Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Усовершенствование мер борьбы с паразитозами плотоядных животных

ВАК РФ 03.02.11, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "Усовершенствование мер борьбы с паразитозами плотоядных животных"

На правах рукописи /

СТЕПАНОВ Василий Александрович

УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕР БОРЬБЫ С ПАРАЗИТОЗАМИ ПЛОТОЯДНЫХ ЖИВОТНЫХ (ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА НОВЫХ ПРЕПАРАТОВ, ПРИМЕНЯЕМЫХ НАКОЖНО)

Специальность: 03.02.11. — паразитология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

1 г ФЬВ 2015

Москва 2015

005558850

005558850

Работа выполнена в ФГБНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт фундаментальной и прикладной паразитологии животных и растений имени К.И. Скрябина»

Научный руководитель:

доктор ветеринарных наук Арисов Михаил Владимирович

Официальные оппоненты:

Бопдаренко Владимир Олегович, доктор биологических наук, ФГБУ «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов», ведущий научный сотрудник отдела качества и стандартизации фармакологических лекарственных средств

Шемяков Дмитрий Николаевич, кандидат ветеринарных наук, ФГБОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина», доцент кафедры паразитологии и ветеринарно-санитарной экспертизы

Ведущая организация: ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет»

Защита диссертации состоится « Jb^SmiM2015 г. в часов ira заседании совета по защите диссертаций на соисгание учёной степешг кандидата наук, на соискание учёной степени доктора наук Д 006.011.01, созданного на базе ФГБНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт фундаментальной и прикладной паразитологии животных и растений имени К.И. Скрябина»

Адрес: 117218, Москва, ул. Б. Черемушкинская, д. 28

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБНУ «ВНИИП им. К.И. Скрябина»

Автореферат разослан «<?£

Учёный секретарь диссертационного совета по защите диссертаций на соискание учёной степени кандидата наук, на соискшше учёной степени доктора наук,

1. Общая характеристика работы

Актуальность темы. С давних времен люди приручали животных, и в результате этого совместное обитание стало образом жизни людей. Особенно в последние годы привязанность человека к домашним животным сильно возросла, в связи с этим каждый владелец старается вырастить свое животное здоровым. Однако отсутствие сведений об элементарных санитарных правилах некоторых владельцев животных служит одной из причин широкого распространения заразных заболеваний, в том числе и паразитарных (Водянов A.A., 1997, Гламаздин Н.Г., 2002, Uga S. et al., 1996). В настоящее время наблюдается бесконтрольный рост численности как домашних, так и бездомных животных, особенно в крупных городах (Абакумов A.A., 2000, Воличев А.Н., 2000, Шинкаренко А.Н, 2005, Keane К.А., 1992). По некоторым данным, в России насчитывается около 30 млн. собак и 40 млн. кошек. В больших городах абсолютное число собак может достигать уровня - 1 животное на 30 жителей. Точные данные по числепности бездомных животных отсутствуют (Есаулова Н.В., 2000, Захаров П.В. и др., 2001, Кашковская Л.М., 2009).

Актуальной современной проблемой является расширение многими паразитами плотоядных своего ареала, это происходит по ряду причин (глобальное потепление климата, усиление антропогенной нагрузки на окружающую среду и другие). В средней полосе России, например, в Московской области, участились случаи регистрации таких зооантрошшозов, как эхинококкоз, дирофиляриоз, токсоплазмоз и других (Архипов И.А., 2004, Веденеев С.А., 2004, Ястреб В.Б., 2004).

Паразитозы домашних плотоядных животных являются одной из наиболее изучаемых проблем медицины и ветеринарии, но, несмотря на достигнутые успехи ветеринарной медицины в их ликвидации, они представляют опасность для самих собак и кошек, сельскохозяйственных животных, а также человека, особенно детей, продолжают наносить значительный ущерб человечеству. На территории СНГ у собак и кошек зарегистрировано 80 - 90 видов паразитов, многие из них могут поражать человека и сельскохозяйственных животных (Беспалова U.C., 2003, Борцова С.А. и др., 2007, Горохов В.В., 2002, Евенко A.B., 2001, Жабров A.B., 2002, Корякин Р.В., 2004, Полоз C.B., 2000, Bishop B.F. et al., 2002, Lloyd S., 1985).

Паразиты наносят значительный вред своим хозяевам, вызывают необратимые патологические процессы, ухудшают общее состояние здоровья животных, обостряют течение хронических заболеваний, снижают иммунитет и даже могут привести к гибели собак и кошек, особенно в раннем возрасте (Архипов И. А. и др., 2001, Шахбиев Х.Х., 2010).

Для борьбы с паразитозами плотоядных необходимо осуществлять постоянный эпизоотический контроль за распространением с целью своевременного проведения лечебно-профилактических мероприятий и снижения заболеваемости, проводить обследование животных перед случкой и профилактическими прививками.

Дегельминтизация и обработки сегодня остается основным и главным средством, основным приемом, обеспечивающим разрыв эпизоотической цепи. Поэтому разработка, фармакологическая и клиническая оценка, внедрение в ветеринарную практику новых средств, усовершенствование существующих методов профилактики и лечения паразитозов животных является актуальной задачей ветеринарной науки и практики.

В настоящее время в ветеринарной практике известно свыше 1500 тысяч противопаразитарных препаратов и их лекарственных форм, относящихся к 8 классам химических соединений. Современные лекарственные формы препаратов позволяют повысить их биодоступность, снизить терапевтическую дозу, минимизировать побочные эффекты (Березкина С.В., 1999). Однако, несмотря на многообразие лекарственных средств, созданных для борьбы с паразитозами, все-таки многие из них по различным причинам не удовлетворяют современным требованиям ветеринарной практики, основными условиями которой являются высокая эффективность, относительно низкая токсичность для животных и человека, безвредность для объектов окружающей среды и, немаловажно, удобство в применении.

Широкое распространение паразитозов собак и кошек, разнообразие возбудителей и многочисленные осложнения, которыми они сопровождаются, вызывают необходимость искать все более совершенные средства для их лечения и профилактики. Таким образом, имеется актуальная задача по разработке новых препаратов, главным образом - комплексных, содержащих несколько действующих веществ. Это сочетание обладает преимуществами, так как разные активные компоненты вступают в сипергидное воздействие на все стадии развития и виды паразитов, а также исключают выработку устойчивых популяций возбудителей.

Чаще всего антигельминтные препараты применяются пероралыю, в форме таблеток или суспензии, однако для многих животных такой способ является неприемлемым в связи с агрессивностью отдельных особей, а также неприятными вкусами лекарственных средств, вызывающими слюнотечение, образование пены или даже рвоту у принимающих их животных. Альтернативным методом является транедермальное введение антигельминтных препаратов (в виде капель на холку). К таким лекарственным средствам относятся «Гельминтал С» и «Гельминтал К», в состав которых входят действующие вещества моксидектин и празиквантел, а также вспомогательные компоненты. По внешнему виду они представляют собой прозрачную, маслянистую, бесцветную или светло-желтого цвета жидкость.

Цель и задачи исследований. Цель работы - изучить фармако-токсикологические свойства инсектоакарицидных препаратов на основе фипронила, пирипроксифена, О-цифенотрина и этофенпрокса, изучить лечебно-профилактическую эффективность антигельминтных препаратов,

применяемых в виде капель на холку, при нематодозах и цестодозах собак и кошек.

Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:

- изучить фармако-токсикологические свойства новых препаратов на основе фипронила, пирипроксифена, О-цифенотрина и этофенпрокса;

- определить скорость наступления состояния нокдауна и высоты подъема клещей по обработанной ткани инсектоакарицидными препаратами для собак и для кошек;

- изучить репеллентные свойства инсектоакарицидных препаратов для собак и для кошек;

- изучить лечебно-профилактическую эффективность препаратов, применяемых в виде капель на холку, при арахноэнтомозах плотоядных животных;

- изучить лечебно-профилактическую эффективность препаратов, применяемых в виде спрея, при арахноэнтомозах плотоядных животных;

-изучить лечебно-профилактическую эффективность антигельминтных препаратов, применяемых в виде капель на холку, при нематодозах и цестодозах собак и кошек;

Научная новизна работы. Изучены фармако-токсикологические свойства новых препаратов на основе фипронила, пирипроксифена, О-цифенотрина и этофенпрокса, результаты которых позволили научно обосновать безвредность препарата для животных в терапевтических и повышенных дозах, а также высокую эффективность при арахноэнтомозах собак и кошек. Изучены нокдаун-эффект и репеллентные свойства комплексных препаратов.

В клинических условиях доказана высокая лечебно-профилактическая эффективность новых комплексных антигельминтных препаратов «Гельминтал С» и «Гельминтал К», применяемых в виде капель на холку, при нематодозах и цестодозах собак и кошек.

Теоретическая и практическая значимость работы. Дано научно-практическое обоснование применения в ветеринарии новых инсектоакарицидных препаратов на основе фипронила, пирипроксифена, О-цифенотрина и этофенпрокса. Результаты исследований изучаемых противопаразитарных средств использованы при разработке нормативных документов по применению в ветеринарной практике:

- в инструкцию по применению РольфКлуб ЗВ капель для борьбы с эктопаразитами собак (утв. Россельхознадзором 14.05.14 г.32-3-3.14-1974 ПВР-3-3.14/03026);

- в инструкцию по применению РольфКлуб 31) капель для борьбы с эктопаразитами кошек (утв. Россельхознадзором 14.05.14 г.32-3-3.14-1975 ПВР -3-3.14/03027);

- в проект инструкции по применению РольфКлуб ЗП спрея для собак;

- в проект инструкции по применению РольфКлуб ЗЭ спрея для кошек.

Положения, выносимые на защиту:

- результаты исследований токсикологических свойств новых препаратов на основе фипронила, пирипроксифена, О-цифенотрина и этофенпрокса;

- результаты исследований по определению скорости наступления состояния нокдауна и высоты подъема клещей по обработанной ткани;

- результаты исследований репеллентных свойств;

-результаты исследований лечебно-профилактической эффективности препаратов, применяемых в виде капель на холку и спрея, при арахноэнтомозах плотоядных животных;

-результаты исследований лечебно-профилактической эффективности антигельминтных препаратов, применяемых в виде капель на холку, при нсматодозах и цестодозах собак и кошек.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены, обсуждены и одобрены на заседаниях Ученого Совета ВИГИС 2011 - 2014 гг.; на научно-практической конференции «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» (г. Москва, 2014 гг.); X Международной научно-практической конференции «Научная индустрия европейского континента» (РгаЬа, 2014).

Публикации результатов исследований. По материалам проведенных исследований и теме диссертации опубликовано 8 научных работ, 6 из которых в изданиях, рекомендованных ВАК РФ, где представлены основные положения работы.

Личный вклад диссертанта. Представленная диссертационная работа является результатом 3-летних научных исследований автора. Работа по проведению фармако-токсикологических исследований и оценки эффективности препаратов автором выполнена самостоятельно.

Изучение новдаун-эффекта и репеллентных свойств инсектоакарицидных препаратов проведены совместно с научным руководителем и сотрудниками организации-производителя изучаемых препаратов. Диссертация выполнена под научным руководством доктора ветеринарных наук, ведущего научного сотрудника лаборатории иммунологии ФГБНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт фундаментальной и прикладной паразитологии животных и растений имени К.И. Скрябина» Арисова Михаила Владимировича, который оказывал научно-методическую помощь при проведении исследований, анализе полученных данных. Статьи, написанные в соавторстве, включают не менее 80% материалов в исследованиях аспиранта.

Объем и структура диссертации. Диссертация написана на 168 страницах компьютерного текста, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Список использованной литературы включает 450 источников, из которых 344 отечественных работ и 106 иностранных авторов. Работа иллюстрирована

12 таблицами. Диссертация включает 4 приложения: инструкцию по применению РольфКлуб 3D капель для борьбы с эктопаразитами собак (утв. Россельхознадзором 14.05.14 г. 32-3-3.14-1974 ПВР -3-3.14/03026); инструкцию по применению РольфКлуб 3D капель для борьбы с эктопаразитами кошек (утв. Россельхознадзором 14.05.14 г. 32-3-3.14-1975 ПВР -3-3.14/03027); проект инструкции по применению РольфКлуб 3D спрея для собак; проект инструкции по применению РольфКлуб 3D спрея для кошек.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы исследований

Исследования по токсикологической оценке препаратов проводили в виварии Всероссийского научно-исследовательского института фундаментальной и прикладной паразитологии животных и растений имени К.И. Скрябина.

Для установления общетоксических свойств препаратов использовали белых беспородных крыс, мышей, морских свинок. Животных получали из питомника «Филиал Андреевка ГУ НЦ биомедицинских технологий РАМП». Они были разведены специально и ранее не участвовали в опытах.

Вновь прибывшие в виварий института животные находились в комнате карантинирования и адаптации в течение 14 суток. Во время карантинного периода у них контролировали клинические показатели состояния здоровья. Животных содержали в поликарбонатных клетках по 5 или 10 голов. В качестве подстила использовали древесные опилки. Животных содержали в виварии согласно санитарным правилам и на стандартном рационе в соответствии с Приказом МЗ СССР №1045-73 от 06.04.1973. Подготовку к опыту проводили в соответствии с указаниями ОФС «Испытание на токсичность» ГФ XI. Перед опытом у животных забирали корм и воду. Через два часа их взвешивали и распределяли по группам. Подбор в группы проводили произвольно методом «случайных чисел», используя в качестве критерия массу тела. Индивидуальные значения массы тела не отклонялись от среднего значения в группе более чем на 10%. Животных взвешивали на весах ВР-05МС-3/0.5-БР (Россия).

Для определения острой пероралыгой токсичности использовали беспородных белых мышей-самцов с исходной массой 18 — 20 г. Отдельно формировали группы для исследования РольфКлуб 3D капли для собак и для кошек. По каждому препарату было сформировано 6 групп животных (5 опытных и 1 контрольная), состоявших из 10 особей. Все грызуны содержались в одинаковых условиях, получали одинаковый рацион. Препараты вводили мышам однократно с помощью желудочного зонда в дозах: 412, 515, 721, 824 и 1133 мг/кг (для кошек) и 257, 412, 515, 721 и 1030 мг/кг (для собак). Наблюдения за животными вели в течение 14 суток, учитывали характер токсического действия: поведение, двигательную активность, состояние шерстного покрова, нарушение физиологических

функций, возможную гибель. Расчет параметров токсичности проводили по методу Миллера и Тейнтера.

Определение параметров острой накожной токсичности проводили на белых крысах-самцах с исходной массой 200 - 220 г. Отдельно формировали группы для исследования РольфКлуб 3D капли для собак и для кошек. Для исследования каждого препарата животных разделяли на 3 группы по 6 крыс в каждой. За сутки до нанесения препаратов вогнутыми ножницами выстригали шерстный покров площадью 6x6 см в области спины. Опытные животные получали препараты РольфКлуб 3D капли в дозах: 2060, 2575, 3193 и 3708 мг/кг (для кошек) и 2060, 2575, 3090 и 3605 мг/кг (для собак), однократно. После аппликации грызунов рассаживали на 30 минут в отдельные клетки, чтобы избежать слизывание препарата. Наблюдение за животными вели в течение 14 суток, регистрировали общее состояние и поведение, проявление симптомов интоксикации, возможную гибель.

Раздражающее действие препаратов на кожу определяли в опыте по изучению острого накожного токсического действия. Первичную реакцию оценивали сразу после нанесения, далее через 15 минут, 1, 3, 24,48 и 72 часа. Наблюдали за состоянием кожи, обращая особое внимание на гиперемию, отечность, появление трещин, изъязвлений, кровоизлияний, сухих корочек и т.д. Оценку раздражающего действия выражали в баллах по шкале, указанной в Методических указаниях к постановке исследований по изучению раздражающих свойств и обоснованию предельно допустимых концентраций избирательно действующих раздражающих веществ в воздухе рабочей зоны.

Изучение подострой токсичности проводили на 40 крысах-самцах исходной массой тела 200-220 г. Животных разделили на 4 равноценные группы по 10 крыс в каждой. Выбранные дозы представляли дозировки, кратные значению LD50=3100 мг/кг. Рольфклуб 3D наносили ежедневно в течение 14 суток на выстриженный участок кожи в области спины в дозах: 1/10; 1/20 и 1/50 от LDS0 (310; 155 и 62 мг/кг от LD50=3100 мг/кг) с помощью автоматической гашетки. Животные контрольной группы препарат не получали. В течение всего периода наблюдали за общим состоянием и поведением животных, возможной гибелью, приемом корма и воды, видимыми физиологическими функциями, состояние шерстного покрова, кожи и т.п. Ежедневно у крыс регистрировали массу тела (весы ВР-05 МС-3/0,5-БР, Россия). В конце опыта через 1 сутки после последней аппликации Рольфклуб 3D животных убивали декапитацией и отбирали пробы крови (с и без антикоагулянта) для определения гематологических и биохимических показателей. Основные показатели периферической крови крыс определяли на гематологическом анализаторе PCE 90-vet (Китай); лейкоцитарную формулу - общепринятым методом. Биохимические показатели крови определяли на анализаторе Biosystems А-15 (Испания). Определяли массу основных органов (весы «AND HL400», Япония) и рассчитывали массовые коэффициенты. Проводили макро- и микроскопическое исследование

органов (печени, легких, почек, сердца, селезенки, кожи), пробы которых отбирали у всех крыс каждой группы. Материал фиксировали в 10% формалине и заливали в парафин. Гистологические срезы делали на микротоме «Microm НМ325» (Германия) и окрашивали гематоксилии-эозином. Микроскопические препараты исследовали под микроскопом «Micros» (Австрия); увеличение 90x10.

Изучение аллергизирующих свойств препарата «РольфКлуб 3D капли для собак», который применяется накожно, провели на 80 белых крысах популяции Wistar массой 200 - 220 г. Выполняли эпикутанную сенсибилизацию 40 белых крыс путем 20 повторных (по 5 раз в неделю) накожных аппликаций на участки боковой поверхности туловища размером 2x2 см в дозе 0,01 мл, нанося равномерным слоем на весь участок аппликации с помощью глазной пипетки. При этом способе сенсибилизации можно выявить возможность возникновения контактного дерматита. В процессе сенсибилизации контактного дерматита или раздражающего действия препарата отмечено не было. Через 10 суток после сенсибилизации провели тестирование: использовали кожную (эпикутанную), внутрикожную, конъюнктивальную и назальную пробы. Для каждой пробы использовали 10 сенсибилизированных крыс и 10 крыс несенсибилизированных - контроль.

Эпикутанная проба. Сенсибилизированным и контрольным животным (по 10 крыс) однократно нанесли на выстриженные участки кожи спины (2x2 см) испытуемый препарат в дозе 0,2 мл (рабочая доза, не вызывающая кожно-раздражающего действия). После нанесения препаратов через 15, 30 минут, 24, 48 и 72 часа проводили оценку кожи, которую оценивали в баллах.

Внутрикожная проба. 0,1 мл испытуемого препарата внутрикожно ввели на выстриженном участке 1x1 см, а воду для контроля в том же объеме на другой стороне туловища животного. Результаты учитывали через 20 - 30 минут (аллергическая реакция немедленного типа), через 4—6 часов (немедленно-замедленного типа), через 24 часа (замедленного типа). Отмечали реакцию кожи (возможные появления эритемы, инфильтрата), измеряли толщину кожной складки, сопоставляя показателям контроля.

Конъюнктивальная и назальная пробы. На слизистую конъюнктивы (под верхнее веко) и носовой полости закапали по 1 капле испытуемого препарата сенсибилизированным и контрольным животных. Оценку конъюнктивальной реакции проводили визуально под лупой при увеличении х2 через 15 минут (реакция немедленного типа) и через 24-48 часов (замедленного типа) по бальной шкале: 0 - видимых реакций нет; 1 - легкое покраснение слезного протока; 2 - покраснение слезного протока и склеры в направлении к роговице; 3 - покраснение всей конъюнктивы и склеры. При оценке назальной реакции учитывали состояние слизистой оболочки, наличие чихания и усиления секреции слизи в сопоставлении с контрольными животными.

Изучение переносимости препаратов проводили на 15 клинически здоровых беспородных кошках 2-4 летнего возраста массой тела 2 - 4 кг и

на 15 клинически здоровых беспородных собаках 2-4 летнего возраста массой тела 12-15 кг. Животные содержались в боксах на стандартном полнорационном кормлении для кошек и собак. Они по принципу аналогов были разделены на три группы по 5 особей в каждой. Препараты РольфКлуб ЗЕ) капли наносили накожно, раздвигая шерсть, на спину, распределяя его от холки до крестца, 1 раз в сутки в течение 5 дней в следующих дозах: первым опытным группам 0,15 мл/кг (рекомендуемая терапевтическая доза), вторым опытным 0,45 мл/кг (трехкратная терапевтическая доза), третьи группы служили контролем, им препарат не применяли. В процессе опыта за животными вели ежедневное наблюдение, контролировали их общее состояние, поведение, аппетит, вес, температуру тела. Взвешивание и измерение температуры производили утром перед кормлением. До начала опыта и через 10 и 30 дней после начала применения препарата брали кровь для исследования ряда морфологических и биохимических параметров. Данные обрабатывали статистически с использованием программы «вшёеп^ 200».

Лабораторные эксперименты по определению нокдаун-эффекта проведены на базе ФГБНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт фундаментальной и прикладной паразитологии животных и растений им. К.И. Скрябина». Определение репеллентной активности препарата по отношению к природным популяциям кровососущих двукрылых проводили в лесопарках г. Москвы и Нижегородской области. Исследования проводили в апреле - июне 2014 года, используя методику «Дезинсекция. Методы определения эффективности инсектицидов, акарицидов, регуляторов развития и репеллентов, используемых в медицинской дезинсекции. N МУ 3.5.2.1759-03». Всего в опытах использовали 90 иксодовых клещей, 12 собак и 12 кошек разного возраста и пород.

Работу по изучению эффективности инсектоакарицидных препаратов проводили с июня 2013 года по май 2014 года на базе ветеринарных клиник г. Бронницы Московской области, «Беланта» и «Зоомедик 1» г. Москва на спонтанно зараженных собаках и кошках разного возраста и пород. Всего, зараженных эктопаразитами, было выделено 432 собаки и 360 кошек, также 115 собак и 45 кошек были обработаны в профилактических целях. Диагноз, а также эффективность препаратов, подтверждали результатами клинического осмотра и исследованиями соскобов, взятых с пораженных участков.

Исследования по изучению эффективности лекарственных препаратов «Гельминтал С» и «Гельминтал К» при нематодозах и цестодозах собак и кошек проводили с июня по декабрь 2013 года на базе ветеринарных клиник г. Бронницы и «Зоомедик 1» г. Москва. В опытах было использовано 61 собака и 55 кошек разного возраста и пород, естественно инвазированных нематодами и цестодами. Диагноз, а также эффективность препарата, подтверждали комплексно исходя из клинической картины и лабораторно по

методу Фюллеборна на обнаружение яиц гельминтов в фекалиях животного с последующей дифференцировкой.

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.2.1. Фармако-токсикологическая оценка новых препаратов па основе фипроннда, пирипроксифена, О-цифенотрина и этофенпрокеа

2.2.1.1. Сравнительная характеристика препаратов (физико-химические, фармакологические свойства)

Препараты в форме раствора для нанесения на кожу:

1. РольфКлуб 30 капли для собак, представляют собой маслянистую прозрачную жидкость жёлтого цвета, плотность 0,98 г/см3, содержат в качестве действующих веществ фипронил - 9,8%, Б-цифенотрин — 5,2%, пирипроксифен - 2%.

2. Рольфклуб 30 капли для кошек, представляют собой маслянистую прозрачную жидкость жёлтого цвета, плотность 0,98 г/см3, содержат в качестве действующих веществ фипронил - 9,8%, этофенпрокс — 15%, пирипроксифен - 2%.

3. РольфКлуб ЗБ спрей для собак, представляют собой прозрачную жидкость светло-жёлтого цвета, плотность 0,93 г/см3, содержат в качестве действующих веществ фипронил - 0,4 %, О-цифенотрин - 0,2 %, пирипроксифен - 0,2 %.

4. РольфКлуб 31) спрей для кошек, представляют собой прозрачную жидкость светло-жёлтого цвета, плотность 0,93 г/см3, содержат в качестве действующих веществ фипронил — 0,4 %, этофенпрокс— 0,6 %, пирипроксифен - 0,2 %.

Отличием препаратов, применяемых в виде капель на холку и в виде спрея, является количественное и качественное содержание активных компонентов и, соответственно, способу и дозам применения в практике.

В связи с тем, что препараты применяемые в виде капель на холку и спрея идентичны, но отличаются только количественным содержанием действующих веществ, доклинические экспериментальные исследования провели с препаратами РольфКлуб ЗО капли для собак и для кошек, так как содержание действующих веществ значительно выше, чем в препаратах, применяемых в виде спрея.

2.2.1.2. Острая токсичность

Острая пероралъная токсичность. Параметры острого токсического действия препарата РольфКлуб ЗО капли для кошек при пероралыюм введении мышам указаны в табл. 1, для собак — в табл. 2.

Таблица 1

ЬЭо 1Л)15 ьо50 ьо84 ЬЭюо

412 мг/кг 600 мг/кг 720±150 мг/кг 860 мг/кг 1133 мг/кг

Таблица 2

Параметры острой пероральной токсичности препарата для собак

ЬР0 1Л)16 ЬР50 ЬР84 1 ЬР100

257 мг/кг 310 мг/кг 600±120 мг/кг 760 мг/кг | 1030 мг/кг

С учетом установленных значений ЬО50, согласно общепринятой гигиенической классификации (ГОСТ 12.1.007-76) препараты относятся к 3 классу опасности.

Острая токсичность при накожном нанесении. Параметры острого токсического действия препарата РольфКлуб ЗИ капли для кошек при нанесении на кожу крыс указаны в табл. 3, для собак — в табл. 4.

Таблица 3

Параметры острой токсичности при нанесении на кожу препарата __«РольфКлуб ЗР капли для кошек» _

ЬР0 1Л)16 ЬР50 ЬР84 ГРюо

2060 мг/кг 2750 мг/кг 3200 ± 320 мг/кг 3450 мг/кг 3708 мг/кг

Таблица 4

Параметры острой токсичности при нанесении на кожу препарата «РольфКлуб ЗР капли для собак»

ЬР0 ЬР16 ЬР5о ЬР84 ГРюо

2060 мг/кг 2600 мг/кг 3100 ±565 мг/кг 3500 мг/кг 3650 мг/кг

С учетом установленных значений ЬР50, согласно общепринятой гигиенической классификации (ГОСТ 12.1.007-76) препараты относяться к 4 классу опасности.

2.2.1.3. Оценка раздражающего действия

Во время определения параметров острой накожной токсичности одновременно оценивали воздействие препаратов РольфКлуб ЗР капли для собак и для кошек на кожу. В начальные и последующие периоды наблюдений отсутствовали какие-либо характерные признаки поражения кожи: гиперемия, отечность, наличие трещин, изъязвлений, сухих корочек, кровоизлияний и т.д. (0 баллов).

2.2.1.4. Изучение биологического действия препарата «РольфКлуб ЗЭ капли для собак» при повторном воздействии в субхроническом эксперименте

Влияние на общее состояние и поведение, динамику прироста массы тела крыс

Нанесение препарата в дозе 310 мг/кг привело к гибели одного животного после трех аппликаций. После четвертого нанесения животные опытной группы отказывались от корма и воды. У животных наблюдали мышечные спазмы, которые сопровождались беспокойством крыс в виде агрессии.

Со второй недели и до конца опыта признаков интоксикации и гибели не наблюдали, все животные в норме принимали корм и воду, адекватно реагировали на внешние раздражители.

Нанесение препарата в дозах 310 и 155 мг/кг отразилось статистически значимым образом па текущих значениях привесов соответственно 208,35±3,10 и 235,24±2,52 против данных контрольной группы 245,18±2,81. В дозе 310 мг/кг достоверные изменения претерпели конечные значения массы тела крыс 279,90±3,23 в сравнении с контролем 300,78±2,18. Однако процент к исходной массе тела сравним с контрольными значениям. Массовые коэффициенты

Препарат в дозе 310 мг/кг привел к изменению относительной массы печени и селезенки на 27,6 и 36,8% соответственно.

Макро- и микроскопическое исследование тканей При макро- и микроскопическом исследовании печени, легких, почек, сердца, селезенки и кожи после нанесения препарата в трех дозах в течение 14 суток паталогических изменений не отмечено.

Гематологические и биохимические показатели крови Длительное нанесение препарата в трех дозах не отразилось отрицательным образом на морфологические и биохимические показатели крови крыс.

2.2.1.5. Изучение аллергизирующих свойств препарата «РольфКлуб 3D капли для собак»

Эпикутанная проба. В течение 72 часов после нанесения испытуемого препарата сенсибилизированным и контрольным животным по характеру кожной реакции (отсутствие гиперемии, инфильтрации) обработанные участки не отличались у опытных и контрольных животных. Реакция оценена по шкале в баллах: 0 - видимой реакции нет.

Внутрикожная проба. При введении препарата у сенсибилизированных и контрольных крыс на месте инъекции появилось покраснение в виде «пуговки». В течение 12 часов покраснение на месте введения препарата рассасывалось и постепенно переходило в бледно-розовый оттенок в обеих группах с мелким шелушением эпидермиса. По истечении 24 часов на коже сенсибилизированных и контрольных животных отклонений не отмечено.

Конъюнктивальная и назальная пробы. Конъюнктивальная реакция при закапывании препарата не отличалась как у сенсибилизированных, так и у контрольных животных. В течение 1 часа отмечали покраснение всей конъюнктивы и склеры, в последующем покраснение переходило в легкое покраснение. Через 24, 48 часов не было отмечено каких-либо изменений слизистой оболочки и склеры глаз в обеих группах.

При оценке назальной реакции установлено, что при закапывании испытуемого препарата наблюдали чихание, усиление секреции слизи и

незначительную гиперемию слизистой оболочки в обеих группах. Через 24, 48 часов никаких отклонений на слизистой оболочке иоса отмечено не было.

2.2.1.6. Изучение переносимости препаратов на собаках и кошках

В результате ежедневного наблюдения за животными было установлено, что общее состояние собак и кошек опытных групп не отличалось от состояния животных контрольных групп, все они находились в удовлетворительном состоянии, были подвижны, активны, охотно принимали корм и пили воду, отклонений физиологических функций не отмечалось.

Достоверных изменений массы тела собак и кошек в первых, вторых и контрольных группах через 10 и 30 дней эксперимента не было установлено. Температура тела собак и кошек подопытных и контрольных групп находилась в пределах физиологической нормы для данного вида и возраста до и после применения препаратов.

Гематологические и биохимические показатели крови, а также урологические показатели у опытных и контрольных групп достоверно не отличались и находились в пределах физиологической нормы до и после применения препарата.

2.2.1.7. Определение скорости наступления состояния нокдауна и высоты подъема клещей по обработанной ткани препаратами для собак и для кошек

В результате было установлено, что время от момента пересечения паразитами нижней черты участка, обработанного препаратами, до их отпадения составляло: у препарата, предназначенного для собак, - от 0,38 до 4,40 минут, для кошек - от 0,45 до 3,11 минут, соответственно среднее значение времени наступления состояния нокдауна Тер.: 2,16±0,23 и 2,03±0,23 минут. При этом максимальная высота подъема клещей по тесту с препаратом для собак была от 8 до 38 см, среднее значение Нср. 21,4±2,16 см, для кошек - от 14 до 41 см и 25,2±2,3 см.

Кроме этого, следует указать и показатель Тш - время прохождения клещом обработанной поверхности, он составлял в среднем у препарата для собак 40,4±2,88 сек., у препарата для кошек - 37,8±2,99 сек., в контрольной группе - до 20 секунд.

Время отпадения паразитов с контрольного теста было более 10 минут, при этом высота подъема клеща по тесту была максимальной - до конца ленты.

Таким образом, тестируемые препараты обладают выраженным нокдаун-эффектом.

2.2.1.8. Изучение репеллентных свойств препаратов для собак и для кошек

В 1-е и 5-е сутки после обработки животных насекомые кружились вокруг них, но не садились. На контрольных собак в Московском регионе садилось в среднем 25 комаров и 31 - в Нижегородской области. На контрольных кошек - 22 и 26 комаров соответственно. На 7-е сутки эксперимента насекомые садились на поверхность животных, но не кусали (не присасывались) и через 5-10 секунд улетали. Контрольные животные подвергались нападению комаров. Следует отметить, что на 10-е и 15-е сутки комары садились и присасывались как на опытных, так и на контрольных собак и кошек. Таким образом, препараты проявляют репеллентное действие в течение 7 суток после обработки животных.

2.2.1.9. Изучение терапевтической эффективности препарата «РольфКлуб 3D капли для собак»

Вышеуказанными методами диагностики для обработки было выделено 95 собак, пораженных блохами, вшами и власоедами, 50 собак, пораженных клещами Sarcoptes scabiei var. Canis и 22 собаки, пораженных Otodectes cynotis. 40 собак обработано в профилактических целях от энтомозов и иксодидозов.

При энтомозах и профилактике препарат наносили в места, недоступные для слизывания - в области шеи, у основания черепа или между лопатками, в дозах 0,5 мл/4 кг; 1 мл/4-10 кг; 1,5 мл/10-20 кг; 2,5 мл/20-40 кг; 4 мл/40-60 кг массы животных. При обработке крупных собак массой более 60 кг препарат дозировали из расчета 0,125 мл/кг, нанося препарат на кожу в 3-4 места точечно вдоль позвоночника.

При отодектозе перед обработкой у собак предварительно очищали ушные раковины от чешуек, корок и экссудата при помощи ватного тампона, смоченного препаратом. В каждую ушную раковину больным животным с внутренней стороны закапывали по 1-3 капли относительно веса с последующим легким массажем, сложив ушную раковину пополам. Обработку проводили 2-3-х кратно с интервалом 7 дней.

При саркоптозе препарат наносили накожно на пораженные участки с захватом по периферии до 1-2 см здоровой кожи в дозе 0,15 мл/кг массы тела. Перед обработкой у животных предварительно очищали очаги поражений от корочек и струпьев. Обработку проводили 2-3-х кратно, с интервалом 7 дней.

При применении препарата у собак не было отмечено каких-либо побочных явлений и осложнений.

Через 24 часа и в течение 60 суток после обработки собак провели обследование и установили, что у животных при клиническом осмотре живых блох, вшей и власоедов не обнаружено, а также не отмечено наличие иксодовых клещей.

Через 10 суток после обработки собак, пораженных клещами Sarcoptes scabiei var. Canis и Otodectes cynotis, при микроскопическом исследовании были обнаружены единичные клещи, деформированные личинки и яйца. Клиническая картина заболеваний сохранялась .Через 30 суток после применения капель были проведены повторные клинические и микроскопические исследования, по результатам которых установлено, что все обработанные животные выздоровели. Не отмечено также повторного поражения собак клещами в течение 60 суток.

2.2.1.10. Изучение терапевтической эффективности препарата «РольфКлуб 3D капли для кошек»

Для проведения эксперимента было выделено 79 кошек, пораженных блохами и власоедами, 77 кошек, пораженных клещами Otodectes cynotis и 26 кошек, пораженных Notoedres cati. 45 кошек было обработано в профилактических целях.

При энтомозах (поражении блохами и власоедами) и профилактике препарат применяли животным путем капельного нанесения на сухую неповрежденную кожу, раздвинув шерсть, наносили в места, недоступные для слизывания - в области шеи, у основания черепа или между лопатками в дозах 0,5 мл/4 кг; 0,8 мл/4-8 кг массы животного. При обработке крупных кошек (свыше 8 кг) препарат наносили из расчета 0,125 мл/кг.

При отодектозе (ушной чесотке) наружный слуховой проход очищали от струпьев и корок, затем закапывали в каждое ухо по 1 -3 капли препарата (в зависимости от размера животного). Ушную раковину складывали вдоль пополам и массировали се основание. Обработку повторяли 2-3 раза с интервалом 7 дней. Препарат вводили в оба уха.

При нотоэдрозе препарат наносили на пораженные участки и распределяли кончиками пальцев в перчатке с захватом до 1 см здоровой кожи в дозе 0,15 мл/кг. В случае обширных участков поражения, дозу увеличивали в 2 раза. Обработку проводили двукратно, с интервалом 7 дней.

После обработки животных вели ежедневное наблюдение: учитывали общее состояние, прием корма и воды, поведение, осматривали кожный покров, а через 1, 7, 14, 30 и 60 суток повторно проводили клинический осмотр кожного покрова.

При применении препарата у кошек не отмечено каких-либо побочных явлений и осложнений.

Через 24 часа и в течение 60 суток суток после обработки кошек провели обследование и установили, что у животных при клиническом осмотре живых блох, власоедов и иксодовых клещей не обнаружено.

При обследовании кошек, пораженных клещами Otodectes cynotis и Notoedres cati, через 14 и 30 суток после применения капель установлено, что все обработанные животные выздоровели. Не отмечено также повторного поражения кошек в течение 60 суток.

2.2.1.11. Изучение терапевтической эффективности препарата «РольфКлуб 3D спрей для собак»

Было подобрано и обработано: 60 собак пораженных блохами, 16 -вшами и 11 - власоедами; у 69 собак отмечено наличие иксодовых клещей; 32, пораженных Sarcoptes scabiei var. canis в средней и в сильной степени; 25 собак, пораженных Otodectes cynotis, и 12 собак, зараженных Demodex canis в негенерализованной форме. Также в профилактических целях было обработано 75 собак.

После постановки диагноза препарат применяли путем распыления на сухую неповрежденную кожу. Доза препарата в зависимости от состояния шерстного покрова составляла 1,5 - 3,0 мл на 1 кг массы животного. Для уничтожения иксодовых клещей на теле животных препарат наносили на паразита и место его прикрепления к коже (одно нажатие на распылительную головку). Для лечения отодектоза на внутреннюю поверхность ушной раковины, осуществляли 1 нажатие на распылительную головку. Обработку повторяли 2-3 раза с интервалом 7-10 дней. Обрабатывали обязательно оба уха, даже в случае поражения отодектозом только одного. Для лечения саркоптоза и демодекоза препарат наносили на предварительно очищенные от струпьев пораженные участки тела с захватом пограничной здоровой кожи до 1 см, из расчета 1 мл на 10 см2 пораженного участка тела животного. Обработки проводили 4 раза с интервалом 7-10 дней. Собак с обширными участками поражения при саркоптозе обрабатывали в два приема с интервалом 1 день, нанося препарат на пораженные места сначала одной, а затем другой половины тела.

Через 2 и 7 суток после обработки у животных при клиническом осмотре живых блох, вшей, власоедов и иксодовых клещей не обнаружено. Через 14, 30 суток после применения препарата установлено, что все обработанные животные были свободны от эктопаразитов, что подтверждено клиническими и микроскопическими исследованиями. Кроме этого, не было отмечено повторного поражения собак блохами, вшами и власоедами в течение 90 суток, иксодовыми клещами - 30. Также наблюдалось активное защитное (репеллентное) действие препарата от нападения летающими кровососущими насекомыми в течение 10 суток.

2.2.1.12. Изучение терапевтической эффективности препарата «РольфКлуб 3D спрей для кошек»

Всего было обработано: 52 кошки пораженных блохами и 14 -власоедами; у 18 - кошек отмечено наличие иксодовых клещей; 34, пораженных Notoedres cati в средней и в сильной степени; 60 кошек, пораженных Otodectes cynotis.

Препарат применяли путем распыления на сухую неповрежденную кожу в дозе 1,5 - 3,0 мл на 1 кг массы животного аналогично препарату для собак при отодектозе и саркоптозе. При применении препарата у кошек не отмечено каких-либо побочных явлений и осложнений.

Через 2 и 7 суток после обработки живых блох, власоедов и иксодовых клещей не обнаружено. Через 14, 30 суток после применения препарата установлено, что все обработанные кошки были свободны о г эктопаразитов, что подтверждалось клиническими и микроскопическими исследованиями. Кроме этого, не было отмечено повторного поражения животных энтомозами в течение 90 суток, иксодовыми клещами в течение 60 суток, а также наблюдалось активное защитное (репеллентное) действие препарата от нападения летающими кровососущими насекомыми в течение 10 суток.

2.2.2. Совершенствование системы противопаразитариых мероприятий при гельминтозах плотоядных

2.2.2.1. Изучение терапевтической эффективности препарата «Гельминтал С» при нематодозах и цестодозах собак

В опыт было подобрано 61 животное, зараженные кишечными нематодами (Toxocara canis - 17 собак, Toxascaris leonina - 14, Trichuris vulpis

- 4, Uncinaria stenocephala - 3) и цестодами (Dipylidium caninum - 13, Taenia spp. — 3), со смешанной инвазией (Dipylidium caninum + Toxocara canis - 7).

Препарат применяли после постановки диагноза. Средство наносили капельно («spot-on») на сухую неповрежденную кожу в местах, недоступных для слизывания - между лопатками, в область шеи, у основания черепа, при обработке крупных собак капли наносили в 3 - 4 точки вдоль позвоночника. Препарат применяли в дозе 0,1 мл/кг массы животного. Лекарственное средство использовали однократно. При применении препарата у животных не отмечено каких-либо побочных явлений и осложнений.

По результатам гельминтологических исследований на 10 и 20 дни после использования препарата все собаки были свободны от паразитов всех указанных видов.

2.2.2.2. Изучение терапевтической эффективности препарата «Гельминтал К» при нематодозах и цестодозах кошек

Для проведения опыта было подобрано 55 животных, зараженные кишечными нематодами (Toxocara cati - 15 кошек, Toxascaris leonina - 16, Uncinaria stenocephala - 3) и цестодами (Dipylidium caninum - 13, Taenia spp.

- 2), а так же со смешанной инвазией (Dipylidium caninum + Toxocara cati — 6).

Средство наносили капельно («spot-on») на сухую неповрежденную кожу в места, недоступные для слизывания - между лопатками, в область шеи, у основания черепа. Препарат применяли в дозе ОД мл/кг массы животного. Лекарственное средство использовали однократно. При применении препарата у животных не отмечено каких-либо побочных явлений и осложнений.

На 10 и 20 дни после использования препарата все кошки были свободны от паразитов всех указанных видов.

выводы

1. ЛД50 препаратов РольфКлуб 3D капли для собак и для кошек при введении в желудок мышам составила: препарата для собак 600±120 мг/кг. препарата для кошек - 720±150 мг/кг. ЛД50 препарата для собак при накожном нанесении для крыс составила 3100 мг/кг, препарата для кошек - 3200 мг/кг. С учетом установленных значений LDS0, согласно общепринятой гигиенической классификации (ГОСТ 12.1.007-76) препараты относятся к 3-му классу опасное! и при введении внутрь и к 4-му классу опасности при накожном применении.

2. Препарат «Рольфклуб 3D капли» не обладает раздражающим действием на кожу крыс. В подостром опыте показал, что доза 310 мг/кг являются - токсичной, доза 155 мг/кг - пороговой, доза 62 мг кг - не действующей. При 20-ти кратной накожной сенсибилизации не вызывает аллергенной активности организма животных.

3. В исследованиях влияния препаратов «РольфКлуб 3D капли» для собак и для кошек на организм было определено, что при пятидневном накожном нанесении животным препаратов в терапевтической и трехкратно увеличенных дозах, не отмечено статистически достоверных изменений в физиологическом состоянии, морфологических и биохимических показателях крови и физико-химических показателях мочи.

4. Препараты «Рольфклуб 3D капли для собак» и «Рольфклуб 3D капли для кошек» обладают выраженным нокдаун-эффектом. Время наступления состояния нокдауна (Т, минут) составляет: у препарата для собак 2,16±0,23, для кошек - 2,03±0,23 минут при средней высоте подъема Нср. соответственно 21,4±2,16 и 25,2±2,3 см.

5. Препараты «Рольфклуб 3D капли для собак» и «Рольфклуб 3D капли для кошек» обладают репелентным действием. Их репеллентная активность при обработке животных сохраняется в течение 7 суток.

6. Эффективность препаратов «Рольфклуб 3D капли для собак» и «Рольфклуб 3D капли для кошек» при арахноэнтомозах в экспериментах составила 100%. Не отмечено повторного поражения животных энтомозами и акарозами в течение 60 суток.

7. Эффективность препаратов «РольфКлуб 3D спрей для собак» и «РольфКлуб 3D спрей для кошек» при арахноэнтомозах в экспериментах составила 100%. Не отмечено повторного поражения животных возбудителями энтомозов в течение 90 суток и иксодидозов - 30, также препарат показал активное защитное (репеллентное) действие от нападения летающими кровососущими насекомыми в течение 10 суток.

8. В результате клинических испытаний была получена высокая эффективность (100%) антигельминтных средств «Гельминтал К» и «Гельминтал С» при нематодозах и цестодозах собак и кошек, а также не имели негативного влияния на организм животных.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Паразитозы собак и кошек широко распространены в Московском регионе, следовательно, необходимо проводить регулярные обработки и дегельминтизацию животных.

Для борьбы с эктопаразитозами собак и кошек рекомендуем применять препараты «Ральфклуб ЗО» в виде капель и спрея для собак и кошек; для дегельминтизации «Гельминтал К» и «Гельминтал С» при нематодозах и цестодозах собак и кошек.

Инструкция по применению РольфКлуб ЗО капли для борьбы с эктопаразитами собак (утв. Россельхознадзором 14.05.14 г.32-3-3.14-1974 ПВР-3-3.14/03026).

Инструкция по применению РольфКлуб ЗП капли для борьбы с эктопаразитами кошек (утв. Россельхознадзором 14.05.14 г.32-3-3.14-1975 ПВР -3-3.14/03027).

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1.* Арисов, М.В. Фармако-токсикологическая оценка новых инсектоакарицидных препаратов РольфКлуб 3D для собак и для кошек / М.В. Арисов, В.А. Степанов, Е.С. Смирнова // Ветеринария. - 2014. - № 9. - С.31-33.

2.* Арисов, М.В. Токсикологическая оценка и инсектоакарицидная эффективность препаратов «РольфКлуб 3D спрей для собак» и «РольфКлуб 3D спрей для кошек» / М.В. Арисов, В.А. Степанов, Е.С. Смирнова // Российский паразитологический журнал. - 2014. - №3. - С. 112-117.

3.* Арисов, М.В. Фармако-токсикологическая оценка комплексного противопаразитарного препарата для собак и кошек / М.В. Арисов, В.А. Степанов, Е.С. Смирнова // Российский ветеринарный журнал — мелкие домашние и дикие животные. - 2014. - №4. - С. 36-39.

4.* Арисов, М.В. Изучение скорости наступления состояния нокдауна, высоты подъема иксодовых клещей по обработанной ткани препаратами «Рольф клуб 3D капли для собак» и «Рольф клуб 3D капли для кошек» / М.В. Арисов, В.А. Степанов // Российский паразитологический журнал. - 2014. -№3.-С. 86-90.

5.* Арисов, М.В. Изучение репеллентной активности препаратов «Рольф клуб 3D капли для собак» и «Рольф клуб 3D капли для кошек» по отношению к кровососущим двукрылым насекомым / М.В. Арисов, В.А. Степанов // Российский паразитологический журнал. - 2014. - № 4. - С. 102104.

6.* Арисов, М.В. Антигельминтная эффективность препаратов «Гельминтал С» и «Гельминтал К» «SPOT-ON»: миф или реальность / М.В. Арисов, E.H. Индюхова, В.А. Степанов // Ветеринарный врач. - Казань. -2014,-№6.-С. 44-47.

7. Степанов, В.А. Изучение терапевтической эффективности препаратов «РольфКлуб 3D спрей для собак» и «РольфКлуб 3D спрей для кошек» / В.А. Степанов // Сб. мат. научи, конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». - М. 2015 г. - Вып. 16 - С. 342.

8. Арисов, М.В. Защитные показатели эффективности новых инсекггоакарицидных препаратов «РольфКлуб 3D капли для собак» и «РольфКлуб 3D капли для кошек» / М.В. Арисов, В.А. Степанов, E.H. Индюхова // тезисы секция ветеринарная медицина: Тез. докл. «Научная индустрия европейского континента» 27 ноября-05 декабря. - 2014. - Vol. 16. -Praha.-C. 87-90.

*- Публикации в изданиях, включенных в перечень ВАК РФ

Подписано в печать:

29.01.2015

Заказ ЛЪ 10515 Тираж - 80 экз. Печать трафаретная. Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш., 36 (499) 788-78-56 www.autoreferat.ru