Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Физиологическое становление тромбоцитарного гемостаза у продуктивных животных в постнатальном онтогенезе

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Физиологическое становление тромбоцитарного гемостаза у продуктивных животных в постнатальном онтогенезе"

1

На правах рукописи

Медведев Илья Николаевич

ФИЗИОЛОГИЧЕСКОЕ СТАНОВЛЕНИЕ ТРОМБОЦИТАРНОГО ГЕМОСТАЗА У ПРОДУКТИВНЫХ ЖИВОТНЫХ В ПОСТНАТАЛЬНОМ ОНТОГЕНЕЗЕ

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени доктора биологических наук

03.00.13 - физиология

Чебоксары - 2009

003462821

Работа выполнена на кафедре адаптивной физической культуры и спорта ГОУ ВПО «Курский институт социального образования (филиал) Российского государственного социального университета» и кафедре физиологии ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И.Скрябина»

Научный консультант:

доктор биологических наук, профессор Максимов Владимир Ильич

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Григорьев Василий Семенович,

доктор биологических наук, профессор Нигматуллина Разина Рамазановна,

заслуженный деятель науки РФ, доктор биологических наук, профессор Каталымов Леонид Лазаревич.

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Самарский государственный университет».

Защита диссертации состоится <ре//иш 2003 г. в

часов на заседании объединенного совета ДМ212300.03 при ГОУ ВПО «Чувашский государственный педагогический университет имени И.Я. Яковлева» (428800, г.Чебоксары, ул.К.Маркса, 38, ГОУ ВПО «ЧГПУ им. И.Я. Яковлева» тел. (8352) 62-02-83, e-mail: rectorat@chgpu.edu.ru).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «ЧГПУ им. И.Я. Яковлева» по адресу: 428800, г.Чебоксары, ул.К.Маркса, 38.

Автореферат разослан » ЛмАлл 200Л.

Учёный секретарь объединенного совета, доктор биологических наук

В.В. Алексеев

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. До сих пор знания особенностей физиологии сельскохозяйственных животных в раннем онтогенезе недостаточны. Остается актуальным эмпирический подход к решению проблем, касающихся различных сторон развития системы крови всех видов сельскохозяйственных животных в онтогенезе. Цикл индивидуального развития организма определяется наследственностью, которая в полной мере реализуется лишь, если на каждом этапе его развития будут обеспечены специфичные и обязательные для него условия среды [К.Б.Свечин, И.А.Аршавский, А.В.Квасницкий и др., 1967; В.Ф.Лысов, 1996; В.ФЛысов, В.И.Максимов, 2003; A.A. Шуканов и соавт., 2004].

Известно, что функциональная активность тромбоцитарного гемостаза во многом определяет агрегатное состояние крови. В зависимости от степени отклонений условий среды от требующихся в раннем онтогенезе, а также выраженности нарушений обмена веществ имеет место либо адаптация организма, либо возникновение разнообразных форм дисфункций. Большое значение в становлении систем организма оказывают особенности обмена веществ у разных видов животных, в частности у моногастричных и полигастричных. Важным достижением биологии и, в частности физиологии, можно считать введение в практику различных средств и приемов восстановления нарушенного хода физиологических процессов при различных состояниях у животных. Использование их не всегда приводит к эффективному результату, и успех или неуспех коррекции зависит в значительной степени от состояния местной и общей реактивности организма, которые изменяются в ходе онтогенеза, формирования его структур и становления функций [И.М. Карпуть, 1989; В.Ф. Лысов, В.И. Максимов, 2003].

В общей структуре отклонений от физиологического состояния у животных наиболее уязвимой является фаза новорожденное™. На этом этапе развития у телят часто могут возникать функциональные нарушения в системе пищеварения, а у поросят нередко возникает анемия. Функциональные нарушения пищеварения у телят и анемия у поросят ведут к ряду общих изменений в организме во многом через формирование дисфункций тромбоцитов, обуславливающих нарушение реологии крови, возникновение гипоксии и нарушениям сердечной деятельности, обеспечивая снижение резистентности к респираторным болезням, интоксикации, нарушениям обмена веществ и др. [A.M. Зинкевич, 1985; И.П. Кондрахин, 2003].

В тоже время, динамика активности тромбоцитарного гемостаза и тонких механизмов его реализации у телят и поросят в течение раннего онтогенеза, у телят с функциональными нарушениями пищеварения и поросят с анемией в фазу новорожденное™ изучены недостаточно: не раскрыты причины возникновения и пути формирования у них тромбоцитопатии; не разработаны эффективные и научно-обоснованные подходы ее коррекции; не

выяснено влияние различных индукторов и их сочетаний на агрегационные функции кровяных пластинок, имеющее место в реальных условиях кровотока; не оценена морфологически степень активации тромбоцитов в просвете сосудов, не выяснено состояние перекисного окисления липидов (ПОЛ) тромбоцитов и активность антиокислительных ферментов кровяных пластинок; не изучено состояние тромбопластинообразования, липидный состав тромбоцитарных мембран и особенности обмена арахидоновой кислоты в кровяных пластинках; не разработана тактика мероприятий, направленных одновременно на восстановление гемостатических нарушений с оптимизацией микроциркуляции, нормализацией обменных процессов и коррекцию функциональных нарушений пищеварения у телят и анемии у поросят в фазу новорожденное™.

В связи с этим вполне очевидна актуальность и целесообразность изучения становления тромбоцитарного гемостаза у новорожденных телят и поросят в постнатальном онтогенезе. Исходя из этого были сформулированы цель и задачи настоящего исследования.

Цель исследования - выявить особенности физиологического становления тромбоцитарного гемостаза в отдельные фазы раннего онтогенеза у телят и поросят, его изменения при наиболее часто возникающих отклонениях от гомеостаза в фазу новорожденное™ с поиском эффективной коррекции активности тромбоцитов у телят с функциональными нарушениями пищеварения и поросят при анемии.

Задачи исследования: 1. Исследовать состояние тромбоцитарных функций, содержание средних молекул, активность ПОЛ, уровень антиоксидантной защиты плазмы крови и тромбоцитов, липидный состав кровяных пластинок и протромботический потенциал первичного гемостаза у здоровых телят в раннем онтогенезе. 2. Определить особенности тромбоцитарных функций, активность ПОЛ, антиоксидантной защиты плазмы крови и тромбоцитов, состояние липидного состава кровяных пластинок и протромботический потенциал первичного гемостаза у здоровых поросят в раннем онтогенезе. 3. Провести сравнительный анализ активности тромбоцитов у телят и поросят в раннем постнатальном онтогенезе. 4. Определить динамику содержания средних молекул, активность ПОЛ и состояние антиоксидантной защиты плазмы крови и тромбоцитов, изменения липидного состава кровяных пластинок и уровень активности тромбоцитов у новорожденных телят с риском развития и возникшими функциональными нарушениями пищеварения. 5. Определить степень влияния различных подходов к коррекции тромбоцитарных нарушений и протромботического потенциала первичного гемостаза у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения (традиционная коррекция, сорбент «Экое», «Биопаг-Д», «Фосфопаг», сочетание «Фосфопага» и «Экоса» и сочетание «Фосфопага», «Экоса» и кальция глюконата). 6. Разработать и апробировать способ профилактики тромбоцитарных нарушений у новорожденных телят с риском развития функциональных нарушений пищеварения. 7. Установить особ!енности

активности ПОЛ и состояния антиоксидантной защиты плазмы крови и тромбоцитов, изменения липидного состава кровяных пластинок, сопутствующих развитию тромбоцитарных дисфункций у новорожденных поросят с анемией. 8. Оценить активность тромбоцитарных функций и уровень протромботического потенциала первичного гемостаза у новорожденных поросят с анемией и на фоне изолированного применения препарата железа (ферроглюкин) и его сочетаний с фоспренилом и гамавитом.

Научная новизна исследования состоит в том, что впервые:

1. Определены видовые особенности состояния тромбоцитарного гемостаза, антиоксидантной защиты тромбоцитов, липидного состава их мембран, активности ПОЛ и протромботического потенциала первичного гемостаза у телят и поросят в раннем онтогенезе. 2. Выявлены особенности тромбоцитарного гемостаза, антиоксидантной защиты тромбоцитов, липидного состава их мембран, активности ПОЛ и протромботического потенциала первичного гемостаза у физиологически незрелых новорожденных телят до возникновения функциональных нарушений пищеварения и после их развития, содержания в плазме крови средних молекул, активности ПОЛ плазмы, что позволяет считать эти изменения ранними предвестниками развития функциональных нарушений пищеварения и дисфункций тромбоцитов с усилением их активности и может служить основанием для проведения мер профилактики, направленных на нормализацию свойств кровяных пластинок. 3. Установлена зависимость активности тромбоцитарного гемостаза, антиоксидантной защиты тромбоцитов, липидного состава их мембран, активности ПОЛ и протромботического потенциала первичного гемостаза у физиологически незрелых новорожденных поросят с дефицитом железа. 4. Найден способ коррекции и профилактики функциональных нарушений пищеварения у новорожденных телят, нормализующий активность тромбоцитов и их протромботический потенциал, посредством сочетания «Фосфопага», энтеросорбента «Экое» и кальция глюконата. 5. Определено, что у новорожденных поросят с анемией при применении препарата железа (ферроглюкин) в сочетании с фоспренилом и гамавитом нормализуется активность тромбоцитов и их протромботический потенциал.

Научно-практическая значимость работы. Выполненное исследование содержит новое решение актуальной научной проблемы - оценки специфики становления тромбоцитарного гемостаза у телят и поросят в раннем постнатальном онтогенезе и при наиболее часто возникающих у них отклонениях от гомеостаза в фазу новорожденное™.

Установленные особенности становления морфофизиологических параметров тромбоцитарного гемостаза в различные фазы раннего постнатального онтогенеза и при наиболее часто возникающих отклонениях от гомеостаза в фазу новорожденности у телят и поросят необходимы для решения практических задач по созданию нормальных условий содержания

животных, обеспечивающих полное проявление их генетических потенциальных возможностей.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Для каждой фазы раннего постнатального онтогенеза у крупного рогатого скота и свиней свойственна определенная активность тромбоцитарного гемостаза.

2. Активность тромбоцитарного гемостаза у разных видов животных имеет свои особенности.

3. Развивающиеся функциональные нарушения пищеварения у телят и дефицит железа у поросят в фазу новорожденное™ вызывают характерные сдвиги тромбоцитарного гемостаза.

4. Дисфункции тромбоцитарного гемостаза в фазу новорожденности возможно корректировать у телят с функциональными нарушениями пищеварения с помощью «Фосфопага», «Экоса» и глюконата кальция, а у поросят с анемией сочетанием ферроглюкина с гамавитом.

Реализация результатов исследования. Полученные данные, научные положения и выводы внедрены в работу ветеринарной службы Фатежского, Советского, Суджанского, Октябрьского, Золотухинского, Курского, Железногорского, Обоянского, Конышовского районов Курской области РФ и научно-исследовательскую работу Всероссийского НИВИ патологии, фармакологии и терапии РАСХН, используются в учебном процессе при преподавании физиологии в Курском институте социального образования (филиал) РГСУ.

Апробация. Основные материалы диссертации доложены и обсуждены на: Международной научно-практической конференции «Экология, окружающая среда и здоровье населения Центрального Черноземья (2005), X съезде биохимиков Украины (2006), научной конференции с международным участием «Научные исследования высшей школы» (2006), IV научной конференции с международным участием «Проблемы агропромышленного комплекса (2007), XI Международной научно-производственной конференции «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения» (2007), V Международной конференции «Современные наукоемкие технологии» (2007), 19 Международной межвузовской научно-практической конференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии» (2007), V научной конференции с международным участием «Гомеостаз и эндоэкология» (2007), IV научной конференции с международным участием «Фундаментальные и прикладные проблемы медицины и биологии» (2007), научной конференции с международным участием «Научные исследования высшей школы по приоритетным направлениям науки и техники» (2007), Международной научно-практической конференции «Теоретические и прикладные проблемы социально-правовых, медико-биологических, технико-экономических сфер жизни общества (2007, 2008), Научном симпозиуме специалистов, молодых ученых и студентов «Адаптивные реакции в биологии и медицине» в рамках Международной научно-практической конференции «Теоретические и

прикладные проблемы социально-правовых, медико-биологических и технико-экономических сфер жизни общества» (2007, 2008), первом международном конгрессе ветеринарных фармакологов «Эффективные и безопасные лекарственные средства» посвященного 200-летию высшего ветеринарного образования и Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины (2008), на расширенном заседании кафедры адаптивной физической культуры и спорта Курского института социального образования (филиал) РГСУ с привлечением сотрудников кафедры физиологии Курской государственной сельскохозяйственной академии им. И.И. Иванова, Курского государственного медицинского университета, Белгородского государственного университета, Белгородской сельскохозяйственной академии и Всероссийского НИВИ патологии, фармакологии и терапии РАСХН, Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина 17 октября 2008г.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 83 работы, в т.ч. 3 монографии, 18 статей в рецензируемых изданиях, рекомендованных ВАК РФ, получено 10 патентов на изобретение и 2 решения о выдаче патента на изобретение.

Структура и объём работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов собственных исследований, обсуждения, заключения, выводов, практических рекомендаций, указателя использованной литературы, содержащей отечественных и зарубежных источников, и двух приложений, полно раскрывающих суть примененных лечебных подходов. Диссертация изложена на 402 страницах машинописи, включает 115 таблиц и 48 рисунков.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

Характеристика животных. Исследования, положенные в основу диссертации, проведены в 2004-2008гг. на крупном рогатом скоте и свиньях хозяйств Курской области, лабораторные анализы выполнялись у телят и поросят, находившихся под наблюдением на базе Центра гемостазиопатий Курской областной клинической станции переливания крови. В исследование включены 449 здоровых новорожденных телят симментальской и черно-пестрой породы в день отела от здоровых коров 1-2 отела с нормально протекавшей беременностью, находившихся на рациональном кормлении [Калашников А.П. и др., 2003]. Телята осматривались и обследовались за период новорожденное™ 5 раз (1-2 сут., 3-4, 5-6, 7-8, 9-10 сут.). В случае возникновения признаков функциональных нарушений пищеварения (ФНП) у теленка не позднее, чем через 0,5 сут. после их начала, определялись все оцениваемые показатели, и применялся в течение последующих 10 сут. один из используемых в работе видов коррекции с оценкой тех же показателей по ее завершению. Общее число телят, у которых за период новорожденное™ развились ФНП, составило 153 (36,7%), при этом 267 (63,3%) остались

здоровыми, составив группу контроля. В исследование включены 29 здоровых новорожденных телят с риском облигатного развития ФНП, которым был проведен курс успешной профилактической коррекции. Из новорожденных телят с развившимися ФНП 146 (95,4%) имели признаки физиологической незрелости (масса при рождении менее 20 кг, т.е. менее 7% массы тела матери, длина теленка менее 70 см, наличие менее 4 резцов и менее 12 коренных зубов, пуповина у них отпадала не менее через 12 сут. жизни). Содержание новорожденных животных осуществлялось в стандартных условиях телятника при нередко избыточной выпойке молозивом. Новорожденные телята были подразделены на 8 групп: 1-я -здоровые (контроль) 267 голов, 2-7-я - новорожденные телята с ФНП разделенные с учетом способа коррекции тромбоцитарных нарушений, их количество в группах составило соответственно 25(16,4%), 25 (16,4%), 25 (16,4%) 25 (16,4%), 27 (17,4%) и 26 (17,0%). Во 2-й группе телят коррекцию состояния производили с помощью традиционного для хозяйств подхода (голод на 10-12 ч. с последующим назначением небольших доз молозива -1/4 от обычного количества, 5-6 раз в сут. с постепенным доведением объема молозива до нормы; за 15 мин до выпаивания телятам давали 50,0 мл натурального желудочного сока, разбавленного 50,0 мл теплой воды) с наблюдением в течение 10 сут.; в 3-ей - включения в схему выпаивания вечером включали в виде водной взвеси гидроалюмосиликатный сорбент -«Экое» (производство Белгородского государственного университета) 150мг/кг живой массы в течение 10 сут. на ночь с целью снижения сорбции питательных веществ из рациона; в 4-ой - выпаивания утром 0,01% раствора полигексаметиленгуанидин хлорида («Биопаг-Д», производства Института эколого-технологических проблем г. Москва) по 100,0 мл в сутки в течении 10 сут.; в 5-ой - выпаивания утром полигексаметиленгуанидин фосфата («Фосфопаг», производства Института эколого-технологических проблем г. Москва) в растворе 0,01% включаясь в выпаивание по 100,0 мл в сутки в течении 10 сут.; в 6-ой - применения в течение 10 сут. сочетания «Фосфопага» и «Экое» с распределением их в течение суток следующим образом: 0,01% «Фосфопага» 100,0 в утренние часы, а «Экое» 150мг/кг на ночь для исключения сорбции «Экосом» «Фосфопага»; в 7-ой - применения в течение 10 суток сочетания «Фосфопага», глюконата кальция и «Экоса» с распределением их с течение суток: 0,01% «Фосфопаг» 100,0 мл утром, 10% глюконат кальция 10,0 мл в обед и «Экое» 150мг/кг вечером; в 8-й -проведения профилактической коррекции у 29 здоровых новорожденных телят, имеющих риск облигатного развития ФНП, обследованных в суточном возрасте. С целью профилактики ФНП и нивелирования зарегистрированных у них отклонений, наличие которых позволяло прогнозировать возникновения ФНП сразу же после обследования, проводился 8-сут. превентивный курс коррекции: 0,01% «Фосфопаг» 100,0 мл утром, 10% глюконат кальция 10,0 мл в обед и «Экое» 150мг/кг вечером.

В исследование также включены 22 здоровых теленка 30 сут. возраста, 21 -3 мес. и 23 - годовалого возраста, содержащихся в стандартных условиях и находящихся на достаточном и полноценном рационе питания.

Проведены исследования 148 новорожденных поросят, 24 здоровых 20-сут. возраста, 23-40-сут. и 22 здоровых животных годовалого возраста породы крупная белая. Новорожденные поросята были разделены на 4 группы: 1-я - здоровые (контроль) - 27, 2-4-я - поросята с анемией (121), в т.ч. хряков 63 (52,1%) II 58 (47,9%) свинок с анемией 1-2-сут. возраста, взятые в исследование сразу после установления у них анемии по общему состоянию животного и лабораторным показателям. Анемия во всех случаях была железодефицитной - уровень железа в крови животных в среднем составлял 13,6±0,45 мкмоль/л, гемоглобин - 84,4±0,90г/л, количество эритроцитов крови - 4,21±0,15х1012/л. Поросята с анемией получены в зимний период от свиноматок 1-2 опороса, находившихся во время беременности на недостаточном и нерациональном питании. Случайным образом новорожденные поросята с анемией были подразделены на 3 равные группы, соответственно по 38 (31,4%), 42 (34,7%) и 41 (33,9%) животных. Коррекция анемии во 2-й группе поросят (38 животных) осуществлялась ферроглюкином по 150 мг (2мл) внутримышечно, двукратно с интервалом между инъекциями 10 сут.; в 3-ей (42 поросенка) - назначался ферроглюкин по 150мг (2мл) внутримышечно, двукратно с интервалом 10 сут и фоспренил 0,05мл/кг внутримышечно, двукратно в разных шприцах в разные точки, первый раз одновременно с первой инъекцией препарата железа и в той же дозе через пять сут. после его первой инъекции; в 4-ой (41 животное) -ферроглюкином 150мг (2мл) внутримышечно, двукратно с интервалом 10 сут. и гамавитом 0,01 мг/кг внутримышечно один раз в сут., пять суток, начиная с первой инъекции ферроглюкина.

Методы исследования. Зоогигиенические параметры содержания животных соответствовали нормативам. Физиологическую зрелость новорожденных животных определяли по системе интегрального показателя, приведенных в работах В.Ф. Лысова (1977), А.И. Кузнецова, В.Н. Лузиной, В.Г. Лукошкиной (1984).

Для решения поставленных в работе задач проведен морфо-биологический анализ крови, который включал определение эритроцитов [В.Ф. Лысов, Т.В. Ипполитова, В.И. Максимов, Н.М. Шевелев, 2004], гемоглобина [Битюков И.П. и др., 1990], гематокритной величины [И.Тодоров, 1963], общего белка в сыворотке крови [В.Г. Колб и др., 1982]. Кроме того в протокол исследования новорожденных поросят с анемией включено определение содержания в крови сидероцитов, нормобластов и ретикулоцитов, среднего содержания гемоглобина (СГЭ) и средней его концентрации в 1 эритроците (СКЭ), среднего объема (СОЭ) и диаметра (СДЭ) этих клеток крови, концентрации в сыворотке крови железа (СЖ), общей (ОЖСС) и латентной (ЛЖСС) железосвязывающей способности сыворотки крови, коэффициента насыщения трансферрина (ТФ) железом (КНТ), уровня ТФ в сыворотке (СЖ - количества железа, связанного ТФ, ОЖСС - количество железа, которое

может быть связано ТФ, ЛЖСС - разницы между ОЖСС и СЖ, КНТ -процента ТФ, связанного с железом, вычисляющегося путем деления СЖ на ОЖСС) [Камышников B.C., 2000].

Активность ПОЛ в плазме оценивали по содержанию тиобарбитуровой кислоты (ТБК)-активных продуктов набором фирмы „Агат-Мед"и ацилгидроперекисей (АГП) [В.Б. Гаврилов и др., 1983]. Для оценки антиокислительного потенциала жидкой части крови определяли ее антиокислительную активность по И.А. Волчегорскому и соавт. (2000). В плазме оценивали уровень средних молекул по Н.Г. Габриелян, В.И. Липатова и др. (1985) при 280нм и 254нм [Н.И. Габриэлян и др., 1985].

Состояние внутритромбоцитарного ПОЛ определяли по концентрации базального уровня малонового диальдегида (МДА) в реакции восстановления тиобарбитуровой кислотой в отмытых и ресуспендированных тромбоцитах на основе принципа метода J.B. Shmith et al. (1976) в модификации A.A. Кубатиева, C.B. Андреева (1979) и содержанию ацилгидроперекисей [В.Б. Гаврилов и др., 1983]. В отмытых и ресуспендированных тромбоцитах определяли содержание средних молекул (СМ) по Н.Г. Габриелян, В.И. Липатова и др. (1985) при 280нм и 254нм [Н.И. Габриэлян и др., 1985]. В отмытых и ресуспендированных тромбоцитах [Г.Н. Ястребов, 1985] количественно оценены уровни общего холестерола (ХС) энзиматическим колориметрическим методом набором фирмы „Витал Диагностикум" и общих фосфолипидов (ОФЛ) по содержанию в них фосфора [В.Г. Колб, 1982] с последующим расчетом отношения ХС/ОФЛ в тромбоцитах. Активность внутритромбоцитарных антиоксидантных ферментов устанавливали для каталазы и супероксидцисмутазы [С. Чевари и др., 1991].

Оценку состояния системы тромбоцитарного гемостаза производили по ряду параметров: подсчитывали количество тромбоцитов в капиллярной крови в камере Горяева; агрегацию тромбоцитов (AT) оценивали визуальным микрометодом по А.С.Шитиковой (1999) с использованием в качестве индукторов АДФ (0,5x10"" M.), коллагена (разведение 1:2 основной суспензии), тромбина (0,125ед/мл.), ристомицина (0,8 мг/мл.) (НПО „Ренам"), адреналина (5,0* Ю"6 М. Завод Гедеон Рихтер), а также сочетания АДФ+адреналин, АДФ+коллаген и коллаген+адреналин в приведенных концентрациях. Продукты лабилизации тромбоцитарных фосфолипидов -активаторов свертывания (Фз -тромбоцитов) оценивали по методу Е.Д. Еремина (1974) с вычислением индекса тромбоцитарной активности (ИТА). Активность и время образования тромбоцитарного тромбопластина выявляли по методу R. Biggs, A.S. Douglas, R.G. Macfarlane (1953). Для косвенной оценки обмена эндогенной арахидоновой кислоты (АА) в тромбоцитах, а также активности в них циклооксигеназы (ЦО) и тромбоксансинтетазы (ТС) использованы три пробы переноса по методу Ермолаевой Т.А. и соавт. (1992) с регистрацией агрегации тромбоцитов на фотоэлектроколориметре. Морфологическое определение внутрисосудистой активности тромбоцитов (ВАТ) производили с использованием фазовоконтрастного микроскопа по методу A.C. Шитиковой и соавт. (1997).

Кровь для биохимического исследования у животных брали в утренние часы из вены после ночного перерыва приема корма.

Статистическую обработку результатов проводили с использованием критерия (I) Стьюдента, корреляционного и системного многофакторного анализа [А. Бредерфорд Хилл, 1958; М.В. Углова и др., 1982].

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Особенности становления тромбоцнтарных функций у телят в раннем постнатальном онтогенезе

Оценка тромбоцитарного гемостаза у здоровых новорожденных телят выявила достоверную динамику оцениваемых функций кровяных пластинок при сохранении содержания тромбоцитов в кровотоке животных в границах нормы в течение всего раннего онтогенеза.

ИТА, являющийся высоко значимым показателем при оценке тромбоцитарной стимуляции процесса свертывания крови, составлял в первые двое суток жизни телят 25,3±0,05% и оставался на данном уровне в течение всей новорожденное™. Это указывало на стабильность в течение фазы молозивного питания в кровяных пластинках здоровых телят уровня продуктов лабилизации тромбоцнтарных фосфолипидов - активаторов свертывания крови. У здоровых телят было установлено постоянство активности тромбопластина за всю фазу новорожденное™, составляя в среднем 14,0±0,05с. при времени его образования 2,40±0,01мин. При переходе телят к молочному и молочно-растительному питанию ИТА испытывал тенденцию к нарастанию, достигая достоверного уровня к фазе растительного питания (27,4±0,07%). Вместе с тем, у здоровых телят по завершению фазы новорожденное™ отмечено достоверное нарастание активности тромбопластина, составлявшей к году жизни 12,9±0,06с. при сокращении времени его образования до 2,28±0,1 Шин.

Одним из механизмов стабилизации активности АТ у новорожденных телят является постоянный уровень активности в тромбоцитах ЦО и ТС -ферментов метаболизма АА, синтезирующих тромбоксан. При этом, в более позднем возрасте у телят тромбоксанообразование неуклонно увеличивалось, что во многом способствовало ускорению АТ.

Стабильность АТ в фазу новорожденное™ сменялась ее ускорением в последующие фазы раннего онтогенеза (рис.1).

У новорожденных в 1-2 суточном возрасте время развития АТ под влиянием коллагена составляло 29,4±0,26с., находясь в последующие сроки наблюдения на аналогичном уровне, составляя в среднем за фазу новорожденное™ 30,0±0,12с. Аналогичная динамика АТ у здоровых новорожденных телят отмечена под влиянием АДФ (в среднем 39,0±0,28с.) и ристомицина (в среднем 41,0±0,26с.). В более поздние сроки развивалась тромбиновая и адреналиновая АТ также при отсутствии их достоверной динамики в течение фазы новорожденное™, составляя в среднем за фазу 54,0±0,2с. и 97,0±0,45 е., соответственно. У новорожденных телят отмечалась

также стабильность времени развития АТ и на фоне сочетания индукторов, составлявшем в среднем: для АДФ+адреналин - 36,0±0,50с., для АДФ+коллаген - 27,0±0,09 е., для адреналин+коллаген - 30,1±0,12с.

1-тромбин 3-АДФ 5 - АДФ+коллаген

2 - коллаген 4 - АДФ+адреналин 6 - адреналин+коллаген

Рнс. 1. Агрегационная активность тромбоцитов у здоровых телят в раннем онтогенезе.

Сочетание двух индукторов агрегации, имеющих место в реальных условиях кровотока у животных, позволило в большей степени приблизить наше представление об АТ in vivo у здоровых животных к реально возникающему в их кровяном русле агрегационному процессу тромбоцитов в течение всей фазы новорожденное™.

В более старшем возрасте у телят отмечается ускорение АТ с сокращением времени, необходимого для ее развития по мере смены фаз раннего онтогенеза. Так, АТ под влиянием коллагена к годовалому возрасту составляла 26,5±0,03с. Аналогичную динамику претерпела к первому году жизни АТ у здоровых животных под влиянием АДФ (35,4±0,02с.) и ристомицина (35,6±0,06с.).

Ускоряясь по мере взросления тромбиновая и адреналиновая АТ, постепенно ускоряющаяся, достигала в фазу растительного питания 47,2±0,03с. и 90,1±0,04 е., соответственно. При сочетанном использовании индукторов отмечена аналогичная динамика с ускорением АТ, подчеркивающая выявленную закономерность при их изолированном применении. Так, к году жизни АТ по сравнению с новорожденностью ускорялась для АДФ+адреналина на 8,4%, для АДФ+коллагена на 9,7%, для адреналин+коллагена на 20,4%.

Найденные закономерности динамики АТ в раннем онтогенезе телят были подтверждены состоянием внутрисосудистой активности тромбоцитов во все сроки наблюдения.

Уровень дискоцитов в крови у здоровых новорожденных телят в 1-2 сутки жизни составил 76,1±0,03%, достоверно не меняясь на протяжении всей фазы новорожденное™ (в среднем - 82,0±0,16%). Количество диско-эхиноцитов в их кровотоке (в среднем 10,3±0,1%), а также содержание сфероцитов, сферо-эхиноцитов и биполярных форм тромбоцитов, также

оставалось стабильным на протяжении всей фазы новорожденное™. Вследствие этого сумма активных форм тромбоцитов также не претерпела достоверных изменений, составляя в среднем 18,0±0,2%. В кровотоке новорожденных телят уровни свободно циркулирующих малых и больших агрегатов тромбоцитов не имели достоверной динамики, составляя в начале фазы новорожденное™ 3,4±0,06 и 0,15±0,03 на 100 свободно лежащих тромбоцитов и в его конце 3,8±0,0б и 0,13±0,02 на 100 свободно лежащих тромбоцитов, соответственно. Количество тромбоцитов, вовлеченных в процесс агрегатообразования, у здоровых телят в начале фазы новорожденное™ составило 5,3±0,08% и 5,3±0,02% в ее конце. Эти данные говорят о достоверной стабильности ВАТ in vivo в течение всей фазы новорожденное™ у здоровых телят, обеспечивая у них оптимальную микроциркуляцию во время адаптации к внеутробной жизни.

По завершении фазы новорожденное™ у телят отмечено уменьшение содержания дискоидных форм тромбоцитов с небольшим, но достоверным нарастанием суммы активных форм кровяных пластинок (к году жизни 25,8%) за счет увеличения диско-эхиноцитов, сфероцитов, сферо-эхиноцитов и биполярных форм тромбоцитов. Одновременно с этим достоверно нарастало число свободно циркулирующих малых и больших агрегатов тромбоцитов, увеличившись к году жизни в 1,23 и 3,83. раза, соответственно. Количество тромбоцитов, вовлеченных в процесс агрегатообразования, у здоровых телят к году жизни также возрос на 38,0%, что говорит о нарастании ВАТ in vivo по мере созревания организма теленка, обеспечивая у них оптимальную микроциркуляцию во время становления функций органов и систем организма.

Таким образом, стабильность активности кровяных пластинок у здоровых новорожденных телят обуславливает постоянство у них ВАТ, оптимальный уровень реологии крови и микроциркуляции в тканях, сменяясь ее нарастанием в последующие фазы раннего онтогенеза, необходимом для нормального роста и развития животных.

В протромботическом потенциале (ТП) первичного гемостаза у здоровых новорожденных телят наиболее весомыми были время развития АТ со всеми индукторами и их сочетаниями (Pi от 362,83 до 134,17). Достаточно высокие коэффициенты влияния в ТП принадлежали активности ПОЛ в тромбоцитах, их антиоксидантной защиты, содержанию в крови телят агрегатов и уровню вовлеченности в них тромбоцитов. Остальные параметры гемостаза были менее весомы, значимость их существенно не различалась между собой, играя в ТП скромную роль. Взвешенная средняя протромботического потенциала, характеризующая состояние протромботических влияний в первичном гемостазе, у здоровых новорожденных телят составила Xbí тп = 0,007.

В протромботическом потенциале первичного гемостаза у здоровых телят в раннем онтогенезе наиболее весомыми сохранились время развития АТ со всеми индукторами и их сочетаниями, увеличив величину весовых коэффициентов их влияния (Pi от 381,62 до 152,16). Высокими сохранились

коэффициенты влияния уровней ПОЛ, антиоксидантной защиты тромбоцитов, агрегатообразования и вовлеченности в них тромбоцитов при нарастании их абсолютных величин. Остальные параметры гемостаза были по-прежнему менее весомы. Взвешенная средняя протромботического потенциала годовалых телят составила ХВ| тп = 0,019.

Таким образом, у полностью здоровых телят в раннем онтогенезе отмечается рост проагрегантных влияний в первичном гемостазе, что способствует поддержанию гомеостаза внутренней среды организма у них на оптимальном уровне в ответ на меняющиеся условия внешней среды в процессе роста и развития теленка.

3.2. Особенности становления тромбоцитарных функций у поросят в раннем постнатальном онтогенезе

У здоровых поросят в кровотоке в раннем онтогенезе количество тромбоцитов было нормальным.

ИТА, характеризующий степень лабилизации тромбоцитарных фосфолипидов и участвующий в процессе свертывания крови, составлял в первые сутки жизни поросят 24,8±0,07%, испытывая в начале тенденцию к увеличению, а с 4 суток новорожденности достоверное повышение, усилившись к концу фазы молозивного питания на 13,7%. В течение фазы новорожденности у поросят была установлена легкая тенденция к усилению активности тромбопластинообразования, составляя к ее концу 14,4±0,01с. при времени его образования 2,42±0,07мин.

По завершению фазы новорожденности ИТА достоверно нарастал от исследования к исследованию, усилившись к 20 сут. жизни на 3,0%, к 40 сут. жизни на 16,2% и к 1 году жизни на 27,8% по сравнению с фазой новорожденности. Это указывало на повышение степени лабильности тромбоцитарных фосфолипидов, обуславливающих рост тромбопластиногенерации на протяжении всего раннего онтогенеза (к концу года жизни активность тромбопластина составляла 12,8±0,06с. при времени его образования 2,28±0,04мин.).

АТ с рядом индукторов и их сочетаний в течение раннего онтогенеза у поросят характеризовалась постепенным ускорением вследствие влияния среды на организм поросенка (рис. 2).

1-тромбин 3-АДФ 5 - АДФ+коллагсн

2 - коллаген 4 - АДФ+ацреналин 6-адреналин+коллагсн

Рис. 2. Агрегационная активность тромбоцитов у поросят в раннем онтогенезе.

6 новорожденности

У обследованных здоровых животных отмечалось в течение фазы новорожденное™ ускорение АТ, особенно под влиянием коллагена с 35,6±0,07 с. в 1-е сутки до 32,5±0,05 с. на 5-е. Несколько медленнее АТ развивалась у поросят под влиянием АДФ и ристомицина, испытывая при этом аналогичную тенденцию к ускорению, а с 3-х суток жизни достоверное усиление агрегационного процесса. АТ с Н202 у здоровых новорожденных поросят в первые сутки >¿ii3ini развивалась за 47,9±0,07 с. с постепенным сокращением ее времени до 4б,7±0,02 с. на 5-е сутки. Тромбиновая и адреналиновая АТ также претерпевала туже динамику, в среднем за новорожденность составляя 57,7±0,07 с. и 99,5+0,03 е., соответственно. Оценка АТ при сочетании двух индукторов агрегации позволяла приблизить представление об АТ к реально возникающему в кровяном русле здоровых новорожденных поросят in vivo агрегационному процессу тромбоцитов.

Установлено, что в течение фазы новорожденное™ время развития АТ на фоне сочетания индукторов также сокращалась, достигая на 3-й сутки уровня достоверности и составляя в среднем за новорожденность АДФ+адреналин - 35,4±0,04с., АДФ+коллаген - 24,8±0,06 е., адреналин+коллаген - 27,6±0,11с.

По завершению фазы новорожденное™ у поросят отмечено дополнительное ускорение агрегационного процесса под влиянием всех индукторов и их сочетаний. По прежнему наиболее активным индуктором был коллаген, АТ с которым к году жизни достигла 26,8±0,02 е., увеличившись на 26,2%. Несколько медленнее АТ развивалась у годовалых поросят под влиянием АДФ, ристомицина и Н2О2, ускорившись за первый год жизни более чем на 20%. АТ под действием тромбина и адреналина также ускорилась на 20,4% и 10,2%. АТ при сочетании двух индукторов агрегации испытала аналогичную динамику, ускорившись на 23,7% для АДФ+адреналин, на 17,5% для АДФ+коллаген и на 22,7% для адреналин+коллаген.

У здоровых поросят к концу новорожденное™ косвенно зарегистрировано усиление синтеза в тромбоцитах ТхА2 на 5,5%, усиливающееся к году жизни дополнительно на 41,8% по причине неуклонного повышения активности за ранний онтогенез ферментов ее превращения - ЦО (на 77,6±0,07%) и ТС на 18,6%.

В крови здоровых новорожденных поросят дискоцитов в 1-е сутки жизни содержалось 83,1±0,24% с последующей слабой тенденцией к снижению их уровня к концу фазы новорожденное™ до 82,0+0,16%. При этом, количество диско-эхиноцитов у них увеличивалось, составляя к концу фазы молозивного питания 12,6±0,23%. Содержание сфероцитов, сферо-эхиноцитов и биполярных форм тромбоцитов также испытывало динамику к нарастанию, достигая к 5-м суткам жизни 2,6+0,07%, 1,7+0,01% и 1,1+0,07%, соответственно. За счет этого сумма активных форм тромбоцитов у здоровых животных нарастала за фазу новорожденное™ на 6,5%. Уровень малых и больших агрегатов в кровотоке здоровых поросят испытывал сначала тенденцию к повышению, а с 3-х суток жизни достоверное увеличение,

составляя к концу новорожденное™ 3,17±0,06 и 0,16±0,06 на 100 свободнолежащнх тромбоцитов, соответственно, причем количество тромбоцитов в агрегатах у них нарастало за новорожденность на 10,6%, что указывало на повышение ВАТ у здоровых поросят в первую фазу раннего онтогенеза.

В последующие фазы раннего онтогенеза содержание дискоцитов продолжало снижаться, составляя к году жизни 75,5±0,09%. При этом, количество диско-эхиноцитов у них постепенно увеличивалось, составляя к концу года жизни 17,1±0,04%. Содержание сфероцитов, сферо-эхиноцитов и биполярных форм тромбоцитов также испытывало динамику к нарастанию, увеличившись за ранний онтогенез по сравнению с фазой новорожденное™ на 40,0%, 73,3% и 44,4%, соответственно. За счет этого сумма активных форм тромбоцитов у здоровых животных нарастала после фазы новорожденное™ еще на 40,8% с увеличением уровней малых и больших агрегатов в течение раннего онтогенеза в 1,2 и в 3,2 раза, соответственно, при достижении вовлеченности тромбоцитов в агрегаты 8,4±0,07%.

На основе полученных данных можно заключить, что у здоровых поросят в течение раннего онтогенеза отмечается постепенное повышение ВАТ, что является приспособительной реакцией к внеутробному существованию и средовым воздействиям.

Полученные разнонаправленные показатели тромбоцитарных функций, неоднозначно влияющих на первичный гемостаз в целом, требовали комплексной оценки с применением системного многофакторного анализа.

В протромботическом потенциале первичного гемостаза у здоровых новорожденных поросят наиболее весомыми являлись сокращение времени развития АТ со всеми индукторами и их сочетаниями (Р1 от 366,74 до 99,54). Относительно высокие коэффициенты влияния в ТП принадлежали уровням ПОЛ плазмы и тромбоцитов, антиоксидантной защиты кровяных пластинок и активности ЦО и ТС в них. Остальные параметры гемостаза были менее весомы. Взвешенная средняя протромботического потенциала у здоровых новорожденных поросят составила ХВ| тп = 0,006.

При вычислении протромботического потенциала первичного гемостаза у здоровых поросят в раннем онтогенезе выявлено, что наибольшую весомость сохранили сокращение времени развития АТ со всеми индукторами и их сочетаниями, увеличение антиоксидантной защиты тромбоцитов и уровень в них ПОЛ. Относительно высокие коэффициенты влияния в ТП принадлежали сумме активных форм тромбоцитов, активности ЦО, ТС и агрегатообразования в кровотоке. Значение взвешенной средней протромботического потенциала составило ХВ;ТП= 0,020.

Таким образом, у здоровых поросят в течение раннего онтогенеза в первичном гемостазе отмечается рост проагрегантных влияний, что, безусловно, способствует поддержанию у них гомеостаза внутренней среды организма в ходе роста и развития на оптимальном уровне.

3.3. Сравнительный анализ тромбоцитарных функций у телят и поросят в раннем постнатальном онтогенезе

Активность тромбоцитарного гемостаза в фазу новорожденное™ у здоровых телят была стабильной с последующим ее усилением. У поросят отмечено постоянное усиление ее в течение всего раннего онтогенеза.

ИТА, являющийся высоко значимым показателем стимуляции продуктами лабплнзации тромбоцитарных фосфолипидов процесса свертывания крови у обоих видов животных в течение фазы новорожденное™ был стабилен, находясь у телят и поросят на сравнимом уровне. Это во многом объясняло постоянство у телят и поросят в течение фазы молозивного питания активности тромбопластина и времени его синтеза, находившихся у них на сходных уровнях. При переходе телят к молочному и молочно-растительному питанию ИТА испытывал тенденцию к нарастанию, достигая уровня достоверности к фазе растительного питания. У поросят достоверное нарастание данного показателя отмечалось, начиная с фазы молочного питания, превышая к 1 году аналогичный уровень у телят на 24,1%. Это обуславливало у обоих видов увеличение активности тромбопластина и снижение времени его синтеза.

Исследование АТ под действием ряда индукторов и их сочетаний позволило установить в фазу новорожденное™ у телят стабильность уровня чувствительности к ним тромбоцитов при нарастании ее у поросят. У здоровых новорояеденных телят адгезивная способность кровяных пластинок была стабильна за счет постоянства концентрации в их крови фактора Виллебранда (ФВ) - кофактора адгезии тромбоцитов и/или отсутствия динамики числа рецепторов к нему - (вР1 в) на поверхности кровяных пластинок, нарастая в последующие фазы раннего онтогенеза. Стабильность уровня ФВ у новорожденных телят и его последующий рост определен на основе динамики АТ с ристомицином, который по своей способности влиять на тромбоциты, идентичен субэндотелиальным структурам сосудов. Известно, что ФВ соединяется одним концом молекулы с коллагеном, а другим с тромбоцитом через рецептор - гликопротеид 1в, формируя „ось адгезии": коллаген - ФВ - йР1в, что позволяет предполагать их стабильность у телят в фазу новорожденное™ числа этих рецепторов на тромбоцитарных мембранах. Рецепторные перестройки на поверхности кровяных пластинок являются следствием процессов развития в организме растущих животных, влияния факторов внешней среды, меняющих соотношение липидов в мембранах тромбоцитов, способствующих динамике активное™ тромбоцитарного гемостаза в раннем онтогенезе. При этом, к концу фазы молозивного питания у телят адгезия и АТ развивалась более ускоренно, чем у поросят.

Важным механизмом стабильности состояния АТ у телят в фазу новорожденное™ можно считать постоянство активности обмена арахидоновой кислоты в тромбоцитах, находящегося на более низком уровне, чем у поросят. Благодаря стабильности активности ЦО и ТС в течение фазы новорожденное™ уровень тромбоксанообразования у телят к

концу данной фазы остался существенно ниже аналогичного показателя у поросят. По ее завершению у обоих видов животных отмечено постепенное ускорение адгезии и АТ со всеми индукторами и их сочетаниями, выходя на сравнимый уровень только к фазе растительного питания. Это можно объяснить повышением у телят и поросят с возрастом числа и/или активности рецепторов на мембране тромбоцитов к сильным агонистам агрегации — коллагену и тромбину, обеспечивая рост активности фосфолипазы С, стимулируя фосфоинозитольный путь через диацилглицерол и протеинкиназу С с усилением фосфолирирования белков сократительной системы и интенсификацией сокращения актомиозина.

Усиление у обоих видов животных чувствительности тромбоцитов к слабым агонистам агрегации — АДФ и адреналину, взаимодействующими с соответствующими рецепторами их мембраны, происходит вследствие роста экспрессии фибриногеновых рецепторов (GPIlB-IIIa), стимуляции фосфолипазы А2, регулирующей выход из фосфолипидов арахидоновой кислоты с последующим усилением ее метаболизма циклооксигеназой и тромбоксансинтетазой и увеличенным образованием проагрегантных простагландинов в т.ч. мощнейшего из них - тромбоксана А2. Достоверное нарастание чувствительности к слабым индукторам обусловилось увеличением в течение раннего онтогенеза у обоих видов животных активности показателей обмена арахидоновой кислоты в тромбоцитах, сохраняя к 1 году жизни данный показатель у поросят на более высоком уровне за счет большей активности у них ТС.

Найденные закономерности динамики АТ in vivo в раннем онтогенезе телят и поросят были подтверждены возрастными изменениями у них состояния внутрисосудистой активности тромбоцитов во все сроки наблюдения.

Уровень дискоцитов в крови у здоровых телят в фазу молозивного питания был несколько ниже, достоверно не меняясь у них на ее протяжении. Сумма активных форм тромбоцитов и уровень агрегатов тромбоцитов при стабильности за фазу новорожденное™ у телят превышали в среднем неуклонно увеличивающиеся аналогичные показатели у поросят.

Об увеличении в крови телят и поросят в раннем онтогенезе активных форм тромбоцитов свидетельствуют данные исследования ВАТ. Кроме того, высокая ВАТ может косвенно говорить о постепенном росте доступности коллагена сосудистой стенки вследствие повреждения эндотелия факторами среды и повышения в крови растущих животных различных индукторов агрегации (тромбина, АДФ, адреналина).

В ходе развития в кровотоке у телят и поросят становится все больше кровяных пластинок, принявших округлую форму и образовавших отростки с переходом от дискоцита к диско-эхиноциту, затем к сфероциту и сферо-эхиноциту. Рост уровня диско-эхиноцитов обуславливает развитие гемостатической активности тромбоцитов при повышении адгезии и агрегации, связанной с экспрессией на их мембране фибриногеновых рецепторов (GP Пв - Ша). Увеличение диско-эхиноцитов повышает

стимуляцию каталитических свойств фосфолипидов плазматической мембраны и приводит к генерации фактора Хд и тромбина.

После фазы новорожденное™ в течение всего последующего раннего онтогенеза у телят и поросят постепенно уменьшалось количество

дискоидных ферм тромбоцитов с достоверным ростом суммы активных с^ер: кровяных пластинок усилением •¡грсгатооС^г.зования. К" 1 году жизни по большинству показателей ВАТ сравнялась у обоих видов.

Таким образом, выявленные закономерности тромбоцитарной активности у здоровых телят и поросят в раннем онтогенезе обуславливает оптимальный уровень ВАТ и микроциркуляции в тканях, адекватный с одной стороны их генетической программе, а с другой влияниям внешней среды и может считаться видовой приспособительной реакцией к внеутробному существованию.

Установлено, что в данную возрастную фазу у телят и поросят в протромботическом потенциале первичного гемостаза наиболее весомыми являются время развития АТ со всеми индукторами и их сочетаниями, активность ПОЛ в тромбоцитах и их антиоксидантная защита. Кроме того, у телят достаточно значимы величины уровней тромбоцитарных агрегатов в кровотоке и величина вовлеченности в них тромбоцитов, у поросят -активность ЦО и ТС. Остальные параметры гемостаза были менее весомы, играя в ТП скромную роль.

Таким образом, у полностью здоровых новорожденных животных в первичном гемостазе отмечается легкое превалирование уровня проагрегантных влияний, более выраженное у телят, обуславливающееся их видовыми особенностями реакции на воздействия внешней среды.

В протромботическом потенциале первичного гемостаза у здоровых телят и поросят в раннем онтогенезе наибольшую весомость сохраняли время развития АТ со всеми индукторами и их сочетаниями, повысив величину весовых коэффициентов. Высокая значимость в первичном гемостазе у обоих видов сохранились за ПОЛ, антиоксидантной защитой тромбоцитов и уровнем агрегатообразования. У телят в ТП также отмечена выраженная значимость показателя вовлеченности в агрегаты тромбоцитов, а у поросят -активности ЦО и ТС в тромбоцитах. Остальные параметры гемостаза были менее весомы.

Таким образом, имеющий место в раннем онтогенезе рост проагрегантных влияний в первичном гемостазе отмечается у полностью здоровых телят и поросят практически в равной степени, слабо преобладая у последних. Найденные видовые особенности ТП, безусловно, способствуют поддержанию гомеостаза внутренней среды организма у телят и поросят на оптимальном уровне в ответ на меняющиеся условия внешней среды в ходе роста и развития обоих видов сельскохозяйственных животных.

3.4. Особенности тромбоцитарных функций у новорожденных телят с

ФНП

Одним из факторов, дестабилизирующих гомеостаз животного, является ФНП, которые отражаются на компонентах функциональной системы крови, а значит и на реологических ее свойствах. Крупный рогатый скот, особенно новорожденные телята, выражено реагируют на изменения постоянства среды желудочно-кишечного тракта, что должно отразиться и на функциях крови и реологических свойствах тромбоцитов (В.Ф.Лысов, 1979; В.И.Максимов, 1995)

При развитии ФНП количество тромбоцитов в крови телят оставалось без изменений. ИТА в группе животных с ФНП возрастал с 32,6±0,03% до их развития до 39,2±0,05% на их фоне (в контроле - 26,0±0,03%). У телят с ФНП было найдено повышение активности (Р<0,01) тромбопластина с 12,0±0,02с., перед их возникновением и 9,6±0,02с. на его фоне с компенсаторным замедлением его синтеза до 2,95±0,05 мин. (в контроле -2,40±0,01мин.).

На фоне ФНП в простой пробе переноса косвенно зарегистрировано усиление синтеза в тромбоцитах проагрегантных метаболитов АА, в том числе тромбоксана, максимально увеличивающееся на высоте ФНП за счет активации ЦО и ТС, активность которых нарастала при развитии ФНП.

Важную роль в активации биферментной системы тромбоксанообразования в кровяных пластинках играет увеличение СМ в тромбоцитах при ФНП. Рост СМ28о и СМ254 сильно прямо коррелировал с восстановлением АТ в простой пробе переноса — г = 0,82 (1 = 5,86) и г = 0,76 (1 = 8,90), что говорит о тесной взаимосвязи повышения уровня СМ в тромбоцитах и активации тромбоцитарных функций в условиях ФНП.

У телят на фоне манефестации ФНП отмечалось ускорение АТ, особенно под влиянием коллагена. Несколько медленнее АТ развивалась у этих животных под влиянием ристомицина и АДФ. Тромбиновая и адреналиновая АТ также развивались быстрее, чем в контроле (Р<0,01). Время развития АТ на фоне сочетания индукторов было еще более укороченным за счет их взаимопотенциирующего действия (табл.1).

По ранней АТ с ристомицином, который по своей способности влиять на тромбоциты, идентичен субэндотелиальным структурам сосудов косвенно зарегистрировано повышение уровня ФВ при ФНП. Известно, что ФВ способен соединяться одним концом молекулы с коллагеном, а другим с тромбоцитом через рецептор - гликопротеид 1в, формируя „ось адгезии": коллаген — ФВ — ОР1в, что позволяет предполагать повышение числа этих рецепторов на тромбоцитарных мембранах.

Связь сильных агонистов агрегации - коллагена и тромбина в стандартных концентрациях с рецепторами на мембране тромбоцитов ведет к активации фосфолипазы С, стимуляции фосфоинозитольного пути через диацилглицерол и протеинкиназу С с фосфолирированием белков сократительной системы. Инозитолтрифосфат способствует выходу Са2+ из

внутритромбоцитарных депо, обусловливая интенсификацию сокращения актомиозина.

Таблица 1. Агрегационная активность тромбоцитов у

ново рожденных телят

Ппрпуетрм Телята с функциональными нарушенном и пшнегпрення п=153. М±ш Контроль, г-267 М±т

Агрегация тромбоцитов АДФ, с. 33,0±0,12 39,0±0,28 р<0,01

Коллаген, с. 25,3±0,21 30,0±0,12 р<0,01

Тромбин, с. 42,4±0,11 54,0±0,2 р<0,01

Ристомицин, с. 26,2±0,13 41,0±0,26 р<0,01

Адреналин, с. 75,6±0,16 97,0±0,45 р<0,01

АДФ+адреналин, с. 20,0±0,12 36,0±0,5 р<0,01

АДФ+коллаген, с. 18,4±0,09 27,0±0,09 р<0,01

Адреналин+коллаген, с. 20,3±0,07 30,1±0,12 р<0,01

Условные обозначения: р- достоверность различий между показателями у телят контроля и имеющих функциональные нарушения пищеварения.

Слабые агонисты агрегации тромбоцитов - АДФ и адреналин взаимодействуют с рецепторами их мембраны и вызывают экспрессию фибриногеновых рецепторов (GPIlB-IIIa), стимулируют фосфолипазу А2, регулирующую выход из фосфолипидов арахидоновой кислоты с усилением образования ТхА2, стимулирующего АТ посредством фосфолипазы А2 и С и прямого выхода Са2+ в цитоплазму.

Не исключено, что видная роль в усилении АТ с сильными и слабыми индукторами играют сдвиги в липидном составе мембран тромбоцитов, связанные с их нагруженностью ХС, снижением ОФЛ и усилением в них ПОЛ.

Сочетанное использование двух индукторов агрегации, имеющих место в реальных условиях кровотока позволило приблизить наше представление об АТ in vivo у новорожденных животных с ФНП животных к реально возникающему в их кровяном русле агрегационному процессу тромбоцитов.

Корреляционный анализ выявил статистически значимые обратные сильные и средней силы связи между содержанием СМ280 и СМ254 , АГП и ТБК-соединений в крови телят с ФНП одной стороны и активностью у них АТ под влиянием всех примененных индукторов и их сочетаний с другой. При сочетании индукторов статистическая связь АТ с СМ плазмы была выше, чем в случае одного индуктора, причем связь АТ с СМ254 оказалась максимальной.

Статистическая связь АГП и МДА тромбоцитов, с одной стороны, и АТ, с другой, оказалась обратной и для большинства индукторов средней силы.

Высокая ВАТ косвенно говорит о доступности коллагена сосудистой стенки вследствие повреждения эндотелия и повышения в крови больных различных индукторов агрегации (тромбина, АДФ, адреналина). Вероятно, токсические агенты, появляющиеся в крови при ФНП ведут к возникновению микротравм сосудистых стенок, что неизбежно вызывает усиление ВАТ у этих телят.

Дискоциты в крови у здоровых телят с развивающимися в последующем ФНП составили 70,0±0,3%, при манифестации ФНП - 62,0±0,2%. Количество диско-эхиноцитов на этом фоне увеличивалось до 18,0±0,4%. При этом, содержание сфероцитов, сферо-эхиноцитов и биполярных форм тромбоцитов при развитии ФНП также значительно превышало контрольные значения. Сумма активных форм тромбоцитов достоверно увеличивалась, число малых и больших агрегатов в свободной циркуляции в кровотоке телят при функциональных нарушениях пищеварения возросло почти в 2 раза. Количество тромбоцитов в агрегатах при функциональных нарушениях пищеварения достигало 14,6±0,02%, против 5,0±0,2% в контроле.

Проведенный корреляционный анализ между суммой активных форм тромбоцитов и уровнем внутритромбоцитарных МДА и АГП выявил прямую связь средней силы - г = 0,50 (1 = 3,60) и г = 0,56 (1 = 5,38), соответственно. При этом, между суммой активных форм тромбоцитов и содержанием в кровяных пластинках средних молекул на 280нм и 254 нм найдена сильная прямая корреляционная связь - г = 0,78 (1 = 10,55) и г = 0,84 (1 = 8,65), соответственно.

Наиболее весомыми в общем агрегационном процессе телят с функциональными нарушениями пищеварения являлись уменьшение времени развития АТ со всеми индукторами и их сочетаниями (Р1 от 833,3 до 452,4). Достаточно высокие коэффициенты влияния в ТП принадлежали возросшему ПОЛ в плазме и тромбоцитах и ослаблению каталазы и супероксиддисмутазы (СОД) в последних (Р1 от 386,0 до 253,4) и числу малых (Р1 =386,4) и числу средних и больших агрегатов в кровотоке (Р1 =351,8) Остальные параметры тромбоцитарного гемостаза были менее весомы. Значимость их существенно не различалась между собой, играя в ТП скромную роль.

Взвешенная средняя протромботического процесса у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения составила ХВ: тп исход = 0,399.

Таким образом, повышение активности кровяных пластинок у новорожденных телят с ФНП способствует усилению у них ВАТ, ухудшению реологии крови и увеличению риска тромботических осложнений. Особую роль в этом играет увеличение содержания в тромбоцитах СМ и активное внутритромбоцитарное ПОЛ.

3.5. Коррекция тромбоцитарных функций у новорожденных телят с ФНП комплексом из «Фосфопага», «Экоса» и глюконата кальция

В целях коррекции выявленных реологических нарушений тромбоцитарных функций у новорожденных телят с ФНП проведен поиск адекватных подходов к их коррекции. С этой целью были апробированы коррекция традиционная для хозяйств, в которых велись исследования, сорбент «Экое», препараты «Биопаг-Д» и «Фосфопаг» и сочетание «Фосфопага» и «Экоса», а также лечебный комплекс из «Фосфопага», «Экоса» и глюконата кальция. Полная нормализация всех нарушенных параметров тромбоцитарного гемостаза у телят произошла на фоне комплексной коррекции, тогда как традиционная коррекция и сорберт «Экое» обеспечили весьма скромную динамику оцениваемых показателей, «Биопаг-Д» и «Фосфопаг» оказали более выраженное позитивное влияние, а сочетание «Фосфопага» и «Экоса» приблизило все параметры к уровню контроля, однако не позволив достичь ни по одному из значений уровня, характерного для здоровых животных.

Количество тромбоцитов в кровотоке животных до и после коррекции находилось в пределах общепринятой нормы, не отличаясь от такового в группе контроля. С помощью комплексной коррекции стало возможным ввести в границы нормы ИТА (с 41,2±0,01% до 26,0±0,06%), что косвенно указывало на уменьшение в кровяных пластинках телят продуктов лабилизации тромбоцитарных фосфолипидов - активаторов свертывания крови. При этом, была получена достоверная нормализация активности тромбопластина с 9,8±0,06с. до 13,9±0,02с. с оптимизацией времени его синтеза - 2,41±0,02 мин. (в контроле - 2,40±0,01мин.).

Комплекс из «Фосфопага», «Экоса» и глюконата кальция оказывал нормализующее влияние на важный механизм ускорения АТ при ФНП, нормализуя интенсивность обмена арахидоновой кислоты в тромбоцитах, обеспечивая оптимизацию тромбоксанообразования (30,6±0,02%), благодаря нормализации активности обоих ферментов ее превращения -циклооксигеназы и тромбоксансинтетазы.

У телят с ФНП на фоне примененной коррекции отмечалось значительное удлинение АТ. Так, наиболее ранняя АТ зарегистрирована под влиянием коллагена, указывая на нормализацию количества и биодоступности коллагеновых рецепторов - СР1а-Па и ОРУ1 на мембранах кровяных пластинок и восстановление эластичности микрососудов с исключением контакта тромбоцитов с волокнами коллагена сосудистой стенки.

Тромбиновая и адреналиновая АТ и АДФ также наступала в те же сроки, как в контроле, что обеспечивалось нормализацией активности на поверхности тромбоцитов телят с ФНП рецепторов к АФД, адреналину и тромбину. Время развития АТ на фоне сочетания индукторов будучи исходно укороченным, также претерпело позитивную динамику, соответствуя к концу коррекции группе здоровых животных (табл.2).

Нормализация АТ при взаимопотенциирующем действии индукторов стала возможной благодаря оптимизации обмена веществ в тканях,

сосудистой стенке и тромбоцитах, а также функционирования внутритромбоцитарных путей реализации АТ, в т.ч. через ослабление фосфолипаз С и А2, уменьшение экспрессии фибриногеновых рецепторов (Св11в-Ша) на мембране кровяных пластинок и депрессию образования в них

физиологического агреганта -тромбоксана. Тг.б шца 2. Агрегационная активность тромбоцитов новорожденных телят с ФНП до и после комплексной коррекции «Фосфопагом»,

«Экосом» и глюконатом кальция__

Параметры Новорожденные телята с функциональными нарушениями пищеварения, М±т Контроль, п=267, М±т

Исходное состояние, п=26 На фоне 10- дневной комплексной коррекции, п=26

Агрегация тромбоцитов АДФ, с. 36,0±0,10 39,0±0,05 р,<0,01 39,0±0,28 р<0,01

Коллаген, с. 20,3±0,05 31,0±0,05 р,<0,01 30,0±0,12 р<0,01

Тромбин, с. 43,6±0,22 54,0±0,03 р,<0,01 54,0±0,2 р<0,01

Ристомицин, с. 31,6±0,02 41,0±0,12 р,<0,01 41,0±0,26 р<0,01

Адреналин, с. 82,0±0,03 98,0±0,06 р,<0,01 97,0±0,45 р<0,01

АДФ+адреналин, с. 22,0±0,05 36,0±0,03 р,<0,01 36,0±0,5 р<0,01

АДФ+коллаген, с. 20,0±0,01 27,0±0,05 Р1<0,01 27,0±0,09 р<0,01

Адреналин+коллаген, с. 19,0±0,02 30,0±0,05 р,<0,01 30,1±0,12 р<0,01

Условные обозначения: р1 - достоверность динамики показателей на фоне коррекции.

У телят с ФНП на фоне комплексной коррекции содержание дискоцитов в кровотоке достоверно увеличилось до уровня контроля (82,3±0,6%).

Количество в крови телят диско-эхиноцитов, сфероцитов и сферо-эхиноцитов на фоне коррекции достоверно снизилось, не отличаясь от контрольных значений. При этом сумма активных форм тромбоцитов нормализовалась (17,7±0,04%). Число малых и число средних и больших агрегатов в кровотоке телят с ФНП на комплексной коррекции уменьшились до 3,7±0,05 и 0,15±0,02 на 100 свободно лежащих тромбоцитов, соответственно, не отличаясь от контрольных значений.

Выраженное снижение протромботического потенциала (с ХВ| тп исход = 0,399 до Хв1 то «Фосфопаг»+ «Экос»+глюконат кальция = 0,026) у новорожденных телят с ФНП на фоне сочетания «Фосфопага», «Экоса» и глюконата кальция говорит о возможности нормализации первичного гемостаза с его помощью.

Положительное значение ТП при приближении его абсолютного значения к нулю свидетельствует о сохранении слабой проагрегантной направленности первичного гемостаза у животных, прошедших данный вид коррекции, не позволяющей возникнуть явлениям кровоточивости. Наибольшая весомость в процессе нормализации ТП в данном случае принадлежала удлинению времени АТ со всеми индукторами и их сочетаниями, ослаблению ПОЛ в плазме и тромбоцитах, повышению в последних активности СОД и каталазы, ослаблению тромбоксанообразования и снижению уровней тромбоцитарных агрегатов всех размеров.

Таким образом, повышенная активность кровяных пластинок у новорожденных телят с ФНП на фоне комплексной коррекции нормализуется по всем оцениваемым показателям, оптимизируя реологию крови и исключая тем самым риск тромботических осложнений. Важнейшую роль в этом играют нормализация на фоне комплексной коррекции содержания в тромбоцитах СМ, выход на уровень контрольных значений внутритромбоцитарного ПОЛ и оптимизация рецепторных и пострецепторных механизмов восприятия сигнала кровяными пластинками извне.

Установлено, что возникающие при ФНП тромбоцитарные дисфункции могут быть предотвращены своевременным применением у телят сочетания «Фосфопага», «Экоса» и глюконата кальция, способных корректировать активность тромбоцитов и профилактирующих ФНП.

3.6. Особенности тромбоцитарных функций у новорожденных поросят с анемией

У новорожденных поросят с анемией количество тромбоцитов в кровотоке животных не отличалось от такового в группе контроля. У них ИТА превышал контроль в 1,49 раз, что косвенно указывало на увеличение в кровяных пластинках животных уровня продуктов лабилизации тромбоцитарных фосфолипидов - активаторов свертывания крови. Кроме того, у них было найдено достоверное повышение активности тромбопластина на 46,8% при компенсаторном замедлении его синтеза до 2,72±0,02 мин (в контроле - 2,41±0,02 мин), что являлось важным стимулом гемостаза в целом при анемии.

Исследование АТ под действием ряда индукторов и их сочетаний выявило высокую чувствительность тромбоцитов поросят с анемией к внешним стимулам с активацией их агрегационной способности.

У обследованных животных с анемией отмечалось ускорение АТ, особенно под влиянием коллагена. Несколько медленнее АТ у поросят с анемией развивалась под влиянием АДФ и ристомицина, еще позднее АТ регистрировалась у них с Н2О2. Тромбиновая и адреналиновая АТ также развивались быстрее, чем в контроле (р<0,01). Время развития АТ на фоне сочетания индукторов было еще более укороченным: АДФ+адреналин -18,3±0,02с., АДФ+коллаген - 17,6±0,01 е., адреналин+коллаген - 12,1±0,05с. Оценка АТ при сочетании двух индукторов агрегации позволила

приблизить представление об АТ к реально возникающему в кровяном русле новорожденных поросят с анемией агрегационному процессу тромбоцитов (табл.3).

Установлено, что новорожденных поросят имеющих анемию отмечается

усиление адгезивно!" способности кровяных пластинок, идущей по двум механизмам. Перкый механизм -- увеличение плотности коллагеновых рецепторов-гликопротеидов 1а - Па и VI на мембране тромбоцитов, что косвенно установлено по ускорению АТ с коллагеном. Второй механизм -нарастание адгезии тромбоцитов у новорожденных поросят с анемией связан с высокой выработкой ФВ структурами сосудов и активным его связывания с рецепторами к нему - (вР1 в) на поверхности кровяных пластинок. Повышение уровня ФВ регистрируется у этих животных на основе ранней АТ с ристомицином, который по своей способности влиять на тромбоциты, идентичен субэндотелиальным структурам сосудов. Увеличение синтеза ФВ вызывает на основе положительной обратной связи повышение числа рецепторов к нему на тромбоцитарных мембранах, вызывая рост их адгезивной готовности.

Таблица 3. Агрегационная активность тромбоцитов у _новорожденных поросят с анемией_

Параметры Новорожденные поросята с анемией, п =121, М ± m Контроль п = 27, М ± m

АДФ, с. 25,3±0,05 43,6±0,14 Р2<0,01

Коллаген, с. 22,5±0,02 34,1±0,04 Р2<0,01

Тромбин, с. 38,6±0,02 57,7±0,07 р2<0,01

Ристомицин, с. 24,3±0,11 46,4±0,12 р2<0,01

Н202, с. 29,6±0,02 47,3±0,05 р2<0,01

Адреналин, с. 66,5±0,01 99,5±0,03 Р2<0,01

АДФ+адреналин, с. 18,3±0,02 35,4±0,04 р2<0,01

АДФ+коллаген, с. 17,6±0,01 24,8±0,06 р2<0,01

Адреналин+коллаген, с. 12,1±0,05 27,6±0,11 Р2<0,01

Условные обозначения: рг - достоверность различий между контрольными поросятами и имеющими анемию.

В условиях усиления чувствительности тромбоцитов к индукторам агрегации при анемии усиливается фиксация индукторов к рецепторам на мембране кровяных пластинок, вызывая высокую активацию фосфолипазы С сильными агонистами и стимулирующую фосфоинозитольный путь через диацилглицерол и протеинкиназу С с фосфолирированием белков сократительной системы и стимулирующую фосфолипазы А2, регулирующей

выход из фосфолипидов арахидоновой кислоты повышением выхода проагрегантных простагландинов, в т.ч. тромбоксана за счет активации ЦО и ТС.

Корреляционный анализ показал статистически значимые обратные сильные и средней силы связи между содержанием АГП и МДА в тромбоцитах анемичных поросят и времени АТ на фоне примененных индукторов и их сочетаний.

Корреляционный анализ между активностью каталазы и СОД тромбоцитов, с одной стороны, и АТ со всеми используемыми индукторами и их сочетаниями, с другой, выявили прямую сильную и средней силы статистическую связь. Причем, в случае АТ с сочетаниями индукторов статистическая связь ее с ПОЛ и антиоксидантной защитой кровяных пластинок оказалась максимальной.

В крови поросят с анемией дискоцитов содержалось - 51,3±0,03% (в контроле - 82,6±0,13%). Количество диско-эхиноцитов у них было увеличено втрое. Содержание сфероцитов, сферо-эхиноцитов и биполярных форм тромбоцитов у анемичных животных превышало контрольные значения в 6 раз, в 2,5 раза и 1,7 раза, соответственно. Сумма активных форм тромбоцитов у них была выше контрольных значений в 2,8 раза.

Нарастание агрегирующей способности кровяных пластинок ведет к повышению содержания активных форм тромбоцитов и к увеличению числа циркулирующих агрегатов различных размеров в крови животных.

Малых и больших агрегатов в их кровотоке содержалось 18,2±0,08 на 100 свободно лежащих тромбоцитов и 5,01±0,03 на 100 свободно лежащих тромбоцитов против контроля - 3,04±0,02 на 100 свободно лежащих тромбоцитов и 0,14±0,03 на 100 свободно лежащих тромбоцитов, соответственно, причем количество тромбоцитов в агрегатах у них было выше, чем в контроле в 2,07 раза.

В протромботическом потенциале первичного гемостаза у новорожденных поросят с анемией наиболее весомыми являлись сокращение времени развития АТ со всеми индукторами и их сочетаниями (Р1 от 367,21 до 217,43), активности антиоксидантной защиты кровяных пластинок и ПОЛ в них (Р1 от 384,15 до 275,26). Относительно высокие коэффициенты влияния в ТП принадлежали увеличенному содержанию ХС (Р1=183,42), сниженному уровню в тромбоцитах ОФЛ (Р1=168,92) и возросшей активности ЦО (Р1=151,12) и ТС (Р1=133,71). Остальные параметры гемостаза были менее весомы. Значимость их существенно не различалась между собой, играя в ТП скромную роль.

Взвешенная средняя протромботического потенциалау новорожденных поросят с анемией составила Хв1тп= 0,362.

С целью поиска наиболее эффективной коррекции тромбоцитарных нарушений у новорожденных поросят с анемией применен препарат железа -ферроглюкин и его сочетания с фоспренилом и гамавитом. Установлено, что изолированное применение ферроглюкина и его сочетание с фоспренилом недостаточно корректирует у них тромбоцитарные дисфункции.

Нормализация тромбоцитарных функций у новорожденных поросят с анемией была возможна только в случае применения ферроглюкина с гамавитом.

3.7. Возможности сочетания ферроглюкина и гамавита в

коррекции состояния новорожденных поросят с анемией

Количество тромбоцитов в кровотоке животных до и после коррекции находилось в пределах общепринятой нормы, не отличаясь от такового в группе контроля. Сочетание ферроглюкина с гамавитом нормализовало активность тромбоцитов у поросят с анемией. ИТА у них через 5 дней после окончания коррекции снизился на 50,5%, достигнув контрольного уровня -26,5±0,12% при нормализации активности тромбопластина (14,0±0,04с.) с переходом на контрольный уровень времени его синтеза (2,41±0,02 мин.). Полученные результаты указывают на то, что ферроглюкин с гамавитом способны при сочетанном применении нормализовать у поросят с анемией активность основного запускающего механизма плазменного гемостаза -усиленного тромбопластинообразования.

Исследование АТ под действием ряда индукторов и их сочетаний выявило нормализацию чувствительности тромбоцитов анемичных животных к внешним стимулам с выходом их агрегационной активности на контрольный уровень (табл.4).

К концу применения ферроглюкина и гамавита у поросят отмечено достоверное удлинение времени развития АТ с изолированными индукторами и их сочетаниями. Через 5 дней после окончания применения ферроглюкина и гамавита АТ затормозилась со всеми индукторами и их сочетаниями. Наиболее активным индуктором АТ был коллаген, что указывало на приближение количества и биодоступности коллагеновых рецепторов - СР1а-Па и вРУ1 на мембранах кровяных пластинок к уровню здоровых животных. На втором месте находились АДФ, ристомицин, Н2О2 и тромбин. Активность адреналиновой АТ также нормализовалась, развиваясь через 99,4±0,08с после добавления индуктора. Оптимизация с ристомицином на фоне коррекции указывала на нормализацию еще одного механизма адгезии тромбоцитов у новорожденных поросят с анемией - снижение до контрольного уровня фактора Виллебранда в крови с уменьшением числа рецепторов (ОР1в) к нему на поверхности кровяных пластинок. Сочетание индукторов, усиливающее их агрегирующее действие, способствовало более ранней АТ. Так, при сочетании адреналина и коллагена АТ на фоне коррекции тормозилась на 87,2%, АДФ и коллагена на 36,6%, АДФ и адреналина в 2,39 раза, что указывало на нормализацию АТ в условиях, приближенных к реальным.

Таблица 4. Динамика агрегационной активности тромбоцитов у новорожденных поросят с анемией на фоне ферроглюкина и гамавита

Параметры Ферроглюкин с гамавитом, п=41, М±т Контроль, п=27, М±т

исходные значения в конце курса коррекции через 5 дней после завершения коррекции

АДФ, с. 25,3±0,06 33,9±0,03 р,<0,01 42,1±0,01 р,<0,01 43,6±0,14 р2<0,01

Коллаген, с. 22,6±0,01 25,4±0,08 Р1<0,01 33,3±0,08 р,<0;01 34,1±0,04 р2<0,01

Тромбин, с. 38,4±0,03 48,4±0,08 Р1<0,01 57,3±0,04 р,<0,01 57,7±0,07 р2<0,01

Ристомицин, с. 24,0±0,11 34,3±0,12 р,<0,01 45,8±0,03 р,<0,01 46,4±0,12 р2<0,01

Н202, с. 29,6±0,03 37,4±0,08 Р1<0,01 46,7±0,04 р,<0,01 47,3 ±0,05 р2<0,01

Адреналин, с. 66,2±0,05 79,6±0,8 р,<0,01 99,4±0,08 р,<0,01 99,5±0,03 р2<0,01

АДФ+адреналин, с. 18,7±0,01 28,4±0,08 Р1<0,01 35,0±0,08 Р1<0,01 35,4±0,04 р2<0,01

АДФ+коллаген, с. 18,0±0,01 21,0±0,08 р,<0,01 24,6±0,05 р,<0,01 24,8±0,06. р2<0,01 .

Адреналин+коллаген, с. 11,9±0,01 21,8±0,07 Р1<0,01 28,5±0,04 Р1<0,01 27,6±0,11 р2<0,01 .

Аналогичные позитивные изменения на поверхности тромбоцитов поросят с дефицитом железа произошли с рецепторами к АДФ, адреналину и тромбину с одновременным нарастанием активности системы антиокисления тромбоцитов, обуславливающим повышение резистентности к Н202.

Нормализация АТ при взаимопотенциирующем действии ее индукторов стала возможной благодаря оптимизации функционирования внутритромбоцитарных путей реализации АТ, в т.ч. через ослабление фосфолипаз С и А2_ уменьшение экспрессии фибриногеновых рецепторов (ввИв-Ша) на мембране кровяных пластинок и депрессию образования в них физиологического агреганта - тромбоксана.

Оценка динамики обмена арахидоновой кислоты в тромбоцитах у поросят с анемией показала, что через 5 дней после коррекции ферроглюкином и гамавитом нормализуется тромбоксанообразование за счет одновременного снижения активности ЦО и ТС.

К концу курса применения ферроглюкина и гамавита у поросят с анемией отмечено увеличение содержания в кровотоке дискоидных форм кровяных пластинок, при достоверном снижении содержания активированных

тромбоцитов (30,8±0,08%) за счет сокращения количества и оптимизации соотношения всех их разновидностей (диско-эхиноцитов, сфероцитов, сферо-эхиноцитов и биполярных форм). Количество свободно циркулирующих в крови малых тромбоцитарных агрегатов (10,2±0,08 на 100 свободно лежащих тромбоцитов), средних и больших агрегатов (2,6±0,04 на 100 свободно лежащих тромбоцитов) также уменьшилось. Число тромбоцитов, вовлеченных в агрегаты, снизилось в 1,53 раза.

Последующее наблюдение за животными с анемией, прошедшими курс коррекции ферроглюкином и гамавитом, выявило значительную дополнительную положительную динамику ВАТ. Так, через 5 дней после коррекции содержание дискоцитов в кровяном русле поросят увеличилось до 83,2±0,04% при нормализации суммы активных форм тромбоцитов за счет дополнительного снижения в крови животных всех разновидностей активированных кровяных пластинок. Через 5 дней после завершения курса применения ферроглюкина и гамавита у поросят нормализовалось содержание свободно циркулирующих малых (3,4±0,08 на 100 свободно лежащих тромбоцитов), средних и больших агрегатов (0,6±0,03 на 100 свободно лежащих тромбоцитов) при контрольном уровне вовлечения в них тромбоцитов.

Наиболее весомым в протромботическом потенциале первичного гемостаза у поросят после коррекции ферроглюкином и гамавитом являлось замедление развития АТ со всеми индукторами и их сочетаниями (Р1 от 707,4 до 161,9), ослабление ПОЛ и рост активности антиоксидантных ферментов кровяных пластинок (Р1 от 426,1 до 336,2). Относительно высокие коэффициенты влияния в ТП принадлежали ослаблению активности ЦО (Р1=530,4) и ТС (Р1=248,1). Остальные параметры тромбоцитарного гемостаза играли в ТП скромную роль.

Взвешенная средняя протромботического потенциала у новорожденных поросят с анемией составила ХВ;тпферроглкж.ш+пшавит = 0,028.

Приближение значения ТП к «0» указывает на уравновешивание пр<^- и антитромботических влияний в первичном гемостазе поросят с анемией на фоне ферроглюкина и гамавита, указывая на полную коррекцию у них тромбоцитарных функций с исключением риска микротромбозов. Достигнутая нормализация тромбоцитарного гемостаза с помощью ферроглюкина и гамавита позволяет считать его применение предпочтительным у новорожденных поросят с анемией с целью снижения риска микротромбозов и оптимизации микроциркуляции. Ферроглюкин с гамавитом улучшают агрегационные свойства тромбоцитов через оптимизацию эритропоэза, процессов перексидации и стимуляцию обмена веществ.

ВЫВОДЫ

1.У крупного рогатого скота и свиней становление тромбоцитарного гемостаза происходит с возрастом, характеризуясь относительно высокой степенью совершенства и активностью, обеспечивая в течение

постнатального периода онтогенеза адекватную адаптацию к условиям внешней среды.

1.1. У телят в фазу новорожденное™ отмечается стабильность тромбоцитарного гемостаза (агрегация тромбоцитов с сочетаниями индукторов АДФ с адреналином, АДФ с коллагеном, адреналин с коллагеном и сумма активных форм составляли в 1-2 сутки 36,3±0,14с, 2б,8±0,05с., 28,4±0,03с, 23,9±0,04%, 3-4 сутки 37,5±0,10с, 27,6±0,02с, 32,1±0,07с, 19,6±0,02%, 5-6 сутки 34,8±0,08с, 28,1±0,07с, 29,9±0,10с, 21,0±0,05%, 7-8 сутки 38,1±0,03с, 26,9±0,15с, 31,6±0,09с, 15,8±0,01%, 9-10 сутки 36,4±0,16с, 27,2±0,07с, 30,3±0,14с, 19,0±0,16%, соответственно) с низким уровнем протромботического потенциала (Хв, тп=0,007).

1.2. У поросят в фазу новорожденности происходит нарастание активности тромбоцитарного гемостаза (агрегация тромбоцитов с сочетаниями индукторов АДФ с адреналином, АДФ с коллагеном, адреналин с коллагеном и сумма активных форм составляли в 1 сутки 36,5±0,03с, 24,8±0,04с., 28,6±0,09с, 16,9±0,80%, 2 сутки 36,0±0,01с, 24,5±0,02с, 28,2±0,11с, 17,0±0,18%, 3 сутки 35,4±0,05с, 24,9±0,01с, 27,4±0,13с, 17,5±0,15%, 4 сутки 35,0±0,08с, 24,7±0,03с, 27,2±0,10с, 17,7±0,23%, 5 сутки 34,3±0,04с, 25,0±0,06с, 26,4±0,06с, 18,0±0,08%, соответственно) с низким уровнем протромботического потенциала (ХВ| тп=0,006).

1.3. У телят в раннем онтогенезе отмечается нарастание активности тромбоцитарного гемостаза (агрегация тромбоцитов с сочетаниями индукторов АДФ с адреналином, АДФ с коллагеном, адреналин с коллагеном и сумма активных форм составляли в среднем за фазу новорожденности 36,0±0,50с, 27,0±0,09с., 30,1±0,12с, 18,0±0,20%, в фазу молочного питания 36,1±0,20с, 26,2±0,03с, 28,3±0,06с, 19,6±0,03%, в фазу молочно-растительного питания 34,6±0,07с, 25,0±0,03с, 26,5±0,07с, 21,6±0,04%, в фазу растительного питания 33,2±0,02с, 24,6±0,05с, 25,0±0,11с, 23,9±0,05%, соответственно с небольшим увеличением протромботического потенциала (Хв; тп =0,019).

1.4. У поросят в течение всего раннего онтогенеза отмечается неуклонный рост активности тромбоцитарного гемостаза (агрегация тромбоцитов с сочетаниями индукторов АДФ с адреналином, АДФ с коллагеном, адреналин с коллагеном и сумма активных форм составляли в среднем за фазу новорожденности 35,4±0,04с, 24,8±0,06с., 27,6±0,11с, 17,4±0,11%, в фазу молочного питания 32,6±0,02с, 24,1±0,08с, 25,3±0,08с, 19,9±0,02%, в фазу молочно-растительного питания 31,0±0,04с, 22,8±0,07с, 24,0±0,07с, 22,6±0,05%, в фазу растительного питания 28,6±0,07с, 21,1±0,09с, 22,5±0,06с, 24,5±0,06%, соответственно с небольшим увеличением протромботического потенциала (ХВ| тп =0,020).

2. Более выраженное усиление функций первичного гемостаза у здоровых поросят в течение раннего онтогенеза уравнивалось с активностью такового у телят к годовалому возрасту.

3. Физиологическая незрелость новорожденных телят, имеющих риск развития ФНП, сопровождается характерными нарушениями активности тромбоцитарного гемостаза.

3.1.У физиологически незрелых телят имеется врожденная мембранопатия тромбоцитов (ХС - 0,80±0,02 мкмоль/109тр, ОФЛ - 0,40±0,05 мкмоль/109 тр, ХС/ОФЛ - 2,00±0,04).

3.2.При физиологической незрелости у новорожденных телят вследствие наличия липидного дисбаланса в мембранах тромбоцитов происходит ослабление антиоксидантной защищенности кровяных пластинок (СОД -7820,0±26,50 МЕ/109 тр., каталаза - 1470,0±6,75 МЕ/109 тр.), что в совокупности с ослаблением антиоксидантного состояния плазмы создает предпосылки к повышению в них перекисного окисления липидов (базальный МДА - 1,20±0,001 нмоль/109 тр., АГП - 3,05±0,04 Дгзз/Ю9 тр., дополнительно усиливающегося при манефестации функциональных нарушений пищеварения (базальный МДА - 1,54±0,004 нмоль/109 тр., АГП -3,49±0,01 Д233/109тр.).

3.3.У новорожденных телят с признаками физиологической незрелости отмечается более высокий уровень функционирования тромбоцитарного гемостаза, чем у физиологически зрелых животных (агрегация тромбоцитов с сочетаниями индукторов АДФ с адреналином, АДФ с коллагеном, адреналин с коллагеном и сумма активных форм составляли 28,0±0,08 е., 23,0±0,06 е., 24,0±0,30 е., 30,0±0,05 %, соответственно), способствуя его дополнительной активации при развитии функциональных нарушений пищеварения (агрегация тромбоцитов с сочетаниями индукторов АДФ с адреналином, АДФ с коллагеном, адреналин с коллагеном и сумма активных форм составляли 20,0±0,12 е., 18,4±0,09 е., 20,3±0,07 е., 38,0±0,3 %, соответственно).

4. При возникновении функциональных нарушений пищеварения у новорожденных телят отмечается увеличение внутрисосудистой активности тромбоцитов, что способствует увеличению содержания у них в кровотоке активных форм кровяных пластинок (дискоциты - 62,0±0,2%, сумма активных форм - 38,0±0,3%) и их агрегатов различного размера (малые агрегаты - 15,2±0,06 на 100 свободно лежащих тромбоцитов, средние и большие агрегаты - 4,7±0,03 на 100 свободно лежащих тромбоцитов), способствуя нарастанию у них протромботического потенциала (Хв, тп =0,399).

5. Применение у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения традиционной коррекции, сорбента «Экое» и «Биопага-Д», «Фосфопага» и его сочетания с «Экое» недостаточно оптимизирует перекисное окисление липидов плазмы и тромбоцитов, несколько снижая в них уровень средних молекул, не оказывая влияния на липидный дисбаланс в мембранах тромбоцитов, не позволяя достичь нормализации состояния тромбоцитарного гемостаза и исключить риск развития внутрисосудистого микротромбообразования за счет слабого влияния на протромботический потенциал первичного гемостаза (ХВ1 тп традиционная коррекция =0,392, ХВ1 ТО «Экое» =

0,360, ХВ; ТП «Биопаг-Д» — 0,301, Хц| тп «Фосфопаг» 0,234, Хв, ТП «Фосфопаг»+«Экос» 0,121).

6. Нормализация всех исследуемых биохимических и гематологических показателей (агрегация тромбоцитов с сочетаниями индукторов АДФ с адреналином, АДФ с коллагеном, адреналин с коллагеном и сумма активных форм составляли к концу коррекции 36,0±0,03с., 27,0±0,05с., 30,0±0,05с., 17,7±0,04, соответственно) возможна на фоне 10 суточного применения комплекса из «Фосфопага», «Экоса» и глюконата кальция, нивелирующего риск микротромбозов с переводом реологических свойств тромбоцитов на уровень здоровых телят при приближении протромботического потенциала приблизился К нулевому уровню (ХВ! ТП «Фосфопаг»+ «Экога+глюконат кальция = 0,026).

7. Профилактическое применение в течение 8 суток комплекса, состоящего из «Фосфопага», «Экоса» и глюконата кальция, предотвращает развитие функциональных нарушений пищеварения и тромбоцитопатии с нормализацией субфизиологических нарушений тромбоцитарного гемостаза у новорожденных телят (агрегация тромбоцитов с сочетаниями индукторов АДФ с адреналином, АДФ с коллагеном, адреналин с коллагеном и сумма активных форм составляли по окончании коррекции 35,8±0,02 е., 27,3±0,08 е., 29,8±0,02 е., 18,8±0,06 %, соответственно) при приближении протромботического потенциала к нулевому уровню (ХВ| ш профилактика = 0,025).

8. У новорожденных поросят с анемией имеются выраженные нарушения тромбоцитарного гемостаза (агрегация тромбоцитов с сочетаниями индукторов АДФ с адреналином, АДФ с коллагеном, адреналин с коллагеном и сумма активных форм составляли 18,3±0,02с, 17,6±0,01с., 12,1±0,05с, 48,7±0,02%) при высоком уровне протромботического потенциала (ХВ; тп =0,362) первичного гемостаза, создавая условия для микротромбообразования.

9. Применение ферроглюкина у новорожденных поросят с анемией не оказывает влияния на нарушения тромбоцитарного гемостаза (агрегация тромбоцитов с сочетаниями индукторов АДФ с адреналином, АДФ с коллагеном, адреналин с коллагеном и сумма активных форм составляли через 5 суток после коррекции 19,1±0,04с, 17,6±0,04с., 12,4±0,06с, 47,9±0,02%, соответственно) и величину протромботического потенциала (Хв1тп =0,356) первичного гемостаза.

10. Коррекция анемии у новорожденных поросят с помощью ферроглюкина и фоспренила вызывает позитивную динамику тромбоцитарного гемостаза (агрегация тромбоцитов с сочетаниями индукторов АДФ с адреналином, АДФ с коллагеном, адреналин с коллагеном и сумма активных форм составляли через 5 суток после коррекции 33,5±0,04с, 24,8±0,07с., 25,9±0,07с, 25,6±0,04%,, соответственно) и снижение величины протромботического потенциала (Хш тп =0,174) первичного гемостаза, не достигающего уровня здоровых животных.

11. Сочетание ферроглюкина с гамавитом у новорожденных поросят с анемией нормализует тромбоцитарный гемостаз (агрегация тромбоцитов с

сочетаниями индукторов АДФ с адреналином, АДФ с коллагеном, адреналин с коллагеном и сумма активных форм составляли через 5 суток после коррекции 35,0±0,08с, 24,6±0,05с., 28,5±0,03с, 16,8±0,04%, соответственно) и снижает протромботический потенциал (XBi тп =0,028) первичного гемостаза до уровня контроля.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для оценки состояния тромбоцитарного гемостаза и прогнозирования его дополнительной активации у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения рекомендуется определять с обработкой полученных данных системным многофакторным анализом и вычислением величины протромботического потенциала.

2. Для коррекции дисфункций первичного гемостаза новорожденным телятам с функциональными нарушениями пищеварения необходимо включать в схему выпаивания комплекс из «Фосфопага», «Экоса» и глюконата кальция на 10 суток.

3. С целью профилактики тромбоцитопатии у новорожденных телят при обнаружении у них мембранопатии тромбоцитов, увеличения уровня средних молекул и перекисного окисления липидов в них, в схему выпаивания на 8 суток рекомендуется включать «Фосфопаг», «Экое» и глюконат кальция.

4. Адекватность проводимой коррекции у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения и у новорожденных поросят с признаками анемии рекомендуется проверять путем определения у них активности агрегации in vitro с изолированными индукторами и их сочетаниями и внутрисосудистой активности тромбоцитов.

5. Для коррекции тромбоцитарных нарушений у новорожденных поросят с анемией рекомендуется применение в течение 10 сут. сочетания ферроглюкина 150 мг (2мл) внутримышечно, двукратно с интервалом 10 сут. и гамавита 0,01 мг/кг внутримышечно один раз в день, пять дней, начиная с первой инъекции ферроглюкина.

6. У новорожденных поросят с легкой анемией без признаков тромбоцитопатии для предотвращения развития тромбоцитарных дисфункций возможно использовать сочетание ферроглюкина по 150мг (2мл) внутримышечно, двоекратно с интервалом 10 дней и фоспренила 0,05мл/кг внутримышечно, двоекратно в разных шприцах в разные точки, первый раз одновременно с первой инъекцией препарата железа, второй раз в той же дозе через пять дней после его первой инъекции.

Результаты исследований внедрены в хозяйствах Курского, Конышевского, Железногорского, Обоянского, Фатежского, Золотухинского, Октябрьского, Суджанского, Советского районов Курской области.

Основные положения диссертации используются в учебном процессе при преподавании физиологии в Курском институте социального образования (филиал) РГСУ, Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии имени К. И. Скрябина и Белгородской государственной сельскохозяйственной академии.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Медведев, И.Н. Диагностика агрегационных нарушений у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова, С.Ю. Завалишина / Методические рекомендации, Курск.- 2005.-10с. (10/4).

2. Горяинова, И.А. Тромбоцитарные дисфункции у новорожденных телят / И.А. Горяинова, И.Н. Медведев, С.Ю. Завалишина,- М., 2005,- 130 с. (130/100).

3. *Медведев, И.Н. Быстрая эффективная коррекция нарушений тромбоцитарного гемостаза у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Международный вестник ветеринарии. -2006.-№3-4.-С.24-27. (4/2).

4. *Медведев, И.Н. Нарушения тромбоцитарного гемостаза у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Международный вестник ветеринарии. -2006.-№3-4.-С.63-67. (5/3).

5. Медведев, И.Н. Оценка внутрисосудистой активности тромбоцитов у новорожденных телят с функциональными .нарушениями пищеварения / И.Н., Медведев, И.А. Горяинова, С.Ю.Завалишина // Методические рекомендации,- Курск, 2006.-12с. (12/5).

6. Медведев, И.Н. Нарушения тромбоцитарного гемостаза и подходы к его коррекции у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова.-М., 2006.-170с.(170/140).

7. *Медведев, И.Н. Применение «Биопага-Д» новорожденным телятам при диспепсии / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Зоотехния. -2006.-№12.-СЛ9-20(2/1).

8. Медведев, И.Н. Пути возникновения тромбоцитарных нарушений у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Материалы IV научной конференции с международным участием «Проблемы агропромышленного комплекса», январь 2007. / Ж. «Успехи современного естествознания». -2007.-№1 ,-С.44-45.(2/1).

9. Медведев, И.Н. Внутрисосудистая активность тромбоцитов здоровых новорожденных телят в регионе Курской магнитной аномалии / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Материалы научной конференции с международным участием «Научные исследования высшей школы», 2-12 декабря 2006г., Испания, Марокко, Тенерифе, Мадера / Ж. «Фундаментальные исследования». -2007.-№1-С.83.(1/0,5).

10. *Медведев, И.Н. Коррекция диспепсии с предотвращением тромботических осложнений у новорожденных телят / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова//Молочное и мясное скотоводство.-2007.-№2.-С.42-43.(2/1).

11. Медведев, И.Н. Воздействие препарата «Биопаг-Д» на агрегационную функцию и перекисное окисление липидов тромбоцитов у новорожденных телят, больных диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Материалы V Международной конференции «Современные наукоемкие технологии»,

февраль 2007, Египет, г.Хурагда / Ж. «Успехи современного естествознания». -2007.-№2.-С.53-54.(2/1).

12. Медведев, И.Н. Коррекция функций тромбоцитов у новорожденных телят с диспепсией с помощью «Фосфопага» / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Материалы V научной конференции с международным участием «Гомеостаз и эндоэкология» 21-28 февраля 2007г. Хургада (Египет) / Ж. «Успехи современного естествознания». -2007.-№2.-С.37-38.(2/1).

13. Медведев, И.Н. Тромбоцитарные нарушения у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Материалы V научной конференции с международным участием «Гомеостаз и эндоэкология» 21-28 февраля 2007г. г. Хургада (Египет) / Ж. «Успехи современного естествознания»,- 2007.-№2.-С.37. (1/0,5).

14. Medvedev, I.N Biological aspects og infringements thrombocyte hemostasis / I.N Medvedev, T.A. Belova, I.A. Gorainova // EUROPEAN JOURNAL OF NATURAL HISTORY.- 2007.-№2.-P.71-73.(3/l).

15. Medvedev, I.N Prompt effective correction of thrombocyte hemostasis diaturbances in new-born calves with dyspepsia / I.N Medvedev, I.A. Gorainova // European Journal academy of natural history. -2007.-№2.-P.47-50.(4/2).

16. Медведев, И.Н. Внутрисосудистая активность тромбоцитов у новорожденных телят с диспепсией и ее коррекция «Фосфопагом» / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Материалы IV научной конференции с международным участием «Фундаментальные и прикладные проблемы медицины и биологии», 1-11 марта, 2007г. Индия / Ж. «Успехи современного естествознания».-2007.-№3.-С.91-92.(2/1).

17. *Медведев, И.Н. Коррекция дисфункции у новорожденных телят с диспепсией сорбентом «Экое» / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Зоотехния. -2007.-№3.-С.26-28.(3/1).

18. Медведев, И.Н. Диагностика состояния тромбоцитарного гемостаза у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова, С.Ю. Завалишина // Методические рекомендации.- Курск, 2007,-16с.( 16/6).

19. Медведев, И.Н. Нивелирование нарушений тромбоцитарного гемостаза у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Кардиолог.-2007.-№3.-С.30-32.(3/2).

20. Медведев, И.Н. Коррекция агрегации тромбоцитов и перекисного окисления их липидов у новорожденных телят с диспепсией Фосфопагом и Экосом / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Материалы научной конференции с международным участием «Научные исследования высшей школы по приоритетным направлениям науки и техники», 5-18 января 2007, Таиланд, Сингапур, Малайзия / Ж. «Современные наукоемкие технологии». -2007.-№4.-С. 99.(1/0,5).

21. *Медведев, И.Н. Оптимизация показателей гемостаза Фосфопагом у телят при диспепсии / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Ветеринария. -2007.-№4.-С.42-44.(3/2).

22. Медведев, И.Н. Применение сорбента «Экое» для коррекции тромбоцитарного гемостаза у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Материалы международной научно-практической конференции «Теоретические и прикладные проблемы социально-правовых, медико-биологических, технико-экономических сфер жизни общества». Курск, 26-27 марта 2007г.- Курск, 2007.-С.148-151.(4/2).

23. Медведев, И.Н. Нормативные значения первичного гемостаза у здоровых новорожденных телят в Курской области / И.Н. Медведев, Т.А. Белова, И.А. Горяинова // Материалы международной научно-практической конференции «Теоретические и прикладные проблемы социально-правовых, медико-биологических, технико-экономических сфер жизни общества» Курск, 26-27 марта 2007г. - Курск, 2007,- с.152-153.(2/0,9).

24. Медведев, И.Н. Формирование тромбоцитарных нарушений у новорожденных телят при развитии диспепсии / И.Н. Медведев, Т.А. Белова, И.А. Горяинова // Материалы международной научно-практической конференции «теоретические и прикладные проблемы социально-правовых, медико-биологических, технико-экономических сфер жизни общества». Курск, 26-27 марта 2007г.-Курск, 2007.-С.153-155.(3/1).

25. Медведев, И.Н. Возможности назначения энтеросорбентов при желудочно-кишечной патологии у новорожденных телят / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Материалы международной научно-практической конференции «Теоретические и прикладные проблемы социально-правовых, медико-биологических, технико-экономических сфер жизни общества». Курск, 26-27 марта 2007г.-Курск, 2007,- С.155-158.(4/2).

26. Медведев, И.Н. Методические подходы по исследованию тромбоцитарного звена гемостаза у новорожденных телят / И.Н. Медведев, Т.А. Белова, И.А. Горяинова // Материалы международной научно-практической конференции «Теоретические и прикладные проблемы социально-правовых, медико-биологических, технико-экономических сфер жизни общества» Курск, 26-27 марта 2007г.-Курск, 2007.- С.158-162.(5/2).

27. Медведев, И.Н. Эффективный способ коррекции тромбоцитарных дисфункций у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Материалы международной научно-практической конференции «Теоретические и прикладные проблемы социально-правовых, медико-биологических, технико-экономических сфер жизни общества» Курск, 26-27 марта 2007г.- Курск, 2007.- С.162-166.(5/2).

28. Медведев, И.Н. Дисфункция агрегационной способности тромбоцитов у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Материалы международной научно-практической конференции «Теоретические и прикладные проблемы социально-правовых, медико-биологических, технико-экономических сфер жизни общества». Курск, 26-27 марта 2007г.-Курск, 2007. - С.166-169.(4/2).

29. *Медведев, И.Н. Профилактика диспепсии и нарушений тромбоцитарного гемостаза у новорожденных телят / И.Н. Медведев, И.А.

Горяинова, Т.А. Белова // Международный вестник ветеринарии.-2007.-№3.-С.43-46 (4/2).

30. Медведев, И.Н. Механизмы развития тромбоцитарных нарушений у новороясденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Материалы XI международной научно-производственной конференции «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения» 14-18 мая 2007г. -Белгород, 2007.-С.106.(1/0,5).

31. Медведев, И.Н. Влияние «Биопага-Д» на агрегационную функцию и перекисное окисление липидов тромбоцитов у новорожденных телят, больных диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Материалы XI международной научно-производственной конференции «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения». Белгород, 14-18 мая 2007г. - Белгород, 2007.-С.107.(1/0,5).

32. Медведев, И.Н. Дисагрегационные аспекты нарушений тромбоцитарного гемостаза у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, Т. А. Белова, И.А. Горяинова // Материалы 19 Международной межвузовской научно-практической конференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии». Санкт-Петербург, 23-24 мая 2007г. - Санкт-Петербург, 2007.-С.92-93. (2/0,8).

33. Медведев, И.Н. Высокоэффективная коррекция тромбоцитарного гемостаза у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Материалы 19 Международной межвузовской научно-практической конференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии». Санкт-Петербург, 23-24 мая 2007г. - Санкт-Петербург, 2007.-С.14-15.(2/1).

34. Медведев, И.Н. Возможности сорбента «Экое» в коррекции тромбоцитарного гемостаза у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова// Биологический вестник.-2007.-т.11, №1.-С.76-78 (3/1,5).

35. *Медведев, И.Н. Способ лечения тромбоцитарных нарушений у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, Б.Д. Беспарточный, И.А. Горяинова. - Патент на изобретение №2324487, приоритет 12 июля 2006г. (3/2).

36. *Медведев, И.Н. Нормализация первичного гемостаза у новорожденных телят при диспепсии / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Ветеринария.- 2007.-№9.-С.41-44.(4/2).

37. *Медведев, И.Н. Функциональные нарушения первичного гемостаза у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова, Т.А. Белова//Ветеринарная практика.- 2007.-№3.-С.14-17.(4/1,5).

38. *Медведев, И.Н. Тромбоцитарные нарушения у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова, Т.А. Белова // Зоотехния,-2007.-№11.-С.19-20.(2/0,8).

39. *Медведев, И.Н. Способ профилактики тромбоцитарных нарушений у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, Б.Д. Беспарточный,

И.А. Горяинова. Патент на изобретение №2323731, приоритет от 27 ноября 2006г. (5/3).

40. *Медведев, И.Н. Способ профилактики развития тромбоцитопатии в первые часы диспепсии у новорожденных телят / И.Н. Медведев, Б.Д. Беспарточный, И.А. Горяинова. Патент на изобретение №2323730, приоритет 27 ноября 2006г. (3/2).

41. Медведев, И.Н. Незаразные болезни молодняка / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова, Т.А. Белова / В кн.: Агроветеринарная сфера жизни общества т.З, семитомного издания «Сферы социальной жизни Курского края». -М., 2007.-С.139-140.(2/0,8).

42. *Медведев, И.Н. Возможности фармакологической коррекции тромбоцитарных дисфункций у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова, Т.А. Белова // Вестник Оренбургского государственного университета, 2007.-№12.-С.124-127.(4/2,0).

43. Горяинова, И.А. Возможности монотерапии фосфопагом нарушений тромбоцитарного гемостаза у новорожденных телят с диспепсией / И.А, Горяинова, И.Н. Медведев, Т.А. Белова / Материалы Международной научно-практической конференции «Теоретические и прикладные проблемы социально-правовых, медико-биологических и технико-экономических сфер жизни общества. Курск, 20-21 марта 2008,-Курск, 2008.-С.120-122. (3/1).

44. Становление систем в постнатапьный период онтогенеза у животных / С.Ю. Завалишина, И.А. Горяинова, И.Н. Медведев, Т.А. Белова / Материалы Международной научно-практической конференции «Теоретические и прикладные проблемы социально-правовых, медико-биологических и технико-экономических сфер жизни общества. Курск, 20-21 марта 2008.-Курск, 2008.-С.123-132. (10/3).

45. Медведев, И.Н. Возможности влияния современного полигексаметиленгуанидина на биохимические сдвига у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова, Т.А. Белова / Материалы Международной научно-практической конференции «Теоретические и прикладные проблемы социально-правовых, медико-биологических и технико-экономических сфер жизни общества. Курск, 20-21 марта 2008.-Курск, 2008.-С.135-138.(4/2).

46. Горяинова, И.А. Нормализация первичного гемостаза у новорожденных телят с диспепсией / И.А. Горяинова, Т.А. Белова, И.Н. Медведев // Материалы первого международного конгресса ветеринарных фармакологов «Эффективные и безопасные лекарственные средства» посвященного 200-летию высшего ветеринарного образования и Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины. -Санкт-Петербург, 2008.-С.40-41. (2/0,8).

47. Медведев, И.Н. Воздействие сорбента «Экое» на тромбоцитарные дисфункции у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова, Т.А. Белова / Материалы международного симпозиума, посвященного 80-летию академика РАМН H.A. Агаджаняна «Адаптационная физиология и качество жизни: проблемы

традиционной и инновационной медицины», Москва, 14-16 мая 2008.- М., 2008.-С.212-217. (5/2,5).

48. Горяинова, И.А. Возможности монотерапии фосфопагом нарушений тромбоцитарного гемостаза у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения / И.А. Горяинова И.А., И.Н. Медведев, Т.А. Белова / Материалы международного научно-практического симпозиума «Адаптивные реакции в социальной сфере, биологии и медицине», Курск, 2122 марта 2008.-Курск, 2008.-С. 137-140. (4/2,0).

49. Функциональные особенности физиологически зрелых новорожденных поросят / С.Ю. Завалишина, И.Н. Медведев, И.А. Горяинова, Т.И. Карцева, Я.В. Киперман, Т.А. Белова / Материалы международного научно-практического симпозиума «Адаптивные реакции в социальной сфере, биологии и медицине», Курск, 21-22 марта 2008,-Курск, 2008.-С. 140-149. (10/2,0).

50. Медведев, И.Н. Коррекция реологических нарушений тромбоцитов у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова / Материалы международного научно-практического симпозиума «Адаптивные реакции в социальной сфере, биологии и медицине», Курск, 21-22 марта 2008,-Курск, 2008.-С. 183-186. (4/2).

51. Медведев, И.Н. Возможности сочетанного применения Фосфопага, Экоса и глюконата кальция в коррекции нарушений тромбоцитарного гемостаза у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова / Материалы международного научно-практического симпозиума «Адаптивные реакции в социальной сфере, биологии и медицине», Курск, 21-22 марта 2008.-Курск, 2008.-С.186-191. (6/3).

52. Нарушения агрегационной активности тромбоцитов у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова, С.Ю. Завалишина, Т.А. Белова / Материалы международного научно-практического симпозиума «Адаптивные реакции в социальной сфере, биологии и медицине», Курск, 21-22 марта 2008,-Курск, 2008.-С.191-195.(5/1,25).

53. Актуальные проблемы ветеринарии / И.Н. Медведев, С.Ю. Завалишина, И.А. Горяинова, Т.И. Карцева, Я.В. Киперман, Т.А. Белова / Материалы международного научно-практического симпозиума «Адаптивные реакции в социальной сфере, биологии и медицине», Курск, 21-22 марта 2008.-Курск, 2008.-С. 195-197. (3/1,0).

54. Механизмы формирования наклонности к тромбообразованию / И.Н. Медведев, С.Ю. Завалишина, И.А. Горяинова, Т.А. Белова, Т.А. / Материалы международного научно-практического симпозиума «Адаптивные реакции в социальной сфере, биологии и медицине», Курск, 21-22 марта 2008.-Курск, 2008.-С.197-199. (3/1).

55. *Медведев, И.Н. Фосфопаг и экое в коррекции тромбоцитарных дисфункций у новорожденных телят с функциональными нарушениями

пищеварения / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Аграрная наука.-2008.-№6.-С.33-35. (3/1,5).

56. Медведев, И.Н. Нормализация гемостаза у новорожденных поросят с анемией с помощью сочетания ферроглюкина и гамавита / Е.Г. Краснова, И.Н. Медведев // Современные проблемы адаптации. Материалы международной научной конференции. -Курск, 2008.-С.123-124. (2/1,5)

57. Медведев, И.Н. Состояние первичного гемостаза у новорожденных поросят с анемией / И.Н. Медведев, Е.Г. Краснова // Современные проблемы адаптации. Материалы международной научной конференции. - Курск, 2008.-С.124-125. (2/1,5).

58. Медведев, И.Н. Повышение агрегационной активности тромбоцитов у новорожденных поросят с анемией / И.Н. Медведев // Современные проблемы адаптации. Материалы международной научной конференции. -Курск, 2008.-С.125-126. (2/2).

59. Медведев, И.Н. Нарушения первичного гемостаза у новорожденных поросят с анемией / И.Н. Медведев // Современные проблемы адаптации. Материалы международной научной конференции. - Курск, 2008.-С.126-127. (2/2).

60. Медведев, И.Н. Возможности сочетания ферроглюкина и фоспренила в коррекции первичного гемостаза у новорожденных поросят с анемией / И.Н. Медведев // Современные проблемы адаптации. Материалы международной научной конференции. - Курск, 2008.-С.128. (1/1).

61. Медведев, И.Н. Проблема нарушений функций первичного гемостаза у новорожденных поросят с анемией / И.Н. Медведев, Е.Г. Краснова // Современные проблемы адаптации. Материалы международной научной конференции. - Курск, 2008.-С. 129-130. (2/1,5).

62. Медведев, И.Н. Коррекция гемостаза у новорожденных поросят с анемией с помощью ферроглюкина и гамавита / И.Н. Медведев, С.Ю. Завалишина, Е.Г. Краснова // Современные проблемы адаптации. Материалы международной научной конференции. - Курск, 2008.-С.130-131. (2/1).

63. Медведев, И.Н. Возможности ферроглюкина и гамавита в коррекции агрегационной активности тромбоцитов у новорожденных поросят с анемией / И.Н. Медведев / Материалы V международной научной конференции «Проблемы агропромышленного комплекса», Патгайа (Тайланд), 20-28 февраля 2008г. Опубликовано в журнале «Фундаментальные исследования».-2008.-№1.-С.82. (1/1).

64. Медведев, И.Н.Первичный гемостаз у новорожденных поросят / И.Н. Медведев, Е.Г. Краснова,- М., 2008,- 150с. (150/110).

65. Медведев, И.Н. Влияние ферроглюкина на состояние гемостаза у продуктивных животных с анемией в фазу новорожденное™ / И.Н. Медведев // Современные проблемы адаптации. Материалы международной научной конференции. - Курск, 2008.-С.131-132.(2/2).

66. Проблемы анемии в современном животноводстве / С.Ю. Завалишина, И.Н. Медведев, Е.Г. Краснова, Я.В. Киперман, Т.И. Карцева // Теоретические и прикладные проблемы социально-правовых, медико-биологических и

технико-экономических сфер жизни общества. Материалы международной научно-практической конференции, Курск, 20-21 марта 2008.-Курск, 2008.-С.122-123. (2/1).

67. Медведев, И.Н. Ферроглюкин и гамавит в коррекции гемостаза у продуктивных животных с анемией в фазу новорожденное™ / И.Н. Медведев // Современные проблемы адаптации. Материалы международной научной конференции. - Курск, 2008.-С.132-137. (6/6).

68. Максимов, В.И. Подходы к коррекции анемии у поросят / В.И. Максимов, И.Н. Медведев // Материалы международного научно-практического симпозиума «Адаптивные реакции в социальной сфере биологии и медицине», Курск, 21-22 марта 2008,-Курск, 2008.-С.245-249. (5/4).

69. *Максимов, В.И. Сравнительная оценка тромбоцитарных функций в раннем онтогенезе у телят и поросят / В.И. Максимов, И.Н. Медведев // Ветеринария.-2008.-№11.-С.50-54. (5/4).

70. *Медведев, И.Н. Динамика тромбоцитарной активности в раннем онтогенезе поросят / И.Н. Медведев // Зоотехния.-2008.-№9.-С.27-28. (2/2).

71. *Медведев, И.Н. Профилактика тромбоцитарных дисфункций у новорожденных телят / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Аграрная наука.-2008.-№7.-С.28-30.(3/2).

72. *Медведев, И.Н. Становление тромбоцитарной активности у телят в раннем онтогенезе / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Аграрная наука.-2008.-№8. - С.38-40. (3/2).

73. *Медведев, И.Н. Высокоэффективная коррекция нарушений тромбоцитарных дисфункций у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Технологии живых систем.-2008,- №4,- С.74-77. (4/3).

74. *Медведев, И.Н. Способ предотвращения тромбоцитарных нарушений при диспепсии у новорожденных телят / И.Н. Медведев, Б.Д. Беспарточный.-Патент на изобретение №2327466, приоритет 20 октября 2006г. (6/4).

75. *Медведев, И.Н. Способ лечения диспепсии у новорожденных телят / И.Н. Медведев, Б.Д. Беспарточный,- Патент на изобретение №2327467, приоритет 20 октября 2006г. (6/4).

76. *Медведев, И.Н. Способ профилактики развития тромбоцитарных нарушений при диспепсии у новорожденных телят / И.Н. Медведев, Б.Д. Беспарточный.- Патент на изобретение №2328290, приоритет 20 октября 2006г. (4/3).

77. *Медведев, И.Н. Способ лечения диспепсии новорожденных телят / И.Н. Медведев, Б.Д. Беспарточный, И.А. Горяинова,- Патент на изобретение №2329812, приоритет 20 ноября 2006г. (4/3).

78. *Медведев, И.Н. Способ раннего выявления риска формирования тромбоцитарных нарушений у животных / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова, Т.А. Белова, Б.Д. Беспарточный.- Патент на изобретение №2316767, приоритет 10 января 2006г. (9/6).

79. *Медведев, И.Н. Способ лечения диспепсии новорожденных телят / И.Н. Медведев, Б.Д. Беспарточный,- Патент на изобретение №2327468, приоритет 20 октября 2006г.(3/2).

80. *Медведев, И.Н. Способ лечения тромбоцитарных нарушений у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, Б.Д. Беспарточный, И.А. Горяинова,- Патент на изобретение №2333749, приоритет 27 ноября 2006г. (8/6).

81. *Медведев, И.Н. Способ нормализации содержания липидов в мембранах тромбоцитов у новорожденных поросят с анемией / И.Н. Медведев, Е.Г. Краснова, Б.Д. Беспарточный.- Решение о выдаче патента по заявке на изобретение №2007140161 от 25.08.2008г., приоритет 29 октября 2007г. (5/3).

82.*Медведев, И.Н. Способ ускоренной нормализации тромбопластинообразования у новорожденных поросят с анемией / И.Н. Медведев, Е.Г. Краснова, Б.Д. Беспарточный,- Решение о выдаче патента по заявке на изобретение №2007139532 от 25.08.2008г., приоритет 24 октября 2007г. (7/5).

83.*Медведев, И.Н. Оптимизация первичного гемостаза у новорожденных поросят с анемией / И.Н. Медведев // Технологии живых систем.-2009.-Т.6, №1.-С. 14-22.

*- публикации в рецензируемых изданиях, рекомендуемых ВАК РФ.

Бумага писчая. Печать оперативная. Усл. печ. листов 2.0. Тираж 100 экз. Заказ №8717. МУП «Курская городская типография» 305004, г.Курск, ул.Ленина,77