Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Интенсификация воспроизведения в условиях промышленного свиноводства. Теория и практика

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Интенсификация воспроизведения в условиях промышленного свиноводства. Теория и практика"

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЖИВОТНОВОДСТВА (ВИЮ

РГБ ОД

- О 1335 На правах рукописи

Нарижный Александр Григорьевич

ИНТЕНСИФИКАЦИЯ ВОСПРОИЗВЕДЕНИЯ В УСЛОВИЯХ ПРОМЫШЛЕННОГО СВИНОВОДСТВА. ТЕОРИЯ И ПРАКТИКА.

Специальность 03.00.13 - физиология человека и животных

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

п. Дубровины Московской области 1995

- г -

Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском селекционно-генетическом институте животноводства (ВНИСГИЖ).

Научный консультант: доктор биологических наук, профессор В.Л. КОНОНОВ

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор М.И. КЛОПОВ, доктор ветеринарных наук, профессор В.А. ВОЛОДИН, доктор биологических наук, профессор А. Н. УСПЕНСКИЙ

Ведущее учреждение - Всероссийский научно-исследовательский институт племенного дела.

Защита диссертации состоится 1995 ГОда в

10 часов на заседании специализированного Совета Д 020.16.02 при Всероссийском научно-исследовательском институте животноводства.

Адрес института: 142012, Московская область. Подольский район, п. Дубровицы.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

Л

Автореферат разослан " " года.

Учений секретарь специализированного совета, доктор биологических наук

П. А. НАУМЕНКО

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность теш. Наиболее важной технологической проблемой в свиноводстве является воспроизводство поголовья, один из способов интенсификации которого - использование искусственного осеменения. Особенно большие возможности в племенной работе со свиньями имеет метод длительного хранения спермы. При этом появляется возможность более широкого племенного использования наиболее выдающихся производителей, а также создаются лучшие условия для эффективного испытания производителей по качеству потомства. Важную роль этот метод мог бы иметь для целей гибридизации в свиноводстве.

Многочисленные исследования, проведенные в нашей стране и за рубежом показали, что сперма хряка обладает более низкой устойчивостью к криогенным воздействиям по сравнению со спермой быка.

В связи с этим, необходимы более углубленные исследования биологических причин данного явления и разработка новых приемов защиты сперматозоидов, позволяющих повысить их выживаемость в процессе криоконсервации.

Большое значение имеют также вопросы совершенствования методов использования, как свежеразбавленной. так и криоконсервиро-ванной спермы хряков, с целью повышения результативности осеменения с одновременным снижением экономических и трудовых затрат на его проведение.

Актуален вопрос и о повышении воспроизводительной способности свиноматок и хряков, содержащихся в условиях промышленной технологии.

Как известно, интенсивность использования свиней определяется их способностью к более быстрому половому созреванию и сроками восстановления половой функции после очередных опоросов. Но в условиях содержания на комплексах часто отмечается замедление полового созревания свинок и задержка наступления эструса у маток после отъема поросят. Кроме этого, оплодотворяемость свиноматок в данных условиях также понижена. В связи с этим, необходимо дальнейшее совершенствование и разработка новых технологических и биологических приемов, позволяющих повысить репродуктивную функцию ремонтных свинок и взрослых маток.

Не менее важен также вопрос повышения воспроизводительной функции хряков. Это касается ускорения полового созревания молодых животных, повышения эффективности их приучения к садке на чучело свиньи, а также улучшения показателей их спермопродукции.

На решение этих задач и были направлены исследования, изложенные в данной диссертации, ставящие целью радикально модернизировать существующую технологию искусственного осеменения свиней, способную решать новые задачи и обеспечивать более высокую эффективность воспроизводства.

Цель работы состояла в создании обновленной технологии искусственного осеменения путем включения и усовершенствования методов криоконсервации спермы хряков и повышения эффективности использования замороженной и свежеполученной спермы, а также в разработке более совершенных приемов стимуляции воспроизводительной функции свиноматок и хряков.

Задали исследований.

1. Изучить влияние криоконсервации на систему регуляции переписного окисления липидов в сперме хряков.

2. Исследовать криозащитное действие на сперматозоиды хряков антиоксидантов с целью разработки новой синтетической среды.

3. Оснастить метод глубокого замораживания спермы хряка новыми более совершенными приборами и инструментами.

4. изучить влияние различных физиологических факторов на результативность осеменения свиней глубокозамороженной спермой.

5. Изучить возможность и экономическую эффективность транспортировки замороженной спермы хряков в отдаленные регионы страны.

6. Исследовать целесообразность применения более простых и дешевых синтетических разбавителей для осеменения свиней свежеполученной спермой.

7. Выяснить эффективность различных методов стимуляции эст-руса и индукции опоросов у свиноматок.

8. Изучить влияние феромонов на стимуляцию репродуктивной функции свиноматок и хряков.

Научная новизна. Установлено, что криоконсервация стимулирует пероксидацию липидов в сперматозоидах хряков. Показано, что криообработка индуцирует утечку из сперматозоидов хряка ферментов - супероксиддисмутазы и аспарагиновой трансаминазы. Выяснене-но защитное действие синтетческих антиоксидантов на сперматозоидов при замораживании семени.

Создана и внедрена в практику новая синтетическая среда для замораживания спермы хряков (A.C. N626773, 1978 г.). Разработан диализный метод криоконсервации семени хряков.

Впервые в стране разработана, усовершенствована и внедрена в практику свиноводства технология глубокого замораживания и длительного хранения спермы хряков. Доказана возможность транспорта замороженной спермы видающихся хряков в отдаленные и трудно доступные регионы России и стран СНГ для повышения эффективности племенной работы. Усовершенствованы универсальные приборы для искусственного осеменения свиней (УПОС-1,2), позволяющие значительно сократить потребную дозу спермы для осеменения.

Установлена возможность применения более простых и дешевых разбавителей спермы при ее краткосрочном хранении в охлажденном состоянии.

Разработаны приемы физиологической, гормональной и сенсорной стимуляции для регуляции воспроизводительной функции у свиноматок при разных способах их содержания. Усовершенствована методика синхронизации опоросов у свиней.

Выяснена возможность стимуляции воспроизводительной функции у хряков-производителей с помощью феромонов.

Основные положения, выносимые на защиту:

- методы повышения устойчивости сперматозоидов хряков путем регулирования окислительно-восстановительных процессов в семени;

- новые способы индукции и стимуляции половой доминанты у свиноматок с применением биологически активных и гормональных средств;

- новая техника для искусственного осеменения свиноматок:

- высокоэффективный способ решения задач племенной работы в отдаленных регионах страны путем сверхдальной транспортировки криоконсервированного семени хряков.

Практическое значение работы. Предложение) вводить в состав сред в качестве криопротективных средств антиоксиданы БОТ. БОА, ИХФГАН-3, что повышает результативность осеменения свиноматок.

Предложенный способ концентрирования спермы хряков перед ее замораживанием путем диализной обработки способствует уменьшению потребностей в хладоагентах и криогенных емкостях, а также значительно снижает трудовые затраты.

Практическое применение метода осеменения маток криоконсер-вированной спермой дает значительный экономический и генетический эффект не только в племенном, но и в товарном свиноводстве.

Использование при краткосрочном хранении охлажденной спермы хряков более простых синтетических разбавителей значительно снижает экономические затраты при искусственном осеменении свиней.

Разработаны новые более эффективные приемы физиологической и гормональной стимуляции свиноматок и ремонтных свинок позволяет значительно сокращать послеродовой период, ускоряет приход их в охоту и повышают результативность искусственного осеменения.

Сенсорные приемы стимуляции воспроизводительной функции хряков позволяют ускорить период полового созревания хрячков и повышают их спермопродукцию.

Реализация результатов исследований. Материалы, полученные в данной работе, использованы при разработке научно-методических и нормативно-технических документов:

1. Методические указания по стимуляции воспроизводительной функции свиноматок в условиях промышленной технологии. - Москва, 1985 г.

2. Система производства свинины при низкоконцентратном кормлении свиней на опыте Белгородской области. - Белгород, 1989 г.

3. Методические рекомендации по криоконсервации семени хряков. - Дубровицы, 1991 г.

4. Методические рекомендации: Cryoconservatlon of boar semen. - Dubrovitsy, 1993.

Разработанная технология криоконсервации спермы хряков используется в России и на Украине.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и одобрены на:

- 8-м съезде НТО сельского хозяйства СССР. - 1982;

- 2-м Всесоюзном совещании по химической коммуникации животных. Москва, 1983;

- Всесоюзных совещаниях по воспроизводству свиней. - Москва. - ВДНХ СССР, 1983-1991 гг;

- 3-м Всесоюзном совещании по химической коммуникации животных. Москва, 1988:

- Международной конференции "Биологические основы высокой продуктивности с.-х. животных". - Калуга, 1990;

- 1-1й республ!канськ1й конференцИ иБ1отехнолог1чн1 досл1даення 1 перспектива 1х розвитку" - Льв1в, 1990;

- Всероссийской научной конференции по производству и комплексной переработки продукции животноводства. - Углич, 1993;

- 1-й и 2-й международных конференциях "Миловановские чтения'' ВИЖ, 1993, 1994;

- ученом совете ВНИСГИЖ. - 1993, 1994;

- Всероссийской научной и учебно-методической конференции по акушерству, гинекологии и биотехнике размножения животных. - Воронеж, 1994;

. - международной научно-практической конференции "Пути повышения производства и улучшения качества свинины". - Харьков, 1994.

По материалам диссертации опубликовано 28 печатных работ в журналах "Доклада ВАСХНИЛ", "Доклады Российской академии с.-х. наук". "Животноводство". "Зоотехния", "Свиноводство", "Ветеринария", , "Сельскохозяйственная биология". Трудах ВНИСГИЖ. ВНИИРГЖ, Харьковского СХИ.

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных материалов, выводов, предложений производству, списка литературы и приложения. Работа изложена на 358 страницах машинописного текста, содержит 72 таблицы и 17 рисунков. Список литературы включает 596 источников, из них 320 иностранных.

Общая схема исследований

Разработка технологии интенсивного воспроизводства в уоловиях промышленного свиноводства

Интенсификация воспроизводи' тельных функции

Совершенствование техники искусственного ооеменения

Хряков

Маток

Совершенствование методов детекции охоты у шток

Синхронизация охоты у свиноматок

Разработка более аффективных

Криоконоерва-ция семени

Оптимизация условий кормления

Ольфакторная стимуляция воспроизводительных функций

Оптимизация уоло-вий оодержания

Стимуляция по-ловои доминанты

Сред для обмени

Инструментов

I

00 I

Гормональными препаратами

I

Негормональными препаратами

Развитие теории криоконоервации семени

I

Разработка новых приемов криопротек-тивной обработки оемени

Оптимизация дозирования оемени

Использование крио-коноервированноро оемени в племработе

Новая технология интенсивного воспроизводства овиней, ядяпФ1трп-(у»,пяая а условиям промышленного свиноводства

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Экспериментальные исследования выполнены в отделе биотехнологии воспроизведения с.-х. животных ВНИСГИЖ и в отделе биологии воспроизведения с.-х. животных ВИЖа.

Научно-производственные опыты в период с 1980 по 1995 гг. были проведены на базе хозяйств Белгородской, Московской, Камчатской, Сахалинской областей и республик Бурятия. Кара-Калпакс-тан, Украина. Объектом исследований служили сперма хряков различных пород, а также хряки, свиноматки и ремонтные свинки разных пород.

Исследование устойчивости сперматозоидов хряков к перекисно-му окислению липидов с помощью метода индуцированной ионами железа хемилюминесценции (Ю.А. Владимиров, М. П. Шерстнев, 1989). Анализ активности супероксиддисмутазы в сперме животных проводили хемилюминесцентным микрометодом (F. Huu et al., 1984). При этом использовали медицинский хемилюминометр ХЛМ 1 ц-01, ФЭУ-130. Активность аспарагиновой (ACT) и аланиновой (АЛТ) трансаминаз в на-тивной и криоконсервированной сперме хряков проводили по модифицированному методу Умбрайта (A.A. Покровский, 1969).

Опыты по развитию технологии криоконсервации семени хряков проводили совместно с В.П.Кононовым.

При изучении криопротективного действия разных веществ на сперму хряка оптимальное соотношение компонентов находили методом встречных арифметических и геометрических рядов и методом треугольных графиков по В.К.Милованову (1962). Изотоническую концентрацию веществ для спермы хряка определяли криоскопическим и биологическим методами.

Эффективность разных синтетических сред для спермы хряков определяли по подвижности и выживаемости образцов спермы и по результатам искусственного осеменения маток.

Для замораживания спермы использовали эякуляты с подвижностью не менее 70% и концентрацией - не менее 200 млн/мл. Замораживали сперму в гранулах объемом 0,5 мл на пластине "сухого" льда или охлажденной фторопластовой пластине (Ющенко Н.П., 1968). Оттаивали сперму с помощью гидрооттаивателя конструкции ВИЖа (Кононов В.П. и др., 1975). Осеменение свиней проводили двукратно в течение эструса.

При изучении влияния феромонов на выявление зструса у свиней проводили сравнительное исследование влияния естественных источников феромонов хряка: слюны, препуциального смыва, мочи, спермы и синтетических аналогов половых феромонов (СтО-1, СтО-2). синтезированных в Институте эволюционной морфологии и экологии животных им. А.Н. Северцева РАН (Соколов В.Е. и др.. 1986).

В экспериментах по влиянию половых феромонов на половое созревание свинок применяли импортный препарат "Суидор" и разработанный нами препарат "Стимул".

Эффективность гормональной стимуляции эструса у свиней выясняли с помощью комплексной их обработки тривитамином (А.Д.Е). СЖК и хорионическим гонадотропином (ХГ).

В опытах по синхронизации опоросов у свиней анализировали эффективность комплексного применения эстрадиола дипропионата, раствора серотонина адипината, окситоцина, эстрофана и глюконата кальция.

С целью стимуляции воспроизводительной функции хряков изучали действие феромонов свиноматок (препарат "Стимульгин").

Экономическую эффективность использования разных препаратов (феромонов, гормонов, витаминов, простагландинов и др.). приборов, разбавителей и криоконсервированного семени определяли с учетом их фактической стоимости на декабрь 1994 года.

Биометрическую обработку полученных данных проводили по Е.К. Меркурьевой (1964).

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Биотехнические приемы повышения воспроизводительной способности хряков и маток

3.1.1. Эффективность выявления охоты у свиней с помощью естественных и синтетических феромонов

В практике свиноводства выявление состояния охоты у свиноматок чаще всего проводят с помощью хряков-пробников. При этом оль-факторные, визуальные и звуковые сигналы, исходящие от самцов, улавливаются самкой в охоте, что вызывает у нее проявление рефлекса неподвижности. Однако использование хряков-пробников связа-

но со значительными экономическими и трудовыми затратами, поэтому мы попытались при отборе маток в охоте вместо хряков-пробников применить их естественные феромоны, выделяемые с различными экскретами. Для этого нами были проведены специальные опыты по сравнительному испытанию естественных источников феромонов: слюны, препуциального смыва, мочи, спермы.

Было установлено, что хотя естественные половые феромоны хряков повышают количество маток, положительно реагирующих на надавливание в области поясницы, ни в одном варианте не было, чтобы все матки, находившиеся в состоянии охоты, проявили этот рефлекс в ответ на надавливание. Следовательно, использование естественных половых феромонов в сочетании с надавливанием на область поясницы не является надежным тестом для выбора маток в состоянии охоты.

Таблица 1

Выявление свиноматок с рефлексом неподвижности в зависимости от применяемых феромонов

Феромон Концентрация феромона в растворе (мг%) Число свиноматок в охоте Свиноматки, проявившие рефлекс неподвижности

Число %

СтО-1

СтО-2

О 50 100 150 200 250 300 0 25 50 75 100 125 150

233 233 233 233 233 233 233 217 217 217 217 217 217 217

129 161 185 181 180 175 177 114 155 177

174 172

175 171

55,3+3,2

69,0+3,0*

79,4+2,7**

77,6+2. 7**

77,2+2,7**

75,1+2,8**

75. 9+2,8**

52,4+3,3

71.4+3.3**

81,6+2.6**

80,2+2,6**

79,2+2,7**

80,6+3,2**

78.8+2.7**

*)Р>0.01; **)Р<0,001

В связи с тем, что в настоящее время освоен выпуск синтетических аналогов феромонов, мы в последующем эксперименте выяснили эффективность применения синтетических феромонов Ст0-1 и Ст0-2 для выявления маток с рефлексом неподвижности (табл. 1).

Из таблицы 1 видно, что использование обоих феромонов высокодостоверно, повышает число выявляемых животных с рефлексом неподвижности. Наибольший процент выявленных свиноматок в охоте отмечается при концентрации СтО-1 100 мгЯ и Ст0-2 50 иг%. Следовательно, использование синтетических половых феромонов в сочетании с надавливанием на область поясницы может быть рекомендовано для практического выявления свиноматок в охоте.

3.1.2. Влияние феромонов хряка на результативность искусственного осеменения

Имеются сообщения, что определенные синтетические аналоги феромонов способствуют усилению моторики матки (Журбенко A.M.. 1983) и повышают оплодотворяемость свиноматок (Волощик П.Д. и др., 1982; Соколов В.Е. и др., 1983).

В этой связи целью наших экспериментов было сравнительное изучение влияния на оплодотворяемость свиноматок синтетических аналогов феромона хряков: СтО-1, СтО-2 и "Суидор". Кроме того, изучали влияние феромоноподобных веществ хряка, содержащих в экстрактах корней пастернака посевного и сельдерея (Claus R., Hoppen Н., 1979). Данные представлены в таблице 2.

Таблица 2

Результаты искусственного осеменения маток в связи с воздействием в момент осеменения различными феромонными препаратами

Источник феромонов

Осеменено маток

Опоросилось число! %

Количество родившихся поросят всего I многоплодие

Без воздействия (контроль) ^С^идор"

Спиртовый

экстракт

сельдерея

Спиртовый

экстракт

пастернака

*)Р<0,05

298 311 315

95

101

237 80, 0+2,3 2253 173 87,7+1,8* 2695 280 88,8+1.8* 2745

79 83,1+3.8 85 84,1+3,6

764 833

9.5 9.8 9.8

9.7

9.8

Из данных таблицы 2 видно, что СтО-1 и "Суидор" повышают результативность осеменения на 8-9%, тогда как вытяжки из сельдерея и пастернака повысили результативность осеменения на 3-4% (Р<0,05). Очевидно, это обусловлено более низкой концентрацией активных веществ в экстрактах корней этих растений.

Данные этих экспериментов показывают, что для повышения результативности осеменения в свиноводстве успешно может быть использован синтетический аналог полового феромона хряка - СтО-1, который в этом отношении не уступает немецкому препарату "Суидор".

3.1.3. Влияние феромонов хряка на эструс у маток

В настоящее время как в нашей стране, так н за рубежом проводятся интенсивные исследования по стимуляции эструса у свиноматок после отъема у них поросят (Клинский Ю.Д. и др.. 1977: Башке-ев Е.Д., 1978, 1979). Особый интерес представляет использование различных феромонов хряка для индуцирования эструса у свиноматок. Поэтому в задачу наших исследований входило изучение эффективности использования хряков-пробников для стимуляции эструса у свиноматок после отъема поросят.

Было установлено, что контакт свиноматок с хряками во время подсоса способствует ускорению наступления эструса после отъема поросят. Предоставление маткам выгула само по себе стимулировало наступление охоты, а сочетание этих факторов: контакта с хряками и моциона усилило положительное воздействие на проявление половой доминанты у маток. Наиболее эффективным оказалось сочетание контакта с хряком, начиная за 3 дня до отъема поросят и свободно-выгульного содержания свиноматок. В этом случае в охоту за 12 дней после отъема поросят пришло 8955 маток.

Затем мы провели исследования по влиянии синтетического феромона - "Суидор" на стимуляцию эструса у свиноматок и результативность их осеменения.

Действие препарата изучали на фоне выгульного или безвыгульного содержания свиноматок (табл. 3). Контрольных свиноматок не подвергали обработкам феромоном, а на животных опытных групп воздействовали феромоном двукратно в день за 5 или 3 дня до либо

сразу после отъема поросят, а также во время осеменения. Для воздействия феромоном в помещении препарат разбрызгивали из пульверизатора или наносили по 0.1 мл на носовое зеркало каждой матке. Маток осеменяли свежеполученной спермой дважды в течение эструса.

Таблица 3

Действие "Суидора" на эффективность стимуляции эструса и оплодотворяемость свиноматок

Группа опыта

Число свиноматок

Пришло в охоту за 21 день после отьема

Опоросилось

число I % I число | %

Многоплодие

Содержание свиноматок без моциона

Без стимуляции

(контроль) 60 42 70+5,9 31 74+6,7

Стимуляция феромо-

ном до отьема: за 5 дней за 3 дня После отъема Во время осеменения

60 60 60

60

54

55 51

36

90+3,8* 91+3,6* 85+4,6*

40

41 37

74+5,9 75+5,8 73+6,2

72+6,3 27 75+7.2

Без стимуляции (контроль) Стимуляция феромоном до отьема: за 5 дней за 3 дня После отьема

Во время осеменения

Содержание свиноматок с моционом

60

57

95+2,8 48 84+4,8

*)Р<0,05

60 58

60 59

60 59

60 48

97+2,2 98+1.8 98+1.8

48

51

52

83+4.9 86+4.5 88+4.2

96+2.7 44 92+3,9

9,2

9,8 9.7 9,5

10,0

9,9

9,9 10.1 10.2

10,5

Из данных таблицы 3 видно, что при безвыгульном содержании стимуляция феромоном повысила приход свиноматок в охоту на 15-21Я5, многоплодие - на 3,4-8,735. Наибольшее число поросят на 100 маток получено при стимуляции "Суидором," начиная за 3-5 дней до отьема поросят.

При выгульном содержании свиноматок и без стимуляции феромоном приход маток в охоту повышается на 25%. супоросность - на

10,4% и многоплодие - на 7,9% по сравнению с безвыгульным содержанием. Применение феромона при выгульном содержании не повышает приход животных в охоту и на результаты осеменений.

Следовательно, для повышения воспроизводительных функций свиноматок, содержащихся без выгула в условиях промышленного комплекса, можно проводить их стимуляцию феромоном - "Суидор", начиная обработки за 3-5 дней до отъема поросят.

3.1.4. Действие феромонов на половое созревание свинок

Имеются данные о том, что на скорость полового созревания свинок можно воздействовать с помощью контактирования их с половозрелыми хряками (Шипилов B.C. и др., 1974). Учитывая это, мы решили испытать влияние различных феромонов на стимуляцию воспроизводительных функций у свинок крупной белой породы при их выращивании во все сезоны года. В опытах применяли феромон "Суидор" и новый предложенный нами феромонный препарат - "Стимул".

Было установлено, что имеются сезонные различия по скорости прихода животных в охоту без обработки феромонами, особенно заметные в группе с безвыгульным содержанием. Снижение прихода в охоту отмечалось в весенне-летне-осенний сезоны года.

Применение "Суидора" и "Стимула" в этой группе повышало процент животных, пришедших в охоту во все сезоны года, по сравнению с контрольной. Однако применение препарата "Стимул" при свободно-выгульном содержании свинок не оказало достоверного увеличения на скорость прихода их в охоту по сравнению с животными без обработки.

Статистически достоверное увеличение прихода свинок в охоту отмечено при свободно-выгульном содержании как без применения феромона "Стимул", так и с его применением по сравнению с животными контрольной группы во все сезоны года, кроме зимы.

Стимуляция воспроизводительных функций свинок "Суидором" и "Стимулом" при безвыгульном и особенно свободно-выгульном содержании сокращает сроки прихода ремонтных свинок в охоту. В этих экспериментах также было показано, что оплодотворяемость свинок была самой высокой при выгульном содержании и при воздействии препаратом "Стимулом" во время осеменения. Многоплодие было самым высоким в группе выгульного содержания и при стимуляции этим пре-

паратом во время осеменения.

Положительное влияние препарата "Стимул" на результативность осеменения маток, вероятно, объясняется тем, что при его воздействии во время осеменения происходит усиление половой доминанты, проявляющейся прежде всего в усилении окситоцинового рефлекса. Это. в свою очередь, ускоряет продвижение спермы по половым путям в краниальные участки, где существуют условия для наиболее высокой выживаемости сперматозоидов (Хантер Р., 1984).

Таким образом, стимуляция воспроизводительных функций у ремонтных свинок с помощью "Суидора" и "Стимула" при безвыгульном их содержании ускоряет сроки наступления эструса и повышает оплодотворяемость и многоплодие животных. Однако в условиях безвыгульного содержания стимуляция охоты феромонами не устраняет полностью отрицательных воздействий гиподинамии.

3.1.5. Индуцирование эструса у свиней с помощью гормональных препаратов

На многих промышленных комплексах наблюдается длительное отсутствие эструса у свиноматок после опоросов, что вызывается нарушением технологии отъема поросят, недостаточным витаминным питанием животных, отсутствием моциона и другими причинами.

Предлагаются методы преодоления половой депрессии у свиней в летний период с помощью пироксина и СЖК (Клинский Ю.Д. и др.. 1981). Сообщается о положительном влиянии на синхронизацию эструса у свиней тривитамимна, СЖК и ЛГ (Мартыненко H.A. и др., 1975; Прокофьев М.И., 1983).

Таблица 4

Эффективность использования негормональных и гормональных препаратов для стимуляции воспроизводительной функции у свиноматок

Препараты

Обра- Пришло в Осе- Опо- Много-

бота- охоту в мене- роси- плодие

но течение но лось.

сви- 10 суток маток {%)

нома- после об-

ток работки

Масса поросенка при рождении (кг)

Тривитамин 103 СЖК 109

Тривитамин+СЖК 106 Тривитамин+СЖК+ ХГ 137

Осеменение свежеразбавленной спермой 43,6+4.8 45 80+3.9 9,4 77,0+4,0*« 84 60+4,0 9.3 89.6+2,9** 95 69+4.4 9,7

91,2+2.4** 125 84+3,1 10,6

1,25+0,04 1,23+0,03 1.24+0.02

1.24+0,03

Тривитамин СЖК

Тривитамин+СЖК Т|>ивитамин+СЖК+

Осеменение 50 50 53

[ение криоконсервированной спермой 58,0+6 Л 29 58+6.9 9,2 1,29+0.03 64,0+6.7 32 65+6.7 9,3 1.27+0,04 73,0+6.0 39 74+5.9 9,5 1,29+0.02

59 79.0+5.2* 47 81+5.2*10,1

1,28+0,01

*)Р<0.05 **)Р<0,01

В связи с этим, в своих исследованиях, мы изучали эффективность стимуляции эструса у свиноматок с помощью СЖК, ХГ и триви-тамина, применяемых по отдельности или в комплексе.

Результаты этих экспериментов суммированы в таблице 4.

Из таблицы 4 видно, что комплексное применение испытуемых препаратов стимулировало самый высокий процент, максимально повышало результативность осеменения.

На основании проведенных экспериментов можно заключить, что использование комплексной обработки маток, не пришедших в охоту с помощью тривитамина, СЖК и ХГ. позволяет получать хорошие результаты по индуцированию эструса и по эффективности осеменения как свежеразбавленной. так и криоконсервированной спермой.

3.1.6. Синхронизация опоросов у свиноматок с помощью биопрепаратов

Для получения уплотненных опоросов и формирования одновоз-растных групп поросят в свиноводстве применяют стимуляцию опоросов. Для инициации и стимуляции родовой деятельности применяются различные методы (Володин В.А. и др.. 1984; Гордон А.. 1988).

Однако, до сих пор отсутствует достаточно эффективный и надежный метод стимуляции опоросов.

Целью наших исследований было изучение эффективности стимуляции опоросов у свиноматок с помощью комбинированного применения эстрогенов, серотонина, окситоцина и простагландина.

Для опытов было сформировано четыре группы супоросных свиноматок-аналогов. Первая и вторая группы были осеменены свежераз-бавленной спермой, а третья и четвертая - замороженной.

Результаты стимуляции опоросов приведены в таблице 5.

Данные таблицы 5 свидетельствуют о высокой эффективности примененной нами схемы обработки для синхронизации опоросов. При этом продолжительность опоросов в опытных группах была достоверно ниже, по сравнению с контролем.

Результаты эксперимента свидетельствуют, что предложенный нами метод синхронизации опоросов на 112-й день супоросности довольно эффективен и может найти практическое применение для получения опоросов в дневное время и улучшения сохранности новорожденных поросят.

Таблица 5

Эффективность стимуляции опоросов у свиноматок

Использованная сперма для осеменения

Изучаемые показатели

Свежеразбавленная

без обработки (контроль)

эстрогены*

серотонин+

глюконат

Са+ОКС+ПГ

Криоконсервированная без обра-

ботки (контроль)

эстрогены+се-ротонин+глю-конат Са+0КС+ ПГ

Число свиноматок Продолжительность супоросности (дней) Время от инъекции до опороса (час) Продолжительность опороса (мин) Количество поросят в помете Число мертворожденных

Масса поросенка при рождении (кг) Масса поросенка в 35 дней (кг) сохранность поросят в 35 дней (55)

Период от отъема до прихода маток в охоту (дней)

30 29

115,6+0.12* 112.9+0,16 18.3+0,07

30 31

114,2+0,13 113.1+0.15 18.6+0.08

310+0,97* 10.1+0,15

6

1,25+0,01 7.3+0,08

198+1,7 9.9+0,09

5

1,21+0,09 7,27+0,09

335+0,35* 9, 9+0,09 5

1.45+0,01 7. 9+0. 08

328+1.22 9.8+0.13 5

1,39+0.12 7.84+0,07

90,4+1,95 90,6+1,91 96,6+1.7 97.0+1,73 8,10+0,13 7,95+0,15 8,15+0,13 8,10+0,14

*)Р<0,01"

3.1.7. Биотехническая стимуляция воспроизводительной функции хряков

В своей работе мы решили изучить эффективность полового феромона "Стимульгин", на скорость выработки у молодых хрячков условного полового рефлекса на чучело и на биологические показатели эякулятов.

Результаты по выработке условного полового рефлекса хряков к садке на чучело приведены в таблице 6.

Данные таблицы показывают, что применение препарата "Сти-

мульгин" способствует приучению молодых хрячков к садке на чучело. Особенно это эффективно при свободно-выгульном содержании животных. При этом значительно сокращается время, необходимое для

Таблица 6

Влияние феромона "Стимульгин" на приучение хряков к садке

на чучело

Условия опыта

Число хрячков

Приучено к садкам число I %

Затрачено на приучение дней | попыток

Без применения феромона (контроль) 15 С I

Безвыгульное содержание 5 33.3+12.1

применением "Сти-мульгина" 16 10 62,5+12,0

Без применения феромона (контроль) С применением "Сти мульгина"

Выгульное содержание 15 8 53,3+13,0 15 12 80,0+10,О

22 9

17 14

21 7

15 12

их приучения. Кроме того, были проведены исследования по изучению влияния данного препарата на спермопродукцию хряков. При этом установлено. что использование препарата во время взятия спермы увеличивает концентрацию сперматозоидов и их общее количество в эякуляте. Следовательно, препарат "Стимульгин" может быть эффективно использован для улучшения выработки условного полового рефлекса у хряков на чучело и повышения их спермопродукции.

3.2. Повышение эффективности использования свежевзятой спермы хряков.

3.2.1. Влияние состава разбавителя на результативность осеменения маток свежевзятой спермой

В настоящее время для разбавления и хранения спермы хряков в охлажденном состоянии при температуре 16-20 С применяют ГХЦ и ГХЦС - среды. Среда ГХЦ (Плишко Н.Т., 1968) имеет ограниченное

применение из-за того, что не допускает больших степеней разбавления. Вторая, ГХЦС среда (Балашов Н.Г. и др., 1970) позволяет разбавлять сперму в любых концентрациях, но из-за наличия в своем составе сульфата аммония не выдерживает длительного хранения в виде сухих заготовок, что затрудняет ее централизованное изготовление.

Поэтому в ВГНКИ ветпрепаратов разработали новый вариант среды для разбавления и хранения спермы (ГХЦСН-РУ-1). которая, во-первых, может неограниченно долго храниться в виде сухих заготовок, во-вторых, обладает более сильными протективными свойствами на сперматозоида. Состав ГХЦСН-РУ-1: глюкоза - 37 г, ЭДТАШаз) - 2.5 г, цитрат натрия трехзамещенный - 0,5 г, натрий сернокислый безводный - 2,5 г, вода дистиллированная 1 л.

Для выяснения практических преимуществ новой среды, по сравнению с ГХЦС средой, нами были проведены специальные опыты.

Результаты опытов по осеменению свиноматок спермой, разбавленной соответствующими средами после их предварительного хранения в течение нескольких месяцев, показали, что сохранение сухих заготовок среды ГХЦС в течение 17 месяцев приводит к резкому снижению ее биологической полноценности, о чем свидетельствует понижение результативности осеменения. Сохранение же сухой заготовки среды ГХЦСН-РУ-1 даже в течение 17 месяцев не приводило к снижению ее биологической полноценности, что подтверждается результативностью осеменения. Кроме того, установлено, что использование свежеприготовленной среды ГХЦСН-РУ-1 привело к повышению результативности осеменения по сравнению со средой ГХЦС.

Таким образом, новая среда может быть использована в практике искусственного осеменения свиней, сохраняемой в охлажденном состоянии.

В задачу наших исследований также входила проверка эффективности осеменения свиноматок свежеполученной спермой, разбавленной различными разбавителями в сравнении со стандартной ГХЦС средой. Свежеразбавленную сперму от момента взятия до ее использования сохраняли не более 2-х часов.

Таблица 7

Влияние разбавителей на результативность осеменения маток свежеполученной спермой

Использованный Осеменено Опоросилось Многоплодие

разбавитель маток число | %

ГХЦС (контроль) 195 161 82,0+2,7 10,2

Глюкозо-сульфат-

ный разбавитель 185 151 81,0+2,8 10,0

Сахарозо-сульфат- 165 86,0+2,5

ный разбавитель 191 10.1

Сульфатный разба-

витель 201 172 86.0+2.4 10.0

Как показали исследования (табл. 7), при искусственном осеменении свиноматок спермой, разбавленной глюкозо-сульфатным или сахарозо-сульфатным или сульфатным разбавителями, получены аналогичные результаты по опоросам и многоплодию свиноматок, как и при использовании стандартной ГХЦС среды.

Таким образом, наш данные говорят о том. что в условиях внутрихозяйственных станций при искусственном осеменении свиней свежеразбавленной спермой можно применять более простые и дешевые разбавители, что дает значительный экономический эффект.

3.3. Развитие метода криоконсервации семени хряков

3.3.1. Факторы, обуславливающие криогенные повреждения и устойчивость сперматозоидов

3.3.1.1. Перекисное окисление липидов и криоустойчивость сперматозоидов

Имеются сообщения, что криоконсервация может стимулировать перекисное окисление липидов (ЛОЛ) в сперме животных (Наук В.А. и др., 1983: Ерохин A.C. и др., 1992). В связи с этим в наших экспериментах мы изучали влияние криоконсервации на уровень перокси-дации липидов в гаметах хряка.

Для изучения ПОЛ мы применяли метод индуцированной ионами железа хемшиоминесценции (Журавлев А. И., 1965; Владимиров Ю. А. и др., 1991). Предварительные эксперименты показали, что нативные

сперматозоиды хряка имевт очень слабую спонтанную хемилюминесцен-цию (ХЛ). Введение же в образец ионов железа индуцирует ПОЛ. При этом на кривой ХЛ видны фазы быстрой и медленной вспышек свечения, латентный период и стационарное свечение.

Кинетические показатели кривой ХЛ в нативных и подвергнутых замораживанию-оттаиванию сперматозоидах представлены в таблице 8.

Таблица 8

Величина амплитуды быстрой (М и медленной (Н) вспышек ХЛ в суспензии сперматозоидов хряка

Группа опыта 1 1 п | И 1 н

Нативные сперматозоиды 6 0,9+0,31 1.24+0.1

Замороженно-огтаянные 7 0,7+0,08 1.55+0,2

Из таблицы 8 видно, что процесс криоконсервации сперматозоидов оказал стимулирующее влияние на пероксидацию липидов. Амплитуда свечения быстрой вспышки сразу после оттаивания понизилась на 23%. Амплитуда же медленной вспышки после оттаивания повысилась на 20% (Р<0,05). Это свидетельствует, как об интенсификации ПОЛ, так и об ослаблении функции антиоксидантной системы в гаметах хряка, подвергнутых глубокому замораживанию.

Как видно из полученных результатов, криоконсервация оказывает стимулирующее влияние на ПОЛ в сперме хряка. При этом могут повреждаться важные структуры сперматозоидов, участвующие в регуляции метаболизма и процессах оплодотворения ооцитов. С этим может быть связана одна из причин снижения оплодотворяющей способности оттаянной спермы хряков.

3.3.1.2. Значение активности супероксиддисмутазы в сперматозоидах на их выживаемость при замораживании

Имеются данные, что в клетках животных ПОЛ может индуцироваться супероксидным радикалом 0«, который является источником всех внутриклеточных активных форм кислорода (Афанасьев И. Б., 1988; Владимиров Ю.А. и др., 1991). Большинство аэробных клеток имеет эндогенные антиоксидантные ферменты, защищающие их от токсических производных кислорода, ключевым из которых является су-пероксиддисмутаза (СОД). В связи с подверженностью сперматозоидов

хряка ПОЛ, мы решили выяснить вопрос о сохранности активности СОД в процессе охлаждения и замораживания спермы хряков.

Таблица 9

Влияние криообработки на активность СОД в сперме хряка (п=10)

Образцы спермы, инкубация при 37 С

Подвижность сперматозоидов. %

% гамет с неповрежденной акросомои

Активность СОД. ед. акт/мл среды

До замораживания 84+5,3 Через 15 мин после

оттаивания 46+4,1 Через 60 мин после

оттаивания 35+2,1 Через 120 мин после

оттаивания 30+2,О

89+6,5 58+5,1 50+2,8 45+3,2

5.9+0,6 4,1+0,4 4,6+0.3 6,7+0.6

Опыты по изучению влияния процесса замораживания-оттаивания на активность СОД проводили в сперматозоидах совместно с А.С.Еро-хиным. Результаты представлено в таблице 9.

Результаты этого эксперимента показали, что через 15 минут после оттаивания активность СОД в окружающей среде понизилась на 20% (РС0.05). Затем она начала повышаться и через 2 часа инкубации при 37 С превышала начальный уровень на 9% (Р>0,05). При этом также не было обнаружено заметной корреляции между активностью СОД и сохранностью подвижности, а также целостности акросом в оттаянных сперматозоидах хряка.

Увеличение концентрации внеклеточной СОД в оттаянной сперме хряка через 2 часа после инкубации, вероятно, объясняется увеличением выхода фермента из половых клеток в результате нарастания биодеструктивных изменений в их плазматических мембранах.

3.4. Влияние различных веществ на устойчивость спермы хряка при замораживании

3.4.1. Действие неэлектролитных и электролитных компонентов сред

Для повышения биологической полноценности криоконсервирован-

ной спермы необходима разработка новых синтетических разбавителей, которые бы оказывали максимальное криопротективное влияние на половые клетки. На основании проведения многочисленных лабораторных и производственных испытаний нами было разработано два оптимальных варианта синтетических сред для замораживания спермы хряков (табл. 10).

Результаты осеменения свиноматок спермой, замороженной в различных вариантах сред, суммированы в таблице 11.

Результаты этих экспериментов показали, что замораживание спермы хряка в новых средах обеспечивает получение высокой результативности осеменения свиноматок. Процент опоросов был в пределах 53-71 при хорошем многоплодии. Все это свидетельствует о хороших криозащитных свойствах разработанных нами синтетических сред.

Таблица 10

Состав сред для замораживания спермы хряков

Компоненты сред

Количество (г)

1-й вариант 2-й вариант

Лактоза или сахароза Глюкоза

Цитрат натрия, трехзамещенный

50 16

50 16 3

Оксид кальция Оксид магния Гидроксид натрия Гидроксид калия Глицерин, мл Желток куриного яйца, мл Вода дистиллированная, мл

0,6 0,4 0,3 0,1 40 50 1000

8

3

2 0,6 4

40 50 1000

Результативность осеменения свиней спермой, разных средах

Таблица 11 замороженной в

Основные компоненты

Осеменено маток

Опоросилось Получено поросят

число

всего живых

мертворожденных

многоплодие

Сахароза, глюкоза, ЗДТА, оксиды кальция и магния 22 Лактоза, фруктоза, ЭДТА, оксиды кальция и магния 42 Сахароза, трис, ЭДТА, сульфат аммония+глюко-за и фруктоза 100

Сахароза, глюкоза, фруктоза, ЭДТА, оксиды кальция и маг-ния+гидроксиды натрия и калия 120

13 59+10 122 30 71+8 250

53 53+5

71 59+5

445

665

О 18

20

10

9,0 8,0

8,4

9,4

3.4.2. Влияние биоантиоксидантов

Учитывая, что криоконсервация стимулирует пероксидацию липи-дов в сперме хряка, в своих исследованиях мы предусмотрели изучение криозащитного влияния на сперму различных антиоксидантов. В частности, мы изучили эффективность биоантиокислителей (витамины Е и С) на устойчивость спермы хряка к замораживанию.

Результаты предварительных лабораторных исследований показали, что добавка в среду для замораживания а-токоферола в оптимальной концентрации повышает живучесть сперматозоидов после оттаивания.

Изучение влияния а-токоферола на утечку из сперматозоидов фосфатаз после их оттаивания показало, что данный антиоксидант в некоторой степени предотвращает утечку из гамет щелочной фосфата-зы, но не влияет на кислую фосфатазу.

Для изучения влияния а-токоферола на биологическую полноценность замороженно-оттаянной спермы были проведены эксперименты по искусственному осеменению свиноматок.

При этом было показано, что витамин Е приводит к некоторому повышению результативности осеменения свиноматок.

Результаты экспериментов показали, что введение аскорбиновой кислоты в среду оказывает отрицательное влияние на подвижность и живучесть оттаянной спермы.

3.4.3. Действие синтетических антиоксидантов

В данных экспериментах мы изучали криозащитное влияние на сперму хряков различных синтетических жирорастворимых антиоксидантов: бутилоксианизол (БОА), бутилокситолуол (БОТ), дитретбу-тилкрезол (ДТБК) и ИХФГАН-3.

Анализ результатов показал, что БОТ и БОА в оптимальных концентрациях повышали подвижность оттаянных сперматозоидов и их живучесть. Лучшее защитное влияние было при концентрации в замораживающей среде 0,06% БОТ и 0,03% БОА. При этом снижалась также утечка из сперматозоидов ACT и кислой фосфатазы (КФ).

Для изучения влияния оптимальных концентраций антиоксидантов на биологическую полноценность сперматозоидов провели эксперименты по искусственному осеменению свиноматок (табл. 12).

Из таблицы 12 видно, что при замораживании спермы с БОТ оп-лодотворяемость свиноматок повышалась на 19% по сравнению с контролем. Введение БОА привело к увеличению оплодотворяемости на 11% (Р<0,05).

Таким образом, эксперименты показали, что при замораживании спермы хряка с добавлением антиоксидантов БОТ и БОА повышается криоустойчивость и оплодотворяющая способность оттаянной спермы.

Таблица 12

Влияние синтетических антиоксидантов на результативность осеменения свиней замороженно-оттаянной спермой

Группа опыта

Концентрация анти-оксиданта, (мгЖ)

Осеменено маток

Опоросилось Получено поросят

чис- 58 всего многопло-

ло живых дие

Среда с БОТ 60 21

Среда с БОА 30 22 Контроль (без

антиоксидантов) 0 73

15 71+10 146 9,8

14 63+10 119 8,7

38 52+6 334 8,8

Использование БОТ и БОА в качестве криопротекторов спермы в составе синтетического разбавителя признано ВНИИ Государственной патентной экспертизы изобретением и на него выдано авторское свидетельство N626773 от 14 июня 1978 г.

В следующем эксперименте мы сравнивали эффективность криоза-щитного действия БОТ и БОА. Сочетанное применение данных антиок-сидантов оказывает более заметный криозащитный эффект.

Для детального изучения механизма криозащитного действия данных антиоксидангов на сперматозоиды хряка мы провели специальные исследования по их влиянию на кинетику хемилюминесценции в образцах оттаянных сперматозоидов. Антиоксиданты вводили в состав разбавителя спермы в тех же дозах, что применяли и при осеменении. Результаты опыта суммировали в таблице 13.

Таблица 13

Влияние антиоксидантов на величину амплитуды быстрой (Ь) и медленной (Н) вспышек ХЛ в суспензии криоконсервированных сперматозоидов (п«=8)

Вариант опыта | Ь | Н | Ъ&сС

Контроль (без 1,36+0.31 1,24+0,08 0,25+0,01 антиоксиданта)

БОА 2.15+0,15* 0,32+0,06** 0,03+0,01

БОТ 1,37+0,21 0 б

БОТ + БОА 1.55+0.17 О О

*)р<о,й5 :

**)Р<0,01

Как видно из таблицы 13, использование антиоксидантов при замораживании спермы оказало значительное влияние на характер протекания пероксидации липидов. Добавление к сперме БОТ и смеси БОТ+БОА практически полностью ингибировапо процесс ПОЛ, о чем свидетельствует отсутствие развития медленной вспышки по сравнению с контролем. Амплитуда быстрой вспышки ХЛ при использовании БОТ и БОТ+БОА была практически одинаковой с контролем. Использование БОА привело к некоторому повышению данной амплитуды.

Таким образом, криозащитный эффект данных антиоксидантов

можно объяснить их антиокислительным действием на гаметы.

В последнее время появились данные о положительном влиянии на криоустойчивость спермы баранов синтетического фенольного ан-тиоксиданта ИХФГАН-3, синтезированный в Институте химфизики РАН (Ерохин A.C., 1994). В этой связи мы решили испытать криозащитное действие данного антиоксиданта на криоустойчивость спермы хряков.

Результаты опытов показали, что использование нового антиоксиданта ИХФГАН-3 во всех изученнмх дозах повышает подвижность оттаянных сперматозоидов, абсолютный показатель их живучести и сохранность акросом. Лучшее защитное действие оказывает доза 30 мгЯ препарата. Причем защитное действие этого антиоксиданта даже несколько превышает эффективность ДТБН.

При замораживании спермы с ИХФГАН-3 результативность осеменения повысилась на 17,755 (Р>0.05), а многоплодие на 0,3 поросенка по сравнению с контролем. При использовании ДТБК результативность осеменения была выше по сравнению с контролем на 14,2%.

Таким образом, новый антиоксидант ИХФГАН-3 обладает выраженным криозащитным влиянием на сперму хряка. Неободимо расширить исследования по изучению эффективности замораживания спермы хряка с данным препаратом.

3.5. Совершенствование технологии криоконсервации спермы хряка 3.5.1. Замораживание спермы в концентрированном состоянии

Видовая особенность воспроизводства свиней - необходимость большого объема спермы для плодотворного осеменения - затрудняет широкое практическое применение метода криоконсервации. Поэтому весьма перспективные поиски возможности снижения объема замораживаемой спермы, без снижения результативности осеменения.

В специальных экспериментах, мы изучали возможность концентрирования спермы перед ее замораживанием путем центрифугирования.

Результаты данных экспериментов представлены в таблице 14.

Таблица 14

Влияние центрифугирования спермы на результативность осеменения

Метод замораживания Осеменено маток Опор ОСИЛОСЬ

ЧИСЛ01 %

Концентрированная: Без антиоксидантов с БОТ (30 мг%) не концентрированная 53 55 143 23 25 92 46+6.8 45+6.7 64+4.0

Получено поросят

Многоплодие

233

9,8 9,3

9,6

Из таблицы 14 видно, что осеменение свиноматок концентрированным семенем, даже с использованием антиоксиданта, привело к значительному снижению результативности осеменения по сравнению с контролем.

Результаты наших опытов показывают, что при замораживании концентрированной спермы происходит более значительное ее повреждение. обусловленное центрифугированием, чем при обычном замораживании. В настоящее время данный метод пока не может быть рекомендован для практического использования.

3.5.2. Диализный метод криопротективной обработки спермы

С целью дальнейшего совершенствования метода криоконсервации спермы в концентрированном состоянии, мы в своих исследованиях, изучали возможность диализной обработки семени перед замораживанием.

До настоящего времени криопротективные факторы в сперму (глицерин, сахара и другие компоненты) вводили перед ее замораживанием путем разбавления минимум в 2 раза. Диализ позволяет обрабатывать сперму, не увеличивая ее объема.

Среди множества испытанных диализационных пленок наиболее эффективной для обмена компонентами жидкой части спермы и среды оказалась гидратцеллюлозная мембрана. Испытание отдельных сред показало, что для ведения диализа спермы больше всего подходит разработанная нами ранее среда (см. табл.5, вариант 1).

Диализ спермы проводится в течение 5-6 ч при 15 С. Затем к сперме добавляют смесь желтка и 2.9%-го раствора цитрата натрия

(1:1) - 10% от объема спермы и продолжают диализировать, переключив регулятор холодильника на 4оС. Через 2 часа сперма охлаждается до этой температуры. Затем сперму замораживают в виде гранул на "сухом" льду или фторопластовой пластине.

Результаты осеменения свиней спермой, замороженной по данной технологии представлены в таблице 15.

Таблица 15

Влияние диализной обработки спермы на результативность осеменения свиней

Способ обработки Осеменено Опоросилось Получено Многоплодие семени перед за- маток число % поросят мораживанием_____

Диализом без пе-

^емешивания 28 15 53±9 139 9,2 иализ с перемешиванием 68 42 62+6 416 9,8 Контроль (обычное разбавление) 18 9 50+13 82 9,1

Анализ данных свидетельствует, что новый метод криопротек-тивной обработки спермы позволяет сохранить биологическую полноценность оттаянных сперматозоидов на высоком уровне. Вместе с тем. существенное уменьшение объема замороженной спермы значительно сокращает потребность в криогенных емкостях, хладоагентах и затратах труда.

Затем нами был проведен широкий научно-производственный эксперимент по изучению эффективности осеменения свиней спермой, замороженной с использованием метода диализа. При этом также изучалась эффективность криозащитного действия различных антиоксидан-тов. В качестве контроля сравнивали метод обычного разбавления спермы перед замораживанием, а также метод с использованием центрифугирования спермы. Здесь также применяли при замораживании ан-тиоксиданты. Результаты этих сравнительных экспериментов суммированы в таблице 16.

Анализ этих экспериментов свидетельствует, что использование диализного метода для подготовки спермы к замораживанию оказывает положительное влияние на криоустойчивость спермы. При этом полу-

чены результаты осеменения практически одинаковые с обычным разбавлением семени. Введение антиоксидантов в состав криоконсерви-рующей среды в данном опыте повысило результативность осеменения на 20 и 235?, соответственно, для БОА и БОТ. Сочетаемое применение данных антиоксидантов оказало практически такой же эффект, как и раздельное их применение. Положительное влияние антиоксидантов

Таблица 16

Влияние метода криоконсервации и введения антиоксидантов на результативность осеменения маток

Антиоксиданты и их Осеме- Опоросилось Получено поросят концентрация в среде нено число % всего на опорос (мгЖ) маток

Обычное разбавление спермы 152

Без антиоксидантов 31 16 52+9 9,5

БОА (30) 32 21 66+8 206 9,8

БОТ (60) 31 22 71+8* 216 9,8

БОТ (36) + БОА (6) 32 26 79+7* 258 9.9

Центрифугирование 108 8.3

Без антиоксидантов 25 13 52+10

БОА (30) 26 14 54+10 121 8.6

БОТ (60) 26 15 58+10 129 8.6

БОТ (36) + БОА (6) 30 18 60+9 159 8.8

Диализ

Без антиоксидантов 64 36 56+6 346 9,6

БОА (30) 62 47 76+5 466 9.9

БОТ (60) 66 52 79+5* 515 9.9

БОТ (36) + БОА (6) 66 53 80+5** 536 10,1

*)Р<0.05; **)Р<0,01

было также выявлено в группе с обычным разбавлением спермы. В то время, как в группе с центрифугированием семени они оказали очень слабый эффект.

Таким образом, наши исследования показали высокую эффективность диализного метода для криоконсервации спермы хряков. Преимущество данного метода перед обычным разбавлением состоит в том. что он позволяет в 2 раза снизить объем замораживаемой спермы, а. следовательно, во столько же раз уменьшает потребность в криогенных хранилищах и хладоагентах. Это позволяет уже в настоящее вре-

мя рекомендовать его для практического использования в племенном свиноводстве.

С целью выяснения механизмов положительного влияния диализного метода на криоустойчивость сперматозоидов хряка в присутствии или отсутствии антиоксидантов нами были проведены опыты по изучению влияния методов криоконсервации на уровень перекисного окисления Липидов в оттаянных образцах сперматозоидов.

При этом установлено, что способ обработки спермы перед замораживанием оказывает заметное влияние на характер протекания ПОЛ при его индуцировании ионами железа. Так, в контроле (при отсутствии антиоксидантов) процесс ПОЛ в большой мере зависел от способа подготовки спермы к замораживанию. Наиболее сильная пе-роксидация липидов наблюдалась в группе, где сперма подвергалась центрифугированию.

Использование диализа спермы перед ее замораживанием оказало выраженное ингибирующее влияние на ПОЛ. Даже в отсутствии антиоксидантов практически не удалось индуцировать пероксидацию липидов в гаметах с помощью ионов железа, о чем свидетельствует отсутствие развития медленной вспышш в период наблюдения (20-30 мин).

Использование антиоксидантов при замораживании спермы различными методами, также оказало значительное влияние на характер протекания ПОЛ. При обычном разбавлении спермы добавление БОТ и смеси БОТ + БОА практически ингибировало процесс ПОЛ.

В образцах спермы, подвергавшихся перед замораживанием центрифугированию. только комплексное применение БОГ + БОА приводило к ингибиции пероксидации липидов.

В диализационном образце не происходило развития медленной вспышки ХЛ , как в отсутствии, так и с добавлением антиоксидантов.

На основании проведенных экспериментов можно заключить, что диализный метод криоконсервации спермы обеспечивает наибольшую устойчивость сперматозоидов хряка к перекисному окислению липидов в процессе криоконсервации по сравнению с другими методами.

3.5.3. Эффективность осеменения маток в связи с морфологической сохранностью акросом сперматозоидов

В связи с разработкой метода криоконсервации спермы хряков

большое значение приобретают методы оценки биологической полноценности сперматозоидов после замораживания-оттаивания. Данный вопрос окончательно не выяснен и требует дальнейших исследований. Поэтому мы провели исследования по изучению связи оплодотворяющей способности замороженно-оттаянной спермы хряков с ее основными характеристиками: подвижностью, живучестью и состояние акросом.

Результаты экспериментов показали, что при подвижности оттаянных сперматозоидов равной ЮЖ было получено от 50 до 62% опоросов с многоплодием 8,2-8,9 поросят. Почти аналогичные результаты были получены при подвижности сперматозоидов 30% (от 59 до 69,5% опоросов при многоплодии 8,8 и 9,2 поросят). Это свидетельствует о том, что результаты осеменения криоконсервированной спермой мало сопряжены с наиболее распространенной оценкой семени по подвижности. Что касается показателя живучести оттаянной спермы, то с его повышением увеличивается как оплодотворяемость, так и многоплодие свиноматок.

Наш эксперименты доказали, что тест подвижности при использовании замороженной спермы не полностью отражают биологическую полноценность сперматозоидов и для прогнозирования оплодотворяющей способности целесообразно использовать сочетание показателей подвижности, живучести и сохранности акросом половых клеток.

3.5.4. Влияние числа сперматозоидов в дозе на результаты осеменения

С целью выяснения вопроса об оптимальном числе сперматозоидов в дозе криоконсервированной спермы, нами были поставлены специальные опыты.

При этом установлено, что при уменьшении объема вводимого семени до 75-100 мл и концентрации сперматозоидов до 1,5-2,0 млрд. можно получать высокие результаты оплодотворяемости. При уменьшении же объема вводимого семени до 50 мл с числом сперматозоидов в дозе равным 1 млрд. наблюдается достоверное снижение результативности осеменения свиноматок и их многоплодия.

Следовательно, оптимальной дозой для плодотворного осеменения свиноматок замороженно-оттаянным семенем является объем 75-100 мл и концентрация 1,5-2,0 млрд. сперматозоидов в этом объеме.

Затем были проведены расширенные производственные эксперименты по осеменению свиноматок криоконсервированной спермой с различной концентрацией сперматозоидов в дозе.

Была установлена тенденция повышения оплодотворяемости маток при снижении числа сперматозоидов в дозе с 4,5 до 3.4 млрд. При снижении числа сперматозоидов от 3,4 до 2,2 млрд. получены практически аналогичные результаты осеменения по таким породам как крупная белая и уэльская. Однако многоплодие маток крупной белой породы было несколько ниже при содержании в дозе 2,2 млрд. сперматозоидов. При осеменении указанной дозой маток уэльской породы отмечается тенденция повышения многоплодия в сравнении с дозой содержащей 3,4 млрд. Что касается маток пород эстонская беконная и ландрас. то при содержании в дозе 2,2 млрд. сперматозоидов наблюдалось снижение как их оплодотворяемости. так и многоплодия. Уменьшение числа сперматозоидов до 1.1 млрд. привело к резкому снижению результативности осеменения маток всех пород.

Таким образом, при использовании глубокозамороженной спермы хряков оптимальное число подвижных сперматозоидов в дозе должно составлять 2.2-3.4 млрд.

3.6.Биотехнические приемы повышения результативности осеменения маток криоконсервированной спермой

3.6.1. Влияние сурфагона на результаты осеменения

Результаты осеменения маток криоконсервированной спермой в большей степени зависят от физиологического состояния свиноматок. Несбалансированность рационов кормления животных, особенно по витаминам, незаменимым аминокислотам . макро- и микроэлементам приводит к ослаблению функции нервной и эндокринной систем и. соответственно к несинхронному созреванию фолликулов и растянутости овуляции (Брутганс Я.П., 1980: Зыкунов Н.П., 1984).

В последние годы появились сообщения об успешном использовании в целях ускорения овуляции у коров синтетического гонадотроп-ного релизинг-гормона - сурфагона (Клинский Ю.Д. и др., 1987).

В этой связи мы изучили влияние сурфагона, на результаты осеменения свиней замороженной спермой (табл. 17). -

Таблица 17

Влияние сурфагона на результаты осеменения свиней криоконсервированной спермой

Осеме- Опоросилось Получено погюсят

Группа опыта нено маток число % всего многоплодие

Контрольная (без сурфагона) Опытная 118 120 75 94 63.5+3.0 668 78.3+4.0* 905 8.9 9.6

*)Р<0,01

Из таблицы 17 видно, что обработка свиноматок сурфагоном в оптимальной дозе 10 мкг привела к увеличению оплодотворяемости на 14,8% и многоплодию на 0,7 поросенка.

Изучение крупноплодности поросят, контрольной и опытной группы показало, что в опытной группе 66,2% новорожденных поросят имели живую массу более 1.4 кг против 63.2% в контроле.

Кроме того, мы проанализировали сохранность поросят от рождения до отъема в 28 дней в двух сравниваемых группах. Анализ показал, что обработка свиноматок сурфагоном перед осеменением замороженной спермой повышает сохранность поросят к 2-х месячному возрасту на 4% (Р<0,05).

Таким образом, можно заключить, что для повышения результативности осеменения свиноматок криоконсервированной спермой в условиях промышленной технологии целесообразно применение сурфагона в виде внутримышечной инъекции в дозе 10 мкг препарата на матку сразу после выявления у нее признаков охоты.

3.6.2. Эффективность применения простагландиновых препаратов

Как известно, при использовании замороженной спермы хряков для получения нормальной оплодотворяемости требуется 2-х кратное осеменение маток в течение эструса. Это приводит к значительным трудовым и экономическим затратам.

Поэтому, разработка методов однократного осеменения маток криоконсервированной спермой без снижения результативности осеменения является очень актуальной и важной задачей.

Целью наших следующих экспериментов было изучение возможности однократного осеменения маток в течение эструса криоконсерви-рованной спермой путем использования комплексной обработки животных перед осеменением сурфагоном и синтетическим аналогом прос-тагландина £2 - ремофаном (табл. 18).

Результаты этого эксперимента свидетельствуют, что при однократном осеменении свиноматок замороженной спермой с предварительной их обработкой сурфагоном+ремофан. результативность его была такой же, как и при двукратном осеменении. Это свидетельствует об высокой эффективности использования препаратов.

Таблица 18

Эффективность осеменения свиноматок замороженной спермой в связи с обработкой сурфагоном в сочетании с ремофаном

Осеме- Относилось Получено пооосят

Препарат и доза нено маток число % всего жизнеспособных многоплодие

Без обработки (контроль) Сурфагон 10 мкг+ Ремофан 0,075 мг Без обработки (контроль) Сурфагон 10 мкг+ Ремофан 0,075 мг .Двукратное осеменение 30 20 66.6+8.5 31 25 80,0+7,0 Однократное осеменение 186 258 9,3 10,3

30 30 18 24 60.0+8,9 80.0+7.3 172 245 9,5 10,2

Известно,к то однократное осеменение в охоту без дополнительной обработки свиноматок снижает супоросность примерно на 3056. В нашем случае этого не произошло, что по-видимом, является следствием ускорения запаздывающих овуляций в результате обработки биопрепаратами. Однократное осеменение животных криоконсервирован-ной спермой позволяет в два раза увеличить интенсивность племенного использования наиболее ценных хряков-производителей и может значительно повысить продуктивные и породные качества стада. При этом существенно сокращаются расход замороженной спермы и экономические затраты на ее заготовку и хранение.

3.7. Продуктивные качества потомства, полученного от криоконсервированной спермы

В литературе имеются сообщения о положительном влиянии крио-консервации на некоторые продуктивные качества потомства (Походня Г., 1978; Коваленко в. и др., 1980: Кононов В.П., 1982). Однако данный вопрос требует дальнейших более широких исследований.

Поэтому нами были изучены рост, развитие и воспроизводительные способности свиней, полученных от глубокозамороженной спермы.

Результаты исследований роста и развития хрячков и свинок, полученных от замороженной и свежевзятой спермы показали, что хрячки и свиноматки обеих групп к 24-х месячному возрасту достигали класса элита по массе и длине туловища, а также по экстерь-ерной оценке. Масса хрячков в возрасте 12 мес., и свинок в возрасте 6, 12. 18 и 24 мес., полученных от замороженной спермы, была выше на статистически достоверную величину (Р<0,05), что по-видимому, является результатом географического гетерозиса.

Изучение биологических показателей спермопродукции у двух сравниваемых групп хрячков в 12 месячном возрасте показало, что у хрячков, полученных от замороженной спермы, показатели спермопродукции были выше, чем у животных, полученных от свежевзятого семени.

В период производственных экспериментов мы изучали также морфолоческие и биохимические показатели крови хряков и свинок сравниваемых групп.

При этом у потомков, полученных от замороженной спермы показатели крови по многим параметрам превосходили контрольную группу.

Для изучения воспроизводительных способностей свинок двух сравниваемых групп, после 7-ми месячного возраста их искусственно осеменяли как свежей, так и криоконсервированной спермой. При этом были получены практически одинаковые результаты по проценту оплодотворяемости и по многоплодию маток.

Таким образом, экспериментальные исследования по изучению роста, развития, морфологических и биохимических показателей крови, а также показателей спермопродукции и оплодотворяемости у животных, полученных от криоконсервированной спермы свидетельствуют, что данные показатели находятся на высоком уровне, как и у

животных, полученных от свежей спермы, а в некоторых случаях даже превосходят таковые контрольной группы. Это дает основание для заключения, что замораживание семени семени хряков не несет отрицательных генетических и паратипических последствий для потомства.

3.8. Практическое использование криоконсервированной спермы в свиноводстве

С целью решения задачи освежения крови в замкнутых популяциях в 1986 году впервые в стране был организован дальний транспорт спермы в заморолженном состоянии из Московской области (ЦСИО) на Камчатку в совхоз "Моховской". Было осеменено 20 свиноматок, из которых одну выбраковали, а 11 опоросились. При этом было получено 76 жизнеспособных поросят: 39 хрячков и 37 свинок. Это устранило необходимость завозить в хозяйство новых хряков и сэкономило значительные средства.

Этот первый опыт эффективного использования криоконсервации семени для ремонта хрячьего стада на фермах в отдаленных регионах страны стал быстро распространяться. Стали поступать заявки из различных регионов Советского Союза. Позднее этим приемом воспользовались хозяйства: "Ленинское знамя" Сахалинской областей, "Прибайкалысий" Бурятской ССР, им.Тельмана Кара-Калпакской АССР, Узбекистана и др. Семенем, заготовленным в ведущих племза-водах страны было осеменено в общей сложности более Зтыс. маток (48). Результаты этой работы приведены в таблице 19.

Таблица 19

Результаты использования транспортировки замороженного семени хряков из Московской области в отдаленные регионы СССР для ремонта стада производителей

Регион Осеменено Из них опоросились Родилось поросят

хозяйства маток --------------------------------------

число % Всего на матку

Камчатская область 1278 Россия 805 63+1 7889 9.8

Белгородская область 687 419 61+2 4022 9.6

Бурятия 299 176 59+3 1637 _ 9.3

Сахалинская область 184 103 56+3 948 9.2

Полтавская область 250 Украина 153 61+3 1454 9.5

Харьковская область 176 106 60+3 1028 9.7

Кара-Калпакия 139 Узбекистан 71 51+4 653 9.2

Всего 3004 1833 61+1 17631 9.6

Как видно из таблицы 19. в последние годы в России и в странах СНГ было в последние годы получено более 17 тыс. поросят от хряков лучших в стране генотипов.

В настоящее время разработанной нами технологией криоконсер-вации семени хряков стал пользоваться известный в стране племсов-хоз "Гибридный" НАО "Поволжское" Самарской области. Располагая уникальными в племенном отношении животными, это хозяйство организовало продажу криоконсервированного семени ценных хряков на Дальний Восток в Приморский край, в Омскую, Пермскую и др. области. распространяя таким образом ценные генотипы и вытесняя малоценные на обширной территории России.

Таблица 20

Экономическая эффективность получения поросят для освежения крови в стадах в отдаленных регионах России и СНГ путем завоза криоконсервированного семени (цены 1994 г.)

Название хозяйств

Затраты при получении 100 поросят с освеженной кровью на закупку и транспорт (тыс. руб.)

хряка

криоконсервированного семени

Экономический эффект

тыс.руб. %

С-з "Моховской" Камчатской обл. С-з "Прибайкальский". Бурятия К-з им. Фрунзе Белгородской обл.

К-з им. Ильича Полтавской обл.

С-з им. Тельмана. Кара-Калпакс тан

5000 4300 2200

1400

Россия 2600

2500

1200

Украина 1200

Узбекистан 4100 2500

2400 1800 1000

200

1600

48 42 45

14

39

Данные, приведенные в таблице 20 свидетельствуют о высокой экономической эффективности осеменения свиноматок транспортированной замороженной спермой в отдаленные регионы России и СНГ. Для освежения крови в замкнутых популяциях требуется независимо от величины свиноводческого предприятия получение примерно 100 поросят, от семени хряка из другой популяции. Однако даже для этих сотни поросят требуется завоз как минимум одного хряка-производителя. Завоз семени исключает эту дорогую операцию и требует затрат примерно на половину меньше.

Видно, что высокий экономический эффект при этом достигается при завозе семени на большие расстояния. Однако в хозяйствах, где поблизости есть племенные предприятия (в нашем случае к-з им. Ильича Полтавской области Украины) эффект от завоза семени вместо завоза хряка не значителен (14%).

ВЫВОДЫ

1. Сперма хряка подвержена пероксидации липидов в процессе ее криоконс ервации.

2. Семенная плазма и сперматозоиды хряка содержат антиокси-дантный фермент - супероксиддисмутазу. Криообработка индуцирует утечку данного фермента из сперматозоидов в инкубационную среду.

3. Процессы замораживания-оттаивания стимулируют значительную утечку из сперматозоидов хряка аспарагиновой трансаминазы.

4. Введение в состав разбавляющей среды для замораживания спермы хряка синтетических антиоксидантов: бутилокситолуола, бу-тилоксианизола и ИХФГАН-З, повышает криоустойчивость сперматозоидов хряка и увеличивает результативность осеменения в среднем на 14-19%.

5. Концентрирование спермы хряка перед замораживанием путем осаждения спермиев центрифугированием снижает биологическую полноценность спермиев и результаты осеменения.

6. Диализный метод обработки спермы хряка перед замораживанием повышает биологическую полноценность сперматозоидов и позволяет в 2 раза сократить объем дозы замораживаемой спермы и. следовательно во столько же раз уменьшить потребность в криогенных емкостях и хладоагентах.

7. Оптимальное содержание сперматозоидов в дозе криоконсервированной спермы - 2,2-3,4 млрд. подвижных клеток в объеме 75-100 мл спермы.

8. Осеменение свиноматок криоконсервированной спермой не оказывает отрицательного влияния на рост и развитие полученного потомства.

- 9. Разработанные приборы и оборудование для криоконсервации и оттаивания спермы хряков позволяют улучшать биологическую полноценность сперматозоидов и результативность искусственного осеменения свиноматок.

10. Обработка свиноматок перед осеменением сурфагоном в дозе 10 мкг на животное повысило на 14,8% их оплодотворяемость.

11. Комплексная обработка свиней перед осеменением сурфагоном и ремофаном позволила получить такие же результаты опоросов при однократном осеменении, как и при двукратном.

12. При осеменении свиноматок свежеразбавленной спермой хоро-

шие результаты могут быть получены при использовании простого глюкозо-сульфатного разбавителя или изотонического раствора сульфата натрия.

13. Использование синтетических аналогов полового феромона хряка СтО-1 и СтО-2 позволяет эффективно выбирать маток в состоянии охоты и улучшает результативность искусственного их осеменения и многоплодие.

14. Комплексная обработка свиноматок после отъема поросят СЯК, ХГ и тривитамином высокоэффективно стимулирует наступление эструса. Стимуляция ремонтных свинок синтетическим феромоном СтО-2 способствует ускорении их полового созревания.

15. Высокая синхронизация опоросов у свиноматок достигается при их обработке на 112 день беременности комплексным применением эстрогена, серотонина, окситоцина и эстрофана.

16. Воздействие на молодых хрячков половым феромоном самок "Стимульгин" ускоряет выработку полового рефлекса садок на чучело для взятия спермы в искусственную вагину, а также увеличивает объем и концентрацию сперматозоидов в эякуляте.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для повышения эффективности искусственного осеменения свиней криокосервированной спермой рекомендуем для замораживания спермы хряков использовать синтетическую среду следующего состава: сахароза - 50 г, глюкоза - 8 г, фруктоза - 8 г, трилон Б - 4 г, окись кальция - 0.6 г, окись магния - 0.4 г, аммоний лимоннокислый - 2,0, глицерин - 40 мл, желток куриного яйца - 50 мл, бу-тилгидроокситолуол -0,0 6 г, либо бутилгидрооксианизол - 0,03 г или ИХФГАН-3 -Ор 3 г, вода дистиллированная - до 1000 мл.

2. Повышению биологической полноценности спермиев и получению более стабильных результатов осеменения способствует диализный метод обработки семени перед криоконсервацией.

3. Для повышения эффективности искусственного осеменения свиноматок предлагаем обрабатывать их перед осеменением сурфагоном или сурфагоном в сочетании с ремофаном.

Для восстановления репродуктивной функции у свиноматок предлагаем использовать препараты СЖК, ХГ и тривитамин, которые вводят внутримышечно по следующей схеме: однократно на голову триви-

тамин - 5-7 мл., через сутки СЖК - по 10 м.ед. на 1 кг живой массы и через 72 часа -ХГ в дозе 500 И.Е. Для ускорения полового созревания свинок предлагаем воздействовать на них синтетическим аналогом полового феромона хряка Ст0-2.

Для облегчения выявления свиноматок в состоянии охоты и повышения эффективности их искусственного осеменения предлагаем использовать препараты синтетических феромонов: Ст0-1, СтО-2, "Сти-мульгин".

Список основных работ, опубликованных по теме диссертации

1. Нарижный А.Г., Черных В.Я. Среда для разбавления и замораживания семени сельскохозяйственных животных//Авторское свидетельство N626773, 1978.

2. Кононов В.П., Черных В.Я., Нарижный А.Г. Устойчивость живчиков к глубокому охлаждению в зависимости от содержания витамина Е в рационе хряков//Животноводство» 1978.-N1. - С.49-51.

3. Кононов В.П., Нарижный А.Г. Замораживание семени хряка в концентрированном состоянии//3оотехния.-1981.-N10.-С. 39-41.

4. Кононов В.П., Нарижный А.Г. Совершенствование технологии искусственного осеменения свиней//Свиноводство.

1982.-НЮ.-С. 25-26.

5. Кононов В., Нарижный А. Опыт замораживания спермы//Свино-водство. - 1983.-N1.-0.26-27.

6. Нарижный А.Г. Применение антиоксидантов при глубоком замораживании семени хряка//Сельскохозяйственная биология.

1983.-N4.-С. 92-95.

7. Нарижный А., Походня Г., Манько Ю. Эффективность использования сред//Свиноводство. - 1983.-N5.-С.19-20.

8. Кононов В.П.. Нарижный А.Г. Технология замораживания семени хряков//Животноводство. - 1981 - N7.-0.54-56.

9. Нарижный А., Зыкунов Н., Походня Г. и др. Универсальный прибор// Свиноводство. - 1984.-N11.-С.28-29.

10. Нарижный А.. Походня Г. Резервы прогрессивного мето-да//Свиноводство. - 1985.-N5.-С.23-24.

П. Нарижный А.Г., Походня Г.С. Разбавители спермы хря-ков//Ветеринария - 1985.-N5.-С.56-57.

12. Кононов В.П., Нарижный А.Г.. Походня Г.С. Способ криопро-тективной обработки спермы животных//Животноводство. 1987.-N12.-С. 42-44.

13. Нарижный А.Г. Действие естественных феромонов на воспроизводительную функцию свиней//Селекционно-генетические методы повышения продуктивности с.-х. животных.-М..1987.-С.53-56.

14. Нарижный А.Г., Кононов В.П.. Галич В.И. и др.Технологическое совершенствование методов криоконсервации семени хря-ков//Вопросы интенсификации племенного свиноводства. М. . 1989. -С. 121-128.

15. Нарижный А.Г., Герасимов В,И. Рост, развитие и воспроизводительные функции свиней, полученных от глубокозамороженной спермы/УИнтенсификация производства свинины.-Харьков, 1989.-С.60-68.

16. Нарижный А.Г. Результативность осеменения свиней криокон-сервированной спермой в связи с числом поступательно-подвижных сперматозоидов в дозе//Бюлл. ВНИИРГЖ.-в.116.-С. 18-20.

17. Kononov V.P., Narlsnyj A. G., Galitch V.l. Fortpflanzungsbiolo- gle und Fortpflanzungssteuerung bei Rind, Schwein und Schaf//Fors- chungrZentrum fur Tierproduktion Dummerstorf-Rostock der Akademie der Landwlrschatswlssenchaften der DDR, 1990.v. 301-322.

18. Нарижный А.Г., Походня Г.С., Лымарь П.И. Индукция регенеративной способности половой системы у свиноматок при разных условиях их содержания//Воспроизводство и искусственное осеменение С.-х. животных., 1990.-С.49-56.

19. Кононов В.П., Нарижный А.Г., Галич В.И. Технология замораживания и длительного хранения спермы хряков//Воспроизводство и искусственное осеменение с.-х. животных.М., 1990.-С.67-74.

20. Нарижный А. Г. Повышение эффективности воспроизводства свиней с помощью сурфагона//Бюлл. ВНИИРГЖ.-1991.в. 128.-С.10-13.

21. Нарижный А.Г., Походня Г.С., Засуха И.В. Опыт замораживания спермы хряков.М.-1991.-66 с.

22. Кононов В., Нарижный А., Галич В. Перспективы замораживания спермы//Свиноводство. -1991.-N4.-С.26-27.

23. Нарижный А.Г. Стимуляция феромонами воспроизводительных функций свинок//3оотехния.-1991.-NI1.-С.63-66.

24. Нарижный А.Г.. Ерохин A.C., Рочев Н.Ф. Влияние антиокси-

дантов и способов криоконсервации на пероксидацию липидов в сперме хряка// Доклады Российской академии с.-х. наук. -1993. -N6.-С.32-34.

25. Нарнжный А.Г., Галич В.И., Галич С.К. Эффективность осеменения свиноматок в зависимости от качества замороженной спер-мы//Генетика, селекция и воспроизводство с.-х. животных. -1994.в.1.-С.123-126.

26. Нарижный А.Г.. Галич В.И., Галич С.К. Опыт дальней транспортировки и использования замороженного семени хряка//Генетика, селекция и воспроизводство с.-х. животных.-1994.в.1.-С. 170-174.

27. Походня Г. С., Засуха». В., Нарижный А. Г., Цицюрский Л.Н. и др.//Интенсификация промышленного свиноводства.-Киев.-1994.-461 с.

28. Нарижный А.Г.. Ерохин A.C. Активность супероксиддисмутазы в нативной и криоконсервированной сперме хряков//Доклады Российской академии с.-х. наук.-1995.-С.37-38.