Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Физиолого-биохимические особенности влияния нитратов на организм животных

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Физиолого-биохимические особенности влияния нитратов на организм животных"

На правах рукописи

КАРИМОВ АКОБИР ИЗАТУЛЛОЕВИЧ

ФИЗИОЛОГО-БИОХИМИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ВЛИЯНИЯ НИТРАТОВ НА ОРГАНИЗМ ЖИВОТНЫХ

Специальность: 03.00.04-05-биохимия и 03.03.01-физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Душанбе - 2010

? О МАП 20*

004602338

Работа выполнена на кафедре физиологии человека и животных Таджикского национального университета, НИИ гастроэнтерологии Министерства здравоохранения Республики Таджикистан и Института животноводства Таджикской академии сельскохозяйственных наук

Научные руководители:

Научный консультант: Официальные оппоненты:

Ведущая организация:

доктор биологических наук, профессор ]Сафаров Х.М.

кандидат биологических наук, ст. н.с. Иргашев Т.А. доктор биологических наук, профессор, Устоев М.Б. доктор биологических наук, профессор Юлдошев X. кандидат биологических наук, доцент Холбеков М. Е.

НИИ питания при Министерстве промышленности и энергетики Республики Таджикистан

Защита состоится « И » мая 2010 г. в 10. 00 часов на заседании диссертационного совета Д 737.004.05 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора биологических наук при Таджикском национальном университете, 734025 пр. Рудаки, 17.

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке ТНУ (734025, г. Душанбе, пр. Рудаки, 17).

Автореферат разослан » рц^е /-Й 2010 года

Ученый секретарь диссертационного совета

кандидат биологических наук, Хамрабаева З.М.

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы: Многочисленными исследованиями (Солильняк и др. 1987; Ажипа и др., 1990; Арустамова, 2001; Вегс1и5, 2002; Бояркнн и др., 2004; Гриценко, 2005; Ярошенко, 2007) установлено, что широкое применение минеральных удобрений и пестицидов в сельском хозяйстве привели к загрязнению окружающей среды, в частности, атмосферного воздуха, питьевой воды и потребляемой пищи и создали реальную угрозу, как для жизни человека, так и других живых существ. За последние три десятка лет «география» загрязнения нитратами пищевых продуктов существенно расширилась (Сопильняк и др., 1987; Черпяева, 1990; Вегёиэ, 2002; Бояркин и др., 2004).

Хозяйства Республики Таджикистан производят растениеводческую продукцию, в 25% которой содержание нитратов значительно выше концентраций, , рекомендуемых гигиенистами и диетологами. В то же время в питании населения страны существенно возросла доля картофеля и овощей, что определяется не только снижением доходов семей, но и возрастанием производства растительных продуктов. По данным ВОЗ в Таджикистане с 1993 года по 2008 год, при снижении в рационе мясомолочной продукции потребление продуктов растениеводства возросло до 65%. (ВОЗ, 2008).

В настоящее время в Таджикистане продовольственные ресурсы по основным видам продукции формируются на 45-80% за счет собственного производства, остальная часть приходится на импорт из других стран. В связи с этим, определение содержания нитратов в растениеводческой продукции, потребляемой в качестве пищи, а также их влияния на организм человека является одной из важных задач современной науки и имеет, как теоретическое, так и практическое значение.

В связи с вышеизложенным, актуальность настоящего исследования заключается в изучении влияния нитратов на различные физиолого-биохи-мические показатели, которые отражают многие стороны метаболических процессов и позволяют выявить их действие на функциональное состояние органов и тканей.

Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы явилось изучение действия различных доз нитрата аммония на функцию органов и тканей, а также биохимических свойств белков, ферментов, липидов и аминокислот, участвующих в метаболизме нитратного азота в организме животных на период от 1 до 6 месячного возраста.

В соответствии с поставленной целью были определены следующие задачи:

исследование влияния нитратов на обменные процессы тканей печени, почек и сыворотки крови у молодых животных;

- изучение влияния различных доз нитратов на биохимические показатели в сыворотке крови и тканей печени животных при хронической интоксикации;

- оценка уровня нитратного фона и содержания общих и водорастворимых белков, липидов в метаболизме нитратного азота в почках.

Научная новизна. Новизна научных положений диссертационной работы заключается в том, что впервые а условиях Таджикистана проведено комплексное исследование влияния различных доз нитрата ' аммония на функциональное состояние и интенсивность обмена веществ организма животных в постнатальном онтогенезе и при хронической интоксикации. Выявлено, что различные дозы нитратов оказывают отрицательное влияние на белоксинтезирующую функцию печени. Определена концентрация гемоглобина и метгемоглобйна в крови у животных, в зависимости от дозы интоксикации й показанб, что их концентрации в зависимости от времени и дозы интоксикации значительно увеличиваются и способствуют развитию гемической гипоксии. Показано, что после шестимесячной' интоксикации у животных развиваются компенсаторные адаптивные механизмы, направленные на снижение уровня метгемоглобйна, улучшение снабжения тканей кислородом и восстановление функциональной деятельности органов.

Степень обоснованности и достоверности положений, выводов и рекомендаций.

Выявлено, что нитраты влияют на массу тела и степень выживаемости животных, гематологических показателей, содержание белков в сыворотке крови, на физиологическое состояние тканей, приводящих к снижению содержания общих и водорастворимых белков, на изменение содержания,аминокислот, а также повышение холестерина, общих липидов и триглицеридов, на биохимические показатели почек, сопровождающиеся снижением суточного диуреза, появлением глюкозы и белка в моче, изменением мочевины и креатенина почечной ткани. Исследование физиолого-биохимических особенностей влияния нитратов позволит выявить не только их отрицательное действие, но и поможет разработать методы диагностики для предотвращения отрицательного их действия на организм животных. В связи с этим контроль за содержанием нитратов в растениеводческой продукции, потребляемой в пищу и влиянием их на здоровье человека является актуальным и имеет практическое значение.

Теоретическая и практическая значимость работы. Полученные результаты могут быть использованы в клинической практике, а также при составлении природоохранных мероприятий. Исследованные дозы нитрата аммония могут быть испрльзованы при профилактике и лечении больных, отравленных нитратами, а также определения функционального состояния печени, почек и других жизненно важных органов, восстановление белкового обмена, с учетом ограничения в их диетах, содержащих нитраты. При составлении нормативной документации санитарно-гигиенических и экологических служб. Результаты физиолого-биохимических исследований будут положены в основу рекомендации по использованию допустимых доз азотосодержащих удобрений в продуктах питания и кормовых культурах, выращиваемых в Таджикистане.

Основные положения, выносимые на защиту: - влияние нитратов на обменные процессы тканей печени, почек и сыворотки крови молодых животных;

- влияния различных доз нитратов на биохимические показатели в сыворотке крови, тканей печени и почек животных при хронической интоксикации;

- уровень нитратного фона и содержания общих и водорастворимых белков, липидов в метаболизме нитратного азота в почках.

Апробация результатов исследовании. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на ежегодных научно-теоретических конференциях профессорско-преподавательского состава ТНУ (1998-2009 г), на юбилейной конференции ТНУ (Душанбе, 1998 г), на республиканских конференциях молодых ученых и специалистов (Душанбе, 19982000 гг.), на республиканском семинаре по вопросам «физиологии и биохимии» (Душанбе, 2000 г), на международной конференции «Актуальные проблемы физиологии человека и животных», (Душанбе, 2003 г.), II съезде физиологов СНГ (Кишинэу, 2008г), на расширенных заседаниях кафедр физиологии человека и животных, бийхимии (Душанбе, 2009; 2010 г.);

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 118 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, материала и методов исследования, результатов исследований, обсуждения результатов, выводов и практических рекомендаций, а также списка использованной литературы, включающего 164 наименований, в том числе 44 на иностранных языках. Работа содержит 24 таблицы и 15 рисунков.

II. ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материал и методы исследования. Основные экспериментальные исследования проводились на кафедре физиологии человека и животных ТНУ, лабораториях патологической физиологии и экспериментальной химиотерапии Института гастроэнтерологии МЗ РТ и Института животноводства Таджикской академии сельскохозяйственных наук в период (19972006), на 220 особях молодых и половозрелых беспородных белых крыс обоего пола, весом 140-270 граммов. Животные вне опыта содержались в условиях вивария и по методу групп-аналогов были

распределены на контрольные и опытные серии. Кормление животных как опытных, так и контрольных групп было одинаковым. Животные получали пищу и воду без ограничения после окончания всех наблюдений.

Наблюдения проводились с 8 часов утра до 14 часов дня в строгой последовательности, в основном, в летний и осенний сезоны года, при температуре воздуха 25-38°С. Во всех сериях опытов температурный режим придерживался относительно на одинаковом уровне.

Были изучены такие физиолого-биохимические показатели, как изменения массы тела, вегетативные функции печени, почек, а также белковый обмен, ферментативная активность, содержание липидов и других веществ в крови, тканях печени и почек независимо от времени суток, сезона года и режима питания.

Были проведены свыше 300 биохимических и 200 гематологических анализов.

Нитратную интоксикацию животных опытных групп вызывали путем внутрижелудочного введения нитрата аммония (МН4М03) в дозах 50, 100 и 200 мг/г массы тела, один раз в сутки в течение шести месяцев, а контрольным животным, соответственно вводили физиологический раствор.

О тяжести интоксикации судили определением степени выживаемости животных в течение шести месяцев, динамике веса тела, изменением содержания мочевой кислоты, мочевины, остаточного азота, креатинина, липидов (холестерина, липопротеидов и триглициридов), цитоплазматических ферментов (АлАТ, АсАТ и ЩФ), малонового диальдегида в сыворотке крови,' а также определением показателей антитоксической и экскреторной функции печени и изменением форменных элементов крови.

Гомогенизацию тканей печени и почек проводили сразу же после декапитации животных по каждой серии в зависимости от продолжительности опытов.

Для установления биохимических сдвигов в тканях печени и почек применили следующие тесты: определение содержания общих и водорастворимых белков, активности гистидазы, аргиназы, количества общего жира, холестерина, триптофана, тирозина в тканях печени, почек и в сыворотке крови.

Для исследования кровь брали путем прокалывания десен у животных. Количество эритроцитов, тромбоцитов и лейкоцитов определяли в камере Горяева.

Концентрацию гемоглобина определяли гемоцианидным методом. Метгемоглобин в крови определяли путем измерения оптического поглощения лизать эритроцитов в областях а и Ъ после спектра гемоглобина на спектрофотометре СФ-16 по О.Г. Архиповой (1987). Величину гематокрита измеряли в микрогематокритной центрифуге. Скорость оседания эритроцитов (СОЭ) микро-методом Панченкова (Меньшикова, 1987).

Содержание общего билирубина в крови определяли по методу Гроору, холестерина по унифицированному методу Залаткис-Зака (Меньшикова, 1987).

Активность АсАТ, АлАТ и ЩФ определяли использованием стандартных наборов по методу Райтмона (Меньшикова, 1987).

Общий белок определяли унифицированным методом Лоури по биуретовой реакции.

Белковые фракции в сыворотке крови определяли по унифицированному методу электрофореза, на основе которого в щелочной среде в электрическом поле наиболее быстро перемещаются альбумины, затем а, ß и у глобулины (Меньшикова, 1987).

Содержание мочевины в сыворотке крови и моче определяли на основе образования мочевины с диацетилмонокисом в присутствии тиосемикарбазида и ионов двухвалентного железа в сильнокислой среде окрашенного комплекса, интенсивность окраски которого определяли фотометрически (Архипова, 1987). По объему собранной мочи устанавливали минутный диурез, после чего в крови и моче определяли концентрацию креатинина..

Результаты исследований подвергнуты статистической обработке биометрическим методом по H.A. Плохинскому (1970), Е.К. Меркурьевой (1983) с использованием компьютерной программы - Excel.

III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. Влияние различных доз азотосодержащнх соединений на биохимические показатели крови и тканей печени

Проведенная сравнительная оценка влияния нитрата аммония на общее состояние животных показывает, что внутрижелудочное введение нитрата аммония в дозах 100 и 200 мг/г по сравнению с дозой 50мг/г вызывает общую вялость и заторможенное состояние животных, как в ранние, так и поздние сроки интоксикации. В то же время, как месячная, так и шестимесячная интоксикация нитратом аммония приводит к потере общего веса животных (рис.1).

Группа

Рис. I. Динамика веса тела белых крыс с хронической нитратной интоксикацией (в граммах)

Примечание:

1: (*Р<0,01; ** Р<0,05; *** Р<0,001) рассчитано по отношению к контролю

2: опытные группы получали нитрат аммония (NH4N03) из расчета -1-50 мг/г;

II -100 мг/г; III- 200 мг/г живой массы.

Как видно из представленных на рисунке 1 данных потеря веса животных после месячной интоксикации в дозе 50мг/г составляет - 12%, в 100мг/г - 21%, а в 200мг/г - 50%. Снижение веса животных в опытных группах также наблюдается как после трех- (17, 25 и 50%), так и после шестимесячной (16, 25 и 51%) интоксикации. Аналогичные изменения наблюдаются и при определении веса печени животных. Например, вес печени крыс контрольной группы в среднем составлял 6,5г±1,8, при отравлении нитратом наблюдается тенденция к снижению веса печени крыс.

Представленные в таблице 1 результаты свидетельствуют о том; что степень выживаемости животных за весь период опытов в зависимости от дозы интоксикации разная.

Так, у животных получавших 200мг нитрата аммония ежедневно в конце опытного периода, после шести месяцев вес тела сократился на 50%. Сохранность животных, получавших нитрат аммония в дозах 50, 100 и 200 мг/г веса, соответственно составила 80, 65 и 50%.

Таблица 1

Выживаемость белых крыс с хронической нитратной _интоксикацией, % _

Серия опытов Степень выживаемости, в %

после одного месяца после трех месяцев после шести месяцев

Интактные 100 100 100

I - животные, получавшие нитрат аммония в дозе 50мг/г массы тела 98 90 80

II- животные, получавшие нитрат аммония в дозе 100мг/г массы тела 95 85 65

III- животные, получавшие нитрат аммония в дозе 200мг/г массы тела 83 70 50

В связи с интенсификацией производства продукции растениеводства в последнее время, большое значение приобретают исследования механизмов , развития гипоксии гемического типа. К их числу относится гемическая гипоксия нитратного происхождения.

В литературе, посвященной химизму нитратов, не имеется сообщений о выделении нитритов из организма человека. Опополь Н.И., Добрянская Е.В. (1986) считают, что основная их часть идет на образование метгемоглобина. Доказано, что даже при.больших концентрациях нитратов в крови (2215 мг/кг) содержание метгемоглобина составляет только 2,1- 4.5%, что намного ниже допустимых норм. .....

Один из видов проявления токсического действия нитратов на организм человека и животных определяется в форме матгемоглобинемии. Она является следствием окисления двухвалентного железа гемоглобина в трехвалентное железо. В результате такого окисления гемоглобин, имеющий красную окраску, превращается в тёмно-коричневый. Клиническая картина этой болезни сводится к появлению цеонида-темно-синей или фиолетово-синей окраски слизистой и кожного покрова, сопровождающихся понижением кровяного давления, сердечной и лёгочной недостаточности.

Содержание форменных элементов, концентрация гемоглобина, метгемоглобина и скорость оседания эритроцитов колебались в зависимости от концентрации нитрата аммония и сроков интоксикации.

Установлено, что метгемоглобинемия включает в себе состояние организма, которое связано с повышением физиологической нормы содержания метгемоглобина в крови. Оно возникает вследствие наследственной недостаточности восстанавливающих систем эритроцитов, либо в результате превышения их функциональных возможностей при поступлении в организм больших доз некоторых токсических агентов (Токарев, 1979).

Основной механизм патогенеза метгемоглобинемии обычно связан с хронической гипоксией, поскольку насыщение артериальной крови кислородом у больных животных снижается. Метгемоглобин не участвует в транспорте кислорода, кроме того,

он ухудшает функцию переноса оставшегося оксигенированного гемоглобина. При его повышении в пределах 20-50 % от общего количества гемоглобина возникают общая слабость, недомогание, одышка при физических напряжениях, раздражительность, ослабление памяти, головные боли и головокружения (Рубенчик, 1979).

Полученные нами результаты по определению концентрации метгемоглобина в крови (рис. 2) показывают, что у взрослых белых крыс после трех месяцев внутрижелудочного введения нитрата аммония в дозах 50, 100 и 200 мг/г она составила 15,0; 25,0 и 35,0 г/%. Величина этого показателя после шести месяцев интоксикации аналогичными дозами составляет 12,0; 20,0 и 30,0 г/%.

40 35 30 25 20 15 10 5 0

И 3 месяца И 6 месяцев

0,5

Интактные

I Группа И

III

Рис. 2. Влияние нитрата аммония на концентрацию метгемоглобина в крови белых крыс

Хотя снижение концентрации метгемоглобина в крови при шестимесячной интоксикации в сравнении с трехмесячной незначительно, но все таки оно достоверно превышает допустимые нормы.

Результаты проведенных исследований показывают, что хроническая:, интоксикация нитратом аммония у белых крыс вызывает < гемическую гипоксию, характеризующуюся значительным увеличением метгемоглобина в крови. Снижение

р.гетгемоглобина, а также содержание гемоглобина после шести месяцев интоксикации свидетельствуют о развитии компенсаторных адаптивных механизмов, направленных на улучшение снабжения тканей кислородом и восстановления функциональной деятельности органов.

Результаты по определению гематологических показателей свидетельствуют о том, что концентрация гемоглобина у опытных 'ашотных после трехмесячной нитратной интоксикации повышается на 14, 41 и 50% (Р<0,001) соответственно, по сравнению с контрольным животными. Значение этого показателя после шести месяцев интоксикации относительно ниже и составляет 7, 21 и 28%.

Данные по определению количества эритроцитов в крови животных опытных групп после трехмесячной интоксикации показывают, что влияние нитрата аммония на организм животных сопровождается повышением количества эритроцитов. Интоксикация животных в дозе 50мг/г привела к незначительному увеличению количества эритроцитов, т.е. на 4%. При интоксикации животных нитратом аммония в дозах 100 и 200 мг/г наблюда-ется достоверное увеличение количества эритроцитов и составляет 38 и 55% соответственно (Р<0,05; Р<0,001). Аналогичные изменения количества эритроцитов сохраняются также после шестимесячной интоксикации и составляет от 26 до 47%.

На основе полученных нами данных установлено, чй"у животных с нитратной интоксикацией достоверно увеличивается количество лейкоцитов. Данный показатель у опытных животных в сравнении с контрольным как после трехмесячной, так и после шестимесячной интоксикации увеличивается в 2-2,5 раза.

Результаты по определению содержания белков в сыворотке крови, ткани печени после внугрижелудочного введения нитрата аммония в дозе 50мг/г показали,'что содержание общих белков'в' сыворотке крови независимо от возраста животных существенно не изменился.

Хроническое внутрижелудочное введение нитрата аммония в дозе 100мг/г в течение одного месяца привело к достоверному снижению количества общего и водорастворимого белка в ткани печени. Уровень общего белка уменьшился на 16,2%, а содержание водорастворимого белка - на 27,9%. В сыворотке крови

одномесячное отравление крыс вызывало уменьшение концентрации альбуминов на 21,5% и достоверное увеличение содержания а2 и (3-глобулинов.

Продолжение интоксикации нитрата до трех месяцев еще в большей степени подавляет синтез белков в ткани печени. При этом количество общего белка уменьшается на 25%, а содержание водорастворимых белков на 33%. В эти сроки в сыворотке крови воздействие нитрата снижает содержание альбуминов - на 24%, и значительно увеличивает количество а ¡- и р-глобулинов.

Интоксикация животных в течение шести месяцев привела к наибольшему угнетению белоксинтезирующей функции печени. При этом количество общих белков снижается - на 31%, а содержание водорастворимых белков - на 41%. В сыворотке крови, наряду со значительным снижением концентрации альбуминов -37%, отмечается достоверное возрастание количества аь оь и Р-глобулинов. Величина А/Г- коэффициента у шестимесячных животных также существенно снижается.

При шестимесячной Интоксикации нитратом аммония в дозе 50мг, хотя наблюдается уменьшение общих и водорастворимых белков печени, однако во всех клеточных фракциях содержание общих белков заметно снижается. Введение нитрата аммония в дозе 200мг/г резко снижает концентрацию общих и водорастворимых белков, как в гомогенате, так и во всех клеточных фракциях печени.

В сыворотке крови при введении нитрата аммония в дозе 50мг/г имело место достоверное снижение только Р-глобулина, а при его введении в дозе 200мг/г - снижение альбумина. Тогда как,' введение нитрата аммония в дозе 100мг/г, по этим показателям занимает промежуточное место.

Длительное хроническое введение нитрата в зависимости от срока воздействия нитрата аммония оказывало различное влияние на активность щелочной фосфатазы (ЩФ), как в сыворотке крови, так и в ткани печени опытных животных. Например, после месячного внутрижелудочного введения нитрата аммония в дозах 50 и 200мг/г в печени и в сыворотке крови опытных животных наблюдается достоверное увеличение активности ЩФ, относительно контрольным животным.

Действие нитрата аммония у животных в возрасте трех месяцев незначительно по сравнению с животными в возрасте одного месяца, где наблюдается увеличение активности ЩФ, как в печени, так и в сыворотке крови опытных животных. Шестимесячное внутрижелудочное введение нитрата аммония привело к значительному угнетению активности ЩФ в печени. Под воздействием нитрата аммония в сыворотке крови существенно увеличивается активность ЩФ.

Концентрация бромсульфалеина в сыворотке крови опытных животных после 10-минутного наблюдения в среднем составляет 26,0мг%, у интактных крыс 10,0мг%, а после 30-минутного наблюдения - 17,0мг% против 8,5мг% у животных контрольной группы. Как видно из представленных в таблице Ъ ' данных, что трехмесячная интоксикация животных нитратом аммония, в сыворотке крови вызывает повышение активности фермента АлАТ - на 46,5%, а активности АсАТ - на 54,5%. При шестимесячной интоксикации наблюдается значительное увеличение активности вышеназванных ферментов.

Таблица 2

Изменение ферментов всыворотке крови у белых крыс с нитратной интоксикацией (п=6)

Группа АЛАТ, (имоль/сск/л) АСАТ, (нмоль/сек/л) ЩФ (нмоль/сск/д) Билирубин общ. ' мкмоль/л

После трехмесячного введения

Интактные 143,5±5,9 139,0±4,8 220±8,5 15,9±0,85

1 280,0±7,5* 250±6,5* 320,0±9,0** 250±0,30

II 350,0±8,1*** 310±7,5*** 380±10,0* 34,0±0,40*

III 475,0±10,0*** 410,0±9,5*** 430±12,0*** 47,0±0,50***

После шестимесячного введения

I 510±12,0*** 450±12,0*** . 520,0±13*** 40,0±5,6***

И 771,4±31,0*** 674,0±24,0*** 680±18,0*** 60,7±6,1 ***

III 850±38,0*** 730,0±33*** 770,0±35*** 75,0±7,4+**

Примечание; (* Р<0,01; *** Р<0,001; ** Р<0,05) рассчитано по отношению к контролю

Предполагается, что параллельно с этим в сыворотке крови повышается концентрация билирубина в 3,8 раза, а сиаловых

кислот - на 40%, и снижается содержание общего белка - на 46,6%, что свидетельствует о тяжелом поражении печени.

Для выяснения механизма токсического действия нитратов на печень нами было изучено изменение содержания сиоловых кислот, перекисного окисления липидов (ПОЛ) в ткани печени (табл. 3).

Таблица 3

Влияние нитрата аммония на концентрацию малонового диальдегида (МДА) и сиоловых кислот в ткани печени в течение 6-ти месяцев (п =6)

Период опыта, мес.

Группа МДА мкмол/л Сиоловых кислот, ммол/л

3 6 3 - 6 !

Интактные 4,3±0,30 4,4±0,35 0,94±0,03 0,95±0,04 :

I 6,4±0,40* 10,0±0,70*** 1,3±0,05* 2,2±0,10* ;

II 7,5±0,90*** 17,7±2,4*** 1,5±0,10*** 2,8±0,17*** ;

III 11,7*1,2*** 25,0±2,7*** 1,9±0,13*** 3,5±0.!8*** !

Примечание; (* Р<0,01; *** Р<0,001) рассчитано по отношению к контролю

Показано, что внутрижелудочное введение нитрата аммония в дозе 100мг/г в течение 6 месяцев опытным животным, способствует повышению концентрации малонового диальдегида (МДА) в ткани печени до 17,7мкм/л, против 4,3 у контрольным, а сиаловых кислот - 2,8ммоль/л, против 0,94 ммоль /л.

Одной из важнейших функций печени является депонирование углеводов в виде гликогена. Как видно из полученных экспериментальных результатов, при шестимесячном введении нитрата аммония концентрация гликогена в ткани печени составляет 2,4мг/г, что было на 48% меньше показателей контрольных животных.

Таким образом, нитрат аммония при непосредственном попадании в организм животных вызывает нарушения метаболизма углеводов, белков, липидов и функциональное состояние печени.

Исследования по изучению количества холестерина, триглицеридов и общих жиров в сыворотке крови и ткани печени животных показали, что у контрольных крыс трехмесячного

возраста содержание холестерина в сыворотке крови по сравнению с одно-, двух- и четырехмесячным было относительно высоким. В ткани печени трехмесячных животных содержание холестерина также значительно повышается в сравнении с одно-, двух- и четырехмесячными животными.

У опытных животных после одномесячной интоксикации в сыворотке крови уровень холестерина и содержание триглицеридов резко возрастает, и по отношению с контрольным животными этот показатель определяется в 2 раза выше. Содержание общих жиров в сыворотке крови в 3,5 раза превышает их уровень по сравнению с контролными животными. Уровень холестерина, триглицеридов и общих жиров в ткани печени достоверно повышается (Р<0.001).

У двухмесячных животных при введении нитрата аммония в сыворотке крови отмечается значительное повышенное содержание , триглицеридов (в 4,5 раза) по сравнению с контролем. Уровень общих липидов в зависимости от возрастания содержания, , триглицеридов остается значительно высоким. Показатели жиролипоидного обмена в ткани печени этих опытных групп животных остаются достоверно высокими. . ■

В сыворотке крови под влиянием нитратов содержание. : холестерина и общих липидов увеличивается в значительной степени, чем в ткани печени. Повышение количества холестерина в сыворотке крови нами отмечено после 3-х месяцев (в дозе 200мг/г). Содержание холестерина при шестимесячном воздействии нитрата ^ аммония в дозе 200мг/г, в ткани печени было аналогично с;;, величинами холестерина в контрольной группе. Количество общих липидов в сыворотке крови было достоверно высоким при,всех дозах и сроках воздействия нитрата аммония.

Нитрат при хроническом внутрижелудочном его введении приводит к увеличению показателей липидного обмена. Так, После месячного отравления животных нитратом аммония в сыворотке крови отмечается увеличение количества холестерина - на 44%. Повышение уровня холестерина в ткани печени оказалось на 84% больше, чем с контрольным животным. Содержание триглицеридов и общих липидов, как в сыворотке крови, так и в ткани печени, после месячной интоксикации животных нитратом аммония увеличивается в три раза.

Увеличение продолжительности воздействия нитрата аммония до трех месяцев приводит к значительному повышению уровня холестерина, триглицеридов и общих липидов в сыворотке крови и ткани печени. По сравнению с животным, получившим нитрат аммония в течение одного месяца, количество холестерина увеличивается на 54%, общих липидов - на 70%, а триглицеридов -на 129%. Повышение холестерина в ткани печени было на 50%, триглицеридов - на 37%, а общих липидов - на 14% выше, чем с животными, получившими нитрат аммония в течение месяца.

Интоксикация животных нитратом аммония в течение шести месяцев вызывала наибольшее возрастание количества холестерина, общих липидов, особенно триглицеридов. При сравнении этих показателей с группой животных с продолжительностью интоксикации до одного месяца, отмечается повышение уровня холестерина в сыворотке крови - на 44%, общих липидов - на 74% и триглицеридов на 153%. В печени количество холестерина увеличивается - на 59%, общих липидов - на 84%, а триглицеридов - на 81%.

Следовательно, изучение содержания липидного обмена показало, что нитрат аммония при внутрижелудочном его введении приводит к увеличению концентрации холестерина, общих липидов и триглицеридов, как в сыворотке крови, так и в ткани печени.

Наряду с изучением общих функциональных и биохимических изменений ткани печени и крови, нами также исследовано влияние нитратов на функциональные и биохимические показатели почек в молодом возрасте и при их хроническом воздействии.

3.2. Влияние нитратов на функциональные и биохимические показатели почек при их хронической интоксикации

Поступающие с пищей нитраты всасываются в пищеварительный тракт, попадают в кровь и вместе с ней - в ткани, 65% выводятся через почки, а остальное их количество - 10% остается в организме. У животных опытных групп, получивших нитрат аммония в течении шести месяцев в дозах 50, 100 и 200мг/г наблюдаются глубокие нарушения функции почек (табл. 4).

После трехмесячной интоксикации в сыворотке крови животных опытных групп (введение нитрата аммония в дозах 50, 100 и 200 мг/г) наблюдается повышение концентрации мочевины -

в 1,5, 2,0 и 3.0 раза, содержания остаточного азота - в 2,0, 3,0 и 4,0 раза, мочевой кислоты - в 2,0; 2,5 и 3,0 раза, а креагинина - в 1-2,0 раза, соответственно по сравнению с контрольными. Такая же картина наблюдается после шестимесячного введения нитрата аммония, хотя, по-видимому, обнаружены некоторые приспособительные реакции организма животных на длительное воздействие токсического вещества, т.е. изучаемые показатели были значительно выше, чем у контрольных животных. Эти показатели были на 10-15% ниже по сравнению с данными, полученными после трехмесячной интоксикации. Накопление конечных продуктов обмена азотосодержащих веществ в сыворотке крови свидетельствует о поражении почек.

Таблица 4

Биохимические показатели сыворотки крови у белых крыс с нитратной интоксикацией (п= 6)

Группа Мочевина ммоль/л Остаточны й азот, мг% Мочевая кислота ммоль/л Креатишш мкмоль/л

В трехмесячном возрасте

Интактные 4,0±0,21 11,8±0,48 0,21±0,04 95,0±4,5

Введение нитрата аммония в дозе 50мг/г 6,0-0,60* 22,5±2,4*** 0,35±0,03** 118,0±8,0***

Введение нитрата аммония в дозе 10 0м г/г 8,0±0,85*** 31,7±2,7*** 0,53±0,05*** 166,0±10,7***

Введение нитрата аммония в дозе 200мг/г 11,7±1,0*** 44,0±3,5*** 0,70±0,06*** 190,0±15,0***

В шестимесячном возрасте

Введение нитрата аммония в дозе 50м г/г 5,6±0,50* 21,2±2,5*** 0,30±0,04* 106,0±6,8*

Введение нитрата аммония в дозе 100мг/г 7,4±0,60*** 25,7±2,6*** 0,46±0,04*** 158,0±7,5***

Введение нитрата аммония в дозе 200мг/г 10,3±0,80* 31,4±3,5* 0,58±0,08*-*-* 175,0±10,51'**

Примечание: (* Р<0,01; *** Р<0,001; ** Р<0,05) рассчитано по

отношению к контролю

Шестимесячная интоксикация нитратом аммония проявлялась в виде анурии и сопровождалась снижением суточного диуреза у опытных животных - в 2-3 раза, а также содержание мочевины - ПО; 92,0 и 80,0 мг%, креатинина - 35,5; 28,0 и 20,0 ммоль/л, соответственно, против 190,0 мг% и 50 ммоль/л у контрольных животных (рис. 3).

о

О)

^ ю

^пи

Кол-во суточной мочи, мл

77 Ol

ОТ о

WI 00

г Ш:

щ 1

; : ,

Щ: ЗКЖ

Мочевина, мг%

о

о •—

со

-00

со м

тж

Глюкоза, мг%

ЕЗ Интактные

□ I О И

□ III

Белок, г%

о Ю

ш -in

м сс CS о сч

Креатин, моль/л

показатели

Рис.З.Биохнмический состав мочи у белых крыс с нитратной интоксикацией

Примечание: опытные группы -1- 50; II -100; III- 200мг/г В моче опытных групп животных появляется глюкоза в количестве 10,0 у первой; 31,8 - у второй и 38,0 мг % - третьей группы опытных животных и белка, соответственно - 0,8; 1,0 и 1,8 г/л. Функциональное состояние почек и их выделительная функция у животных с нитратной интоксикацией представлены в таблице 5.

Нитраты при непосредственном попадании внутрь организма животных вызывают серьезные нарушения функции почек, что сопровождается уменьшением клиранса мочевины и креатинина, а также повышением экскреции белка и глюкозы в суточной моче.

Хроническая интоксикация крыс нитратом путем интрагастрального введения 100мг/г показала, что действие нитрата аммония в течение одного месяца способствует достоверному повышению содержания водорастворимых белков в ткани почек, а интоксикация с продолжительностью до трех месяцев приводит, напротив, к существенному снижению его количества. При шестимесячном введении нитрата аммония еще в большей мере снижается концентрация водорастворимых белков в ткани почек. Общий белок при хроническом отравлении животных нитратом аммония особому применению в тканях почек не подвергается и остается в пределах величин контрольной группы. Нитрат аммония в сыворотке крови приводит к достоверному уменьшению количества общих белков при одномесячной и шестимесячной интоксикациях животных. Содержание альбумина в сыворотке крови снижается достоверно во всех группах опытных животных, наиболее значительно при шестимесячной интоксикации - на 27%.

Установлено, что в опытной группе животных, получавших 200мг/г нитрата аммония в течение одного месяца, происходило также достоверное уменьшение количества водорастворимых белков в ткани почек. Продолжение интоксикации до трех и шести месяцев тоже способствовало достоверному уменьшению только водорастворимых белков, после шестимесячной интоксикации нитратом аммония.

Таким образом, можно заключить, что нитраты влияют на массу тела животных, которая проявляется в уменьшении веса - на 50%, и степень выживаемости - на 50-80%, также сопровождается изменением гематологических показателей, содержании белков крови, жиров, а также активности ферментов ткани печени и сыворотки крови, изменением содержания аминокислот, увеличением активности ферментов.

Влияния нитратов на биохимические показатели почек сопровождается снижением суточного диуреза, появлением

глюкозы и белка в моче, изменением мочевины и креатенина, а также увеличением холестерина, липидов, почечных тканей.

Таблица 5

Выделительная функция почек у белых крыс с нитратной интоксикацией (п= 6)

Группы животных Клиранс мочевины, ммоль/чяс Клиранс креатинина, ммоль/час Интенсивная реобсорбация мочевины, в % Кональцеьая реобсорбацш), в %

В трехмесячном возрасте

Интактные 27,7±2,5 186,4±8,1 148,0±0,16 97,0±5,1

Введение нитрата аммония в дозе 50мг/г 10,5±0,50*** 81,0±3,4* * * 14,0±1,5** 90,0±5,0*

Введение нитрата аммония в дозе 100мг/г 5,8±0,12*** 40,0±2,8*** 14,5±0,75** 86,2±4,8**

Введение нитрата аммония в дозе 200мг/г 3,0±0,Ю*** 25,0±0,30*** 13,0±0,60** 80,0±3,5

В шестимесячном возрасте

Введение нитрата аммония в дозе 50мг/г 6,0±0,15*** 38,0±1,5*** 15,0±0,8 85,0±5,0**

Введение нитрата аммония в дозе 100мг/г 7,0±0,13*** 42,7±2,5*** 16,4±0,9* 87,0±5,0

Введение нитрата аммония в дозе 200мг/г 4,0±0,18*** 33,0±0,9*** ]8,0±],0** 80±5,4

Примечание:(*Р<0,01 ;*** Р<0,001 ** Р<0,05) рассчитано по

отношению к контролю

В целом, результаты проведенных экспериментальных исследований показывают, что нитраты оказывают отрицательное влияние на, физиолого-биохимические процессы организма животных, также приводят к значительному изменению метаболизма углеводов, белков, липидов, аминокислот, активности ферментов не только в сыворотке крови и ткани печени, но и в почках. В проведенной схеме показано выявление закономерности

влияния нитратов на физиолого-биохимические процессы организма животных

СХЕМА ВЛИЯНИЯ НИТРАТОВ НА ФИЗИОЛОГО-БИОХИМИЧЕСКИЕ ПРОЦЕССЫ ОРГАНИЗМА ЖИВОТНЫХ (В ЭКСПЕРИМЕНТЕ)

Увеличиваются альбумины. Уменьшаются глобулины.

Уменьшение веса тела и выживаемость.

Повышение тирозина, снижение триптофана

Снижение суточного диуреза, эскрекция К4 Появление глюкозы и белка,

Уменьшение клиранса мочевины и креатенина

Увеличение холестерина-на 26%,

лилидов- на15%, тканей печени - на 44% триглицеридов

Увеличение активности АлАТ,.АсАТ,ЩФ

Повышение холестерина

-на44,4%,общих

липидов-на 74,4%,

триглицеридов- на

153,% поражение

паренхимы печени

выводы

Хроническая интоксикация нитратом аммония животных вызывает гемическую гипоксию, характеризующуюся значительным увеличением концентрации метгемоглобина в крови. Выживаемость животных в зависимости от дозы интоксикации за весь период разных опытов. Вес тела животных, получавших нитрат аммония ежедневно в дозе 200мг/г, после шести месяцев сократился на 50%. Степень выживаемости животных, получавших нитрат аммония в дозах 50, 100 и 200мг/г, соответственно составила 80, 65 и 50%.

Хроническое воздействие нитрата приводит к уменьшению тканевых белков, концентрации альбуминов и триптофана, увеличению содержания р-глобулинов и тирозина в сыворотке крови. Нитрат аммония поражает паренхиму печени и при длительном его введении происходит угнетение белоксинтезирующей функции печени, что выражается в количественном и качественном изменении синтезируемого белка в ткани органа и сыворотке крови. Под действием нитратов в сыворотке крови и ткани печени увеличивается содержание холестерина, триглицеридов и общих жиров, что" приводит к серьезным нарушениям липидного обмена.

Нитраты вызывают нарушения функции почек, которые проявляются в виде снижения диуреза, эскрекции К' и креатинина, повышения эскрекции белка и ионов натрия, титруемых кислот и аммиака, что сопровождается уменьшением клиранса мочевины и креатинина, а также и повышением экскреции белка и глюкозы в суточной моче.

РЕКОМЕНДАЦИИ

Ввиду того, что все дозы нитрата аммония, особенно высокие (100 и 200 мг/г) значительно подавляют функцию печени и повышают содержание липидов в органах, в связи с этим лечение больных отравленных нитратами должно быть

направлено, прежде всего, на восстановление белкового обмена, с учетом ограничения в их диетах жировых веществ.

?. Диагностика и лечение больных, подвергавшихся воздействию нитратов (тактика санации) должна быть направлена на улучЩение не только функции печени, а также почек и других жизненно важных органов.

3. Необходимо учесть наличие того факта, что молодой организм наиболее восприимчив к влиянию нитратов, чем взрослый.

Основные положения диссертационной работы отражены в

следующих публикациях автора:

1. Шамсудцинов Ш.Н. Гепотоксическое действие нитратов. / Ш.Н.Шамсудинов, Х.М.Сафаров, Г.А.Авезов, А.И Каримов // Действие различных факторов на структуру и функцию организма животных. Душанбе, 1997. Вып. 9. -С.99-103.

2. Сафаров Х.М. Нефротоксическое действие нитратов. / Ш.Н Шамсудинов., Х.М. Сафаров, А.И. Каримов, М.Б Устоев, Т. Рузиев // Действие различных факторов на структуру и функцию организма животных. Душанбе, 1998. Вып. 10.-С. 34-39.

3. Ш.Н.Шамсудинов.Влияние нитратов на функции почек. / Ш.Н. Шамсудинов Х.М.Сафаров, А.И Каримов.//Весгн. Педагог, ун-та. -1998,*№3. -С. 115.

4. А.И Каримов. Воздействие нитратов на пищевые продукты и его последствия. /А.И Каримов.//Вестн. Тадж .гос. ун.-та -Естеств. науки,- 2001, № 1. -С.87-90.

5. Каримов А.И. Влияние нитратов на периферические картины крови. /А.И Каримов, Ш.Н Шамсудинов.//Адаптационные закономерности животных в экстремальных условиях. -Душанбе, 2003. -С. 25-28.

6. Х.М. Сафаров. Влияние азотосодержащих соединений на содержание белков сыворотки крови и ткани печени крыс в онтогенезе./ Х.М Сафаров, А.И Каримов.//Аграрный университет. Научно-производственный журнал. -2004, № 2. -С.42-47.

7. А.И Каримов. Влияние нитратов на гематологические показатели. / А.И Каримов // Вестн.Тадж.нац. ун-та. - Естеств. науки,-2005, №3. -С.147-150.

М.Б Устоев. Изменения активности ферментов сыворотки крови : и ткани печени крыс в онтогенезе при хроническом воздействии нитратов. / М.Б Устоев М.Б., А.И Каримов //Научные труды II съезда физиологов СНГ. Кишинэу, 2008. -С.262. 9. ; Т.А.Иргашев, А.И Каримов . Влияния нитратов на организм человека и животных. Т.А.Иргашев, А. И. Каримов /(обзора-Душанбе, «Нодир», 2009. 58с.

Сдано в набор 09.04.2010 г. Подписано в печать 05.04.2010 г. Формат 60x84 1/16. Тираж 100 экз.

ООО «Сармад-Компания» г. Душанбе, ул. 1-й проезд Лахути 6.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Каримов, Акобир Изатуллоевич

Введение.3

Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 .Влияния нитратов на организм человека как источник загрязнения окружающей среды.9

1.2.Нитраты как социально-экологическая проблема.18

1.3.Метаболизм нитратов в организме человека.21

1 АСнижение содержания нитратов в продуктах при хранении и кулинарной обработке.31

Глава И. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 40

Глава III. Влияние различных доз азотосодержащих соединений на биохимические показатели органов и тканей

3.1. Влияние нитрата аммония на общее состояние, масса тела и печени животных.45

3.2. Изменения гематологических показателей под влиянием нитратов.46

3.3. Влияние азотасодержащих соединений на концентрацию белков сыворотки крови и ткани печени крыс в онтогенезе.52

3.4. Влияние хронического воздействия нитрата аммония на биохимические показатели печени и сыворотки крови.Г. 59

3.5. Изменения активности ферментов сыворотки крови и ткани печени и в онтогенезе и при хроническом воздействии нитратов.65

3.6. Влияние нитрата аммония на содержание липидов ткани печени и сыворотки крови в онтогенезе и при их хронической интоксикации.74

Глава 4. Влияние нитратов на функциональные и биохимические показатели почек в онтогенезе и при их хронической интоксикации.83

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.94

Выводы.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Физиолого-биохимические особенности влияния нитратов на организм животных"

Актуальность темы: В мире ежегодно применяется большой арсенал минеральных удобрений и пестицидов, производство которых в экономически развитых странах имеет выраженную тенденцию к дальнейшему росту. Следует отметить, что из года в год расширяется экспорт минеральных удобрений и пестицидов в развивающихся странах. Среди регионов, в которых производится продукция с содержанием нитратов выше предельно допустимых норм, более 30% ее общего объема, следует выделить страны Прибалтики, Ленинградскую и Московскую области, Молдавию, Украину, отдельные области Белоруссии и особенно республик Центральной Азии (Опополь и др. 1986; Сопильняк, Федотова, 1987; Ажипа и др., 1990; Черпяева И.И., 1990; Бабаев, 1997; Kanapatskaia et all, 1998; Дзугкоев и др., 1999; Гиясов, Якубова, Юлдашев, 1998; Гиясов, 1999; Искандаров, 2000; Мецлер, 2000; Шукурова, 2002; Бояркин и др., 2004).

Многочисленными исследованиями (Сопильняк Н.Т. и др. 1987; Ажипа Я.И. и др., 1990; Арустамова Э.А., 2001; Berdus M.G., 2002; Бояркин Е.В. и др., 2004; Гриценко B.C., 2005; Ярошенко Т. Я., 2007) установлено, что широкое применение минеральных удобрений и пестицидов в сельском хозяйстве привели к загрязнению окружающей среды, в частности, атмосферного воздуха, питьевой воды и потребляемой пищи и создали реальную угрозу, как для жизни человека, так и других живых существ. За последние три десятка лет «география» загрязнения нитратами пищевых продуктов существенно расширилась (Сопильняк Н.Т и др., 1987; Черпяева И.И., 1990; ; Berdus M.G., 2002; Бояркин Е.В. и др., 2004).

Биологическая роль нитратов в глобальном круговороте азота в природе общеизвестна. При этом в современном естествознании исследования этой актуальной научной проблемы выполнены исключительно на таких объектах как почва и растения. Процесс утилизации нитратов организмом человека и животных крайне недостаточно изучены.

Общепринято, что организм животного не способен восстанавливать нитраты, поскольку ткани животных не содержат нитрат- и нитрит восстанавливающих ферментов. Это справедливо лишь в отношении организма животного в чистом виде. Реально же организм человека и любого животного следует рассматривать как комплексную систему "макроорганизм + микроорганизмы, населяющие организм хозяина".

Масса поступающих с пищей и водой нитратов может быть достаточно значительна (Дерягина и др., 1993). Поэтому продукты метаболизма нитратов в организме могут, заметно влиять на физиологию организма в целом.

Выделяют первичную токсичность собственно нитрат-иона; вторичную, связанную с образованием нитрит-иона, и третичную, обусловленную образованием из нитритов и аминов нитрозаминов. Кроме того, одним из конечных продуктов метаболизма нитратов в организме является NO, роль которого в качестве «клеточного гормона» активно изучается (Комарова, 2001).

Нитраты, являясь типичными ксенобиотиками, вовлекаются микрофлорой человека и животных в метаболические процессы, в ходе которых восстанавливаются сначала до нитрита, а затем до катиона аммония, через образование ряда промежуточных продуктов.

При всем вышеизложенном следует помнить, что вред наносят организму не сами нитраты, а нитриты, в которые они превращаются при определенных условиях. (Hjelt К. et all, 1995; Реутов В.П., Дьяконова Е.Л.,1996;).

Нитраты оказывают существенное влияние на обмен натрия, калия и воды в желудочно-кишечном тракте организма человека и животных, который одним из первых повреждается при нитратной интоксикации.

Нитриты, являясь сильными окислителями, всасываются в кровь и под воздействием фермента нитратредуктазы восстанавливаются до нитритов, которые взаимодействуют с гемоглобином крови и окисляют в нем 2-х валентное железо в 3-х валентное. В результате образуется вещество метгемоглобин, который уже не способен переносить кислород. Поэтому нарушается нормальное дыхание клеток и тканей организма (*тканевая гипоксия), вследствии чего накапливается молочная кислота, холестерин и резко падает количество белка. Особенно опасны нитраты для детей грудного возраста, т.к. их ферментная основа несовершенна и восстановление метгемоглобина в гемоглобин идет медленно (Ильинский, 1990; Жукова, 1997; Гоженко, Славина, 2001; Куценко, 2004).

В зоне чрезмерного применения минеральных удобрений и пестицидов значительно чаще встречаются острые респираторные заболевания, пневмония, туберкулез легких (В.С.Гуменный, 1978), роста числа заболеваний печени, а также заболеваний сердечно-сосудистой системы и способствуют возникновению раковых опухолей в желудочно-кишечном тракте (В.П.Безуглый, 1978; Э.А. Арустамова, 2001; B.C. Гриенко,2005; Г.И. Румянцев и др., 2002-2008).

В связи с изложенным, исследование влияния различных доз нитрата на физиолого-биохимические показатели органов и тканей, которые отражают метаболические процессы и позволяют выявить их действие на функциональное состояние организма животных, а также на их возрастной чувствительности приобретает особое значение и актуальность.

Впервые на нитратах в странах СНГ стали обращать внимание в 70-х годах XX столетия, когда в Узбекистане случилось несколько массовых желудочно-кишечных отравлений арбузами, при их чрезмерной подкормке аммиачной селитрой (Гайлите М., Гайлитис М., 1990; Гриценко, 2005), хотя о нитратах знали гораздо раньше. Об отравлении нитратами и нитритами не

- б так давно писали, а говорили очень много (Соколов, 1990; Дерягина, 1996; Nicholls-Gizemski F.A. et all., 1999; Арустамова Э.А., 2001).Хозяйства Республики Таджикистан производят растениеводческую продукцию, в 25% которой содержание нитратов значительно выше концентраций, рекомендуемых гигиенистами и диетологами. В то же время в питании населения страны существенно возросла доля картофеля и овощей, что определяется не только снижением доходов семей, но и возрастанием производства растительных продуктов. Так, в Таджикистане с 1993 года по 2008 год, при снижении в рационе мясомолочной продукции потребление продуктов растениеводства возросло до 65%. Более того, в сельском хозяйстве растениеводство занимает ведущее положение (ВОЗ,2008).

В настоящее время в Таджикистане продовольственные ресурсы по основным видам продукции формируются на 45-80% за счет собственного производства, остальная часть приходится на импорт из других стран. В связи с этим, определение содержания нитратов в растениеводческой продукции, потребляемой в качестве пищи, а также их влияния на организм человека является одной из важных задач современной науки и имеет, как теоретическое, так и практическое значение (ВОЗ, 2008).

В связи с вышеизложенным, актуальность настоящего исследования заключается в изучении влияния нитратов на различных физиолого-биохимических показателях, которые отражают многие стороны метаболических процессов и позволяют выявить их действие на функциональное состояние органов и тканей, как несущий значительный вклад для предотвращения их воздействия на организм человека и животных.

Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы является на модели нитратной нагрузки, исследование у белых крыс влияния нитратов на функции крови, ткани печени и почек, а также изучение биохимических свойств белков, ферментов, липидов и аминокислот участвующих в метаболизме нитратного азота в организме животных.

В соответствии с поставленной целью были определены следующие задачи:

- исследование влияния нитратов на гематологические показатели и обменные процессы тканей печени и почек у молодых животных;

- изучение влияния различных доз нитратов на биохимические показатели в сыворотке крови и тканей печени животных при хронической интоксикации;

- изучение влияния различных доз нитратов на биохимические показатели в метаболизме нитратного азота в почках.

Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы явилось изучение действия различных доз нитрата аммония на функцию органов и тканей, а также биохимических свойств белков, ферментов, липидов и аминокислот, участвующих в метаболизме нитратного азота в организме животных на период от 1 до 6 месячного возраста.

В соответствии с поставленной целью были определены следующие задачи:

- исследование влияния нитратов на обменные процессы тканей печени, почек и сыворотки крови у молодых животных;

- изучение влияния различных доз нитратов на биохимические показатели в сыворотке крови и тканей печени животных при хронической интоксикации;

- оценка уровня нитратного фона и содержания общих и водорастворимых белков, липидов в метаболизме нитратного азота в почках.

Научная новизна. Новизна научных положений диссертационной работы заключается в том, что впервые в условиях Таджикистана проведено комплексное изучение влияния различных доз нитрата аммония на функциональное состояние и интенсивность обмена веществ организма животных в онтогенезе и при хронической интоксикации. Установлено, что нитраты в зависимости от возраста, времени и дозы интоксикации существенно влияют на показатели углеводного, белкового, липидного обмена, изменение содержания аминокислот и ферментов в тканях печени и почек, а также на биохимические показатели сыворотки крови животных. Выявлено, что различные дозы нитратов оказывают отрицательное влияние на белоксинтезирующую функцию печени. Определена концентрация гемоглобина и метгемоглобина в крови у животных, в зависимости от дозы интоксикации и показано, что их концентрации в зависимости от времени и дозы интоксикации значительно увеличиваются и способствуют развитию гемической гипоксии. Показано, что после шестимесячной интоксикации у животных развиваются компенсаторные адаптивные механизмы, направленные на снижение уровня метгемоглобина, улучшение снабжения тканей кислородом и восстановление функциональной деятельности органов.

Степень обоснованности и достоверности положений, выводов и рекомендаций. Установлено, что нитраты, оказывая существенное влияние на процессы обмена натрия, калия и воды в желудочно-кишечном тракте, способствуют развитию патогенной (вредной) кишечной микрофлоры, которая выделяет в организм человека и животных ядовитые вещества -токсины, в результате чего происходит токсикация, т.е. отравление организма. Они также снижают содержание витаминов в составе пищи, которые, в свою очередь являются важными структурными компонентами многих ферментов, стимулируют действие гормонов, а через них влияют на все виды обмена веществ. При длительном поступлении нитратов в организм человека (даже в незначительных дозах) уменьшается количество йода, что приводит к увеличению щитовидной железы. Выявлено, что нитраты способствуют возникновению раковых опухолей в желудочно-кишечном тракте у человека, вызывают резкое расширение сосудов, в результате чего понижается кровяное давление.

Эти положения и обусловили нас заниматься исследованием роли нитратов на организм животных.

На основе полученных результатов выявлено, что нитраты влияют на массу и степень выживаемости животных, гематологических показателей, содержание белков в сыворотке крови, на физиологические особенности тканей, приводящих к снижению содержания общих и водорастворимых белков, на изменение содержания аминокислот, а также повышение холестерина, общих липидов и триглицеридов, на биохимические показатели почек, сопровождающие снижением суточного диуреза, появлением глюкозы и белка в моче, изменением мочевины и креатенина, а также увеличением холестерина, липидов, почечных тканей. Исследование физиолого-биохимических особенностей влияния нитратов позволит выявить не только их отрицательное действие, но и поможет разработать методы диагностики для предотвращения отрицательного их действия на организм человека и животных. В связи с этим контроль за содержанием нитратов в растениеводческой продукции, потребляемой в пищу и влиянием их на здоровье человека является актуальными имеет практическое значение.

Теоретическая и практическая значимость работы. Полученные результаты могут быть использованы в клинической практике, при профилактике и лечения больных, отравленных нитратами, а также определении функции печени, легких, почек и других жизненно важных органов, восстановление белкового обмена, с учетом ограничения в их диетах, содержащих нитраты. Полученные данные могут быть использованы при составлении нормативных документаций санитарно-гигиенических и экологических служб. Результаты физиолого-биохимических исследований будут положены в основу рекомендации по использованию допустимых доз азотосодержащих удобрений в продуктах питания.

Апробация результатов исследования. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на ежегодных научно-теоретических конференциях профессорско-преподавательского состава ТНУ (1998-2009 г), на юбилейной конференции ТНУ (Душанбе, 1998 г), на республиканских конференциях молодых ученых и специалистов (Душанбе, 1998-2000 гг.), на республиканском семинаре по вопросам «физиологии и биохимии» (Душанбе, 2000 г), на международной конференции «Актуальные проблемы физиологии человека и животных», (Душанбе, 2003 г.), И съезде физиологов СНГ (Кишинэу, 2008г), на расширенных заседаниях кафедр физиологии человека и животных, биохимии (Душанбе, 2009; 2010 г.).

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 121 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, материала и методов исследования, результаты исследований, обсуждения результатов, выводов и практических рекомендаций, а также списка использованной литературы, включающего 164 наименований, в том числе 44 на иностранных языках. Работа содержит 23 таблиц и 10 рисунков.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Каримов, Акобир Изатуллоевич

ВЫВОДЫ

Выживаемость животных в зависимости от дозы интоксикации за весь период опытов разная. Вес тела животных, получавших нитрат аммония ежедневно в дозе 200мг/кг, после шести месяцев сократился на 50%. Степень выживаемости животных, получавших нитрат аммония в дозах 50, 100 и 200мг/кг, соответственно составила 80, 65 и 50%. Хроническая интоксикация нитратом аммония животных вызывает гемическую гипоксию, характеризующуюся значительным увеличением концентрации метгемоглобина в крови.

Хроническое воздействие нитрата приводит к уменьшению тканевых белков, концентрации альбуминов и триптофана, увеличению содержания р-глобулинов и тирозина в сыворотке крови. Нитрат аммония поражает паренхиму печени и при длительном его введении происходит угнетение белоксинтезирующей функции печени, что выражается в количественном и качественном изменении синтезируемого белка в ткани органа и сыворотке крови. Под действием нитратов в сыворотке крови и ткани печени увеличивается содержание холестерина, триглицеридов и общих жиров, что приводит к серьезным нарушениям липидного обмена. Нитраты вызывают нарушения функции почек, которые проявляются в виде снижения диуреза, эскрекции К+ и креатинина, повышения эскрекции белка и ионов натрия, титруемых кислот и аммиака, что сопровождается уменьшением клиранса мочевины и креатинина, а также и повышением экскреции белка и глюкозы в суточной моче.

РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Ввиду того, что все дозы нитрата аммония, особенно высокие (100 и 200 мг/кг) значительно подавляют функцию печени и повышают содержание липидов в органах. Поэтому лечение больных отравленных нитратами должно быть направлено, прежде всего, на восстановление белкового обмена, с учетом ограничения в их диетах жировых веществ.

2. Диагностика и лечение больных, подвергавшихся воздействию нитратов (тактика санации) должна быть направлена на улучшение не только функции печени, а также почек и других жизненно важных органов.

3. Необходимо учесть наличие того факта, что молодой организм наиболее восприимчив к влиянию нитратов, чем взрослый.

Автор выражает благодарность сотрудникам кафедры физиологии человека и животных ТНУ в период (1997-2006) и лаборатории клинической диагностики и биохимии Института гастроэнтерологии АН РТ, особенно к.б.н. Шамсидинову Ш. благодарность автор выражает научным руководителям д.б.н., профессору, Т.А. Иргашеву к.б.н., ст.н. сотруднику и научному консультанту д.б.н., профессору М.Б.Устоеву, за постановку цели и задачи, критические замечания, ценные советы и предложения, неоценимую поддержку, практическую и методическую помощь на всех этапах выполнения диссертационной работы.

Особую Х.М.Сафарову

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Каримов, Акобир Изатуллоевич, Душанбе

1. Арустамова Э.А.,Безопасность жизнедеятельности. Учебник./М. «Дашков и К.2001

2. Ажипа Я.И. Медико-биологические аспекты применения метода ЭПР.-М: Наука, 1983. 528 с.

3. Ажипа Я.И., Реутов В.П., Каюшин Л.П. Экологические и медико-биологические аспекты проблемы загрязнения окружающей среды нитратами и нитритами//Физиология человека. 1990. Т.16. № 3. С. 131-149.

4. Аман М.Э., Алекаев Н.С., Бекова Е.А, Завгородная В.Д. Известие Вузов, 1970, №6, -С. 22-24.

5. Архипов О.Г. Методы исследования и профпатология./М.Медицина 1987- 243 с.

6. Архипова О.Г. Методы исследования в профпатологии. М.: Медицина, 1989. - 206 с.

7. Бабаев И.И. Эколого- гигиеническая оценка применения пестицидов в условиях Республики Таджикистан// Автореф. дисс. на соис. уч. степ. док. мед. наук Алматы. 1997, 30 с.

8. Бояркин Е.В.,Дрофеев Н.В.,Пешкова A.A., Восстановление нитратов в органах растений. 2004,-С.257-262.

9. Боговский П.А. Азотные удобрения и проблемы рака. 1980

10. Борисов В.А. Экологические проблемы накопления нитратов в окружающей среде. 1990

11. Большая Российская энциклопедия, 1992, т. 3;

12. Браткавичютес Р.И. и др. Генетическая оценка содержания нитратов в питьевой воде и растительных пищевых продуктах некоторых районов Литовской ССР//Вопросы питания, 1991, № 2, -С. 60-62

13. Блюгер А.Ф, Маргулис М.С, Валук В.А, Андрейман JI.A. Успехи гематологии Рига, 1980, вып. 8, -С. 216-228.

14. Варич В.Я., Ванин А.Ф., Овсянникова JI.M. Обнаружение эндогенной окиси азота в печени мышей методом электронного парамагнитного резонанса//Биофизика. 1987. -32, вып. 6.- С. 10621063.

15. Волкова Н.В. Гигиенические значения нитратов и нитритов в плане отдаленных последствий их действия на организм. 1980.

16. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Пепекисное окисление липидов в биологических мембранах. М.: Наука, 1972. - 252 с.

17. Вожская A.M., Попова Н.И., Сладкова C.B. Кислородтранспортные свойства крови при острой нитритной метгемоглобинемии.//Пат. Физиология №2. 1993. -С 33-35

18. Всемирной организации здравоохранения.2008.-С 110

19. Габович Р.Д., Припутина JI.C. Гигиенические основы охраны продуктов питания о вредных химических веществ. 1990.

20. Ганиев Х.Г. Микрометод определения арометических аминокислот в субклеточных структурах печени// В кн: Экспериментальная патология печени. Душанбе, 1981, вып. 4 -С. 245-250.

21. Гиясов Т.Д., Якубова М.М., Юлдашев Х.Ю. и др. Некоторые параметры углеродного и азотного обмена в листьях различных ярусов хлопчатника// Тез. докл. конф. /»вклад ученых в развитие биол. наук». Душанбе, 1998. -С. 40-41

22. Гиясов Т.Д. Фотосинтез и ассимиляция азота в онтогенезе хлопчатника // Автореф. дисс. на соис.уч. степ. док. болог. наук.- Ill 1. Душанбе, 1999.—48c.

23. Глинка Н.Л. Общая химия. Л., 1985 - С. 398

24. Гайлите М., Гайлитис М. Ещё раз о нитратах//Наука и мы, 1990г., № 6, -С.2.

25. Гриценко B.C. Безопасность жизнедеятельности. Учебник пособие.2005г.

26. Глунцев Н.М., Дмитриева Л.В., Макарова С.О. Как снизить содержание нитратов в продукции//Картофель и овощи, 1990г. № 1, -С. 24-28.

27. Голиков С.Н. Актуальные проблемы современной токсикологии// Фармакология и токсикология 1990. М. - С. 645-650.

28. Граф В.А., Митрофанов Н.С. Использование нитрита при производстве мясных продуктов. ЦНИИТЭИ. Обзорная информация. М. 1978.-С. 62.

29. Гурвич А.Е. Изучение сывороточных белков методом электрофороза на фильтровальной бумаге. «Лабораторное дело», 1955, №3, -С. 3-9.

30. Гурняк О. Н. Влияние пестицидов на морфо-функциональний состояние печени : дис. канд. биол. наук: 03.00.11 / Киевский национальный ун-т им. Тараса Шевченко. К., 2005.

31. Дерягина В.П. Ах, нитраты! И кто же вас выдумал?//Организм. 1989г. №9.

32. Дерягина В.П., Реутов В.П. Экологические аспекты патофизиологии, связанные с нитратно-нитритным загрязнением окружающей среды//

33. Российский конгресс по патофизиологии. Москва, 1996, — С. 239

34. Дрофеев Н.В., Бояркин Е.В.Влияние засоления на активность нитратредуктазы в органах растений, различающихся по солеустойчивости. 2006.-С.11-16.

35. Дзугкоев Ф.С., Джиоев И.Г., Кабоева Б.Н., Накусов Т.Т., Беликова JI.P. Влияние азотсодержащих соединений на водно-солевой обмен и функции почек//Материалы VI Международного конгресса "Экология и организм человека". Самара. 1999. С. 64-66

36. Егорова В.В., Иезутова H.H., Никитина A.A. и др. Воздействие нитратов на крыс во время беременности на развитие пищеварительной системы в онтогенезе //Физиологический журнал №6. 1993.-С. 93-101.

37. Ершов Ю.А., Плетнева Т.В. Механизмы токсического действия V нитрогенных соединений — Медицина. 1989 -211 с.

38. Жукова Г.Ф., Филина С.А., Зайцев А.Н., Мамонова Л.Г. Поступление нитратов в состав рациона детей младшего возрастаУ/Вопросы питания. 1991, № 6. С. 49-53.

39. Зарубин Г.П. Дмитриев М.Т. Приходько Е.И. Мищихина В.А. Гигиеническая оценка нитратов в пищевых продуктах. Гигиена и санитария. 1990.

40. Зуфоров Н.К. Компенсаторно-приспособительные процессы в почках при хронической почечной недостаточности// Мед. журнал Узб. 1989, № 3-С. 74-76

41. Зуфаров К.А., Наджимитдинов К.Н. Морфологические аспекты влияния пестицидов на действие лекарственных веществ, метаболизирующихся в печени// В кн: Успехи гепатологии, вып, 5, Рига, 1975, -С. 200.

42. Ильницкий А.П. О регламентировании нитратов в сельскохозяйственных продуктах растительного происхождения //Вопросы питания. 1991, № 6.-С. 12-14

43. Ильницкий А.П. Нитраты как новый средовой фактор, оказывающий влияние на организм населения//Экологические проблемы накопления нитратов в окружающей среде: Тез. докл. Всесоюз. конф. Пущино. 1989, -С. 130.

44. Каган Ю.С. Сасинович Л.И, Воронина Л .Я. О хроническом воздействии некоторых пестицидов на функциональное состояние печени. «Гиг. и сан.», 1970, №9, -С. 36

45. Капанадзе. К вопросу установления предельно допустимой концентрации нитратов в воде. 1980.

46. Кислеков Ю.Я., Волжская М.А. Резистентность крыс к острой гипоксии при нитритной метгемоглобинемии.//Пат. Физиология №2. 1993.-С. 35-37

47. Комарова В.И. Определение нитратредуктазной активности ротовой жидкости//Научный вестник./ Зоотехния. Вып.1. -ВГСХА. Волгоград, 1999, -С. 123-124.

48. Комарова В.И., Храмов В.А. Определение активности нитритредуктазы в ротовой жидкости человека.// Клиническая лабораторная диагностика, №11, 1999, -С. 36

49. Комарова В.И. Метаболизм нитратов в ротовой жидкости человека// Автореф. дисс. на соис.уч. степ. канд. биол. наук Санкт-Петербург 2001,-20 с

50. Кисляков О.Я., Волжская A.M. Резистентность крыс к острой гипоксии при нитритной метгемоглобинемии//Патологическая физиология и экспериментальная терапия. М., 1993, №2, — С. 3537.

51. Клиш И.Н. Динамика активности и пути коррекции нарушений окислительных процессов при токсическом поражении печени в эксперименте.//Автореферат дис. канд. мед. наук. Львов, 1992. - 17 с.

52. Колб В.Р., Камышников B.C. Клиническая биохимия.- Минск: Белорусь, 1976-260 с.

53. Криляков В.Н. Физико-химические свойства и перекисное окисление липидов субклеточных структур почек при нитрозоаминовом канцерогенезе и дополнительном введении антиоксидантов. Автореф. дисс. канд. мед. наук Челябинск 1988 - 19 с.

54. Кузьминская У.А. Биохимическая характеристика субклеточных структур печени при воздействии пестицидов (к механизму действия хлорорганических и карбонатных пестицидов). Автореф. дис. доктора мед. наук. Киев, 1975. 46с.

55. Кузьминская У. А., М.Г.Кокаровцева, М. Овсянникова Биохимические, иммунологические и биофизические методы в токсикологическом эксперименте//Метод. рук-во.- Киев, 1989. -184 с.

56. Личинова Р.И. и Ротембург Ю.С. Аккумуляция энергии и регуляцияферментативных процессов //В сб. Митохондрии/ М.Наука, 1977, -С. 23-27.

57. Лужников Е.А., Дагаев В.Н., Фирсов. H.H. Основы реаниматологии при острых отравлениях. М. 1977, -С. 375.

58. Лужников Е.А., Костомарова Л.Г. Острые отравления. М.: Медицина, 1989. - 472 с.

59. Мецлер Д.Биохимия. «Мир»2000.

60. Мансурова И. Д. Биохимия печени при болезни Боткина и боткинских циррозах. Душанбе., 1964.-С.150.

61. Мансурова И.Д., Сапожников Г.Н., Ганиев Х.Г и др. Влияние однократного введения ДДТ на некоторые показатели функции печени и поджелудочной железы у крыс// Изв. АН Тадж. ССР. Отделение биологических наук, Дониш, 1978, № 2.-С.77.

62. Мансурова И.Д. Действие пестицидов на обменные процессы у человека и животных //В кн. Эксперим. патол. печени. Душанбе, 1981 вып. 4,-С.5-6

63. Метелица В.И., Давыдов А.Б.//Препараты нитратов в кардиологии. Механизм действия нитратов. — М. 1987. С. 26-28

64. Мугниев А.Ф., Посмитная И.В. Содержание нитратов в овощах можно регулировать//Картофель и овощи 1989. № 1.

65. Меншикова В.В. Лабораторные методы исследований в клинике. 1987.-С.243.

66. Нуралиев Ю.Н.,Волынская Т.В.Влияние этанола на экскреторную функцию печени белых крыс.1976.-С.156-158.

67. Нитраты, нитриты и N-нитрозосоединения. Женева: Всемирная организация здравоохранения//Совместное издание программы ООН по окружающей среде и Всемирной организации здравоохранения, 1981.

68. Опопель Н.И. Об особенностях токсического воздействия нитратов,содержащихся в растительных продуктахУ/Вопросы питания. 1991. № 6.-С 15-20.

69. Опопол И.В., Дабрянская Е.В. Нитраты. Минск 1987. 150 с.

70. Опополь Н.И., Добрянская Е.В. Нитраты: гигиенические аспекты проблемы. Кишинев, 1986. - 115 с.

71. Отчёт министерства экологии и окружающей среды Республики Северная Осетия-Алания за 1998 год. Владикавказ. 1999. С. 37

72. Покровская С.Ф. Пути снижения нитратов в овощах. М.: Урожай, 1988 1

73. Павловский П.Е., Пальмин В.В. Биохимия мяса и мясопродуктов. -М.; Пищпромиздат, 1975.- С. 324.

74. Прохорова М.И.,Тушникова З.Н.Болыной практикум по углеводному и липидному обмену.1985.-С.34-35.

75. Покровская С.Ф. Пути снижения содержания нитратов в овощах. М., 1988г. С. 42-46.

76. Пивоваров Ю.П.,Королик В.В.Зинович Л.С. Гигиена и основы экологии человека.М.2006,-С.528.

77. Плохинский Н.А."Биометрия"//Изд. Московского университета.1970.-367 с.

78. Полевой В.В. Физиология растений. М.: Высшая школа, 1989;

79. Реутов В.П., Дьяконова Е.Л. Нейроны виноградной улитки, как модель для исследования компенсаторно-приспособительной реакции в мозге млекопитающих//Материалы I Российского конгресса по патофизиологии. Москва. 1996. — С. 18

80. Румянцев Г.И.,Новиков С.М.,Шашина Е.А.,Воздействия факторов окружающей среды на здоровые населения. (ММА им.А.И.Сечинова) 2002-2008.

81. Реутов В.П.Цикл окси азота в организме млекопитающих //Успехибиологии. Химии. 1995- 35.-С.189-228.

82. Рубенчик B.JI. Образование канцерогенов из соединений азота -Киев: Наукова Думка-1990. -213 с.

83. Русяев В.А. Влияние фосфороргонических пистицидов на организм белых крыс различного возраста. Автореф. канд.дисс. Харьков, 1973. 21 с.

84. Рыжова А.П. Фермент трансаминаза, и его определение в клинической практике. «Лаб.дело», 1970, № 5, С. 295-300.

85. Рычков А.Л., Нитратная кухня. Химия и жизнь. 1989, № 7.

86. Савченков М.Ф. Влияние некоторых промышленных ядов на животных разного возраста. Автореф. канд.дисс. Л., 1969. 22 с.

87. Сафаров Х.М., Шамсуддинов Ш.Н., Каримов А. и др. Нефротоксическое действие нитратов//в сб./ Действие различных факторов на структуру и функцию организма животных. Душанбе 1990, вып. IX-С.

88. Сафаров Х.М., Шамсуддинов Ш.Н., Каримов А. Влияние нитратов на функции почек. 1998,-С. 115

89. Середенко и др. Механизмы развития и компенсации гемической гипоксии Киев, 1987 - 150 с.

90. Синяк K.M., Оргель М.Я., Крук В.И. Метод приготовления липидов крови для газохроматографического исследования. «Лаб.дел», 1976. № 1.-С. 37-41.

91. Смирнова Л.Г. и Кост Е.А. Руководство по клиническим лабораторным исследованиям. М., Медгиз, 1960.

92. Соколов O.A. Нитраты под строгий контроль//Наука и жизнь. 1988, №3

93. Соколов O.A. Особенности распределения нитратов и нитритов в овощах//Картофель и овощи. 1987. № 6.

94. Соколов O.A., Семёнов В., Агаев В., Нитраты в окружающей среде. Пущино, 1990г. С. 216-238

95. Сопильняк Н.Т., Федотова JI.C., Удобрения и качество продукции// Картофель и овощи. 1987. № 5. С. 18-19

96. Стальная И.Д., Гаришвили Т.Г.//В кн/ Современные методы в биохимии., М., 1977, С. 66-68.

97. Таланов Г.А. Профилактика загрязнения кормов нитратами и нитритами//Ветеринария. 1992. № 1.- С. 9-13.

98. Тугаринова В.Н., Микрашевский В.Е.Отценка функционального состояния печени с помошью нагрузки бромсульфалеином в санитарно-токсикологическом эксперименте. 1966.-С.55-59.

99. Токорев Ю.Н. Диагностика и лечение метгемоглобинемии//Терапевт, арх., 1979, №9.-С. 79-82.

100. Фримель Г.Имуналогические методы.М.2007

101. Федорчук A.C. Функция почек при хронической гемической гипоксии. Тез. респ. конф. Тбилиси-1988 — С. 85

102. Химическая энциклопедия. В 5 т. М.:

103. Храмов В.А., Комарова В.И. Способ определения хлорогеновой кислоты в растительных объектах//Гигиена и санитария. 1999. - № 9-С.71.

104. Храмов В.А., Комарова В.И., Темкин Э.С. Антибиотики как ингибиторы нитратредуктазы ротовой жидкостичеловека//Стоматология.- 2000,-№ 2. С.4-5.

105. Ю.Цыганенко О.И., Набока М.В., Ланченко B.C. Метаболизм нитратов в организме человека и животных при их поступлении с питьевой водой и пищей//Гигиена и санитария. 1989. № 4. С. 55-59

106. Ш.Чапкявиченс Э.С., Как уменьшить содержание нитратов и нитритов в овощах/Юрганизм, 1988. № 3

107. Черпяева И.И., Экологические проблемы использования азотных удобрений. Химизация сельского хозяйства, 1990, № 4,— С. 20-21.

108. Шамсуддинов Ш.Н.,Сафаров Х.М., Авезов Г.А., Каримов А.И. Гепатоксическое действие нитратов. Действие различных факторов на структуру и функции организма животных. Г. Душанбе. 1997г: вып. 8 С.99-103.

109. Шукурова Д.И. Гигиеническое обоснование регламентов применения минеральных удобрений и пестицидов в сельском хозяйстве Республики Таджикистан// Автореф. дисс. на соис.уч. степ. канд. биол. Наук. Москва. 2002, 25с.

110. Экологические проблемы накопления нитратов в окружающей среде: Тез. докл. Всесоюз. конф. Пущино, 1989. 151 с.

111. Эвенштейн 3. Нитраты, нитриты, нитрозамины//Общественное питание., 1989, № 3.

112. Ярошенко Т. Я. Роль оксида азота в механизмах поражения печени ксенобиотиками: дис. канд. биол. наук: 03.00.04 / Институт биологии животных УААН. Л., 2007.

113. Ягнятинская A.M. О биологической роли ксантиоксидазы//Успехи совр. биологии. -1985.- 99, вып.1. С. 38 - 51.

114. Avila М.А., Mingorance J., Martinez-Chanter M.L., Casado M., Martin-Sanz P., Bosco L., Mato J.M. Regulation of rat liver S-adenosylmethionine synthetase during septic shock: role of nitric oxide//Hepatology 1997. #2, p. 391-396.

115. Battelli M., Abboudauza A. Stirpe F. Effects of hypoxia and ethanol on xanthine oxidase//Chem.-Biol. Interact. 1992. - 83, #l.-p. 73-84.

116. Blachier F., Briand D., Selamnia M., Robert V., Guihot G., Mayeur C., Differential inhibitory effects of three nitric oxide donors on ornithine decarboxylase activity in human colon carcinoma cells//Biochem Pharmacol. 1998. #8,-p. 1235-1239

117. Borchers R. Allantoin determination//Anal. Biochem. 1977. - 79, #2. -p. 612-613.

118. Berdus M.G.Sports-ecological education and ecology of sports/Modern Olvmpic sports and sports for all. Warsaw, 2002.

119. Cassens R.G. Residual nitrite in cured meats. Food Technology #7 1997. -p. 53-55. :

120. Coleman M.D., Coleman N.A. Drug-induced methaemoglobinaemia. Treatment issues//Drug Saf. 1996. #6. p. 394-405

121. Corbett J.A., Lancaster J.R., McDaniel M.L. Interleukin -lb-induced formation of EPR -detectabl iron nitrosyl complexes in inslets of Langerhans//J. Biol. Chem. - 1991. -266, # 32. -p. 21351-21354.

122. Corbett J.A., Sweetlang M.A., Lancaster J.R. Aminoguanidine, a novel inhibitor of NO formation, prevents diabetic vascular disfunction//Diabets. -1992. -1, #3. -p. 552-556.

123. Culotta E., Koshland D.E. NO news is good news//Science. -1992. -258. -p. 1862-1865.

124. Doblander С., Lackner R. Metabolism and detoxification of nitrite by trout hepatocytes//Biochim. Biophys. Acta. 1996. #2. p. 270-274

125. Examination of Dietary Recommendations for Salt-Cured, Smoked, and Nitrite-Preserved Foods. CAST Issue Paper No. 8, November 1997. Internet.

126. Green L.C., Wagner D.A., Glogowski J.G. Analysis of nitrate, nitrite and 15N nitrate in biological fluids//Anal. Biochem. 1982. - 126, #1. -p. 131138.

127. Hammes W.P., & Hertel. C. New developments in meat starter cultures. J. Meat Science 1998 No. Suppl. S125-S138.

128. Huergo I., Yernck C., Popper H. Цит. по кн. Д.А.Кайдин. Модификация ускоренного метода определения общих липидов в сыворотке крови по Хуэрго.лаб.дело,1973,№12,-С.750.

129. Hestrin S. The reaction of acetylcholine and other carboxylic derivates with hydroxylamine and its analytical application//J.Biol. Chem. 1949. -180, #1.-p. 243-249.

130. Hjelt K., Lund J.T., Scherling В., Bendixen S., Lundstrom K. Methaemoglobinaemia among neonates in a neonatal intensive care unit//Acta Paediatr 1995. #4. p. 365-370

131. Ignaro L. Biological action and properties of endothelium derived nitric oxide formed and released from artery and vein//Circulation Research. -1989. - 65. N 1. -p. 1-21.

132. Ignaro L. Bilogical action and properties of endothelium derived nitric oxide formed and released from artery and vein // Circulation Research. -1989.-65, N 1.-P. 1-21.

133. Jens K.S. Moller, Lars L. Hinrichsen and Henrik J. Andersen. Formation of Amino Acid (L-leucine, L-phenylalanine) Derived Volatile Flavour Compounds by Moraxella phenylpyruvica and Staphylococcus xylosus in

134. Cured Meat Model Systems. Danish Meat Research Institute, Maglegerdsvej 2, DK-4000 Roskilde, Denmark and Danish Institute of Agricultural Sciences, Department of Product Quality, Research Centre Foulum, P.O. Box 50, DK-8830 Tjele, Denmark. Internet.

135. Ji Y., Akerboom T.P., Sies H. Microsomal formation of S-nitrosoglutathione from organic nitrites: possible role of membrane-bound glutathione transferase/ZBiochem. J. 1996. #313 (Pt2). p. 377-380

136. Joseph J., Kalyanaraman B., James S.H. Trapping of nitric oxide by nitronyl nitroxides an electron spin resonance investigation//Biochem. Biophys. Res. Communs. 1993. - 192, #2. -p. 926-934.

137. Kanapatskaia I.A., Zyrianova T.N., Lavrova V.M. Indicators of lipid peroxidation in rat liver mitochondria after exposing them to some xenobiotics and the action of low dose radiation//Ukr. Biokhim. Zh. 1998. #6.-p. 113-119

138. Kankaanranta H., Rydell E., Petersson A.S., Holm P., Moilanen E., Corell T. Nitric oxide-donating properties of mesoionic 3-aryl substituted oxatriazole-5-imine derivatives//Br. J. Pharmacol. 1996. #3. p. 401-406

139. Kohi C., Gescher A. Denitrification of the genotoxicant 2-nitropropane: relationship to its mechanism of toxicity/ZXenobiotica 1997. #8. — p. 843852

140. Kozlov A.V., Staniek K., Nohi H. Nitrite reductase activity is a novel function of mammalian mitochondria/ZFEBS Lett. 1999. #454, p. 127130

141. Lancaster J.R., Langrehr J.M., Bergonia H.A., Murase N. EPR detection of heme and nonheme iron containing protein nitrosylation by nitric oxide during rejection of rat heard allograMJ.Biol. Chem. -1992. - 267, N 16. -p. 10994-10998.

142. Marietta M.A. Nitric Oxide Synthase: Structure and Mechanism//J.Biol.o1. Chem. 1993.-268.-p. 1231.

143. Martin-Sanz P., Bosca L., Olmedilla L., Perez-Pena J., Garutti I., Sanz J. Presence of a nitric oxide synthase inhibitor in the graft efflux during reperfusion in human liver transplantation//Clin. Transplant. 1999. #3. p. 221-230

144. Moncada S., Palmer R.M.J., Higgs E.A. Nitric oxide: physiology, pathophysiology and pharmacology//Pharmacol. Rev. 1991. 43, N1 -p. 109-142.

145. Mulsch A., Mordvintcev P.I., Vanin A.F., Busse R. Formation and release of dinitrosyl iron complexes by endothelial cells//Biochem. Biophys. Res. Communs. 1993. - 196, N 3. -p. 1303-1308.

146. Nicholls-Gizemski F.A., Tirmenstein M.A., Fariss M.W. Time-dependent production of nitric oxide by rat hepatocyte suspensions/ZBiochem. Pharmacol. 1999. #11.-p. 1223-1226

147. Park C.S., Baek H.M., Chung W.G., Lee K.H., Ryu S.D., Cha Y.N. Suppression of flavin-containing monooxygenase by overproduced nitric oxide in rat liver//Mol. Pharmacol. 1999. #3. p. 507-514

148. Petermann H., Vogi S., Schulze E., Dargel R. Chronic liver injury alters basal and stimulated nitric oxide production and 3 H-thymidine incorporation in cultured sinusoidal endothelial cells from rats//J. Hepatol. 1999, #2.-p. 284-292

149. Rees D.D., Cellek S., Palmer R.M.J., Moncada S. Dexamethason prevents the induction by endotoxin of a effects on vascular tone: an insight into endotoxin shock//Biochim. Biophys. Res. Communs. 1990. - 173, N 2. -p. 541-547

150. Rockey D.C., Chung J.J. Reduced nitric oxide production by endothelial cells in cirrhotic rat liver: endothelial dysfunction in portal hypertension. //Gastroenterology 1998. #2. -p. 344-351