Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Результативность осеменения коров и телок при использовании усовершенствованных сред и сексированного семени
ВАК РФ 06.02.07, Разведение, селекция и генетика сельскохозяйственных животных
Автореферат диссертации по теме "Результативность осеменения коров и телок при использовании усовершенствованных сред и сексированного семени"
10-6
1784 _
На правах рукописи
ДУНИН МИХАИЛ ИВАНОВИЧ
ш*—
РЕЗУЛЬТАТИВНОСТЬ ОСЕМЕНЕНИЯ КОРОВ И ТЕЛОК ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ УСОВЕРШЕНСТВОВАННЫХ СРЕД И СЕКСИРОВАННОГО СЕМЕНИ
06.02.07. - Разведение, селекция и генетика сельскохозяйственных животных
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук
п. Лесные Поляны Московской области 2010 г.
Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском институте племенного дела
Научный руководитель:
доктор биологических наук, профессор Ерохин Анатолий Сергеевич Официальные оппоненты:
доктор биологических наук, профессор Кононов Валентин Петрович доктор биологических наук, Баранов Александр Васильевич
Ведущее учреждение: Российская академия менеджмента в
животноводстве
Защита диссертации состоится 29 октября в 11часов на заседании диссертационного совета Д.220.017.01 при Всероссийском научно-исследовательском институте племенного дела по адресу: 141212,Московская область, Пушкинский район, п.Лесные Поляны, ВНИИплем, факс: 8-(495) -515- 95- 57.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВНИИплем. Автореферат разослан 28 сентября 2010 года
Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук, профессор
Ерохин А.С.
БИБЛИОТЕКА
1__2010
--—-1 !
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность работы. В связи с широкомасштабным использованием для искусственного осеменения крупного рогатого скота криоконсервированной спермы, необходимо дальнейшее совершенствование технологии её глубокого замораживания. В технологии криоконсервации спермы быков имеется целый ряд проблем, решение которых позволило бы улучшить результативность осеменения животных.
В частности, при глубоком замораживании семени быков в процессе технологической обработки погибает более половины половых клеток.
Кроме того, оплодотворяемость самок при использовании криоконсервированной спермы все еще остается не достаточно высокой, а в последние годы отмечается снижение результативности искусственного осеменения коров в высокопродуктивных стадах во многих странах мира.
Поэтому требуются дальнейшие углубленные исследования в области совершенствования синтетических разбавителей, предназначенных для глубокого замораживания спермы быков, с целью улучшения сохранности биологической полноценности сперматозоидов в процессе их технологической обработки. При этом значительный интерес представляет поиск новых, более эффективных криопротекторов и других биологически активных веществ, способных увеличить выживаемость сперматозоидов в процессе криоконсервации и их фертильность.
Не менее важное научное значение имеет задача целенаправленного регулирования соотношения полов потомства у крупного рогатого скота.
В последние годы американскими исследователями разработана технология разделений сперматозоидов животных по полу с помощью высокоскоростной проточной цитометрии и во многих странах проходит производственная проверка эффективности данного метода при искусственном осеменении коров и телок.
В этой связи необходимы исследования биологической полноценности криоконсервированной сексированной спермы быков и эффективности ее использования для искусственного осеменения коров и телок и в нашей стране.
Цель и задачи исследований. Целью данной работы является изучение результативности искусственного осеменения коров и телок спермой быков, замороженной в усовершенствованных синтетических разбавителях, а также выяснение эффективности использования разделенной по полу спермы.
Для достижения этой цели в диссертации были поставлены следующие задачи:
- изучить криозащитное влияние на сперму быков сукцината хитозана;
- выяснить защитное влияние различных эфиров глицерина при глубоком замораживании семени быков;
- проанализировать результативность осеменения коров спермой, замороженной в усовершенствованной трис-фруктозо-лимоннокислой среде в сравнении с лактозо-глицерино-желточной средой;
- исследовать криопротективное влияние на сперму быков бычьего и человеческого сывороточного альбумина;
- изучить биологические и микробиологические показатели сексированной спермы быков, полученной из разных зарубежных фирм;
- выяснить эффективность использования разделенной по полу спермы быков для искусственного осеменения коров и телок.
Научная новизна исследований. Изучено криозащитное влияние на сперму быков сукцината хитозана. Выяснено влияние моноэтилового и монометилового эфиров глицерина на устойчивость семени быков к глубокому замораживанию.
Проанализировано протективное действие бычьего и человеческого сывороточного альбумина при криоконсервации спермы быков.
Проведены сравнительные испытания результативности осеменения коров спермой, замороженной в усовершенствованной трис-фруктозо-лимоннокислой и лактозо-глицерино-желточной среде.
Исследованы биологические и микробиологические показатели сексированной спермы быков, полученной из разных зарубежных фирм.
Изучены показатели подвижности и живучести оттаянной сексированной спермы быков с помощью автоматической системы
анализа спермы - «Sperm Vision» и определенны её некоторые биохимические показатели.
Исследована результативность искусственного осеменения коров и телок криоконсервированной разделенной по полу спермой.
Практическая значимость. Подтверждено, что применение усовершенствованной трис-фруктозо-лимоннокисло-желточной среды для замораживания спермы быков способствует повышению живучести и оплодотворяющей способности сперматозоидов быков в сравнении с лактозо-глицерино-желточной средой.
Установлено, что при осеменении телок разделенной по полу спермой, возможно получать удовлетворительные для практики результаты оплодотворяемости самок. В потомстве телок, осемененных сексированной спермой, значительно повышен процент самок, в сравнении с использованием обычной спермы.
Использование сексированной спермы для искусственного осеменения коров приводит к значительному снижению оплодотворяемости, в сравнении с применением обычной криоконсервированной спермы, и является экономически нецелесообразным.
Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на:
- Ученых Советах ВНИИплем, 2009-2010 г.г.;
- Научно-производственной конференции на ВВЦ, 2010 г.;
- Научной конференции Российского Университета Дружбы Народов, 2010 г.;
- Расширенной межотдельской конференции ВНИИплем, 2010 г.;
- 14-й Европейской конференции по размножению сельскохозяйственных животных, г. Эгер, Венгрия, 2010 г.
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 6 научных работ, в том числе 2 в рекомендуемых ВАК журналах.
Основные положения, выносимые на защиту:
- Добавление сукцината хитозана в состав замораживающей среды для спермы быков повышает живучесть оттаянных сперматозоидов, но не увеличивает их фертильность.
- Осеменение коров спермой, замороженной с низкой концентацией монометилового эфира, не снижает результативности осеменения коров по сравнению с использованием глицерина.
Осеменение коров спермой, замороженной в усовершенствованной трис-фруктозо-лимоннокислой среде повышает оплодотворяемость в сравнении с применением лактозо-глицерино-желточной среды.
- Использование сексированной спермы для осеменения телок, позволяет получать приемлемую для практики оплодотворяемость и увеличивает получение в потомстве особей женского пола до 90 %.
Объем работы. Диссертация изложена на 120 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, методики исследований, результатов исследований, выводов и практических предложений. Диссертация включает 21 таблицу. Список литературы содержит -232 источника, в том числе - 162 на иностранном языке.
2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Экспериментальные исследования выполнены в отделе биологии воспроизведения сельскохозяйственных животных ВНИИплем и ряде хозяйств Московской и Омской областей. Все эксперименты проводились согласно прилагаемой схемы исследований (рис.1).
Влияние различных концентраций водорастворимой формы хитозана, бычьего и человеческого сывороточного альбумина, а также монометилового и моноэтилового эфиров глицерина на криоустойчивость спермы быков определяли по подвижности и живучести заморожено оттаянных сперматозоидов вне организма и по результатам искусственного осеменения коров. Результативность искусственного осеменения коров спермой, замороженной в усовершенствованной среде, сравнивали с оплодотворяемостью, полученной от спермы, замороженной в ЛГЖ среде. Для замораживания спермы быков использовали эякуляты с подвижностью более 80% и концентрацией не менее 1 млрд / мл. Замораживали сперму в виде гранул объемом 0,2 мл или в пайетах объемом 0,25 мл. Оттаивали сперму в 3% растворе цитрата натрия или водяном оттаивателе при 38 С. Коров осеменяли двухкратно в течение эструса. Результативность осеменения учитывали по данным ректального исследования и отелам.
Рис.1 Общая схема исследований
Содержание АТФ в сперматозоидах анализировали с помощью люминиметра ЕМ1ПТЕ-100 ЗА по методу Угаровой (1991).
В экспериментах по изучению результативности искусственного осеменения коров и телок разделенным по полу семенем использовали сперму голштинской породы, полученную из фирмы «ABS Global Inc.» (США) и «Alta Genetics» ( Канада). Сперма предварительно подвергалась процессу разделения с помощью высокоскоростной проточной цитометрии для получения фракции, содержащей 87-92% сперматозоидов с Х- хромосомой. После разделения сперматозоиды подвергали процессу глубокого замораживания во французских соломинках объемом 0,25 мл. Оттаивали соломинки в водяной бане при 38 °С в течение 30 секунд. Осеменяли телок и коров сексированным семенем однократно в течение эструса. При этом сперму вводили внутриматочно с помощью обычных инструментов для искусственного осеменения.
Подвижность оттаянных сперматозоидов анализировали глазомерно с помощью микроскопа и с использованием автоматического оборудования для анализа качества спермы « Sperm Vision» ( Германия). Состояние акросом изучали с помощью фазово-контрастной микроскопии, а уровень микробной контаминации сексированной спермы определяли с помощью стандартных микробиологических методик. Концентрацию глутатионредуктазы в сперме быков определяли по окислению NADPH, а глутатионпероксидазы - с использованием гидроперекиси третбутила в качестве субстрата.
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Изучение криозащитного влияния на сперму быков сукцината хитозана
3.1.1. Анализ криозащитного влияния сукцината хитозана при глубоком замораживании семени быков
С целью повышения защитных свойств синтетических разбавителей для замораживания спермы животных изучается влияние различных биологически активных веществ
В последние годы определенный интерес у исследователей вызывает изучение биологического влияния хитозана в животноводстве и ветеринарии (Фомичев Ю.П., 2004). Хитозан представляет собой N-деацитилированную форму хитина, который является структурным элементом наружного скелета ракообразных.
Хитозан обладает антибактериальными, антиоксидантными и сорбиционными свойствами.
В задачу наших исследований входило изучение влияния сукцината хитозана на подвижность и оплодотворяющую способность спермы быков, замороженной в усовершенствованной трис-фруктозо-лимоннокислой среде.
В первом эксперименте мы изучали влияние различных дозировок хитозана на устойчивость спермы быков к замораживанию.
Результаты изучения влияния различных дозировок сукцината хитозана на подвижность и живучесть заморожено-оттаянных сперматозоидов быков представлены в таблице 1.
Из данных таблицы 1 видно, что сукцинат хитозана в концентрации 1 мг/мл, оказал определенное защитное влияние как на подвижность сперматозоидов сразу после оттаивания, так и на их живучесть при 37° С.
Таблица 1.
Влияние хитозана на подвижность и живучесть заморожено-оттаянных сперматозоидов быков (п=7)
Содержание хитозана в среде мг/мл Подвижность спе рматозоидов, в % Абсолютный показатель выживаемости сперматозоидов при 37°С, усл. ед.
До замораживания После оттаивания
Контроль (без хитозана) 78 ±5,6 43 ±1,8 136,5 ±8,1
3,0 76 ± 4,4 44 ± 2,7 141,2 ±6,9
2,0 76 ± 2,9 44 ±3,1 138,5 ±7,7
1,0 78 ± 4,9 48 ± 2,4* 156,8 ±9,1*
0,5 78 ±3,6 42 ± 2,9 144,3 ± 8,8
0,25 77 ±3,8 41 ±3,4 140,4 ±5,9
0,12 78 ± 4,9 41 ±2,2 127,8 ±4,9
0,06 77 ±6,1 41 ± 1,6 125,6 ±8,8
* - Р < 0,05
Так, подвижность сперматозоидов в группе с 1 мг/мл хитозана сразу после оттаивания и абсолютный показатель их выживаемости при 37° С были выше, чем в контрольной группе, соответственно на 11,6% и 14,8% (Р<0,05).
Более высокие и низкие дозировки препарата оказали меньший защитный эффект на повышение подвижности и живучести оттаянных сперматозоидов.
3.1.2. Результативность искусственного осеменения коров спермой, замороженной с сукцинатом хитозана
В следующем эксперименте мы решили выяснить действие оптимальной дозировки сукцината хитозана в составе замораживающей среды (1мг/мл) на результативность осеменения коров криоконсервированной спермой (таблица 2).
Таблица 2
Влияние хитозана на результативность осеменения коров криоконсервированной спермой
Группа животных Осеменено коров Выбыло из опыта Стельных через 3 месяца
голов %
Опытная 83 3 36 45,0
Контрольная (без хитозана) 79 4 35 46,6
Как видно из данных таблицы 2, введение хитозана в состав среды в дозе 1 мг/мл, не оказало положительного влияния на результативность осеменения коров.
Таким образом, проведенные исследования показали, что несмотря на положительное влияние изученного препарата на повышение подвижности и живучести оттаянных сперматозоидов быков, не было отмечено его положительного влияния на оплодотворяемость коров.
Необходимы дальнейшие исследования с целью поиска более эффективных биологически активных веществ, способных повысить фертильность криоконсервированной спермы быков.
3.2. Выяснение защитного влияния различных эфиров
глицерина при замораживании семени быков 3.2.1. Влияние моноэтилового эфира на подвижность и живучесть оттаянных сперматозоидов
Как известно, при замораживании семени быков в качестве основного криопротектора применяется глицерин.
Однако, наряду с положительным защитным эффектом, глицерин может проявлять и отрицательное влияние на
биологическую полноценность сперматозоидов при криоконсервации (Варнавский А.Н., 1970; Slavic Т., 1987).
Поэтому необходим дальнейший поиск более эффективных криопротекторов по сравнению с глицерином.
В задачу наших исследований входило выяснение защитного влияния некоторых эфиров глицерина при замораживании спермы быков в усовершенствованной трис-фруктозо-лимоннокислой среде.
В первом опыте изучали криозащитное влияние при замораживании спермы быков различных дозировок моноэтилового эфира.
Результаты изучения криозащитного влияния моноэтилового эфира показали, что более высокая подвижность сперматозоидов сразу после оттаивания наблюдалась в группах с 1 и 2% данного препарата. Однако, подвижность сперматозоидов во всех группах, при использовании этого эфира, была достоверно ниже, чем в группах с глицерином. Более того, данный препарат во всех дозировках приводил к значительному снижению живучести оттаянных сперматозоидов, что свидетельствует о низкой криопротективной эффективности моноэтилового эфира глицерина на сперматозоиды быков.
3.2.2. Изучение криозащитного влияния на сперму быков монометилового эфира глицерина
В следующем эксперименте мы изучали криозащитное влияние другого эфира глицерина - монометилового эфира, в сравнении с различными дозировками глицерина. Полученные результаты этого опыта представлены в таблице 3.
Как видно из данных таблицы 3, монометиловый эфир глицерина в концентрациях 1-2% оказал заметный защитный эффект на подвижность и абсолютный показатель живучести оттаянных сперматозоидов быков в сравнении с оптимальной концентрацией глицерина в среде (6%).
При этом абсолютный показатель живучести оттаянных сперматозоидов в этих группах был выше, чем в группе с 6% глицерина на 25 и 21%, соответственно.
Таблица 3
Влияние монометилового эфира глицерина на криоустойчивость спермы
быков
Препарат и его концентрация, в% п Подвижность сперматозоидов в % Абсолютный показатель живучести при 37°С, усл. ед.
До замораживания После оттаивания
Монометиловый эфир глицерина
1 5 80 ± 4,5 45 ±2.1 201 ± 12,1
2 5 80 ± 5,2 46 ± 1,8 194 ±10,3
3 5 80 ±3,6 45 ± 1,5 155 ±6,6
4 5 80 ±5,0 41 ±2,3 140 ±7,6
5 5 80 ± 4,4 41 ±3,0 100 ±5,1
6 5 80 ±3,1 40 ± 1,4 83 ±3,6
7 5 80 ±3,7 36± 1,8 66 ±2,7
8 5 80 ± 2,9 32 ± 1,2 51 ±3,4
Глицерин
1 5 80 ±3,7 41 ± 2,9 96 ±4,0
2 5 80 ± 5,1 40 ±2,5 104 ±3,3
3 5 80 ± 4,4 42 ±3,1 135 ±6,1
4 5 80 ± 3,3 41 ±2,1 144 ±5,8
5 5 80 ±3,0 41 ± 3,3 153 ±4,7
6 5 80 ±2,8 44 ±1,5 161 ±9,1
7 5 80 ±5,1 39 ±1,7 137 ±7,0
8 5 80 ±3,7 35 ±1,6 108 ±5,4
Для выяснения вопроса о влиянии монометилового эфира глицерина на биологическую полноценность
криоконсервированной спермы быков нами были проведены опыты по искусственному осеменению коров спермой, замороженной в усовершенствованной трис-фруктозо-лимоннокислой среде с добавлением в нее 1% изучаемого препарата. Контрольную группу коров осеменяли спермой, замороженной в аналогичной среде, но содержащей в качестве криопротектора 6% глицерина.
Результаты этих экспериментов суммированы в таблице 4.
Таблица 4
Результативность осеменения коров спермой, замороженной с монометиловым эфиром глицерина
Группа животных Осеменено коров Выбыло из опыта Стельных через 2 месяца после осеменения
голов %
Опытная 35 - 17 48,5
Контрольная 38 1 18 48,6
Результаты опытов свидетельствуют, что использование монометилового эфира глицерина в концентрации 1% позволило получить такую же стельность у коров, как и при использовании 6% глицерина. Это свидетельствует о высоких криозащитных свойствах изучаемого эфира глицерина. Возможно, использование более высоких дозировок данного препарата позволит получить лучшую оплодотворяемость животных по сравнению с использованием глицерина.
Исследования в данном направлении необходимо продолжить в дальнейшем.
3.3. Выяснение результативности искусственного осеменения коров спермой, замороженной в усовершенствованной трис-фруктозо-лимоннокислой среде в сравнении с лактозо-глицерино-желточной средой
Ранее было показано, что применение усовершенствованной трис-фруктозо-лимоннокислой среды с 20 % желтка для замораживания спермы быков, способствовало повышению оплодотворяемости коров по сравнению с использованием ЛГЖ-среды.
В этой связи, в задачу наших исследований входило дальнейшее изучение эффективности использования усовершенствованной в отделе биологии воспроизведения животных ВНИИплем трис-фруктозо-лимоннокислой среды для замораживания семени быков, при её хранении в виде готового концентрированного (1:4) раствора в сравнении с применением лактозо-глицерино-желточной среды.
В первом эксперименте мы выясняли влияние замораживания спермы быков в усовершенствованной трис-фруктозо-лимоннокислой среде с 20% желтка и в лактозо (11,5%)-глицерино
(5%)-желточной (20%) среде на подвижность и живучесть заморожено-оттаянных сперматозоидов, а также содержание в них АТФ.
Подвижность сперматозоидов замороженных в трис-фруктозо-лимоннокислой среде через 5; 60; 120 и 180 минут п&сле оттаивания была выше, чем в лактозо-глицерино-желточной среде, соответственно, на 7,3%; 26,6%; 28% и 47%, а концентрация АТФ -на 7,5%; 21,3%; 18,9% и 31,2% (Р<0,05). Следовательно, трис-фруктозо-лимоннокислая среда обладает более высокими защитными свойствами при замораживании спермы быков по сравнению с лактозо-глицерино-желточной средой.
Затем нами были проведены сравнительные эксперименты по искусственному осеменению коров спермой, замороженной в этих двух средах (таблица 5).
Таблица 5
Результативность осеменения коров спермой, замороженной в различных
средах
Синтетическая среда Осеменено коров Выбыло из опыта Стельных че рез 3 месяца
голов %
трис-фруктозо-лимоннокислая 226 9 106 . -48,8* •
лактозо-глицерино-желточная 228 7 90 40,7
* Р<0,05
Полученные результаты показали, что при искусственном осеменении коров спермой, замороженной в усовершенствованной среде, их оплодотворяемость повысилась на 8,1% (Р<0,05) по сравнению с использованием лактозо-глицерино-желточной среды.
На основании наших исследований можно заключить о перспективности использования для замораживания семени быков этой синтетической среды, приготовленной и расфасованной в производственных условиях.
3.4. Изучение криопротективного влияния на сперму быков бычьего и человеческого сывороточного альбумина
Известно, что для повышения биологической полноценности спермы разных видов животных, сохраняемой в охлажденном состоянии, в состав синтетических сред вводят бычий
сывороточный альбумин (Kreider J.C., е.а., 1985; Upreti G. е.а., 1995; Ерохин A.C. и др., 2007).
В связи с тем, что мы не обнаружили в доступной нам литературе сведений о применении бычьего или человеческого сывороточного альбумина для улучшения биологической полноценности сперматозоидов быков при глубоком замораживании, в задачу наших исследований входило выяснение защитной эффективности данных препаратов при криоконсервации семени этого вида животных.
В первом опыте мы анализировали защитный эффект при замораживании спермы быков различных дозировок бычьего сывороточного альбумина.
Полученные результаты показали, что все изученные дозировки бычьего сывороточного альбумина (0,01-0,6%) не оказали положительного эффекта на биологические показатели криоконсервированной спермы быков.
Затем мы проанализировали криозащитное влияние на сперматозоиды быков человеческого сывороточного альбумина, но и данный препарат не оказал положительного влияния на подвижность и живучесть оттаянных сперматозоидов быков.
3.5. Изучение эффективности использования разделенной по полу спермы для искусственного осеменения крупного рогатого скота
3.5.1. Определение биологических и микробиологических показателей сексированной спермы быков, полученной из
разных фирм
Как известно, в последние годы в практике скотоводства применяется разделенная по полу сперма быков-производителей. При этом возможно получать 85-92% потомков желаемого пола. Метод разделения спермы животных по полу с помощью высокоскоростной проточной цитометрии основан на различном содержании ДНК в сперматозоидах с Х- и Y- половой хромосомой. Во время цитометрического разделения сперматозоидов по полу они подвергаются воздействию ряда неблагоприятных факторов: окраска красителем, высокая степень разбавления семени, воздействие лазерного излучения и определенного давления, электромагнитное влияние, центрифугирование.
В этой связи мы решили изучить некоторые биологические и микробиологические показатели спермы быков, подвергнутых разделению по полу и дальнейшему глубокому замораживанию, полученной от фирмы «ABS Global» (США).
Результаты наших лабораторных исследований сексированной спермы фирмы «ABS Global» (США) представлены в таблице 6.
Таблица 6
Биологические показатели оттаянной сексированной спермы быков, полученной из фирмы «ABS Global», США
Бык и номер Концентрация, млн/мл Подвижность спермиев Спермиев с интактной акросомой,% Микробная загрязнен-
серии семени После оттаивания Через 3 часа После оттаивания Через 3 часа ность, микр. тел в дозе
Рефлектор 107330 2,1 40 30 80 70 230 (не пат.)
107333 2,0 40 35 90 80 стерильно
Мисчиф 108070 2,1 40 30 90 70 стерильно
Манго
108023 2.2 43 35 85 75 стерильно
Виндбрейкер 108069 2,2 40 35 90 80 10 (не пат.)
108076 108024 2,0 2,0 40 45 30 30 80 80 70 75 стерильно стерильно
Маунтайнер 108171 108164 2,1 2,0 40 45 30 30 80 85 75 70 стерильно стерильно
108111 2,0 40 30 90 80 стерильно
Как видно из таблицы 6, подвижность сексированных сперматозоидов сразу после оттаивания у всех быков достигала 4045%, то есть находилась на том же уровне, что и у обычной не разделенной криоконсервированной спермы. Через 3 часа после инкубации половых клеток при 30°С, их подвижность оставалась также на достаточно высоком уровне и составляла 30-35%.
Микробиологический анализ оттаянных образцов спермы подтвердил их стерильность в 8 сериях из 10. И только в одной серии (107330) у быка Рефлектора выявили наличие 230 не патогенных микробных тел в дозе, при норме не более 25 микробных тел. Данная серия была выбракована и утилизирована
по микробиологическим показателям. К сексированной сперме быков предъявляются более строгие санитарные требования в связи с пониженной концентрацией половых клеток в дозе для осеменения, а также вследствие внутриматочного введения семени.
Изучение концентрации сперматозоидов показало, что во всех сериях содержалось более 2 млн. половых клеток, что соответствует нормативам, предъявляемым к сексированной криоконсервированной сперме быков. Согласно этим нормам, в дозе должно быть не меньше 2 млн. сперматозоидов.
Таким образом, проведенные нами исследования показали, что практически все серии исследованной сексированной спермы соответствовали предъявляемым к ней требованиям.
3.5.2. Анализ подвижности и живучести сперматозоидов быков с помощью автоматической системы контроля качества спермы
«Sperm Vision»
В связи с тем, что в последние годы для более объективной оценки качества спермы животных стали широко применяться автоматические компьютерные программы и специальное оборудование, выпускаемые различными зарубежными фирмами, в задачу наших исследований входило изучение подвижности и живучести заморожено-оттаянных сперматозоидов с помощью автоматического анализатора качества спермы и программы «Sperm Vision», фирмы «Минитюб», Германия.
Для этого нами были проведены специальные эксперименты, в которых изучалась подвижность сексированных сперматозоидов через каждый час после их оттаивания и инкубации при 37°С до их полной гибели, с помощью этого автоматического оборудования.
При определении подвижности сперматозоидов с помощью автоматического анализатора было установлено, что сразу после оттаивания процент сперматозоидов с прямолинейной подвижностью в группе сексированной спермы у обоих быков колебался от 42 до 62%, а в группе обычной спермы - от 41 до 61%. Причем, в группе сексированной спермы, через 5 часов после оттаивания не было отмечено подвижных сперматозоидов, в то время как в группе обычной спермы подвижность во всех трех сериях составляла от 5 до 8%.
Это свидетельствует о более продолжительной живучести оттаянных сперматозоидов, которые не подвергались процессу
разделения по полу с помощью высокоскоростной проточной цитометрии.
3.5.3. Изучение уровня АТФ и концентрации антиокислительных ферментов в сексированных сперматозоидах быков
В связи с изучением возможного влияния процесса разделения сперматозоидов быков по полу на их биологическую полноценность, мы решили выяснить активность антиокислительных ферментов глутатионпероксидазы и глутатионредуктазы, а также уровень АТФ в сперматозоидах быков, замороженных по. обычной технологии и в группе, подвергнутой процессу высокоскоростной проточной цитометрии.
В экспериментах использовали криоконсервированную сперму от трех быков, которая была заморожена по обычной технологии и с использованием технологии сексирования.
Анализ изучения концентрации АТФ в оттаянных образцах обычного и сексированного семени представлен в таблице 7.
Таблица 7
Динамика содержания АТФ в оттаянных сперматозоидах быков
Время инкубации оттаянной спермы при 37°С, мин Несексированная сперма Сексированная сперма
п Подвижность спермиев, в % Концентрация АТФ, нмоль/108 клеток Подвижность спермиев, в % Концентрация АТФ, нмоль/108 клеток
5 6 45 ±3,1 7,9 ± 0,4* 44 ± 1,7 7,7 ± 0,4*
60 6 36 ± 1,3 6,8 ± 0,5* 31 ±2,4 6,0 ± 0,5*
120 6 28 ± 1,8 5,6 ±0,3** 20 ± 1,5 4,7 ± 0,3*
180 6 23 ± 0,9 3,9 ±0,3** 17.±1,2 3,0 ±0,2**
*-Р<0,05; **-Р<0,01
Как видно из таблицы 7, подвижность оттаянных сексированных сперматозоидов, инкубируемых при 37°С, снижалась более быстрыми темпами по сравнению с несексированными образцами. Например, через 60, 120 и 180 минут после оттаивания, подвижность сперматозоидов в сравнении с 5 минутами после оттаивания, в этих группах снизилась, соответственно, на 29,6%; 54,5% и 61,4% в сравнении с 20%; 37,8% и 48,9% в образцах несексированного семени.
Также результаты исследований показали и более заметное снижение уровня АТФ в оттаянных образцах сексированного •семени. Так, концентрация АТФ в оттаянных сперматозоидах данной группы быков снизилась через 60, 120 и 180 минут после оттаивания в сравнении с первоначальным показателем, соответственно, на 22,1%; 39,0% и 61% против 14,0%; 29,1% и 50,7% в группах несексированного семени.
Изучение активности антиоксидантных ферментов в оттаянных образцах семени быков показал, что активность обоих изучаемых ферментов в инкубационной среде после оттаивания спермы, практически не изменялась в изучаемые периоды времени как в сексированных, так и несексированных образцах.
Это свидетельствует о том, что уровень криогенных изменений проницаемости плазматических мембран в сравниваемых группах сперматозоидов находился на одном уровне и дальнейшей утечки внутриклеточных антиокислительных ферментов в инкубационную среду не наблюдалось.
На основании проведенных исследований можно заключить, что пониженная живучесть заморожено-оттаянных сексированных сперматозоидов быков может быть обусловлена более быстрым снижением внутриклеточной концентрации АТФ в сравнении с несексированными половыми клетками.
3.5.4. Результативность искусственного осеменения коров и телок сексированным семенем
Практическое применение замороженного разделенного по полу семени быков, началось в ряде зарубежных стран с 2000 года.
При этом в различных странах получены не однозначные результаты по оплодотворяемости самок и соотношению полов в потомстве (Schenk J.L. е.а., 1999; Bodmer М. е.а., 2004; Anderssen М., 2006; De Jarnette J.M. е.а., 2009).
В этой связи в задачу наших исследований входило изучение результативности искусственного осеменения телок и коров сексированной спермой в различных хозяйствах.
Результативность искусственного осеменения телок сексированной спермой в хозяйствах Московской области представлена в таблице 8.
Как видно из данных таблицы 8, результативность осеменения телок сексированным семенем составила от 25,6% до 52,7%.
Самый низкий результат был получен в ЗАО «Непецино». В двух других хозяйствах получена нормальная для сексированного семени оплодотворяемость животных - 45,3% и 52,7%.
Таблица 8
Эффективность осеменения телок сексированной спермой
Хозяйство и группа животных Осеменено Выбыло из Стельных через 3 месяца
телок опыта голов %
ЗАО «Непецино»
Опытная 82 1 21 25,6
Контрольная 33 - 22 66,6
С ПК «Золотая Нива»
Опытная 75 - 34 45,3
Контрольная 52 1 37 72,5
ЗАО «Зеленоградский»
Опытная 56 1 29 52,7
Контрольная 44 1 31 70,4
В контрольных группах, где телок осеменяли обычным семенем, содержащем в дозе примерно в 10 раз больше сперматозоидов, оплодотворяемость была выше. Разница в оплодотворяемости телок сексированным семенем в разных хозяйствах может быть обусловлена квалификацией техников-осеменаторов и другими факторами.
Эти результаты свидетельствуют о возможности получения вполне приемлемой оплодотворяемости телок при использовании сексированного семени.
Изучение соотношения полов в потомстве телок, осемененных обычной и сексированной спермой показало, что в опытной группе получено 90,6% самок по сравнению с 46,1% в контрольной группе.
Мы также проверили результативность однократного искусственного осеменения коров сексированной спермой в сравнении с обычным семенем.
При этом оказалось, что результативность осеменения коров сексированным семенем была очень низкой и составила только 18,7% по сравнению с 47,6% в контрольной группе. Эти данные свидетельствуют, что более эффективным является использование сексированного семени для осеменения тёлок.
Значительные различия в оплодотворяемости от сексированного семени у коров и тёлок могут быть следствием ряда
причин: более растянутыми сроками овуляции и наличием различных гинекологических осложнений у коров, скрытыми •эндометритами, метаболическими нарушениями в организме и рядом других причин.
ВЫВОДЫ
1. Установлено, что введение сукцината хитозана в состав замораживающей среды для спермы быка в дозе 1 мг/мл, способствовало повышению подвижности и живучести заморожено-оттаянных сперматозоидов, но не оказало положительного влияния на результативность осеменения коров.
2. Изучение влияния монометилового эфира глицерина показало, что его введение в состав замораживающей среды в концентрации 1-2% привело к повышению живучести оттаянных сперматозоидов на 25 и 21%, соответственно, по сравнению с использованием 6% глицерина.
3. Показано, что при осеменения коров спермой, замороженной с 1% монометилового эфира, оплодотворяемость животных была практически одинаковой с группой, где использовали глицерин в концентрации 6%.
4. Анализ результативности осеменения коров спермой, замороженной в усовершенствованной трис-фруктозо-лимоннокисло-желточной среде показал, что оплодотворяемость животных в этой группе была выше на 8,1% по сравнению с использованием ЛГЖ среды.
5. Введение в состав замораживающей среды для спермы быков различных дозировок бычьего и человеческого сывороточного альбумина, не оказало положительного влияния на подвижность и живучесть оттаянных сперматозоидов.
6. Установлено, что в образцах заморожено-оттаянной разделенной по полу спермы быков, сохраняется высокая подвижность и живучесть половых клеток.
7. Выяснено, что подвижность оттаянных сексированных сперматозоидов и содержание в них АТФ снижается более быстрыми темпами по сравнению с половыми клетками не подвергавшимися процессу разделения по полу с помощью высокоскоростной проточной цитометрии.
8. Изучение эффективности искусственного осеменения телок сексированной спермой показало, что оплодотворяемость животных при этом в разных хозяйствах колебалась от 25,6% до 52,7%.
9. В группе телок, осемененных сексированным семейем, получено в потомстве 90,6% самок в сравнении с 46,1% самок в контрольной группе.
10. Осеменение коров сексированным семенем привело к снижению их оплодотворяемости до 18,7% в сравнении с 47,6% при осеменении обычным криоконсервированным семенем.
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
1. Рекомендуем племпредприятиям использовать для замораживания спермы быков вместо лактозо-глидерино-желточной среды усовершенствованную трис-фруктозо-лимоннокислую среду следующего состава: вода дистиллированная - 100 мл; трис-(оксиметил)-аминометан -2,75 г; фруктоза - 0,8 г; лимонная кислота - 1,4 г; глицерин - 6 мл; желток куриного яйца - 20 мл; полиген - 30 мг.
2. Предлагаем животноводческим хозяйствам использовать сексированную сперму быков преимущественно для искусственного осеменения телок при строгом соблюдении зооветеринарных требований, предъявляемых к использованию данного вида семени.
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Дунин М.И. Качество разделенной по полу спермы быков. /Дунин М.И.// Животноводство России,- 2009- №6.- с.40-41.
2. Дунин М.И. Использование разделенного по полу семени в практике животноводства. /Ерохин А.С., Дунин М.И.// Сельскохозяйственная биология.- 2009.- №6.- с. 3-10.
3. Дунин М.И. Методы регуляции пола у животных. /Ерохин А.С., Дунин М.И.// - ВНИИплем-2009,- 64 с.
4. Дунин М.И. Изучение подвижности и живучести разделенных по полу сперматозоидов быков голштинской породы. /Дунин М.И.// Селекция, кормление, содержание сельскохозяйственных животных и технология производства продуктов животноводства.-ВНИИплем,-2009.-Вып. 22,- с. 13-16.
5. Dunin M.I. Effect of chitosan on quality and fertility of frozen bull semen. /Dunin M.I., Erokhin A.S.// Reproduction in Domestic Animals.- 2010.-v. 45.-Suppl. 3.- p. 85 - Abstr. 90.
6. Dunin M.I. Protective effect of monomethyl ester of glycerol under deep freezing of bull semen. /Erokhin A.S., Dunin M.I// Reproduction in Domestic Animals.-2010.-v.45.-Suppl. 3.-
p. 85 - Abstr. 92.
Типография ВНИИплем Заказ № 7_Объём 1.0 п.л._тираж 60 экз.
ï ^ " S 0
2009062718
2009062718
Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Дунин, Михаил Иванович
ВВЕДЕНИЕ.
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1.1. Влияние различных факторов на устойчивость семени животных к замораживанию.
1.2. Методы улучшения биологической полноценности спермы быков, подвергнутой глубокому замораживанию.
1.3. Приемы искусственного регулирования соотношения полов в потомстве животных.
1.4. Разделение сперматозоидов животных по полу с помощью высокоскоростной проточной цитометрии.
2. МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЙ.
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.
3.1. Изучение криозащитного влияния на сперму быков сукцината хитозана.
3.1.1. Анализ криозащитного влияния сукцината хитозана при глубоком замораживании семени быков.
3.1.2. Результативность искусственного осеменения коров спермой, замороженной с сукцинатом хитозана.
3.2. Выяснение защитного влияния различных эфиров глицерина при замораживании семени быков.
3.2.1. Влияние моноэтилового эфира на подвижность и живучесть оттаянных сперматозоидов.
3.2.2. Изучение криозащитного влияния на сперму быков монометилового эфира глицерина.
3.2.3. Результативность искусственного осеменения коров спермой, замороженной с монометиловым эфиром глицерина.
3.3. Выяснение результативности искусственного осеменения коров спермой, замороженной в усовершенствованной трис-фруктозо-лимоннокислой среде в сравнении с лактозо-глицерино-желточной средой.
3.4. Изучение криопротективного влияния на сперму быков бычьего и человеческого сывороточного альбумина.
3.5. Изучение эффективности использования разделенной по полу спермы для искусственного осеменения крупного рогатого скота.
3.5.1. Определение биологических и микробиологических показателей сексированной спермы быков, полученной из разных фирм.
3.5.2. Анализ подвижности и живучести сперматозоидов быков с помощью автоматической системы контроля качества спермы «Sperm Vision».
3.5.3. Изучение уровня АТФ и концентрации антиокислительных ферментов в сексированных сперматозоидах быков.
3.5.4. Результативность искусственного осеменения коров и телок сексированным семенем.
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
ВЫВОДЫ.
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.
Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Результативность осеменения коров и телок при использовании усовершенствованных сред и сексированного семени"
Актуальность работы. В связи с широкомасштабным использованием для искусственного осеменения крупного рогатого скота криоконсервированной спермы, необходимо дальнейшее совершенствование технологии её глубокого замораживания. В технологии криоконсервации спермы быков имеется целый ряд проблем, решение которых позволило бы улучшить результативность осеменения животных.
В частности, при глубоком замораживании семени быков в процессе технологической обработки погибает более половины половых клеток.
Кроме того, оплодотворяемость самок при использовании криоконсервированной спермы все еще остается не достаточно высокой, а в последние годы отмечается снижение результативности искусственного осеменения коров в высокопродуктивных стадах во многих странах мира.
Поэтому требуются дальнейшие углубленные исследования в области совершенствования синтетических разбавителей, предназначенных для глубокого замораживания спермы быков, с целью улучшения сохранности биологической полноценности сперматозоидов в процессе их технологической обработки. При этом значительный интерес представляет поиск новых, более эффективных криопротекторов и других биологически активных веществ, способных увеличить выживаемость сперматозоидов в процессе криоконсервации и их фертильность.
Не менее важное научное значение имеет задача целенаправленного регулирования соотношения полов потомства у крупного рогатого скота.
Как известно, во многих отраслях животноводства, продуктивность особей разного пола значительно отличается. Например, для молочного скотоводства было бы выгоднее, чтобы в потомстве у коров рождалось больше телочек. Эта проблема особенно актуальна для нынешнего состояния в молочном скотоводстве, так как в связи с интенсификацией данной отрасли и снижением продуктивного долголетия коров, отмечается недостаточное получение в хозяйствах телочек, необходимое для расширенного воспроизводства стада.
И наоборот, получение большего количества потомков мужского пола могло бы повысить рентабельность мясного скотоводства.
Кроме того, использование спермы быков, содержащей фракции сперматозоидов с Х- или Y- половой хромосомой, может найти широкое применение в программах оплодотворения ооцитов in vitro и дальнейшей трансплантации сексированных эмбрионов, с целью значительного ускорения селекционно-генетического прогресса в разводимых стадах КРС.
В последние годы американскими исследователями разработана технология разделения сперматозоидов животных по полу с помощью высокоскоростной проточной цитометрии и во многих странах проходит производственная проверка эффективности данного метода при искусственном осеменении коров и телок.
В этой связи необходимы исследования биологической полноценности криоконсервированной сексированной спермы быков и эффективности ее использования для искусственного осеменения коров и телок и в нашей стране.
Цель it задачи исследований. Целью данной работы является изучение результативности искусственного осеменения коров и телок спермой быков, замороженной в усовершенствованных синтетических разбавителях, а также выяснение эффективности использования разделенной по полу спермы.
Для достижения этой цели в диссертации были поставлены следующие задачи:
- изучить криозащитное влияние на сперму быков сукцината хитозана;
- выяснить защитное влияние различных эфиров глицерина при глубоком замораживании семени быков;
- проанализировать результативность осеменения коров спермой, замороженной в усовершенствованной трис-фруктозо-лимоннокислой среде в сравнении с лактозо-глицерино-желточной средой;
- исследовать криопротективное влияние на сперму быков бычьего и человеческого сывороточного альбумина;
- изучить биологические и микробиологические показатели сексированной спермы быков, полученной из разных зарубежных фирм;
- выяснить эффективность использования разделенной по полу спермы быков для искусственного осеменения коров и телок.
Научная новизна исследований. Изучено криозащитное влияние на сперму быков сукцината хитозана. Выяснено влияние моноэтилового и монометилового эфиров глицерина на устойчивость семени быков к глубокому замораживанию.
Проанализировано протективное действие бычьего и человеческого сывороточного альбумина при криоконсервации спермы быков.
Проведены сравнительные испытания результативности осеменения коров спермой, замороженной в усовершенствованной трис-фруктозо-лимоннокислой и лактозо-глицерино-желточной среде.
Исследованы биологические и микробиологические показатели сексированной спермы быков, полученной из разных зарубежных фирм.
Изучены показатели подвижности и живучести оттаянной сексированной спермы быков с помощью автоматической системы анализа спермы - «Sperm Vision» и определенны её некоторые биохимические показатели.
Исследована результативность искусственного осеменения коров и телок криоконсервированной разделенной по полу спермой.
Практическая значимость. Подтверждено, что применение усовершенствованной трис-фруктозо-лимоннокисло-желточной среды для замораживания спермы быков способствует повышению живучести и оплодотворяющей способности сперматозоидов быков в сравнении с лактозо-глицерино-желточной средой.
Установлено, что при осеменении телок разделенной по полу спермой, возможно получать удовлетворительные для практики результаты оплодотворяемости самок. В потомстве телок, осемененных сексированной спермой, значительно повышен процент самок, в сравнении с использованием обычной спермы.
Использование сексированной спермы для искусственного осеменения коров приводит к значительному снижению оплодотворяемости, в сравнении с применением обычной криоконсервированной спермы, и является экономически нецелесообразным.
Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на:
- Ученых Советах ВНИИплем, 2009-2010 г.г.;
- Научно-производственной конференции на ВВЦ, 2010 г.;
- Научной конференции Российского Университета Дружбы Народов, 2010 г.;
- Расширенной межотдельской конференции ВНИИплем, 2010 г.;
- 14-й Европейской конференции по размножению сельскохозяйственных животных, г. Эгер, Венгрия, 2010 г.
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 6 научных работ, в том числе 2 в рекомендуемых ВАК журналах.
Основные положения, выносимые на защиту:
- Добавление сукцината хитозана в состав замораживающей среды для спермы быков повышает живучесть оттаянных сперматозоидов, но не увеличивает их фертильность.
- Осеменение коров спермой, замороженной с низкой концентацией монометилового эфира, не снижает результативности осеменения коров по сравнению с использованием глицерина.
- Осеменение коров спермой, замороженной в усовершенствованной трис-фруктозо-лимоннокислой среде повышает оплодотворяемость в сравнении с применением лактозо-глицерино-желточной среды.
- Использование сексированной спермы для осеменения телок, позволяет получать приемлемую для практики оплодотворяемость и увеличивает получение в потомстве особей женского пола до 90 %.
Объем работы. Диссертация изложена на 120 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, методики исследований, результатов исследований, выводов и практических предложений. Диссертация включает 21 таблицу. Список литературы содержит 232 источника, в том числе - 162 на иностранном языке.
Заключение Диссертация по теме "Разведение, селекция и генетика сельскохозяйственных животных", Дунин, Михаил Иванович
ВЫВОДЫ
1. Установлено, что введение сукцината хитозана в состав замораживающей среды для спермы быка в дозе 1 мг/мл, способствовало повышению подвижности и живучести заморожено-оттаянных сперматозоидов, но не оказало положительного влияния на результативность осеменения коров.
2. Изучение влияния монометилового эфира глицерина показало, что его введение в состав замораживающей среды в концентрации 1-2% привело к повышению живучести оттаянных сперматозоидов на 25 и 21%, соответственно, по сравнению с использованием 6% глицерина.
3. Показано, что при осеменения коров спермой, замороженной с 1% монометилового эфира, оплодотворяемость животных была практически одинаковой с группой, где использовали глицерин в концентрации 6%.
4. Анализ результативности осеменения коров спермой, замороженной в усовершенствованной трис-фруктозо-лимоннокисло-желточной среде показал, что оплодотворяемость животных в этой группе была выше на 8,1% по сравнению с использованием ЛГЖ среды.
5. Введение в состав замораживающей среды для спермы быков различных дозировок бычьего и человеческого сывороточного альбумина, не оказало положительного влияния на подвижность и живучесть оттаянных сперматозоидов.
6. Установлено, что в образцах заморожено-оттаянной разделенной по полу спермы быков, сохраняется высокая подвижность и живучесть половых клеток.
7. Выяснено, что подвижность оттаянных сексированных сперматозоидов и содержание в них АТФ снижается более быстрыми темпами по сравнению с половыми клетками не подвергавшимися процессу разделения по полу с помощью высокоскоростной проточной цитометрии.
8. Изучение эффективности искусственного осеменения телок сексированной спермой показало, что оплодотворяемость животных при этом в разных хозяйствах колебалась от 25,6% до 52,7%.
9. В группе телок, осемененных сексированным семенем, получено в потомстве 90,6% самок в сравнении с 46,1% самок в контрольной группе.
10. Осеменение коров сексированным семенем привело к снижению их оплодотворяемости до 18,7% в сравнении с 47,6% при осеменении обычным криоконсервированным семенем.
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
1. Рекомендуем племпредприятиям использовать для замораживания спермы быков вместо лактозо-глицерино-желточной среды усовершенствованную трис-фруктозо-лимоннокислую среду следующего состава: вода дистиллированная - 100 мл; трис-(оксиметил)-аминометан - 2,75 г; фруктоза - 0,8 г; лимонная кислота -1,4 г; глицерин - 6 мл; желток куриного яйца — 20 мл; полиген - 30 мг.
2. Предлагаем животноводческим хозяйствам использовать сексированную сперму быков преимущественно для искусственного осеменения телок при строгом соблюдении зооветеринарных требований, предъявляемых к использованию данного вида семени.
Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата биологических наук, Дунин, Михаил Иванович, п. Лесные Поляны Московской обл.
1. Антонюк B.C. Биохимический контроль за качеством спермы хряков. / Антонюк B.C. // Доклады ВАСХНИЛ 1980. - №1.-с. 27-30.
2. Астауров Б.Л. Актуальные вопросы генетики. М. 1966.
3. Белоус A.M., Бондаренко В. А. Структурное изменение биологических мембран при охлаждении. Киев: Наукова Думка. 1982.
4. Белоус A.M., Гордиенко Е.А., Розанов Л.Ф. Замораживание и криопротекция. М.: Высшая школа. 1987:
5. Бернштейн А.Д., Петропавловский В.В. Влияние неэлектролитов на переживание сперматозоидов. / Бернштейн А.Д., Петропавловский В.В. // Бюлл. экспериментальной биологии и медицины. 1937. - Вып. 1.-е. 21-25.
6. Берилло М.М., Пухальский Л.Х. Вопросы длительного сохранения спермы быка и барана. / Берилло М.М., Пухальский Л.Х. // Проблемы животноводства. 1936. - № 10.-е. 24-40.
7. Бондаревская Л.Ф. Дёйствие возраста гамет и искусственного вызывания овуляции на воспроизведение у крольчих. // Автореф. Диссертации канд. биол. наук.-Дубровицы. 1978.
8. Бугров A.Jl. Способ оттаивания замороженной спермы быков в различной упаковке. / Бугров A.JI. // Животноводство. 1976. - № 12. - с. 5759.
9. Бурков И.А. Влияние иммунизации кроликов семенем петуха на пол потомков. / Бурков И.А. // Мат. 6-й Всес. конф. по физиол. и биох. методам повышения продуктивности животных. Боровск. 1968. - с. 390-391.
10. Варнавский А.Н. Изучение акросомы спермиев барана с помощью фазово-контрастной микроскопии. / Варнавский А.Н. // Доклады ВАСХНИЛ. 1978. №8. с. 33-34.
11. Владимиров Ю.А., Азизова O.A., Деев O.A. и др. Свободные радикалы в живых системах. / Владимиров Ю.А., Азизова O.A., Деев O.A., Сеин И.С. // Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Сер. Биофизика. 1991. - Т. 29.
12. Владимирская Е.М. Пути регуляции пола у животных. Киев: Урожай. 1966.
13. Владимирская Е.М., Плуженко И.Л. Влияние обработки спермы быка микрофоллином на соотношение полов в потомстве. / Владимирская Е.М., Плуженко И.Л. // Научные труды УСХА. 1974. - Т. 6. - Вып. 134.-е. 164-166.
14. Голубь B.C. Липиды семенника, придатка живчиков барана и быка. //Автореф. дисс. канд. биол. наук.-Дубровицы. 1972.
15. Гуськов A.M. Криогенные изменения липидов и функциональная полноценность гамет хряков и быков. // Автореф. дисс. канд. биол. наук.-Львов. 1984.
16. Зверева Г.В., Чухрий В.Н., Клевец JI.A. Сукцинатдегидрогеназная активность спермы быков и качество спермы. / Зверева Г.В., Чухрий В.Н., Клевец JT.A. // Сельскохозяйственная биология. 1989. - № 6. - с. 30-33.
17. Евтух В.П. Совершенствование метода криоконсервации семени крупного рогатого скота с использованием биологически активных веществ. // Автореф. дисс. канд. биол. наук.-Лесные Поляны. 2004.
18. Ерохин A.C. Регулирование овуляции и соотношения полов у млекопитающих//Дисс. канд. биол. наук.-Дубровицы. 1982.
19. Ерохин A.C., Платов Е.М., Тимофеев К.Н. и др. Структурное состояние мембраны сперматозоидов барана и быка после криовоздействия. / Ерохин A.C., Платов Е.М., Тимофеев К.Н., Кондаков Е.В. // Доклады ВАСХНИЛ. 1989. - № 3. - с. 19-21.
20. Ерохин A.C., Деряженцев В.И. Перекисное окисление липидов в сперме баранов. / Ерохин A.C., Деряженцев В.И. // Овцеводство. 1991. - № З.-с. 17-19.
21. Ерохин A.C. Физиологические аспекты криорезистентности спермы баранов и быков. // Дисс. докт. биол. наук.-Дубровицы. 1994.
22. Ерохин A.C., Коган И.Г., Барсель В.А. Активность супероксиддисмутазы в сперме барана и быка при криоконсервации. /
23. Ерохин A.C., Коган И.Г., Барсель В.А. // Сельскохозяйственная биология. -1995.-№4.-с. 50-51.
24. Ерохин A.C., Лехмус И.А. Определение содержания АТФ биолюминисцентным методом в сперматозоидах барана после криообработки. / Ерохин A.C., Лехмус И.А. // Доклады РАСХН. 1996. - № 1.- с. 32-34.
25. Ерохин A.C., Фомичев Ю.П., Федина Н.И. и др. Изучение защитного влияния хитозана при криоконсервации семени баранов и быков. /. Ерохин A.C., Фомичев Ю.П., Федина Н.И., Епишина Т.М. // Аграрная Россия.- 2004. № 5. - с. 18-20.
26. Ерохин A.C., Епишина Т.М., Федина Н.И. Влияние бычьего сывороточного альбумина на фертильность охлажденного семени хряков. / Ерохин A.C., Епишина Т.М., Федина Н.И. // Свиноводство. 2007. - № 4. -с. 26-27.
27. Ерохин A.C., Добровольский Г.А. Замораживание семени быков в среде с сухим соевым лецитином. / Ерохин A.C., Добровольский Г.А. // Молочное и мясное скотоводство. 2009. - № 5. - с. 16-17.
28. Кононов В.П. Замораживание семени хряка. Теория и практика. // Автореф. дисс. докт. биол. наук.-Дубровицы. 1982.
29. Кононов В.П. Глубокое замораживание семени хряков. Новое в теории и практике. / Кононов В.П. // Теория и практика воспроизведения животных. М.: Колос. 1984. - с. 241-256.
30. Кузнецова H.A. Первый опыт применения искусственного осеменения в каракулеводстве. / Кузнецова H.A. // Проблемы животноводства. 1932. - № 5-6. - с. 86-90.
31. Курбатов А.Д., Корбан Н.В. Обработка кур и яиц гормональными веществами и пол цыплят. / Курбатов А.Д.; Корбан Н.В. // Агробиология. -1965.-№4.-с. 543-549.
32. Левина С.Е. Очерки развития пола в раннем онтогенезе высших позвоночных. М.: Наука. - 1974.
33. Ленинджер А. Митохондрия. Молекулярные основы структуры и функции.-М.: Мир. 1966.
34. Лопатко М.И., Тюпина К.Ф. Замораживание спермы быка без глицерина. / Лопатко М.И., Тюпина К.Ф. // Молочное и мясное скотоводство. 1971.-№4.-с. 24.
35. Луговой В.И., Моисеев В.А. Влияние низких температур на растворимые ферменты. / Луговой В.И., Моисеев В.А. // Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Сер. Биофизика. 1978. - Т. 9. - с. 53-79.
36. Малиновская В.А. Оптимальные режимы замораживания спермы быков в соломинках. / Малиновская В.А. // Совершенствование методов воспроизводства и искусственного осеменения сельскохозяйственных животных. М. - 1983. - с. 100-108.
37. Маховка В.В. Об электрическом заряде сперматозоидов млекопитающих. / Маховка В.В. // Проблемы животноводства. 1934. - № 3. -с. 120.
38. Мороз Л.Г., Рустенов А.Р., Шапиев И.Ш. Значение серосодержащих соединений в устойчивости спермы к замораживанию. / Мороз Л.Г., Рустенов А.Р., Шапиев И.Ш. // Доклады ВАСХНИЛ. 1990. - № 9. - с. 51-55.
39. Милованов В.К., Соколовская И.И. Теория холодового удара живчиков млекопитающих. / Милованов В.К., Соколовская И.И. // Доклады ВАСХНИЛ. 1959. - № 8. - с. 3-9.
40. Милованов В.К. Биология воспроизведения и искусственное осеменение сельскохозяйственных животных. М. - 1962.
41. Милованов В.К., Жильцова Л.С. Комплексонаты металлов в средах для семени сельскохозяйственных животных. / Милованов В.К., Жильцова Л.С. // Вестник сельскохозяйственной науки. 1982. - № 2. - с. 58-66.
42. Милованов В.К., Ерохин A.C. Направления и перспективы искусственного регулирования соотношения полов в потомстве. / Милованов В.К., Ерохин A.C. // Сельское хозяйство за рубежом. 1980. - № 1.-е. 43-47.
43. Нарижный А.Г., Ерохин A.C. Активность супероксиддисмутазы в нативной и криоконсервированной сперме хряков. / Нарижный А.Г., Ерохин A.C. // Доклады РАСХН. 1995. - № 1. - с. 37-38.
44. Наук В.А. Криоконсервация семени животных. / Наук В.А. // Консервация генетических ресурсов.-Пущино. 1982.
45. Наук В.А., Гуськов A.M. Особенности перекисного окисления липидов при замораживании спермы быков и хряков. / Наук В.А., Гуськов A.M. // Доклады ВАСХНИЛ. 1983. - № 2. - с. 27-29.
46. Осташко Ф.И. Причины и механизмы холодового удара клеток. / Осташко Ф.И. // Международный сельскохозяйственный журнал. 1964. - № 3.-е. 106-109.
47. Осташко Ф.И., Строна В.И., Кузнецов Г.Н. и др. Влияние ß-глюкоронедазы на качественные показатели спермы производителей. / Осташко Ф.И., Строна В.И., Кузнецов Г.Н., Баев И.С. // Животноводство. -1974. № 4. с. 53-54.
48. Осташко Ф.И. Глубокое замораживание и длительное хранение спермы производителей.-Киев: Урожай. 1978.
49. Пакенас П.И. Исследование сперматогенеза и усовершенствование технологии взятия и обработки семени. // Автореф. дисс. докт. биол. наук. -Таллин. 1972.
50. Пакенас П.И., Гинкявичус Г., Ленкутис В. Байсогальская технология кормления, содержания, подготовки быков к взятию семени, его криоконсервация и использование. / Пакенас П.И., Гинкявичус Г., Ленкутис В. //Вильнюс. 1980. - с. 89.
51. Петренко И.П. О регулировании пола в потомстве коров. / Петренко И.П. // Цитология и генетика. 1976. - Т. 10. - № 6. - с. 535-538.
52. Платов Е.М. Замораживание семени быка в глицериновой компенсированной среде. / Платов Е.М. // Животноводство. 1963. - № 8. -с. 92-94.
53. Платов Е.М. Теоретические и практические основы замораживания семени производителей сельскохозяйственных животных. // Автореф. дисс. докт. биол. наук.-Дубровицы. 1973.
54. Пушкарь Н.С. Белоус A.M., Цветков Ц.Д. Теория и практика криогенного и сублимационного консервирования.-Киев: Наукова Думка. -1984.
55. Семаков В.Г. Активность сукцинатдегидрогеназы в процессе замораживания и оттаивания спермы быков и хряков. / Семаков В.Г. // Доклады ВАСХНИЛ. 1984. - № 2. - с. 26-27.
56. Семенова В.А. Защитные свойства отдельных факторов желтка куриного яйца при замораживании семени животных. // Автореф. дисс. канд. биол. наук.-Дубровицы. 1987.
57. Смирнов И.В. Сохранение спермы сельскохозяйственных животных посредством глубокого охлаждения. // Дисс. канд. биол. наук. М. - 1949.
58. Соколовская И.И., Милованов В.К. Опыты по эпигамному переопределению пола птиц. / Соколовская И.И., Милованов В.К. // Труды института генетики. 1939. - Т. 13. - с. 339-346.
59. Соколовская И.И., Ойвадис Р.Н., Абилов A.M. О значении акросомы в оценке семени самцов. / Соколовская И.И., Ойвадис Р.Н., Абилов
60. A.М. // Животноводство. 1981. - № 9. - с. 45-46.
61. Титенко Н.В. Первичное соотношение полов у млекопитающих. / Титенко Н.В. // Цитология и генетика. 1976. - Т. 10. - № 3. - с. 225-228.
62. Угарова Н.Н., БровкоЛ.Ю. Биолюминисцентные методы анализа в микробиологии. // Угарова Н.Н. Бровко Л.Ю. // Прикладная биохимия и микробиология. 1991. - Т. 21. - № 1. - с. 134-141.
63. Фомичев Ю.П. Сорбционно-детоксикационные технологии в животноводстве и ветеринарной медицине. / Фомичев Ю.П. // Аграрная Россия. 2004. - № 5. - с. 3-8.
64. Шредер В.Н. Искусственная регуляция пола у млекопитающих. / Шредер В.Н. // Биологический журнал. 1934. - Т. 3. - № 3. - с. 465-576.
65. Шредер В.Н. Физиология И' биохимия возникновения и регуляции пола у животных.-М.: Наука. 1965.
66. Эрнст Л.К., Дыбан А.П., Лакиза О.В. Партеногенетическое развитие яйцеклеток кролика, активированных этанолом и тепловым шоком. / Эрнст Л.К., Дыбан А.П., Лакиза О.В. // Доклады РАСХН. -1991. № 9. - с. 46-48.
67. Ahmad К., Foote R.H. Motility and fertility of frozen bull spermatozoa in Tris-yolk and* milk extenders containing amicacin- sulphate. /Ahmad K., Foote R.H. // J. Dairy Sci. 1986. - v. 69. - p. 535-541.
68. Ali J.I., Eldridge F.E., Koo G.C. Enrichment of bovine X- and Y-chromosome bearing sperm with monoclonal H-Y antibody fluorescence activated cell sorted. / Ali J.I., Eldridge F.E., Koo G.C. // Arch. Androl. 1990. - v. 24. - p. 235-245.
69. Alvares J.G., Storey B.T. Role of superoxide dismutase in protecting rabbit spermatozoa from 02 toxicity due to peroxidation. / Alvares J.G., Storey
70. B.T.//Biol. Reprod.- 1993.-v. 28. p. 1129-1136.
71. Anderssen M., Taponen J., Kommeri M. e.a. Pregnancy rates in lactating Holstein-Friesian cows after artificial insemination with sexed sperm. / Anderssen M., Taponen J., Kommeri M., Frank S. // Reprod. Domest. Animals. -2006.-v. 41.-p. 95-97.
72. Arriola J., Foote R.H. Glycerolation and thawing effect on bull spermatozoa frozen in detergent treated egg-yolk and whole egg extenders. / Arriola J., Foote R.H. // J. Dairy. Sci. 1987. - v. 70. - p. 1664-1670.
73. Bangham A.D. Electrophoretic characteristics of ram and rabbit spermatozoa. / Bangham A.D. // Proced. of Royal Soc. 1961. - v. 155. - p. 295.
74. Bathgate R., Grossfeld R. Early pregnancy loss in sows after low dose deep uterine artificial insemination with sex-sorted, frozen-thawed sperm. / Bathgate R, Grossfeld R. // Animal Reprod. Sci. 2008. - v. 104.- p. 440-444.
75. Beal W.E., White L.M., Garner D.L. Sex ratio after insemination, of bovine spermatozoa isolated using a bovine serum albumin gradient. / Beal W.E., White L.M., Garner D.L. // J. Anim. Sci.- 1984.- v. 58,- p. 1432-1436.
76. Bennet D., Boyse E. Sex ratio in progeny of mice inseminated with sperm treated with H-Y antiserum. / Bennet D., Boyse E. // Nature. 1973. - v. 46.-p. 308-309.
77. Beatty R. Parthenogenesis and polyploidy in mammalian development. Cambridge. 1957.
78. Bhattacharya B. Phenotype of mammalian spermatozoa in relation to genetic content. / Bhattacharya B. // Ind. J. Exper. Biology. 1976. - v. 14. - p. 610-615.
79. Bhattacharya B. Guide to pre-arranging the sex of offspring. Omaha. USA. 1977.
80. Bodmer M., Janett F., Den Daas N. Fertility after low dose insemination of sexed sperm in heifers and cows under field conditions. / Bodmer M., Janett F., Den Daas N. // Reprod. Dornest. Anim. 2004. - v. 39.- p. 254.
81. Boe-Hansen G.B., Monis I.D., Annette B. DNA integrity in sexed bull sperm assessed by neutral Comet assay and sperm chromatin structure assay. / Boe-Hansen G.B., Moms I.D., Annette B. // Theriogenology. -2005. v. 63.- p. 1789-1802.
82. Cambell K.H., Mc Whir J., Richie W.A. Sheep cloned by nuclear transfer from a cultured cell line./Cambell K.H., Mc Whir J., Richie W.A. // Nature. 1996. - v. 380. - p. 64-66.
83. Cerchiaro I., Cassandro M., Dal Zotto R. e. a. A field study on fertility and purity of sex-sorted cattle sperm. / Cerchiaro I., Cassandro M., Dal Zotto R. // J. Dairy Sei. 2007. - v. 90. - p. 2538-2542.
84. Chavatte-Palmer P., Heyman Y., Richard C. Chemical, hormonal and hematologic characteristics of bovine calves derived from nuclei from somaticcells. / Chavatte-Palmer P., Heyman Y., Richard C. I I Biol. Reprod. 2002. - v. 66. -p. 1596-1603.
85. Chen Y., Foote R.H., Brockett C.C. Effect of sucrose, trehalose, hypotaurine, taurine and blood serum on survival of frozen bull sperm. / Chen Y., Foote R.H., Brockett C.C. // Cryobiology. -1993. v. 30. - p. 423-431.
86. Courot M., Esnault C. Sedimentation du sperm et sex ratio. / Courot M., Esnault C. // Ann. de Biol. Anim. Bioch. Bioph. 1973. - v. 13. - № 3. - p. 329334.
87. Cran D.G., Johnson L.A., Polge C. Sex preselection in cattle: a field trial. / Cran D.G., Johnson L.A., Polge C. // Vet. Record. 1995. - v. 136. - p. 495-496.
88. Dantchakoff V. Sur les effects morphogenetigues de la folliculine dans l'ebouclie testiculaire du poulet. / Dantchakoff V. // C.R. Soc. Biol. Paris. 1935. -v. 119.-p. 1117-1120.
89. Davis I.T., Bratton R.W., Foote R.H. Livability of bovine spermatozoa at 5-25° C and 85° C in tris-buffered and citrate-buffered yolk-glycerol extenders. / Davis I.T., Bratton R.W., Foote R.H. // J. Dairy Sei. -1963. v. 46.- p. 333-336.
90. De Sousa P.A., King T., Harkness L. Evaluation of gestational deficiencies in cloned sheep fetuses and placentae. / De Sousa P.A., King T., Harkness L. // Biol. Reprod. 2001. - v. 65. - p. 23-30.
91. De Jarnette J.M., Nebel R.L. Evaluation the successe of sex-sorted semen in US dairy herds from on farm records. / De Jarnette J.M., Nebel R.L. // Theriogenology. 2009. - v . 71. - p. 49-58.
92. De Graaf S.P., Evans G., Maxwell W.M. Succesful low dose insemination of flow cytometrically sorted ram spermatozoa in sheep. / De Graaf S.P., Evans G., Maxwell W.M. // Reprod. Dornest. Animal. 2007. - v. 42. - p. 648-653.
93. Diasio R., Glass R. Effect of pH on the migration of X and Y sperm. / Diasio R., Glass R. // Fertility and Sterility. 1971. - v. 22. - p. 303-305.
94. Eichwald E.J., Silmser C.R. Untitled publication. / Eichwald E.J., Silmser C.R. // Transplant. Bull. 1955. - v. 2. - p. 148-149.
95. Eichwald E.J., Silmser C., Weissman J. Sex-linked rejection of normal and neoplastic tissue. 1. Distribution and specifity. / Eichwald E.J., Silmser C., Weissman J. // J. Natl. Cancer Just. 1958. - v. 20. - p. 563-575.
96. Ericsson R., Langevin C. Isolation of fractions rich in human Y-sperm. / Ericsson R., Langevin C. // Nature. 1973. - v. 246. - p. 421-424.
97. Evan J., Douglas T., Renkton J. An attempt to separate fractions rich in human Y-sperm. //Nature. 1975. - v. 253. - p. 352-354.
98. Evans R.W., Setchell B.P. Association of exogenous phospholipids with spermatozoa. / Evans R.W., Setchell B.P. // J. Reprod. Fertil. 1978. - v. 53.-p. 357-362.
99. Fahy G.M. The relevance of cryoprotectant "toxicity" to cryobiology. / Fahy G.M. // Cryobiology. 1986. - v. 23. - p. 1-13.
100. Flaherty S.P., Michalowska J., Swann N.J. Albumin gradient do not enrich Y-bearing human spermatozoa. / Flaherty S.P., Michalowska J., Swann N.J. // Hum. Reprod. 1997. - v. 12. - p. 938-942.
101. Foote R.H., Brockett C.C., Kaproth M.T. Motility and fertility of bull* sperm in whole milk extender containing antioxidants. / Foote R.H., Brockett C.C., Kaproth M.T. // Animal Reprod. Sci. 2002. - v. 71. - p. 13-23.
102. Foulkes J.A. The separation of lipoproteins from egg yolk and their effect on the motility and integrity of bovine spermatozoa. / Foulkes J.A. // J. Reprod. Fertil. 1977. - v. 49. - p. 277-284.
103. Garner D.L., Gledhill B.L., Pinkel D. e.a. Quantification of the X- and Y-chromosome-bearing sperm of domestic animals by flow cytometry. / Garner D.L., Gledhill B.L., Pinkel D. // Biol. Reprod. 1983. - v. 28. - p. 312-321.
104. Gibson C.D., Graham E.F. The relationship between fertility and post-freeze motility of bull spermatozoa (by pellet freezing) without glycerol: / Gibson C.D., Graham E.F. // J. Reprod. Fertil. 1969. - v. 20. - p. 155-157.
105. Galli C. Pregnancy: a cloned horse born to its dam twin. // Nature. -2003.-v. 424. p. 635.
106. Gilmour D. Histocompatibility antigen in the heterogametic sex in the chicken. / Gilmour D. // Transplantation. 1967. - v. 5. - p. 699-706.
107. Gordon M.J. Control of sex ratio in rabbit by electrophoresis of spermatozoa. / Gordon M.J. // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1957. - v. 43. - № 10.-p. 913-918.
108. Graham C.F. The production of parthenogenetic mammalian embryos and their use in biological research. / Graham C.F. // Biol. Rew. 1974. - v. 49. -p. 399-422.
109. Graham F. Fertility studies with frozen boar spermatozoa. / Graham F. //A. I. Dig. -1971.- v. 19.-p. 16-18.
110. Graham J.K., Foote R.H. Effect of several lipids fatty acyl chain length and degree of unsaturation of the motility of bull spermatozoa after cold shock and freezing. / Graham J.K., Foote R.H. // Cryobiology. 1987. - v. 24. - № 1. - p.42-52.
111. Graham J.K., Hammersteadt R.H. Differential effect of butylated hydroxytoluence analogs on bull sperm subjected to cold-induced membrane stress. / Graham J.K., Hammersteadt R.H. // Cryobiology. 1992. - v. 29. - p. 106117.
112. Grafter T. Effect of catalase on fertility results of frozen bull semen. / Grafter T. // J. Reprod. Fertil. 1977. - v. 49. - p. 277-284.
113. Grossfeld R., Kline P., Sieg B. e.a. Production of piglets with sexed semen employing a non-surgical insemination technique. / Grossfeld R., Kline P., Sieg B., Rath D. // Theriogenology. 2005. - v. 63. - p. 2269-2277.
114. Hafs H., Boyd L. Sex ratio of calves from inseminations after electrophoresis of sperm. / Hafs H., Boyd L. // J. Anim. Sci. 1974. - v. 38. - № 3. - p. 603-604.
115. Hammersteadtd R.H.,Use of spin labele to evaluate effect of cold shock and osmolarity on sperm. / Hammersteadtd R.H. // Biol. Reprod. 1978. - v. 18. -p. 686-696.
116. Hancock R. Comparison of effect of normal rabbit sera and anti-cock sperm sera on rabbit sperm, including comparison of effects on the sex ratio. / Hancock R. // Biol. Reprod. 1978 - v. 18. - p. 510-515.
117. Hendriksen P.J., Tieman M., Van Der L.T. e.a. Binding of anti H-Y monoclonal antibodies to separated X and Y-chromosome bearing porcine and bovine sperm. / Hendriksen P.J., Tieman M., Van Der L.T. // Mol. Reprod. Dev. -1993.-v. 35.-p. 189-196.
118. Hopkins K., Shelton W., Engle C. Estrogen sex-reversal of tilapia Aurea. / Hopkins K., Shelton W., Engle C. // Aquaculture. 1979. - v. 18. - № 3. -p. 263-268.
119. Hoppe P.C., Koo G.C. Reacting mouse spermatozoa with monoclonal H-Y antibodies does not influence sex ratio of eggs fertilized in vitro. / Hoppe P.C., Koo G.C. // Reprod. Immunol. 1984. - v. 6. - p. 1-9.
120. Jones R.C. Influence of diluents and*processing times after ejaculation on the survival of deep-frozen ram spermatozoa. / Jones R.C. // Austr. J. Biol. Sci. 1969. - v. 22. - № 4. - p. 995-1004.
121. Jones R., Mann T. Lipid peroxidation in spermatozoa. / Jones R., Mann T. //Proc. R. Soc. Lond. B. 1973. - v. 184. - p. 103-107.
122. Jones R., Mann T. Lipid peroxidation in spermatozoa: formation, role of plasmologen and physiological significance. / Jones R., Mann T. // Proc. R. Soc. Lond. B. 1976.-v. 193.-p. 317-333.
123. Jones R, Stewart D. The effect of cooling to 5°C and freezing-thawing on the ultra-structure of bull spermatozoa. / Jones R., Stewart D. // Reprod. Fertil. -1979. v. 56. - № 1. - p. 233-238.
124. Johnson L.A., Flook J.P., Look M.V. e.a. Flow sorting of X- and Y-chromosome bearing spermatozoa into two populations. / Johnson L.A., Flook J.P., Look M.V., Pinkel D. // Gamete Research. 1987. - v. 16. - p. 1-9.
125. Johnson L.A., Flook J.P., Hawk H.W. Sex preselection in rabbits: live birth from X- and Y- sperm separated by DNA and cell sorting. / Johnson L.A., Flook J.P., Hawk H.W. // Biol. Reprod. 1989. - v. 41. - p. 199-203.
126. Johnson L.A. Sex preselection in swine: altered sex ratios in offspring following surgical insemination of flow sorted X- and Y- bearing sperm. / Johnson L.A. // Reprod. Domest. Anim. 1991. - v. 26. -p. 309-314.
127. Johnson L.A., Welch G.R. Sex preselection: high-speed flow cytometric sorting of X- and Y- sperm for maximum efficiency. / Johnson L.A., Welch G.R. // Theriogenology. 1999. - v. 52. - p. 1323-1341.
128. Johnson L.A., Welch G.R., Rens W. The Beltswille sperm sexing technology: high-speed sorting gives improved sperm output for IVF and A.I. / Johnson L.A., Welch G.R., Rens W. // J. Anim. Sci. 1999. - v. 77. - Suppl. 2. - p. 213-220.
129. Joerg A., Asai M., Graphodatskaya D. Validating bovine sexed semen samples using quantitative PCR. / Joerg A., Asai M., Graphodatskaya D. // J. Anim. Breed. Genet. 2004. - v. 121. - p. 209-215.
130. Kampachmidt R.F., Meyer D.T., Herman H.A. Lipid and lipoprotein constituents of egg-yolk in the resistence and storage of bull spermatozoa. / Kampachmidt R.F., Meyer D.T., Herman H.A. // J. Dairy Sci. 1953. - v. 36. - № 3.-p. 733-742.
131. Kaufman M.H., Barton S.C., Syrani M.A. Normal post-implantation development of mouse parthenogenetic embryos to the forelimb bud stage. / Kaufman M.H., Barton S.C., Syrani M.A. //Nature. 1977. - v. 265. - p. 53-55.
132. Killian G., Honadel T., Mc Nutt T. Evaluation of butylated hydroxytoluence as a cryopreservative added to whole or skim milk diluent for bull sperm. / Killian G., Honadel T.3 Mc Nutt T. // J. Dairy Sci. 1989. - v. 72. - p. 1291-1295.
133. Kline P., Rath D. Application of flow-cytometrically sexed spermatozoa in different farm animal spicies: a review. / Kline P., Rath D. // Arch. Tierz., Dummerstorf. 2006. - v. 49. - p. 41-54.
134. Kline P., Rath D. Reduction of oxidative stress in bovine spermatozoa during flow cytometric sorting. / Kline P., Rath D. // Reprod. Domest. Animal. -2007. v. 42. - p. 63-67. ■
135. Kline P., Frese D., Osmers H. e.a. Insemination with sex-sorted fresh bovine spermatozoa processed in the presence of antioxidative substances. / Kline P., Frese D., Osmers H., Rath D., // Reprod. Domest. Anim. 2007. - v. 42. - p. 58-62.
136. Kleegman S. Can sex be predetermined by the physician. / Kleegman S. // Ekcerpta Med. 1966. - v. 109. - p. 109.
137. Koo G.K., Stackpale C.W. Topographical location of the H-Y antigen on mouse spermatozoa by immunoelectron microscopy. / Koo G.K., Stackpale
138. C.W. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1973. - v. 70. - p. 1502-1505.
139. Kreider J.L., Tindall W.C., Potter G.D. Inclusion of bovine serum albumin in semen extenders to enhance maintenance of stallion sperm viability. / Kreider J.L., Tindall W.C., Potter G.D. // Theriogenology. 1985.1 - v. 23. - p. 399-408.
140. Kurykin J., Jaakma U., Jalakas M. Deposition of sexed semen at different sites in the uterus at a fixed time and pregnancy rates in heifers. / Kurykin J., Jaakma U., Jalakas M. // Reprod. Domest. Animal. 2006. - v. 41. - p. 312.
141. Lewin S. Artificial sex regulation of mammalian off spring. / Lewin S. // Brit. Vet. J. 1956. - v. 112. - p. 549-550.
142. Lindsey A.C., Varner D.D., Seidel G.E. Jr. e.a. Hysteroscopic or rectally guided, deep-uterine insemination of mares with spermatozoa stored 18 h at either 5 °C or 15 °C prior to flow-cytometric sorting. / Lindsey A.C., Varner
143. D.D., Seidel G.E. Jr. // Anim. Reprod. Sci. 2005. - v. 85. - p. 125-130.
144. Lovelock J.E., Bishop M.W. Prevention of freezing damage to living cell by dimethyl sulphoxide. / Lovelock J.E., Bishop M.W. // Nature. 1959. -v. 183.-p. 1384-1395.
145. Luyet B.J., Gehenio P.M. Life and death at low temperatures. / Luyet B.J., Gehenio P.M. // Biodynamica. 1940. - p. 1-341.
146. Lush B. The possibility of sex control by artificial insemination with centrifuged spermatozoa. / Lush B. // J. Agric. Res. 1925. - v. 30. - p. 893-913.
147. Mann T. The biochemistry of semen and of the male reproductive tract. N-Y.- 1964.
148. Mari G., Rizzato G., Iacono E. e.a. First foal born, in Italy using flow cytometrically sorted' spermatozoa. / Mari G., Rizzato; G., Iacono E. // Reprod. Domest. Animal. 20081 - v. 43. - Suppl. 3i - p. 179:
149. Maxwell W.M. Physiology of spermatozoa at high dilution rates: the influence of seminal plasma. // Theriogenology. 1999. - v. 52. - p. 1352.
150. Meszai*os J:, Peijes J. Biotechnicai modszer a szarvasmarha? ivararanyanak befolyasolas ara. / Meszaros J., Perjes J.//Magy Allatorv. Lapia. -1979.-v. 34.-p. 726-728.
151. Morrell J.M., Keeler K.D., Noakes D. e.a. Sexing of sperm by flow cytometry. / Morrell J.M., Keeler K.D., Noakes D: // Vet. Record: 19881 - v. 122: -p. 322-324.
152. Morris L.H., Hunter R.H.,. Allen W.R. Hysteroscopic insemination of small numbers of spermatozoa at the uterotubal junction of preovulatory mares. / Morris L.H., Hunter R.H., Allen W.R. // J. Reprod. Fertil. 2000. - v. 118: - p. 95100.
153. Moruzzi J.F. Selecting a mammalian species for the separation of X-and Y-chromosome —bearing spermatozoa. / Moruzzi J.F. // J. Reprod. Fertil. -1979.-v. 57.-p. 319-323.
154. Muchleis P., Long S. The effects of aliening the pH of seminal fluid on the sex ratio of rabbit offspring. / Muchleis P., Long S. // Fertility and Sterility. -1976.-v. 27.-p. 12-18.
155. Muller U., Sicbers J. The testis as a secretory organ for H-Y antigen. / Muller U., Sicbers J. // Human Genetics. 1978. - v. 42. - p. 209-213.
156. Nagase H., Niwa T. Deep-freezing bull semen in concentrated pellet form. / Nagase H., Niwa T. // 5-th Int. Congr. Anim. Reprod. Trento. 1964. - v. 4. -p. 410-415.
157. Nagase H. Protective effect of poliols against freezing injury of bull spermatozoa. / Nagase H. // 6-th Int. Congr. Anim. Reprod. and A.I. Paris. 1968. -v. 2.-p. 1103.
158. Olsen M.W., Buss E.G. Role of genetic factors and fowl pox vims in parthenogenesis in turkey eggs. / Olsen M.W., Buss E.G. // Genetics. 1967. - v. 56. - p. 727-732.
159. Olsen M.W. Avian parthenogenesis. Beltsville.- 1975.
160. Pechan P., Tracey N. H-Y evolution. / Pechan P., Tracey N. // Experientia. 1980. - v. 36. - p. 356-357.
161. Pincus J., Enzmann E.V. The comparative behavior of mammalian eggs in vivo and in vitro. 2. Activation of tubal eggs of the rabbit. / Pincus J., Enzmann E.V. // J. Exp. Zool. 1936. - v. 73. - p. 195-208.
162. Pincus J. The breeding of some rabbits produced by recipient of artificially activated ova. / Pincus J. // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1940. - v. 26. -p. 163-165.
163. Pinkel D., Gledhill B.L., Van Dilla M.A. High resolution DNA measurement of mammalian sperm. / Pinkel D., Gledhill B.L., Van Dilla M.A. // Cytometry. 1982. - v. 3. - p. 1-9.
164. Phillips J J., Bramwell R.K., Graham J.K. Cryopreservation of rooster sperm using methyl-cellulose. / Phillips J.J., Bramwell R.K., Graham J.K. // Poultry Sci. 1996. - v. 75. - № 7. - p. 915-923.
165. Polge C., Smith A.U., Parkes A.S. Revival of spermatozoa after vitrification and degidratation at low temperature. / Polge C., Smith A.U., Parkes A.S. //Nature. 1949. - v. 164. - № 4172. - p. 666-667.
166. Polge C., Rowson L.E. Fertilization capacity of bull spermatozoa after freezing at 79°C. / Polge C., Rowson L.E. // Nature. 1952. - v. 169. - № 4307.-p. 626-627.
167. Philips P.H., Lardy H.A. A yolk-buffer pabulum for the preservation of bull semen. / Philips P.H., Lardy H.A. // J. Dairy Sci. 1940. - v. 23. - p. 339-404.
168. Prendergast E., Vishwanath R., Shannon P. e.a. Charged lipoprotein fractions of egg yolk in bovine semen diluents. / Prendergast E., Vishwanath R., Shannon P. // Proc. 26-th Ann. Conf. Austr. Soc. Reprod. Biol. Brisbane. 1994. -v. 26.-p. 113.
169. Probst S., Rath D. Production of piglets using intracytoplasmic sperm injection (ICSI) with flow cytometrically sorted boar semen and artificially activated oocytes. / Probst S., Rath D. // Theriogenology. 2003. - v. 59. - p. 961973.
170. Plammer J.H., Robertson L., Watson P.F. Accumulation of calcium in cold-shocked spermatozoa of the ram and its intracellular localization usingpyroantimonate. / Plammer J.H., Robertson L., Watson P.F. // J. Reprod. Fertil. -1986.-v. 77.-p. 177-185.
171. Rath D. Low dose insemination in the sow. A review. / Rath D. // Reprod. Dornest. Anim. 2002. - v. 37. - p. 1291-1304.
172. Rath D., Johnson L. Application and commercialization of flow cytometrically sex-sorted semen. / Rath D., Johnson L. // Reprod. Dornest. Anim. -2008.-v. 43.-p. 338-346.
173. Rens W., Welch G.P., Johnson L.A. A novel nozzle for more efficient sperm orientation to improve sorting efficiency of X- and Y- chromosome-bearing sperm. / Rens W., Welch G.P., Johnson L.A. // Cytometry. 1998. - v. 33. - p. 476-481.
174. Robertson L., Watson P.F. Calcium transport in diluted or cooled ram semen. / Robertson L., Watson P.F. // J. Reprod. Fertil. 1986. - v. 77. - p. 177185.
175. Ross A., Robinson A. Failure to confirm separation of X- and Y-bearing human sperm using BSA gradient. / Ross A., Robinson A. // Nature. -1975.-v. 253.-p. 354-355.
176. Roberts B., Diasio B. Effect of pH on the migration of X and Y sperm. / Roberts B., Diasio B. // Fertil. Steril. 1971. - v. 22. - p. 5-10.
177. Schenk J.L., Suh T.K., Cran D.G. e.a. Cryopreservation of flow-sorted bovine spermatozoa. / Schenk J.L., Suh T.K., Cran D.G. // Theriogenology. 1999. -v. 52.-p. 1375-1391.
178. Schilling E., Thormahlen D. Atteints for separation of X and Y spermatozoa by density gradient centrifiigation. / Schilling E., Thormahlen D. // 8th Int. Congr. Anim. Reprod. and A.I. Krakow. 1976.
179. Seidel Jr. G.E., Johnson L.A., Allen C.A. e.a. Artificial insemination with X- and Y-bearing bovine sperm. / Seidel Jr. G.E., Johnson L.A., Allen C.A. // Theriogenology. 1996. - v. 45. - p. 309.
180. Seidel G.E. Jr., Herrickhoff L.A., Schenk J.L. Artificial insemination of heifers with cooled unfrozen, sexed semen. / Seidel G.E. Jr., Herrickhoff L.A., Schenk J.L. // Theriogenology. 1998. - v. 49. - p. 365.
181. Seidel G.E. Jr., Schenk J.L., Herickhoff L.A. e.a. Insemination of heifers with sexed sperm. / Seidel G.E. Jr., Schenk J.L., Herickhoff L.A., Doyle S.P., Brink Z., Green R.D., Cran D.G. // Theriogenology. 1999. - v. 52. - p. 14071420.
182. Seidel G.E. Jr., Garner D.L. Current status of sexing mammalian spermatozoa. / Seidel G.E. Jr., Garner D.L. // Reproduction. 2002. - v. 124.- p. 733-743.
183. Seidel Jr. G.E. Sexing mammalian sperm-interwining of commerce, technology, and biology. / Seidel Jr. G.E. // Anim. Reprod. Sei. 2003. - v. 79. - p. 145-156.
184. Seidel G.E. Jr. Overview of sexing sperm. / Seidel Jr. G.E. // Theriogenology. 2007. - v. 68. - p. 443-446.
185. Sieg B., Kline P., Frese D. Improvement of sexed bull semen processing for cryopreservation. / Sieg B., Kline P., Frese D. // Reprod. Domest. Anim. 2003. - v. 38. - p. 329-330.
186. Sills E.S., Kirman I., Colobero L.T. H-Y antigen expression patterns in human X and Y- chromosome bearing spermatozoa. / Sills E.S., Kirman I., Colobero L.T. // Am. J. Reprod. Immun. - 1998. - v. 40. - p. 43-47.
187. Silvers W.K. Male specific antigen homology in mice and rats. / Silvers W.K. // Science. 1973. - v. 181. - p. 570.
188. Shettles L. Factors influencingsex ratio. / Shettles L. // Int. J. Gynec.
189. Obstefr. 1970. - v. 8.-p. 643-645.
190. Shishito S., Shirai M., Sasaki K. Galvanic separation of X and Y bearing human spermatozoa. // Int. J. Fértil. 1975. - v. 20. - p. 13-18.
191. Slavik T. Effect of glycerol on the penetration ability of fresh ram spermatozoa with zona-free hamster eggs. / Slavik T. // J. Reprod. Fértil. 1987. -v. 79.-№ l.-p. 99-103.
192. Slaweta R., Laskowska T. The effect of glutathione on the motility and fertility of frozen bull sperm. / Slaweta R., Laskowska T. // Anim. Reprod. Sci. -1987.-v. 4.-p. 249-253.
193. Thibier M., Guerin B. Hygienic aspects of storage and use of semen for artificial insemination. / Thibier M., Guerin B. // Anim. Reprod. Sci. 2000. -v. 62. -p. 233-251.
194. Thomson J.G., Cummins J.M. The effect of washing and protein supplementation on the acrosome reaction of ram spermatozoa in vitro. / Thomson J.G., Cummins J.M. // Anim. Reprod. Sci. 1985. - v. 9. - № 1. - p. 75-78.
195. Tubman L.M., Brink Z., Suh T.K. Characteristics of calves produced with sperm sexed by flow cytometry/cell sorting. I Tubman L.M., Brink Z., Suh T.K., Seidel G.E. // J. Anim. Sci. 2004. - v. 82. - p. 1029-1036.
196. Upreti G.C., Oliver D.M., Dyganzich D.M. Development of a chemically ram semen diluent (RSD-1). / Upreti G.C., Oliver D.M., Dyganzich D.M. // Anim. Reprod. Sci. 1995. - v. 37. - p. 143-157.
197. Vishwanath R., Shannon P. Storage of bovine semen in liquid and frozen state. / Vishwanath R., Shannon P. // Anim. Reprod. Sci. 2000. - v. 62. -p. 25-53.
198. Wakim P.E. Determining the sex of baby rabbits by as certaining the pH of the vagina of the mother before mating. / Wakim P.E. // J. Am. Osteopath. Assoc. 1972. - v. 72. - p. 173-176.
199. Watson P.F. The interaction of egg-yolk and ram spermatozoa. Studies with a fluorescent probe. / Watson P.F. // J. Reprod. Fertil. 1975. - v. 42. - № 1. -p. 105-111.
200. Watson P.F. The preservation of semen in mammals. / Watson P.F. // Oxford. Rev. Reprod. Biol. 1979. - v. 1. - p. 283-350.
201. Watson P.F. The role of lipid and protein in the protection of ram spermatozoa at 5°C by egg yolk lipoprotein. / Watson P.F. // J. Reprod. Fertil. -1981.- v. 62.-p. 483-493.
202. Watson P.F., Martin J.C. Effect of egg yolk, glycerol and freezing rate on the viability of frozen bull spermatozoa. / Watson P.F., Martin J.C. // Austr. J. Biol. Sci. 1975. - v. 28. - № 2. - p. 153-159.
203. Welch G.R., Johnson L.A. Sex preselection: laboratory validation of the sperm sex ratio'of flow sorted X- and Y- sperm by sort reanalysis for DNA. / Welch G.R., Johnson L.A. // Theriogenology. 1999. - v. 52. - p. 1343-1352.
204. Woelders H. Fundamentals and recent development in cryopreservation of bull and boar semen. / Woelders H. // Vet. Q. 1997. - v. 19. - p. 135-138.
205. Wrathall A.E. Risk of transmitting scrapic and bovine spongiform encephalopathy by semen and embryos. / Wrathall A.E. // Dev. Sci. Tech. OIE.-1997. v. 16.-№ 1. - p. 240-264.
206. Wilson R.D., Weigel K.A., Fricke P.M. e.a. In vitro production of Holstein embryos using sex-sorted sperm-and ¡oocytes from selected cull cows. / Wilson R.D., Weigel K.A., Fricke P.M. // J. Dairy Sci. 2005. - v. 88. - p. 776782.
207. Yamamoto T., Kajishima T. Sex hormone induction of sex reversal in the goldfish and evidence for male heterogamety. / Yamamoto T., Kajishima T. // J. Exp. Zool. 1968. - v. 168. - p. 2-10.
208. Zavos P.M. Sperm separation attempt via the use of albumin gradient in rabbits. / Zavos P.M. // Theriogenology. 1985. - v. 88. - p. 776-782.
209. Xu J., Guo Z., Su L. Developmental potential of vitrified Holstein cattle embryos fertilized in vitro with sex-sorted sperm. / Xu J., Guo Z., Su L. // J. Dairy Sci. 2006. - v. 89. - p. 2510-2518.
-
Дунин, Михаил Иванович
-
кандидата биологических наук
-
п. Лесные Поляны Московской обл., 2010
-
ВАК 06.02.07
- Регуляция воспроизводительной функции высокопродуктивных коров и телок черно-пестрой породы
- ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИЕ И ОРГАНИЗАЦИОННО-ТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ ПОВЫШЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ ВОСПРОИЗВОДСТВА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
- Совершенствование системы воспроизводства коров и телок с использованием нового устройства ИПБ
- ВЛИЯНИЕ БУСЕРЕЛИНА И СЕЛЕМАГА НА ВОСПРОИЗВОДИТЕЛЬНУЮ ФУНКЦИЮ КОРОВ И ТЕЛОК
- Связь возраста первого осеменения с воспроизводительными качествами коров чёрно-пёстрой породы при разных вариантах подбора
