Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Фармако-токсикологическое обоснование применения селимакцида при желудочно-кишечных болезнях

ВАК РФ 06.02.03, Звероводство и охотоведение

Автореферат диссертации по теме "Фармако-токсикологическое обоснование применения селимакцида при желудочно-кишечных болезнях"

ИИ4607773

На правах рукописи

Потехина Рамзия Мухаметовна

ФАРМАКО ТОКСИКОЛОГИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПРИМЕНЕНИЯ СЕЛИМАКЦИДА ПРИ ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНЫХ БОЛЕЗНЯХ

06.02.03 - ветеринарная фармакология с токсикологией 06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

- 2 СЕН 201П

КАЗАНЬ-2010

004607773

Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных» - (ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ»)

Научный руководитель: Кандидат медицинских наук

Муртазина Гульнара Харисовна

Научный консультант: Доктор биологических наук, профессор Иванов Аркадий Васильевич

Официальные оппоненты: Доктор медицинских наук, профессор

Поздеев Оскар Кимович

Кандидат биологических наук Семенов Эдуард Ильясович

Ведущее учреждение: ФГОУ ВПО «Башкирский государственный аграрный университет».

у ^

Защита состоится « /[д » игУссЛ 2010 года в У® часов на заседании диссертационного совета Д-220.012.01 при ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» (420075, г. Казань, Научный городок-2).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» (г. Казань)

Электронный вариант автореферата и текст объявления о защите размещен на сайте организации: www.vnivi.ru

Автореферат разослан «_»_2010 года.

Учёный секретарь диссертационного совета,

кандидат ветеринарных наук, ^ У

старший научный сотрудник — В.И. Степанов

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Желудочно-кишечные болезни сельскохозяйственных животных занимают одно из ведущих мест по частоте, массовости проявления и величине наносимого хозяйствам экономического ущерба вследствие заболеваемости и падежа новорожденного молодняка, недополучения привеса, а также больших затрат на лечебные мероприятия. (A.B. Иванов, Х.З. Гаффаров, 2002; К.Х. Папуниди и др., 2006; В.А. Мищенко, 2006).

В комплексе мероприятий по лечению желудочно-кишечных болезней значительное место занимают антимикробные лекарственные средства с бактерицидным типом действия, обеспечивающие в организме «стерилизующий» эффект (В.А. Томчук, 2001; А.Ф. Сапожников, 2003; В.Г. Свергунов, 2005). Однако широкое бессистемное применение антимикробных средств приводит к образованию резистентных форм возбудителя, развитию дисбиотических процессов в кишечнике, нарушению моторной и секреторной функций желудочно-кишечного тракта, задержке репарации слизистой оболочки кишечника, угнетению процессов иммуногенеза, что значительно снижает или приводит к полной утрате эффективности лекарственного, средства. Эти обстоятельства обуславливают необходимость активного изыскания современных, более эффективных химиотерапевтических препаратов, не оказывающих отрицательного влияния на организм (Е.В. Ильинский, 2006; В.А. Антипов, 2009; C.B. Шабунин, 2009).

В этом аспекте представляют определенный интерес научные исследования Поздеева O.K. с сотр. (1993), Макаева Х.Н. с сотр. (2000) и Муртазиной Г.Х. (2004) по изучению препаратов из группы сераорганических соединений, синтезированных сотрудниками ИОФХ им. А.Е. Арбузова КНЦ РАН. Ими было выявлено, что эти соединения обладают стабильной антимикробной активностью в отношении большинства грамположительных и грамотрицательных бактерий, вирусов, хламидий, «in vivo» повышают фагоцитарную активность лейкоцитов и бактерицидную активность сыворотки крови.

Исходя из этого, в процессе изыскания эффективных химиотерапевтических средств для лечения животных при желудочно-кишечных заболеваниях нами была отобрана диэтиламмониевая соль N-метиламино-1-фенилметансульфоновой кислоты из группы сераорганических соединений, названная условно - селимакцид (Патент РФ на изобретение № 2111962).

Цель исследования: экспериментальными и клиническими исследованиями обосновать возможность применения селимакцида как

лечебное средство в комплексной терапии желудочно-кишечных болезней молодняка животных.

Задачи исследования:

1. Изучить антимикробную активность селимакцида в отношении изолятов, выделенных из содержимого желудочно-кишечного тракта здоровых и больных колнбактериозом, сальмонеллезом телят.

2. Изучить токсико-фармакологические параметры селимакцида и возможные отдаленные последствия при его воздействии на организм.

3. Определить влияние селимакцида на клинический статус, гематологические показатели и факторы неспецифической защиты лабораторных и сельскохозяйственных животных.

4. Оценить терапевтическую эффективность селимакцида при сальмонеллезе и колибактериозе кроликов и телят.

Научная новизна. Впервые определена антимикробная активность селимакцида в отношении бактерий, обитателей желудочно - кишечного тракта и возбудителей колибактериоза, сальмонеллеза; изучены его токсико-фармакологические параметры; влияние на факторы неспецифической защиты - животных; распределение в органах и тканях при энтеральном введении; подтверждена эффективность селимакцида при экспериментально вызванных колибактериозе и сальмонеллезе кроликов, а также колибактериозе телят в условиях хозяйств.

Практическая значимость. Высокая бактерицидная активность и терапевтическая эффективность селимакцида при низкой токсичности для теплокровных животных, отсутствие аллергизирующих свойств, тератогенности, эмбриотоксичности и мутагенности соединения, позволяют рекомендовать его для внедрения в ветеринарную практику для . лечения и профилактики желудочно-кишечных заболеваний бактериальной этиологии.

Основные положения, выносимые на защиту:

антибактериальная активность селимакцида в отношении бактерий обитателей желудочно-кишечного тракта и возбудителей колибактериоза и сальмонеллеза животных;

- .. токсико-фармакологические параметры и отдаленные последствия при применении селимакцида в опытах на лабораторных и сельскохозяйственных животных;

влияние селимакцида на клинический статус, гематологические, биохимические, иммунологические показатели здоровых и больных желудочно-кишечными болезнями животных;

терапевтическая эффективность селимакцида при сальмонеллезе и колибактериозе кроликов и телят.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и получили положительную оценку на ежегодных заседаниях ученого совета «ВНИВИ» и ФГУ «ФЦГРБ-ВНИВИ» при обсуждении отчетов о НИР за 2001-2009 годы; на Международных и Всероссийских научно-практических конференциях (Владимир, 2004; Казань, 2004; Санкт-Петербург, 2004); на II съезде ветеринарных фармакологов и токсикологов России «Современные проблемы ветеринарной фармакологии и токсикологии» (г. Казань, 2009).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 7 работ, в том числе 2 статьи в реферируемом ВАКом России изданиях: «Ученые записки Казанской .государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана», 2006; «Ветеринарный врач», 2009.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 139 страницах компьютерного текста и включает: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов исследований, выводы, практические рекомендации, список литературы и приложения. Работа иллюстрирована 36 таблицами, 2 рисунками. Список литературы содержит 256 источников, из них 59 иностранных.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 1 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Исследования проводились в отделе биологической безопасности ФГУ «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных» (ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ»). Результаты исследований апробированы в хозяйствах Республики Марий-Эл.

Селимакцид - диэтиламмониевая соль М-метиламино-1 -фенилметансульфоновой кислоты - относится к новым химическим соединениям класса аминометансульфонатов и представляет собой кристаллический порошок белого цвета, хорошо растворимый в воде, спирте, диметилсульфоксиде. Массовая доля основного вещества в препарате составляет 99,5%. Строение диэтиламмониевой соли №-метиламино-1-фенилметансульфоновой кислоты доказано методом рентгеноструктурного анализа и подтверждено данными ЯМР 'Ни |3С спектроскопии (Патент РФ на изобретение № 2111962).

Эксперименты проведены на 120 белых мышах массой 18-20г, 100 белых крысах массой 180-220г, 186 кроликах массой 2-3 кг и 76 телятах с 2-х до 15 дневного возраста.

Бактериостатическое и бактерицидное действие селимакцида определяли методом серийных разведений по Першину Г.И. (1971) и согласно «Методическим указаниям по определению чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам» (2004) с использованием 23 изолятов энтеропатогенной кишечной палочки, 12

изолятов непатогенной ферментативно-активной Е. coli, 3 изолятов патогенных сальмонелл, по одному изоляту патогенных стафилококков и клостридий.

Определение параметров токсичности селимакцида для лабораторных животных и телят 3-6 дневного возраста проводили согласно «Методическим указаниям по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве» (1988) и «Методическим указаниям по изучению общетоксического действия фармакологических веществ» (2004). Испытуемое средство вводили в виде водных растворов белым мышам -подкожно, кроликам, крысам и телятам перорально. Контрольным животным вводили адекватное количество стерильной дистиллированной воды. Расчеты токсичности селимакцида для животных проводили по Керберу (1931) и методом пробит - анализа по Миллеру и Тейтнеру, коэффициент кумуляции определяли по формуле предложенной Ю.С. Коган и В.В. Станкевич (1964).

При определении субхронической токсичности селимакцид вводили кроликам в дозе 1/10 ЛД50 в течение 24 суток, а хронической токсичности -60 суток один раз в день.

Раздражающее действие селимакцида изучали на кроликах-альбиносах при нанесении 10% водного раствора на выстриженный участок кожи и на слизистые оболочки глаза и ротовой полости.

Определение аллергизирующих свойств селимакцида на кроликах-альбиносах проводили согласно рекомендациям МЗ СССР «Постановка исследования по гигиеническому нормированию промышленных аллергеном в воздухе рабочей зоны» и «Методическим указаниям по оценке аллергизирующих свойств фармакологических веществ» (2004), используя метод эпикутанной сенсибилизации.

Первоначально оценку мутагенной активности селимакцида проводили с использованием теста Эймса согласно «Методическим указаниям по изучению отдаленных последствий действия пестицидов» (1988). При этом использовали индикаторные штаммы сальмонелл ТА-98 и ТА-100.

В последующих опытах на белых мышах и белых крысах в возрасте 6-7 недель определяли цитогенетическое действие селимакцида на клетки мозгового вещества бедренной кости. За 2,5 часа до забоя подопытным животным внутрибрюшинно вводили колхицин (0,04%) из расчета 0,01 мл на один грамм живой массы.

При проведении цитологического анализа учитывали следующие типы аберраций: одиночные фрагменты, хроматидные обмены, парные фрагменты и хромосомные обмены. Пробелы в качестве аберраций не учитывали.

Изучение возможного гонадотоксического, эмбриотоксического и тератогенного воздействия селимакцида проводили на 18 самках белых крыс, 28 самках и 6 самцах кроликов, согласно «Методическим указаниям по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве» (1988).

Контроль действия препарата на организм подопытных животных осуществляли по результатам клинического наблюдения за их общим состоянием с регистрацией динамики температуры тела, пульса, дыхания, реакции на внешние раздражители, подвижности, позыва к корму и воде, а также гематологических и биохимических исследований крови на 5, 10, 15, 30 сутки введения препарата. Гематологические исследования включали определение количества эритроцитов, лейкоцитов с выведением лейкоцитарной формулы по общепринятым методикам, уровня гемоглобина по Сали, опсоно-фагоцитарную реакцию лейкоцитов по методике Берзинь В:К. и Блимберга М.Я., используя культуру стрептококков в качестве тест-микроба.

Содержание в крови Т- и В- лимфоцитов определяли по методу Джулиус M., а их дифференциацию - методом спонтанного розеткообразования. Бактерицидную активность сыворотки крови животных определяли по Смирновой О.В. и Кузьминой Т.А., используя S.enteritidis в качестве тест-микроба.

Функционально-метаболическую активность нейтрофилов оценивали в реакции восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест) в спонтанном (сНСТ-тест) и индуцированном (иНСТ-тест) вариантах по методу B.H.Park et al. (1968) в модификации Виксмана М.Е. и Маянского А.Н. (1979).

Биохимические исследования включали определение общего белка сыворотки крови рефрактометрическим методом и соотношение белковых фракций по Ахмедову А.М. (1968).

Для изучения санирующих свойств селимакцида "in vivo" на модели экспериментального колибактериоза и сальмонеллеза заражали внутрижелудочно 18 кроликов патогенными культурами ЭПКП и 15 кроликов - ассоциацией изолятов S. enteritidis и S. typhimurium. Штаммы ЭПКП и сальмонелл депонированных в лаборатории по хранению и изучению штаммов возбудителей ООБ.

Изучение терапевтической эффективности селимакцида при колибактериозе телят осуществляли в лабораторно-контролируемом опыте с использованием 49 телят 5-12 дневного возраста. По согласованию с администрацией и ветеринарной службой, эксперименты проводили в условиях совхоза «Ташнурский» Звениговского района Республики Марий -Эл.

Оценку эффективности лечения животных осуществляли по результатам клинического наблюдения с регистрацией температуры тела, данных, гематологических исследований, динамики фагоцитарной активности лейкоцитов и бактерицидных свойств сыворотки крови, длительности срока лечения и выживаемости подопытных животных.

Статистическую обработку полученного материала проводили общепринятыми методами вариационной статистики с помощью критерия Стьюдента с применением пакета прикладных программ Microsoft Excel 97.

2 РЕЗУЛЬТАТЫ ИСССЛЕДОВАНИЙ

2.1 Антибактериальная активность селимакцида "in vitro"

Наши исследования показали различную чувствительность к селимакциду выделенных изолятов сальмонелл, эшерихий, стафилококков, клостридий и выявили бактерицидную активность препарата в концентрации 5-20 мг/мл и выше. В частности он проявляет стабильную бактерицидную активность в отношении всех изолятов энтеропатогенной кишечной палочки (ЭПКП), стафилококков и S.dublin спустя 30 минут после контакта с бактериями при его концентрации 5-7,5 мг/мл, в то же время изоляты ферментативно - активной кишечной палочки, S. enteritidis и клостридий, оказались более устойчивы к воздействию селимакцида. Отсутствие роста данных бактерий регистрировали лишь через 40 минут после контакта при его концентрации 10-15 мг/мл. При повышении концентрации селимакцида до 20 мг/мл через 30 минут контакта рост бактерий отсутствовал во всех посевах. Не установлена разница в чувствительности к селимакциду изолятов ЭГЖП, выделенных от больных.животных, получавших или не получавших антимикробную терапию до забора материала.

Чувствительность взятых в опыт изолятов кишечной палочки и сальмонелл к препарату не менялась и в кислой среде по сравнению с результатами, полученными в предыдущих опытах, тогда как, по данным Кашкина К.П. и др. (1984), Падейской E.H. (1997), действие многих антибиотиков в кислой среде значительно ослабевает.

Минимальную подавляющую рост бактерий концентрацию селимакцида изучали, используя МПБ в пробирках с содержанием селимакцида 0,1- 10 мг/мл, в которые вносили суспензию 6-ти 1,5 суточных агаровых культур изолятов ЭПКП из расчета 500 тысяч м.к./мл. Наличие или отсутствие роста засеянных изолятов в опытных и контрольных пробирках определяли измерением оптической плотности МПБ сразу после посева бактерий, а также через 6, 18 и 24 часа экспозиции в термостате при 37°С. При использовании селимакцида в концентрации 0,1-0,3 мг/мл оптическая плотность МПБ постепенно повышалась от исходных данных. Аналогичные результаты получены при измерении оптической плотности контрольных проб без препарата. При использовании селимакцида в концентрации 0,5 мг/мл и более, оптическая плотность МПБ во все сроки определения не менялась.

Результаты высевов суспензии бактерий на среду Эндо и МПБ после удаления селимакцида промывкой показали, что несмотря на неизменность оптической плотности МПБ с селимакцидом в концентрации от 0,5 до 2 мг/мл, при посеве суспензии регистрировали рост исходных бактерий, но в меньшей концентрации чем в контроле (Р<0,05). При высеве отмытой суспензии после использования селимакцида в концентрации 3 мг/мл и выше рост исходных бактерий как в МПБ, так и на среде Эндо не отмечен.

Таким образом, экспериментально установлено, что селимакцид при концентрации 0,5; 1,0 и 2 мг/мл обладает бактериостатическим действием, а при концентрации 3 мг/мл и выше - бактерицидным.

При длительном использовании антимикробных средств у большинства бактерий вырабатывается к ним резистентность - естественный биологический ответ. Это значительно снижает лечебную эффективность антимикробных препаратов (Козлова Н.С. и др., 2001; Страчунский Л.С. и др., 2007).

Изучение возможной выработки у ЭПКП, сальмонелл и стафилококка резистентности к селимакциду показало, что после 20-кратного периодического культивирования данных бактерий в среде, содержащей препарат в суббактерицидной для них концентрации, устойчивость не вырабатывается, так как после применения селимакцида в ранее определенной бактерицидной концентрации во всех посевах рост бактерий отсутствовал.

При сравнительном изучении антибактериальной активности селимакцида, гентамицина, тетрациклина, левомицетина в отношении патогенных бактерий установлено, что по активности селимакцид превышает левомицетин, тетрациклин и сопоставим по эффективности с гентамицином. В то же время в отношении ферментативно - активной кишечной палочки активность селимакцида в 2 раза ниже тетрациклина и левомицетина и в 3 раза - гентамицина.

2.2 Изучение эффективности селимакцида при экспериментальном колибактериозе и сальмонеллезе

В связи с тем, что чувствительность бактерий к антимикробным препаратам "in vitro" не всегда совпадает с их клинической эффективностью (Ахметова Л.И. и др., 2000; Mansoury В. и др., 1997), мы провели изучение санирующей эффективности селимакцида "in vivo" с использованием перорально зараженных ЭПКП и сальмонеллами кроликов (табл. 1 и 2).

Титрацию минимальной летальной дозы (МЛДю0) взятых для экспериментального заражения изолятов ЭПКП №93 и №124 и сальмонелл №417 и №348 проводили в специальных опытах на 24 кроликах. При этом животных заражали перорально. Сальмонеллез у кроликов вызывали заражением ассоциацией двух изолятов, а колибактериоз - заражением моноизолятами. МЛДюо ассоциации изолятов составляла 90 млрд.м.к. (45+45 млрд.м.к.), а ЭПКП - 60 млрд.м.к.

Во всех случаях применения препарата (через 10 мин после заражения и после появления признаков заболевания) животные выздоровели при 100%-й гибели контрольных (не леченых) кроликов на 3-8 сутки после заражения эшерихиями или сальмонеллами.

Таблица 1 Схема и результаты изучения эффективности селимакцида при экспериментальном колибактериозе

№ изолята Группа Кол-во животных Сроки к дё'За введения селимакцида г(перорально) Пало Выжило

93 1 3 В день появления клинических признаков заболевания 1/10 ЛД30 (380мг/кг) *2 раза/день, 8 сут 0 3

2 3 Контроль, без лечения 3 0

124 3 3 В день появления клинических признаков заболевания 1/10 ДЦ5о(380мг/кг) х 2 раза/день, 8 сут 0 3

4 3 Контроль, без лечения 3 0

Таблица 2 Схема и результаты изучения эффективности селимакцида ___при экспериментальном сальмонеллезе

Группа Кол-во животных Доза заражения Сроки и доза введения селимакцида (перорально) Пало Выжило

1 5 45 млрд. м.к. изолят417 + 45 млрд. м.к. изолят 348 В день появления признаков заболевания; 1/10 ЛД50 (З80.мг/кг) *2 раза/сут в течение 8 сут 0 5

2 5 Контроль без лечения 5 0

При бактериологическом исследовании материала от павших контрольных животных исходная культура ЭПКП й сальмонелл высевалась из паренхиматозных органов (печень, почки, мезентериальные лимфатические узлы) и содержимого кишечника, в то время как из материала от специально декапитированных через 10 и 15 суток после последнего введения селимакцида опытных животных ни из одного объекта ЭПКП, сальмонеллы не выделены, т.е. препарат предотвращает формирование бактерионосительства.

Таким образом, обобщенный анализ результатов экспериментов по изучейию антибактериальной активности селимакцида "in vitro" и "in vivo" позволяет констатировать, что препарат обладает стабильной активностью в отношении ЭПКП и сальмонелл. Полученные данные не изменяются при испытании бактерицидной активности препарата с использованием этих бактерий "in vitro" в кислой среде и "in vivo" при экспериментальном заражении животных.

2.3 Токсико-фармакологические параметры селимакцида С целью определения острой токсичности для белых мышей селимакцйд вводили подкожно в дозе от 1 ООО до 2000 мг/кг. Всего испытали 10 доз, по 6 животных'на каждую дозу,

Изучение острой токсичности при внутрижелудочном введении проведено на ,48 самцах белых крыс и на 18 кроликах. Белым крысам препарат вводили в дозе от 2000 до 5000 мг/кг, а кроликам - от 1500 до 6000 мг/кг. Результаты исследований обобщены в табл. 3.

Таблица 3 Данные острой токсичности селимакцида

Вид животного Способ введения, доза мг/кг

подкожно в желудок

ЛД50, МПД ЛД» МПД

Белые мыши 1667 1500

Белые крысы 3000 2000

Кролики 3833 3000

В связи с тем, что при изучении острой токсичности на телятах З-б дневного возраста клинических признаков интоксикации и гибели животных не регистрировали даже при пероральном введении селимакцида в дозе 5000 мг/кг (160 г/гол, в 80 раз превышающая лечебную) рассчитать ЛД50 острую для данных животных оказалось невозможным.

Изучение субхронической токсичности и кумулятивных свойств селимакцида проводили на 24 кроликах. Первоначальная доза селимакцида составляла 1/10 ЛДз0 и через каждые 4 суток эту дозу увеличивали в 1,5 раза. В опыте установлено, что ЛД50 (субхроническая) равна 20220,8 мг/кг, коэффициент кумуляции составляет 5,3, что свидетельствует о слабых кумулятивных свойствах соединения. ...

Изучение хронической токсичности селимакцида проводили на 10 кроликах, разделенных на две группы, по 5 животных в каждой. Опытным животным препарат давали в дозе 1/10 ЛД50 (380 мг/кг) перорально в течение 60 суток один раз в день. Контрольные животные получали адекватное количество дистиллированной воды. При длительном внутрижелудочном поступлении селимакцид не вызывал каких-либо изменений в организме животных. Введение кроликам в течение 2 месяцев селимакцида в суммарной дозе 22800 мг/кг не вызвало признаков интоксикации и гибели.

Для определения раздражающего действия эксперименты проведены на 5 кроликах-альбиносах обоего пола. Селимакцид наносили один раз в день в течение 5 суток на выстриженные участки кожи в виде 10%-го водного раствора в объеме 1 мл и выдерживали 4 часа. Реакцию кожи регистрировали через 1 и 18 часов после нанесения селимакцида и оценивали в сравнении с симметричным участком кожи того же животного, где была нанесена дистиллированная вода. За весь период наблюдения каких-либо

функциональных нарушений кожи (эритема, отек, трещины, изъявления, изменение температуры) не отмечено.

В следующей серии опытов на кроликах-альбиносах изучали влияние селимакцида на слизистую оболочку глаза и ротовой полости (местное действие). В конъюнктивальный мешок левого глаза вносили одну каплю 10% водного раствора препарата, а правый глаз служил контролем. После нанесения селимакцида в конъюнктивальный мешок наблюдали гиперемию слизистой оболочки глаза, кровенаполненность сосудов склеры и роговицы, ширина зрачка до введения селимакцида равнялась 6 мм, после введения 7 мм. Отека слизистой и выделений из глаза не было. Гиперемия и кровенаполненность сосудов исчезли через 3 часа после нанесения соединения. Зрачок принимал прежние размеры (6 мм) через 3,5 часа.

При орошении слизистой ротовой полости 10%-ым раствором селимакцида в количестве 10 мл, никаких отклонений от физиологической нормы состояния слизистой ротовой полости не регистрировали.

Аллергизирующее действие селимакцида изучали на двух видах лабораторных животных: 10 белых крысах и 5 кроликах-альбиносах, используя метод эпикутанной сенсибилизации.

Кожа животных до и после нанесения 10%-го раствора селимакцида в объеме 1 мл была бледно-розового цвета.

После того как сенсибилизированным животным нанесли на кожу разрешающие дозы веществ в тех же концентрациях, во всех случаях кожные пробы были отрицательными.

Обобщенный анализ проведенных опытов свидетельствует, что селимакцид не обладает раздражающим и аллергизирующим действиями.

С целью изучения возможных отдаленных последствий после применения селимакцида проведены специальные исследования по определению его мутагенного действия двумя методами и изучению эмбриотоксических, тератогенных и гонадотоксических свойств.

В опытах по оценке мутагенной активности установлено, что при применении селимакцида число колоний - ревертантов не превышает спонтанный фон, а по сравнению с позитивным контролем меньше в 28 раз при действии исходного соединения и в 26 раз - при действии метаболитов. Для подтверждения отсутствия мутагенного действия провели эксперименты на 40 белых мышах и 24 белых крысах 6-7 недельного возраста по изучению цитогенетического воздействия селимакцида на ¡слетки мозга бедренной кости. При подкожном введении животные получали препарат в дозе 1/2 ЛД50 - однократно, 1/20 ЛД50 - трехкратно и 1/20 ЛД^ - семикратно. Число нарушений типов аберраций в клетках костного мозга опытных белых мышей и крыс не отличалось от контроля независимо от дозы и кратности введения селимакцида. В частности, если общее ■ количество нарушений в опыте из 500 исследованных клеток составляло от 2,0±0,2 до 2,8±0,1%, то в контроле - от 2,4±0,25 до 2,8±0,2%. Некоторые изменения и нарушения,

выявленные нами в клетках, как опытных, так и контрольных животных возникают, по-видимому, под влиянием внешних и внутренних факторов.

В экспериментах по определению эмбрио-, гонадотоксичности и тератогенности селимакцида клиническое состояние, кратность спариваний, развитие эмбрионов и плодов белых крыс и кроликов, получавших препарат, не отличались от интактных животных. Количество, средняя масса, средняя длина плодов и вес плаценты всех опытных животных существенно не отличались от контрольных. Потомство всех групп развивалось без видимых изменений и сохранность приплода в течение 20 дней наблюдения была 100%.

Следовательно, в эксперименте на индикаторных штаммах сальмонелл и лабораторных животных установлено, что селимакцид и его метаболиты при многократном пероральном введении не обладают мутагенной активностью. Пероральное введение селимакцида белым крысам и кроликам в дозе 1/10 ЛДзо в течение 17-48 суток один раз в день не оказывает отрицательного воздействия на сперматогенез, овогенез и препарат не обладает гонадотоксическщд, эмбриотоксическим и тератогенным действием.

При определении наличия селимакцида в организме лабораторных животных, используя методы определения антибиотиков в биологических субстратах установили, что при однократном пероральном введении в дозе 1/10 ЛДзо Данное соединение сохраняется в биосубстратах из печени, почек и сыворотке крови в бактерицидной концентрации в отношении ЭПКП и сальмонелл в течение 12 часов.

2.4 Влияние селимакцида на клинический статус, гематологические, биохимические, иммунологические показатели животных.

Все кролики при введении данного препарата через желудочно-кишечный тракт в дозе 1/20 - 1/5 ЛДзо один раз в день в течение 30 суток и телята - в дозе 100 и 200 мг/кг один раз в день в течение 15 суток не проявляли беспокойства, были в удовлетворительном состоянии, сохранялись подвижность, реакции на внешние раздражители и позывы к корму и воде, температура тела, пульс и частота дыхания - в пределах физиологически допустимых норм.

В опытах на лабораторных животных (кроликах) и телятах было установлено, что селимакцид не оказывает отрицательного влияния на их клиническое состояние, некоторые гематологические показатели, протеинограмму и достоверно повышает фагоцитарную активность лейкоцитов, бактерицидные свойства сыворотки крови.

Влияние селимакцида на функционально-метаболическую активность нейтрофилов здоровых и больных колибактериозом телят

Функционально-метаболическая активность нейтрофилов у больных колибактериозом в остром периоде заболевания достоверно повышена в сНСТ-тесте, по сравнению с уровнем этого показателя у здоровых телят.

Подобная динамика процесса была обнаружена и при изучении стимулированной Serratia marcescens активности клеток у телят при остром течении колибактериоза. Однако у телят с подострым течением болезни иНСТ-тест не отличался от уровня здоровых животных (Р>0,05).

Резервная реактивность нейтрофилов (РРН), которую рассчитывали по разнице индуцированного и спонтанного НСТ-теста, отражающая эффективный потенциал системы фагоцитоза у телят больных колибактериозом, была ниже, чем у здоровых.

Результаты изучения влияния селимакцида на функциональную активность нейтрофилов в HCT - тесте у клинически здоровых и у больных колибактериозом телят обобщены и представлены на рис.

1 оо% 1

90%

ао%

70% 60% 50% -40% 30% 20% Ю%

о%

ta Контроль без препарата сз Оельпилэкцид, 1 оо мкг/мя

(Я Сепимакцмд, 500 мкг/мп ЕЭ Селимакцид, т ООО плкг/мл

вэ Селимакцмд, 5000 мкг/мл

Рис. Функционально-метаболическая активность нейтрофилов телят при воздействии селимакцида в НСТ-тесте *- Р < 0,01 - достоверность по сравнению с контролем Изучение воздействия селимакцида на функциональную активность нейтрофилов у здоровых и больных телят в НСТ-тесте, показало, что на спонтанную метаболическую активность нейтрофильных гранулоцитов действие препарата не достоверно (Р >0,05),

В иНСТ-тесте мы выявили, что прединкубация нейтрофилов с селимакцидом вызывает усиление юс ответа на воздействие Serratia marcescens. Так, нейтрофилы больных колибактериозом в иНСТ-тесте отвечают увеличением активности на дозу селимакцида 0,1-1 мг/мл (Р< 0,01), а у здоровых телят - на дозу 0,1-0,5 мг/мл (Р<0,05), Но способность препарата модулировать активность нейтрофилов у больных колибактериозом выше, чем у здоровых телят (Р<0,05; Р<0,01).

Полученные данные позволяют заключить, что селимакцид не только не оказывает отрицательное влияние на неспецифическую резистентность организма, но и проявляет стимулирующее действие на функциональную активность нейтрофилов крови.

2.5 Изучение лечебной эффективности селимакцида при колибактериозе телят

Опыты проводились в условиях животноводческого хозяйства СПХ «Ташнурский» Звениговского района Марий Эл при массовом проявлении желудочно-кишечных заболеваний с признаками диареи среди телят 5-12 дневного возраста.

При исследовании материала (печень, содержимое тонкого кишечника, трубчатая кость, пробы кала) от павших и больных животных выделены „патогенные, высоко вирулентные для белых мышей культуры кишечной палочки. Диагноз заболевания подтверждался параллельными исследованиями материала от павших и больных животных в условиях лаборатории по изучению болезней молодняка ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» и Республиканской ветеринарной лаборатории Марий Эл.

С целью уточнения этиологических агентов, вызывающих заболевание телят провели бактериологическое исследование содержимого желудочно-кишечного тракта здоровых и больных животных.

Основная масса микрофлоры кишечника здоровых телят от 5 до 10 дневного возраста представлена лактобациллами, количество которых в 1 г кала находилось в пределах от 7,8 до 18,5 млрд., бактериями из группы кишечной палочки - от 9,3 до 69,7 млн., энтерококками - от 0,5 до 3,4 млн., а количество бацилл перфрингенс не превышало 2,1 - 14,5 тыс. Выделенные изоляты кишечной палочки были непатогенными или слабопатогенными для лабораторных животных. При сопоставлении данных количества бактерий в 1 г кала здоровых и больных эшерихиозной диареей телят, установлено, что у телят больных колибактеризом происходило уменьшение в 1 г кала числа лактобацилл в 4,7 раза и увеличение количества кишечных палочек в 8,6 раза, а энтерококков и бацилл перфрингенс у больных телят было примерно в 2 раза больше по сравнению со здоровыми телятами. Следует отметить, что изоляты кишечной палочки в 18 раз были вирулентнее аналогичных бактерий выделенных от здоровых телят.

•На основании клинико-эпизотологических и лабораторных исследований установлен диагноз - колибактериоз острой и подострой формы течения.

Возможность использования селимакцида при колибактериозе телят изучили в опыте на 49 животных 5-12 дневного возраста, разделенных по принципу аналогов на 7 групп по 7 голов в каждой (табл. 4).

Таблица 4 Лечебная эффективность селимакцида при колибактериозе телят

Группа Количество животных Состояние животных до опыта Схема применения селимакцида (перорапьно в виде раствора) в объеме 250-400 мл/гол. Результаты лечения

1 7 Угнетение, гиподинамия, позывы к корму снижены; диарея - кал жидкий с примесями слизи, а иногда и крови, с неприятным запахом; температура тела повышена до 40,5-41 С. Животные гибнут на 5-8 сутки после появления признаков заболевания. При паталогоанатомическом вскрытии - катаральный гастроэнтероколит, перерождение печени, мелкоточечные кровоизлияния на миокарде, почках. Лабораторно подтвержденный диагноз - колибактериоз. 20 мг/кг два раза в день Курс лечения 12-13 суток. Выздоровление 3-х телят на 12-13 сутки лечения. 4 теленка пали на 4,5 и 7 сутки опыта.

2 7 40 мг/кг два раза в день Курс лечения 10 суток. Выздоровление 5-ти телят на 8-10 сутки лечения. Два теленка пали на 4 сутки опыта.

3 7 60 мг/кг два раза в день Курс лечения 10 суток. Выздоровление всех опытных животных на 5-8 сутки опыта.

4 7 80 мг/кг два раза в день Курс лечения 10 суток. Выздоровление всех опытных животных на 5-8 сутки опыта. Рецидивов заболевания не было.

5 7 100 мг/кг два раза в день Курс лечения 8 суток. Выздоровление всех опытных животных на 5-7 сутки опыта. Рецидивов заболевания не было.

6 7 Левомидитин согласно наставлению по применению (Контроль 1). Курс лечения 10 суток. Выздоровление 6 телят на 710 сутки лечения. Один теленок пал на 5 сутки опыта.

7 7 Тетрациклин согласно наставлению по применению (Контроль 2). Курс лечения 10 суток. Выздоровление 5 телят на б-9 сутки лечения. Два теленка пали на 5-6 сутки опыта.

ск

Анализ данных клинических исследований, срока лечения, выживания опытных и контрольных животных свидетельствует, что срок лечения больных животных первой группы длился 12-13 суток, терапевтический эффект не превышал 42,9 %. При лечении селимакцидом животных 2-й группы улучшение общего состояния 5 телят регистрировали на 5-7 сутки и их клиническое выздоровление отмечали на 8-10 сутки, а 2 теленка пали на 4-5 сутки опыта (лечебный эффект 71,4%). Клиническое выздоровление всех телят 3-5 групп наблюдали на 5-8 сутки лечения.

Среди телят, которых лечили левомицетином, пало 1 животное на 5 сутки опыта, клиническое выздоровление остальных отмечали на 7-10 сутки. Лечебный эффект составил 85,7%. В группе телят, которых лечили тетрациклином на 5-6 сутки опыта пали 2 теленка, клиническое выздоровление остальных животных регистрировали на 6-9 сутки лечения. Лечебный эффект составил 71,4%.

Данные проведенного эксперимента показали возможность использования селимакцида при желудочно-кишечных заболеваниях бактериальной этиологии. В частности, при лечении телят больных острой и подострой формой колибактериоза терапевтический эффект при применении селимакцида в дозе 60 мг/кг перорально 2 раза в день был 100% и превышал аналогичный показатель левомицетина на 14,3%, а тетрациклина на 28,6%.

Обобщая вышеизложенное, представляется перспективным дальнейшее изучение свойств диэтидаммониевой соли N - метиламино - 1 -фенилметансульфоновой кислоты - селимакцида - с целью возможного ее применения в клинической практике в качестве этиотропного и/или патогенетического лекарственного средства.

3 ВЫВОДЫ

1. В комплексной терапии молодняка животных при желудочно-кишечных болезнях предложено новое химическое соединение -диэтиламмониевая соль М-метиламино-1-фенилметансульфоновой кислоты -селимакцид.

2. Селимакцид «in vitro» в концентрации 0,5-2 мг/мл обладает бактериостатическим, а при концентрации 5 - 7,5 мг/мл - бактерицидным действием в отношении патогенных изолятов кишечной палочки, сальмонелл, стафилококков, клостридий, которое не меняется в кислой среде. В этих дозах селимакцид не ингибирует рост ферментативно активной кишечной палочки.

3. На модели экспериментально вызванных колибактериоза и сальмонеллеза у лабораторных животных селимакцид сохраняет свою антимикробную, лечебную эффективность и предотвращает формирование бактерионосительства. При однократном пероральном введении в дозе 1/10 LD5o (380 мг/гол) селимакцид сохраняется в организме в бактерицидной концентрации в течение 12 часов.

4. Согласно ГОСТу 12.1.007-76 селимакцид относится к соединениям III класса опасности. LD30 при однократном подкожном введении белым мышам составляет 1667 мг/кг, при внутрижелудочном введении белым крысам - 3000 мг/кг, кроликам - 3833 мг/кг. Субхроническая токсичность (LDso) при внутрижелудочном введении кроликам составляет 20220,8 мг/кг, а коэффициент кумуляции - 5,3. При пероральном введении телятам 3-6 дневного возраста в дозе 5000 мг/кг (150-160г/гол; в 80 раз превышающей лечебную) не вызывает признаков интоксикации и гибели подопытных животных.

5. Селимакцид при многократном (30 - 48 дней) пероральном введении в дозе 1/10 LD5o не обладает мутагенной активностью, цитогенетическим действием, эмбрио- и гонадотоксичностью, тератогенностью. Пероральное введение селимакцида в течение 30 сут в дозе 190, 380, 760 мг/кг кроликам и в течение 15 сут в дозе 200 мг/кг телятам 5-12 дневного возраста не оказывает отрицательного воздействия на их клинический статус, гематологические, биохимические и иммунологические показатели, не вызывает патологических изменений в органах и тканях.

6. У животных больных колибактериозом в остром периоде болезни наблюдается повышение функционально-метаболической активности нейтрофилов крови с истощением их резервного потенциала, что подтверждено при оценке в НСТ-тесте. Селимакцид повышает у больных колибактериозом животных функционально-метаболическую активность и резервный потенциал нейтрофилов крови (НСТ-тест), суммарную фагоцитарную активность лейкоцитов и бактерицидную активность сыворотки крови.

7. Селимакцид при пероральном введении телятам 5-12 дневного возраста в дозе 60-100 мг/кг два раза в день обуславливает 96-100% лечебный эффект при колибактериозе. Срок лечения при этом не превышает 5-7 суток.

4 ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для профилактики и лечения как этиотропное и/или патогенетическое средство в комплексной терапии телят при желудочно-кишечных заболеваниях (сальмонеллез, колибактериоз) рекомендуется селимакцид в дозе 60-100 мг/кг два раза в день, в течение 5-7 суток.

2. По результатам изучения свойств селимакцида в целях производственной апробации его лечебной эффективности, разработана «Рекомендация по применению селимакцида для лечения и профилактики желудочно-кишечных болезней молодняка животных», утвержденная ГУВ Республики Марий - Эл.

5 Список опубликованных работ по теме диссертации

1. Потехина, P.M. Антимикробная активность и токсикологические параметры селимакцида/ P.M. Потехина, Г.Х. Муртазина //Матер.

Всероссийской конференции молодых ученых «Молодые ученые -агропромышленному комплексу» -Казань. -2004. -С.20-23. 2. Потехина, P.M. Лечебная эффективность селимакцида при желудочно-кишечных заболеваниях бактериальной этиологии /P.M. Потехина, Г.Х. Муртазина, Х.Н. Макаев //Матер. Всероссийской конференции молодых ученых «Молодые ученые - агропромышленному комплексу» -Казань. -2004.

3. Потехина, P.M. Селимакцид - антимикробный препарат нового поколения из группы О -амино-метансульфонатов производных сульфоновой кислоты /P.M. Потехина, Г.Х. Муртазина, Р.Н. Попов, Х.Н. Макаев, Д.И. Александров, Н.И. Галиакберова //Матер. Конф. «Проблемы мониторинга и генодиагностики инфекционных болезней животных». -Владимир. -2004. -С.173-175.

4. Потехина, P.M. Терапевтическая эффективность селимакцида при колибактериозе телят /P.M. Потехина //Ученые записки Казанской гос-ой акад. вет.мед. им Н.Э. Баумана-Казань. -2006. -Т.187. -С.100-103.

5. Потехина, P.M. Изучение вирусоостатического действия диэтиламмониевой соли сульфоаминокислоты /P.M. Потехина, Г.Х. Муртазина, В.Г. Гумеров //Матер. Всероссийской научно-практической конференции. -Казань, -2007. -С.33-34.

6. Потехина, P.M. Антимикробная активность, токсикологические параметры и возможные отдаленные последствия селимакцида /Р.М, Потехина, Х.Н. Макаев, Г.Х. Муртазина //Ветеринарный врач. -Казань. -№5. -2009. -С.6-9.

7. Потехина, P.M. Влияние селимакцида на гемостаз / P.M. Потехина, Г.Х. Муртазина, Х.Н. Макаев //Матер, второго съезда ветеринарных фармакологов и токсикологов России. -Казань. -2009. -С.131-134.

-С.10-11.

Подписано к печати юо&.ю. Заказ 160 Тираж/ЙСЬкз.

Формат 60x84/16 Усл.-цеч. д. ю Печать ИБО

Бумага офсетная

Цещр информационных технологий КГАВМ 420074, Казань, Сибирский тразсг, 35.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Потехина, Рамзия Мухаметовна

ВВЕДЕНИЕ.

1. Обзор литературы.

1.1. Этиологические факторы желудочно-кишечных болезней молодняка сельскохозяйственных животных.

1.2. Современное состояние этиотропной терапии при желудочно-кишечных заболеваниях.

1.3. Патогенетические механизмы желудочно- кишечных болезней и современные принципы корригирующей терапии.

1.4. Физико-химическая характеристика селимакцида.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2. Материалы и методы

3. Результаты исследований

3.1. Антибактериальная активность селимакцида «in vitro» в отношении различных бактерий, обитателей желудочно-кишечного тракта и возбудителей колибактериоза и сальмонеллеза животных.

3.2. Сравнительная оценка активности селимакцида и известных антибиотиков, применяемых в практике лечения при желудочно-кишечных болезнях бактериальной этиологии.

3.3. Результаты изучения возможной выработки устойчивости бактерий к селимакциду.

3.4. Эффективность селимакцида «in vivo» при экспериментальных колибактериозе и сальмонеллезе лабораторных животных.

3.5. Определение токсичности и кумулятивных свойств селимакцида в опытах на лабораторных животных и новорожденных телятах.

3.6. Определение раздражающего и аллергизирующего действия селимакцида.

3.7. Изучение возможных отдаленных последствий воздействия селимакцида.

3.7.1. Оценка мутагенной активности селимакцида с использованием теста Эймса па индикаторных штаммах сальмонелл ТА-98 и ТА-100.

3.7.2. Цитогенетические исследования при действии селимакцида в опытах на белых мышах и белых крысах.

3.7.3. Изучение гонадо-, эмбриотоксического и тератогенного действия селимакцида в опытах на белых крысах и кроликах.

3.8. Влияние селимакцида на клинический статус, гематологические, биохимические, иммунологические показатели крови животных.

3.9. Изучение фармако-кинетики селимакцида.

3.10. Испытание лечебной эффективности селимакцида при колибактериозах телят.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ВЫВОДЫ

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Фармако-токсикологическое обоснование применения селимакцида при желудочно-кишечных болезнях"

Актуальность темы. Желудочно-кишечные болезни сельскохозяйственных животных занимают одно из ведущих мест по частоте, массовости проявления и величине наносимого хозяйствам экономического ущерба вследствие заболеваемости и падежа новорожденного молодняка, недополучения привеса, а также больших затрат на лечебные мероприятия (53, 114, 133, 181). Согласно многочисленным данным в этиологии и патогенезе желудочно-кишечных болезней особую роль играют различные токсикозы, патогенные, условно-патогенные бактерии, вирусы, микоилазмы, способствующие снижению резистентности организма.

Из-за отсутствия у коров трансплацентарной передачи материнских антител теленок рождается незащищенным, поэтому в первые недели жизни риск возникновения желудочно-кишечных заболеваний телят в большинстве хозяйств достигает 80-100%, около 50-60% заболевших животных гибпе1. (53,52,68, 132, 143, 181).

В комплексе мероприятий по лечению желудочно-кишечных болезней значительное место занимают антимикробные лекарственные средства. В современной химиотерапии отдают предпочтение лекарственным средствам с бактерицидным типом действия, обеспечивающим в организме «стерилизующий» эффект (174, 152, 153). Однако широкое бессистемное применение антимикробных средств приводит к образованию резистентных форм возбудителя, что значительно снижает или приводит к полной утрате лекарственным веществом лечебных свойств. Эти обстоятельства обуславливают необходимость активного изыскания более эффективных химиотерапевтических препаратов и рациональных способов их применения (17, 67, 76).

В этом аспекте представляют определенный интерес научные исследования Поздеева O.K. с сотр. (138, 139, 140), Макаева Х.Н. с сотр. (95, 96) и Муртазиной Г.Х. (119, 121) по изучению препаратов из группы сераорганических соединений, синтезированных сотрудниками ИОФХ им. Арбузова А.Е. КНЦ РАН. Ими было выявлено, что сераорганические соединения задерживают репродукцию вируса гриппа вследствие торможения активности вирусной нейраминидазы, обладают стабильной бактерицидной активностью в отношении большинства грамположительных и грамотрицательных бактерий, «in vivo» повышают фагоцитарную активность лейкоцитов и бактерицидную активность сыворотки крови, а при аэрогенном использовании - функциональную активность альвеолярных макрофагов при достаточно низкой токсичности для лабораторных животных.

Исходя из этого, в процессе изыскания эффективных химиотерапевтических средств для лечения желудочно-кишечных заболеваний молодняка сельскохозяйственных животных нами была отобрана Диэтиламмониевая соль Ы-метиламино-1-фенилметансульфоиовой кислоты из группы сероорганических соединений, синтезированная сотрудниками ИОФХ им. Арбузова, названная условно селимакцид (Патент №2111962) (135).

С учетом изложенного определены цель и задачи наших исследований.

Цель: экспериментальными и клиническими исследованиями обосновать возможность применения селимакцида как лечебное средство в комплексной терапии желудочно-кишечных болезней молодняка животных.

Для выполнения поставленной цели были определены следующие задачи:

1. Изучить антимикробную активность селимакцида «in vitro» и «in vivo» в отношении изолятов, выделенных из содержимого желудочно-кишечного тракта здоровых и больных колибактериозом, сальмонеллезом телят.

2. Определить токсико-фармакологические параметры селимакцида и изучить возможные отдаленные последствия при его воздействии на организм.

3. Изучить влияние селимакцида на клинический статус, гематологические показатели и факторы неспецифической защиты лабораторных и сельскохозяйственных животных.

4. Оценить терапевтическую эффективность селимакцида при экспериментальном сальмонеллезе и колибактериозе кроликов, а также при желудочно-кишечных болезнях телят в условиях хозяйств.

Научная новизна

Впервые определена антимикробная активность селимакцида в отношении бактерий, обитателей желудочно - кишечного тракта и возбудителей колибактериоза и сальмонеллеза; изучены его токсико-фармакологические параметры; влияние на факторы неспецифической защиты животных; распределение в органах и тканях при энтеральном введении; подтверждена эффективность селимакцида при экспериментально вызванных колибактериоза и сальмонеллеза кроликов, а также колибактериозе телят в условиях хозяйств.

Практическая ценность Высокая бактерицидная активность и терапевтическая эффективность селимакцида при низкой токсичности для теплокровных животных, отсутствие аллергизирующих свойств, тератогенности, эмбриотоксичности и мутагенности соединения, позволяют рекомендовать его для внедрения в ветеринарную практику при лечении и профилактике желудочно-кишечных заболеваний бактериальной этиологии.

Апробация работы

Материалы диссертации доложены и получили положительную оценку на ежегодных заседаниях ученого совета «ВНИВИ» и ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» при обсуждении отчетов о НИР за 2001-2009 годы; на Международных и Всероссийских научно-практических конференциях

Владимир, 2004; Казань, 2004; Санкт-Петербург, 2004); на II съезде ветеринарных фармакологов и токсикологов России «Современные проблемы ветеринарной фармакологии и токсикологии» (г. Казань, 2009г.).

Основные положения, выносимые на защиту: антимикробная активность селимакцида «in vitro» и «in vivo» в отношении бактерий, обитателей желудочно-кишечного тракта и возбудителей колибактериоза и сальмонеллеза животных; токсико-фармакологические параметры, раздражающие, аллергизирующие свойства и возможные отдаленные последствия при применении селимакцида в опытах на лабораторных и сельскохозяйственных животных; влияние селимакцида на клинический статус, гематологические показатели и факторы неспецифической защиты организма здоровых и больных желудочно-кишечными болезнями животных; терапевтическая эффективность селимакцида при экспериментальном сальмонеллезе, колибактериозе кроликов и колибактериозе телят.

Публикации По материалам диссертации опубликовано 7 работ, в том числе 2 статьи в реферируемом ВАКом России изданиях: «Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана», 2006; «Ветеринарный врач», 2009.

Объем и структура диссертации Диссертация изложена на 139 страницах компьютерного текста и включает: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов исследований, выводы, практические рекомендации, список литературы и приложения. Работа иллюстрирована 36 таблицами, 2 рисунками. Список литературы содержит 256 источников, из них 59 иностранных.

Заключение Диссертация по теме "Звероводство и охотоведение", Потехина, Рамзия Мухаметовна

выводы

1 В качестве этиотропного и/или патогенетического лечебного средства в комплексной терапии молодняка животных при желудочно-кишечных болезнях предложено новое синтезированное химическое соединение -диэтиламмониевая соль Ы-метиламино-1-фенилметансульфоновой кислоты -селимакцид.

2 Селимакцид в концентрации 0,5-2 мг/мл обладаем бактериостатическим, а при концентрации 5 — 7,5 мг/мл — бактерицидным действием в отношении патогенных изолятов кишечной палочки, сальмонелл, стафилококков, клостридий, которое не меняется в кислой среде. В этих дозах селимакцид не ингибирует рост ферменгативно активной кишечной палочки.

3 На модели экспериментально вызванных колибактериоза и сальмонеллеза у лабораторных животных селимакцид сохраняет свою антимикробную активность и предотвращает формирование бактерионосительства. При однократном пероральном введении в дозе 1/10 ЬО50 (3 8 0 мг/гол) селимакцид сохраняется в организме в бактерицидной концентрации в течение 12 часов.

4 Средне-смертельная доза (1Л}5о) селимакцида при однократном подкожном введении белым мышам составляет 1667 мг/кг, при внутрижелудочном введении белым крысам — 3000 мг/кг, кроликам - 3833 мг/кг. Субхроническая токсичность (ЬБ50) при внутрижелудочном введении кроликам составляет 20220,8 мг/кг, а коэффициент кумуляции - 5,3. При пероральном введении телятам 3-6 дневного возраста в дозе 5000 мг/кг не вызывает признаков интоксикации и гибели подопытных животных. Согласно ГОСТа 12.1.007-76 селимакцид относится к соединениям III класса опасности.

5 Селимакцид при многократном (30 -48 дней) пероральном введении в дозе 1/10 Ы}5о не обладает мутагенной активностью, цитогенетическим действием, эмбрио- и гонадотоксичностью, тератогенностью. Пероральнос введение селимакцида в течение 30 сут в дозе 190, 380, 760 мг/кг кроликам и в течение 15 сут в дозе 200 мг/кг телятам 5-12 дневного возраста не оказывает отрицательного воздействия на их клинический статус, гематологические и биохимические показатели, не вызывает патологических изменений в органах и тканях.

6 У животных больных колибактериозом в остром периоде болезни наблюдается повышение функционально-метаболической активности нейтрофилов крови с истощением их резервного потенциала, что подтверждено при оценке в НСТ-тесте. Селимакцид повышает у больных колибактериозом животных функционально-метаболическую активность и резервный потенциал нейтрофилов крови (НСТ-тест), суммарную фагоцитарную активность лейкоцитов и бактерицидную активность сыворотки крови.

7 Селимакцид при пероральном введении телятам 5-12 дневного возраста в дозе 60-100 мг/кг два раза в день обуславливает 96-100% лечебный эффект при колибактериозе. Срок лечения при этом не превышает 5-7 суток.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1 Для профилактики и лечения как этиотропное и/или патогенетическое средство в комплексной терапии телят при желудочно-кишечных заболеваниях (сальмонеллез, колибактериоз) рекомендуется селимакцид в дозе 60-100 мг/кг два раза в день, в течение 5-7 суток.

2 По результатам изучения свойств селимакцида в целях производственной апробации его лечебной эффективности, разработана «Рекомендация по применению селимакцида для лечения и профилактики желудочно-кишечных болезней молодняка животных», утвержденное РГУ «Управление ветеринарии Республики Марий — Эл».

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата биологических наук, Потехина, Рамзия Мухаметовна, Казань

1. Авакаянц, Б.М. Опыт лечения и профилактики энтерита гелят./Б.М. Авакаянц //Ветеринария, -1997. -№9. -С.34-36.

2. Авакаянц, Б.М. Фитотерапия при лечении диспепсии телят./ Б.М. Авакаянц, М.С. Благонравов, JT.A. Попова, Н.В. Галакгионова и др.//Ветеринарный консультант.-№9-10.-2008.-С.34.

3. Агий, В.М. Профилактика желудочно-кишечных и респираторных болезней телят путем изменения технологии их содержания ./Пробл. Агропром. Комплексу Карпат, 1994, вып.З.- С.204-213.

4. Алексеева, С.А. Резистентность организма кур под влиянием сульфадимезина и левомицетина// Ветеринария.-№9.-1996.-С.

5. Алиев, A.A. Витамин F — незаменимый фактор, предупреждающий диспепсии новорожденных телят. /A.A. Алиев, В.М. Щеглов //Воронеж. -2002. -С.64-67.

6. Алиев, A.A. Витамин F предупреждает диспепсию новорожденных телят /A.A. Алиев //Ветер, консультант. -Москва. -2004. -№9. -С.20-21.

7. Аликаев, В. А. Влияние витаминной и минеральной подкормки стельных коров на здоровье и развитие телят./В.А. Аликаев //Проблема животноводства. 1938.-С.127-132.

8. Аликаев, В.А. Профилактика заболеваний и выращивание здорового молодняка с/х животных. /В.А. Аликаев //Матер. Куйбышевской обл. научной произ. зооветконф. -Куйбышев, 1966. -С.90-105.

9. Аликаев, В.А. Некоторые итоги и перспективы комплексных исследований по изучению диспепсий новорожденных телят. /В.А. Аликаев, К.И. Вертинский //Труды MB А, 1967. -Т.51. -С.5-11.

10. Алимов, A.M. Желудочно-кишечные болезни поросят и их профилактика.//Ветеринария с/х животных.-№3.-2008.-С.25-26.

11. Амирбеков, М. Доксиветин — антибиотик пролонгированного действия. /М. Амирбеков //Ветеринария. -1999. -№6. -С.43-45.

12. Андреева, A.C. О роли патогенных серотипов кишечной палочки при заболеваниях молодняка с/х животных. /A.C. Андреева //Матер, всесоюз. конф. по болезням молодняка с/х животных и птиц. -М. —1964. -С. 156-157.

13. Анохин, Б. Опыт лечения диспепсии новорожденных поросят. /Б. Анохин, В. Лопатин //Ветеринария с/х животных -2006. -№8.

14. Антипов, В.А. Тилазин эффективный антибиотик. /В.А. Антипов //Ветеринария. -1981. -№8. -С.63-65.

15. Антонов, Б.И. Лабораторные исследования в ветеринарии. Биохимические и микробиологические.// Под. Ред. Б.И. Антонова, М.: Агропромиздат.-1991 .-С.8-9.

16. Априкян, B.C. Иммуномоделирующие свойства миелопептидов при различных патологиях бактериальной природы у животных// Автореф. дис. канд.биол.наук.-М.-1988.-19с.

17. Аристархова, Л.Н. Испытание Полнена-1 при диспепсии телят. /Л.Н. Аристархова, Н.В. Чурина, A.A. Малыгина //Тр.Свердл.н.-и.вет.станции. -1995.-Вып. 10.-С.228-231.

18. Арсланова, Д.М. Клеточный иммунитет больных колибактериозом при фаготерапии. /Д.М. Арсланова //Актуальные вопросы бактериальных инфекций: Сб. научн. тр. /Ташкентский государственный медицинский институт. Ташкент. —1989. -С.11-13.

19. Ахметова, Л.И. Чувствительность к антимикробным препаратам штаммов эшерихий и сальмонелл, выделенных в Екатеринбурге. /Л.И. Ахметова, С.М. Розанова //Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. -2000. -№3. -С.21-27.

20. Бабаева, М.В. Параформ и канамицин при колибактериозе цыплят. /М.В. Бабаева //Ветеринария. -1983. -№ 4. -С.36-37.

21. Бабкина, Т.Н. Эффективность методов лечения телят, больных диспепсией. /Т.Н. Бабкина //пос. Персиановский. —2002. —С.21-23.

22. Байбурский, В.Л. Комбинированные антибиотические препараты в ветеринарии. /В.Л. Байбурский, Л.В. Анбхина //Антибиотики и химиотерапия. -1992. -№2. -С.50-53.

23. Баран, В.М. Клиническое значение некоторых показателей иммунитета при сальмонеллезе./В.М. Баран, П.Л. Новиков, A.A. Астапов, М.И. Вершеня// Здравоохранение Белоруссии.-1986.-№10.-С.56-58.

24. Барсков, A.A. Микрофлора кишечника телят клинически здоровых и больных токсической диспепсией. /A.A. Барсков //Уч.зап.КГВИ. -Казань. — 1970.-Т. 104. -С.

25. Белоновская, О.С. Исследование показателей углеводного обмена при диспепсии телят. /О.С. Белоновская, C.B. Плюйко //Пробл.вет.биологии. —М.: 1997. -С.35-41.

26. Белоусов, Ю.Б. Клиническая фармакология и фармакотерапия. /Ю.Б. Белоусов, B.C. Моисеев, В.К. Лепахин //М.: Универсум Паблишинг. -1997. — С.339-343.

27. Белянко, Л.В. Комплексная система профилактики и лечения вирусно-бактериальных гастроэнтеритов новорожденных телят на фермахпромышленного типа. /JI.B. Белянко //Вирус.болезни с/х животных. — Владимир. -1995. -С.217-219.

28. Бергман, Г. А. Липополисахарид-опосредованная активация нейтрофилов периферической крови у больных.//Г.А. Бергман, А.Н. Горобченко, C.B. Грачев и др.// Вестник новых медицинских технологий.-1999.-№1.-С.52-53.

29. Берина, В.Г. Профилактика гипокалиемии у телят. /В.Г. Берипа //Диагностика, лечение и профилактика незараз, и инфекц. болезней с/х животных Зап.Сибири. -Омск,- 1994(1995).-С. 113-114.

30. Блюгер, А.Ф. Клиническая иммунология кишечных инфекций. /А.Ф. Блюгер, Х.М. Векслер //Рига. -1980. -214с.

31. Бовкун, Г.Ф. Нормобиоценоз и дизбактериоз молодняка /Г.Ф. Бовкун, Е.П. Ващекин, Н.И. Малик, Е.В. Малик //Ветеринария сельскохоз-х жив. -№3. —2008. —С.12-18.

32. Бовкун, Г.Ф. Пробиотическая профилактика и терапия дизбактериозов / Г.Ф. Бовкун, Е.П. Ващекин, Н.И. Малик, Е.В. Малик //Ветеринария сельскохоз-х жив. -№4. -2008. -С.28-29.

33. Бондаренко, В.М. Антибиотикорезистентность у патогенных штаммов E.coli, выделенных от больных в СССР и НРБ. /В.М. Бондаренко, Р.И. Маринова, Л.И. Глатман, И.П. Корягина //Антибиотики. -1981. -№8. -С.608-612.

34. Борисова, Е.В. Участие липополисахарида сальмонелл в развитии иммунологической недостаточности. /Е.В. Борисова, В.А. Борисов // Журп. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. —1995. -№6. -С.65-66.

35. Бриан, JI.E. Бактериальная резистентность к химиопрепаратам. /Л.Е. Бриан //Медицина. -1984. -С.

36. Бродов, Л.Е. Актуальные вопросы патогенетической терапии острых кишечных инфекций. /Л.Е. Бродов, В.В. Малеев, Н.Д. Ющук // Сов. медицина. -1991. -№7. -С.65-69.

37. Бродов, Л.Е. Диагностика и лечение острых кишечных инфекций. /Л.Е. Бродов, Н.Д. Ющук, В.В. Малеев //Эпидемиология и инфекционные болезни. -1997. -№4. —С.4-6.

38. Бузлама, B.C. Лекарство для животных — современные требования и проблемы создания.// Сб. докл. Науч-практ. конф.-Сигулда.-1990.-С.24-25.

39. Бухарин, О.В. Сальмонеллы и сальмонеллезы. /О.В. Бухарин, ТО.Д. Каган, А.Л. Бурмистрова //Екатеринбург: УрО РАН. -2000. -258с.

40. Винников, Н.Т. Валовое количество общих аминокислот в сыворотке крови здоровых и больных диспепсией телят. /Н.Т. Винников, Л.С. Ильясова //Саратовская гос.академия ветеринарной медицины и биотехнологий. — Саратов. -1995. -С.5-6.

41. Винников, Н.Т. Дегидратация у больных диспепсией телят и ее коррекция. /Н.Т. Винников //Всерос.н.-.вет.ин-т патологии, фармакологии и терапии. -Ворнеж. -1995. -С.39-41.

42. Винников, Н.Т. Содержание натрия в органах и тканях здоровых и больных диспепсией телят. /Н.Т. Винников //Итоги и перспективы науч.исслед. по пробл. патологии животных и разраб.средств и методовтерапии и профилактики. -Воронеж. -1995. -С.283-284.I

43. Волков, И.В. К вопросу энтероколитов новорожденных телят. /И.В. Волков //Ветеринария. -1957. -№1. -С67-68.

44. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности ГОСТ ССБТ12.1.007-76.-М.- 1976.

45. Гамидов, М.Г. Эффективное средство при лечении диареи новорожденных телят. /М.Г. Гамидов //Актуал. вопр. ветеринарии. -Новосибирск. -1997. -С.36-37.

46. Гаффаров, Х.З. Клинико-эпизоотологические особенное ги инфекционных диарей новорожденных телят и основные принципы их профилактики и лечения. /Х.З. Гаффаров, Г.Н. Спиридонов //Труды 1 съезда вет.врачей РТ. -Казань. -1996. -С. 163-167.

47. Гаффаров, Х.З. Моно- и смешанные инфекционные диареи новорожденных телят и поросят. /Х.З. Гаффаров, А.В. Иванов, Е.А. Непоклонов, А.З. Равилов //В кн. —Казань. -2002. —592с.

48. Генес, B.C. Таблицы достоверных различий между группами наблюдений по качественным показателям. /B.C. Генес // М.: -1964. -С.81-83.

49. Глотов, А.Г. Вирусная диарея — болезни слизистых оболочек КРС и стратегии его контроля /А.Г. Глотов, К.Л. Келлинг //Российский ветеринарный журнал. -2008. -№4. -С. 19-22.

50. Даминов, Т.А. Эффективность применения тималина при сальмонеллезе. /Т.А. Даминов, М.А. Гулямова //XII Всесоюз. съезд врачей. -1988. -С.196-198.

51. Дульнев, В.И. О профилактике нарушений обмена веществ у коров и диареи телят в зимний период. /В.И. Дульнев //Молоч. и мясн. Скотоводство. -2000. -№1. —С.20-21.

52. Ермолин, A.B. Лечебная и профилактическая эффективность линко-спектина при диспепсии у телят. /A.B. Ермолин, Д.И. Дегтяров //Актуал. проб. вет. медицины, животноводства, обществознания и подг. кадров на Юж.Урале. -Челябинск. -1996. -С.27-29.

53. Жадинский, Н.В. Экспериментальное обоснование применения рифампицина и гентамицина при сальмонелл езах. /Н.В. Жадинский //Автореф.дис. .канд.мед.наук. -Харьков. -1980. -16с.

54. Зароза, В.Т. Эширихиоз телят. /В.Т. Зароза //Всесоюз. Академия с/х наук. В.И. Ленина. -Москва. -1991. -С. 174-196.

55. Зароза, В.Т. Возбудители колибактериоза сельскохозяйственных животных и их лабораторная идентификация /В.Т.Зароза, Г.А. Бурова, В.Г. Буров //Ветеринария сельскохоз-х жив. -№3. -2008. -С.29-30.

56. Зуева, B.C. Влияние лейкинферона на активность фагоцитирующих клеток при сальмонеллезах. /B.C. Зуева, Н.Я. Спивак, И.В. ФильчаковI

57. Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. —1991. -№9. —1. С.21-25.

58. Ильинская, Р.Д. Значение энтеропатогенных штаммов E.coli при 1 желудочно-кишечных заболеваниях телят. /Р.Д. Ильинская //Ветеринария. —1963.-№12.-С.58-60.

59. Ильинский, Е.В. Острые расстройства пищеварения у новорожденных i телят. /Е.В. Ильинский, К.Г. Габриелян //Ветеринария с/х животных. -2006. -! №1. —С.67-69.1.{

60. Исабаев, А.Ж. Фармакокоррекция иммуннобиохимического статуса у телят при диспепсии. /А.Ж. Исабаев //-Троицк. -2004. -19с.

61. Кашкин, К.П. Иммунная реактивность организма и антибиотическая терапия. /К.П. Кашкин, З.О. Караев //Д.: Медицина. -1984. -200с.

62. Кирилличева, Г.Б. Функциональная активность макрофагов при заражении вирулентным и авирулентным штаммами эшерихий. /Г.Б. Кирилличева, Л.Д. Кудрявцева, Ю.А. Белая, М.А. Туманян //Журн. микробиология, эпидемиология и иммунобиология. —1987. -№5. -С.76-79.

63. Киселева, P.E. Эндогенная интоксикация у телят при диарее. /P.E. Кисилева, Р.В. Борченко, JI.B. Кузмичева //Ветеринария. -2005. -№12. -С.39-41.

64. Ковалев, В.Ф. Антибиотики, сульфаниламиды и нитрофураны вветеринарии. /В.Ф. Ковалев, И.Б. Волков, Б.В. Виолин//М.-ВО «Агропромиздат». -1988. -С. 181-184.

65. Ковальчук, Н.М. Проблемы эшерихиоза телят в современных условиях экологического неблагополучия /Н.М. Ковальчук //Ветеринария сельскох-х жив. -2008. -№4. -С.21-22.

66. Козлова, Н.С. Чувствительность антибиотикоустойчивых штаммов сальмонелл к новым антибиотикам и химиопрепаратам. /Н.С. Козлова, И.К. Лебедева //Антибиотики и химиотерапия. -1991. -Т.36. -№2. -С.24-26.

67. Козловська, Г.В. Новые данные относительно патогенной характеристики E.coli. //BicH. аграр. науки. -1997. -№2. -С.75-76.

68. Колесов, A.M. Этиология диспепсии у телят. /A.M. Колесов //Тр. Саратовского ЭВМ. -1968. -Т.15.

69. Кондрахин, И.Г1. Диспепсия новорожденных телят — успехи, проблемы. /И.П. Кондрахин //Ветеринария. -2003. -№1. -С.39-43.

70. Коробко, А. Влияние различных биопрепаратов на сохранность телят./А. Коробко// Молоч. и мясное скотоводство.-2000.-№2.-С.28-30.

71. Кудлай, Д.Г. Генетика лекарственной устойчивости бактерий. /Д.Г. Кудлай, В.Ф. Чубиков //-М.: -1972. -129с.

72. Кузнецова, С.М. Комбинированная антибиотикотерапия. /С.М. Кузнецова//Антибиотики. -1983. -№2. -С.19-37.

73. Кузник, Б.И. Иммуногенез, гемостаз и неспецифическая резистентность организма. /Б.И. Кузник, Н.В. Васильев, H.H. Цыбиков //М.: Медицина. -1989. -С. 158-167.

74. Куликова, И.Н. Клинико-иммунологическая оценка лечения иммунофаном больных гастроинтестинальной формой сальмонеллеза. /И.Н. Куликова, В.П. Машилов, Н.Б. Касимова //Эпидемиология и инфекционные болезни. -1998. -№1. -С.30-33.

75. Купчинская, Ю.К. Побочное действие лекарств. /Ю.К. Купчинская, Б.И. Василяускас, В.В. Кемпинскас //-М.: Медицина. -1972. -С. 199-202, 213215,269-272.

76. Курамшина, В.А. Изучение антимикробной активности препарата МК-1095. /В.А. Курамшина //Матер. Международной конф., посвящ. 125-летию академии. -Казань. -1998. -Часть 1. -С.52.-54.

77. Курамшина, В.А. Изучение токсикологических параметров препарата МК-1095. /В.А. Курамшина, Х.Н. Макаев // Матер.науч.произв.конф. -Казань. -1999. -Часть 2. -С. 137-138.

78. Курамшина, В.А. Лечебно-профилактическая эффективность препарата МК-1095 при желудочно-кишечных болезнях микробного характера у ягнят. /В.А. Курамшина, А.П. Ильина, Х.Н. Макаев //Матер.науч.произв.конф. -Казань.-1999.

79. Ларичев, B.C. Современные методы лечения диспепсии телят. //Ветеринарный консультант №18 2007.

80. Лейси, Б. Механизм химиотерапевтического синергизма./ М.: Иностранная литература.-1960.-С.96-109.

81. Лисицын, В.В. Вакцинапрофилактика диарея новорожденных теля! рота — и коронавирусной этиология. /В.В. Лисицын, Т.Б. Никитина, В.В. Думова, Д.К. Павлов //Российский вет. журнал. —2008. -№3. -С.16-18.

82. Лопаткин, И. А. Фармакокинетика перфлоксацина при гнойно-воспалительных заболеваниях почек и мочевыводящих путей.//Антибиотики и химиотерапия.-1991.-№11.-С.40-42.

83. Лысенко, И.П. Изучение симбиотической и условно-патогенной микрофлоры при желудочно-кишечных заболеваниях телят. /И.П. Лысенко //Ветеринария. -Киев. -1975. -Вып.40. -С.3-11.

84. Магдей, М.В. Анализ групповой заболеваемости сальмонеллезом в республике Молдова./ М.В. Магдей, В.Н. Слизар, С.ULI. Рожнова // Журнал Микробиология.-1993 .-№4.-С.47-52.

85. Макаев, Х.Н. Лечение и профилактика желудочно-кишечных болезней молодняка сельскохозяйственных животных. /Х.Н. Макаев, Х.З. Гаффаров //Матер.научно-произв.конф. по актуал. Проблемам ветеринарии и животноводства. -Казань. —1997. —С.32-34.

86. Макаев, Х.Н. Новое противомикробное средство против респираторных и желудочно-кишечных заболеваний. /Х.Н. Макаев, А.З. Равилов, B.C. Угрюмова //Ветеринарный врач. -2000. -№2. -С.24-26.

87. Малеев, В.В. Проблемы и перспективы патогенетической терапии инфекционных болезней. /В.В. Малеев //Эпидемиология и инфекционные болезни. -2000. -№3. -С.4-8.

88. Малкина, Е.Ю. Протективное действие ряда иммуномодуляторов и их влияние на активность макрофагов. / Е.Ю. Малкина, Т.Б. Мастернак, A.C. Ларин //Иммунология. -1998. -№1. -С.33-36.

89. Мамедов, А.Т. Лечение желудочно-кишечных заболеваний телят с использованием лекарственных растений. /А.Т. Мамедов //-Воронеж. —2004. -С.388-390.

90. Маннапова, Р.Т. Иммунный статус и его коррекция прополисом в комплексе с политрилом при диспепсии телят. /Р.Т. Маннапова //М. —2000. -С.44-45.

91. Маннапова, Р.Т. Влияние нового препарата политрил в комплексе с прополисом, пиримидинами, бифидумбактерином на состояние естественной резистентности при диспепсии телят. /Р.Т. Маннапова //М. -2001. —С.45-48.

92. Машилов, В.П. Лечение больных с кишечными инфекциями в поликлинике./ В.П. Машилов, К.И. Чекалина//Терапевтический архив.-1996.-№11.-С.30-32.

93. Медведев, И.Н. Оптимизация показателей гемостаза фосфопогом у телят при диспепсии. /И.Н. Медведев //Ветеринария. -2007. -№4. -С.42-44.

94. Методические указания к постановке исследований по гигиеническому нормированию промышленных аллергенов в воздухе рабочей зоны. М., 1988.

95. Методические указания по изучению отдаленных последствий пестицидов. М., 1988. с.18.

96. Методические указания по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве. М., 1988. — С.140-257.

97. Методические указания по бактериологической диагностике колибактериоза (эшерихиоза) животных. М., 1991.

98. Методические указания по изучению общетоксического действия фармакологических веществ. М., 2002. -С.41-54.

99. Методические указания по определению чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам. М., 2004.

100. Методические указания по оценке аллергизирующих свойств фармакологических веществ. М., 2004. -С.54-70.

101. Митюшин, В.В. Диспепсия новорожденных телят. /В.В. Митюшин //М.: Росагропромиздат. —1989.

102. Мищенко, В.А. Особенности диарейных болезней крупного рогатого скота. /В.А. Мищенко, H.A. Яременко, О.И. Гетмолский, Д.К. Павлов //Ветеринария. -2001. -№5. -С.5-7.

103. Мищенко, В.А. Меры борьбы с диареями новорожденных телят /В.А. Мищенко, H.A. Яременко, Д.К. Павлов, О.И. Гетманский, A.B. Савин //Ветеринария с/х животных. -2006. -№1. -С.64-66.

104. Мищенко, В.А. Меры борьбы с диареями новорожденных телят/В.А. Мищенко, H.A. Яременко, Д.К. Павлов, О.И. Гетманский, A.B. Савин //Ветеринария с/х животных. -2008. -№3. -С. 18-20.

105. Мозгис, В.Я. Диарейные и респираторные заболевания телят, вызываемые условно-патогенными микроорганизмами. /В.Я. Мозгис // Латв.гос.НИИ животноводства и ветеринарии «сигра». —Рига. Эинатне. — 1993.-С. 176-177.

106. Мозгов, И.Е. Особенности действия фармакологических веществ на животных в раннем возрасте. /И.Е. Мозгов //В кн.:Профилактика заболеваний с/х животных. -М. -1968. -С. 14-15.

107. Муртазина, Г.Х. Изучение антимикробной активности селимакцида. /Г.Х. Муртазина, Х.Н. Макаев //Матер. 2-ой Респуб.конф. молод, ученых и специалистов «Человек и природа». —Казань. —1996, книга 2, -С.33.

108. Муртазина, Г.Х. Результаты определения токсикологических параметров селимакцида. /Г.Х. Муртазина, В.Г. Сафронов //Матер. 2-ой Респуб.конф. молод, ученых и специалистов «Человек и природа». -Казань. -1996, книга 2. -С.30.

109. Муртазина, Г.Х. Влияние селимакцида на показатели гемостаза в эксперименте /Г.Х. Муртазина //Тезисы докладов научн. конф. «Современные технологии диагностики и терапии инфекционных болезней». -СПб.-1999.-С. 190-192.

110. Муртазина, Г.Х. Селимакцид — новое химиотерапевтическое средство. /Г.Х. Мургазина //Матер.юбил.конф., посвящ. 50-летию Центра военно-технических проблем биологической защиты НИИ микробиологии МО РФ. -Екатеринбург. -1999. -С.155-156.

111. Муруева, Г.Б. Идентификация микробов семейства энтеробактериацеа. /Г.Б. Муруева, Р.Д. Батомункоева, Б.Б. Цыдыпова //Сб.тр.Бурят.СХИ. —Улан-Удэ. -1994. —С.52-54.

112. Навашин, С.М. Молекулярные основы современной антибиотикотерапии. /С.М. Навашин, Ю.О. Сазыкин //Антибиотики и химиотерапия. -1988. -№1. -С.3-12.

113. Немченко, М.И. Некоторые аспекты неонатологии. /М.И. Пемченко //В кн.: Профилактика болезней молодняка на животноводческих комплексах — Воронеж. -1981. -С.58-59.

114. Никитин, A.B. Влияние современных химиотерапевтических препаратов на активность фагоцитов и реакции иммунитета. /A.B. Никитин, П.С. Навашин, Т.В. Смолкина //Антибиотики и химиотерапия. -1996. -Т.41. -№7-8. -С.49-56.

115. Никитин, В.Ф. Эпизоотологические особенности криптоспоридиоза и меры профилактики диареи телят.// Журн. Ветеринария сельскохозяйственных животных.-№2.-2007.-С.58.

116. Ортман, P.A. Химиотерапевтическая эффективность энроксила при желудочно-кишечных и легочных заболеваниях телят и поросят. / P.A. Ортман //Актуал.проб.ветеринарии. -Барнаул. -1995. -С. 157-158.

117. Падейская, E.H. Некоторые вопросы антимикробной терапии кишечных инфекций. /E.H. Падейская //Русский мед. журнал. -1997. -№24. -С.26-34.

118. Пак, С.Г. Состояние факторов клеточного иммунитета при сальмонеллезе и пищевых токсикоинфекциях. /С.Г. Пак, И.Л. Виноградов, Х.М. Векслер //Журн.микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. — 1987. -№12. —С78-81.

119. Пак, С.Г. Сальмонеллез. /С.Г. Пак, М.Х. Турьянов, М.А. Пальцев //-М.:Медицина. -1988. -304с.

120. Папуниди, К.Х. Влияние пробиотиков на микрофлору желудочно-кишечного тракта новорожденных телят /К.Х. Папуниди, Г.Ш. Закирова //Ветеринарный врач. -2006. -№4. -С.29-30.

121. Папуниди, К.Х. Влияние лечебно-профилактического иммуноглобулина на некоторые биохимические и иммунологические показатели бронхопневмонии телят /К.Х. Папуниди, О.Г. Бусыгина //Ветеринарный врач -2006, №4. -С.39-40.

122. Паршин, П.А. Нитазолсодержащие препараты при желудочно-кишечных болезнях молодняка. /П.А. Паршин, C.B. Шабунин //Ветеринария. -1997. -№9. -С.38-41.

123. Першин, Г.Н. Методы экспериментальной химиотерапии./Г.Н. Першин //М., Медицина. 1971.- С.46-49.

124. Печеницына, Т.В. Влияние биостимулятора на иммунологические и биохимические сдвиги при экспериментальном сальмонелл езе./Т.В.г

125. Печеницына, Ф.И. Рафикова// Материалы IV съезда гигиенистов, санитарных1.Iврачей, эпидемиологов, микробиологов и инфекционистов Узбекистана.-Ташкент.-Медицина.-1980.-С.64-65.

126. Поздеев, O.K. Антивирусные свойства производных аминосульфоновых кислот, содержащих алкиламинозаместители. /O.K. Поздеев, C.B. Андреев, В.Б. Иванов, Ю.В. Бадеев //Сб.научн. трудов Казанского гос.вет. института. -Казань. -1990. -С.93-99.

127. Поздеев, O.K. Коррекция патологических процессов в органе мишени инфекции как альтернативный путь создания новых противовирусных препаратов. /O.K. Поздеев, Г.Х. Гильманова, В.Д. Коробкова, C.B. Андреев //Матер.Всесоюз.симп. -Рига. -1991. -С. 148-153.

128. Поздеев, O.K. Антивирусные свойства фосфор- и сераорганических соединений. /O.K. Поздеев //Автореф.дис.д-ра.мед.наук. -Казань. -1993. -31с.

129. Покровский, В.И. Сальмонеллезы: (Этиология, эпидемиология, клиника, профилактика). /В.И. Покровский, В.А. Килессо, Н.Д. Ющук //-Т.: Медицина. -1989. -344с.

130. Поспелов, Е.В. Состояние иммунной системы и обмена аминокислот у больных диспепсией телят в связи с применением ронколейкина и реамберина. /Е.В. Поспелов //-СПб. -2003. -19с.

131. Проданов, В.И. Роль микробных факторов в этиологии диспепсии телят. /В.И. Проданов //В. -1969. -№4. -С.67-69.

132. Проданов, В.И. Материалы к изучению желудочно-кишечных заболеваний новорожденных телят. /В.И. Проданов //В кн.: Профилактика и лечение заболеваний молодняка с/х животных. -М. -1974. -С.204-208.

133. Пройкова, В.А. Фармакология и токсикология. /В.А. Пройкова, Г.Ы. Першин и др. //-1990. -№4. -С.404-407.

134. Рабинович, М.И. Влияние ряда лекарств на основные показатели крови. /М.И. Рабинович //Ветеринария. -1998. -№10. -С.43-46.

135. Раицкая, В.И. Новые препараты для лечения и профилактики желудочно-кишечных болезней телят. /В.И. Раицкая, О.П. Панина //Ветеринария. -1999. -№3. -С.42-43.

136. Рапопорт, М.И. Токсикогинетика.//Сб.-.Итоги науки. Фармакология и токсикология. М. 1966.-с7-46.

137. Рашидова, P.A. Фагоцитарная реакция лейкоцитов у больных сальмонеллезом и бактерионосителей. /P.A. Рашидова //Медицинский журнал Узбекистана. —1982. -№3. -С.31-37.

138. Рысакова, В.Е. Биологические свойства и чувствительность к антибиотикам некоторых представителей семейства кишечных бактерий. /В.Е. Рысакова //В. кн.: Химиотерапии инфекция и лекарственная устойчивость патогенных микроорганизмов. М., 1973. -259с.

139. Сапожников, А.Ф. Эффективность лечения телят при различных формах диспепсии. /А.Ф. Сапожников, О.В. Суханова, M.JI. Лебедева //Междун.научн.производ.конф. по актуал. проблемам Агропром.комплекса. -Казань. -2003. -4.2.i

140. Свергупов, В.Г. Изучение эффективности пролонгированногоiпрепарата ТСС при диареи молодняка животных. /В.Г. Свергунов //Вет.врач. : -2005. -№5. -С.56-57.

141. Семенченко, М.В. Резистентность S. Typhimurium к антибактериальным препаратам./ М.В. Семенченко, Э. Савелли1 //Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия.-2001.-№3.I