Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ И ИММУНО-БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА РНК ИЗ ТИМУСА, СВЯЗАННЫЕ СО СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ФРАГМЕНТАЦИЕЙ ВЫСОКОМОЛЕКУЛЯРНЫХ РНК

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Содержание диссертации, , Баранова, Ольга Александровна

Список сокращений.

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Многоуровневая система биорегуляции.

1.2. Рибонуклеиновые кислоты в регуляции процессов на уровне целостного организма.

1.2.1. Рибонуклеиновые кислоты в системе биорегуляции.

1.2.2. Рибонуклеиновые кислоты как модуляторы иммунного ответа.

1.2.3. Влияние экзогенных РНК на фенотипические свойства лимфоидных клеток.

1.3. Рибонуклеиновые кислоты в регуляции внутриклеточных процессов.

1.3.1. Влияние нмРНП на основные процессы, происходящие в клетке.

1.3.2. РНК - РНК взаимодействия и общность процессов эндонуклеотического расщепления РНК.

1.4. Роль эндонуклеотического расщепления высокомолекулярных цРНК.

1.4.1. Расщепление 28SрРНКпри аутоиммунной патологии.

1.4.2. Фрагментация 28SрРНК в модельных системах при апоптозе.

1.4.2.1.В клетках нервной системы.

1.4.2.2. В опухолевых клетках.

1.4.3. Иные случаи фрагментации 28SpPHK.

Введение Диссертация по биологии, на тему "ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ И ИММУНО-БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА РНК ИЗ ТИМУСА, СВЯЗАННЫЕ СО СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ФРАГМЕНТАЦИЕЙ ВЫСОКОМОЛЕКУЛЯРНЫХ РНК"

Актуальность темы.

Общеизвестна важная роль, которую играет РНК в жизнедеятельности как отдельных клеток, так в цельном организме животных. Наиболее хорошо изучено участие различных классов РНК в реализации генной экспрессии при транскрипции, процессинге, трансляции и, соответственно, наиболее полно охарактеризованы рибосомные, матричные, транспортные РНК и их предшественники. В меньшей степени понятны функции стабильных ядерных и цитоплазматических низкомолекулярных РНК/РНП (нмРНК/нмРНП). И совсем мало изучена роль нмРНК, получающихся при фрагментации высокополимерных образцов клеточных РНК, в особенности это касается «зрелых» цитоплазматических РНК. В лаборатории молекулярной иммунологии НИИ ФХМ в течение длительного времени проводятся исследования РНК из различных органов и тканей животных и опубликованы существенные результаты по свойствам РНК из таких животных клеток как АКЭ, печень, селезенка, лимфотические узлы [3,5,6]. В этих исследованиях убедительно показано, что всем известная нестабильность максимально очищенных от примесей высокомолекулярных РНК, выражающаяся в потере «нативности» молекул РНК при различных манипуляциях в растворах (в том числе, при экстракции из ткани и хранении) связана со специфическими эндонуклеолитическими расщеплениями этих РНК. При этом совокупность получающихся данных свидетельствует в пользу того, что места разрыва фосфодиэфирных цепей предопределены структурой фрагментирующих РНК. Настоящая диссертационная работа является продолжением этой серии исследований: в ней впервые систематически изучены свойства РНК из тимуса с позиций влияния специфической фрагментации на физико-химические и биологические свойства РНК, экстрагированных из этой ткани. Актуальность данного направления исследований получила подтверждение в появившихся относительно недавно публикациях об обнаружении специфического ограниченного эндонуклеолиза «зрелых» цРНК (прежде всего 28S рРНК) в животных клетках при самых различных экспериментальных условиях: индукция апоптоза, инфицирование вирусами, аутоиммунные состояния и т.п. Авторы этих публикаций активно обсуждают регуляторную роль наблюдаемой специфической фрагментации цРНК. Совсем недавно появились данные о «неканонических» свойствах РНК и РНП: обнаружение опухолевой РНК в плазме человека, РНК плода в материнской плазме, наличие аутоантигеных свойств у ядерных U-PHK и малых цитоплазматических Y РНК

48,60,61,114,115,119,132], которые позволяют рассматривать проблему фрагментации высокомолекулярных РНК не только с фундаментальной точки зрения, но и придают этой тематике прикладное значение.

Другой предпосылкой для выполнения представленной диссертации явились довольно многочисленные, хотя и разрозненные, данные о биологической активности экзогенных рибонуклеиновых препаратов как in vivo, так и in vitro [8,10,11,18,29,30,31]. В том числе есть ряд свидетельств о влиянии экзогенных РНК из тимуса на различные внутриклеточные процессы в животных клетках, а так же и на некоторые процессы, происходящие на уровне организма. В частности, показано, что тимусная РНК обладает способностью переносить иммунологическую информацию от клетки к клетке, причем фракцией, ответственной за иммуностимуляцию, оказалась низкомолекулярная (4S-6S) РНК [11,108]. Однако нет ясности в понимании механизмов наблюдаемых явлений, а также отсутствует однозначное мнение о том, какие именно РНК ответственны за тот или иной биологический эффект (в одних работах речь шла о высокомолекулярных «нативных», предположительно матричных РНК [20,29,30,31], в других - о нмРНК [108]. Из всего вышесказанного вытекают цели и задачи данной работы.

Цель работы: охарактеризовать физико-химические и иммунобиологические свойства РНК из тимуса, полученных различными методами, и на этой основе рассмотреть специфическую фрагментацию высокомолекулярных цРНК.

В соответствии с этим поставлены следующие задачи:

1. Разработать адекватные поставленной цели методы выделения РНК из тимуса млекопитающих.

2. Изучить физико - химические свойства препаратов тимических РНК.

3. Исследовать процесс специфической фрагментации тимических РНК в процессе экстракции из ткани, в модельных экспериментов in vitro и при индукции автолиза, а также охарактеризовать получающиеся фрагменты.

4. Провести исследования иммуно-биологических свойств низкомолекулярных РНК из тимуса для выявления специфической активности потенциального фармпрепарата Риботим (РТ), содержащих эти РНК.

Научная новизна.

- Предложены новые экспериментальные подходы для экстракции РНК с учетом специфики тимусной ткани.

Оценены величины молекулярных масс всех компонентов рибонуклеиновых препаратов из тимуса. Впервые охарактеризованы как «нативные» препараты цРНК, так и препараты с разным уровнем фрагментации высокомолекулярных «зрелых» молекул РНК.

- Исследован и проанализирован процесс автолиза цРНК в сравнении с данными по фрагментации высокомолекулярных «зрелых» молекул РНК при апоптозе лимфолейкозных клеток.

- В качестве основы для создания нового фармпрепарата предложен биоактивный рибонуклеиновый препарат из тимуса - Риботим, обладающий иммунотропными и регенерирующими свойствами.

Практическая значимость работы.

Обнаружение иммунобиологической активности тимусных РНК (и в первую очередь нмРНК) потребовало разработки нового технологичного метода их выделения. Предложенный в данной работе «детергентный» способ выделения РНК из замороженной ткани тимуса крупного рогатого скота позволяет получать препарат РТ в достаточных количествах для проведения доклинических испытаний и может быть внедрён в производство. На этот способ получено положительное решение от 20.08.96. о выдаче патента ВНИИГПЭ на «Средство «Риботим», обладающее иммунотропным действием и способ его получения». В рамках требований Фармкомитета по преклиническим испытаниям проведено исследование специфической активности данного препарата. Показано влияние РТ на Т - зависимое антителообразование и репаративные процессы в коже в моделях экспериментальной раны и ожога у крыс. Эти результаты, наряду с отсутствием острой токсичности при дозе, десятикратно превышающей терапевтическую, позволяют продолжить преклинические испытания РТ.

Проведенная в настоящей работе физико-химическая характеристика позволила получать тимусные рибонуклеиновые препараты определенного состава и тем самым стандартизовать наработку РТ. В то же время, обнаруженная взаимосвязь между составом и биологической активностью дает возможность по-новому трактовать те биологические эффекты, которые вызывают уже известные препараты экзогенных РНК.

Положения, выносимые на защиту.

1. Состав препаратов РНК из тимуса крыс, в основном, соответствует аналогичным препаратам из других животных клеток, в частности, из клеток печени и АКЭ мышей. В то же время высокомолекулярные РНК из тимуса в большей степени подвержены специфической фрагментации, которая может проявляться уже в процессе экстракции РНК из ткани.

2. Наблюдаемая фрагментация с различной степенью выраженности происходит воспроизводимым и специфическим образом также в модельных экспериментах автолиза и в условиях индуцированного апоптоза клеток.

3. Фрагментация высокомолекулярных цРНК протекает как многоступенчатый каскадный процесс, который по последовательности этапов и спектрам получающихся фрагментов носит сходный характер при всех исследованных условиях.

4. Образование смеси низкомолекулярных рибонуклеиновых компонентов в препарате РНК из тимуса - Риботиме - является результатом многоступенчатой специфической фрагментации более высокомолекулярных цРНК. Наблюдаемый ограниченный эндонуклеолиз, по-видимому, имеет биологический смысл, а образующиеся фрагменты проявляют иммунобиологическую активность.

5. Обнаруженные иммуно-биологические свойства Риботима позволяют предложить его в качестве потенциального лекарственного средства со специфической активностью иммунотропного препарата, усиливающего репаративные процессы в коже.

Апробация работы.

Материалы, изложенные в диссертационной работе были представлены на 1-ом Международном конгрессе по иммунореабилитации, Сочи-Дагомыс, 1994; И-ом Междунородном конгрессе по иммунореабилитации, Москва, 1995; П-ом Российском конгрессе «Человек и лекарство», Москва, 1995; V-ой научной конференции «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге», С-Петербург, 2001; VI-ой Всероссийской конференции «Дни иммунологии в Санк-Петербурге», С-Петербург, 2002, VII-ом Всероссийском нучном форуме с международным участием им. академика В.И.Иоффе «Дни иммунологии в Санк-Петербурге», С-Петербург, 2003. Публикации.

По теме диссертационной работы опубликовано 8 печатных работ, включая шесть тезисов докладов и две статьи в центральных журналах.

Структура и объём диссертации.

Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, обсуждения полученных результатов, выводов и списка цитируемой литературы. Работа содержит 116 страниц машинописного текста, 11 таблиц и 19 рисунков.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Баранова, Ольга Александровна

Выводы.

1. Для выделения РНК из тимуса предложена модификация классического «фенольного» метода, а также разработан новый, технологичный способ выделения с применением ДДС - Na в качестве основного денатурирующего агента. Показано, что оба метода позволяют получить рибонуклеиновые препараты удовлетворительной чистоты: содержание РНК - 90+3,5% в случае «фенольного» и 90+3,2% в случае «детергентного» методов выделения, количество ДНК - 8,5+0,9% и 5,0±0,8%, белка - 1,5+0,5% и 5,0±0,4%, соответственно.

2. При помощи денатурирующего электрофореза в ПААГе 2,5%-, 8%- и 15%-ой концентраций подробно охарактеризовано распределение молекулярных масс компонентов тимусных рибонуклеиновых препаратов. Выявлены существенные различия в размерах компонентов в зависимости от способа получения: «фенольный» препарат цРНК представлен спектром компонентов в диапазоне от 28S до 4S, тогда как в «детергентом» все компоненты находятся в области «легче» 7S РНК.

3. Продемонстрировано, что как во время автолиза в модельных экспериментах, так и при выделении РНК из ткани тимуса происходит специфический ограниченный эндонуклеолиз высокомолекулярных образцов цРНК, и в ходе многоступенчатой фрагментации образуется смесь низкомолекулярных компонентов. Аналогичная картина наблюдается при индукции апопттоза во время культивирования клеток EL4.

4. Впервые в данной работе исследован автолиз не только в суммарных препаратах цРНК, но и в препаратах высокомолекулярных цРНК, экстрагированных из геля после электрофореза.

5. По электрофоретическим данным рассчитаны молекулярные массы компонентов рибонуклеиновых препаратов из тимуса и печени, а также продуктов фрагментации высокомолекулярных образцов цРНК. Сравнительный анализ спектров получаемых фрагментов и динамики фрагментации выявил общность процессов ограниченного эндонуклеолиза при самых различных условиях: выделение РНК из ткани, автолиз РНК, апоптоз клеток.

6. Показано, что тимический препарат Риботим обладает иммунобиологической активностью. Препарат достоверно повышает уровень Т -зависимого антителообразования на пике иммунного ответа в диапазоне доз от 1 до 100 мкг/мышь. Установлен дозозависимый характер действия препарата. Отмечено также положительное действие Риботима на репаративные процессы в коже: наблюдается значительное ускорение и улучшение «качества» заживления как в случае экспериментального ожога, так и в модели линейной раны у крыс.

Библиография Диссертация по биологии, , Баранова, Ольга Александровна, Москва

1. Абрамов В.В., Абрамова Т.Я. Ассиметрия нервной, эндокринной и иммунной систем. Новосибирск, «Наука», 1996, с 25-29.

2. Абрамов В.В., Егоров Д.Н., Вердосанидзе К.В., Козлов В.А. Нервная и иммунная системы в канцерогенезе. Новосибирск, 1998, с 27-30.

3. Арион В.Я., Гребцова Л.Б., Короткова М.Н., Бекман Э.М. Обнаружение «скрытых» рибонуклеаз в высокоочищенных препаратах РНК. Молекулярная биология, 1982, т. 16, с. 201-209.

4. Арион В.Я., Зимина И.В., Лопухин Ю.М. Современные взгляды на природу и клиническое использование тимических препаратов. 1997. Russ. J. Immun. v. 2, p. 157-166.

5. Бекман Э.М., Григорьев М.Ю., Гутникова М.Н. и др. Аутолитическая деградация РНК: влияние аутолизатов и нативных препаратов пре мРНК на уровень транскрипции в модельных системах in vitro и in vivo. Биохимия. 1985, т. 50, с. 1843-1851.

6. Бекман Э.М., Денисенко М.Ф., Григорьев М.Ю., Арион В.Я. Автолитическая деградация РНК: влияние различных факторов на динамику процесса. Молекулярная биология., 1986, т. 20, с. 527-535.

7. Бекман Э.М., Григорьев М.Ю. Рибозимы: РНК РНК-взаимодействия и эндонуклеолитическое расщепление. Успехи биологической химии., 1988, т. 29, с. 113-121.

8. Белоус A.M., Годин А.М., Панков Е.Я. Экзогенные нуклеиновые кислоты и восстановительные процессы. М., Медицина, 1974.

9. Белохвостов А.С., Климов Н.А. Участие нуклеиновых кислот в иммунном ответе. Успехи современной биологии, 1980, т. 89, с. 189-204.

10. Блинов М.Н., Луганова И.С. Рибонуклеиновые кислоты как модуляторы иммунного ответа. В сб. Молекулярные механизмы клеточного гомеостаза. Новосибирск, «Наука» 1987, с. 182-195.

11. И. Блинов М.Н., Луганова И.С., Владимирова А.Д., Бубнов А.Н. Влияние ксеногенной тимусной РНК на пролиферацию лимфоцитов больныххроническим лимфолейкозом. В кн.: Труды I Всероссийского съезда гемотологов и трансфизиологов. Ленинград, 1980, с. 27-29.

12. Волков Е.М., Полежаев Г.И. Влияние денервации и возможные механизмы нейротрофического контроля хемочувствительной и электрогенной мембран скелетных мышечных волокон. Успехи физиологических наук. 1982. т. 13, №3, с. 9-30.

13. Гублер Е.В., Генкин А.А. Применение непараметрических критериев статистики в медико-биологических исследованиях. Л., Медицина 1973. с. 136.

14. Дудич Е.И., Семенкова Л.Н., Дудич И.В., Николаева М.А., и др. Изучение процесса апоптоза раковых клеток, индуцированного а-фетопротеином. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2000, т. 130, №12, с. 604-612.

15. Евтеева И.Н., Куличкова В.А., Миттенберг А.Г., Волкова И.В. Новая эндорибонуклеазная активность 26S-протеосом из клеток линии А-431. Цитология. 2000, т. 42, №7, с. 675-679.

16. Егорова М.В., Шапошникова В.В., Нариманов А.А., Кудрявцев А.А., и др. Действие экстракта из корней синюхи голубой (polemonium coeruleum L.) на опухолевые клетки. Российский онкологический журнал. 1998, №1, с. 45-48.

17. Земсков В.М., Лидак М.Ю., Земсков В.М., Микстайс У .Я. Низкомолекулярная РНК: получение, гидролиз и применение в медицине. Рига. 1985.

18. Ильницкая С.И. Фенотипическая модификация опухолевых клеток под влиянием экзогенных РНК. Автореферат дисс. канд. биол. наук., Новосибирск. 1988.

19. Ильницкая С.И., Николин В.П. Повышение противоопухолевой резистентности мышей путём антигенной модификации опухолевых клеток препаратами РНК. Экспериментальная онкология. 1993, т. 15, №3, с. 36-39.

20. Константинова И.М., Петухова О.А., Куличкова В.А., Туроверова Л.В. и др. Новый класс РНП-частиц, содержащие малые РНК, гомологичные коротким диспергированным повторяющимся последовательностям ДНК. Молекулярная биология. 1995. т. 29, Вып. 4, с. 761 771.

21. Константинова И.М., Волкова И.В., Евдонин A.JL, Ермолаева Ю.Б. и др. Тканеспецифичность субъединичного состава и ЭФР-зависимые измерения набора субъединиц 208-протеасом. Цитология. 2000, т. 42, №7, с. 665-668.

22. Константинова И.М., Ветцкер Р., Петухова О.А., Чесноков И.Н. Онтогенез. 1997, т. 28, с. 171-177.

23. Куличкова В.А., Волкова И.В., Туроверова JI.B., Евтеева И.Н. Специфические ДНК-связывающая и эндорибонуклеазная активности прочно связанных с хроматином малых РНП. Молекулярная биология. 1999, т. 33, №5, с. 764-771.

24. Миттенберг А.Г., Куличкова В.А., Медведева Н.Д., Волкова И.В. и др. Характеристики эндорибонуклеазной активности протеасом из клеток линии К562. II. Анализ нуклеолиза специфических мРНК протеасомоми. Цитология. 2002, т. 44, №4, с. 357-363.

25. Невинский Г.А., Канышкова Т.Г., Бунева В.Н. Природные каталитически активные антитела (абзимы) в норме и при патологии. Биохимия. 2000, т. 65, вып. 11, с. 1473-1487.

26. Николин В.П. Экспериментальное и клиническое исследование противоопухолевого действия препарата рибонуклеиновой кислоты. Автореферат дисс. канд. мед. наук. Новосибирск. 1973.

27. Николин В.П., Ильницкая С.И., Вишневецкий С.Н., Мертвецов Н.П. Влияние экзогенной поли (А)+мРНК на антигенные свойства и рост клеток опухоли Кребс-2. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1992.

28. Николин В.П., Ильницкая С.И., Попов Н.А., Мертвецов Н.П. Индукция наследуемых изменений в антигенной структуре опухолевых клеток экзогенной поли (А)+мРНК. Экспериментальная онкология. 1994, т. 16, с. 335-341.

29. Пальцев А.А. Полиморфно-ядерные лейкоциты. В кн. Воспаление. Руководство для врачей. Под редакцией Серова В.В., Паукова B.C. М., Медицина, 1995, 640 с.

30. Сёмочкин С.В., Каргина И.Б., Бекман Э.М., Арион В.Я. «Иммунокоррекция препаратами тимуса при экспериментальной ожоговой травме», International J. on Immunorehabilitation, 1999, №12.

31. Саркисов Д.С., Пальцин А.А., Колкер И.И. Архив патологии. 1986. №12. с. 6-13.

32. Сёмочкин С.В., Бекман Э.М., Баранова О.А., Арион В.Я. «Регуляторное влияние риботима на функциональную активность нейтрофилов при экспериментальной ожоговой травме», Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 2001, т.131, №3, с. 306-309.

33. Слепцова JI.А., Аксёнова Н.Н., О межклеточной передаче информации в процессе иммуногенеза. IV. Сравнительная характеристика температурно-солевых фракций РНК клеток селезёнки контрольных и иммунных крыс. Цитология. 1974, XVI, 1147-1152.

34. Чипенс Г.И., Веретенникова Н.И., Вегнер Р.Э., Гниломёдова JI.E., Розенталь Г.Ф. Структурные основы действия пептидных и белковых иммуномодуляторов. Рига, «Зинатне», 1990, с. 42, 49, 105, 243.

35. Archer S. Induction of T-cell specific antigen on bone marrow lymphocytes with thymus RNA. Immunology, 1978, v. 34, p. 123-129.

36. Baneijee S, An S, Zhou A , Silverman R, Makino S. Rnase L-Independed Specific 28S rRNA Clevege in Murine Coronovirus-Infected Cells. Journal of Virology, Oct. 2000, p. 8793-8802.

37. Banerjee S, An S, Makino S. Specific 28S rRNA Clevege in Murine Coronovirus-Infected Cells. Adv Exp Med Biol 2001, v. 494, p. 621-626.

38. Berstain RM, Bunn CC, Hughes GRV et al. Cellular protein and RNA antigens in autoimmune disease. Mol Biol Med 1984; 2: 105-20.

39. Biggiogera M, Bottone MG, Martin ТЕ, Uchiumi T, Pellicciari C. Still immunodetectabl nuclear RNPs are extruded from the cytoplasm of spontaneously apoptotic thymocytes. Exp. Cell Res. 1997, 234, p. 512-520.

40. Biggiogera M, Bottone MG, Pellicciari C. Nuclear RNA Is Extruded from Apoptotic Cells. Journal of Histochemistry and Cytochemistry, Vol. 46, 9991006, Sep. 1998.

41. Biggiogera M, Pellicciari С Heterogeneous ectopic RNP-derived structures (HERDS) are markers of transcriptional arrest. FASEB J, 2000, v. 14, p. 828834.

42. Bonfa E, Parnassa AP, Rhodes DD et al. Antiribosomal S10 antibodies in humans and MRLIlpr mice with systemic lupus erythematjsus. Arthritis Rheum 1989; 32: 1252-61.

43. Bunn CC, Bernstain RM, Mathews MB. Autoantibodies against alanyl-tRNA synthetase and tRNA coexist and are associated with myositis. J Exp Med 1986; 163: 1281-91.

44. Burd G.B., Dreyfuss G. Science. 1994. V. 265. p. 615-621.

45. Cai C., Guo H., Schroeder R., Punzalan C., Kuo P. Nitric Oxide-Dependent Ribosomal RNA Cleavage Is Associated with Inhibition of Ribosomal Peptidyl Transferase Activity in ANA-1 Murine Macrophages. J. of Immunology, 2000, 165: 3978-3984.

46. Casiano C.A., Martin S.J., Green D.G., Tan E.M. Selectiv cleavage of nuclear autoantigens during CD95(Fas/APO-l)-mediated T cell apoptosis. J.Exp .Med. 1996, 184, p. 765-770.

47. Chang D., Maraia R.J. J. Biol. Chem. 1993. V. 268. p. 6423-6428.

48. Chen Y., Bhoopalam N., Yakulis V., Heller P. Changes in lymphocyte surface immunoglobulins in myeloma and effect of an RNA-containing plasma factor. Ann. Internal Med., 1975, v. 83, p. 625-631.

49. Chomcznsky P., Sacchi N. Singl-step method of RNA isolation by acid guanidium thiocyanate-phenol-chloroform extraction. 1987. Anal. Biochem. v. 162, p. 156-159.

50. Course R.J., de Boer H.A., Nomura M. Cell. 1986. v. 44. p. 197-205.

51. Coux О., Tanaka K., Goldberg L. Annu. Rev. Biochem. 1996. v. 65. p. 801-847.

52. Covacci R., Bruzzese N., Sgambato A., Di Francesco A. et al. Magnesium1. KIPI •restriction induces granulocytic differentiation and expression of p27 in human leukemic HL-60 cells. 1998. J. Cell. Biochem. 70: 313-322.

53. Davies R.V. Biosci. Rep. 1984. v. 4, p. 3-22.

54. Davis T.L., Firulli A.B., Kinniburgh A.J. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1989. v. 86. p. 9682-9686.

55. Deckwerth T.L., Johnson E.M. Temporal analysis of events associated with programmed cell death (apoptosis) of sympathetic neurons deprived of nerve growth factor. 1993. J. Cell. Biol. 123: 1207-1222.

56. Degen WGJ, van Aarssen Y, Pruijn GJM, Utz PJ, van Venrooij WJ. The fate of U1 snRNP during anti-Fas induced apoptosis: specific cleavage of the U1 snPNA molecule. Cell Death Differ. 7, 70-80.

57. Degen WGJ, Pruijn GJM, Raats JMH, van Venrooij WJ. Caspase-dependent cleavage of nucleic acids. 2000. Cell Death and Differ. 7, 616-627.

58. Del Prete, M Julieta et all. Degradation of cellular mRNA is a general early apoptosis-induced event. FASEB J, 2002, Dec. 16(14), p. 2003-2005.

59. Delic J., Coppey-Moisan M., Magdelenat H. Gamma ray-induced transcription and apoptosis-associated loss of 28S rRNA in interphase human lymphocytes. 1993. Int. J. Radiat. Biol. 64, 39-46.

60. Dobrzelewski J, Milewska Z, Panusz H. Effect on transcription of low-molecular-weight RNA from calf thymus chromatin. 1980. Acta. Biochim. Pol. 27(2): 75-87.

61. Dragunow M., Preston K. The role of inducible transcription factors in apoptotic nerve cell death. 1995. Brain Res.Rev 21,1-28.

62. Dreyfuss G., Philipson L., Mattaj I.W. Ribonucleoprotein particles in cellular processes. J.Cell.Biol. 1988 v.106. p.1419-1425.

63. Dubnau G., Struhl G. Nature. 1996 v. 379. p. 694-699.

64. Elkon K.B., Parnassa A.P., Foster C.L. Lupus autoantibodies target ribosomal P proteins. J. Exp. Med. 1985; 162: 459-71.

65. Elkon K., Shelly S., Parnassa A. et al. Identification and chemical synthesis of a ribosomal protein antigenic determinant in systemic lupus eruthematosus. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1986; 83: 7419-23.

66. Fan L., Yakovlev A., Faden A. Site-specific cleavage of 28S rRNA as a marker of traumatic brain injury. 1999. J. of Neurotrauma. V. 16, №5, p. 357-364.

67. Fodstad O., Olsnes S. Studies on the accessibility of ribosomes to inactivation by the toxic lectins abrin and ricin. 1977. Eur. J. Biochem. v. 74, 209-215.

68. Francoeur A.M., Peebles C.L., Heckman K.J. et al. Identification of ribosomal protein autoantigens. J. Immunol. 1985; 135: 2378-84.

69. Gerne N.K., Nordin A.A. Science, 1963, v. 140, p. 405.

70. Giancomoni D., Yakulis V., Wang S.R. et al. In vitro conversion of normal mouse lymphocytes by plasmacytoma RNA to express idiotipic specifities on their surface characteristic of the plasmacytoma immunoglobulin. Cell Immunol., 1974, v. 11, p. 389-400.

71. Greenhalgh D.A., Parish J.H. Effect of 5-fluorouracil combination therapy on RNA processing in human colonic carcinoma cells. 1990. Br. J. Cancer 6, 415419.

72. Heller P., Bhoopalam N., Chen Y., Yakulis V. The relationship of myeloma «RNA» to immune response. In: Immune RNA in Neoplasia. N.Y.: Acad. Press, 1976, p. 223-233.

73. Hitl W., Wolf D.H. Trends Biol Sci. 1996. v. 21. p. 96-102.

74. Hoet R.M., Weerd P.D., Gunnewiek J.K. et al. Epitope regions on U1 small nuclear RNA recognized by anti-Ul RNA-specific autoantibodies. 1992. J Clin Invest 90: 1753-62.

75. Helene C., Toulme S. Specific regulation of gene expression by antisense; sense and antigene nucleic acids. 1990. Biochem. Biophys Acta. 1990. v. 1049. p. 99125.

76. Holmberg L., Melander Y., Nygard O. Probing the structure of mouse Ehrlich ascites cell 5,8S, 18S and 28S ribosomal RNA in situ. 1994. Nucl. Asids. Res. v. 22, p. 1374-1382.

77. Holmberg L., Nygard O. Release of ribosome-bound 5S rRNA upon cleavege of the phosphodiester bond between nucleotides A55 in 5S rRNA. 2000. v. 381. n. 11. p. 1041-1046.

78. Houge G., Doskeland S.O., Вое R., Lanotte M. Selective cleavage of 28S rRNA variable regions V3 and VI3 in myeloid leukemia cell apoptosis. 1993. v. 315, n. 1, p. 16-20.

79. Houge G., Robaye В., Eikhom T.S., Golstain J. et al. Fine mapping of 28S rRNA sites specifically cleaved in cells undergoing apoptosis. 1995. Molecular and Cellular Biology. V. 15, n. 4, p. 2051-2062.

80. Houge G., Doskeland S.O. Divergence towards a dead end? Cleavage of the divergent domains of ribosomal RNA in apoptosis. 1996. Experientia. (52), p. 963-967.

81. Katzmann Y., Giacomoni D., Yakulis V., Heller P. Characterization of myeloma «RNA» to immune response. 1976. In: Immune RNA in Neoplasia. N.Y.: Acad. Press, p. 223-233.

82. King K.L., Jewel C.M., Borthner C.D., Cidlowski J.A. 28S ribosome degradation in lymphoid cell apoptosis: evidence caspase and Bcl-2-dependent and independent pathways. 2000. Cell Death Differ v. 7, p. 994-1001.

83. Kobayashi S., Higashi N., Suzuki K., Goto S. et al. J. Biol. Chem. 1992. v. 267, p. 18291-18297.

84. Kramerov D.A., Tallib S.V., Shamyatsky G.P., Georgiev G.P. Nucleic Acids Res. 1990. v. 18, p. 4499-4505.

85. Lafarga M., Lerga A., Andres M.A., Polanco J.I. et al. Apoptosis induced by methylazoxymethanol in developing rat cerebellum: organization of the cellnucleus and its relationship to DNA and rRNA degradation. 1997. Cell and Tissue Research. 289: 25-38.

86. Lamon E.W., Bennet J.C. Antibodies to ribosomal ribonucleic acid (rRNA) in patients with systemic lupus erythematosus (SLE). 1970. Immunology, 19: 43942.

87. Larson D.E., Xie W., Glibetic M. et al. Coordinated decreases in rRNA gene transcription factors and rRNA synthesis durind muscle cell differentiation. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 90: 7933-7936.

88. Lee R.C., Rhonda L.F., Ambros V. The C. elegans heterochronic gene lin-4 encodes small RNAs with antisense complementarity to lin-4. 1993. Cell. V. 75, n.3, p. 843-854.

89. Lei H, Furth E. et all A program of cell death and extracellular matrix degradation is activated in the amnion before the onset of labor. J Clin Invest 1996, Nov 1,98 (9), p. 1971-1978.

90. Lockshin R.A., Zakeri Z. Programmed cell death: early changes in metamorphosing cells, v. 72 p. 589-596.

91. Lundberg U., West A.B., Altman S. Characterization of RNA with unusual electrophoretic mobility from tissues of patients with Crohn's disease. 1995. FEBS Letters, v. 371, p. 345-350.

92. Maraia R.J., Driscoll .Т., Bilyeu Т., Darlington G.J. 1993. Mol. Cell. Boil. V. 3, p. 4233-4241.

93. Maraia R.J., Zasloff M., Plotz P., Adeniyi-Jones S. 1988. Mol. Cell. Biol. V. 7, p. 4433-4440.

94. Martins de Sa C., Grossi de Sa M.-F., Akhayat O., Broders F. et.al. 1986. Mol. Biol. v. 187 p. 479-493.

95. McKinnon R.D., Danielson P., Brow M. N. D., Bloom F.E. et al. 1987. Mol. Cell. Biol. v. 7, p. 2148-2154.

96. Michelotti E.E., Michelotti G.A., Aronsohn A.I., Levens D. 1996. Mol. Cell. Biol. v. 16, p. 2350-2360.

97. Michot В., Hassouna N., Bachellerie J.P. Secondary structure of mouse 28S rRNA and general model for the folding of the large rRNA in eukaryotes. 1984. Nucl. Acids. Res. v. 12, p. 4259-4279.

98. Mylonas P.G., Matsouka P.T., Papandoniou E.V., Vagianos C. et al. Growth hormone and insulin-like growth factor I protect intes cells from radiation induced apoptosis. 2000. Mol. Cell. Endocrinol. V. 160. n. 1-2. p. 115-122.

99. Nakamura K. The proliferation of plasma cells from mouse bone marrow in vitro. II. Stimulation of IG-producing cells by an RNAse sensitive thymocyte homogenat. 1976. Cell Immunol, v. 25, p. 163-172.

100. Noller H.F. Ribosomal RNA and translation. 1991. Annu Rev Biochem. v. 60, p. 191-227.

101. Nowak R. Science. 1994. v. 263, p. 608-610.lll.Olmo N., Turnay J. et al. Cytotoxic mechanism of the ribotoxin a-sarcin. Induction of cell death via apoptosis. 2001. Eur. J. Biochem. v. 268, p. 21132123.

102. Payao S.L.M., Smith M.A.C., Winter L.M.F., Bertolucci P.H.F. Ribosomal RNA in Alzheimer's disease and ageing. 1998. Mechanism of ageing and development, v. 105, p. 265-272.

103. Petit F., Jarrouss A.S., Boissonnet G., Dadet M.N. et al. Mol. Biol. Reports. 1997. v. 24, p. 113-117.

104. Poon Leo L.M., Leung Tse N., Lau Tze K., Lo Y.M.Dennis. Presence of fetal RNA in maternal plasma. Clinical Chemistry. 2000 v. 46, p. 1832-1834.

105. Poon Leo L.M., Leung Tse N., Lau Tze K., Lo Y.M.Dennis. Circulating fetal RNA in maternal plasma. PNAS. 2001 v. 945, p. 207-210.

106. Radzioch D., Clayton M., Varesio L. Interferon-alpha -beta and -gamma augment the levels of rRNA precursors in peritoneal macrophages but not in macrophage cell lines and fibroblasts. 1987. J. Immunol, v. 139, p. 805-812.

107. Rajagopalan L.A., Maker J.S. Progr. Nucleic. Acids. Res. Mol. Biol. 1997. v. 56, p. 257-286.

108. Roy G., Mercure S., Beuvon F., Perreault JP. Characterization of stable RNAs intestinal tissues of individuals with either Crohn's disease or ulcerative colitis. 1997. Biochem. Cell. Biol. v. 75, p. 789-794.

109. Rutjes SA, van der Heijden A, Utz PJ, van Venrooij WJ, Pruijn GJM. Rapid nucleolytic degradation of the smoll cytoplasmic Y RNAs during apoptosis. J. Biol. Chem. 1999, 274, 24799-24807.

110. Ryskov A.P., Ivanov P.L., Kramerov D.A., Georgiev G.P. Nucleic. Acids. Res. 1983. v. 11, p. 6541-6548.

111. Samali A, Gilje B, Doskeland SO, Cotter TG, Houge G. The ability to cleave 28S ribosomal RNA during apoptosis is a cell-dependent trait unrelated to DNA fragmentation. Cell Death Differ. 1997,4, p. 289-293.

112. Sandvic K., van Deurs B.O. Toxin-induced cell lysis: protection by 3-methyladenine and cycloheximide. 1992. Exp. Cell. Res. v. 200, p. 253-262.

113. Sato Т., Uchiumi Т., Kominami R. et al. Autoantibodies specific for 20-Kdal ribosomal large subunit protein L12. 1990. Biochem. Biophys. Res. Commun. v. 172, p. 496-502.

114. Sato Т., Uchiumi Т., Ozawa T. et. al. Autoantibodies against ribosomal protrins found with high frequency in patients with systemic lupus erythematosus with active disease. 1991. J. Rheumatol, v. 18, p. 1681-1684.

115. Sato Т., Uchiumi Т., Arakawa M., Kominami R. Serological association of lupus autoantibodies to a limited functional domain of 28S ribosomal RNA and to the ribosomal proteins bound to the domain. 1994. Clin. Exp. Immunol, v. 98, p. 3539.

116. Saxena S.K., Ackerman E.J. Microinjected oligonucleotides complementary to the alpha-sarcin loop of 28S RNA abolish protein synthesis in Xenopus oocytes. 1990. J. Biol. Chem. v. 265, p. 3263-3269.

117. Saxena S.K., Rybak S.M., Winkler G. et.al. Comparison of Rnases and toxins upon injection into Xenopus oocytes. 1991. J. Biol. Chtm. V. 266, p. 2120821214.

118. Scherrer K., Bey F. Progr. Nucleic Acids Res. Mol. Biol. 1994. v. 49, p. 1-64.

119. Schoeniger L.O., Jelinek W.R. Mol. Cell. Biol. 1986. v. 6, p. 1508-1519.

120. Sell S., Mendelsohn J. Transfer of specific immunity with RNA. 1978. Arch. Pathol. Lab. Med. v. 102, p. 217-222.

121. Silva JM, Rodriguez R, Garcia JM, Munoz С et all. Detection of epithelial tumour RNA in the plasma of colon cancer patients is associated with advanced stages and circulating tumor cells. Gut. 2002. v. 50, p. 530-534.

122. Strub K., Gall G., Busslinger M.L. EMBO J. 1984. v. 3, p. 2801-2807.

123. Tanaka K. J. Biochem. 1998. v. 123, p. 195-204.

124. Toszyski D.P.W., Steitz J.A. EMBO J. 1991 v. 10, p. 459-466.

125. Uchiumi Т., Traut R.R., Elkon K., Kominami R. A human autoantibody specific for unique 28S ribosomal RNA inhibits the interaction of elongation factors 1 a and 2 with ribosomes. 1991. J. Biol. Chem. v. 266, n. 4, p. 2054-2062.

126. Wightman В., Ha I., Ruvkun G. Cell. 1993. v. 75, p. 855-862.

127. Wilusz J., Keene J.D. Autoantibodies specific for U1 RNA and initiator methionine tRNA. 1986. v. 261, p. 547-572.

128. Zhang J., Liu W. The mechanism of action of trichosanthin on eukaryotic ribosomes RNA N-glycosidase activity of the cytotoxin. 1992. Nucl. Acids Res. v. 20, p. 1271-1275.