Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Фотобиологические основы лечебного действия УФ-облученной крови при перитоните

ВАК РФ 03.00.02, Биофизика

Автореферат диссертации по теме "Фотобиологические основы лечебного действия УФ-облученной крови при перитоните"

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ РОССИЙСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ

На правах рукописи УДК 612.014.1

СОКОЛОВ

Александр Юрьевич

ФОТОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ ЛЕЧЕБНОГО ДЕЙСТВИЯ УФ-ОБЛУЧЕННОЙ КРОВИ ПРИ ПЕРИТОНИТЕ

Биофизика 03.00.02 Патофизиология 14.00.16

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва 1994

Работа выполнена в Российском Государственном медицинском Университете (РГМУ).

Научный руководитель

профессор, доктор биологических наук Дмитрий Иванович Рощупкин.

доктор биологических наук Иванов Илья Ильич, доктор медицинских наук Сергиенко Валерий Иванович.

Ведущая организация: Институт общей патологии и патофизиологии РАМН.

в «... » часов на заседании специализированного совета по защите диссертаций К-084.14.04 при Российском Государственном медицинском Универтитете по адресу: 117531, Москва, ул. Островитянова, 1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке РГМУ.

Официальные оппоненты:

Защита состоится «

»

1994 г.

Автореферат разослан

1994 г.

Ученый секретарь специализированного совета, кандидат медицинских наук

И. В. Буромский

озщдп :;йрактеристика рдзота ЙКТЗЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. УльтраФподетоп-ое излучение <УШ кгк гшн из Факторов внешней среди обладает кногоооразнкн действием а зивые организмы.

Очень интересным эффектом УФН является иоднепклппя свойств ропи человека н знвотнш таган обрлзон. что облученная УФН ппе ргапизиа кровь шэд введегаи в сосудистое русло оказывает эчебное воздействие. На основания этого эффекта УФП разработан и спояьзуется а клиякпгскол врактике к ветептарда нетод лечения -екнфузип УС-облученпоД крови (РУФОК). ¡¡ли Фотогеиотерапкя.

В настояиее время опубликовано того работ по лечебному ействяэ фотогзиотерашш. в которые показана ее высокая э-Иек-япность вря лечения сеаспса. перитонитов, пневношог. а такхе при аде заболевания сердечло-сосудистой система rsnott Е. х.. 1948; anelina I.E., 1930: Парякпя А. П.. 1983; потаиев Л.В., 1980!.

Upzi разработка uannux основ Фотогеиотераяик необхошяю гат» две задача, о.тпа из «газ иигочает в себя биофизический спект пзучзеиой пробасил, другая se — клинический. Еио4изи-ескаа егороиа сопроса заклзчается d изучении фотохктическнл эагаия. врпводгадаз к превращении облучаемой jenomt з лекарство, шшкческая задача - изучение паганизма реализация прнобретеигая: ровьо свойств при ее попадании в организм; обоснование прикенг-та при разл!пных заболеваниям; разработка критериев, достоверно градаецкх наличие лечебного или побочных эффектов Фото-емотератш.

Ревенпе первой задачи возмогло на иоделяя, которые позволяют :следователв более "широкое" манипулирование обьектои п даг>т эзиогность пзучеюш нояекулярно-клеточныя иегаипзиоз Фотогекоте-imm. Одкки яз такка подзолов является создание на гивотныз здеяп заболевания, поддающегося лечешш реинФузкей УФ-облучеиноя РОВЯ.

Cpezrn аспектов УФ излучения, хороио нзученнвя на сегодняшний шь в опытах с глелсапи, большой интерес представляет свободяора-исальпое яерекисное оггисдение дшшдое (ИОЛ) ГРоштпшп д. и. п , 19791. Этот процесс протекает я при У9-обпзгчетш кровя. Ой >яет влиять па лечебвме свойства УФ-облученной iсрази.

В биологические объектах, йкеезих Ферментные система, гбетратои которж является арахвдоповга кислота, при воздействии ?которая (етгиесюс: Фагеторов, в частности V3H, протекает Феряен-stX"oo пз^2:с.спое окисление днпидов (арагндоиовоя юте лоты) Snyder D. 3., 1970; Горзиов Л. В, п др., 19891. При шжлоокся-■пазнои Ферментативном ПОЛ образуются биологически активные

- г -

соединения простатландшш. Сташишая зод дсйстшам у$и Фериевта-ташого окисления хиршя кислот в клгпсаз крова (троибошгггг к ягйкокитак). ■иневщнЯ соответсвэтзщне фериеатше системы, но^ет иметь существенное значение и воявлашш у УФ-облучешюй кроьи лечс-бних свойств.

ссновние задачи работы.

1. Разработка экспериментальной модели эабояевгшш на хашоткыя. соядаюцегоса паченк» ихК'Узие'й УФ-обяяняшоа крови. 2. Пссаедопз-¡ше роли не4ернентативного к Зеркентатишого перекксного окисле-цц£ шшндов в приобретешь кровью лечебных свойств при УФ облучении. 3. Исследование Фэтзшновадьцого состояние тромбоцитов крови экспериментальных аивотныж при Фотогекотерааий,. 4. Исследование Фагоцитарной активности перитонезльиьж иакроФагоп экспериментальных shboteus и услошяг проведения иифузпд ФотоиодиФккироваипой scpobh ва модели э1:сперим&нтаяьпого иеритозпта у крыс.

ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ РЙБОТЙ. По.Еучеккне данные о роли активация рие итатиппс-го {аиклооксигекагшого) и пе<К;риентаткз-иого иерекисного окисления дшшдоз в приобретении кгозью лачебг.Ш2 свойств при ее облучений уф светом ногут биь кспользослии дяя теоретического обоснования лечебного пейслшм ФотоподнФикнроЕак-пой крови и для оптимизации фотогеиотергя.зг.

AílPÓSflUifS равотй. Натернали диссертации 5гжк представлены на III всесоюзной конференции "БкоантиоксцдаятЧ лосква, ишь 1939 г.; на IV Всесоюзной съезде патофизкодогоа, Кьеашев, октябрь i969: на Всесошой научно-практической коа-ференвдш "Прщ|еЕенне Уф-облученной крови в кедишше и ветс-рикарии", С. -Петербург, ноябрь 1989: на IV конференции "Биоавткокендаст".' Иоскна. иай 1992 г.; на Всероссийском симпозиуме "Биологическое действие электромагнитных полей", г. Пушино, октябрь 1993 г.

стрнктнря И 0б1еу работы. Диссертация изловева на 109 страницах, содержит г таблицы, 1Т рисунков и состоит нз введения, глав "Обзор литература", "Материала а методы исследования". "Результаты". "Обсуждение полученных результатов" н выводов. Список литературы включает ¡62 наинэнованкя.

шершн и ыетоды исследования

реактивы и лабораторные киботнке. работа проводилась на icracai сайдах линия Пистар. в работе использовались соли и D-глюкоза марок чда и хч; аспирин, ¿-токоферол, кт - фирмы Gigraa (USA). Ипдонеташш - Фиркы Pol fa (Poland). И о но л (2, й-ди-трет-бутилфевох Сыа получен из Института Химической Физики ран. получение И уф-облучение крови. Кровь для кнФузии заб5£ралась s

здорогах ззгвзпшн той зе линии пластккопь*?! ппридем из сердца. кровь стабилизировалась 3.0 "/. раствором шпгрзтл изтрия (9:1). Облучение крозп проводилось cdsток лигам був-зоп. Обгаал интенсивность излучения з УФ-днапазопе, кзнеренпая нетодон фэррноксалат-ной акпшометрии IHatchard O.G., РагКег С. А.. 1956]. составляла 5,б»Ю"гэпнпггпя/(иг»с). Образци крови подвергались обяученкэ в открытык пдгстгасошж киветаг сверку с толгдтой слоя 3 ни при непрерывном перенешвзшпш. Яалашая доза облучения составляла S'iO"53fmaTeftH/u2. Лишшлне антаоксидактн (иопоя или ^-токоферол) и нттгк'итора шклооксягеназн (аспирин или иидонетаяин) вводились п облучаемую» порщю кроби при интенсивном перемешивании в mute этаяолышя растворов (в контроле вводился эквивалентный обьеи зталсла).

ИОДЕЛЯРОЕ1НИЕ ПЕРЯТОНЯТА H ЩФУЗЙЯ уф-0плучгнн0я КРОВИ. индукция острого перитонита 5' kfhg осутествлялась путем внутрибркнганой ¡'пъоюпш 30 и сгепензпн .тала кролика.

Обягчепззя или яеоблпенная кровь вводилась я квостовла вену ¡спаси в количестве 2 ид на ! кг массы гивотнсго. Sypc тафузий Я>отоксднФиш:розаиноГ1 крови состоял из трек процедур, первая иафузпя проводилась через Oí 3 - 2,0 часа после внутрибрюгпшного Егзсяения каловой суспензии. а две остэвянеся — через 1 п г для. Критерием эффективности лечения являлся показатель тшгааености вшотаых.

¡ЮЛУЧЕНВВ ПЕРНТОНЕА/1ЫШ НАКРОФЛГОВ. Зрысаи. наводящимся под эФкрпыи наркозом, виутрибретинло вводился забу^эренный Физиологический раствор с гепарином (2,5 ед. ) < 137 шн ПаС1: ' 2. Т пя CCI; 5 löi нагпроц; 1.5 й! гнгроч) в объеме 12 ил при 37вС. после массирования стсиох бгюзной полости в течение 2 минут биотная стенка вскрнвалась по белой линии кявота. Жидкость, содерла-Еапся в брганой полости, отсасывалась пластиковой пипеткой н Фильтровалась через двойкой слой нейлоновой нарли. Все последующе операпк'л по таделения перитонеалышя иакроФагоп (ППФ) провожались на такаем льду.

Полученная суспензия центрифугировалась ю кинут при 1ъо з и гсомпатной температуре. Последняя процедура повторялась дваады в забуферетаон Физиологическом растворе. Конечный клеточный осадок аля .визирования эрятролитов подвергался оснотическону шоку в 1 нл пистиллированкой Н20 в течение 15 с, после чего смешивался с 10 ил раствора Хенхса (13Э öl НаС1; 5,1 пЯ KCl; О, 4 иН НагНРОу; Í.Z пИ НаНС03 ; 1,1 tri! HgCl2 ; 0,83 йН Hesov ; 1.2 пН СаС1, ; 5, в nîl D -rassK03u; рН=т, 4). Суспензия клеток центрифугировалась в течение 10 кинут при 460 в и конкатной температуре, осадок ресуспендировался з среде Хенкса. Жизнеспособность клеток

оценивалась ао окрашиванию тршановди свнш. Перктонеальнь« иакрофагк с получение?! суспензия составляли пе ненее во жизнеспособность ¡сяетск находилась d предедзк 95-9ви. ФЛГОРЕСШГОЩК МЕТОД ЙССЛЕДОШЗДЯ ОЛГОДКТЛРИОЯ АКТИВНОСТИ

перитонеальных макрофагов. Получение насаженная акридииовыи оранжевые клеток Е. col i

Елетга-; Е. coll инкубировались в среде, содержащей 0.01 5 акршишозого оранжевого (АО), в теченкв 5 кинут при 22-гз°С. Затем бактернп двояки отишаднсь от ¡»захваченного зоаяа с иокощьа центрифугирования ара гоооо е н 4°с в течение ?о ihíiíí. Сутшрпатант после ¡саждого центрифугирования отбрасипасся, ; осадок ре с г с п е н д; г; ю в зя с я о новом растворе Хеккса, ае содерадие/ АО. Концентрация бактерий определялась турбшишетричеаси и i конечной препарате составляла 3«104 клеток/мл, Поягченка* суспензия окрашенных АО клеток Е. coll до использования храшшас! на льду не Солее 1 часа. Определение фагоцитарной активности

Для определения интегральной Фагоцитарной активности перц-тоаеадьньк макрофагов 0,5 нл суспензии ПИФ (Р., 5«106 клеток б 1 lia) спешивались с та кии ае объемом суспензии скрашенных Е. coll <3«108 клеток в 1 ил]. Се уста 40 шшут сстлестиой инкубашш ирг 37° С обраэш.' аеятри^утироваллсь 10 «мнут и® 460 з. Осадок ресус-иевдкроваяея в среде Хенкса и повторно центрифугировался. После последнего центрифугирования осадок ресуспешшровался в 0,5 mi среды Хенкса с введением с полученную суспензию о, 1 не 1" раствора Тритона Я-100. Спектр Фдуоресиенаш, полученнык образаогз регистрировался в диапазоне 500-600 нн при длине волны возбухдао-шего света 450 ш:. Измерение спектров Флуоресценции проводились на снектроФяуорилетре PEEXIH-ELHEK-44A. Показателей $агоянтарной активности сдуаила разница интенсивности Флуоресценции опытные н контрольные проб при 530 ни.

Определение Фагоцитарной активности накроФагов (Фагоцитарного числа <<5>ч) и Фагоцитарного индексами!) проводили по методу CFruzaosKl U., 15С8].

вссяедозаиие агрегавдокноя активности тршшцитов.

Кровь У крыс, находящихся иод эфирным наркозом, забиралась кз iipáooro келудочка шврияен, в который был предварительно набран 3, 6 '/■ раствор трехзакеЕенного цитрата натрия. Объемное отношение раствора шгтрата натрия и icpobh - 1: 9. Стабилизированная кровь центрифугировалась при 460 s в течение 1£ юшут при окяатаой тишературе. Супекгатант, предста&ляшкй собой Сопатую тромбоцита!® плазму, использовался в дальнеГазей работе. Далее 1 ил суспеязки тронбояитов центрифугировался при зеоо s в течение

3 минут при комнатной температуре. суперпатапт (плазма) использовался цеиссредстиенио пород измерением агрегации тронСоцитов дда доведенля концентрации послешшг до 5-8<Ю* кл/нкл.

Агрегация тронбогатов выпивалась введением в исследуемый образец (2, 5 юсИ) и регистрировалась турбодинетричссгаш

нятодон с поноаьа лазерного агтегонетра. РКЭиЛЬТАТЫ М ОБСУЖДЕНИЕ

Изучение Фотобиология ее кип основ лечебного действия Фотогемотерапии представляет собой комплекс мероприятий ио выяснению природы полезных ФотомодиФшеапий- определяют?* .¡ечебные свойства УФ-облученной крови, и введши, которые определяют побочное действие.

На основании дашшх литератур о механизмах действия УФК на коделыше системы имеется возможность подавлять некоторые нодиФнкапш в облучаемой ¡сропн химически. использование гииичес-юа ингибиторов ФотонэяиФикацпй в клинике кожет привести к сш«е-1я» лечебного зФ4екта Фотогенотерашш. Поэтону для решения оберлс вопросов наиболее' цлодотворшж можно считать изучение лечебны« эффектов УФ-обдучинной крови на лабораторный животные. заболевания которые поддаются двчеш® «отогенотерапнея. При этой но ал о оаешшать лечебный эффект по гашгоаемостл. если при выбранной иатояопш отиеч?.ется иисокзя смертность, а Фотогемотерапия способствует сниаению числа летальных исходов. Такое исследование и ¿шю проведено в настоящей работе. Кроне* того, для решения поставленной задачи проводилось исследование изменений в организме эксперимента ль;,их яивотсшх: система бактериальной Зашггы и тронбошггарного звена гемостаза. лечебное действие нф-оплаченной кропи

В представленной работе модельный заболеванием был выбран калений перитонит, индуиирусный у крыс внутрнбрегштши введением ннФиаирушего агента.

Для поставлешшх задач оптимальной являлась доза инфицирую-шего агента, при которой к 11)-ону дна после нндлшки перитонита смертность крис составляла 70-90 к.

В первой серки экспериментов была изучена веззиохяоеть получения лечеъного эффекта ври инфузии 74-облученной крови. Иссле-делание проводилось иа ЮЬ крысах с перитонитом.

Полученные кинетические кгигае гибели крыс, которые наблюдались в течение 13 дней с нонентз индукции перитонита, представле-1ш яз рис. 1. Видно, что табель хиоотнях, которым вводилась облученная кровь, значительно нике. чей п контрольной группе. Лечеб-кий эффект у иеобиучсннсГ! крови вирахрн слабее.

Максимальный лечебный эффект ннфузии УФ-облученной крови

о -

Bpïaa (сутка)

Раз. I. Ккпепггэетл* кргааи» гк'иля етис сув йкопервисзТЁЯЬЯои агрэтошгп». &5оэя»-.к«аед: 1 -аЕпаотаыа úta датаяша; 2 -язЦктя УЗ-еЗлуЧгеязой крове; 3 -нвфувлг шэйпуче*тoft jipcisa.

.75 1-

й f-

и

§50

л

К

¡в

у 25

и

с:

о

т

"1Г"

j-4

етч

í

4

0 3 6 8 12 55

Время (сутам) Рка.2. Bnasso» яиаэяг. ва ггралевткчесеук, еффздгаяасг»

У—у с п ^ : ; ÏÎ с Л жрогл. Обоень^скха: 1 -rE-iíoj:?"^ яо fernst; tfnviybíís УФ-с5«учэгшой spoon п нопопои ( ¡0 'И'}; 3 пэоСяу-

ЧвКВОв Кре-ВИ О ЕСКОЛЭи.

и з е 9 18 16 ВрйИЯ {суг:

PEO.?. Вяваш» альфа-тософеропа ш 'евролаптаздгкум «-ффоатнЕноси инфуанд УФ—облучоквоЗк вровя при агсиорпнзи'Г'\га,Ш'л". перитош*'.; ССоевачялая: 1 -хиеотсыв Os» пачamis; Я -гшфтваа грови. oäajwa-иой в ирвсутствии <*л*фа-~токоферслА (ICH); 3 -ивфузие необлув-зп-пой кроея с с.ифл-тоьофсролси.

слкечаяея на т-9 сггки после кидугссз зерзззтзгга в качгаа вечензз. Летальность в группе хквотаиг. которнн перекгаокась »влзпекнзя УФ-свэтои тсровь. на т сггга составляла 37 л & х вга :иерп5вс-/з в грэтшо с трансфузией необлучеииой кроен 52 1 7 '»'. (отаипко иездг зтаин ггэтшаш достоверно с р<о. 03). скегагость жгс н группе, о которой не проводилось гаосакиг мероаряятггй. :остзваяла 8". 1 6 х < отзктае ::ех17 этой группой а груяаод с 2вреишаяиеи Уф-обяученяой крови достоверно с р<0. 01).

Лечебное действие »Слученной, а тазах- • неойлучезноЗ кдаи лроявянется через дшпрльный срок: аз животные п кахпой грзга-зе но истечении 1 иесяпз со дня нндушши заболевания вихивзеность вставляла 5, 25 и 34 соответственно в группе без перелаважгз фови, в группах с трансфузией необлучекноЛ и облученной крови.

Исзоля из представленных дзшшз. вшшо» что {отэкоднФкзнро-яявая кровь обладает достовершш лечебпам действием при остро« «ритоните у крцс.

действие питиоксйдзатсз я ингибиторов цишокснгеназного окнсденич йишщв нп эффективность уотигеыотерппии

3 некбг-зяа'к кгет&к а плазне даоса под действен УФИ проте кает свободнораяжзльпэг нефернентативиое нерекнспое окислекяе

1яглд0и.

Роль го тапл зеяагагсного окисления дисидов в зкспернкгггтз [зупазот путем подавления ПОЛ лишвшыии аитноксидаятаки.

В представленной гаОоте конечная ксипен'п>аиия автюжсндззток i йвФузкрусной обягченвой шга иеоблпеняой крови составляла 10 ави 'Л-овллевиэ а ниф/зня кровя проводилась через 30 нквдгг ¡осле введения антиоксидавтов в кровь.

Согласно данный, представленным па рис. 2 а 3. введения юпола или альфа-токоФярола в концентрации 10 икй до облучения в юршгз кровя, предназначенную для облучения, не приводит к пгибяровапкю лечебного эффекта $отогенотерапии. Такой жз '»зультат получен в опитая с перелнпаннен необяучевноЗ крови. Ля полного обоснования этак заключений приведен сжмзркиэ данные | гкбглк животных пз т-е сутки от момента индукции перитонита, ■бработаинне статистически. В данной случае габеаь ошгпшх меотну; удогко представить по отношению к гибели в группе 1 без ечения. которая принималась за 100 х. Смертность крыс, который водилась У5>-облученная кровь с альфа- токоферолом и неполон, оставляла соответственно 45 1 20 и 42 1 15 х. При этон нгртзость крыс при инФузии Уф-облученной крови без добавок оставляла 43 * 12 у (рис. 4). При введении иеоблученной крови добавкой альФз-токо<1ерола или ионола летальность составляла оответственно 77 1 33 и 64 1 27" от смертности в контроле, а в

- я -

случае иетузим пеобдгченной крови без добавок - 72 ±9* (рис. 5).

Для исследования роди 4еркептативного {пиклоокситенззного) перекисного опнс.-ешк лиендоз з дркобретешт крсныз яечебпкг свойств при ее УФ-облучешз; были использованы специфические ингибиторы шнслооксигеназы аспирин и ишхочеташш, ко то ш г вводились в ктозь перед облучением. Введение данных препаратов е кроеь иерсд облучение»!, а не после него, бнло обусловлена© теи. что было необхогшко подавить процесс, которяй начинается ухе ас вреия облучения ооразпа.

Концентрация ингибиторов яиквоокстчшазного окисления дяпи-дов подбирались таким образом, чтобы (как и случае с антиоксггдаи-тани) исключить неспецифические эффекты, т. к. асгшршь пгстнер, в концентрации 1-ю нН, иожет инактивировать пе только пикясокси-геназу, но и другие белки [Вигсь J.V., 1981!. В нашем случае концентрация аспирина составляла 10 нкН. а индонетаикка 1 нкИ. УФ-облучение и инфузия крови проводилась через 30 никут после введения препаратов.

Результаты данных опытов представлены на рис. О и т. К: представленных данных видно, что введение в порцию кропи перед облучением аспирина (10 гаск) и шшоиетащша !1 и.кШ приводило ь полному исчезновении лечебного эффекта инФузни УФ-облтчешзоГ крови (рис. в и 7), Не наблюдался лечебный к в случае

введения иеоблучешюй кровй с аспирином или ¡шдонетацинок.

■ Тага« образом, кровь крыс, облученная УФ пзлучепиеи виг организма, приобретает свойства лекарства, оказывает лечебшй эффект при перетоните. Антиоксидакты конол к альФа токоферол, способные торнозить неФернентативное перекисное о!деление лини-дов. при введении из в облучаемую порцию крови не приводят л снижения эффективности Фотогемотерашш. Ложно предполагать, что г условиях пзшх эксперггяеитов неФеркентатквное перекисное окисление я1шидов не относится к чисдг лечебшх ФотонодиФикадий кгов): при Уф облучении.

При введении в переливаемую ыортю крови (до ее Уф-облуче-ния) ингибиторов Ферментативного {ншслосксигеназЕого) перекисногс окисления ляпидов. лечебный эффект У-?-облученной крови не наблюдается. Это указывает яа то, что, по всей вшшиоста кровь при VI облучении приобретает свойства лекарства в результате агшгаагаа щпспоокс15тепазпого окисления липилов. Асюпчях я индоиеташа снимает лечебное действие и необлгченной крови.

изменение фагоцитарной активности лерйтошйльннк ипкрофйгов

В данной часта работы иидукаля острого перитонит; проводилась сублетальноЯ дозой шФипируюшего аггита.

100.0

75.9

•>0.0

25.0

0.0 -1

Ряс.4. Лечебный аффект УФ~облучениой кроои при экспериментальном перитоните у крыс з случае введения и облучаемую порцию крови анти— оксвдантов ионола ( 3 ) или альфа-токоферола ( 4 ). Предсгавлеяные даияые соответствуют 7-м суткам после лндужцяи перптоттта. За 100 % принята смертность животиы* в контрольной группе ( 1 ). в которой пв прлвояш'ос!. викахнх лвчеСша иеропригтий. Уровень летальности животных, котсрим инфуэировадась УФ-облучениая кров» без добавок, соответствует ( 2 ). !

100.0 : 75.0 50.0

25,0 0.0 -1

Рис.0 Лечебный Цфект необлученной крови при экспериментальном лерктсппто у крио в случае введекяг в пифузяруемую поргрпо Крови антй— оксидонтс? ионола ( 3 ] или альфа-токоферола ( 4 ). Представленные дыпшв соответствуют 7-м суткам после индукции перитонита. За 100 X принята смертность животннж в контрольной группе ( 1 ), в которой ас пройоцилось никаких лечебных церопраятий. Уровень летальности ензотных. зготорым ивфузировалвсь неоолучеикая кровь без добеизоя. сооте-етствуе-г ( 3 ).

Й Т5

Рис. 7.

Время (сутка)

Ррсмв (суилв)

_1_

_1_

18 15 0 » 8 9 »8 1»

Пгсп.ение яа лечебный аффект кяфузии УФ-обпучеяной а пеовлу-•г^и^ой крови ингибиторов ферментативного перекнсяого окисления лпитдов асяирява (рис.в) п шздоиетадавв (рпс.7).

( 1 ) жипотшлв бега леченнж; ( 2 ) пифувва крови, облученной » присутствии икгяЯтторов ниюгоокснгенаэы епсирина (рис.6) или иидо-мётацина (рис.?). ( 3 ) икфуэиз иеэблученноА кровк с аспирином или

кндометецино«.

Данциг со интегрально*! Фапопнтараой шстшшостк (ИФА) перито-пгалыож пгкрофагов цредставлеи* в табл. 1. определение ЕйА проводили аа 3 и 4 день. В табл. 1 представлены значения фагоцитарной активности перитонеавьшк иакрофагов (Ш1Ф) крыс в первне четгше ш после 'шишиши эксиеркнгатального перитонита со сравнена с таковой у здоровых зизвотшх.

В дальнейшей для опенки воздействия инфузнн УФ-облучепной н необлученной крови на активность накроФагов уровень штег-раяьной Фагоцитарной активности у итотных с острнп зкевердаен-талышн перитошгген без лечения, взятые из той же серии, принимался за 1.0.

Пз даннык, представленных в табл. 1, видно, что при ин^зии УФ-обл ученной крови наблюдается увеличение < относите ¿¡иао контроля) Фагоцитарной активности ПИФ па 3-4 супа с момента надлаиш перитонита. В группе хивотсих. который мнфузировадась неоЗяучениая кровь, прироста Н?А не наблюдалось. С учетом того Факта, что V?-облученная ¡сровь обладает шражеипым герапевтнчес-йэ! эффектом. но1шо полагать, что актаяэтэтеегее действие данной процедуры на активность перитонеальшх (•¡акроФагов является одной из причин этого терапевтического эффекта.

Данные, иолучеиные с ионоиыэ Фг/оресцентного метода, свидетельствуют об обшей повкаепик Фагоцитарной активности накроФагов в брюшной полости. Однако вопрос о врнчлнак такого усиления активности клеток остается яедаяснешши. Для шясиеякя причин усиления интегральной Фагоцитарной активности пернто-ыеаяьных макрофагов было проведено исследование Фагоцитарного индекса и Фагоцитарного числа подучешшк Клеток. Данные, представленные в табл. г. свидетельствуют о существенном увеличении Фагоцитарного индекса (процент активно Фагоиитирущкг меток) в группе с инфузией УФ-облучеиной крови по. сравнения с акалогичнш показателен у здоровые живота«. а также у крыс с перитонитом без лечения или с шфузией нефотомодифшшроваиной крови. Однако, в отличие от увеличения числа Фагогштарущих клеток, другой из показателей фагоцитарной активности, а именно - Фагоцитарное число (среднее число заквачешшк накроФагои бактерии), во веек группах яшотиых бил прщггячески одинаков (табл. 2).

ПРИ. исследовании влияния антиоксидантов ионола и ^-токоферола и ингибитора ферментативного перекисного окисления аспирина па стимулирующий перитонеальные макрофаги эффект Фотогеиотерааии была получена следующая картина, На 3 сутки после индукций перитонита ингибироваиие рассматриваемого эффекта инФузии Уф-облученной крови наблюдалось только у животных, которым

1'8бЛЗЦЗ X, Вякяяяе иоиола, ,н-токоферола п аспирина на фагоцитарную активность пярэтгонеалыас* макрофагов крыс с перитонитом при $0101«н5тер1явя.

Декь Ннтпгр«л«»маз Аагоцптарнэл активность Сп X к контролю^

» \ { Вобаяок \ \ Контроль} V© Ивоблу« ] к.рооь. > 1 > Ионол чсишзя Кровь а-Тснсоф&рол Ч® ' Нвоблу-свиная КрООЛ» Аспирин УФ Неовлу-чинная к.ров>*

3 4 100 ¡129-»-В 104+9 ) *" 1 1 5.00 ¡1.27+11 99*3 1 ** 122*17 103+19 127*1:6 129+11. 114+7 ,107 +6 103+9 126+24, 98+1 09+9 99*5 103+5

ЯрлмочаШ}!» Контроль — значение интегральной фагоцитарной

адопмэстя а ^.рктоиеаяьных макрофагов крыс с перитонитом Оез лечения,

1ркв«мве:»е за 100 г-се сс-галынле значения г.нрлг'.аптсп но отношению к иомтролг^ — (шфузяя УФ-о&лученяоП крова.

?агшца Я. ©агоцигариыЯ индекс н фагоцитарное число пернтонеалышх ярые с перитонитом при $отогемотерапии на З-тнй день после ?«/С'гч!'5!: перитонита.

л г ^ и и т а р о п число Си и по атсп&'гаияг» к гсоиграл», Вез лв^онкя!) Фзкгоиктарный ЫИД&К.С Спроцект фагсцйтирукмдкя клвтсиО

\ \ } Нгфузяя УФ- | И«?фуэяд «©«• ртль |сблучвмиой {о&яучекмой } Т.££ХЭВЯ | кр*->пи 1 1 Здоровые жняотяыа Без лвчв- 1!МЯ йнфузпя чэнноЯ "ЛПСТМ1 Икфузяя иеавлу-чвннсИ крот:

100 I 93*0 ) 103*3 ! .: 1 , ~ 32*3 ¿0 »4 37*3 41 »3

впеязаасъ '¡.'Ф-обапекиая кропь с аспигшюн (табл. 1). На 4-тае супся япгкчитор дикяооксиггказного окисления липндов зспирш •гакке аоляоетш янгйбяргет рассиэтгиваегкЛ з-И-ект стинулятяг ПНФ '.тайа. П. Все это говорит в пользу того, что вроцессои, ответ-«.тзеваня за эМест стимуляции: 1Ш, является активация УФИ ШЕ1асск<;игеяазяого окисления лкпидов в ппФузируемой крови.

Эффект инфузии Уф-обягчеаиой идя необлученной крови с анти-окскдаятаки на активашсэ ПИФ на 3 день не отличается от эффекта ипфузия облученной идя необлученной крови без ник (табл. 1). На четвертые сутки обнаруживается более сложная картина.

йонод. вводимый в ипфузкруеную кровь перед облучением, не влияет на эффект стимуляции фагоцитарной активности перитонеаяь-ных макрофагов на четвертый день. инфузия крови с ¿-тскоФеродон практически не приводит к достоверному увеличению интегральной Фагоцитарной активности перитонеалышх макрофагов.

В результате инфузии необлученной крови с ионолои на 1-й день отмечается увеличение ифа яеритонеаяьнак макрофагов крыс. Видино. ионол в данной случае оказывает частичное активирующее пернтонеальные макрофаги действие сам по себе. В случае инфузии необлученной 1срови с ¡¿-токоферолом достоверного увеличения ИФА па четвертый день не отмечается (табл. 1).

Стоит отметить, что иа четвертые сутки !в сравнении с З-нл) в случае абортивного течения перитонита происходит сильное изменение лабораторных. показателей состояния организма. Рассмотрим некоторые данные литературы, которые помогут нам несколько прояснить картину. Согласно данный [Бондарев Г. А.. 19793 наксинальиое изменение лаборатог'вдг показателей при моделировании перитонита в эксперименте приходятся на 4-5 день после индукции заболевания. Миграционная активность лейкоцитов ври благоприятном исходе заболевания ГКонопов А. Г. , 19751 па 4-е сутки резко надает (по сравнению с такоВой на 5-н сутки). Комплиментарная, лизою«чн«з ( <?<эктериаилная активность к 4-ыи суткам снижается (Диго р. £ , 19(<71. При моделировании перитонита на 4-ый день активность макгоФагоп резко падает 1СолодуИ Ю. П. .1969]. По наши собственным данным на четвертый день у крыс с перитонитом без лечения интегральная.Фагоцитарная активность ГОФ в 1,4 раза ниже та *етий день. Перечисление данпие

наводят на шсль о том, что на 1 день после индуюгии заболевания (в отличие от 3-го) вознохна особая реакция организма на инФузкю 3"Ф-облученной или необлученной крови с антиоксидантани, в частности снижение стимулируюшего эффекта УФ-облученной крови с ¡¿-токоферолом и активация ИФА пернтонеалышх накроФагов при инфузии, необлученной крови с ионолом. ИССЛЕДОВАНИЕ АГРЕШИОННОЯ СПОСОБНОСТИ ТРОМБОЦИТОВ.

В этой серии опытов (результаты исследования на ВО крысах с перитонитом) доза гшФинирумзего агента подбиралась таким же образон, как и в экспериментах, посвятеинык исследование Фагоцитарной активности пегитонеалышк макрофагов. Из данных, представленных па рис. 8, видно, что на третьи сутки после

рис.3. Эффект инфузии УФ— облученное и ке об л у ч е нноо

кроЬи на агреганионную способность тромбоцитоо

Е3.| кот) рель . Ш г — УФ. . @ 5необлуч«ниоя кребь « -- УО + . ш 5 несблученюя крс6ь4 инЗсметацин икЭометацин

гаишеюз! перитонита отмечается достоверное снихевие агрега-руемости тромбоцитов под действием АД=5 как в ' случае с ;шфузкес Уф-обягчешкй крови. так а иеоблучепыоа есровп. На четвертые сутки противоагрегациояный эффект ипфгзйа УС-обйтченяо? -я необдуманной :срови отсутствовал.

Введение яагабэтора ферментативного переютсиого окисаегак лшшдоз индояетащзда в кровь перед Уф-обягчеяиен приводит к ингн-Сировашго аротшзоагрегатаопяого эффекта .внфузна (рис. 8). Нэ-обдучеипап кровь с индометанинок таете не обладает протшзо-агрегаПЕОпвш действием.

В заключении этого раздела ното сделать зывод, что ври зкеяегангаталыгон перитоните у ьл>ыс ш?и щкзведешш Фотсгенотера-!П1£! шш яри ¡яфузни каоблучепяоз гсроеи отиечается сткешге агреггипошзой способности троибошггов в составе богатой троибо-•штгг:г! плазш сод действием АД1>. Т. е. Фактически весь эффект зссасденка агеегацк! тройботггов обусловлен самой процедурой ¡шОузин кровл Еле зависимости была она предварительно облучена ■ГФП яви пет. Пи: кнгибкрованш ферментативного иерекисного жисления лишшоп в ипфузируемой крови противоагрегацпениого зСФекта не отнзчалссь.

<s - ВЫВОДЫ

1. ВнФузия УФ-обягчаяпой крови снижает снертность крыс с зксп ерия ентальени перитонитом. Перитонит, ипдутарсвашшй в эксперименте у хнвотвих, н&хет еыть использован ¡сак модельное заболевание для изучения колекуяярно-клеточшкгг меяашзнов лечебного действия УФ-облгчепной крови.

2. Терапевтический эффект УФ-облученясй крови не проявляется, если она облучается в присутствии ингибиторов шжлооксигеназного оккслешш лшшдов аспирина и индонетапипа. Стимуляция «иклооксигеиазного окисления липидов. вероятно, является центральным звенон в ковекуляряо-клеточном механизме, который определяет приобретение кровь» при УФ-облтчеяии лечебная свойств при перитоните.

3. Введение в облучаемую поршоо крови перед облучениеи липид-иих антиоксидантов ионола или альФа-токоФерола не шчшодит к кнгпбированию ее лечебного действия. Перекксное Фотоокнслеяие липидов не имеет сушественного значения дли лечебной Фотоноди-Фккашш крови при УФ-облучетш.

4. ВнФузия Уф-облУчениой крови вызывает увеличение Фагоцитарной активности перитонеальных макрофагов у крас с перитонитом за счет увеличения числа активно фагоцитирующих клеток. Усиления Фагоцитарной активности не происходит при оСлгчешга крови в присутствии ингибитора циклооксигенззного окисления лкшшов. Усиление Фагоцитарной активности перитояеальнык макрофагов иоает быть важным этапом в механизме лечебного действия УФ-облучеиной крови при перитоните.

5. Противоагрегашюкное действие па тромбоцита в составе обогащенной тромбоцитами плазмы инфузий Уф-облучеваой или не-облучепной крови отмечается на третьи сутки после 'индукции перитонита у крыс, к четвертым суткам такого эффекта не наблюдалось. Введение в облучаемую или пеоблучаемую крозь ингибитора Ферментативного перекисиого окисления липидов ослабляет противо-агрегадиошый зФФект инфузии Уф-облученной или иеоблУчениой крови.

^По теиз диссертации опдбликованн следдвдие работы:

1. Ааосов А.К.. Соколов А.Ю., Роиункин д.и. Влияние липидного антиоксиданта oC-токоферола на эффективность реинФузии Уф-облучеяной крови при лечении экспериментального острого калового перитонита. - Тезисы докладов III Всесоюзной конференции "Виоантиоксидант", Носква, АН СССР. 1989. Т. 2. с. 179-180.

г. Аносов А. К., Соколов А. Ю.. Рошупкин Д. И. Роль

аерекнсаого окисления дшшдов мембран клеток и липопротендов. пяазш icpoen в лечебном эффекте фотогекотерашш при экспериментальном острой каловом перитоните. - в сб. "Нарляеяие некашзноп регуляции и их коррекция". Тезисы догспадов IV Бсс-сойз!юг 1 съезда патофизиологов, з-б скт. 1989. Кишипев, т. 2. с. 51Т - Москва, 1989.

3. Соколова.®. ■ ЗЕерева К. В.. Аносов А. К., Нетолько Л. II.. Рояуденн Д. ¡1. Действие дкбяюла я аспирина па активации пег'итонеальгшх мггсрофагов, обусловленную инфузией УФ-облу-чеаяой крови. Теззсм IV конференции "Пноаятлоксидант", Исскез, РАН. 1992.

4. Аносгр. А. Е., Иелеховец О. К., Зверева И. В.. Соколов А. В.. Волгина Т. 3.. Роялвшн Д. 3. Использование липядного антаоксидапта для выявления активации Ферментативного огагт аг:тп якрвиз. кислот в лейкоцитах при УФ облучении. Тезиса IV конференции "Виоантисксидаит", Яосква, РАН. 1992.

5. Соколов А. Q., Аяосоз А. К., Рмпупкян Д. Я. Роль Фотонодн- ' ■'жйайй, пргдотараЕаеных ингибиторами лероксндашот лишшсв,

□ лечебной действии УФ-об,лученной кроеи при перитоните у кис. • - НК0$Й*»КЗ. 1993, т. 38, вып. 4. с. 703-707.