Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Фармако-токсикологические свойства и терапевтическая эффективность комплексного препарата на основе доксициклина и флорфеникола

ВАК РФ 06.02.03, Звероводство и охотоведение

Автореферат диссертации по теме "Фармако-токсикологические свойства и терапевтическая эффективность комплексного препарата на основе доксициклина и флорфеникола"

7

Абрамов Сергей Владиславович

Фармако-токсикологические свойства и терапевтическая эффективность комплексного препарата на основе доксициклина и флорфеникола

06.02.03. - ветеринарная фармакология с токсикологией

і з мдр жг

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Москва-2012

005013452

Работа выполнена в ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии» Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИВСГЭ Россельхозакадемии) Научный руко- доктор биологических наук, профессор водитель: Дорожкин Василий Иванович

Официальные Уразаев Дмитрий Николаевич

оппоненты: доктор ветерииарных наук, профессор, ФГБОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина», профессор кафедры фармакологии и токсикологии Лобова Полина Сергеевна

кандидат биологических наук, ведущий научный сотрудник ФГБУВГНКИ Ведущая органи- ГНУ Всероссийский научно-исследовательский вете-зация: ринарный институт патологии, фармакологии и тера-

пии Россельхозакадемии.

СО

часов на заседа-

Защита диссертации состоится « Чмт 2012 г в /о нии диссертационного совета Д 006.008.01 при ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии» Российской академии сельскохозяйственных наук по адресу: 123022, г. Москва, Звенигородское шоссе, дом 5.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ ВНИИВСГЭ Россельхозакадемии.

Автореферат разослан « 2) » хМХфггЮ^ 2012 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук Xfä&j

Крутько Н.С.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В настоящее время на развитие животноводства в нашей стране обращают все большее внимания. Особое значение имеет получение здорового жизнеспособного молодняка телят и решение вопросов, направленных на повышение их продуктивности и сохранности.

Выполнению этой задачи мешают болезни телят раннего возраста различной этиологии. Несвоевременная и неправильная выпойка молозива, несбалансированное и неполноценное кормление, нарушение условий содержания, сырость, сквозняки и другие изменения микроклимата в родильных отделениях и телятниках приводят к возникновению различных респираторных и желудочно-кишечных болезней молодняка. В этиопато-генезе этих болезней основную роль играют пастереллы, стафилококки, стрептококки, патогенные штаммы E.coli, микоплазмы, вирусы и др. При изменении внешней среды и понижении устойчивости организма эта микрофлора становиться патогенной и может стать причиной развития патологического процесса. Желудочно-кишечные и бронхо-легочные заболевания проявляются у телят в форме токсической диспепсии, гастроэнтеритов, бронхитов, бронхопневмонии, плевритов и т.д. Все это, в конечном итоге, без оказания лечебной помощи, приводит к гибели молодняка (Пахмутова В.М. 2006; Шабунин C.B. 2008; Антипов В.А. 2009).

Чтобы предотвратить массовый падеж, необходимо своевременное и качественное вмешательство ветеринарных специалистов. В решении этой важной проблемы ветеринарная наука добилась определенных успехов. Для лечения легочных и желудочно-кишечных болезней молодняка предложены различные схемы и большое количество фармакологических средств, включая антибиотики, сульфаниламиды, фторхинолоны и др. Общим недостатком антимикробных средств является то, что длительное применение одних и тех же препаратов приводит к появлению устойчивых штаммов микроорганизмов, и тем самым к снижению их лечебной эффективности, что в свою очередь усложняет и удорожает процесс лечения (Ковалев В.Ф.,1983; Ковалев В.М, Виолин.Б.В.,1985).

В этой связи изыскание новых резервных комплексных антибактериальных препаратов имеет важное практическое значение. Применение рациональных комбинаций антибактериальных средств позволяет расши-

3 г

рить спектр действия комплексного препарата и предотвратить развитие резистентности у микроорганизмов.

Исходя из вышеизложенного, в настоящей работе изучен комплексный антибактериальный препарат флоридокс на основе доксициклина и флорфеникола производства ЗАО «Нита - Фарм» (г. Саратов).

Цель и задачи исследований. Целью работы было изучение фарма-ко-токсикологических свойств и терапевтической эффективности комплексного препарата на основе доксициклина и флорфеникола.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи: -определить острую и подострую токсичность препарата на белых мышах и крысах при внутрижелудочном и внутримышечном применении;

-изучить раздражающее действие препарата на кожный покров и слизистую конъюнктиву кроликов и выяснить аллергенные свойства препарата на морских свинках;

-исследовать специфическую токсичность препарата (гепатотокси-ческие, эмбриотоксические и тератогенные свойства);

-изучить подострую токсичность препарата на телятах; -разработать метод ВЭЖХ с масс-спектрометрическим определением действующих веществ и их метаболитов в биосубстратах.

-изучить фармакокинетику доксициклина и флорфеникола в организме телят.

—установить наличие остаточных количеств действующих веществ и их метаболитов в органах и тканях телят после курсового применения препарата;

-изучить терапевтическую эффективность препарата при бронхопневмонии и колибактериозе телят;

-разработать проект инструкции по применению препарата при болезнях телят бактериальной этиологии.

Научная новизна работы. Впервые проведена фармако - токсикологическая оценка комплексного препарата флоридокс. Определены параметры острой и подострой токсичности, раздражающего, аллергенного, гепато-токсического, эмбриотоксического и тератогенного действия. Разработан метод ВЭЖХ с масс-спетрометрическим определением действующих веществ и их метаболитов в органах и тканях телят. Определены сроки воз-

4

можного использования мяса и субпродуктов для пищевых целей после курсового применения препарата. Изучена эффективность препарата при бронхопневмонии и колибактсриозе телят.

Практическая значимость работы. Для лечения бронхопневмонии и колибактсриоза телят рекомендован новый комплексный препарат фло-ридокс на основе доксициклина и флорфеникола. Разработана методика определения остаточных количеств доксициклина, флорфеникола и флор-фениколамина в органах и тканях животных с использованием метода ВЭЖХ с масс-спектрометрическим определением. Данные по исследованию фармако-токсикологических свойств, терапевтической эффективности и фармакокинетики легли в основу разработки нормативных документов (СТО и инструкции по применению флоридокса).

Основные положения диссертации, выносимые на защиту: -результаты изучения фармако - токсикологических свойств препарата на лабораторных животных и телятах;

-результаты разработки метода ВЭЖХ с масс-спектрометрическим определением действующих веществ и их метаболитов в органах и тканях телят;

-результаты изучения фармакокинетики флоридокса и определение остаточных количеств действующих веществ (доксициклина, флорфеникола и флорфениколамина) в органах и тканях телят;

-результаты изучения терапевтической эффективности препарата при бронхопневмонии и колибактериозе телят.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы были доложены и обсуждены на научно-методической комиссии ФГУ «ВГНКИ» (2009 г.); на ученом совете ГНУ ВНИИСГЭ 2009-2011 гг.; на III съезде фармакологов и токсикологов России «Актуальные проблемы ветеринарной фармакологии, токсикологии и фармации» (Санкт-Петербург, 2011); на международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы современной ветеринарии» (г. Краснодар, 2011г.); на международной научной конференции «Лекарственные препараты для животных» (г. Москва 2011 г.); расширенном совещании ГНУ ВНИИ ветеринарной санитарии, гигиены и экологии Россельхозакадемии. (2011 г.).

Публикации результатов исследований. По теме диссертации опубликованы 4 печатные работы в изданиях, входящих в перечень ВАК РФ.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 128 страницах компьютерного текста и состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Список литературы включает 205 источников, в том числе 106 отечественных и 99 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 33 таблицами и 8 графиками.

2. Материалы и методы исследований

Исследования проведены в ГНУ ВНИИВСГЭ, а также на базе ООО МНИЦ «ОЗОС» г. Москва; СК «Бакланово» Демидовского района, Смоленской области; племзаводе ООО «Авангард», Рязанской области; СПК «Черемшан» Самарской области.

Для проведения исследований использовали: испытуемый комплексный препарат флоридокс производства ЗАО «Нита - Фарм», г. Саратов).

Флоридокс (Floridox) - раствор для инъекций. В 1 мл препарата в качестве действующих веществ содержится 50 мг доксициклина гиклата (в пересчете на основание) и 100 мг флорфеникола, а в качестве вспомогательных веществ: оксид магния - 4 мг, ронгалит - 4 мг, диметилацетамид -700 мг и вода для инъекций. По внешнему виду препарат представляет собой прозрачную жидкость от коричневого до темно - коричневого цвета. Для сравнения эффективности флоридокса были использованы антибактериальные препараты флорой (KRKA d.d., Novo mesto, Словения), бицил-лин-3 (ООО «ТМ» Белоруссия), энроколи («S.P. Veterinaria», S.A, Испания) и доксилокс (ЗАО «Нита-Фарм», г. Саратов).

Эксперименты проводили па 70 беспородных белых мышах массой 18-20 г и 193 белых крысах массой 90-234 г, 30 морских свинках массой 210-235 г, 12 кроликах породы шиншилла массой 2,3-3,0 кг, 193 телятах в возрасте от 4-10 дней до 3,5-4 месяцев. Для исследований животных разделяли на группы в соответствии со схемой эксперимента. В качестве биоло-

гического материала использовали кровь, сыворотку и плазму крови, легкие, сердце, печень, почки, мышцы.

Для анализа состояния животных проводили определение гематологических показателей крови - гемоглобина, форменных элементов крови -эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов на гематологическом анализаторе «Abacus JuniorVct» («Diatron», Австрия); лейкограмму определяли общепринятым методом. Биохимические показатели крови (билирубин, ACT, AJIT, ЛДГ, мочевину, креатинин, общий белок, щелочную фосфатазу, глюкозу, общий белок) определяли на анализаторе А-15/25 («BioSystems», Испания) и автоматическом биохимическом анализаторе Olympus AU 400.

Исследование общетоксических свойств препарата (острая и подо-страя токсичность) проводили на лабораторных животных (Смирнов A.M., Дорожкин В.И., 2010 г.). Определение острой токсичности проводили на белых мышах в дозах 1000, 2500, 3000, 5000, 7500, 10000 и 12000 мг/кг и белых крысах в дозах 1000; 2500; 4000; 5000; 7500 и 10000 мг/кг при однократном внутрижелудочном введении препарата; на белых крысах при внутримышечном введении препарата в дозах 1000; 2500; 3000; 3500; 4000 и 5000 мг/кг массы животного. В течение 14 суток после введения препарата учитывали общее состояние, характер проявления интоксикации, особенности поведения, приема корма, воды, состояние шерстного покрова, слизистых, время гибели животных. Уровень опасности препарата оценивали согласно ГОСТ 12.1.007-76 «Вредные вещества, классификация, требования безопасности».

Подострую токсичность изучали при многократном внутримышечном введении препарата белым крысам в дозах 1/10 LDS0 (350 мг/кг), 1/20 LD5o (175 мг/кг), 1/50 LD5n (70 мг/кг). В конце опыта проводили декапита-циго животных и отбирали органы для расчета массовых коэффициентов и кровь для исследований гематологических и биохимических показателей.

Местно-раздражающее действие препарата изучали па кроликах породы шиншилла путем 20 повторных накожных аппликаций в объеме 0,2 мл на выстриженный участок боковой поверхности туловища. Учет результатов вели на 1; 7; 14; 20 и 26 сутки опыта. Степень выраженности функционально-морфологических изменений кожи оценивали в баллах по линейке C.B. Суворова (1974).

Раздражающее действие препарата на слизистую оболочку глаза изучали на кроликах методом конъюнктивальных проб (Майд А., 1987).

Аллергенное действие препарата изучали на морских свинках с использованием метода гистаминного шока и коиъюнктивалыюго теста.

Влияние препарата на антитоксическую функцию печени оценивали в эксперименте на белых крысах методом гексеналового сна (Смирнов A.M., ДорожкинВ.И. 2010 г.).

Эмбриотропные свойства препарата изучали на белых крысах. Препарат вводили внутримышечно в дозе - 175 мг/кг животным 1-й группы с 1 по 6-сутки беременности, 2-й группы с 7 по 13 сутки и 3-й группы с 14 по 19-сутки. На 20 сутки беременности животных декапитировали с целью изучения состояния матки, яичников и эмбрионов.

Исследование подострой токсичности препарата проводили на телятах 3,5-4 месячного возраста. Препарат вводили животным опытных групп внутримышечно в дозах 175 и 350 мг/кг, ежедневно в течение 15 суток. Наблюдение за опытными животными проводили в течение 30 дней. У животных отбирали кровь для определения гематологических и биохимических показателей.

Разработку метода ВЭЖХ с масс-спектрометрическим определением осуществляли на хромато-масс-спектрометрической системе, включающей градиентный микронасос и автосемплер Perkin Elmer series 200 и квадрупольный масс-спектрометр Applied Biosystems 3200 QTrap LC/MS/MS. Анализ хроматограмм производили с помощью программно-аппаратного комплекса analyst software 1.4.2.

Фармакокинетику и определение остаточного содержания действующих веществ препарата изучали на телятах 3,5 - 4 месячного возраста при однократном и курсовом внутримышечном введении в дозе 1 мл на 7,5 кг массы животного. Перед введением препарата у телят брали кровь для определения фоновых показателей. В дальнейшем отбор проб крови у животных проводили через 0,5; 1, 2, 3, 6, 9, 12 и 24 часа после введения препарата. Убой животных проводили на 40 и 42 сутки после 7 дневного введения. Для анализа отбирали образцы мышечной ткани, сердца, почек, печени и легких.

Терапевтическую эффективность флоридокса исследовали на телятах больных бронхопневмонией и колибактериозом. При бронхопневмонии телят препарат применяли внутримышечно в дозе 1 мл/7,5 кг массы животного один раз в сутки в течение 5-6 дней подряд до исчезновения клинических признаков болезни.

Терапевтическое действие флоридокса сравнивали с другими препаратами для лечения респираторных и желудочно-кишечных болезней телят. Эффективность антибактериальных препаратов оценивали по скорости устранения симптомов болезни, нормализации некоторых гематологических и биохимических показателей и сохранности животных.

Для определения оптимальной дозы препарата при лечении бронхопневмонии телят флоридокс вводили внутримышечно в дозах 1; 1,25; 1,5 мл на 7,5 кг массы животного ежедневно в течение 5-7 суток. Флорой и бициллин-3 назначались в соответствии с инструкцией по применению.

Терапевтическое действие флоридокса при желудочно-кишечных заболеваниях изучали на телятах в возрасте 4-10 суток, больных колибактериозом. Препарат вводили внутримышечно в область шеи в дозах 1,0; 1,25; 1,5 мл на 7,5 кг массы животного в течение 3-5 суток. В качестве препаратов сравнения использовали энроколи и доксилокс в соответствии с инструкциями по применению.

Статистическую обработку полученных данных проводили с использованием программы «Student 200».

3. Результаты исследований

3.1. Результаты исследований острой и подстрой токсичности флоридокса

Результаты опытов показали, что характер и степень острого токсикоза у белых крыс и мышей при внутрижелудочном применении флоридокса по выраженности и тяжести были разными в зависимости от вводимых доз.

В результате проведенных экспериментов установлено, что значение LD50 флоридокса для белых крыс при внутрижелудочном введении, рассчитанного по методу Кербера, составило 5583±622 мг/кг. Расчет по методу Миллера-Тейнтера показал, что максимально переносимая доза (LD0)

флоридокса для белых крыс равнялась 2500 мг/кг, LD,6 - 3400 мг/кг, сред-несмертельная доза (LDS0) составила 5600 (4097-7103) мг/кг, LDg4 равнялась 7800 мг/кг и абсолютно смертельная составила 10000 мг/кг.

Значение LD50 флоридокса для мышей при внутрижелудочном введении было определено с использованием метода Кербера и составило 6550±527 мг/кг. LD50 флоридокса для белых мышей, рассчитанное методом Миллера - Тейнтера, было 6500 (5360^-7640).

С учетом установленных параметров токсического действия флоридокса на лабораторных животных его можно отнести к 4 классу опасности согласно общепринятой гигиенической классификации (ГОСТ 12.1.007-76).

LD50 флоридокса для белых крыс при внутримышечном введении, рассчитанного по методу Кербера, составило 3458±206 мг/кг. Расчет по методу Миллера-Тейнтера показал, что максимально переносимая доза (LD0) препарата для белых крыс была равна 2500 мг/кг, LDi6 - 2750 мг/кг, среднесмертельная доза (LD50) составила 3500 (3005+3995) мг/кг, LDM равнялась 4200 мг/кг и абсолютно смертельная составила 5000 мг/кг.

При исследовании подострой токсичности установлено, что у крыс, которым испытуемый препарат вводили внутримышечно в дозах 175 (1/20 LD50) и 70 (1/50 LD50) мг/кг, не наблюдали каких-либо симптомов интоксикации или патологических реакций. При введении испытуемого препарата в дозе 350 (1/10 LD50) мг/кг имело место статистически достоверное снижение относительного прироста массы тела по сравнению с этим показателем у контрольных крыс (111,05±3,04 против 130,88±2,63%). Прирост массы крыс при введении препарата в дозах 175 и 70 мг/кг, не отличался статистически значимым образом от контроля. У крыс, которым вводили испытуемый препарат в дозе 350 мг/кг, отмечалось увеличение относительной массы печени (40,54±0,91), почек (7,70±0,14) и семенников (12,12±0,51) в сравнении с контрольной группой (36,70±0,35; 6,58±0,16 и 9,49±0,24, соответственно). Значения относительной массы органов крыс, которым препарат вводили в дозах 175 и 70 мг/кг, не подверглись изменениям.

У опытных животных не отмечено статистически значимого изменения уровней гемоглобина, количества эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов по сравнению с контролем. При введении препарата в дозах 350 и

10

175 мг/кг были отмечены статистически достоверные изменения некоторых биохимических показателей: уровня общего билирубина, мочевины, общего белка, активности альфа-амилазы и концентрации глюкозы по сравнению с контролем.

Таблица 1

Биохимические показатели сыворотки крови крыс после внутримышечного введения флоридокса в течение 14 суток (п = 10)_

Показатель Доза, мг/кг/индивидуальные значения для каждого животного, среднее значение ± средняя арифметическая ошибка (М±ш), t-критерий

350 175 70 контроль

Билирубин общий, мкмоль/л 10,41±0,71* t = 3,82 15,03±1,35 t = 0,85 14,36±0,91 t= 1,50 16,58±1,07

Билирубин прямой, мкмоль/л 2,26±0,47 t = 0,55 1,73±0,34 t = 0,18 1,4±0,26 t = 0,66 1,85±0,53

АСТ, Е/л 211,50±16,57 t = 0,77 220,10±36,15 t = 0,68 192,00±15,50 t = 0,05 190,70± 19,72

АЛТ, Е/л 55,90±3,29 t = 1,93 52,50±4,88 t= 1,13 50,20±3,51 t = 0,93 44,60±4,48

Мочевина, ммоль/л 7,87±0,30* t = 4,22 7,71±0,31* t = 4,42 9,03±0,60 t= 1,79 10,52±0,52

Креатинин, мкмоль/л 45,30±1,25 t = 1,61 43,30±2,12 t= 1,95 44,80±4,21 t - 0,90 49,20±1,93

Общий белок, г/л 63,90±1,55* t = 5,18 70,50±1,77* t = 2,95 91,50±19,26 t = 0,56 80,10±2,53

Щелочная фосфатаза, Е/л 235,50±20,19 t= 1,26 242,50±14,76 t= 1,16 292,20±34,38 t = 0,32 277,80±24,77

Альфа-амилаза общая, Е/л 337,20±39,81* t = 5,34 486,10±15,27* t = 3,9 479,70±59,32 t= 1,59 583,40±18,05

Глюкоза, ммоль/л 7,09±0,27* t = 3,80 7,31±0,26* t = 3,30 8,12±0,37 t= 1,05 8,63±0,27

лдг, Е/л 845,30±83,14 t= 1,43 1442,20±254,06 t = 0,70 899,90±109,18 t= 1,15 1196,60±218,10

* Примечание: Р < 0,05

Также наблюдали тенденцию к увеличению уровней AJIT, ACT и ЩФ, что может свидетельствовать о влиянии флоридокса на функцию печени. Эти изменения не были статистически достоверны, и уровень этих ферментов находился в пределах физиологической нормы. Тем не менее,

11

это дает основание предположить, что испытуемый препарат в высокой дозе оказал определенное отрицательное влияние на функцию печени.

Приведенные данные биохимического анализа позволяют заключить, что флоридокс в дозе 70 мг/кг при внутримышечном введении не оказывал влияния на все тестированные показатели. Доза 175 мг/кг является пороговой (минимально действующей), а доза 350 мг/кг является токсической.

3.2. Результаты исследований раздражающего и аллергенного действия флоридокса

При многократных аппликациях флоридокса на выстриженные участки кожи кроликов в течение 2 недель функционально - морфологических нарушений целостности эпидермиса кожи не наблюдали. Гиперемия, шелушение, отек, эритема кожи отсутствовали. Оценка раздражающего действия флоридокса при однократном закапывании в конъюнктивалышй мешок показала отсутствие патологических изменений слизистой оболочки глаза кроликов. При ежедневном закапывании флоридокса под конъюнктиву 12 кроликам в течение 5 суток, в конце эксперимента отмечали незначительную гиперемию слизистой оболочки глаза.

Полученные данные в эксперименте с гистаминовым шоком показали, что препарат не потенцировал действие гистамина, следовательно, он не обладает аллергенным свойством. Исследование аллергенного действия флоридокса методом «конъюнктивального теста» показало, что случаев покраснеиия слезного протока, склеры или всей конъюнктивы у морских свинок не наблюдали. Флоридокс не вызывал гиперчувствительности немедленного и замедленного типов, реакция на протяжении всего периода исследования была отрицательной.

Таким образом, исследованиями установлено, что флоридокс не обладает раздражающим и аллергенным действием.

3.3. Результаты изучения влияния флоридокса на антитоксическую функцию печени, эмбриотоксических и тератогенных свойств

При оценке антитоксической функции печени установлено, что флоридокс в дозах 175 и 70 мг/кг массы животного не оказал гепатотоксиче-ского действия на функцию печени крыс.

Введение флоридокеа самкам крыс в дозе 175 мг/кг, в критические сроки беременности не вызывало эмбриотоксического эффекта. Показатели предимплантационной гибели зигот, постимплантационной гибели эмбрионов, общей эмбриональной смертности в опытных группах не отличались от контрольных групп.

Показателями тератогенного действия являются нарушения органогенеза во внутриутробном периоде и изменение костной системы плода. При измерении костной системы плодов установлено, что длина трубчатых костей была одинаковой, не выявлено случаев уродств и изменений внутренних органов при исследовании плодов.

Таким образом, установлено, что флоридокс не обладает эмбриоток-сическим и тератогенным действием.

3.4. Результаты исследований подострой токсичности флоридокеа на телятах

Установлено, что при ежедневном внутримышечном введении телятам флоридокеа в дозе 175 мг/кг клинические и гематологические показатели не выходили за пределы физиологической нормы и не отличались от таковых показателей контрольной группы.

После введения флоридокеа в дозе 350 мг/кг, на 15 сутки отмечали угнетение, достоверное учащение пульса и частоты дыхания по сравнению с контролем па 14,4 и 41,8% соответственно, повышение содержания эритроцитов и гемоглобина на 18,5 и 5,0% соответственно, снижение аппетита и количества потребляемой воды по сравнению с контрольными животными. Статистически достоверные изменения по сравнению с контрольными животными зафиксированы по таким показателям, как билирубин общий, билирубин прямой, ACT, AJIT, мочевина, общий белок и щелочная фосфатаза на 36,2; 51,8; 18,2; 66,4; 52,4; 11,7; 62,1%, соответственно.

Показатели активности ACT, AJ1T, уровня общего и прямого били-рубинов указывают, что исследуемый препарат отрицательно влияет на функцию печени (таблица 2 и 3). Эти изменения были обратимы и показатели соответствовали фоновым значениям через 15 суток после отмены препарата.

Во время опыта наблюдалась тенденция к постепенному увеличению уровня креатинина и мочевины в сыворотке крови опытных животных,

13

что также указывало на негативное влияние флоридокса на почки, однако эти изменения были обратимы и уровни креатинина и мочевины нормализовались через 15 суток после отмены препарата.

Среднесуточный прирост опытных и контрольных телят перед началом опыта составлял в среднем 475±35 г и 483±37 г. После 15- дневного введения препарата в дозе 350 мг/кг среднесуточный прирост снизился в среднем на 30 %. После отмены препарата, в конце эксперимента, показатели прироста достигали исходных данных и не отличались от таковых у телят контрольной группы.

Таким образом, можно констатировать, что флоридокс в дозе 350 мг/кг вызывает временное угнетение функции печени и почек. Все отмеченные изменения биохимических показателей были дозозависимы и при введении препарата в дозе 175 мг/кг были менее выражены.

3.5. Разработка метода определения доксициклина, флорфеникола и флорфениколамина в органах и тканях животных

В настоящее время существует ряд методов определения доксициклина и флорфеникола, основанных на методе высокоэффективной жидкостной хроматографии. Однако, данные методы не обеспечивают достаточной чувствительности при определении остаточных количеств препарата в органах и тканях животных. В основе разработанного нами метода совместного определения флорфеникола и доксициклина лежит экстракция доксициклина и флорфеникола из образцов органов и тканей животных из фосфатно-сульфатного буфера с помощью смеси этилацетата и изопропи-лового спирта с последующим отделением и упариванием органической фазы.

Таблица 2

Биохимические показатели крови телят до и после введения флорндокса в дозе 175,0 мг/кг

Показатели Ед. измерения Опытная группа Контрольная группа

фон 7 сутки 15 сутки 30 сутки фон 7 сутки 15 сутки 30 сутки

Билирубин общий Мкмоль/л 25,07±2,74 18,90+1,90 20,87+3,32 20,30±1,52 21,83±6.88 16,60+0.28 19,23=3,31 19,23 ±3,31

АСТ Ед./л 91,67+14,08 125,00+9,93» 139,67+17,61* 98,30+12,09 118.67+12,81 142,00+ 19,82 135,00±18,83 112.00±16,39

ллт Ед./л 19,33±7,76 31,33+7,41* 33,33+14,66* 28.67+3,86 26,00±7.79 21,67±7,41 20,33+7,41 20.67+3.86

Мочевина Ммоль/л 3,90+0,45 5,20+0,57 4,10=0,29» 4,20+0,79 3,87+0,61 5,23+0.61 4.67x0,37 4,60+0,79

Креатинин Мкмоль/л 78,67±12,97 110,33+24,50 90,33+13,57 82,00+5,45 99,33+15,84 114.67+18,19 114,00+9,93 92.00±5,35

Общий белок г/л 54,00±6,48 70,33±1,89 73,00+6,48 58,67+4,20 62,67+16,36 68,00+1,4] 71,33+2,49 62.67+4.50

Щелочная фосфатаза Ед./л 325,33+111,25 303,00+49,17 277,67+34,84* 294,00±35,06 347.33±75,30 326,67±60,43 307,67+37,03 234,00+65,06

а-амилаза Ед./л 31,00±14,66 49,33+24,85 56,00± 15,64 34,61 ±8,41 52,33+33,00 46,33±21,17 51,33+18.37 75,67+15,41

лдг Ед.л 947,67+67,26 1085,67+23.58 1056,33+80,08 952,10+131,61 1067,33+46,45 1161,33±35,71 1087,67±23,44 1089,00+138,67

Примечание: показатель достоверности * - Р > 0,95

Таблица З

Биохимические показатели крови телят до и после введения флоридокса в дозе 350 мг/кг

Показатели Ед. измерения Опытная группа Контрольная группа

фон 7 сутки 15 сутки 30 сутки фон 7 сутки 15 сутки 30 сутки

Билирубин общий Мкмоль/л 20,07±1,47 24,31 ±2,20* 26,24+4,36* 21,59+2,80 21,83+6,88 16,60+0,28 19,23+3,31 19,23+3,31

АСТ Ед./л 97,08±9,32 128,39+8,97* 159,55+13,20* 95,37+12,41 118,67*12,81 142,00+19,82 135,00+18,83 112,00+16,39

АЛТ Ед./л 22,40+3.58 35,50+7,15* 33,86+2,68* 21,72±7,20 26,00+7,79 21,67+7,41 20,33+7,41 20,67+3,86

Мочевина М моль/л 4,77+0,38 6.34+0,74* 7,12+0,49* 4,12+0,32 3,87+0,61 5,23+0,61 4,67±0,37 4,60+0,79

Креатинин Мкмоль/л 84,26+ 14,52 97,31 + 18,47 126,83±16,80* 78,54+11,04 99,33± 15,84 114,67+18,19 114,00+9,93 92,00+5,35

Общий белок г/л 53,30+3,75 63,32=2,76* 63,00+8,32* 60,14+3,69 62,67± 16,36 68,00+1,41 71,33+2,49 62,67+4,50

Щелочная фосфатаза Ед./л 305,31 ±81,52 237,07+70,58* 214,49+44,83* 279,36+55,23 347,33+75.30 326,67+60,43 347,67+37,03 234,00+65,06

а-амилаза Ед./л 42,66+10,42 54,00+8,25 48.85+5,46 42,42+5,31 52.33+33,00 46,33+21,17 51,33+18.37 75,67+15,41

лдг Ед./л 984,26±71,67 985,56+20,47 1023,11+70,80 924,52±67,21 1067,33+46,45 1161,33±35,71 1087,67+23,44 1089,00+138,67

Примечание: показатель достоверности * - Р > 0,95

Сухой остаток восстанавливали с помощью 0,5 мл мобильной фазы и анализировали методом ВЭЖХ с масс-спектрометричсской детекцией, позволяющим значительно повысить предел количественного детектирования, а также определить не только действующие вещества препарата, но и метаболит флорфеникола - флорфениколамин.

Разработанный метод экстракции действующих веществ позволил одновременно определять флорфеникол и доксициклин, что значительно ускоряет процесс анализа. В результате проведенных экспериментов установлено, что степень экстракции флорфеникола из проб плазмы крови составила 90%, из проб органов 87%, а флорфениколамина 81%. Степень извлечения доксициклина из проб плазмы крови и из органов составила 88%.

Разработанная методика была использована в дальнейших исследованиях для определения уровней остаточных количеств доксициклина, флорфеникола и флорфениколамина в органах и тканях телят.

3.6. Определение доксициклина, флорфеникола и флорфениколамина в образцах плазмы крови, органах и тканях телят

Установлено, что при однократном внутримышечном введении фло-ридокса действующее вещество флорфеникол в крови находили в более высокой концентрации в первый час, чем доксициклин. Причем, для доксициклина характерно было наличие двух пиков, соответствующих I и 9 часам (рис. 1). Второй пик через 9 часов можно объяснить, как повторным всасыванием вещества из кишечника, так и использованием пролонгирующего компонента в лекарственной форме. Низкая концентрация доксициклина обусловлена его высокой степенью связывания с белками крови и медленным всасыванием. Действующие вещества препарата обнаруживались в крови в эффективных концентрациях на протяжении 24 часов, при этом содержание флорфеникола было значительно выше, чем доксициклина.

u * ' ' ' I.......I 1 I 1 I ' I ' I ' I ' I ■ I '

о 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26

t, h

О- ДОКСИЦИКЛИН

- флорфеникол

График 1. Концентрация доксициклина и флорфеиикола в плазме крови телят

При изучении сроков выведения остаточных количеств доксициклина, флорфсникола и флорфениколамина было установлено, что содержание всех компонентов было ниже максимально допустимых уровней (СанПин 2.3.2.1078-01 доп.№22). Обнаруженные количества действующих веществ препарата через 40 суток после его отмены не привышали: 0,025 мкг/г флорфеникол; 0,020 мкг/г флорфениколамин; 0,070 мкг/г для доксициклина, а через 42 суток: 0,009; 0,015 и 0,056 мкг/г соответственно.

3.7. Изучение терапевтической и лечебно-профилактической эффективности флоридокса на телятах

Проведены три серии экспериментов по определению терапевтической эффективности испытуемого препарата флоридокс на телятах, больных бронхопневмонией и колибактсриозом. Результаты исследований представлены в таблице 4.

Таблица 4

Сравнительная терапевтическая эффективность флоридокса при бронхопневмонии и колибактериозе телят

^^^Покачатели Болезни Кол-во животных Препарат Дом Продолжительность лечения Пало Вынуждено убито Терапевтическая эффективность, %

Бронхопневмония 13 Флоридокс ] мл/7,5 кт 5-6 - 1 92,3

13 Флорон 1мл/10кт 6-8 - 1 92,3

Бронхопневмония 12 Флоридокс 1 мл/7,5 кг 5-7 - - 100

12 Флоридокс 1,25 мл/7,5 кг 5-6 - - 100

12 Флоридокс 1,5 мл/7,5 кг 5-6 - - 100

12 Флорон 1 мл/10 кт 7-8 1 1 83,3

14 Ьициллии-3 15 тыс ЕД/кт 1 раз в 3 суток 7-8 2 1 78,6

Колибактериоз 10 Флоридокс 1 мл/7,5 кг 4-5 - - 100

10 Флоридокс 1,25мл/7,5 кг 3-5 1 - 90

10 Флоридокс 1,5 мл/7,5 кг 3-5 - - 100

10 Энроколи 0,5 мл/10 кг 3-4 1 1 80

10 Доксилокс 1 мл/10 кг 5-6 - 1 90

Сравнительное изучение флоридокса и флорона для лечения бронхопневмонии телят 2,5-3 месячного возраста показало, что их эффективность была примерно одинаковой, однако продолжительность лечения фло-ридоксом составила 5-6 суток, а флороном 6-8 суток.

При выборе оптимальной дозы было установлено, что все испытанные дозы (1,0; 1,25 и 1,5 мл на 7,5 кг массы животного) обеспечили 100% эффективность лечения бронхопневмонии. В то же время, препараты флорон и би-циллин-3 показали более низкую терапевтическую эффективность (83,3% и

78,6%, соответственно). Следует отмстить, что длительность лечения флори-доксом составила 5-7 суток, в то время как препараты сравнения требовалось вводить в течение 7-8 суток.

При колибактериозе телят установлено, что флоридокс в дозе 1,0 -1,5 мл/7,5 кг массы животного обеспечивает терапевтическую эффективность от 90 до 100%. Лечение животных, больных колибактериозом, препаратами энроколи и доксилоксом было менее успешным, их эффективность составила 80 и 90% соответственно.

Учитывая, что эффективность лечения при введении флоридокса во всех испытанных дозах была практически одинаковой, можно рекомендовать применять его в суточной дозе 1 мл на 7,5 кг массы животного для лечения бронхопневмонии и колибактериоза телят в течение 5-7 суток. Испытуемый препарат флоридокс хорошо переносится животными, осложнений и побочных явлений не зарегистрировано.

ВЫВОДЫ

1. Установлено, что флоридокс относится к 4 классу опасности (по ГОСТ 12.1.007-76). ЛД50 при внутрижелудочном введении составила для мышей 6500 мг/кг, для крыс 5600 мг/кг, а при внутримышечном введении 3500 мг/кг.

2. Флоридокс не обладает раздражающим действием на кожный покров и конъюнктиву. Флоридокс не обладает гепатотоксическим эмбрио-токсическим и тератогенным действием.

3. Введение флоридокса телятам в дозах 175 и 350 мг/кг в течение 15 суток вызывает дозозависимые и обратимые изменения биохимических показателей, характеризующих функциональное состояние печени и почек. Через 15 суток после отмены препарата все показатели возвращались к фоновым уровням и соответствовали физиологической норме.

4. Установлено, что ВЭЖХ с масс-спектромстрической детекцией позволяет определять основной метаболит флорфеникола - флорфеникола-мин. Предел количественного определения компоненов препарата составил 0,003 мкг/г/мл. Степень извлечения докеициклииа из органов и тканей находится на уровне 88%, флорфеникола 87-90%, а флорфениколамина 81%.

5. Установлено, что действующие вещество флоридокса -доксициклин всасывается постепенно, имея два пика повышения концентрации в плазме крови: через 1 и 9 часов (0.56 и 0.42 мкг/мл соответственно). Флорфеникол в отличие от доксициклина быстро всасывается из места инъекции и достигает высоких концентраций в плазме крови в течение 1 часа после введения (4 мкг/мл). Оба компонента препарата обнаруживаются в плазме крови при его введении в терапевтических дозах в течение 24 часов. Концентрация флорфеникола при этом составляет не менее 0,6 мкг/мл, доксициклина - не менее 0.24 мкг/мл.

6. Остаточные количества доксициклина, флорфеникола и флор-фениколамина обнаруживаются в органах и тканях телят через 40 и 42 суток после применения препарата в терапевтической дозе, однако их концентрации не превышают МДУ, предусмотренные дополнением №22 к СанПиН 2.3.2.1078-01. Следовательно, мясо от животных, после применения флоридокса можно использовать в пищевых целях через 40 суток.

7. Терапевтическая эффективность флоридокса при его применении в дозе 1 мл/ 7,5 кг массы животного один раз в сутки в течение 5-7 дней при бронхопневмонии телят составила 92,3-100%; при колибакте-риозе телят - 100%.

Практические предложения

Для лечения телят при бронхопневмонии и колибактериозе предложен новый комплексный препарат флоридокс на основе доксициклина и флорфеникола обладающий широким спектром антибактериального действия. Препарат рекомендуется применять при респираторных и желудоч-но - кишечных заболеваниях бактериальной этиологии.

Разработана методика определения остаточных количеств доксициклина, флорфеникола и флорфениколамина. Данные по исследованию фармакотоксикологических свойств и терапевтической эффективности отражены в инструкции по применению флоридокса (документы одобрены ФГБУ ВГНКИ и переданы в Россельхознадзор для утверждения).

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

Абрамов C.B., Жукова H.H., Панфилова М.Н. Изучение терапевтической эффективности нового препарата на основе флорфеникола и док-сициклина на телятах//Международный вестник ветеринарии. - 2010,- №4. -С. 39-42.

Абрамов C.B., Жукова H.H., Панфилова М.Н. Оценка острой токсичности препарата на основе доксициклина с флорфениколом на лабораторных животных//Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии. -2011,-№2(6).-С. 92-94.

Абрамов C.B. Изучение фармакокинетики доксициклина в образцах крови телят после применения комплексного препарата флоридокс фирмы «Нита-Фарм»//Международный вестник ветеринарии. -2011. -№4. -С.43-46.

Абрамов C.B., Балышев A.B. Изучение фармакокинетики флорфеникола в образцах крови телят после применения комплексного препарата флоридокс фирмы «Нита-Фарм»//Международный вестник ветеринарии. -2011. -№4- С.46-49.

Подписано в печать. Формат 60x84/16 Бумага офсетная. Печать офсетная. Усл. печ. л. 1,0 Тираж 20 Экз. Заказ № 966 Типография ООО "Ай-клуб" (Печатный салон МДМ) 119146, г. Москва, Комсомольский пр-кт, д.28 Тел. 8-495-782-88-39

Текст научной работыДиссертация по сельскому хозяйству, кандидата ветеринарных наук, Абрамов, Сергей Владиславович, Москва

61 12-16/78

ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии» Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИВСГЭ Россельхозакадемии)

На правах рукописи

АБРАМОВ СЕРГЕЙ ВЛАДИСЛАВОВИЧ

ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА И ТЕРАПЕВТИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ КОМПЛЕКСНОГО ПРЕПАРАТА НА ОСНОВЕ ДОКСИЦИКЛИНА И ФЛОРФЕНИКОЛА

Специальность: 06.02.03. - ветеринарная фармакология с

токсикологией

ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор В.И. Дорожкин

Москва - 2012

ВВЕДЕНИЕ..............................................................................5

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ............................................................9

1.1. Респираторные и желудочно-кишечные болезни телят бактериальной этиологии.......................................................................9

1.2. Комплексная антибактериальная терапия, как способ преодоление устойчивости микроорганизмов...................................................15

1.3. Доксициклин......................................................................19

1.3.1. Физико-химические свойства..................................................19

1.3.2. Механизм действия.............................................................20

1.3.3. Фармакокинетика...............................................................20

1.3.4 Токсичность.......................................................................22

1.3.5. Методы анализа..................................................................24

1.3.6. Гигиенические нормативы....................................................25

1.4. Флорфеникол......................................................................26

1.4.1. Физико-химические свойства.................................................26

1.4.2. Механизм действия..............................................................27

1.4.3. Фармакокинетка.................................................................28

1.4.4. Биодоступность и токсичность...............................................30

1.4.5. Методы анализа..................................................................31

1.4.6. Гигиенические нормативы.....................................................32

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ..........................34

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ...........................................46

3.1. Результаты исследований острой и подострой токсичности..............46

3.1.1. Результаты исследований острой токсичности препарата флоридокс на лабораторных животных при внутрижелудочном введении...............46

3.1.2. Результаты исследований острой токсичности препарата при внутримышечном введении................................................................50

3.1.3. Результаты исследований подострой токсичности препарата при внутримышечном введении............................................................52

3.2. Результаты исследований раздражающего и аллергенного действия флоридокса.........................................................................62

3.2.1. Результаты исследований раздражающего действия препарата на кожу и конъюнктиву кроликов..........................................................62

3.2.2. Результаты исследований аллергенных свойств препарата на морских свинках....................................................................................62

3.3. Результаты изучения влияния флоридокса на антитоксическую функцию печени, эмбриотоксических и тератогенных свойств..........64

3.3.1. Результаты исследований влияния флоридокса на антитоксическую функцию печени.........................................................................64

3.3.2.Результаты изучения эмбриотоксических свойств препарата на самках белых крыс..........................................................................65

3.4. Результаты исследований подострой токсичности флоридокса на телятах....................................................................................67

3.5. Разработка метода определения доксициклина, флорфеникола и флорфеникол амина в органах и тканях животных.........................74

3.5.1. Подбор условий определения доксициклина в биосубстратах...........................................................................................74

3.5.2. Подбор условий определения флорфеникола, флорфеникол амина в биосубстратах............................................................................78

3.6. Определение доксициклина, флорфеникола и флорфеникол амина в образцах плазмы крови, органах и тканях телят..........................84

3.6.1. Результаты определения доксициклина и флорфеникола в образцах плазмы....................................................................................84

3.6.2. Результаты определения доксициклина, флорфеникола и флорфеникол амина в органах и тканях........................................................87

тивности флоридокса на телятах..................................................89

4. ОБСУЖДЕНИЕ.....................................................................94

5. ВЫВОДЫ...........................................................................104

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ........................................106

7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ......................................................107

8. ПРИЛОЖЕНИЕ....................................................................129

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. В настоящее время на развитие животноводства в нашей стране обращают все большее внимания. Особое значение имеет получение здорового жизнеспособного молодняка телят и решение вопросов, направленных на повышение их продуктивности и сохранности.

Выполнению этой задачи мешают болезни телят раннего возраста различной этиологии. Несвоевременная и неправильная выпойка молозива, несбалансированное и неполноценное кормление, нарушение условий содержания, сырость, сквозняки и другие изменения микроклимата в родильных отделениях и телятниках приводят к возникновению различных респираторных и желудочно-кишечных болезней молодняка. В этиопато-генезе этих болезней основную роль играют пастереллы, стафилококки, стрептококки, патогенные штаммы E.coli, микоплазмы, вирусы и др. При изменении внешней среды и понижении устойчивости организма эта микрофлора становиться патогенной и может стать причиной развития патологического процесса. Желудочно-кишечные и бронхо-легочные заболевания проявляются у телят в форме токсической диспепсии, гастроэнтеритов, бронхитов, бронхопневмонии, плевритов и т.д. Все это, в конечном итоге, без оказания лечебной помощи, приводит к гибели молодняка (Пахмутов В.М. 2006; Шабунин C.B. 2008; Антипов В.А. 2009).

Чтобы предотвратить массовый падеж, необходимо своевременное и качественное вмешательство ветеринарных специалистов. В решении этой важной проблемы ветеринарная наука добилась определенных успехов. Для лечения легочных и желудочно-кишечных болезней молодняка предложены различные схемы и большое количество фармакологических средств, включая антибиотики, сульфаниламиды, фторхинолоны и др. Общим недостатком антимикробных средств является то, что длительное применение одних и тех же препаратов приводит к появлению устойчивых штаммов микроорганизмов, и тем самым к снижению их лечебной

эффективности, что в свою очередь усложняет и удорожает процесс лечения (Ковалев В.Ф.,1983; Ковалев В.Ф, Виолин.Б.В.,1985).

В этой связи изыскание новых резервных комплексных антибактериальных препаратов имеет важное практическое значение. Применение рациональных комбинаций антибактериальных средств позволяет расширить спектр действия комплексного препарата и предотвратить развитие резистентности у микроорганизмов.

Исходя из вышеизложенного, в настоящей работе изучен комплексный антибактериальный препарат флоридокс на основе доксициклина и флорфеникола производства ЗАО «Нита - Фарм» (г. Саратов).

Цель и задачи исследований. Целью работы было изучение фарма-ко-токсикологических свойств и терапевтической эффективности комплексного препарата на основе доксициклина и флорфеникола.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи: -определить острую и подострую токсичность препарата на белых мышах и крысах при внутрижелудочном и внутримышечном применении;

-изучить раздражающее действие препарата на кожный покров и слизистую конъюнктиву кроликов и выяснить аллергенные свойства препарата на морских свинках;

-исследовать специфическую токсичность препарата (гепатотокси-ческие, эмбриотоксические и тератогенные свойства);

-изучить подострую токсичность препарата на телятах; -разработать метод ВЭЖХ с масс-спектрометрическим определением действующих веществ и их метаболитов в биосубстратах.

-изучить фармакокинетику доксициклина и флорфеникола в организме телят.

-установить наличие остаточных количеств действующих веществ и их метаболитов в органах и тканях телят после курсового применения препарата;

-изучить терапевтическую эффективность препарата при бронхопневмонии и колибактериозе телят;

-разработать проект инструкции по применению препарата при болезнях телят бактериальной этиологии.

Научная новизна работы. Впервые проведена фармако - токсикологическая оценка комплексного препарата флоридокс. Определены параметры острой и подострой токсичности, раздражающего, аллергенного, гепатотоксического, эмбриотоксического и тератогенного действия. Разработан метод ВЭЖХ с масс-спетрометрическим определением действующих веществ и их метаболитов в органах и тканях телят. Определены сроки возможного использования мяса и субпродуктов для пищевых целей после курсового применения препарата. Изучена эффективность препарата при бронхопневмонии и колибактериозе телят.

Практическая значимость работы. Для лечения бронхопневмонии и колибактериоза телят рекомендован новый комплексный препарат флоридокс на основе доксициклина и флорфеникола. Разработана методика определения остаточных количеств доксициклина, флорфеникола и флор-феникол амина в органах и тканях животных с использованием метода ВЭЖХ с масс-спектрометрическим определением. Данные по исследованию фармако-токсикологических свойств, терапевтической эффективности и фармакокинетики легли в основу разработки нормативных документов (СТО и инструкции по применению флоридокса).

Основные положения диссертации, выносимые на защиту: -результаты изучения фармако - токсикологических свойств препарата на лабораторных животных и телятах;

-результаты разработки метода ВЭЖХ с масс-спектрометрическим определением действующих веществ и их метаболитов в органах и тканях телят;

-результаты изучения фармакокинетики флоридокса и определение остаточных количеств действующих веществ (доксициклина, флорфенико-ла и флорфеникол амина) в органах и тканях телят;

-результаты изучения терапевтической эффективности препарата при бронхопневмонии и колибактериозе телят.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы были доложены и обсуждены на научно-методической комиссии ФГУ «ВГНКИ» (2009 г.); на ученом совете ГНУ ВНИИСГЭ 2009-2011 гг.; на III съезде фармакологов и токсикологов России «Актуальные проблемы ветеринарной фармакологии, токсикологии и фармации» (Санкт-Петербург, 2011); на международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы современной ветеринарии» (г. Краснодар, 2011г.); на международной научной конференции «Лекарственные препараты для животных» (г. Москва 2011 г.); расширенном совещании ГНУ ВНИИ ветеринарной санитарии, гигиены и экологии Россельхозакадемии. (2011 г.).

Публикации результатов исследований. По теме диссертации опубликованы 4 печатные работы в изданиях, входящих в перечень ВАК РФ.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 128 страницах компьютерного текста и состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Список литературы включает 205 источников, в том числе 106 отечественных и 99 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 33 таблицами и 8 графиками.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Респираторные и желудочно-кишечные болезни телят

бактериальной этиологии

Одним из факторов, сдерживающих рост поголовья крупного рогатого скота и продуктивность, являются болезни желудочно-кишечного тракта и респираторной системы молодняка, которые наносят значительный ущерб скотоводству [12, 28, 34, 58, 61, 67, 68, 92, 99].

По данным опубликованных источников в России ежегодно регистрируются желудочно-кишечные болезни более чем у 7,5 миллионов телят, из которых гибнет - 12-25% [1,4, 15].

Респираторные болезни занимают второе место после желудочно-кишечной патологии молодняка. Летальность и вынужденный убой животных от патологии дыхательной системы составляют от 5 до 90%, среди которых бронхопневмонии занимают одно из ведущих мест [2, 42, 55, 56, 105].

По сведениям В.М. Пахмутова И.И., Балковой и др. (2005), на болезни органов дыхания приходится 11% всего поголовья скота, что составляет 25% от всего заболевшего крупного рогатого скота [70].

Бронхопневмония (воспаление бронхов и легких) - заболевание полиэтиологическое и обычно возникает в результате комбинированного воздействия на организм неблагоприятных факторов (стрессов), ослабляющих резистентность. Она характеризуется скоплением в бронхах и альвеолах экссудата, состоящего из большого количества слизи, отторгнутой эпителиальными клетками слизистой оболочки, лейкоцитов, а также расстройством кровообращения и газообмена с нарастающей дыхательной недостаточностью и интоксикацией организма, нарушением обменных процессов [27, 31, 46, 56, 69, 71, 88, 91, 103, 105].

Таким образом, бронхопневмонию рассматривают не только как местный процесс с локализацией в легких, но и как общее заболевание, проявляющееся нарушением всех систем и функций организма.

Регистрируется бронхопневмония преимущественно у телят 1 -3 месячного возраста. Болезнь возникает чаще всего в зимний, весенний и летний сезон года. Зимняя и весенняя вспышка обычно начинается в феврале с максимальным количеством больных и их гибелью в марте - апреле [2, 7, 56].

У молодняка по своему происхождению бронхопневмонии телят подразделяют на первичные и вторичные.

Первичные бронхопневмонии обычно возникают вследствие воздействия неблагоприятных факторов внешней среды и нарушения санитарно-гигиенического режима содержания: сырость, скученность, повышенное содержание аммиака в помещении, воздействие низких температур, плохое кормление, отсутствие моциона, воздействие комплекса стресс-факторов в период комплектации и перевозки поголовья, особенно в условиях промышленной технологии и т.д.; в результате чего понижается естественная резистентность молодого организма телят [6,10, 24, 51, 87,104].

Вторичные бронхопневмонии наблюдаются при ряде инфекционных заболеваний.

Одной из причин заболевания молодняка бронхопневмонией являются патогенные и условно-патогенные микроорганизмы, находящиеся в организме животных в латентном состоянии и приобретающие вирулентные свойства при снижении резистентности и иммунологической реактивности организма животных [73, 74, 178].

Многообразие различных вирусных возбудителей, принадлежащих к высокопатогенным латентным семействам Негре8ушс1ае, Ас1епоутс1ае, Рагатухоушёае и др., вызывают заболевания органов респираторной системы и создают благоприятные условия для бактериальной микрофлоры,

которая при определенных условиях может стать первопричиной заболевания [14, 23, 43, 47, 89, 96].

Из пневмонических очагов, трахеальной и бронхиальной слизи у большинства заболевших и павших от бронхопневмонии животных удается выделить одновременно представителей разной бактериальной флоры: Streptococcus pneumonia, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pasteurella multocida, Pseudomonas aeruginosa, а также вирусы инфекционного ринот-рахеита, парагриппа-3 и вирусной диареи микоплазм, грибов, хламидий [11,14,17, 46, 96,106,150,165].

Смешанные инфекции бактериальной этиологии, как правило, на фоне стрессов и иммунодефицитов протекают значительно тяжелее, вызывая глубокие патологические изменения в бронхах и легких заканчиваясь чаще всего гибелью животных [5, 7, 9,13, 30, 46, 87, 91, 94, 106].

По мнению С.М Сулейманова (1986), респираторные болезни на фоне стрессов протекают у телят в виде острых вирусных инфекций, а затем могут осложняться вторичной инфекцией. В большинстве случаев бактериальная микрофлора в этиологии бронхопневмонии играет вторичную, осложняющую роль [87].

Больные животные являются источником дальнейшего распространения заболевания.

Основной путь передачи инфекции, по данным некоторых авторов, аэрогенный и воздушно-капельный [64, 87].

Клинические проявления смешанных инфекций очень разнообразны н не специфичны для каждого из составляющих их заболеваний. Они, как правило, не характеризуются суммой симптомов, а чаще сопровождаются активизацией патологического процесса.

При преимущественном участии в развитии бронхопневмонии патогенной бактериальной микрофлоры изменения характеризуются в основном экссудативным процессом и лейкоцитарной реакцией, что проявляется

быстрым накоплением сначала серозного, а затем катарального экссудата в просвете бронхиол и альвеол. Слизистая оболочка становится отечной, набухшей, поверхность ее бугристой. Это обусловлено тем, что бактерии обычно не проникают в стенку слизистой оболочки, а размножаются почти исключительно в просветах дыхательных полостей респираторных отделов легких [11, 29].

Характер воспалительного процесса при бронхопневмонии варьируется в зависимости от этиологического фактора и степени сопротивляемости организма.

При остром течении болезни вначале поражаются, как пр