Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Физико-химические и биологические свойства гидролизатов из куриных эмбрионов-отходов вакцинного производства

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Физико-химические и биологические свойства гидролизатов из куриных эмбрионов-отходов вакцинного производства"

Л1ИНИСТЕРСТВ0 СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКИ И ВЕТЕРИНАРНЫЙ ИНСТИТУТ

На правах рукописи

КУЗИНА Татьяна Борисовна

УДК 557.122.2:616.097.3:591.3:615.371/372.004

ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ И БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ГИДРОЛИЗАТОВ ИЗ КУРИНЫХ ЭМБРИОНОВ — ОТХОДОВ ВАКЦИННОГО ПРОИЗВОДСТВА

Специальность: 03.00.04 — Биохимия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

САНКТ-ПЕТЕРБУРГ

1993

/У/ >; \/ ^ ¡4 ^

Работа выполнена и лаборатории иммунологии и радиобиологии Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института птицеводства.

Научный руководитель: доктор биологических наук Колабская Л. С.

Официальные оппоненты; доктор медицинских наук, профессор Рудаков В. В.; кандидат биологических паук, старшим научный сотрудник Ко-лупаева Т. Д.

Ведущее учреждение: Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт птищ^юдства.

па заседании Специализированного совета К 120.20.01 в Санкт-Петербургском ветеринарном институте по адресу: 196084, г. Санкт-Петербург, Московский пр., 112.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Санкт-Пстербург-ского ветеринарного института.

Автореферат разослан ^¿оЛ^ 1993 г.

Ученый секретарь Специализированного совета, кандидат биологических наук,

Защита состоится

в 13 час.

доцент

Т. А. Эйсымонт

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Современное промышленное птицеводство редусматривает содоржчние многомиллионного поголовья на огра-яченных площадях, в условиях изоляции от естественной среды Зитания, что отрицательно влияет на уровень резистентности орфизма, Результатом снижения уровня нзспецифической защиты явится уменьшение продуктивности и сохранности поголовья, увелцч-|иа количества заболеваний различно»! этиологии (Митюшников В. М., !85; Колабская Л.С., 1986).

Профилактика заболеваний в промышленном птицеводстве осуще-'вляется в основном за счет применения вакцин и химико-фарма-1втических средств (антибиотиков, сульфаниламидов, кокцидиоста-!ков). Однако, широкое и не всегда обоснованное их применение ижает эффективность лечебно-профилактических мероприятий и мо~ т вызвать иммунодепрессию (Кашкин К.П., Караев 3.0., 1979; яхов Э.Н., Кику В.Ф., 198'»).

В связи с этим актуальной представляется разработка спосо-в повышения резистентности организма птиц о помощью биогенных, эпаратов, не оказывающих отрицательного воздействия на иммун-о систему.

Большое место среди подобных препаратов принадлежит белко-ч гидролизатам (Колабская Л.С., 1986; Мовсум-Задэ К.К., Берес-э В.А., 1989; Комаров A.A., 1991). Гидролиэаты из крови чело-са и животных предназначены в. первую очередь для использования (едицинскоЛ практике и не могут удовлетворить потребности пти-зрдства, поэтому целесообразно расширение их ассортимента.

Богатую сырьевую базу для получения белковых гидролиза^ов уставляет технология производства вирусвакцин на развивающих-куриных эмбрионах, которые представляют ценный источник бел-для получения биологически активных препаратов.

Цель и задачи исследований. Цель исследовании — разработать нологичный метод получения гидролнзата из куриных эмбрионов -одов вакцинного производства и рациональный способ его премия с целью повышения резистентности организма птиц.

Для дооти чгкгя :юстап.л»нно.: ноли необходимо решить слодув-задачи:

- разработать оптимальный лпра.'кгтры гидролиза куриных эмбри-

оно в и деминерализации кислого полупродукта;

- научить физико-химические свойства гидролизата из куриных эмбрионов (ГКЭ);

- изучить влияние ГКЭ- на иммунобиологическое состояние организма цыплят;

- разработать оптимальные дозы и схемы применения ГКЭ;

- провести сравнительную оценку эффективности применения ГКс и коммерческих биологически активных препаратов.

Положения, выносимые на защиту. В связи с вышеизложенным, на защиту выносятся следующие положения:

- схемы получения аминокислотного препарата из куриных ьнб-рионов - отходов вакцинного производства, с использованием методов солянокислого гидролиза сырья и ионнообменной очистки кислого полупродукта;

- физико-химическая характеристика ГКЭ и методы контроля его качества и стандартизации;

- рациональные схемы и дозы применения препарата;

- результаты применения ГКЭ- в производственных условиях.

Научная новизна работы.' На основании проведенных исследований впервые разработан метод получения гидролизата из куриных, эмбрионов - отходов вакцинного производства, основанный на солянокислом гидролизе сырья и деминерализации кислого полупродукта методом ионнообменной хроматографии на анионита ЭДЗгЮП.

Определено, что полученный гидролизат характеризуется высоким количеством свободных аминокислот, а содержание метионина, цистина и изолейцина в нем значительно выше, чем в гидролизатах, полученных аналогичным способом из других'видов сырья. Установлено, что минеральный состав ГКЭ отличается значительным количеством ионов кальция..

Определена высокая зффективность применения ГКЭ в дозе 0,5 - 1,0 мл/гол. с питьевой водой или кормой цыплятам раннего возраста. Получены данные о том, что препарат способствует повышению сохранности птицы при I ' заражении ' ее колибактериозом.- Теоретически обосновано, экспериментально доказано, что ГКЭ является биологически активным веществом, способствует коррекции иммунной системы цыплят при иммуноде^ицитном состоянии, вызваньом введением иммунодепрессантов, повышает титры антител при вакцинации

против ныокаслской болезни (НБ). . ,

Установлено, что по эффективности действия ГКЗ. не уступает или.превосходит известные биологические активные препараты, применяемые в птицеводстве.

Практическое значение работы. Получен гидролизат из курин-ных эмбрионов - отходов вакцинного производства и предложены рациональные схемы и дозы его применения цыплятам раннего возраста, позволяющие увеличить сохранность и продуктивность птицы и устойчивость ее к инфекционным заболеваниям. Применение ГКЗ. дало положительный эффект в производственном опыте на птицефабрике "Рус-ско-Высоцкая" Ленинградской области.

Получено положительное решение на заявку на изобретение "Способ выращивания сельскохозяйственной птицы" № 4896159/15/122908 и разработан проект нормативно-технической документации на препарат.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы используются в учебном процессе Санкт-Петербургского ветеринароного. института при чтении лекций курса болезней птиц по теме."Охрана-здоровья птиц в комплексах". Основные положения диссертации додо-кены на заседаниях методического и Ученого советов БНИВИП.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 3 печатных.ра-5оты, в которых изложено основное ее содержание.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 153 :траницах машинописного текста, включает введение, обзор литера-гры, собственные исследования, .выводы и практические предложения.

Работа иллюстрирована 16 таблицами и 2 рисунками. Список итературы содержит 218 источников, в том числе 71 иностранных, риложения на 17 страницах.

' ' 2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ■

2.1. Материалы и методы

Работа выполнена в лаборатории иммунологии и радиобиологии зероссийского научно-исследовательского ветеринарного института ги.цеводства в период 1988 - 1991 гг.

. Материалом для исследований служили 14 - 16-дневные куриные [брионы, зараженные вирусом гриппа птиц или инфекционного ларин-

готрахеита (штамм ВНИИБН) посла удаления из них вируееодер»ащеш жидкости. В работе было использовано 2400 куриных эмбриона.

Лабораторыне опиты били проведены на 850 цыплятах: кросса "Бройлер-6" в возрасте 1-60 дней.

Комплексный аминокислотный препарат из куриных эмбрионов -отходов вакцинного производства получали путем подбора оптимальных условий -кислотного гидролиза с учетом соотношения сырья и кислоты, концентрации HCl в гидролизном смеси, температуры и ьре мени гидролиза.

Для освобождения от ионов хлора и гумииових веществ, кислый гид-ролизат пропускали через колонку, заполненную ионнообменнои смолой марки ЭДЭ-ЮП. Полученный препарат нейтрализовали и стерилизовали.

Содоржание общего азота в гидролизате определяли полумикро-методом Къельдаля: аминныи азот - потенциометрическим титрование по Зеренсеиу; глубину расщепления белка - по отношению содержани аминного азота к общему (в %)\ цветность препарата измеряли на ФЭК-56 при длине волны 540 нм. Количество хлор-ионов определяли методом аргентометрического титрования по Мору; содержание..натрий-, калий- и кальций-ионов - методом пламенной фотометрии; триптофан - по методу Хорна. Количественное содержание свободных аминокислот в гидролизате исследовали методом ионообменной хроматографии на автоматическом аминокислотном анализаторе IWA-3B фирмы "Хитачи" (Епония).

Изучение влияния ГКЭ: на организм цыплят процедили на моделях экспериментальной иммунодепрессии,заражения колибактериозом и. вакцинации против ныокаелской болезни.

С целью создания иммунодефицитного состояния суточным цыплятам вводили внутрибрюшинно иммунодепрессанты: гидрокортизон (однократно в дозе 50 мг/кг массы тела) или циклофосфан (трех-' кратно в той же дозе). *

Заражение цыплят колибактериозом проводили в 15-20-дневном .возрасте взвесью суточной агаровой культуры патогенного штамма кишечной палочки (эпизоотические штамм Б^) в стерильном физиологическом растворе. Взвесь микробных клеток вводили подкожно в дозе 0,5-0,6 млрд.микробных клеток на I цыпленка. Наблюдение за зараженной птицей осуществляли в течение 30 дней.

Вакцинацию цыплят против нькжаслской болезни проводили в зоэрасте 14 дней вакциной из штамма "JIa-Сотп" интрпназалыю. ?итри антител определяли через I'* дней посла вакцинации в реак-цш торможения гяиагглютинэции по методике Сюрина 13.Н. и соавт. ;198б).

Определение.содержания Xt^G- в сыворотке крови птиц проводили ю методу Нанчинн (1965) в модификации UuiUjllll согласно рекомен-,ациИ Колабской JI.C. и Шорниковой J* JI. (198'*).

Определение уровня лизосомально-катионных белков (ЛКБ) в 'ранулоцитач крови и фагоцитарной активности лейкоцитов проводи-и в соответствии с методическими рекомендациями £11ШШ (1987).

Количественное определение Т-лимфоцитов проводили в реакции -розеткообразования согласно рекомендаций Катаева В. П. (1987).

Исследование микрофлоры кишечного тракта птиц осуществляли бщепринятым методом десятикратных серийных разведений исследу-мого материала. Для выделения' чистых, культур бил использован ме-од селективных питательных сред. Идентификацию выделенных чистых ультур микроорганизмов проводили используя тест-системы APR про-эводства Франции.

Статистическую обработку результатов исследований проводили з методу Стьюдент.а с учетом рекомендаций Стрелкова Р.Б. (1986).

Настоящая работа является самостоятельным разделом хоздого-)рной тематики № 3357 , а также фрагментом комплексных иссле-)ваниГ1, отраслевой НТГ1 О.Х 63 № гос. регистрации 01.90.0.060^901

2.2. Получение гидролизата из куринных эмбрионов - отходов вакцинного производства

В основу технологии получения аминокислотного комплекса из иных эмбрионов был положен солянокислые высокотемпературный дролиз, как единственный способ, обеспечивающий стерильность тового препарата и растворенье скорлупы куриных эмбрионов.

Экспериментальными исследованиями установлено, что.введение гидролизную смесь, скорлупы при прочих равных условиях вызывало ижений количества общего а^ота в 1,8 раза, триптофана - в 1,9 зп и выхода раствора на стадии гидролиза - в 1,5 раза. Причи-,i этого являлось расходование части НИ на растворение скорлу-

ш куриных эмбрионов.

Подбор оптимальной концентрации HCl осуществляли в диапазон значений от 1,1 н до 1,7 н. Оптимальной была концентрация 1,5 н, обеспечивающая максимальный выход азотистых продуктов в раствор и сохранение ьативности всех заменимых и незаменимых аминокисло

Изучение влияния соотношения субстрат/кислота на состав пре парата показало, что оптимальным является соотношение 1/1,5, поа воляющее получить кислый гидролизат, содержащий Ь,0 - 0,2 г/л общего азота при глубине расщепления белка 68,b - 1,1%. йлход гидролизата при ото« составлял 75,Б - от объеиа загрузки.

Освобождение кислого гидролизата от ионов хлора и гуминоьш веществ проводили пропусканием его через колонку, заполненную ионообменной смолой ЭДЭ-ЮП.

Поскольку для гидролиза куриных эмбрионов необходима доста точно высокая концентрация HCl, условия ионного обмена, разработанные для осветления и деминерализации гидролизатов из крови человека и животных не позволяли освободить от побочных продукте гидролиза ГКЭ: на смоле сорбировалось лишь 50% гуминовых вещест! и 60$ ионоь хлора.

С цельи снижения степени десорбции побочных продуктов гидролиза была уменьшена скорость элюции азотистых продуктов и снижена концентрация 01Г ионов элюента ( скорость составляла 20-30 мл/мин; в качестве элюента использовали 0,3 н раствор едкого на? ра).

Дня оптимизации условий ионного обмена было изучено влияние изменения количества кислого ГКЭ, поступаыщего на анионит, на состав конечного продукта. Результаты,опытов представлены на рисунке I.

При подаче на колонку кислого гидролизата из расчета 1,5-2,С ил/г анионита достигалась достаточно высокая степень очистки от побочных продуктов гидролиза ( цветность раствора составляла 0,с 0,46 ед.экстинкции, количество ионов хлора - 380-460 иэкв/л) и отмечался высокий выход азотистых продуктов ( до 75Й от исходьо1 уровня).

в «¡ход гидролизата от загрузки)

ГОО

90 Р0 70 60 50

40

30

20 10

1,0 ]_

2,0

1,5

Г

т

2,5

0,6

0,5

0,4

0,3 0,2 0,1

цветность раствора (ед.экстинции)

1.0

1.5

-х

2,0 "г4

2,5

4

800

700 600

500

400

300

200 100

количество ионов хлора Лйзке/Л)

*

2,:

.2.0

1.5 1,0 [ ~Т

Рисунок I. Зависимость состава гидролизата из куриных эмбрионов ог количества кислого полупродукта, поступающего на анионнт.

2.3.4иэико-хииическиа свойства гидролиаата из куриных эмбрионов - отходов вакцинного производства

Основными показателями качества для гидролизатов являются внешний вид, цвет, pli, количество общего азота и глубина расщепления белка,,ь таш стерильность и безвредность.

ПО представляет собой коричневую прозрачную или опалесциру-ющую кидкость со специфическим запахом. При хранении допускается образование небольшого осадка на дне флакона. Массовая доля общего азота составляет 0,6-0,7/2; массовая доля шинного азота - не иоьее bOJi от общего азота; рН находится в пределах ь,5-7,5. Препарат долаен быть стерильным и безвредны*!.

ï'iO содержит Ib свободных аминокислот (таблица I).

Таблица I

Сравнительный анализ содержания свободных аминокислот в гидролнзатах из крови кур и из куриных ¡эмбрионов • .

Название аминокислот Гидролизат из Гидролизат из кури-

крови кур них эмбрионов

г/л /о г/л %

Аспьрагиновая кислота 4,ь*0,5 15,3 3,4*0,2 11,0

Треонин 0,о*0,1 2 ,Ь 1,5*0,1 • 4,7

Серии 1,6±0,2 4,9 1,о*0,2 ' 5,9

Глотаминовая кислота 3,7*0,2 11,6 3,Ь*0,3 12,3

Пролин 1,3*0,3 4,0 1,2*0,1 3,7

Глицин 2,1*0,2 6,7 , i,e±o.ï 6,1

Алании 2,4*0,1 7,7 5,4

Валиь 0,9*0,1 ' 2 ,Ь 1,4*0,2 4,4

ЦистИИ 0,5*0,1 1,7 '3,2*0,3 s 10,3

Метионин 0,4*0,2 1,3 1,5*0,1 4,7

Изолейцин 0,3±0,1 0,Ь 1,4*0,2 4,4

Лейцин 2,Ь*0,2 Ь,9 I,b*0,3 5,9

Тирозин 1,5*0,1 ■ 4,Ь 1,3*0,1 , 4,1

Фенилаланин о,е*о,2 2,6 1,4*0,2 4,5

Лизин " 3,4*0,2 10,9 2,2*0,3 7,0

Гистидин• 2,9*0,2 9,1 1,0*0,2 3,3

Продолжение табдиш 1

Дргишш Трилто(||ан

1,1±0,1 3,4 0,3*0,1 1,0

1,7-4), 3 0,2*0,1

0,4 0,6

Оумма свободных

аминокислот 31,№2,Ь 32,113,0

Но сравнению с гидролизатом из крови кур ПСЗ содержит больно таких незаменимых аминокислот, как цистин - в 6,4 раза, метионин -в 3,Ь раза, изолейцин - в 4,7 раза, а также треонин, валин, фенил-аланин.

Минеральный состав ПО характеризуется значительным количеством ионов кальция, составляющим 100,0*1,6 мзкп/л.

Поскольку для гидролиаатов, применяемых пероральпо, но разработаны нормативы по предельно допустимым количествам побочных продуктов гидролиза (ионоь хлора и гуминових веществ), наш било изучена возможность упрощения способа получения ГпЭ за счет исключения стадии ионного оьмсна.

Однако, опыты, проведанные на суточных цыплятах, покапали, что неочищенный ПО оказывал токоическое влияние на оргашии цыплят, что проявилось в высокой смертности, составившей 62,1$.

Изучение динамики показателей иеслбцифичоской резистентности и прироста живой массы цыплят при применении ГКЗ с питьевой водой в диапазоне доз от 0,2 до 1,5 мл/гол. показало, что наиболее выраженным и длительным стимулирующим эффектом обладают дозы 0,5.— - 1,6 мл/гол.

Применение препарата цыплятам-бройлерам в указанных дозах повышало содержание и сыворотке крови в 1,7-1,9 раза, количество ЛКБ в 1,1 -1,2 раза и увеличивало титры антител при вакцинации против, ньюкаслской болезни на 2,3-2,5 , (Р<0,05).

При этом прирост живой массы увеличивался на 2Ь-29и по сравнению с контрольной группой. Темпы прироста живой массы цыплят этих

2.4. Шбор оптимальных доз и схем применения ГКЭ

групп были стабильными и сохранялись на высоком уровне даже чероз 10 дней поело окончания липойки ГКЭ.

Результаты опытов по применению Г'Ю в различные сроки выращивания цыплят позволяют сделать вывод, что наиболее эффективно назначение препарата в течение первых 30 дней жизни цыплят, так как естественная резистентность птицы в этот период находится на низком уровне. Рациональная схема применения ПО - с 1-го по 10-й и с 20-го по 50-й день жизни.цыплят.

2.5. Оценка эффективности применения ПО при экспериментальной икиунодепрессии

В последние годы рядом исследователей установлено, что ряд аминокислот обладают способностью стимулиропа-рь иммунный отвит (Белокрылов Г.Л., Молчанова И.В.,1986). Доказано■также иммуномо-дулирующее действие гидролиэатов бёлка (Комаров A.A., 1991; ßt)U> ICU.I G ., /<& A, (S8Z) .

В связи с этим нами било проведено изучение эффективности применения ГКЭ при экспериментальной иммунодепрессии. Результаты опытов показали, что применение ПО способствовало частичному восстановлению показателей резистентности, сниженных в результате введения иммунодепрессантов.

Так, если при введении гидрокортизона уровень Jilffi у цыплят •контрольной группы составлял,I,37 - 0,07 ед., то у цыплят, получавших ПО - 1,91 - 0,04 ед. Количество в сыворотке крови контрольной птицы составляло 1,04 £ 0,08 г/л; подопытной -I,S8 ± 0,16 г/л.

2.6. Эффективность применения ГКЭ при экспериментальном колибактериозе

Наиболее распространенными заболеваниями молодняка в промышленном птицеводстве являются желудочно-кишечные заболевания, в'т. ч. колибактсриоэ. В возникновении и развитии колибактеркоза, как заболевания," вызываемого условно-патогенной микрофлорой, особенно большое значение имеет уровень резистентности и иммунологической реактивности оргаьиэма.

В связи с этим была изучена эффективность применения ГКЭ как

препарата, повышающего резистентность организма к заражении коли-бакгериозом. Результаты зкспериментов представлены в таблице 2.

Для контрольной птица в острой стадии заболевания характерно снижение количества сывороточного IqG па 4Ь%, уроьня JiiiO на 31% и повышение фагоцитарной активности гранулоцитов ьа б,С,t.

У цыплят, получавших ГКЗ, отмечалось достоверное повышение количества IcjG и пропоита завершенного фагоцитоза по сравнению а контрольными цыплятами, что свидетельствует о стимуляции гуморального и клеточного звана неспецифической резистентности под влиянием комплексного аминокислотного препарата.

К 21 дгю после заражения у цыплят подопытной группы отмечена нормализация двух из трех изучаемых показателей (количество Ic^G и JxIiB), тогда как у цыплят контрольной группы они все еще значительно отличались от показателей здоровой птицы.

Отимулируищее действие ПО при применении ого на фоне зара>-. кения колибактериозом подтверждается также повышением сохрашости обработанной птныд на ¿7,Ць.

. 2.7. Срашеиие эффективности применения ПО и тицалина при экспериментальной колибактериоое

Сравнительная оценка эффективности применения ГНЭ и тималина при заражении, патогенным штаммом кишечьой палосиш ь дозе ЛД^оо показала, что оба препарата достаточно эффективны. Так, если тималин предохранял 22,2$ цыплят от смертельной колиинфекции, то ТО - 23,5%.

Определено, что оба препарата повышают выработку IjG ь 1,о~ -2 раза и процент Е-розеткообразупщих клеток (Е-РОК) на 5,2-6,b'/S (рисунок 2).

'Применение ГКЭ и тималина способствовало снижению общего числа услоонопатогешых оьтеробактерий в кишечнике подопытных цыплят по сравнении с контрольными на I и соответственно: в т.ч. количества лактоэоотрицателььых бактерий - на 4%, гемолизируащих кокков - на 2^, условнспатогенных псевдомонад - на 3 и 4 ^ соответственно.

Таблица 2

Влияние ГКЗ на показатели резистентности цыплят при-экспериментальном колибактериозе

п= 20

Название п/п группы

Сохранность птицы (/о)

Показатели неспецифлчес- ■ Показателя неспецнфичэсксл резис-

кол резистентности через тентностй через 21 день после за-

5 дн.после заражения_ ракенкя____

поличество Уровень ,ь зааерае- Количество Уровень ъ заверыен-

196 в сыво-ДКВ в нного фа- в сыво- ЛК5 в

рОтке крови грануло гоцитоза ротке крови грануло-

(г/л) цитах (г/л) цитах(ед.)

(ед.)

ного фагоцитоза

I. Кктактная птица 100,0.- 3,43+0,34 2,01+0,07 42,0+2,3 5,73+0,60 1,77+0,07 39,8+3,3

2. Контроль засайения 44,4 2,30+0,06-1,53+0,04 45,6+0,4 10,1+0,98 1,69+0,03 43,6+3,1

3. ГКЗ на фоне заражения 72,7 4,43+0,43*1,59+0,12 52,7+0,7* 5,86+0,96* .2,02+0,10* 53,5+2,1*

Примечание: *

- различия показателей по сравнения с группой "контроль заражения" достоверны, р < 0,05-.

Количество 1с|0 (мг/м'л)

2,0

1.0

Гидролизат Тималин Контроль

Содержание 'ЛКБ

возраст цыплят

■ 2,2 ' 1,8

1,0 0,6

I

ю

30

. 20: 10 .

20 (дн.)

15

20

возраст цыплят (дн.)

Количество Е-РОК

I 00

возраст цыплчт

15 .20 (ян.)

Рисунок 2. Влияние гидролизата из куриных энбрионов и тималйна на иммунобиологическое состояние организма цымят при заражении колийактериоэом. • 15

Испытание эффективности- применения ГКЭ в условиях производства на базе птицефабрики "Русско-Шсоцкая" Ленинградской области показало, что препарат позволяет увеличить сохранность обработанной птицы на 0,7$; повысить среднесуточный прирост живой массы на 1,3 г и увеличить средний вес I головы при убое на ЬО г.

Экономический эффект от применения препарата составил 11руб. 71! коп, на I голову или 2 руб. 93 коп. на I рубль затрат.

ВЫВОДЫ

1. Разработан способ получения белкового гидролиэата из куриных эмбрионов - отходов вакцинного производства, заключающийся в кислотном гидролизе сырья (температура 130-140°С, экспозиция 4-6 часов, концентрация соляной кислоты в гидролизной смеси 1,5н, соотношение субстрат/кислота 1/1,5) и ионообменной очистке кислого полупродукта на анионите ЭДЭ-ЮП (количество гидролиэата, поступающего на смолу 1,5-2,0 мл/г, скорость элюции азотистых продуктов 20-30 мл/мин). '

2. Гидролизат из куриных эмбрионов содержит 6,0-7,0 г/л общего азота, имеет глубину, расщепления белка не менее'50%, цветность раствора не более 0,50 ед.экст., содержит не более 500 мэкв/л ионов хлора.

3. Гидролизат из куриных эмбрионов содержит 18 свободных аминокислот, их сумма составляет 32,1*3,0 г/л. По сравнению с. аналогичным препаратом из крови кур ГКЭ содержит большее коли-' чество таких незаменимых аминокислот, как ыетионин - в 3,8 раза; цистин - в 6,4 раза; изолейцин - в 4,7 раза; треонин - в 1,9 рааа; фенидаланин - в 1,Ь раза; аргинин - в 1,5 раза.

Минеральный состав ГКЭ характеризуется наличием значительного количества ионов кальция.

4. Научно обоснованы оптимальные дозы и схемы применения ГКЭ цыплятам; Оптимальные дозы находятся в пределах 0,5-1,0 мл/гол. Наиболее аффективно и экономически оправдано применение гидролиэата цыплятам с 1-го по 10-Й и с 20-го по 30-й день жизни.

5. Препарат повышает неспецифическую резистентность орга-

. низма цыплят. При этом к 30-дневному возрасту увеличивается содержание 1^0- в сыворотке крови на 30-45$ и уровень Л1СБ на 13-20$,

1С

а также титр антител при вакцинации против ньгжаслской болезни на 2,3-2,5 Прирост живой массы к моменту планового убоя

увеличивается на 15-20,5.

6. На модели экспериментальной иммунодепрессии доказано, что ПО обладает ш/.муномодулнрутацими свойствами. Применение гид-ролизата ьа фоне шиунодепрессии гидрокортизоном способствовало увеличению количества 1^0 в' сыворотке крови в 1,9 раза и уровня ЛКБ в гранулоцитах в 1,4 раза.

7. Установлено, что ПО повышает резистентность цыплят к заражению колийактернозсм и погашает сохранность птицы на 27,1$.

Ь. При сравнительной оценке эффективности применении ПО и тималина на фоне заражения ¡солкбактериозом было определено, что по своему стимулирующему действию первый не уступает последнему. Оба препарата повышают выработку иммуноглобулина С- в 1,о--2 раза и процент Е-РОК ьа 5,3~6,Ь/о. Сохранность обработанной птицы увеличивалась на 22,2-23,5;» по сравнению с контрольной птицей.

9. Применение ПО в производственных условиях позволило получить экономический эффект II руб. 7Ь коп. на I голову или 2 руб. 93 коп. па I рубль затрат.

. ¡1РА1Ш1Ч£СЖ ПРадОШШ

1. Обоснована возможность использования отходов вакцинного производства в качестве сырья для производства белкового гидроли-зата и разработана промышленная технология получения препарата.

2. Материалы по получению и применению гидролизата из куриных эмбрионов - отходов вакцинного производства вошли ь заявку на изобретение "Способ ьыра'цивания сельскохозяйственной птицы", на которую получено положительное решение ВШИГПЭ № 59/15/ 12290ь.

3. На основании проведенных исследований разработан проект нормативно-технической документации на препарат "Эмбриамин -стимулятор резистентности организма", включающий; . -технические условия;

-инструкцию по изготовлению и контролю; -наставление по применению. " '

4. Результаты исследований по получению и применению препарата используются в учебной процессе СПВ11 при чтении лекций кур- _

са болезней птиц по теме; "Охрана здоровья птиц в комплексах".

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАНШЛ ПО МАТЕРИАЛАМ ДИССЕРТАЦИИ

I. Колабская Л.С., Горецкая Т.И., Кузина Т.Е. Иммунный статус организма птиц в промышленном птицеводстве //Сб.науч.тр. ВН11БИП/ /Эффективны? средства, метода диагностики и профилактики болезней птиц в промышленном птицеводстве.-Л. ,1991.-С. 112-123.

Z. I{узина Т.Б., Колабская Л. С. Уровень неспецифической резистентности цыплят-бройлеров при применении белкового гидролизата.-Деп. в ВИНИТИ.- »535-В93 5;.03.93г.-9с.-Библиогр.9'назв.

3. Лузина Т.Е.,Колабская Л. С. Физико-химическая характеристика гидролизата из куриных эмбрионов - отходов производства.-Деп.в. ВИНИТИ.- »536-В93 5.03.93 г.-9 с.-Библиогр. 12 назв.

ГЩ.Тдл.БНР.' Зшс.Зад.Тэт.У!). 39.04.УМ.