Физиологические свойства и жирнокислотный состав спермы быков при использовании биологически активного препарата "Милайф"

Леднев, Антон Вениаминович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Физиологические свойства и жирнокислотный состав спермы быков при использовании биологически активного препарата "Милайф"
ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Физиологические свойства и жирнокислотный состав спермы быков при использовании биологически активного препарата "Милайф""

На правах

Леднев Антон Вениаминович

ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА И ЖИРНОКИСЛОТНЫЙ СОСТАВ СПЕРМЫ БЫКОВ ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОГО ПРЕПАРАТА «МИЛАЙФ»

03.00.13 - Физиология 03.00.04-Биохимия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Нижний Новгород - 2005

Работа выполнена в ФГОУ ВПО «Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия» Минсельхоза РФ на кафедре акушерства и зоогигиены.

Научные руководители: доктор биологических наук, профессор

Успенский Александр Николаевич доктор биологических наук Бопдарин Юрий Аркадьевич

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Великанов Валериан Иванович кандидат биологических наук Тулупов Геннадий Васильевич

Ведущая организация:

ГНУ «Научно-исследовательский ветеринарный институт Нечерноземной зоны» РФ РАСХН

Защита состоится «» ¿У^^/^с/ 2005 г. в 'Ту часов на заседании диссертационного совета Д 220.047.01 при ФГОУ ВПО «Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия» по адресу: 603107, Нижний Новгород, пр. Гагарина, 97.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия»

Автореферат разослан « Л6 » 2005 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Иващенко М.Н.

¿oog-fr Pf 6 о

jo^g 3

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы.

В настоящее время предложены различные технолоши замораживания спермы. Они имеют весьма существенные различия в составе консервирующих сред, технологических приемах подготовки объекта к замораживанию, техники замораживания и оттаивания. Замораживание спермы дает ощутимые экономические выгоды, существенно снижает транспортные расходы при перевозке криоконсервированного материала.

Развитие метода сохранения семени сельскохозяйственных животных открытого В.К. Миловановым, И.И. Соколовской и И.В. Смирновым (1972 г. с приоритетом 1947 г.) связано главным образом с поиском более эффективных биологически активных веществ и защитных сред для сохранения томеостаза и развития адаптивных процессов спермиев вне организма. В связи с этим в течение нескольких десятков лет проводились исследования над изучением структурно-функциональных изменений спермиев при замораживании-оттаивании, разработки защитных веществ и способов повышения резистентности спермиев при криоконсервации (О. Смиг, 1963; А.Н. Успенский, 1965-1982; Н.П. Шергин, 1967; ИЛИ. Шапиев, 1974; И.В. Смирнов, 1974; В.К. Милованов, и др., 1972-1985; Ф.И. Осташко, 1978; Е.М. Платов, 1978; Н.З. Жильцов, B.C. Голубь, 1984; В.Е. Недова, и др., 1990; A.C. Ерохин, и др., 1991; А.Г. Нарижный, и др., 2002; С.С. Паньшин, 2003; В.А. Наук, и др., 1983-2004; E.F. Graham, et all, 1971; Flesch, Gadclla, 2000). Поддержание гомеостаза спермиев вне организма реализуется путем применения различных синтетических сред, которые безвредны для спермиев, предохраняют их от холодового удара, имеют достаточную буферную емкость, определенную изотоничность и pH, обладают бактерицидными свойствами. Основными компонентами синтетических сред являются: неэлектролиты, электролиты, буферные соединения, антиоксиданты, протекторы липидной природы и антибактериальные вещества. В скотоводстве проблему криоконсервирования спермы можно считать вполне решенной, однако, технология замораживания непрерывно совершенствуется, определяя для исследователей новые вопросы и задачи.

Важным элементом технологам является криозащитная среда для разбавления, замораживания и оттаивания спермы. В последнее время возникла необходимость заняться усовершенствованием синтетических сред для замораживания семени быка с использованием новых веществ, которые бы обеспечили большую биологическую полноценность оттаянных сперматозоидов, и тем самым повышали оплодотворяющую способность заморожено-оттаянной спермы животных.

ингредиентов, включающий: низкомолекулярные олигопсптидные соединения, щелочные олигопетиды, 18 аминокислот, (в т.ч. незаменимые триптофан, лизин, метионин). Содержание аспарагиновой и глутаминовой аминокисло! приближается к их содержанию в животных белках. Компонентами «Милайфа» являются ненасыщенные жирные кислоты, 50% из которых приходится на долю линоленовой кислоты; углеводы представлены гликанами, органическими кислотами (в т.ч. яблочной, лимонной, янтарной); в состав препарата входят также витамины группы В (В1, В2, В4, В6, В12), фолиевая, никотиновая, паптотеновая кислоты и убихиноны <36, <39, (210. Минеральный состав представлен 22 жизненно важными микро- и макроэлементами. Учитывая данный состав препарата «Милайф» способный согласно теоретическим предпосылкам обеспечить сохранение структуры, функции и биоэнергетику сперматозоидов мы сочли целесообразным проведение исследований по его влиянию на биологические свойства спермиев.

Цель и задачи исследований.

Целью данной работы является изучение влияния препарата «Милайф» на физиологические свойства и жирнокислотный состав спермы быков. Для достижения цели были поставлены следуюнще задачи:

• Определение оптимальной концентрации биологически активного препарата, обеспечивающей физиологическую защиту при глубоком замораживании спермы быков.

• Изучение жирнокислотного состава спермы быков в условиях глубокого замораживания.

• Определение оплодотворяющей способности спермы с включением в разбавитель биологически активного препарата «Милайф».

Научная новизна исследований.

Разработан разбавитель для глубокого замораживания спермы быков на основе биологически активного препарата «Милайф» и установлена в биологически активном состоянии высокая оплодотворяющая способность спермы.

Определена оптимально-эффективная концентрация препарата «Милайф» для сохранения жизнеспособности сперматозоидов.

Впервые изучен и выявлен специфический состав высших жирных кислот общих липидов сперматозоидов в условиях глубокого замораживания и последующего оттаивания при подготовке к искусственному осеменению в специфической среде с использованием в составе разбавителя препарата «Милайф».

Практическая ценность работы.

часто рекомендуемого в практике компонента синтешческой среды для длительного хранения спермы быков.

Дана оценка важнейших структурных компонентов спермы быков -высших жирных кислот общих липидов. Специфический состав кислот, включающий высокие уровни относительного содержания насыщенных кислот, в частности 5,8,11 - эйкозатриеновую кислоту и минорных полйеновых кислот, при одновременном уменьшении объема незаменимой 5,8,11,14-эйкозатетраеновой (арахидоновой) кислоты, позволяет рекомендовать его в качестве теста, характеризующего жизнеспособность спермы.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Оценка физиологических свойств спермы быков в условиях применения биологически активного препарата «Милайф»;

2. Жирнокислотный состав общих липидов спермы быков в экспериментах, включающих хранение и подготовку ее к практическому применению с использованием биологически активного препарата «Милайф».

Апробация работы.

Материалы проведенных исследований были доложены, обсуждены на: научно-практических конференциях НГСХА (2001-2003 г); на международной научно-практической конференции «Роль и значение метода искусственного осеменения сельскохозяйственных животных в прогрессе животноводства XX и XXI веков» (ВИЖ, Дубровицы, 2004 г); на международной научно-практической конференции «Вклад молодых ученых в развитии аграрной науки XXI века» (Рязань, 2004 г); на заседаниях кафедры акушерства и зоогигиены сельскохозяйственных животных Нижегородской государственной сельскохозяйственной академии (2002-2005 I).

Публикации материалов исследований.

По материалам диссертационной работы опубликовано 5 статей, в которых отражены основные результаты исследований.

Структура и объем работы.

Диссертация изложепа па 131 странице компьютерного текста и состоит из общей характеристики работы, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, изложения полученных результатов и их обсуждения, выводов, практических предложений и списка цитируемой литературы. Работа содержит 15 таблиц, 13 рисунков. Список используемой литературы включает 266 источников, в том числе 120 иностранных.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Научно-исследовательская работа выполнялась в период с 2002 по 2005 гг. Лабораторные исследования были выполнены в: лабораториях кафедры акушерства и зоогигиены Нижегородской государственной

сельскохозяйственной академии; лабораторных и производственных условиях ОАО «Нижегородское» по племенной работе; экспериментально-клинической лаборатории Республиканского гастроэнтерологического центра научно-исследовательского института детской гастроэнтерологии Минздрава России. Научно-производственные исследования проводились на базе учхоза «Новинки» Нижегородской государственной сельскохозяйственной академии, Богородского района, Нижегородской области.

Все эксперименты проводили согласно прилагаемой схемы исследований.

СХЕМА ИССЛЕДОВАНИЙ

Объектом исследования служила сперма быков производителей черно-пестрой, швицкой и голштинской пород принадлежащих ОАО «Нижегородское» по племенной работе. Исследование спермы проводили в соответствии с действующими ГОСТами: 20909.2 - 75, 20909.3-75, 20909.4 -75.

Изотоническую концентрацию нового компонента разбавителя установили биологическим методом.

При определении оптимального состава разбавителя нами была изучена живучесть после замораживания-оттаивания спермы методом треугольных систем по В.К. Милованову (1962) с величиной интервалов в 20% и в 10% при всех соотношениях трех компонентов (желток куриного яйца, изотонический раствор лактозы, изотонический раствор изучаемого препарата «Милайф») с добавлением глицерина (66 вариантов).

Определение жирнокислотного состава общих липидов методом газожидкостной хроматографии

Анализ жирных кислот в составе общих липидов спермы быков проводили методом газовой хроматографии. Отделение спермы от семенной жидкости проводили путем многократного отмывания в физиологическом растворе (Gadella, Flesch, 2000). Общие липиды выделяли по Folch (1953) хлороформ-метанольной смесью (2:1 по объему) из расчета 1 объем спермы и 15 объемов смеси, путем 3-х разового (по 0,5) этапного экстрагирования. Экстракты объединяли и промывали дважды раствором 5% KCl, который затем отделяли в делительной воронке. Экстракт выпаривали досуха под вакуумом при комнатной температуре, добавляли 2 мл 5% раствора H2S04 в метаноле и инкубировали в течение 60 мин при 80 °С для получения термостабильных производных - метиловых эфиров жирных кислот, необходимых для последующего хроматографического анализа (Э. Хевтман, 1986). Метиловые эфиры жирных кислот реэкстрагировали из реакционного осадка гексаном (812 мл), каторый выпаривали до 0,02-0,50 мл, в зависимости от количества выделяемых липидов.. Для разделения кислот применяли газовый храмотограф серии «Цвет-110» с ионизационно-пламенным детектором в стеклянных колонках размером 200 х 0,35 см, заполненных хроматоном N-AW-DMCS (0,125-0,160 мм) + 4,5% полидиэтиленгликольсукцината при следующих стандартных условиях анализа: температура испарителя 200 °С, термостата колонок 185 °С. Кроме того, применяли режим программирования температуры от 75 °С до 185 °С с интервалом 6 °С/мин. Поток газа носителя (азот особой чистоты) не превышал 30 мл/мин. Для построения калибровочных графиков анализировали характеристики каждой из кислот. Концентрацию кислот в смеси (%) определяли методом внутренней нормировки по соответствующей формуле (Б.В. Столяров, И.М. Савинов, А.Г. Витгенберг, 1978). Учет результатов: площади пиков на хроматограммах определяли с помощью измерительной лупы, умножая высоту пика на его ширину, измеренную в точке

'/г высоты. Затем определяли долю каждого пика от общей площади всех пиков (в %), т.е. определяли содержание каждой кислоты (в %) от общего количества кислот.

Научно-производственный опыт по осеменению животных

По завершению лабораторных опытов, в которых были выяснены условия, необходимые для замораживания семени быков в разработанной нами синтетической среде, был поставлен научно-производственный опыт в учхозе «Новинки» НГСХА, Богородского района, Нижегородской области.

Коров в подопытные и контрольные группы подбирали клинически здоровых по принципу аналогов.

Опыт проводили по следующей схеме:

1. Группа - обычное разбавление ЛГЦЖ (лактозо-дитрат-глицерин-

желточной) средой (контроль).

2. Группа - разбавление с применением препарата «Милайф». Сперму замораживали в форме гранул (опыт).

Осеменяли коров ректоцервикарьным способом, контрольным и подопытным семенем.

Результаты осеменения учитывали по: проценту коров не повторивших охоту после первого осеменения, итогам ректального исследования спустя 6090 дней после первого осеменения.

Общий объем исследований составил 2572 пробы физиолого-биохимических анализов. Статистическую обработку результатов проводили с использованием стандартного пакета статистических программ Microsoft Excel 2002 и по H.A. Плохинскому (1969).

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Определение оптимального количества биологически активного препарата «Милайф»

Первоначально нами была установлена изотоническая концентрация биологически активного препарата «Милайф» для спермы быка биологическим методом. Полученные данные по определению живучести спермы быка в изотоническом растворе биологически активного препарата «Милайф» при 37 °С по средним данным пяти опытов представлены в таблице 1.

Приведенные результаты свидетельствуют о том, что наивысшей живучестью обладает сперма быка в растворе биологически активного препарата «Милайф» с концентрацией 2,5 % - 4,25 ч. Абсолютный показатель живучести в растворе биологически активного препарата «Милайф» при концентрации 2,5 % составил 2,30.

Эффективность введения биологически активного

препа| эата «Милайф» в сперму быков (п=5)

Концентрация растворов (%) Живучесть (ч) Абсолютный показатель живучести

0,5 3,25 ±0,10 1,31 ±0,03**

1,0 3,50 ±0,10 1,65 ±0,01**

1,5 3,40 ± 0,04 1,55 ±0,01**

2,0 4,00 ±0,20 1,99 ±0,01**

2,5 4,25 ±0,10 2,30 ± 0,06*

3,0 3,90 ±0,10 1,85 ±0,01*

3,5 3,70 ±0,10 1,74 ±0,02*

4,0 3,30 ±0,10 1,50 ±0,03**

4,5 2,60 ±0,10 1,07 ±0,02**

♦ Р < 0,01

** Р < 0,001

Определение сочетаемости трех компонентов среды

Для дальнейшего определения состава среды, с учетом полученной изотонической концентрации биологически активного препарата «Милайф», нами была изучена возможность оптимального сочетания трех основных компонентов (лактоза, желток куриного яйца и изучаемый препарат) в средах для замораживания. При разбавлении спсрмы, предварительно оцененною по активности и концентрации, мы использовали раствор вышеуказанного препарата при всех возможных их сочетаниях и соотношениях через 10% по методу треугольных систем (по В.К. Милованову, 1962). Результаты исследования показаны на рисунке 1.

Из данных полученных при использовании метода треугольника с интервалом в 10 % (рис. 1.) видно, что наилучшие условия для жизни спермиев (по сохранению ими подвижное ш и продолжительности выживания при 37 С), обеспечивает раствор, находящийся в 64 варианте, со следующим соотношением изотонических концентраций компонентов:

Лактоза - 20 %; «Милайф» - 80 %

Влияние биологически активного препарата «Милайф» на переживаемость сперматозоидов в процессе замораживания-оттаивания

Методом встречных радов мы попытались ввести в состав существующей ЛЦГЖ (лактозо-цитрат-глицерин-желточной) среды новый отечественный биологически активный препарат «Милайф». Пример введения вышеуказанного препарата представлен в таблице 2.

Анализ таблицы 2 показывает, что лучшей подвижностью и живучестью обладают сперматозоиды, если в ЛЦГЖ (лактозо-цитрат-глицерин-желточной) среде присутствует 15 % биологически активного препарата «Милайф». В результате проведенных исследований методом биологического контроля, нами был определен оптимальный уровень биологически активного препарата «Милайф» в среде для замораживания и длительного хранения спермы быков, который равен 15 % от 2,5% изотонического раствора.

Желток

20% лактоза

80%

«Милайф»

Изотонический раствор лактозы

Ба> 1,0 8а> 1,5 8а< 1,0

Изотонический раствор изучаемого препарата «Милайф»

Рис. 1. Оптимизация трехкомпонентного разбавителя спермы при ъ=Ъ1 С.

Таблица 2.

Выживаемость оттаянной спермы в разбавителе с препаратом «Милайф»

№ пробирки 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11

ЛЦГЖ среда 100 95 90 85 80 75 70 65 60 55 50

«Милайф» 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50

Подвижность свежеразбавленной спермы, % 80 80 80 80 75 75 70 65 65 60 60

Подвижность после оттаивания, % 40 45 45 45 40 35 35 35 30 30 30

Живучесть свежеразбавленной спермы (ч) 19 20 21 23 20 16 14 11 9 8 7

Живучесть оттаянной спермы при 37 °С, (ч) 6 8 9 11 9 7 6 5 5 4 3

Дальнейшее совершенствование синтетической среды для глубокого замораживания и длительного хранения спермы быков проводилось посредством исследования сочетаемости трех компонентов (желтка куриного яйца, лактозы, препарата «Милайф») данной синтетической среды в результате замораживания-оттаивания. Установление биологического уровня исследуемого препарата проводилось методом треугольника по В.К. Милованову (1962). Целью применения данного метода являлось определение оптимального соотношения трех компонентов среды и в частности нового отечественного биологически активного препарата «Милайф». Расчетным являлся изотонический раствор исследуемого препарата «Милайф» - 2,5 %.

Были проведены исследования по определению живучести в смесях по методу треугольника с интервалом 10 %. Результаты исследования эффективности различных сочетаний исследуемых компонентов приведены на рисунке 2.

На основании данных, представленных на рисунке 2, установлено, что смеси изотонических растворов исследуемых веществ по восстановлению подвижности и выживаемости спермиев при 37 °С, после замораживания-оттаивания, является наиболее благоприятным для спермиев быка в 64-ом варианте. При разбавлении спермы для замораживания к опытной среде добавляли 5 мл глицерина.

Желток

[49)' <51)

Изотонический раствор лактозы

Изотонический раствор изучаемого препарата «Милайф»

Ба > 0,5 Ба> 1,0 М. 8а> 1,5 Ба < 0,5

Рис. 2. Оптимизация разбавителя с препаратом «Милайф» после замораживания-оттаивания.

Если счита ть вариант № 64 синтетической средой, то ее состав представлен в таблице 3.

Указанные рецепты синтетических сред уместно применять при разбавлении спермы быков перед замораживанием в форме необлицованных гранул. Это позволит повысить отдельные биологические свойства спермы. В лабораторных условиях применение этих сред было эффективным.

Оптимальный состав среды (на 100 мл воды)

Ингредиенты Количество

Лактоза, г 2,3

«Милайф», г 2,0

Глицерин, мл 5,0

Влияние препарата «Милайф» на морфологию спермиев

Содержание спермиев с анормальной морфологией приведено в таблице 4.

Таблица 4.

Содержание анормальных форм спермиев (п-5)

Уклоняющиеся формы живчиков Количество анормальных форм спермиев N„,»/0 к„

экз. %

Контроль

Головка Шейка Тело Жгутик 2,0 ± 0,3 3,0 ± 0,6 5,0 ± 0,7 6,0 ±0,6 12,5 ± 2,7 18,8 ±3,2 31,2 ±5,1 37,5 ± 2,1 12,3 ± 0,9 0,14 ±0,01

Всего 16,0 ± 1,1 100,0 - -

Опыт

Головка Шейка Тело Жгутик 2,0 ± 0,2 3,0 ± 0,5 4,0 ± 0,5 4,0 ± 0,2 16,7 ±0,2 16,7 ±0,7 33,3 ±5,1 33,3 ± 2,6 9,2 ± 1,0 * 0,10 ±0,01*

Всего 12,0 ±1,5* 100,0 - -

* - Р<0,05

Анализ таблицы 4 показывает, что использование изучаемого препарата «Милайф» в качестве одного из компонентов среды вызывает незначительное снижение анормальных форм спермиев с 16 в контроле до 12 в опыте. Основная доля морфологических изменений приходится на долю жгутика 37,5 % в контроле и 33,3 % в опыте, что подтверждает такое высказывание, что такие деформации жгутика, как закручивание, петлеобразование и др., возникают очень легко и у нормальных спермиев под влиянием изменений физико-химических условий среды (В.К. Милованов, 1962).

Изучение влияния препарата «Милайф» па количественное содержание мертвых спермиев

Другое направление в поиске объективной оценки качества спермы является определение количественного содержания живых и мертвых спермиев. Количественное содержание мертвых спермиев представлено в таблице 5.

Таблица 5.

Количество мертвых спермиев (п=5)

Среда Количество мертвых спермиев, %

Контроль 13,0 ±0,9

Опыт 9,5 ± 0,7 *

*-Р<0,05

Большие различия могут быть обнаружены в физиологических свойствах сперматозоидов. В каждом эякуляте можно найти как весьма активных, так и уже мертвых спермиев. Из таблицы 5 видно, что количество мертвых спермиев ниже на 3,52 % по сравнению с контролем.

Влияние препарата «Милайф» на устойчивость сперматозоидов быков к замораживанию

Изучение влияния препарата «Милайф» на устойчивость спрерматозоидов к глубокому замораживанию показано в таблице 6.

Таблица 6.

Устойчивость спермиев к холодовому шоку (п=5)

Среда Подвижность спермиев Коэффициент устойчивости

до охлаждения после охлаждения

Контроль Опыт 8,00 ±0,02 8,00 ±0,02 4,00 ±0,04 5,00 ± 0,04 0,50 ±0,10 0,63 ± 0,04 *

* - Р<0,05

Как видно из таблицы 6, препарат «Милайф» оказывает выраженный защитный эффект при замораживании спермы быков. При введении в состав разбавителя изучаемого препарата активность заморожено-оттаянных сперматозоидов была сравнима с контрольной группой, где использовали желток куриного яйца. В опытной группе отмечена более высокая подвижность сперматозоидов сразу после оттаивания: 5,0 баллов против 4,0 баллов в контроле.

Снижение микробного числа при использовании препарата «Милайф»

Влияние нового отечественного препарата «Милайф» на микробный фон спермы быков представлен в таблице 7.

Таблица 7.

Влияние препарата «Милайф» на микробный фон _спермы быков после оттаивания (п=5)__

Группа Микробное число шт. в 1мл. Коли-титр Условнопатогенная микрофлора

Контроль Опыт 40,0 ±6,1 20,0 ± 8,5 * отриц. отриц. нет нет

* - Р<0,05

Данные таблицы 7 показывают, что при использовании изучаемого препарата микробное число снижалось в 2 раза по сравнению с контролем, где в качестве санирующего препарата применяется «Полигеп». В ряде случаев удается получать безмикробную сперму.

Состав жирных кислот спермы быков

В составе общих липидов количество высших жирных кислот спермы быков, в свежеполученной сперме, в разработанной нами газохроматофафических условиях были выделены и идентифицированы следующие 17 высших жирных кислот: тетрадекановая (миристиновая - Си о), пентадекановая (Ci50), гексадекановая (пальмитиновая - Ci<¡o), 9-гексадекановая (пальмитолеиновая - Cjg ¡), гептадекановая (маргариновая - Спо), октадекановая (стеариновая - Ci8o), 9-октадекановая (олеиновая - Cl81), 9,12-октадекановая (линолевая - С)82), 6,9,12-октадекатриеновая (липоленовая - С)8з), 8,9-эйкозадиеновая (С20 2), 5,8,11-эйкозатриеновая (С20з), 5,8,11,14-эйкозатетраеновая (арахидоновая - С204), 5,8,11,14,17-эйкозапентаеновая (С205), 4,8-дозадиеновая (С222). 4,8,12,15-дозатетраеновая (С224), 4,8,12,15,19-докозапентаеновая (клупанодоновая - С22 5), 4,8,12,15,19,23-докозагексаеновая (С22 б)- Количественные результаты по составу высших жирных кислот спермы быков приведены в таблице 8.

Анализ полученных данных о фракционном составе высших жирных кислот спермы быков показал, что жирные кислоты Ci50, С170, Ci83, С2П2, С20з, С222, С22 4 отмечаются в сперме быков в незначительных и даже следовых количествах. Основное количество высших жирных кислот фракционного состава (до 90%) включают 8 кислот: С160 - 29,0 %, С^о - 17,2 %, С)81 - 18,9 %, Cis 2 - 10,6 %, С20 3 - 0,4 %, С20-4 - 6,7 %, С22.5 ~ 2,6 % и С22 6 - 1,6 %• Большое процентное включение в липиды среди них составляют полиеновые кислоты (С!82, С204, С20 5, С22 б)- Доля насыщенных кислот (См 0, С)5 о, С|6о, С)8 о) меньше (49,3%), чем полиеновых кислот.

Состав жирных кислот общих липидов (М±ш)

ЛГл Содержание жирных кислот, %

Л 2 гтЛтт Кислота Название кислоты препарат нативная сперма

11 \11 «Милайф» (п=22)

1 С)4 0 Миристиновая 0,5 1,5 ± 0,3

2 С)50 Пентадекановая 0,7 0,5 ±0,1

3 С)бо Пальмитиновая 19,3 29,0 ±1,0

4 С)61 9,10-гексадеценовая 1,7 4,0 ± 0,4

5 Спо Маргариновая 0,5 1Д ±0,1

6 С]80 Стеариновая 6,3 17,2 ±0,4

7 С)8 I Олеиновая 5,7 18,9 ±0,9

8 С[8 2 Линолевая 12,9 10,6 ±0,8

9 С]83 Октадекатриеновая 52,3 0,7 ±0,1

10 С202 Эйкозадиеновая следы 0,9 ± 0,2

11 СэдЗ Эйкозатриеновая следы 0,4 ±0,1

12 С2ОЧ Арахидоновая следы 6,7 ± 0,5

13 С20 5 Эйкозапентаеновая следы 2,5 ± 0,2

14 С22 2 Докозадиеновая следы 0,6 ±0,1

15 С224 Докозатетраеновая следы 1,2 ±0,1

16 Сг2:5 Докозапентаеновая следы 2,6 ± 0,2

17 С226 Докоза! ексаеновая следы 1,6 ±0,1

Насыщенные жирные кислоты 27,3 49,3 ± 1,4

Ненасыщенные жирные кислоты 72,6 50,7 ±1,1

Моноеновые 7,4 22,9 ±0,6

Полиеновые 65,2 27,8 ± 0,7

Динамика жирных кислот в результате длительного хранения спермы быков

Длительное хранение спермы в глубокозамороженном состоянии приводит к снижению общего количества жирнокислотного состава общих липидов спермы быков по сравнению с соответствующими данными, определенными у нативной спермы. Длительное хранение спермы в глубокозамороженном состоянии увеличивает соотношение между суммой насыщенных и ненасыщенных кислот и уменьшает соотношение между суммой моноеновых и полиеновых кислот в составе ненасыщенных высших жирных кислот спермы быков по сравнению со свежеполученной спермой быков. Уменьшается содержание полиеновых кислот на 52 % по сравнению с содержанием полиеновых кислот в нативной сперме. После хранения увеличивается разница в сперме быков для суммарных насыщенных кислот: 49,3 ± 1,4 % - в нативной сперме и 70,1 ± 3,9 % - в сперме после хранения (табл. 9.).

Таблица 9.

Изменение жирнокислотного состава общих липидов спермы быков в процессе хранения (М±т)

Содержание жирных кислот в

№ спермс, %

Jiü п\п Кислота Название кислоты Нативная сохраненной

(п~22) при -196 °С, (п=31)

1 С|4 0 Миристиновая 1,5 ±0,3 7,1 ± 1,2*

2 Ci50 Пентадекановая 0,5 ± 0,1 6,4 ± 1,2*

3 С160 Пальмитиновая 29,0 ± 1,0 42,1 ±3,1*

4 С,в 1 9,10-гексадеценовая 4,0 ± 0,4 3,4 ±1,1

5 Ci70 Маргариновая 1,1 ±0,1 6,8 ± 1,4*

6 С18О Стеариновая 17,2 ±0,4 9,4 ±1,8*

7 С18 1 Олеиновая 18,9 ±0,9 7,6 ±1,5*

8 С]82 Линолевая 10,6 ± 0,8 12,0 ±3,3

9 Ci8 3 Октадекатриеновая 0,7 ±0,1 0,7 ± 1,5

10 С202 Эйкозадиеновая 0,9 ± 0,2 0,2 ±0,1*

11 С2о з Эйкозатриеновая 0,4 ±0,1 2,5 ± 0,9*

12 С204 Арахидоновая 6,7 ± 0,5 2,4 ± 0,8*

13 С20 5 Эйкозапентаеновая 2,5 ± 0,2 -

14 с22 2 Докозадиеновая 0,6 ±0,1 -

15 С22 4 Докозатетраеновая 1,2 ±0,1 0,4 ± 0,2*

16 C22S Докозапентаеновая 2,6 ± 0,2 0,3 ±0,1*

17 Си 6 Докозагексаеновая 1,6 ±0,1 0,4 ±0,1*

Насыщенные жирные кислоты 49,3 ±1,4 70,1 ± 3,9*

Ненасыщенные жирные кислоты 50,7 ± 1,1 29,9 ±2,1*

Моноеновые 22,9 ±0,6 11,0± 1,5*

Полиеновые 27,8 ± 0,7 18,9 ±2,0*

* - Р<0,05

В результате исследований выявлено, что изменения состава жирных кислот в сперме после хранения были следующие: по сравнению с нативной спермой отсутствовали 2 кислоты (С2о 5 и С22 т), уменьшилось содержание в два и более раз 8-ми кислот, наибольшее отличие от содержания высших жирных кислот в нативной сперме среди них отмечались для С^ 0> С18 ь С2о.г, С20 4, С22 4, С22 5» С22 б- Наблюдалось увеличение содержания следующих высших жирных кислот Сно, С150, С160, Спо, С18 2, С20з, по сравнению с содержанием их в свежеполученной сперме. В результате хранения в жирнокислотном спектре спермы быков преобладает пальмитиновая - С^-о кислота (40,4 %), в свежеполученной сперме она составляет 29,0 %.

Влияние препарата "Милайф" на жирнокислотный состав общих липидов спермы быков

При введении биологически активного препарата «Милайф» в состав разбавителя для длительного хранения в глубокозамороженном состоянии спермы быков способствовало изменению жирнокислотного состава общих липидов спермы быков, представленный в таблице 10.

В частности, в контрольной (хранение при -196 °С) группе отмечалось уменьшение октодекановой (стеариновая) С180, олеиновой С^.ь арахидоновой С20 4, докозапентаеновой С225 и докозагесаеновой С226 кислот. Было выявлено накопление мало активных гексадекановая (пальмитиновая) С160 и эйкозатрисновая С20 з кислот, известных как патогенные факторы, изменяющие структуру клеточных мембран.

Анализ изменения жирно-кислотного состава общих липидов спермы быков можно провести при помощи диаграмм представленных на рисунке 3.

Содержание кислот, %

насыщенные нснасыщмтые моноеновые

Высшие жирные кислоты

ммшеыовые

□ Сперма нативная

□ Стандартное хранение

Ш В состав разбавителя включен препарат "Милайф"

Рис. 3. Жирнокислотный состав общих липидов спермы быков

Таблица 10.

Жирнокислотный состав общих липидов спермы быков в результате введения в состав разбавителя препарата «Милайф» (М±т)

№ п\п Кислота Название кислоты Сохраненной при -196 °С, (п=31) Содержание жирных кислот в сперме с препаратом «Милайф», % (п=42)

1 С)4 0 Миристиновая 7,1 ± 1,2* 0,2 ±0,1*

2 Си о Пентадекановая 6,4 ±1,2* 0,2 ±0,1*

3 С160 Пальмитиновая 42,1 ±3,1* 28,7 ± 1,8*

4 С161 9,10-гексадеценовая 3,4 ±1,1 5,3 ± 0,5*

5 С]7 0 Маргариновая 6,8 ± 1,4* 1,3 ±0,4*

6 С]80 Стеариновая 9,4 ±1,8* 11,2 ± 1,3

7 С]8 1 Олеиновая 7,6 ±1,5* 19,9 ±2,3*

8 С[82 Линолевая 12,0 ± 3,3 20,1 ±2,1*

9 С)8 3 Октадекатриеновая 0,7 ±1,5 0,5 ± 0,4

10 Ого-2 Эйкозадиеновая 0,2 ±0,1* 0,2 ± 0,1

11 Сгоз Эйкозатриеновая 2,5 ± 0,9* 1,1 ±0,3*

12 С20 4 Арахидоновая 2,4 ± 0,8* 8,6 ± 1,4*

13 С205 Эйкозапентаеновая - -

14 С222 Докозадиеновая - -

15 С224 Докозатетраеновая 0,4 ± 0,2* 0,7 ± 0,4

16 С225 Докозапентаеновая 0,3 ±0,1* 1,6 ±0,4*

17 С226 Докозагексаеновая 0,4 ±0,1* 0,4 ±0,1

Насыщенные жирные кислоты Ненасыщенные жирные кислоты Моноеновые Полиеновые 70,1 ± 3,9* 29,9 ±2,1* 11,0 ± 1,5* 18,9 ±2,0* 41,6 ±1,9* 58,4 ± 2,5* 25,2 ±1,0* 33,2 ± 1,6*

* - Р<0,05

Применение биологически активного препарата «Милайф» оказало действие на жирно-кислотный состав общих липидов спермы быков, которое выражалось в следующем: отмечалось незначительное уменьшение гексадекановой (пальмитиновая) С^-о кислоты и увеличение всех остальных основных кислот в частности октодекановой (стеариновая) С18 о, олеиновой С18ь арахидоновой С20 4, докозапентаеновой С22 5 и докозагесаеновой С226 кислот по сравнению с контролем (сперма нативная) сохраняется соотношение между насыщенными и ненасыщенными кислотами.

Оплодотворяющая способность спермы быков

Нами было проведено изучение оплодотворяющей способности семени быка, после осеменения коров, спермой замороженной по варианту изучаемой синтетической среды и ЛЦГЖ (лактозо-цитрат-глицерин-желточной) среды.

Опыт был поставлен на ферме учхоза «Новинки» Нижегородской государственной сельскохозяйственной академии. При расфасовке спермы предназначенной для осеменения использовали гранулы. Результаты по осеменению коров представлены в таблице 11.

Таблица 11.

Сравнительная оценка искусственного осеменения коров

Группы Осеменили коров Бесповторных осеменений Индекс Стельных

число % оплодотворения число %

Опыт 144 91 63,2 ± 3,3 * 1,3 115 79,9 ±2,5*

Контроль 96 47 48,9 ± 3,5 2,1 62 68,8 + 3,8

* - Р<0,05

Результаты искусственного осеменения коров, как видно из данных таблицы 11, были выше, при использовании опытной среды, по сравнению с применяемой для этих же целей лактозо-цитрат-глицерин-желточной (ЛЦГЖ). В среднем эти различия составили 11,1 ± 0,6 % по сравнению с контролем. Кроме того, включение препарата «Милайф» в состав разбавителя способствовало некоторому повышению результативности их первичного осеменения.

ВЫВОДЫ

1. Применение разработанного разбавителя для длительного хранения спермы быков повышает биологическую полноценность и оплодотворяющую способность криоконсервированной спермы на 11,1 ± 0,6 %.

2. Введение в состав разбавителя препарата «Милайф» в условиях глубокого замораживания и последующего оттаивания способствует сохранению состава высших жирных кислот общих липидов сперматозоидов, без отрицательных последствий для физиологической активности спермы быков. Суммарное содержание насыщенных и ненасыщенных кислот соответствует их уровням в нативной сперме.

3. В липидном комплексе сперматозоидов быков состав высших жирных кислот общих липидов характеризуется набором из 17 основных кислот, доминирующими из которых в процентном соотношении являются гексадекановая (С^о) - 29,0 ±1,0 %, октадекановая (С^о) — 17,2 ± 0,4 %, 9-октадекановая (С,8- 18,9 ± 0,9 %, 9,12-октадекановая (С|82) - 10,6 ± 0,8 % и 5,8,11,14-эйкозатетраеновая (С20.4) - 6,7 ± 0,5 %.

4. Состав высших жирных кислот общих липидов сперматозоидов в процессе замораживания-оттаивания изменяется: уменьшается «ненасыщенная» составляющая (29,9 ь 2,1 %), по сравнению со свежевзятой спермой,

имеющая в своем составе незаменимые 8,9-эйкозадиеновую (С 20 г)> 5,8,11,14-эйкозатетраеновую (С20Л 5,8,11,14,17-эйкозапентаеновую (С205), 4,8,12,15,19-докозапентаеновую (С22 5), 4,8,12,15,19,23-докозагексаеновую (С22 б) кислоты при одновременном накоплении насыщенной составляющей (70,1 ± 3,9 %), за счет тетрадекановой (Ci40), пентадекановой (С)5 о), гексадекановой (С|бо), гептадекановой (С]7о) кислот по сравнению с нативной спермой.

5. Установлено, что введение в состав среды для замораживания и длительного хранения спермы быков препарата «Милайф», способствует эффективной защите сперматозоидов при замораживании.

6. Специфический состав жирных кислот общих липидов сперматозоидов, включающий высокие уровни относительного содержания насыщенной составляющей на фоне уменьшения ненасыщенных кислот, в том числе незаменимой 5,8,11,14-эйкозатетраеновой (С204) и полиеновых (5,8,11,14,17-эйкозапентаеновой (С2о:5), 4,8,12,15,19-докозапентаеновой (С225), 4,8,12,15,19,23-докозагексаеновой (С22б)) кислот, при одновременном накоплении неэквивалентной по замене 5,8,11-эйкозатриеновой (С2оз) кислоты; может служить одной из характеристик жизнеспособности спермы в условиях замораживания-оттаивание.

7. Оптимальная концентрация препарата «Милайф» при добавлении в состав разбавителя для глубокого замораживания и длительного хранения спермы быков является интервал 2,0-3,0 %.

8. Препарат «Милайф», введенный в состав среды обладает противомикробной активностью, подтвержденной снижением микробного числа с 40 + 6,1 до 20 ± 8,5 шт/мл.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для повышения результативности искусственного осеменения коров и телок, считаем целесообразно вводить в состав разбавителя препарат «Милайф» для длительного хранения спермы быков.

2. Проводить определение жирнокислотного состава общих липидов спермы быков методом газожидкостной хроматографии для определения качества спермы быков на различных этапах ее подготовки к практическому применению.

3. Результаты полученных исследований могут быть рекомендованы для включения в программы соответствующих курсов акушерства, гинекологии и биотехнологии размножения животных при подготовке специалистов биологического, ветеринарного и зооинженерного профиля.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Леднев, A.B. Применение биологически активного препарата «Милайф» и его роль в повышении переживаемости спермы быков /A.B. Леднев //Вклад молодых ученых в развитии аграрной науки XXI века: Материалы

международной научно-практической конференции молодых ученых и специалистов - г. Рязань. - 2004 г. - С. 445-447.

2. Успенский, А.Н. Влияние биологически активного препарата «Милайф» на переживаемость и оплодотворяющую способность спермы быков / A.II. Успенский, A.B. Леднев // Роль и значение метода искусственного осеменения сельскохозяйственных животных в прогрессе животноводства XX и XXI веков: Материалы международной научно-практической конференции 22-24 марта 2004 г. - Дубровицы. - С. 131-133.

3. Успенский, А.Н. Значение биологически активного препарата «Милайф» в повышении оплодотворяющей способности животных /А.Н. Успенский, A.B. Леднев //Роль и значение метода искусственного осеменения сельскохозяйственных животных в прогрессе животноводства XX и XXI веков: Материалы международной научно-практической конференции 22-24 марта 2004 г. - Дубровицы. - С. 274-276.

4. Леднев, A.B. Влияние нового отечественного биологически активного препарата "Милайф" на жирно-кислотный состав общих липидов спермы быков / A.B. Леднев, Ю.А. Богдарин, А.Н. Успенский //Проблемы современной ветеринарии: Материалы региональной научно-практической конференции молодых ученых студентов. - г. Нижний Новгород. - 2005. - С. 31-34.

5. Леднев, A.B. Жирнокислотный состав общих липидов спермы быков /A.B. Леднев, Ю.А. Богдарин, А.Н. Успенский //Проблемы современной ветеринарии: Материалы региональной научно-практической конференции молодых ученых студентов - г. Нижний Новгород. - 2005. - С. 34-37.

к»

Печать офсетная. Усл. печ. л. 1,5. Тираж 100 экз. Заказ 161

Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия 603107, г. Нижний Новгород, проспект Гагарина, 97

Типография НГСХА

»11313

РНБ Русский фонд

2006-4 10119

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Леднев, Антон Вениаминович

Общая характеристика работы.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Криоконсервация спермы сельскохозяйственных животных и влияние эффекта оттаивания на сохранение активности спермы.

1.2. Влияние замораживания и оттаивания на структурный состав спермы.

1.3. Устойчивость спермы к замораживанию у различных сельскохозяйственных животных.

1.4. Особенности состава сред рекомендованных для разбавления и хранения спермы сельскохозяйственных животных.

1.5. Характеристика нового отечественного препарата «Милайф» для оценки возможности его применения в среде для разбавления и глубокого замораживания спермы быков.

Глава 2. Материалы и методы исследования.

2.1. Место и условия проведения исследований.

2.2. Методы исследования.

2.2.1. Определение оптимального состава синтетической среды для разбавления и замораживания спермы быков.

2.2.2. Определение жирнокислотного состава общих липидов методом газожидкостной хроматографии.

2.3. Научно-производственный опыт по осеменению животных.

2.4. Биометрическая обработка полученных опытных данных.

Глава 3. Результаты собственных исследований и их обсуждение.

3.1. Определение оптимального состава синтетической среды для разбавления и замораживания спермы быков.

3.1.1. Определение оптимального количества биологически активного препарата «Милайф» для сохранения жизнеспособности спермы быков.

3.1.2. Определение сочетаемости трех компонентов среды.

3.1.3. Влияние биологически активного препарата «Милайф» на переживаемость сперматозоидов в процессе замораживания-оттаивания.

3.1.4. Влияние препарата «Милайф» на морфологию спермиев.

3.1.5. Изучение влияния препарата «Милайф» на количественное содержание мертвых спермиев.

3.1.6. Влияние препарата «Милайф» на устойчивость сперматозоидов быков к замораживанию.

3.1.7. Снижение микробного числа при использовании препарата «Милайф».

3.2. Определение жирнокислотного состава общих липидов методом газожидкостной хроматографии.

3.2.1. Состав жирных кислот спермы быков.

3.2.2. Динамика жирных кислот в результате длительного хранения спермы быков.

3.2.3. Влияние препарата "Милайф" на жирнокислотный состав общих липидов спермы быков.

3.3. Оплодотворяющая способность спермы быков.

Выводы.

Рекомендации по использованию научных выводов диссертационной работы.

Список используемой литературы.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Физиологические свойства и жирнокислотный состав спермы быков при использовании биологически активного препарата "Милайф""

В настоящее время предложены различные технологии замораживания спермы. Они имеют весьма существенные различия в составе консервирующих сред, технологических приемах подготовки объекта к замораживанию, техники замораживания и оттаивания. Замораживание спермы дает ощутимые экономические выгоды, существенно снижает транспортные расходы при перевозке криоконсервированного материала.

Развитие метода сохранения семени сельскохозяйственных животных открытого В.К. Миловановым, И.И. Соколовской и И.В. Смирновым (1972 г. с приоритетом 1947 г.) связано главным образом с поиском более эффективных биологически активных веществ и защитных сред для сохранения гомеостаза и развития адаптивных процессов спермиев вне организма. В связи с этим в течение нескольких десятков лет проводились исследования над изучением структурно-функциональных изменений спермиев при замораживании-оттаивании, разработки защитных веществ и способов повышения резистентности спермиев при криоконсервации (О. Смит, 1963; А.Н. Успенский, 1965-1982; Н.П. Шергин, 1967; И.Ш. Шапиев, 1974; И.В. Смирнов, 1974; В.К. Милованов, и др., 1972-1985; Ф.И. Осташко, 1978; Е.М. Платов, 1978; Н.З. Жильцов, B.C. Голубь, 1984; В.Е. Недова, и др., 1990; А.С. Ерохин, и др., 1991; А.Г. Нарижный, и др., 2002; С.С. Паныпин, 2003; В.А. Наук, и др., 1983-2004; E.F. Graham, et all, 1971; Flesch, Gadella, 2000). Поддержание гомеостаза спермиев вне организма реализуется путем применения различных синтетических сред, которые безвредны для спермиев, предохраняют их от холодового удара, имеют достаточную буферную емкость, определенную изотоничность и рН, обладают бактерицидными свойствами. Основными компонентами синтетических сред являются: неэлектролиты, электролиты, буферные соединения, антиоксиданты, протекторы липидной природы и антибактериальные вещества. В скотоводстве проблему криоконсервирования спермы можно считать вполне решенной, однако, технология замораживания непрерывно совершенствуется, определяя для исследователей новые вопросы и задачи.

Важным элементом технологии является криозащитная среда для разбавления, замораживания и оттаивания спермы. В последнее время возникла необходимость заняться усовершенствованием синтетических сред для замораживания семени быка с использованием новых веществ, которые бы обеспечили большую биологическую полноценность оттаянных сперматозоидов, и тем самым повышали оплодотворяющую способность заморожено-оттаянной спермы животных.

В настоящее время в различных областях медицины, в том числе гинекологической практике успешно применяется биологически активный препарат «Милайф» (И. В. Кучерова, 1997; В. И. Дижа и др., 1999; JI. Г. Макаркина и др., 2001; В. Б. Рудакова и др., 2001; Н. И. Яковлева и др., 2002). В составе этого препарата содержится сложный биохимический комплекс ингредиентов, включающий: низкомолекулярные олигопептидные соединения, щелочные олигопептиды, 18 аминокислот, (в т.ч. незаменимые триптофан, лизин, метионин). Содержание аспарагиновой и глутаминовой аминокислот приближается к их содержанию в животных белках. Компонентами «Милайфа» являются ненасыщенные жирные кислоты, 50% из которых приходится на долю линоленовой кислоты; углеводы представлены гликанами, органическими кислотами (в т.ч. яблочной, лимонной, янтарной); в состав препарата входят также витамины группы В (В1, В2, В4, В6, В12), фолиевая, никотиновая, пантотеновая кислоты и убихиноны Q6, Q9, Q10. Минеральный состав представлен 22 жизненно важными микро- и макроэлементами. Учитывая данный состав препарата «Милайф» способный согласно теоретическим предпосылкам обеспечить сохранение структуры, функции и биоэнергетику сперматозоидов мы сочли целесообразным проведение исследований по его влиянию на биологические свойства спермиев.

Цель и задачи исследований

• Изучение жирнокислотного состава спермы быков в условиях глубокого замораживания.

Научная новизна исследований

Практическая ценность работы

Предложен разбавитель, позволяющий повышать качественные показатели сохранности оплодотворяющей способности спермы быков. Применение препарата «Милайф» позволяет исключить желток куриного яйца из наиболее часто рекомендуемого в практике компонента синтетической среды для длительного хранения спермы быков.

Дана оценка важнейших структурных компонентов спермы быков -высших жирных кислот общих липидов. Специфический состав кислот, включающий высокие уровни относительного содержания насыщенных кислот, в частности 5,8,11 - эйкозатриеновую кислоту и минорных полиеновых кислот, при одновременном уменьшении объема незаменимой 5,8,11,14-эйкозатетраеновой (арахидоновой) кислоты, позволяет рекомендовать его в качестве теста, характеризующего жизнеспособность спермы.

Основные положения, выносимые на защиту;

Апробация работы

Материалы проведенных исследований были доложены, обсуждены и получили положительную оценку: на научно-практических конференциях НГСХА (2001-2003 г); на международной научно-практической конференции «Роль и значение метода искусственного осеменения сельскохозяйственных животных в прогрессе животноводства XX и XXI веков» (ВИЖ, Дубровицы, 2004 г); на международной научно-практической конференции «Вклад молодых ученых в развитии аграрной науки XXI века» (Рязань, 2004 г); на заседаниях кафедры акушерства и зоогигиены сельскохозяйственных животных Нижегородской государственной сельскохозяйственной академии (2002-2005г).

Публикации материалов исследований

По материалам диссертационной работы опубликовано пять статей, в которых отражены основные результаты исследований.

Структура и объем работы

Диссертация изложена на 131 странице компьютерного текста и состоит из общей характеристики работы, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, изложения полученных результатов и их обсуждения, выводов, практических предложений и списка цитируемой литературы. Работа содержит 15 таблиц, 13 рисунков. Список используемой литературы включает 266 источников, в том числе 120 иностранных.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Леднев, Антон Вениаминович

ВЫВОДЫ

3. В липидном комплексе сперматозоидов быков состав высших жирных кислот общих липидов характеризуется набором из 17 основных кислот, доминирующими из которых в процентном соотношении являются гексадекановая (Ci6:o) - 29,0 ± 1,0 %, октадекановая (Ci8:o) - 17,2 ± 0,4 %, 9-октадекановая (Ci8:i) - 18,9 ± 0,9 %, 9,12-октадекановая (Ci8:2) - 10,6 ± 0,8 % и 5,8,11,14-эйкозатетраеновая (Сгсы) - 6,7 ± 0,5 %.

4. Состав высших жирных кислот общих липидов сперматозоидов в процессе замораживания-оттаивания изменяется: уменьшается «ненасыщенная» составляющая (29,9 ±2,1 %), по сравнению со свежевзятой спермой, имеющая в своем составе незаменимые 8,9-эйкозадиеновую (С20.2)> 5,8,11,14-эйкозатетраеновую (С20.4Х 5,8,11,14,17-эйкозапентаеновую (С20.5Х 4,8,12,15,19-докозапентаеновую (Сгг^Х 4,8,12,15,19,23-докозагексаеновую (С22:б) кислоты при одновременном накоплении насыщенной составляющей (70,1 ± 3,9 %), за счет тетрадекановой (Ci4:o), пентадекановой (Ci5:o), гексадекановой (Ci6:o)> гептадекановой (Сп:о) кислот по сравнению с нативной спермой.

6. Специфический состав жирных кислот общих липидов сперматозоидов, включающий высокие уровни относительного содержания насыщенной составляющей на фоне уменьшения ненасыщенных кислот, в том числе незаменимой 5,8,11,14-эйкозатетраеновой (Сгсы) и полиеновых (5,8,11,14,17-эйкозапентаеновой (Сго^), 4,8,12,15,19-докозапентаеновой (С22:5)> 4,8,12,15,19,23-докозагексаеновой (С22:б)) кислот, при одновременном накоплении неэквивалентной по замене 5,8,11-эйкозатриеновой (Сго:з) кислоты; может служить одной из характеристик жизнеспособности спермы в условиях замораживания-оттаивание.

8. Препарат «Милайф», введенный в состав среды обладает противомикробной активностью, подтвержденной снижением микробного числа с 40 ± 6,1 до 20 ± 8,5 шт/мл.

РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ ДИССЕРТАЦИОННОЙ РАБОТЫ

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Леднев, Антон Вениаминович, Нижний Новгород

1. Алиев, Н.Я. Защита спермы баранов от загрязнения / Н.Я. Алиев // Ветеринария. 1973. - №2. - С. 87-88.

2. Алимова, Е.К. Липиды и жирные кислоты в норме и при ряде патологических состояний / Е.К. Алимова. М.: Медицина, 1975.

3. Арановский, Ф.В. Применение антибиотиков в комплексе мероприятий, повышающих оплодотворяемость коров / Ф.В. Арановский // Труды института: Калининградский НИВИ. 1691. - Вып. 2 - С. 67-71.

4. Изменение параметров иммунного и интерферонового статусов у гинекологических больных в процессе лечения препаратом Милайф / С.Н. Архипов, И.В. Кучерова, И.М. Федорова, Т.К. Лопатина // Журн. медицинская картотека. 2000. - № 6.

5. Ашмарин, И.П. Действие гистонов тимуса на выживаемость сперматозоидов / И.П. Ашмарин, Е.К. Суродеева //Прикладная биохимия и микробиология. 1969. - Т. 5, вып. 3. - С. 343-348.

6. Балашов, Н.Г. О ветеринарно-санитарной оценке спермы / Н.Г. Балашов //Ветеринария. 1965. - № 8.

7. Балашов, Н.Г. Ветеринарный контроль при искусственном осеменении животных / Н.Г. Балашов. М.: Колос, 1980. - 271 с.

8. Белоножкин, В.П. Влияние длительного хранения замороженной спермы быков-производителей на ее оплодотворяющую способность / В.П.

9. Белоножкин, В.Ф. Турбин, И.Г. Лазарев //Сб. научн. работ: Вопросы воспроизводства сельскохозяйственных животных. М., 1984. - С. 29-32.

10. Белоус, A.M. Структурные изменения биологических мембран при охлаждении / A.M. Белоус, В.А. Бондаренко. Киев: Наукова думка, 1982.-256 с.

11. Бергельсон, Л.Д. Мембраны, молекулы, клетки / Л.Д. Бергельсон. М.: Наука, 1982.- 183 с.

12. Бернштейн, А.Д. Об обмене глюкозы в сперме / А.Д. Бернштейн //Сб. Этюды по физиологии сперматозоида. Москва-Самара, 1933, - С. 9.

13. Бернштейн, А.Д. Об обмене молочной кислоты в сперме / А.Д. Бернштейн, И.М. Словохотов //Сб. Этюды по физиологии сперматозоида. Москва-Самара, 1933, - С. 26.

14. Бернштейн, А. Д. Влияние неэлектролитов на продвижение сперматозоидов / А.Д. Бернштейн, В.В. Петропавловский //Бюл. экспер. биол. и мед. 1937. -№ 1, вып 3. - С. 41-43.

15. Богдарин, Ю.А. Ускоренный метод определения высших жирных кислот, выделенных из биологических сред, на газовом хроматографе / Ю.А. Богдарин //Лаб. дело. 1979. - № 2. - С. 129.

16. Исследование содержания нуклеиновой кислоты в спермиях сельскохозяйственных животных / К. Братанов, К. Иосифов, М. Матлиева, Е. Цекова //Сб. Ветеринарно-медицинские науки. София, 1964.-№ 1.-С. 73.

17. Бугров, А.Д. Критические зоны при оттаивании спермы быков и их влияние на выживаемость спермиев / А.Д. Бугров Т.И. Олексеенко //Сельскохозяйственная биология. 1977. - Т. 13, № 3, - С. 368-370.

18. Бугров, А.Д. К методике изучения проницаемости криопротекторов при замораживании спермы быков / А.Д. Бугров //Науч.-техн. бюл. / НИИ животноводства Лесостепи и Полесья УССР. 1986. - №43. - С. 24-28.

19. Волосевич, А.П. Повышение переживаемости и активности бычьего семени (под влиянием биогенных стимуляторов) / А.П. Волосевич //Общая биология. 1960. - № 4.

20. Волоскова, А. Содержание липоидов в сперме жеребца / А. Волоскова //Коневодство. 1938. - № 11. - С. 37.

21. Воронина, М.С. Содержание натрия, калия, кальция и магния в семенной плазме петухов при замораживании спермы в разных средах / М.С. Воронина, А.Д. Курбатов, В.В. Комарова //Бюл. науч. работ ВНИИРГЖ. -1980.-Вып. 43.-С.10.

22. Голубева, Е.Д. Действие пенициллина и стрептомицина в различных дозах на качество спермы быков / Е.Д. Голубева //Сб. научных трудов: Пути повышения продуктивности животноводства. 1970. - Т. 73. - С. 146-150.

23. Далеу, В.Г. Влияние полиолов, антиоксидантов и режимов криоконсервации на функциональную полноценность семени быков-производителей: Автореф. дис. канд. биол. наук: 03.00.13 / В.Г. Далеу. -Львов, 1984.- 19 с.

24. Применение биогенного адаптогена Милайф в лечении острого и хронического, персистирующего урогенитального герпеса и хламидиоза / В.И. Дижа, Т.И. Гришина, С.В. Султанова, В.Н. Ларина // Журн. медицинская картотека. 1999. - № 3.

25. Евдокимов, П.Д. Антибиотики в ветеринарии и животноводстве / П.Д. Евдокимов. -JL: Сельхозгиз, 1964.

26. Ерохин, А.С. и др. //Доклады ВАСХНИЛ. 1989. - № 3.

27. Криоустойчивость сперматозоидов быка в связи с жирнокислотным составом их липидов / А.С. Ерохин, К.Д. Кучкина, В.И. Деряженцев, В.Ф. Турбин // Доклады ВАСХНИЛ. 1991. - № 5.

28. Ерохин, А.С. Изучение пероксидации липидов в компонентах разбавителей спермы животных / А.С. Ерохин //Доклады ВАСХНИЛ. -1992.- №6.

29. Живков, В. Содержание кислоторастворимого и липидного фосфора в спермиях быка, барана, хряка и жеребца / В. Живков, Г. Калев Ветеринарно-медицинские науки (София). 1965. - Т. И. - С. 333.

30. Жильцов, Н.З. Действие глубокого замораживания семени на фосфолипидный состав живчиков быка и барана / Н.З. Жильцов, B.C. Голубь //Вопросы воспроизводства сельскохозяйственных животных: Сб. научн. раб. М., 1984. - С. 23-28.

31. Зверева, Г.В. Активность окислительных ферментов в сперме быков и оплодотворяющая способность спермиев / Г.В. Зверева, Б.Н. Чухрий, Л.А. Клевец //Докл. ВАСХНИЛ. 1981. - № 12. - С. 19-20.

32. Иванов, И.И. О значении неуглеводного обмена для движения сперматозоидов / И.И. Иванов //Биохимия. 1936. - № 1.

33. Иосифов, К. Исследования содержания аминокислот в свежей и храненной сперме барана, быка, хряка и жеребца / К. Иосифов //Извест. ин-та биол. и патол. размножения (София). 1962. Т. II. - С. 71.

34. Клемина, В.Л. Живучесть семени быков в связи с биохимическими показателями и оплодотворяющей способностью / В.Л. Клемина //Вестник сельскохозяйственной науки. 1966. - № 1. - С. 42.

35. Кононов, В. Оборудование для глубогого охлаждения и оттаивания спермы / В. Кононов, Н. Голышев, Э. Хачапуридзе //Свиноводство. — 1975.-№6.-С. 23-25.

36. Кононов, В. Среды для замораживания спермы хряка / В. Кононов, Н. Голышев, Э. Хачапуридзе //Свиноводство. 1975. - № 11. - С. 25-26.

37. Кононов, В.П. Достижения и перспективы замораживания семени в свиноводстве / В.П. Кононов // Обзорн. информ. М., 1983. - 75 с.

38. Кононов, В.П. //В сб. Теория и практика воспроизведения животных /Под ред. В.К. Милованова и И.И. Соколовской М.: Колос, 1984.

39. Крейдлин, Ю.Г. Режимы замораживания семени быков при различных технологиях / Ю.Г. Крейдлин //Вопросы воспроизводства сельскохозяйственных животных: Сб. научн. раб. — М., 1984. С. 41-45.

40. Кучерова, И.В. О клиническом применении препарата «Милайф» / И.В. Кучерова // Журн. вестник акушерства и гинекологии. 1997. - № 3-4. — С. 35-37.

41. Кучерова, И.В. Использование препарата «Милайф» при климактерической кардиопатии / И.В. Кучерова, К.А. Антонова // Журн. вестник акушерства и гинекологии. 1997. - № 3-4. - С. 38-39.

42. Лозино-Лозинский, Л.К. Очерки по криобиологии / Л.К. Лозино-Лозинский. Л.: Наука, 1972. - 287 с.

43. Лопырин, А.И. Биология размножения овец / А.И. Лопырин. М.: Колос, 1971.

44. Лянсберг, Э.С. Синтетические среды для хранения семени барана: Автореф. дис. канд. биол. наук: 03.00.13 / Э.С. Лянсберг. Дубровицы Моск. обл., 1970.- 17 с.

45. Макаркина, Л.Г. Применение препарата «Милайф» при климактерическом синдроме с противо-показаниями к проведению заместительной гормональной терапии / Л.Г. Макаркина, О.В. Дистергова, Е.В. Мохова // Журн. медицинская картотека. 2001. - № 5.

46. Малышева, З.В. Опыт применение препарата «Милайф» для лечения миом матки / З.В. Малышева, Н.И. Яковлева // Журн. медицинская картотека. 2000. - № 1. - С. 18-20.

47. Опыт применения адаптогена Милайф в сочетании с квантовой терапией у женщин, страдающих хроническими воспалениями гениталий /З.В. Малышева, Н.И. Яковлева, И.Ф. Тютюнник, Л.Н. Рождествена // Журн. медицинская картотека. 2000. - № 6.

48. Мамзина, Е.А. Энергетическое обеспечение оплодотворяющих свойств спермы петухов / Е.А. Мамзина, В.В. Комарова //Вопросы искусственного осеменения кур: Сб. науч. тр. ВНИИРГЖ. Л.: - 1970. -вып. 16.-С. 76-84.

49. Милованов, В.К. Разбавители для спермы сельскохозяйственных животных / В.К. Милованов, О.Л. Селиванова //Проблемы животноводства. 1932.-№ 2. - С. 75.

50. Милованов В.К. Анабиоз сперматозоидов и его использование в социалистическом животноводстве / В.К. Милованов, Х.Х. Хабибуллин //Проблемы животноводства. — 1933. № 5. — С. 83.

51. Милованов, В.К. Основы искусственного осеменения / В.К. Милованов. -M.-JL: Сельхозгиз, 1934.- 191 с.

52. Милованов, В.К. Биология воспроизведения и искусственное осеменение сельскохозяйственных животных / В.К. Милованов. М.: Сельхозгиз, 1962.-696 с.

53. Милованов, В.К. Причины эмбриональной смертности и новые возможности улучшения воспроизводства стад / В.К. Милованов И.И. Соколовская //Животноводство. — 1964. № 5.

54. Милованов, В.К. Свойство живчиков млекопитающих сохранить биологическую полноценность после быстрого замораживания / В.К. Милованов, И.И. Соколовская, И.В. Смирнов //Диплом на открытие № 103 от 28 ноября 1972 г. С. 28.

55. Милованов, В.К. //Доклады ВАСХНИЛ № 10, 1981.

56. Милованов, В.К. Среда для глубокого охлаждения семени / В.К. Милованов, В.А. Варнавская, И.П. Шайдулин //Животноводство. 1985. - № 7. — С. 39-41.

57. Миронов, П. Получение бактериологически чистой спермы / П. Миронов //Животноводство. — 1959. № 5.

58. Мозгов, И.Е. Фармакологические стимуляторы в животноводстве / И.Е. Мозгов. -М.: Колос, 1964.

59. Мороз, Л.Г. Исследование степени сопряженности дыхания и фосфорилирования в сперме хряков при хранении / Л.Г. Мороз //Докл. Советских ученых к VI Международному конгрессу по размножению и искусственному осеменению животных. 1968.

60. Мороз, Л.Г. Методические рекомендации по оценке качества спермы хряков низкотемпературной консервации / Л.Г. Мороз, Н.В. Корбан, И.Ш. Шапиев. Л.: - 1980. - 61 с.

61. Мороз, Л.Г. Оценка спермы хряков для замораживания и прогнозирования ее оплодотворяющей способности / Л.Г. Мороз, Н.В. Корбан, И.Ш. Шапиев //Сельскохозяйственная биология. 1982. - Т. 17, № 3. - С. 394-397.

62. Нарубина, Л.Е. Изучение защитных свойств глицерина при замораживании спермы петухов / Л.Е. Нарубина, А.Д. Курбатов, Г.Б. Бубляева //Бюллетень ВНИИРИГСХЖ. 1975. - Вып. 9. - С. 41-43.

63. Нарижный, А. Действие синтетических антиоксидантов / А. Нарыжный //Свиноводство. 1978. - № 1. - С. 24-25.

64. Наук, В.А. Особенности перекисного окисления липидов при замораживании спермы быков и хряков-производителей / В.А. Наук, A.M. Гуськов //Докл. ВАСХНИЛ. 1983. - № 2. - С. 27-29.

65. Использование аэросилов в практике искусственного осеменения / В.Е. Недава, А.А. Чуйко, JI.A. Бегма, А.А. Бегма, В.И. Богомаз //Зоотехния. -1990.-№8.-С. 63-65.

66. Несмеянова, Т.Н. Содержание калия, натрия и кальция в сперме и секретах половых желез быка и барана / Т.Н. Несмеянова //Успехи зоотехнических наук. 1936. - Т. 2, № 2. - С. 37-41.

67. Несмеянова, Т.Н. Роль липоидных веществ жизнедеятельности сперматозоидов / Т.Н. Несмеянова //Докл.ВАСХНИЛ. 1940. - Вып. 14. - С. 34-40.

68. Николаев, В.Е. Об изменениях состава жирных кислот липидов в плазме крови и некоторых органах при травматическом шоке / В.Е. Николаев //Бюлл. экспер. биол. 1978. - № 3. - С. 290-291.

69. Осташко, Ф.И. Теория и практика глубокого охлаждения и длительного хранения спермы / Ф.И. Осташко //Молочно-мясное скотоводство. — Киев: Урожай, 1966. № 7. - С. 3-16.

70. Осташко, Ф.И. Вопросы теории и практики низкотемпературного консервирования спермы производителей / Ф.И. Осташко //Интенсификация общественного животноводства: Сб. наун. раб. — Харьков, 1971.-Т. 36.-С. 35-104.

71. Осташко, Ф.И. Глубокое замораживание и длительное хранение спермы производителей / Ф.И. Осташко. Киев: Урожай, 1978. - С. 71.

72. Осташко, Ф.И. Глубокое замораживание и длительное хранение спермы производителей / Ф.И. Осташко. Киев: Урожай, 1978. - 254 с.

73. Пакенас, П.И. Исследование сперматогенеза и усовершенствование технологии взятия и обработки семени: Автореф. дис. доктора биол. наук: 03.00.13 / П.И. Пакенас. Таллин, 1972. - 57 с.

74. Паныпин, С.С. Усовершенствование метода глубокого замораживания семени быка с использованием комплексонатов, аминокислот и витаминов: Автореф. дис.канд. биол. наук: 03.00.13. / С.С. Паныпин. -Дубровицы, 2003. 26 с.

75. Платов, Е.М. Усовершенствованный метод замораживания семени быка / Е.М. Платов //Вестник сельскохозяйственной науки. 1961.- № 11. — С. 127-128.

76. Платов, Е.М. Замораживание семени быка в глицериновой «компенсированной» среде / Е.М. Платов //Животноводство. 1963. - № 8. - С.92-94.

77. Платов, Е.М. Роль желтка и других факторов при глубоком охлаждении семени быка и барана / Е.М. Платов, А.А. Шевцова // Материалы конференции молодых ученых ВИЖ. 1967. - № 5. - С. 28-30.

78. Платов, Е.М. Действие замораживания спермы на содержание фосфолипидов в сперматозоидах / Е.М. Платов, А.Н. Успенский //Доклады советских ученых к VI международному конгрессу по размножению и иск. осем. с.-х. животных. М.: Колос, 1968. — С. 47-48.

79. Платов, Е.М. О предохранении спермиев от холодового удара / Е.М. Платов // Молочное и мясное скотоводство. — 1969. № 8. - С. 23-24.

80. Платов, Е.М. Теоретические и практические основы замораживания семени производителей сельскохозяйственных животных: Автореферат дис.доктора биол. наук: 03.00.13 / Е.М. Платов. Дубровицы, 1973. -37 с.

81. Платов, Е.М. Влияние кристаллизации воды на сперматозоиды при замораживании семени / Е.М. Платов, Т.М. Лаптеев //Сельскохозяйственная биология. 1975. - Т. 10, № 1, - С. 92-95.

82. Платов, Е.М. Некоторые теоретические аспекты замораживания спермы / Е.М. Платов //Животноводство. 1978. - № 10. - С. 64-67.

83. Плохинский, А.Н. Руководство по биометрии для зоотехников / А.Н. Плохинский. М.: Колос, 1969. - 256 с.

84. Покровский, А.А. Жирнокислотный состав липидов митохондриальных мембран как показатель биологической ценности жира / А.А. Покровский, М.М. Левачев, М.М. Гаппаров //Вопр. Питания. 1973. - № 4.-С. 3-11.

85. Попов, П.С. //Животноводство. 1970. - № 9.

86. Поярков, Э.В. Растворы Сахаров как физиологическая среда / Э.В. Поярков //Труды Петроградской биологической лаборатории. 1917. -С. 213-217.

87. Поярков, Э.В. Роль осмотического давления и явления элементарной приспособленности в биологии сперматозоидов / Э.В. Поярков // Доклады биологического общества. Париж. - 1917. - С. 767.

88. Прокопцев, В.М. Действие унитола на сперму хряков / В.М. Прокопцев, А. Рустенов, Л.Г. Мороз //Сельскохозяйственная биология. 1974. — Т. 9, №4.-С. 581-584.

89. Прокопцев, В.М. Технология искусственного осеменения свиней / В.М. Прокопцев. Л.: Колос, 1981. - 160 с.

90. Пушкарь, Н.С. Введение в криобиологию / Н.С. Пушкарь, A.M. Белоус. — Киев: Наукова думка, 1975. 343 с.

91. Рослановский, К. Применение пробы на переживание спермы быка при температуре 46,5 °С / К. Рослановский //Roezn. Nauk. 1960.

92. Глубокое замораживание спермы быков / В.Ф. Сахно и др. М.: Колос, 1969.

93. Семаков, В.Г. Содержание циклических нуклеотидов (ЦАМФ и ЦГМФ) в сперме быков и хряков при криоконсервации / В.Г. Семаков //Сельскохозяйственная биология. — 1984. № 2. — С. 81-83.

94. Семенова, Н.В. К вопросу о дальнейшем совершенствовании ферментных бактериостатических сред для семени сельскохозяйственных животных / Н.В. Семенова //Бюллетень научно-технической информации. 1959. - № 1.

95. Смирнов, И.В. Сохранение спермы сельскохозяйственных животных при температуре минус 78°С / И.В. Смирнов // Социалистическое животноводство. 1951. - № 1. - С. 94-95.

96. Смирнов, И.В. К вопросу о холодовом ударе спермиев / И.В. Смирнов //Научные труды / Киевская опытная станция животноводства. 1961. -№7.-С. 61-70.

97. Смирнов, И.В. О сроках хранения спермы в жидком азоте / И.В. Смирнов //Молочное и мясное скотоводство. 1973. - № 9. - С. 39-40.

98. Смирнов, И.В. К теории глубокого охлаждения спермы / И.В. Смирнов //Животноводство. 1974. - № 11. - С. 65-70.

99. Смирнов, И.В. Теоретические вопросы замораживания и хранения спермы (быков) / И.В. Смирнов //Интенсификация с/х производства: Сб. научн. раб.-Киев, 1974. С.131-133.

100. Смирнов-Угрюмов, Д.В. Повышение устойчивости семени к замораживанию / Д.В. Смирнов-Угрюмов //Доклады ВАСХНИЛ. 1958. -Т. 12.-С. 32.

101. Смит, О. Биологическое действие замораживания и переохлаждения / О. Смит. — М.: Л.: Изд-во иностр. лит-ры, 1963. 503 с.

102. Соколовская, И.И. О роли некоторых аминополисахаридов и действующих на них ферментов в оплодотворении млекопитающих / И.И. Соколовская //Журн. общей биологии. — 1953. Т. XIV, № 2. - С. 96-112.

103. Значение антибиотиков, сульфопрепаратов и витаминов Bj и В12 для сохранения семени / И.И. Соколовская и др. //Известия ТСХА. 1956. -№2(12).

104. Соколовская, И.И. Проблемы оплодотворения сельскохозяйственных животных / И.И. Соколовская. М.: Советская наука, 1957. - 314 с.

105. Соколовская, И.И. Метод асептического взятия семени в связи с организацией международного обмена / И.И. Соколовская // В сб. Новое в племенном деле и искусственном осеменении с.х. животных. М., -1963.

106. Соколовская, И.И. Биология воспроизведения сельскохозяйственных животных / И.И. Соколовская //Общество «Знание» РСФСР. М., 1969. -360 с.

107. Столяров, Б.В. Руководство к практическим работам по газовой хроматографии / Б.В. Столяров, И.М. Савинов, А.Г. Виттенберг. Л., 1978.-2 изд.-326 с.

108. Суродеева, Е.К. Действие поликатионов, стабилизирующих сперматозоиды, на дыхание и связывание фосфата / Е.К. Суродеева, Л.Г. Мороз, И.П. Ашмарин //Цитология. 1972. - Т. 14, вып. 6. - С. 793-796.

109. Суродеева, Е.К. Перспективность применения аденозинтрифосфата, гистонов и унитиола как компонентов нового разбавителя для спермы хряков / Е.К. Суродеева //Бюллетень ВНИИРГЖ. 1975. - Вып. 9. - С. 20-23.

110. Сысоев, А.А. Физиология размножения сельскохозяйственных животных / А.А. Сысоев. М.: Колос, 1978. - 360 с.

111. Тюпич, М.М. Дозирование и степень разбавления семени быков при искусственном осеменении / М.М. Тюпич //Бюллетень научно-технической информации ВИЖ. 1957. - № 1(3). - С. 57-58.

112. Успенский, А.Н. Среда с гликоколом для разбавления семени быка перед замораживанием / А.Н. Успенский // Молочное и мясное скотоводство. — 1965. № 6. - С.59.

113. Успенский, А.Н. Сиаловая кислота в сперме сельскохозяйственных животных / А.Н. Успенский //Доклады советских ученых к VI международному конгрессу по размножению и искусственному осеменению животных. М.: Колос, 1968. - С. 142-144.

114. Успенский, А.Н. Уровень нейраминовой кислоты при сохранении семени животных / А.Н. Успенский //Вестник сельскохозяйственной науки. -1968. -№ 10.-С. 99-101.

115. Успенский, А.Н. Биохимические показатели семени при замораживании / А.Н. Успенский //Овцеводство. 1969. - № 9. - С. 34-36.

116. Успенский, А.Н. Модификация среды для разбавления спермы быков / А.Н. Успенский, А.Г. Тоненков //Информационный листок 110-73 /

117. Горьковский межотрасл. центр научно-техн. информ. и пропаг. 1973. -4 с.

118. Успенский, А.Н. Влияние сроков хранения глубокозамороженного семени быков на его качество / А.Н. Успенский, В.В. Зверев //Передовые методы профилактики и лечения сельскохозяйственных животных / Труды Горьковского СХИ. Горький, 1980. - Т. 149.

119. Успенский, А.Н. Влияние температуры оттаивания замороженной в форме гранул спермы быка на его качество / А.Н. Успенский, В.В. Зверев //Новое в разведении сельскохозяйственных животных / Труды Горьковского СХИ. Горький, 1980. - Т. 150. - С. 105-107.

120. Хабибуллин Х.Х. Сохранение и перевозка семени быков при низких температурах / Х.Х. Хабибуллин //Молочное и мясное скотоводство. -1957.-№5.-С. 48-49.

121. Хабибуллин Х.Х. Длительное хранение семени быка в замороженном состоянии / Х.Х. Хабибуллин //Молочное и мясное скотоводство. 1958. -№ 2.-С. 51-53.

122. Хабибуллин, Х.Х. Семя быка можно сохранять при температуре -196°С / Х.Х. Хабибуллин //Молочное и мясное скотоводство. 1960. - № 3. - С. 47-48.

123. Хроматография. Практическое применение метода. В 2-х ч. Ч. 1. Пер. с англ. / под ред. Э. Хевтмана. М.: Мир, 1986. - С. 170-174.

124. Холтер, Г. Каким образом различные вещества попадают в клетку / Г. Холтер //Живая клетка: Сб. научн. раб. М.: Мир, 1966. - С. 130-145.

125. Хомяков, А.Е. Содержание высших жирных кислот и общих липидов в сыворотке крови больных острым панкреатитом / А.Е. Хомяков, В.И. Кеда //Клин. Мед. 1974. - № 11. - С. 70-78.

126. Хюльтнес, С. Глубокозамороженное семя надежный компонент в планировании развития скота / С. Хюльтнес //Сельское хозяйство за рубежом / Животноводство. — 1973. - № 3. - С. 27-28.

127. Шапиев, И.Ш. Влияние замораживания и состава инкубационной среды на функциональное состояние сперматозоидов хряка: Автореф. дис. канд. биол. наук: 03.00.13 / И.Ш. Шапиев. Ленинград, 1974. - 25 с.

128. Шапиев, И.Ш. Ультраструктурные изменения сперматозоидов хряка при замораживании-оттаивании / И.Ш. Шапиев //Цитология. 1975. — Т. 17, №7.-С. 856-857.

129. Шапиев, И.Ш. К вопросу технологии замораживания семени хряков / И.Ш. Шапиев, Л.Г. Мороз, Н.В. Корбан //Животноводство. 1976. - № 12.-С. 60-62.

130. Шергин, Н.П. О расщеплении моно- и дисахаридов сперматозоидами / Н.П. Шергин //Сб. Успехи сельскохозяйственных наук. — 1935. Т. 1(2).

131. Шергин, Н.П. Роль фруктозы при искусственном осеменении / Н.П. Шергин //Доклады ВАСХНИЛ. 1956. - Вып. 10.

132. Шергин, Н.П. Аминокислотный состав и изменений белка семени быка и барана / Н.П. Шергин //Труды ВИЖ. 1959. - Т. 23. - С. 191.

133. Шергин, Н.П. Биохимия спермы сельскохозяйственных животных / Н.П. Шергин. М., 1967. - 239 с.

134. Шмидт, П.Ю. Анабиоз. / П.Ю. Шмидт. М.: Изд. АН СССР, 1955. -345 с.

135. Яблонский, В.А. Видовые особенности обмена веществ в сперме быка, барана и хряка / В.А. Яблонский //Сельскохозяйственная биология. -1973.-Т. 8,№ 1.-С. 100-103.

136. Яблонский, В.А. Микробное загрязнение спермы и его влияние на обмен веществ сперматозоидов быков-производителей / В.А. Яблонский //Вестник сельскохозяйственной науки. 1963. - № 12.

137. Яковлева, Н.И. Использование отечественного препарата «Милайф» в лечении хронических воспалительных заболеваний гениталий / Н.И. Яковлева, О.В. Малышева, Н.Д. Алексеева // Медицинская картотека. -2001.-№3.-С.

138. Aaes-Jorgensen. Essential fatty acids / Aaes-Jorgensen //Physiol. Rev. 1961. -Vol. 4.-P. 116-128.

139. Aaes-Jorgensen. Tissue lipids in FFA deficiency / Aaes-Jorgensen. //Rev. ital. sostanze grasse. 1974. - Vol. 51, N. 9. - P. 310-311.

140. Ahluwalia. Fatty acid composition of lipids ofbull, boar, rabbit and human semen / Ahluwalia //J. Reprod. Fertil. 1969. - Apr 18(3).

141. Aitken R. et al. // Biology of Reprod. 1989. - N. 40.

142. Alfm-Slater, R.B. Essential fatty acids reinvestigated / R.B. Alfm-Slater, Aftergoodz //Physiol. Rev. 1968. - Vol. 48. - P. 758-764.

143. Fatty acid composition of adipose tissue in normal, atherosclerotic and diabetic subjects / F.M. Antonini, A. Bucalossi, E. Petruzzi, R. Simoni, P.L. Morini, D'alssanedro //Atherosclerosis. 1970. - Vol. 11. - P. 279-289.

144. Long chain fatty acid binding to humen plasma albumin / J.D. Ashbrook, A.A. Spector, E.C. Santos, J.E. Fletcher//J. Biol. Chem. 1975. - Vol.250. - P. 2333-2338.

145. Balachaudran, R. Metabolism interactions among polyunsaturated fatty acids in response to an atherogenic diet / R. Balachaudran, L.A. Ehrhart //Proc. Soc. Biol. And Med.- 1975.-Vol. 149, N. l.-P. 29-34.

146. Bennet P. et al. // Biochem. Bioph. Acta. 1987. - N. 919.

147. Bhargava. Химический состав спермы быка, особенно в отношении нуклеиновых кислот, нуклеотидов и свободных аминокислот / Bhargava, Bishop, Work. //Bioch. J. 1959. - Vol. 73. - P. 242.

148. Bhargava. Внедрение С14-аминокислот в белки спермиев быка / Bhargava, Bishop, Work //Bioch. J. 1959. - Vol. 73. - P. 247.

149. Bills, Т.К. Metabolism of 14-C-arachidonic acids in human platelets / Т.К. Bills, J.R. Smith, M.J. Silves //Biochem. Biophys Acta. 1976. - Vol. 424. - P. 309-314.

150. Birran, L.A. Effect of the deficiency of the lipids in varios rat tissue and the influence of dietary supplementation with assential fatty acids on deficient rats / L.A. Birran, W. Bartley, C.W. Carter //Biochem J. 1964. - Vol. 93, N. 3. -P. 492-498.

151. Bjorntorp, P. Plyunsaturated Fatty Acids in Man / P. Bjorntorp //Also. 1960.

152. Bloch, R. Control mechanismus in the synthesis of saturated fatty acids / R. Bloch, D. Vance //Ann. Rev. Biochem. 1977. - Vol. 46. - P. 262-298.

153. Bomstein. Использование фосфолипидов спермиями быка / Bomstein, Steberl. //Exp. Sell. Res. 1947. - Vol. 12. - P. 254.

154. Bomstein. Фактор подавления температурного шока сперматозоидов быка в неочищенном яичном лецитине / Bomstein, Steberl //Exp. Sell. Res. -1959.-Vol. 16.-P. 675.

155. Brenner, R.R. Effect of polyunsaturated fatty acids on the desaturation in vitro of linoleic to linolenic acid / R.R. Brenner, M.E. D1 Tomas, R.O. Peluffo //Biochim et Biophys. Acta. - 1965. - Vol. 106, N. 3. - P. 640-642.

156. Brenner, R. The oxidative desturation of unsaturated fatty acids in animals / R. Brenner //Mol and Cell. Biochem. 1974. - Vol. 3, N. 1. - P. 41-52.

157. Brenner, R. Algunas contribuctiones al estudion de los acidos grasos no saturados у su biosintesis / R. Brenner //An Acad.nac.eienc.exact., fis.y nature. Buenos Aires. 1976. - Vol. 28. - P. 85-96.

158. Caren, R. The origin of plasma arachidpnic acid in dogs / R. Caren, L. Corbo //Metabolism. 1968. - Vol. 17. - P. 1043-1050.

159. Chubb, Cooper. Аминокислоты плазмы спермы птиц / Chubb, Cooper //J. Reprod. Fertil. 1962. - N. 4. - P. 7.

160. Plasma lipids in human linoleic asid deficiency / F.D. Collins, A.J. Sinclar, J.P. Royle, D.A. Coats, A.T. Maynard, R.F. Leonard //Nuts. Metabol. 1971. -Vol. 13.-P. 150-167.

161. Coots, R.A. Metabolism of arachidonic acid -114 С in the rat / R.A. Coots //J. Lipid Res. 1965. - Vol. 6. - P. 494-497.

162. Darin-Bennet, A., White, J. //Criobiology. 1977. - Vol. 14. - P. 466-470.

163. Effects of octanoats and cleate on energy metabolism in the perfussed rat liver / Luc .J. Debser, Guy Mannaerts, De Schepper, J. Paul //Eur. J. Biochem. -1974. Vol. 47, N. 3. - P. 591-600.

164. Defranceschi. О природе и функции аминокислот в плазме спермы быка / Defranceschi //Arch. Veter. Ital. 1955. - N. 6. - P. 525.

165. Delorme, C. Bernard. The effect of vitamin B-6 Deficiency on the fatty acid composition of the major phospholipids in the rat / C. Bernard Delorme, Paul I. Lupien //J. Nutr. 1976. - Vol. 106, N. 2. - P. 169-180.

166. Состав жирных кислот спермы быков / Dietz, Pickett, Kowarek, Jensen // J. Dairy Sci. 1963. - Vol. 46. - P. 468.

167. Dillam. Химические исследования спермиев млекопитающих / Dillam, Thomas. //Bioch. Biophys. Acta. 1953. - N. 11. - P. 79.

168. Docke. О прогнозе оплодотворяемости при глубоком охлаждении спермы быка / Docke, Wiechert //Zuchthyg, Fortpflanzungstor, Besam. 1959. - N. 8.-P. 282.

169. Dorp, D.A.Van. Essential fatty acid metabolism / D.A.Van Dorp //Proc. Nutr. Sec. 1975. - Vol. 34, N. 3. - P. 279-286.

170. Analisi gas-cromatografica Degli grassi totalic del plasma e dei tessuti diratte tratate con ormoni sessuali / C. Flamigni, L. Bovicelli, R. Tirelli, E. Guerrest //Attual. Ostetr. Ginecol. 1967. Vol. 13, Suppl., 2. - P. 456-462.

171. Отношение молочной кислоты к показателям качества спермы / Flerchinger, Erb, Mikota, Ehlers //J. Dairy. Sci. 1956. - N. 39. - P. 1006.

172. Flipse. Катаболизм глицина С14 промытыми спермиями быка / Flipse, Benson //Exp. Sell. Res. 1957. -N. 13. - P. 611.

173. Flipse. Анаэробное поглощение глюкозы С14 спермиями. Быка / Flipse //J. Dairy. Sci. 1955. - N. 38 (7).

174. Frits, M. Flesch, Dynamics of the mammalian sperm plasma membrane in the process of fertilization / Frits M. Flesch, Barend M. Gadella //Biochimica et Biophysica Acta. 2000. - Vol. 1469. - P. 197-235.

175. Galli, C. The (n-6) pentaene-(n-3) hexane fatty acid ration as an index of linolenie acid deficiency / C. Galli, E. Agradi, R. Paoletti //Biochem. et Biochys. Acta. 1974. - Vol. 369, N. 2. - P. 142-145.

176. Graham, E.F. Fertiliti studies with frozen boar spermatozoa / E.F. Graham, A.H.J. Rajamannan, M.K.L. Schmehl // A.I. Dig. 1971. - Vol. 19, N 19(6). -P. 6-8.

177. Grawford, M.A. Fatty-Acids Ratios in Free-Living and Domestic Animals / M.A. Grawford //Lancet. 1968. - Vol. 1, N. 7556. - P. 1329-1333.

178. Green, D. The role of lipids in mitochondrial electron transfer and exidative phosphorylation / D. Green, S. Fleischer //Biocem. Biochys. Acta. 1963. -Vol. 70.-P. 554-561.

179. Guarnieri, M. Essential fatty acids / M. Guarnieri, R.M. Johnson //Adv. In Lipid REs., v.8.Ed.R.Padetti.D.Kritchevsky Acad. Press. New York London, 1970.-P. 115-120.

180. Use of spin labels to evaluate effects of cold shock and osmolality on sperm / R.H. Hammersted, Keith., Snipes et all. //Biol. Reprod. 1978. - N. 18. - P. 686-696.

181. Hartree. Фосфолипиды в сперме млекопитающих / Hartree, Mann /Я. Reprod. Fertil. 1960. - N. 1. P. 23.

182. Essential fatty acid deficiency in the rat / L.J. Hoilund, R.D. Sundberg, C.H. Herbst, I.D. Parkin III. Clinical syndrome histopathology and heamotopatology. Lab. Invest. 1970. - Vol. 23. - P. 58-59.

183. Holman, R.T. The ration of trienoic-tetraenoic acide in tissue lipids as a reassure of essential fatty acid rafuirement / R.T. Holman //J. Nutr. 1960. -Vol. 70. - P. 405-407.

184. Holman, R.T. The assential fatty acids requirement of infants and the assesament of their dietary intahe of linoleate by serum fattyacid anelys / R.T. Holman, O. Caster, H.F. Wiese //Amer. J. clin. Nutr. 1964. - Vol. 14. - P. 7076.

185. Holman, R.T. Essential Fatty acids deficiency in Holam progress in the chemistry of fats and others lipids / R.T. Holman // Pergemon Press, Oxford. -1968. Vol. 9, N. 2. - P. 275-348.

186. Hopwood. Свободные аминокислоты бычьей спермы / Hopwood, Gassner //Fertil. Steril. 1962. -N. 13. - P. 290.

187. Hornstra, G. Dietary fats and arterial thrombosis / G. Hornstra //Haemostasis. -1974.-Vol. 2.-P. 21-52.

188. Hornestra, G. Relation-ship between the type of dietary fatty acid and arterial thrombosis tendency in rate / G. Hornetra, R.N. Lussenburg //Atherosclerosis. 1975. - Vol. 22, N. 3. - P. 499-516.

189. Horvath. Некоторые биохимические показатели спермы быка / Horvath, Solimoss //Acta Veterin. Budapest, 1953. - N. 3. - P. 155.

190. Johnson, L.A. Use of boar spermatozoa for artificial insemination / L.A. Johnson, L.G. Aalbers, J.A.M. Arts //J. Anim. Sci. 1982. - Vol. 54, N 1. - P. 126-131.

191. Jones, R., Mann, T. //J. Reprod. Fert. 1977. Vol. 50. - P. 261-270.

192. Kako, K.I. Changes in Fatty Asid Composition of Myocardial Triglyceride Following a Single Administration in Ethanol to Rabbits / K.I. Kako, M.S. Liv, M.I. Thernton //J. Molec, and Cellular. 1973. - Vol. 5, N. 5. - P. 473489.

193. Kichev, G.K. Glycoprotein complexes in bovine seminal plasma diluted with yolk media / G.K. Kichev, V.A. Naouk, H.A. Khanak //Compt. Rend. Acad. Bulg. Sci. 1981. - Vol. 34, N 3. - P. 407-410.

194. Abnormal fatty acid composition and human atherosclerosis / K.J. Kingsbury, C. Brett, R. Stovold, H. Chapman, J. Anderson, D.M. Morgan //Postgrad, med. J. 1974. - Vol. 50. - P. 425-440.

195. Kubicek. Сахара и органические кислоты плазмы спермы млекопитающих / Kubicek, Santavy //Bull. Soc. Chim. biol. 1958. - N. 40. -P. 1603.

196. Laborit, H. The action of arachidonic acids on experimental hyperatension in the rat / H. Laborit, N. Valette //Chem. Biol. Interaction. 1975. - Vol. 10. - P. 239-246.

197. Lake, P.E. Proc. 6-th Int. / P.E. Lake //Congr. Anim. Reprod. A. A.I. 1968. -N. 2.-P. 1633-1635.

198. Lake, P.E. Preservation of fowl semen in liquid nitrogen an improved method / P.E. Lake, J.M. Stewart // Brit. Poultry Sci. - 1978. - Vol. 19, N 2. -P. 187-194.

199. Lake, P.E. Storage of fowl semen for different periods above 0 °C / P.E. Lake, O. Ravil //Inter. Congr. Anim. Reprod. A. I. 1982. - Vol. 9, N 5. - P. 113116.

200. Lake, P.E. An exploration of crioprotective compounds to fowl spermatozoa / P.E. Lake, O. Ravil //Brit. Poultry Sci. 1984. - Vol. 25, N 1. - P. 145-150.

201. Lang, P.D. Fatty acids composition of adipose tissue in patients with coronary Heart disease / P.D. Lang, M. Degott, J. Vollman //Aterosclerosis. 1977. -Vol. 26, N. l.-P. 29-39.

202. Lardy, Phillips. Фосфолипиды как источник энергии для движения спермиев / Lardy, Phillips //Amer. J. Physiol. 1941. - N. 134. - P. 542.

203. Lardy. Исследование окисления жира и углеводов спермиями млекопитающих / Lardy, Phillips //Arch. Biochem. 1945. - N. 6. - P. 53.

204. Lipids of the sperm plasma membrane: from polyunsaturated fatty acids considered as markers of sperm function to possible scavenger therapy / A. Lenzi, et all //Hum. Reprod. Update. 1996. - May-June 2(3). - P. 246-256.

205. Lodge. Дезоксиглюкоза — обратимый ингибитор гликолиза спермиев / Lodge //J. Dairy. Sci. 1963. - N. 46. - P. 637.

206. Lodge. Обмен CO2 и фруктозы бычьих спермиев / Lodge, Salisbury //J. Dairy. Sci. 1963. - N. 46. - P. 140.

207. Fettsaurenmuster der Lipidfraktionen in Blut. Teil II / A. Lohninger, K. Weigl W. Riedi, W. Heinkelmann, W. Tolle, G. Schlag, B. Landaner, G. Blumel //Kontrollpersonen. Med. Welt. 1976. - Vol. 27, N. 19. - P. 923-926.

208. Lovelock. Механизм защитного действия глицерина против гемолиза при замерзании и оттаивании / Lovelock //Bioch. Biophys. Acta. 1953. - N. 11.-P. 28.

209. Липиды спермиев барана / Lovern, Olley, Hartree, Mann //Bioch. J. 1957. -N. 67.-P. 630.

210. Lowry, R.R. Innteractions in the meyabolism of polyunsaturated fatty acids / R.R. Lowry, Jan I. Tinsley //Biochem et Biophys. Acta. 1966. - Vol. 116, N. 2. - P. 398-400.

211. Luyet, M.J. The vitrification of organic colloids and of protoplasm / M.J. Luyet //Biodinamica. 1937. - Vol.1, N 29. - P. 1-14.

212. Luyet, B.J. //Oxford, Blackwell Scientific Publication, 1960.

213. Mann, T. The biochemistry of semen and of the male reproductive tract / T. Mann. London. New York, 1964. - 493 p.

214. Mazur, P. Theoretical and experimental effects of cooling and warming velocity in the survival of frozen and thawed cells / P. Mazur //Cryobiology. -1966.- Vol. 2, N4.- P. 181-192.

215. Пути использования глюкозы спермиями из придатка и семенника / Wu, McKenzie, Fang, Butts //J. Dairy. Sci. 1959. - Vol. 42. - P. 110.

216. Meryman, H.T. Review of biological freezing / H.T. Meryman //Cryobiology. London; New York: Acad, press, 1966. - P. 55-90.

217. Metz, S.H. Regulation of uptake of alpha-amino-isolutyric acids by levator in muscle / S.H. Metz, J. Mulder, S.G. Berg van den //Science. 1960. - Vol. 132,N. 34118.-P. 41-42.

218. Miller. Влияние уровня глицерина, различной температуры и других факторов на переживаемость спермиев быка / Miller, Van Demark //J. Dairy. Sci. 1954. - N. 37. - P. 1.

219. Nagase, H. Deep freezing bull semen in concentrated pellet form / H. Nagase, T. Niwa // V-th Intern. Congr. Anim. Reprod. Trento, - 1964. - N 4. - P. 410-415.

220. Neville, W.J. et al. //Poultry Sci. 1971, - N. 5. - P. 1411.

221. O'Dell. Влияние глицерина на образование молочной кислоты спермиями быка / O'Dell, Almquist, Flipse //J. Dairy. Sci. 1959. - N. 42. - P. 188.

222. Ohyashiki Т. et al. // Biochem. Bioph. Acta. 1988. - N 939.

223. Oshino, N. The Dietary Control of the Mocrosomal Steaiyl CoA Desaturation Enzymesystem in Rat Liver. / N. Oshino, R. Sato //Arch. Biochem. Biophys. -1972. Vol. 149, N. 2. - P. 369-377.

224. Pickett. Состав липидов спермиев и плазмы быка / Pickett, Kowarek, Jensen //J. Dairy Sci. 1963. - Vol. 47. - P. 1964.

225. Pitt. Gas chromatographic-mass spectrometric characterization of unsaturated fatty acids in urine / Pitt //J. Chromatogr. 1990. - Dec.

226. Polge, C. Revival of spermatozoa after vitrification and dehydration low temperatures / C. Polge, A.V. Smith, A.S. Parks //Nature. 1949. - N. 164. -P. 666.

227. Polge, C. Fertilization capacity of bull spermatozoa after freezing 79 °C / C. Polge, L.E.A. Rowson //Nature. - 1952. - N. 169. - P. 626-627.

228. Prasad, R. // In: Advances in Lipid Research. Academic Press New York. -1985.-Vol.21.

229. Pursel, V.G. Freezing of boar spermatozoa: fertilizing capacity with concentrated semen and new thawing procedure / V.G. Pursel, L.A. Johnson //J. Anim. Sci. 1975. - Vol. 40, N 1. - P. 99-102.

230. Pursley. Сравнение различных разбавителей в отношении сохранения активности спермиев быка / Pursley, Hernan, Dickensheat //J. Dairy. Sci. -1950.-N. 33.-P. 216.

231. Ramwell, P.W. Regulation of the arachidom acid cascade / P.W. Ramwell, E.M.K. Loevey, A.I. Sintetos //Biol. Reprod. -1977. Vol. 16, N. 1. - P. 70-87.

232. Ray-Sarkar. Аминокислотный состав спермы быка / Ray-Sarkar, Luecke, Duncan //J. boil. Chem. 1947. - N. 171. - P. 463.

233. Rothlin, M.E. Extraction and release of individual free fatty acids by the heart and fat depots / M.E. Rothlin, R.J. Bing //J. Clin. Invest. 1961. - Vol. 40. - P. 180-1386.

234. Ryser H.J.P. Histones and basic poliaminoacids stimulate the uptake of albumin by tumor cells in culture / H.J.P. Ryser, K.K. Hancoc //Science. -1965. Vol. 150. - P. 501-503.V

235. Salisbury, C.W. Preservation of bovine spermatozoon in yolk-citrate diluents and field results its use / C.W. Salisbury, H.K. Fuller //J. Dairy Sci. — 1941. — Vol. 27.-P. 11.

236. Samuelson, B. Metabolic transformation of arachidonic acid / B. Samuelson //Prostaglandins. 1976. - Vol. 11. - P. 431-435.

237. Saroff. Зависимость между содержанием яичного желтка и глицерина в разбавителях при глубоком замораживании / Saroff, Mixner //J. Dairy. Sci. 1955.-N. 33.-P. 292.

238. Scott. Окисление жирных кислот с короткими цепями (Ci — Cg) спермиями барана, быка, собаки и птиц / Scott, White, Annison //Biochem. J. 1962.-N. 83.-P. 392.

239. Siliprandi, N. Alcune osservazioni in tema di trasporto,deposito ed utilizzarine ossidativa dei lipid / N. Siliprandi //Quad. Sclavo diagn. clin. et lab. 1973-(1974). - Vol. 9, N. 1. - P. 215-224.

240. Singer, S.I. The fluid mosaic model of the structure of cell membrane / S.I. Singer, G.I. Nicolson //Science. 1972. - Vol. 175, N 4023. - P. 720-731.

241. Singer P., Gnauck G., Thoelke H., Honigmann G., Buntrock P., Kettler L.H. //Dtsch.Z.Verdamunge-und Stoffwechselkrankh. 1974. - Vol. 34, N. 1. - P. 27-35.

242. Slater T. // Biochem J. 1984. - N. 222.

243. Sprecher, Howard. The influence of dietary alterations fasting and competitive interactions on the microsomal chain elongation of fatty acids / Sprecher Howard //Biochem et Biophys. Acta. 1974. - Vol. 360, N. 2. - P. 113-123.

244. Stampf, R.K. Metabolism of fatty acids / R.K. Stampf//Ann. Rev. Biochem. -1969.-Vol. 38.-P. 159-212.

245. Stoffel, W. Der Stoffwechsel der ungestigten Fettsauren / W. Stoffel, H. Caesar//Heppa-Seylen's Z. Physiol. Chem. 1965. - Bd. 341. - S. 76-78.

246. Tagliamonte, B. Gli acidi grassi a numero dispari di atomi di carlonic-aspetti metabolici enutrizionali / B. Tagliamonte, B. Tomassi //Se TANU. 1976. -Vol. 6, N. l.- P. 12-17.

247. Vergroesen, A.I. Early sings of paly unsaturated fatty acid deficiency / A.I. Vergroesen //Nutr et dieta. 1976. - N. 23. - P. 19-26.

248. Vohkerman, H. The acetion of prostaglaudin synthetase on 2-arachaidonyl-leathin / H. Vohkerman, D.H. Drop //Biochem and Biophys Acta. 1968. -Vol. 164.-P. 430-432.

249. Vuyst. Аминокислотный состав спермы быка / Vuyst, Vervack, Henriet //Zootecn. et veterin. 1955. - Vol. 10. - P. 331.

250. Watson, P.F. The effect cold shock on sperm cell membrane / P.F. Watson //Effect of low temperatures on biological membrances. 1981. - P. 189-218.

251. Watson, P., Plummer, J. //In: Deep freezing of boar Semen. Ed. Johnson L. and Larson K., Uppsala, Sweden. 1985. - P. 119-126.

252. The development of essential-fatty acid deficiency in healthy men fat-tree diets intravenonsly and orally / D. Wehe. Jamie, E. William, Connor., Besten Den. Lawrence //J.clin.Invest. 1975. - Vol. 56, N. 1. - P. 127-134.

253. The localization of different synthetic systems for fatty acids in inner and outer mitochondrial membranes from rabbit heart / A.F. Whereat, M.W. Orishimo, J. Nelson, SJ. Phillips //J. Biol. Chem. 1969. - Vol. 244. - P. 6498-6506.

254. Wieneke. Аминокислотный состав спермиев и плазмы семени, лишенной белка / Wieneke //Deutsch. Tierartzl. Wochenschr. 1965. - Vol. 72, N. 24. -P. 571.

Информация о работе

Леднев, Антон Вениаминович
кандидата биологических наук
Нижний Новгород, 2005
ВАК 03.00.13

Диссертация

Физиологические свойства и жирнокислотный состав спермы быков при использовании биологически активного препарата "Милайф" - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Физиологические свойства и жирнокислотный состав спермы быков при использовании биологически активного препарата "Милайф" - тема автореферата по биологии, скачайте бесплатно автореферат диссертации

Похожие работы