Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Фагоцитарная активность и ловушкообразующая способность макрофагов различных компартментов у потомства самок крыс с лекарственным поражением печени

ВАК РФ 03.03.04, Клеточная биология, цитология, гистология

Автореферат диссертации по теме "Фагоцитарная активность и ловушкообразующая способность макрофагов различных компартментов у потомства самок крыс с лекарственным поражением печени"

На правах рукописи

Шопова Анастасия Валерьевна

ФАГОЦИТАРНАЯ АКТИВНОСТЬ И ЛОВУШКООБРАЗУЮЩАЯ СПОСОБНОСТЬ МАКРОФАГОВ РАЗЛИЧНЫХ КОМПАРТМЕНТОВ У ПОТОМСТВА САМОК КРЫС С ЛЕКАРСТВЕННЫМ ПОРАЖЕНИЕМ

ПЕЧЕНИ

03.03.04 - Клеточная биология, цитология, гистология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

8 АПР 2015

005567031

Оренбург-2015

005567031

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Челябинский государственный университет» Министерства образования Российской Федерации

Научный

руководитель: Брюхин Геннадий Васильевич,

доктор медицинских наук, профессор

Официальные

оппоненты: Лебединская Ольга Витальевна, доктор

медицинских наук, доцент, ГБОУ ВПО «Пермский государственный медицинский университет им. академика Е.А. Вагнера» Министерства Здравоохранения Российской Федерации, профессор кафедры гистологии, эмбриологии и цитологии

Козлова Алина Николаевна, кандидат медицинских наук, доцент кафедры гистологии, цитологии и эмбриологии ГБОУ ВПО «Оренбургский государственный медицинский университет» Министерства Здравоохранения Российской Федерации

Ведущая организация: ФГБНУ «Научно-исследовательский институт морфологии человека» Российской академии медицинских наук, г. Москва

Защита диссертации состоится «16» июня 2015 г. в « » часов на заседании диссертационного совета Д. 208.066.04 Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Оренбургский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации по адресу: 460000, Россия, г. Оренбург, ул. Советская, 6, зал заседаний диссертационного совета. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО ОрГМУ Минздрава России, пр. Парковый д. 7 и на сайте www.orgnia.ru

Автореферат разослан «_»_2015 года

Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук, профе>

Шевлюк Николай Николаевич

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В течение длительного времени в Российской Федерации сохранялась стойкая депопуляция, регистрировался высокий уровень заболеваемости, что послужило предпосылкой для выделения здоровья населения фактором национальной безопасности (Римашевская Н.М., 2004; Баранов A.A. с соавт., 2005). Несмотря на некоторые успехи, суммарный коэффициент рождаемости (среднее число детей, рожденных одной женщиной репродуктивного возраста) остается ниже уровня, необходимого для простого воспроизводства населения. Так он должен составлять 2,13 детей, однако в 2013 году он составил 1,707 детей (в 2012 году - 1,691 детей, в 2011 году — 1,582 детей). В связи с этим вопросы рождаемости остаются в настоящее время особо актуальными и острыми. Кроме того, имеются данные о высоком уровне самопроизвольного прерывания беременности, достигающего 10% (Стародубов В.И., Суханова Л.П., 2012). Особое значение придается демографическому старению нации, в результате которого увеличивается доля лиц возраста, превышающего трудоспособный, над лицами молодыми (Стародубов В.И., Суханова Л.П., 2012). Так в 2010 году данные показатели составили 21,6% к 18,3% соответственно.

Известно, что уровень здоровья женщин и детей, показатели материнской, младенческой и перинатальной смертности являются отражением уровня развития общества (Фролова О. Г. и соавт., 2005; Милованов А. П., 2008).

При этом одним из ведущих показателей, обуславливающих уровень репродуктивного потенциала, является здоровье женщин. Именно женщине, как основной хранительнице генов, принадлежит основная роль в рождении здорового потомства (Баранов A.A., Щеплягина Л.А., 2000; Шарапова О.В., Цыбульская И.С., 2000; Барт Б.Я. с соавт., 2010). Патология беременности и перинатального периода является ключевым фактором, отягощающим снижение показателей систем жизнеобеспечения потомства. На фоне увеличения возраста первородящих женщин, анамнез которых зачастую отягощен абортами, возрастает частота экстрагенитальной и акушерской патологии (Медведь В.И., 2007). В связи с этим, увеличивается число беременностей высокого риска, приводящих к различной патологии со стороны плода - самопроизвольным абортам, а также мертворождаемости. На фоне неполноценного соматического статуса женщин беременность нередко заканчивается рождением физиологически незрелых детей с признаками отставания физического развития. Известно, что экстрагенитальные заболевания матери являются одной из основных причин нарушения адаптационных возможностей плода, а также осложнений внутриутробного, родового и послеродового периодов (Егорова А.Т. с соавт., 2013; Шехтман М.М., 2003). Особое место, в силу своей распространенности, занимает патология гепатобилиарной системы, которая является одной из причин рождения физиологически незрелых детей (Апресян C.B., 2009; Кузьмин В.Н., 2010; Сафронов В.В., Шакирова Э.М, 2010).

Многочисленными экспериментальными исследованиями показано нарушение морфофункционального становления систем жизнеобеспечения у потомства самок крыс с хроническим поражением печени различного генеза (Брюхин Г.В., 1990 - 2013; Грачев А.Ю., 1994; Бояков A.A., 1999; Николина О.В., 1999; Евченко Е.В., 2001; Федосов А.А, 2001; Пашнина E.H., 2003; Михайлова Г.И., 2005; Кузнецова А. Б., 2006; Ильиных М.А., 2006; Леонов Н.В., 2007; Барышева C.B., 2008; Вторушина Е.В., 2008; Романов A.C., 2008; Сизоненко М.Л., 2008 - 2013; Шаврина Е.Ю, 2012; Зубарев И.В., 2012; Невзорова Н.В., 2012; Солянникова Д.Р., 2013; Серышева О.Ю., 2013; Мальгина Т.Д., 2013; Ласьков Д.С., 2014).

Одним из факторов, влияющих на состояние систем жизнеобеспечения потомства, является состояние неспецифической резистентности. В связи с этим целью настоящего исследования явился анализ фагоцитарной активности и ловушкообразующей способности макрофагов различных компартментов у потомства самок крыс с экспериментальным поражением печени лекарственного генеза в различные сроки постнатального развития.

В соответствии с целью исследования были выделены следующие задачи:

1. Исследовать особенности количественного состава моноцитов периферической крови и тканевых макрофагов у потомства самок крыс с поражением печени лекарственного генеза в различные сроки постнатального периода.

2. Изучить различные этапы фагоцитарного процесса моноцитов периферической крови и тканевых макрофагов у потомства крыс с лекарственно - индуцированным поражением печени в различные сроки постнатального периода.

3. Оценить ловушкообразующую способность мононуклеарных фагоцитов у крысят, рожденных от матерей с лекарственным поражением печени в различные сроки постнатального периода.

4. Изучить влияние иммобилизационного стресса на морфофункциональное состояние моноцитов периферической крови и тканевых макрофагов у половозрелого потомства крыс с экспериментальным поражением печени лекарственного генеза.

Апробация материалов работы.

Материалы конференции были представлены на III Международной (X Итоговой) научно-практической конференции молодых ученых (Челябинск, 2012), второй всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Физиологические механизмы адаптации и экология человека» (Тюмень, 2012), всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы лабораторной диагностики и биотехнологии» (Кемерово, 2012), IV Международной (XI Итоговой) научно-практической конференции молодых ученых (Челябинск, 2013), региональной научно-практической конференции «Основные достижения научных школ ЮУГМУ» (Челябинск, 2014).

Положения, выносимые на защиту:

1. Экспериментальная патология печени самок крыс, обусловленная введением тетрациклина и парацетамола, является существенным фактором риска, неблагоприятно влияющим на антенатальное и постнатальное морфофункциональное состояние клеточных элементов системы мононуклеарных фагоцитов потомства.

2. Лекарственное поражение гепатобилиарной системы самок крыс обусловливает нарушение ловушкообразующей способности макрофагов различных компартментов и моноцитов периферической крови потомства.

3. Поражение гепатобилиарной системы матери лекарственного генеза вызывает нарушение стрессрезистентности моноцитов периферической крови и тканевых макрофагов различных компартментов половозрелого потомства.

Научная новизна.

На адекватных экспериментальных моделях лекарственного поражения печени матери различного генеза установлены общие закономерности морфофункционального состояния мононуклеарных фагоцитов у потомства. Выявлено нарушение функциональных параметров моноцитов периферической крови и тканевых макрофагов у потомства самок крыс с экспериментальным поражением печени лекарственной этиологии: изменение количественного состава, снижение фагоцитарной активности, а также угнетение ловушкообразующей способности. Новыми являются данные, демонстрирующие особенности ловушкообразующей способности тканевых макрофагов и моноцитов периферической крови крыс в различные сроки постнатального периода. Установлено угнетение ловушкообразующей способности макрофагов различных компартментов потомства самок крыс с экспериментальным лекарственным поражением печени. Установлено угнетение стрессрезистентности клеточных элементов неспецифической резистентности у потомства самок крыс с лекарственно-индуцированной патологией печени.

Теоретическая и практическая значимость работы.

Экспериментальное исследование носит фундаментальный характер. Его результаты позволяют расширить знания о механизмах, лежащих в основе нарушения неспецифической резистентности у потомства, рожденного от матерей с лекарственным поражением печени. Полученные результаты содержат новые данные о влиянии патологии гепатобилиарной системы матери лекарственной этиологии на адгезивную, поглотительную способность, метаболическую, киллинговую активность макрофагов потомства. Полученные результаты расширяют представления о ловушкообразующей способности тканевых макрофагов и моноцитов периферической крови.

Полученные результаты могут быть учтены при разработке мер профилактики нарушений неспецифической резистентности у детей от матерей с лекарственной патологией гепатобилиарной системы.

Результаты исследования используются в научно-исследовательской деятельности и в учебном процессе курса гистологии, эмбриологии и цитологии биологического факультета ФГБОУ ВПО «Челябинский

государственный университет» в дисциплинах: «Методы исследования крови» (бакалавриат), «Патофизиология» (бакалавриат), «Современные аспекты культивирования клеток и тканей» (магистратура).

Публикации: По теме диссертации опубликовано 13 работ, в том числе 3 в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Объем и структура диссертации: Диссертация изложена на 235 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, собственных результатов и их обсуждения, заключения, выводов и списка использованной литературы, включающего 435 источников, в том числе 134 работы зарубежных авторов. Диссертация содержит 20 таблиц, 111 рисунков, из которых 41 микрофотография.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Экспериментальное исследование было выполнено на белых лабораторных крысах-самках «Вистар» и их потомстве в различные сроки постнатального онтогенеза — на 1-ый, 15-ый, 30-ый, 45-ый и 60-ый день жизни. Все исследуемые животные были разделены на 3 группы. Первую группу составили интактные животные - «контрольная группа» (К — 76 животных из 25 пометов), вторую - животные с лекарственным поражением печени, вызванным введением парацетамола - «опытная группа 1» (Ol - 57 животных из 16 пометов), третью — животные с лекарственным поражением печени, вызванным введением тетрациклина - «опытная группа 2» (02 - 62 животных из 19 пометов).

Для достижения поставленной цели исследования у подопытных животных моделировалось лекарственное поражение печени различного генеза.

Модель лекарственно-индуцированного гепатита, вызванного введением парацетамола, воспроизводилась интрагастральным введением половозрелым самкам крыс парацетамола УБФ (ОАО «Уралбиофарм», Россия), в дозе 2,5 г на кг массы тела животного на 1% крахмальном клейстере (Венгеровский А.И., 2005).

Моделирование лекарственно-индуцированного гепатита,

вызванного введением тетрациклина осуществлялось с помощью интрагастрального введения тетрациклина гидрохлорида («Биосинтез» г. Пенза, Россия), который вводился половозрелым самкам крыс в течение 5 дней в дозе 0,5 г на кг массы тела животного на 1% крахмальном клейстере (Скакун Н.П., 1982).

Экспериментальную модель иммобилизационного стресса

воспроизводили для определения резервных возможностей макрофагальной системы путем обездвиживания животных с жесткой фиксацией конечностей в течение 2 суток с тремя временными интервалами. В первый день крыс иммобилизировали с 10 до 15 часов, после 2 часов отдыха снова помещали в камеру и оставляли на ночь. BIO часов утра следующего дня крыс выпускали до 17 часов, после чего снова проводили иммобилизацию до следующего утра (Брюхин Г.В., Грачев А.Ю., 1994).

Методы выделения исследуемых мононуклеаров различных компартментов.

В качестве объекта исследования использовали моноциты периферической крови, а также тканевые макрофаги (перитонеальные, альвеолярные, печеночные).

Моноциты периферической крови выделяли с помощью метода, основанного на седиментации их в одноступенчатом градиенте плотности фиколл - урографина (плотностью 1,077г/см3) (Фримель Г., 1987). В результате дифференцированного центрифугирования кольцо с мононуклеарами крови оказывалось на границе двух сред - остальных форменных элементов и плазмы крови.

Перитонеальные макрофаги экспериментальных животных получали путем внутрибрюшинного введения животным раствора Хенкса в объеме 1-5 мл, жидкость отсасывали пастеровской пипеткой (Фримель Г., 1987) в чистую пробирку, центрифугировали и ресуспендировали с 1мл физиологического раствора.

Альвеолярные макрофаги экспериментальных животных получали методом лаважирования легких (Вазина И.Р. с соавт., 1984).

Макрофаги печени получали по методике Сгойоп R.W. с! а!. (1978) в модификации Брюхина Г.В. с соавт. (1987). Для этого в воротную вену печени вводили физиологический раствор с целью удаления из нее остатков крови. Затем выделенную печень измельчали ножницами, а полученные кусочки инкубировали в течение часа в 0,0001% теплом растворе трипсина, после чего их гомогенизировали в среде 199. Далее полученную клеточную взвесь помещали в чистую пробирку, добавляли расвор Хенкса, трижды центрифугировали, а затем ресуспендировали.

Для получения мазков мононуклеарных клеточных элементов системы мононуклеарных фагоцитов (СМФ) клеточную взвесь в объеме 0,1 мл помещали на предметное стекло и приготавливали мазки, которые затем фиксировали и окрашивали (Фримель Г., 1987).

Для получения монослоя мононуклеарных клеточных элементов СМФ (Хейфец Л.Б., Абалакина В.А., 1973) клеточную взвесь в объеме 0,1 мл, соответствующему концентрации клеток 2* 106, наносили на предметное стекло и инкубировали во влажной камере в термостате при 37°С в течение 30-60 минут. Затем остатки неприлипших клеток удаляли физиологическим раствором. Полученный монослой использовали для экспериментальных исследований.

Иммунологические методы исследования. Определение жизнеспособности клеточных элементов СМФ проводили с помощью 0,1% водного раствора трипанового синего и 0,1% растворе эозина в растворе Хенкса (Кондратьева И.А., Самуилов В.Д., 2001). Подсчет клеток осуществляли с помощью камеры Горяева по общепринятой методике (Фримель Г., 1987).

Определение фагоцитарных и микробоцидных свойств проводили с помощью теста поглощения корпускулярных частиц латекса по методу

Фрейдлин И,С. (1976) с последующим определением фагоцитарного показателя и фагоцитарного индекса.

Для исследования фагоцитарных и микробоцидных свойств мононуклеаров использовали суточную культуру золотистого стафилококка. Для оценки полученных результатов подсчитывали фагоцитарный показатель, фагоцитарный индекс и киллинговую активность.

Для определения ловушкообразующей способности макрофагов проводили прижизненное окрашивание флюоресцирующим красителем акридиновым оранжевым структур ядра фагоцитов (Долгушин И.И. с соавт., 2009).

Для количественного выражения активности макрофагальных ловушек определялось число макрофагов, способных к образованию внеклеточных сетей. Длину хвостов определяли с помощью морфометрической установки ВидеоТест Морфология 5.0. Об активности внеклеточных макрофагальных ловушек судили по числу активных ловушек (количество внеклеточных структур, захвативших S. aureus), индексу макрофагальной ловушки (число бактерий в 100 подсчитанных ловушках в пересчете на 1 ловушку) и киллинговой активности (процент убитых поглощенных микроорганизмов из расчета на одну макрофагальную ловушку).

Определение лизосомальной активности клеточных элементов было основано на свойстве мононуклеаров избирательно накапливать в лизосомах цитоплазмы флюоресцирующий краситель и вызывать их красное свечение (Фрейдлин И.С. с соавт., 1981).

Для количественного выражения лизосомальной активности производили подсчет процентного содержания макрофагов с лизосомальной активностью (число акридиноранжпозитивных клеток), а также среднего цитохимического коэффициента (СЦК)-

Адгезивные свойства мононуклеаров оценивали нединамическим методом (Храмова И.А., И.П. Кольцов, 2010), основанным на свойстве макрофагов прикрепляться к чистой стеклянной поверхности (Тотолян A.A., Фрейдлин И.С., 2000). Для количественной оценки адгезивных свойств исследовали суммарный показатель адгезии — процентное соотношение количества клеток, прикрепившихся к стеклу, к общему числу внесенных на стекло клеток. Исследование рецепторного аппарата (Rollany Н., Degre Н., 1982) проводили путем подсчета процента распластанных фагоцитов.

Внутриклеточный кислородзависимый метаболизм оценивали с помощью НСТ-теста, который является общепринятым для оценки «метаболического взрыва» в макрофагах. Окислительный клеточный метаболизм оценивали по двум показателям — интегральному тесту восстановления нитросинего тетразолия (спонтанный и индуцированный HCT - тест) (Виксман М.Е., Маянский А.Н., 1979).

Цитохимические методы исследования. Оценку содержания гликогена в макрофагах проводили с помощью Шифф - реакции по Мак-Манусу (Волкова О.В., 1982). Для выявления пероксидазопозитивных фагоцитов использовали бензидиновый метод Грэхема-Кнолля (1974). Интенсивность цитохимической

реакции на сукцинатдегидрогеназу (СДГ) оценивали с помощью методики Хейхоу Ф.Г.Дж. и Кваглино Д. (1983).

Статистические методы исследования. Полученные цифровые данные обрабатывали на компьютере с использованием программы SPSS 17.0 (Statsoft, Inc.), определяя среднее и 95% доверительный интервал. Учитывая небольшую выборку животных, достоверность полученных результатов определяли при помощи непараметрического метода - критерия Манна-Уитни. Для оценки сочетанного действия лекарственной гепатопатии и иммобилизационного стресса проводился двухфакторный дисперсионный анализ, с помощью которого было выявлено различие как между группами, так и значимые взаимодействия между данными факторами. Проверка распределений на нормальность осуществлялась с помощью критерия Колмагорова-Смирнова (Холлендер М. и Вульф Д., 1983), проверка распределений на однородность дисперсий - с помощью критерия Левене (Levene Н., 1960) Нормализацию данных, распределенных с отклонением от номального распределения, производили с помощью преобразования Бокса-Кокса (Sakia R.M., 1992).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Содержание клеточных элементов СМФ

Таблица 1 - Количественная оценка перитонеальных и печеночных макрофагов

экспериментальных животных

Группа День Количество клеточных элементов СМФ в единице объема

Перитонеальные макро< Ьаги(х10'/1мл) Печеночные макрофаги (х Ю'/орган)

1 15 30 45 60 1 15 30 45 60

К 3,86 (3,044,68) 4,04 (3,394,69) 5,97 (5,566,38) 10,65 (9,7111,59) 12,31 (10,2114,41) 6,03 (5,566,5) 6,54 (5,177,91) 8,55 (7,349,76) 11,93 (11,512,36) 12,65 (11,4213,88)

oi 1,62« (1,172,07) 2,25» (1,622,88) 2,85* (1,913,79) 5,69* (5,066,32) 7,39* (6,97,88) 10,32* (9,3811,26) 11,9* (10,6713,13) 14,23* (13,3315,13) 17,68* (16,1119,25) 19,6* (18,3120,89)

02 2,13* (1,582,68) 3,09* (2,973,21) 3,91* (3,444,38) 7,15* (5,78,6) 9,55* (9,110,0) 10,09* (7,8212,36) 13,79* (12,2615,32) 15,75* (14,6116,89) 18,31* (17,2319,39) 18,88* (16,8420,92)

В скобках границы 95%ДИ

* - результаты статистически достоверны по сравнению с контролем (р<0,05)

Установлено, что у всех экспериментальных животных количество макрофагов различных компартментов после рождения постепенно увеличивается и достигает максимума к периоду половой зрелости (табл. 1). При этом у подопытных животных выявлено снижение содержания моноцитов крови, перитонеальных и альвеолярных макрофагов, и, напротив, повышение числа печеночных макрофагов. Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о компенсаторном перераспределении макрофагальных клеток в сторону увеличения числа печеночных макрофагов.

Поверхностный рецепторный аппарат клеточных элементов СМФ Для адекватного функционирования мононуклеарных фагоцитов, в том числе распознавания чужеродных частиц и макромолекул, необходим оптимальный уровень специфического взаимодействия их с помощью рецепторного аппарата (Маянский А.Н., Маянский Д.Н., 1983; Глебов Р.Н.,

1987; Пинегин Б.В., Карсонова М.И., 2009; Мквико Т., Нагипоп I., 1992). Оценка рецепторного аппарата макрофагов проводилась с помощью адгезивного теста и теста распластывания.

Установлено, что у всех экспериментальных животных адгезивные свойства перитонеальных и альвеолярных макрофагов после рождения постепенно увеличиваются, о чем свидетельствует повышение процентного содержания клеточных элементов, подвергшихся адгезии через 30 и 60 минут инкубации (табл. 2). Аналогичная тенденция выявлена у моноцитов и печеночных макрофагов. Обращает на себя внимание, что на всех сроках исследования у подопытных животных число адгезировавших клеток снижено по сравнению с контролем.

Таблица 2 - Адгезивные свойства мононуклеарных фагоцитов после 30-минутной инкубации у подопытных животных_

Содержание клеточных элементов, подвергшихся адгезии, %

Перитонеальные макрофаги Альвеолярные макрофаги

1 15 30 45 60 1 15 30 45 60

к 34,8 41,9 49.04 66,16 75,97 37,95 39,03 40,77 49,21 52,63

(28,98- (36,02- (39,18- (58,5- (70,33- (31,8- (34,41- (36,24- (40,63- (43,18-

40,62) 47,78) 58,9) 73,82) 81,61) 44,1) 43,65) 45,3) 57,79) 62,08)

01 20,55* 25,22* 26,33* 30,11* 34,42* 22.39* 23,67* 26,46* 27,95* 30,5*

(16,16- (22,5- (23,57- (24,56- (27,09- (17,24- (20,01- (23,09- (17,13- (22,86-

24,94) 27,94) 29,09) 35,66) 41,75) 27,54) 27,33) 29,83) 38,77) 38,14)

02 17,33* 26,55* 40,89 49,51* 48,11* 20,54* 27,6* 35,15 33,7* 38,74*

(11,22- (22,6- (33,09- (41,93- (43,23- (13,27- (23,23- (29,35- (29,64- (35,25-

23,44) 30,49) 48,69) 57,09) 52,99) 27,81) 31,97) 40,95) 37,76) 42,23)

В скобках границы 95%ДИ

* - результаты статистически достоверны по сравнению с контролем (р<0,05)

1 день 15 день 30 день 45 день 60 день

Рисунок 1 - Распластывание перитонеальных макрофагов после 30 - минутной инкубации

* - результаты статистически достоверны по сравнению с контролем (р<0,05)

Число макрофагов, подвергшихся распластыванию, у интактных животных после рождения постепенно возрастает и достигает максимальных значений к периоду половой зрелости. У подопытных животных в перитонеальных, альвеолярных и печеночных макрофагах после рождения происходит постепенное увеличение исследуемого показателя до периода полового созревания, после чего он снижается. При этом содержание распластанных моноцитов у подопытных крысят после рождения увеличивается до периода половой зрелости, (рис. 1).

Обращает на себя внимание, что на всех сроках исследования число распластанных клеток у подопытных животных снижено по сравнению с группой контроля.

Таким образом, исследование рецепторного аппарата макрофагов различных компартментов потомства самок крыс с лекарственным поражением печени в адгезивном тесте и тесте распластывания позволило констатировать снижение экспрессии адгезивных молекул на их поверхности.

Лизосомальная активность клеточных элементов СМФ

Важная роль в процессе фагоцитоза отводится лизосомам, участвующим в кислороднезависимых механизмах бактерицидности (Маянский А.Н., Маянский Д.Н., 1983). Установлено, что у всех экспериментальных животных количество акридиноранжпозитивных клеток среди исследованных макрофагов после рождения постепенно увеличивается и достигает максимальных значений к периоду половой зрелости (рис. 2).

Обращает на себя внимание, что на всех сроках исследования число акридиноранжпозитивных клеток у подопытных животных обеих групп снижено по сравнению с контролем.

1 день 1? день 30 день 45 день 60 день

;.01

I.

1.01 -.....Анч

0.88 1.05' 1.16'

15 день 30 день 45 день 60 день

А Б

Рисунок 2 - Количество акридиноранжпозитивных моноцитов периферической крови (А) и СЦК лизосомальной активности перитонеальных макрофагов (Б) * - результаты статистически достоверны по сравнению с контролем (р<0,05) Установлено, что у интактных крысят СЦК лизосомальной активности во всех исследуемых клетках постепенно увеличивается и достигает максимума к периоду половой зрелости. У животных опытной группы 1 СЦК в перитонеальных и альвеолярных макрофагах к 15-му дню постнатального развития снижается, а затем постепенно увеличивается к 45-му дню и стабилизируется (рис. 2Б). СЦК печеночных макрофагов крысят опытной группы 1 постепенно увеличивается и достигает максимальных значений к 60-му дню. СЦК моноцитов периферической крови животных данной группы после рождения первоначально снижается, а затем постепенно увеличивается и достигает максимального значения к 60 дню развития.

У животных опытной группы 2 СЦК лизосомальной активности всех исследуемых клеток постепенно увеличивается с периода новорожденное™, достигая максимального значения к периоду половой зрелости. На всех сроках исследования СЦК подопытных животных снижен по сравнению с контролем.

Таким образом, у потомства самок крыс с лекарственным поражением печени имеет место снижение лизосомальной активности макрофагов различных компартментов.

Кислородзависимая метаболическая активность клеточных элементов СМФ

Одним из основных методов, позволяющих оценить кислородзависимый потенциал клетки, является НСТ-тест (Маянский А.Н., Маянский Д.Н., 1983; Фрейдлин И.С., 1984).

Установлено, что у интактных животных активность спонтанного НСТ-теста в перитонеальных макрофагах после рождения постепенно увеличивается. В альвеолярных макрофагах данный показатель до периода полового созревания меняется незначительно, а затем к периоду половой зрелости увеличивается и стабилизируется. В печеночных макрофагах интенсивность спонтанного НСТ-теста после рождения снижается и стабилизируется до периода половой зрелости, после чего исследуемый показатель увеличивается к окончанию периода половой зрелости, превышая при этом исходный уровень. Активность НСТ-теста в моноцитах периферической крови интактных животных после рождения постепенно увеличивается и достигает максимального значения к периоду половой зрелости (рис. ЗА).

15день ЗОдень 45день 60 день

А Б

Рисунок 3 — Активность спонтанного НСТ — теста моноцитов периферической крови (А) и стимулированного НСТ - теста печеночных макрофагов (Б) * - результаты статистически достоверны по сравнению с контролем

В опытной группе 1 активность НСТ-теста в перитонеальных макрофагах после рождения до периода половой зрелости меняется незначительно, а затем достигает максимальных значений на 60-ый день исследования. Активность НСТ-теста в альвеолярных макрофагах после рождения незначительно увеличивается до периода полового созревания, а затем стабилизируется. НСТ-тест в печеночных макрофагах после рождения имеет тенденцию к увеличению, достигая максимального значения к периоду половой зрелости. В моноцитах крови активность спонтанного НСТ-теста после рождения увеличивается, достигая максимального значения к 30-му дню постнатальной жизни, а затем наблюдается снижение исследуемого показателя.

В опытной группе 2 активность НСТ-теста в перитонеальных макрофагах после рождения постепенно увеличивается к началу периода полового

созревания и стабилизируется. В альвеолярных и перитонеальных макрофагах исследуемый показатель постепенно увеличивается и достигает максимального значения к периоду половой зрелости. В моноцитах крови активность НСТ-теста после рождения постепенно увеличивается, достигая максимального значения к 30-му дню развития, после чего отмечается стабилизация данного показателя. На всех сроках исследования активность спонтанного НСТ-теста у животных обеих опытных групп снижена по сравнению с контролем.

Стимулированный НСТ-тест позволяет определить потенциальные ресурсы клеток к возникновению «метаболического взрыва» в ответ на внедрение патогенных микроорганизмов (Гудков Г.В., Ханферян P.A., 2009; Кульчиков А.Е., 2011). У интактных животных активность стимулированного НСТ-теста в перитонеальных и альвеолярных макрофагах после рождения постепенно увеличивается.

В печеночных макрофагах активность стимулированного НСТ-теста у интактных крысят после рождения несколько снижается и стабилизируется на уровне, не превышающем показатели периода новорожденное™ (рис. ЗБ).

В моноцитах периферической крови интактных животных исследуемый показатель после рождения постепенно увеличивается, достигая максимального значения на 45-ый день постнатального развития.

У животных опытной группы 1 активность стимулированного НСТ-теста в перитонеальных макрофагах после рождения постепенно увеличивается и достигает максимального значения в период половой зрелости. В альвеолярных макрофагах данный показатель после рождения практически не изменяется. В печеночных макрофагах стимулированный НСТ-тест после рождения незначительно увеличивается с периода новорожденное™ до начала полового созревания. В моноцитах крови активность стимулированного НСТ-теста после рождения увеличивается до 30-го дня постнатального развития, а затем отмечается незначительное снижение исследуемого показателя.

У животных опытной группы 2 активность стимулированного НСТ-теста в перитонеальных и альвеолярных макрофагах после рождения постепенно увеличивается и достигает максимального значения в период половой зрелости. В печеночных макрофагах исследуемый показатель после рождения увеличивается, достигая максимального значения к периоду полового созревания, после чего отмечается постепенное снижение этого показателя. В моноцитах крови животных опытной группы 2 интенсивность стимулированного НСТ-теста после рождения постепенно увеличивается, также достигая максимального значения к 30-му дню исследования, после чего отмечается стабилизация данного показателя.

Обращает на себя внимание, что на всех сроках исследования активность стимулированного НСТ-теста в макрофагах различных компартментов у подопытных животных обеих экспериментальных групп снижена по сравнению с группой контроля.

170 160 150 1-tO ПО 120 110 ■ 100 90 SO 70

Рисунок 4 - Коэффициент стимуляции НСТ-теста моноцитов периферической крови

* - результаты статистически достоверны по сравнению с контролем (р<0,05)

Кроме того, на большинстве сроков исследования коэффициент стимуляции НСТ-теста макрофагов различных компартментов подопытных крысят снижен по сравнению с контролем, что указывает на угнетение их кислородзависимой метаболической активности (рис. 4).

Цитохимическая характеристика клеточных элементов СМФ

СДГ, наряду с НСТ-тестом, позволяет оценить активность кислородзависимых механизмов киллинговой активности фагоцитов.

Установлено, что у интактных крысят интенсивность цитохимической реакции в различных макрофагах на большинстве сроков исследования после рождения постепенно увеличивается и достигает максимального значения в период половой зрелости. Аналогичная закономерность выявлена у крысят опытной группы 1. Интенсивность цитохимической реакции у животных опытной группы 2 после рождения меняется незначительно.

На всех сроках исследования интенсивность цитохимической реакции на СДГ в макрофагах различных компартментов потомства самок крыс с экспериментальным лекарственным поражением печени снижена по сравнению с контролем, что согласуется с данными, полученными при изучении интенсивности НСТ-теста, и указывает на угнетение кислородзависимого метаболизма.

Миелопероксидаза является ключевым ферментом, обеспечивающим образование продуктов «респираторного взрыва» - активных форм кислорода, принимающих активное участие в киллинге захваченных микроорганизмов (Маянский А.Н., Маянский Д.Н., 1983).

Установлено, что количество клеток с положительной реакцией на пероксидазу с возрастом уменьшается, достигая минимальных значений к периоду половой зрелости. При этом число бензидинпозитивных клеток подопытных крысят существенно снижено по сравнению с контролем (рис. 5).

Основным энергетическим субстратом различных клеточных элементов является гликоген (Луговская С.А., 1997; Турицына Е.Г., 2009; Сурков А.Н., 2012). У интактных животных содержание ШИК - позитивного материала после рождения постепенно увеличивается и достигает максимума к периоду половой зрелости. Исключение составили перитонеальные макрофаги у которых содержание гликогена после рождения к подсосному периоду

снижается, а затем вновь увеличивается и достигает максимального значения в период половой зрелости.

Рисунок 5 - Содержание бензидинпозитивных печеночных макрофагов * - результаты статистически достоверны по сравнению с контролем (р<0,05)

У подопытных крысят обеих групп содержание гликогена в моноцитах, перитонеальных и печеночных макрофагах после рождения снижается и достигает минимального уровня на 30-й день постнатальной жизни, а затем увеличивается к периоду половой зрелости (рис. 6).

1 день 15 день 30 день 4 5 день 60 день

Рисунок 6 - Содержание ШИК-позитивных перитонеальных макрофагов * - результаты статистически достоверны по сравнению с контролем (р<0,05)

Содержание гликогена в легочных макрофагах опытной группы 1 после рождения существенно снижается, а затем резко увеличивается к периоду половой зрелости. В опытной группе 2 активность гликогена в альвеолярных макрофагах до периода половой зрелости практически не изменяется, а затем увеличивается к периоду половой зрелости до уровня, превышающего исходный.

Таким образом, в макрофагах различных компартментов подопытных животных на большинстве сроков исследования выявлено увеличение содержания ШИК-позитивного материала у подопытных крысят, что косвенно может свидетельствовать о снижении интенсивности метаболических процессов.

Фагоцитарная активность клеточных элементов СМФ

Оценка фагоцитарной активности макрофагов проводилась комплексно с определением фагоцитарного показателя и фагоцитарного индекса с использованием золотистого стафилококка (S. aureus).

Установлено, что в процессе постнатального развития активность фагоцитоза у интактных крысят в перитонеальных и печеночных фагоцитах

постепенно увеличивается и достигает наибольших значений к 30-му дню онтогенеза, после чего происходит его незначительное снижение на 45-ый и 60-ый день. Иная зависимость выявлена при изучении фагоцитарного показателя альвеолярных макрофагов и моноцитов периферической крови, где наблюдалось небольшое снижение фагоцитарной активности на 45-е сутки исследования (рис. 7).

При исследовании интенсивности фагоцитоза отмечено повышение количества бактерий, захваченных макрофагами, по мере увеличения срока постнатального развития (табл. 3).

1деш. 15 День ЗОдеиь 45день бОдснь

Рисунок 7 — Фагоцитарный показатель суточной культуры S. aureus альвеолярных макрофагов

* - результаты статистически достоверны по сравнению с контролем (р<0,05) Таблица 3 - Фагоцитарный индекс S. aureus перитонеальных и печеночных

Группа Фагоцитарный индекс, %

День Перитонеальные макрофаги Печеночные мак рофаги

1 15 30 45 60 1 15 30 45 60

К 4,94 4,55 5,46 6,18 6,61 3,01 3,21 3,49 3,2 3,76

(4,14- (3,81- (4,76- (4,77- (5,92- (2,52- (2,58- (3,24- (2,87- (3,04-

5,74) 5,29) 6,16) 7,59) 7,3) 3,5) 3,84) 3,74) 3,53) 4,48)

01 2,73* 2,48* 3,15* 3,06* 3,28* 1,82* 1,95 2,29* 1,95* 2,09*

(1,93- (1,7- (2,52- (2,28- (2,73- (1,15- (1,13- (1,45- (1.4- (1,62-

3,53) 3,26) 3,78) 3,84) 3,83) 2,49) 2,77) 3,13) 2,5) 2,56)

02 2,59* 2,89* 3,16* 3,49* 3,31* 1,78 2,09 2,53* 2,26* 2,88

(1,45- (2,19- (2,46- (2,75- (2,61- (1,02- (1,58- (1,98- (1,75- (1,9-

3,73) 3,59) 3,86) 4,23) 4,01) 2,54) 2,6) 3,08) 2,77) 3,86)

В скобках границы 95%ДИ

* - результаты статистически достоверны по сравнению с контролем (р<0,05)

Для определения степени завершенности и эффективности фагоцитоза была произведена оценка числа погибших в фагоцитах бактерий. Отмечено, что бактерицидная активность в большей степени выражена у альвеолярных макрофагов и макрофагов перитонеального экссудата (рис. 8). При этом во всех исследуемых клетках киллинговая активность у подопытных крысят снижена.

В целом полученные результаты свидетельствуют об угнетении фагоцитарных свойств клеток СМФ у крысят, рожденных от матерей с лекарственным поражением печени.

6S.S9 64.17 71.34 73.22 77.15

47.07* 58.64*

37.57* 3?.42*

44.84*

34.39*

1 день I? день 30 день 45 день 60 день

Рисунок 8 - Киллинговая активность суточной культуры S. aureus альвеолярных макрофагов

* - результаты статистически достоверны по сравнению с контролем (р<0,05) Ловушкообразующая способность клеточных элементов СМФ Для оценки внеклеточной бактерицидности мононуклеаров проводилась оценка их способности к образованию внеклеточных ловушек.

к

ш

1 день J 5 день 30 день 45 день 60 день

60 день 4 5 день 30 день 15 день I день

28.65* 19.83

пл 1Ш* 22.

тг 25.:«* 1634

■ К

»01

А Б

Рисунок 9 — Количество внеклеточных ловушек (А), и длина хвоста макрофагальных внеклеточных ловушек (Б), образуемых альвеолярными макрофагами

* - результаты статистически достоверны по сравнению с контролем (р<0,05) При анализе числа ловушек отмечается тенденция к увеличению их числа к периоде половой зрелости (рис. 9А).

При этом установлено, что у подопытных крысят обеих групп число макрофагов, образующих ловушки, существенно снижено. Вместе с тем, установлено увеличение длины их хвостов, что, согласно данным литературы, свидетельствует об угнетении активности внеклеточных ловушек (рис. 9Б) (Долгушин И.И. с соавт., 2012).

При изучении фагоцитарного индекса выявлено, что количество бактерий в ловушках нарастает соответственно сроку постнатального развития во всех исследуемых группах. Исключение составили перитонеальные макрофаги первой опытной группы на 15-ый и 45-ый день экспериментального исследования, альвеолярные макрофаги второй опытной группы на 45-ый день исследования и моноциты крови первой опытной группы на 60-ый и второй опытной группы на 45-ый день онтогенеза.

При этом киллинговая активность с возрастом во всех исследуемых клетках как у интактных, так и у подопытных крысят увеличивается, у подопытных животных данный показатель снижен по сравнению с контролем (рис. 10).

Рисунок 10 - Киллинговая активность моноцитарных внеклеточных ловушек * - результаты статистически достоверны по сравнению с контролем (р<0,05)

Таким образом, выявлено нарушение способности макрофагов к ловушкообразованию, а также снижение функциональной активности ловушек у потомства матерей с лекарственным поражением печени.

Исследование стрессрезистентности потомства самок крыс с лекарственно-ндуцированным поражением печени Мононуклеарным фагоцитам принадлежит ключевая роль в процессах адаптации организма к стрессорным факторам (Маянский А.Н., Маянский Д.Н., 1983; Харин Г.М., 1994). В связи с этим у экспериментальных животных моделировался иммобилизационный стресс (Брюхин Г.В., Грачев А.Ю., 1994).

Выявлено, что на фоне моноцитоза у подопытных крысят отмечается снижение численного состава тканевых макрофагов. Такое перераспределение числа макрофагов, вероятно, связано с негативным воздействием медиаторов стресса на дифференцировку моноцитов.

При исследовании стрессрезистентности кислородзависимых механизмов бактерицидное™ выявлено, что активность макрофагов в НСТ-тесте у подопытных животных снижена (табл. 4).

Аналогичная закономерность выявлена при исследовании процессов адгезии и распластывания. Кроме того, обращает на себя внимание, что во всех изучаемых компартментах число прилипших и распластанных клеток у интактных животных существенно выше, чем у подопытных.

Кроме того, установлено угнетение активности и интенсивности фагоцитоза. Отмечено стрессиндуцированное угнетение кислороднезависимой биоцидности макрофагов всех экспериментальных групп, выражающееся в снижении лизосомальной активности.

Таким образом, выявлено неоднозначное изменение устойчивости мононуклеаров к экстремальному воздействию, что может быть связано с неодинаковой степенью адаптационных возможностей различных клеточных структур, лежащих в основе реализации функционального потенциала системы.

Таблица 4 - Оценка сочетанного влияния поражения гепатобилиарной системы матери и иммобилизационного стресса на фагоцитарную активность 60-

дневных экспериментальных животных

Клетки К К стресс 01 01 стресс 02 02 стресс

Содержание Перит. 12,31 10,95" 7,39' 4,89аЬс 9,55' 8,04""

106/орган (10,21- (9,34- (6,9- (3,91- (9,1- (6,94-

14,41) 12,56) 7,88) 5,87) 10,0) 9,14)

Альв. 6,66 5,13" 3,5' 1,38аЬс 4,06" 1,79аЬ°

1071 мл (6,19- (4,07- (3,09- (0,6- (3,86- (1,32-

7,13) 6,19) 3,91) 2,16) 4,26) 2,26)

Моноц. 6,67 9,78ь 3,63" 10,23'"® 4,2' 8,88'"°

105/1мл (6,06- (7,вб- (3,26- (6,92- (3,79- (6,23-

7,28) ПЛ) 4,0) 13,54) 4,61) 11,53)

Печен. 12,65 9,03" 19,6" 8,39'"° 18,88" 9,22""°

10%рган (11,42- (7,11- (18,31- (7,31- (16,84- (7,77-

13,88) 10,95) гО,89) 9,47) 20,92) 10,67)

Фагоцитоз Перит. 95,67 74,33" 74,83' 59,83"" 82,33' 58,67'"

латекса. (85,81- (66,43- (60,41- (52,77- (66,98- (50,77-

105,53) 82,23) 89,25) 66,89) 97,68) 66,57)

Фагоцитарный Альв. 85,08 60,17" 64,41' 48,83'"° 69,67' 56,67'"°

показатель, % (74,48- (53,68- (54,77- (44,28- (64,38- (50,28-

95,68) 66,66) 74,05) 53,38) 74,96) 63,06)

Моноц. 96,83 57,83" 73,33' 51,83'"° 80,58' 67,17"°

(90,75- (50,25- (69,12- (45,58- (75,07- (55,39-

102,91) 65,41) 77,54) 57,63) 86,09) 78.95)

Печен. 87,58 61,83" 59,42' 40,83'" 72,16' 66.33"1*

(76,6- (48,64- (48,97- (33,89- (63,62- (49,91-

98,56) 75,02) 69,87) 47,77) 80,7) 82,75)

Фагоцитоз латекса, Перит. 11,64 4,76" 8,26' 5,35'"° 7,91' 4,2""°

Фагоцитарный (9,6413,64) (1,18,42) (6,3810,14) (3,846,86) (7,528,3) (2,615,79)

индекс, % Альв. 9,89 3,74" 4,98" 1,97"° 5,23' 3,24""°

(8,11- (1,6- (3,8- (0,34- (4,0- (1,85-

11,67) 5,88) 6,16) 3,6) 6.46) 4,63)

Моноц. 11,25 6,17ь 6,51' 4,85'"° 7,73' 3,83""°

(9,25- (5,68- (4,9- (4,2- (6,99- (3,34-

13,25) 6,66) 8,12) 5,5) 8,47) 4,32)

Печен. 9,6 4,4" 5,27' 4,3*ы 5,94' 2,44""°

(7,56- (3,81- (4,7- (4,07- (4,51- (1,74-

11,64) 4,99) 5,84) 4,53) 7,37) 3,14)

Лизосомапьная Перит. 81,27 51,89" 52,18' 54,28""° 65,27* 31,62"

активность, (72,41- (46,48- (45,07- (36,8- (58,25- (19,55-

90,13) 57,3) 59,29) 71,76) 72,29) 43,69)

Число акридин- Альв. 93,27 63,67" 55,36" 36,01""° 67,45' 28,33'"°

оранжпозитивных (86,21- (46,46- (46,85- (26,25- (55,16- (14,65-

клеток, % 100,33) 80,88) 63,87) 45,77) 79,74) 42,01)

Моноц. 91,73 40,5" 51,54" 26,67""° 72,64' 20,33'"

(83,89- (23,43- (45,01- (14,87- (60,94- (6,49-

99,57) 57,57) 58,07) 38,47) 84,34) 34,17)

Печен. 78,56 58,33" 53,36' 51,66'"° 59,82' 52,5'"

(66,21- (53,59- (46,11- (45,39- (54,16- (45,41-

90,91) 63,07) 60,61) 57,93) 65,48) 59,59)

Лизосомальная Перит. 2,27 1,64ь 1,25' 0,63'" 1,22" 0,58'"

активность, (1,82- (1,33- (0,94- (0,34- (0,97- (0,21-

2,72) 1,95) 1,56) 0,92) 1,47) 0,95)

СЦК, % Альв. 2,11 1,51" 1,36' 1,34""° 1,29" 0,75"

(1,82- (1,31- (1,22- (1,03- (1,15- (0,44-

2,4) 1,71) 1,5) 1,65) 1,43) 1,06)

Продолжение таблицы 4

Моноц. 1,98 2,71" 1,16' 1,14'"* 1,21' 0,5 Г""

(1,77- (2,28- (0,69- (0,87- (0,82- (0,22-

2,19) 3,14) 1,63) 1,41) 1,6) 0,8)

Печен. 1,4 0,75" 0,97* 0,37'" 1,17 1,07"°

(1,17- (0,38- (0,72- (0,23- (0,82- (0,02-

1,63) 1,12) 1,22) 0,51) 1,52) 0,32)

НСТ спонтанный, % Перит. 38,25 25,5Ь 19,25" 10,33"* 19,85' 12,17"*

(33,9- (18,74- (13,57- (6,9- (16,77- (7,0-

42,6) 32,26) 24,93) 13,76) 22,93) 17,34)

Альв. 35,08 29,33" 21,77* 12,83*" 21,17* 15,33*"

(28,69- (24,59- (18,36- (8,64- (17,54- (10,27-

41,47) 34,07) 25,18) 17,02) 24,8) 20,39)

Моноц. 36,17 22,33" 21,08* 17,17*"° 22,5* 13,5*"°

(30,9- (16,98- (16,64- (12,31- (18,03- (10,8-

41,44) 27,68) 25,52) 22,03) 26,97) 16,2)

Печен. 23,27 19,5Ь 14,82* 7,83*" 14,33" 6,83*"

(18,55- (14,74- (11,45- (5,54- (11,06- (2,64-

27,99) 24,26) 18,19) 10,12) 17,6) 11,02)

нет Перит. 57,73 54,16" 18,82' 16,67*" 20,64" 16,83'"

стимулированный, % (53,4462,02) (46,1862,14) (15,5722,07) (11,9321,41) (16,4124,87) (11,8121,85)

Альв. 48,72 38,17" 19,73' 13,17"* 23,82" 16,83*"

(45,31- (31,45- (15,71- (11,25- (18,43- (13,46-

52,13) 44,89) 23,75) 15,09) 29,21) 20,2)

Моноц. 41,54 26,33" 21,45' 13,33'" 22,82* 11,67*"

(35,78- (19,69- (14,2- (7,57- (16,27- (7,63-

47,3) 32,97) 28,7) 19,09) 29,37) 15,71)

Печен. 20,82 21,67 16,54' 8,5" 15,36" 7,67"

(17,8- (18,24- (13,58- (5,29- (13,17- (4,48-

23,84) 25,1) 19,5) 11,71) 17,55) 10,86)

а - статистически значимое влияние экспериментального поражения печени матери Ь - статистически значимое влияние иммобилизационного стресса с - статистически значимое взаимодействие между факторами

Итак, с одной стороны на плод оказывают негативное влияние токсичные продукты из организма матери (продукты азотистого обмена, цитотоксические лимфоциты, аутоантитела, иммунные комплексы), образующиеся в результате нарушения функций печени и проникают через гемато-плацентарный барьер в организм плода. При этом аутоантитела, поступающие из организма матери, могут вызывать развитие патологических аутоимунных реакций, что приводит к истощению адаптационных способностей организма.

С другой стороны, стресс материнского организма приводит к запуску целого каскада нейрогормональных сдвигов у плода, что связано с проникновением через гемато-плацентарный барьер кортикотропина и кортикостероидов (Резников А.Г., 2004), являющихся основными мощными медиаторами стресс - реализующей системы. Длительное воздействие данных продуктов на различных уровнях приводит к структурным и функциональным перестройкам у плода. В частности, негативное влияние пренатального стресса распространяется на кроветворную систему, вызывая нарушение миелоидного кроветворения и моноцитопоэза. В результате нарушается способность образовывать полноценные тканевые макрофаги и формируется неполноценность их функциональных свойств.

ВЫВОДЫ

1. Экспериментальное лекарственное поражение печени матери вызывает изменение количественных показателей мононуклеарных фагоцитов, выражающееся в перераспределении клеточных элементов — повышение числа макрофагов печени и снижение численности макрофагов других компартментов.

2. Экспериментальная лекарственная патология печени матери вызывает изменение функционального статуса мононуклеарных фагоцитов, выражающееся в снижении фагоцитарной активности (адгезивных свойств, поглотительной способности, кислородзависимых и кислороднезависимых механизмов бактерицидности, метаболической активности, энергетического потенциала).

3. Экстрагенитальная патология печени матери лекарственного генеза обусловливает нарушение ловушкообразующей способности тканевых макрофагов и моноцитов периферической крови (снижение числа активных внеклеточных ловушек, их фагоцитарного индекса и киллинговой активности) у потомства.

4. Экспериментальная патология печени матери, обусловленная введением лекарственных средств, приводит к снижению стрессрезистентности мононуклеарных фагоцитов потомства.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Шопова, A.B. Влияние лекарственно - индуцированной патологии гепатобилиарной системы на функциональную активность мононуклеарных фагоцитов различных компартментов у потомства (экспериментальное исследование) / A.B. Шопова // Материалы III Международной (X Итоговой) научно-практической конференции молодых ученых. - Челябинск: Изд-во «Челябинская государственная медицинская академия», 2012. — С. 390-392

2. Шопова, A.B. Влияние патологии гепатобилиарной системы матери на ловушкообразующую способность макрофагов различных компартментов у потомства / A.B. Шопова, Г.В. Брюхин // Актуальные проблемы лабораторной диагностики и биотехнологии: Материалы Всероссийской научно-практической конференции, г. Кемерово, 13-14 сентября 2012. - Кемерово, 2012. - С. 123-125

3. Шопова, A.B. Влияние хронической патологии печени матери на реакции кислородзависимого метаболизма мононуклеаров различных компартментов у потомства / A.B. Шопова // Физиологические механизмы адаптации и экология человека: Материалы второй всероссийской научно-практической конференции с международным участием, г. Тюмень, 23 октября 2012. - Тюмень: «Лаконика», 2012. - С. 114-117

4. Шопова, A.B. Исследование рецепторного аппарата макрофагов различных компартментов у потомства самок крыс с лекарственным поражением печени в различные периоды постнатального онтогенеза / A.B. Шопова, Г.В. Брюхин // Медицинский академический журнал. Приложение. — 2012. - С. 107-109

5. Shopova, A. Study of extracellular networks of mononuclear phagocytes in the brood of the female rats with drug induced hepatitis / A. Shopova, G. Bryukhin //

«Scientific enquiry in the contemporary world: theoretical basics and innovative approach». FL, USA, L&L Publishing. - 2012.-Vol. l.-P. 100-104

6. Шопова, A.B. Активность внеклеточных ловушек макрофагов различных компартментов у потомства самок крыс с лекарственным поражением печени / Г.В. Брюхнн, А.В. Шопова // Иммунология. — 2013. -№6. - С. 304-309

7. Шопова, А.В. Исследование реакций кислородзависимого метаболизма фагоцитов различных компартментов у потомства самок крыс с лекарственной патологией печени / А.В. Шопова // Вестник Челябинского государственного университета. - №7 (298). - 2013. - С. 133-135

8. Шопова, А.В. Исследование функционального состояния мононуклеаров различных компартментов у потомства самок крыс с экспериментальной лекарственной патологией печени / А.В. Шопова // Материалы IV Международной (XI Итоговой) научно-практической конференции молодых ученых. - Челябинск: Изд-во Южно-Уральского государственного университета, 2013. - С. 265-268

9. Шопова, А.В. Ловушкообразующая способность альвеолярных и перитонеальных макрофагов у потомства самок крыс с экспериментальной лекарственной патологией гепатобилиарной системы / Г.В. Брюхин, А.В. Шопова // Морфология. - 2013. - Том 144. - №5. - С. 134

10.Шопова, А.В. Ловушкообразующая способность моноцитов периферической крови у потомства самок крыс с лекарственным поражением печени / Г.В. Брюхин, А.В. Шопова, Т.М. Гиленко // Материалы научно-практической конференции «Основные достижения научных школ ЮУГМУ», 2014. - С. 3235

11. Шопова, А.В. Оценка фагоцитарной и киллинговой активности моноцитов периферической крови у потомства самок крыс с экспериментальной лекарственно-индуцированной патологией печени / Г.В. Брюхин, А.В. Шопова // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. — 2014. — №2. — С. 52-56

12. Шопова, А.В. Характеристика фагоцитарной и лизосомальной активности макрофагов различных компартментов у потомтства самок крыс с лекарственной патологией печени при иммобилизационном стрессе / А.В. Шопова // Роль патологии печени матери в нарушении развития, реактивности и резистентности потомства в условиях эксперимента. — Челябинск: ООО «Абрис-Принт», 2014. - С. 56-61

13. Шопова, А.В. Характеристика функциональной активности клеток Купфера у потомства самок крыс с лекарственной патологией печени / Г.В. Брюхин, А.В. Шопова // Роль патологии печени матери в нарушении развития, реактивности и резистентности потомства в условиях эксперимента. — Челябинск: ООО «Абрис-Принт», 2014. -С. 51-55

На правах рукописи

Шопова Анастасия Валерьевна

ФАГОЦИТАРНАЯ АКТИВНОСТЬ И ЛОВУШКООБРАЗУЮЩАЯ СПОСОБНОСТЬ МАКРОФАГОВ РАЗЛИЧНЫХ КОМПАРТМЕНТОВ У ПОТОМСТВА САМОК КРЫС С ЛЕКАРСТВЕННЫМ ПОРАЖЕНИЕМ

ПЕЧЕНИ

03.03.04 - Клеточная биология, цитология, гистология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Оренбург-2015

Отпечатано в ПЦ «Принтмед». 454048, г. Челябинск, ул. Яблочкина, 23, тел.(351) 30-67-37, rinmed@mail.ni. Подписано к печати 12.03.15 г. Объём 1 п.л. Формат 64x84. Гарнитура «Times New Roman». Бумага для офисной техники, 80 мг/м2. Тираж 100 экз. Заказ 2052/15.