Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

ЭЙМЕРИОЗ КРОЛИКОВ В РЕСПУБЛИКЕ ТАТАРСТАН (ЭПИЗООТОЛОГИЯ, МЕРЫ БОРЬБЫ)

ВАК РФ 03.00.19, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "ЭЙМЕРИОЗ КРОЛИКОВ В РЕСПУБЛИКЕ ТАТАРСТАН (ЭПИЗООТОЛОГИЯ, МЕРЫ БОРЬБЫ)"

Л -гччец

На правах рукописи

/ /

Шиляева Юлия Николаевна

ЭЙМЕРИОЗ КРОЛИКОВ В РЕСПУБЛИКЕ ТАТАРСТАН (ЭПИЗООТОЛОГИЯ, МЕРЫ БОРЬБЫ)

Специальность 03.00.19 - паразитология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Н. Новгород-2004

Работа выполпепа на кафедре паразитологии и инвазионных болезней

Федерального государственного образовательного учреждения высшего

профессионального образования «Казанская і осу даре гве ш і ая академия ветеринарной медицины им, Н.Э. Баумана»

Научный руководитель доктор ветеринарных наук,

профессор М.Х. Лутфуллин

Официальные оппоненты: Заслуженный деятель науки РФ,

д.в.н., профессор Э.Х. Даугалиева к.в.н., доцент О.Л. Куликова

Ведущая организация: ГУ Научно-исследовательский ветеринарный

Институт Нечерноземной зоны Р'" Я113 РФ)

Зашита диссертации состоится июь і 2С*1 * -дан ил

диссертационного совета Д.220.047,02 а Ни. псі ієн ной

сельскохозяйственной академии (603107,11. Новгс; г, ^7).

С диссертацией можно ознакомится » оибл потеке Нижегородской государственной сельскохозяйственной акздемни,

Автореферат разослан «//» мая 2004 г.

Ученый секретарь диссертацисншого Совета, доктор биологических наук, профессор Н.Г. Горчакова

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Важное значение для успешного развития кролиководства в России, помимо обеспечения хороших условий содержания, кормления и улучшения породности, приобретают ветеринарно-санитарные мероприятия по охране поголовья кроликов от различных болезней, в том числе и от такого опасного инвазионного заболевания как эймериоз.

Эймериоз животных является самой распространённой болезнью и причиняет огромный экономический ущерб хозяйствам.

Заражённость кроликов эймериозом может варьировать от 30 до 100% (Н.М Лапшин, 1968; ИЦ. Дондуков, 1970; НА. Колабский, П.И. Пашкин, 1974; С.В. Леонтюк, 1974; С.А. Плешаков, 1999 и др.), падёж от чиела заболевших достигает 85%. Однако, ущерб от данного заболевания не ограничивается падежом, больные животные отстают в росте и теряют от 12 до 30% своей живой массы. Кроме того, большое количество печени кроликов выбраковывается при ветсринарно-санитарной экспертизе, снижается питательная ценность мяса переболевших животных и большие расходы несут хозяйства на проведение лечебно-профилактических мероприятий.

Эпизоотологию эймериоза кроликов в зверохозяйствах Республики Татарстан и других регионов изучали многие исследователи (С.К. Мосипа, 1Ш. Григорьева, 1981; Д.В. Васильева, Г.М. Гадеева, 1992; В.А. Стрельчнк, Е.А. Ушакова, 1998; Ж.Ф. Дзаумаммелуна, 2001 и др.). Однако, мпогае вопросы, связанные с региональными особенностями распространения, а также диагностикой этого заболевания требуют дальнейшего изучения.

Известно, что химиотерапия в настоящее время является самой эффективной и экономически результативной мерой борьбы с эймериозом кроликов. Разработкой методов химиотерапии и химиопрофилактики при эймериозе занимались многие исследователи (В. П. Рюгова, 1985; К.И. Абуладзе, Н.В. Демидов, 1990; А.И. Ятусевич, Т.В. Медвсдская, 1998; А.М. Ермаков, 2000; М.Ш. Акбаев и др., 2000; КБ. Эсубалеу, 2001; Huang Luyi, Chen Hua, 1990; S.K. Katiyar, 1994 и другие).

В настоящее время известно много химических веществ, действующих губительно на эймерий. Однако большинство из них обладают недостаточной эффективностью, высокой себестоимостью, бодьшой токсичностью, способностью накапливаться в тканях или оказывают иммуноденрсссивнос действие. Поэтому проблема изыскания новых препаратов и схем их применения остается актуальной.

Цель и задачи исследований. Цель—исследований—=—изучить эпизоотолопгческую ситуацию по эймериоз/ в Республики

фонд научной литературы

фонд научной литературы

к»

Татарстан, а также усовершенствовать диагностику и лечение этого заболевания.

Для выполнения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

Изучить распространение, возрастную и сезонную динамику, а также видовой состав эймерий в зверохозяйствах Республики Татарстан;

Усовершенствовать копрологическую диагностику эймериоза

кроликов;

Провести сравнительную терапевтическую оценку эффективности ..некоторых препаратов при эймериозе кроликов;

- Изучить влияние йодхлорина, фуразолидона и вермитана 20%-ного гранулята на иммунологическую реактивность организма экспериментально зараженных эймериозом и здоровых кроликов.

Научная новизна. В специализированных звероводческих хозяйствах РТ изучено эпизоотическое проявление эй мерной кроликов, территориальные, временные и популяционные границы его эпизоотического процесса.

Усовершенствован копршюгический метод исследований в 2,4-2,7 раза повышающий разрешающую способность существующих методов диагностики эймериоза кроликов.

Впервые установлена высокая лечебно-реабилитационная эффективность йодхлорина при эймериозе кроликов, разработана региональная научно обоснованная система противоэймериозных мероприятий.

Практическая ценность. Доказано, что экологическая паразитарная система эймериозпой инвазии в популяции кроликов - система управляемая. Разработал и рекомендован более эффективный метод диагностики эймериоза.

Для лечения кркцндноза кроликов предложен препарат йодхлорин, обеспечивающий полное освобождение организма кроликов от ооцист эймерий, нормализующий кроветворную функцию организма и положительно влияющий на клеточные и гуморальные факторы иммунитета. Полученные новые данные имеют ценное научно-практическое значение для более детального выяснения некоторых вопросов патогенеза при экспериментальном эймериозе кроликов, а также в процессе лечения их различными кокцидиостатиками.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Эймерноз широко распространен в популяции кроликов на территории РТ с выраженной возрастной и сезонной неравномерностью эпизоотического проявления и преобладанием Е. хНеЛае в этиологической структуре инвазии;

2. Усовершенствованный метод коггрологнгческой диагностики эймериоза кроликов является востребованным и наиболее эффективным;

3. Йодхлорин - высокоэффективный препарат, обладающий кокцидиостатическим действием при эймериозе кроликов;

4. Применение йодклорина при экспериментальном эймериозс кроликов активизирует эрнтропозз, восстанавливает показатели гомеостаза и неспецифической резистентности организма.

Внедрение результатов исследований. В 2000-2004 годах результаты исследований под авторским надзором с положительным эффектом внедрены в зверохозянствах Республики Татарстан. Основные положения диссертационной работы вошли в «Методические рекомендации по диагностике и профилактике эймериоза кроликов», одобренные методической комиссией и Ученым Советом ФГОУ ВПОКГЛВМ.

Пути реализации. Результаты исследований, а также положения, сформулированный и диссертации используются при разработке противоэймериозных мероприятий в других регионах и в учебном процессе на кафедре паразитологии Федерального государственного образовательною учреждения высшего профессионального образования «Казанская государственная академия ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана».

Апробация работы. Основные результаты исследований доложены и обсуждены на республиканской научно-производственной конференции но актуальным проблемам животноводства и ветеринарии (Казань, 1999); Международной научной конференции, посвященной 70-летию образования зооииженерного факультета (Казань, 2000); Всероссийской научно-производственной конференции по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии (Казань, 2002); Международной научной конференции, посвященной 130-летию академии (Казань, 2003); на расширенном заседании профессорско-преподавательского состава кафедр паразитологии и инвазионных болезней, эпизоотологии, патологической анатомии, анатомии, гистологии, акушерства и патофизиологии (Казань, 2004).

Публикация. По теме диссертации опубликовано 8 научных работ и получено удостоверение на рационализаторское предложение (№ 426-02 от 13 марта 2002 г.).

Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 177 страницах компьютерного текста, иллюстрирована 15 таблицами и 24 рисунками. Включает введение, обзор литературы, результаты собственных исследований, заключение, выводы, практические предложения и приложения. Список использованной литературы включает 211 источников (в том числе 54 иностранных авторов).

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 1. Материалы и методы

Работа выполнена на кафедре паразитологии ФГОУ ВПО КГАВМ и в зверохозяйствах Республики Татарстан в 2000 — 2004 гг.

Изучение распространения эймериозов кроликов в РТ проводили с учётом эп изоотологическнх данных, клинических признаков, патодогоанатомичес них изменений и результатов копрологических исследований. Количество ооцист эймерий подсчитывали в 5 полях зрения микроскопа.

Клинический осмотр и паразитологическое вскрытие животных проводили по общепринятым методам.

Дня изучения видового состава возбудителей эймериоза кроликов в условиях Республики Татарстан от заведомо пораженных кроликов зверохозяйств «Бирюлннский», «Кощаковский» и «Берсутский» из прямой кишки животных брали свежий кал, который помещали в пробирку и увлажняли 2%-ным раствором двухромовокислого калия. Пробирки эгикстировали и доставляли на кафедру паразитологии КГАВМ. Материал перекладывали в бактериологические чашки и ставили для созревания ооцист в термостат с температурой 27-28°С на 12 дней. В течение этого времени материал ежедневно исследовали на обнаружение ооцист по разработанному нами методу й методу Фюялеборна. Всплывшие на поверхность флотационной жидкости ооцнеты помещали на предметное стекло, поверх которого клали покровное и производили изучение видового состава ооцист (Об. х 40, ок. х 10). Для изучения видовой принадлежности эймерий пользовались определительной таблицей Е.М. Хейснна (1967). При рассмотрении каждого вида эймерий обращали внимание па форму и цвет оболочек, наличие в ооцисте и споре остаточных тел, вели наблюдение над процессом спорогонии. Размеры ооцист, спор, спорозонтов, толщину оболочек ооцист и величину шапочки определяли путем промеров по 150 ооцист каждого вида.

В целях усовершенствования предложенных методов коггрологической диагностики кокцидиоза кроликов испытывали такие флотационные и комбинированные методы как Щербовнча с нитратом натрия,.с сульфатом магния и с тиосульфатом натрия, Веретты, Дарлинга, Котельникова-Хренова с нитратом аммония и с нитратом свинца, Котельникова-Варснкчева, Малпори, Вольфа, Демидова, Вишпяускаса, Сафиуллина, Бреза и метод Фюллеборпа. Собранные из кала больных кроликов ооцисты кокцидий в количестве 100 экземпляров закладывали в пробы фекалий здоровых кроликов и подсчитывали их сначала в одной капле, а затем в 1 мл флотационной жидкости.

При эпизоотологнческом обследовании, а также для оценки эффективности кокцидиостатиков пользовались показателями — экстенсинва-

зированности (ЭИ), интеисинвазированности (ИИ), экстенсэффективности (ЭЭ) и инте неэффективности (ИЭ).

Лечебную эффективность 13 антаэймериозных препаратов изучали в зверосовхозе «Бирюлинский» на 112 кроликах двухмесячного возраста, пород Белый великан и Шиншилла, спонтанно инвазированпых кокцидиозом. Перед началом производственных опытов, животных подбирали по принципу аналогов (т.е. имеющих сходные клинические признаки, одинаковую живую массу и степень инвазии) и разделили их на 14 груш. Кроликам первой группы назначали норсульфазол (0,4 г/кг массы тела), второй - фуразолидон (20 мг/кг), третьей - метронидазол (40 мг/кг), четвёртой - вермитан 20%-ный граиулят (40 мг/кг), пятой и шестой группам - ветакокс и ампролиум соответственно (40 мг/кг), седьмой - йодхлорин (0,4 мг/кг), восьмой - кокцидиовнт (40 мг/кг), девятой - юшнакокс (30 мг/кг), десятой - кокцидип (40 мг/кг), одиннадцатой группе - фармкокцид-10 (35 мг/кг), двенадцатой - сульфадимезин в такой же дозе, тринадцатой - норсульфазол с фталазолом соответственно (0,4/0,1 г/кг массы тела).

Указанные препараты задавали с кормом групповым методом. Препараты, за- исключением метронидазола и вермитана применяли двумя пятидневными курсами с интервалом в 3 дня. Обработку кроликов третьей группы проводили двумя шестидневными курсами с интервалом 3 дня. Животным четвертой группы задавали вермитан в дозе 40 мг/кг в течение пяти дней с кормом. Кроликам седьмой группы перорально при помощи шприца, соединенного с резиновым шлангом в течение 5 дней вводили ii од хлор Ш1 в дозе 6 мл/гол, который перед применением разподаищ в 20 мл питьевой воды. Животные 14 группы служили контролем и обработку их против эймериоза не проводили. При проведении опытов учитывали клиническое состояние животных, количество ооцист кокцидий в поле зрения микроскопа до и через 7, 14 и 30 дней после лечепия.

На экспериментально зараженных эймериозом кроликах изучали терапевтическую эффективность, а также гематологические, биохимические и иммунобиологические показатели после введения йодхлорина, фуразолидона н вермитана 20%-ного i-ранулята.

Заражение животных проводили смешанной культурой спорулированных ооцист Eimeria stiedae, Е. coecicola, Е. intestinalis, Е. irresidua, Е. piriformis„ Е magna, Е. perforons, Е, media. Для этого неспорулированные ооцисты эймерий выделяли из фекалий по методу Фюллеборна и культивировали в чашках Петри в 2,5%-ном растворе бихромата калия в термостате при температуре 2б-27°С. Суспензию ооцист отмывали 2 раза водопроводной водой центрифугированием и подсчитывали с помощью камеры

Горяева количество ооцист в 1 мл. Каждому животному с помощью резинового зонда и шприца перорально вводили по 50 тыс. ооцисгг эймерий.

, Содержание гемоглобина определяли по Сали, количество эритроцитов и лейкоцитов - в камере Горяева (по общепримятой методике). Для определения лейкоцитарной формулы использовали мазки крови, окрашенные по Романовскому -Гимзе.

Скорость оседания эритроцитов (СОЭ) исследовали по способу Панченкова (A.A. Кудрявцев, JI.A. Кудрявцева, 1974).

Количество общего белка определяли рефрактометром ИРФ-22, белковые фракции — рефрактометрическим методом, содержание сывороточного лизоцима - нефелометричееккм методом по В.Г. Дорофейчуку (1968), количество сывороточного комплемента - согласно методике J1.C. Резниковой (1967) путём титрования комплемента по 50%-ному гемолизу.

Процент аттракции лейкоцитов, фагоцитарную активность лейкоцитов, фагоцитарный индекс и индекс переваривания определяли по методике Кост и Стенко(А.А. Кудрявцев, JI. А. Кудрявцева, 1974).

Бактерицидную активность сыворотки крови исследовали методом фотонефелометрии по Мюшелю и Треффексу в модификации О.В. Смирновой и Т. А. Кузьминой (1966).

Т-лимфоциты определяли методом спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана по Wybran et al. (1972). B-лимфоциты выявляли реакцией комплементарного розеткообразования с эритроцитами барана, образующими иммушше комплексы с проти воэритроцитарныыи антителами и комплементом по Е.Ф. Чернушенко, Л.С. Когосовой (1981).

Лейкоцитарную взвесь для определения Т- и B-лимфоцитов получали согласно методике М.Х Лутфуллтгна я H.A. Лутфуллиной (1996).

Статистическую обработку цифровых данных проводили с заданной надежностью (достоверностью) Р < 95% или уровне значимости г = 0,05 на ЭВМ «Электроника МК-56» по разработанным программам (Р.Х. Тукшаитов, Н.Х. Нигматуллин, 1988).

2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 2.1. Распространение, возрастная, сезонная динамика и видовой состав энмерин в зверохозяйствах Республики Татарстан

Обследование 512 кроликов в трех зверохозя йствах Республики Татарстан показало, что эймериями инвазированы все возрастные группы животных. Наблюдения показали, что у кроликов кокцидиоз протекает в виде смешанной инвазии. У инвазированнык кокцидиозом животных клинические признаки характеризовались общим угнетением, понижением аппетита или его

отсутствием, бледностью или жслтушностью слизистых оболочек, жидкими испражнениями со слизью и нередко с кровью, наблюдались параличи конечностей и шейных мышц, а также судороги.

При наружном осмотре трупов павших животных отмечали выраженное истощение организма, бледность и желтушность слизистых оболочек, а при вскрытии в желудочно-кишечном тракте обнаруживали набухание и покраснение, а также отслоение слизистых оболочек, покрытие их творожистыми наслоениями с примесями крови и присутствием сероватых точечных и очаговых пятен. Печень была увеличена, на поверхности и в паренхиме органа имелись округлые белого цвета очажки, заполненные смеганообраэным содержимым-

Величина экстенсивности и интенсивности инвазии зависела от возраста кроликов. Так, кролики от 1 до 3-х месячного возраста были заражены эймериями в пределах 92,4-100% (в среднем 97,4%), а интенсинвазированность (ИИ) колебалась от 49 до 218 ооцист (в среднем 120,6 ооцист) в 5 полях зрения микроскопа. Кролики в возрасте от 3-х до 6-и месяцев были инвазированы эймериями намного меньше и экстснсинвазированность колебалась от 50 до 99,1% (в среднем 91,6%), при средней ИИ ог единичных до 63 ооцист. Экстснсинвазированность кроликов старше 6 мес. была в пределах от 52,4 до 97,2% (в среднем 77,3%), при средней ИИ от единичных до 46 ооцист.

Установлена гакже зависимость интенсивности инвазии от сезона года. Например, ИИ взрослых кроликов в летне-осенний период составила 32±1,4, осс[ше-зимняй - 5±0,4, в зимний период отмечались лишь единичные ооцисты эймерий во всей капле пробы, а в весенний период ИИ составила 12±1,1 ооцист в 5 полях зрения микроскопа.

Не выявлено достоверной разницы в интенсивности и экстенсивности инвазии у кроликов пород Белый великан. Шиншилла, Черно-бурой и Серебристой.

В исследованных нами зверохозяйствах у кроликов были обнаружены 8 видов возбудителей эймериозов: Eimeria stiedae (20,3%), Е performs (18,4%), Е. magna (12,8%), Е. piriformis (12,4%), Е intestinalis (12,0%), Я irresidua (11,7%), Е. media (6,8%), Е. coecicola (5,6%). Морфологические признаки обнаруженных видов эймерий согласуются с литературными дшшыми.

2.2. Ко прологи ческа я диагностика эймериоза кроликов

Исследовали пробы фекалий- от кроликов с заведомо известным количеством ооцист эймерий (100 экз.)

Результаты проведенных исследований показали, что комбинированными методами Котелышкова-Хренова с нитратом свинца н

Вншияускаса с сернокислым цинком ш в одном случае ооцист кокцидий не обнаружили.

Методом Фюллеборна и Дарлинга было выявлено соответственно 40,(Ж),4 и 35,6±1,1% ооцнст кокцидий. С помощью метода Щербовича с сернокислым магнием было обнаружено 20,5±1,4%, с аммиачной селитрой 22,8± 1,2% и тиосульфатом натрия - 28,8±2,2%. Диагностическая эффективность таких методов как Котелышкова-Хрснова с аммиачной селитрой, Вольфа и Демидова также была не высокая и составила 28,3±0,9%, 28,4±1,3% и 22,0±0,5% СООТВеТСТВеННО:

С помощью методов Котел ьннкова-Вареничева, Верреты, Маллори и Бреза было выявлено 48,2±1,2, 64,4±3,1. 59,6±0,5 и 70,0±3,3% ооцист кокцидий соответственно.

Высокую диагностическую эффективность проявил флотационный метод Сафиующна с комбинацией солей цинка хлорида и натрия хлорида. Этим методом было обнаружено 81,1±3,8% ооцист кокцидий.

Следующим этапом наших исследований являлось усовершенствование метода Сафиуллина, целью которого являлось повышение чувствительности метода.

При методе Сафиуллина соотношение раствора цинка хлорида и натрия составляет 1:2. Мы изменяли соотношения этих растворов как в сторону увеличения, так и в сторону уменьшения компонентов флотационной жидкости. Исследования показали, что при всех использованных комбинациях количество выявляемых ооцист кокцидий колебалось от 33,3±1,5 до 62,64=4,1%. Методом Сафиуллина в этом опыте было обнаружено 79,1±0,8% ооцист.

Следовательно, путем изменения соотношения цинка хлорида и натрия хлорида нам не удалось повысить чувствительность метода Сафиуллина. Поэтому мы использовали флотационную жидкость, состоящую из трех компонентов (насыщеш)ых растворов цинка хлорида, натрия хлорида и сахара). Диагностическая эффективность комбинированного метода с использованием трехкомпонентного ингредиента зависела также от соотношения входящих компонентов. Так, например, с помощью раствора, приготовленного из насыщенных растворов цинка хлорида, натрия хлорида и сахара в соотношении 1:1:1 было выявлено 34,1 ±2,8% заложенных ооцист, в то время как при Соотношении этих же компонентов 1:2,5:0,5 обнаружили 95,1±5,8% ооцист.

Таким образом, разработанный нами копроскопический метод, основанный на использовании трехкомпонентного ингредиента, состоящего из насыщенного раствора цинка хлорида, натрия хлорида и сахара оказался более чувствительным, с помощью которого было обнаружено ооцнст на 16% больше, чем методом Сафиуллина и соответственно на 75,1% и 69,5% больше, чем методами Фюллеборна и Дарлинга.

2.3. Сравнительная оценка терапевтической эффективности некоторых препаратов при энмериозе кроликов

Изучали сравнительную эффективность 13 препаратов (норсульфазол, фуразолидон, метронидазол, вермитан 20%-ный грапулят, ветакокс, ампролнум, йодхлорин, кокщщиовит, клинакокс, кокцидип, фармкоюшд-10, сульфадимезин, норсульфазол с фталазолом) при лечении спонтанно инвазиро ванных крольчат двухмесячного возраста в период когда отмечалось максимальное выделение ооцист эймерий.

В результате проведенных исследований было установлено, что через 7 дней после последнего применения использованных препаратов ИИ снижалась во всех опытных группах, а ИЭ колебалась ог 44,6 до 97,5%: Наиболее высокой противоэймериозной эффективностью в этот период обладал йодхлорнн (97,5%), далее ветакокс, кокцидиовит и норсульфазол с фталазолом, ИЭ которых составила 89,1 88,1 и 87,1% соответственно.

Через 14 дней после лечения в некоторых группах отмечали повышение ИИ, а в некоторых, наоборот, снижение.

Например, после применения клинакокса - 82,1% (против 70,2%), норсульфазола ИЭ составила 74,4% (против 65,6% через 7 дней), коюшдина -68,3% (против 47,7%), сульфадимезина - 66,7% (против 61,5%). ИЭ фуразодндона, метронидазола, вермитана 20%-ого, ветакокса, ампролиума, клинакокса, фармкокцида, норсульфазола с фталазолом снизилась. Наиболее низкие показатели ИЭ были у метронидазола (19,7%), ампролиума (25%) и фармкокцида-10 (21,1%).

Через 30 дней после лечения норсульфазолом, фуразолидоном, ветакоксом, ампролиумом, кокнидиовитом и кокцидином произошло увеличение количества ооцист по сравнению с 14 днем. В группах, где использовали мстронидазол, вермитан и норсульфазол с фталазолом отмечали дальнейшее снижение количества ооцист и ИЭ в этих группах составила соответственно 43,9, 25,0 и 66,7%. ЙЭ йодхлорина составила 100%, при чем все 8 кроликов как на 14-ый, так и на 30 дни полностью освободились от ооцист и ЭЭ также составила 100%.

В контрольной группе, где лечение животных не проводили, ИИ через 7 дней составила 226±3,9, через 14 дней - 230±3,9 и через 30 дней - 252±4.0 ооцист, против 201 ±2,7 (фоновые исследования).

Следовательно, йодхлорин в дозе 6 мл/гол при перорадьном применении в течение 5 дней, обладает выраженным кокцидиостатическим действием.

. 2,4. Изучение гематологических, биохимически!, иммунобиологических показателей у кроликов зараженных кокцидиозом н леченных йодхлорином, фуразолидоном н вермитаном 20%-иым граыулятом

В опыте использовали 25 кроликов 1-3 месячного возраста с массой тела 1,7-3,0 кг, которых разделили на 5 групп (по 5 животных в каждой). Кроликов I, П, 1П и IV групп инвазировали взвесью 50 тыс. проспорулировал цых ооцист эймерий, состоящей из 8 видов эймерий. Зараженным животным I группы, Начиная с первого дня патентного периода (начало выделения ооцист эймерий) нерорально, ежедневно в течение 5 дней в дозе б мл на голову задавали йодхлорин. Кроликам II группы давали фуразолидон из расчета 20 мг/кг живой массы 1 раз в день двумя пятидневными курсами с интервалом между ними 3 дня. Животных Ш группы лечили вермитаном из расчета 40 мг/кг массы животного одним пятидневным курсом. Зараженные крошки IV группы не подвергались лечению, животные V группы служили контролем (интактные). Пробы фекалий и кровь брали до заражения, до лечения (спустя 7 дней после заражения) и через 3,6,10, 15 и 30 дней после введения препаратов.

Результаты копрологических исследований показали, что ИИ у экспериментально зараженных животных до лечения находилась в пределах 2201±124,8 - 2253±50,1 ооцист в 5 полях зрения микроскопа. В этот же период у кроликов всех четырех групп были выявлены и клинические признаки острого эймериоза, характерными для которых являлось частое мочеиспускание и понос. В группе, где применяли йодхлорин, на 15 день после введения препарата ИЭ и ЭЭ составила 100%. После применения фуразолидона и вермитана ИЭ в этот период составила 47,5 и 37,5% соответственно. Улучшение общего состояния у кроликов отмечалось на 10 день в группах, леченных Йодхлорином и фуразолидоном, на 12 сутки в группе, где применяли вермитан и на 20 сутки в группе зараженного контроля.

Первичное инвазирование кроликов эймериями вызвало уменьшение количества эритроцитов. После введения животным йодхлорина, фуразолидона, вермитана, а также в группе зараженного контроля наиболее выраженные изменения отмечали на 3 день терапии, что составляло 4,74±0,26, 4,82±0,2, 4,76±0,29, 4,3±0,17, против б,8±0,17х101г/л в контроле. В последующем, в группе, леченной йодхлорином количество эритроцитов и гемоглобина повысилось на 28 и 27,8% соответственно, что связано с позитивным влиянием препарата на эритропоэз, а также на уничтожение негативных факторов, влияющих на кроветворную функцию организма (токсины ооцист эймерий), тогда как в группе, где задавали вермитан они до конца опыта оставались ниже уровня таковых у здоровых кроликов (слабая степень анемии). В группе, получавшей фуразолидон, эти показатели восстановились до физиологической нормы на 30 день опыта.

Ответная реакция организма на патогенное действие эймерий сопровождалась увеличением числа лейкоцитов у всех зараженных животных в пределах 1,5-2 раза на 3 день введения препаратов и нормализацией их на 15 день лечения йодхлорином и на 30 сутки лечения фуразолидоном н вермитаном. В группе зараженного контроля отмечалась лейкопения, связанная -с функциональным истощением защитных сил организма.

На 3-ий день лечения было отмечено повышение уровня СОЭ, которое группах, леченных йодхлорином, фуразолидоном, вермитаном и зараженного контроля составило 6,38±0,96; 7,41±0,83; 6,82±0,95 и 10,1 ±0,72 мм/час, против 2,4±0,09 мм/час в контроле. Уровень СОЭ в группе, леченной йодхлорином, нормализовался на 15 сутки, в группах, леченных фуразолидоном и вермитаном - на 30 сутки. В группе зараженного контроля этот показатель к концу опыта был выше уровня таковых здоровых животных в 2,5 раза, что говорит о сохраняющемся воспалительном процессе в кишечнике, сопровождающимся выпотом экссудата в просвет и затруднением всасывания жидкости в организм кролика, что приводит к вязкости крови.

О подавлении иммунобиологической реакции организма кроликов в ответ на патогенное действие простейших в шизогональный период развитая свидетельствовало снижение в 1,2-1,5 раза числа • лимфоцитов в группах зараженных животных, которые в последующем повысились до физиологической нормы у животных, которым применяли йодхлорин.

В этот период во всех четырех группах зараженных животных также произошел "выброс в кровеносное русло эозинофилов, которые превышали показатели таковых здоровых животных соответственно на 4,7; 7,3; 5,9 и 6,8%, Следует отметить, что эозшюфилия имела кратковременный характер и уже на б день лечения уровень эозинофилов нормализовался. Данное явление вполне объяснимо, т.к. эозинофилия является показателем и аллергии и защитой реакции организма, в силу того, что у всех клеток — эффекторов эозинофилы обладают наиболее мощной цитотоксичностьк» по отношению к кокцндням.

Отмеченная динамика форменных элементов крови в начальный период инвазии носит защитный характер и объясняется стимулирующим воздействием антигенов паразитов и развитием воспалительного процесса, тогда как характер выявленных сдвигов показателей крови в последующем отражает частичную иммунодепрессию и угнетение естественной резистентности организма.

У зараженных эймериозом кроликов количество Т-лнмфоцитов было незначительно ниже и колебалось от 35,1±0»21 до 36,2±0,22%, против 40,0±0,4% в к01Гтроле. Через 3 дня после введения препаратов содержание этих клеток в группе, леченной йодхлорином равнялось 35,9±0,44%, фуразолидоном -33,8±0,24%, вермитаном - 31,2±0,42% и в группе зараженного контроля -33,1 ±0,2%, против 41,3±0,1% в контроле (р<0,01), т.е. произошло дальнейшее

снижение. Однако на 15 сутки после введения йодхлорина содержание Т-клеток нормализовалось. У животных, получавших вермитан, а также зараженного контроля уровень этих клеток был ниже, чем у здоровых в течение веет опыта и находился в пределах ,22,1±0,12 - 39,1±0,21% и 30,1±0,64 - 38,1 ±0,26%, которые к концу опыта так и не нормализовались.

Результаты идентификации В-лимфоцитов показали, что у кроликов 1руппы зараженного контроля в течение 3-30 суток происходило снижение этого показателя по сравнению с исходными данными и к концу опыта уровень их был ниже фоновых показателей на 5,1%. Введение йодхлорина, наоборот, способствовало повышению ЕАС-лимфоцитов, которые нормализовались на 15 сутки, тогда как в других группах В-лимфоциты в течение всего периода были ниже уровня таковых здоровых кроликов.

Об активной гуморальной реакции в организме зараженных эймериями кроликов говорят значительные сдвиги в распределении белковых фракций. Достоверное увеличение содержания общего белка в сыворотке крови отмечалось на 3 день введения препаратов на 30-35% во всех группах зараженных животных, более выраженное в группе зараженного контроля (12,1*0,38, против 6,47*0,54 г% в контроле). Во фракциях белка у животных всех четырех зараженных групп зафиксирована диспротеинемия, характеризующаяся снижением как количества альбуминов, так и а-глобулинов и повышением на 30 день опыта {3- и у-глобулнпов. В группе зараженного контроля на 30-ый день опыта (V и -/-глобулины превышали фракции таковых в группах, получавших йодхлорнн, фуразолидон и вермитан соответственно на 24 и 9%, 32 и 14%, 25 и 13%. Очевидно, положительная динамика ^-глобулинов доказывает развитие выраженных иммунобиологических реакций организма в ответ на антигенное воздействие эй мер ни.

Ведущая роль, при инвазионных заболеваниях принадлежит полиморфно-ну клеарным нейтрофилам, обладающим фагоцитарными и цитотоксическими свойствами. ФАН у контрольных животных на протяжении всего периода опыта находилась в пределах 64,6-68,3%. Однако, у зараженных животных отмечалось снижение этого показателя на 3-ий день после введения препаратов в пределах 1,6-2 раза от исходного, после чего в группе, получавшей йодалорин ФАН нормализовался на 15 сутки, тогда как в группах, леченных фуразолидоном и вермитаном он так и не восстановился до физиологической нормы. В группе зараженного контроля ФАН к концу опыта составил 38,9±0,12%, против 68,3±1,9% в контроле.

В первые дни инвазии в результате активной циркуляции токсинов эймерий снижалась бактерицидная активность сыворотки крови. При этом снижение этого показателя заметно было в группе леченной вермитаном, где

БАСК снизилась и составила 47,3±1,3, пропив 54,1 ±1,0 г% (исходные данные). К концу опыта этот показатель нормализовался.

Патогенное действие эймеркй также отразилось и на активности лизоцнма и уровня комплемента сыворотки крови во всех опытных группах, кроме контроля на 3 день лечения, где эта показатели снизились. Уровень лизоцнма в этот период был в пределах 10,2±0,29 - 12,1±0,53, против 16,4±0,4 мкг/мл в контроле, а комплемента 10,5±0,39 - 11,6±0,56 С'Н^/мл, против 16,4*0,4 С'Н50/мл. На 6-е сутки после введения препаратов эти показатели активизировались и к концу опыта (30-ый день) нормализовались в Ггруппе, тогда как во II и III не достигли исходного уровня.

Таким образом, можно констатировать, что у экспериментально инвазированных кокцидиозом кроликов наблюдается нестабильность в гуморальных и клеточных специфических и неспецифических факторах иммунологической защиты. Это происходит, по всей вероятности, в результате как иммунодепрессивного действия паразитарных антигенов, обычно в начальный период инвазии, так и иммуностимулирующего их воздействия в последующем. Однако, в группах, где применяли фуразолидон и вермитап, а также в группе зараженного контроля показатели неспецифической резистентности так и не пришли к таковым у здоровых, что свидетельствует о возможном развитии "вторичного иммунодефицнтного состояния, а также о негативном влиянии самих препаратов на иммунную систему организма кроликов. Следует отметить, что в 1руппе, . где применяли йодхлорин, большинство изученных показателей нормализовалось ла 15 сутки после введения препарата.

2.5. Изучение влияния йодхлорнна, фуразолндона и вермнтана 20%-иого гранулята на гематологические, биохимические и иммунобиологические показатели здоровых кроликов

С целью изучения влияния указанных препаратов на гематологические, биохимические и иммунобиологические показатели организма здоровых животных нами был проведен опыт на 20 кроликах, 15 из которых получали йодхлорин, фуразолидон и вермитан (по 5 кроликов на препарат). Кровь для исследования брали до и через 3,6,10,15 и 30 дней после введения препаратов. Установлено, что после применения йодхлорина и фуразолидона у здоровых кроликов отмечалось повышение эритроцитов и гемоглобина в течение всего опыта, в пределах 1,1-1,4 раза в сравнении с исходными данными. Это говорит о том, что препараты оказывают положительное влияние на эритролоэз. Наоборот, применение вермитана подавляло кроветворную функцию организма

кроликов« о чем свидетельствовало снижение эритроцитов и гемоглобина в этих группах в 1,4-1,5 раза, что статистически достоверно.

Отмечающийся на 15 день после введения йодхлорина слабый лейкоцитоз (7,2*0,3, против 6,48±0,52х10ч/л в сравнении с фоном), говорит об активации клеточного фактора защиты. В группах, где использовали фуразолидон и вермитан, этот показатель прогрессивно снижался и составлял в этот же срок 5,6±0,28 и 5,5±0,12х10%, против 6,28±0,39 и 6Д4±0Д4хЮ7л (фоновые данные), а на 30 сутки эти показатели повысились на 6 и 5% соответственно.

На 10 день после введения йодхлорина отмечался лимфоцитоз, а при введении фуразолидона н вермитана установили достоверное угнетение лимфоцитопоэза, который восстановился до физиологической нормы к концу опыта в группе, где применяли фуразолидон.

Иммуннодепрессивная реакция на введение фуразолидона и вермитана подтверждалась также снижением Т- и В-лимфоцитов, которое наиболее характерно было выражено на 10 день введения препаратов. Йодхлорин у здоровых кроликов наряду с лимфоцитозом повышал уровень Т-лимфоцитов, достигающий наивысшего пика на 10 сутки (45,2±0,1, против 38,7±0,3% в исходных данных) и В- лимфоцитов на 15 день (31,0±0,8, против 25,4і 1,24% в фоновом показателе). К концу опыта в группах, получавших йодхлорин и фуразолидон, содержание этих клеток находилось на уровне таковых у контрольных кроликов. Несмотря на незначительное повышение количество Т-клеток у кроликов, получавших вермитан на 30 день опыта было ниже контрольной группы на 15,8%, а В-клеток - на 14,6%.

После применения йодхлорина в фуразолидона на 10 день была отмечена слабая тперпротсияемия, за счет снижения уровней альбумина и а-глобулинов и повышения и у-глобулиновых фракций и восстановление всех фракций до физиологической нормы к концу опыта в обоих группах. Применение вермитана вызвало, наоборот, гипопротеинемию, связанную с понижением р- и у-глобулиновых фракций к 10 дню опыта, сохраняющуюся так до конца опыта. Кроме того, было установлено, что показатели БАСК и ФАИ у животных этой группы незначительно превышали таковые в контрольной группе и составляли 60,3±2,01 и 69,3±0,9 г%, против 64,6±1,4 и 64,6±1,4 г% в контроле. Однако в группе, где применяли фуразолидон показатели БАСК и ФАН уступали таковым контрольной группы на 15 день введения препарата и составляли 51,4±1,4 и 62,1 ± 1,62 г% соответственно, против 57,9±2,3 и 63,8^2,34 г% в исходных данных. После использования вермитана показатели БАСК и ФАН в этот срок также были ниже исходных данных и составляли 49,8±1,34 и 58,4±1,74%, против 56,1±2,1 и 66,1±2,51 г%. На 30 день опыта эти показатели в группе, где применяли фуразолидон нормализовались.

Введение йодхлорина способствовало незначительному подъему уровня лнзоцима на 10 день введения препарата, который составил 17,9±0,91, против 15,9±0,61 мкг/мл (фоновый показатель). Уровень комплемента при этом в течение всего опыта оставался в пределах нормы н составлял 15,7±0,84-17»1±0,1 мкг/мл. После введения кроликам фуразолвдона и вермитана уровни лнзоцима и комплемента снизились в пределах 7-10%, при чем они были более выраженными в группе, в которой применял» вермитан, где уровни лнзоцима и комплемента составляли в этот день 14,2±0,31 мкг/мл и 14,8*0,52 СН50/мл, против 15,9±0,73 мкг/мл и 16,1 ±0,92 СН50/мл соответственно по сравнению с фоном. Уровни этих показателей в последующем нормализовались в группе, где применяли фуразолвдон и не восстановились до физиологической нормы при применении вермитана.

В конце опыта (через 30 дней) животных с каждой группы убивали и подвергали неполному гельминтологическому вскрытию. Исследования показали, что применение йодхлорина, фуразолвдона и вермитана не вызывают на слизистой желудка и кишечника видимых патологоанатомических изменений.

Таким образом, введение кроликам йодхлорина позитивно сказывается на эритропоэзе, активизирует клеточные и. гуморальные, а также неспецифические факторы иммунитета, повышает иммунобиологическую реакцию организма. Фуразолвдон активизирует кроветворную функцию организма, увеличивает уровень общего белка сыворотки крови и незначительно снижзет защитные факторы иммунитета, которые к концу опыта восстанавливаются до физиологической нормы. Однако применение вермитана негативно сказывается на кроветворной функции н угнетает защитную функцию организма.

ВЫВОДЫ

1. Эймериоз кроликов широкораспространен в зверохозяйствах РТ, с выраженной ЭИ от 36,7 до 100% (М=68,3±3,4%) и ИИ от 2,5 до 218,0 (М=110,3±5,5) ооцист в 5 полях зрения микроскопа. Протекает круглогодично, с выраженными сезонными эпизоотическими надбавками (август-сснтябрь). В эпизоотическое проявление эймериоза вовлекаются все возрастные ipyiiiw популяции, с преимущественным поражением крольчат до 3-х месячного возраста независимо от их породы. '

2. В формировании этиологической структуры эймериоза кроликов в РТ в различной степени участвуют 8 видов эймерий: Eimeria stiedae (20,3%), Е. performs (18,4%), Е. magna (12,8%), Е. piriformis (12,4%), Е. intestinalis (12,0%), Е irresidua (11,7%), E. media (6,8%), £. coecicola (5,6%).

3. Манифестация экспериментального эймериоза у кроликов при презентации им по 50 тыс. ооцист на одну особь проявляется постепенным нарастанием до 10 дня показателей гомеостаза и снижением исспецифической резистентности их организма.

4. В контролируемых опытах по сравнительной оценке с использованием принципа «Placebo», метод Сафиуллина оказался наиболее эффективным с высокой разрешающей диагностической способностью, позволяющей выявлять в среднем 81,1±3,8 из 100 ооцист КОКЦИДИЙ в исследуемом материале.

5. Разрешающая способность предложенного нами флотационного метода копрологичсских исследований, основанного на использовании трех-компонентной смеси насыщенных растворов цинка хлорида, натрия хлорида и сахара в соотношении 1:2,5:0,5, превосходит в 2,4 раза метод Фюллеборна и в 2,7 - метод Дарлинга при диагностике эймериоза кроликов.

6. Из 13 химиопрепаратов, испытшшых при спонтанном эймериозе кроликов кокцидиостатическим свойством обладает Йодхлорин, при 5-тн дневном пероральном применении которого в дозе 6 мл на животное (0,039 г/кг живой массы по ДВ), достигается 100% интенс- и экстенсэффективность через 14 дней после начала применения, с восстановлением уровня гомеостаза и неспецифической резистентности.

7. Региональная научно-обоснованная система противоэймериозных мероприятий для звероводческих хозяйств РТ с применением усовершенствованного метода диагностики и йодхлорина с лсчсбно-рсабилитационлой целью, оказалась высокоэффективной и востребованной. Внедрение системы в зверосовхозах «Кощаковский», «Бирюлипский» и «Берсутский» РТ позволила оздоровить их от эймериоза кроликов и поддерживать эпизоотическое благополучие.

РЕКОМЕНДАЦИИ ПРОИЗВОДСТВУ:

1. Усовершенствованный копролошческий метод диагностики кокцидиоза кроликов (удостоверение на рационализаторское предложение №426-02 от 13.03.02.).

2. Методические рекомендации по диагностике и профилактике эймериоза кроликов, одобренные методической комиссией и Ученым Советом ФГОУВПОКГАВМ.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Ницак Ю.Н., Тимербаева P.P. Изыскание препаратов против кокцидиоза кроликов //Актуальные проблемы животноводства и ветеринарии. - Казань. -1999. -С. 34-35.

2. Лутфуллин М.Х., Шиляева Ю.Н. {Ницак Ю.Н.), Гоголев В.Б. Некоторые иммунологические показатели у кроликов при экспериментальном кокцидиозе //Инфекционные и инвазионные болезни животных. - Казань. -2000.-С. 86-87.

3. Лутфуллин М.Х., Шиляева Ю.Н., Корнишина М.Д., Угрюмова В.У. Т- и В-лимфоциты при кокцидиозе кроликов //Инфекционные и инвазионные болезни животных. - Казань. - 2000. - С. 87-88.

4. Корнишина М.Д., Матросова JI.E., Шиляева Ю.Н. Сравнительная эффективность препаратов при эймериозе кроликов //Материалы Всероссийской научной производственной конференции по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии. - Казань. - 2002. - Ч. 1. - С. 64-65.

5. Шиляева Ю.Н., Лутфуллин М.Х., Гайсина Л.А. Эффективность копрологических методов диагностики кокцидиоза кроликов //Материалы Всероссийской научной производственной - конференции по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии.-Казань.-2002. ~Ч. 1.-С. 141-142.

6. Шиляева Ю.Н. Диагностическая эффективность метода Щербовича с различными флотационными жидкостями.. при эймериозе кроликов //Материалы Всероссийской научной производствешюй конференции по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии. - Казань. - 2002. - Ч. 1. -С. 142-144.

7. Шиляева Ю.Н., Лутфуллин М.Х., Корнишина М.Д., Матросова Л.Е. Сравнительная оценка терапевтической эффективности некоторых препаратов при эймериозе кроликов //Учёные записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины. — 2003. — Т. 174. — С. 184-189.

8. Лутфуллин М.Х., Шиляева Ю.Н., Корнишина М.Д. Эпизоотологическая ситуация по эймериозу кроликов в зверохозяйствах РТ //Материалы Международной научно-производственной конференции по актуальным проблемам агропромышленного комплекса. — Казань. — 2003. — 4.1. - С. 8688.

На правах рукописи

Шиляева ЮЛ.

-Зйккртоз лсудалэтомга^Рсигубликс'ТатЕргга; (эпизоотология, меры борьбы)

03.00.19 - паразитология Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

компьютерная верстка Т.В. Оваохно

Корректор О.Ф. Костина Лицензия ЛР № 0402284 от

Подписано в печать Формат 60/84 1/16. Печать офсетная. Бумага офсетная. Усл. печ. л, - 1,0. Тираж - 100 экз. Заказ №///

Типография НГСХА, 603107, Н. Новгород, пр. Гагарина, 97.