Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Фармако-токсикологическая и терапевтическая оценка препаратов на основе фенилпиразола, бензилбензоата и перипроксифена при арахноэнтомозах плотоядных животных

ВАК РФ 03.02.11, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "Фармако-токсикологическая и терапевтическая оценка препаратов на основе фенилпиразола, бензилбензоата и перипроксифена при арахноэнтомозах плотоядных животных"

На правах рукописи

Степанов Алексей Александрович

ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКАЯ И ТЕРАПЕВТИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ПРЕПАРАТОВ НА ОСНОВЕ ФЕНИЛПИРАЗОЛА, БЕНЗИЛБЕНЗОАТА И ПЕРИПРОКСИФЕНА ПРИ АРАХНОЭНТОМОЗАХ ПЛОТОЯДНЫХ ЖИВОТНЫХ

Специальность: 03.02.11. - паразитология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

1 о АПР 2314

Москва - 2014

005546868

005546868

Работа выполнена в ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт гельминтологии имени К.И. Скрябина»

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук

Арисов Михаил Владимирович

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

Бондаренко Владимир Олегович,

ФГБУ «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов», ведущий научный сотрудник отдела качества и стандартизации фармакологических лекарственных средств

кандидат ветеринарных наук, Шемяков Дмитрий Николаевич, ФГБОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина», доцент кафедры паразитологии и инвазионных болезней животных

Ведущая организация: ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет»

Защита диссертации состоится «14» мая 2014 г. в 14— часов на заседании совета по защите диссертаций на соискание учёной степени кандидата наук, на соискание учёной степени доктора наук Д 006.011.01, созданного на базе ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт гельминтологии имени К.И. Скрябина»

Адрес: 117218, Москва, ул. Б. Черемушкинская, д. 28

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ «ВИГИС» и на сайте: ЬйрУ/итллу.vniigis.ru

Автореферат разослан «

Учёный секретарь совета по защите диссертаций на соискание учёной степени кандидата наук, на соискание учёной степени доктора наук, д.б.н., профессор

Бережко Вера Кузьминична

t. ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Арахноэнтомозы плотоядных животных распространены повсеместно: встречаются на всех материках, где обитают плотоядные животные, они имеют широкий ареал и проникают с животными во всё новые места обитания. (Галузо И.Г., 1950; Беклемишев В.Н., 1955; Бердыев Л., 1981; Непоклонов A.A., Бргошинина Г.Г., Ивашкова Е.И., 1983; Алексеев А.Н., 1985; Водянов A.A., 1986; Василсвич Ф.И., 1986; Кербабаев Э.Б., 1998; Mueller R.S., 2007 и др.).

В развитии кожных заболеваний плотоядных животных важную роль играют эктопаразиты. Наиболее распространены из арахнозов плотоядных животных саркоптоз, нотоэдроз, отодектоз и демодекоз. К паукообразным принадлежит и группа иксодовых клещей - наружных паразитов животных, зарегистрированных в качестве биологических переносчиков кровепаразитов (пироплазмы) собак. Немаловажную роль в развитии кожных заболеваний играют энтомозы, вызванные блохами, вшами и власоедами. По данным A.M. Титаренко (2000), И.Е. Рогозиной (2004, 2005), Т.С. Катаевой (2009) и др. в последние годы отмечена тенденция к увеличению распространения арахноэнтомозов плотоядных. Это связано с повышением поголовья собак и кошек, увеличением популяции бродячих животных (источников инвазии), содержанием собак и кошек на низком уровне ветеринарного обслуживания.

В настоящее время в ветеринарной практике используется большое количество ветеринарных препаратов с инсектицидным и акарицидным действием. Необходимость применения данных препаратов связано с тем, что заболевания, вызываемые насекомыми и клещами, инвазивны и причиняют значительный ущерб здоровью животных: кровососущие насекомые, клещи, блохи при укусах вызывают беспокойство и стресс; инокулируя при укусе биологически активные вещества и, выделяя продукты жизнедеятельности, они вызывают раздражение, воспалительную, аллергическую реакцию, токсикоз; при паразитировании клещей травмируется кожа, нарушается ее целостность, открываются ворота инфекции. При высокой степени инвазии возможно развитие анемии, истощение, снижение иммунитета. Иксодиды являются переносчиками опасных инфекций и инвазий (пироплазмоз, эрлихиоз, боррелиоз и т.д.) (Непоклонов A.A. с соавт., 1983; Тимофеев Б.А., 1992).

На протяжении многих лет основными методами борьбы с эктопаразитами животных остается применение химических средств. Начиная с 1950-х годов массовое использование химических инсектоакарицидов способствовало появлению резистентных популяций вредных насекомых и клещей (Brown A.W.F., 1976; Рославцева С.А., 1988; Сальникова О.Г., Яровая Н.В., 2011).

Актуальной задачей для ветеринарных специалистов является разработка новых препаратов, а также поиск иной стратегии применения существующих инсектоакарицидных средств, в результате чего свести к минимуму формирование устойчивых популяций эктопаразитов. Для интенсификации борьбы с арахноэнтомозами животных необходимо применять комбинированные препараты с разным механизмом действия, что уменьшит развитие лекарственной устойчивости, повысит эффективность обработок,

сократит кратность обработок, снизит затраты, уменьшит токсичность воздействия на животных.

Комбинации препаратов с разным механизмом действия не только более надежны, но и уменьшают развитие лекарственной устойчивости. Привыкание у насекомых приводит к снижению эффекта при длительном использовании препаратов. Поэтому целесообразна ротация различных средств с определенной периодичностью. Обработки животных обязательно сочетают с применением регуляторов роста и размножения насекомых для их уничтожения в окружающей среде (Стринадкин П.С., Андричук Б.В., Домацкий Н.И., 1982; Богданов М.Р., Мигранов М.Г., 1994; Дьяченко Ю.В., Водянов A.A., 1997; Грапов А.Ф., 1999; Енгашев C.B., Ларионов C.B., 2002; Соколов В .Д., Андреева H.JL, Ноздрин Г.А. и др., 2003).

Для расширения ассортимента отечественных средств, эффективных и безопасных в применении, на базе института гельминтологии (ВИГИС) разработан новый препарат с инсектоакарицидным действием «Инсакар». Изначально было предложено 4 композиции препарата с различным качественным и количественным составом активных компонентов (бензилбензоат, фипронил, перипроксифен). По результатам ранее проведенных исследований в лабораторных условиях выделили композицию-4 (с последующим названием «Инсакар плюс»), которая показала выраженную острую акарицидную активность и продолжительное остаточное действие в течение 30 дней. Кроме того, выделили композицию-1 (с последующим названием «Инсакар»), которая также обладала продолжительным остаточным действием в течение 30 дней, но 100% гибель клещей при первом контакте с обработанной поверхностью наступала на порядок дольше (Арисов М.В. и др., 2011). В исследованиях М.В. Арисова (2010,2011) были представлены данные о высокой инсектицидной эффективности обеих композиций препарата при энтомозах собак.

На первом этапе нашей работы было определение более эффективной, безвредной и экономичной композиции из ранее выделенных двух препаратов с различным качественным и количественным содержанием активных компонентов: инсакар, содержащий в качестве действующих веществ фипронил 9%, пирипроксифен 2% и вспомогательные компоненты; инсакар плюс, содержащий в качестве ДВ бензилбензоат 20%, фипронил 5%, пирипроксифен 2% и вспомогательные компоненты.

Цель и задачи исследований. Цель работы - на основе экспериментальных исследований определить более эффективную, безвредную и экономичную композицию из двух препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс» с различным качественным и количественным содержанием активных компонентов, а также изучить фармако-токсикологические свойства и лечебно-профилактическую эффективность выбранного препарата при арахноэнтомозах плотоядных животных.

Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:

- на основании фармако-токсикологических исследований и оценки сравнительной инсектоакарицидной эффективности препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс» определить более безвредную, эффективную и экономичную композицию;

- изучить аллергизирующие и имунотоксикологические свойства препарата;

- изучить овоцидное действие препарата в лабораторных условиях;

- изучить лечебно-профилактическую эффективность препарата при арахноэнтомозах плотоядных животных;

- разработать схему и способы лечения арахноэнтомозов плотоядных животных препаратом «Инсакар».

- разработать инструкцию по применению капель инсектоакарицидных «Инсакар» при арахноэнтомозах плотоядных животных.

Научная новизна. По результатам доклинических и клинических исследований двух препаратов выделен препарат «Инсакар плюс», показавший лучшую эффективность.

Изучены фармако-токсикологические свойства препарата «Инсакар плюс», результаты которых позволили научно обосновать безвредность препарата для животных в терапегических и повышенных дозах. Изучена лечебно-профилактическая эффективность препарата «Инсакар плюс» при арахноэнтомозах плотоядных животных. Разработаны схема и способы лечения арахноэнтомозов плотоядных животных препаратом «Инсакар плюс».

Разработана Инструкция по применению капель инсектоакарицидных «Инсакар» при арахноэнтомозах плотоядных животных.

По результатам исследований получен патент на изобретение РФ № 2456982 от 27 июля 2012 года «Инсектоакарицидное средство для лечения плотоядных животных».

Практическая значимость. Дано научно-практическое обоснование применения в ветеринарии нового инсектоакарицидного препарата «Инсакар». Разработаны схема и способы лечения арахноэнтомозов плотоядных животных препаратом «Инсакар».

Разработана и утверждена на Ученом Совете ГНУ «ВИГИС» Инструкция по применению капель инсектоакарицидных "Инсакар" при арахноэнтомозах плотоядных животных (протокол №7 от 29.09.2011).

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены, обсуждены и одобрены на заседаниях Ученого Совета ВИГИС 2011-2013 гг.; на научно-практических конференциях ««Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» (г. Москва, 2011; 2012 гг.).

Личный вклад диссертанта. Представленная диссертационная работа является результатом 3-летних научных исследований автора. Работа по проведению фармако-токсикологических исследований и оценки сравнительной инсектоакарицидной эффективности препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс» и изучению лечебно-профилактической эффективности

препарата «Инсакар плюс» при арахноэнтомозах плотоядных животных выполнены автором самостоятельно.

Схема и способы лечения арахноэнтомозов плотоядных животных препаратом «Инсакар», Инструкция по применению капель инсектоакарицидных «Инсакар» при арахноэнтомозах плотоядных животных разработаны совместно с научным руководителем. Диссертация выполнена под научным руководством доктора ветеринарных наук, ведущего научного сотрудника лаборатории иммунологии ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт гельминтологии им. К.И. Скрябина» Россельхозакадемии, Арисова Михаила Владимировича, который оказывал научно-методическую помощь при проведении исследований, анализе полученных данных. Статьи, написанные в соавторстве, включают не менее 80% материалов в исследованиях аспиранта.

Основные положения, выносимые на защиту:

- сравнительная оценка препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс» по фармако-токсикологическим и инсектоакарицидным свойствам;

- результаты исследований аллергических и иммунотоксических свойств препарата «Инсакар плюс»;

- результаты изучения овоцидного действия препарата «Инсакар плюс» в лабораторных условиях и лечебно-профилактической эффективности при арахноэнтомозах плотоядных животных;

Публикации. По материалам проведенных исследований и теме диссертации опубликовано 8 научных работ, 4 из которых в изданиях, рекомендованных ВАК РФ, где представлены основные положения работы.

Объем и структура диссертации. Диссертация написана на 143 страницах компьютерного текста, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Список использованной литературы включает 364 источника, из которых 247 отечественных работ и 117 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 27 таблицами, 9 рисунками. Приложение к диссертации включает: патент на изобретение РФ № 2456982 от 27 июля 2012 года «Инсектоакарицидное средство для лечения плотоядных животных»; инструкцию по применению капель инсектоакарицидных "Инсакар" при арахноэнтомозах плотоядных животных; акты производственных испытаний.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Основные фармако-токсикологические исследования проводились в лаборатории иммунологии ВИГИС. В производственных условиях работа проводилась в ветеринарных клиниках г. Москвы и Московской области, а также в ветеринарных учреждениях других регионов России.

Всего в экспериментальных и клинических исследованиях находилось 368 лабораторных животных (222 мыши, 140 крыс, 6 кроликов), а также 122 кошки, 251 собака.

Расчет параметров острой токсичности препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс» при пероралыгом введении и накожном нанесении проводили в соответствии с методическими рекомендациями по изучению общетоксического действия фармакологических веществ (1997 г.), используя метод Кербера в модификации В.Б.Прозоровского (Беленький М.Л., 1963; Жуленко В.Н., Рабинович М.И., Таланов Г.А., 2001; ГОСТ 12.1.007-76).

В опытах при введении в желудок использовали белых мышей (для каждого препарата использовали по 36 голов массой 20-22 г). Готовили 30% растворы и вводили с помощью иглы с булавовидным утолщением в желудок натощак. Препарат «Инсакар» вводили в дозах: первой группе - 0,2 мл (60 мг/гол или 3000 мг/кг); второй — 0,3 мл (90 мг/гол или 4500 мг/кг); третьей — 0,35 мл (105 мг/гол или 5250 мг/кг); четвертой-0,4мл (120 мг/гол или 6000 мг/кг); пятой-0,45 мл (135 мг/гол или 6750 мг/кг); шестой - 0,5 мл (150 мг/гол или 7500 мг/кг).

Препарат «Инсакар плюс» вводили в дозах: первой группе - 0,2 мл (60 мг/ гол или 3000 мг/кг); второй - 0,25 мл (75 мг/гол или 3750 мг/кг); третьей - 0,3 мл (90 мг/гол или 4500 мг/кг); четвертой-0,35 мл (105 мг/гол или 5250 мг/кг); пятой-

0.4 мл (120 мг/гол или 6000 мг/кг); шестой - 0,45 мл (135 мг/гол или 6750 мг/кг).

В опытах по изучению острой накожной токсичности использовали белых беспородных крыс массой 300 г. За сутки до нанесения препаратов вогнутыми ножницами выстригали участок кожи площадью 6x6 см в области спины. Препараты наносили на кожу в дозах: 6 мл (20000 мг/кг), 8 мл (26666 мг/кг) и 10 мл (33333 мг/кг). На каждую дозу препаратов использовали по 4 крысы. Дозы 8 и 10 мл наносили дважды с интервалом 10 минут. После обработки крыс помещали в индивидуальные камеры на 4 часа во избежание потерь препарата. В дальнейшем животных содержали в обычных клетках.

Кумулятивные свойства препаратов изучали по методу Лима с соавт. (1961). Опыт проводили на белых мышах (90 голов) живой массой 20-23 г по 30 голов на препарат и контрольную группу. Препараты вводили животным ежедневно, индивидуально, при помощи металлического зонда, алиментарным путем в виде водной эмульсии. В течение первых четырех суток животные опытных групп получали препараты в дозах равной 0,1 от ранее установленной однократной ЛД50. Через каждые четыре дня, на пятый дозу увеличивали в 1,5 раза. В течение 25-ти суток за всеми животными вели наблюдения, отмечая их смертность. Оценку результатов исследования проводили по отношению средних летальных доз острого и подострого экспериментов по формуле: К^т = ЛДиОтодостр)/ ЛД5о(остр), откуда следует: если коэффициент кумуляции меньше

1, то испытуемый препарат обладает кумулятивными свойствами; если больше 1 - то отмечается повышенная устойчивость к препарату (слабо выраженная кумуляция).

Исследования по изучению местного и кожно-резорбтивного действия препаратов проводили в опытах на крысах при нанесении препаратов 5 раз с интервалом 5 суток в дозах 1 мл/гол, что в 2,5 раза превышает кратность применения в практических условиях и в 5 раз превышающую терапевтическую дозу. Кроме того, в опытах на кроликах проводили изучение местного действия препаратов на слизистые оболочки глаз.

Местное действие препаратов на кожу изучали на 18 белых беспородных крысах обоего пола массой 250 - 310 г. (2 опытные и контрольная группы по 6 гол). За сутки до эксперимента у каждого животного в области спины выстригали участки от шерсти (3x3 см2) и определяли толщину кожной складки. На выстриженный участок нанесли пипеткой препараты в дозе 1 мл. Наблюдения проводили в течение всего срока эксперимента. Оценку реакции кожи провели по системе, принятой по Range Finding Test: - очень слабое покраснение - 1 балл; - вполне определенное покраснение — 2 балла; - умеренное, до сильного покраснение - 3 балла; - тяжелая эритема с образованием корочек — 4 балла.

Действие препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс» на конъюнктиву глаза изучили на 6 кроликах (по 3 кролика для каждого препарата). Животным глазной пипеткой закапали в правый глаз по 2-3 капли испытуемого препарата, а в левый по 2-3 капли чистого подсолнечного масла (контроль). Наблюдение за животными вели в течение 1 часа, а далее на протяжении 3-х дней ежедневно. Оценку действия препаратов на слизистую глаз проводили по характеру конъюнктивита и кератита.

Кожно-резорбтивное действие препаратов оценивали по специфическим и интегральным показателям через сутки после последней обработки препаратами. Гематологические исследования крови проводили на гематологическом анализаторе PCE 90-vet (США) (определяли динамику количества эритроцитов, лейкоцитов, контролировали уровень гемоглобина, величину гематокрита), также по общепринятым методам выводили лейкограмму и определяли СОЭ. В это же время по биохимическим тестам оценивали обмен веществ в организме и работу внутренних органов: почек, печени, поджелудочной железы и др. Основные показатели определяли на биохимическом анализаторе «А-125 биосистем».

Опыты по оценке сравнительной эффективности инсектоакарицидных свойств препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс» при арахноэнтомозах собак и кошек проводили в ветеринарной клинике «СДМ ВЕТАР» г. Бронницы Московской области.

Изучение эффективности препаратов при нотоэдрозе проводили на 8 кошках разного возраста и пород, при отодектозе на 14 кошках и 3 собаках, при саркоптозе на 12спонтанно зараженных собаках, при демодекозе также на 12 собаках. Из животных формировали 2 группы. Животных 1 группы обрабатывали препаратом «Инсакар», вторую — «Инсакар плюс».

При нотоэдрозе, саркоптозе и демодекозе перед обработкой у животных предварительно очищали очаги поражения от корок и экссудата при помощи ватного тампона, смоченного препаратом, либо маслом. Препарат в дозе 1,5 мл/ 2-10 кг массы тела наносили накожно на пораженные участки с захватом здоровой кожи на 1 - 2 см. Обработку проводили однократно, при демодекозе двукратно с интервалом 15 суток. Наряду с применением препаратов при демодекозе собак назначали витамины и иммуностимуляторы согласно инструкциям.

При отодектозе перед обработкой у животных предварительно очищали ушные раковины от чешуек, корок и экссудата при помощи ватного тампона,

смоченного препаратом. В каждую ушную раковину больным животным с внутренней стороны закапывали по 5 капель / 1 кг веса с последующим легким массажем, сложив ушную раковину пополам. Обработку проводили однократно.

После обработок животных вели ежедневное наблюдение: учитывали общее состояние, прием корма и воды, поведение, осматривали кожный покров, а через 7, 14 и 30 суток повторно проводили клиническое обследование.

По результатам фармако-токсикологических исследований и оценке сравнительной эффективности определили и отобрали препарат «Инсакар плюс». Последующие экспериментальные исследования проводили с препаратом «Инсакар плюс».

Изучение аллергизирующих свойств препарата «Инсакар плюс», который применяется накожно, провели на 80 белых крысах популяции \Vistar массой 200 - 220 г. Провели эпикутанную сенсибилизацию 40 белых крыс путем 20 повторных (по 5 раз в неделю) накожных аппликаций на участки боковой поверхности туловища размером 2x2 см в дозе 0,2 мл (близкая к рекомендованной для клинических испытаний терапевтическая доза), нанося равномерным слоем на весь участок аппликации с помощью глазной пипетки.

Через 10 суток после сенсибилизации провели тестирование: использовали кожную (эпикутанную), внутрикожную, конъюнктивальную и назальную пробы. Для каждой пробы использовали 10 сенсибилизированных крыс и 10 крыс несенсибилизированных — контроль.

Эпикутанная проба. Сенсибилизированным и контрольным животным (по 10 крыс) однократно нанесли на выстриженные участки кожи спины (2x2 см) испытуемый препарат в дозе 0,2 мл (рабочая доза, не вызывающая кожно-раздражающего действия). После нанесения препаратов через 15, 30 минут, 24, 48 и 72 часа проводили оценку кожи, которую оценивали в баллах.

Внутрикожная проба. 0,1 мл испытуемого препарата внутрикожно ввели на выстриженном участке 1x1 см, а воду для контроля в том же объеме на другой стороне туловища животного. Результаты учитывали через 20 - 30 минут (аллергическая реакция немедленного типа), через 4-6 часов (немедленно-замедленного типа), через 24 часа (замедленного типа). Отмечали реакцию кожи (возможные появления эритемы, инфильтрата), измеряли толщину кожной складки, сопоставляя показателям контроля.

Коныонктивальная и назальная пробы. На слизистую конъюнктивы (под верхнее веко) и носовой полости закапали по 1 капле испытуемого препарата сенсибилизированным и контрольным животных. Оценку конъюнктивалыюй реакции проводили визуально под лупой при увеличении х2 через 15 минут (реакция немедленного типа) и через 24-48 часов (замедленного типа) по бальной шкале: 0 - видимых реакций нет; 1 - легкое покраснение слезного протока; 2 -покраснение слезного протока и склеры в направлении к роговице; 3 -покраснение всей конъюнктивы и склеры.

При оценке назальной реакции учитывали состояние слизистой оболочки, наличие чихания и усиления секреции слизи в сопоставлении с контрольными животными.

Оценка Т-клеточного звена иммунной системы. Для постановки реакции ГЗТ сформировали 3 группы (по 10 голов) мышей СВА массой тела 18 г, которых иммунизировали однократно тимусзависимым антигеном путем внутрибрюшинного введения 0,5 мл 2% суспензии эритроцитов барана на стерильном 0,15 М растворе ЫаС1. Сразу после этого мышей первой группы обработали препаратом «Инсакар плюс» в дозе 0,02 мл. Мышей второй группы обработали в дозе 0,2 мл - десятикратно увеличенной дозе. Мыши третьей группы служили контролем, препарат не получали.

На 5-е сутки после сенсибилизации в подушечку правой задней лапы ввели разрешающую дозу антигена - 0,05 мл 4% суспензии эритроцитов барана. В контрлатеральную (контрольную) лапу ввели 0,15 М раствор ЫаС1 в том же объеме. Степень местной воспалительной реакции оценивали через 24 часа после разрешающей инъекции по разнице массы опытной (М0) и контрольной (Мк) лап. После выведения животных из опыта методом цервикальной дислокации обрезали обе лапы выше пяточного сустава, но ниже сочленения малой и большой берцовых костей. Индекс реакции ГЗТ (ИР) вычисляли для каждой мыши по формуле: ИР= М0 - Мк/ Мк.

Реакция гемагглютинации. Для постановки реакции гемагглютинации (РГА) сформировали 3 группы (по 10 голов) мышей СВА массой тела 18 г, которых иммунизировали (сенсибилизировали) однократно тимусзависимым антигеном путем внутрибрюшинного введения 0,5 мл 2% суспензии эритроцитов барана на стерильном 0,15 М растворе КаС1. Сразу после этого мышей первой группы обработали препаратом «Инсакар плюс» в дозе 0,02 мл. Мышей второй группы обработали в дозе 0,2 мл — десятикратно увеличенной дозе. Мыши третьей группы служили контролем, препаратом обработаны не были. Мышей обрабатывали согласно инструкции по применению в индуктивную фазу первичного иммунного ответа, т.е. одновременно с внутрибрюшинной иммунизацией тест-агентом (ЭБ).

Кровь для получения сыворотки брали на 7 день после иммунизации мышей эритроцитами барана (максимум накопления специфических антител крови) путем декапитации и получали сыворотку. Полученную сыворотку в возрастающем разведении добавляли в 96 луночных плоскодонных планшетах, приготовив двукратные разведения исследуемой сыворотки в объеме 0,5 мл начиная с разведения 1:10. В контрольную лунку вносили 0,5 мл физиологического раствора. После этого ко всем лункам добавляли 0,5 мл 1% суспензии эритроцитов барана. Учет реакции вели после инкубации планшетов в термостате в течение 2 часов при 37 °С. При положительном результате эритроциты оседают на дне лунки планшета в виде зонтика, при отрицательном - в виде пуговки. За титр принимают то последнее разведение исследуемой сыворотки, при котором еще наблюдается положительный результат. Контрольная лунка должна быть отрицательной.

Для сравнения выраженности ответов различных животных в опыте и контроле определяли индекс действия (ИД) препаратов, который представляет собой отношение титра антител в опыте к величине титра антител в контроле. Значение индекса действия 0,7 и менее свидетельствует об иммуносупрессивной

активности испытуемых препаратов и их комбинаций. Величина индекса действия 1,3 и более соответствует иммуностимулирующему действию.

В опытах по изучению овоцидного действия препарата использовали яйца иксодовых клещей. Для этого свежие яйцекладки клещей (примерно по 50 яиц па группу) помещали на полоски фильтровальной бумаги в чашки Петри и при помощи пуливизатора (ручного) на все яйца нанесли равномерно: 1 группа -«Инсакар плюс», 2 группа контроль - вода. Затем полоски с яйцекладками помещали в пробирки, закрыв тканевой салфеткой. Пробирки помещали в эксикатор, где находились при температуре 27 °С. Наблюдения вели в течение 7-ми суток. Отсутствие развившихся из яиц личинок в опытах и нормальное развитие в контроле служило доказательством овоцидного действия препарата.

Исследования по оценке эффективности препарата «Инсакар плюс» проводили с января по ноябрь 2011-2013 годах в ветеринарных клиниках «Беланта» и «Зоомедик 1», ветеринарном кабинете «Анимода» на спонтанно зараженных собаках и кошках разного возраста и пород.

Изучение инсектицидных свойств капель провели на спонтанно зараженных 18 собаках и 18 кошках разного возраста и пород. Препарат использовали путем топикалышго (точечного) нанесения на кожу. Перед обработкой у пипетки открывали крышечку, раздвигали у животного шерсть в области спины (между лопатками) и наносили препарат на кожу в одну или несколько точек в дозах - собаки: 2-10 кг-1,5 мл (1 пипетка); 10-20кг-3,0мл (2 пипетки); более 20 кг - 4,5- 6,0 мл (3-4 пипетки); кошки: до 1 кг - 0,3 мл (10 капель); 1-3 кг - 0,6 мл (20 капель); более 3 кг - 1,0 мл. Для изучения акарицидных свойств препарата всего было подобрано: 33 собаки, зараженных Sarcoptes canis; 28 собак и 56 кошек, зараженных Otodectes cynotis; 26 кошек, зараженных Notoedres cati; 21 собаки, зараженных Demodex canis. Диагноз, а также эффективность препарата подтверждали результатами микроскопии соскобов, взятых с пораженных участков. Препарат применяли аналогично опытам по изучению сравнительной эффективности.

В качестве контроля отбирали по 2 собаки и кошки из каждой группы.

Изучение профилактической эффективности препарата «Инсакар плюс» проводили с ранней весны до поздней осени 2012, 2013 годах в ветеринарных клиниках «Беланта» и «Зоомедик 1» г. Москвы, Успенской участковой ветеринарной лечебнице Вязниковского района Смоленской области. Всего было обработано 90 собак. Препарат инсакар использовали 1 раз в месяц путем топикального (точечного) нанесения на кожу однократно, в дозах 2-10 кг - 1,5 мл (1 пипетка); 10 - 20 кг - 3,0 мл (2 пипетки); более 20 кг - 4,5- 6,0 мл (3-4 пипетки). После обработки за животными вели наблюдение в течение 30 суток.

Изучение сравнительной эффективности препаратов «Инсакар плюс» и «Инспектор Тотал С» при демодекозе собак проводили па базе ветеринарной клиники «Беланта» г. Москвы на 34 спонтанно зараженных собаках разных возрастов, пород и массы с разными формами и тяжестью течения болезни, зараженных Demodex canis. Животных разделили на 4 группы: животных 1 группы (13 собак) обрабатывали препаратом «Инсакар плюс», 2 группу (13 собак) - «Инспектор Тотал С», 3 группу (6 собак) обработали препаратом

«Инспектор Тотал С» по методу и дозам применения препарата «Инсакар плюс», 4 группа (2 собаки) служили контролем, их не обрабатывали.

Препарат «Инсакар плюс» применяли животным согласно разработанной временной инструкции по применению.

«Инспектор Тотал С» применяли животным согласно инструкции по применению путем капельного нанесения на сухую неповрежденную кожу в дозе 2,5 мл на 10-25 кг массы тела животного. Препарат наносили непосредственно на кожу между лопатками у основания шеи. При обработке крупных животных содержимое пипеток наносили на кожу в 3-4 места. Обработку собак проводили 4-х кратно с интервалом 28 суток.

Третью группу собак обработали препаратом «Инспектор Тотал С» по способу аналогично препарату «Инсакар плюс».

После каждой обработки за животными вели наблюдение: учитывали общее состояние, прием корма и воды, поведение, осматривали кожный покров, а через 15 суток после второй и четвертой обработок проводили микроскопию соскобов, взятых с нескольких мест пораженных участков кожи.

Все результаты исследований подвергли статистическому анализу по методике Стыодента-Фишера (Н. А. Плохинский, 1978), с использованием методов современной прогностики.

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.2.1. Физико-химические свойства препарата «Инсакар»

Капли инсектоакарицидные "Инсакар" - композиция 1 (Инсакар) в качестве действующих веществ содержит: фипронил 9%, пирипроксифен 2% и вспомогательные компоненты; композиция 2 (Инсакар плюс), содержит в качестве ДВ: бензилбензоат 20%, фипронил 5%, пирипроксифен 2% и вспомогательные компоненты.

Препараты представляет собой прозрачную маслянистую жидкость светло-желтого цвета, со слабым специфическим запахом.

2.2.2. Сравнительная оценка токсикологических и иисектоакарицидных свойств препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс»

При разработке и изучении ветеринарного препарата необходимо в первую очередь исследовать реакции, возникающие в организме животных под влиянием изучаемого лекарственного средства. Целесообразность передачи нового препарата в практику, а также возможные области его применения могут быть полностью выяснены только в результате количественной и качественной оценки разных сторон его фармакотоксикологичесих эффектов. Одним из основных задач, возникающих при изучении токсического действия препарата -это выявление побочных нежелательных эффектов и исключение отдаленного действия на животных и человека.

2.2.2.1. Острая токсичность препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс» при введении в желудок

ЛД50 «Инсакара» при введении внутрь для мышей с учетом стандартной ошибки составила 5937,5±225,3 мг/кг, ЛД50 «Инсакара плюс» -5125±226 мг/кг, что дает основание отнести данные препараты к 4 классу токсичности -малоопасныс по ГОСТ 12.1.007-76.

2.2.2.2. Изучение острой накожной токсичности препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс»

Токсичность фармакологических средств исследуют при нескольких путях введения, причем необходимо использовать тот путь, при котором показана терапевтическая активность рекомендуемого препарата.

ЛД50 препарата «Инсакар» составила 47666 мг/кг, «Инсакар плюс» -41833 мг/кг. По гигиенической классификации (ГОСТ 12.1.007-76) в соответствии с установленными параметрами кожной токсичности для крыс препараты «Ипсакар» и «Инсакар плюс» 4 относятся к 4 классу опасности.

2.2.2.3. Изучение кумулятивных свойств

Учитывая суммарную дозу (ЛД50 — многократная) препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс» 15942,9 мг/кг и 13092,8 мг/кг соответственно, определили коэффициент кумуляции, который составил 2,68 и 2,55 соответственно. По классификации веществ по кумулятивным свойствам, исследуемые препараты относятся к группе веществ со слабо выраженной кумуляцией.

2.2.2.4. Местное действие препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс» на кожу

При нанесении препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс» общая сумма баллов составила 2 и 2,5 соответственно, что позволяет классифицировать местно-раздражающее действие препаратов как слабое - 4 класс опасности.

Восстановление функционального состояния кожи протекало без постороннего вмешательства в течение суток после прекращения нанесения препарата.

2.2.2.5. Изучение местного действия на слизистые оболочки глаз

Визуальную оценку раздражающего действия препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс» на слизистые оболочки глаза проводили через 1, 24, 48 и 72 часа по изменению кровенаполнения конъюнктивы, наличию лакримаций и состояние роговицы глаза по 10-ти бальной системе. При нанесении препаратов у кроликов всех групп отмечали выраженную гиперемию и слезотечение. Эти явления исчезли через 24 часа.

Таким образом, препараты обладают слабовыраженным действием на слизистую оболочку глаза с восстановлением слизистой оболочки до нормы в течение суток.

2.2.2.6. Кожно-резорбтивное действие препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс» в подостром эксперименте на крысах

В течение всего опытного периода внешних признаков токсикоза и гибели крыс не отмечали. Опытные животные по своему поведению, внешнему виду ничем не отличались от контрольных животных.

Анализ полученных данных по количеству эритроцитов, лейкоцитов (2 группа), по уровню гемоглобина, гематокрита, а также по гемограмме показал, что достоверные различия между опытными и контрольными животными по вышеуказанным показателям отсутствовали (таблица 1; Р > 0,05). В первой группе анализ показал, что уровень лейкоцитов выше на 10,4% по сравнению с контролем. Это связано с тем, что у одной крысы из группы был увеличен уровень лейкоцитов (15,4) по сравнению с другими животными группы (8,8-9,4), но был на верхнем уровне нормы для данного показателя крыс (2,9-15,3). Повышенный уровень лейкоцитов у крысы возможно связан с незначительным воспалительным процессом, не связанным с применением препарата «Инсакар». Кроме того, отмечено некоторое снижение СОЭ в обеих группах на 24,81 и 12,78% соответственно по сравнению с контролем, но данное снижение не носит значительного характера (таблица 1).

Таблица 1

Морфологические показатели крови крыс

Морфологические показатели опыт контроль в % к контролю

Иисакар

Эритроциты, 10 и/л 7,94±0,31 8,29±0,47 95,78

Лейкоциты, 109/л 10,16±2,7 9,2±0,19 110,4

Гемоглобин, г/л 142,16±10,07 143,83±8,08 98,84

Гематокрит, % 46,88±3,96 48,9±4,63 95,87

СОЭ, мм/ч 1,0±0,57 1,33±0,54 75,19

Лейкограмма, %

Нейтрофилы сегм. 12,33±3,61 14,66±4,12 84,11

Эозинофилы 2,66±1,08 2,66±1,08 100

Лимфоциты 83,66±4,8 6 81,66±4,86 102,45

Моноциты 1,33±1,08 1,0±1,15 133

Инсакар плюс

Эритроциты, 1012/л 7,89±0,32 8,29±0,47 95,17

Лейкоциты, 109/л 9,13±0,25 9,2±0,19 99,24

Гемоглобин, г/л 142,16±8,53 143,83±8,08 98,84

Гематокрит, % 44,7±3,67 48,9±4,63 91,41

СОЭ, мм/ч 1,16±0,72 1,33±0,54 87,22

Лейкограмма, %

Нейтрофилы сегм. 1233±3,61 14,66±4,12 84,11

Эозинофилы 3,0£1,14 2,66±1,08 112,8

Лимфоциты 8333±4,12 81,66±4,86 102,05

Моноциты 133±1,08 1,0±1,15 133

Результаты влияния препаратов на функциональную активность печени, почек и некоторых показателей белкового, жирового и углеводного обмена представлены в таблице 2.

Как следует из таблицы, почти все представленные биохимические показатели у животных опытной и контрольной групп находятся примерно на одном уровне. Имеется некоторое снижение уровня общего билирубина в обеих группах на 19 % по сравнению с контролем. Данное изменение значимости не имеет, так как это связано с тем, что в опытных группах наблюдали незначительное снижение эритроцитов и, соответственно, уменьшения их разрушения.

Таблица 2

Биохимические показатели крови крыс

Биохимические показатели опыт контроль в% к контролю

Инсакар

Глюкоза, ммоль/л 6,73±0,31 6,8±0,29 98,97

Белок общий, г/л 74,83±5,57 72,5±3,97 103,20

Альбумин, г/л 28,66±ЗД9 27,66±3,36 103,61

Билирубин общий, мкмоль/л 14,3 2±3,96 17,83±12,64 80,31

AJIT, ед/л 56,5±6,18 57,0±7,76 99,12

ACT, ед/л 178,66±37,79 166,83±26,10 107,09

Щелочная фосфатаза, ед/л 265±47,83 273,0±67,5 97,07

Амилаза, ед/л 1048,33±131,42 981,66±127,68 106,79

Остаточный азот, мкмоль/л 7,47±0,69 7,5±0,22 99,6

Креатинин, мкмоль/л 59,83±5,99 63,16±8,86 94,73

Инсакар плюс

Глюкоза, ммоль/л 6,73±0,47 6,8±0,29 98,97

Белок общий, г/л 71,33±2,17 72,5±3,97 98,39

Альбумин, г/л 28,0±2,89 27,66±3J6 101,23

Билирубин общий, мкмоль/л 14,45±10,67 17,83±12,64 81,04

АЛТ, ед/л 55,5±6,25 51,Oil,16 97,37

ACT, ед/л 168,83±18,64 166,83±26,10 101,20

Щелочная фосфатаза, ед/л 287,83±79,9 273,0±67,5 105,43

Амилаза, ед/л 1063,33*203,47 981,66±127,68 108,31

Остаточный азот, мкмоль/л 7,01±0,35 7,5±0,22 93,47

Креатинин, мкмоль/л 55,83±3,83 63,16±8,86 88,39

При убое, у крыс взвешивали внутренние органы и определяли массовые коэффициенты (табл. 3).

Таблица 3

Массовые коэффициенты внутренних органов крыс после пятикратного нанесения препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс»

Вариант опыта Органы

почки легкие селезенка сердце печень

Инсакар 6,29±0,52 6,53±0,99 3,36±0,84 3,46±0,43 40,73±2,86

Инсакар плюс 6,28±0,64 7,22±1,40 4,08±0,58 3,04±0,23 41,94±1,66

Контроль 5,87±0,43 5,83±0,21 3,44±0,63 3,44±0,41 37,01±3,68

Как следует из таблицы, пятикратное накожное применение препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс» не привело к достоверному изменению массовых коэффициентов почек, легких, селезенки, сердца и печени по сравнению с контрольными животными.

2.2.2.7. Оценка сравнительной эффективности акарпцидных свойств препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс»

Изучение эффективности препаратов при иотоэдрозе плотоядных животных. При наблюдении за опытными животными в течение 30 суток после первого применения препаратов в 1 группе выздоровели 2 кошки с легкими поражениями, а у двух кошек при микроскопии обнаруживали единичные экземпляры клещей. Во 2 группе все кошки были здоровыми, что подтверждено клиническими и акорологическими исследованиями.

Таким образом, при однократной обработке эффективность при нотоэдрозе плотоядных препарата «Инсакар» составила 50%, «Инсакар плюс» -100 %.

Изучение эффективности препаратов при отодектозе плотоядных животных. При наблюдении за опытными животными в течение 30 суток после первого применения препаратов в двух группах выздоровели все животные, что подтверждено клиническими и акорологическими исследованиями. В результате эффективность препаратов при отодектозе составила 100 %.

Изучение эффективности препаратов при саркоптозе собак. При наблюдении за опытными животными в течение 30 суток после первого применения препаратов в 1 группе выздоровели 5 собак, во 2 — 6 собак, что подтверждено клиническими и акорологическими исследованиями.

Таким образом, при однократной обработке эффективность при саркоптозе собак капель «Инсакар» составила 83,3 %, капель «Инсакар плюс» - 100 %.

Изучение эффективности препаратов при демодекозе собак. Через 15 суток после обработки собак провели обследование и установили, что у животных 1 группы в соскобах обнаруживали живых клещей Demodex canis. Клинические признаки сохранялись. Во 2 группе при микроскопии в соскобах обнаружены единичные клещи, деформированные личинки и яйца. Клинические

признаки стали угасать. Через 30 суток после первого применения препаратов в первой группе у двух собак кожный покров нормализовался, у четырех собак оставались единичные места с угасающими поражениями, при микроскопии соскобов обнаружены единичные клещи. Во второй группе у всех собак наблюдали выздоровление кожного покрова, на облысевших местах стали расти волосы. При микроскопическом исследовании соскобов кожи лишь у одной собаки обнаружили единичных клещей. В результате эффективность при демодекозе собак капель «Инсакар» составила 33,3 %, капель «Инсакар плюс» -83,3 %.

При применении препаратов так и после у собак не отмечено каких-либо побочных явлений и осложнений.

Согласно оценке сравнительной инсектоакарицидной эффективности изучаемых препаратов при акарозах (саркоптоз, отодектоз, нотоэдроз, демодекоз) плотоядных животных в производственных условиях можно выделить препарат «Инсакар плюс», который показал лучшую акарицидную активность.

По результатам доклинических и клинических исследований препараты «Инсакар» и «Инсакар плюс» по фармако-токсикологичесшт свойствам идентичны, побочных нежелательных эффектов не выявлено. Оценка сравнительной эффективности препаратов при арахпоэнтомозах собак и кошек позволила выделить препарат «Инсакар плюс», показавший лучшую эффективность. Последующие экспериментальные исследования проводили с препаратом «Инсакар плюс».

2.2.3. Изучение аллергизирующих свойств препарата «Инсакар плюс»

Эпикутанная проба. В течение 72 часов после нанесения испытуемого препарата сенсибилизированным и контрольным животным по характеру кожной реакции (отсутствие гиперемии, инфильтрации) обработанные участки не отличались у опытных и контрольных животных. Реакция оценена по шкале в баллах: 0 - видимой реакции нет. Отрицательная кожная реакция свидетельствует об отсутствии гиперчувствительности немедленного и замедленного типа как у сенсибилизированных, так и контрольных животных.

Внутрикожная проба. При введении препарата у сенсибилизированных и контрольных крыс на месте инъекции появилось покраснение в виде «пуговки». В течение 12 часов покраснение на месте введения препарата рассасывалось, и постепенно переходила в бледно-розовый оттенок в обеих группах с мелким шелушением эпидермиса. По истечении 24 часов на коже сенсибилизированных и контрольных животных отклонений не отмечено.

Конъюнктивалышя и назальная пробы. Конъюнктивальная реакция при закапывании препарата не отличалась как у сенсибилизированных, так и у контрольных животных. В течение 1 часа отмечали покраснение всей конъюнктивы и склеры, в последующем покраснение переходило в легкое покраснение. Через 24, 48 часов не было отмечено каких-либо изменений слизистой оболочки и склеры глаз в обеих группах.

При оценке назальной реакции установлено, что при закапывании испытуемого препарата наблюдали чихание, усиление секреции слизи и незначительную гиперемию слизистой оболочки в обеих группах. Через 24, 48 часов ни каких отклонений на слизистой оболочке носа отмечено не было.

Всасывание веществ, попадающих на слизистые оболочки, происходит быстро и, соответственно, реакции в связи с этим развиваются также быстро, как аллергические, так и раздражающего характера. Отмеченные отклонения в течение 12 часов, при постановке конъюнктивальной и назальной проб в обеих группах свидетельствуют о слабо выраженном действии препарата на слизистые оболочки.

2.2.4. Изучение иммунотоксических свойств препарата «Инсакар плюс» 2.2.4.1. Оценка Т-клеточного звена иммунной системы Через 24 часа после разрешающей инъекции определили массу опытной (М0) и контрольной (Мк) лап, по результатам которых вычислили индекс реакции ГЗТ (ИР) вычисляли для каждой мыши по формуле: ИР= М0 - Мг/ Мк (табл. 4).

Таблица 4

Индекс реакции (ИР)

Группа ИР

«Инсакар плюс» в дозе 1 мл/кг (0,02 мл/гол) 9,45 ± 0,74

«Инсакар плюс» в дозе 10 мл/кг (0,2 мл/гол) 9,79± 1,07

Контроль 10,18± 1,33

В результате исследований установлено, что препарат «Инсакар плюс» не угнетает Т-клеточное звено иммунной системы.

2.2.4.2. Реакция прямой гемагглютинации

Накожное однократное применение испытуемого препарата в терапевтической и десятикратно увеличенной терапевтической дозах ие вызывает изменение интенсивности антитело продукции против тимусзависимого антигена. Титр гемагглютининов в сыворотке крови животных, получивших различные дозы испытуемого препарата, не отличался от такового в контроле. На толерантность гуморального иммунного ответа к действию испытуемого препарата в испытанных дозах указывают также индексы действия препарата, равные 1,01 и 0,98 (табл. 5).

Таблица 5

Интенсивность антителопродукции против тимусзависимого антигена у мышей при накожном применении препарата «Инсакар плюс»

группа доза кщ Уг титра антител Индекс действия (ид)

1 0,02 мл/кг 5,7±0,34 1,01

2 0,2 мл/кг 5,5±0,37 0,98

контроль - 5,6±0,3б -

Субхроническая токсичность. В опытах по определению субхронической токсичности и влияния на организм плотоядных животных препарата «Инсакар плюс» автор диссертации не принимал участие, указанные опыты были проведены ранее научным руководителем. В субхронических экспериментах на крысах установлено, что доза препарата 1/5 от ЛД50 (8400 мг/кг) при накожном применении является токсичной -приводит снижению активности АЛТ и АСТ, повышению уровня мочевины и креатинина. Дозы 1/10 от ЛД5о (4200 мг/кг) и 1/20 от ЛД50 (2100 мг/кг) являются недействующими - не вызывали функциональных изменений в организме животных.

Влияние препарата «Инсакар плюс» на организм собак. В исследованиях влияния препарата «Инсакар плюс» на организм собак было определено, что при пятидневном накожном нанесении живоным препарата в терапевтической, 3 и 5 раз увеличенных дозах не отмечено статистически достоверных изменений в физиологическом состоянии, морфологических и биохимических показателях крови и физико-химических показателях мочи.

2.2.5. Изучение овоцидного действия препарата «Инсакар плюс» в лабораторных условиях

В результате изучения овоцидного действия препарата «Инсакар плюс» в лабораторных условиях было выявлено, что препарат обеспечивает гибель яиц клещей на 100 %.

2.2.6. Изучение терапевтической эффективности препарата «Инсакар плюс» при энтомозах и акарозах плотоядных животных в производственных условиях

Для подтверждения эффективности препарата «Инсакар плюс» с января по ноябрь 2011 - 2013 годах провели широкие производственные испытания в различных ветеринарных учреждениях г. Москвы и Московской области. Всего было подобрано и обработано 100 собак и 100 кошек разного возраста и пород, пораженных арахноэнтомозами.

Для определения инсектицидной эффективности препарата «Инсакар плюс» подобрали 18 собак и 18 кошек пораженных блохами. Через 24 часа после обработки животных установили, что как у собак, так и у кошек живых личинок, имаго блох и вшей не обнаружено, в то время как животные контрольной группы были заражены. При дальнейшем наблюдении за опытными животными в течение 30 суток живых насекомых не находили.

Для определения акарицидной эффективности препарата «Инсакар» подобрали 82 собаки и 82 кошки, пораженных саркоптозом, нотоэдрозом, отодектозом и демодекозом. На 7-е сутки после обработок у животных больных саркоптозом, нотоэдрозом и отодектозом отмечали тенденцию к выздоровлению. При клиническом и акарологическом исследовании на 14-й день у всех животных отмечали полное выздоровление.

У собак больных демодекозом через 15 суток после обработки при микроскопии в соскобах обнаруживали единичных клещей, деформированные

личинки и яйца. Клинические признаки стали угасать. Через 30 суток после первого применения препарата у собак наблюдали выздоровление кожного покрова, на облысевших местах стали расти волосы. При микроскопическом исследовании соскобов кожи у пяти собак обнаружили единичных клещей.

При применении препарата при энтомозах и акарозах не отмечено каких-либо побочных явлений и осложнений.

2.2.7. Изучение профилактической эффективности препарата «Инсакар плюс» при иксодидозах собак

Для профилактики иксодидозов было обработано 90 собак. Обработку животных начинали ранней весной до появления первых проталин и проводили обработки периодически 1 раз в месяц до поздней осени.

При применении препарата так и после обработок не отмечено каких-либо побочных явлений и осложнений. У собак, обработанных в профилактических целях, не обнаружено ни одного случая нападения иксодовых клещей в течение 30 суток после обработки.

2.2.8. Изучение сравнительной эффективности препаратов «Инсакар

плюс» и «Инспектор Тотал С» при демодекозе собак

Препарат «Инсакар плюс» при двукратной обработке показал 92,3 %-ную эффективность. Препарат «Инспектор Тотал С» при применении согласно инструкции не показал положительного терапевтического эффекта при демодекозе собак. При 2-х кратной обработке, применяя метод тотальной обработки поражений, препарат «Инспектор Тотал С» проявляет положительный эффект против клещей, но полного (100%-го) уничтожения не достигнуто. Через 30 суток после обработки клещи вновь начинали размножаться, а также начали проявляться и клинические признаки заболевания.

2.2.9. Дозы, схема н способы применения препарата «Инсакар плюс»

при арахноэнтомозах плотоядных животных

Таблица 6

Энтамозы плотоядных животных

Препарат используют путем топикального (точечного) нанесения препарата на кожу. Перед обработкой у пипетки открывают крышечку, раздвигают у животного шерсть в области спины (между лопатками) и наносят препарат на кожу в одну или несколько точек. В зависимости от вида и массы животного используют препарат в дозах:

Собаки: 2-10 кг - 1,5 мл (1 пипетка); 10 - 20 кг - 3,0 мл (2 пипетки); более 20 кг - 4,5- 6,0 мл (3-4 пипетки).

Кошки: до 1 кг - 0,3 мл (10 капель); 1-3 кг - 0,6 мл (20 капель); более 3 кг - 1,0 мл.

При сильном поражении животного вшами, блохами, власоедами, рекомендуется производить обработку один раз в месяц._

Иксодовые клещи В профилактических целях животных необходимо начать обрабатывать ранней весной до появления первых проталин и проводить обработки периодически 1 раз в месяц до поздней осени. Если животное моют чаще 2-х раз в месяц, рекомендуется сократить интервал между обработками до 2-3 недель. Препарат используют методом и в дозах, указанных выше (см. при энтомозах). При обнаружении иксодового клеща на коже животного следует нанести 1 каплю препарата на паразита. Если через 20 минут клещ самопроизвольно не отпадет, то его необходимо извлечь при помощи пинцета.

Саркоптоз; нотоэдроз плотоядных Препарат наносят накожно на пораженные участки с захватом по периферии до 2 см здоровой кожи в дозах, указанных выше (см. при энтомозах). В случае обширных участков поражения, можно увеличить дозу в 2 раза. Перед обработкой у животных предварительно очистить очаги поражений от корочек и струпьев при помощи ватного тампона, смоченного

препаратом. Обработку проводят однократно._

Отодектоз плотоядных Перед обработкой у животных предварительно очистить ушные раковины от чешуек, корок и экссудата при помощи ватного тампона, смоченного препаратом. В каждую ушную раковину больным животным с внутренней стороны закапать препарат по 3 капли / 1 кг веса с последующим легким массажем, сложив ушную раковину пополам. Обработку проводят

однократно.__

Демодекоз собак

Перед обработкой у животных предварительно очистить очаги поражений от чешуек и струпьев при помощи ватного тампона, смоченного теплым маслом. Препараты наносить накожно, втирая в пораженные участки с захватом по периферии до 2 см здоровой кожи в дозе 1,5 мл/ 2-10 кг массы тела двукратно с интервалом 20 дней. В зависимости от обширности демодекозной инвазии дозировку необходимо увеличить до количества, достаточного для обработки всех поражений, но не более трехкратно увеличенной от вышеуказанной дозы. В случае, если после второй обработки не достигнуто полного выздоровления, кратность обработок можно увеличить. Наряду с применением препаратов необходимо назначить витамины и иммуностимуляторы согласно инструкциям.

выводы

1. ЛД50 «Инсакара» при введении в желудок для мышей составила 5937,5±225,3 мг/кг, ЛД50 «Инсакара плюс» - 5125±226 мг/кг. ЛД50 «Инсакара» при накожном нанесении для крыс составила 47666 мг/кг, «Инсакара плюс» -41833 мг/кг. По гигиенической классификации (ГОСТ 12.1.007-76) препараты «Инсакар» и «Инсакар плюс» относятся к 4 классу опасности - малоопасные.

2. Коэффициент кумуляции препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс», составил 2,68 и 2,55 соответственно. По классификации веществ по кумулятивным свойствам, исследуемые препараты относятся к группе веществ со слабо выраженной кумуляцией.

3. Общая сумма баллов местно-раздражающего действия препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс» на кожу составила 2 - 2,5 соответственно, что дает основание классифицировать местно-раздражающее действие как слабое - 4 класс опасности.

4. Препараты «Инсакар» и «Инсакар плюс» обладают слабовыраженным действием на слизистую оболочку глаза с восстановлением слизистой оболочки до нормы в течение суток.

5. При оценке кожно-резорбтивного действия препаратов но специфическим и интегральным показателям в подостром эксперименте достоверных различий между опытными и контрольными животными не отмечено.

6. При сравнительной оценке эффективность препарата «Инсакар» при нотоэдрозе составила 50%, «Инсакар плюс» - 100 %; нри отодектозе эффективность обеих препаратов составила 100 %; при саркоптозе собак эффективность «Инсакара» составила 83,3 %, «Инсакар плюс» - 100 %. При демодекозе высокую эффективность показал препарат «Инсакар плюс».

7. Препараты «Инсакар» и «Инсакар плюс» по фармако-токсикологическим свойствам идентичные, побочпых нежелательных эффектов не выявлено. Оценка сравнительной эффективности препаратов при акарозах собак и кошек позволяет выделить препарат «Инсакар плюс», показавшего лучшую эффективность.

8. Препарат «Инсакар плюс» при 20-ти кратной накожном нанесении в терапевтической дозе 1 мл/кг не вызывает аллергенной активности организма животных при эпикутанном, внутрикожном, конъюнктивальном и назальном тестировании.

9. В реакциях гиперчувствительности замедленного типа и гемагтлютинации, накожное однократное применение препарата «Инсакар плюс» в терапевтической и десятикратно увеличенной дозах не оказывает негативного действия на Т-клеточное звено иммунной системы и гуморальный иммунный ответ.

10. Овоцидное действие препарата «Инсакар плюс» в лабораторных условия обеспечивает гибель яиц клещей на 100 %.

11. При саркоптозе, нотоэдрозе, отодектозе, а также при энтомозах плотоядных животных однократная обработка препаратом «Инсакар плюс»

обеспечивает 100%-ную эффективность, а также высокую акарицидную эффективность (92 %) при лечении демодекоза собак.

12. Обработка препаратом «Инсакар плюс» собак от иксодидозов обеспечивает профилактический эффект в течение 30 суток.

13. При изучении сравнительной эффективности препаратов «Инсакар плюс» и «Инспектор Тотал С» при демодекозе собак, препарат «Инсакар плюс» показал 92,3 %-ную эффективность, препарат «Инспектор Тотал С» не показал положительного терапевтического эффекта при демодекозе собак.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Отсутствие токсического воздействия на животных и высокая инсектоакарицидная активность нового препарата «Инсакар плюс» в рекомендуемых схемах применения позволяют рекомендовать данный препарат в ветеринарную практику для лечения плотоядных животных при арахноэнтомозах.

Рекомендуется применять разработанную схему и способы лечения арахноэнтомозов плотоядных препаратом «Инсакар».

Полученные результаты исследований были использованы при разработке Инструкции по применению капель инсектоакарицидных «Инсакар» при арахноэнтомозах плотоядных животных, одобренных Ученым Советом ГНУ «ВИГИС» протокол №7 от 29.09.2011 г.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Степанов A.A. Определение острой токсичности препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс» / Арисов М.В. // Сб. мат. научн. конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». — М. 2011 г. - Вып. 12. - С. 28-30.

2. Степанов A.A. Местное и кожно-резорбтивное действие препаратов инсакар и инсакар плюс / Арисов М.В. // Сб. мат. научн. конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». - М. - 2012 г. - Вып. 13. - С.17-21.

3. Степанов A.A. Токсикологическая оценка инсектоакарицпдного препарата Инсакар при арахноэнтомозах плотоядных животных / Арисов М.В. // Российский паразитологический журнал. - М. - 2012. - № 1. - С. 98103.

4. Степанов A.A. Аллергизирующие свойства препарата Инсакар плюс // Сб. мат. научн. конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». -М.-2012 г.-Вып. 13. - С. 403-406.

5. Степанов A.A. Оценка эффективности препарата Инсакар при арахноэнтомозах плотоядных животных / Арисов М.В. // Российский паразитологический журнал. — М. - 2012. - № 3. - С. 117-121.

6. Степанов A.A. Новый инсектоакарицидпый препарат «Инсакар» при арахноэнтомозах плотоядных животных / Арисов М.В. // ж-л Ветеринария. - М. - 2012. - № 10. - С. 32-35.

7. Степанов A.A. Изучение иммунотоксических свойств препарата Инсакар / Арисов М.В. // Российский паразитологический журнал. - М. - 2013. - № 4. - С. 104-108.

8. Арисов М.В., Успенский A.B., Архипов И.А., Арисова Г.Б., Степанов A.A. Патент на изобретение РФ № 2456982 от 27 июля 2012 года «Инсектоакарицидное средство для лечения плотоядных животных». Приоритет изобретения 30 мая 2011 г. зарегистрировано в Государственном реестре изобретений Российской Федерации 27 июля 2012 г. Опубликовано 27.07.2012. Бюл. №21. —7с.

Подписано в печать:

14.03.2014

Заказ № 9404 Тираж -100 экз. Печать трафаретная. Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш., 36 (499) 788-78-56 vvww.autoreferat.ru

Текст научной работыДиссертация по биологии, кандидата ветеринарных наук, Степанов, Алексей Александрович, Москва

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК

ГОСУДАРСТВЕННОЕ НАУЧНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ

ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ГЕЛЬМИНТОЛОГИИ имени К.И. СКРЯБИНА (ГНУ ВИГИС Россельхозакадемии)

04201457190

СТЕПАНОВ АЛЕКСЕЙ АЛЕКСАНДРОВИЧ

ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКАЯ И ТЕРАПЕВТИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ПРЕПАРАТОВ НА ОСНОВЕ ФЕНИЛПИРАЗОЛА, БЕНЗИЛБЕНЗОАТА И ПИРИПРОКСИФЕНА ПРИ АРАХНОЭНТОМОЗАХ ПЛОТОЯДНЫХ ЖИВОТНЫХ

Диссертация на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук Арисов Михаил Владимирович

Специальность:

03.02.11. - Паразитология

Москва 2014

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ................................................................................................................................................4

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ..................................................................................................10

1.1. Арахноэнтомозы плотоядных животных как сформировавшиеся паразитарные системы....................................................................................................................10

1.2. Меры борьбы и новые инсектоакарициды при арахноэнтомозах плотоядных в современной ветеринарной практике............................................24

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.................................. 37

2.1. Материалы и методы исследований............................... 37

2.2. Результаты исследований............................................. 51

2.2.1. Физико-химические свойства препарата инсакар................. 51

2.2.2. Сравнительная оценка фармако-токсикологических и инсектоакарицидных свойств препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс»............................................................ 52

2.2.2.1. Острая токсичность препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс» при введении в желудок.................................. 52

2.2.2.2. Изучение острой накожной токсичности препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс».................................... 55

2.2.2.3. Изучение кумулятивных свойств препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс»...................................................... 57

2.2.2.4. Местное действие препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс»

на кожу.................................................................. 61

2.2.2.5. Действие препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс» на конъюнктиву глаза..................................................... 62

2.2.2.6. Кожно-резорбтивное действие препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс»...................................................... 63

2.2.2.7. Оценка сравнительной эффективности акарицидных свойств препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс»........................ 71

*

2.2.3. Изучение аллергизирующих свойств препарата «Инсакар плюс»........................................................................ 77

2.2.4. Изучение иммунотоксических свойств препарата «Инсакар плюс»........................................................................ 78

2.2.4.1. Оценка Т-клеточного звена иммунной системы................ 78

2.2.4.2. Реакция прямой гемаглютинаци................................. 81

2.2.5. Изучение овоцидного действия препарата «Инсакар плюс» в лабораторных условиях................................................ 85

2.2.6. Изучение терапевтической эффективности препарата «Инсакар плюс» при энтомозах и акарозах плотоядных животных в производственных условиях........................... 86

2.2.7. Изучение профилактической эффективности препарата «Инсакар плюс» при иксодидозах собак........................... 91

2.2.8. Изучение сравнительной эффективности препаратов «Инсакар плюс» и «Инспектор Тотал С» при демодекозе собак............ 91

2.2.9. Схема и способы лечения арахноэнтомозов плотоядных животных препаратом «Инсакар плюс»............................. 94

3. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ..........................96

4. ВЫВОДЫ........................................................................................................................................107

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ..............................................................109

6. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ..............................110

ПРИЛОЖЕНИЕ ..................................................................................................................144

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Арахноэнтомозы плотоядных животных распространены повсеместно: встречаются на всех материках, где обитают плотоядные животные, они имеют широкий ареал и проникают вслед за человеком и животными во всё новые места обитания. Арахноэнтомозы поражают практически любые культурные растения, любых домашних и промысловых животных, вызывая такие серьёзные заболевания как демодекоз, саркоптоз, кнемидокоптоз, мелофагоз, пироплазмидоз и другие (Галузо И.Г., 1950; Беклемишев В.Н., 1955; Бердыев А., 1981; Непоклонов A.A., Брюшинина Г.Г., Ивашкова Е.И., 1983; Алексеев А.Н., 1985; Водянов A.A., 1986; Василевич Ф.И., 1986; Кербабаев Э.Б., 1998; Mueller R.S., 2007 и ДР-)-

В развитии кожных заболеваний плотоядных животных важную роль играют эктопаразиты — арахноэнтомозы. Наиболее распространенные арахнозы плотоядных животных это саркоптоз, нотоэдроз, отодектоз (так называемые чесоточные заболевания) и демодекоз. К паукообразным принадлежит и группа иксодовых клещей - наружных паразитов животных, зарегистрированных в качестве биологических переносчиков кровепаразитов (пироплазмы) собак. Возбудители арахнозов относятся к постоянным паразитам, а иксодовые клещи - к временным, нападающим на собак для кровососания (питания) только в теплый период года. Немаловажную роль в развитии кожных заболеваний играют энтомозы, вызванные блохами, вшами и власоедами. По данным A.M. Титаренко (2000), И.Е. Рогозиной (2004, 2005), Т.С. Катаевой (2009) и др. в последние годы отмечена тенденция к увеличению распространения арахноэнтомозов плотоядных. Это связано с повышением поголовья собак и кошек, увеличением популяции бродячих животных (источников инвазии), содержанием собак и кошек на низком уровне ветеринарного обслуживания.

В настоящее время в ветеринарной практике используется большое количество ветеринарных препаратов с инсектицидным и акарицидным

действием. Необходимость применения данных препаратов связано с тем, что заболевания, вызываемые насекомыми и клещами, инвазивны и причиняют значительный ущерб здоровью животных: кровососущие насекомые, клещи, блохи при укусах вызывают беспокойство и стресс; инокулируя при укусе биологически активные вещества и, выделяя продукты жизнедеятельности, они вызывают раздражение, воспалительную, аллергическую реакцию, токсикоз; при покусах или персистенции клещей травмируется кожа, нарушается ее целостность, открываются ворота инфекции; при высокой степени инвазии возможно развитие анемии, истощение, снижение иммунитета; являются переносчиками опасных инфекций и инвазий (пироплазмоз, эрлихиоз, боррелиоз и т.д.) (Непоклонов A.A. с соавт., 1983; Тимофеев Б.А., 1992).

На протяжении многих лет основными методами борьбы с эктопаразитами животных остается применение химических средств. Начиная с 1950-х годов массовое использование химических инсектоакарицидов способствовало появлению резистентных популяций вредных насекомых и клещей (Brown A.W.F., 1976; Рославцева С.А., 1988; Сальникова О.Г., Яровая Н.В., 2011).

Актуальной задачей для ветеринарных специалистов является разработка новых препаратов, а также поиск иной стратегии применения существующих инсектоакарицидных средств, в результате чего свести к минимуму формирование устойчивых популяций эктопаразитов. Для интенсификации борьбы с арахноэнтомозами животных необходимо применять комбинированные препараты с разным механизмом действия, что уменьшит развитие лекарственной устойчивости, повысит эффективность обработок, сократит кратность обработок, снизит затраты, уменьшит токсичность воздействия на животных.

Инсектоакарициды, которые включают одно действующее вещество, как правило, не имеют достаточной эффективности. Овоциды, назначаемые в монорежиме, не дают полной уверенности, что взрослые паразиты не

производят яиц. Комбинации препаратов с разным механизмом действия не только более надежны, но и уменьшают развитие лекарственной устойчивости. Привыкание у насекомых приводит к снижению эффекта при длительном использовании препаратов. Поэтому целесообразна ротация различных средств с определенной периодичностью. Обработки животных обязательно сочетают с применением регуляторов роста и размножения насекомых для их уничтожения в окружающей среде (Стринадкин П.С., Андричук Б.В., Домацкий Н.И., 1982; Богданов М.Р., Мигранов М.Г., 1994; Дьяченко Ю.В., Водянов A.A., 1997; Грапов А.Ф., 1999; Енгашев C.B., Ларионов C.B., 2002; Соколов В.Д., Андреева Н.Л., Ноздрин Г.А. и др., 2003).

Для расширения ассортимента отечественных средств, эффективных и безопасных в применении, на базе института гельминтологии (ВИГИС) разработан новый препарат с инсектоакарицидным действием «Инсакар». Изначально было предложено 4 композиции препарата с различным качественным и количественным составом активных компонентов (бензилбензоат, фипронил, перипроксифен). По результатам ранее проведенных исследований в лабораторных условиях выделили композицию-4 (с последующим названием «Инсакар плюс»), которая показала выраженную острую акарицидную активность и продолжительное остаточное действие в течение 30 дней. Кроме того, выделили композицию-1 (с последующим названием «Инсакар»), которая также обладала продолжительным остаточным действием в течение 30 дней, но 100% гибель клещей при первом контакте с обработанной поверхностью наступала на порядок дольше (М.В. Арисов и др., 2011). Кроме этого, в исследованиях М.В. Арисова (2010, 2011) были представлены данные о высокой инсектицидной эффективности обеих композиций препарата при энтомозах собак.

На первом этапе нашей работы было определение более эффективной, безвредной и экономичной композиции из ранее выделенных двух препаратов с различным качественным и количественным содержанием

активных компонентов: инсакар, содержащий в качестве действующих веществ фипронил 9%, пирипроксифен 2% и вспомогательные компоненты; инсакар плюс, содержащий в качестве ДВ бензилбензоат 20%, фипронил 5%, пирипроксифен 2% и вспомогательные компоненты.

Цель и задачи исследований. Цель работы - на основе экспериментальных исследований определить более эффективную, безвредную и экономичную композицию из двух препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс» с различным качественным и количественным содержанием активных компонентов, а также изучить фармако-токсикологические свойства и лечебно-профилактическую эффективность выбранного препарата при арахноэнтомозах плотоядных животных.

Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:

- на основании фармако-токсикологических исследований и оценки сравнительной инсектоакарицидной эффективности препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс» определить более безвредную, эффективную и экономичную композицию;

- изучить аллергизирующие и имунотоксикологические свойства препарата;

- изучить овоцидное действие препарата в лабораторных условиях;

- изучить лечебно-профилактическую эффективность препарата при арахноэнтомозах плотоядных животных;

- разработать схему и способы лечения арахноэнтомозов плотоядных животных препаратом Инсакар.

- разработать инструкцию по применению капель инсектоакарицидных "Инсакар" при арахноэнтомозах плотоядных животных.

Научная новизна. По результатам доклинических и клинических исследований двух препаратов выделен препарат «Инсакар плюс», показавший лучшую эффективность.

Изучены фармако-токсикологические свойства препарата «Инсакар плюс», результаты которых позволили научно обосновать безвредность

препарата для животных в терапетических и повышенных дозах. Изучена лечебно-профилактическая эффективность препарата «Инсакар плюс» при арахноэнтомозах плотоядных животных. Разработаны схема и способы лечения арахноэнтомозов плотоядных животных препаратом «Инсакар плюс».

Разработана Инструкция по применению капель инсектоакарицидных «Инсакар» при арахноэнтомозах плотоядных животных.

По результатам исследований получен патент на изобретение РФ № 2456982 от 27 июля 2012 года «Инсектоакарицидное средство для лечения плотоядных животных».

Практическая значимость. Дано научно-практическое обоснование применения в ветеринарии нового инсектоакарицидного препарата «Инсакар». Разработаны схема и способы лечения арахноэнтомозов плотоядных животных препаратом «Инсакар».

Разработана и утверждена на Ученом Совете ГНУ «ВИГИС» Инструкция по применению капель инсектоакарицидных "Инсакар" при арахноэнтомозах плотоядных животных (протокол №7 от 29.09.2011 г.).

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены, обсуждены и одобрены на заседаниях Ученого Совета ВИГИС 2011 - 2013 гг.; на научно-практических конференциях ««Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» (г. Москва, 2011; 2012 гг.).

Личный вклад диссертанта. Представленная диссертационная работа является результатом 3-летних научных исследований автора. Работа по проведению фармако-токсикологических исследований и оценки сравнительной инсектоакарицидной эффективности препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс» и изучение лечебно-профилактической эффективности препарата «Инсакар плюс» при арахноэнтомозах плотоядных животных выполнены автором самостоятельно.

Схема и способы лечения арахноэнтомозов плотоядных животных препаратом «Инсакар», Инструкция по применению капель

инсектоакарицидных «Инсакар» при арахноэнтомозах плотоядных животных разработаны совместно с научным руководителем. Диссертация выполнена под научным руководством доктора ветеринарных наук, ведущего научного сотрудника лаборатории иммунологии ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт гельминтологии им. К.И. Скрябина» Россельхозакадемии, Арисова Михаила Владимировича, который оказывал научно-методическую помощь при проведении исследований, анализе полученных данных. Статьи, написанные в соавторстве, включают не менее 80% материалов в исследованиях аспиранта.

Основные положения, выносимые на защиту:

- сравнительная оценка препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс» по фармако-токсикологическим и инсектоакарицидным свойствам;

- результаты исследований аллергических и иммунотоксических свойств препарата «Инсакар плюс»;

- результаты изучения овоцидного действия препарата «Инсакар плюс» в лабораторных условиях и лечебно-профилактической эффективности при арахноэнтомозах плотоядных животных;

Публикации. По материалам проведенных исследований и теме диссертации опубликовано 8 научных работ, 4 из которых в изданиях, рекомендованных ВАК РФ, где представлены основные положения работы.

Объем и структура диссертации. Диссертация написана на 143 страницах компьютерного текста, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Список использованной литературы включает 364 источника, из которых 247 отечественных работ и 117 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 27 таблицами, 9 рисунками. Приложение к диссертации включает: патент на изобретение РФ № 2456982 от 27 июля 2012 года «Инсектоакарицидное

средство для лечения плотоядных животных»; инструкцию по применению капель инсектоакарицидных "Инсакар" при арахноэнтомозах плотоядных животных; акты производственных испытаний.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Арахноэнтомозы плотоядных животных как

сформировавшиеся паразитарные системы.

Арахноэнтомозы имеют широкое распространение: паразитические членистоногие живут на всех материках, они имеют широкий ареал, и проникают вслед за человеком во всё новые места обитания. Членистоногие поражают практически любые культурные растения, любых домашних и промысловых животных, вызывая такие серьёзные заболевания как демодекоз, саркоптоз, кнемидокоптоз, мелофагоз, пироплазмидоз и другие (Галузо И.Г., 1950; Беклемишев В.Н., 1955; Бердыев А., 1981; Непоклонов A.A., Брюшинина Г.Г., Ивашкова Е.И., 1983; Алексеев А.Н., 1985; Водянов A.A., 1986; Василевич Ф.И., 1986; Кербабаев Э.Б., 1998; Mueller R.S., 2007 и ДР-)-

Большое значение в развитии кожных заболеваний плотоядных животных имеют арахноэнтомозы (эктопаразиты) - это саркоптоз, нотоэдроз, отодектоз (чесоточные заболевания) и демодекоз. Кромен этого к наружным паразитам относятся и группа иксодовых клещей, которые также являются биологическими переносчиками кровепаразитов (пироплазмы) собак. Важную роль в развитии кожных заболеваний плотоядных животных играют энтомозы (блохи, вши и власоеды). По данным A.M. Титаренко (2000), И.Е. Рогозиной (2004, 2005), Т.С. Катаевой (2009) и др. в последние годы в связи с повышением поголовья собак и кошек, а также увеличением популяции бродячих животных (источников инвазии), содержанием собак и кошек на низком уровне ветеринарного обслуживания, отмечена тенденция к увеличению распространения арахноэнтомозов плотоядных.

Саркоптоидозы плотоядных животных относятся к эпизоотическим инвазионным заболеваниям, которые характеризуются высокой контагиозностью и возможностью неограниченного распространения. Во всех странах мира в мегаполисах из саркоптоидозов у собак широкое распространение получили саркоптоз и отодектоз (Holz I., 1955; Майоров А.И., 1986, 1989; Wright F.C., Riner Т.С., 1979; Scott J.G., Walcott J., 1988; Шустрова М.В., 1996; Прозоров A.M., 1999; Ерёмина Т.С., 2003;