Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Фармакотоксикологические свойства производных смоляных кислот, монометилового эфира кетотетракарбоновой кислоты и их применение в животноводстве
ВАК РФ 06.02.03, Звероводство и охотоведение
Автореферат диссертации по теме "Фармакотоксикологические свойства производных смоляных кислот, монометилового эфира кетотетракарбоновой кислоты и их применение в животноводстве"
На правах рукописи
ЧУДОВ ИВАН ВЛАДИМИРОВИЧ
ФАРМАКОТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ПРОИЗВОДНЫХ СМОЛЯНЫХ КИСЛОТ, МОНОМЕТИЛОВОГО ЭФИРА КЕТОТЕТРАКАР-БОНОВОЙ КИСЛОТЫ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В ЖИВОТНОВОДСТВЕ
06.02.03 - ветеринарная фармакология с токсикологией
АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук
005546222 2 и ПАР 2014
Казань-2014
005546222
Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Башкирский государственный аграрный университет» (ФГБОУ ВПО Башкирский ГАУ) г. Уфа
Научный консультант: доктор биологических наук, профессор
Исмагилова Асия Фахретдиновна
Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор, зав.
кафедрой фармакологии Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э.Баумана Усенко Виктор Иванович
доктор биологических наук, заведующая отделом животноводства и ветеринарии ГНУ «Татарский научно-исследовательский институт агрохимии и почвоведения» Ежкова Асия Мазетдиновна
доктор медицинских наук, профессор кафедры фармакологии Казанского государственного медицинского университета Залялютдинова Луиза Наильевна
Ведущее учреждение: ФГБОУ ВПО «Чувашская государственная сель-
скохозяйственная академия»
Защита состоится «13» мая 2014 года в 10.00 часов на заседании диссертационного совета Д-220.012.01 при ФГБУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности» (420075, г. Казань, Научный городок - 2, ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ»),
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» (г. Казань). Электронный вариант автореферата и текст объявления о защите размещен на официальных сайтах ВАК РФ www.vak.ed.gov.ru и текст диссертации - на официальном сайте ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» www.vnivi.ru
Автореферат и диссертация разосланы « с » 2014 г.
Ученый секретарь /у ^
диссертационного совета, п&Л'/М???7^/'
кандидат ветеринарных наук Степанов Владимир Иванович
1 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы исследования. Одной из основных задач, поставленных Российской сельскохозяйственной академией, является разработка и внедрение в ветеринарную практику, и животноводство средств эффективной терапии и профилактики заболеваний животных заразной и незаразной этиологии, а также повышение естественной резистентности и устойчивости к отрицательному воздействию внешней среды [15,41,44,50].
Практическая медицина и ветеринария современности использует обширный арсенал лекарственных средств для лечения различных патологических состояний организма животных и человека, а также средства, регулирующие течение обменных реакций. Однако, несмотря на подтвержденную клинической практикой эффективность большинства из этих средств, приходится осознавать, что их активность очень сильно ограничена спектром действия, и в большинстве случаев, наряду с положительным терапевтическим эффектом, сопряжена с проявлением отрицательного побочного действия, порой, превосходящего по тяжести первоначальную патологию. Немаловажное значение имеет и тот факт, что отдельные группы лекарственных средств при длительном применении способны терять свою фармакологическую активность [6, 9, 50, 56,70].
Преимуществом лекарственных средств на основе природных компонентов перед их синтетическими аналогами состоит в том, что они редко вызывают побочные реакции организма, малотоксичные, хорошо переносятся и могут быть использованы не только для лечения, но и с профилактической целью при длительных курсах. С точки зрения экологичности производства лекарственное растительное сырье остается приоритетным в связи с гораздо более быстрой возобновляемостью источников и меньшим загрязнением окружающей среды, в сравнении с производством хи-миотерапевтических средств [3,4,31,58].
Степень разработанности проблемы. Наибольший интерес из всех компонентов лекарственного растительного сырья во всем мире заслуживают эфирные масла, в том числе содержащиеся в коре многих деревьев доступные для полусинтеза терпено-вые соединения [12, 13, 16, 19, 20, 26, 48, 51, 52, 60, 67]. Перспективную основу для дизайна новых биологически активных соединений, смоляные кислоты, представляют собой еще и потому, что даже незначительные изменения их молекул приводят к существенному изменению проявляемых видов активности [6, 21, 52, 53]. Причем, модификацией химической структуры отдельных ди- и тритерпеноидов возможно добиться одновременного присутствия множества видов фармакологической активности [46, 47, 54]. Однако, в доступной литературе нами не обнаружено описания компонентов растительного лекарственного сырья в общем, а также производных абиетиновой, хино-, малеопимаровой кислот в частности, которые могли бы проявлять одновременно хорошо выраженные противовоспалительные, противоязвенные, гепатопротек-торные, антиоксидантпые и иммуностимулирующие свойства, крайне необходимые при лечении и профилактике широко распространенных в животноводстве и ветеринарии патологий печени, желудочно-кишечного тракта, репродуктивной системы и заболеваний, характеризующихся течением выраженной воспалительной реакции.
Цели и задачи. Цепью исследований явилось изыскание новых биологически активных компонентов лекарственного растительного сырья, на основе полусинтеза смоляных кислот, обоснование их безопасности и терапевтической эффективности при коррекции реакций воспаления, патологий пищеварительной и репродуктивной систем животных. В соответствии с поставленными целями нами решались следующие задачи:
1. Провести скрининг, дизайн и прогноз спектра биологических видов активности новых производных смоляных кислот;
2. Изучить токсико-фармакологические свойства производных абиетиновой, хи-нопимаровой и малеопимаровой кислот: острую и хроническую токсичность; эмбрио-токсические свойства; противовоспалительную и противоязвенную активность; раздражающие и сенсибилизирующие свойства; влияние на минеральный состав и органический матрикс костной ткани при остеоиндукции;
3. Изучить влияние монометилового эфира кетотетракарбоновой кислоты и ее композиций на клеточный и гуморальный иммунитет;
4. Изучить влияние монометилового эфира кетотетракарбоновой кислоты и ее композиции с анилокаином и полифлоксацином («Полшрил») на течение процессов свободнорадикального окисления;
5. Изучить гепатопротекторные свойства монометилового эфира кетотетракарбоновой кислоты и ее композиции с анилокаином и полифлоксацином при различных формах гепатозов крыс, собак и молодняка крупного рогатого скота;
6. Изучить терапевтическую эффективность применения монометилового эфира кетотетракарбоновой кислоты и ее композиции с анилокаином и полифлоксацином при лечении токсической диспепсии телят;
7. Изучить терапевтическую эффективность монометилового эфира кетотетракарбоновой кислоты и ее композиции с анилокаином и полифлоксацином при лечении острого катарально-гнойного эндометрита у коров и их влияние на гормональный статус.
Научная новизна. Проведен сравнительный анализ и скрининг возможностей изменения набора биологических видов активностей у новых производных смоляных кислот посредством модификации их химических структур.
Впервые изучены токсико-фармакологические свойства новых производных абиетиновой, хино- и малеопимаровой кислот, монометилового эфира кетотетракарбоновой кислоты индивидуально, а также в композиции с анилокаином и полифлоксацином: параметры острой и хронической токсичности; эмбриотоксические свойства; противовоспалительные и противоязвенные свойства; раздражающие и сенсибилизирующие свойства; влияние на минеральный состав и органический матрикс костной ткани при остеоиндукции.
Впервые изучены и установлены иммуностимулирующие, антиоксидантные и гепатозащитные свойства монометилового эфира кетотетракарбоновой кислоты в композиции с анилокаином и полифлоксацином, а также возможность их применения при профилактике и лечении различных форм гепатозов у лабораторных, домашних и сельскохозяйственных животных.
Впервые установлена высокая эффективность применения монометилового
эфира кетотетракарбоновой кислоты в композиции с анилокаином и полифлоксаци-ном при лечении токсической диспепсии у телят и гнойно-катарального эндометрита у коров. Определены дозы и схемы их применения для повышения продуктивного здоровья животных.
Новизна прикладных разработок подтверждена двумя патентами РФ на изобретения: «Средство, представляющее собой 8-(метокси-карбонил)-4Ь,8-диметил-3-(2-метш1пропаноил)-тетрадекагидрофенантрен-1,2,1 Оа-трикарбоновую кислоту, проявляющее противовоспалительную и противоязвенную активность, и способ его получения» № RUS2426720 от 30 ноября 2009 года; «Средство, представляющее собой 13-изопропил-4,10-диметилдодекагидро-13,16-эпоксиоксирено[2,3] нафто[2,1-(1][1,2] ди-оксицин-4-карбоновую кислоту, проявляющее противовоспалительную и противоязвенную активность» № RUS2472787 22 августа 2011 года.
Теоретическая и практическая значимость. Результаты проведенных исследований позволили предложить новый иммуномодулятор МЭК и его композицию для повышения общей резистентности организма животных, лечения диспепсии телят, профилактики и лечения гепатозов у лабораторных, домашних и сельскохозяйственных животных, а также для лечения катарально-гнойного эндометрита у коров. В результате проведенных исследований разработаны и утверждены в установленном порядке:
1. Методические рекомендации производству «Лечение и профилактика эндометритов у коров» (утверждены заместителем руководителя Федеральной службы по ветеринарному и фитосанитарному надзору «Россельхознадзор» Власовым H.A., протокол №3 от 17 марта 2009 г.).
2. Методические рекомендации «Применение новой композиции монометилового эфира кетотетракарбоновой кислоты с анилокаином и полифлоксацином (МЭК+А+П) в форме внутриматочных свечей на желатиново-глицериновой основе для лечения острого послеродового катарально-гнойного эндометрита у крупного рогатого скота (рассмотрены и одобрены секцией «Патология, фармакология и терапия» отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (протокол №2 от 10 сентября 2010 г.).
3. Методические рекомендации производству «Лечение жирового гепатоза у молодняка крупного рогатого скота на откорме и фармакопрофилактика лекарственных поражений печени у собак при применении макроциклических лактонов» (рассмотрены и одобрены научно техническим советом при Министерстве сельского хозяйства Республики Башкортостан (протокол № 2 от 2 июля 2012 г.).
Материалы диссертационной работы существенно дополняют сведения о фармакологической активности компонентов лекарственного растительного сырья терпе-ноидной структуры, используются в учебном процессе на кафедре морфологии, патологии, фармации и незаразных болезней ФГБОУ ВПО «Башкирский государственный аграрный университет»; в ФГБОУ ВПО «Уральская государственная академия ветеринарной медицины»; ФГБОУ ВПО «Иркутский государственный аграрный университет»; ФГБОУ ВПО «Оренбургский государственный аграрный университет»; ФГБОУ ВПО «Тюменская государственная сельскохозяйственная академия» и ФГБОУ ВПО «Воронежский государственный аграрный университет».
По материалам исследований автор награжден серебряной медалью и дипломом XI Российской агропромышленной выставки «Золотая осень - 2009» за «Инновационную разработку высокоэффективного препарата «МАОП + Анилокаин + Энрофлокса-цин» в форме внутриматочных свечей для лечения эндометритов у коров».
Методология и методы исследований.
Работа выполнена на кафедре морфологии, патологии, фармации и незаразных болезней ФГБОУ ВПО «Башкирский государственный аграрный университет» в период с 2002 по 2013 гг. в соответствии с планом научно-исследовательских работ университета (№№ государственной регистрации 01200950324, 01201058602, 01201352807). Научно-производственные исследования проведены в условиях питомника собак и в сельскохозяйственных предприятиях Республики Башкортостан. Отдельные Фрагменты работы были выполнены с участием д-ра биол. наук Исмагиловой А.Ф.; д-ра хим. наук Казаковой О.Б.; канд. биол. наук Нигматуллина Ю.М.
Материалы исследований.
1. В работе исследовались 21 новых производных смоляных кислот (абиетиновая кислота и ее озонат, хинопимаровая кислота и 5 ее производных; малеопимаровая кислота, 13 ее линейных амидов и амидов с аминокислотными остатками), синтезированных в ФГБУН «Институт органической химии Уфимского научного центра Российской академии наук» при содействии д-ра хим. наук О.Б. Казаковой; 2-метил-4-амино-6-окси-пиримидин (МАОП) и композиции МАОП и монометилового эфира ке-тотетракарбоновой кислоты (МЭК) с анилокаином, энро- и полифлоксацином («По-литрил»).
2. В экспериментах использованы следующие виды животных: мыши линии СБА - 105 голов; мыши линии СцВ1 — 105 голов; мыши, гибриды первого поколения (F1=C57B/ál х СВА$) - 60 голов; мыши белые беспородные - 2753 голов; крысы белые беспородные - 1219 голов; свинки морские породы «Гладкошерстная» - 144 голов; кролики породы «Серебристый» — 60 голов; собаки породы «Восточно-европейская овчарка» — 30 голов; коровы и телята породы «Черно-пестрая» - 101 голов. Лабораторные животные содержались в одинаковых условиях вивария, соответствующих требованиям СанПИН № 1045-73 «Санитарные правила по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник (вивариев)» [37], а также ГОСТ Р 53434-2009 «Принципы надлежащей практики» [35], соответствующего международным стандартам GLP. Рацион лабораторных животных состоял из сбалансированного по питательности, витаминам и минеральным веществам, отдельно для каждого из видов животных (мышей, крыс, морских свинок и кроликов), гранулированного корма «ПроКорм», соответствующего ГОСТ Р 50258-92 «Комбикорма полнорационные для лабораторных животных» [23]. Условия кормления и содержания сельскохозяйственных животных и собак представлены в соответствующих разделах результатов собственных исследований.
3. Анализ вероятных видов биологической активности новых производных смоляных кислот и их выраженность осуществляли с использованием авторизованного доступа к международной компьютерной системе PASS С&Т Ver. 1.0, разработанной в ФГБУ «Научно-исследовательский институт биомедицинской химии имени В.Н. Оре-ховича» РАМН (http://pharmaex-pert.ru/PASSOnline) [69].
4. Для гематологических и биохимических исследований использовали консервированные и неконсервированные пробы крови крыс, собак и крупного рогатого скота. При изучении селективности противовоспалительных свойств изучаемых соединений исследовали минеральный состав и его соотношение с органическим матриксом в костной ткани крыс.
5. В исследованиях применяли стандартизированные наборы реактивов Vital Diagnostics Spb, Diatron Messtechnik GmbH, а также химические реактивы с пометкой х.ч. и о.с.ч.
6. В исследованиях применяли следующее оборудование: весы лабораторные RAD WAG AS 310 С (П класс точности); печь муфельная; баня водяная; центрифуга ЕВА 20 СHettich, Германия); микроскоп световой; встряхиватель Вортекс V-3; камера Горяева; термостат; калиброванные пипетки автоматические с переменным объемом «Ленпипет» и одноразовые наконечники для них; фотоколориметр спектрофотометри-ческий ПЭ-5300В и борсшшкатные пробирки с длиной оптического пути 10 мм; холодильник; ионометр И-500; полуавтоматический биохимический анализатор StatFax 1904+ (Awareness Technology Inc.); ИФА-анализатор Stat Fax 2100; автоматический гематологический анализатор Abacus Junior 5 Vet (Diatron Messtechnik GmbH); пробирки вакуумные «Vacuette»: для гематологических исследований - с ЭДТА-К2, для биохимических исследований сыворотки крови — без наполнителя.
Методы исследований.
1. Определение параметров токсичности исследуемых соединений осуществляли при внутрижелудочном введении, по методу Кербера [7, 10, 38, 39, 55] с последующим расчетом LD¡o и коэффициента вариабельности смертельных доз (К).
2. Противовоспалительную активность изучали согласно классической методике Ф.П. Тринуса и H.A. Мохорта [49].
3. Остеоиндуктивная активность изучали по методу А.Х. Шамсутдинова [57].
4. Противоязвенную активность изучали по методу С.В.Аничкова и И.С. Заводской [1] на моделях острых язв, вызванных внутрижелудочным введением 3%-нош раствора уксусной кислоты в дозе 100 мг/кг и раствора индометацина.
5. Изучение кожно-резорбтивных и сенсибилизирующих свойств производных малеопимаровой кислоты и их композиции с анилокаином и полифлоксацином проводили по методу Б.И. Любимова и М.И. Мироновой [27].
6. Влияние изучаемых соединений на клеточно-опосредованный и неопосредованный иммунный ответ изучали путем сенсибилизации белых мышей 1%-ным раствором динитрофторбензола и эритроцитами барана. Количество антителообразую-щих клеток определяли с помощью метода локального гемолиза в жидкой фазе, предложенного N.K. Jeme и A.A. Nordin, в модификации Conningham [63]. Титр гемагглю-тининов в сыворотке крови экспериментальных животных определяли планшетным методом. Изменения функциональной активности перитонеальных макрофагов определяли по способности восстанавливать нитросиний тетразолий и фармазан в дифор-мазан под действием продуктов НАДФ - оксидазной реакции. Оценку количества перитонеальных макрофагов, несущих Fc-рецепторы, производили методом розеткооб-разования с эритроцитами барана (ЕА-РОК) [14]. Фагоцитарную активность нейтро-филов определяли по методу Н.В. Пучкова (2000) [36]с суспензией убитых микробных тел St.aureus (штамм 209).
7. Изучение хронической токсичности и влияния изучаемых соединений на эмбриогенез у крыс осуществляли согласно руководству по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ ФГУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» [17,18,55].
8. Гепатопротекторные свойства МЭК и ее композиции изучены на моделях острых экспериментальных гепатитогепатозов вызванных внутрибрюшинным введением крысам 50%-ного масляного раствора тетрахлорметана и метанола [29, 32, 45,55].
9. При определении антиоксидантных свойств изучаемых соединений и композиций учитывали содержание в крови диеновых конъюгатов [5], малонового диальдегида [68], глутатионредуктазы, глутатионпероксидазы, катал азы, ретинола и токоферола [24].
10. Биохимические исследования крови проводили с использованием биохимического анализатора крови StatFax 1904+ (Awareness Technology Inc.) с применением стандартизированных реактивов Vital Diagnostics Spb.
11. Определение уровня белковых фракций крови осуществляли нефелометрическим методом [24].
12. Бактерицидную активность сыворотки крови (БАСК) характеризовали степенью задержки прироста биомассы тест-культуры St. aureus (штамм № 209).
13. Гематологические исследования цельной крови проводили с использованием автоматического гематологического анализатора Abacus Junior 5 Vet (Diatron Messtechnik Gmb H). Определение уровня гормонов (кортизол, тестостерон, прогестерон, эстрадиол, трийодтиронин, тироксин) в сыворотке крови коров определяли иммуноферментным (ИФА) методом с применением планшетного ИФА-анализатора Stat Fax 2100 и стандартизированных диагностикумов Vital Diagnostics Spb.
14. Статистическая обработка результатов. Экспериментально полученный цифровой материал подвергали обработке методом вариационной статистики с применением прикладного приложения MS Office - MSExcef[43].
Положения, выносимые на защиту.
1. Взаимосвязь вероятной биологической активности от расположения фарма-кофорных групп в структуре производных малеопимаровой, абиетиновой и хино-пимаровой кислот;
2. Фармакологический спектр и механизмы иммуномодулирующей и гепатоза-щитной активностей монометилового эфира кетотетракарбоновой кислоты и его композиций;
3. Степень безвредности нового производного малеопимаровой кислоты МЭК и его композиций с анило каином и полифлоксацином;
4. Возможность применения МЭК и его композиции с анилокаином и полифлоксацином при лечении токсической формы диспепсии у телят;
5. Возможность коррекции гормонального статуса коров и лечения катарально-гнойного эндометрита у коров с применением внутриматочных свечей композиции МЭК+А+П на желатиново-глицериновой основе.
Степень достоверности и апробация результатов. Статистическую обработку цифрового материала, полученного в экспериментах, проводили с использованием стандартного пакета статистической обработки данных прикладной программы MS Excef, включающую подсчет средних величин (М), средней ошибки (т), среднеквад-ратических отклонений выборки (<5), степень достоверности по Сгьюденту [43].
Основные положения диссертации представлены и доложены на: международных и всероссийских научно-практических конференциях (Санкт-Петербург, 2003, 2006; Улан-Удэ, 2010; Уфа, 2010, 2012; Казань, 2010; Краснодар, 2011; Москва, 2011); научной конференции «Органическая химия для медицины «ОРХИМЕД - 2008»» (Черноголовка, Московская обл., 2008); Втором, Третьем и Четвертом съездах ветеринарных фармакологов и токсикологов России (Казань, 2009; Санкт-Петербург, 2011; Москва, 2013). По материалам диссертации опубликовано 38 работ, в том числе 14 статей в журналах рекомендованных ВАК Министерства образования и науки Российской Федерации, 2 учебных пособий, 3 методических рекомендаций, 2 патента Российской Федерации на изобретения.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 306 страницах компьютерного текста и включает: введение, обзор литературы, результаты собственных исследований, заключение с рекомендациями производству, список сокращенных терминов, список использованной литературы (всего 354 источников, в том числе 97 зарубежных), список иллюстрированного материала и приложения. Диссертация иллюстрирована 26 таблицами и 10 рисунками.
2 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1 Дизайн и PASSC&T прогноз спектра биологической активности новых производных смоляных кислот.
Модификация химической структуры известных биологически активных компонентов лекарственного растительного сырья преследует не только практическую цель - получение новых лекарственных веществ с нужными фармакологическими и биологическими свойствами, но и является одним из методов познания общих и частных закономерностей обусловливающих переход одного вида активности в другой [33,34,59].
Современная версия компьютерной системы предсказания спектра биологической активности PASS С&Т [69] реализованная в 1998 году включает в себя обучающую выборку более 30000 биологически активных веществ с экспериментально доказанной активностью, и охватывает более 5825 видов фармакологических эффектов и механизмов действия с ошибкой прогноза в - 4,477%. [34,62,65].
Компьютерный PASSC&T анализ возможных видов биологической активности и их вероятности выраженности у двадцати одного новых производных абиетиновой, хино- и малеопимаровой кислот позволили нам выявить наиболее перспективные соединения, представленные дигидрохинопимаровой кислотой, монометиловым эфиром кетотетракарбоновой кислоты, абиетиновой кислотой и ее озонатом, а также позволили выявить принципиальные зависимости химической структуры соединений, и, проявляемые ими виды активности.
22 Изучение параметров острой токсичности производных смоляных кислот (абиетиновой и левопимаровой).
Результаты первой серии проведенных исследований показали, что все изучаемые терпеноиды обладают токсичностью, находящейся на уровне от 4571,43+303,57 мг/кг до 15214,3±542,9 мг/кг. При введении мышам производных смоляных кислот в дозах близких к LDu отмечалось незначительное угнетение общего состояния, проявляющееся понижением двигательной активности, однако данные признаки исчезали уже через 1-2 часа с последующим и полным восстановлением физиологической ак-
тивности. При внугрижелудочном введении производных смоляных кислот в дозах, приближающихся к Ы)х, в течение 20-30 минут у мышей отмечалось незначительное повышение двигательной активности с последующим угнетением, сохраняющимся в течение до 6-12 часов. В серии опытов по определению острой токсичности ма-леопимаровой кислоты синтетической, введение средиетоксических и более высоких доз сопровождалось гастроэнтерическими явлениями, по-видимому, связанными с образованием в желудочно-кишечном тракте животных метаболитов, обладающих раздражающими свойствами. При вскрытии таких вынужденно убитых животных нами отмечена неравномерная гиперемия и складчатость слизистых оболочек тонкого и толстого отделов кишечника с явлениями набухания и разрыхления. Содержимое желудка и кишечника имело слизистую консистенцию.
Абсолютно смертельные дозы производных смоляных кислот, введенные мышам внутрижелудочно, вызывали быстро наступающее (в течение 5-10 минут) угнетение, с последующей гибелью в течение от 12 часов (малеопимаровая кислота; метиловый эфир малеопимаровой кислоты; метиловые эфиры малеопимаровой кислоты с фрагментами а- и /7-аланина, ¿-метионина, Ь- и £)£-вадина, ¿-лейцина, Ь-фенилаланина; метиловые эфиры малеопимаровой кислоты с фрагментами 1Н-имидазола и А^-метилпиперазина) до 48 часов (хинопимаровая кислота; дигидрохино-пимаровая кислота и ее метиловый эфир; МЭК, абиетиновая кислота и ее озонат). При вскрытии грудной клетки, произведенной непосредственно после остановки дыхания, у опытных животных, получавших абсолютно летальные дозы исследуемых соединений, нами не было отмечено каких либо признаков сердечного автоматизма в ответ на механическое раздражение сердечной мышцы пинцетом. При вскрытии сердца отмечено отсутствие крови в предсердиях при переполнении кровью желудочков. При гистологических исследованиях сердца нами отмечено, что заметного изменения общей численности кардиомиоцитов не происходило, однако отмечено одновременно-параллельно-зависимое появление атрофичных, гипотрофированных и гипертрофированных кардиомиоцитов. Со стороны сердца нами также отмечены гемодинамические нарушения, сопровождавшиеся умеренной диффузной инфильтрацией стромы миокарда мононуклеарами.
Появление кардиомиоцитов пшотрофированного и гипертрофированного характеров указывает на возможность как потенцирования кардиоцитотропного эффекта производными смоляных кислот, так и индуцирования внутриклеточных регенераторных механизмов в миокарде.
Печень у животных, погибших в результате острой интоксикации, вызванной аддуктами левопимаровой кислоты, характеризовалась венозным застоем крови. При гистологическом исследовании структуры печени нами, отмечена умеренная субплаз-малеммальная липидная инфильтрация и некроз отдельных гепатоцитов, неравномерное полнокровие сосудов с более выраженным синусоидальным полнокровием, особенно выраженной при острой летальной интоксикации линейными амидами и амидами малеопимаровой кислоты с аминокислотными остатками.
Определенные расчетным методом коэффициенты вариабельности смертельных доз составили от -1,4 у производного малеопимаровой кислоты с остатком фенилала-нина, и МЭК, а у абиетиновой кислоты составил -2,9. Значения коэффициента вариабельности смертельных доз (К) у исследуемых производных смоляных кислот в пределах А>1 свидетельствует о значительной широте токсических доз.
Нами также отмечены следующие зависимости токсической активности изучаемых соединений в сопоставлении с их химической структурой:
В результате восстановления метилового эфира дигидрохинопимаровой кислоты до 1 /?-гидроксипроизводного происходит снижение токсических свойств. Напротив, введение в ее структуру двух гидроксильных сгереогрупп в положения С15 и С18, при условии наличия метоксикарбонильной группы в положении С21, способствует значительному, в -2 раза, повышению LD50 в сравнении с хинопимаровой и в -2,3 раз по сравнению с метиловым эфиром 1/?-гидроксидищдро-хинопимаровой кислоты, однако, введение гидроксиминного фрагмента в положение С21, при наличии гидроксильных групп в положениях С15 и С18 не приводит к достоверному изменению параметров острой токсичности, в сравнении с метиловым эфиром lfi-гидроксидигидрохинопимаровой кислоты.
Взаимодействие хлорангидрида малеопимаровой кислоты с эфирами аминокислот, включающими остаток L-лейцина, L-вапина, а также с N-метилпиперазином приводит к незначительному повышению параметров острой токсичности, что, по-видимому, связано с быстрым метаболическим распадом указанных аддуктов малеопимаровой кислоты, сопровождающееся освобождением и токсическим воздействием на организм мышей соответствующих эфиров.
Из всех исследованных нами аддуктов малеопимаровой кислоты особого внимания заслуживает продукт ее озонолиза - МЭК, который проявил в -1,3 раз менее выраженные токсические свойства в сравнении с прямыми аддуктами левопимаровой кислоты - кислотами хино- и малеопимаровой.
Во 2-й серии опытов, нами определены параметры острой токсичности наиболее перспективного производного малеопимаровой кислоты - МЭК в композиции с ани-локаином и полифлоксацином (МЭК+А+П), теоретически способными усиливать проявление ее фармакологических свойств. В качестве сравнения нами определены параметры острой токсичности композиции полусинтетического аналога природного пиримидина - 2-метил-4-амино-6-оксипиримидин (МАОП) с анилокаином и энро-флоксацином (МАОП+А+Э), применяемой в ветеринарии (Таблица 1).
Таблица 1 - Параметры острой токсичности МАОП, МЭК и их композиций с анилокаином, энро- и полифлоксацином.
Исследуемые соединения Для мышей белых беспородных Для крыс белых беспородных
££>50 К ££>50 К
Энрофлоксацин 2392,86±118,73 2,43 2607,14+215,24 2,55
Полифлоксацин 2575,48±91,16 2,01 3066,33±46,68 1,64
Анилокаин 2278,57±145,91 1,99 3007,14±164,05 1,77
МАОП 5428,57±382,25 2,17 6128,57+471,89 2,36
МЭК 11035,71±297,71 1,35 11250,0±302,18 1,36
МАОП+А+Э 4835,71±419,66 2,65 6450,0+271,16 3,0
МЭК+А+П 13857,14±817,76 1,86 14071,43+842,04 1,89
Проведенными исследованиями выявлено, что анилокаин, полифлоксацин и эн-рофлоксацин, включаемые в состав композиций с МАОП и МЭК имеют сравнительно равнозначное значение Шщ, составляющее - 2500 мг/кг для белых мышей и -3000 мг/кг для белых крыс. пиримидина МАОП для белых мышей было в -2 раза
меньше (1Х>5о=5428,0+382,0 мг/кг для мышей и Ц)5о=6128,0±471,0 мг/кг для крыс) в сравнении с МЭК (1Ао=11035,0+297,0 мг/кг для мышей и ¿Ао=11250,0±302 мг/кг для крыс). При этом параметры острой токсичности компонентов композиции МА-ОП+А+Э в соотношении 1:2:0,2 не имели достоверных отличий от параметров токсичности исходного пиримидина, тогда как композиция МЭК+А+П в том же соотношении обладала в —1,3 раз меньшей токсичностью в сравнении с ¿О» МЭК и в -2,9 раз при сравнении с ¿О» композиции МАОП+А+Э.
В целом все рассмотренные производные абиетиновой кислоты, композиция МАОП+А+Э, а также композиция МЭК+А+П относятся к 4 классу опасности (малотоксичные вещества) согласно ГОСТ 12.1.00.7-76 [22].
23 Изучение противовоспалительной активности производных смоляных кислот и композиции МЭК+А+П.
Противовоспалительное действие новых производных смоляных кислот, а также композиций МЭК+А+П и МАОП+А+Э изучено на 90 группах белых мышей, по 7 гол в каждой, на трех моделях воспалений, экспериментально индуцированных субплан-тарным инъецированием 2%-ного раствора каррагенина, 2%-ного раствора формалина или 1%-ного раствора серебра нитрата по следующей схеме: за 1 час до введения фло-гогена, непосредственно после его введения, а также через 1 и 2 часа после введения флогогена животным опытных групп внутрижелудочно. В качестве препарата сравнения использовали диклофенак в дозе 8 мг/кг.
Из всех исследуемых соединений наибольшая противовоспалительная активность, превосходящая активность диклофенака в дозе 8 мг/кг, нами получена от производного малеопимаровой кислоты — МЭК в дозе 50 мг/кг. А повысить противовоспалительную активность нам удалось путем включения МЭК в состав композиции с анилокаином (А) и полифлоксацином (П) в соотношении 1:2:0,2. Противовоспалительная активность такой композиции, в дозе 25 мг/кг, при назначении внутрь составила: на модели острого экспериментального воспаления, вызванного каррагенином -48,38+0,8%, что соответственно на 20,68% и 6,26% выше активности МЭК и композиции МАОП+А+Э в тех же дозах, а также на 22,96% выше активности диклофенака; на модели острого воспаления, вызванного формалином - 46,61+0,81%, что соответственно на 9,14% и 5,84% выше активности МЭК и композиции МАОП+А+Э в тех же дозах, а также на 19,31% выше активности диклофенака; на модели острого экспериментального воспаления, вызванного нитратом серебра — 38,23+0,75%, что на -7% выше активности МЭК и композиции МАОП+А+Э в тех же дозах, а также на 23,38% выше активности диклофенака, хотя и в меньшей рекомендуемой дозе, составляющей 8 мг/кг.
2.4 Селективное противовоспалительное влияние МЭК на остеоиндуктив-ную активность костной ткани крыс.
Главным элементом механизма действия как стероидных, так и НПВС является блокада синтеза простагландинов и лейкотриенов из арахидоновой кислоты путем ингибирования фосфолипаз (относительно стероидов) или циклооксигеназ (относительно НПВС) [8, 11, 40, 61, 64]. Однако, блокада образования простагландинов и лейкотриенов, как правило, способствует проявлению иммунодепрессивных свойств, что натолкнуло нас на необходимость решения вопроса механизма одновременного иммуностимулирующего и противовоспалительного эффекта МЭК.
Влияние МЭК на остеоиндуктивную активность костной ткани нами изучена на белых беспородных крысах обоего пола с живой массой 200-220 г. Животным опыт-
ной группы в течение 7 сут внутрь вводили композицию МЭК+А+П в дозе 25 мг/кг; животным 2-й группы (положительный контроль) в течение того же периода времени внутрь назначали диклофенак в дозе 8 мг/кг; животным 3-й группы (отрицательный контроль) - плацебо.
В ходе проведенных исследований нами установлено, что в опытной и контрольной (плацебо) группах животных состав костной ткани (концентрация неорганических компонентов — кальция, фосфора; органического матрикса, а также их соотношений) после семисуточного периода не изменился, тогда как в группе животных, получавших внутрь диклофенак, концентрации минеральных компонентов (кальция и фосфора) снизилась на -2,5% при неизменном их соотношении, а соотношение минеральных компонентов к органическому матриксу снизилось с 1:1,81 до 1:1,29. Через 6 недель после трансплантации показатели минерального состава костной ткани контрольной группы (плацебо) находились на достоверно сопоставимом уровне с показателями минерального состава костной ткани животных, получавших МЭК в дозе 25 мг/кг, тогда как в группе животных, получавших диклофенак в дозе 8 мг/кг, отмечены более существенные изменения уровень кальция и фосфора минерального компонента понизился в -2,46 раз в сравнении с контролем (плацебо), а соотношение суммы минеральных компонентов (кальция и фосфора) к массе органического матрикса понизился в -3,18 раз.
Таким образом, нашими исследованиями подтверждена селективная противовоспалительная активность МЭК в дозе 25 мг/кг, в отличие от неселективного действия диклофенака, а также доказана вероятность одновременного присутствия противовоспалительных, иммуностимулирующих и антиульцерогенных свойств у МЭК, не противоречащих механизмам течения воспалительных реакций, протекающих в организме животных.
2.5 Противоязвенная активность производных смоляных кислот и композиции МЭК+А+П.
Известно, что большинство используемых в ветеринарной практике НПВС, способствуют возникновению язв и эрозий слизистых оболочек, что ограничивает их использование при смешанной патологии с одновременным развитием воспалительного и эрозивно-язвенного процессов. Широкому использованию стероидных противовоспалительных средств также препятствует возможность возникновения реакции «привыкания» [25,28,30,42].
Проведенными исследования установлено, что наивысший уровень противоязвенной активности (4,39+0,16), на модели острых язв, вызванных индометацином, проявляет производное малеопимаровой кислоты - МЭК, при назначении внутрь в дозе 25 мг/кг. При этом увеличение дозы МЭК с 25 мг/кг до 100 мг/кг не приводило к улучшению отмеченного свойства, тогда как на модели острых язв индуцированных уксусной кислотой нами отмечено повышение противоязвенной активности с 2,26+0,07 при дозе 25 мг/кг до 2,52+0,03 при дозе 100 мг/кг.
Значительного повышения противоязвенной активности МЭК, удалось включением его в состав композиции с анилокаином и полифлоксацином в соотношении 1:2:0,2. При этом противоязвенная активность указанной композиции при назначении внутрь, в дозе 25 мг/кг, составила: на модели острых язв желудка, вызванных индометацином - 6,55+0,02, что в —1,5 раз выше активности МЭК и в -2 раза выше активности композиции МАОП+А+Э, назначаемых в тех же дозах; на модели острых язв желудка, вызванных воздействием уксусной кислоты, противоязвенная активность со-
ставила 4,48+0,03, что в ~2 раза выше активности МЭК и в -1,3 раз выше активности композиции МАОП+А+Э.
В отличие от результатов, полученных при определении параметров противовоспалительной активности, при которых повышение дозы композиции МЭК+А+П не приводило к повышению проявляемого эффекта, в случае с проявлением противоязвенной активности, увеличение дозы композиции с 25 мг/кг до 50 мг/кг, при назначении внутрь, приводило к улучшению эффекта с 6,55±0,02 до 7,57±0,04 на моделях острых язв, вызванных индометацином, и, с 4,48+0,09 до 5,33±0,04 на модели острых язв желудка, вызванных уксусной кислотой.
2.6 Влияние МЭК и композиции МЭК+А+П на клеточно- и иеклеточно-опосредованный иммунный ответ.
Одной из важнейших проблем современной ветеринарной науки и практики является разработка эффективных мер профилактики и лечения иммунодеф ицитных состояний у животных. Интерес исследователей и практических специалистов к проблеме иммунодефицитов у животных объясняется тем, что им сопутствуют различные патологические процессы, в том числе инфекционные заболевания, вызываемые вирусами, бактериями, грибами и простейшими.
При постановке реакции сенсибилизации динитрофторбензолом (ДНФБ) его 1%-ный раствор в ацетоне наносили на правый бок белых беспородных мышей обоего пола с массой тела 19-22 г. Через 10 сут после сенсибилизации мышей по принципу аналогов разделили на 25 групп (23 опытных и 2 контрольные при п=7). Мышам на обе стороны правого уха наносили раствор ДНФБ, при этом мышам опытных групп внутрижелудочно назначали исследуемые соединения (МАОП, Анилокаин (А), Поли-флоксацин (П), малеопимаровую кислоту (МПК), метиловый эфир малеопимаровой кислоты (Оте МПК), монометиловый эфир кетотетракарбоновой кислоты (МЭК) и их композиции в различных дозах. Животным 1-й контрольной группы (положительный контроль) внутрижелудочно вводили диклофенак в дозе 8 мг/кг, животным 2-й контрольной группы (отрицательный контроль) внутрижелудочно вводили плацебо (0,9%-ный раствор хлорида натрия). При изучении влияния изучаемых соединений на клеточно-опосредованный иммунитет сенсибилизацию 25 групп мышей осуществляли внутривенным введением сенсибилизирующей дозы эритроцитов барана (2x106 клеток), а через 10 сут субплантарно вводили разрешающую дозу эритроцитов (ЕА) барана [2x10 клеток] с одновременным внутрижелудочяым назначением тех же соединений, что и в опытах с ДНФБ.
Проведенные исследования показали на отсутствие вероятности формирования у опытных животных реакции гиперчувствительности замедленного типа к исследуемым соединениям. При этом отмечено увеличение угнетающего воздействия на развитие воспалительного отека при замене энрофлоксацина в композиции МАОП+А+Э на полифлоксацин. Предпосылками к замене МАОП в композиции МАОП+А+П на производные малеопимаровой кислоты послужил тот факт, что МПК, Оте МПК и МЭК уже при индивидуальном применении в дозах 25-50 мг/кг вызывали более выраженное угнетение воспалительного отека. Сформированные новые композиции МПК+А+П, Оте МПК+А+П и МЭК+А+П оправдали предполагаемое усиление угнетения отека с наивысшим эффектом при однократном лечебном применении композиции МЭК+А+П (1:2:0,2) в дозе 25 мг/кг. При этом угнетение отека ушей было выражено: на 10,2% сильнее по сравнению с диклофенаком (26,64+0,58% против 36,84±0,56%) и на 21,99% по сравнению с интакгным контролем (26,64+0,58% против
48,63±0,60%) в реакции формирования неклеточной гиперчувствительности при действии ДНФБ: на 24,25% эффективнее диклофенака (20,61±0,63% против 44,86±0,60%) и на 36,68% в сравнении с плацебо (20,61±0,63% против 57,29±0,67%) при формировании клеточно-опосредованной гиперчувствительности под влиянием ЕА барана в сенсибилизирующей дозе. Присутствие положительного эффекта в обеих сериях опытов указывает также на возможность одновременной стимуляции неклеточно- и кле-точно-опосредованного иммунного ответов под влиянием композиции МЭК+А+П (1:2:0,2).
Для подтверждения данных, получены при скрининге нами были проведены еще 4-е серии опытов по выявлению возможного развития реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) к композиции МЭК+А+П (1:2:0,2) на высокоинбредных мышах линий С57В/ и СБА, сенсибилизированных ЕА барана при профилактирующем (назначение в течение 5-и суг до сенсибилизации) и лечебном (назначение в течение 5-и сут после сенсибилизации) ее применении (таблица 2).
Таблица 2 - Влияние композиции МЭК+А+П (1:2:0,2) на формирование реакции гиперчувствительности замедленного типа к эритроцитам барана
Исследуемая композиция Доза, мг/кг Кол-во мышей в группе %увеличения отека лапки (профилактическое действие) %увеличения отека лапки (лечебное действие)
С51В1
МАОП+А+Э (1:2:0,2) 25 15 16,24±0,50** 13,26±0,66*
МАОП+А+П (1:2:0,2) 25 15 15,32±0,68** 12,74±0,57**
МЭК+А+П (1:2:0,2) 25 15 14,29±0,65** 11,24±0,61**
50 15 12,46±0,61** 10,80±0,53**
100 15 12,51±0,68** 10,80±0,67**
Диклофенак 8 15 16,46±0,62** 14,68±0,58**
Плацебо - 15 22,20+0,59** 18,34+0,50**
СБА
МАОП+А+Э (1:2:0,2) 25 15 13,28+0,61** 15,59±0,68**
МАОП+А+П (1:2:0,2) 25 15 12,66±0,53** 14,34±0,69**
МЭК+А+П (1:2:0,2) 25 15 11,94±0,67** 12,67±0,54**
50 15 10,76+0,58** 11,08±0,68**
100 15 11,00±0,50** 11,46±0,57**
Диклофенак 8 15 15,24±0,70* 16,29±0,68*
Плацебо - 15 19,2±0,61 21,13±0,62
Примечание: * -Р<0,05 по сравнению с диклофенаком; # -Р<0,02 по сравнению с плацебо
При сравнении данных, полученных в ходе скрининговых исследований и данных, приведенных в таблице 2, установлено эффективное подавления воспалительного отека лапок мышей линий СцВ1 и СБА как при профилактическом, так и при лечебном назначении композиции МЭК+А+П (1:2:0,2) в дозе 25 мг/кг.
Изучение возможной модуляции антителогенеза композицией МЭК+А+П (1:2:0,2) осуществляли на белых неинбредных мышах с массой тела 19-22 г. Мышей подвергали иммунизации внутрибрюшинным введением оптимальной дозы (2x10 )
эритроцитов барана. Одновременно с иммунизацией опытным животным в течение 7-и сут внутрижелудочно задавали композицию МЭК+А+П (1:2:0,2) в дозах 25 мг/кг, 50 мг/кг и 100 мг/кг, композиции сравнения: МАОП+А+Э (1:2:0,2) и МАОП+А+П (1:2:0,2) в дозах 25 мг/кг; животным контрольной группы внутрижелудочно назначали плацебо (0,9%-ный раствор натрия хлорида).
Через 7 сут мышей опытных и контрольной групп убивали цервикальным способом под эфирным наркозом, изъятые из них навески селезенки гомогенизировали в среде ИРМ11640 и использовали для определения АОК в реакции с комплиментом. Из отобранной у мышей крови выделяли сыворотку и определяли в ней уровень ге-магглютининов.
Применение композиции МЭК+А+П (1:2:0,2) в дозе 25 мг/кг приводит к достоверному увеличению образования в селезенке мышей АОК (на 1474,17 АОК больше по сравнению с контрольной группой), при этом показывая в -1,26 раз большую эффективность в сравнении с композицией МАОП+А+Э (1:2:0,2) и в -1,18 раз в сравнении с композицией МАОП+А+П (1:2:0,2) в тех же дозах. Подобная тенденция отмечена и со стороны повышения титра гемагглютининов сыворотки крови до уровня 5,76+0,18 при применении композиции МЭК+А+П (1:2:0,2) в дозе 25 мг/кг против более низкого уровня титра гемагглютининов сыворотки крови мышей, получавших композиции МАОП+А+Э (1:2:0,2) и МАОП+А+П (1:2:0,2) в дозах 25 мг/кг соответственно в -1,7 и -1,54 раз.
2.6.1 Изучение влияния МЭК и композиции МЭК+А+П на фагоцитарную активность нейтрофилов и перитонеальных макрофагов.
В современных условиях широкого разнообразия лекарственных средств, используемых при лечении и профилактике заболеваний животных, особое значение отводится рационализации фармакотерапии, подразумевающей использование лекарственных средств многонаправленного действия, в том числе композиций нескольких лекарственных веществ с синергидным и / или аддитивным эффектом в отношении друг друга.
Исследования проведены на 60-и мышах гибридах первого поколения (^1=С57ВЙ хСВА $), разделенных на 12 групп. Животным назначали исследуемые композиции МАОП+А+Э (1:2:0,2), МАОП+А+П (1:2:0,2) и МЭК+А+П (1:2:0,2) в исследуемых дозах при однократном за 24 часа до начала исследований назначении и семикратном назначении в течение 7-и сут.
Нашими исследованиями установлено, что уже через 1-е сут после однократного применения изучаемых соединений происходит заметное увеличение фагоцитарной активности макрофагов. Так, в группе животных, которым была назначена композиция МЭК+А+П (1:2:0,2) в дозе 25 мг/кг цветовой показатель активности (ЦПА) макрофагов характеризовал более выраженную степень раздражения, отраженную в увеличении процента фармазан-позигивных клеток (с отложением диформазана в цитоплазме) при постановке цитохимической реакции с нитросиним тетразолием. Цветовой показатель при этом составил 0,047+0,004, что в -3,36 раз больше при сравнении с тем же показателем в контрольной группе, а также в -1,52 и -2,24 раз больше в сравнении с показателем в группах животных, получавших композиции МАОП+А+Э [1:2:0,2] и, МАОП+А+П [1:2:0,2] в тех же дозах (таблица 3).
Таблица 3 - Динамика изменения функциональной активности перитонеальных макрофагов к эритроцитам барана
Исследуемая композиция и ее доза Число ЕА РОК% Число 100 мак| ЕАна рофагов ЦПА макрофагов
однократно семикратно однократно семикратно однократно семикратно
МАОП+А+Э, 25 мг/кг 38,70 +2,45* 53,00 ±3,43* 147,60 ±17,08* 212,20 ±17,38* 0,021 ±0,003* 0,071 ±0,003*
МАОП+А+П, 25 мг/кг 43,40 ±2,32* 59,80 ±3,19* 159,80 ±12,10* 226,00 ±18,09* 0,031 ±й,001* 0,079 ±0,003*
МЭК+А+П, 25 мг/кг 54,80 ±2,04* 74,30 ±3,2* 259,50 ±20,99* 384,60 ±15,36* 0,047 ±0,003* 0,123 ±0,001*
МЭК+А+П, 50 мг/кг 56,10 ±2,60* 71,10 ±2,18* 255,80 ±22,46* 363,30 ±12,65* 0,047 ±0,004* 0,126 ±0,002*
МЭК+А+П, 100 мг/кг 56,50 ±2,32* 72,40 ±2,32* 265,80 ±11,20* 367,70 +12,28* 0,048 ±0,001* 0,124 ±0,002*
Контроль (Плацебо) 30,50 ±1,90 31,00 ±1,33 97,00 ±6,11 99,60 ±3,44 0,014 ±0,004 0,012 ±0,002
Примечание: * -/40,05; # -Р<0,02; $-Р<0,005
Помимо увеличения фагоцитирующей активности перитонеальных макрофагов при однократном назначении композиции МЭК+А+П (1:2:0,2) внутрь в дозе 25 мг/кг, нами отмечена значительная активация Л-рецепторного аппарата, отраженная в увеличении процента ЕА-РОК в -1,8 раз по сравнению с контролем (54,80±2,04% ЕА-РОК в опыте против 30,50±1,90% ЕА-РОК в контроле), а также в увеличении количества эритроцитов барана (ЕА), прикрепленных к 100 макрофагам, в -2,67 раз по сравнению с контролем (259,50±20,99 ЕА/100 макрофагов в опыте против 97,00±6,11 ЕА/100 макрофагов в контроле). Тогда как при однократном назначении внутрь композиций МАОП+А+П (1:2:0,2) и МАОП+А+Э (1:2:0,2) в аналогичных дозах (25 мг/кг) эти показатели были значительно менее выраженными: процент ЕА-РОК был больше в сравнении с контролем в -1,42 и -1,27 раз соответственно, что на 38% и 53% соответственно меньше по сравнению с процентом ЕА-РОК в группе животных, однократно внутрь получавших композицию МЭК+А+П (1:2:0,2) в дозе 25 мг/кг. Число ЕА образующих розетки с перигонеальными макрофагами в группах мышей, получавших однократно внутрь композиции МАОП+А+П (1:2:0,2) и МАОП+А+Э (1:2:0,2) в дозах 25 мг/кг было больше при сравнении с контролем в -1,64 и -1,52 раз соответственно, но в -1,8 раз меньше при сравнении с группой мышей, получавших внутрь композицию МЭК+А+П (1:2:0,2) в той же дозе -25 мг/кг.
При сравнении фагоцитарной активности перитонеальных макрофагов к ЕА и фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови к убитым микробным телам &.аиг£К£ (штамм 209) - таблица 4 - можно отметить, что процент участвующих в фагоцитозе клеток распределен примерно в одинаковых соотношениях для изучаемых композиций, однако агрессивность нейтрофилов крови значительно выше агрессивности перитонеальных макрофагов.
Таблица 4 - Динамика изменения функциональной активности нейтрофилов периферической крови к убитым микробным клеткам &.аига« (штамм 209)
Исследуемые композиции и их дозы Фагощ актив нейтро< парная ность илов, % Кол-во фагоцитированных микробных тел Фагоцитарный индекс Фагоцитарное число
однократно семикратно однократно семикратно однократно семикратно однократно семикратно
МАОП+ А+Э, 25 мг/кг 41,70 ±1,57* 60,80 ±1,62* 176,40 ±6,65* 277,10 ±20,5* 4,23 ±0,02* 4,56 ±0,30* 1,76 ±0,07* 2,77 40,21*
МАОП+А+П, 25 мг/кг 47,80 ±1,62* 64,30 ±1,89* 208,60 +17,22* 308,60 ±19,22* 4,36 ±0,23* 4,80 ±0,28* 2,09 +0,17* 3,09 ±0,19*
МЭК+А+П, 25 мг/кг 59,00 ±3,02* 79,30 ±3,23* 318,70 ±21,46* 451,60 ±24,33* 5,40 ±0,10* 5,70 +0,30* 3,19 +0,21* 4,52 ±0,24*
МЭК+А+П, 50 мг/кг 61,30 ±3,23* 79,10 ±3,18* 334,10 ±25,39* 441,30 ±28,14* 5,44 ±0,14* 5,58 ±0,33* 3,34 ±0,25* 4,41 ±0,28*
МЭК+А+П, 100 мг/кг 61,10 ±2,18* 78,60 ±2,07* 317,90 ±24,95* 438,20 ±28,94* 5,20 ±0,37* 5,57 ±0,34* 3,18 ±0,25* 4,38 ±0,29*
Контроль (плацебо) 30,30 ±1,89 30,80 ±2,04 97,30 ±6,58 95,90 +7,95 3,22 ±0,22 3,12 ±0,23 0,97 ±0,07 0,96 ±0,08
Примечание: * -Лс0,05; # - Р<0,02; $- Р<0,005
Так, если в группе животных, получавших композицию МЭК+А+П (1:2:0,2) однократно внутрь в дозе 25 мг/кг, каждый перитонеальный макрофаг (ФИ) в среднем образовывал розетку с 4,71+0,09 ЕА, то фагоцитарный индекс нейтрофилов крови к микробным телам убитых Биаигеия (штамм 209) составлял 5,40+0,10, что на 14% больше чем у перитонеальных макрофагов.
Семикратное применение изучаемых соединений приводило к еще большему и вместе с тем стабильному повышению, как активности, так и агрессивности перитонеальных макрофагов и нейтрофилов периферической крови, но, не выходя за допустимые пределы. Так, при семикратном в течение 7-и сут назначении композиции МЭК+А+П (1:2:0,2) в дозе 25 мг/кг, розеткообразующая активность перитонеальных макрофагов и нейтрофилов увеличилась в -1,36 раз (с 54,80±2,04% ЕА-РОК до 74,30+3,23% ЕА-РОК) и -1,34 раз (с 59,00±3,02% до 79,30+3,23% ЕА-РОК) соответственно; агрессивность перитонеальных макрофагов увеличилась в -1,48 раз (с 259,50±20,99 ЕА/100 макрофагов до 384,60+15,36 ЕА/100 макрофагов), при увеличении фагоцитарного индекса на -9,3% (с 4,74+0,09 до 5,18+0,11), а агрессивности нейтрофилов на -42% (с 318,70±21,46 до 451,60±24,33 фагоцитированных убитых микробных тел Биаигеия на 100 нейтрофилов). Вместе с этим необходимо отметить, что увеличение дозы композиции МЭК+А+П (1:2:0,2) до 50 и 100 мг/кг, как при однократном, так и при 7-и кратном применении не приводило к достоверному изменению активности перитонеальных макрофагов и нейтрофилов периферической крови в сравнении с назначением композиции МЭК+А+П (1:2:0,2) в дозе 25 мг/кг.
2.7 Изучение хронической токсичности и раздражающих свойств МЭК и его композиции.
Экспериментальные исследования по изучению возможной хронической токсичности МЭК и МЭК+А+П проведены на 154-х белых половозрелых беспородных крысах обоего пола с живой массой 200-220 г. Перед исследованиями животные прошли 14-и суточную карантинизацию и были распределены на 7 групп по 21 голов в каждой. Животным первых 3-х групп ежесуточно, на протяжении 3-х месяцев, внутрь назначали МЭК в эффективной дозе 25 мг/кг, превышающей ее в -2 раза - 50 мг/кг и в 5-и кратной дозе - 125 мг/кг соответственно. Животным 4-6-й групп внутрь, по той же схеме и в тех же дозах назначали композицию МЭК+А+П, а животные 7-й группы оставались интактными (группа контроля). О возможном токсическом влиянии судили на основании гематологических и биохимических изменений крови животных опытных и контрольных групп, проводимых с интервалом в 1 мес (на 30-е, 60-е и 90-е сут исследований). Один раз в месяц по 7 голов из каждой группы подвергали эвтаназии, посредством передозировки ксилазина. Эвтаназированных животных подвергали па-тологоанатомическому вскрытию для макроскопической оценки состояния сердца, легких, печени, селезенки, почек и надпочечников. Семь клинически здоровых крыс были подвергнуты эвтаназии до начала исследований, с целью получения предварительных сведений.
Экспериментальными исследованиям при трехмесячном назначении МЭК и МЭК+А+П в дозах 25, 50 и 125 мг/кг/сут, нами не установлено достоверных отличий биохимического состава сыворотки крови, количества эритроцитов, лейкоцитов и их субпопуляций в цельной крови крыс опытных и контрольной групп, показатели которых находились в пределах физиологической нормы для данного вида животных. При патологоанатомическом вскрытии животных всех групп и на всех этапах эксперимента нами не было обнаружено макроскопических признаков патологии органов пищеварительной, дыхательной и мочевыделительной систем, также как и не было обнаружено статистических отличий в массе внутренних органов.
Большинство химических веществ в той или иной степени обладают раздражающими свойствами. Поэтому задачей наших дальнейших исследований явилось также и изучение возможного кожно-резорбтивного действия производных малеопимаровой кислоты и композиции МЭК+А+П (1:2:0,2).
Для решения поставленной задачи нами было сформировано 24 групп морских свинок (п=6) с живой массой 380-400 г, подобранных по принципу аналогов с равным количеством самцов и самок. Морским свинкам первых 12-и групп на выстриженные участки кожи в области спины, с одной из сторон от позвоночного столба наносили одно из исследуемых соединений (МПК, Оте МПК, МЭК или МЭК+А+П в соотношении 1:2:0,2) в форме мази на ланолине с концентрацией 1%, 10% и 25% один раз в сут, на протяжении 15-и сут, а с противоположной стороны от позвоночного столба наносили только ланолин с той же периодичностью.
Результаты исследований показали, что длительные накожные аппликации МПК и ее производных - Оте МПК, МЭК, а также композиции МЭК+А+П, не приводят к изменениям общего состояния опытных животных. Температура тела, частота пульса и дыхания соотносились с физиологическими параметрами для данного вида
животных. Цвет опытных участков кожи, подвергавшихся аппликациям, оставался сравнимым с контрольными участками кожи, и лишь при применении 25%-ной мази композиции МЭК+А+П у двух особей из 6-и, на 13-14-е сут исследований наблюдалась слабая гиперемия, исчезающая через 20-40 минут после нанесения, однако, на 15-е сут исследований у этих же животных изменений в ответ на нанесение мази не возникало.
2.8 Изучение влияния композиции МЭК+А+П на эмбриогенез крыс
Целью наших исследований явилось выявление возможного эмбриотоксическо-го влияния новой композиции МЭК+А+П (1:2:0,2) при длительном назначении в течение всего срока беременности, в фармакологически активной дозе 25 мг/кг, дозах близких к фармакологической - 10 и 50 мг/кг, а также в дозе превышающей фармакологически-активную в 5 раз (125 мг/кг).
Для проведения исследований нами было сформировано 6 групп самок крыс (п=10). Крысам 1-й группы ежесуточно внутрижелудочно вводили полифлоксацин в дозе 5 мг/кг; животным 2-5-й групп - композицию МЭК+А+П (1:2:0,2) в дозах 10„ 25, 50 и 125 мг/кг соответственно; животным 6-й группы (контроль) - 0,9%-ный раствор натрия хлорида. Назначение препаратов начинали с момента выявления признаков «охоты» у крыс и до 20-х сут беременности. Первым днем беременности считали мент, обнаружения сперматозоидов в слизистом смыве с влагалища крыс. По 5 крыс -из каждой группы на 5-е сут беременности подвергали эвтаназии, с целью определе- / ния количества желтых тел беременности в яичниках и количества мест имплантации?:. Оставшихся по 5 крыс в каждой из групп подвигали наблюдению вплоть до момента' родов.
В ходе исследований нами установлено, что назначение композиции МЭК+А+П (1:2:0,2) в дозах от 10 до 125 мг/кг положительно влияет на эмбриогенез при длитель-; ном (двадцатисуточном) применении, способствуя достоверному (Р<0,05) увеличению, количества желтых тел в яичниках до 17,20+0,84, что на 2,8 больше в сравнении с кон-! трольной группой и на 1,4 больше в сравнении с применением полифлоксацина в дозе*-5 мг/кг. Увеличение количества желтых тел беременности в яичниках крыс, получавших композицию МЭК+А+П (1:2:0,2) по-видимому связано с возможным регулятор-ным влиянием на гормональный статус.
Применение композиции МЭК+А+П (1:2:0,2) в дозе 25 мг/кг способствовало также увеличению мест имплантации до 14,20+0,45 (в контрольной группе -12,40±0,89; в группе крыс, получавших полифлоксацин - 12,60+0,55) и повышению многоплодности до 14,40+0,89 крысят в помете (на -3,8 голов больше, чем в контрольной группе и на -2,6 голов больше, чем в группе крыс, получавших полифлоксацин), Несмотря на достоверно большую предимплантационную гибель, отмеченную в опытных группах, получавших композицию МЭК+А+П (1:2:0,2) в дозах 25-125 мг/кг, превышающую контрольные значения на 1,4-3,55%, общая эмбриональная смертность в этих группах была меньше на 10,97-13,12% (в сравнении с контролем) и на 9,1611,31 % (в сравнении с группой крыс, получавших полифлоксацин), за счет отсутствия постимплантационной смертности.
В группе крыс, получавших МЭК+А+П (1:2:0 Д) в изучаемых дозах, нами отмечено увеличение массы плодов (на 62,8-89,6 мг больше в сравнении с контролем) в
приплоде, при массе достоверно равной с плодами в контрольной группе. Плодо-плацентарный коэффициент при этом находился в достоверно одинаковых пределах (0,20-0,22), наряду с соотношением самок и самцов -50+50, что также указывает на отсутствие эмбриотоксических свойств у композиции МЭК+А+П (1:2:0,2).
2.9 Влияние композиции МЭК+А+П на течение процессов свободноради-кального окисления.
Исследования по изучению влияния композиции МЭК+А+П на течение процессов свободнорадикального окисления проведены на 60-и 2-х месячных клинически здоровых кроликах породы «Серебристый» обоего пола, распределенных на 12 групп (п=5). Животным с 1-й по 11-ю групп ежесуточно, на протяжении 7-и сут назначали: в 1-й группе - МАОП в дозе 25мг/кг; во 2-й группе - анилокаин (А) в дозе 50 мг/кг; в 3-й группе - полифлоксацин (П) в дозе 5 мг/кг; в 4-й группе - энрофлоксацин (Э) в дозе 5 мг/кг; в 5-7-й группах - МЭК в дозах 10 мг/кг, 25 мг/кг и 50 мг/кг соответственно; в 8-й группе - композицию МАОП+А+Э (1:2:0,2) в дозе 25 мг/кг; в 9-11-й группах -композицию МЭК+А+П (1:2:0,2) в дозах 10 мг/кг, 25 мг/кг и 50 мг/кг соответственно. Животные 12-й группы служили контролем, и действию лекарственных средств не подвергались. До начала исследований, а также на 14-е и 30-е сут исследований у кроликов осуществляли забор крови и количественно определяли наличие в ней глу-татионпероксидазы, глутатионредуктазы, катал азы, витаминов А и Е, малонового диальдегида и диеновых конъюгатов.
Проведенными исследованиями установлено, что из всех испытанных соединений и композиций наибольшую степень антиоксидантной защиты проявила композиция МЭК+А+П (1:2:0,2) при назначении ее внутрь с кормом в дозе 25 мг/кг,1 раз в сут, 7 сут подряд. Антиоксидантные свойства композиции МЭК+А+П (1:2:0,2) отразились в увеличении уровня глутатионзависимых антиоксидантных ферментов. Так, на 14-е сут исследований, уровень глутатионпероксидазы в эритроцитах кроликов повысился до 18,51 ±0,29 мкмоль/мл/мин, что на 24,73% больше в сравнении с показателем в начале исследований (14,84±0,42 мкмоль/мл/мин) и на -40,12% больше в сравнении со значением этого показателя у животных контрольной группы (13,21±0,11 мкмоль/мл/мин). При этом активность глутатионредуктазы составил 2,54±0,01 мкмоль/мл/мин, что на ~40,33% больше значения этого показателя в контрольной группе (1,81±0,04 мкмоль/мл/мин) и на -13,39% выше в сравнении со значением в начале исследований (2,24±0,02 мкмоль/мл/мин). Помимо повышения уровня глутатионзависимых антиоксидантных ферментов в эритроцитарных клетках крови кроликов, нами также установлено повышение активности синергиста в реакциях обезвреживания водорода пероксида — катал азы. Активность каталазы при этом составила 37,03+0,28 ммоль Я202/л, тогда как в эритроцитах крови кроликов контрольной группы она составила 34,57±0,28 ммоль НгО?)л, что на - 6,64% ниже сравниваемого значения.
Достоверное (Р<0,05) повышение уровня токоферола и ретинола в сыворотке крови кроликов, получавших композицию МЭК+А+П (1:2:0,2) в дозе 25 мг/кг, с 1,88±0,02 мкг/мл до 2,24±0,02 мкг/мл (на -19,15% больше в сравнении с начальным значением показателя и на -23,76% больше в сравнении со значением показателя животных контрольной группы) и с 0,23±0,01 мкг/мл до 0,43+0,02 мкг/мл (на -86,96%
больше в сравнении с начальным значением показателя и на -95,46% больше в сравнении со значением показателя животных контрольной группы) соответственно, к 14-м сут исследований, нами связано с уменьшением их затрат в системе антиоксидантной защиты на фоне активации ферментативного звена и сопряженного с этим понижения уровня маркеров перекисного окисления жиров и оксидативного стресса, представленных как диеновыми конъюгатами, так и малоновым диальдегидом, образующимися в организме животных в результате дегидратации полиненасыщенных жиров активными формами кислорода. Так уровень малонового диальдегида к 14-м сут исследований понизился с 1,08±0,01 нмоль/мл до 0,74±0,02 нмоль/мл (на -31,48% меньше исходного значения показателя и значения в контрольной группе), уровень диеновых конъюгатов, к тому же сроку исследований, понизился с 1,68±0,01 нмоль/мл до 1,36+0,01 нмоль/мл (на -19,05% меньше значения начального показателя и на 20,47% меньше значения показателя в контрольной группе).
Необходимо также отметить недостаточную антиоксидантную активность рассматриваемых показателей в группах животных на протяжении 7-и сут получавших анилокаин в дозе 50 мг/кг, полифлоксацин и энрофлоксацин в дозе 5 мг/кг. Назначение по однотипной схеме МЭК в дозах 10 мг/кг, 25 мг/кг и 50 мг/кг, а также композиции МАОП+А+Э (1:2:0,2) в дозе 25 мг/кг, приводило к активации системы антиокси-дантной защиты в аналогии с применением композиции МЭК+А+П (1:2:0,2) в дозе 25 мг/кг, но значения рассматриваемых показателей при этом характеризовали на порядок меньшую активность ферментативного звена оксидантогенеза. Повышение же дозы композиции МЭК+А+П (1:2:0,2) с 25 мг/кг до 50 мг/кг улучшением качества перекисного окисления липидов, в сравнительном аспекте, не характеризовалось, но и не приводило к его ухудшению.
Подводя итог, с большой уверенностью можно отметить, что семисуточное назначение композиции МЭК+А+П (1:2:0,2) в дозе 25 мг/кг не способно индуцировать цитотоксический эффект в тканях организма животных, при этом напротив, позиционирует и координирует более качественное течение перекисного окисления липидов в органах и тканях, предотвращая процессы свободнорадикального окисления. Это, в свою очередь, дает основание предполагать о возможности применения композиции МЭК+А+П (1:2:0,2) при патологиях, характеризующихся пшоксическими явлениями, а также при интоксикациях эндо- и экзогенного характеров с явлениями пито лизиса, как результата образования свободнорадикальных оксидантов (СГ, НгОг, -ОН, Н-0-С1 и т.п.) и ДНК-адцуктов, реализующих основные механизмы мута-, канцерогенеза и преждевременного старения клеток. Учитывая то, что железосодержащий протопор-фирин катал аза в наибольших количествах содержится в цитозоле и перохсисомах ге-патоцитов (до 40% всего белка), то повышение уровня этого фермента совместно с глутатионредукгазой и глутатионпероксидазой, при назначении композиции МЭК+А+П (1:2:0,2), может являться ключевым звеном в ее механизме протекторного действия при патологиях печени, сопряженных с нарушением различных биомолекулярных клеточных структур (нуклеиновых кислот, белков и липидов) в результате активации свободнорадикального окисления.
2.10 Сравнительная лечебно-профилактическая гепатопротекторная активность МЭК и его композиции на экспериментальных моделях острых гепати-тогепатозов, вызванных действием тетрахлорметана и метанола.
Гепатопротекторные свойства соединения МЭК изучены на двух моделях острых гепатитогепатозов экспериментально воспроизведенных внутрибрюшинным вве-
дением 50%-ного масляного раствора тетрахлорметана и метанола. Эксперимент воспроизведен на 147-и белых беспородных крысах обоего пола с живой массой 220-250 г. Для проведения эксперимента крысы были распределены на 20 групп (п=7), 7 животных были использованы для определения исходных гематологических и биохимических показателей крови. Животным 1-10-й групп трехкратно (1 раз в 2-е сут) внут-рибрюшинно вводили 50%-ный масляный раствор тетрахлорметана (ССУ4) из расчета 4 мл/кг живой массы, животным 11-20 групп - 50%-ный масляный раствор метанола (С//4) в том же объеме. За 7 сут до моделирования гепатитогепатозов и в течение 7-и сут с момента первой инъекции индуктора гепатитогепатоза крысам 1-й и 11-й групп внутрь задавали соединение МАОП в эффективной дозе 25 мг/кг/сут; крысам 2-й и 12-й групп - МЭК в дозе 10 мг/кг/сут; крысам 3-й и 13-й групп -МЭК в дозе 25 мг/кг/сут; крысам 4-й и 14-й групп - МЭК в дозе 50 мг/кг/сут; крысам 5-й и 15-й групп - композицию МАОП+А+Э (1:2:0,2) в эффективной дозе 25 мг/кг/сут; крысам 6-8-й и 16-18-й групп — композицию МЭК+А+П (1:2:0,2) в дозах 10,25 и 50 мг/кг/сут; крысы 9-й и 19-й групп оставались интактными (отрицательный контроль); крысам 10-й и 20-й групп внутрь задавали препарат сравнения «Карсил» в дозе 25 мг/кг/сут. На 15-е сут исследований (через 7 сут после начала воспроизведения гепатитогепатоза) у наркотизированных животных опытных и контрольных групп производили забор крови для определения основных гематологических и биохимических параметров крови.
При применении композиции МЭК+А+П в дозе 25 мг/кг/сут, на фоне острого гепатитогепатоза, вызванного действием тетрахлорметана, активность АСТ и АЛТ сыворотки крови опытных животных была соответственно на -21,64% и -27,19% ниже, в сравнении с активностью этих же ферментов в сыворотке крови крыс, коррекцию острого гепатитогепатоза у которых осуществляли с применением препарата «Карсил» в той же дозе. На модели гепатитогепатоза, вызванного метанолом активность АЛТ и АСТ была ниже на -28,91% и -16,83% соответственно, в сравнении с показателями крови крыс группы положительного контроля. Коэффициент де Ритиса в группах экспериментальных животных, получавших композицию МЭК+А+П в дозе 25 мг/кг/сут, при этом составлял -1,2 против -1,3 в группах крыс положительного контроля, получавших карсил в той же дозе. О более выраженном гепатопротекгор-ном действии композиции МЭК+А+П в дозе 25 мг/кг/сут свидетельствовала и более позитивная динамика изменений активности щелочной фосфатазы, которая в модели острого гепатитогепатоза, вызванного тетрахлорметаном составила 117,38+1,01 Ед/л, а при остром метаноловом гепатитогепатозе - 127,41+1,12 Ед/л, тогда как при лечебно-профилактическом применении карсила в дозе 25 мг/кг/сут активность щелочной фосфатазы была соответственно на -11% и -27% выше, составив 130,44±1,70 Ед/л и 161,63±3,80 Ед/л, что в свою очередь, в -1,3-1,5 раз меньше, в сравнении с группой отрицательного контроля (плацебо).
Уровень холестерина и билирубина в сыворотке крови крыс, получавших композицию МЭК+А+П в дозе 25 мг/кг/сут, был: в -1,29 и -1,16 раз ниже в сравнении с их уровнем в сыворотке крови крыс, получавших препарат сравнения «Карсил» в той же дозе - на модели острого гепатитогепатоза, вызванного тетрахлорметаном; в -1,48 и -1,30 раз соответственно меньше в сравнении с группой положительного контроля — на модели острого гепатитогепатоза, вызванного метанолом.
Морфологические и биохимические исследования крови крыс в обеих моделях рассматриваемых острых гепатитогепатозов, также указывали на более выраженные процессы гемопоэза, глкжогенеза и белоксинтезирующую функции печени при лечеб-
но-профилактическом применении композиции МЭК+А+П в дозе 25 мг/кг/сут, в сравнении с показателями морфологических и биохимических исследований крови крыс, получавших препарат «Карсил» в той же дозе. Повышение дозы композиции МЭК+А+П с 25 мг/кг/сут до 50 мг/кг/сут не способствовало повышению гепатозащнг-ной активности, однако и не провоцировало ухудшений морфо-биохимических показателей крови задействованных в опыте крыс, так как референтные расхождения при этом были в достоверно сравнимых пределах.
2.11 Эффективность применения композиции МЭК+А+П с целью коррекции токсического гепатоза у собак, на фоне действия макроциклических лакто-нов.
Для проведения исследований нами было сформировано 6 групп клинически здоровых собак (п=5) обоего пола с живой массой 27-30 кг в возрасте 2,5-3 года. Животным всех групп подкожно инъецировали профилактические дозы макроцикличе-ского лактона - ивомек в рекомендуемой дозе 0,4 мг/кг (по ДВ) с целью профилактики арахноэнтомозов и нематодозов. Ивомек вводили двукратно с интервалом 14 сут. В течение первых 7 сут со дня назначения первой дозы ивомека, собакам внутрь 1 раз в сут до кормления назначали: в 1-й, 2-й и 3-й группах - композицию МЭК+А+П (1:2:0,2) в экспериментальных дозах 10, 25 и 50 мг/кг соответственно; в 4-й опытной группе - композицию МАОП+А+Э (1:2:0,2) в дозе 25 мг/кг; в 5-й группе - карсил в дозе 25 мг/кг, в 6-й группе (контроль) - плацебо (крахмал). До инъекции ивомека, а также через 24 часа, 14 и 30 сут после первой инъекции ивомека у животных всех групп производили отбор венозной крови с целью определения динамики изменения ее морфо-биохимических показателей.
Проведенными исследованиями установлено, что назначение композиции МЭК+А+П (1:2:0,2) в дозе 25 мг/кг внутрь 1 раз в сут, в течение 7 сут, исключало вероятность гепатотоксического действия макроциклического лактона ивомек при его профилактическом применении в дозе 0,4 мг/кг (по ДВ).
Так, в группе животных, получавших композицию МЭК+А+П (1:2:0,2) в дозе 25 мг/кг после назначения ивомека, через 14 сут хоть и отмечались сдвиги морфобиохи-мического состава крови, но, тем не менее, значения показателей крови варьировали в пределах физиологических норм, а через 30 сут после назначения ивомека приходили в соответствие показателям, отмеченным до его назначения. Кроме того, нами установлено, что назначение композиции МЭК+А+П (1:2:0,2) в дозе 50 мг/кг не приводит к достоверно лучшему фармакокоррекгирующему гепатотоксический эффект ивомека в сравнении с МЭК+А+П (1:2:0,2) в дозе 25 мг/кг.
Фармакокорректирующее действие в отношении гепатотоксического эффекта, вызванного парентеральным введением ивомека, при применении композиций МЭК+А+П (1:2:0,2) в дозе 10 мг/кг и МАОП+А+Э в дозе 25 мг/кг находилось на уровне того же эффекта, отмечаемого при применении широко используемого в ветеринарной и медицинской практике гепатопротектора карсил в дозе 25 мг/кг. Эффект этих препаратов в указанных дозах характеризовался меньшей стабильностью и недостаточностью семисуточного курса в сравнении с композицией МЭК+А+П (1:2:0,2) в дозе 25 мг/кг. Так фармакокорректирующее действие карсила в дозе 25 мг/кг через 30 сут после назначения ивомека, характеризовалось сравнительно высоким уровнем: АЛТ - 57,23±1,24 Ед/л (на 487,15% больше в сравнении с применением композиции МЭК+А+П (1:2:0,2) в дозе 25 мг/кг); АСТ - 56,51+1,49 Ед/л (на 18,34% больше в сравнении с применением композиции МЭК+А+П (1:2:0,2) в дозе 25 мг/кг); щелочной
фосфатазы - 141,82±6,74 Ед/л (на 30,32% выше в сравнении с применением композиции МЭК+А+П (1:2:0,2) в дозе 25 мг/кг); холестерина - 4,77+0,22 ммоль/л (на 69,11% выше в сравнении с применением композиции МЭК+А+П (1:2:0,2) в дозе 25 мг/кг) и билирубина - 6,б7±0,05 мкмоль/л (на 62,50% выше в сравнении с применением композиции МЭК+А+П (1:2:0,2) в дозе 25 мг/кг) на фоне более низкого уровня: гемоглобина - 130,83+3,26 г/л (на 22,51% меньше в сравнении с применением композиции МЭК+А+П (1:2:0,2) в дозе 25 мг/кг); глюкозы - 3,65+0,06 ммоль/л (на 16,31% меньше в сравнении с применением композиции МЭК+А+П (1:2:0,2) в дозе 25 мг/кг); общего белка сыворотки крови - 66,49+2,10 г/л (на 9,50% меньше в сравнении с применением композиции МЭК+А+П (1:2:0,2) в дозе 25 мг/кг) и сравнимого с отмеченным при применении композиции МЭК+А+П (1:2:0,2) в дозе 25 мг/кг уровня эритроцитов и лейкоцитов.
Со стороны фракционного состава белков сыворотки крови собак, после недельного курса фармакокоррекции гепатотоксического эффекта ивомека карсилом в дозе 25 мг/кг на 30-е сут исследований уровень альбуминов составил 47,18±0,38% (на 6,0% меньше в сравнении с применением композиции МЭК+А+П (1:2:0,2) в дозе 25 мг/кг); а-глобулинов - 9,63+0,21% (на 4,33% меньше в сравнении с применением композиции МЭК+А+П (1:2:0,2) в дозе 25 мг/кг) на фоне высокого уровня ^-глобулинов -27,19+0,24% (на 2,19% выше верхней границы физиологической нормы и на 5,13% выше в сравнении с применением композиции МЭК+А+П (1:2:0,2) в дозе 25 мг/кг) и у-глобулинов - 16,00+0,71% (на 2,0% выше верхней границы физиологической нормы и на 5,21% выше в сравнении с применением композиции МЭК+А+П (1:2:0,2) в дозе 25 мг/кг).
2.12 Применение новой композиции МЭК+А+П при лечении жирового ге-патоза молодняка крупного рогатого скота.
Для изучения терапевтической эффективности композиций МЭК+А+П и МА-ОП+А+Э при лечении жирового гепатоза молодняка крупного рогатого скота, нами было отобрано 30 голов откормочных телят (с живой массой 100-120 кг) с признаками жирового гепатоза вследствие интенсивного откорма. Отобранных животных распределили на 6 групп (п=5). Для животных всех групп было произведено индивидуальное балансирование рационов (по переваримому протеину, сахару, сахаропротеиновому соотношению, уровню клетчатки, минеральным веществам и витаминам) и назначена общая фармакотерапия, включающая: внутривенное введение 200 мл 1%-ного раствора натрия гидрокарбоната на 20%ном растворе глюкозы - 1 раз в сут в течение двух недель; внутримышечное введение препарата «Тетрамаг» - трехкратно с интервалом в 7 сут. Помимо общетерапевтического воздействия внутрь в течение двух недель назначали: животным 1-й, 2-й и 3-й групп - композицию МЭК+А+П (1:2:0,2) в дозах 10, 25 и 50 мг/кг соответственно, 1 раз в сут до кормления; животным 4-й группы -композицию МАОП+А+Э (1:2:0,2) в дозе 25 мг/кг, 1 раз в сут до кормления; животным пятой группы - препарат «Карсил» по две капсулы 3 раза в сут (суточная доза 3,0); животные 6-й группы не получали дополнительного фармакологического воздействия (отрицательный контроль).
При проведении фармакотерапии жирового гепатоза, по приведенной выше схеме, нами выявлено наиболее фармакологически активное соединение, представленное композицией МЭК+А+П (1:2:0,2). Так, уже через 14 сут применения композиции МЭК+А+П (1:2:0,2) в дозе 25 мг/кг на фоне общетерапевтических приемов отмечено заметное восстановление клинического статуса животных, проявившееся восстановле-
нием аппетита, румииации, ясностью сердечных тонов, восстановлением кровяного артериального давления до физиологической нормы с исчезновением признаков угнетенного состояния. Со стороны биохимических показателей крови у животных 2-й группы отмечено повышение уровня каротина до 0,87+0,038 мг% (на 200% больше изначального значения) и глюкозы до 2,65±0,07 ммоль/л, что характеризовало восстановление углеводного обмена веществ и косвенно указывало на восстановление течения реакций перекисного окисления липидов. Показателем стабилизации работы сердечнососудистой системы явилось не только исчезновение тахикардии и восстановление артериального давления, но и нормализация минерального состава крови (калия, натрия, кальция и фосфора), способного оказывать существенное влияние на нервную проводимость в сердце.
В свою очередь немаловажное влияние на восстановление минерального обмена веществ оказало повышение уровня буферных систем организма животных, отразившееся в повышении уровня резервной щелочности плазмы крови до нормативных 47,96±1,47 Об.% С02 (на 49,5 % больше изначального значения).
Фактом, доказывающим купирование процесса разрушения гепацитарных мембран и восстановление обмена липидов, явилось понижение уровня АЛТ до 30,88+1,73 Ед/л (на 24,12% меньше в сравнении с первоначальным значением), уровня АСТ до 84,90±1,95 Ед/л (на 20,54% меньше в сравнении с первоначальным значением) и уровня холестерина до 1,86+0,03 ммоль/л.
На улучшение белоксинтезирующей и ангиоксидантной функций печени, при применении МЭК+А+П (1:2:0,2) в дозе 25 мг/кг, указывали и изменения со стороны отдельных белковых фракций сыворотки крови, на фоне восстановления уровня общего белка до нормативных 79,4+2,4 г/л (на 18,65% меньше изначального значения) к 14-м сут исследований. Вместе с этим нами отмечено восстановление уровня у-глобулинов до 27,88+1,62% (на 36,64% меньше изначального значения) с одновременным повышением уровня альбуминов до нормативных 41,25±0,74% (на 47,90% больше изначального значения). Повышение, в пределах физиологических норм, уровня /?-глобулинов, при применении МЭК+А+П (1:2:0,2) в дозе 25 мг/кг, также указывало на улучшение транспорта липидов.
Необходимо также отметить, что указанные выше явления оставались в пределах статистической достоверности неизменными на 14-е сут опыта (через 15 сут после прекращения назначения композиции МЭК+А+П (1:2:0,2) в дозе 25 мг/кг).
Применение композиции МЭК+А+П (1:2:0,2) в меньшей дозе (10 мг/кг - первая опытная группа) проявило достоверно меньшую фармакологическую активность при лечении острой формы жирового гепатоза, сравнимую с эффектом гепатопротектора -«Карсил» и композиции МАОП+А+Э (1:2:0,2) в рекомендованных дозах. Вместе с этим двухнедельного курса Карсила при лечении жирового гепатоза у крупного рогатого скота недостаточно, так как видимое улучшение общего состояния животных и восстановление биохимических показателей крови через 14 сут с момента лечения сменяются рецидивирующей тенденцией к 30-м сут наблюдений (через 15 сут после отмены препарата).
2.13 Терапевтическая эффективность применения композиции МЭК+А+П при лечении токсической диспепсии у телят.
Определение терапевтической эффективности МЭК+А+П (1:2:0,2), при лечении токсической формы диспепсии у телят проведено в сопоставлении с терапевтической активностью фторхинолонов - энрофлоксацин и полифлоксацин, а также с эффектив-
ностью композиции МАОП+А+Э (1:2:0,2). Для проведения исследований нами было отобрано 30 телят черно-пестрой породы, обоего пола, в возрасте 3-5 сут, живой массой 39-42 кг, с признаками токсической формы диспепсии. Из отобранных телят нами были сформированы 6 опытных групп по 5 голов в каждой. С целью более точной оценки результатов гематологических и биохимических исследований крови опытных животных в динамике нами была сформирована контрольная 1руппа (п=5) клинически здоровых телят того же возраста.
Телят опытных групп подвергали лечению по следующей схеме:
- В 1-е сут лечения производили замену двух выпоек молозива на сенной настой (1:20) с добавлением натрия хлорида до концентрации 0,5-0,85% с целью уменьшения раздражения рецепторов пищеварительного тракта, улучшения секреции пищеварительных желез, а также с целью уменьшения питательного субстрата для патогенной и условно-патогенной микрофлоры желудочно-кишечного тракта больных телят;
- В качестве регидратационной терапии телятам внутривенно вводили по 500 мл раствора Рингера;
- В качестве возместительной терапии телятам опытных групп внутримышечно, вводили подогретый до 36-37 °С масляный раствор препарата «Тетрамаг» в объеме 3 мл/гол. Повторную инъекцию осуществляли на 5-е сут лечения. Клинически здоровым телятам контрольной группы (фон) плановую витаминизацию осуществляли тем же препаратом и в той же дозе, но с интервалом 10 сут;
- Животным 1-й и 2-й опытных групп 1 раз в сут, внутрь, до кормления назначали соответственно энро- и полифлоксацин в терапевтических дозах 5 мг/кг (по ДВ). Телятам 3-й опытной группы внутрь, 1 раз в сут до кормления назначали терапевтическую - 25 мг/кг дозу композиции МАОП+А+Э (1:2:0,2). Телятам 5-й и 6-й групп внутрь, 1 раз в сут до кормления назначали композицию МЭК+А+П(1:2:0,2) в испытуемых дозах 10 мг/кг, 25 мг/кг и 50 мг/кг соответственно.
При проведении терапевтических мероприятий при лечении токсической формы диспепсии у телят, улучшение общего состояния подвергнутых лечению телят, характеризующееся полным восстановлением аппетита, периодичности и количества актов дефекации, нормализацией общей температуры тела, пульса, дыхания и двигательной активности, наблюдалось: на 5-е сут - в 5-й и 6-й группах, схема лечения которых включала назначение композиции МЭК+А+П в дозах 25 мг/кг/сут и 50 мг/кг/сут; на 7-е сут - в 4-й и 5-й группах телят, схема лечения которых включала назначение композиций МАОП+А+Э в дозе 25 мг/кг/сут и МЭК+А+П в дозе 10 мг/кг/сут; на 10-12-е сут в 1-й и 2-й группах телят, схема лечения которых включала назначение энро- и поли-флоксацина в рекомендуемой дозе 5 мг/кг/сут. При этом в группе телят, получавших энрофлоксацин, на 2-е сут после начала лечения 1 теленок из 5-и пал, тем самым понизив эффективность проводимой терапии.
Клинико-гематологический синдром дегидратации организма телят на 5-е сут исследований отсутствовал во всех опытных группах, не смотря на то, что у телят 1-й и 2-й групп, в схему лечения которых были включены энро- и полифлоксацин, к этому моменту полного восстановления перистальтики кишечника не наблюдалась, и являлось лишь результатом продолжающейся оральной и парентеральной регидратационной терапии. Доказательством этого являлось и то, что при анализе биохимических показателей сыворотки крови телят указанных групп, дисбаланс электролитного состава хоть и имел положительную тенденцию, тем не менее, оставался нарушенным — уро-
вень ионов натрия был ниже физиологической нормы и фоновых показателей, а уровень ионов калия превышал верхние границы этих значений.
На 5-е сут исследований восстановление лейкограммы, до физиологически допустимой нормы отмечено только в 3-6-й группах телят, лечение которых включало применение композиций МАОП+А+Э в дозе 25 мг/кг/сут и МЭК+А+П в дозах 10 мг/кг/сут, 25 мг/кг/сут и 50 мг/кг/сут. При этом относительный моноцитоз и относительное повышение количества палочкоядерных нейтрофилов (на -3,5% в сравнении с верхней границей физиологической нормы), не могут быть рассмотрены как состояние патологии, в сопоставлении с результатами анализа биохимического состава сыворотки крови, а обосновываются нами наличием у монометилового эфира кетотетра-карбоновой кислоты (МЭК) стимулирующей клеточное звено иммунитета активности, доказанной в опытах на лабораторных животных.
Количество палочкоядерных нейтрофилов в лейкограмме телят 1-й опытной группы (с включением в состав фармакотерапии энрофлоксацина в дозе 5 мг/кг/сут) на 5-е сут исследований составляло 14,18±0,08%, приближаясь к верхней границе физиологической нормы, при этом уровень сегментоядерных лейкоцитов не только превышал норму, но и, составив 34,42±0,12%, превышал концентрацию палочкоядерных форм в -2,5 раз, что указывало не только на продолжающееся течение воспалительной реакции в организме телят, но и на наличие иммуносупрессорной активности энрофлоксацина, характерной для многих антибактериальных средств. Предположенный нами иммуносупрессорный эффект энрофлоксацина подтверждался также и состоянием лейкограммы телят 1-й группы на 10-е сут исследований, в которой концентрация палочкоядерных нейтрофилов понизилась до критичных 7,90±0,12% (при норме 913%), а концентрация сегментоядерных нейтрофилов составила 34,9710,50%, превышая концентрацию палочкоядерных форм в -4,4 раз.
Помимо клинико-гематолошческих показателей крови больных диспепсией телят 1-й и 2-й групп (схема лечения которых включала применение энро- и полифлок-сацина в дозах 5 мг/кг/сут), на 5-е сут исследований наличие воспалительного процесса подтверждалось результатами биохимических исследований сыворотки крови. Уровень белка в сыворотке крови телят 1-й и 2-й групп при этом составлял 64,00±1,09 г/л и 63,61±0,98 г/л, что превышало верхнюю границу физиологической нормы и фоновые значения на 5,8 и 8,3% соответственно. Некоторое же увеличение ^глобулинов в сыворотке крови телят 1-й и 2-й групп с изначальных 10,20+0,11% до 15,84+028 и 17,33±0,21 к 5-м сут исследований указывало на положительную тенденцию в терапии диспепсии, однако эти значения были в -1,6-1,7 раз меньше в сравнении со значением фонового уровня у-глобулинов (26,90±0,35%) при высокой концентрации альбуминов (59,11±0,53% в 1-й группе и 59,18±0Д6% - в 2-й) и относительно высоком уровне а-глобулинов (10,00±0,29% в 1 группе и 9,13+0,19% - в 2-й). Необходимо также отметить, что фракционный состав белков крови телят 2-й группы (фармакотерапия диспепсии в которой включала применение полифлоксацина в дозе 5 мг/кг/сут) нормализовался к 10-м сут исследований, тогда как в 1-й группе (с включением в состав фармакотерапии энрофлоксацина в дозе 5 мг/кг/сут), не смотря на признаки клинического выздоровления, уровень у-глобулинов оставался крайне низким, составляя^, 92±0,33% против 28,21±0,27% в сыворотке крови здоровых телят и -27,6% в сыворотке крови телят 3-6 групп.
Как на 5-е, так и на 10-е сут исследований в сыворотке крови телят 1-й группы обнаруживался низкий уровень глюкозы (3,96+0,03 ммоль/л, что в -1,3 раз меньше фо-
новых значений) при этом показатель резервной щелочности крови характеризовался истощением буферных свойств на фоне низкого уровня каратиноидов.
Наилучшие результаты при лечении диспепсии телят нами получены в 5-й опытной группе (с включением в схему лечения композиции МЭК+А+П в дозе 25 мг/кг/сут), в которой признаки выздоровления на 5-е сут исследований характеризовались не только клинической нормализацией общего состояния, но и полным восстановлением значений рассматриваемых биохимических и гематологических показателей крови, статистически не отличающихся от значений крови здоровых телят. Единственным показателем, выгодно отличающимся от группы положительного контроля, явился каротин, содержание которого в сыворотке крови телят 5-й группы на 10-е сут исследований составило 0,56±0,03 мг%, тем самым превышая значение этого показателя в сыворотке крови здоровых телят в -1,3 раз. Указанный факт также подтверждает эффективное течение процесса перекисного окисления липидов, предотвращающее расход основных антиоксидантов.
Необходимо также отметить, что включение в схему лечения токсической формы диспепсии телят композиций МАОП+А+Э в дозе 25 мг/кг/сут и МЭК+А+П в дозе 10 мг/кг/сут (3-я и 4-я опытные группы) отличалось более длительным периодом до полного клинико-гематологического выздоровления по сравнению с применением композиции МЭК+А+П в дозе 25 мг/кг/сут (5-я опытная группа).
Прирост живой массы к 14-м сут исследований в 5-й и 6-й группах телят (подвергнутых лечению с применением композиции МЭК+А+П в дозах 25 мг/кг/сут и 50 мг/кг/сут) составил 6,00+0,14 кг (средняя живая масса до начала лечения составляла 40,60+0,20 кг в 5 группе и 40,90+0,26 кг - в 6 группе, а к 14-м сут она составила соответственно 46,60+0,16 кг и 46,90+0,18 кг), тем самым составив общий ущерб от потерь живой массы во время терапии -1,0 кг/гол (средняя живая масса здоровых телят в начале исследований составляла 41,50±0,12 кг, а к 14-м сут исследований достигла 48,45+0,26 кг), тогда как в остальных группах ущерб был более значительным, составив: в 1-й опытной группе 4,18+0,09 кг; во 2-й опытной группе - 3,04+0,26 кг; в 3-й опытной группе-2,32+0,16 кг; в 4-й опытной группе-2,01+0,11 кг.
2.14 Влияния композиции МЭК на восстановление гормонального статуса коров при лечении катарально-гнойного эндометрита.
Воспаление слизистой оболочки матки у крупного рогатого скота в послеродовой период — одна из самых распространенных патологий в большинстве животноводческих хозяйств. Клинической формой заболевания болеет каждая третья корова, в высокопродуктивных стадах диагностируют заболевание у 70-80% животных. Выбраковка и убой бесплодных животных вследствие эндометрита достигают 50% заболевших животных. Данная патология наносит ощутимый экономический урон, который складывается из снижения репродуктивной способности животного, молочной продуктивности, качества молока, и повышения затрат на лечение [66,70].
Задачей наших исследований явилось научное обоснование влияния композиции МЭК+А+П (1:2:0,2), на организм коров при лечении катарально-гнойного эндометрита, с учетом возможного синергидного эффекта. Исследования проведены на коровах черно-пестрой породы с признаками катарально-гнойного послеродового эндометрита. После клинического исследования, 36 животных с признаками эндометрита объединили в 3 группы по принципу аналогов. Лечение проводили по общепринятым методам, включающим промывание матки растворами антисептических веществ, стимуляцию сократительной активности матки, возместительную терапию с применени-
ем комплекса жирорастворимых витаминов. Помимо общетерапевтических воздействий коровам 1-й и 2-й опытных групп внутриматочно назначали композицию МА-ОП +А+Э и МЭК+А+П в дозах 4 мг/кг (по ДВ) в форме свечей на желатиново-глицериновой основе, а коровам контрольной группы фармакопейные свечи фуразо-лидона.
Проведенными исследованиями было установлено, что применение композиций МЭК+А+П (1:2:0,2) и МАОП+А+Э (1:2:0,2) в дозах 4 мг/кг (по ДВ) при лечении острого катарально -гнойного эндометрита у коров способствовало более быстрому восстановлению общего состояния по сравнению с контрольной группой. Так на 2-4-е сут исследований у коров опытных групп отмечено улучшение аппетита, положение тела в пространстве становилось естественным. На 7-е сут лечения с применением композиции МЭК+А+П и на 8-9-е суг лечения с применением композиции МАОП+А+Э исчезали отечность и гиперемия слизистых оболочек, шейка матки закрывалась, истечения отсутствовали. Рога матки при ректальном исследовании были упругими с хорошо сформированной межроговой бороздой. При ректальном исследовании также отсутствовали признаки накопления экссудата в полости матки, а бактериологическими исследованиями влагалищной слизи не обнаруживалось наличие в ней патогенной микрофлоры.
После применения в составе фармакотерапии внугриматочных свечей с композицией МЭК+А+П, на 7-8-е сут, наряду с признаками клинического выздоровления морфологические и биохимические показатели крови опытных коров восстанавливались до фоновых значений. При этом количество Г-лимфоцитов в крови коров 1-ой опытной группы превышало фоновые значения в -1,4 раз при одновременном усилении фагоцитарной активности (в -1,1 раз больше в сравнении с фоновым значением и значением 2-ой опытной группы; в -1,3 раз больше в сравнении с показателями контрольной группы). Бактерицидная активность сыворотки крови (БАСК), уровень ли-зоцима и концентрация ^-лизина в крови коров 1-ой опытной группы на 7-8-е сут превышали фоновые значения в -1,2; -1,1 и -1,1 раз, тогда как во 2-ой опытной группе эти показатели были сравнимыми с фоновыми, при учете реферснтности и достоверности в пределах Р<0,05. В контрольной группе коров, лечение острого катарально-гнойного эндометрита которых включало назначение свечей фуразолидона, нами напротив отмечено понижение иммунологических показателей, не только в сравнении с фоновыми значениями, но и со значениями, установленными до начала терапевтического воздействия.
Анализируя изменения состава белков в крови коров, нами было отмечено, что у животных контрольной группы (лечение по общей схеме) к 30-м суг послеродового периода показатели соответствовали исходному уровню, тогда как у животных обеих опытных групп отмечалось повышение уровня а-, /?- и у-глобулинов. К 14-м сут исследований со стороны у-глобулинов в крови коров опытных групп отмечалось некоторое снижение концентрации по отношению к уровню альбуминов, что указывало на усиление регенеративных процессов, при которых альбумины выполняют пластическую функцию. В период с 14-х по 30-е сут исследований уровень у-глобулинов в крови опытных животных имел стабильную тенденцию к повышению, но не выходил за пределы физиологической нормы. Указанные изменения морфо-биохимического состава крови коров, подвергнутых лечению острого катарально-гнойного эндометрита с применением композиций МЭК+А+П и МАОП+А+Э в дозах 4 мг/кг (по ДВ) также указывают на улучшение регуляторной и белоксинтезирующей функций печени, свя-
занное с вероятным восстановлением гормонального гомеостаза. В динамике гормонального гомеостаза у коров нами отмечено стимулирующее влияние композиции МЭК+А+П (1:2:0,2) в дозе 4 мг/кг (по ДВ) на синтез и метаболизм кортикостероидов, что отражалось увеличением в плазме крови коров гормона кортизола на 21,41% (с 18,64+0,21 нг/мл до 22,63+0,48 нг/мл) к 14-м сут исследований и последующим выравниванием этого показателя до фоновых значений -13,27+0,68 нг/мл к 30-м сут наблюдений.
В сыворотке крови коров 1-й опытной группы нами отмечено повышение уровня прогестерона, при понижении концентрации тестостерона и эстрадиола. Так, концентрация тестостерона и эстрадиола к 14-м сут исследований снизилась с 4,13+0,07 нг/мл до 1,61 ±0,12 нг/мл и со 163,71 +2,25 пг/мл до 40,78+1,32 пг/мл соответственно, а, к 30-м сут исследований концентрация тестостерона понизилась до 0,62+0,03 нг/мл при значении уровня эстрадиола 30,54+1,91 пг/мл. При этом в крови коров 2-й опытной группы на 30-е сут исследований уровень тестостерона был в -1,8 раз выше, а уровень эстрадиола в -1,2 раз ниже в сравнении 1-й опытной группой.
Концентрация прогестерона в сыворотке крови коров, лечение острого ката-рально-гнойного эндометрита у которых включало применение композиции МЭК+А+П, увеличилась до 4,32±0,11 нг/мл (в ~2,9 раз выше значения этого показателя в сравнении с контролем) к 14-м сут исследований, а к 30-м сут — до 9,13+0,17 нг/мл, превысив, таким образом, аналогичный показатель в сыворотке крови коров 2-й опытной и контрольной групп в -1,83 и -3,42 раз соответственно.
Выделенные нами динамические изменения гормонального гомеостаза могут быть обоснованы нормализацией ароматизации тестостерона в фолликулах и интер-стициальных клетках яичников под влиянием композиции МЭК+А+П (1:2:0,2), а также восстановлением нормального цикла развития яйцеклеток приближающегося ову-ляторного периода.
При анализе изменений концентрации гормонов щитовидной железы, являющихся регуляторами важнейших функций организма, нами отмечены динамические изменения, характеризующие значительную активацию метаболизма трийодтиронина на фоне применения композиции МЭК+А+П (1:2:0,2).Так, в плазме крови коров 1-й опытной группы содержание тироксина повысилось на 72,89% (с 32,65±1,48 нМ/л до 56,45+1,64 нМ/л), у коров же контрольной группы этот показатель имел тенденцию незначительного (в сравнительном аспекте с применением композиции МЭК+А+П) роста на 16,99% к 14-м сут (с 32,65±1,43 нМ/л до 38,18+0,71 нМ/л) с последующим понижением до уровня 36,47+2,44 нМ/л к 30-м сут наблюдений. В крови коров 2-й группы уровень тироксина не имел достоверных динамических изменений в течение всего срока исследований, составив 31,73+2,30 нМ/л к 14-м сут, и 32,46+1,82 нМ/л к 30-м сут исследований. Одновременно с изменениями уровня тироксина в плазме крови коров 1-й опытной группы отмечено значительное повышение концентрации трийодтиронина до 6,93±0,14 нМ/л (на 127,21% выше исходных показателей) к 30-м сут исследований, против 3,88+0,07 нМ/л (на 27,21% выше исходного показателя) в контрольной группе.
Таким образом, изменения концентраций тироксина и трийодтиронина указывают на усиление функции щитовидной железы, за счет выработки гормонов посредством обратной связи (формирование более метаболически активного трийодтиронина из менее активной формы тироксина посредством периферического дийодирования), что, по-видимому, также связано с увеличением уровня глобулинов в плазме крови
опытных коров в целом, и, тироксинсвязывающего глобулина в частности. Указанные изменения, в свою очередь, характеризуют активизацию белоксинтезирующие процессов в печени и в клетках ретикулоэндотелиалыгой системы. Наблюдаемая физиологическая гиперфункция щитовидной железы, по-видимому, связана с увеличением молочной продуктивности коров в сравнении с периодом низкой лактации до полного выздоровления.
Обобщив полученные результаты можно сказать, что композиция МЭК+А+П активизирует стероидогенез в надпочечниках, обладает гонадотропным и тиреотроп-ным действием, за счет чего стимулирует защитно-приспособительные реакции организма на фоне нормализации обмена веществ, ускорения сроков полного выздоровления при остром катарально-гнойном эндометрите с одновременным уменьшением сервис-периода и повышением оплодотворяемости.
Применение композиции МЭК+А+П (1:2:0,2) в форме внутриматочных свечей, в составе предлагаемой схеме лечения острого послеродового катарально-гнойного эндометрита у коров наряду с более благоприятным исходом в более короткие сроки, способствует восстановлению биохимических функций организма и гормонального статуса, а также выраженной стимуляции гуморального иммунного ответа у животных.
3 Заключение
1. Разработана и модифицирована схема синтеза и озонолиза новых производных абиетиновой, хино- и малеопимаровой кислот, а также проведен дизайн и прогноз спектра биологической активности в зависимости от положения вводимых в их структуру фармакофорных групп.
2. Производные абиетиновой, аддукты левопимаровой кислоты и мономеггиловый эфир кетотегракарбоновой кислоты (МЭК) относятся к 4 классу опасности согласно ГОСТ 12.1.00-7-76, не вызывают интоксикации животных при длительном (трехмесячном введении внутрь в дозе 25 мг/кг/сут) применении, эмбриотоксического, раздражающего и сенсибилизирующего действия.
3. Установлена выраженная селективная противовоспалительная активность МЭК в дозе 25 мг/кг, в отличие от неселективного действия диклофенака. Доказана вероятность одновременного присутствия противовоспалительных, стимулирующих клеточное и гуморальное звенья иммунитета и антиульцерогенных свойств у МЭК, не противоречащих механизмам течения воспалительных реакций, протекающих в организме животных.
4. Композиция МЭК+А+П в соотношении 1:2:0,2 при назначении внутрь в дозе 25 мг/кг способствует увеличению, как активности, так и интенсивности фагоцитоза. Помимо увеличения фагоцитирующей активности перитонеальных макрофагов однократное назначение композиции МЭК+А+П способствует значительной активации Рс-рецепторного аппарата, отраженного в увеличении процента ЕА-РОК в -1,8 раз по сравнению с контролем.
5. Семисуточное назначение композиции МЭК+А+П (1:2:0,2) в дозе 25/мг/кг не вызывает цитотоксического эффекта в тканях организма животных, улучшает течение перекисного окисления липидов, предотвращая процессы свободнорадикального окисления, что является ключевым звеном в механизме протекторного действия при гепа-
тозах печени, протекающих с нарушением различных биомолекулярных клеточных структур.
6. Установлены выраженные гепатопротекторные свойства композиции МЭК+А+П (1:2:0,2) в дозе 25 мг/кг на фоне общетерапевтических воздействий, проявляющееся стимуляцией клеточного метаболизма, активацией синтеза белков и фосфолипидов в гепатоцитах и, препятствием разрушения их клеточных мембран при лечении жирового гепатоза у крыс, собак и молодняка крупного рогатого скота на откорме.
7. Результаты исследований показали высокую терапевтическую эффективность композиции МЭК+А+П (1:2:0,2) в дозе 25 мг/кг/сут, в сочетании с регидратационной и общеукрепляющей терапией, при лечении токсической формы диспепсии, достигнув полного клинико-гематологическоко выздоровления на 5-е сут при минимальном ущербе прироста живой массы в -1,0 кг/гол.
8. Композиция МЭК+А+П активизирует стероидогенез в надпочечниках, обладает гонадотропным и тиреотропным действием, за счет чего стимулирует защитно-приспособительные реакции организма на фоне нормализации обмена веществ, ускорения сроков полного выздоровления при остром катарально-гнойном эндометрите с одновременным уменьшением сервис-периода и повышением оплодотворяемости.
9. Применение композиции МЭК+А+П (1:2:0,2) в форме внутриматочных свечей в составе предлагаемой схемы лечения острого послеродового катарально-гнойного эндометрита у коров наряду с более благоприятным исходом в более короткие сроки, способствует восстановлению биохимических функций организма и гормонального статуса, а также выраженной стимуляции гуморального иммунного ответа.
4 Рекомендации производству
1. На основании проведенных исследований ветеринарной практике и животноводству рекомендуется:
- иммуномодулятор МЭК+А+П (1:2:0,2) для коррекции иммунитета у домашних и сельскохозяйственных животных внутрь в дозе 25 мг/кг однократно - с профилактической целью при угрозе возникновения иммунодефицита, и семикратно - с лечебной целью.
- композиция МЭК+А+П (1:2:0,2) при патологиях, характеризующихся пшо-ксическими явлениями, а также при интоксикациях эндо- и экзогенного характеров с явлениями цитолизиса;
- для лечения токсической формы диспепсии у телят рекомендуется применение композиции МЭК+А+П (1:2:0,2) в дозе 25 мг/кг/сут в составе традиционной регидратационной и возместительной витаминотерапии;
- композиция МЭК+А+П (1:2:0,2) в форме внутриматочных свечей на жела-тиново-глицериновой основе, содержащих 4 мг/кг активного вещества для лечения острых катарально-гнойных эндометритов 1 раз в сут до полного выздоровления.
2. На основании полученных результатов исследований разработаны и внедрены в практику 3 методические рекомендации, которые используются при чтении лекций студентам и слушателям курсов повышения квалификации на факультетах ветеринарной медицины ВУЗов РФ по фармакологии, токсикологии, акушерству,
гинекологии и биотехнике размножения, внутренним незаразным болезням, а также
по дисциплинам специализации - ветеринарная фармация.
5 Список использованной литературы
1. Аничков, C.B. Фармакотерапия язвенной болезни / C.B. Аничков, И.С. Заводская. -Л.: Медгиз, 1965.-С.30-51.
2. Антипов, В .А. Об обращении лекарственных средств для животных / В.А. Антипов, А.Н. Трошин / Биотехнология: токсикологическая, радиационная и биологическая безопасность: Мат-лы Междунар. науч.-практич. конф. - Казань: ФГБУ ФЦТРБ ВНИВИ, 2010. - С. 7-11.
3. Аргунов, МЛ. Экологические проблемы здоровья животных и пути их решения / М.Н. Аргунов, А.Г. Шахов, B.C. Бузлама // Ветеринария. -2003. - № 5. - С. 3-7.
4. Бузлама, B.C. Перспективы и пути развития современной экспериментальной и клинической ветеринарной фармакологии / B.C. Бузлама // Современнные проблемы ветеринарной фармакологии и токсикологи: мат-лы П съезда ветеринарных фармакологов и токсикологов России. - Казань: ФЦТРБ-ВНИВИ. - 2009. - С. 580-582.
5. Гаврилов, В.Б. Спектрофотометрическое определение содержания гидроперекисей липидов в плазме крови / В.Б. Гаврилов, М.И. Мишкорудная И Лабораторное дело. -1983.-№3.-С. 33-35.
6. Галин, Ф.З. Синтез и превращения диеновых аддуктов смоляных кислот / Ф.З. Галин, О.Б. Флехтер, Е.В. Третьякова / Химия и компьютерное моделирование // Бут-леровские сообщения. — 2004. — Т.5. — №2. - С. 1-21.
7. Гублер, Е.В. Курс патологической техники / Е.В. Гублер - Л.: Медгиз, 1989. - 339 с.
8. Губский, Ю.Н. Транспорт кальция и перекисное окисление липидов в микросомах печени при острой интоксикации тетрахлорметаном / Ю.Н. Губский, А.П. Заика, Е.А. Левицкий // Фармакология и токсикология. -Киев, 1990. - Т.25. - С. 90-93.
9. Дорожкин ВЛ. Определение содержания экотоксикантов в сельскохозяйственной продукции растительного происхождения, выращенных на полях после внесения осадков сточных вод с очистных сооружений / В.И. Дорожкин / Биотехнология: токсикологическая, радиационная и биологическая безопасность: мат-лы Междунар. науч.-практич. конф. -Казань: ФГБУ ФЦТРБ ВНИВИ, 2010. -С. 45-46.
Ю.Елизарова, О.Н. Определение пороговых доз промышленных ядов при пероральном введении I О.Н. Елизарова - М.: Медицина, 1971. - 194 с.
П.Еналеева, В.Ш. Оценка эффективности карсила и эссенциале при лечении больных острыми вирусными гепатитами А и В/ В.Ш. Еналеева, Я.Х. Садекова, H.A. Булатова [и др.] Н Казанский медицинский журнал. - 1990. - №4. - С. 277-279.
12.Жохова, Е.В. Фармакогнозия / Е.В. Жохова, М.Ю. Гончаров, М.Н. Повыдыш - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2012. - С. 448-505.
13.3арудий, Ф.С. Противоязвенное действие тригерпеновых соединений лупановой группы / Ф.С. Зарудий, Л.Т. Карачурина, ТА. Сапожникова, [и др.] // Поиск, разработка и внедрение новых лекарственных средств и организационных форм фармацевтической деятельности: Мат-лы тез. докл. Междунар. конф. - Томск. - 2000. - С. 152-153.
14.3емсков, А.М. Достижения в исследовании физиологии и метаболизма фагоцитов / А.М. Земсков // Микробиология, эпидемиология и иммунология. - 1985. - №12. -С.85-93.
15.Иванов, A.B. Микотоксикозы (биологические и ветеринарные аспекты) / A.B. Ива-
нов, МЛ. Тремасов, К.Х. Папуниди [и др.] - М.: Колос, 2010. - С. 48-71.
16.Иванов, A.C. Гиполшщдемические свойства гликозидов бетулина / A.C. Иванов, Т.С. Захарова, Л.Э. Одинокова [и др.] // Химико-фармацевтический журнал. -1987. -Т. 21.-№9.-С. 1091-1094.
17. Изучение эмбриотокснческого действия фармакологических веществ и влияния их на репродуктивную функцию: метод, указания -М: Мин. здравоохранения СССР, 1985.-31 с.
18. Изучению общетоксического действия фармакологических средств: методические указания. -М.: Мин. здравоохранения РФ, 1997. - 25 с.
19.Казакова, О.Б. Синтез, структура и фармакологическая активность (7й,85)-эпокси-(13Я,17Я)-триоксоланабиетиновой кислоты / О.Б. Казакова, И.Е. Смирнова, X. До Тхи Тху [и др.] И Биоорганическая химия. - 2013. - Т. 39. - № 2. - С. 230-239.
20.Карачурина, Л.Т. Биохимические механизмы гепатопротекторного действия тритер-пеноидов группы лупана и их фармакологическая активность: автореф. дис. ... канд. биол. наук: 03.00.04; 14.00.25 / Карачурина Лилия Талгатовна. -Уфа, 2004. -25 с.
21. Карачурина, Л.Т. Исследование некоторых фармакологических свойств бисге-мифталата бетулина / Карачурина Л.Т., Сапожникова Т.А., Зарудий Ф.С. [и др.] И Эксп. и клин, фармакол. - 2003. - Т. 66. - № 4. - С. 56-59.
22. Классификация и общие требования безопасности: ГОСТ 12.1.007-76 -Введ. 199701-01. -М.: Гос. комитета стандартов, 1976. - 23 с.
23.Комбикорма полнорационные для лабораторных животных. Технические условия: ГОСТ Р 50258-92 -Введ. 1994-01-01. -М.: Госстандарт России, 1994. - 8 с.
24.Кондрахин, И.П. Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики / И.П. Кондрахин, A.B. Архипов, В.И. Левченко - М.: Колос, 2004. - С. 186-187, 195196.
25.Крыжановский, С.А. Современные лекарственные препараты: практическое руководство / С.А. Крыжановский, М.Б. Вититнова - М.: Рипод Классик, 2000. - С. 317338.
26. Ле Бант, Шон Синтез бетулиновой кислоты и разработка ее липосомальной формы: автореферат дис____канд. хим. наук: 02.00.10 / Ле Бант Шон -М., 1999. -26 с.
27. Любимов, Б.И. Методические рекомендации по оценке аллергенных свойств фармакологических средств / Б.И. Любимов, М.И. Миронова - М., 1988. - С. 3-18.
28.Машковский, М.Д. Лекарственные средства: практическое пособие для врачей / М.Д. Машковский - М.: Новая волна, 2008. - 1206 с.
29. Миронов, М.И. Методические аспекты оценки гепатотоксичности лекарственных препаратов на стадии доклинического изучения / М.И. Миронов // Побочное действие туберкулостатических препаратов: сб. науч. тр. -М. -1983. — С. 34-38.
30.Набиев, Ф.Г. Современные ветеринарные лекарственные препараты /Ф.Г. Набиев, Р.Н. Ахмадеев-Москва-Краснодар: Лань, 2011. -С. 39-43,292-296.
31. Никитина, Т.И. Фитология. Лекарственные растения в научной медицине / Т.И. Никитина, Х.М. Насыров - Уфа: Башкортостан. - 1993. - 248 с.
32. Николаев, С.М. Растительные и лекарственные препараты при повреждениях гепа-тобилиарной системы / С.М. Николаев - Новосибирск: Наука. -1992. -155 с.
33.Поройков, В.В. Компьютерное предсказание биологической активности веществ: пределы возможного / В.В.Поройков // Химия в России. -1999. -№ 2, 8-12.
34.Поройков, В.В. Компьютерный прогноз биологической активности химических соединений как основа для поиска и оптимизации базовых структур новых лекарств / В.В. Поройков, Д.А Филимонов // Азотистые гетероциклы и алкалоиды. - М.: Ири-
диум-пресс. - 2001. - Т. 1. - С. 123-129.
35.Принципы надлежащей лабораторной практики: ГОСТ Р 53434-2009 -Введ. 2009-1209. -М.: Сгандарггинформ, 2009. -12 с.
36. Пучков, Н.В. Роль иммуномодулирующей терапии в общеютинической практике / Н.В. Пучков, A.B. Некрасов // Иммунология. - 2000. - № 5. - С. 34-39.
37. Санитарные правила по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник (вивариев): СНИП 1045-73, утв. 06.04.1973 -М.; Госстандарт, 2011.-15 с.
38.Саноцкий И.В., Уланова И.П. Критерии вредности в гигиене и токсикологии при оценке опасности химических соединений. - М.: Медицина, 1975. - 328 с.
39.Саноцкий, И.В. Методы определения токсичности и опасности химических веществ / И.В. Саноцкий - М.: Медицина, 1970. - 245 с.
40.Сарагиков, A.C. Коррекция гепатопротекторами структурно-метаболических нарушений в печени при их интоксикации £>-галактозамином / A.C. Саратиков, А.И. Венгеровский, И.М. Седых // Фармакология и токсикология. - 1990. - № 2. - С. 38-40.
41. Смирнов, А.М. Актуальные вопросы ветеринарно-санитарных мероприятий на территориях, загрязненных экотоксикантами // А.М. Смирнов, В .И. Дорожкин, ILH. Рубченков // Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии. - 2012. - № 2. -С. 1-2.
42.Соколов, В.Д. Общая клиническая фармакология, фармахокинетика, фармакодина-мика и побочное действие лекарственных средств / В.Д. Соколов, НЛ. Андреева, Г.А. Ноздрин [и др.] // Клиническая фармакология; Под ред. В.Д. Соколова. -М.: Колос, 2002. - С. 48-98.
43. Стрелков, Р.Б. Методика научных исследований и статистическая обработка результатов / Pi. Стрелков - М.: Наука, 1996. - 308 с.
44.Сулейманов, С.М. Лечебно-профилактическая эффективность тетраметра при эндометрите у коров / С.М. Сулейманов, И.Т. Шапошников, A.A. Щербаков [и др.] // Ветеринарная патология. - 2011. - № 1-2. - С. 72-76.
45.Токсиколого-гигиеническая оценка безопасности наноматериалов: метод, указания / МУ 1.2.2520-09. - М.: Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека; ГУ НИИ питания РАМН, 2009. — 26 с.
46.Толстикова Т.Г. Терпеноиды ряда лупана - биологическая активность и фармакологические перспективы. Полусинтетические производные лупана / Т.Г. Толстикова, И.В. Сорокина // Биоорганическая химия. - 2006. - № 3. - С. 291-307.
47. Толстикова, Т.Г. Терпеноиды ряда лупана - биологическая активность и фармакологические перспективы. Производные ряда лупана / Т.Г. Толстикова, И.В. Сорокина // Биоорганическая химия. - 2006. — № 1. - С.42-55.
48.Толстикова, Т.Г. Терпеноиды ряда лупана - биологическая активность и фармакологические перспективы. Нативные производные лупана / Т.Г. Толстикова, И.В. Сорокина, ГА. Толсгаков [и др.] // Биоорганическая химия. - 2006. - Т. 32. - № 1. -С. 4255.
49.Тринус, Ф.П. Нестероидные противовоспалительные средства / Ф.П. Тринус, Н.Ф. Мохорт, Б.М. Клебанов - Киев, 1975 - С. 204-231.
50.Уша, Б.В. Перспективность различных направлений нанобиотехнологии для ветеринарии / Б.В. Уша, A.A. Концевова, А.М. Смирнов и др. // Ветеринария. - 2012. - № 2, -С. 53-55.
51. Филина, Л.И. Технология фитопрепаратов из коры березы / Л.И. Филина, В.Ф. Се-менченко / Фармация, фармакология и подготовка кадров: мат-лы XXXIX регио-
вальной конф. -Пятигорск. -1994. - С. 78.
52.Флехтер, О.Б. Противовоспалительная и противоязвенная активность некоторых производных бетулоновой кислоты, метилбетулоната и лупенона / О.Б. Флехтер, Л.Р. Нигматуллина, JI.T. Карачурина [и др.] // Хим.-фарм. журнал. - 2000. - Т. 34. -№11.-С. 17-20.
53. Флехтер, О.Б. Синтез и противовоспалительная активность новых ацилпроизводных бетулина / О.Б. Флехтер, Н.И. Медведева, JI.T. Карачурина [и др.] // Хим.-фарм. журнал. - 2002. - Т. 36. - № 9. - С. 29-32.
54. Флехтер, О.Б. Синтез эфиров тритерпеноидов группы лупана и их гепатопротекторная активность / О.Б. Флехтер, JI.T. Карачурина, В.В. Поройков [и др.] // Биоорганическая химия. - 2000. - Т. 26. - № 3. - С. 215-223.
55.Хабриев, Р.У. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Р.У. Хабриев, Е.В. Арзамасцев, Э.А. Бабаян [и др.] - М.: ФГУ научный центр экспертизы средств медицинского применения, 2005. - 829 с.
56.Шабунин, С.В. Гепатопротективные эффекты аминотона / С.В. Шабунин, ГА. Во-строилова, БЛ. Жаркой [и др.] // Ветеринарная патология. - 2006. -№ 2. - С. 106110.
57.Шамсутдинов, А.Х. Изменение остеоиндукгивной активности костного матрикса в онтогенезе / А.Х. Шамсутдинов, Д.Д.Сумароков, М.Б. Швырков // Проблемы аллопластики. -М,-1984.-Т.2. -С.15-19.
58. Шахов, А.Г. Коррекция антиоксидантного статуса новорожденных телят для формирования более высокого колострального иммунитета / А.Г. Шахов, М.И. Рецкий, Д.В. Чусов [и др.] // Докл. Рос. академии с.-х. наук. - 2010. - № 2. - С. 42-44.
59. Anzali, S. Discriminating between drugs and nondrugs by Prediction of Activity Spectra for Substances (PASS) / S. Anzali, G. Bamickel, B. Cezanne [et al.] // J. Med. Chem. -2001, - V. 15. - № 4. - P. 2432-2437.
60.Baxradell, L.B. Artesunate a review of its pharmacology and therapeutic efficacy in the treatment of malaria / L.B. Barradell, A. Fitton // Drugs. - 1995. -V. 50. - № 4. - P. 714741.
ól.Davila, J.C. Protective effect of flavonoids on drug induced hepatotoxicity in vitro / J.C. Davila, A. Lenherr, D. Acosta // Toxicology. -1989. - V. 57. - № 3. - P.267-286.
62.Filimonov, D. Chemical similarity assessment through multilevel neighborhoods of atoms: definition and comparison with the other descriptors / D. Filimonov, V. Poroikov, Yu. Borodina [et al.] И J. Chem. Inf. Comput. Sci. -1999. - V. 39. - № 4. - P. 666-670.
63.Jeme, N.K. Plague Formation in agar by singl antibody producing cells / N.K. Jerne, E.A. Nordin // Sciense. -1965. - V. 140. - № 3565. - 405 p.
64.Khakimov, Z.Z. The correction of disorders in the microsomal oxidation system of the liver in experimental acute liver failure / Z.Z. Khakimov, M.E. Krakovskii // Patol. PhysioL Exp. Ter. -1990. - № 1. - P. 21-23.
65.Lagunin, A. PASS: prediction of activity spectra for biologically active substances / A. Lagunin, A. Stepanchikova, D. Filimonov [et al.] // Bioinformatics. - 2000. - V. 16. - № 8. -P. 747-748.
66.Le Blanc, M.M. Clinical and Subclinical endometritis in the Mare: both threats to fertility / M.M. Lc Blanc, R.C. Causey // Reproduction in Domestic Animals. - 2009. - V. 44. - P. 10-22.
67.Lin, A.J. Antimalarial activity of new dihydroartemisinin derivatives. Sugar analogues / AJ. Lin, L.Q. Li, S.L. Anderson [et al.] // Med. Chem. - 1992. - V. 35. - № 9. - P. 1639-
1642.
68.Mihara, M. Thiobarbituric acid value on fresh homogenate of rat as a parameter of lipid peroxidation in aging, CCU intoxication and vitamin E defi ciency / M. Mihara, M. Uchiyama, K, Fukuzawa // Biochem. Med. - 1980. - V. 23. - № 3. - P. 302-311.
69.Pharma expert predictive services «PASS online» [Electronic resource]: FSBI «Research Institute of biomedical chemistry named after V.N. Orekhovich» The Russian Academy of medical Sciences. -Mode of access: URL: http://pharmaexpert.ru/PASSOnline (дата обращения: 22.01.2005).
70.Zhao, Hong-xia Research of drug-resistance of Escherichia coli Isolated from Bovine with Endometritis and the Relationship between Antibiotic Resistance and Integron / H. Zhao, P. Li. // Acta veter. zootechn. sinica. - London. - 2009. - V. 1. - P. 142-144.
5 Список работ, опубликованных автором по теме диссертации
Статьи, опубликованные в изданиях, рекомендованных ВАК РФ
1. Чудов, И.В. Инновационные разработки лекарственных средств из растительного лекарственного сырья и их синтетических аналогов [Текст] / ИЛ. Чудов, А.Ф. Исмагилова, Е.Ф. Хамзина И Труды Кубанского государственного аграрного университета. -2009. -№1. -Ч. 1. -С. 276-278.
2. Чудов, ИЛ.Синтез и антибактериальная активность 31-членного макроциклическо-го диэфиродигидразида [Текст] / И.В. Чудов, Г.Ю. Ишмуратов, А.Ф. Исмагилова // Бутлеровские сообщения. -2009. -Т. 16. -№4. -С. 21-25.
3. Чудов, ИЛ. Синтез и противовоспалительная активность производных хинопима-ровой кислоты [Текст] / И.В. Чудов, А.Ф. Исмагилова, О.Б. Казакова [и др.] //Биоорганическая химия. -2010. -Т. 36. -№ 2. -С. 277-282.
4. Чудов, И.В.Синтез и фармакологическая активность амидов и продукта озонолиза малеопимаровой кислоты [Текст] /И.В. Чудов, А.Ф.Исмагилова, О.Б. Казакова О.Б. [и др.]//Биоорганическаяхимия-2010.-Т. 36.-№6. -С. 832-840.
5. Чудов, ИЛ.Новые производные малеопимаровой кислоты и их противоязвенная и противовоспалительная активность[Текст] / И.В. Чудов, А.Ф. Исмагилова, О.Б. Казакова// Труды Кубанского государственного аграрного университета.-2010. -Т.27. -№6.-С. 145-149.
6. Чудов, И.В. Применение новой композиции МЭК+А+П при лечении острого жирового гепатоза молодняка крупного рогатого скота[Текст] / И.В. Чудов, А.Ф. Исмагилова // Ветеринарный врач.-2011, -№ 1. -С. 47-51.
7. Чудов, ИЛ.Коррекция гормонального статуса коров производными тритерпенои-дов[Текст] / И.В. Чудов, А.Ф. Исмагилова //Вестник ветеринарии. -Ставрополь: Эн-тропос. -2011. -Т.56. -№1. -С. 53-59.
8. Чудов, И.В.Токсикологические и фармакологические свойства политрила [Текст] / И.В. Чудов, Б.П. Струнин, А.Ф. Исмагилова и др. //Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. -2011. -№ 5. -С. 16-23.
9. Чудов, ИЛ. Изучение кожно-раздражающеш и сенсибилизирующего действия новой композиции МЭК+А+П [Текст] / И.В. Чудов, А.Ф. Исмагилова // Актуальные проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии. -2012. -Т.7. -№1. -С. 1823.
Ю.Чудов, ИЛ. Изучение влияния пиримидина - МАОП и тритерпеноида МЭК в композиции с анилокаином и фгорхинолонами на клеточное звено иммунитета [Текст] / И.В. Чудов, А.Ф. Исмагилова // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана. -2012. -Т. 210. —С. 282-287.
H.Чудов, И.В. Коррекция токсического гепатоза у собак, вызванного воздействием макроциклических лактонов [Текст] / И.В. Чудов, А.Ф. Исмагилова // Аграрный вестник Урала.-2012. -№5. -С. 53-57.
12.Чудов, И.В. Влияние композиции монометилового эфира кетотетракарбоновой кислоты с анилокаином и полифлоксацином (МЭК+А+П) на течение процессов свобод-норадикального окисления [Текст] / И.В. Чудов, А.Ф. Исмагилова // Ветеринарный врач. -2012. -№6. -С. 37-40.
13.Чудов, И.В. Коррекция течения процессов перекисного окисления липидов полусинтетическими производными терпеноидов [Текст] / И.В. Чудов, А.Ф. Исмагилова //Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии. -Т.9. -№1. -2013. -С. 8082.
14. Чудов, И.В. Синтез, структура и фармакологическая активность (7R,8S)-3noKCH-(13Я,1Ж)-триоксоланабиетиновой кислоты [Текст] / И.В. Чудов, А.Ф. Исмагилова, О.Б. Казакова и др. //Биоорганическая химия. -2013. -Т. 39. -№ 2. -С. 230-239.
Учебные пособия и методические рекомендации производству
I. Чудов, И.В. Экспериментальная и практическая токсикология в ветеринарии: учебное пособие [Текст] / И.В. Чудов, А.Ф. Исмагилова -Уфа: Изд-во Башкирский ГАУ, 2008. -284 [3] с. -100 экз. ISBN 5-7456-0119-1
2. Чудов, И.В. Ветеринарная фармация: учебное пособие [Текст] / И.В. Чудов, А.Ф. Исмагилова -Уфа: Изд-во Башкирский ГАУ, 2008. -236 [2] с. -100 экз. ISBN 5-74560178-7.
3. Чудов И.В. Методические рекомендации производству по лечению и профилактике эндометритов у коров [Текст] / И.В. Чудов, А.Ф. Исмагилова, Ю.М. Нигматуллин // Методические рекомендации. -М.: Россельхознадзор, 2009. -26 с.
4. Чудов, И.В. Методические рекомендации производству по применению новой композиции монометилового эфира кетотетракарбоновой кислоты с анилокаином и полифлоксацином (МЭК+А+П) в форме внутриматочных свечей на желатиново-глицериновой основе для лечения острого послеродового катарально-гнойного эндометрита у крупного рогатого скота [Текст] / И.В. Чудов, А.Ф. Исмагилова // Методические рекомендации. -М.: РАСХН, 2010. -28 с.
5. Чудов, И.В. Методические рекомендации по лечению жирового гепатоза у молодняка крупного рогатого скота на откорме и фармакопрофилакгике лекарственных поражений печени у собак при применении макроциклических лактонов [Текст] / И.В. Чудов, А.Ф. Исмагилова // Методические рекомендации. -Уфа: МСХ Республики Башкортостан, -24 с.
Патенты РФ па изобретения
1. Пат. 2334745 Российская Федерация, МПК С07С53/00. Средство, представляющее собой 8-(метоксикарбонил)-4Ь,8-диметил-3-(2-метилпропаноил)-тетрадека-гидрофенантрен-1,2,10а-трикарбоновую кислоту, проявляющее противовоспалительную и противоязвенную активность, и способ его получения [Текст] / Чудов И.В., Исмагилова А.Ф., Казакова О.Б. [и др.]; заявители и патентообладатели: Учреждение РАН Институт органической химии Уфимского научного центра (RU), ФГОУ ВПО «Башкирский государственный аграрный университет» (RU). -2009144435/04; заявл. 30.11.2009; опубл. 20.08.2011, Бюл. №23. -9 е.: ил.
2. Пат. 2472787 Российская Федерация, МПК C07D323/02, C07D325/00, А61Р1/04, А61Р29/00. Средство, представляющее собой 13-изопропил-4,10-диметилдодека-гидро-13,16-эпоксиоксирено[2,3]нафто[2, l-d][l ,2]диоксицин-4-карбоновую кислоту, проявляющее противовоспалительную и противоязвенную активность [Текст] / Чу-
дов ИЛ., Исмагилова А.Ф., Казакова О.Б. [и др.]; заявители и патентообладатели: Учреждение РАН Институт органической химии Уфимского научного центра (RU), ФГБОУ ВПО «Башкирский государственный аграрный университет» (RU), ГОУ ВПО «Башкирский государственный университет» (RU). -2011135097/04; заявл. 22.08.2011; опубл. 20.01.2013, Бюл. №2. -8 е.: ил.
Публикации в других изданиях
1. Чудов, ИЛ. Изучение влияния политрила на процессы перекисного окисления ли-пидов и систему антиоксидантной защиты [Текст] / И.В. Чудов, А.Ф. Исмагилова, ВА. Антипов и др. // Новые фармакологические средства в ветеринарии: мат-лы междунар. науч.-практич. конф. -Санкт-Петербург: С-Пб ГАВМ, 2003. -С. 48-49.
2. Чудов, ИЛ. Изучение противоязвенной активности политрила [Текст] / И.В. Чудов, А.Ф. Исмагилова, В .А. Антипов и др. //Новые фармакологические средства в ветеринарии: мат-лы междунар. науч.-практич. конф. -Санкт-Петербург: С-Пб ГАВМ, 2003.-С. 49-50.
3. Чудов, ИЛЛзучение возможных путей метаболизма нового фторхинолонового препарата - «Политрил» [Текст] / ИЛ. Чудов, А.Ф. Исмагилова, Р.Н. Файрушин, Р.Ф. Халимов / Новые фармакологические средства в ветеринарии: мат-лы междунар. науч.-практич. конф.-Санкт-Пеггербург: С-Пб ГАВМ, 2006. -С. 114-118.
4. Чудов, И.В.Стггез и оценка острой токсичности производных смоляных кислот [Текст] / И.В. Чудов, О.Б. Казакова, А.Ф. Исмагилова / Органическая химия для медицины «ОРХИМЕД-2008»: мат-лы науч. конф. -Черноголовка, Московская обл., 2008.-С. 111-112.
5. Чудов, ИЛЛСопцептуальные подходы разработки новых химиотерапевтических средств фторхинолонового ряда в ветеринарии [Текст] / И.В. Чудов, А.Ф. Исмагилова, Б.П. Струнин / Современные проблемы ветеринарной фармакологии и токсикологии: мат-лы П съезда ветеринарных фармакологов и токсикологов России. -Казань, 2009.-С. 101-105.
6. Чудов, ИЛ.Фармакологические свойства новых тритерпеноидов и перспективы их применения в ветеринарии [Текст] / ИЛ. Чудов, А.Ф. Исмагилова / Научное обеспечение инновационного развития АПК / Современные и инновационные технологии в ветеринарии: мат-лы Всерос. науч.-практич. конф. -Уфа: ФГОУ ВПО Башкирский ГАУ, 2010.-С. 240-241.
7. Чудов, ИЛ.Фармакологические свойства композиции пиримидина МАОП с анило-каином и энрофлоксацином и ее эффективность при лечении эндометритов у коров [Текст] / И.В. Чудов, А.Ф. Исмагилова, Нигматуллин Ю.М. // Вестник Башкирского государственного аграрного университета, 2010. -Т.14. -№2. -С. 34-41.
8. Chudov, I.V. The synthesis and anti-inflammatory activity of quinopimaric acid derivatives [Text] / I.V. Chudov, A.F. Ismagilova, ОЛ. Kazakova [et al.] // Bioorganic Chemistry. -2010. -T. 36. -№ 2. -P. 257-262.
9. Chudov, I.V. Synthesis and pharmacological activity of amides and the ozonolysis product of maleopimaric acid [Text] / I.V. Chudov, A.F. Ismagilova, O.B. Kazakova [et al.] // Bioorganic Chemistry. -2010. -T. 36. -№ 6. -P. 762-770.
Ю.Чудов, ИЛ. Влияние некоторых тритерпеноидов и их комбинаций с анилокаином и полифлоксацином на клеточно- и неклегочно-опосредованный иммунный от-вет[Текст] / И.В. Чудов / Современные тенденции развития ветеринарной медицины и инновационные технологии в ветеринарии и животноводстве: мат-лы междунар. науч.-практич. конф.-Улан-Удэ, 2010-С. 144-148.
11.Чудов, И.В. Влияние тритерпеноидов на слизистые оболочки желудочно-кишечного
тракта [Текст] / И.В. Чудов, А.Ф. Исмагилова / Состояние, проблемы и перспективы развития АПК: мат-лы междунар. науч.-практич. конф. -Уфа: ФГОУ ВПО Башкирский ГАУ, 2010. -С. 78-79.
12. Чудов, И.В. Изучение возможного отдаленного нейротоксического действия МА-ОП, анилокаина, энрофлоксацина и их композиции [Текст] / И.В. Чудов, А.Ф. Исмагилова, Е.Ф. Хамзина / Биотехнология: токсикологическая, радиационная и биологическая безопасность России: мат-лы междунар. науч.-практич. конф. -Казань: ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ», 2010.-С. 174-176.
13.Чудов, И.В. Изучение возможного эмбриотоксического действия новой композиции МЭК с анилокаином и полифлоксацином [Текст] / И.В. Чудов, А.Ф. Исмагилова / Актуальные проблемы ветеринарной фармакологии, токсикологии и фармации: мат-лы Ш съезда ветеринарных фармакологов и токсикологов России. -Санкт-Петербург: С-Пб. ГАВМ, 2011.-С. 485-487.
14.Чудов, И.В. Действие новой композиции МЭК+А+П на кожу [Текст] / И.В. Чудов, А.Ф. Исмагилова / Актуальные проблемы современной ветеринарии: мат-лы междунар. науч.-практич. конф. -Краснодар: Краснодарский НИВИ, 2011.-С. 107-109.
15.Чудов, И.В. Острая токсичность новых полусинтетических производных хино-, ма-леопимаровой кислот и других гритерпеноидов лупанового ряда [Текст] / И.В. Чудов, А.Ф. Исмагилова, Е.Ф. Хамзина / Современные проблемы патологической анатомии, патогенеза и диагностики болезней животных: мат-лы XVII Всерос. науч.-методич. конф. по пат. анатомии жив-ых. -М.: ФГОУ ВПО «Московская ГАВМ», 2011.-С. 177-180.
16.Чудов, И.В. Активаторы пищеварения для животных [Текст] / И.В. Чудов, ФА. Ах-метов / Вклад молодежи в развитие науки Казахстана: мат-лы науч.-практич. конф. студентов, магистрантов и молодых ученых -Костанай: Косганайский гос. ун-тет им. А Байтурсынова, 2011. -С. 337-340.
17.Чудов, И.В. Селективное противовоспалительное влияние монометилового эфира кетотетракарбоновой кислоты на остеоиндуктивную активность костной ткани [Текст] / И.В. Чудов, А.Ф. Исмагилова / Актуальные вопросы ветеринарной фармакологии, токсикологии и фармации: мат-лы IV съезда ветеринарных фармакологов и токсикологов России. -М.: ФГБОУ ВПО «Московская ГАВМ», 2013. -С. 626-630.
Отпечатано в копировальном центре «АмегаПринт». г. Уфа, ул. ул. 8 марта, д.32/1, тел.: (347)246-38-99
Подписано в печать 13.02.2013 г. Печ. л. 2,2 Заказ №1024. Тираж 100 экз. Формат 60x84 '/,6 Гарнитура Times New Roman. Бумага офсетная. Печать цифровая.
Текст научной работыДиссертация по сельскому хозяйству, доктора биологических наук, Чудов, Иван Владимирович, Казань
ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ «БАШКИРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРАРНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ»
На правах рукописи
ЧУДОВ ИВАН ВЛАДИМИРОВИЧ
ФАРМАКОТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ПРОИЗВОДНЫХ СМОЛЯНЫХ КИСЛОТ, МОНОМЕТИЛОВОГО ЭФИРА КЕТОТЕТРАКАРБОНОВОЙ КИСЛОТЫ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В ЖИВОТНОВОДСТВЕ
06.02.03 - ветеринарная фармакология с токсикологией
ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора биологических наук
Научный консультант: доктор биологических наук, профессор Исмагилова А.Ф.
УФА-2014
ОГЛАВЛЕНИЕ
Стр.
ВВЕДЕНИЕ.........................................................6
1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ............................................31
1.1 Основные направления и принципы разработки новых лекарственных средств..........................................31
1.2 Современные предпосылки создания новых лекарственных средств
на основе лекарственного растительного сырья......................38
1.2.1 Общие сведения о терпенах, смоляных кислотах и их
биологической активности........................................39
1.2.1.1 Биологическая активность дитерпеноидов, выделенных из живицы кедровой и их значение при создании новых лекарственных средств ... .42
1.2.1.2 Биологическая активность тритерпеноидов, выделенных из коры березы и их значение при создании новых лекарственных средств......45
1.3 Лекарственные растения и их активные компоненты, применяемые
при коррекции патологий печени..................................50
2 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.................65
2.1 Дизайн и PASS С&Т прогноз спектра биологической активности
новых производных смоляных кислот..............................65
2.2 Изучение параметров острой токсичности производных смоляных (абиетиновой, лево-, хино- и малеопимаровой) кислот................83
2.3 Изучение противовоспалительной активности производных смоляных кислот и композиции монометилового эфира кетотетракарбоно-
вой кислоты с анилокаином и полифлоксацином.....................99
2.3.1 Селективное противовоспалительное влияние монометилового
эфира кетотетракарбоновой кислоты на остеоиндуктивную активность костной ткани крыс.......................................115
2.4 Противоязвенная активность производных смоляных кислот и композиции монометилового эфира кетотетракарбоновой кислоты с анило-каином и полифлоксацином......................................118
2.5 Влияние отдельных производных смоляных кислот и их композиций с анилокаином и полифлоксацином на клеточно- и не клеточно-опосредованный иммунный ответ...............................127
2.5.1 Изучение влияния МЭК и композиции МЭК+А+П на фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови и перитонеаль-ных макрофагов..............................................136
2.6 Изучение хронической токсичности монометилового эфира кетотетракарбоновой кислоты и композиции МЭК+А+П.....................141
2.6.1 Изучение влияния композиции монометилового эфира кетотетракарбоновой кислоты с анилокаином и полифлоксацином на эмбриогенез крыс....................................................150
2.6.2 Изучение кожно-раздражающих и резорбтивных свойств производных малеопимаровой кислоты и композиции МЭК с анилокаином и полифлоксацином......................................154
2.7 Влияние композиции монометилового эфира кетотетракарбоновой кислоты с анилокаином и полифлоксацином (МЭК+А+П) на течение процессов свободнорадикального окисления.......................156
2.8 Влияние монометилового эфира кетотетракарбоновой кислоты и компо зиции МЭК+А+П на печень......................................163
2.8.1 Сравнительная лечебно-профилактическая гепатопротекторная активность МЭК и композиции МЭК+А+П на экспериментальных моделях острых гепатитогепатозов, вызванных действием тетрахлорметана и метанола......................................................163
2.8.2 Эффективность применения композиции МЭК+А+П при коррекции токсического гепатоза собак, вызванного действием макроциклических
лактонов......................................................171
2.8.3 Терапевтическая эффективность применения композиции МЭК+А+П при лечении жирового гепатоза молодняка крупного рогатого скота ... 182
2.9 Терапевтическая эффективность применения композиции МЭК+А+П
при лечении токсической диспепсии у телят........................191
2.10 Влияния композиции МЭК+А+П на восстановление гормонального статуса коров при лечении катарально-гнойного эндометрита.........207
3 ЗАКЛЮЧЕНИЕ..................................................219
РЕКОМЕНДАЦИИ ПРОИЗВОДСТВУ...........!..................221
СПИСОК СОКРАЩЕННЫХ ТЕРМИНОВ............................222
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ......................224
СПИСОК ИЛЛЮСТРИРОВАННОГО МАТЕРИАЛА..................266
ПРИЛОЖЕНИЯ....................................................270
ПРИЛОЖЕНИЕ А Патент Российской Федерации на изобретение «Средство, представляющее собой 8-(метокси-карбонил)-4Ь,8-диметил-3-(2-метилпропаноил)-тетрадекагидрофенантрен-1,2,1 Оа-трикарбоновую кислоту, проявляющее противовоспалительную и противоязвенную активность, и
способ его получения» № RUS 2426720 от 30 ноября 2009 года............271
ПРИЛОЖЕНИЕ Б Патент Российской Федерации на изобретение: «Средство, представляющее собой 13-изопропил-4,10-диметилдодекагидро-13,16-
эпоксиоксирено[2,3] нафто[2,1-с!][1,2]диоксицин-4-карбоновую кислоту, проявляющее противовоспалительную и противоязвенную активность»
№ RUS 2472787 22 августа 2011 года.................................273
ПРИЛОЖЕНИЕ В ЯМР-спектрограмма монометилового эфира кетотетра-
карбоновой кислоты...............................................275
ПРИЛОЖЕНИЕ Г Методические рекомендации производству «Лечение
жирового гепатоза у молодняка крупного рогатого скота на откорме и фармакопрофилактика лекарственных поражений печени у собак при применении макроциклических лактонов» (протокол № 2 от 2 июля 2012 г.) .... 277 ПРИЛОЖЕНИЕ Д Методические рекомендации производству «Лечение и
профилактика эндометритов у коров» (протокол №3 от 17 марта 2009 г.).....284
ПРИЛОЖЕНИЕ Е Методические рекомендации «Применение новой композиции монометилового эфира кетотетракарбоновой кислоты с анилокаином и полифлоксацином (МЭК+А+П) в форме внутриматочных свечей на жела-тиново-глицериновой основе для лечения острого послеродового катараль-но-гнойного эндометрита у крупного рогатого скота (протокол №2 от 10 сентября 2010 г.).....................................................286
ПРИЛОЖЕНИЕ Ж Акты внедрения результатов научно-исследовательской
работы в производство.............................................292
ПРИЛОЖЕНИЕ И Дипломом XI Российской агропромышленной выставки «Золотая осень - 2009» за инновационную разработку высокоэффективного препарата в форме внутриматочных свечей для лечения эндометритов
у коров»..........................................................300
ПРИЛОЖЕНИЕ К Карты обратной связи о внедрении научных исследований, отраженных в диссертационной работе в учебный процесс ВУЗов РФ......301
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность темы исследования. Одной из основных задач, поставленных Российской сельскохозяйственной академией, является разработка и внедрение в ветеринарную практику, и животноводство средств эффективной терапии и профилактики заболеваний животных заразной и незаразной этиологии, а также повышение естественной резистентности и устойчивости к отрицательному воздействию внешней среды [90, 209, 217, 235].
Практическая медицина и ветеринария современности использует обширный арсенал лекарственных средств для лечения различных патологических состояний организма животных и человека, а также средства, регулирующие течение обменных реакций. Однако, несмотря на подтвержденную клинической практикой эффективность большинства из этих средств, приходится осознавать, что их активность очень сильно ограничена спектром действия, и в большинстве случаев, наряду с положительным терапевтическим эффектом, сопряжена с проявлением отрицательного побочного действия, порой, превосходящего по тяжести первоначальную патологию. Немаловажное значение имеет и тот факт, что отдельные группы лекарственных средств при длительном применении способны терять свою фармакологическую активность [10, 68, 235, 248, 354].
Преимуществом лекарственных средств на основе природных компонентов перед их синтетическими аналогами состоит в том, что они редко вызывают побочные реакции организма, малотоксичные, хорошо переносятся и могут быть использованы не только для лечения, но и с профилактической целью при длительных курсах. С точки зрения экологичности производства лекарственное растительное сырье остается приоритетным в связи с гораздо более быстрой возоб-новляемостыо источников и меньшим загрязнением окружающей среды, в сравнении с производством химиотерапевтических средств [11, 36, 168, 251].
Степень разработанности проблемы. Наибольший интерес из всех компонентов лекарственного растительного сырья во всем мире заслуживают эфирные масла, в том числе содержащиеся в коре многих деревьев доступные
для полусинтеза терпеновые соединения [76, 81, 92, 107, 109, 145, 229, 236, 237, 265, 319]. Перспективную основу для дизайна новых биологически активных соединений, смоляные кислоты, представляют собой еще и потому, что даже незначительные изменения их молекул приводят к существенному изменению проявляемых видов активности [51, 110, 237, 240]. Причем, модификацией химической структуры отдельных ди- и тритерпеноидов возможно добиться одновременного присутствия множества видов фармакологической активности [227, 228, 242]. Однако, в доступной литературе нами не обнаружено описания компонентов растительного лекарственного сырья в общем, а также производных абиетиновой, хино-, малеопимаровой кислот в частности, которые могли бы проявлять одновременно хорошо выраженные противовоспалительные, противоязвенные, гепатопротекторные, антиоксидантные и иммуностимулирующие свойства, крайне необходимые при лечении и профилактике широко распространенных в животноводстве и ветеринарии патологий печени, желудочно-кишечного тракта, репродуктивной системы и заболеваний, характеризующихся течением выраженной воспалительной реакции.
Цели и задачи. Целью исследований явилось изыскание новых биологически активных компонентов лекарственного растительного сырья, на основе полусинтеза смоляных кислот, обоснование их безопасности и терапевтической эффективности при коррекции реакций воспаления, патологий пищеварительной и репродуктивной систем животных. В соответствии с поставленными целями нами решались следующие задачи:
1. Провести скрининг, дизайн и прогноз спектра биологических видов активности новых производных смоляных кислот;
2. Изучить токсико-фармакологические свойства производных абиетиновой, хинопимаровой и малеопимаровой кислот: острую и хроническую токсичность; эмбриотоксические свойства; противовоспалительную и противоязвенную активность; раздражающие и сенсибилизирующие свойства; влияние на минеральный состав и органический матрикс костной ткани при остеоиндукции;
3. Изучить влияние монометилового эфира кетотетракарбоновой кислоты и ее композиций на клеточный и гуморальный иммунитет;
4. Изучить влияние монометилового эфира кетотетракарбоновой кислоты и ее композиции с анилокаином и полифлоксацином («Политрил») на течение процессов свободнорадикального окисления;
5. Изучить гепатопротекторные свойства монометилового эфира кетотетракарбоновой кислоты и ее композиции с анилокаином и полифлоксацином при различных формах гепатозов крыс, собак и молодняка крупного рогатого скота;
6. Изучить терапевтическую эффективность применения монометилового эфира кетотетракарбоновой кислоты и ее композиции с анилокаином и полифлоксацином при лечении токсической диспепсии телят;
7. Изучить терапевтическую эффективность монометилового эфира кетотетракарбоновой кислоты и ее композиции с анилокаином и полифлоксацином при лечении острого катарально-гнойного эндометрита у коров и их влияние на гормональный статус.
Научная новизна. Проведен сравнительный анализ и скрининг возможностей изменения набора биологических видов активностей у новых производных смоляных кислот посредством модификации их химических структур.
Впервые изучены токсико-фармакологические свойства новых производных абиетиновой, хино- и малеопимаровой кислот, монометилового эфира кетотетракарбоновой кислоты индивидуально, а также в композиции с анилокаином и полифлоксацином: параметры острой и хронической токсичности; эмбриоток-сические свойства; противовоспалительные и противоязвенные свойства; раздражающие и сенсибилизирующие свойства; влияние на минеральный состав и органический матрикс костной ткани при остеоиндукции.
Впервые изучены и установлены иммуностимулирующие, антиоксидант-ные и гепатозащитные свойства монометилового эфира кетотетракарбоновой кислоты в композиции с анилокаином и полифлоксацином, а также возможность их применения при профилактике и лечении различных форм гепатозов у лабораторных, домашних и сельскохозяйственных животных.
Впервые установлена высокая эффективность применения монометилового эфира кетотетракарбоновой кислоты в композиции с анилокаином и полифлок-сацином при лечении токсической диспепсии у телят и гнойно-катарального эндометрита у коров. Определены дозы и схемы их применения для повышения продуктивного здоровья животных.
Новизна прикладных разработок подтверждена двумя патентами Российской Федерации на изобретения: «Средство, представляющее собой 8-(метокси-карбонил)-4Ь,8-диметил-3-(2-метилпропаноил)-тетрадекагидрофенантрен-1,2,10а-трикарбоновую кислоту, проявляющее противовоспалительную и противоязвенную активность, и способ его получения»№ RUS 2426720 от 30 ноября 2009 года; «Средство, представляющее собой 13-изопропил-4,10-диметилдодекагидро-13,16-эпоксиоксирено[2,3] нафто[2,1-d] [ 1,2]диоксицин-4-карбоновую кислоту, проявляющее противовоспалительную и противоязвенную активность» № RUS 2472787 22 августа 2011 года.
Теоретическая и практическая значимость. Результаты проведенных исследований позволили предложить новый иммуномодулятор МЭК и его композицию для повышения общей резистентности организма животных, лечения диспепсии телят, профилактики и лечения гепатозов у лабораторных, домашних и сельскохозяйственных животных, а также для лечения катарально-гнойного эндометрита у коров. В результате проведенных исследований разработаны и утверждены в установленном порядке:
1. Методические рекомендации производству «Лечение и профилактика эндометритов у коров» (утверждены заместителем руководителя Федеральной службы по ветеринарному и фитосанитарному надзору «Россельхознадзор» Власовым H.A., протокол №3 от 17 марта 2009 г.).
2. Методические рекомендации «Применение новой композиции монометилового эфира кетотетракарбоновой кислоты с анилокаином и полифлоксаци-ном (МЭК+А+П) в форме внутриматочных свечей на желатиново-глицериновой основе для лечения острого послеродового катарально-гнойного эндометрита у крупного рогатого скота (рассмотрены и одобрены секцией «Патология, фарма-
кология и терапия» отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (протокол №2 от 10 сентября 2010 г.).
3. Методические рекомендации производству «Лечение жирового гепатоза у молодняка крупного рогатого скота на откорме и фармакопрофилактика лекарственных поражений печени у собак при применении макроциклических лактонов» (рассмотрены и одобрены научно техническим советом при Министерстве сельского хозяйства Республики Башкортостан (протокол № 2 от 2 июля 2012 г.).
Материалы диссертационной работы существенно дополняют сведения о фармакологической активности компонентов лекарственного растительного сырья терпеноидной структуры, используются в учебном процессе на кафедре морфологии, патологии, фармации и незаразных болезней ФГБОУ ВПО «Башкирский государственный аграрный университет»; в ФГБОУ ВПО «Уральская государственная академия ветеринарной медицины»; ФГБОУ ВПО «Иркутский государственный аграрный университет»; ФГБОУ ВПО «Оренбургский государственный аграрный университет»; ФГБОУ ВПО «Тюменская государственная сельскохозяйственная академия» и ФГБОУ ВПО «Воронежский государственный аграрный университет».
По материалам исследований автор награжден серебряной медалью и дипломом XI Российской агропромышленной выставки «Золотая осень - 2009» за «Инновационную разработку высокоэффективного препарата «МА-ОП+Анилокаин+Энрофлоксацин» в форме внутриматочных свечей для лечения эндометритов у коров».
Методология и методы исследований.
Работа выполнена на кафедре морфологии, патологии, фармации и незаразных болезней ФГБОУ ВПО «Башкирский государственный аграрный университет» в период с 2002 по 2013 гг. в соответствии с планом научно-исследовательских работ университета (№№ государственной регистрации 01200950324, 01201058602, 01201352807). Научно-производственные исследования проведены в условиях питомника собак и в сельскохозяйственных пред-
приятиях Республики Башкортостан. Отдельные Фрагменты работы были выполнены с участием д-ра био�
-
Чудов, Иван Владимирович
-
доктора биологических наук
-
Казань, 2014
-
ВАК 06.02.03
- Криопротекторные свойства полиолов и их производных при замораживании тромбоцитов
- Результативность осеменения коров и телок при использовании усовершенствованных сред и сексированного семени
- Структурная локализация и регуляция биосинтеза предшественников хлорофилла
- Фармакология и применение препаратов железа в ветеринарии и животноводстве
- Повышение эффективности флотации апатитсодержащих руд на основе использования алкилдикарбоновых кислот и их монопроизводных
