Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Органоспецифическая характеристика макрофагов в норме, при злокачественном росте и при стимуляции иммунной системы антигеном и ретиноидами

ВАК РФ 03.00.11, Эмбриология, гистология и цитология

Автореферат диссертации по теме "Органоспецифическая характеристика макрофагов в норме, при злокачественном росте и при стимуляции иммунной системы антигеном и ретиноидами"

АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК СССР

НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ МОРФОЛОГИИ

ЧЕЛОВЕКА

На правах рукописи

БАХШИНЯН МАРГАРИТА ЗАВЕНОВНА

УДК: 611.018.. 153+ 612.112.3

ОРГАНОСПЕЦИФИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МАКРОФАГОВ В НОРМЕ, ПРИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННОМ РОСТЕ И ПРИ СТИМУЛЯЦИИ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ АНТИГЕНОМ И РЕТИНОИДАМИ

Работа выполнена на кафедре гистологии, цитологии и эмбриологии ордена Трудового Красного Знамени государственного медицинского института Министерства здравоохранения Арм. ССР.

Официальные оппоненты:

1. Доктор медицинских наук, профессор 3. С. Хлыстова.

2. Доктор медицинских наук, профессор А. И. Радостина.

3. Доктор медицинских наук Ю. А. Ровенский.

Учреждение, дающее отзыв о научно-практической ценности диссертации—Московский медицинский стоматологический институт им. Н. А. Семашко.

Защита состоится «--»--------- 1989 года в---чае.

на заседания Специализированного совета (Д 001.04.01) при НИИ морфологии человека АМН СССР.

Адрес: 117818, г. Москва, ул. Цюрупы, 3.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института морфологии АМН СССР.

Автореферат разослан «--» —------1989 г.

Ученый секретарь Специализированного совета кандидат биологических наук

В. И. АЛТУХОВА

: .. ■ " ; ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблеш. В настоящее время установлено, что клетки, у которых фагоцитоз является основной функцией, относят к системе мононуклеарных фагоцитов - СМФ. Данный термин был принят • большинством специалистов и опубликован в бюллетене ВОЗ в 1972 году. Система мононуклеарных фагоцитов включает.в себя макрофаги, моноциты и их костно-мозговые предшественники.

Установлено, что макрофаги синтезируют ряд биологически активных веществ, среди которых наиболее широким спектром регулирующего воздействия обладают простагландины, а также интерлейкин-I /¿¿IW 'Wilkinson, & 1985,^ July ed <х£ ISPS, (vU- Zhf-

son 1988/. Известно также, что макрофаги зачастую являются регуляторами иммунных реакций, т.к. синтез ими практически всех иммуностимулирующих веществ связан с активацией их антигенным материалом. Кроме того, установлено, что отдельные представители этой клеточной популяции синтезируют биологически активные вещества и без стимуляции /А.А.Покровский с соавт., 1979/. Являясь высо-корзактивной клеткой, макрофаг индуцирует, подавляет, адаптирует или модифицирует различные свои функции, поддерживая гомеостаз в организме. Существенную роль при этом играют: фагоцитоз, секреция различных факторов и межклеточные взаииодействия. Именно этим и объясняется способность макрофагов быстро включаться в развитие того или иного патологического процесса /В.А.Козлов, Н.Ю.Громыхи-на, 198 V.

В настоящее время ¡З^Сов-чтап 1986/ отмечается, что в патогенезе ряда заболеваний лежат качественные и количественные нарушения фагоцитоза макрофагами, осуществляемые в основном за счет следующих четырех механизмов: '

1. Нарушение микроциркуляции органов, сопровождающиеся уменьшением притока макрофагов к тканям.

2. Уменьшение массы паренхимы органов, содержащих.фиксированные макрофаги /например, при циррозе или спленэктомии/.

3. Понижение эффективности oi/сонизации при дефиците комплемента ИЛИ

4. Качественная дисфункция макрофагов вследствие дефицита ре-гулпторных цитокинов, таких как ^-интерферон или прямого тормозящего действия на макрофаги, например, при вирусной инфекции.

Среди клеток соединительной ткани макрофагам принадлежит ведущее место в обменных реакциях, в естественном и специфическом иммунитете, в воспалении и регенерации, в противоопухолевой зац:<те

/Д.Н.Маянский, 1982, 1984, Л М 1988/. Изложенное

явилось причиной многочисленных исследований макрофагов /Я.Карр,

1978, Н.А.Юрина, А.И.Радостина, 1978, 1987, л» ^¿гл е^аб 1977,

1979, 1982, Я^сеё г^е/ш? и др/, анализ киторых выявил, что объектом исследований явился активированный макрофаг, изученный, в основном, в условиях 1п 'Иго в аспекте его иммунологических и биохимических характеристик. Морфологические исследования СМФ выявили присущие всем ее представителям общие признаки - активную клеточную поверхность и развитый лизосомный аппарат. Между тем, с учетом широкого распространения макрофагов в организме, большого количества синтезируемых ими биологически активных веществ, высоких адаптационных возможностей этих клеток, а также отсутствия специальных исследований макрофагов различной тканевой локализации в условиях 'ьп становится понятной необходимость изучения органоспецифичвских структурно-функциональных особенностей макрофагов при различных состояниях организма. Результаты исследований подобного рода могут Стъ более целостными и претендовать на большую глубину и полноценность при изучении макрофагов в норме, что является почти не исследованным вопросом^ в условиях мобилизации иммунной системы организма, например, при активации тканевым антигеном. В связи с широким распространением онкологических заболеваний большую актуальность представляет исследование СМФ организма олухоленосителя. Сравнительно недавно в связи с большим вниманием, уделяемым в последние годы иммунотерапии злокачественных новообразований выявлены адъювантные свойства у ретиноидов - синтетических аналогов витамина А. Механизм их антиканцерогенного эффекта является предметом отдельных исследований /Ю.И.Афанасьев, 1982, 1984, 1986; К.И.Плецитый с соавт., 1982, 1984;-Г^^Л^ /?. Уо^/е^ Ис1пг 1981; З^Огует/аРаъгу-/> 1981/. Однако и в настоящее время в этом вопросе имеется много невыясненных сторон, что делает весьма актуальным изучение макрофагов в организма опухоленосителя под воздействием ретиноидов. Дискуссионными являются по сегодняшний день вопросы, связанные с пролиферацией и дифференцировкой макрофагов. Отсутствие специальных исследований процессов, лежащих в основе высокой функциональной активности макрофагов делает зеоьла актуальным их исследование в указанном аспекте.

Таким образом, имеется ряд спорных и мало исследованных вопросов, касающихся органоспецифичвских особенностей структуры и функции макрофагов.

Цель п задачи исследования. Цель диссерташп - исследование рга.юапе';; зч$е::;:х ~ср>о;>'н:-:л:ю:;а:шшх особен.юсуел клоток СлФ -ло?1!С и при рс.,ш!ч;шх состояниях организма, э такяв исследование зу^ост:, про; ьоиоз, обеспечивающих высокие функциональные возможности макрофагов.

С учетом сказанного были определены следующие задачи данного исследования:

1. Исследование структурно-функциональных признаков макрофагов различной органной локализации на предмет выявления их органо-специфических особенностей в норме.

2. Исследование реактивных изменений различных представителей СМФ при их активации тканевым антигеном и ретиноидами.

3. Изучение изменения органоспецифических особенностей клеток СМФ при различных разновидностях злокачественного роста и исследование воздействия ретиноидов на макрофаги различной органной локализации в организме опухоленосителя.

Количественное цитохимическое исследование содержания ДНК и ее синтез в макрофагах в норма,- в организме опухоленосителя под воздействием ретиноидов и без них и в условиях антигенной стимуляции.

Научная новизна. Впервые выявлены и описаны структурно-функциональные особенности макрофагов печени, селезенки, легкого, лимфатических узлов и дермы в норме и при различных состояниях организма: активации тканевым антигеном, ретиноидами и в условиях опухолевого роста. При этом впервые:

- представлены морфометрические характеристики макрофага в норме и активированного в каждом из исследованных органов, основанные

на измерении его фагоцитарной функции и содержания в его цитоплазме кислой фосфатазы.

- исследованы, описаны, подвергнуты морфометрическому анализу изменения макрофагов перечисленных органов в организме опухоленосителя: в динамике химически индуцированного канцерогенеза, при росте трансплантированных опухолей и в условиях лейкоза.

- выявлены органные различия в фагоцитарной функции макрофагов в организме опухоленосителя.

- получены новые данные о повышении фагоцитарной функции, количественного содержания, максимальной выраженности типичных ультраструктурных признаков макрофагов различных органов при воздействии ретиноидами.

- установлена зависимость описаино;: активации ¡.'.акро':1агоз: I/ от

использованной разновидности ретиноида - преимущественно от полностью трансметилового эфира ретиноевой кислоты, реже от метилового эфира 7,8 дегидроретиноевой кислоты, 2/ от способа его введения - преимущественно парентеральный, 3/ от растворителя, на котором он готовился - преимущественно масляный, V и независимости от дозы . ■

- ооосновано положение о том, что в основе высоких функциональных возможностей макрофагов, имеющих различные проявления, лежит процесс полиплоидизации, происходящий на стадии предшественников макрофагов, вероятнее всего, моноцитов.

- доказано, что активация макрофагов под воздействием ретиноидов обусловлена интенсификацией в них синтеза ДНК, что способствует ускорению дифференцировки макрофагов.

- доказано, что в организме опухоленосителя /перевивные опухоли

и ранняя стадия химически индуцированного канцерогенеза/ происходит активация макрофагов, выражающаяся в притоке в органы молодых форм-предшественников. Процесс этот достигает значительного усиления под влиянием ретиноидов.

- обоснована принадлежность к макрофагической системе многоядерных клеток /с высоким содержанием ДНК/, характеризующихся высокой функциональной активностью.

Положения, вносимые на защиту. I. Макрофаги различных органов /печени, селезенки, легкого, лимфатических узлов и дермы/ имеют выраженную органную структурно-функциональную характеристику. Тканевое окружение макрофагов обусловливает дифференцировку их предшественников, занесенных током крови в органы в плане формирования у них определенных структурно-функциональных признаков, связанных с функцией органа. 2. Макрофаги обладают высокой реактивностью, проявления которой многообразны в зависимости от локализации клеток и от воздействия на организм. 3. Реакция макрофагов при опухолевом росте /трансплантированные опухоли/ в организме опухоленоси-теля отличается от реакции при химически индуцированном канцерогенезе. В первом случае наблюдается активация основных признаков, присущих макрофагам, во втором, особенно по мере гфогрессии заболевания, происходит угнетение указанных признаков. Макрофаги в организме, пораженном лейкозом, характеризуются низкой реактивностью. 4. Ретиноиды, особенно при парентеральном введении их масляных растворов, способствуют активации основных структурно-функциональных признаков макрофагов исследованных органов. В условиях злокачественного роста ретиноиды способствуют значительному прояв-

лению потенциальных возможностей макрофагов, направленных на восстановление резко нарушенного гомеостаза. 5. В основе высокой и многообразной функциональной активности макрофагов лежит процесс полиплоидизации, происходящий до поступления их непосредственных предшественников в органы. Процесс этот активируется при росте трансплантированных опухолей и при воздействии ратиноидами.

Значение полученных результатов и их внедрение в практику.

В результате проведенного исследования сформулирован ряд положений, являющихся существенным вкладом в современные представления о структурных и функциональных особенностях макрофагов различных органов. Установление факта полиплоидности макрофагов позволит объяснить с новых позиций высокую функциональную активность макрофагов, монет составить перспективное направление для дальнейшего исследования макрофагов при различных /состояниях/ воздействиях на организм.

Теоретическое значение проведенных исследований состоит в решении научной проблемы, заключающейся в значительном расширении существующих представлений об иммуноморфологии макрофагального звена организма. Установленные закономерности строения и функции макрофагов различных органов, изменения их реактивности при различных воздействиях на организм могут быть использованы в преподавании курса иммунологии студентам медицинских вузов. Исследование реактивности макрофагов в условиях злокачественного роста под воздействием ретиноидов и без них может служить фактическим материалом для разработки основ ишунотерапевтически правильного подхода к лечению опухолевых заболеваний, обоснованию применения способа, доз и разновидностей ретиноидов.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано в печати 48 работ, получено удостоверение на рационализаторское предложение, авторское свидетельство.

Внедрение. Материалы диссертации внедрены в программу учебного процесса в качестве учебного пособия - для проведения лекционных занятий со студентами на кафедрах гистологии с цитологией и эмбриологией I Ленинградского медицинского института им.ак.И.П.Павлова от 15.12.1981г. /совместно с А.В.Азнауряном, Э.С.Акопджанян, С.ЦЛилингарян, Н.А.Григорян, И.С.Каспаровой/ и Ереванского медицинского инзтитута; также при проведении практических и лекционных занятий - на кафедре гистологии с цитологией и эмбриологией I !МИ им.И.М.Сеченова /акт внедрения № Н 5-12 от 13.02.89 - протокол II? 18 методического совещания кафедры гистологии I ММИ/.

На разработку "Способа определения фагоцитарной активности макрофагов" выдано удостоверение на рационализаторское предложение /№ 78 от 19/Ш-1981г./; выдано авторское свидетельство на изобретение "Водорастворимые производные ретиноевых кислот, обладающие кан-церопротекторными свойствами и способ их получения" /№ 106 6201 от 8.09.1983г./ - совместно с Поляченко Л.Н., Даввдовой Л.П.» Самохва-ловым Г.И., Афанасьевым. Ю.И. , Ноздриным В.И. и Волковым Ю;Т./.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на заседании Ереванского отделения Всесоюзного общества анатомов, гистологов и эмбриологов в 198^ году /протокол № 7 - 13/У-84$1 на П Всесоюзном симпозиуме по соматической полиплоидии /Ереван, 1977/; на П Закавказской конференции морфологов /Баку, 1978/; на 7-ом национальном конгрессе по анатомии, гистологии и эмбриологии /Варна, 1978/; на 5-ой Всесоюзной конференции по физиологии и патологии соединительной ткани /Новосибирск, 1980/; на конференции молодых ученых и специалистов, посвященной 50-летию основания Ереванского медицинского института /Ереван, 1980/; на IX Всесоюзном съезде анатомов, гистологов и эмбриологов /Минск, 1981/; на Ш Закавказской конференции морфологов /Ереван, 1982/; на 1У научно-практической конференции, посвященной >50-летию 1У Главного управления при Министерстве здравоохранения Арм.ССР /Ереван, 1983/; на Всесоюзной научной конференции - "Функциональная морфология лимфатических узлов и других органов иммунной системы и их роль в иммунных процессах" /Москва, 1983/; на У1 Закавказской конференции патофизиологов по современным проблемам патологической физиологии /Ереван, 1985/; на 1У Закавказской-конференции морфологов /Батуми, 1985/; на X Всесоюзном съезде анатомов, гистологов, эмбриологов /Винница, 1986/; на 1У Всесоюзной конференции по патологии клетки /Москва, 1987/; на Всесоюзном симпозиуме "Морфология и развитие органов иммунной системы" /Москва-Пермь, 1988/; на 67-отчетной научной сессии Ереванского медицинского института /Ереван, 1988/; в коллективе моего научного консультанта на кафедре гистологии I Московского медицинского института им.И.М.Сеченова /зав.проф.Ю.И.Афанасьев/ - 27/1-1983г; диссертация в целом апробирована на совместной конференции кафедры гистологии с кафедрами нормальной и патологической анато/ мии, ЦНИЛ, лаборатории патоморфологии института кардиологии.

Структура и объец диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исслслозьния, 5 глав результатов исследований, обсуждения полученных результатов, выводов," указателя литературы, представленных в пдиаы тоне об^ог?«:

333 страницы машинописного текста /текст диссертации 153 страницы/. Иллюстрации представлены 112 рисунками, которые включёюг 78 электронных микрофотогрфий, 34 микрофотографий,.2 схемы, I гистограмму; цифровой материал представлен 32 таблицами, Указатель литературы содержит 284 источника, из них 75 работ отечественных авторов.

Материал а методы исследования.

Объекты исследования: макрофаги печени, селезенки, лимфатических узлов, легкого и дермы в норме, в условиях активации тканевым антигеном, в организма опухоленосителя при воздействии ретиноидов и без них.

Выбор объекта исследования был продиктован следующими соображениями:

Большинство специальных исследований макрофагов проводились:

1. В условиях Ьг •'¿'¿го, где аппелировать к состоянию макро-фагального звена иммунного ответа организма не представляется возможным.

2. На перитонаальных макрофагах, в отношении остальных представителей СМФ имеются единичные и разрозненные данные.

3. Исследования сводились к описанию общих, присущих всем макрофагам признаков, без учета органных особенностей, в существующих данных отсутствует, описание структуры и функции макрофагов в интак-тном организме;

Были поставлены следующие серии опытов.

В I группе были изучены макрофаги в норме у 15 беспородных белых мышей, у 17 крыс обоих полов, у. 7 мышей-самцов линии Р1С57В1 /СВА, у 9 крыс-самцов линии у 15 мышей-самок линии СВА.

Во П группе были исследованы макрофаги в условиях воздействия на организм тканевого антигена - эритроцитов барана, т.е. в условиях антигенной стимуляции. Для этой цели беспородных белых мышей /32/ и крыс /52/ обоих полов иммунизировали внутрибрюшинным введением 0,5 взвеси эритроцитов барана /мышам вводили 6%-ную, крысам -8% взвесь/.

Животные данный группы - крысы были забиты на 2-4, 5-6, 10-11, 14 и 20-21 дни эксперимента, мыши - на 5-6, 9, 15-16 дни. В выборе сроков забоя мы исходили из необходимости исследовать структурно-функциональные изменения макрофагов в динамике иммунной реакции, продолжительность которой составляет примерно 25 дней /Н.А.Жарикова, 1979 и др/.

В Ш группе животных была исследована реактивность макрофагаль-ного звена иммунной системы в организме опухоленосителя при хими-

чески индуцированной канцерогенезе, при трансплантации перевивных опухолей и в условиях развивающегося лейкоза, поскольку реакция организма в названных вариантах злокачественного роста не может быть идентичной /Ю.И.Афанасьев, 1966/.

Химический канцерогенез был индуцирован накожным нанесением 0,5% 3,4-бензпирена у 25 мышей-самцов С57В1/СВА, которые были забиты на 36 день опыта, когда на месте нанесения препарата развивалось воспаление и на 86 день опыта /визуально различимая опухоль/

В качестве перевивных опухолей были использованы: карцинома Люэс - плоскоклехочный рак легкого, карцинома РС-1 - слизистый рак с исходным гистологическим характером гепатохолангиомы, перевиваемый ракчкелудка, являющийся плоскоклеточным ороговеващиы раком желудка с исходным гистологическим характером карциносарко-мы /ЮТ/ /Е.Е.Погосянц, Н.С.Киселева, 1963, З.П.Софьина, 1976/.

Карциному Люэс прививали 5 мышам-самцам линии С57В1/СВА подкожно в боковую поверхность живота в той же среде и в том же соотнсшекйЙу'Жйвотные были забиты на 28 день опыта. Карциному РС-1 прививали крысам-самкаи /15/ линии Ьат подкожно в боковую поверхность живота в среде 199 в соттношеюш 1:5. Животные были забиты на 2 день опыта»

ПРЖ прививали 6 мышам-самкам линии СБА' внутримышечно в среде 199 в соотношении 1:6. Животные были забиты на 12 день опыта.Сроки забоя животных в этой части эксперимента определялись появлением сформировавшейся опухоли.

Макрофаги в условиях развивающегося лейкоза изучали на мышах-самцах высоколейкозной линии АК&. 37 животных атой группы были забиты на 87 день опыта, когда гибель животных от лейкоза составила более 50/5.

В 1У группе экспериментов исследованы макрофаги при воздействии на организм ретиноидов - синтетических аналогов витамина А. При этом мы руководствовались следующими соображениями: выявленными у ретиноидов противоопухолевыми и иммуностимулирующими свойствами /Ю.И.Афанасьев с соавт., 1982, 1984, 1986/, отсутствием данных об их влиянии на макрофаги, а также наличием неисследованных вопросов в механизме их антиканцерогенного влияния.

При этом мы поставили следующие задачи.

1. Выявление зависимости степени активации макрофагов от способа введения ретиноида. Для этой цели ретиноиды вводили накожный,-подкожным, пероральным и внутрибрюшинным способом.

2. Изучение дозозввисимого эффекта активации макрофагов, т.к.

установлено, что в физиологических дозах ретиноиды не проявляют канцеропротекторных свойств /В.И.Ноздрин, С.М.Субботин, 1983/.

3. Использование различных видов ретиноидов для выявления факта зависимости степени активации макрофагов от их разновидностей и выявление при этом органоспецифичности макрофагов.

Из этих соображений нами были использованы следующие ретиноиды: МЭЕК - полностью трансметиловый эфир ретиноевой кислоты, ДГМЭИС - метиловый эфир ?,8 дигидроретиноевой кислоты, ретиноид С-15 и 13-цис-ретиноат /Ю.И.Афанасьев с соавт., 1979/.

Ретиноиды вводили следующим образом:

Накожно наносили 14 мышам-самцам линии Р-]- С57В1/СВА на коку межлопаточной области по 2 капли ретиноида один раз в 3 дня пипеткой со стандартным диаметром концевого отверстия в течение 36 дней. Были использованы МЭИ и ДГМЭЖ - 0,1$ бензольные растворы."

Внутрибрюшинным способом -43 крысам-самцам линии ЦЛ'з"£а-г. вводили повышенные дозы тех же ретиноидов по 2 мл и по 4 мл по одному разу /1% масляный раствор/. Животные были забиты через 2 недели после начала эксперимента.

Дозы всех использованных ретиноидов и биологически активных форм витамина А являлись условными терапевтическими и составляли от 1/40 до 1/3 ЛД250 в остром опыте у мьшгей /Ю.И.Афанасьев с соавт., 1983, В.И.Ноздрин, С.М.Субботин, 1983/.

Во П подгруппе данной группы животных было изучено влияние ретиноидов на макрофаги при росте перевивных опухолей. Для этого:

а/ 96 мышам-самцам линии Р^ С57В1/СВА вышеуказанным накожным способом и отмеченными дозами наносили бензпирен и МЗЙС, бензпирен и ДГМЭИС в течение 86 дней. Из выливших животных было забито на 86-ой день опыта - 12, и на 86-ой день - II.

б/ 14 мышам-самцам линии С57В1/СВА с привитой карциномой Мэс вводили внутрибрюшинно 0,05/5 раствор ретиноида С^ по 4 мл 4 раза с интервалом в два дня. В день последнего введения животные были, забиты.

в/ 26 крысам-самкам линии И^/^йг-^ с привитой карциномой РС-1 вводили внутрибрюшинно в течение 4 недель по одному разу еженедельно 0,5 мл 1% масляного раствора МЗРК, после чего животные были забиты.

г/ 38 крысам-самцам линии №¿3 привитой карциномой

РС-1 вводили 1% масляный раствор МаРК - пероральным, внутрибрюшинным и подкожным /на ипси- и контрлатеральной к опухоли стороне/ способами.

При всех способах введения ретиноид вводили б раз по 0,5 мл с интервалами в 5 дней. .

д/ 31 мышам-самкам линии СБА с привитой опухолыо/ш/внутри-брюшинным способом вводили по 0,1 мл 1% масляного раствора ретинои-да С-^ или 13-цисретиноата через каждые 48 часов б раз.

е/ 4-0 животным - 10 недельным мышам-самцам линии Акй вводили в течение 12 недель внутрибрюшинно по 0,15 мл и,07%-ного масляного раствора МйРК в неделю один раз.

. В У группе животных с учетом отсутствия специальных исследований содержания ДНК в макрофагах был проведен количественный цитохимический анализ содержания ДНК, а также изучен синтез ДНК в ядрах макрофагов в норме, в условиях роста перевивных опухолей, химически индуцированного канцерогенеза и под воздействием ретиноидов, в условиях антигенной стимуляции. Животные были разбиты на следующие подгруппы:

а/ Контрольная группа, которая состояла из 3 мышей-самцов Р1 С57В1/СВА и 4 мышей-самок СВА.

У первых были исследованы макрофаги печени, селезенки, легкого и лимфатических узлов.

У вторых - макрофаги селезенки /представители макрофагов с наибольшей активностью/ и лимфатических узлов /с умеренной активностью/.

б/ В этой группе были исследованы макрофаги печени, селезенки, легкого и лимфатических узлов у 4 мышей-самцов линии С57В1/СВА с химически индуцированным канцерогенезом, а также макрофаги селезенки и лимфатических узлов у 5 мышей-самов СВА с привитой опухолью-раком .желудка - ПЛ.

г/ У 5 беспородных белых мышей в условиях антигенной стимуляции.

в/ В- данной группе было исследовано у 4 мышей-самцов линии ^ С57В1/СВА влияние ретиноидов МЭЕК и ДГМЭРК на макрофаги названных органов; у 4 мышей той же линии влияние тех же ретиноидов в условиях химически индуцированного канцерогенеза; у 4 мышей-самок СВА влияние ретиноидов С-^ и 13-цисретиноата на макрофаги селезенки и лимфатических узлов, а также у 4 мышей этой же линии влияние тех ¡:се ретиноидов на макрофаги селезенки и лимфатических узлов в условиях роста опухоли ПИ.

Исследование макрофагов проводилось следующими методами.

I. Изучение строения макрофагов проводилось с помощью электронного микроскопа -трансмиссионного и сканирующего.

2. Морфометрическое исследование проводилось с помощью светового микроскопа /а/ и приборов /б/.

а. С помощью светового микроскопа определяли I/ количество макрофагов, приходящееся на одно поле зрения, 2/ фагоцитарную способность по двум показателям: определяли фагоцйтарный показатель,

а также среднее.число клеток со сверхинтенсивным фагоцитозом, 3/ ядерно-плазменные отношения, 4/ синтез ДНК в макрофагах исследовали авторадиографическим способом в экспериментах при воздействии ретиноидов в условиях химически индуцированного канцерогенеза и без него, при росте перевивной опухоли ПР1 с ретиноидами и без них, а также в условиях антигенной стимуляции.

б. С помощью цитофотометра определяли I/ функциональное состояние макрофагбв с определением и последующим количественным анализом маркерного фермента лизосом - кислой фосфатазы. Указанный фермент определяли методом азосочетаний в макрофагах в норме у 10 беспородных белых крыс, а также в активированных антигенной стимула-, цией макрофагах у 12 беспородных крыс. На основании этих данных,

а также изучения фагоцитарной способности мы представили морфоме-трическую характеристику макрофага в норме и активированного макрофага в каждом органе. 2/ количественный цитохимический анализ содержания ДНК.

В тесной связи с этим разделом исследования явилось изучение многоядерных макрофагов, в которых определяли содержание ДНК и учитывали их численность по отношению к одноядерным макрофагам.

ПОЛУЧЕННЫЕ ДАННЫЕ И ИХ АНАЛИЗ

I. Структурно-функциональные особенности макрофагов различной органной локализации в норме.

Макрофаги селезенки. Злектронномикроскопическими исследованиями выявлены две разновидности макрофагов в этом органе. Одна характеризуется наличием широких гребневидных выростов цитоплазмы, лизосом различного размера, с преобладанием вторичных и утилизирующихся эритроцитов. Вторая, меньшая численностью, которую мы условно обозначили как "спокойные" макрофаги, характеризуется гладкой поверхностью, невысоким содержанием лизосом, наличием ГЭР и рибосом. В данном органе макрофаги располагаются в непосредственной близости от лимфоидных, ретикулярных клеток, эритроцитов и зачастую тесно к ним прилегают.

Макройаги печени. Электронноиикроскопическими исследованиями выявлены их следующие разновидности. Одна с преобладанием лизосом, вторая - с гладкой .поверхностью, раввитыми ГЭР, рибосома-

ми, бедная лизосомами. Третья разновидность наряду с лизосомами содержит капли жира и находится обычно в тесном соприкосновении с асирсодержащими участками гепатоцитов и липоцитами.

Наличие описанных разновидностей макрофагов свидетельствует о многообразии их функций в пределах одного органа: у первого типа макрофагов, по всей вероятности, преобладает фагоцитарная функция с последующей утилизацией эритроцитов /в селезенке/ или многочисленных агентов, приносимых кровью /в печени/, вторая и третья разновидности макрофагов /печени/ помимо выполнения фагоцитарной функции вместе с паренхиматозными клетками принимают участие в выполнении функции селезенки и печени.

Выраженность в "спокойных" макрофагах селезенки %органелл, ответственных за белковый синтез, тесные их взаимоотношения с лим-фоидными клетками, наличие аналогичной разновидности макрофагов в печени, а также известные из литературы данные о наличии у макрофагов печени белково-синтетической функции /Д.Н.Маянский, 1981, 1982/ делает допустимым предположение о.наличии отмеченной'функции у макрофагов данных органов в норме.

Тесное взаимодействие другой разновидности печеночных макрофагов с липоцитами и с кирсодержащими участками гепатоцитов свидетельствует об участии данной разновидности печеночных макрофагов вместе с гепатоцитами в липидном обмене органа.

Исследование.количества макрофагов обнаружило их большую численность в печени, чем в селезенке, что может быть связано с особенностями печеночного кровообращения: селезеночная вена, впадая в воротную, создает возможность попадания макрофагов селезенки в печень, т.е. происходит перераспределение клеток,

! Фагоцитарная активность макрофагов печени высокая, с чем коррелирует огромное содержание лизосом в этих макрофагах, описанное нами и отмеченное отдельными авторами /И.С.ФреЙдлин, 1969, 1978, 1979, 1983/. В макрофагах селезенки она также довольно высокая.

Содержание кислой фосфавазы в макрофагах обоих органов примерно одинаково высокое, что находится в прямой зависимости от высокой фагоцитарной активности указанных клеток: постоянно происходящий интенсивный фагоцитоз ,требует значительного количества фер^ мента.

Макрофаги легкого располагаются в эпителиальной выстилке альвеол, а также в соединительной ткани межальвеолярных перегородок. Электронномикроскопическими исследованиями выявлено, что на свое.': поверхности эти макрофаги имеют единичные цитоплазматические от-

и

ростки, многочисленные лизосомы и фагоцитированные осиофильные тельца. Реже встречается другая.разновидность макрофагов, содержа^ щая в цитоплазме липидные капли. Встречаются и промежуточные виды.

Количество макрофагов в данном органе сравнительно с их численностью в печени и селезенке несколько' меньше.

Фагоцитарная активность макрофагов легкого, несмотря на то, что несколько уступает фагоцитарной активности макрофагов печени и селезенки, довольно высокая.

Содержание кислой фосфатазы в альвеолярных макрофагах несколько ниже. В целом же макрофаги легкого являются.клетками с высокой реактивностью, регулируют, по всей вероятности, сурфактантный го-мео'стаз и участвуют в липидном обмене органа,о чем помимо получен-, ных данных свидетельствуют отдельные исследова'ния/В.В.Ерохин,1987/.

Макрофаги лимфатических узлов. Электронномикроскопическими исследованиями выявлены два вида макрофагов. Одна, находящаяся в синусах, характеризуется обилием и полиморфизмом лизосом, имеющих различные размеры, форму..и содержимое, что связано с выполняемой ими дренирующей функцией. Вторая разновидность, находящаяся в паренхиме органа, характеризуется наличием наряду с лизосомами и большого количества рибосом.

Количество макрофагов в лимфатическом узле у отдельных особей уступает численности этих клеток в печени и селезенке, у других же превосходит численность 'макрофагов в селезенке или в легком, никогда не достигая при этом уровня печеночных.

По фагоцитарной активности и содержанию кислой фосфатазы макрофаги данного органа уступают макрофагам.печени, селезенки и в меньшей степени легкого. Следует отметить, что макрофаги со сверхинтенсивным фагоцитозом располагаются преимущественно в синусах, т.е.там располагаются наиболее интенсивно фагоцитирующие макрофаги.

Макрофаги данного органа располагаются в окружении лимфоидных и ретикулярных клеток. Сравнительно более низкие показатели функциональной активности макрофагов в этом органе в целом обусловлены более слабо развитой фагоцитарной функцией макрофагов, расположенных в паренхиме органа.

Макрофаги дермы. По ультраструктурным признакам они отличаются от описанных макрофагов: имеют удлиненное вытянутой формы тело, гладкую поверхность, отличаются незначительным содержанием лизосом, наличием вакуолей и рибосом. Располагаются они в непосредственной близости от фибробластов и коллагеновых фибрилл, последние зачастую как бы вплетаются в их плазмалемму. Макрофаги дермы

уступают макрофагам остальных органов в количественном отнощеции, фагоцитарной активности, в содержании кислой фосфатазы.

Из приведенного описания макрофагов дермы следует, что данные клетки участвуют в первую очередь в обменных процессах ко^и, вероятно, секретируя факторы, индуцирующие рост фибробластов и продукцию ими коллагена» Указания о подобной функциональной особенности гистиоцитов соединительной ткани встречаются в отдельных исследованиях /В.В.Серов, А.Б.Шехтер, 1981/.

Таким образом, в норме, в отсутствие экспериментальных воздействий макрофаги имеют ряд общих структурно-функциональных признаков, свидетельствующих об их высокой реактивности. Вместе с тем, они имеют ряд ультраструктурных особенностей, связанных с их различной органной локализацией. Более того, мы наблюдали внутриор-ганные различия, что является доказательством их высоких адаптационных и функциональных возможностей.

Проявлением органоспецифических различий макрофагов являются выявленные различия фагоцитарной функции и содержания кислой фосфатазы в макрофагах различных органов.

Морфометрическая характеристика макрофагов различных органов в норме

Орган Фагоцитарны}! показатель Содержание кислой фосфатазы

Печень 13,842+0,36 158,91+10,51

Селезенка 9,188+0,17 166,08+4,77

Лимфатический 4,532+0,13 141,035+4,21

узел

Легкое 6,371+0,165 149,09+2,963

Дерма 3,242+0,154 71,29+2,57

Из таблицы следует, что самые активные фагоциты находятся в печени и селезенке, далее следуют макрофаги легкого, затем лимфатических узлов и дермы. Содержание кислой фосфатазы не всегда находится в прямой зависимости от фагоцитарной способности. Полученные данные можно объяснить тем, что кислая фосфатаза помимо участия в расщеплении-поглощаемых веществ,выполняет и другие функции-физиологический аутолиз, участие в секреции, катализ белкового . распада /Т.Б.Журавлева, Р.А.Прочуханова, 1978/. . .■ , ■

2. Структурно-функциональная характеристика макрофагов различных органов в условиях.антигенной стимуляции.

Структурные особенности, присущие интактным макрофагам, приобретают более выраженный характер. Это касается как общих, так и органоспецифическвх признаков.

В макрофагах селезенки мы наблюдали усиление складчатости поверхности, утилизации эритроцитов, значительного развития достигает лизосомный аппарат. Исчезают "спокойные" макрофаги, вероятно, трансформируясь в единый тип активированного макрофага.

Количество макрофагов возрастает с первых дней опыта, достигает максимума к 5-6 дню /у крыс/ или 9-му /у мышей/. Данный факт, вероятно, обусловлен притоком моноцитов в орган и их интенсивной дифференцировкой в макрофаги.

Фагоцитарная активность также возрастает с первых дней опыта, достигая максимальных значений к 7-му дню /у крыс/ или 5-6 дню у мышей.

Изменение содержания кислой фосфатазы происходит волнообразно и не обнаруживает прямой корреляции с фагоцитарной активностью, что можно объяснить следующим образом. При возрастании фагоцитарной функции клетки расходуется большое количество фермента, возможно превышающее ее синтетические возможности. Затем оба процесса - расход и синтез фермента - в какой-то период уравновешиваются и по мере уменьшения расхода фермента, наблюдаемого по ходу опыта в связи со снижением фагоцитарной функции, содержание фермента в клетке возрастает. Этим же можно объяснить сочетааие низкой фагоцитарной функции на 20-21 день опыта с высоким содержанием фермента, поскольку на поздних стадиях опыта вместе с активацией иммунной системы продолжается и синтез фермента, обуславливая высокие, сравнительно с контролем, цифры /что касается и фагоцитарной функции/. В аналогичных опытах в культуре макрофагов отдельными авторами получены схожие данные - повышение активности кислой фосфатазы в лизосомной фракции клетки при одновременном

1982 и др/.

Вышеописанные разновидности интактных макрофагов печени наблюдаются и в этом эксперименте.

Количество макрофагов печени возрастает с первых дней опыта, достигает высоких цифр к 5-6 дням и держится на высоких цифрах до конца эксперимента, слегка снижаясь к концу опыта у крыс. в

Высоких значений достигает фагоцитарная активность макрофа-

понижении ее содержания в цитоплазме

гов, повышаясь с первых дней опыта. После 5-6 дня /у мышей/ или 7-го дня /у крыс/ она постепенно снижается.

Содержание кислой фосфатазы и ее соответствие фагоцитарной функции клетки меняются на протяжении опыта в той же закономерности, что и в селезенке. .

В макрофагах легкого мы наблюдали активацию лизосомного аппарата, значительный фагоцитоз осмиофильных пластинчатых телец, макрофаги с обилием липидных капель в цитоплазме. Количество макрофагов, фагоцитарная активность возрастают с первых дней опыта, достигают максимальных цифр в определенные дни: на 5-6 дни и 15-16 дни /мыши/, или на 7 и 9 дни /крысы/. Содержание кислой фосфатазы в макрофагах легкого остается высоким на протяжении всего эксперимента и не достигает таких значений как в макрофагах печени и селезенки, что можно объяснить более высоким уровнем метаболизма макрофагов указанных органов, связанным с их органоспецифическими особенностями. Кроме того, установлено, что /К.Е.Ноорег; 1979/ несмотря на высокую реактивность, макрофаги легкого отличаются более низкой способностью слияния лизосом с фагосомами. Поэтому допустимо предположить, что находясь даже в условиях мобилизации защитных реакций, они не синтезируют столь значительных количеств кислой фосфатазы, как макрофаги в печени и селезенке.

Макрофаги лимфатических узлов характеризуются в условиях данного опыта активацией лизосомного аппарата, макрофагально-лимфоид-ных контактов как в синусах, так и в паренхиме органа.

Количество макрофагов возрастает примерно вдвое с первых дней эксперимента, достигает максимума к 5-6 дням /у крыс/ или 9-му /у мыше5^ оно остается высоким до конца опыта.

Фагоцитарная активность макрофагов меняется на всем протяжении эксперимента волнообразно.

Содержание кислой фосфатазы возрастает и меняется в зависимости от фагоцитарной функции в макрофагах печени, селезенки и легкого.

В макрофагах дермы нами выявлены следующие ультраструктурные разновидности макрофагов дермы: I - часто встречающаяся - характеризуется обилием вакуолей в цитоплазме, П - имеет гладкую поверхность, мало, лизосом, развитый ГЭР, зачастую с расширенными цистернами, Ш разновидность появляется на поздних стадих эксперимента и представляет собой типичный активированный макрофаг.

Количество макрофагов дермы возрастает, но нерезко, и держится на высоких цифрах на протяжении всего опыта.

Фагоцитарная активность и содержание кислой фосфатазы возрас-

тают и держатся на повышенных цифрах на протяжении всего эксперимента. Изменение содержания фермента в макрофагах этого органа находится в прямой зависимости от их фагоцитарной активности.

В условиях данного опыта мы наблюдали взаимодействия активированных макрофагов с различными тканевыми элементами. В селезенке и лимфатических узлах с эозинофидами, или одновременно с лимфоид-ными клетками и эозинофилами; в печени - с эндотелием, нейтрофила-ми, лаброцитами, лимфоидными клетками, в дерме - с волокнами поперечно-полосатой мышечной ткани. Описанные взаимодействия макрофагов свидетельствуют об их высоких реактивных свойствах, находящих многообразные проявления в условиях стимуляции иммунной системы и представлены на схеме й I.

По аналогии с макрофагами в норме на основании морфометричес-ких и гистохимических исследований мы представили морфометрическую оценку активированных макрофагов.

Морфометрическая характеристика активированных макрофагов различных органов .

Орган

Фагоцитарный показатель

Содержание кислой фосфатазы

Печень

Селезенка

Легкое

Лимфатический

узел

дерма

14,023+0,225 11,595+0,485 8,97+0,17 7,235+0,175 4,54+0,01

312,4+12,24 343,43+13,86 272,71+6,01 237+9,29 97,15+1,39

Из таблицы следует, что наибольшей активностью обладают макрофаги печени, селезенки и легкого,затем лимфатических узлов и дермы.

3. Макрофаги в условиях злокачественного роста.

Химически - бензпиреном - индуцированный канцерогенез /36 и 86 дни опыта/.

Макрофаги печени, начиная с ранних сроков опыта - /36 день/ обнаруживают признаки угнетения: уменьшается их количество, понижается фагоцитарная активность. На поздних сроках /86 день/ - указанные явления нарастают.

Макрофаги селезенки обнаруживают аналогичные изменения. Элек-тронномикроскопичес;:ие исследования выявили сглаживание клеточной поверхности, наличие атипичных лизосом, бедность органеллами, пик-нотические изменения ядра.

Макрофаги лимфатических узлов характеризуются сходными признаками угнетения с отличием, заключающимся в том, что по сравнению с макрофагами печени и селезенки различие между количеством и фагоцитарной активностью на ранней и поздней стадии заболевания не столь выражены, что объяснимо их более низкой реактивностью.

Макрофаги легкого не подвергаются угнетающему воздействию канцерогена, о чем свидетельствуют электронномикроскопические исследования, а также результаты морфометрических исследований.

Полученные данные можно расценить как специфическое свойство легочных макрофагов - большая их устойчивость канцерогену, что, возможно, обусловлено специфическими условиями, в которых пребывают макрофаги в связи с газообменом и постоянным взаимодействием с кислородом /Д.А.Нише, 1985/.

В макрофагах дермы наблюдается уменьшение размеров клеток, цитоплазмы и ядра начиная с ранних стадий опыта, при отсутствии заметного снижения численности и фагоцитарной функции. К 86 дню опыта указанные явления выражены ярче, к этому присоединяется и •угнетение фагоцитарной активности.

Следует отметить, что угнетающее действие бензпирена на макрофаги выявляется до появления визуально различимой опухоли и нарастает по ходу эксперимента, что обусловлено нарастающей по мере прогрессии заболевания интоксикацией организма.

Перевивные опухоли.

Макрофаги печени и селезенки не подвергаются заметным количественный колебаниям, фагоцитарная функция возрастает, с чем согласуется и картина их электронномикроскопического исследования, за исключением опыта с ПИ, где заметно снижение обоих показателей.

Макрофаги легкого уменьшаются в количестве, подавляется их фагоцитарная функция, что особенно заметно в условиях роста карциномы Люэс.

Макрофаги лимфатического узла в изменении своих признаков напоминают макрофаги печени и селезенки в слабой форме.

Макрофаги дермы не подвергаются заметным уменьшением количества и фагоцитарной функции.

Следует отметить отсутствие в целом супрессирующего воздействия на макрофаги перевивных.опухолей, в отличие от химически индуцированного канцерогенеза, что объяснимо: перевивные опухоли за тот отрезок времени, в которОй велось наблюдение, не успевают оказать в полной мере отрицательное воздействие на иммунную систему, в том числе и на ее макрофагальное звено.

Органоспецифичность макрофагов в .организме опухоленооитили

выражается в следующем. Макрофаги печени и селезенки, являясь наиболее активными представителями СМФ, в условиях химически индуцированного, канцерогенеза обнаруживают наиболее выраженные признаки угнетения. В условиях роста перевивных опухолей именно отмеченные макрофаги подвергаются значительной активации, что вызвано достаточной антигенной силой растущих бластом. Высокая реактивность выявлена нами в макрофагах легкого. Активация изученных признаков в условиях химически индуцированного канцерогенеза и их подавление в условиях роста перевивных опухолей может быть объяснена аналогично. Следует добавить, что в условиях роста карциномы Люэс подавление этого звена СМФ монет быть объяснено характером перевиваемой опухоли, являющейся плоскоклеточным раком легкого, матастазирую-щим, как правило, в легкие, что создает тем самым дополнительное отрицательное воздействие на местные фагоциты,

Аналогичным образом можно объяснить и наиболее выраженное в условиях химически индуцированного канцерогенеза угнетение макрофагов дермы - общее токсическое воздействие канцерогена и дополнительное местное отрицательное влияние при его накожном нанесении.

В условиях прогрессирующего лейкоза мы наблюдали в целом сниженную активность макрофагов - их численности и фагоцитарной функций, что, возможно, вызвано их гибелью з органах или на стадии предшественников вследствие отрицательного воздействия токсических продуктов, образующихся в организме, пораженном лейкозом._

4. Влияние ретиноидов- на - макрофаги /а/ в условиях злокачественного роста в организме /б/.

а/ В первой части данного раздела мы исследовали влияние ретиноидов на макрофаги в зависимости от дозы, формы и способа введения.

б/ Вторая часть посвящена выяснению возможности активации рети-ноидами макрофагов различной органной локализации в организме опу-холеносителя.

Накожное нанесение МЭРК и ДГМЭРК.

ЙЗРК не вызывает в макрофагах.печени существенных изменений численности и фагоцитарной функции.

ДГМЭРК оказывает отрицательное воздействие на фагоцитарную функцию этих макрофагов.

Макрофаги селезенки под влиянием МЭНС также не подвергаются активации, ДГМЭРК способствует увеличению их численности, но не зликет на фагоцитарную способность.

На численность макрофагов легкого ретиноиды не оказывают поло-аительного влияния. Фагоцитарная их активность под влиянием ДГМЭРК

уменьшается, МЗРК не меняет ее сравнительно с контролем.

На макрофаги лимфатических узлов - численность и фагоцитарную активность - ретиноиды не оказывают положительного влияния.

Из всех исследованных макрофагов заметную активацию всех показателей под влиянием ретиноидов испытывают, только макрофаги дермы, что можно рассматривать как проявление их способности поглощать адъюванты, нанесенные в данном случае на кожу.

Внутрибрюшинное введение масляных форм МЭРК и ДГМЭРК.

Макрофаги печени, селезенки и лимфатических узлов подвергаются значительной активации; увеличивается их численность, в 2-3 раза возрастает фагоцитарная активность. Само масло также способствует некоторой активации макрофагов, т.к. в месте.его введения в брюшную полость развивается воспаление, тем более, что известна способность макрофагов поглощать и метаболизировать липиды /^./ОАя-o/es, S!C^/VdzI980/. Данный растворитель способствует максимальному проявлению адьювантных свойств ретиноидами.

Возрастание морфометрических показателей коррелирует с их ультраструктурными изменениями - макрофаги характеризуются много-и длинно-отростчатой поверхностью, развитым, лизосомальным аппаратом с образованием гигантских лизосом, аутофагосом, сильным развитием ГЭР, рибосом, активацией межклеточных взаимодействий.Схема №2.

Описанная активация макрофагов трех отмеченных органов обусловлена следующими обстоятельствами: I. Данные органы располагаются ближе остальных к месту введения ретиноида. 2. Не исключен в связи с развивающимся на месте введения ретиноидов перитонитом приток в эти органы новых порций моноцитов. 3. Активацию макрофагов печени можно дополнительно объяснить их способностью вместе с ге-патоцитами депонировать ретиноиды, особенно их масляные растворы, а также и тем, что в процессе синтеза витамина А и' ретинолсвязы-вающего белка и его дальнейшей секреции из печени определенную роль играют ретинол эфиргидролазы, определенная часть которых локализуется в макрофагах печени /Т.Ш.Шарманов, 1978/.

Известно, что помимо депонирования в печени ретиноиды откладываются в легком. С учетом данного явления и факта участия макрофагов легкого в липидном обмене органа становится объяснимой их активация.

Макрофаги дермы также подвергаются некоторой активации, хотя и слабее, чем при накожном нанесении ретиноидов.

4. Активация макрофагов эритроцитами и ретиноидами различается механизмом. В первом случае наблюдается в первую очередь акти-

вация фагоцитарной функции, направленной на захват и утилизацию чужеродных эритроцитов. Во втором случае - региноиды, как и жирорастворимые витамины, связываются с клеточными мембранами, меняют их заряд и, следовательно, транспорт метаболитов Д.А.Покровский, В.А.Тутельян, 1976/. Вследствие сказанного происходят описанные на-, ми изменения мембранных компонентов клетки, представленные на схеме.

Влияние ретиноидов на макрофаги в организме опухоленосителя.

В условиях химически индуцированного канцерогенеза электронно-микроскопическими и морфометрическими исследованиями выявлена активация макрофагов всех изученных органов.

В условиях роста перевивных опухолей /карциномы Люэс, карциномы РС-1 и рака желудка - ПРИ/. В данной части экспериментов установлено в целом положительное влияние ретиноидов на все исследованные макрофаги. При этом следует выделить следующие моменты.

1. В основе описанного тормозящего влияния ретиноида С|5 на рост перевивных опухолей /Ю.И.Афанасьев с соавт., 1982/, возможно, лежит вышеотмеченная активация макрофагов, т.к. известно, что лаби-лизация лизосомных мембран макрофагов ретиноидами способствует разрушению цитоплазматических мембран опухолевых клеток /А.А.Семенов, 1979/.

2. При изучении различных способов введения ретиноидов в условиях роста карциномы РС-1 на фагоцитарную активность макрофагов печени выяснилось, что внутрибрюшинный способ введения оказался наиболее эффективным, подкожное введение оказывает более выраженное воздействие, если ретиноид вводится ^о стороны контрлатеральной по отношению к опухоли.

3. Органоспецифические особенности макрофагов в данном эксперименте проявляются зависимостью степени активации их различных представителей от разновидности ретиноида.

МЭРК оказывает положительное воздействие на все макрофаги, кроме печеночных, что, вероятно, связано с характером опухоли, оказывающей настолько выраженное избирательное угнетающее воздействие на печень /макрофаги/, что неустраняется применением МЭРК. В условиях прогрессирующего лейкоза ретиноиды не оказывают положительного влияния на макрофаги, возможно, по причине их несостоятельности повысить изначально сниженную фагоцитарную функцию макрофагов. Существуют данные об угнетающем влипши лейкозных клеток на макрофа-гальную активность //? й&ЛЭ76/. Вероятно, в этом

кроется одна из причин высокого процента гибели животных, наблюдаемой в данном опыте, носкотря на применение ретиноида /3..Ноздрлл с соавт., 1982/.

-гг-

У..Количественный цитохимический анализ содержания ДНК и изучение его синтеза в ядрах макрофагов. Схема К; 3.

Исследование интактных макрофагов селезенки и лимфатических узлов обнаружило в обоих органах значительное количество макрофагов с содержанием ДНК, превышающим диплоидное. Кроме того, обнаружены многоядерные макрофаги с октаплоидным и выше содержанием ДНК. При этом мы не обнаружили клеток, синтезирующих ДНК. Следовательно, макрофаги составляют смешанную по плоидности популяцию и поли-плоидизация их происходит в период формирования их непосредствен*-ных предшественников-моноцитов.

Б условиях роста перевивной опухоли мы наблвдали возрастание численности одноядерных диплоидных макрофагов, появление синтезирующих ДНК макрофагов, а также снижение количества клеток с высоким содержанием ДНК и многоядерных макрофагов. Содержание же ДНК в гиперплоидных ядрах остается на том ке уровне, что и у интактных макрофагов. Исходя из сказанного можно предположить, что в организме опухоленосителя часть зрелых гиперплоидных и, следовательно, наиболее активных макрофагов покинула органы, устремившись к источнику, нарушающему гомеостаз. Пополнение численности макрофагов в обоих органах происходит за счет мигрирующих в органы моноцитов, трансформирующихся в макрофаги.

Аналогичные результаты - моноцитоз периферической крови и повышение пролиферации предшественников моноцитопоэза в костном мозге наблюдала И.С.Фрейдлин /1984/ в экспериментах с индуцированием в брюшной полости воспаления. Данное положение подтвердилось и авторадиографическим исследованием, и морфометрическими данными, обнаруживающими в этих органах появление ДНК-синтезирующих макрофагов; '.сниженную сравнительно с контролем фагоцитарную способность макрофагов, что присуще, как это известно из литературы, их менее зрелым формам. Электронномикроскопические исследования выявили в этот период в органах многочисленные так называемые "моноцитоидные" /В.В.Серов, А.Б.Шехтер, 1981/ клетки.

При воздействии ретиноидов в условиях опухолевого роста мы наблюдали возрастание численности макрофагов с повышенным содержанием ДНК, активацию синтеза ДНК и повышение численности многоядерных макрофагов. Численность макрофагов и их фагоцитарная функция при этом не возрастают. Следовательно," можно заключить, что наиболее активированные макрофаги из органов мигрируют с топ же скоростью, что и без применения ретиноидов. Однако активируется процесс трансформации молодых макрофагов в их зрелые активированные формы, со-, держащие большое количество ДНК.

Можно заключить, что в основе положительного влияния ретииои-дов на макрофаги лежит процесс их полиплоидизации, вызывающий ускорение трансформации их предшественников в органах.

В условиях химически индуцированного канцерогенеза мы получили следующие данные:

С 36 дня эксперимента в макрофагах всех органов начинается синтез ДНК. При этом в макрофагах печени и селезенки мы наблюдали уменьшение численности макрофагов и снижение их фагоцитарной активности, митозы отсутствовали, что свидетельствует об ускоренной дифференцировке.макрофагов и миграции наиболее их активных форм к очагу поражения.

В макрофагах легкого и лимфатического узла численность и фагоцитарная функция макрофагов не меняются, что свидетельствует о наличии дифференцировки макрофагов, но отсутствии или замедленной их миграции к очагу поражения.

По мере прогрессии заболевания мы наблюдали торможение макро-фагальной активности, проявляющейся, прежде всего, угасанием их ДНК-синтезирующей способности. При этом выявляются и органоспеци-фические особенности макрофагов - наиболее активные их представители в печени, селезенке, легком - оказываются.и наиболее устойчивыми к супрессирующему воздействию канцерогена.

Воздействие ретиноидами /без канцерогена/ в условиях данного эксперимента способствует возрастанию синтеза ДНК в макрофагах при тех не.показателях численности и фагоцитарной функции, что и в контроле.

Применение ретиноидов в условиях химичаски индуцированного канцерогенеза способствует возрастанию фагоцитарной способности макрофагов и доли среди них клеток, синтезирующих ДНК /сравнительно с канцерогеном/ то есть, происходит активация процесса трансформации клеток-предшественников в зрелые активные формы.

Численность большинства макрофагов при воздействии ретиноидов в данных условиях возрастает, что можно предположительно объяснить либо большей интенсивностью процесса дифференцировки макрофагов сравнительно с их миграцией, либо преобладанием супрессирующего воздействия на них ретиноидов.

При сравнительном анализе воздействия ретиноидов на процесс возрастания плоидности макрофагов при химически индуцированном канцерогенезе и в условиях роста перевивных опухолей нами замечены следующие закономерности:

1.В обоих случаях в макрофагах имеет место активация процесса гиперрепликации ДНК,способствующего активной трансформации моноци-

тов в макрофаги. Ускорение миграции в опухоль способствует появлению в органах большого количества моноцитов и ускоренному их превращению в макрофаги.

2. Ускорение трансформации макрофагов сопровождается их миграцией к опухоли.

3. В условиях роста перевивных опухолей процесс гиперрепликации ДНК в макрофагах активируется, в условиях химически индуциро-:.. ванного канцерогенеза - процесса медленно и исподволь развивающегося в отдельных.случаях - /макрофаги лимфатических узлов/ отмечено его угнетение.

4. Процесс миграции активированных ретиноидами макрофагов из органов к очагу воздействия в условиях роста перевивных опухолей выражен ярче, чем при химически индуцированном канцерогенезе.

д/ Исследование синтеза ДНК в макрофагах в условиях антигенной стимуляции.•

В этой части исследования мы составили отдельные таблицы численности, фагоцитарного показателя и индекса мечения для макрофагов каждого органа.

Сроки _Селезенка_Печень_._

Количество Фагоцит.Индекс Количество Фагоцит. Индекс

макрофагов показат.метки макрофагов показат. метки в %

/М+м/ ■ /М+м/ в % /М+м/ /М+м/

Контроль 7,86+0,199" 10,22+0,08 - .12,8+0,24 13,05+0,22 -

5-6 дни 9,12+0,062 11,012+0,6 3. 22,652+0,356 16,095+0,25 1,17

08

Р<0,001 Р=0,1 Рс0,001 Р <0,001

9 день 13,32+0,06 11+0,03 3,4 19,635+0,335 15,21+0,53 3,1

Р<0,001 Р<.А,001 Р<0,001 Р<г0,001

15-16 8,4+0,054 11,95+0,24 I, 24,9+0,296 12,12+0,18 2,73 дни 97

Р<0,001 Р «¿0,05 Р<0,001 Р-с0,02

Из таблицы следует, что одновременно с возрастанием числа и фагоцитарной активности макрофагов селезенки в них начинается синтез ДНК, который приводит к полиплоидизации клетки, поскольку митозы мы не наблюдали /Отметим,что это касается макрофагов зсех исследованных органов/.Полиплоидизация,следовательно,способствует повышению функциональной активности макрофагов.Максимальных показателей достигает численность макрофагов в этом органе к 9-му дню опыта,когда фагоцитарная активность значительна,но не максимальна.

>жно, следовательно, допустить, что наиболее аетивные макрофаги ¡лезенки /с самой высокой фагоцитарной активностью/ устремились очагу поражения именно к 9-му дню опыта. Максимальная же числен-ють макрофагов в этом органе в указанный срок.обусловлена призом моноцитов и их трансформацией в макрофаги. Следовательно, шиплоидизация в этот период способствует повышению функциональ-|й активности макрофагов, в том числе и их мобильности, сопрово-.ающейся их миграцией в очаг поражения.

Аналогичные данные несовпадения сроков максимальных показа-лей фагоцитарной активности и синтеза ДНК мы наблюдали в макро-гах печени. Полученные данные можно объяснить аналогично резуль-там исследования макрофагов селезенки.

Макрофаги легкого в условиях антигенной стимуляции претерпе-ют несколько иные изменения.

С первых дней эксперимента мы наблюдали появление синтеза К при незначительном повышении численности макрофагов и их фаго-тарной активности. К 9-му дню опыта заметно значительное усиле-е фагоцитарной и ДНК-синтезирущих функций макрофагов легкого. 15-16 дням.численность клеток достигает иаксимума при сравнате-но высоких, но не максимальных обеих исследованных,функциях, лученные данные можно объяснить следующим образом. Полиплоидиза-я макрофагов способствует усилению функциональной активности крофагов, проявления.которой могут быть различными. В макрофа-х печени и селезенки, являющихся самыми активными фагоцитами, сположенными к тому же ближе остальных к очагу воспаления, ра-гравшегося на месте введения в брюшную полость эритроцитов, иление функции проявляется в первую очередь активацией фагоцк-рной способности с последующей миграцией активированных макро-гов к очагу поражения.

ОКИ - количество макрофагов /й±и/ «агоцитарный показатель индекс метки в %

нтроль 4+0,04 6,97+0,19 -

5 дни 4,34+0,01 7,71+0,13 1,17

Р^0,01 Р^с 0,001

цень 4,56+0,116 8,303+0,121 3,1

Р-«0,001 Р<0,001

-16 дни 5,2+0,09 7,94+0,12 2,73

Р^0,001 Р< 0,001

»

В макрофагах легкого, более отдаленных от участка воспаления, * полиплоидизация способствует, возможно, усилению у макрофагов иной, не фагоцитарной, например, секреторной функции, и вызывает незначительную или замедленную /сравнительно с макрофагами печени и селезенки/ миграцию к очагу воспаления. В пользу этого предположения свидетельствует факт отсутствия заметного изменения численности макрофагов в этом органе на 5-6 и 9 дни опыта, а также данные электронно-микроскопических исследований, свидетельствующие о наличии в цитоплазме макрофагов легкого в данных условиях наряду.с резорби-рованныи сурфактантом, многочисленных рибосом и вакуолей.

В макрофагах лимфатических узлов с началом синтеза ДНК на 5-6 дни эксперимента происходит возрастание фагоцитарной активности при неизменяющемся количестве клеток. К 5-му дню опыта все изучаемые показатели повышаются, фагоцитарная-активность и численность макрофагов при этом достигают максимальных показателей, синтез ДНК достигает самых высоких значений к 15-16 дням эксперимента при высоких, но не максимальных показателях их количества и фагоцитарной функции, что свидетельствует о том, что процесс полиплоидизации способствует повышению функциональной активности клеток, особенно заметной к 15-16 дням опыта. Активированные макрофаги устремляются к очагу поражения, чем и объясняются невысокие сравнительно с 9-ым днем количество и фагоцитарная функция клетки. .Описанная реакция макрофагов мезентериальных лимфатических узлов, расположенных в непосредственной близости от очага воспаления, укладывается в приведенное объяснение.

' Макрофаги лимфатического узла в

условиях антигенной стимуляции

Сроки Количество макрофагов /ш+м/ Фагоцитарный показатель /М+м/ Индекс метки в %

Контроль 4,7+0,4 3,9+0,02 . -

5-6 дни 4,676+0,12 4,97+0,03 0,214

Рс 0,001

9 день 5,7+0,03 5,94+0,171 0,253

Р< 0,001 РсО,001

15-16 дни 5,66+0,006 5,87+0,13 0,39

0,001 Р< 0,001

Макрофаги дермы в условиях антигенной стимуляции

Зроки Количество макрофагов /М+м/ Фагоцитарный показатель /М+м/ Индекс метки в %

(онтроль 1,^76+0,01 2,91+0,39 -

5-6 день 1,73+0,07 3,19+0,127 0,17

Р<0,02 Р-= 0,001

3 день 1,795+0,04 4,27+0,119 0,23

Р<0,001 Р-= 0,001

[5-16 день 1,63+0,0372 3,92+0,008 0,305

Р =0,1 Р-с 0,001

Следует отметить невысокую ДНК-синтезирующую способность макрофагов цермы сравнительно с макрофагами остальных органов. В макрофагах этого органа синтез ДНК начинается с 5-6 дня опыта и постепенна повышаясь, достигает максимальных цифр к 15-16 дням эксперимента.

К 9-му дню опыта фагоцитарная активность и численность макрофагов достигают наивысших значений при возросшей, но не максимальной ДНК-синтезирующей способности. Последняя достигает максимальных значений к 15-16 дням опыта при невысоких двух остальных показателях, т.е. синтез ДНК в макрофагах дермы вызнвает изменения, аналогичные описанным в макрофагах других органов. Вследствие наибольшей отдаленности макрофагов этого органа от очага воспаления '/лоскут кожи брался с меяиопатотаой области/ и сравнительно слабо выраженной у них фагоцитарной функции указанные изменения выражены не сто-дь ярко, как в макрофагах остальных органов.'

Заканчивая эту часть наших исследований, можно заключить следующее :

1. В основе активации макрофагов тканевым антигеном - эритроцитами барана - лежит процесс их полиплоидизации.

2. Полиплоидизация макрофагов способствует усилению функциональной активности клеток, проявляющейся в условиях антигенной стимуляции, в первую очередь усилением их фагоцитарной активности. С полученными данными количественного анализа фагоцитарной функции клеток, подсчета процента меченых макрофагов коррелируют и данные эле-ктронномикроскопических исследований, констатирующих значительную выраженность цитоплазматических отростков в макрофагах тех органов, которым они были присущи и в норме /печень, селезенка/, и в тех

органах, где они в норме не встречались /дерма/. Этот раздел на-них исследований совпадает с данными В.Я.Бродского и И.В.Урывае-вой /1981/ о том, что всем полиплоидизирующим клеткам обысно своЕ ственно наличие большого количества цитоплазматических отростков.

Таким образом, нами установлено:

1. Макрофаги в норме являются клетками с высокой реактивностью. Об этой свидетельствуют их богатство органеллами, в первую очередь, лизосомами, высокая фагоцитарная способность, большое со дергание в их цитоплазме кислой йосфатазы. При наличии общих стру ктурно-оункциональных признаков имеются и органоспецифические осо бенности, связанные с их органной локализацией и свидетельству кади об их высоких адаптационных возможностях, выполнении ими, помимо фагоцитарной, и иных функций, связанных с деятельностью органа.

2. В условиях воздействия тканевым антигеном наблюдается активация макрофагов, выражанцаяся в увеличении их численности, воз растании фагоцитарной активности и содержания кислой фосфатазы. Основные органспецийические признаки строения как и общие, достигает значительной выраженности. Наблюдаются тесные взаимодействия активированных макрофагов с различными тканевыми элементами.

Указанные взаимодействия активированных макрофагов свидетель ствуя об их высокой реактивности, доказывают наличие у них качеств, присущих клеткам с короткодистантной регуляцией и, возможно, признаков секреции медиаторов локального действия, ограниченного регионом выделения и воздействующих на ближайшие тканевые элемент:

3. В условиях злокачдственного роста нами также выявлена высокая реактивность макрофагов, находящая различные проявления в зависимости от:

а/ Разновидностей опухолевого роста,

б/ Оргавной локализации макрофагов.

4. Рекшовды ояазывавт мембранно-активирущее влияние на макрофаги, чю проявляется возрастанием их фагоцитарной функции, активацией клеточной поверхности /цг.топлазлатические отростки, контакта с гибадцнш ялстнаня/, увеличеннеа размеров лизосом, появлением аутойагоеон, сплышы развитием ГЭР.

Органосиецийичоскае признаки какрооагов заключаются в разной степени автлзацна ззх различиях представителей в зависимости от прнмЕняевого ретиноцда.

В условиях злокачественного роста ретиноиды стимулируют пониженную или незначительно измененную, сравнительно с нормой, фун-кщшлажнтзз активность какро.рагов, за исключением лейкоза.

5. Макрофаги являются смешанной по плоидности клеточной популяцией. Процесс полиплоидизации происходит до поступления в органы их предшественников, активируется в условиях опухолевого роста, -достигает значительной выраженности при использовании ретиноидов, а также в условиях антигенной стимуляции. Сказанное позволяет допустить, что

а/ активированный макрофаг является клеткой с гиперплоидным ядром.

б/ В основе их высокой и находящей многообразные проявления функциональной активности лежит процесс полиплоидизации.

ВЫВОДЫ

1. макрофадмразличной органной локализации присущи органо-специфическив структурно-функциональные особенности, наиболее сильно проявляющиеся в печени и ослабляющиеся последовательно в ряду: макрофаги селезенки, легкого, лимфатических узлов, дермы.

2. Степень выраженности типичных ультраструктурных признаков макрофагов - активной клеточной поверхности и развитого лизосом-ного аппарата - убывает в ряду:.макрофаги печени, селезенки, легкого, лимфатических узлов и дермы.

3. Присущие макрофагам различных органов типичные структурно-функциональные признаки достигают значительной выраженности в условиях антигенной стимуляции.

Реактивность макрофагов в организме опухоленосителя резко изменяется.

- органоспецифические особенности макрофагов различной локализации проявляются неодинаковой выраженностью изменений реактивности при всех разновидностях опухолевого роста.

- в условиях химически индуцированного канцерогенеза до появления визуально различимой опухоли в макрофагах исследованных органов наблюдаются признаки супрессии, особенно в макрофагах печени и селезенки, нарастающие по мере прогрессии заболевания. «

- в условиях роста перевивных опухолей макрофаги исследованных органов подвергаются активации.

- макрофаги легкого в условиях химически индуцированного канцерогенеза подвергаются активации, в условиях роста перевивных опухолей и, особенно карциномы Люэс - угнетению.

- в организме, пораженном лейкозом, наблюдается сниженная активность макрофагов, проявляющаяся низкими показателями их численности и фагоцитарной активности.

5. Ретиноиды оказывают стимулирующее дозонезависимое воздействие на макрофаги исследованных органов, что проявляется в увеличении количества клеток, возрастании их фагоцитарной активности, выраженности ультраструктурных признаков.

Парентеральный способ введения масляных растворов ретиноидов оказывает наиболее выраженное активирующее влияние на макрофаги.

Органоспецифические особенности макрофагов при воздействии ретиноидов проявляются заметнее под влиянием метилового эфира ретиное-вой кислоты /МЭРК/ в лимфатических узлах, а под влиянием дигидроме-тилового эфира ретиноевой кислоты /ДГМЭРК/ - в селезенке и легких. На макрофаги печени и дермы оба.ретиноида оказывают примерно одинаковое положительное воздействие.

В условиях прогрессирующего лейкоза наблюдается отрицательное воздействие ретиноидов на макроф§ги.

6. Высокая реактивность'макрофагов обусловлена процессом поли-плоидизации, усиливающейся при антигенной стимуляции.

7. В организме опухоленосителя на ранних стадих химически индуцированного канцерогенеза и при росте перевивных опухолей под влиянием ретиноидов наблюдается приток в органы предшественников макрофагов, их ускоренная специализация в макрофаги, что обусловлено усилением процесса полиплоидизации макрофагов.

Список работ, опубликованных по теме диссертации.

1. Влияние витамина А спирта на содержание нуклеиновых кислот в гепатоцитах при ДМБА - канцерогенезе у мышей // П Всесоюзный симпозиум по соматической полиплоидии. Ереван, 1977. - С.80-85. Совместно с Н0здриным В.И., Артюхиной H.A.

2. Исследование токсических и антиканцерогенных свойств метилового эфира ретиноевой кислоты // П Закавказская конференция морфологов. Баку - 1978, тезисы докладов. С.41-42. Совместно с Афанасьевым Ю.И., Ноздрикым В.И., Акрамовой Д.л , Периловым A.A., Хачатурян Е.А. #

3. Изучение адъювантности и противоопухолевой активности витамина А // 7 Международный национальный конгресс по анатомии, гистологии и эмбриологии. Варна - 1978. С.7. Совместно с Афанасьевым Ю.И., Ноздриным В.И.

4. Соматическая полиплоидия // Успехи совр.биологии. - 1979. -Т.87, ;:> I. - С.148-150. Совместно с Ноздриным В.И.

5. Влияние витамина А и вакцины БЦЕ на содержание плазматических клеток и лимфоцитов в дерме при химическом канцерогенезе кожи

у мышей // дурнал экспер.и клинич.медицины. - 1979. - Т.XIX, ü 5.-С. 19-25. Совместно с Ноздри.шм В.И., Азнауряном A.B.

6. Влияние витамина А и вакцины БЦК на содержание лаброцитов в дерме при химическом канцерогенезе у мышей // Журнал экспер.и клинич.медицины. - 1980. - Т.ХХ, № 2. - С.143-146. Совместно с Ноздриным В.И., Азнауряном A.B.

7. К вопросу об иммунологической характеристике различных возрастных групп в эксперименте // ЗЕурнал экспер, и клинич.медицины. - 1980. - Т.ХХ, № 3. С.266-269.

8. Состояние лимфоцитов и макрофагов дермы в условиях накожного нанесения метилретиноата и метил-7,8 дигидроретиноата на ранних этапах канцерогенеза у мышей // Всесоюзная конференция "Физиология и патология соединительной ткани".-Новосибирск,1980. Гезисы докладов.-С.60-61.Совместно с Афанасьевым Ю.И.,Ноздриным В.И.

9. Влияние антигенной стимуляции на лимфоидный ответ селезенки у мышей различных возрастных групп // Конференция молодых ученых и специалистов, посвященная 50-летию основания Ереванск.мед. ин-та. - Ереван, 1980. - С.8-9. Совместно с Григорян H.A.

10. Изменение содержания макрофагов при введении ретиноевой кислоты // Биологический журнал Армении. - 1981. - Т.ХХХ1У, fö I.-3.55-58.

11.Изменение содержания лимфоцитов и макрофагов при накожном внесении канцерогенов и двух ретиноидов // Биологический журнал Армении. - 1981. - Т.ХХХ1У, № 5. - С.473-476. Совместно о Ноздриным В.И.

12.Возрастные особенности лимфоидных клеток при антигенной стимуляции и Архив АГЭ. - 1981. - Т.XXI, № 9. С.92-98. Совмест-зо с Азнауряном A.B., Акопджанян З.С., Чилингарян С.Ц., Григорян I.A., Каспаровой И.С.

13.Количественная характеристика клеточных и неклеточных структур тимуса и селезенки при антигенной стимуляции // IX Все-, зоюзный съезд АГЭ. - Минск. - 1981. Тезисы докладов. - C.II2-II3. Совместно с Григорян H.A.

14.Влияние аппендэктомии на противоопухолевый эффект трансме-гилретиноата // БЭМиМ. - 1982. - Т.ХСШ, tä I. С.66-68. Совместно

: Ноздриным В.И., Субботиным С.М.

15.Развитие спонтанного лейкоза у мышей линии AKR при введе-ши МЭРК // Биологический журнал Армении. - 1982. - Т.ХХХУ, № 2.-:.Ю?-ПО.Совместно с Ноздриным В.И. .Падалко В.М. .Азнауряном A.B.

16.Изменение клеточного состава пейеровых бляшек при антиген-юм воздействии // Журнал экспер.и клинич.медицины. - 1982. -'.ХХП, й 2. - С.106-109. Совместно с Азнауряном A.B.

17.Противоопухолевые и.токсические свойства ретиноида Cj5 // БЗМиМ. - 1982. - Т.ХС111, й 4. 0,76-78. Совместно с Афанасьевым Ю.И., Ноздршым Б.И., Самохваловым Г.И., Вакуловой Л.А., Яковлевой И.М.

18.!>1ор«юметрический анализ содержания BJK, РНК-сульфатирован-ных и ШИК-положительншс веществ под действием витамина А, БЦЖ и 9-10 диметилбензанантрацена в кератиноцитах мышей // Биологический журнал Армении. - 1982. - Т.ХХХУ, ¡6 - С.299-302. Совмзстно с Ноздриным В.И., Азнауряном A.B., Артюхиной H.H.

19.Структура и функции макрофагов // Успехи совр.биологии.-1982. - Т.93, ü 3. - С.421-432. Совместно с Афанасьевым Ю.И., Ноздриным В.И., Горячкиной В.Л.

20.Некоторые данные об участии клеток системы мононуклеарных фагоцитов в иммунных реакциях организма // Ш Закавказская конференция морфологов. - Ереван, 1982. Тезисы докладов. - С.36.

21. Реактивность клеток сисхош ыононуклеарных фагоцитов s аутоиммунном организме // И-Закавказская конференция морфологов. -Ереван, 1982. Тезисы докладов. - С.14. Совместно с Азнауряном A.B.

22. Некоторые данные о реактивности иакрофагальяого звена иммунного ответа // Биологический журнал Армении. - 1983. - Т.ХХХУ, ü 2. - С.10ЫЮ.

23.Состояние эпидермиса при различных способах введения й£с~ -трансиетилретиноата // Биологический журнал Армении. - I9C3. - " Т.ХХХУ, й 5. - С.437-439. Совместно с Ноздриным В.И., Субботиным C.«L, Азнауряном A.B.

24. Значение кооперативного взаимодействия макрофагов и лим-фоидных клеток в условиях злокачественного роста // Биологический журнал Армении. - 1983. - Т.ХХХУ, й 9. - С.728-734.

25.Влияние антигенной стимуляции на макрофаги а их взаимодействие с ликвидными клетками // Всесоюзная научная конференция. -Москва. - 1983. - Тезисы докладов. - С.12-13.

26.Взаимодействие иммунокомлзтентных клеток в условиях аутоиммунного организма в эксперимента // 1У научно-практическая конференция. - Ереван. - 1983. - Тезисы докладов. - С.201^-206. Совместно с Азнауряном A.B., Насоновой В.А.

27.06 участии макрофагов и лямфовдных клеток в механизме развития аутоиммунных реакций // Биологический журнал Армении. -1984. - Т.ХХХУХ, w 5. - С.362-368. Совместно с Азнауряном A.B.

28.Значение плеток СМФ при стимуляции иммунекомпетентной системы в условиях канцерогенеза // Биологический журнал Армении. -IS84. - Т.ХХХУП, ;.2 6. - С.490-435.

29.Действие ретяноидов на селезенку крыс // БЗБиМ. - 1384. -Т.ХСУП, Э 4. - С.494-497. Совместно с Афанасьевым Ю.И., Ноздриным В.И., Горячкиной В.Л.

ЗОЛакрооаги я лимфоидные клетки в условиях антигенной стимуляции // Архив АГЗ. - 1985. - Т.ХХХУП, !й 2. - С.56-58. Совместно с Азнауряном A.B.

31.Зависимость противоопухолевого эффекта от способа введения и суммарной дозы полностью транс-метилретиноата // Биологичоскай журнал Армении. - 1985. - Т.ХХХУШ, fö 9. - С.775-779.

32.Гистохимяческая и электронномикроскопмческая характеристика макрофагов различных органов при иммунизации // 13 Закавказская конференция патофизиологов. - Ереван, 1985. Тезисы докладов. -3.27-28. Совместно с Азнауряном A.B., Акопдяаяян З.С., Белоусовой Г.А.

33.Некоторые данные об участии макрофагов селезенки в реактив-ibix состояниях организма // 1У Закавказская конференция морфологов. • Батуми, 1985. Тезисы докладов. - C.30-3I. Совместно с Азнауряном 1.В., Белоусовой Т.А., Акопдяанян Э.С.

34.Морфофункциональная характеристика макрофагов различных ор-•анов // 1У Закавказская конференция морфологов. - Батуми, 1985. ;езисы докладов. - C.3I-32. Совместно с Акопдканяв З.С.

35.Сравнительная морфофункциональная характеристика макрофагов >азличных органов в условиях антигенной стимуляции // Биологичес-:ий нурнал Армении. - 1986. - Т.XXXIX, й 5. - С.402-408. Совместно

: Азнауряном A.B.

36.0 регулирующей роли макрофагов в'иммунном ответе организма 7 Биологический нурнал Армении. - Т.XXXIX, iä 6. - С.533-535.

37.К вопросу о морфофункциональной идентификации макрофагов азличных органов при реактивных состояниях организма // X Всесоюз-ый сьезд АГЗ. - Винница, 1986. Тезисы докладов. - С.7. Совместно

Азнауряном A.B., Белоусовой Т.А., Акопдканян Э.С.

38.Водорастворимые производные ретипоевых кислот, обладающие анцеропротекторными свойствами и способ их получения // Авторское видетельство В 106.6201. Заявка ü 34.55539. - Москва. - 1983. -озшестно с Поляченко Л.Н., Давыдовой Л.П., Самохваловым Г.И., йанасьсвын Ю.И., Ноздриным В.И., Волковым Ю.Т.

39.Активация макрофагов в кшунном ответе // Архив АГЭ. -986. - T.XCI, й 12. - С.71-78. Совместно с Азнауряном A.B., Бело>-овой Т.А.

40.Роль наивной крови в стимуляции иммунитета мстилретиноа-тс^м у крыс // Журнал экспер.и клинич.медицины. - 1987. - Т.ХПУП, !.'> I. - С.44-48. Совместно с Афанасьевым Ю.И., Ноздрииым В.И., Волковым ü.T., Никифоровым С.А., Ведерниковой Н.В., Косолаповым Г.А.

41.Изменения мембранных структур клетки при различных воздействиях на организм // 1У Всесоюзная конференция по патологии клетки. - Москва. - 1987. Тезисы докладов. - С.71. Совместно с Азнаурянои А.З., Бслоусовой Т.А., Азнаурян A.C.

42.Макрофаги печени и селезенки б условиях антигенной стимуляции // Биологический журнал Армении. - 1988. - Т.ХП, й 2. -

С.129-133. Совместно с Азнауряном A.B., Акопднанян Э.С., Артемян H.A.

43.0рганоспецяфические особенности резидентных макрофагов // Биологический журнал Армении. - 1988. - Т.ХП, й 3. - С.238-240.

44.Морфоуункциональныв особенности органов иммунной системы при некоторых воздействиях на организм /антигенная стимуляция, гипорбария/ // Всесоюзный симпозиум "Морфология и развитие органов иммунной системы". - Москва-Пермь. - 1988. Тезисы докладов. -С.5-6. Совместно с Азнауряном A.B., Туманяном ЭЛ., Белоусовой

Т.А., Каспаровой И.С.

45.Макрофаги селезенки в норме и при различных воздействиях на организм // 67 Отчетная научная сессия. - Ереван, 1988. Тезисы докладов. - С.46.

46.Макрофаги дермы // Биологический журнал Армении. - 1989^-.-Т.Х1П, !й 2. - C.I06-III. Совместно с Азнауряном A.B., Акоаджанян Э.С., Белоусовой Т.А., Артемян H.A.

47.Макрофаги печени // Биологический журнал Армении. - 1989.-Т.ХШ, й 2. - C.III-II5.

48.Синтез и содержание ДШС в ядрах макрофагов в норме, при экспериментальном канцерогенезе и в условиях воздействия на него ретиноидами // Цитология. - 1989. - Т. , ü .. - С. Совместно с йагакяном Ю.А., Караловой K.M. В.печати.

Ь 3 сслсзенке ] | с неНт£о^ила

эозинодЗилаии

В лимфатических узлах с нейтро!

В печени с эндотелием

кооперации макрофаг -эозинофил-плази.клетка

В дерме с поперечнополосатыми ш. волокнами

лаброцитами

СХКМА ¡й I

ЗЗА'.ИОДЕ'ЙТВЛЯ АКТИВИРОВАННЫХ ТКАНЕВЫМ АНТИГЕНОМ МАКРОФАГОВ

I

№

СХЕМА № 2

ИЗМЕНЕНИЯ В МАКРОФАГАХ ПОД ВОЗДЕЙСТВИЕМ ЕЕТИНОИДОВ

Л

Ж

Ж

л

И.

Ш

ыД

1щ

л

мм

в ¡2 . Ь (¡г

СХЕМА № 3

Распределение макрофагов лимфатических узлов и селезенки в норма, в условиях роста перевивной опухоли без воздействия ретиноидов и при их введении, по содержанию ДНК в ядрах.

По осям абсцисс - количество клеток, по осям ординат - содержание ДНК, усл.ед.; а - макрофаги лимфоузлов мезентерия, б - то же селезенки. I - лимфоциты (диплоидный.эталон содержания ДНК, 2с; П - макрофаги интактных мышей (контроль); Ш - макрофаги пораженных раком (ПРЕ) мышей; 1У - то же, с введением ретиноида С—15; У - то же, с введением ретиноида 13-цис-метил-ретиноата. Штриховыми линиями обозначены границ классов плоидности - 2с и 4с.

■ Благодарности Выражаю глубокую благодарность заведующему кафедрой гистологии, цитологии и эмбриологии I ШИ им ' И. М. Се чане профессору ы. «и Афанасьеву за многолетнюю конслультативщ помощь и плодотворное сотрудничество.

Благодарю заведующего кафедрой гистологии, цитологии и эмбриологии Ереванского медицинского института профессора АзнауряндА.В. за консультативную помощь.

Выражаю глубокую признательность за профессиональную критику и конструктивные замечания зав. лабораторией цитологии и биологии развития института экспериментальной биологии профессору С.А. Магакяну.

/ 'баиЗ