Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Фармако-токсикологическая оценка и применение филомеда при филометроидозе карпа

ВАК РФ 06.02.03, Звероводство и охотоведение

Автореферат диссертации по теме "Фармако-токсикологическая оценка и применение филомеда при филометроидозе карпа"

004618303 На правах рукописи

УРАЗАЕВА РЕНАТА ДМИТРИЕВНА

Фармако - токсикологическая оценка и применение филомеда при филометроидозе карпа

06.02.03 - ветеринарная фармакология с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук

2 3

Воронеж 2010

004618808

Работа выполнена в лаборатории токсикологии и санитарии кормов ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии» РАСХН

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор Дорожкин Василий Иванович

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук Востроилова Галина Анатольевна

доктор ветеринарных наук, профессор Беспалова Надегеда Сергеевна

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Российский университет дружбы

народов» (РУДЫ)

Защита диссертации состоится «24» декабря 2010 г. в 1300 часов на заседании диссертационного совета ДМ 006.004.01 при ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии» по адресу: 394087, г. Воронеж, ул. Ломоносова, 1146.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ ВНИВИПФиТ. Автореферат разослан ноября 2010 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Т.И.Ермакова

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Россия - страна, имеющая огромные территории, обладает большой площадью внутренних водоемов. Развитие аквакультуры, в целом, и прудового рыбоводства, в частности, является важной составной частью животноводства нашей страны. Рыба - ценный пищевой продукт, являющийся важным источником протеина животного происхождения. Белки рыбы легко усваиваются, а аминокислотный состав свидетельствует об их полноценности. Витаминный и минеральный состав мяса рыбы часто богаче и разнообразнее, чем у других видов животных. Общее содержание минеральных веществ в рыбе примерно в 1,5 раза выше, чем в мясе млекопитающих. Низкое содержание жира делает рыбу ценным диетическим продуктом (Шерман И. М., Чижик А. К., 1989; Друковский С.Г., 2006).

В настоящее время потребность в рыбе и рыбопродуктах очень высока. С ростом спроса на рыбную продукцию появилось большое количество частных рыбоводных прудов и садковых хозяйств, значительный прирост поголовья рыбы обеспечили комбинаты и рыбозаводы. Восприимчивость рыбы к инфекционным и инвазионным заболеваниям является одним из важнейших биологических факторов, нарушающих нормальное течение рыбоводного процесса. Заболеваемости рыбы способствуют плотные посадки, некачественный корм, низкое содержание кислорода, неблагоприятные температура или рН воды, накопление продуктов метаболизма. Распространение инфекционных и инвазионных заболеваний во многом зависит от нарушений технологии и ветеринарно-санитарных правил при разведении и выращивании рыб (Бауэр О.Н., 1959; Привезенцев Ю.А., Власов В .А., 2004; Козлов В.И. и др., 2006).

Для прудовых хозяйств центральных и южных регионов России, выращивающих товарного карпа, актуальной проблемой является гельминтозное заболевание филометроидоз (Висманис К.О., 1967; Головина Н.А. и др., 2003; Акбаев М.Ш. и др., 2008; Шерман И. М. и др., 1989). По данным Сапожникова Г.И. (2001) заболевание установлено в 17 (19,1%) регионах. По данным ФГУ «Центр ветеринарии» в 2006 г. по филометроидозу было неблагополучно 28 пунктов (Борисова М.Н., Скачков Д.П., 2009). В 2008 году в общей структуре инвазионной патологии филометроидоз составил 12% (Завьялова Е.А., 2009; Мамонтов Ю.П., 2010). Зараженная рыба не представляет угрозы здоровью и жизни человека, но наносит большой экономический ущерб рыбоводному предприятию - рыба истощена, отстает в росте и развитии, теряет до 30 % массы и часто гибнет. Половозрелые нематоды, имеющие красный цвет и достигающие 15 см в длину, локализуются в чешуйных кармашках, из-за чего рыба теряет товарный вид и выбраковывается (Борисова М.Н., 1988).

Несмотря на актуальность проблемы филометроидоза карпа, в настоящее время на Российском рынке ощущается недостаток современных лечебно-профилактических средств, предназначенных для борьбы с данным заболеванием. Поэтому важное значение приобретает создание новых

эффективных препаратов, способных воздействовать на различные стадии развитая нематод.

Пели и задачи исследований. Целью настоящей работы является разработка нового лекарственного средства для лечения филометроидоза карпа и оценка его фармако-токсикологических свойств.

Дня достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Исходя из литературных данных и скрининговых испытаний, выбрать эффективное и безопасное действующее вещество, на основе которого разработать препарат для лечения филометроидоза карпа.

2. Определить токсикологические параметры нового препарата.

3. Определить оптимальные терапевтические дозы и схемы применения препарата.

4. Определить параметры фармакокинетики, в том числе остаточные количества.

5. Провести ветеринарно-санитарную оценку рыбы, получавшей препарат.

Научная новизна работы. Впервые проведены скрининговые испытания ивермектина, эммамектина бензоата и левамизола гидрохлорида на рыбе в плане их безвредности и эффективности при филометроидозе. На основе выбранного, наиболее эффективного действующего вещества - левамизола гидрохлорида, разработан препарат филомед. Проведены комплексные фармако-токсикологические исследования нового препарата, включающие определение параметров общей токсичности и фармакокинетики. Определены оптимальные лечебные дозы препарата при филометроидозе карпа, проведена ветеринарно-санитарная оценка рыбы, подвергнутой обработке филомедом, и рассчитана экономическая эффективность ветеринарных мероприятий.

Теоретическая и практическая ценность работы. В результате проведенных исследований теоретически обоснована и практически подтверждена возможность безопасного использования филомеда в качестве лекарственного средства для лечения карпа при филометроидозе. Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

- выбор действующего вещества и разработка препарата для лечения филометроидоза карпа;

- изучение токсичности филомеда на лабораторных животных и карпе;

- определение параметров фармакокинетики филомеда, в том числе остаточных количеств;

- определение оптимальных доз и изучение эффективности филомеда при филометроидозе карпа;

- ветеринарно-санитарная оценка рыбы после применения препарата. Апробация результатов исследований. Основные результаты работы

доложены и обсуждены на международной научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Вопросы ветеринарии и биотехнологии» ФГОУ ВПО МГАВМиБ, Москва, 2009 г; VII Международной научно - практической конференции «Аквариум, как

средство познания мира», Москва, 2010 г.; LXIV научной конференции молодых ученых и студентов СПбГАВМ, Санкт-Петербург, 2010г.; Международной конференции в рамках выставки «Золотая осень 2010» «Развитие сельскохозяйственного рыбоводства в Российской Федерации», Москва, 2010 г.

Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 4 научные работы, в том числе 2 в изданиях, рекомендованных ВАК РФ, в которых изложены основные положения и выводы по изучаемой проблеме.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 146 страницах и состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения, список литературы, приложения. В диссертации 35 таблиц, 12 графиков и 13 рисунков. Всего использовано 166 литературных источников, в том числе 26 зарубежных авторов.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы исследований

Работа проводилась в 2008 - 2010 годах в лаборатории токсикологии и санитарии кормов Всероссийского научно-исследовательского института ветеринарной санитарии, гигиены и экологии, на базе научно -внедренческого центра «Агроветзащита», рыбоводных хозяйств ООО «Рыбколхоз им. И.В. Абрамова» (Ростовская область), ООО «Слободская сагва» (Ростовская область), ООО «РыбИнвестАгро» (Ростовская область), ООО «Ихтис» (Ростовская область), ЗАО «Егорьевский рыбокомбинат» (Московская область), ООО «Рыбколхоз Полдеревский» (Нижегородская область), ООО «РП№1» (Ставропольский край), сотрудникам которых выражаем искреннюю благодарность за организационно - техническое содействие.

Материалом для исследований служили вещества, обладающие нематодоцидным действием: левамизола гидрохлорид, эммамектина бензоат и ивермектин, которые были использованы в скрининговых опытах по выявлению их острой токсичности и эффективности при филометроидозе карпа. На основании полученных результатов исследований было выбрано действующее вещество для разработки препарата филомед, который изучали с точки зрения его фармако - токсикологических свойств.

В экспериментальной части работы было использовано 107 белых беспородных мышей массой 18 -20 г, 309 белых крыс массой тела 180-220 г и 850597 экз. карпа (Cyprinus carpió) различных возрастных групп (сеголетки от 50 до 250 г и товарная рыба от 800 г до 1, 5 кг).

Группы животных разных видов (мыши, крысы и рыбы) подбирались по принципу аналогов. Работа проводилась с соблюдением правил,

предусмотренных Европейской комиссией по надзору за проведением лабораторных и других опытов с участием экспериментальных животных разных видов.

При изучении острой токсичности определяли переносимые, токсические и летальные дозы фармакологических веществ, причины наступления гибели животных.

Изучаемые препараты вводили per os с помощью зонда (шприц с оливой на игле), дробно, натощак, непосредственно в желудок мышам и крысам или в пищевод карпу. В течение 14 дней после введения препаратов осуществлялось наблюдение за состоянием животных. Выживших животных в конце опыта убивали и подвергали патологоанатомическим исследованиям.

Смертельную концентрацию испытуемого вещества (левамизола гидрохлорида) определяли по общепринятым в водной токсикологии методам определения токсичности растворенных в воде веществ для рыб (Лукьяненко В.И., 1967).

Параметры острой токсичности рассчитывали методом пробит -анализа по Литчфилду и Уилкоксону (1949) в модификации 3. Рота и математическим методом Кербера (Беленький M.JL, 1963).

Результаты опытов по определению параметров острой токсичности оценивали в соответствии с общепринятой классификацией химических веществ по степени опасности (ГОСТ 12.1.007.76), смертельную концентрацию оценивали в соответствии с классификацией Дон-Херти (1951).

Местное (пререзорбтивное) действие филомеда изучали на клинически здоровых беспородных белых крысах и мышах массой тела 180-220 г и 18-20 г, соответственно, обоего пола. Сенсибилизацию проводили многократными аппликациями в течение 10 дней.

При исследовании местного действия, филомед вносили однократно в конъюнктивный мешок мышей и крыс. Влияние препарата учитывали трижды: через 5 минут, спустя 24 и 48 ч.

Кожно-резорбтивное действие филомеда определяли методом погружения хвоста (пробирочным методом). Погружение хвоста проводили ежедневно в течение 10 дней на 2/3 длины в суспензию препарата. В течение последующих 14 дней за животными вели постоянное клиническое наблюдение.

Определение параметров субхронической токсичности филомеда проводили на крысах и карпе по методу Лима и соавторов (1961). Во время экспериментов опытных и контрольных животных, используемых для оценки субхронической токсичности, подвергали комплексным клиническим, патоморфопогическим и гистологическим исследованиям. Степень кумуляции оценивали в соответствии с классификацией Л.М.Медведя (1964).

Хроническую токсичность филомеда изучали на белых крысах обоего пола массой тела 180-220 г и на карпе массой тела 100±10 г. На протяжении всего опыта (30 дней) животные находились под систематическим ежедневным наблюдением. Учитывалось клиническое состояние животных,

аппетит, состояние покровных тканей. Проводились гематологические и биохимические исследования по общепринятым методам. Кровь у крыс и рыб брали натощак. Кровь у рыб брали из хвостовой артерии с помощью шприца. Животных, убитых в конце эксперимента, подвергали патологоанатомическим исследованиям.

Д.Г. Розин (1964) разработал методику оценки детоксицирующей функции печени, в основе которой лежит изменение продолжительности наркотического сна. Наркоз животных вызывали 2% раствором гексенала. Гексенал инъецировали через 1, 4, 8 и 24 часа после введения животным филомеда. Регистрировали в минутах время наступления наркотического сна (боковое положение) и выхода из наркоза (возвращение в исходное положение).

Для определения динамики изменения концентрации левамизола гидрохлорида в крови рыб, получивших филомед, использовали метод жидкостной хроматографии высокого давления с ультрафиолетовым детектированием. Кровь у рыб брали до введения препарата, далее по прошествии 3, 6,12,24,48 и 72 часов после обработки.

Определение остаточных количеств левамизола гидрохлорида в мышечной ткани карпа проводили на 3,5,7 и 9 сутки после введения в их организм филомеда с кормом. В опыте использовали по 5 карпов на каждый срок отбора проб.

Изучение эффективности филомеда проводили в два этапа. Вначале определяли оптимальную терапевтическую дозу и схему применения при филометроидозе карпа на небольшом поголовье рыб на базе рыбоводного хозяйства «Рыбхолхоз им. И.В.Абрамова» (Ростовская область). Для этого было сформировано 7 групп по 25 рыб в каждой. Рыб помещали в разгороженные сеткой бассейны. Препарат в составе 2% крахмального геля с помощью катетера вводили рыбе в пищевод в различных дозах и с различной кратностью. Контрольной группе вводили 2% крахмальный гель в аналогичном объеме.

Далее проводили испытания препарата в условиях производства в рыбоводческих хозяйствах. Объектом исследования служили спонтанно инвазированные филометроидозом карпы (Cyprinus carpió) различных возрастных групп и различной массы тела. Предварительно проводили вскрытие 20 - 25 экз. карпа для определения нахождения нематод в плавательном пузыре и в чешуйных кармашках рыб.

Препарат задавали рыбе в дозе 500 мг/кг ихтиомассы двукратно с интервалом 24 часа в составе кормолекарственной смеси методом вольного группового скармливания без предварительной голодной диеты согласно технологии кормления, используемой в хозяйстве.

В течение последующих шести - десяти дней после дачи препарата при контрольном облове вели наблюдение за состоянием животных. В конце опыта рыб убивали и подвергали патологоанатомическому исследованию. Фармакологическую активность препарата учитывали по количеству живых и мертвых особей гельминта в чешуйных кармашках и в плавательном

пузыре у контрольных и подопытных рыб. Учет эффективности препарата проводили с расчетом экстенс- и интенсэффективности.

Ветеринарно - санитарную оценку рыб подопытных и контрольных групп проводили в лаборатории Семикаракорской районной СББЖ Ростовской области в соответствии с правилами проведения ветеринарно-санитарной экспертизы пресноводной рыбы. Для определения доброкачественности рыбы были проведены органолептические, физико-химические (ГОСТ 7631 - 2008) и микробиологические исследования.

Экономическую эффективность применения филомеда для лечения филометроидоза карповых рыб рассчитывали в соответствии с «Методикой определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий».

Полученные цифровые данные подвергали обработке методами математической статистики, принятой в биологии и медицине (Лакин Г.Ф., 1990) с использованием программы ВюбШ1. Достоверность различия средних показателей по группам оценивали на основании критерия Стьюдента. Результаты считали достоверными при уровне вероятности р<0,05.

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 2.2.1. Разработка филомеда

На основании анализа литературных данных в скрининговые опыты были взяты три вещества, обладающие антигельминтной активностью по отношению к нематодам: эммамектина бензоат, ивермектин и левамизола гидрохлорид. Определялись и сравнивались параметры острой токсичности выбранных веществ и эффективность против гельминтов при естественном заражении рыб филометроидозом. Результаты экспериментов представлены в таблице 1.

Таблица 1

Острая токсичность и эффективность различных антигельминтных веществ

Действующее вещество Токсичность, мг/кг Группа Доза, мг/кг м.т. Кол-во рыб в группе Кол-во вылеченных рыб, через

1Ао ЬОюо 3 дня 6 дней

Эммамектина бензоат 33 39 1 13 10 0 0

Эммамектина бензоат 2 23 10 0 0

Эммамектина бензоат 3 33 10 0 0

Ивермектин 1.35 1.87 4 0,7 10 0 0

Ивермектин 5 0,9 10 0 0

Ивермектин 6 1,3 10 0 0

Левамизола гидрохлорид 588 1005 7 200 10 5 10

Левамизола гидрохлорид 8 300 10 6 10

Левамизола гидрохлорид 9 550 10 10 10

Установлено, что эммамектина бензоат и ивермектин являются высокотоксичными соединениями для рыб, в испытанных дозах данные соединения не вызывали гибели нематод. Левамизола гидрохлорид имеет выраженное антигельминтное действие при филометроидозе карпа. Так уже через 3 дня после введения вещества в дозе 200 мг/кг массы тела отмечалось освобождение 50% рыб от гельминтов, а через 6 дней гельминтов не обнаруживали.

На основании результатов, полученных в ходе скрининговых экспериментов, в качестве действующего вещества для нового препарата был выбран левамизола гидрохлорид, как наиболее безвредное и эффективное средство из апробированных.

С использованием выбранного в ходе предыдущих экспериментов действующего вещества была разработана лекарственная форма филомеда, представляющая собой порошок. 1 г препарата содержит 200 мг действующего вещества левамизола гидрохлорида.

Органолептические, физико-химические и биологические показатели филомеда должны соответствовать требованиям и нормам, указанным в таблице 2.

Таблица 2

Физико-химические свойства филомеда_

Наименование показателя Характеристика и норма

Внешний вид Однородный порошок

Цвет От желтого до светло-коричневого

Подлинность левамизола гидрохлорида Должен выдержать испытание

Массовая доля левамизола гидрохлорида, % 20,0 ±2,0

Массовая доля влаги, %, не более 15,0

Испытание на токсичность в тест-дозе Должен выдержать испытание

Микробиологическая чистота Должен выдержать испытание

2.2.2. Результаты изучения токсичности 2.2.2.1. Результаты изучения острой токсичности

Оценку острой токсичности филомеда проводили на белых беспородных мышах, крысах и рыбе. В ходе экспериментов определяли параметры острой токсичности, значимые дозы, проводили систематические клинические и патологоанатомические исследования. Результаты экспериментов представлены в таблице 3.

Таблица 3

Результаты изучения острой токсичности филомеда при оральном введении

Вид животного ЫЭо, мг/кг 1ЛЭ16, мг/кг Ц^о, мг/кг 1А4, мг/кг ЫЭюо, мг/кг

Мыши 2500 2716 3040 3365 3500

Крысы 1969 2254 2671 3089 3374

Карп 2500 2702 3000 3297 3446

Клиническая картина отравления лабораторных животных (крыс, мышей) после введения больших доз препарата была сходна и проявлялась развитием общего угнетения. Животные сидели с полуприкрытыми глазами, сбившись в кучку. Реакция на внешние раздражители слабо выражена. Аппетит отсутствовал. Дефекация у животных учащалась. В таком состоянии животные находились несколько часов, постепенно клинические признаки интоксикации ослабевали и полностью исчезали через сутки. После введения препарата в смертельных дозах общее состояние животных значительно ухудшалось. Гибель крыс и мышей наступала по прошествии нескольких часов.

У рыб картина отравления характеризовалась хаотичными плавательными движениями, прогрессирующим расстройством равновесия и гибелью в течение 15 минут - 1 часа. У выживших карпов возбуждение сменялась угнетением через 30-40 мин. Рыба ложилась на дно и слабо реагировала на внешние раздражители. Отмечались незначительные кровоизлияния в белковую оболочку глаз. Через 24 часа двигательная активность восстанавливалась и рыба выздоравливала в течение нескольких суток.

Проведенное патологоанатомическое вскрытие павших животных показало сильную воспалительную реакцию внутренних органов. Желудок вздут и наполнен препаратом. Кишечник у животных гиперемирован, имеет вздутия. Селезенка увеличена.

Филомед, согласно общепринятой классификации химических соединений по степени опасности, может быть отнесен к 3 классу (умеренно опасные соединения - ГОСТ 12.1.007 - 76).

2.2.2.1.2. Определение смертельной концентрации левамизола

Определить параметры смертельной концентрации препарата филомед не представляется возможным, так как он не растворяется в воде, поэтому определяли параметры смертельной концентрации для действующего вещества, входящего в состав препарата - левамизола гидрохлорида (таблица 4).

Таблица 4

Параметры смертельной концентрации левамизола гидрохлорида для карпа

Вид животного СК0, мг/л CKj6, мг/л СКзо, мг/л ск84, мг/л CKioo, мг/л

Карп 27,5 30,24 37,32 44,40 45,0

При концентрации изучаемого препарата в воде до 27,5 мг/л признаков токсикоза отмечено не было. При более высоких концентрациях вещества в воде отмечались симптомы отравления, которые усиливались в соответствии с количеством вводимого вещества. Клиническая картина токсикоза при введении препарата в концентрации большей СК5о заключалась в быстром хаотичном плавании, прогрессирующем расстройстве равновесия и гибели рыб в течение 15-30 минут. При введении среднелетальной и более низкой дозы препарата наблюдали сходную картину. Часть рыб погибала. У выживших возбуждение через 30-40 мин сменялась угнетением. Рыбы ложились на дно и практически не проявляли признаков жизни. Отмечали незначительные кровоизлияния в белковую оболочку глаз. Через 24 часа двигательная активность восстанавливалась и рыба выздоравливала в течение нескольких суток. Реакция рыб на внешние раздражители восстанавливалась.

По общепринятой классификации растворенных в воде веществ левамизола гидрохлорид может быть отнесен к сильно токсичным веществам. Однако, потенциальную опасность отравления рыб при применении препарата филомед можно определить исходя из следующих расчетов. Средняя плотность посадки рыб в рыбоводных прудах - 800 кг/га, рекомендуемая доза препарата по действующему веществу составляет 100 мг/кг ихтиомассы. При двукратном применении будет внесено 160 г левамизола (800 кг х 200 мг). Даже если предположить, что весь левамизол выделится в неизмененном виде в водоем, его концентрация составит 0,01 мг/л, что в 2000 раз меньше, чем доза, вызывающая смерть рыбы.

2.2.2.2. Результаты изучения местного раздражающего и кожно -резорбтнвного действия филомеда

В результате проведенных исследований подсчитать ЛД50 филомеда при нанесении на кожу не представлялось возможным, так как при проведении экспериментов методом кожных аппликаций гибели животных (мышей, крыс) не отмечалось.

Ежедневные аппликации препарата в течение 10 дней не вызвали каких-либо изменений состояния кожи: не было отмечено признаков раздражения, воспаления, интоксикации. Изменений толщины кожной складки так же не установлено.

При исследовании местного действия на слизистые оболочки было установлено, что через 5 минут, 24 и 48 часов никаких видимых изменений в поведении животных и в состоянии роговицы глаза не происходит. Покраснений, воспалительных явлений, отечности глаз не было отмечено.

При погружении хвостов животных в пробирки с препаратом и их фиксации в таком положении у животных опытных и контрольных групп не отмечалось изменений кожи хвоста, случаев гибели и каких-либо признаков интоксикации.

На основании результатов проведенных экспериментов можно утверждать, что филомед не обладает местным раздражающим и кожно -резорбтивным действием.

2.2.2.3. Оценка подострой токсичности филомеда 2.2.2.3.1. Оценка подострой токсичности филомеда для крыс

Изучение подострой токсичности филомеда проводили на белых линейных крысах массой тела 180-220 г по методу Лима с соавт. (1961). Группы подопытных и контрольных крыс формировали по принципу аналогов. В каждой группе по 10 животных (таблица 5).

Таблица 5

Результаты изучения субхронической токсичности филомеда для крыс

Показатели Дни опыта

1-16 17 19 23 24 25 26 27 28 29

Суммарная доза филомеда, тыс. мг/кг 8,6 10,0 12,7 20,1 22,2 25,2 28,2 31,3 34,3 38,8

Количество павших крыс 0 1 1 1 1 2 1 1 1 1

Количество павших крыс в нарастающем порядке 0 1 2 3 4 6 7 8 9 10

ЛД50, мг/кг 23164

Ккум 8.7

Клиническая картина подострого токсикоза, вызванного введением препарата в дозе 5000 - 38871 мг/кг массы тела, характеризовалась развитием у крыс признаков депрессии и угнетения. Животные были апатичны, слабо

реагировали на внешние раздражители. Аппетит и жажда были сохранены. На более поздних этапах опыта крысы были истощены, аппетит нарушался, возникали фибриллярные подергивания мышц конечностей. Животные старались зарыться в опилки и остаться неподвижными. Крысы истощены, гибли в коматозном состоянии.

При патологоанатомическом вскрытии трупов крыс отмечали признаки катарально - геморрагического гастроэнтерита, застойной гиперемии желудка и кишечника. Печень увеличена коричнево - красного цвета. Слизистая желудка атрофирована, орган наполнен препаратом, сильно увеличен. Кишечник наполнен газами, местами атрофирован. При проведении патогистологического исследования тушек крыс, отмечали атрофические, дистрофические и воспалительные изменения.

Коэффициент кумуляции, вычисленный по формуле Ю.С.Кагана и В.В.Станкевича (1964), составил 8,7. Препарат относится к группе веществ со слабо выраженной способностью к накоплению.

2.2.2.3.2. Оценка подострой токсичности филомеда для карпа

При определении параметров подострой токсичности и коэффициента кумуляции филомеда для карпа использовали метод субхронической токсичности по Лиму с соавт. (1961). Для проведения эксперимента были сформированы опытная и контрольная группы карпов. В каждой группе по 10 рыб массой тела 100±10 грамм (таблица 6).

Таблица 6

Результаты изучения субхронической токсичности филомеда для карпа

Показатели Дни опыта

1-18 19 20 21 22 23 24 25

Суммарная доза филомеда, тыс. мг/кг 12,7 14,3 15.8 18,1 20,3 22,6 24,9 28,3

Количество павших рыб 0 1 1 1 1 2 3 2

Количество павших рыб в нарастающем порядке 0 1 2 3 4 5 8 10

ЛД50, мг/кг 21421

Кщад 7.14

Клиническая картина подострого токсикоза, вызванного введением препарата, характеризовалась развитием у карпа признаков угнетения. Рыба меняла окраску, плохо реагировала на внешние раздражители. Нарушалась координация движений, аппетит был сохранен. На более поздних этапах опыта карпы были истощены, аппетит нарушался.

При проведении патологоанатомического вскрытия павших рыб отмечали экссудат в брюшной полости. Печень и селезенка были увеличены, красно-коричневого цвета. Желудок был сильно увеличен, наполнен препаратом, слизистая желудка и кишечника атрофирована, так же наблюдались признаки катарально-геморрагического гастроэнтерита. При проведении патогистологического исследования карпов, погибших в ходе опыта, отмечали воспаление, атрофические и дистрофические изменения.

Коэффициент кумуляции филомеда, вычисленный по формуле Ю.С.Кагана и В.В.Станкевича (1964), для карпа составил 7,14 (слабо выраженная кумуляция).

2.2.2.4. Изучение хронической токсичности филомеда

Хроническую токсичность филомеда изучали на белых крысах обоего пола массой тела 180-220 г и на карпе массой тела 100±10 г. Были сформированы по 3 группы каждого вида животных по 15 особей: две подопытные и одна контрольная. Препарат вводили животным внутрь с помощью шприца с оливой в течение 10 суток.

В результате проведенных исследований установлено, что ежедневное введение препарата крысам в дозах 500 и 1000 мг/кг, а карпу в дозах 500 и 800 мг/кг массы тела не вызвало значительных изменений в поведении животных, потреблении корма и воды, как в ходе постановки эксперимента, так и в течение всего срока наблюдения (30 дней). Гибели крыс и карпа в опытных и контрольных группах не отмечалось.

Еженедельный привес крыс и карпа подопытных и контрольных групп в течение опыта достоверно не отличался. Весовые коэффициенты исследуемых органов крыс в период всего эксперимента колебались в пределах нормы и не отличались достоверно от контрольных животных.

Гематологические и биохимические показатели крови подопытных крыс и рыб при длительном использовании филомеда в терапевтической дозе 500 мг/кг массы тела во все периоды исследований не отличались достоверно у животных всех групп. При использовании препарата в дозах, существенно превышающих рекомендуемую, отмечалось достоверное снижение уровня гемоглобина и количества эритроцитов в крови подопытных животных по сравнению с контролем, однако, эти показатели оставались в пределах физиологической нормы. В сыворотке крови отмечалось незначительное снижение содержания креатинина и общего белка. То есть можно утверждать, что длительное введение в организм крыс и рыб филомеда в высоких (токсических) дозах влияет на белок синтезирующие функции организма, а также эритро- и гемопоэз, что следует учитывать при хроническом отравлении животных.

При проведении патологоанатомических исследований крыс и рыб, убитых в конце эксперимента, установлено, что для всех животных была характерна картина, свойственная здоровым животным.

2.2.2.5. Результаты изучения влияния филомеда на антитоксическую функцию печени

Исходя из данных, представленных в таблице 7, следует, что продолжительность гексеналового сна у животных всех опытных и контрольных групп колебалась незначительно от 27,6±1,4 до 29,0±1,6 минут после введения гексенала. Продолжительность сна не зависела от времени наркотизации после введения филомеда - через 1,4, 12 или 24 часа (Р > 0,05).

Таблица 7

Влияние филомеда на антитоксическую функцию печени

Группы Доза Кол-во Время Продолжитель

филомеда, животных в введения ность сна

мг/кг группе гексенала животных,

через, ч мин

Опытная 500 5 1 27,6±0,9

Контроль - 5 1 28,7±0,8

Опытная 500 5 4 28,4±0,4

Контроль - 5 4 28,3±0,7

Опытная 500 5 12 28,3±0,5

Контроль - 5 12 28,7±0,6

Опытная 500 5 24 28,0±0,9

Контроль - 5 24 28,9±0,4

На основании полученных результатов можно заключить, что изучаемый препарат после введения в организм лабораторных животных орально в дозе 500 мг/кг массы тела не влияет на продолжительность наркотического сна, а, следовательно, и на антитоксическую функцию печени.

2.2.3. Определение параметров фармакокинетики филомеда 2.2.3.1. Результаты определения концентрации левамизола в плазме

крови рыб

Определение концентрации левамизола в плазме крови карпа после введения терапевтических доз филомеда проводили методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с ультрафиолетовым детектированием. Результаты экспериментов представлены на графике 1.

мкг/мл

График 1. Изменение концентрации левамизола в крови рыб

Полученные результаты свидетельствуют, что при применении филомеда левамизола гидрохлорид всасывается в желудочно-кишечном тракте, достигая максимальной концентрации в крови через 6 часов (10,07 мкг/мл). В последствии наблюдалось постепенное снижение содержания вещества в крови рыб и через 72 часа левамизола гидрохлорид регистрировали в минимальных концентрациях - 0.25 мкг/мл.

2.2.3.2. Результаты определения концентрации левамизола в мышечной ткани рыб

Определение содержания левамизола в мышечной ткани рыб после введения филомеда так же проводили методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Результаты проведенных исследований (график 2) свидетельствует о том, что полное выведение остаточных количеств левамизола гидрохлорида из организма (мышечной ткани) рыб составляет 9 суток после окончания применения филомеда в терапевтических дозах. Максимальные концентрации левамизола в мышечной ткани рыб регистрировали через 3 суток (114,25 нг/г). На 5 сутки наблюдали значительное снижение концентрации левамизола гидрохлорид (37,398 нг/г), а на 7 сутки минимальные следовые остаточные количества левамизола гидрохлорида обнаружены лишь в одной пробе из пяти.

f

9

График 2. Концентрация левамизола в мышечной ткани рыб

в »концентрация левамизола в мышцах

2.2.4.Изучение терапевтической эффективности филомеда 2.2.4.1.Установление эффективной терапевтической дозы филомеда

Для изучения эффективности препарата филомед, было сформировано 6 опытных группы рыб, спонтанно зараженных филометроидозом, Филомед вводили в пищевод карпов через катетер в составе 2% крахмального геля. Первая группа получила препарат в дозе 200 мг/кг однократно; вторая группа в той же дозе двукратно с интервалом 24 часа; третья группа 500 мг/кг однократно; четвертая группа в той же дозе двукратно; пятая группа 750 мг/кг однократно; шестая группа в той же дозе двукратно. Контрольная группа лечению не подвергалась, рыбе вводили то же количество геля без препарата. Кормление осуществляли один раз в день гранулированным кормом. Через 10 суток после последней дачи филомеда было проведено паразитологическое обследование рыб в опытных и контрольной группах. Результаты опытов представлены в таблице 8.

Препарат продемонстрировал наибольшую эффективность при двукратном применении в дозах 500 и 750 мг/кг ихтиомассы. Исходя из полученных данных, можно предположить, что наиболее эффективная и экономически выгодна доза - 500 мг/кг, соответственно, ее и целесообразно считать оптимальной.

Таблица 8

Эффективность различных доз филомеда

Группа Кол-во рыб Разовая доза, мг/кг Кратность введения Пораженность нематодами после лечения, % Терапевтическая эффективность, %

1 25 250 1 90 10

2 25 250 2 80 20

3 25 500 1 40 60

4 25 500 2 0 100

5 25 750 1 20 80

6 25 750 2 0 100

Контроль 25 - - 90 0

2.2.4.2.Изучение терапевтической эффективности филомеда при филометроидозе карпа

Всего в экспериментах было использовано 850150 экз. разновозрастных карпов. Результаты изучения эффективности препарата филомед в производственных условиях представлены в таблице 9.

Таблица 9

Эффективность филомеда при филометроидозе карпа

Пруд До обработки После обработки ээ, % ИЭ, %

Вскрыто рыб, экз ЭИ, % ИИ, % Вскрыто рыб, экз ЭИ, % ИИ, %

ООО «Рыбколхоз им. И.В.Абрамова»

Пруд № 4 150000 экз. 20 20 1.8 100 0 1 100 100

ООО «РыбИнвестАгро»

Пруд № 19 120000 экз. 50 50 2,8 80 0 0 100 100

ООО «Слободская сагва»

Пруд № 7 70000 экз. 20 30 2.1 100 0 0 100 100

ООО «Ихтис»

Пруд № 4 150000 экз. 20 20 4,3 50 0 0 100 100

ЗАО «Егорьевский рыбокомбинат»

Пруд №3 110000 экз 10 90 7,6 10 10 1 88, 9 86.9

Пруд №5 170000экз. 10 70 5,6 10 0 0 10 0 100

Пруд №6 5000 экз. 10 80 6,3 10 0 0 10 0 100

Пруд №7 10 80 7,2 10 0 0 10 100

20000 экз. 0

ООО «Рыбколхоз Полдеревский»

Пруд № 4 20 70 2.8 100 0 0 10 100

150000 экз. 0

ООО «Рекламное предприятие №1»

Пруд № 4 20 50 2 25 0 0 10 100

14000 экз. 0

При проведении производственных испытаний в различных регионах РФ препарат продемонстрировал высокую терапевтическую эффективность (88,9-100,0%). Филомед был эффективен при филометроидозе карпа в широком диапазоне температур от 16 до 26° С, т.е. в промежутке температур когда происходит развитие и рост нематод. Препарат оказал влияние, как на половозрелых особей, так и на преимагинальные стадии развития нематод. Препарат пригоден для обработки рыб в различные периоды: как весной в период яркого клинического проявления заболевания, так и в конце лета -начале осени.

При проведении производственных испытаний препарата не было выявлено каких-либо побочных эффектов или осложнений.

2.2.5. Ветеринарно - санитарная оценка рыбы после применения филомеда

После проведения экспериментов по определению эффективности филомеда при филометроидозе карпа была проведена ветеринарно-санитарная оценка рыб, обработанных препаратом в терапевтической дозе. Органолептические, физико-химические и микробиологические показатели мяса рыб обеих групп соответствовали требованиям, предъявляемым к доброкачественной рыбе. Рыба свежая, доброкачественная, без каких либо пороков. По органолептическим показателям и результатам лабораторных исследований рыба признана пригодной в пишу людям и подлежит свободной реализации. Следовательно, какого- либо неблагоприятного влияния на качество рыбной продукции филомед не оказывает.

2.2.6. Экономическая эффективность применения филомеда в рыбоводстве

Экономическая эффективность применения филомеда при филометроидозе карпа рассчитывалась на основании результатов производственных опытов (таблица 1С).

Таблица 10

Экономическая эффективность ветеринарных мероприятий

Предотвращенный ущерб 1152000 руб.

Ветеринарные затраты 4469 руб.

Экономический эффект 1147531 руб.

Эффективность ветеринарных мероприятий на рубль затрат 257 руб.

Таким образом, проведение мероприятий по лечению филометроидоза карпа экономически выгодно, так как на каждый рубль ветеринарных затрат хозяйство сохраняет 257 рублей.

ВЫВОДЫ

1. Разработано новое фармакологическое средство филомед, предназначенное для борьбы с филометроидозом карпа. В 1 г препарата содержится 200 мг левамизола гидрохлорида. Препарат относится к 3 классу опасности - умеренно опасные вещества в соответствии с ГОСТ 12.1.007 -76.

2. Филомед не обладает выраженным местньм раздражающим и кожно-резорбтивным действием, не вызывает изменений поверхности кожи и слизистых оболочек у лабораторных животных.

3. Коэффициент кумуляции филомеда для крыс составляет 8,7, для карпа - 7,14, что позволяет отнести препарат к группе веществ со слабо выраженным эффектом кумуляции.

4. В хронических экспериментах при многократном введении препарата в течение 10 дней лабораторным животным и рыбам не установлено существенных изменений в клиническом статусе животных, картине крови и патологоанатомического вскрытия.

5. Введение филомеда в дозе 500 мг/кг массы тела в организм лабораторных крыс не влияет на продолжительность наркотического сна и, следовательно, на антитоксическую функцию печени.

6. Максимальная концентрация левамизола в крови наблюдается через 6 часов после введения филомеда, далее происходит ее снижение в течение 72 часов. Выведение остаточных количеств левамизола происходит в течение 9 суток.

7. Филомед обладает антигельминтной активностью при филометроидозе карпа в дозе 500 мг/кг ихтиомассы в составе кормолекарственной смеси при двукратном введении с интервалом 24 часа. Экстенс-эффективность составляет 88,9-100%, интенс-эффективность -86,9-100%.

8. Применение препарата филомед не вызывает изменений товарного вида, органолептических, физико-химических и бактериологических показателей рыбы.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. В результате проведенных исследований теоретически обоснована и практически подтверждена возможность безопасного использования филомеда в качестве лекарственного средства для лечения карпа при филометроидозе. Препарат необходимо давать зараженной рыбе в составе кормолекарственной смеси двукратно из расчета 500 мг/кг ихтиомассы.

2. Для специалистов Госветслужбы, рыбоводных предприятий и ихтиопатологов, занимающихся выращиванием товарного карпа на территории РФ подготовлено «Методическое пособие по борьбе с филометроидозом карповых рыб в прудовых хозяйствах», рассмотренное и одобренное ученым советом ГНУ ВНИИВСГЭ и секцией «Ветеринарная санитария, гигиена и экология» Отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемни (протокол № 6 от 22 октября 2010 г.)

3. Результаты исследований использованы при разработке проектов нормативных документов:

- «Инструкция по применению филомеда для лечения филометроидоза карпа»

- «Филомед. Технические условия»-СТО 76069684-0087-2010

4. Результаты исследований предлагается использовать в учебном процессе при чтении лекций или проведении лабораторных занятий со студентами по фармакологии (раздел «Антигельминтики»), паразитологии («Паразитарные болезни рыб»), ихтиопатологии («Нематодозы рыб»), на курсах (факультетах) повышения квалификации рыбоводов и ихтиопатологов.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Уразаева, Р.Д. Изучение острой токсичности препарата Филомед на белых мышах / Уразаева Р.Д., Дельцов A.A.// Веткорм. - 2009. - №6. -С.50-51.

2. Уразаева, Р.Д. Новый препарат против филометроидоза карпа/ Уразаева Р.Д.// Мат. 64-й науч.конф.мол.учен. и студ. СПбГАВМ.-СПб.,2010,- С.90-91.

3. Уразаева, Р.Д. Филомед для лечения карпов при филометроидозе /Уразаева Р. Д.// Ветеринария. - 2010. - №4. - С.22-24.

4. Методическое пособие по борьбе с филометроидозом карповых рыб в прудовых хозяйствах/ В,И. Дорожкин, Р.Д. Уразаева, C.B. Енгашев, К.В. Гаврилин. -М., 2010. - 19с.

Отпечатано в ООО «Компания Спутник+» ПД № 1-00007 от 25.09.2000 г. Подписано в печать 17 Л1.2010 Тираж 100 экз. Усл. п.л. 1,5 Печать авторефератов (495)730-47-74,778-45-60

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Уразаева, Рената Дмитриевна

Введение.

1. Обзор литературы.

1.1. Филометроидоз карпа.

1.2. Эпизоотология возбудителя, клиническая и патологоанатомическая картина, диагностика заболевания, ветеринарно-санитарная оценка рыбной продукции

1.3. Профилактика и меры борьбы.

1.3.1. Биологические методы.

1.3.2. Фармакологические средства.

1.4. Левамизол.

1.4.1. Общие сведения.

1.4.2. Механизм действия.

1.4.3. Использование в ветеринарной практике.

1.4.4. Побочное действие, токсичность, противопоказания.

2. Собственные исследования.

2.1. Материалы и методы исследований

2.1.1. Определение токсических свойств.

2.1.1.1. Определение параметров острой токсичности

2.1.1.2. Определение смертельной концентрации

2.1.1.3. Изучение местного раздражающего и кожно-резорбтивного действия.,

2.1.1.4. Определение параметров субхронической токсичности.

2.1.1.5. Определение параметров хронической токсичности.

2.1.1.6. Изучение влияния на антитоксическую функцию печени

2.1.2. Определение параметров фармакокинетики

2.1.2.1. Определение концентрации левамизола в крови карпа

2.1.2.2. Определение остаточных количеств левамизола гидрохлорида в мышечной ткани.

2.1.3. Изучение терапевтической эффективности филомеда

2.1.4. Ветеринарно — санитарная оценка

2.1.5. Расчет экономической эффективности.

2.2. Результаты исследований.

2.2.1. Разработка филомеда.—.•.59L

2.2.2.Результаты изучения токсичности филомеда.

2.2.2.1 .Результаты изучения острой токсичности при оральном пути введения

212.2.1.2. Определение смертельнойжонцентрациишевамизола;. „

2.2.2.2. Результаты изучение местного раздражающего и кожно-резорбтивного действия.

2.2.213. Оценка подострой токсичности филомеда.

212121311.©ценка подострой токсичности филомеда для крыс.

2.2.23:2.0ценка,подострой токсичности^филомеда для карпа.

21212'14; Результаты изучения хронической токсичности филомеда;.

2.2.214.Г. Результаты йзучения»хронической;токсичностифиломедадля крыс.79 2.2.2.4.2. Результаты изучения хронической токсичности; филомеда для.карпа:.87 2.2.2.5: Результаты изучения влияния филомеда на антитоксическую функцию печени;.V.9-12.2.3. Результаты определения параметров фармакокинетики филомеда.

212.3:1. Результаты определения концентрации-левамизола в плазме крови. . рыб. 1.932.2.3.2. Результаты;определения содержания левамизола в мышечной ткани рыб:.1.

212.4. Изучение терапевтической эффективности;филомеда.

2.2.4.1. Установление эффективной терапевтической дозы филомеда.

2.2.4.2. Изучение терапевтической эффективности филомеда в условиях производства.

2.2:5. Ветеринарно — санитарная оценка рыбы после применения филомеда:. 109 2.2.6. Экономическая эффективность применения филомеда в рыбоводстве:

3. Обсуждение результатов исследований.

4. Выводы.

5. Практические предложения.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Фармако-токсикологическая оценка и применение филомеда при филометроидозе карпа"

Актуальность темы. Россия' — страна, имеющая огромные территории, обладает большой площадью внутренних водоемов. Развитие аквакультуры, в целом, и прудового рыбоводства,, в частности, является важной составной частью животноводства нашей страны. Рыба — ценный- пищевой продукт, являющийся важным источником протеина животного происхождениям Белки рыбы легко усваиваются, а- аминокислотный состав» свидетельствует об их полноценности. Витаминный и минеральный состав мяса рыбы часто богаче и разнообразнее, чем у других видов животных. Общее содержание минеральных, веществ в рыбе примерно в 1,5 раза выше, чем в мясе млекопитающих. Низкое содержание жира делает рыбу ценным диетическим продуктом (Шерман И. М!, Чижик А. К., 1989; Друковский С.Г., 2006).

В настоящее время потребность в рыбе и рыбопродуктах очень высока. С ростом спроса на рыбную продукцию появилось большое количество частных рыбоводных прудов и садковых хозяйств,, значительный прирост поголовья рыбы обеспечили комбинаты и рыбозаводы. Восприимчивость рыбы к инфекционным и инвазионным заболеваниям является одним из важнейших биологических факторов, . нарушающих нормальное течение рыбоводного процесса. Заболеваемости рыбы способствуют плотные посадки, некачественный корм, низкое содержание кислорода, неблагоприятные температура или рН воды, накопление продуктов метаболизма. Распространение инфекционных и инвазионных заболеваний во многом зависит от нарушений технологии и ветеринарно-санитарных правил при разведении и выращиваниирыб (Бауэр О.Н., Л959; Привезенцев Ю.А., Власов В.А., 2004; Козлов В.И. и др., 2006).

Для прудовых хозяйств центральных и южных регионов России, выращивающих товарного карпа, актуальной проблемой является гельминтозное заболевание филометроидоз (Висманис К.О., 1967; Головина Н.А. и др., 2003; Акбаев М.Ш. и др., 2008; Шерман И. М. и др., 1989). По данным Сапожникова Г.И. (2001) заболевание установлено в 17 (19,1%) регионах. По данным ФГУ «Центр ветеринарии» в 2006 г. по филометроидозу было неблагополучно 28 пунктов (Борисова М.Н., Скачков Д.П., 2009). В 2008 году в общей структуре инвазионной* патологии филометроидоз составил 12% (Завьялова Е.А., 2009; Мамонтов Ю.П., 2010). Зараженная рыба не представляет угрозы здоровью и жизни человека, но наносит большой экономический ущерб рыбоводному предприятию — рыба истощена, отстает в росте и развитии, теряет до 30 % массы и часто гибнет. Половозрелые нематоды, имеющие красный цвет и достигающие 15 см в длину, локализуются в чешуйных кармашках, из-за чего рыба' теряет товарный вид и выбраковывается (Борисова М.Н., 1988).

Несмотря^ на актуальность проблемы филометроидоза карпа, в настоящее время на* Российском рынке ощущается недостаток современных лечебно-профилактических средств, предназначенных для борьбы с данным заболеванием. Поэтому важное значение приобретает создание новых эффективных препаратов, способных воздействовать на различные стадии развития нематод.

Цели- и задачи исследований. Целью» настоящей работы является разработка нового лекарственного средства для лечения филометроидоза карпа и оценка его фармако-токсикологических свойств.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Исходя из литературных данных и скрининговых испытаний, выбрать эффективное и безопасное действующее вещество, на основе которого разработать препарат для лечения филометроидоза карпа.

2. Определить токсикологические параметры нового препарата.

3. Определить оптимальные терапевтические дозы и схемы применения препарата.

4. Определить параметры фармакокинетики, в том числе остаточные количества.

5. Провести ветеринарно-санитарную оценку рыбы, получавшей препарат.

Научная новизна работы. Впервые проведены скрининговые испытания ивермектина, эммамектина бензоата и левамизола гидрохлорида на* рыбе в плане их безвредности и эффективности при филометроидозе. На основе выбранного, наиболее эффективного действующего вещества - левамизола гидрохлорида, разработан препарат филомед. Проведены комплексные фармако-токсикологические исследования нового препарата, включающие определение параметров общей токсичности и фармакокинетики. Определены оптимальные лечебные дозы препарата^ при филометроидозе карпа, проведена ветеринарно-санитарная оценка рыбы, подвергнутой обработке филомедом, и рассчитана экономическая эффективность ветеринарных мероприятий.

Теоретическая, и практическая ценность работы. В результате проведенных исследований теоретически обоснована и практически подтверждена возможность безопасного использования филомеда в качестве лекарственного средства для лечения карпа при филометроидозе.

Основные положения диссертации,- выносимые на защиту:

- выбор действующего вещества! и-разработка препарата для лечения-филометроидоза карпа;

- изучение токсичности филомеда на лабораторных животных и карпе;

- определение параметров фармакокинетики филомеда; в том числе остаточных количеств;

- определение оптимальных доз и изучение эффективности филомеда при филометроидозе карпа;

- ветеринарно-санитарная оценка рыбы после применения препарата. Апробация результатов исследований. Основные- результаты работы доложены и обсуждены на:

1. Международной научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Вопросы ветеринарии и биотехнологии» ФГОУ ВПО МГАВМиБ, Москва, 2009 г.

2. VII Международной научно — практической конференции «Аквариум, как средство познания мира», Москва, 2010 г.;

3. ЬХГУ научной конференции молодых ученых и студентов СПбГАВМ, Санкт-Петербург,2010г.;

4. Международной конференции в рамках выставки «Золотая осень 2010» «Развитие сельскохозяйственного рыбоводства в Российской федерации», Москва, 2010 г.

Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 4 научные работы, в том числе 2 в изданиях, рекомендованных ВАК РФ, в которых изложены основные положения и выводы по изучаемой проблеме.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 146 страницах и состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения, список литературы, приложения. В диссертации 35 таблиц, 12 графиков и 13 рисунков. Всего использовано 166 литературных источников, в том числе 26 зарубежных авторов.

Заключение Диссертация по теме "Звероводство и охотоведение", Уразаева, Рената Дмитриевна

4. ВЫВОДЫ

1. Разработано новое фармакологическое средство филомед, предназначенное для борьбы с филометроидозом карпа. В 1 г препарата содержится 200 мг левамизола гидрохлорида. Препарат относится к 3 классу опасности — умеренно опасные вещества в, соответствии с ГОСТ 12.1.007 -76.

2. Филомед не обладает выраженным местным раздражающим и кожно-резорбтивным действием, не вызывает изменений поверхности кожи и слизистых оболочек у лабораторных животных.

3. Коэффициент кумуляции филомеда для крыс составляет 8,7, для карпа - 7,1*4, что позволяет отнести препарат к группе веществ со слабо выраженным эффектом.кумуляции.

4. В хронических экспериментах при многократном введении препарата в течение 10 дней лабораторным животным и рыбам не установлено существенных изменений в клиническом статусе животных, картине крови и патологоанатомического вскрытия.

5. Введение филомеда в дозе 500 мг/кг массы тела в организм лабораторных крыс не влияет на продолжительность наркотического сна и, следовательно, на антитоксическую функцию печени.

6. Максимальная концентрация левамизола в крови наблюдается через 6 часов после введения филомеда; далее происходит ее снижение в течение 72 часов. Выведение остаточных количеств левамизола происходит в течение 9 суток.

7. Филомед обладает антигельминтной активностью при филометроидозе карпа в дозе 500 мг/кг ихтиомассы в составе кормолекарственной смеси при двукратном введении с интервалом 24 часа. Экстенс-эффективность составляет 88,9 - 100%, интенс-эффективность - 86,9 -100%.

8. Применение препарата филомед не вызывает изменений товарного вида; органолептических, физико-химических и бактериологических показателей рыбы.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. В; результате проведенных исследований теоретически обоснована^ и практически подтверждена возможность безопасного использования филомеда в качестве лекарственного1 средства для лечения карпа при филометроидозе. Препарат необходимо давать зараженной рыбе в составе кормолекарственной смсси двукратно из расчета 500 мг/кг ихтиомассы.

2!: Для специалистов Госветслужбы, рыбоводных- предприятий; ю ихтиопатологов, занимающихся выращиванием; товарного карпам на . территории РФ подготовлено «Методическое пособие по борьбе с филометроидозом карповых рыб в прудовых хозяйствах», рассмотренное и, одобренное ученым советом ГНУ ВНИИВСГЭ и секцией «Ветеринарная санитария,, гигиена и экология» Отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (протокол № 6 от 22 октября 2010 г.).

3; Результаты исследований* использованы* при разработке проектов нормативных документов:

- «Инструкция по применению филомеда для лечения филометроидоза карпа»; .

- «Филомед. Технические условия»-СТО 76069684-0087-2010:

4. Результаты исследований предлагается использовать в учебном процессе при чтении лекций или проведении лабораторных занятий со студентами по фармакологии (раздел «Антигельминтики»), паразитологии («Паразитарные болезни рыб»), ихтиопатологии («Нематодозы рыб»), на курсах (факультетах) повышения квалификации рыбоводов и ихтиопатологов.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата биологических наук, Уразаева, Рената Дмитриевна, Москва

1. Г. Абилов, А.И. Действие левамизола на иммунный ответ и прирост поросят в период вакцинации / Абилов А.И., Багиров В.А., Мандып-оол Ч.М. // Повышение эффективности ведения свиноводства. — Быково. 1999. — С. 220-221.

2. Абилов, А.И. Влияние левамизола на сохранность и прирост живой массы поросят / Абилов, А.И, Ескин, Г., Афанасьев В. и др. //Свиноводство . -1998.-№5.-С.29-31.

3. Абрамов, A.B. Иммунобиологический статус свиней при энтеральных паразитоценозах до и, после лечения левамизолом и ивермектином на фоне пробиотика: Автореф.дис.канд.вет.наук: 16.00.03/ А.В'.Абрамов; УрГСХА.-Екатеринбург, 2005.- 21'с.

4. Авдосьев, Б.С Результаты применения хлорофоса в борьбе с филометроидозом карпа / Б.С. Авдосьев//Тез.докл. к семинару «О новых передовых методах борьбы с болезнями рыб в рыбоводных хозяйствах Минрыбхоза СССР» ЦНИИТЭИРХ М.:- 1977. С.1-3.

5. Аминжанов, Ml Влияние нилверма на организм овец/ М.Аминжанов // Матер, научн. конф. Всес. О-ва гельминтологов 1968 — 22. С. 13-17.

6. Антипова, П.С. Сезонные и возрастные изменения морфологического состава крови карпа/ П.С. Антипова// Вопросы ихтиопатологии. 1952.- №2. - С.120-122.

7. Архипов, И.А. Антигельминтики: фармакология и применение/ И.А.Архипов//М.: Россельхозакадемия.- 2009.- 406с.

8. Архипов, И.А. Особенности применения и дозированияантгельминтиков на разных видах животных/ И.А. Архипов// М.:Труды ВИГИС.-Т.38.-2002.- С.19-36.

9. Бауэр, О.Н. Регуляция численности паразитов в пресноводных экосистемах/ О.Н. Бауэр// Гельминты в пресноводных биоценозах. -М.:Наука, 1982.-С.4-16.

10. Бауэр, О.Н. Экология паразитов пресноводных рыб//Взаимоотношения паразитов со средой обитания: Изв.Гос.НИОРХа, 1959.- Т. 49.- 2.

11. Беленький, М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта/ М.Л. Беленький. 2-е издание, перераб. и доп. - Ленинград: государственное издание медицинской литературы, 1963. -247с.

12. Беляев, В.И. Справочник по рыбоводству и рыболовству/Беляев, В.И.//Мн.: Урожай, 1986. 224 е., ил.

13. Богонис, М.М. Опыт оздоровления племенного стада карпов хлорофосом при филометроидозе/ Богонис М.М., Пирус Р.И., Кушинский Б:В.// Тез.докл. Всес.совещ. «Совершенствование биотехнологии прудового рыбоводства». М.- 1980. -С.50-51.

14. Борисова, М.Н. Терапия филометроидоза карпов: Автореф. дис.канд. биол. наук: 03.00.20/М.Н.Борисова; науч-исслед. Инст. гельминт, им. К.И.Скрябина.- М., 1988. 25с.

15. Борисова, М.Н. Филометроидоз карпов: эпизоотология, диагностика, методы лечения и профилактики/ Борисова М.Н., Скачков«Д.Н.// Рыбное хозяйство. -2009.- №1. с. 89- 91.

16. Борисова, М.Н. Эффективность лечения филометроидоза карпов с использованием новых лекарственных форм/ М.Н: Борисова, Д.П. Скачков, В.В. Горохов//Рыбное хозяйство, аквакультура, М.,1998. №2. - с.31-34.

17. Боровков, М.Ф. Ветеринарно санитарная экспертиза с основами' технологии? и стандартизации- продуктов животноводства: Учебник/ М.Ф.Боровков, В.П.Фролов, С.А. Серко; Под, ред. Проф. М.Ф. Боровкова. -СПб.: Лань,2007.-448с.

18. Быховская — Павловская И.Е. Паразиты рыб: Руководство по изучению/ И.Е.Быховская Павловская. — Л.: Наука, Ленинградское отделение, 1985. - 121с.

19. Васильков, Г.В. Болезни рыб: справочник/ Г.В.Васильков, Л.И.Грищенко, В.Г.Енгашев//- М.: Агропромиздат, 1989.-288с.

20. Васильков, Г.В. Дитразин и картина крови карпов при филометроидозе/ Г.В. Васильков, Н.Г. Козаченко//М.: Ветеринария. — 1973.-№7.- С.62-63.

21. Васильков, Г.В. Патогенез и симптомы филометроидоза карпов/ Г.В. Васильков //М.:ВИГИС.- 1975. вып.20.- С.45-46.

22. Васильков, Г.В. Паразитарные болезни рыб- и санитарная оценка рыбной продукции/ В.Г.Васильков. — М': Изд-во ВНИРО, 1999: — 191с.

23. Васильков, Г.В. Борьба* с филометроидозом карпов/ Г.В. Васильков//М.: Ветеринария. -1980.- №2.- С.46-49^

24. Васильков, Г.В. Биологический метод борьбы с филометроидозом / Г.В. Васильков, Н.Г. Козаченко, М.Н.Борисова//Рыбоводство и рыболовство 1980.- №9.- С.9.

25. Ващенков, В.М. Обострение применения декариса при лечении больных с неблагоприятным течением язвенной болезни двенадцатиперстной кишки / Ващенков В.М., Успенский В.М., Семенов- В.В.// Современная медицина . 1982. - №12. - С.75-80.

26. Вербицкая, И.Н. Филометроидоз карпа и его- профилактика/ И.Н. Вербицкая//Рыбное хозяйство.- 1975. №5. — С.28-30.

27. Виноградова, Ю.Е. Клинический эффект левамизола и возможность лабораторного прогнозирования его действия/Виноградова, Ю.Е., Рагозина И.В., Иванина Е.К.//Тер.арх. 1980. - №9. - С.30-34.

28. Висманис, К.О.* О биологии Philometra lusiana Visman/ К.О.Висманис//Вопросы!Ихтиологии. 1964. -Т.4".- вып. - 1/30. - С.192-193.

29. Висманис, К.О. Новое заболевание карпа — филометроидоз и меры борьбы с ним /К.О.Висманис //Рыбохозяйств. исследования в бассейне Балт.моря Сборник 2- Рига, Бвлт НИИРХ 1967 - С. 160-166.

30. Висманис, К.О. О морфологии Philometra lusiana Vismanis nom.N. (Nematoda, Dracunculidae) / К.О. Висманис //Зоологический журнал. 1967.- т.46 - вып.5. - C.759-762.

31. Висманис, К.О. Цикл развития возбудителя филометроидоза карпа/ K.Ol Висманис //Труды БалтНИИРХ. 1970.- 4.- С.403-415.

32. Власов, В.А. Фермерское рыбоводство / В.А. Власов. М.: Столичная типография, 2008. — 168с.

33. Волков, Ф.А. Противопаразитарные средства. Справочник/ Ф.А. Волков, В.А. Апальник, К.Ф.Волков//Новосибирск, 1996. -75с.

34. Вышковский; Г.Л. Регистр лекарственных средств России/ Г.Л. Вышковский. Выпуск 12. -М.: РЛС, 2005. - 1440с.

35. Гантверг, А.Н. Избирательная токсичность карбафоса для рыб/ А.Н.Гантверг// Химическая милиорация прудов: сбор.науч.трудов. -Ленинград, 1984, № 225. - с.27-30.

36. Говоров, Н.П. Ветеринарная фармакология/ Н.П. Говоров, С.Г.Сидорова. -М.: Изд-во сельхозлитературы, 1962. — 359с.

37. Гордовская, Н.Б. Влияние левамизола на иммунологические показатели у больных хроническим гломерулонефритом// Гордовская Н.Б., Шилов1 Е.М:, Савицкий.Н.С.//Тер.арх. 1980. - №4. - С.28-31.

38. Гребенников, В.А. Способ леченя атропического дерматита/ Гребенников В.А., Золотова В.В., Символокова Л.В.// Рост. мед. ин-т. -№4496545/14. Заявл.20.10.88. Опуб.29Ю9.95, Бюл.№27.

39. Грищенко, Л.И. Болезни-рыб и основы рыбоводства/ Л.И. Гищенко, М.Ш.Акбаев, Г.В.Васильков. -М.: Колос, 1999.- 456с.

40. Гусейнов, А.З. Иммунотерапия раневой инфекции/ Гусейнов А.З.// Вестн. нов. мед. технол. 1995. - 2, №3-4. - С.89-92.

41. Данилевский В.М. Общая профилактика и терапия незаразных болезней животных/ В.М. Данилевский// Внутренние незаразные болезни сельскохозяйственных животных. М.: Агропромиздат, 1991. - С .12-44.

42. Демидов; Н'.В' Антигельминтики' в ветеринарии? /Н:В. Демидов/ Ветеринария. 1984. - №3. - С.50-52.,

43. Догель, В.А. Паразитофауна и окружающая среда. Некоторые вопросы экологии паразитов» пресноводных рыб. Основные проблемы паразитологии рыб/ В.А.Догель // Л.:Изд ЛГУ, 1958. 167 с.

44. Дорохов С. М. Прудовое рыбоводство: Учебник для сел.проф. техн. училищ и подгот. рабочих на пр-ве. - 3-е изд., перераб. и доп. / С. М. Дорохов, С. П. Пахомов, Г. Д. Поляков. - М.: Высш. школа, 1981. - 240 е., ил.

45. Друковский, С.Г. Ветеринарно-санитарная и экологическая характеристика рыбохозяйственных водоемов московской области: Автореф. дис.канд.биол.наук: 16.00.06/ С.Г.Друковский; Моск. гос. Университет прик. биотех. Москва,2006. 24с.

46. Дячук, Т.И. Ветеринарно-санитарная экспертиза рыбы и рыбопродуктов: справочник / Т.И. Дячук; под ред. В.Н. Кисленко. М.: КолосС, 2008.-365 е.:

47. Жуленко В.Н. Ветеринарная токсикология/ В'.Н.Жуленко, М.И:Рабинович; Г.А.Таланов. -М.:КолосС,2004.- 384с.

48. Жуленко, В.Н. Общая клиническая ветеринарная рецептура: Справочник/ В:Н.Жуленко, О.И.Волкова, Б.В.Уша и др. М.: Колос, 2000. — 550с.

49. Зайцева, Г.А. Правила ветеринарно- санитарной экспертизы пресноводной рыбы и раков/ Г.А.Зайцева. М.:Агропромиздат, 1989.- 37с.

50. Иванова, Н.Т. Метод морфологического анализа крови в ихтиопатологических исследованиях/ Н.Т. Иванова// Известия ГосНИОРХ. — 1976.-т. 105 -С.105-108.

51. Изюмова H.H. Паразитофауна рыб водохранилищ СССР и пути ее формирования/ H.H. Изюмова//Л.:Наука,-1977. 98 с.

52. Исхаки, Ю.Б. Левамизол в терапии аллергических средних отитов (ACO): Докл. на 2 Междунар. конгр. «Иммунореабилитация и реабилитация в мед.» Анталия, 6-10 мая, 1996 / Исхаки Ю.Б., Гафарова М.А.// Int.J.Immunorehabil. 1996. - №2. - С.73.

53. Ихтиопатология/ Н.А.Головина, Ю.А. Стрелков, В.И.Воронин, П.П.Головин, Е.Б.Евдокимова, Л.Н.Юхименко. Под ред. Н.А.Головиной, О.Б.Бауера. М.: Мир, 2003. - 448с.

54. Каган Ю.С. Коэффициент кумуляции как количественный критерий для оценки кумулятивного, действия ядов/ Каган Ю.С., Станкевич

55. B.В.//Актуальные вопросы гигиены труда, промышленной токсикологии профессиональной патологии в нефтяной и нефтехимической промышленности: тез.докл.науч.конф. Уфа, 1964. - С.48-49.

56. Кальгуненко, И.И. Использование декариса (левамизола) в лечении некоторых дерматологических, заболеваний/ Кальгуненко И.И., Рачков С.М., Мухина М;М. //Вестн.дерматол. 1981. - №2. - С.59 -61.

57. Ким, М.Т. Клинико иммунологическая характеристика различных форм, псевдотуберкулеза у детей/ Ким,М.Т. Тыныбеков A.C. Султанов Т.А. // Int J.immunorehabil. - 1998.- № 8. - С.39.

58. Кленова, И.Ф. Ветеринарные препараты в России: Справочник/ И.Ф. Кленова, К.Л. Мальцев, H.A. Яременко, И.Л., Архипов. М;: Сельхозиздат, 2004. - Т. 1. - 576 с; Т.2. - 464 с.

59. Кленова, И.Ф. Ветеринарные препараты,в России/. И.Ф. Кленова, H.A. Яременко. М.'Сельхозиздат, 2002. - 543 с.

60. Козаченко, Н.Г. Морфологические и биохимические изменения у карпов при филометроидозе/ Н.Г. Козаченко// Бюл. ВИГИС.- 1970.- вып.4.1. C.61-63.

61. Козаченко, Н.Г. Коэффициент упитанности у карпов, зараженных Philometroides lusiana/ Н.Г. Козаченко//Бюлл. ВИГИС. 1975. - вып.20.-С.47-49.

62. Козлов, В.И. Аквакультура: учеб. пособие/ В.И.Козлов, А.Л. Никифоров Никишин, А.Л.Бородин. - М:: Колосс, 2006. - 448с.

63. Кузьмин, A.A. Антигельминтики в ветеринарной^ медицине:. А'.А.Кузьмин М.: Аквариум ЛТД; 2000.—' 144с. »

64. Кузьмович, JI:F. Филометроидоз карпа/ Л.Г. Кузьмович// Рыбоводство» и рыболовство. 1964,- №2.- С.28. .

65. Кузьмович, Л.Г. Материалы, к изучению влияния паразитической немотоды PKilometra luisiana Vismanis 1966 на кожные покровы, карпа / Кузьмович Л.Г., Орчук К.К.// Проблемы паразитол. Тр.5 конф: паразитологов УССР. 1969. - ч. 2 .-с.241-243.

66. Лакин, Г.Ф/ БИОМЕТРИЯ: уч. пособие для биол: спец. вузов 4-е изд.перераб.» и доп./ Г.Ф Лакин.// - М.: Высш.шк., 1990. - 352.с:

67. Линник, В.Я. Филометроидоз карпов * и возможность, применения иммунологических методов его диагностики / Линник В:Я., Безнос Т.В., Шимко В.В.//Вет. Наука производству: межвед.сб; - Минск: Урожай,1989. - Вып.27.- С. 110-112

68. Линник, В.Я. Эффективность сипкура в сочетании с польфимиксом и олохиндоксом при филометроидозе карпов/ Линник В.Я., Слепнев Н.К., Безнос Т.В.// Вет.наука произ-ву: междвед.сб.ст. - Минск. 1993. - Вып.31,-С.133-136.

69. Маланин, Л.П. Ветеринарные препараты: Справочник/ Л.П.Маланин, А.П. Морозов, А.С.Селиванова; Под ред. А.Д.Третьякова.- М.: Агропромиздат, 1988.- 319 с.

70. Мамонтов, Ю.П. Прудовое рыбоводство. Современное состояние и перспективы развития рыбоводства в РФ /Ю.П.Мамонтов, В.Я.Скляров, Н.В.Стецко//М.:ФГНУ «Росинформагроте»,-2010. 216с.

71. Машковский, М. Д. Лекарственные средства/ М.Д.Машковский 14-е изд.перераб. и доп. - М.: Новая волна, 2002.-540с.

72. Метелев, В.В. Водная токсикология/ В.В.Метелев, А.И. Канаев, Н.Г. Дзасохова. М.:Колос,1971. - 241с.

73. Михеева, Т.В. Использование иммуномодулятора левамизола в комплексной терапии больных юношеской неблагоприятно текущей шизофренией/ Михеева Т.В., Секурина' Т.П.// Журнал невропатолога и психиатора. 1987. - №1. - С.109 - 113.

74. Мозгов, И.Е. Фармакология /И.Е.Мозгов. М.: Агропромиздат, 1985. -415с.

75. Моисеев, П.А. Ихтиология /Моисеев П.А., Азизова H.A., Куранова И.И.// М.: Легкая и пищевая пром-сть, 1981. 384 с.

76. Мусселиус, В.А. Болезни рыб и борьба с ним в условиях современного рыбоводства / В.А. Мусселиус//- М., Изд. Зоол. ин-та АН СССР, 1987.-С. 14-21.

77. Ноева, H.A. Применение левамизола (декариса) для лечения больных хроническим приобретенным токсоплазмозом /Ноева H.A., Никифоров В.Н., Лебедев К.А.// Современная медицина. 1981. - №3. -С.45-49.

78. Токсические эфиры кислот фосфора/В.Д. О' Брайн//М.: Мир, 1964.7.

79. Орипов, А.О. Действие левамизола на организм овец/ Орипов^А.О.1, Садыков А:М^//Ветеринария;.- М-: 1973i №;11?.- с.94-95:.

80. Оробец, В.А. Гельминтозы свиней (лечение и профилактика) /Оробец В.А. // Вестник ветеринарии. 1997. -№ 6. - С.78 - 82.

81. Панченко, Е.Л. Оценка эффективности различных методов лечения болезни Берже у детей/ Панченко Е.Л., Сергеева Т.В., Кутафина, Е.К. Сенцова Т.Б., Зокиров II.3. // 4 рос. Нац. Конгр. «Человек и лекарство», М; -8-12 апр., 1997: тез докладов-Mi, 1997:-G.98i

82. ЮО.Пламб, Д. К. Фармакологические: препараты/ ДТС.Пламб// 3-е изд. -М;: Аквариум, 2002. - 856с.

83. Преображенский, С.Н. Противомикробные и противопаразитарные средства: учеб. пособие/ С.Н. Преображенский, Д.Н.Уразаев, Л.А.Попова. — М.: ФГОУ ВПО МГАВМиБ им. К.И.Скрябина, 2005. 27с.

84. Привезенцев, Ю.А. Рыбоводство/ Ю.А.Привезенцев, В.А.Власов: -М.:Мир,2004. — 456 с.

85. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Р.У.Хабриев, И.Н.Денисов, В.Б.Герасимов, В,Г.Кукес и др.- М.: Издательский дом «Русский врач», 2005. 832 с.

86. Санин, A.B. Ветеринарный справочник традиционных и нетрадиционных методов лечения собак /A.B. Санин, Е.В. Зинченко. М.: Центрополиграф, 2002. - 596 с.

87. Сапожников, Г.И. Биологический метод борьбы с филометроидозом карпов /Сапожников Г.И., Просинюк В.И., Миронова В.В.// Теория и практика1 борьбы с паразитарными болезням: мат.докл.науч.конф. — М. :ВИГИС,2004. вып.5. - с.349- 351.

88. Сапожников, Г.И. Ветеринарное обслуживание рыбоводства России/ Сапожников Г.И., Седов В.А. //Ветеринария. 2001. - №2. - С.З -8.

89. Сафиуллин, Р.Т. Комплексный подход к борьбе с паразитарными болезнями жвачных животных / Сафиуллин Р.Т.// Ветеринария. — 2005. №8. -С.8- 11.

90. Сафиуллин, Р.Т. Действие тетрамизола и левамизола при кишечных нематодозах свиней / Сафиуллин Р.Т. // Свиноводство. 2001. -№3. - С.23-24.

91. Ш.Сафиуллин, Р.Т. Эффективность цитарина при смешанных гельминтозах свиней/ Сафиуллин Р.Т.// Достижение науки и техники АПК. — 1989. -№11.-С.53 -54.

92. Секретарюк, К.В. Морфофункциональные взаимоотношения в системе паразит- хозяин при ботриоцефалезе и филометроидозе карпа: Автореф. дис.канд.биол.наук:03.00.20/К.В*.Секретарюк; ВИГИС. -М.,1986. -40с.

93. ПЗ.Секретарюк, К.В. Морфологические и гистологическое изменения при филометроидозе карпа/Секретарюк.К.В.//Ветеринария. 1983. - №9. - С.45-47.

94. Секретарюк, К.В. Филометроидоз карпа: Учеб.мет.указания/ К.В. Секретарюк. — Львов: Зоовет ин-т.Д984. — 23с.

95. Серегин, И.Г. Ветеринарно-санитарная экспертиза пищевых продуктов на продовольственных рынках: Учебное пособие/ И.Г.Серегин, М.Ф.Боровков, В.Е. Никитченко. СПб: ГШРД,2005.- 472с.

96. Сидоркин, В. А. Нематодоцидная активность левамизола при аскаридозе свиней./ Сидоркин В.А., Новикова C.B., Баринов Н.Д.// Ветеринария. 2001. - №5. - С.32-33.

97. Скурат, Э.К. Результаты гематологических исследований при филометроидозе карпов /Скурат Э.К., Гребнева Е.И. //Вопр.рыб.хоз-ва Беларуси, Минск,1994, -№12. С. 135-142

98. И9.Соколов, С.Г. Дракунолоидные нематоды рыб дельты Волги/ Соколов СТ.// Паразитология.- СПб: Наука, 2006. Том.40. - №4. - С.З55-362.

99. Цейтлин, Д.Г. Распределение некоторых видов нематод в популяциях их хозяев/ Д.Г. Цейтлин// Гельминты в* пресноводных биоценозах. М.: Наука, 1982. - С200-208.

100. Чекман, И.С. Справочник по клиническойфармакотерагши/И.С.Чекман, А.П.Тёлещук, О.А.Пятак//Киев, Здоровье, 1986.-736 с.

101. Червяков. Д:К. Лекарственные средства в ветеринарии/ Д.К. Червяков, Н:Д: Евдокимов, А.С.Вишкер//Mi :Колос.-1977.- 496с:

102. Черномашенцев, А.И., Рыбоводство / А.И. Черномашенцев, В .В Мильштейн.// М.: Легкая и пищевая пром-сть, 1983. 272 с.

103. Харкевич, А.Д. Фармакология/А.Д. Харкевич. М.: Реотар Медицина, 2002. - 722с.

104. Шайкин В.И. Изучение тератогенной и эмбриотоксической активности левамизола/ В.И.Шайкин// Всесоюзная учредительная конференция по токсикологии; Тез. Докл., МНИИ гигиены труда и профзаболеваний АМН СССР, 1980.-с. 134.

105. Шерман, И.М. Прудовое рыбоводство: Учеб. пособие./ И. М. Шерман, А. К.Чижик //К.: Выш. шк., 1989. 215 е.; ил.

106. Шилов, В.А. Сравнительное изучение эффективности^ иммуномодулирующих препаратов в комплексном, лечении* хронического обструктивного бронхита/ Шилов В:А., Ширинский В.С.//Клин. мед. 1995.- 73, №41 С.88-90.

107. Шмелев, Е.И. Применение левамизола у больных с хроническими неспецифическими заболеваниями легких/ Шмелев Е.И., Бумагина Т.К., Митерев ЮТ Л Современная медицина. 1980. - №11.- С.26-31.

108. Шполянская, А.Ю: Гематологические исследования в ихтиопатологии/ А.Ю. Шполянская//Рыбоводство и болезни рыб. — М. — 1969. G.225-229.

109. Эндрюс К. Болезни рыб/ К.Эндрюс, Э.Экселл, Н.Кэррингтон// М:*:Аквариум. 2005'. -206с.

110. Юсупов, Р.Х. Иммунодефициты животных и их профилактика/ Юсупов Р.Х.// Ветеринарный врач. 2007. - № спецвыпуск. - С.8 - 11.

111. Секретарюк KiM Хромосомш порушення в соматичних юитинах коротв, швазованих philometroides lusiana (vismanis 1967) / Секретарюк Юм// Ветеринарна медицина Украши.- 2002. №7. - С.35-36.

112. Bassler, G The new illustrated guide to fish diseases .- Stationstraat, 2001.- 232p. ill.

113. Cao Ji-yeu Zhoogguo shouyi xuebao/ Cao Ji-yeu, Dou Shu-long, Zhank Shao-dong, Wang An-hua, sun Lei // Chin J: Vet. Sei. 2002. - 22, №5.- C.500 -502:

114. Clarkson M.J., Beg M.K.//Vet.Rec. 1970.V.86, N2. - P.652. ,

115. Fischer M.N.// VetParasitoll- 1986. V.37, N 3.- P.348-352.

116. Forsyth B.A.//Austral.Vet.J. 1966.-V.42, N 4. - P.412.

117. Handbook of drugs and chemicals used in the treatment of fish diseases. -Nelson Herwig: Springfield Illinois USA, 1984. 207p.

118. Kassai Til Veterinary Helminthology. 1999. - 260 p.

119. Komuniecki P., Saz H.J.// J.Parasitol. 1982. - V.68,N2. - P.221 - 227.

120. Krueger H.R.Casida J.E., Niedermeier R.P.// J.Alg.Food.Chem. 1959. V.7.- P.182-188.

121. Lim, R.K. A method for the evaluation of cumulation and tolerance by the determination of acute and'subchronic median effective doses/ Lim R.K., Rink K.G.,Glass HJ. et al.// Arch. Int.Pharmacodyn. 1961. - v. 130. - N.3-4. - P.336-353.

122. Lewis J., Wu C., Levine J.,BergH.//Neuroscience.-1980.-V.5,N 9. -P.967-989.

123. Marriner S., Armour J./ In Chemotherapy of Parasitic Diseases, ed.W.C.Campbell, R.S.Rew. 1986.- P.287 - 299.

124. Martin P., Lejambre L. // Vet.Sci. Commun. -1979.-V.3, N2. -P.159-164.

125. Mikulikova D., Trnavsky K.// Agents Action. 1980. - V. 10, N 4. - P.374 -377.

126. MolnarK. Pontyok filometrozisa//Helaszat.- 1969.-15. -2s.36.

127. Molnar K. Life-History of Philometra ovata (Zeder, 1803) and Ph.rischta Skrjabin. 1917. Acta vet. Acad. Sei. hung., 1966, vol.16 (2), p.227-242.

128. Moravec F. Development of nematode Philometra ovata (Zeder, 1802) in the copepodintermediate host. — Folia parasitol., 1980, vol.27,Nl. -P.29-37.

129. Schoeweis D. Parasite control meets challenge of successful swine medicine/ Schoeweis D., Wollums A. Jenkins J.//DUM. 1988. - V.19,10. - -P.23-24.

130. Thienpont D. et al.//Nature.- 1966.- V.209,N 8. P.1084.

131. Troversa Donato First report; of multipledrug resistance in trichostrongyles affecting sheep under field condition in Italy/ Troversa Donato, Paoletti Barbaraza, Otranto Domenico, Miller James// Parasitol.Res. 2007-101. - №6. - P. 1713 -1716.

132. Vanden Bossche H.,Janssen P.// Life Sci. 1967.- V.6, N12.- P.1781-1792.

133. Walley J.K.// Vet. Rec. 1966. - V.78,N 3. - P. 406.