Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Формирование иммунного ответа насекомых на ранних стадиях инфекционного процесса

ВАК РФ 03.00.09, Энтомология

Автореферат диссертации по теме "Формирование иммунного ответа насекомых на ранних стадиях инфекционного процесса"

РГ6 OD

ГПОЯОГИЧЕСШ шягагг сибирского ™ I i'i.'fFCCCÍiRCSOn ЛК'-ГьЧ'Ш

rznZB EüíTOP БИЕСДМХЖПЧ

У,ЦК 697. 7 1 г

ÍOF.MÍÍPOEAK'ÍI) ¡В'ГГЛППГЭ'СТЕЕГЛ ÍVCEÜCÍVX V.\

рлпн1к стд;:ж ^гг^юнпсго пропесса

ОЗ. 00. С9 - энтсмсхогнгт

Автореферат

диссерташш на соискание ученой стопин капд^дпта биологических наук

Новосибирск - 1993.

РаЭэта'выполнена в лаборатории микробиологии йгалогичес!»-

го института СО РАН

Официальные оппоненты: докторор биологичесшнс наук

11 П Цгернилг кандидат биологических С. А. ь:;:а:1;.:>.

Шдусре учрокденио - институт циа-охогии н генетики

Защгга диссертации состоится " " 1993 г./ в/£ часов на заседании специализированного совета К 003. .14. 01 по защите диссертаций на соискание ученой степени кандидата биологичесгак наук при Биологическом институте СО РЖ

Отаьши на автореферат в двух экземплярах просим направить по адресу : 630091, г.Новосибирск, 91, ул. (Грунзе, 11, специализированному совету Биологического института СО РАН.

С диссертацией шшо оаншгамиться в библиотеке Ег.ологичес-кого института СО'РАН по адресу: 630091, г. Новосибирск, 91, ул. Ярунзе, 11,

г. Новосибирск

/¿■02

Автореферат разослан "6 " ¿ЯЯ-. 1993 г.

Ученый секретарь

специализированного совета доктор биологических наук

А. Ю. Харитонов

ОБЩ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуалыюсгь теш В последние годы интерес к изучению иммунитета насекомых резко возрос. Это связано с важностью этих работ в понимании эволюции иммунных механизмов, так как насекомые представляют собой . уникальную группу животных.которые значительно отличаются по многим физиологическим параметрам, характеру эмбриогенеза, морфологическим признакам и большим видовым разнообразием даже в пределах одного типа Arthropods (Wigglesworth, 1964; Шливанова, 1982; Бей-Биенко, 1980; Росс с сотр., 1985 и т. д.). Актуальность изучения иммунитета насекомых без сомнения связана с необходимостью совершенствования интегрированных методов контроля и борьбы с вредителями сел! кого и лесного хозяйства, с паразитами человека и яивотных (Boman, Hultmark, 1987; Wlkel, 1982 и т.д.).

К настоящему времени известно, что иммунный ответ насекомых формируется такими системами, как агглютинирующая, фенолокси-дазная, коагулирующая, клеточная и кроме того системой антибактериальных белков (Wyatt, 1978; Boman. Hultmark. 1981; 1987; Dunn, 1986; Götz. 1986).

Их активность значительно различается в зависимости от вида насекомого, стадии развития и физиологического состояния.

При этом следует отметить, что недостаточно изучены вопросы,

/

связанные как с взаимодействием перечисленных систем организма, так и о их непосредственным функционированием при инфицировании. особенно на первых стадиях развития патологического процесса

Известно, что инъецирование чужеродного материала в геыс-цель приводит к изменениям в популяционной структуре гемоцитоа (Gagen. Ratcllffe, 1976; Hanschke et all. 1980; Dunn, Drake,

1983). Однако, недостаточно изучены физиологические изменения клеток крови, что трудно выявить при использовании только морфологических критериев, которые, в основном применяется при описании гемоцитоа. Трудности связаны также с выяснением роли коагулирующей, агглютинирующей и фенолоксидазной систем при распознавании чуяеродного агента, проникшего в организм насекомого. Практически не изучены вопросы, связанные с изучением динамики активности этих систем на ранних стадиях инфицирования насекомого. Факторы гемолимфы, вызывающие лизис эритроцитов позвоночных, выявлены к настоящему времени только у одного вида насекомых (Gallería mellonella), (Phipps et all, 1988;1939; Chiu et all, 1991), хотя среди представителей беспозвоночных подобный феномен достаточно распространен.

Цель работы: Изучение механизмов формирования иммунного ответа насекомых на ранних стадиях инфицирования на примере представителей отрядов Lepídoptera и Coleóptera

Основные задачи исследований: 1. Идентификация гемоцитов и их изменения при инфицировании у исследуемых видов насекомых.

2. • Выявление и определение свойств гемолитической, агглютинирующей и фенолоксидазной систем у исследуемых видов насекомых.

3. Изучение взаимодействия этих систем на ранних стадиях инфицирования.

Научная новизна

Впервые, выявлена цитолитическая активность гемолимфы колорадского жука. Частично очищен и определен молекулярный вес белка ответсвенного за гемолиз эритроцитов позвоночных. Установлено, что данный белок - кальций зависимый, синтезируется

сферулоцитами, не обла>; - г •_шт.1б^стериадьной активностью, как по отношению к грам-полсдагслиньм микроорганизмам, так и к грамотридателышм, но активность его повышается в присутсвии бактериальных липополиоаха1..!д :. Впервые выявлена агглютинирующая и фенолоксидазная аи ¿-.ины-ш в организме трех видов совок. Установлена динамика ¡зменения агглютинирующей и фенолоксидазной систем на первых этапах инфицирования насекомых. Получены дополнительные данные о гетерогенности и роли агглютининов, спосооных значительно активизировать процессы кн-^¡■лгуляции и грзпулсобразования в организме насекомых. Установлено.. чю агглютинины совок синтезируются в гемоцитах, а фенолоксидазп в гемоцитах и кутикуле. Излучены дополнительные данные по использованию физиологических критериев в систематике гемоцитов. Установлено, что определенные типы гемоцитов отличаются между собой по интенсивности флуоресценции и характеру распределения хлортетрациклшгавого зонда з тетке, что отражает их. различие в распределении внутриклеточного кальция. С помощью конконавалина А среди гранулоцитов выявлена группа клеток, количество которых увеличивается при инфицировании организма

Научнр-практкчегизя цешгоета Представленные результаты вносят вклад в дальнейшее понимание проблемы эволюции и формирования иммунитета беспозвоночных. Разработанные методы физиологической оценки иммунной системы Насекомых могут найти применение в практике интегрированной защиты растений от различных видов вредителей сельского хозяйства. Выделенный нами гемолитический белок колорадского лука пополняет список мембранотропных белков, которь« оироко

применяются в молекулярной биологии и фармакологии.

Апробация i'íilisiv. Результаты работы докладывались на Конференции молодых ученых БИ СО РАК(1987), VII Совещании энтомоло-год Сибири в 1939 г. (г. Новосибирск), научных сессиях БИ СО РЛ1 (1&89; 1991) и Игялабораторном семинаре БИ СО PAIL По теме диссертации опубликовано 5 работ.

Структура v. o5:-it::i работ;;. Работа состоит из введения, 6 глэл и списка литературы. Текст иллюстрирован 31 рисунком и 6 таблицами. Общий обьем работы 146 страниц, содержание диссертации изложено на 118 стр. машинописного текста. Список литературы состоит из 30 работ отечественных и 175 - зарубзкных авторов.

Автор вырагает признательность за бескорыстную помогу и самоотверженную поддержку при выполнении работы к. в. п.

I В. i':. И'арапову}, за помощь в подготовке, написании работы и цашшз советы д. б. и. I.L П. Кошину, a так*« д. б. и. С. И. Резинковой, ЯННШННННВ б. и. Т. К. Кальвин и другим специалистам, взпвеим на себя труд прочитать эту рукопись, О. Б. Впсиленко га неэа\:энн\<ую помощь в постановке экспериментов.

Материалом для исследований служили личинки последних br/j-растов насекомых - представителей различных отрядов: Murcstra suasa(Den. et Schff.),M. brassicae(L.), Keliothis ari-iigera(Hubn.) (Lepidoptera), Leptinotarza ileceml i neat a( Say.) (ColecptorrJ. Личинок M brass i cae (1 тыс.)- в Новосибирской обл., дич:-шэк и имаго L.decemlineata (15 тыс.) в Ростовской и Свердловской областях, личинок хлопковой совки Н. armígera (500), чгють капустной совки М. brass i cae ' (160) и огородной совки ttsussa (600) выращивали в лаборатории на среде разработанной в инст£:-:

- s -

yrio ШлекупрпоЗ биохопш (Лопаткш с сотр., 1920). Ягсшок

гй!фаш! в однороднее группы по визуальным признакам и по весо-

:'".! ППрЖЭТрГ.Г!.

Д'П идентификации гемсщггов ¡ia¿ использовали зонд на внут-лгггточлиГг ¡агьплй - глортехрзциклзш (ХГЩ, который свпзыва-:ся с гальцпоу :: er? с гкипгм-ллбо компонентом tuieTKü (ме>лбра-.!, АМп!.д,) (Григорович, Алекса, 1984; Добрецов, 1988). йсго ¡етличзетю гз.'.ящаов подсчитывав! в кгкзре Горяева (в 100 кзадрптои се^ги) шпосредствешю после взятия гегалтйы. гзцпгц лополикгзлько просматривали, используя фазово - конт--угнуп raipccitcim и юзргпзпааиэ азур - эозином по Романовскому

Гш.-за Для гаугснгл 4Гупгар:окалыюЯ активности гекоцитоз - их

í

;,здварптелмю ¡ипсубирсгали с разливши агентам:: ДОМ (дигид-;0|'си:рэ1П!лалпн;л) (4 , бактериями Escherichia coli Kl2 и

taíllus tUuriR'jtenalíS (ÍQ''ksiok/¡í3, суточная культура), с :згкздш>2! £р&кцк.!га ггшяпиЗи я аатявной гешлимфой без клене А тшез ютнди ргаиколкш! хзкхинаыи ФРА и Con A ионьвги-(?,анниэ с £ПТЦ. Лрл пп2":л::огпо реагарга образования спонтанных ¡зстск ш 0рнддргзп>ашя> рскшзвдацгй, данных в работах Mmtc С!ПО) и Scott (1071). Д:л злокгрошю - еткроскопического исс-•,-ойшшя сбразгл up*rtp3¿iXQ3 и го1:"сц!иов «{«исироаалн В 2,5 % ;у'П'Г02см а 0.11! фос$хглси буфере (pH 7,2), затеи

•оутгш! бпдпзтлдзгрог.пкэЗ кодой, напыляли золотом и просмат-iia."! m "л-;!ггг."плсл c::a::;rpj¡~,3H ы.л?роскспа Hitachi.

Ге:чк:гг:з Ш'глгплглип; пркидпли согласно ¡.гетоджо, от:саи-й (10f?0). /лпчзяктзркалапуи акгшлюегь гсг.эли:.:^ спро-

хяга íkx'í дигт:стр ято5йщ.'0якоЛ аоаи роста бактерий, при огон пт'С'Схпэ сес? - :."r:rpc0prati"3!.:0D шпольгопалн B.thuriR?ien3ís,

- б -

№ lisodeíKticus, Е. coli, Pseudomonas aeruginosis, • P. fluoresoencens, Seracia iraroensens. Титр гемолитической активности определяли методом двойного разведения, описанного для определения агглютинирующей активности. По количеству гемоглобина, выделяемого эритроцитами при лизисе, проводили более точную регистрацию гемолитической активности димфы(Anderson,1980).

Очистку активных фракций гемолимфы проводили, используя выса-таватп, гехьфильтра;^ш(иа ТОУО SODA VH-65 и-75) и ионообменную ,;7;0!.!0Т0графию (на КМ- и ДЕАЕ-целлюлозе). Электрофоретичес-кий ячализ в пластинах полиакриламидного геля в присутствии дс-ульфата натрия (ПААГ - ДСН) провалили по методу Laemmli в модифчкации Ford (1986). Во вт^гом тарианте_злекгрофорез прово' i; без детергентов ио модифицированной методике Laemmli (Га-аль с сгтр., 1982).

Цсрфофушщионалывя дифференциация гемоцитов.

В данной работе tipa идентификации гемоцитов были использованы известные морфокритерии, названия гемоцитов применялись в соответсвик с классификацией Breheün и Zachary (1986).

При использовании хлортетрациклина (ХГЦ)- зонда на внутрикле- , ' точный Cd'-+, мы регестрировали интенсивность сучения "клеток величина которого прямо коррелирует с содержанием катиона в примекСраняой области. Наибольшее свечение характерно для гра- .' нулоцитов и прогемоцитов, наименьшее для эноцитоидоз. Плазмзто-цитам и гранулоцитам свойственен широкий разброс по интенсивности свечения. Подобный характер' распределения клеток по интенсивности свечения свойственен всем системам гемоцитов изученных нами насекомых (табл.1). Ib свечению клеток гемоциты можно разделить на две группа Перзую группу гемоцитов с низкой

л;:;; \) ол-^зппл гюст?1 г. олловпс;» зпоучтолгл.!, еллру.'л;:'. Г:.: ;i:\¡ j::)'¿or;!¡" по;:::'!!:; г> цллгл!ллл.:0 йол-лл; q

лзлуплзй ллц грль/л сокер.-.пягс р:л5 'ллл:л ('Зэлл:;, поллсл-"j' ^;;!', лллллл, I'-'í" «jíyoí-^'Jtppjicí Зраки лт"; гранул

i лг гуолой. ,1 .......> л'-л^лзтиллел::: лглрлкл. Jiro; л груллу

!;;элст"г>"л:л гргл^ллл:!!,' и прогололихы, лолорлл оиллю

^уср^оцпруллуп цлтогр у. Яролллуточнлл по пллол-

:ллпслтл слсллнля кх:ло1<; глв:п лл? :л:взлатллл;. У л:лл лг;.л"лл ■■ралуллилтсн, Ц---*''- "ллзл?, ::о л л;;и:л:л:. стлполл.

^логшго, силчитол лл? рпо;лга:л и wrcoKCKMoer:! сг.счоаня тзва-;п рллпсЛ шзпллм:: лрслгот:! ллчл: л и с.с. ^улгллзпл талого сспусл-пл:. Шпулгшлл готщгтоп лск-ло лл дгл суйплиуллплл ¡т.

:nccüü!!CCT¡í :лл;'/сл лдг-плрссллл пл, поверг лпоал: i;го;л:л (\.:poí¡í,í-аЛ плллтилг}. У лселул .л ■ ллл; .'лг-'.сп ¡с пир::сл лруьл-

;?лсслл!;:с:> гллзцлгп, ллл'рл;? -л: "лл;лт^л! лл::г;ллоп лл г. г- -•рзнугоцкхи птл'л^тсм-лг. л ллл,-.; еллгл^ллл; с^рз'лоллгг л ч:оцл1ллд!Л Прл1 С' лцл'лл лллллл; лрзлл углллеэ лгл, лгл, ;о-гдадЙ!.;слу, иодсйлоз сгл:',, лл лгллл; слро;:л лглл ¡лпрзллл,-'CQ'fíTd ;:з.гы;о:>.1гс д;л.-; пр-ллллрел-шп гл-ллрлтотл койъпгрлтц cona-í'ira пезно .л^п "ir.is.uxz л ояр^дг.:оа)г:х л 'онсцитоп подтипы. С иг:з:;г1?Ш1егь.,оа чо-теьл грзнулорл-гоа j^wwwí« ¡.тзлгазоЛ еевга (Л ± П. ЕI о? cürpro л; ¡¿л.г грллулзцл.сл;) елллк-гллот) гек'гппи Сслл-л;:тц. С егд-ззтц сгггыпаагся npsr.f.HVJcri сэ грпн/хзцптц и с} груллплги, 'гордо, шк "¡г>ли п.-узн^тгу-л-гол -ол>,::э онрэдэхзкпгл *"":-ть (6 ¿ 1.3Х !:.лтс::>.

- s -

Ts3лица i.

Лнтенсквкосгь флуорсецэшш гсч;ацктог при Бзаш.;эдейс!шш с }?ГЦ ( откссктелыше оддашщы).

Тип

ге;;одтггоз

OüL~SS

количеств

гемоцитоа

Количество иэучекн их. ¡ насеисшх

Шд насе;:о;,;ого

---1---¡------

.U brajs i cae ! i» сизза | i i. aririi gc-гг --í--------_

прогешциты 98 12. 9 jl0:¿ 6 ICO + 5. 3 |110 + 15, ,1

плазматоциш: j

аызбовпдныг 2о 'J W. 0 i cS t 7. 4 + 0. 4 1 SO + 10. a

ззерэтеко- !

обрзэпш 70 ь 3, 0 I 72 + 4. 5 63 ± 9. 4. 1 74. X. 9. i

грапулоцити 6S 10. а 1 91 ±17. / 87 ¿15. 1 1 SS + 14. 3

коагулоцчти 7,4 ■ь 7. 5 ¡ ao ± 6. 8 77 + 5. 6 I o -i 1 W V. ,L 5, д

сферуло1рггы 66 10. о о ! 55 t 8. 7 60 t 7. 0 1 53 9. 0

зкоцпговды 28 X. 5. о ¡ 25 ±3.8 ny ± 6. 7 1 t . 5. a

17900 + 3000

25S00 + 3200

20000 t 4200

L. db-cssdimati.l

22000 + 3700

4

5

- О -

Г&гзадгсгачг? в гетцель гусениц луговой совки суспонз:ш бактерш! Е, coi; или В. thi'ringiensis приводило через дез часа к лгганэяга в гегаиггярной картине. . Сшкллось сбс.ее количество ггноцптоп (на СО ¿ 8.1%), в основном за счет спиягшя плаэмато-цитов (кп 91 + 4.2% от que,его числа пдазматоцитов) к незначительно грзугоцзтов (С + 2.3% от общего числа грзнулоцитов). У ннфпцироЕсшпк суспензией бактерий S. thuringiensis личишсах совок И. ernigera при обдем снижении плозштоцптов, как у личя-i-o.s It surca, уЕзличизагоеь количество гранулоцитов, которые с-Епз1г:о,хпеь с СопА-'ШТЦ, их количество возрастало до 9+ 1.5% (от сбцего числа гршулсцитсв), по сравнению с контроле»;, где они составляли всего 4+0.5% (руэ. 05). При этом следуем отметить, что сб^зе количество гранулоцитов незначительно шнгии-£oci. Особых изменений для СТД-поаолЕгельнш: гекюцитов не стачали. При использовании эритроцитов в опытах in vitro выявили гемоциты, которые способны образовывать спонтанные розетки с дсжшма 'кгзтнгш позвоночные Процессы розеткосСразоганиа с эритроцитами п взаимодействие ге.моцитов с бактериями подобии.

Популяция гемоцнтов в организме насекомого гетерогенна,

это обусловлено тем, что гемоциты находятся в различных стадн-

N

ях развития и физиологического состоят я. Вероятно, критерием состояния индивидуальной клетки могэт быть ' наличие внутриклеточного кальция и характер его распределения в ¡слетке. Если учесть, что ХТЦ образует, тройной шыплекс Са++ -ХГЦ-иембрана, а такте, возможно, Са++ -ХГЦ-АДФ (Добрецов, 1989), то по интенсивности флуоресценции и по характеру распределения ее в тетке, полно судить о состоянии гемоцитов в той или иной группе. Уровень внутриклеточного кальция падает з зрелых клетках, ::згда

в цт/ошиэдз шташгг.г'зетея значительнее голгоссхво секрэтк-líjt: oro ï.-дарииа., и и.м»гьв Щкллпческа выполняет "тракмюрт-тУ фуши;;;:-;. Sïo осюОенво ларам'ерно дл;: зрелых гшоща-окдов и ci j^yjxJtr-fOB." Среди гргшухоцяюв ¡штексишюсхь оьочеша сшша-отзп у ношулоцгиов. В яигшхошщис, гагоркз, вероятно, спо-со&лд окктеапровать в suvrK¿?. га'дгг-нибуд!/ ьзцгекева, уровень вп;тпч;;леточного кааздпя охЕозкхедьЕо вгжак; Это, как правило, осгоскхсл к иезреш.« к ьзретевоЕидешм нааз^агащмам. Большой рсзпрсс гропулоцптоЕ ко иитенишноегк &й8уорзсц0НЩШ, е:;д!:;.:0, . соуслоыкш 1лдаг офункнаикигьког»ю к гетерогенность» это»\ груши клеток. Сувкциояадыкш готерогеаиокя» волу-шцзл гековдтов наиболее ярко проявляйся на пвркж этапа;'. фор.»арогаш!а т&уитого о?ре7а лрп пнфзщпргс;:;;:;:- разл^чш-: чугйроды :,•./> urek'saizr (арш1-рэциш, бггагордо к т.к,). S первую оигргдь вай-л^сл количество пла^птоцитоп. Иодост-со еюг.хш';о т-жчшгл гиз£яш:с ксслгдога-Tejsi, мотор^э СЕНЗШПЛЛ Ein процессы о m::orо

тйгкчсского ícj.iopa i;croi3¿;¡¡"; (Ciif-uv • Anazcan, äCSSj Oiniî-Dunn, 1909). ЪэрсйТДЫЛ ГОГОЧШЛМ OXCT'O bVr.tCpr. î-jj-yï îtîîi TS" tronare п/нлн ошдорлиаьнш ezcuví kiQ í: c;:c:> cvcio;::-

усняшжи» резьяшшо npor.ecci;, vzr.-y.:xr.'- cOi:" ог: кдшт.соЗяг Düiuiiiiie. Следует что по отгел.,::.:; ; v.;.1.:;;;-;;:,.;..; iv,■;■::,-

родгпм oó¿e:;rir"! rc;'ojr;v:r uótjn ьо o^.ii-w:' сглл-

4:>:-J, тщпгз, обусловило {.-..•• '.txji; ■ ü.-pyifi'yp. Cootí,sic£oi:;:o кл-гы; E.coli, к лисахар:даюЛ оОохочкой (F»¿vnol(b, îCSFj) s in;:« л:

pyi~rc<; па noi2ep::noov:î_ ejiou"'íío::,:;db, s ^.r. л. • иг В. Lhurineiensis, ¡жоркэ п ::;::: ¡:v

са. Зноцитокдн жр^лерпсупхея ес^лр-л.шц;:;

';„:■'v.-!::. l'^í,;. И -1у:к i'f- >.¡y.r ¡u -y:

: , : : y, ¡3i;r:¡ ч 2 'л >r;.-. v: "-С!:.;:-

г: . t л - • . В я!.1"1.":', ■^.vp'j t i-i-. :op;--í;py;i:i нч ;,.;!: y.^v-

..............................i'j;-. :::¡-.¡;üc L ; '.¡j:---

■:■>■'»y.i ]>rv.ü 1., Cuitó >;;::( о.'.:ылр: ¡- r "

i-;-ч/шп'й'/р : ¡í 'u'crc:-.^:;-:;^ .. "

•г.,-'-к,-ii!l;t"I! ív : " .,т, i.,.,-.. г.",.-1" . - ■■ • : •.■,..:

v;pC'í» CUir.:.!. ¡'.. rc.JJ -fu V: : .>.',v-¡ '

|'>:.г!!ь : У:.УУУ' ::■... jiir яг ;

... i, ' iC. ¡ ..-,:"" ;.....i :..,","'".!•.'::"... ." : ."."5 .

í :.:i , ■ Г' • ' . . . .',. i' • ' / ' :. .; .

; ¡ : l1 ! iri;-- ',í c'J'..■:■'.¡... :¡ ."■...',: 41. :: .. , . >¡ : '

l'ii-ûi^iï'u'ïï .-,■"•..:•. i ., ■•...•:.' ,

■";,ir.':¡ "-'.ííi :>." :oftbr ' -,;л i.,:" ::■ ¡ i.c:. . ,*.,,.: c.j; /f'J *;.■

'tn.-' ;-i V3iuiH: .1 . г \..x. ::...',:¡x • - -, vy;-

ir/ . ,1 ';íV; G.:, J.iг.о П) ,-t. .-:! j i ^'{j! .

У .14.r.< ü.iyu>-, . .i-.:!.-;.:■,:•!•■; -, :._11¡: ;;'•*; .'v.:.':

IIÜÍ'ÍÍ, тигр íirr.Mji m • ■ i :1 : :.. кг.у.окп'Л" i .. ^I.'ícíüí.:.;:'*;■

ого, ;'Г(; i- ■■.-*. . .:,'j.:-j:\'¡■ • ■ ссзгги: ::: л rri 1;;rr. •■:

В rn.'-: r:-..л:".,::1. 'toi'cr. H. яг: г гага,

i'. i n !L . л .■ ~ ос:;:фу; j;.':.; '. iiuiví'b'.'i'u астякгло'.'Ь 110 IV'- r ^^¡tíím p^n.«ri¡:¡¿;: r;:,-.i <.„v.'4:- ¡u.-: и ::икге::|:>:\;нет-■

В щшсртств!«', сахароз аггл.гт:!кл:г.::: "л. jföi.tcs ;•

зависимости от вида насекомого и типа сахара. Значительное снижение титра агглютинации у всех видов совок регеетрировапи в присутствии фукозн, лактоги, rxsrasu (табл.3). ЗЬтя существует отличия, так в присутсшш галактоз» агглютинация эритроцитов 1ш»'кбироБавлсь полшостьа в гемолимфе хлопковой сошш, частично в гемолимфе капустной cobiöi, в шньезй степени у огородной совки (табл.3). В присутсвии 1!-ацэтилг.т:озач1ша тхпгр штллшшцил в гемолимфе Н.armígera резко возрастал и достигал 20 (logg. титр"1)-

Таблица 2.

Титр агглютинации (1ог„) гема.лим^ личинок совок последнего возраста

Вид насекомого Тест клетки

Зритроцпти Впфооргапишгл

i i кз лоно ка | барана! шзгл i i í i "" 1 Е. col i i В. thur. |M Iii?.

и. «паза ! i 9 ! 4 14" i i 4 i -»- |

V, Ьгаазюш ! 1 ....... 0 I 2 ! -»- 3 I j 3

И. arr.sgera 1Б ! i .. — i i ll ! ю | Ii

— определение из проводили. В. thur. В. thurlngiensis; Ulis. - М. lisodeikticus

Изобходи^з о!изтй?ь гетерогенность агглютшкяоп в гешлод-це соаас, «п-о шлно яроле ионетрирсвагь при перэгсрзслгсн "ксто-Г,Э5К" ГЗ!.ЭДК^][и раЗЛ!ГО!ШШ ТИПСЯ1 ISJE0TOK. При ЭТО!.! хершстерно, иго и гешлчмфэ "петоцэшюй" эритроцзгтачи позвоночных, титр аггаашпрщп! по отвокэаав к Ойктериазьаш кветивм пзъедшея незначительно. Аналогично, геЪоиозфз "истодешш" бактериями сохраняла вгрхэтшшруггцуа шшашость при взаимодействии о пэре-чисздптод типаш зрнтрощдазв. 1Ь хроштограшах как "кстоцзп-i'.oíi" зр:п?рощгга131 чзяошса, таи и патиокой гемолиза различных видов сопок полю видеть, что агглгл-шпп-:н представляю? бзлзи с шлекуларяим весом в пределах 200-400 №. Шдобиыз фрагсщга Сел-коп, получзышх при гвль-^шьтращш, способны активировать ге-юцнти м, соотвзтсЕепио, ускорять процессы кгашюобразования я пшсапсухящгл.

В прксутсшш частично очзпцгнпых агглютининов клшяюобраао-вшгао геиоцатов начинается 'юреэ 3-10 ыки (в ьхштролэ отзигю геиощгти щаишгрупгся через 20-30 шп). Если а кудьтуралькой среде находятся багегориальнш клетки, то они агглютинируют, образуя агрегаты, па поверхности юторых начяшлг фиксироваться геглщгги . Подобный процесс зшсанчиЕается чзрев 5-10 мин образованней различных по неличшге шампов гешцитов и бшегеркй (без агглетиигягов - через 10-60 ¡¿шг).

Нп^шсщш в гошцзль совкзи ■ суспензии бактерий !.í lisodalkticus или В. thurir®len3is или эритроцитов человека приводи? i: изьюпениа -гетра агглотннацин. В retrasarte хлопковой

■ г-\~Жгтг;Лт 2Я-Ш1з:го?С11по - -„- JrJiBtssrt хэ£КоаЛш>- ( - )

!ГГ . S G -COJIÍÍOIÍ

• ■

03 .' ИТ. "El"

>т С) "a" тие.таш,! -алс^гки

1 - ) • Т- z V I :/*••

. п i J П kaq vitJe

t ¿J ö s tSJO.V.Jtüí

( - ) -T О a rao;',

РД ß ixc. ';!,-..": э

'dl « .

?л б à

Ö у í? ouc'.líj

ÜX ö ú

vi e i) ■ oi-íl.ui.íuvf

( - ) j )

UÎ"îill3j3 '¡i H

vlairao:!.!'. lí

_____ ______ _______

■yîai) йэтсшезч с гласно л я c.í:i:::q-i Лу/íz

ГЛ"'ЛЛ H- I . ; • ' ''?'! Л'ЛЛ! ЛЛКЕП? " Г-VC "ЛЗ " •......... •

■ и Л л-, :rv-¡ -er::, :лгп л -y ■' ; -ч •< лз~

• з :лл ллгл-"П " у Сл"л зл "гуллу лдлззлн'э тлтл л ! .- ;

"".' П"Л '"'•■. ■ -Л' ■■ Л !Л:Л' ' .- 1 Лч Л Л'.'.- ЛЛ1Л:!ЛЛ'"Л

глллул': у-г " Л ■РЛЛЛЛЛЛ'Л: л ллл i IV 7"'> (рулл)- У

■■ л;-' < >--.....•■•■:! "луj ;уу 221?,'- - 'M ' , УЛЛЗУЗ ллгугуру

"-РГ.:-. :■ . ' : Л. •'■;• : ЛЛЛ Л ..jr.;'.? Л; '■■:. Л у: ЛЛ"" Л ЛЛЧ !'.'Л'

¡ir,, :y,í;^;'¡4¡.-ii : Л , .Л ' " я Г-' ГЛ

:ЛЛ"> i л '-г Г v Pvrí'i рл: ГЛЛЛЛЛЧ ЛУЛЛЛЛЗ УЛЛЛ !?гг.~ЛГЛ!ь"рл; ллл ;лт;л ^лл-л.лу. ул ù Гр:л.2;, .л у*;ул->ну> л эглитоултл'-1 , . ,coiл--л-. ;л. 'лургз луу;ут

ч'г.'д;лт.ллуул-. -г. ••-■..у-' г », ллгзллл'л'У'иь

Лпл--; лл— л'Лзззл' улуср-л: лл лглулсл::':'глллз ::л лтлуз-

¡.г Л'Л.з/'Л --Ч Л" .ЛЛЛЛ! ! Л 'Л ЛлЛ üp-^v; х^леплг CCÖDl'i, ло гезп

л'ст. г.-;"■ л;-сл ■ ллллл'лллглюп злел^-нелтьо пллл-

г; ■'tir"д.л"-.л"" • *'• л"'-Л лл-л"-" л:'лл:л;л1 лл ¡'злОрзлзл Л.ГУ-¡•ОЛЛЛ'Л"!.-Л V/ ЗЛЛЛЛЛЛЛ Л Л ::;■!/ ЛЛ^ЗГЛ ГУЛ ЗЛИТСЯ л лрз.уз--íaa .лЛ'-лзО i D. Г.<;л:> х;лллтллл дгл атлутгзллгло*;,

-'■•;>"гллл {■•". г.-уолг'Л'.! 7луг-;л глллс г лкгл-лч (Ьзгглг, 1Р53; ^ ''Г'л'уЛулг, НЛл; Г-fil н л. ). тле пвудашлгэ ЛГУ-

т-^л'ллл; «^п!0*л'-сг.яз?лсй рпреузгзкз'лл уахврлл Эд.ГЛ, Слзуувт лл-^глт?,, 'ло V--- лллл:з •. - : : лллллл.зрз зл'Л.ззузлзн олрзул;-п--.^,,,;.. г. гллЛлл.лл;; ¡лллрол, лСхл п^гле:гзуvir иолутороз

л'олсгл'* > " ду 3!уу !л. íryvro crh-'-cüí.tí, :лллл.лзл у луг.'. гуузз-п'ччллл in i* ,у' лл'л " ллл'чпг^ 'лт^лгмкп;! у луслгого'! :т кзлус.;'-с"»'-г. Глгслгл", зо ЛЗЛЛ^^О^СУЛЛЛ Р-Гллгглллор а

V /5МН

- а

Ш Ч

о р;

о гн

/ь

■24

22

20

■18 | е

■ 16

14

24

48 время/ча

Рис.1 . Изменение $енолооксидазной(1) и аг^лютинируюш,ей(2) активности в гемолимфе хлопковой совки Н. агпиеега при инъецировании клеток В. Ышпп^епз^з

/ 3- при инъец%ювании фосфатного буйера.

atZ i

/ifiUiij !

3.0 -

2.0 ■

11 jf

4UL r !

.1_J^J-^-ikrzi

! I--'"'" í j

i-! , - Ï

.1/

I 2 3 4 5 . ■

Fuc. 2 . Сеюшзокспдззиая и агп?,тпчкч»}М№» 1 >v. t.- ; •> ¡ гемсш:мфч капустной cown К < î -¡ ; ч-.

КИП ЮТТС!: M ] J sedas!" ¡r:-;;;.

2 - Фэнэлоксида^ПаЧ .к"; о r< п vv~

нии л-ютгопгюскего : •••

3 - уитп агг/юпшарк...

..jup'.'j...p, ríU^O ¡\.'.H:J- (¡-..!; «./.: с "л tur: с¡r,

i'íiCi'c^ (ЛУ-.'иМ í'j:\Ys, Í;1". L Cti'J :4t,, ii¡ ¡Ü'.D/ÍIÜ' К я: I •■.;■• ¡..íi^iü ¡.OiiíHi í'|).q;.';¡ i:¿¡^.'lü ^/-c, jw¡i .-."и?! u t.-eay: ;v: i.- н .-

.•¡•«..apsiißiuü: ar¡ .lüuiKíh ■ ^ i;••».." - .¡-i ¡•■•¡•i.

О -.ОПУ i4Ü¡". Г. i iL. r'¡lía '■■л.>.1. 'í.'.!',;-.. ; ! ¡:1 |1 uí'í

_Y;V íü:^!;;;.., ¿J'.'-í.f'l'v-O. íif 1 •".';.>,-'■' !.. ... : .j- il ;.!¡V !j_'i.-л.:,. .-.'1.í-..

Í.jr, iibKih-r ytóvXi;--« ¡i..;;; . .Ïi--- ^

t.7,; Oú "j.;::.. , T."; • Г.",' .-¡i-'« V'uV:;

Í.J111 jjSíií.-,. 'Ir-;!Oj.¿>" ,, ■ . ¡ . ï;, -'J ■. .'i ¡. ¡i :r". i i j l

К íii.'-p.. < 1 i Y •',. í-'íi- • i'..: ••

аткакнащш ¡;;TÓ\O¡v l ; :...;:->f./;:,i4.; i .

Ь~)<-'ii'¿ OiliL nü^O.Ysiii'iciil'.! .■..:::". • viví . , - :¡i¡ i i .Y...! .

■ ■■or.-.v:/ - а ¡uy/.Y..;!!;.;.< ,'IY, Í.Y.

i; opiYhi-Y' : .'■.! ч- ¡;.. ¡ ;; Y»y¡ 'y.'.i;:. ■>: '¡'i¡.;,v y rir-vic;;p: CTUOÚ YrsYYYY. vj.\-. ",. : (YY;;.Í,U" ÍYÍ.;:,;YYY,

YYY.i!; Cíp'.¡0f>'!, ..:'.. .'¡,IY!;.¡Y '■;.-■ y'!;,* ;

(¡ta.: pyoyí г . >:■ г. , íy: .¡ ч . yyy,. .:,¡i

'V'! jU'l.'or ■ Y : ;; „ Гг. '..'.[.-.vi ;..':Y,\Y: <\ ■;!''-!.:.;'.r¡

¡i.'.i'm'í: iyi'jiibo.^xoü cníü.yyyc sbu.^y; 'íj:,,:;: i .-'a.. ',(..

?.Yi i'íT'WL ¡YiYu Yj'b i.; ijJYlüY YjYIU, ' YYY. ,:.( ¡;,.;-.¡s-

Ц.:;, iiKtí.aí.i;:; vice.;« -j ;...r¡4 : - ; .Y¡ •у.-'- \\¡

¡YY-yy,, tb.í'.*.y¡'í;¡Yt ; '^.¡Y ,'уЛ:>~

h.voc ;s . .:í:j . ^ ú и--:.. -.¡.„■ï ,■. ,.

r5í.c>jj¡'/.;;j. ¡; с^-'ц, v.'...-. ¡-ли

ïïi.a с b^'íiií ai;i:.;:;:u¡,¡

ruíjjiíiviu-civytí ь гегг.-л;;:.,-;^ or¡jV--;:t.,-;,n¡: / гг.>

£:y,oa нзгекл&л. йр-^ггазитйД-гй -ot-pa^oñ l¡yu.;.r.pura

- "59 - .

(Dif.TJcn ¡м'<':*, l-ccdlcrien сзШГэг, Terostris erredlatus),

Lopii't.pt^iCi (!.lif..ctK2Ds !i.sraigern, Pieris brassiсм, n.rsw^o. Г?гЛг".Игиз r.ibiricus, /.paria orotacgi, Lyirsntria' «lipp"*?» L. r.'^ncdvO, Ctelccptera (Vjlsnososra r.oneum, Loptinotnrsa

'ijc^-'ilir-c^d). г. голсрадекото :.ука шсрг.иэ

mr.Tm С-ъ: (игм Со scorcn'rt спсос?еи лпзкрозать разлкч-ат-Я;: "г;:тсс!гг^га псппопснинсс. Г.~"О.Н-Л м-эпал таршг^бплгг:."! ¡>rc:;s г: уошг^гпул'^л гепем в прэделзх S3 kD. /лггппность сгаго О?,т:я рзега зоъхртгр'п л ярлаутствпл во зязгшвЗ ерэда попои

гепоршта. I'zvCazэе ;с гездэйекгпп гаади::^ с^ролпсь

;.'Р,ПТ""?П'!! "ЗЛСГТЯ: и C.T""''. Пог-Й ГГ'"'- Г:ОГСГ!.~£ ЯрОПОКСДГГ

10-1.1 -рнргачтн т». :r.u;t - соохготсвззко са 1В-?.0 л

'r.,j-CJ .«пя'ругтея за СО ?гпт, no ICQ;\-го го-

гл; ■•j'ryr;! (сгг,?!:":г-:з па со:?зг:г-:эс!гс;гт лппису)

isrrp ;-?-t>r**t 'fT^nnztr.o.'TJ с гглрятгем и досл-трл ?т:::-

.. ;r„:ro (t:¿pig тгт or-т:-"":н:~1 к зрятрокггем чолзвз»а), но

г" лрп ncrps:-*3sn."t псгр.г»э рпеэгтаото пли при !!льск~

тг'-:;у !A lipcd-mtticv:?. ¡л ирсц-сс rcaasa зпачшельпоо

p:v,..»..r.It:3 т;с7г..г (Сч-н-, Fb+-b, Zn-н-), ЭДТЛ ::

(О. П'О, пнггб'гру-т .щчтегкетп г-пг.'аиоотъ бзл-

::п з nrw-s^Jn Мхн- увеличшюех-

: :.Т" vrrp ~~ Пргдггр^гольгюэ иш^тЗпроззнпз

i :•.*-т !*i (CV), гслул-зш:":'! при гггзягтотпш суль^-тсм п

•-•v::".i. с т~г:т;л ЕЗ? <10тл:'.2й/.'т.*> прпголтз? я пслхс.т/ ипгпЗя-

Г-::гп~1!» кггег--*? cZpciz.z? tsrzir.sil vn vzoizzo, г'тглг:;? " т^Сгрзг.тгл гэ сроду ряд Оэлаз, з тем чтгслэ rs-

- ill) --

jíu-.; Liu кий'-азкззз

Í,Í¡ ¡.....•OiiZ-tíZ:: VÍA.'S^ÜÍi и ьрлхрсцijioí;

r^ji.ar., i) no/;oa:ra.-: sou ra c-L/■•).-с^рУ^ц^у i

иш Г«з..;г;й£» ccücú кхздш e пе-

.ЧДРСМ Ii Cil-Ui;;: aü:t'Oü;>t,hpOia2<iC.t. íW0«'tJS3i3íí¡ (pOSiüJ) iy:..:;h>í/., ¡:í>.;). ¡i,; к ¿"¿'неги cc^ú;:: пр^лх-рло 2,£b от

üi„ .jro itoarecci'bi х-ьизц^и^. Зйс^гэ ow?:cc>i>s:w¿; со:: сиргак* чорг» í-g шя» S;, и.да ади^гузда -¿¡¿ияил аряфощии ъь-s • . ...-¡.-л е^из кшссищскуз £o¡n:i/ csc.uossiüi: Ib-

¿f¿di&¿ "ж-таш iкреги'Л, n п*ю:сшшскай ¿im; npi; нар^ьепш; ирргяци:.' лсд! кггхочли;; >;г.!'Лрщ{. 1йро~ LGC, VO.UO i;¡u lüií^&ip-Tja&üi i-i; íií^jinax r^or-Sui.- valuta не c5-с;;к:йлх.с.;;1:з fcn.^i-cbdrii a ¿ovo органа, L;n iv.ioiü;.:;: ;.7iCt¿, так s: ^лгк'лю -

ra:,.olí,::;::;! но о&алаа»' доя^шюрышиаб актклкость» к кспьггчн- 1 ÍUJ; 't.. liçoloihcicuzsj J oruym«^,

E, thiu'iitflenals, Scraoie ¡lirc-raciis, P. f luorôscsnsûns. Spjapu;, vis i'ûpcàoïaiiJiKj (2. БА), слт1икга;/ру5хс,л s raw

Ъ .'.тука, Ii J «с гшзпрушся.

■ Толь roi^iin'HS3Cí»ro бэжь: б организме i;at!ùiav!oi'o из üorcQU г;спг, Однако, учпниид, что ore ¿¿»'.гашскль ьоэрамазг пра u&sípíííh i-о шшшгй сродо киьцм; и/1Ш1 оакторк-Айышх дшга-1»г..оглпрВД£т, îcoïopî.'-» нснзляаася б гемолга: га&генл пасе ¡:":.'::ro tsmpopr&yEsiuti« 512;: при ранении, им ..p.-.vraw/areb, чхо . гглохзншль' бе-Qiî одюиш» спредосивш jr.,..,iïi:ue (функции а оргсшюк'- г^на. Ссьа .в;« ¿уяюод 1л,ор.{у доздх «гши-магься б ZüZi.üüQvmbi на чу?:.родиш! ык-и.и, кэшыш ее прошиде,-

емзегь, с. саэтя57с£1-ш) члптьчгим пли ел* .ицюе.пиш ый-

л^рлл 1лтррс:п ^..-лл^лд " глтгтллроллрлл и л'л'; лл;лл~

(ш) Еетп-люа-п, р^'рслплроллхг л (¡ргли'л'л :лгл ¡иг.Р-здус?::.!'" 1Ъ.з:£лл;>луг) лтлиРзлспп плЛ'лрси-н л

лл'I"! ::лл;;лллпл anppn i!. crrU';orr, Слрорллагрг-' - Л "Л^ЛГ-

^п«:^ i^íV лгхг "К"?-л Г. луглпрлз, гзлл:;'"?*: Л ггрлл"л : 'j'-'z.l-

cíz кааогшЬ'л. 3 рслзлллл in vK-тэ отг'шл'л гл;.лшл;л ллл^ллл л

тлпул -л-рлг-е;л) л лэ'ллл; 4-3' "^ссл р:лолс;л;л^л;7 :: ЛЛ^рллпа, Пол ;1.л-:'л:рлл?.:пл: < глте-ол ггллмс;] о .-'C'/l :^грэтртал:?-»": ллглллссгд лллзлотапглл!! п л:1ло::орг!л грллулллргл-, te'гррларз^л'^с;"; С-лллеллгл'й-у'}

З )тулпл'л"г л гл.'лл'ллло-

ci02Kî, р-р-^тр л.?га л^ллог-'-л ";лл лтого p:p" ~ лл р. !

ррэллл"'^: орг'лол, 1 ТУп" ул^тгггрЧгьлллс'л5:: л'лл^^^л'л л зугсглгл "СЛ а;;;. :л.л: лл.р> •■.^'.•.--ji.v: -лаптоп, а'л у. л гегл/'рпез ::а .Ьр':;т'рллн: мэ-"'. лглп узр^; гл., ллл гслррл• ; рлу;-' ллг? PD ' грэлу Con:1 у ррлр ррлрллл! ir.czz:: л ;;; :рл"л;;

G7, ISO л 2Ш roinjPP; 'глг-э щлг-тлтелулт л гол^лрл л rciipiis:;, - J^ei/'poroini? Cï-.r^r.;:;Ï '

thurins'icrvsis л'-ï лрллгетарор л го?-:о;;лла ллотгл-^й и

л:лзусхнсй cosoi: Sippro;;;:? л-у. что ирп-; ;>о :лл1ллйлрлллл гррлл'лпагы:оз ■ .трэллрркр? ллткрлсат;! гЬЕагэ-сзгяйшг, : л::: п •ír-3 рзгкаг" ¿ллл-гкгрр л з плел'-лутлл-з

?„.ллл горорлкоаллл:? л^рр-лс^хп рлр'-лкгл я л:лал:лг"; гусэ-,Л). ' V:>i.n\.:r:r'"s:<> я гЬл:лрл<> ''озфлллего бу.р:рл ллл тгагго:т::л:га нслрлтлл лр'У'ллл итазюгигао лр^л-аплл r:í-

sir-'HOS-s: лолггкз' ;¡p:í рлзи лгссхйроллрлгэ гллп;--

::остн ibpinnra нро:-гл'о.с;г з тэодшэ р-тт' .

Лкшслюш LO h '¿zw/jísu соллл us ска—иась г»

присудишь гадшисзк, ¿.ласзл л ыкорлэ и>г-

¿¿злуитлл OïbOT ллмкопгх ¿лрллрузлл* ^^дул-ил; с;.31л:лн,л; ГмШ-очаой, еггхльаьру^. f-i.c£c,ra!¡yií(«!KO."« :¡ ■

Cíi25.'SU3i£ ít-iíaá«;Л'брЯйаЬШЬ &!A.KC. t30 ЛЛлчЛЛЛ ГЛ, fcRû,-. ù\i; .ллслп, ï-zhii'r.zLmiidVJ и Нирллллл-.- рзлл;,:^ iú::.,l,o,¡

обузжшяшяэт cidöiitoKOöv* tsss-süiua «e s -

C43ÏC ГЛреДЗХЛС'Г i-CÏOM:W,-.C.t7. !.

Ш первая атаках икулилло-адаи лглолзи .л^.лл с

гшхиБШ 5г.1«ш пзд ^Í^íluju i¡apj¡mii:;c ¡.лдлзлоррл

геьацатоа ¿í/juk кузллули, а с йучлз поаре^ьлс ia¡.'i«i;, н;.г-к220Д1М U'.TJiBiipûLSj;«i» I-Jfc.Ultima ОДкиШОЬ IjpO'ÍOtiS ú.'ílZV. SCCc-рлл, Koiopvii еьзеейии v.'> .i.yXbpíH it i}uHD£»'.4¿ti¿&K)'», СГКДОи-пцруЕцу») и г^зл'улнругл^л ¿> i гоа^пЛ; счллев ыглл.лллл;-

р:2шш£ fü^ss. <4рак-:л.ты 1шлс;ч>;йз csouüií »i/j¿x:í í:33¿.>:.3i;¡ícj üO.'¡3p.3iau:¿ n ¿ллл; шгух изйосргдстьзпип а>л¿¡ллроьа^-з;

¿зр:ллин1Л I гс^еразкиД ¡i иротеази.-гЛ) k;:;îî^cî JsKetiOtrcro Oipyu-fyps популяции i-Kiáíiuaob в сеноиноу yuüEjpcaxitó дек разнит. ьидов пасекашл, что согхгсуеч-с;» с дмигиш -шорагурц (ß'jpts, 1973; Ratoliff'6, Unte, iß82).

кйулз:л:з гоцоцнтоб с использован: ¿-и р^глчви» $«зио':ога-V3CIUK TiCïOïi и ¡ic'pseopoi, ДЛЕ спрйдйлзньи: яйзтпи, юзкшс? более жшм ар^атаыиь прод-зсси, «aiopi.v вдоздод&х' прл и:л.-цзроваи:щ оргализиг дасшаого. Tax, иаряду с пстолрьиз^ пхаа-иуздяарного пуха гсшщмгоа, ка пгршх: ва-ааах ии^икразешил, иг1;эияз'хс,з cspysaypa гранухэц.Л£рного пула.. Еодебш/з пзьзньйпл

выявляется при использовании конконавалина А, который епчаывз ется с углеводными остатками, специфичными в основном к Е-ман-нове и в ыеиъгс»й степени i: D-глпкозе и Н-ацетилглнсозамш^ (Лахтйн, 1987). На первых этапах инфекции у личинок •!. armi<< »г-увеличивается количество конконавапин А-полокитэльных грануло цитов, хотя обвзеэ количество гранулоцитов изменяется незначительно. Вероятно, в гранулоцитах процессируются рецептора, способные связываться с конконавалином А. Наличие подобных рецепторов .по-видимому характеризует возникновение одределе шт. го пула "имыунокошетевтных" гёмоцитов. Их роль в распознова-нии чужеродного обьекта, вероятно, определяется комплементар-ностьв между углеводными остатками рецепторов гёмоцитов и углеводных детерминант рецепторов чужеродного обьекта. Косвенное подтверждение атому было голучено рядом исследователей на Drosophila malanogfaster п Aedes aeglptl при использовании ч качестве маркеров других лектинов (Rizki, Rlzkl, 1983; Happi, Silvers, 1984; Nappl, Christensen, 1988).

Роль агглгтинтшов в формировании.иммунного ответа у насекомых до сих пор не ясна. В основном исследователи пытаются выяснить играот дикзкую-лиСо роль эти вещества при распознавании патогепа и ,особенно, обладай? ли они опсонизируищрй ак-тивностав или не». ,

В наших экспериментах было установлено, что в присутствии гемолимфы резко сокрадается гремя кпампообразования, как геио-цитов с бактериями, так и гёмоцитов меаду собой. Аналогичные результаты были получены, когда мыиспользовали частично очи-щэннда агглютинины совок. Способность агглютининов ускорять процессы инкапсуляции может рыт» опосредованна их способностью об-

__ 1 _ ».'.'j ~

f.cüu8it ' подцл.;ораощцз ¿гаду» ьропс^ед*? у а?'-* uïc^a-o«::;;; веющие: ¡.íjL^ún, »r-ci ои;л ададеагЕкг-црс^тю us apiüDpa хс::-ïima • из reiai.u5ïu е^-р.ш:здсшго тсуааглй ftîÂsrisam (litíu» liatón, lößV). Вда5кш acunaapu свсОощт ук^одлжн учааг-K2U3J lary? СЕЯ&их-аи'ЬСК с чу-'/^гоД"^ с&екхси 3í/í,:::¡ с тешизд.-121. При Eaaro^Âii.CÏEi3) U пикол Л.СО ПО£С-ЮОСШ> ЬСЗШЙШ кон&да&тдопзиэ од^пэдия ъэ-клеул ет'йшаоа С да;;» при ct~ cyïecint пошзрюш&а» вгия ьигскул), isïapis a егга очередь ta-гуз игры* рои» TiUiiTupaii.; ^хавази* яроцзеаоп «»агуллц;;:?. COOTBSÏCEÔHJÎO . ь ярившими тпХ'&'/зерх .««яишглца casn^} ехтаьтанкг шишюз с к^улоцп.вм; и/1Ш1 1»згухэгсги&ш и г '. кон$ог:,:ац!;оп1:це ьзисисикл (ил:; нм^.у^адгл) ело;и!1>уэтс*« '«VC» кшя 'иргклмаовагь кеггугадяа тда»^« Яитьбсрзваипе козгу* ляцци rcí.:üs¡!u¿;> ш bkjwv»«« у гдо/выз;» toœ&i H.aiKit^ra KfH. дсбамшш i'üsaut-osii пли ;;::;;ic3U. ¿acnars-uar: роулътиги ífoy;

поручены Hl Л51ЧШ!»Ш:£ VàUdGanVb hL&íUñ (MlRillCK (¿Ь

all, lOSü), y KüTopiK lau-üOi'.poücuus га-.к-г;.-.яилаа&, ноаи&ццегз 1! 13, riXi&úOÁ »au üiiíi.auaupuíiaju, ni^e,:,.;/ i; й^ш^ачнм avv ссшиции cpViïpoiyiiOn к кэагулнцчц i

В и:^ук;;эго охььта ¡¡исекок.г; cjv,}i-X4.vwiy* риг;,

¿a-pas? йзиаиксцдгас. . llpii bî«kïtv;-w -дошлю с^р^лпа ¡¡о ш'ь-HEB срощг 'ИДйКВИСЗ рад ПС1СНД01-. С (.ОМЬЗ: C]M/;'.'fiiOíí К реи-ятш ii0EcpzuG2ïfiîi (сгэкго, ro..2¡íi;v, fc;:;c¡ii;;i т.д.), тс:; пазшмиш "lasaiaio • болкп" (RütcliíTc, A' i.nía, Ycvi'3i;i,

1990). Caía ^энологлнл-за г&кзд сбвдц.и-/ ноди'т^м еюй.тгга'аг (Yeatcii) íoai). Ш eu.? Руг (1S73) усу<шог;.!г4 что жиямоегь кояяяшдазк у шьецкрекишкл €r.:a\--FS-rii:;; чэрс» cy;;sî

штсгскзи» сж-пзхзл E-n бг'.зо j'Cïssosssno, ч?о пог.сс-коэ :-ч-кйарсггпЕз Ssptsnsa югзг 2ая?г*сл чэрзз 10-20 ссздесхск ггзчзгсйая, nïrj ка пзряа sranas :r1::ropoB2nra дзт:?л «!.зп:.\ч-ггапзпгп a:zT.vn отдали; ка агорой пгеи, яо прл ягом в?яяя

• за зге? ¡•rçr.ïici.'ï пгачигзтов егз'.ЗШ: Г!-:: ,'-t-i-.:.-ï'.r.-!TJî crasc.'rnt':: о агой спахсгай и, гзгоэтпо, с

'ï квя^йгазД спбтокзг:!. 17т: зтом по оБир.з-тзгьгз, г.-.таЗ Л.ЗО S огйгем яы^гтлт.-з:, Qu

ipismpnr?} .»гткчлмэч í!'-;í ЛРУгей. If ::стя пггязггакруэтля и tawr ту.:' спото11'! Сзт'о^г^зппг ?'3"лу ссбоД, от'гзтаь

Е?""'.':;;™:'"'."!^"^::"7r¡i гз':з":пп пп'-ппиггр?-

ггчзл, и в сргзшз}"- язео-

г:;"Зго< Г co"r;i

!'.гпмпзгз,- гг.з с г:.'.......г;; --oí;

г.г.т.и прл .■;■;:.•■ *: ' .':::■} -r,::;.v зззззч ' .;>

Ibpoivro, г-"гсм г::,- из пзо-

пз: г: Су,-;;; r-i-psx^, ¡:po-

r-y.:ru рзз^с^ ото?, cr.-»sr.% tetc,.."? irurr? призвал ;жг;:з гс-••зциты, .з «narres ъ-г.уътогкгл а грз.'-7~:т.и,л Поле fr «vk'^'ía i-CTirroflíun llci'ítо 3 'тзО'зз- чзззлгп-зм г :•--

i"îroa пол г"т:з.зз:г:!!;;з"-! а зз

3 oprrrrîr:"Э пагеггз'зк рля ;ззгггг''peapy-'s-

и з : тз пгг:&"зэ -.чгэрзстзг

г:? :«':; пг::::з"г-; v " .гзгн'-;/; : "".err* :з зрптро-

Î''::;O5 "z rp.r.r.:.";' зкзЗгэ ¡глег-атр^шата

л:""":*:1' ' J У ......з.:.-;; прт1з;:г;.з-

г.?:сс:г п n:r3sr.¿,".-»rr.;:-3i ""Г'; ;:*:;, Плэйз^з

- 2ö -

i хотя ош! б общих чертах сходны. В литературе извес-

löri т: .ЪКП один фшст наличия цитолитической активности in vitro и геи.люф.- насекошх (Phipps et all, 1988; 1389). Авторы вьи-ишю reu "тсическю активность у гуРениц большой вовдшной шли Gaijeriн ßi.lonella, супэственно возрастающую после инъекции c.-iKisbbi йаыи была выявлена логическая активность гемолимфы j.i.iopA; р .. w /«ука, которая не изменялась при ранении и при инь-шщи1! к.:.'г:гпй. Подобную активность гемолимфы колорадского лука L. deceb s »en! а ранее не отшчали, хотя была аарегестрирована его voKi:iriao>jTb к позвоночным штатным и был выделен токсичес-оьамк iльтшшотарэии) (Hsiao, Frankel, 1963). В последствии группа бельгийских ученных выделила ещэ два токсических белка, способных изменять ыеибраннум проницаемость различных клеток Arellnckx et all, 1900). Наделенный наш гемодиалн отличается от ai-их белков по молекулярному весу и по способности разрукать ьритроциты позвоночных животных. Роль его в организме насекомого не ясна. Хотя если учесть, что активность гемолизина возрастает в присутсвии ионов кальция и/или липополисахаридов. бактерий, то, данный белок иоиэх вовлекаатся в процессы инактивации патогена, изменяя его клеточную проницаемость. Возможно гемолизин воздействут на фосфолшщдный слой клетки-мшшни.

Таким образом вышеперечисленные механизш иммунной системы насекомых, не обладая той степенью специфичности, которая характерна для млекопитающих, успешно поддерживает определэнный уровень стабильности организма.

СЛЮДЫ

1. На примере четырех видов насекомых (Н. armígera, !.'. suasa, M.brassicae и L. decemlineata) показано, что ранние стадии иммунного ответа формируются при участии клеток гемолимфы, агглютинирующей и фенолоксидазных систем.

2.. На .первых этапах ..инфицирования происходят качественные и количественные изменения в популяции гемоцитов. Истощается плазштоцитарный пул гемоцитов,. количество гранулоцитов не изменяется, но в клетках процессируются рецепторы, характеризуго-пгиеся определенной углеводной специфичностью к D-маннозе.

3. Гемоциты разной степени зрелости и специализации различаются между собой по интенсивности флуоресценции и характеру распределения хлортетрациклинового зонда в клетке, что отражает их различие в распределении кальция.

4. Фэнолоксидазная активность гемолимфы совок резко падает на первых этапах инфицирования, и при этом у совок агглютинирующая активность либо возрастает (Н. armígera), либо не изменяется (М. brassicae).

б. Гемоциты синтезируют агглтинины и фенолоксидазу, последняя синтезируется такяэ и в кут :уле. Причем в разных органах регистрируются различные изоформы ферментов.

6. Агглютинины совок - кальцийзависимые белки, гетерогенны по углеводной специфичности и способны значительно активировать процессы инкапсуляции и гранулообразования в организме насекомых.

7. В иммунных реакциях колорадского жука (L.decemlineata) участвуют белки, обладающие цитолитической активностью. Данные белки - кальцийзависимые, синтезируются сферулоцита®

не обладают антибактериальной активностью, их молекулярный Еес соответствует примерно 62 кБ.

8. Активность цитологических белков повышается в присутствии бактериальных липополисахаридов.

Сашзвныа язчгдкыз рабоя»:

1. Глупов Е а Некоторые факторы, , определяющие резистентность и реактивность организма насекомого// В сб.: Интегрированная защита растений от вредителей / Новосибирск, 1987. -С. 35 - 40.

2 1'лупов Е Е Действие энтошпатогенных микроорганизмов на обыююве иного соснового шишлыцика// В сб.: Микробиологические исследования в Зап. Сибири / Новосибирск, 1989. - С. 84,-87.

3. Глупов Е Е Некоторые аспекты иммунитета насекомых // Успехи современной биологии, 1992. - т. 3. - С. 62 - 7а

4. Глупов Е Е Литическая активность гемолимфы колорадского жука// Сибирский биологический курнал, 1992. - Е 4. - С. 16 - 20.

5. Глупов Е Е Сзнолоксидаэная и агглютинирующая активности гемолимфы хлопковой совки НеИоОДл агш^ега // Сибирский биологический яурнал, 1993. - Е1. - С. 3 - 7.