Фармакотоксикологическая характеристика нового комплексного антигельминтного препарата вигисокс

Варламова, Анастасия Ивановна

Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Фармакотоксикологическая характеристика нового комплексного антигельминтного препарата вигисокс
ВАК РФ 06.02.03, Звероводство и охотоведение

Автореферат диссертации по теме "Фармакотоксикологическая характеристика нового комплексного антигельминтного препарата вигисокс"

На правах рукописи

Варламова Анастасия Ивановна

ФАРМАКОТОКСИКОЛОПІЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА НОВОГО КОМПЛЕКСНОГО АНТИГЕЛЪМИНТНОГО ПРЕПАРАТА ВИГИСОКС

06.02.03 - ветеринарная фармакология с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

г 1 моя гт

Москва-2013

005538488

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина» (ФГБОУ ВПО МГАВМиБ).

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук,

профессор Данилевская Наталья Владимировна

Официальные оппоненты:

Мирзаев Микаиль Нурбагандович, доктор биологических наук, профессор, заведующий НИЛ иммуннобиотехнологии ФГБОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина» (ФГБОУ ВПО МГАВМиБ);

Морозова Анна Владимировна, кандидат ветеринарных наук, старший научный сотрудник отдела качества и стандартизации фармакологических лекарственных средств ФГБУ «Всероссийского государственного центра качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГБУ «ВГНКИ»);

Ведущая организация: ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии Российской академии сельскохозяйственных наук» (ГНУ ВНИИВСГЭ Россельхозакадемии).

Защита состоится 2013 г. в // ч. на заседании диссерта-

ционного совета Д 22(^045.05. при ФГБОУ ВПО «Московская государственной академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина» (109472, г. Москва, ул. Академика Скрябина, д. 23; тел.: 8(495)3779383).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО МГАВМиБ

Ученый секретарь диссертационного совета

Волчкова Л.А.

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Одним из резервов повышения продуктивности жвачных животных является предотвращение экономического ущерба, причиняемого гельминтозами вследствие падежа и значительного снижения роста и развития молодняка, а также количества и качества продукции.

К числу широко распространенных заболеваний жвачных животных в России относится мониезиоз (В.Я. Шубадеров, 1972; М.Ш. Акбаев, 1986). По данным ряда исследователей зараженность овец и крупного рогатого скота Moniezia spp. в отдельных регионах страны достигает 80-100 % (В.А. Потемкина, 1965; М.И. Кузнецов, 1972; P.A. Магомедов, 2002; А.Х. Цоло-ев, 2002; Е.Е. Белова, 2005). Мониезиоз причиняет большой экономический ущерб вследствие падежа овец, особенно ягнят при высокой степени зараженности, а также из-за снижения их продуктивности. По обобщенным данным Р.Т. Сафиуллина (1997) потери при мониезиозе овец составляют от снижения прироста массы тела 4,16 кг, настрига шерсти - 0,42 кг, а летальность достигает 7,1 %. Большой ущерб причиняют стронгилятозы пищеварительного тракта. От одной овцы недополучают в год 6 кг прироста массы тела и 0,32 кг шерсти, а летальность достигает 12 %. Между тем, нематодо-зы распространены повсеместно, особенно при пастбищной технологии содержания (A.B. Родионов, 2012).

Основным методом борьбы с мониезиозом жвачных до сих пор остается дегельминтизация, которую проводят согласно существующей Инструкции (1999) трехкратно: первый раз через 25-30 сут после выгона овец на пастбище, повторно - через 15-20 сут после первой и третий раз - через 25-30 сут после второй дегельминтизации. Для лечения и профилактики мониезиоза предложены фенасал и его лекарственные формы, альбендазол, сульфат меди и другие препараты (И.А. Архипов, М.Б. Мусаев, В.Е. Абрамов, 2004; И.А. Архипов, 2009). Однако фенасал в странах СНГ не производится. Применяемые лекарственные формы альбендазола не эффективны против неполовозрелых мониезий. Необходимо учитывать и то, что мониезиоз, особенно вызываемый Moniesia benedeni, и стронгилятозы пищеварительного тракта мелкого рогатого скота часто встречаются в форме смешанной инвазии. А несоблюдение зоогигиенических мероприятий еще более усугубляет течение болезни (Кочиш И.И., Калюжный Н.С., Волчкова Л.А., Нестеров В.В., 2008). В связи с этим был разработан комбинированный пре-

парат на основе фенасала и фенбеидазола - вигисокс, полагая, что он будет более эффективным как против цестод, так и нематод.

Цель и задачи исследований'. Целью нашей работы явилось изучение фармакотоксикологических свой|тв и эффективности нового отечественного антигельминтика вигисокса при основных гельминтозах овец.

Для выполнения поставленной радачи мы считали необходимым изучить:

- параметры острой пероральной и накожной токсичности вигисокса;

- раздражающее действие вигисокса на кожу и слизистые оболочки;

- субхроническую токсичность и кумулятивное действие вигисокса;

- эмбриотропные свойства и антимитотическое действие;

- эффективность вигисокса при основных гельминтозах овец;

- сроки выведения фенасала, фенбендазола и его метаболита у овец после дегельминтизации вигисоксом;

- влияние вигисокса на организм клинически здоровых овец.

Научная новизна. Впервые установлена высокая эффективность нового

отечественного препарата вигисокс при мониезиозе, диктиокаулезе и желудочно-кишечных стронгилягозах овец. Дана фармакотоксикологическая характеристика вигисокса. Установлены параметры острой пероральной и накожной токсичности, субхронической токсичности. Показано, что препарат не обладает раздражающим, кумулятивным, эмбриотоксическим и тератогенным действиями. Вигисокс в терапевтической, 3 и 5 раз увеличенной дозах не оказывает отрицательного влияния на клинические, гематологические и биохимические показатели клинически здоровых овец. Изучена динамика выведения фенасала, фенбендазола и его метаболита - оксфенда-зола из организма овец и установлены сроки ожидания для возможного убоя и использования мяса в пищу после лечения животных вигисоксом.

Научная новизна работы подтверждена полученным Патентом на изобретение «Антигельминтное средство» № 2452489 от 10.06.2012 г.

Практическая значимость. Установлены терапевтические дозы вигисокса для рациональной фармакотерапии основных гельминтозов овец. Экспериментально обоснованы сроки убоя животных на мясо после дегельминтизации вигисоксом. На основании проведенных исследований по оценке фармакотоксикологических свойств вигисокса и обобщения полученных результатов разработана одобренная секцией «Инвазионные болезни животных» отделения ветеринарной медицины РАСХН, протокол N° 2,

23 мая 2013 г «Методика применения вигисокса при гельминтозах жвачных животных».

Основные положения, выносимые на защиту:

- параметры острой и субхронической токсичности и другие показатели фармакотоксикологических свойств вигисокса на лабораторных животных;

- результаты изучения эффективности комплексного антигельмшггного препарата на основе фенасала и фенбендазола - вигисокса при основных гельминтозах овец, титрация терапевтической дозы;

- влияние вигисокса на организм овец;

- результаты изучения динамики выведения вигисокса из организма животных.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены на следующих научно-практических конференциях: Научная конференция Всероссийского общества гельминтологов РАН «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» (г. Москва, 2012, 2013 гг.); II Международный конгресс ветеринарных фармакологов и токсикологов, г. С.-Петербург, 2012 г.; научная конференция, посвященная 90-летию М.И.Рабиновича, г. Троицк, 2012 г.; IV съезд ветеринарных фармакологов и токсикологов России «Актуальные вопросы ветеринарной фармакологии, токсикологии и фармации», г. Москва, 2013 г.; секция «Инвазионные болезни животных» отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии, г. Москва, 2013 г., протокол № 2. Диссертационная работа утверждена на межкафедральном совещании по предварительной экспертизе диссертации в ФГБОУ ВПО МГАВМиБ, г. Москва, 2013 г.

Публикации. По материалам исследований опубликовано 10 работ, из них 3 в изданиях, рекомендованных ВАК РФ, в которых изложены основные положения и выводы по изучаемым вопросам. Получен патент на изобретение.

материалов, а также результатов исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка литературы, содержащего 87 отечественных и 101 иностранных источников. Работа иллюстрирована 36 таблицами и 20 рисунками. Приложение на 7 страницах.

2. Собственные исследования 2.1. Материалы и методы

Научные исследования проведены в 2010-2013 гг. на базе кафедры фармакологии и токсикологии им. И.Е. Мозгова ФГБОУ ВПО МГАВМиБ, хозяйствах Самарской области. Объект исследований - вигисокс, новый комплексный антигельмшггный препарат на основе фенасала, фенбевдазола и вспомогательных компонентов. Проведено 18 научно-производственных экспериментов (табл. 1). В экспериментальных исследованиях использовали 134 белые крысы, 20 белых мышей, 4 кролика, 490 овец. Выполнено 60 общеклинических, 84 гематологических, 84 биохимических, 936 гельминтологических исследований и гистологическое изучение 90 образцов плодов и внутренних органов крыс.

Таблица 1 — Перечень экспериментов

№ Эксперимент Место проведения, год Объект/кол-во голов

1 2 3 4

1 Острая токсичность виги-сокса при введении в желудок Виварий ФГБОУ ВПО МГАВМиБ белые крысы /12, белые мыши/20

2 Острая токсичность виги-сокса при нанесении на кожу Виварий ФГБОУ ВПО МГАВМиБ белые крысы /12

3 Раздражающее действие ви-гисокса на кожу и слизистые оболочки Виварий ФГБОУ ВПО МГАВМиБ белые крысы /12, кролики/4

4 Кумулятивные свойства ви-гисокса Виварий ФГБОУ ВПО МГАВМиБ белые крысы/20

5. Субхроническая токсичность вигисокса Виварий ФГБОУ ВПО МГАВМиБ белые крысы/24

6. Оценка вигисокса на эм-бриотоксическое и тератогенное действие Виварий ФГБОУ ВПО МГАВМиБ белые крысы/42

7. Ашимиготическое действие вигисокса Виварий ФГБОУ ВПО МГАВМиБ белые крысы /12

8. Тиграция терапевтической дозы вигисокса при М01ше-зиозе овец колхоз «Красный путь» Пестравского района Самарской области овцы породы ставропольский меринос/ 44

Продолжение таблицы 1

1 2 3 4

9. Титрация терапевтической дозы вигисокса при стронги-лятозах пищеварительного тракта овец колхоз «Красный пуп.» Пестравского района Самарской области овцы порода ставропольский меринос/44

10. Эффективность вигисокса при дикпюкаулезе овец ООО «Юг-Поволжья» Большечерниговского района Самарской области овцы цигайской породы/36

11. Эффективность вигисокса при трихоцефалезе овец ООО «Юг-Поволжья» Большечерниговского района Самарской области овцы цигайской породы / 24

12. Действие антигельминти-ков против мониезий разного возраста колхоз «Красный путь» Пестравского района Самарской области овцы породы ставропольский меринос / 30

13. Эффективность вигисокса против аноплоцефалят разных видов хозяйства Пестравского, Большечерниговского и Борского районов Самарской области овцы цигайской породы и породы ставропольский меринос/ 42

14. Действие антигельминти-ков на яйца моииезий колхоз «Красный путь» Пестравского района Самарской области овцы породы ставропольский меринос / 30

15. Влияние вигисокса на организм овец экспериментальное хозяйство «Курилово» Подольского района Московской области овцы цигайской породы / 20

16. Сроки выведения действующих веществ вигисокса из организма экспериментальное хозяйство «Курилово» Подольского района Московской области овцы цигайской породы /12

17. Комиссионное испытание вигисокса при смешанной инвазии овец колхоз «Красный путь» Пестравского района Самарской области овцы породы ставропольский меринос / 100

18. Производственное испытание вигисокса при легочных и желудочно-кишечных стронгилятозах овец колхоз «Красный путь» Пестравского района Самарской области овцы породы ставропольский меринос / 108

Токсикологические свойства вигисокса изучали в соответствии с «Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (2005) и Правилами лабораторной практики в РФ (Приказ Министерства Здравоохранения Российской Федерации № 708н от 23.08.2010). Опыты на животных проводили согласно правил, принятых Европейской Конвенцией по защите позвоночных животных, ис-

пользуемых для экспериментальных и иных научных целей (Страсбург, 1986) и Приказа МЗ СССР № 755 от 12.08.1977 г. Ежедневно у крыс регистрировали массу тела, используя весы ВР-0,5 МС-3/0,5-БР, РФ. Необходимые навески препарата взвешивали на весах BCJI-60/0,lA, Россия. Основные показатели периферической крови крыс определяли на гематологическом анализаторе «Swelab-970» (США). Биохимические показатели крови определяли на анализаторе «Clima МС-15» (Испания). Гистологические срезы внутренних органов готовили на микротоме «Microm НМ325» (Германия) и окрашивали гематоксилин-эозином. Микроскопические препараты исследовали под микроскопом «Prima star» (Швейцария) при увеличении 90 х 10. Влияние вигисокса на эмбриональное развитие крыс изучали согласно «Методическим рекомендациям по доклиническому изучению репродуктивной токсичности фармакологических средств», утвержденных Минздравом РФ (1998). Состояние внутренних органов плодов изучали под стереомикроскопом МБС-2 на 9 сагитальных срезах, сделанных лезвием бритвы. Изучение сроков выведения действующих веществ вигисокса из организма овец проводили методом хроматографирования с использованием жидкостного хроматографа высокого давления WATERS с ультрафиолетовым детектором, обращеннофазовой колонки LUNA С18 (250><4,6 мм) и программы «Breeze». Эффективность препаратов учитывали по результатам количественных копроовоскопических исследований овец флотационным методом (Г.А. Котельников, 1984) и методом Бермана. Использовали счетную камеру ВИГИС для учета количества яиц мониезий в 1 г фекалий. Действие вигисокса на яйца мониезий изучали по методу Ф.А. Волкова (1975) на основании изучения морфологии и структуры яиц, а также по методу А.Х. Цолоева (2002) путем добавления на каплю с яйцами мониезий одной капли 5 %-го раствора йода.

Титрация терапевтической дозы вигисокса при мониезиозе овец. 44 овцы, спонтанно инвазированные мониезиями (по результатам предварительных исследований проб фекалий методом флотации) разделили по принципу пар аналогов на 4 подопытные и одну контрольную группы по 8-10 голов в каждой. Животные 1, 2 и 3-й подопытных групп получали индивидуально перо-рально комбинированный препарат в дозах соответственно 40, 50 и 60 мг/кг. Овцы четвертой подопытной группы получали базовый препарат - фенасал в дозе 60 мг/кг. Эффективность препаратов учитывали по результатам количе-

ственных копроовоскопических исследований овец всех групп флотационным методом до и через 10 сут после введения препаратов.

Титрация терапевтической дозы вигисокса при стронгилятозах пищеварительного тракта. Овцы 1, 2 и 3-й подопытных групп получали индивидуально перорапьно вигисокс в дозах соответственно 40, 50 и 60 мг/кг. Овцы 4-й группы получали базовый препарат фенбеццазол в дозе 5 мг/кг. Животные пятой группы препарат не получали и служили контролем. Учет эффективности препаратов проводили как и при мониезиозе.

Эффективность вигисокса при диктиокаулезе овец. Животных разделили по принципу аналогов на 3 группы по 12 голов. Овцам первой группы назначали однократно пероралыго вигисокс в дозе 50 мг/кг. Животным второй группы задавали базовый препарат фенбендазол (субстанция) в дозе 5 мг/кг. Овцы третьей группы препарат не получали и служили контролем. Эффективность препаратов учитывали по результатам исследований проб фекалий овец всех групп методом Бермана до и через 18 суток после введения препаратов.

Эффективность вигисокса при трихоцефалезе овец. Овец разделяли на три подопытные группы и одну контрольную группу по 8 голов в каждой. Овцам первой, второй и третьей группы задавали вигисокс в дозах соответственно 60, 70 и 80 мг/кг. Животные третьей группы препарат не получали и служили контролем. Эффективность препарата оценивали по результатам количественных копроовоскопических исследований методом флотации до и через 18 суток после введения препарата.

Действие ангигельминтиков против мониезий разного возраста изучали на 30 овцах породы ставропольский меринос, спонтанно инвазированных Мопіегіа схрапэа по результатам предварительных исследований проб фекалий методом флотации. Овцам первой подопытной группы назначали вигисокс в дозе 60 мг/кг однократно перорально. Животным 2,3,4 и 5-й групп задавали однократно перорально соответственно празиквантел, фенбендазол, альбендазол и никлозамвд в дозах соответственно 3,0; 10; 10 и 100 мг/кг. Овцы пятой группы препарат не получали и служили контролем. Эффективность препаратов методом флотации до и через 7 суток после введения препаратов. Для определения возраста мониезий учитывали их размер, а также наличие зрелых яиц с онкосферой в последних члениках стробилы.

Эффективность вигисокса против аноплоцефалят разных видов изучали в летне-осенний период 2012 г. на 42 овцах, спонтанно инвазированных М. expansa (16 тол.), М. benedeni (15 гол.) и Th. giardi (11 гол.). Вигисокс назначали овцам однократно перорально в дозе 60 мг/кг с концентрированным кормом. Учет эффективности препарата проводили через 7 суток после дегельминтизации путем исследования проб фекалий животных методом флотации.

Действие вигисокса на яйца мониезий изучали по морфологии и структуре яиц (Ф.А. Волков, 1975) , а также по методу А.Х. Цолоева (2002) путем добавления на каплю с яйцами мониезий одной капли 5 %-го раствора йода

Влияние вигисокса на организм овец. Овцам 1,2 и 3-й групп назначали вигисокс перорально индивидуально однократно в терапевтической, три и пять раз увеличенной дозах (60; 180 и 300 мг/кг). Овцы 4-й группы препарат не получали и служили контролем. Все исследования проводили за сутки до и через 1, 3 и 5 суток после дачи вигисокса. По общепринятым методикам изучали общее клиническое состояние животных и проводили гематологические и биохимические исследования.

Динамику выведения вигисокса из организма овец после введения вигисокса изучали совместно с к.ф.н. И.Е. Шумакович. Определение фенбендазо-ла, его метаболита — оксфендазола и фенасала в органах и тканях овец проводили методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с ультрафиолетовым детектированием. Чувствительность метода 0,05 мкг/кг. Оптимальными параметрами хроматографирования остаточных количеств феибендазо-ла и его метаболита - оксфендазола из органов и тканей овец, были следующие: обращеннофазовая хроматографическая колонка LUNA С18 (250><4,6 мм) с диаметром сорбента 5 мкм; элюент: ацетоншрил/0,05 М раствор углекислого аммония в соотношении 40/60; скорость протекания элюента - 1 см3/мин; объем вводимой пробы - 50 мкл; спектр УФ-волны: 290 нм; время удерживания оксфендазола ~ 9 мин., фенбендазола ~ 23 мин. Оптимальные условия хроматографирования фенасала были достигнуты при следующих параметрах: обращеннофазовая хроматографическая колонка LUNA С18 (250x4,6 мм) с диаметром сорбента 5 мкм; элюент: ацегошприл/дист. вода (рН 3,0-3,5); скорость протекания элюента - 1 см3/мин; объем вводимой пробы - 50 мкл; спектр УФ-волны: 340 нм; время удерживания фенасала: ~ 14,0 мин.

Комиссионное испытание вигисокса при смешанной инвазии овец. Вигисокс в дозе 60 мг/кг задавали овцам (30 голов) разного возраста, спои-

танно инвазированным мониезиями (Мопіегіа Ьепесіепі), стронгилятами пищеварительного тракта. В качестве базового препарата использовали фенбендазол в дозе 5 мг/кг на 20 овцах. Эффективность препаратов учитывали по результатам копроовоскопических исследований до и через 15 суток после дегельминтизации.

Производственное испытание вигисокса при желудочно-кишечных стронгилятозах овец. Вигисокс назначали животным однократно в дозе 60 мг/кг в смеси с 0,3 кг овсяной дерти (на 1 голову) путем групповой дачи с кормом. Эффективность препарата учитывали по результатам копроовоскопических исследований до и через 18 суток после дегельминтизации.

Данные всех опытов обрабатывали статистически по методу Стыодента-Фишера.

2.2. Результаты исследований 2.2.1. Токсикологические свойства вигисокса 2.2.1.1. Острая токсичность вигисокса при введении в желудок

Установили, что введение в желудок вигисокса в тестируемых дозах: для белых мышей - 10000 мг/кг и белым крысам 6000 мг/кг ни в одном случае не вызывало гибели животных. У животных обоих видов не отмечали признаков интоксикации. Они сохраняли обычную двигательную активность, охотно потребляли корм и воду и после введения препарата динамично прибавляли в массе тела. Доза препарата 6000 мг/кг являлась максимально возможной для впутрижелудочного введения крысам и 10000 мг/кг - мышам. В связи с этим ЛД50 будет превышать 6000 мг/кг при введении в желудок белым крысам и 10000 мг/кг - мышам, что позволяет сделать вывод о том, что животные не обладают видовой чувствительностью к препарату. Согласно ГОСТа 12.1.007-76 вигисокс относится к IV классу малоопасных веществ.

2.2.1.2. Острая токсичность вигисокса при нанесении на кожу

При аппликации вигисокса на кожу в дозах 3000 и 6000 мг/кг у животных наблюдали адекватную реакцию на нанесение чужеродного вещества; каких-либо симптомов интоксикации, изменений состояния и поведения крыс не отмечали в течение всего периода наблюдений, т.е. 14 суток. Вместе с тем доза 6000 мг/кг была максимально возможной для аппликации на кожу. С уче-

том этого ограничивающего фактора ЛД50 вигисокса будет превышать 6000 мг/кг (IV класс опасности по ГОСТ 12.1.007-76).

2.2.1.3. Раздражающее действие вигисокса на кожу и слизистые оболочки

Препарат в дозах 3000 и 6000 мг/кг не оказывал отрицательного воздействия на неповрежденную кожу крыс. Примерно через 10 сут после нанесения препарата кожа покрылась ровным шерстным покровом. При оценке влияния препарата на конъюнктиву глаза при внесении 1%-ной суспензии вигисокса кроликам за исключением адекватной реакции у животных на внесение инородного тела, никаких других признаков не наблюдали. Таким образом, вигисокс не проявил раздражающего действия на неповрежденную кожу крыс и слизистую оболочку глаз кроликов.

2.2.1.4. Кумулятивные свойства вигисокса

При введении препарата в течение двух месяцев в дозе 1/10 от максимально возможной для внутрижелудочного введения крысам суммарная доза, полученная животными, составила 26400 мг/кг. При введении дозы 1/20 от дозы максимально возможной для внутрижелудочного введения крысам суммарная доза 13200 мг/кг. Падежа крыс в обеих подопытных группах не отмечали. Так как, отсутствовала гибель животных, то нам не удалось определить коэффициент кумуляции. Следовательно, можно сделать вывод о том, что вигисокс не обладает кумулятивными свойствами.

2.2.1.5. Субхроническая токсичность вигисокса

При ежедневном введении вигисокса в трех тестированных дозах (1200, 600 и 300 мг/кг) внешних признаков токсикоза и гибели крыс не наблюдали в течение всего опытного периода. Динамика живой массы крыс разных групп позволяет заключить, что введение вигисокса в указанных дозах не оказало существенного влияния на этот параметр. Массовые коэффициенты органов у животных двух опытных групп колебались в пределах контрольных значений и референтнаых значений для данного вида животных. В частности, значение относительной массы печени у крыс, получавших вигисокс в дозах 1/5,1/10 и 1/20 от дозы максимально возможной для внутрижелудочного введения крысам - 6000 мг/кг, составило 12,57±0,45 г; 12,68±0,35 и 12,64±0,33 г против контрольного значения 12,83±0,26 г, почек - 1,94±0,03 г; 2,01±0,07 и

1,84±0,03 г против 2,03±0,05 г в контроле и сердца - 1,17±0,08 г; 1,09±0,07 и 1,19±0,06 г против 1,25±0,04 г в контроле (Рис. 1).

Рисунок 1 - Влияние вигисокса на массовые коэффициенты органов

Препарат в дозах 1200, 600 и 300 мг/кг/сутки не оказал достоверного влияния на гематологические показатели. В частности, уровень гемоглобина у крыс, получавших вигисокс в дозах 1200, 600 и 300 мг/кг/сутки равнялся 10,62±1,74; 9,71±2,21 и 11,70±0,97 против контрольного значения 9,77±1,92 г%; количество эритроцитов составляло 4,59±0,95; 5,83±0,52 и 5,34±0,43 против 5,63±0,88 млн/мм3; число лейкоцитов равнялось 6, 80±1,82, 7,73±1,44 и 6,91±2,00 против 8,11±2,46 тыс./мм3 и т.д. (Рис. 2).

Протестировано 10 биохимических показателей, отражающих состояние белкового, жирового и углеводного обмена. В частности, уровень общего белка у крыс, получавших вигисокс в дозах 1200, 600 и 300 мг/кг/сутки равнялся 69,10±4,24; 67,40±4,11 и 67,85±4,37 против контрольного значения 67,80±0,36 г/л; количество глюкозы составляло 3,20±0,56; 3,42±0,35 и 3,35±0,55 против 3,50±0,28 ммоль/л, значения амилазы равнялись 476,15±17,35; 514,70±51,55 и 534,18±35,44 против 483,00±29,08 Ед/л и т. д. (табл. 2)

Статистически значимых изменений по сравнению с контролем не установили.

Сегментоядернь • 25,25%

Моноциты - 2,25 %__^

ЭОЗИНОфиЛЫ-_ _ ~-ЛИМфОЦИТЫ

3,25% / 69,25%

"Шг

Рисунок 2 - Влияние вигисокса в дозе 1200 мг/кг на лейкограмму

Таблица 2 - Влияние вигисокса в дозах 1200, 600 и 300 мг/кг/сутки при введении в течение 2 месяцев на биохимические показатели крыс (п = 6, М±т)

Показатель Доза, мг/кг/сутки Контроль

1200 600 300

Общий белок, г/л 69,10±4,24 67,40±4,11 67,85±4,37 67,80±0,36

Альбумин, г/л 32,00±3,19 30,25±4,28 32,15±3,24 30,00±5,91

Креатинин, мкмоль/л 41,35±4,25 41,42±3,59 39,95±3,74 39,82±3,95

Мочевина, ммоль/л 12,20±1,68 11,27±1,17 10,15±1,04 10,52±1,23

АЛТ, Ед/л 59,75±2,34 69,25±3,59 60,75±2,92 64,25±9,87

ACT, Ед/л 162,75±32,68 178,50±39,28 166,81±33,4 183,1±36,65

Щелочная фосфатаза, Е/л 61,25±1,93 62,25±9,80 63,15±8,34 52,75±1,65

Амилаза, Ед/л 476,15±17,35 514,70±51,55 534,18±35,44 483,00±29,08

Глюкоза, ммоль/л 3,20±0,56 3,42±0,35 3,35±0,55 3,50±0,28

Примечание: Р > 0,05

Функциональное состояние почек не претерпело отрицательных изменений при введении вигисокса в трех различных дозах, поскольку уровень креа-тинина и мочевины был сравним с контрольными значениями. В ходе пато-морфологического исследования макроскопических изменений органов и тканей выявлено не было. При микроскопическом исследовании проб печени, селезенки и других внутренних орагнов крыс, получавших препарат в трех дозах, не отмечали патологических изменений.

2.2.1.6. Оценка вигисокса на эмбриотоксическое и тератогенное действие

При введении вигисокса на 1-6; 7-14 и 15-19 сутки эмбриогенеза не отмечали изменений в состоянии и поведении крыс-самок, видимых нарушений беременности и падежа. Прирост массы тела подопытных самок не отличался от прироста животных контрольной группы. При исследовании эмбрионального материала от подопытных крыс показатели гибели плодов не отличались от таковых у контрольных животных. Предимплантацион-ная, постимплантационная гибель и общая эмбриональная смертность при введении вигисокса на 1-6; 7-14 и 15-19 сутки беременности составила соответственно 4,56+0,13, 5,45+0,52 и 6,81±1,01; 5,62+0,84, 3,57+0,44 и 5,20+1,68; 13,15+5,42, 12,64+5,04 и 12,33±2,98 % против контрольных значений 4,15+0,88, 4,45+1,01 и 13,26±3,91 % (табл. 3).

Плоды с аномалиями развития отсутствовали. В ходе исследования сагиттальных срезов было выявлено отсутствие аномалий развития. Продолжительность и течение беременности у подопытных самок находились на уровне контроля и физиологической нормы для данного вида животных. В ходе ежедневного взвешивания беременных крыс было установлено, что животные последовательно прибавляли в массе тела. Течение родов было без патологии. Все крысята родились жизнеспособными. Масса и размеры плодов достоверно не отличались от соответствующих контрольных значений. Физическое развитие потомства протекало без отклонений от нормы. Отлипание ушных раковин, появление первичного волосяного покрова, открытие глаз у крысят подопытной группы находились в пределах контрольных и характерных для данного вида животных. Формирование поведенческих реакций и рефлексов у крысят опытных групп было сравнимым с контролем и в сроки, характерные для данного вида животных. Во всех случаях препарат не индуцировал

развития внешних и внутренних аномалий, следовательно, можно говорить об отсутствии его тератогенного действия.

Таблица 3 - Влияние многократного введения вигисокса в различные периоды эмбриогенеза в трехкратной терапевтической дозе (180 мг/кг) на _пренатальное развитие крыс (п=6; М±т)_

Показатели Стадия эмбриогенеза, на которую вводили препарат (сутки)

1-6 7-14 15-19 Контроль

Предимплантацион-ная гибель, % 4,56+0,13 5,45+0,52 6,81+1,01 4,15+0,88

Постим плантационная гибель, % 5,62+0,84 3,57+0,44 5,20+1,68 4,45+1,01

Общая эмбриональная смертность, % 13,15+5,42 12,64+5,04 12,33+2,98 13,26+3,91

Случаи полной внутриутробной гибели 0 0 0 0

Масса плода, г 2,62+0,02 2,46+0,02 2,74+0,03 2,59+0,02

Краниокаудальный размер плода, см 3,13+0,03 3,01+0,05 3,22+0,03 3,07+0,02

Масса плаценты, г 0,56+0,01 0,55+0,01 0,61+0,02 0,59+0,01

Размер плаценты, см 1,47+0,01 1,56+0,02 1,50+0,01 1,53+0,02

Число плодов с внешними и внутренними аномалиями развития - - - -

Примечание: Р > 0,05

2.2.1.7. Антимитотическое действие вигисокса

Значения основного показателя митотической активности клеток, т.е. митотического индекса, при различных периодах экспозиции после введения вигисокса колебались от 0,38+0,29-0,53+0,32 до 0,41+0,27 % в контроле. Вигисокс не оказывал статистически значимого влияния на процентное число делящихся клеток. Относительное количество клеток на всех стадиях митоза было сопоставимым с таковым в контроле. Вигисокс не вызывал изменений митоза и для него не характерно антимитотическое действие.

2.2.2. Антнгельминтная эффективность вигисокса при основных гельминтозах овец 2.2.2.1. Титрация терапевтической дозы вигисокса при мониезиозе овец

Через 10 сут после введения вигисокса в дозе 60 мг/кг все животные полностью освободились от мониезий, о чем свидетельствует отсутствие яиц мониезий в фекалиях овец. Инвазированность овец контрольной группы в течение опыта изменялась несущественно (Р > 0,05). Среднее число яиц мониезий в г фекалий составило до опыта 255,7+13,2 и в конце опыта 260,4+12,8 экз. Базовый препарат - фенасал в дозе 60 мг/кг показал 86 %-ное снижение количества яиц мониезий в фекалиях овец. Следовательно, дозу вигисокса 60 мг/кг можно считать терапевтической при мониезиозе овец. Препарат в испытанных дозах хорошо переносился овцами.

2.2.2.2. Титрация терапевтической дозы вигисокса при стронгилятозах пищеварительного тракта овец

Результаты испытания вигисокса в разных дозах при желудочно-кишечных стронгилятозах свидетельствуют о 100 %-й эффективности препарата в дозе 60 мг/кг. Препарат хорошо переносился животными и не оказывал побочного действия на их организм. При стронгилятозах пищеварительного тракта овец вигисокс в дозах 40 и 50 мг/кг проявил соответственно 95 и 98,6 %-ное снижение количества яиц стронгилят в фекалиях при 90 %-ной экстенсэффективности. Базовый препарат - фенбендазол в дозе 5 мг/кг показал 94,7%-ный эффект по результатам учета числа яиц стронгилят до и после дегельминтизации.

2.2.2.3. Эффективность вигисокса при диктиокаулезе овец

Вигисокс в дозе 60 мг/кг показал 100 %-пую эффективность против Dictyocaulus filaría. Препарат в дозе 50 мг/кг по результатам копроларво-скопических исследований проявил 97,5 %-пую эффективность. Базовый препарат фенбендазол в дозе 5,0 мг/кг показал также хорошую переносимость, равную 97,6 %. Зараженность овец контрольной группы диктиокау-люсами в период опыта существенно не изменялась (Р > 0,05) и среднее число личинок диктиокаулюсов составило в г фекалий до опыта 150,6+11,8 и в конце опыта 154,8+12,0.

2.2.2.4. Эффективность вигисокса при трихоцсфалезе овец

Наилучшую эффективность вигисокс против трихоцефал показал в дозе 80 мг/кг. Препарат проявил 98,9 %-ную эффективность по результатам учета числа яиц нематод в фекалиях до и после лечения. При этом 6 из 7 обработанных овец полностью освободились от трихоцефал. Эффективность вигисокса в дозе 70 и 60 мг/кг составила соответственно 95,1 и 92,4 %. Учитывая недостаточно высокий эффект вигисокса против трихоцефал в дозе 60 мг/кг (рекомендуемая терапевтическая доза при других гельминто-зах) целесообразно для обеспечения более высокой эффективности дозу препарата повышать до 80 мг/кг.

22.2.5. Действие антигельминтиков против мониезий разного возраста

Эффективность против взрослых мониезий фенбендазола составила 84,0 % и альбендазола 88,0 %, а против неполовозрелых мониезий соответственно 64,3 и 75,0 %. Никлозамид и вигисокс показали одинаковую эффективность, равную против взрослых мониезий 100 % и против неполовозрелых 89,3 %. Эффективность празиквантела составила 100 % против неполовозрелых и взрослых мониезий. У молодняка овец контрольной группы обнаружили, в среднем, по 2,8+0,5 экз. неполовозрелых и 2,5+0,5 экз. имагинальных мониезий, из них 62 % составляли М. ехрапва и 3 8 % М. Ьепе<1еш.

Испытанные препараты оказались высокоэффективными против взрослых мониезий. Их эффективность против неполовозрелых мониезий была ниже кроме празиквантела. В связи с этим для проведения преимагиналь-ных дегельминтизаций животных целесообразно применять антигельмин-тики с учетом их действия против неполовозрелых мониезий.

2.2.2.6. Эффективность вигисокса против аноплоцефалят разных видов

14 из 16 овец, инвазированных М. ехраша, освободились после дачи вигисокса в дозе 60 мг/кг. Количество яиц М. ехрапБа снизилось с 142,4+8,4 до 3,0+0,6 экз., т.е. на 97,9 %. Эффективность вигисокса при мониезиозе овец, вызванной М. Ьепес1еги, оказалась практически аналогичной. Количество яиц М. Ьепеёеш в фекалиях леченых животных снизилось на 97,5 %. 98,9 %-ная эффективность получена нами при испытании вигисокса на овцах, инвазированных ТЬ. §1агсН. Количество яиц тизаниезий в фекалиях овец через 10 суток после дегельминтизации снизилось с 123,5+8,0 до 1,3+0,4 экз. При вскрытии овец из разных хозяйств, у которых после лече-

ния обнаруживали яйца аноплоцефалят в фекалиях, находили в тонком кишечнике по 1-2 экз. М. expansa и М. benedeni и 1 экз. Th. giardi.

2.2.2.7. Действие антигельминтиков на яйца мониезий

Вигисокс проявлял овоцидные свойства. На первые, вторые и третьи сутки после дегельминтизации овец вигисоксом в дозе 60 мг/кг нежизнеспособными оказались соответственно 45,0; 66,9 и 78,8 % яиц мониезий, выделяющихся с фекалиями. Учитывая полученные нами результаты о неполной гибели всех выделяющихся с фекалиями яиц цестод после дегельминтизации, целесообразно первые трое суток после лечения животных не выпасать на пастбище во избежание его контаминации инвазионными элементами.

2.2.3. Влияние вигисокса на организм овец

В результате исследований нами было установлено, что вигисокс в терапевтической (60 мг/кг) и в три и пять раз увеличенных (180 и 300 мг/кг) дозах не оказывает отрицательного влияния на общее клиническое состояние овец. Показатели клинического статуса овец, получавших антигель-минтный препарат в дозе 300 мг/кг, соответствовали референтному уровню для данного вида животных. Гематологические показатели подопытных овец на протяжении всего периода наблюдений были в переделах физиологической нормы и существенно не отличались от показателей овец до введения вигисокса (Р > 0,05).

При биохимическом исследовании крови подопытной группы овец, получавших дозу 300 мг/кг, на 1, 3 и 5-е сутки показатели активности амилазы были сравнимы с контрольной группой: 252,0+4,8; 252,6+5,0 и 251,7+5,2 Ед/л к 253,2+4,3; 253,4+5,0 и 252,6±4,9 Ед/л. Показатели активности щелочной фосфатазы подопытной группы овец, получавших препарат в дозе 300 мг/кг, на 1, 3, и 5 сутки были также сравнимы с показателями контрольной группы животных: 60,9+6,1; 61,3±5,9 и 59,0+5,8 Ед/л к 61,4+5,8; 60,2+5,8 и 59,4+5,6 Ед/л. Биохимические показатели общего билирубина, креатинина, мочевины, глюкозы у всех подопытных групп соответствовали физиологическим нормам. Таким образом, вигисокс в терапевтической и в 3 и 5 раз увеличенных дозах (180 и 300 мг/кг) не оказывает отрицательного влияния на клинический статус, гематологические и биохимические показатели овец, что свидетельствует о хорошей переносимости препарата животными этого вида.

2.2.4. Сроки выведения действующих веществ вигасокса из организма овец 2.2.4.1. Сроки выведения фенбендазола и его метаболита из организма

овец после введения вигисокса

Остаточные количества фенбендазола в максимальном количестве отмечены на первые сутки после обработки овец вигисоксом и соответствуют следующим значениям: в пробах печени - 2250,88+450,18 нг/г, селезенки — 708,26+141,65 нг/г, сердца - 355,14+71,03 нг/г, мышечной ткани — 277,59±55,52 нг/г. Отмечены высокие концентрации сульфоксида фенбендазола в тканях печени, почек и мышечной ткани через 3 суток после окончания обработки животных: 1054,27+210,85; 502,93+ 97,16 и 225,67+45,13 нг/г соответственно. В результате проведенных исследований установлено, что фенбендазол создает достаточно высокие концентрации в тканях печени, почек, мышечной ткани и др. органах в основном через сутки и трое суток после применения вигисокса. В то же время на 7-мые сутки в организме овец в большем количестве обнаруживаются остаточные количества его метаболита — оксфендазола, так, например, в печени его концентрация составляет 71,43+14,29 нг/г, в почках: 76,84+15,37, мышцах 86,08+17,21 нг/г. Однако на 10-ые сутки анализ фенбендазола и оксфендазола дал отрицательный результат во всех органах и тканях. Следовательно, период полного выделения остаточных количеств фенбендазола, сульфоксида из органов и тканей овец составляет 10 суток после окончания обработки.

2.2.4.2. Сроки выведения фенасала из организма овец после введения

вигисокса

Установлены максимальные концентрации фенасала в органах и тканях овец на первые сутки после обработки овец антигельминтиком и соотвест-вуют следующим значениям: в пробах печени - 4036,69+807,34; почек -1226,57+245,31; легких - 925,54+185,11; сердца - 713,07± 142,61; селезенки -581,84+116,37; жировой ткани - 8470,60+1694,12 нг/г; период полного выделения фенасала - 10 суток.

2.2.5. Комиссионное испытание вигисокса при смешанной инвазии овец

При нематодирозе овец количество яиц нематодирусов в фекалиях после дегельминтизации вигисоксом в дозе 60 мг/кг снизилось на 98,6 %, а 21 из 23 овец полностью освободились от нематодирусов. Эффективность вигисокса в терапевтической дозе при других сгронгилятозах пищеварительного тракта

составила 99,1 %. 23 из 25 леченых овец полностью освободились от желудочно-кишечных стронгилят. Препарат хорошо переносился животными и не вызывал побочного действия. Животные контрольных групп были инвазиро-ваны в равной степени и в конце опыта. Таким образом, при комиссионном испытании вигисокса в дозе 60 мг/кг при смешанной инвазии на 118 овцах получена эффективность, равная 100 % против мониезий, 98,6 % против не-матодирусов и 99,1 % против других видов желудочно-кишечных стронгилят.

2.2.6. Производственное испытание вигисокса при легочных и желудочно-кишечных стронгилятозах овец

По результатам копроовоскопических исследований животных до опыта экстенсинвазированность составила диктиокаулами 27,8 %, нематодируса-ми 54,2 % и другими видами желудочно-кишечных стронгилят 57,6 % (таблица 4).

Таблица 4 - Результаты производственного испытания вигисокса в дозе 60 мг/кг при стронгилятозах овец («критический тест»), п=62

Показатели Возбудители гельминтозов

D. filaria Nematodirus spp. Др. виды стронгилят

ЭИ, %, до опыта 27,8 54,2 57,6

ЭИ, %, после лечения 0 0,5 0,6

ЭЭ, % 100 99,1 98,9

Через 18 суток после дегельминтизации овец вигисоксом большинство животных полностью освободилось от гельминтов, о чем свидетельствует отсутствие инвазионных элементов в фекалиях леченых овец. Экстенсинвазированность овец нематодирусами после лечения составила 0,5 % и другими видами желудочно-кишечных стронгилят 0,6 %. Эффективность вигисокса в дозе 60 мг/кг оказалась равной при диктиокаулезе 100 %, нема-тодирозе 99,1 % и других стронгилятозах пищеварительного тракта 98,9 %. Вигисокс в испытанной дозе хорошо переносился овцами, не вызывал побочного действия.

Приблизительный расчет дополнительной стоимости, полученной за счет увеличения количества производимой продукции и повышения ее качества в результате применения более эффективного нового комплексного препарата вигисокс для терапии и профилактики цестодозов и нематодозов овец составит 3890 руб на 100 голов.

ВЫВОДЫ

1. Вигисокс безопасен для организма теплокровных животных. В максимально возможной по объему для введения в желудок белым крысам дозе 6000 мг/кг не отмечено признаков интоксикации и летальности. Вигисокс относится к 4 классу малоопасных веществ. ЛД50 вигисокса при нанесении на кожу крысам превышает 6000 мг/кг. Вигисокс не оказывает раздражающего действия на неповрежденную кожу крыс и слизистую оболочку глаз кроликов.

2. Вигисокс не обладает кумулятивным действием. Вводимые дозы (1200, 600 и 300 мг/кг) препарата безопасны для организма белых крыс при многократном введении. Препарат не оказывает влияния на гематологические и биохимические показатели, прирост массы тела.

3. Вигисокс не обладает эмбриотоксическим и тератогенногым действием при введении в желудок беременным крысам на 1-6; 7-14 и 15-19 сутки беременности в трехкратной терапевтической дозе (180 мг/кг по ДВ) и не оказывает отрицательного влияния на посганаталыюе развитие крыс. Вигисокс не проявляет шггимитотического действия в популяции клеток костного мозга.

4. Оптимальной терапевтической дозой вигисокса на овцах является доза 60 мг/кг, которая оказывает 100%-ную эффективность против мо-ниезий, стронгилят пищеварительного тракта и диктиокаул. При трихо-цефалезе вигисокс показал наилучшую эффективность в дозе 80 мг/кг. Эффективность против взрослых мониезий составила 100 %, против неполовозрелых мониезий - 89,3 %. Вигисокс в дозе 60 мг/кг эффективен при аноплоцефалятозах овец, вызванных разными видами: против Moniezia expansa 97,9 %, М. benedeni 97,5 % и Thizaniesia giardi 98,9 %. Вигисокс обладает овоцидным действием. На первые, вторые и третьи сутки после дегельминтизации овец препаратом в дозе 60 мг/кг нежизнеспособными оказались соответственно 45,0; 66,9 и 78,8 % яиц мониезий, выделяющихся с фекалиями.

5. Вигисокс в терапевтической, в 3 и 5 раз увеличенных дозах (60, 180 и 300 мг/кг) не оказывает отрицательного влияния на клинический статус, гематологические и биохимические показатели клинически здоровых овец, что свидетельствует о хорошей переносимости препарата животными этого вида.

6. Период полного выведения фенасала, фенбендазола, его основного метаболита — оксфендазола, входящих в состав вигисокса, из организма овец после лечения составляет 10 суток.

7. По данным комиссионных испытаний вигисокса в дозе 60 мг/кг при смешанной инвазии овец получена эффективность, равная 100 % против мо-ниезий, 98,6 % против нематодирусов и 99,1 % против желудочно-кишечных стронгилят других видов. При производственном испытании эффективность вигисокса в дозе 60 мг/кг оказалась равной при дикгиокаулезе 100 %, немато-дирозе 99,1 % и других стронгилятозах пищеварительного тракта овец 98,9 %.

Практические предложения

Установлена терапевтическая доза вигисокса для рациональной терапии основных гельминтозов овец. Препарат рекомендован для применения в качестве химиотерапевтического средства при нематодозах и цестодозах овец в дозе 60 мг/кг. На основании полученных результатов исследований разработана «Методика по применению вигисокса при гельминтозах жвачных животных», одобренная секцией «Инвазионные болезни животных» отделения ветеринарной медицины РАСХН (протокол № 2, 23 мая 2013 г.). Экспериментально обоснованы сроки убоя животных на мясо после дегельминтизации вигисоксом. Мясо и субпродукты овец, обработанных вигисоксом, можно использовать в пищевых целях не ранее чем через 10 суток.

Список работ, опубликованных по теме диссертации Статьи в рецензированных журналах

1. Архипова (Варламова), А.И. Антигельминтная эффективность вигисокса при гельминтозах овец / /И.А. Архипов, A.B. Радионов, Е.Е. Белова, K.M. Садов, А.И. Архипова // Российский паразитологический журнал. - 2010. -№4.-С. 89-93.

2. Варламова, А.И. Токсикологические свойства нового комплексного препарата вигисокс / А.И. Варламова, Н.В. Данилевская // Российский паразитологический журнал. - 2012. - № 1. - С. 91-97.

3. Варламова, А.И. Методика по применению вигисокса при гельминтозах жвачных животных / И.А. Архипов, А.И. Варламова, Н.В. Данилевская // Российский паразитологический журнал. - 2013. - №2. - С126-127.

Патенты

4. Архипова (Варламова), А.И. «Антигельмшггное средство» (вигисокс) / И.А. Архипов, А.И. Архипова, Д.Р. Архипова, Е.Е. Белова, K.M. Садов //

Патент на изобретение № 2452489, зарегистрировано в Государственном реестре изобретений Российской Федерации от 10 июня 2012 г.

Статьи в материалах конференций и нерецензируемых журналах

5. Варламова, А.И. Некоторые токсикологические свойства комплексного препарата вигисокс / А.И. Варламова // Материалы докладов научной конференции Всероссийского общества гельминтологов РАН «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». - Москва, 2012. - Вып. 13. — С.89-90.

6. Варламова, А.И. Испытания вигисокса при мониезиозе овец / А.И. Варламова, Н.В. Данилевская // Материалы II Международного Конгресса ветеринарных фармакологов и токсикологов. — Санкт-Петербург, 2012. — С.79-80.

7. Варламова, А.И. Острая и накожная токсичность комплексного препарата вигисокс / А.И. Варламова, Н.В. Данилевская // Материалы II Международного Конгресса ветеринарных фармакологов и токсикологов. — Санкт-Петербург, 2012. - С.80-82.

8. Варламова, А.И. Переносимость вигисокса на овцах / А.И. Варламова, Н.В. Данилевская, Е.Е. Белова // Материалы фармакологической научной конференции, посвященной 90-летию академика Рабинович М.И. — Троицк,

2012. -С. 24-29.

9. Варламова, А.И. Сроки выведения остаточных количеств фенбендазола из организма овец после применения вигисокса / А.И. Варламова, Н.В. Данилевская, И.Е. Шумакович // Материалы IV съезда ветеринарных фармакологов и токсикологов России «Актуальные вопросы ветеринарной фармакологии, токсикологии и фармации. - Воронеж: «Истоки», 2013. - С. 119-121.

10. Варламова, А.И. Эффективность вигисокса при мониезиозе овец и крупного рогатого скота / И.А. Архипов, А.И. Варламова, Н.В. Данилевская, Е.Е. Белова // Материалы докладов научной конференции «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». - Москва. - Вып. 14. —

2013. -С.29-31.

Подписано в печать:

07.11.2013

Заказ № 9035 Тираж - 100 экз. Печать трафаретная. Объем: 1,5 усл.п.л. Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш., 36 (499) 788-78-56 www.autoreferat.ru

Текст научной работыДиссертация по сельскому хозяйству, кандидата ветеринарных наук, Варламова, Анастасия Ивановна, Москва

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина»

04201365010

На правах рукописи

Варламова Анастасия Ивановна

ФАРМАКОТОКСИКОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА НОВОГО КОМПЛЕКСНОГО АНТИГЕЛЬМИНТНОГО ПРЕПАРАТА

ВИГИСОКС

06.02.03 - ветеринарная фармакология с токсикологией

Диссертация на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор Н.В. Данилевская

Москва-2013

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ...................................................................... 4

1. Обзор литературы............................................................ 8

1.1. Краткие сведения по распространению гельминтозов жвачных животных........................................................................

1.2. Эффективность фенбендазола и других препаратов при гельмин-

тозах овец................................................................................................................................................12

1.3. Эффективность фенасала и других препаратов при цестодозах жвачных животных........................................................................................................................18

1.4. Токсикологическая характеристика фенасала......................................................21

1.5. Токсикологические свойства фенбендазола............................................................25

1.6. Фармакокинетика фенасала и фенбендазола и сроки их выведения из организма..............................................................................................................................29

2. Собственные исследования................................................................................................33

2.1. Материалы и методы......................................................... 33

2.2. Результаты исследований................................................. 49

2.2.1. Токсикологические свойства вигисокса.................................. 49

2.2.1.1. Острая токсичность вигисокса при введении в желудок белым мышам и крысам............................................................... 49

2.2.1.2. Острая токсичность вигисокса при нанесении на кожу............... 50

2.2.1.3. Раздражающее действие вигисокса на кожу и слизистые

оболочки......................................................................................................................................................51

2.2.1.4. Кумулятивные свойства вигисокса..............................................................................52

2.2.1.5. Субхроническая токсичность вигисокса..................................................................52

2.2.1.6. Оценка вигисокса на эмбриотоксическое и тератогенное действие... 65

2.2.1.7. Антимитотическое действие вигисокса......................................................................69

2.2.2. Антигельминтная эффективность вигисокса при основных гель-минтозах овец..................................................................

2.2.2.1. Титрация терапевтической дозы вигисокса при мониезиозе овец... 70 2.2.2.2 Титрация терапевтической дозы вигисокса при стронгилятозах

пищеварительного тракта овец............................................................................................72

2.2.2.3. Эффективность вигисокса при диктиокаулезе овец..........................................72

2.2.2.4. Эффективность вигисокса при трихоцефалезе овец........................................73

2.2.2.5. Действие антигельминтиков против мониезий разного возраста... 77

2.2.2.6. Эффективность вигисокса против аноплоцефалят разных видов... 79

2.2.2.7. Действие антигельминтиков на яйца мониезий....................................................81

2.2.3. Влияние вигисокса на организм овец..............................................................................84

2.2.4. Сроки выведения действующих веществ вигисокса из организма овец................................................................................................................................................................88

2.2.4.1. Динамика выведения фенбендазола и его метаболита из организма животных........................................................................................................................................88

2.2.4.2 Сроки выведения фенасала из организма овец после введения ви- ^

гисокса............................................................................

2.2.5. Комиссионное испытание вигисокса при смешанной инвазии

овец................................................................................................................................................................98

2.2.6. Производственное испытание вигисокса при легочных и желудочно-кишечных стронгилятозах овец........................................................................99

3. Обсуждение полученных результатов........................................................................103

ВЫВОДЫ............................................................................................................................................109

ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ

РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ........................................................................111

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ....................................................................................................112

ПРИЛОЖЕНИЕ..............................................................................................................................132

ВВЕДЕНИЕ

К числу широко распространенных заболеваний жвачных животных в России относится мониезиоз (В.Я. Шубадеров, 1972; М.Ш. Акбаев, 1986). По данным ряда исследователей зараженность овец и крупного рогатого скота Moniezia spp. в отдельных регионах страны достигает 80-100 % (В.А. Потемкина, 1965; М.И. Кузнецов, 1972; P.A. Магомедов, 2002; А.Х. Цолоев, 2002; Е.Е. Белова, 2005). Мониезиоз причиняет большой экономический ущерб вследствие падежа овец, особенно ягнят при высокой степени зараженности, а также из-за снижения их продуктивности. По обобщенным данным Р.Т. Сафиуллина (1997) потери при мониезиозе овец составляют от снижения прироста массы тела 4,16 кг, настрига шерсти - 0,42 кг, а летальность достигает 7,1 %.

Большой ущерб причиняют стронгилятозы пищеварительного тракта. От одной овцы недополучают в год 6 кг прироста массы тела и 0,32 кг шерсти, а летальность достигает 12 %. Между тем, нематодозы распространены повсеместно, особенно при пастбищной технологии содержания (A.B. Ради-онов, 2012).

Основным методом борьбы с мониезиозом жвачных до сих пор остается дегельминтизация, которую проводят согласно Инструкции (1999) трехкратно: первый раз через 25-30 сут после выгона овец на пастбище, повторно - через 15-20 сут после первой и третий раз - через 25-30 сут после второй дегельминтизации. Для лечения и профилактики мониезиоза предложены фенасал и его лекарственные формы, альбендазол, сульфат меди и другие препараты (И.А. Архипов, М.Б. Мусаев, В.Е. Абрамов, 2004; И.А. Архипов, 2009). Однако фенасал в странах СНГ не производится. Применяемые лекарственные формы альбендазола не эффективны против неполовозрелых мониезий. Необходимо

учитывать и то, что мониезиоз, особенно вызываемый Moniezia benedeni, и

стронгилятозы пищеварительного тракта мелкого рогатого скота часто встречаются в форме смешанной инвазии. А несоблюдение зоогигиенических мероприятий еще более усугубляет течение болезни (Кочиш И.И., Калюжный Н.С., Волчкова Л.А., Нестеров В.В., 2008). В связи с этим был разработан комбинированный препарат на основе фенасала и фенбендазола - вигисокс, полагая, что он будет более эффективным как против цестод, так и нематод.

Цель н задачи исследований. Целью нашей работы явилось изучение фармакотоксикологических свойств и эффективности нового отечественного антигельминтика - вигисокса при основных гельминтозах овец.

Для выполнения поставленной задачи мы считали необходимым изучить:

- параметры острой пероральной и накожной токсичности вигисокса;

- раздражающее действие вигисокса на кожу и слизистые оболочки;

- субхроническую токсичность и кумулятивные свойства вигисокса;

- эмбриотропные свойства и антимитотическое действие;

- эффективность вигисокса при основных гельминтозах овец

- сроки выведения фенасала, фенбендазола и его метаболита у овец после дегельминтизации вигисоксом;

- влияние вигисокса на организм овец.

Научная новизна. Впервые установлена высокая эффективность нового отечественного препарата вигисокс при мониезиозе, диктиокаулезе и желудочно-кишечных стронгилятозах овец. Дана фармакотоксикологическая характеристика вигисокса. Установлены параметры острой пероральной и накожной токсичности, субхронической токсичности. Показано, что препарат не обладает раздражающим, кумулятивным, эмбриотоксическим и тератогенным действиями. Вигисокс в терапевтической, 3 и 5 раз увеличенной дозах не оказывает отрицательного влияния на клинические, гематологические и биохимические показатели клинически здоровых овец. Изучена динамика выведения фенасала, фенбендазола и его метаболита - оксфендазола из организма овец и установлены сроки ожидания для возможного убоя и использования мяса в пищу после лечения животных вигисоксом.

Практическая значимость. Установлены терапевтические дозы ви-гисокса для рациональной фармакотерапии основных гельминтозов овец. Экспериментально обоснованы сроки убоя животных на мясо после дегельминтизации вигисоксом.

На основании проведенных исследований по оценке фармакотоксико-логических свойств вигисокса и обобщения полученных результатов разработан проект «Инструкции по применению вигисокса при гельминтозах жвачных животных». Также разработана одобренная секцией «Инвазионные болезни животных» отделения ветеринарной медицины РАСХН, протокол № 2, 23 мая 2013 г «Методика применения вигисокса при гельминтозах жвачных животных».

Основные положения, выносимые на защиту:

- результаты изучения эффективности вигисокса при основных гельминтозах овец, титрация терапевтической дозы;

- результаты изучения динамики выведения вигисокса из организма животных;

- влияние вигисокса на организм овец.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены на следующих научно-практических конференциях:

1. Научная конференция Всероссийского общества гельминтологов РАН «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» (г. Москва, 2012, 2013 гг.);

2. II Международный конгресс ветеринарных фармакологов и токсикологов, г. С.-Петербург, 2012 г.

3. Научная конференция, посвященная 90-летию М.И.Рабиновича, г. Троицк, 2012 г.

4. IV съезд ветеринарных фармакологов и токсикологов России «Актуальные вопросы ветеринарной фармакологии, токсикологии и фармации», г. Москва, 2013 г.

5. Секция «Инвазионные болезни животных» отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии, г. Москва, 2013 г., протокол № 2.

Личный вклад соискателя. Диссертационная работа выполнена непосредственно аспирантом. Исследования по фармакотоксикологической оценке вигисокса выполнены автором самостоятельно. В работах, опубликованных в соавторстве с другими исследователями, 80 % работы выполнено диссертантом. Научное руководство осуществляла доктор ветеринарных наук, Н.В. Данилевская, которая оказывала научно-методическую помощь в проведении исследований и анализе полученных результатов.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 131 странице компьютерного текста. Состоит из введения, обзора литературы по изучаемым вопросам и собственных исследований, состоящих из описания материалов, а также результатов исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка литературы, содержащего 87 отечественных и 101 иностранных источников. Работа иллюстрирована 36 таблицами и 20 рисунками. Приложение на 7 страницах.

1. Обзор литературы 1.1. Краткие сведения по распространению гельминтозов жвачных

животных

К числу наиболее распространенных и экономически значимых гельминтозов относится мониезиоз, диктиокаулез и стронгилятозы пищеварительного тракта.

Мониезиоз - болезнь овец, коз, крупного рогатого скота, оленей, буйволов, зебу и некоторых диких жвачных животных, вызываемая паразитиро-ванием в тонком кишечнике цестод, относящихся к различным видам рода Moniezia (P.C. Шульц, Г.И. Диков, 1964).

У различных видов жвачных животных установлено 10 видов моние-зий. Наибольшее эпизоотологическое значение для жвачных имеют два вида: Moniezia expansa и M. benedeni. Они паразитируют, главным образом, у овец и крупного рогатого скота и зарегистрированы почти на всех континентах.

Нередко у животных осенью регистрируют также M. autumnalia и М. alba.

Мониезиоз привлекает внимание многих исследователей как у нас в стране, так и за рубежом, так как имеет повсеместное распространение и характеризуется высокой степенью зараженности животных. Так, В.И. Худо-шин (1970), Б.К. Касымбеков (1990), P.C. Кармалиев (2006) сообщали о распространении мониезиоза в различных природно-климатических условиях. Зараженность овец в отдельных хозяйствах достигала 92,8 %. Особенности распространения мониезиоза овец необходимо знать для разработки лечебно-профилактических мероприятий. Возбудители мониезиоза овец широко распространены во всех странах с развитым овцеводством. Так, например, N.B. Chilton (2007) приводит данные по Австралии, где средняя экстенсивность инвазии М. expansa составляет 31 %, М. benedeni - 21,3 %. По данным Г.М. Уркхарта (2000) мониезии - единственные цестоды, паразитирующие в организме жвачных животных в Западной Европе.

А.Н. Каденации и др. (1974) считал, что в условиях Западной Сибири

мониезиоз среди ягнят достигал своего наивысшего развития в июне и июле.

С появлением клинических признаков и падежа животных инвазия быстро нарастает в течение следующего месяца, снижаясь в сентябре. У взрослых овец она нарастает медленнее с резким дальнейшим спадом. По наблюдениям Г.М. Лазарева, проведенным с 1970 по 1995 г., мониезиоз овец ежегодно встречается во всех овцеводческих хозяйствах аридной зоны юга страны. По данным Р.Т. Сафиуллина (1997), мониезиоз повсеместно распространен на территории нашей страны и приносит ощутимый экономический ущерб. Средняя экстенсивность инвазии по стране составляет 24,5 %, при этом потери прироста массы тела на одну зараженную овцу за пастбищный период составляют 4,16 кг, а шерсти - 0,42 кг. Кроме того, гибель больных животных, особенно ягнят, достигает 7,1 %.

Исходя из приведенных данных, можно прийти к заключению, что заражение овец в различных регионах происходит в разное время года и в зависимости от физиологического состояния животных, климатических, погодных и природно-географических условий, а также от условий содержания овец.

Диктиокаулез является одним из широко распространенных гельминто-зов овец. A.M. Кравец (1971) в условиях Ярославской области РФ в опытах обнаружил, что личинки диктиокаул, попавшие во внешнюю среду, в следующем сезоне не служат источником инвазии, так как зимой теряют свою жизнеспособность. Для развития личинок диктиокаул необходимо наличие достаточного количества свободного кислорода. Все факторы, понижающие содержание свободного кислорода в воде (процесс разложения органических веществ и т. д.), ведут к быстрой гибели развивающихся личинок. По данным В.Н. Козлова (1987) в Смоленской области диктиокаулез распространен повсеместно. Взрослые овцы в клинической форме болеют редко, но в неблагополучных хозяйствах эти животные всегда являются источником инвазии. Ягнята заражаются в основном на пастбище, в местах стоянок и водопоя, которые загрязнены испражнениями животных. Некоторые личинки могут перезимовывать на пастбище. Они хорошо переносят действие больших концентраций лизола и формалина. На сырых, низких и заболоченных пастби-

щах личинок значительно больше, чем в сухих, открытых местах, т. к. под действием солнечных лучей личинки быстро погибают. Диктиокаулез - болезнь молодняка, однако истощенные, ослабленные взрослые животные также могут заболеть этой инвазией. Наиболее восприимчивы ягнята в возрасте 4-9 мес., несколько меньше - в возрасте 9-18 и еще меньше - взрослые овцы. Наибольшего распространения диктиокаулез у мелкого рогатого скота, в частности в Смоленской области, достигает в августе-сентябре, с октября инвазия идет на снижение, достигая минимума в конце зимы - начале весны.

В условиях Киргизстана экстенсивность диктиокаулезной инвазии достигает 100 % (Б. Касымбеков, 1990), а на склонах Большого Кавказа до 15 % (Ю.Ф. Меликов, 1992).

Кроме того, диктиокаулез распространен также в США (L.L. Smith, 1994), Ирландии (P. Brophy, PJ. Cafrey, 1988), на Кубе (A. Delgado, 1989), Нидерландах (J. Jansen, F.N. Borgsteede, 1990), во Франции (A. Marchen, Р. Delatour, 1993) и других странах.

Стронгилоидоз распространен практически повсеместно. По данным С.М. Асадова (1960) встречается заболевание в Горьковской, Кировской областях, Татарстане и других регионах, поражая иногда до 100 % телят. Зараженность молодняка крупного рогатого скота в хозяйствах Амурской области составляет 60,8 % (О.В. Демкина, 2007). Хабертиоз чаще встречается в умеренном и холодном поясе (С.М. Асадов, 1960). Распространение этого гельминтоза в Западной Сибири, Туве и Хабаровском крае изучали А

Информация о работе

Варламова, Анастасия Ивановна
кандидата ветеринарных наук
Москва, 2013
ВАК 06.02.03

Диссертация

Фармакотоксикологическая характеристика нового комплексного антигельминтного препарата вигисокс - тема диссертации по сельскому хозяйству, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы