Этиологическая структура, морфофункциональная характеристика эшерихиоза телят

Моторыгин, Антон Валерьевич

Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Этиологическая структура, морфофункциональная характеристика эшерихиоза телят
ВАК РФ 06.02.02, Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов

Автореферат диссертации по теме "Этиологическая структура, морфофункциональная характеристика эшерихиоза телят"

МОТОРЫГИН АНТОН ВАЛЕРЬЕВИЧ

ЭТИОЛОГИЧЕСКАЯ СТРУКТУРА, МОРФ О ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЭШЕРИХИОЗА ТЕЛЯТ

06.02.02 - Ветеринарная микробиология, вирусология,

эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Г1 ДЕК 2011

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

МОСКВА 2011

005004179

Работа выполнена на кафедре «Инфекционные и паразитарные болезни» ФГБОУ ВПО «Московский государственный университет пищевых производств» (ФГБОУ ВПО «МГУПП»), Министерства образования и науки РФ.

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор

Левченко Екатерина Михайловна (ФГБОУ ВПО «МГУПП»)

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

Скородумов Дмитрий Иванович (ФГБОУ ВПО «МГУПП»)

кандидат ветеринарных наук, доцент Крупальник Виктор Леонидович (ФГОУ ВПО МГАВМиБ им. К.И. Скрябина)

Ведущая организация: Государственное научное учреждение

Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко (ВИЭВ)

Гр // й <?

Защита состоится «'^ у^^^^Л 2011г. в« » часов на заседании Совета по защите докторских и кандидатских диссертаций Д 212.148.09 в ФГБОУ ВПО «Московский государственный университет пищевых производств» (109316, Москва, ул. Талалихина, 33).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Московский государственный университет пищевых производств».

Автореферат разослан

Автореферат размещен на сайте www.mgupp.ru -/'у 2011г.

Автореферат отправлен для размещения на сайте-

Министерства образования и науки РФ у 2011г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук, доцент ^ ^ И.М. Нитяга

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В структуре неонаталыюй патологии крупного рогатого скота существенное место занимают болезни, клинически проявляющиеся диареей, дегидратацией, токсемией, в частности, в неблагополучных хозяйствах промышленного типа эшерихиозом заболевают до 80,0 % телят, отход животных колеблется в пределах от 28,0 до 65,0 % (Коляков Я.Е., 1970; Зароза В.Г., 1971; Сидоров М.А., 1972; Гительсон С.С., 1974; Пирожков М.К., 1986, 2002; Вартанян Г.Г., 1991; Воронин Е.С., Джупина С.И., 1991; Шишков В.П., Ставцева Л.Я. с соавт., 1991; Светоч Э.А., 1994; Черневская О.М., 1995; Субботин В.В., 1997; Тугаринов O.A., 1999; Девришов ДА., 2000; Ленченко Е.М., 2000; Гаффаров Х.З., 2002; Сулейманов С.М., 2002; Паршин П.А., 2003; Довбыш B.C., 2004; Золотухин С.Н., 2005; Грязнева Т.Н., 2005; Куриленко А.Н., Крупальник В.Л., Пименов Н.В., 2005; Сусский Е.В., 2006; Шпонько Ю.Б., 2007; Онищенко И.С., 2008; Konowalchuk J. et al., 1977; Kunkel S.L . et al.,1979; Mlkelsaar M. et al., 1981; Hacker J. et al., 1983; LevineM. et al.,1983; Krieg N.R. et al., 1984; Pal C.H. et al. 1984; Allen S.D. et al., 1985; Levy S.P., 1986; Kraft H., 1987; Chapman P.A., 1989; Sanderson M.W. et al., 1999; Gerardin J. et al., 2000; Kang SJ. et al., 2004).

Циркулирующие в животноводческих объектах патогенные штаммы E.coli различаются антигенной структурой, включающей соматические О-антигены, капсульные полисахаридные K-антигены, жгутиковые Н-антигены (Светоч Э.А., 1994; Головко А.Н., 1996; Скородумов Д.И. и соавт., 2005; Пирожков М.К., 2011; Badouei M.А., 2009). Вариабельность" антигенных свойств, множественность факторов патогенности, возникновение устойчивых форм бактерий за счет наличия плазмид резистентности значительно снижают эффективность антибактериальных препаратов. В этой связи для практической реализации научных достижений, в том числе и внедрения вакцин нового поколения, обладающих высокой антигенной и иммуногенной активностью с широким спектром защитного действия, приоритетной задачей является изучение антигенных, вирулентных и токсигенных свойств изолятов Escherichia coli, вызывающих массовые желудочно-кишечные болезни телят и циркулирующих в репродукторных помещениях животноводческих хозяйств. Учитывая малоис-следованность вопросов влияния токсинов эшерихий на инициацию, развитие и исход инфекционного процесса, целесообразным является дальнейшее изучение этиологической структуры и морфофункциональной характеристики эше-рихиоза телят на основе подбора адекватных лабораторных моделей и тест-систем для оценки токсигенности, эффективных диагностических сред с селективными свойствами, микротест-систем для идентификации бактерий по ферментативным признакам, что и определило актуальность темы диссертационной работы.

Цель исследований: изучить этиологическую структуру и морфофунк-циональную характеристику эшерихиоза телят.

^оДяЧИ иССЛСДОБйшш!

- изучить распространенность и морфофункциональную характеристику желудочно-кишечных болезней телят в животноводческих хозяйствах Рязанской области;

- определить видовой и количественный состав энтеробактерий, доминирующих в микробиоценозах кишечника при желудочно-кишечных болезнях телят;

- определить чувствительность энтеробактерий к антибиотикам;

- изучить антигенную структуру изолятов Escherichia coli, выделенных от телят»;

- изучить патогенные, вирулентные и токсигенные свойства изолятов энтеробактерий, циркулирующих в животноводческих хозяйствах;

- изучить на восприимчивых лабораторных моделях динамику изменений морфологических, гематологических и иммунологических показателей при моделировании инфекционного процесса, обусловленного токсигенными энте-робактериями.

Научная новизна. В животноводческих хозяйствах Рязанской области при желудочно-кишечных болезнях телят из общего числа бактерий семейства Enterobacteriaceae в 74,0 % случаев выделены культуры микроорганизмов Escherichia coli. Среди изученных 64 изолятов наиболее распространены эше-рихии 7 серологических групп: 08 (16,0 %), 028 (6,9 %), 035 (18,0 %), 066 (4,0 %'); 0110 (1,7 %), 0115 (8,0 %), 0126 (4,0 %). При оценке токсигенных.свойств Escherichia coli, выделенных при желудочно-кишечных болезнях телят с применением лабораторных моделей, умереннотоксигенными и слаботоксигенны-ми свойствами характеризовались 15,4 и 38,5 % изолятов соответственно, с применением тест-систем «VET-RPLA» и «VTEC-RPLA» было выявлено наличие энтеротоксина у 59,86 % эшерихий. При воспроизведении инфекционного процесса на лабораторных моделях установлена коррелятивная зависимость индекса колонизации от степени адгезивности изолятов Escherichia coli: у высокоадгезивных штаммов индекс колонизации - 0,65±0,10 %, у низкоадгезивных штаммов - 0,63±0,30 %. При экспериментальной токсемии, обусловленной токсином Escherichia coli, динамика патологических процессов характеризовалась развитием гидропической дистрофии эпителиоцитов ворсинок тонкого отдела кишечника и развитием общей сосудистой реакции микроциркуляторного русла слизистой оболочки желудка, тонкого и толстого отделов кишечника животных.

Практическая значимость работы. На основе экспериментального воспроизведения инфекционного процесса на лабораторных моделях разработаны «Методические рекомендации по количественно-качественному учету энтеробактерий», утвержденные секцией «Ветеринарная санитария, гагиена и экология» отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (протокол № 8 от 22 июня 2010 года). Результаты исследований используются в учебном процессе на ветеринарно-санитарном факультете ФГБОУ ВПО «МГУ 1111» по дисциплинам: «Патологическая физиология» и «Эпизоотология».

Аппобапия

мятйрнядпп ДИССбрТЯЦИИ» ОСНОННЫС р^ЗуЛЬТЗТЫ ДИСС5рТ2Ц1*-

онной работы доложены и одобрены на заседаниях кафедры «Инфекционные и паразитарные болезню> ФГБОУ ВПО «МГУПП» (Москва, 2008-2011 гг.); на Международной научной конференции студентов и молодых ученых «Экологически безопасные ресурсосберегающие технологии и средства переработки сельскохозяйственного сырья и производства продуктов питания» (М., 2009); на VIII Международной научной конференции студентов и молодых ученых «Живые системы и биологическая безопасность населения» (М., 2010); на Ш Международной научно-практической конференции «Научно-техническое творчество молодежи - путь к обществу, основанному на знаниях» (М., 2011), работа удостоена медали «Лауреат ВВЦ» (удостоверение № 267 от 30.06.2011).

Основные положения, выносимые на защиту:

• количественный и видовой состав, чувствительность к антибиотикам эн-теробактерий, доминирующим в микробиоценозах кишечника при желудочно-кишечных болезнях телят;

• антигенная структура изолятов Escherichia coli',

• патогенные, вирулентные и токсигенные свойства изолятов энтеробакте-рий, циркулирующих в животноводческих хозяйствах;

• эффективность тест-систем «VET-RPLA» и «VTEC-RPLA» для индикации энтеротоксинов и вероцитотоксинов Escherichia coli;

• динамика изменений гематологических, иммунологических и морфологических показателей при эшерихиозе телят

Публикация результатов исследований. По материалам диссертационной работы опубликовано 7 научных работ, в т.ч. 4 - в журналах, рекомендованных ВАК.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, библиографии, 2 приложений. Работа изложена на 154 страницах компьютерного текста, содержит 20 таблиц, 22 рисунка. Библиографический список включает 145 источников, из них 70 иностранных авторов.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Работа выполнена с 2008 по 2011 гг. на кафедре «Инфекционные и паразитарные болезни» ФГБОУ ВПО «МГУПП». Часть исследований проводилась в отделе качества и стандартизации иммунобиологических лекарственных средств для животных ФГБУ «ВГНКИ», на экспериментальной базе ОПХ ФГБУ «ВГНКИ» «Манихино». В опытах были использованы паспортизированные штаммы: Escherichia coli 09 №388; Escherichia coli 078 №320; Escherichia coli 0115 №723; Klebsiella pneumonia №24; Salmonella typhimurium № 5715; Staphylococcus aureus № 123; Yersinia pseudotuberculosis № 290; Yersinia entero-colitica S- и R-формы №383, полученные из коллекции ФГБУ «ВГНКИ».

Диагноз «эшерихиоз» устанавливали п« основании зпизсстолошческих данных, клинических признаков, патологоанатомических изменений и бактериологического исследования, в соответствии с «Методическими указаниями по бактериологической диагностике колибактериоза (эшерихиоза) животных (2000); «Методическими рекомендациями по бактериологической диагностике смешанной кишечной инфекции молодняка животных, вызываемой патогенными энтеробактериями» (М., 1999).

С целью выделения патогенных энтеробактерий исследовали патологический материал от телят (п=9), пробы feces больных телят (и=70); смывы со слизистых оболочек полости рта и носовой полости больных телят (и=2(5); смывы с объектов репродукторных помещений (п=20) животноводческих хозяйств Рязанской области (ООО «Колхоз имени Пряхина В.Г.», ООО «Семион-агро», ОАО АПК «Золотая Нива», колхоз «Шелковской»). Для изучения динамики инфекционного процесса, обусловленного патогенными энтеробактериями, были проведены исследования на лабораторных моделях: белые беспородные мыши (п=150); кролики породы «Chinchilla» (п=23); морские свинки породы «Self» (п=20).

Для определения количественного состава энтеробактерий в микробиоценозе кишечника животных определяли КОЕ микроорганизмов (lg/r) в 1 г методом разведения feces животных (Эпштейн-Литвак Р.В., 1969; Субботин В.В., 1999) и методом серийных разведений в 0,7 % -ном растворе МПА (Павлова И.Б., Ленченко Е.М., 1999). Идентификацию выделенных культур мшфоорга-низмов проводили в соответствии с классификационной системой «Bergy's manual, 1984-1989». Биологические свойства микроорганизмов изучали, используя общепринятые методы (Герхардт Ф. и соавт., 1984; Сидоров М.А. и соавт., 1995; Скородумов Д.И. и соавт., 2005). Биохимические свойства микроорганизмов изучали с использованием сред Гисса и набора для ускоренной идентификации энтеробактерий «ENTERO-Rapid-24»(«Lachema», Чехия),

Динамику изменений гематологических и биохимических показателей крови и сыворотки крови животных определяли на анализаторе крови «ВС-2800 vet», «ВА-88а Mindray» (Китай). Концентрацию иммуноглобулинов класса G и С-реактивного белка определяли с помощью иммуноферментных наборов производства «Хема-Медика». Для определения антилизоцимной активности сыворотки крови в опыте использовали Micrococcus lysodeicticus, для определения бактерицидной активности - E.coli.

Серогрупповую принадлежность E.coli определяли в реакции агглютинации с диагностическими О-коли агглютинирующими сыворотками ФГУП «Армавирская биофабрика». Определение серогрупповой принадлежности изоля-тов E.coli, нетипирующихся стандартным набором сывороток, проводили методом получения агглютинирующих диагностических кроличьих сывороток с последующей идентификацией эталонными штаммами эшерихий.

Гемолитическую активность изолятов оценивали качественно, учитывая зоны просветления а- и р-гемолиза вокруг колоний. Определение чувствитель-

ипгтн изолированных микроорганизмов к антибиотикам изучали диско-диффузионным методом в агар (Навашин С.М., Фомина И.П., 1984).

Вирулентность культур микроорганизмов определяли путем внутри-брюшинного заражения белых мышей массой 14-16 г и выражали в LDjo-

Индекс колонизации (ИК) микроорганизмов определяли общепринятыми методами (Скородумов Д.И. и соавт., 2008). Адгезивные свойства микроорганизмов изучали на эритроцитах барана, рассчитывая средний показатель адгезии (СПА) с использованием методики В.И. Брилис и соавт. (1986) в модификации И.Б. Павловой, Е.М. Ленченко (1999).

Для гистологического исследования материал от павших и вынужденно убитых животных фиксировали в 10%-ном растворе нейтрального формалина, жидкости Карнуа, Кайзерлинга, Ценкера. Срезы окрашивали для общих целей гематоксилином и эозином; на соединительную и мышечную ткани - по Ван Гизону, по Маллори; на фибрин - по Шуенинову; на жир - суданом-3; на микроорганизмы - по Крантцу. Гистологические исследования проводили согласно методическим указаниям «Основы гистологии с гистологической техникой» (Волкова О.В., Елецкий Ю.К., 1971).

Полученные данные обрабатывали методом вариационной статистики с использованием методического руководства «Теория статистики» и программы «Statgraphics» (Шмойлова Р. А., 2006).

Выражаем благодарность д-ру вет. наук Склярову О.Д., д-ру вет. наук Пи-рожкову М.К. и канд. вет. наук Капустину А.В. за оказание консультативной помощи при определении антигенной структуры изолятов Escherichia coli, нетипирующихся набором стандартных «О-коли сывороток».

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Эпизоотологические данные и клинико-морфологическая характеристика желудочно-кишечных болезней телят

В период с 2008 по 2011 годы были проведены исследования в животноводческих хозяйствах Рязанской области (ООО «Колхоз имени Пряхина В.Г.», ООО «Семион-агро», ОАО АПК «Золотая Нива», колхоз «Шелковской»).

Диагноз на наличие болезней, вызываемых патогенными энтеробактерия-ми, устанавливали на основании анализа эпизоотических данных, клинико-морфологических и бактериологических исследований. При проведении ретроспективного анализа эпизоотологической ситуации по инфекционным болезням крупного рогатого скота учитывали первичные данные ветеринарной отчетности с 2007 по 2010 гг.: «Журнал для записи противоэпизоотических мероприятий» форма № 2; «Журнал для записи эпизоотического состояния района» форма Щ 3; «Журнал серологического исследования крови» форма № 16. При анализе первичных данных установлено, что смертность телят 2-3-суточного возраста за период 2007-2010 гг. составила - 2,6-3,5 %: 2,6 % в 2007 году; 3,5 % в 2008 году; 2,9 % в 2009 году; 2,6 % в 2010 году. Летальность за период 20072010 гг. находилась в пределах от 2,9 до 5,2 %, из них 2,9 % в 2007 году; 4,2 % в 2008 году; 3,2 % в 2009 году; 5,2 % в 2010 году..

При анализе данных по структуре заболеваемости молодняка крупного рогатого скота установлено, что в Кораблинском и Старожиловском районах Рязанской области в 2007 году было зарегистрировано 34 больных теленка в возрасте до 5 суток, в 2008 году - 45, в 2009 году - 41, в 2010 году - 62.

Установлено, что из общего числа больных животных в возрасте до 5 суток в 2007 году случаев падежа животных с подтвержденным бактериологическим исследованиями диагнозом эшерихиоз было зарегистрировано - 21, что составило 61,7 % от общего числа болезней; в 2008 году - 26 (55,3 %); в 2009 году - 23 (54,7 %); в 2010 году - 35 (56,4 %). Из общего числа больных животных в возрасте до 5 суток в 2007 году было зарегистрировано 13 случаев падежа животных, с подтвержденным бактериологическими исследованиями диагнозом стрептококкоз, что составило 38,2 % от общего числа болезней, в 2008 году-21 (44,6%), в 2009 году- 18 (58,0 %), в2010 году-27 (43,5 %).

Удельный вес желудочно-кишечных болезней доминировал у телят в возрасте до 5 суток, при этом основным клиническим признаком являлась диарея, приводящая при подостром течении к развитию дегидратации и истощению.

3.2. Сравнительная характеристика дифференциально-диагностических сред и тест систем для индикации и идентификации возбудителя эшерихиоза телят

В опытах с референтными штаммами энтеробактерий при изучении росто-обеспечивающих свойств сред Эндо, Левина, «Cefixime Tellurite Sorbitol Macconkey agar» («.SMAC agar»), «Crystal violet-neutral red-bile agar» («VRB agar»), «Brilliance E.coli coliform agar» установлено, что количество микроорганизмов Е. coli, S. typhimurium, К. pneumoniae существенно не отличалось. В частности, при посеве суспензии, содержащей 100 клеток микроорганизмов, среднее количество колоний E.coli, выросших на среде Эндо, составило: 79,33+0,32; Левина - 83,33+0,18; на «SMAC agar» - 86,00+0,66; на «VRB agar» - 84,33+0,24; на <сBrilliance E.coli coliform agar» - 84,43+0,27. Среднее количество колоний S. typhimurium составило: на среде Эндо 64,67+0,89; Левина -61,33+0,43; «SMAC agar» - 68,00+0,36; «VRB agar» - 66,33+0,12, на «Brilliance E.coli coliform agar» - 62,67+0,89. Среднее количество колоний К. pneumoniae составило: на среде Эндо 64,33+0,29; Левина - 62,33+0,31; «SMAC agar» -67,33+0,37; «VRB agar» - 76,33+0,46, на «Brilliance E.coli coliform agar» -69,67+0,78.

Микроорганизмы E.coli через 18 ч на среде «SMAC agar» образовывали темно-красные колонии диаметром 1,0-2,0 мм; на «VRB agar» - темно-красного цвета колонии диаметром 1,5-2,5 мм с изменением цвета среды на малиновый. Микроорганизмы S.typhimurium на среде «SMAC agar» формировали бесцветные колонии диаметром 1,0-4,0 мм; на «VRB agar» - бледно-серые колонии диаметром 1,0-2,0 мм. Микроорганизмы К. pneumoniae через 18 ч на среде «SMAC agar» образовывали красно-розовые колонии диаметром 2,0-3,0 мм; на «VRB agar» - бело-розового цвета колони диаметром 1,5-2,5 мм.

При оценке дифференцизлыю-дкапгссткческих свойств хромогенных сред «Brilliance E.coli coliform agar» и «ТВХmedium agar» установлено, что через 18 часов культивирования бактериальные клетки Е. coli формировали темно-фиолетового цвета колонии диаметром 1,0-3,0 мм и сине-зленого цвета колонии диаметром 1,0-2,0 мм, соответственно.

Микроорганизмы S.typhimurium на средах «Brilliance Exoli coliform agar» и «ТВХ medium agar» формировали молочного цвета колонии диаметром 2,0-3,0 мм; микроорганизмы К. pneumoniae - лилового цвета колонии диаметром 2,03,0 мм и молочного цвета колонии диаметром 2,0-3,0 мм соответственно.

Преимущество хромогенных сред заключается в том, что за счет наличия субстратов «Rose-Gal» и «X-Glu» при первичной идентификации микроорганизмов колонии E.coli можно было дифференцировать от колоний таксономи-чески сходных видов энтеробактерий.

В качестве дополнительного теста для подтверждения принадлежности выделенных культур микроорганизмов к семейству Enterobacteriaceae применяли тест-полоски «OXI-íest» и «COLI-test». При определении оксидазы с помощью «OM-test» при наличии энтеробактерий зона индикации тест-полоски приобретала синий цвет. При постановке «COLI-test» в пробирках с E.coli наблюдали голубое свечение при просмотре в ультрафиолетовых лучах, при добавлении 4-5 капель реактива для теста «индол» проявлялось красное окрашивание суспензии.

На основании изучения сравнительных характеристик диагностических питательных сред можно сделать вывод о том, что дифференциально-диагностические среды «Brilliance E.coli coliform agar» и «ТВХ medium agar» позволяют при подтверждении «COLI-test» «OXI-test» в течение 24 ч идентифицировать и дифференцировать Escherichia coli от таксономически сходных видов энтеробактерий.

3.3. Определение количественного и видового состава энтеробактерий, доминирующих в микробиоценозах кишечника при желудочно-кишечных болезнях телят

Дня выявления изменений экологического равновесия в биотопе желудочно-кишечного тракта проводили бактериологические исследования feces телят, учитывая количественный и качественный состав энтеробактерий. Среднее арифметическое числа выросших колоний в 1,0 г с последующим высевом на плотные дифференциально-диагностические среды составило: МПА - 49,0±1,5; Эндо - 57,0±1,2; «Brilliance E.coli coliform agar» - 55,0±1,4; «SMAC agar» -48,0±1,4; «VRB agar» - 45±1.

При выделении чистой культуры микроорганизмов, наряду с применением сред Гисса, биохимическую идентификацию выделенных энтеробактерий проводили с использованием тест-системы «ENTERO - Rapid - 24», состоящей из планшетов с высушенными питательными средами и субстратами для 24 тестов по 3 ряда. Суспензию бактерий вносили во все лунки планшета по 0,1 мл, инкубировали термостате 4 ч при 37 °С. После чего в соответствующие лунки

добавляли реактивы. После повторной инкубации в термостате через 30 мин учитывали результаты реакций. Идентификацию проводили с помощью «Идентификационной таблицы» и книги кодов «ENTERO-Rapid».

При изучении видового состава из патологического материала и feces телят было выделено 86 культур микроорганизмов семейства Enterobacteriaceae, из которых 64 были идентифицированы как E.coli, 3 - S.typhimurium, 9 -Kpneumoniae, 10 — P.mirabilis (табл. 1).

Таблица 1

Видовой состав изолятов энтеробактерий, выделенных в животноводческих хозяйствах

Виды бактерий Патологи- Feces Смывы со Смывы с Всего

ческий ма- слизистых объектов по-

териал оболочек мещений

Абс. % Абс. % Абс. % Абс. % Абс. %

E.coli 6 27,83 30 36,14 15 9,59 13 8,24 64 81,17

S.typhimurium - . - - - - 3 2,36 3 2,36

BLpneumoniae 1 0,61 4 3,25 4 4,24 - - 9 6,13

P.mirabilis 1 0,35 - - 5 5,42 4 4,01 10 10,13

Всего S 28,79 34 39,39 24 19,25 20 15,61 86 100

При определении гемолитической активности изолятов E.coli учитывали по степени образования на 5,0%-м кровяном агаре зон просветления среды. Установлено, что характерной ß-гемолитической активностью обладали 8,0 % изученных изолятов эшерихий. При изучении чувствительности к антибиотикам изолятов Е. coli установлено, что из 64 изученных культур мшфоорганиз-мов 32 были чувствительными к антибиотикам группы фторхинолонов, 8 -к гентамицину, неомицину, канамицину,мономицину; 10-к цефотаксиму; 5 -к цефазолину; 9 - к полимиксину. Только 2 изолята Е. coli были умеренно чувствительными к тетрациклину. Особенностью эпизоотических изолятов эшерихий являлась устойчивость к антибиотикам группы природных и полусинтетических пенициллинов, олеандомицину, линкомицину, ристомицину.

3.4. Этиологическая структура эшерихиоза телят в животноводческих хозяйствах Рязанской области

3.4.1. Определение серогрупповой принадлежности и адгезивных антигенов E.coli

При определении серогрупповой принадлежности эшерихий диагностическими О-коли агглютинирующими поливалентными и моновалентными сыворотками было идентифицировано 30 изолятов (46,87 %). Из числа типирован-ных изолятов 17 (56,7 %) положительно реагировали в РА с поливалентной сывороткой «группы №1», 11 (36,6 %) - «группы №3» и 2 (6,6 %) антигена были активны в отношении всех комплексных сывороток. Среди изолятов, реагирующих с поливалентной сывороткой «группы №1», обнаружены серогруппы 08, 0115, 0126. К серогруппе 08 отнесены 10 изолятов (55,5 %), к 0115 - 5

(27,7 %), к 0126 - 3 (16,6 %). Все 11 антигенов, реагировавших с третьей поливалентной сывороткой, были отнесены к серогруппе 035 (табл. 2).

Таблица 2

, ¡>"г:пггл'лповай хпяк&ллсжясст;; изолятов

Н. сок) БЫДЁЛСлпЬал при желудочно-кишечных болезнях телят

Поля СЫВ01 валентные )ОТКИ Моновалентные сыворотки Кол- во изо- гов

1 2 3 4 0157 01 02 04 08 078 0111 0115 0127

++++ - - - - - - - ++++ - - - - 10

- - ■н-н- - 5

- +++ - ■ 0157 09 035 018 020 026 0119 11

- - +++ - - - -

- - ■ +-Н-+ 0157 055 0126 0138 0139 0141 0142 0147 0149 2

- - - - -н-н- - - - -

- - - 1111 - - ++++ - - . - - - - 4

_ _ ++ - ■ - - - - - - -

Всего 30

Примечание: «++++» - полная агглютинация, «+++» - почти полная, «++» - не полная, «+»- незначительная, «-» - отсутствие агглютинации

Для определения серогрупповой принадлежности изолятов, активных в отношении всех комплексных сывороток, проводили РА с 31 моновалентной сывороткой. При этом антигены реагировали с рядом гетерологичных сывороток: 04, 08, 015, 018, 035, 0115, 0117, 0119, 0139. При постановке развернутой реакции агглютинации титры антител к сывороткам 04, 08, 015, 035, 0115, 0117, 0119 перестали реагировать в разведении 1:200, к сывороткам 018 -1:1600, и отнесены нами к серогруппе 0139, с которой они реагировали с неполной агглютинацией «++» в разведении 1:3200. При типировании 64 изолятов Rcoli: 18,0 % были отнесены к серогруппе 035; 16,0 % - 08; 8,0 % - 0115 и 4,0 % - 0126; 54,0 % изолятов не удалось типировать набором стандартным «О-коли сывороток».

3.4.2. Определение серогрупповой принадлежности E.coli, нетипирующихся набором стандартных «О-коли сывороток»

Для определения серогрупповой принадлежности E.coli, нетипирующихся набором стандартных «О-коли сывороток», применяли метод получения гипериммунных кроличьих сывороток с последующей идентификацией в РА с эталонными антигенами эшерихий. Антигены нетипирующихся эшерихий готовили, прогревая смывы агаровых культур микроорганизмов в течение часа при 100 °С, а затем консервировали и использовали для иммунизации кроликов, предварительно проверив на стерильность и безвредность.

Гипериммунизацию животных проводили по схеме, состоящей из 5 внутривенных инъекций антигена с установленной концентрацией 2 млрд/см

в нарастающих дозах: 0,2; 0,5; 1,0; 2,0 и 3,0 см3 с интервалом пять суток, после чего проводили забор крови и определяли титр антител в пробирочной РА с гомологичной культурой. При титре антител ниже 1:3200 дополнительно инъецировали по 3,0 см3 антигена и обескровливали кроликов через 10 суток без предварительного исследования сывороток. Сыворотку выдерживали 48 ч при температуре 4-5 °С, после чего центрифугировали при 3000 об./мин в течение 20 мин и консервировали. В результате гипериммунизации животных были получены 11 сывороток с титрами антител от 1:400 до 1:6400, пригодных для постановки РА. Сыворотки отстаивали в течение месяца, после чего использовали для постановки РА с 126 антигенами эталонных штаммов E.coli для определения серогрушювой принадлежности. Среди 11 полученных после гипериммунизации сывороток 6 относились к серогруппе 028,4 - 066 и 1 - Ol 10.

3.5. Характеристика факторов патогенности изолятов энтеробактерий выделенных при желудочно-кишечных болезнях телят

3.5.1. Патогенные и вирулентные свойства энтеробактерий

Патогенные свойства определяли при идентификации микроорганизмов, не типируемых по О-антигену, заражая внутрибрюшинно белых беспородных мышей массой 14-16 г по 0,5 см взвесью микроорганизмов в концентрации 1 млрд/см3 бактериальных клеток. Установлено, что из числа изученных культур микроорганизмов 35,0 % изолятов энтеробактерий являлись патогенными и 65,0 % - непатогенными. При экспериментальном заражении Y.pseudotuberculosis у животных отмечались мелкоточечные кровоизлияния в легких, полнокровие печени и почек, селезенка и лимфоузлы увеличивались. Вирулентность бактерий определяли на лабораторных мышах массой 14-16 г, которых заражали внутрибрюшинно в дозах 2 млрд.; 400; 80; 16 - 32 млн. микробных тел, используя по 5 мышей на дозу. Установлено, что средняя величина LDjo варьировала в пределах от 490,5 млн. до 1,560 млрд. микробных клеток. Наиболее выраженной вирулентностью характеризовались изоляты E.coli серо-группы08и0115 LDjo- 490,5 и 570 млн. микробных клеток, соответственно. Для исследования местных изменений в слизистых оболочках в конъюнкти-вальную полость глаза морских свинок вводили взвесь микроорганизмов в концентрации 1х10-1х1010. Установлено, что изолят E.coli 08, выделенный из feces от теленка с клиническими признаками диареи, вызывал прогрессирующий конъюнктивит и кератит, характеризующийся склеиванием изъязвленных век, обильным гнойным экссудатом, интенсивным помутнением роговицы. Референтный штамм Y.enterocolitica 09 5-формы №383 вызывал выраженный и прогрессирующий к 5-7 суткам конъюнктивит при незначительном помутнении роговицы. В то время как референтные штаммы Y.enterocolitica 09 Ä-формы №383 и Y.pseudotuberculosis № 290 вызывали незначительную выраженность конъюнктивита через 2-3 суток после заражения, слабую выраженность кератита через 2-3 суток, без прогрессирования помутнения роговицы через 5-7 суток.

При определении токсигенности энтеробактерий с использованием лабораторной модели «тест расширения кишечника» белым мышам-сосункам 2-3-суточного возраста per rectum вводили надосадочную жидкость в объеме 0,2 мл. Средние показатели коэффициента (К) расширения тонкого кишечника находились в пределах от 0,070±0,009 до 0,116±0,005. Из общего числа изученных культур микроорганизмов 27,7 % были токсигенными; 18,1 % - слаботок-сигенными; 54,5 % - нетоксигенными. Для оценки продукции токсина с применением «плантарного теста» надосадочную жидкость микроорганизмов вводили 3 мышам в область плантарной поверхности лапы в дозе 0,1 мл. В качестве контроля использовали исходную среду. Средняя разность массы лапок мышей через 24 ч колебалась в пределах от 6,66±4,41 до 48,33+3,54 мг.

При изучении токсигенных свойств E.coli, выделенных при желудочно-кишечных болезнях телят с применением лабораторных моделей «теста расширения кишечника» и «плангарный тест», умереннотоксигенными свойствами характеризовались 38,5 % культур микроорганизмов, слаботоксигенными -15,4 %, нетоксигенными - 46,1 %. Данные по результатам исследований «теста расширения кишечника» согласовывались с результатами «плантарного теста» и имели степень корреляции г=0,96. Вместе с тем, недостатком «теста расширения кишечника» является гибель животных при транспортировке, содержании и травмах кишечника во время введения материала.

Для оценки способности E.coli к продукции термолабильных энтеротокси-нов и вероцитотоксинов применяли тест-системы «VET-RPLA» и <(VTEC-RPLAy> (ОХОШ, Англия), основанные на методе обратной пассивной латексной агглютинации: лунка микропланшета (ряды по 8 лунок) —*■ 25 мкл растворителя —► по 25 мкл надосадочной жидкости исследуемых образцов (3000 об./мин, 20 мин, в первую и вторую лунки каждого ряда) —► 25 мкл образца и фосфатно-буферный раствор (со второй по седьмую лунку каждого ряда) —► в каждую лунку первого ряда добавляли реагент (специфические антитела) —► лунки последнего ряда - положительный контроль —► перемешивали содержимое планшета —► 20-22 "С, 24 ч —► учет результатов. Установлено, что тест-система «VET-RPLA» обладает специфичностью при определении энтеротокси-нов E.coli, в частности, при оценке токсигенности культур энтеробактерий антитела не вступали в реакцию с токсинами: S.typhimurium, К.pneumoniae, Y.pseudotuberculosis и Y.enterocolitica 09 (31,8 %), в то время как референтный штамм E.coli 0115 реагировал положительно, с образованием четко видимых агрегатов латексных частиц, выпадающих в осадок. В целом результаты определения токсигенных свойств E.coli, выделенных при желудочно-кишечных болезнях тедят с применением тест-системы, совпадали с результатами определения токсигенности эшерихий на лабораторных моделях и имели степень корреляции 1=0,98, при этом было выявлено наличие энтеротоксина у 59,86 % эшерихий. Чувствительность тест-системы «VET-RPLA» составляла 1,0-2,0 ng, в соотношении с «плантарым тестом» - 3,33+2,26 мг (табл. 3).

I nflnlTVIO -2

x ww лица j

Результаты оценки токсигенности E.coli на лабораторных моделях н с применением тест-системы «VET-KPLA»

Вид пишрООрГнишМОВ V» ¡¡¡т.о....™ (источник выделения) Па i ОГсиаО«; lb TuKCHi eiiHOcib

илантарный тест Тест-система «VET-RPLA»"

1. S.typhimurium №5715 (референтный пггамм) 3/3 45,00+2,64

2. S.typhimurium (смывы с ре-продукторных помещений) 1/3 23,33+6,43

3. K.pneumoniae №356 (референтный штамм) 2/3 38,33+4,32

4. K.paeumoniae (смыв со слизистой оболочки носовой полости теленка) 1/3 28,33+5,04

5. Y.pseudotubereulosis №290 (референтный штамм) 0/3 6,66+4,41

6. Y.enterocolitica 09 S-форма №383 (референтный штамм) 2/3 48,33+3,54

7. Y.enterocolitica 09 R-форма №383 (референтный штамм) 1/3 30,00+3,26

8. E.coli 078 №320 (референтный штамм) 3/3 36,66±6,10 «++»

9. E.coli 0115 № 580 (референтный штамм) 2/3 55,00+5,40 «+++»

10. E.coli 035 (feces теленка) 1/3 21,66+4,72 «+»

11. E.coli 0115 (feces теленка) 0/3 3,33+2,26 «+»

12. E.coli 08 (feces теленка) 2/3 40,00+3,52 «+++»

13. E.coli 0115 (feces теленка) 1/3 11,66+2,35 «+»

14. E.coli 026 (feces теленка) 0/3 13,33±6,34 «+»

15. E.coli 035 (feces теленка) 0/3 18,33+4,15 «+»

16. E.coli 08 (feces теленка) 2/3 1,66+1,27

17. E.coli 035 (feces теленка) 1/3 40,00+3,41 «++»

18. E.coli 08 (feces теленка) 2/3 41,66+6,14 «+++»

19. E.coli 0115 (feces теленка) 1/3 2,36+2,61

20. E.coli 0115 (feces теленка) 1/3 13,33+5,14 «+»

21. E.coli 028 (feces теленка) 3/3 58,17+5,40 «+++»

22. E.coli 066 (feces теленка) 2/3 44,37±6,14 «++»

Примечание: средняя разность массы лапок: 15,00-34,00 - слаботоксигенные; 35,0064,00 - умереннотоксигенные; 65 и более - высокотоксигенные*; «+», «++», «+++» - положительные, «-»,«+» - отрицательные**

in резистентность кишечника животных при экспериментальном воспроизведении инфекционного процесса на лабораторных моделях

Птгст оптплулп^прима инАркттиооттгп гтппттрггя яя лабоПаТОЕНЫХ МОДЕЛЯХ

^-у«* "--"Г"'"4"* "Г ^ Г Г ^

белых беспородных мышей массой 16-18 г перед проведением опытов по принципу аналогов разделили на 3 группы: 1 и 2 группу животных интрагастрально заражали микроорганизмами E.coli 08 (1 группа) и Y.pseudtuberculosis № 290 (2 группа) в дозе 0,5 см3 в концентрации 1 млрд/см3; 3 группа - незараженные животные (контроль). При определении индекса колонизации (ИК) учитывали количество бактерий, выделенных из толстого отдела кишечника всех зараженных и отдельно незаряженных животных, и выражали в виде процента от максимально возможной изоляции культур микроорганизмов. Общее количество микроорганизмов, выросших на среде «Sorbit-MacConky agar», у зараженных мышей составило 6,54+0,18 КОЕ lg/r (группа 1) и 6,46+0,12 КОЕ lg/r (группа 2), у незараженных животных 5,86+0,23. КОЕ lg/r (контроль); на среде «Brilliance E.coli coliform» 6,33+0,30 КОЕ lg/r (группа 1) и 6,24+0,23 КОЕ lg/r (группа 2), при 5,48+0,27 КОЕ lg/r (контроль); на среде «ТВХ medium agar» 6,27+0,10 КОЕ Ig/r (группа 1) и 6,18±0,16 КОЕ lg/r (группа 2) при 5,37+0,30 КОЕ lg/r (контроль), соответственно. Результаты определения индекса колонизации культур микроорганизмов E.coli и Y. pseudotuberculosis представлены в табл. 4.

Таблица 4

Результаты определения индекса колонизации культур микроорганизмов E.coli и Y. pseudotuberculosis

Дифференциально-диагностическая среда Индекс колонизации (ИК) ДИК

1 группа 2 группа 3 группа

«Sorbit-MacConky agar» 0,634 0,628 0,530 0,004

«ТВХmedium agar» 0,632 0,626 0,528 0,002

«Brilliance E.coli coliform agar» 0,632 0,626 0,528 0,002

При изучении адгезивности изолятов эшерихий E.coli, выделенных из патологического материала и feces телят, учитывали средний показатель адгезии (СПА): при СПА от 0 до 1,00 микроорганизмы считали неадгезивными; от 1,01 до 2,00 - низкоадгезивными; от 2,01 до 4,00 - среднеадгезивными и от 4,01 и более высокоадгезивными. Наиболее выраженные адгезивные свойства были выявлены у культур микроорганизмов E.coli серогрупп: 08, 035, 066 (78,5 %) - высокоадгезивные штаммы (СПА - 4,49±0,24); серогруппы 028, 0115 (17,8 %) - среднеадгезивные (СПА - 2,89±0,22); серогруппы 0126, 0110 (3,7 °/о) - низкоадгезивные (СПА - 1,37±0,16).

При определении диссеминации возбудителя за пределы кишечного тракта учитывали количество культур микроорганизмов E.coli (группа 1) и Y. pseudotuberculosis (группа 2), выделенных из крови, лимфатических узлов, селезенки, печени, почек всех зараженных и отдельно незараженных животных (контроль) в течение 21 суток. Установлено, что на 2-5 сутки эксперимента изоляты

T' rr~)!i OR Ггпл/пття TJTíTTTPTTWTTIÍP.T. HI {ргоч ПО 7 ПГГг/т* — тто KDOHI? селй^анктт

---------- г -----у -------------------'-----\t ' '

печени, почек vi feces, на 12 сутки - из лимфатических узлов, селезенки и почек лабораторных животных. Культуры микроорганизмов Y. pseudotuberculosis (группа 2) выделялись на 2 сутки из селезенки, печени и feces лабораторных животных, на 5 сутки из крови и почек, на 7 сутки из лимфатических узлов.

Для оценки динамики гибели белых мышей заражали двумя методами: внутрибрюшинное заражение культурой микроорганизмов в концентрации 500 млн/см3 бактериальных клеток и интрагастральное введение 0,5 см токсина. Перед проведением опытов животных по принципу аналогов разделили на шесть групп по 10 голов в каждой: 1 и 2 группу заражали культурой микроорганизмов и токсином Е. cotí 08; 3 и 4 группу - культурой микроорганизмов и токсином K.pneumoniae-, 5 группу - внутрибрюшинно ассоциацией культур микроорганизмов E.coli и Kpneumoniae в концентрации по 250 млн./см . Мышам 6 группы (контроль) вводили внутрибрюшинно и интрагастрально по 0,5 см3 стерильного раствора 0,9 % NaCl. При внутрибрюшинном заражении культурой микроорганизмов E.coli (1 группа) гибель 6 мышей наступила через 24 ч, 4-48 ч, тогда как при интрагастральном введении токсина E.coli (2 группа) гибель 8 мышей наступила через 12 ч, 2-24 ч. При внутрибрюшинном заражении культурой микроорганизмов Kpneumoniae (3 группа) гибель 2 мышей наступила через 24 ч, 8-48 ч, тогда как при интрагастральном введении токсина E.coli (4 группа) гибель 4 мышей наступила через 12 ч, 6 - 24 ч. При внутрибрюшинном заражении ассоциацией E.coli и K.pneumoniae (5 группа) гибель 3 мышей наступила через 6 ч, 7-12 ч. В целом, при введении токсина лабораторные животные погибали быстрее, чем при заражении культурой микроорганизмов. При интрагастральном введении токсина Е. coli и Kpneumoniae клинические проявления болезни развивались через 6-8 ч после заражения в виде судорог и диареи. Патологоанатомические изменения у мышей, погибших через 12 ч после введения токсина, проявлялись полнокровием печени, почек и селезенки.

На основе экспериментального воспроизведения инфекционного процесса на лабораторных моделях разработаны «Методические рекомендации по количественно-качественному учету энтеробактерий».

3.7. Корреляция гематологических и иммунологических показателей с динамикой изменения микробиоценозов кишечника телят

Для определения общеклинических и биохимических показателей кровь от телят в возрасте от 1 до 7 суток (п=15) отбирали из яремной вены стерильной иглой. Перед проведением опытов животных, по принципу аналогов разделили на 3 группы: 1 и 2 группа - животные с синдромом желудочно-кишечных болезней в возрасте 1-3 суток и 4-7 суток, соответственно; 3 группа - клинически здоровые животные.

При желудочно-кишечных болезнях телят количество лактобактерий составляло 2,70±0,23 - 7,70±0,22 КОЕ lg/r, рост бифидумбактерий наблюдался в разведении 10"9, тогда как у клинически здоровых телят количество лактобак-

»„»..».¿г Г| СЛ-LA 1 А 1 Л /СЛ-1-П VC\X2 1"/г*

ТсрИй СОСТоВЛллО — avw^ »e/ч uufivv'»"»'"-!'""

наблюдался в разведении Ю-3. Количество патогенных энтеробактерий составило 6,08+0,26 КОЕ lg/r - группа 1 и 2,4,02+0,6 КОЕ lg/r- группа 3.

При исследовании динамики изменений гематологических показателей животных при желудочно-кишечных болезнях установлено, что динамика изменений характеризовалась повышением общего числа лейкоцитов, эозино-филов, сегментоядерных, палочкоядерных и юных нейтрофилов, общего билирубина, аспартатаминотрансферазы (ACT), мочевины, креатанина, альбумина, щелочной фосфатазы, уровня натрия, так же наблюдалось незначительное повышение лактатдегидрогеназы (табл. 5).

Таблица 5

Результаты исследований крови и сыворотки крови при желудочно-кишечных болезнях телят, М+т

Показатели крови и сыворотки крови Группы животных (п=15)

Опыт Контроль

Группа 1* Группа 2" Группа 3""

Лейкоциты, тыс/мкл 12,90+0,17 14,90+0,16 7,90+0,15

Эозинофилы, % 6,00±0,16 7,00+0,17 -

Базофилы, % - - -

Сегаентоадерные нейтрофилы, % 33,00+0,15 30,00+0,17 23,00+0,15

Палочкоядерные нейтрофилы, % 6,00+0,19 8,00+0,16 2,00+0,16

Юные нейтрофилы, % 6,00+0,26 7,00+0,17 -

Лимфоциты, % 42,00+0,15 36,00±0,16 54,00+0,16

Моноциты, % 7,00+0,16 12,00+0,23 21,00+0,18

Билирубин общий, мкмоль/л 4,50+0,07 5,70+0,19 3,40+0,23

ACT, ед/л 71,00+0,17 93,00+0,16 53,00+0,16

АЛТ, ед/л 20,00+0,24 47,00+0,16 36,00+0,17

Мочевина, моль/л 10,60+0,25 5,90+0,15 4,00+0,15

Креатинин, мкмоль/л 97,10+0,13 83,80+0,16 92,00+0,17

Общий белок, г/л 54,00+0,17 45,00+0,18 63,00+0,17

Альбумин, г/л 33,70+0,17 36,90+0,16 30,10+0,15

Щелочная фосфатаза, ед/л 254,00± 0,19 139,00+0,17 168,00+0,18

а-амилаза, ед/л 95,00+0,15 99,00+0,17 158,00+0,17

Глюкоза, моль/л 3,00±0,12 3,70±0,19 5,50+0,16

ЛДГ, ед/л 1624,00+0,15 1703,00+0,16 1622,00+0,20

Натрий(Ыа+), мкмоль/л 330,80+0,18 125,16±0,17 187,01+0,17

Калий(К+), мкмоль/л 10,81±0,15 4,88+0,18 13,96+0,17

Примечание: Р<0,01 * 1-3 сут; ** 4-7 сут; *** 1-7 сут

При прогрессирующей диарее на 4-7 сутки у больных телят наблюдались нарушения водно-электролитного баланса: показатели натрия (На4) составили 125,16+0,17 ммоль/л; показатели калия (К+) -4,88+0,18 ммоль/л.

С целью оценки концентрации иммуноглобулинов класса О и С-реактивного белка (СРБ) в сыворотке крови использовали метод двухсайтового иммуноферментного анализа.

При желудочно-кишечных болезнях наблюдалось снижение уровня иммуноглобулинов класса в (7,60+0,33 мг/мл) и повышение уровня С-реактивного белка (9,34+0,33 мг/мл) (табл, 6).

Результаты определения концентрации иммуноглобулинов и уровня реактивного белка у телят иммуноферментным методом (п= 10)

----С.

1. аклиаца и

_ ____/-1

........

Концентрация иммуноглобулинов Yg G, мг/мл

Опыт Контроль

1 2 3 1 2 3

8,10+0,33 7,90+0,32 8,20+0,34 12,60+0,33 12,50+0,33 12,70+0,34

7,40+0,33 7,60+0,34 7,30+0,32 11,70+0,34 11,90+0,34 11,60±0,32

7,60+0,33 7,70+0,34 7,50+0,33 12,20±0,32 12,10±0,32 12,40±0,34

7,70+0,33 7,80+0,34 7,60+0,33 12,50+0,32 12,70+0,34 12,40+0,33

7.50+0,33 7,60+0,34 7,40+0,33 12,80+0,33 12,70±0,33 13,00+0,34

Концентрация С-реактивного белка мг/мл

1 2 3 1 2 3

9,30+0,33 9,10+0,33 9,50+0,34 3,10+0,33 2,70+0,29 3,50+0,38

10,10+0,33 10,50+0,35 9,80+0,32 2,80±0,32 3,10±0,36 2,60+0,31

9,40+0,33 9,60+0,34 9,30+0,33 3,50+0,33 3,80+0,36 3,20+0,30

8,60+0,33 8,40+0,32 8,80+0,34 3,00+0,32 3,20+0,35 2,90+0,32

9,20+0,33 8,90+0,32 9,50+0,34 3,20+0,32 3,00±0,31 3,50+0,36

Примечанне: Р<0,01;

При определении активности лизоцима сыворотки крови турбодиметриче-ским методом в присутствии культуры микроорганизмов Micrococcus lysodeicticus происходило разрушение и просветление исходной бактериальной взвеси. В результате лизоцимная активность сыворотки крови животных составляла 13,6±0,6 % (опыт) и 18,2±0,4 % (контроль). При определении бактерицидной активности сыворотки крови телят уровень бактерицидной активности сыворотки крови телят при желудочно-кишечных болезнях характеризовался низкой степенью задержки роста Е. coli в МПБ и составлял 75,0 % (опыт), 83,4 % (контроль). При определении показателей фагоцитарной активности клеток крови активность фагоцитоза и индекс фагоцитоза клеток крови телят при желудочно-кишечной болезни составили 59,22+1,24 и 5,44+0,86 %, соответственно.

Для исследования динамики клинико-гематологических показателей при воспроизведении инфекционного процесса на лабораторных моделях, учитывая данные о восприимчивости лабораторных моделей, кроликов «Chinchilla» массой 2,5 кг (п = 6) и морских свинок ЗУ/массой 200-300 г (и = 6) внутрибрюшинно заражали в дозе 5x109 бактериальных клеток E.coli 0115 (группа 1) и Yersinia pseudotuberculosis (группа 2), соответственно. Аналогичным группам животных вводили стерильный раствор 0,9% NaCl (контроль). При исследовании микробиоценозов кишечника кроликов после экспериментального заражения титр бифидумбактерий составлял 10"! -10"4, в контроле - Ю-6, у морских свинок титр вышеуказанных бактерий составил 10^-10~3 - опыт и 10 в контроле. В то же время содержание Е. coli у кроликов при заражении составило 6,45±0,56 lg/r

/WtrTTtrn n » тглтгтлпа _ а ГК4-Л a<\ ia/r v хтплтаге свинок содержание Yersinia pseudotuberculosis при заражении составляло 4,27±0,63 (группа 2), в контроле от здоровых животных иерсинии не выделялись.

В целом динамика изменений гематологических и биохимических показателей крови и сыворотки крови животных с нарушениями количественного и видового состава бактерий в мйкробиоценозах кишечника характеризовалась понижением гемоглобина, количества эозинофилов, сегментоядерных нейтрофилов, общего белка, глюкозы и щелочной фосфа-тазы; повышением гематокрита, количества лейкоцитов, базофилов, палочкоядерных нейтрофилов, лимфоцитов, моноцитов, общего билирубина, аспартатаминотрансферазы (ACT), аланинаминотрансферазы (AJIT) и лактатдегидрогеназы (ЛДГ), мочевины, креатинина, альбумина, а-амилазы (табл. 7).

Таблица 7

Динамика изменений показателей крови и сыворотки крови животных при заражении К pseudotuberculosis и Е. coli, М+т

Показатели крови и сыворотки крови Группы животных (11=6)

Морские свинки Кролики

Опыт Контроль Опыт Контроль

Гемоглобин, г/л 76;от, 16 145,00 ±0,17 98,00±0,16 120,00±0,17

Гематокрит, % 57,00+0,18 45,00+0,16 54,00±0,17 34,00±0,18

Лейкоциты, тыс/мкл 18,50+0,16 11,50+0,17 11,70+0,18 8,30+0,15

Эозинофилы, % 2,00+0,18 4,00+0,16 - 2,00±0,18

Базофилы, % 4,00+0,21 1,00+0,14 3,0+0,2 1,00±0,14

Сешентоядерные нейтрофилы, % 17,00+0,17 34,00+0,17 19,00+0,16 38,00+0,17

Палочкоядерные нейтрофилы, % 4,00+0,16 - 2,00+0,18 -

Лимфоциты, % 81,00+0,18 68,00±0,16 69,00+0,16 57,00+0,16

Моноциты, % 12,00+0,16 7,00+0,18 7,00+0,17 2,0+0,2

Билирубин общий, мкмоль/л 4,80+0,16 0,50+0,09 16,20+0,16 3,60±0,16

ACT, ед/л 187,00+0,17 112,00+0,13 156,00+0,17 65,00+0,14

АЛТ, ед/л 135,00+0,17 75,00+0,14 113,00+0,16 73,00+0,16

ЛДГ, ед/л 168,00+0,16 140,00+0,16 145,00+0,17 112,00+0,14

Мочевина, моль/л 12,50±0,18 9,10+0,13 9,20+0,17 6,50+0,16

Креатинин, мкмоль/л 116,00±0,16 46,50+0,17 153,80+0,17 121,50+0,16

Общий белок, г/л 42,00+0,18 61,00+0,17 45,00+0,14 78,00+0,16

Альбумин, г/л 49,40+0,16 27,60+0,16 53,80+0,17 41,40+0,16

Щелочная фосфатаза, ед/л 7,00+0,15 18,00+0,16 5,00+0,12 11,00+0,13

а-амилаза, ед/л 412,00+0,17 340,00±0,16 325,00+0,16 210,00+0,16

Глюкоза, моль/л 4,30+0,16 7,00+0,12 4,00+0,16 7,50+0,17

Примечание: Р<0,01

Патологоанатомические изменения у телят в возрасте от 1 до 7 суток, обусловленные подострой септикотоксемией, характеризовались геморрагическим энтеритом, серозно-фибринозным перитонитом, на эпи- и эндокарде отмечались точечные и пятнистые кровоизлияния. Наиболее выраженные изменения у всех

wttw/vtttttv ттг»тт TT* 7 TTAfTLT/>—1ЛТТТТТATTIIt.TV ^ATTPQUCY ВЫЯВЛЯЛИСЬ В ВИД6 КЗТЗДЭвЯВНОГО

или катарально-геморрагического гастроэнтерита с наличием точечных, пятнистых и полосчатых кровоизлияний на слизистой оболочке сычуга, тонкого и толстого отделов кишечника. У телят в возрасте 4-5 суток отмечали признаки катарально-геморрагаческого воспаления на всем протяжении тонкого отдела кишечника, слепой и прямой кишок. В тонком отделе кишечника наблюдали как острое катаральное воспаление, так и ярко выраженное геморрагическое воспаление, сопровождаемое наличием ярко-красйого эксудата между петлями пораженных участков кишечника. Брыжейка толстого отдела кишечника была отечной и гиперемированной, кровеносные сосуды инъецированы. Брыжеечные лимфатические узлы были увеличенными, отечными, гиперемированные. Мезентериальные лимфатические узлы на разрезе сочные, красного или вишневого цвета, были увеличены.

При гистологическом исследовании желудочно-кишечного тракта телят для эпителиального слоя слизистой оболочки сычуга, тонкого и толстого отделов кишечника были характерны следующие нарушения: слизистая дистрофия, некробиоз и частичная десквамация эпителия; вследствие слизистой дистрофии и увеличения числа бокаловидных клеток просвет крипт кишечника был сужен. В рыхлой волокнистой соединительной ткани подслизистого слоя слизистой оболочки сычуга, тонкого и толстого отделов кишечника наблюдались разволокнение коллагеновых волокон и инфильтрация клеточных элементов. При доминировании патогенных эшерихий в микробиоценозах кишечника телят гистологические изменения характеризовались увеличением количества межэпителиальных лимфоцитов, кровоизлияниями в соединительную ткань ворсинок, выходом и скоплением нейтрофилов в крипты, наличием нейтрофилов в просвете сосудов, наличием плазмоцитов в собственном слое слизистой оболочки подвздошной кишки. Во всех отделах пищеварительного тракта выявлена множественная бактериальная эмболия сосудов серозной оболочки.

При экспериментальной токсемии, обусловленной токсином Escherichia coli, динамика патологических процессов характеризовалась развитием серозного отека и лейкоцитарной инфильтрацией эпителия и собственной пластинки слизистой оболочки желудка и всех отделов кишечника. В тонком кишечнике выявлялись признаки гидропической дистрофии энтероцитов. В паренхиме печени выявлялись многочисленные ов'альной формы некротические очажки, инфильтрированные полиморфноядерными лейкоцитами. Отмечалось расширение и полнокровие центральной вены, внутридольковые синусоидные капилляры были заполнены студенистой массой бледно-красного цвета. В селезенке и лимфатических узлах лимфоидные фолликулы имели мелкие размеры, без признаков антигенной реакции.

При введении токсина Escherichia coli в область плантарной поверхности лап мышей наблюдалась деструкция ороговевшего слоя эпидермиса кожи и общая сосудистая реакция, отек и гиперемия соединительной ткани дермы. Между волокнами рыхлой волокнистой соединительной ткани располагались

г/мкжпт^оигтт-тв **олгч.т ^гл^^гппто ЯтгАТгил»тггхаг»илгг» тгоато гр**лттттт1^т<гтлгтЕ.т<э

1 V/1T1.W1. ¿«.iwbww.bM. tfiww^wn» w.iv,M,4»v ii^uwuw* w M«»"*) * Viuw^«^»^

изменения характеризовались полнокровием артериол, венул, капилляров, в просвете сосудов выявлялись агрегация эритроцитов и нити фибрина, что свидетельствовало о процессе тромбообразования, вдоль эндотелия сосудов наблюдалось «пограничное» расположение лейкоцитов.

На основании результатов исследований сделано заключение, что при желудочно-кишечных болезнях в микробиоценозах кишечника телят доминируют эшерихии серогрупп 08, 028, 035, 066, 0110, 0115, 0126; динамика гематологических, иммунологических и морфологических изменений характеризуется увеличением количества лейкоцитов, юных нейтрофилов, альбумина, уровня С-реактивного белка, понижением уровня белка, глюкозы, антилизо-цимной и бактерицидной активности, увеличением межэпителиальных лимфоцитов, выходом и скоплением нейтрофилов в крипты, наличием нейтрофилов в просвете сосудов, наличием плазмоцитов в собственном слое слизистой оболочки подвздошной кишки.

ВЫВОДЫ

1. В животноводческих хозяйствах Рязанской области среди новорожденных телят в 2007 году эшерихиоз, подтвержденный лабораторными исследованиями, составил 61,7 % от общего числа больных животных, в 2008 году - 55,3 %, в 2009 году - 54,7 %, в 2010 году - 56,4 %.

2. Из патологического материала и feces телят, смывов с объектов репро-дукторных помещений выделено 86 культур микроорганизмов семейства Enter-obacteriaceae-. E.coli (81,17 %); P.mirabilis (10,13 %); К.pneumoniae (6,13 %); S.typhimurium (2,36 %).

3. Этиологическая структура эшерихиоза телят в хозяйствах Рязанской области представлена 7 наиболее распространенными серогруппами эшерихий: 08 (16,0 %), 028 (6,9 %), 035 (18,0 %), 066 (4,0 %); 0110 (1,7 %), 0115 (8,0 %), 0126 (4,0 %).

4. При оценке токсигенных свойств Escherichia coli с применением лабораторных моделей наличие энтеротоксина выявлено у 53,9 % изолятов, при этом умереннотоксигенными и слаботоксигенными свойствами характеризовались 15,4 и 38,5 % изолятов соответственно, нетоксигенными - 46,1%; с применением тест-систем «УЕТ-RPLA» и «VTEC-RPLA» было выявлено наличие энтеротоксина у 59,86 % эшерихий.

5. При желудочно-кишечных болезнях телят динамика изменений гематологических и иммунологических показателей характеризуется увеличением общего числа лейкоцитов (12,90+0,17 тыс/мкл), креатинина (97,10+0,13 мкмоль/л), щелочной фосфатазы (254,00+0,19 ед/л), уровня натрия (330,80+0,18 мкмоль/л), концентрации С-реактивного белка (9,34+0,33 мг/мл), понижением уровня иммуноглобулинов (7,60+0,33 мг/мл), лизоцимной (13,6+0,6 %) и бактерицидной активности сыворотки крови (75,0 %).

6. При воспроизведении инфекционного процесса на лабораторных моделях установлена коррелятивная зависимость индекса колонизации от степени адгезивности изолятов Escherichia coli: у высокоадгезивных штаммов (СПА - 4,49±0,24) индекс колонизации - 0,65±0,10 %, у низкоадгезивных штаммов (СПА - i,37±0,16) - 0,63±0,30 %.

7. При доминировании патогенных эшерихий в микробиоценозах кишечника телят гистологические изменения характеризуются увеличением количества межэпителиальных лимфоцитов, кровоизлияниями в соединительную ткань ворсинок, выходом и скоплением нейтрофилов в крипты, наличием нейтрофилов в просвете сосудов, наличием плазмоцитов в собственном слое слизистой оболочки подвздошной кишки.

8. При введении ТЛ-токсина Escherichia coli в плантарную поверхность лап лабораторных мышей гистологические изменения характеризовались деструкцией ороговевшего слоя эпидермиса кожи, отеком и гиперемией соединительной ткани дермы, гемоииркуляторные изменения проявлялись в виде полнокровия сосудов микроциркуляторного русла, вдоль эндотелия сосудов наблюдалось пограничное расположение лейкоцитов.

9. При экспериментальной токсемии, обусловленной ТС-токсином Escherichia coli, динамика патологических процессов характеризовалась развитием гидропической дистрофии эпителиоцитов ворсинок тонкого отдела кишечника и развитием общей сосудистой реакции микроциркуляторного русла слизистой оболочки желудка, тонкого и толстого отделов кишечника животных.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Использование для оценки токсигенности штаммов Escherichia coli тест-систем «VET-RPLA» и «VTEC-RPLA», основанных на методе обратной пассивной латексной агглютинации, позволяет в короткие сроки определять наличие термостабильного и термолабильного токсинов в количестве порядка нано-грамма.

2. Использование среды «Brilliance E.coli coliform» при проведении бактериологической диагностики позволяет в течение 24 ч идентифицировать и дифференцировать Е. coli от таксономически сходных видов бактерий при подтверждении тестов: «COLI-test» и «OXI-test».

3. Для использования в лабораториях и научно-исследовательских учреждениях разработаны и изданы «Методические рекомендации по количественно-качественному учету энтеробактерий», утвержденные секцией «Ветеринарная санитария, гигиена и экология» отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (протокол № 8 от 22 июня 2010 года).

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1.Моторыгин А.В. Совершенствование лабораторной диагностики кишечной инфекции телят, вызываемой патогенными энтеробактериями // Экологически безопасные ресурсосберегающие технологии и переработки сельскохозяй-

ственного сырья и производства продуктов питания ; материалы Международной конференции студентов и молодых ученых. - М. : МГУПБ, 2009. - С. 226228.

2. Моторыгин А.В. Количественно-качественная характеристика энтеробак-терий при желудочно-кишечных болезнях телят // Ветеринария. - 2010. - № 8. -С. 29-33.

3. Моторыгин А.В. // Живые системы и биологическая безопасность населения : материалы VIII Международной научной конференции студентов и молодых ученых. - М.: МГУПБ, 2010. - С. 284-286.

4. Моторыгин А.В. Исследование популяционной изменчивости и оценка патогенности микроорганизмов Yersinia enterocolitica / А.В. Моторыгин, Е.М. Ленченко//Аграрная наука. - 2011. - №4. - С. 23-25.

5. Моторыгин А.В. Разработка средств и методов бактериологической диагностики инфекционных болезней животных // Научно-техническое творчество молодежи - путь к обществу, основанному на знаниях : материалы III Международной научно-практической конференции. - М.: МГСУ, 2011. - С. 3 б1-3 63.

6. Моторыгин А.В. Определение качественного и количественного состава микроорганизмов при дисбактериозе кишечника у телят / А.В. Моторыгин, Е.М. Ленченко // Сельскохозяйственная биология. - 2011. - №2. - С. 103-107.

7. Моторыгин А.В. Характеристика методов биологического тестирования токсинов Escherichia coli // Ветеринария. - 2011. - № 5. - С. 30-32.

Отпечатано в типографии ООО "Франтера" Подписано к печати 11.11.2011г. Формат 60x84/16. Бумага "Офсетная №1" вОг/м2. Печать трафаретная. Усл.печ.л. 1,50. Тираж 100. Заказ 468.

WWW.FRANTERA.RU

Содержание диссертации, кандидата ветеринарных наук, Моторыгин, Антон Валерьевич

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Таксономическое положение и история изучения возбудителя эшерихиоза 7 телят.

1.2. Циркуляция E.coli в животноводческих хозяйствах, источники и пути заражения животных.

1.3. Антигенные свойства Е. coli.

1.4. Факторы патогенности Е. coli.

1.5. Специфическая профилактика и терапия эшерихиоза телят.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Эпизоотологические и клинико-морфологические методы исследования

2. 2. Гематологические и иммунологические методы исследований.

2.3. Бактериологические методы исследований.

2.4. Методы серологической идентификации E.coli.

2.5. Методы оценки патогенных, вирулентных и токсигенных свойств энтеробактерий.

2.6. Методы статистической обработки результатов исследований.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Эпизоотологические данные и клинико-морфологическая характеристика желудочно-кишечных болезней телят.

3.2. Сравнительная характеристика дифференциально-диагностических сред и тест систем для индикации и идентификации возбудителя эшерихиоза телят.

3.3. Определения количественного и видового состава энтеробактерий, доминирующих в микробиоценозах кишечника при желудочно-кишечных болезнях телят.

3.4. Этиологическая структура эшерихиоза телят в животноводческих хозяйствах Рязанской области.

3.4.1. Определение серогрупповой принадлежности Е. coli.

------- 3.4.2. Определение серогрупповой принадлежности E.coli~ нетипирующихся набором стандартных «О-коли сывороток».

3.5. Характеристика факторов патогенности изолятов энтеробактерий выделенных при желудочно-кишечных болезнях телят.

3.5.1. Патогенные и вирулентные свойства энтеробактерий.

3.5.2. Токсигенные свойства энтеробактерий.

3.6. Колонизационная резистентность кишечника животных при экспериментальном воспроизведении инфекционного процесса на лабораторных моделях.

3.7. Корреляция гематологических и иммунологических показателей с динамикой изменения микробиоценозов кишечника телят.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

ВЫВОДЫ.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Этиологическая структура, морфофункциональная характеристика эшерихиоза телят"

Актуальность темы. В структуре неонатальной патологии крупного рогатого скота существенное место занимают болезни, клинически проявляющиеся диареей, дегидратацией, токсемией, в частности, в неблагополучных хозяйствах промышленного типа эшерихиозом заболевают до 80,0 % телят, отход животных колеблется в пределах от 28,0 до 65,0 % (Коляков Я.Е., 1970; Зароза В.Г., 1971; Сидоров М.А., 1972; Гительсон С.С., 1974; Пирожков М.К., 1986, 2002; Вартанян Г.Г., 1991; Воронин Е.С, Джупина С.И., 1991; Шишков В.П., Ставцева Л.Я. с соавт., 1991; Светоч Э.А., 1994; Черневская О.М., 1995; Субботин В.В., 1997; Тугаринов O.A., 1999; Девришов Д.А., 2000; Ленченко Е.М., 2000; Гаффаров Х.З., 2002; Сулейманов С.М., 2002; Паршин П.А., 2003; Довбыш B.C., 2004; Золотухин С.Н., 2005; Грязнева Т.Н., 2005; Куриленко А.Н., Крупальник В.Л., Пименов Н.В., 2005; Сусский Е.В., 2006;- Шпонько Ю.Б., 2007; Онищенко И.С., 2008; Konowalchuk J. et al., 1977; Kunkel S.L . et al.,1979; Mlkelsaar M. et al., 1981; Hacker J. et al., 1983; Levine M. et al.,1983; Krieg N.R. et al, 1984; Pal C.H. et al. 1984; Allen S.D. et al, 1985; Levy S.P, 1986; Kraft H, 1987; Chapman P.A., 1989; Gerardin J. et al, 2000; Kang S.J. et al, 2004; Sanderson M.W. et al, 2007).

--------^Цйркулирующие в животноводческих объектах патогШные штаммы £.со/г различаются антигенной структурой, включающей соматические О-антигены, капсульные полисахаридные K-антигены, жгутиковые Н-антигены (Светоч

Э.А, 1994; Головко А.Н, 1996; Скородумов Д.И. и соавт, 2005; Пирожков

М.К, 2011; Badouei М.А, 2009). Вариабельность антигенных свойств, множественность факторов патогенности, возникновение устойчивых форм бактерий за счет наличия плазмид резистентности значительно снижают эффективность антибактериальных препаратов. В этой связи для практической реализации научных достижений, в том числе и внедрения вакцин нового поколения, обладающих высокой антигенной и иммуногенной активностью с широким спектром защитного действия, приоритетной задачей является изучение антигенных, вирулентных и токсигенных свойств изолятов 3

Escherichia coli, вызывающих массовые желудочно-кишечные болезни телят и циркулирующих в репродукторных помещениях животноводческих хозяйств. Учитывая малоисследованность вопросов влияния токсинов эшерихий на инициацию, развитие и исход инфекционного процесса, целесообразным является дальнейшее изучение этиологической структуры и морфофункциональной характеристики эшерихиоза телят на основе подбора адекватных лабораторных моделей и тест-систем для оценки токсигенности, эффективных диагностических сред с селективными свойствами, микротест-систем для идентификации бактерий по ферментативным признакам, что и определило актуальность темы диссертационной работы.

Цель исследований: изучить этиологическую структуру и морфофункциональную характеристику эшерихиоза телят.

Задачи исследований:

- определить видовой и количественный состав энтеробактерий, доминирующих в микробиоценозах кишечника при желудочно-кишечных болезнях телят; "

- определить чувствительность энтеробактерий к антибиотикам;

- изучить антигенную структуру изолятов Escherichia coli, выделенных от телят;

Научная новизна. В животноводческих хозяйствах Рязанской области при желудочно-кишечных болезнях телят из общего числа бактерий семейства Enterobacteriaceae в 74,0 % случаев выделены культуры микроорганизмов Escherichia coli. Среди изученных 64 изолятов наиболее распространены эшерихии 7 серологических групп: 08 (16,0 %), 028 (6,9 %), 035 (18,0 %), 066 (4,0 %); Ol 10 (1,7 %), Ol 15 (8,0 %), 0126 (4,0 %). При оценке токсигенных свойств Escherichia coli, выделенных при желудочно-кишечных болезнях телят с применением лабораторных моделей, умереннотоксигенными и слаботоксигенными свойствами характеризовались 15,4 и 38,5 % изолятов соответственно, с применением тест-систем «VET-RPLA» и «VTEC-RPLA» было выявлено наличие энтеротоксина у 59,86 % эшерихий. При воспроизведении инфекционного процесса на лабораторных моделях установлена коррелятивная зависимость индекса колонизации от степени адгезивности изолятов Escherichia colh y высокоадгезивных штаммов индекс колонизации - 0;65±0,10 %, у низкоадгезивных штаммов - 0,63±0,30 %. При экспериментальной токсемии, обусловленной токсином Escherichia coli, динамика патологических процессов характеризовалась развитием гидропической дистрофии эпителиоцитов ворсинок тонкого отдела кишечника и развитием общей сосудистой реакции микроциркуляторного русла слизистой оболочки~желудка, тонкого и толстого отделов кишечника животных.

Практическая значимость работы. На основе экспериментального воспроизведения инфекционного процесса на лабораторных моделях разработаны «Методические рекомендации по количественно-качественному учету энтеробактерий», утвержденные секцией «Ветеринарная санитария, гигиена и экология» отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (протокол № 8 от 22 июня 2010 года). Результаты исследований используются в учебном процессе на ветеринарно-санитарном факультете ФГБОУ ВПО «МГУШ1» по дисциплинам: «Патологическая физиология» и «Эпизоотология».

Апробация материалов диссертации. Основные результаты диссертационной работы доложены и одобрены на заседаниях кафедры «Инфекционные и паразитарные болезни» ФГБОУ ВПО «МГУПП» (Москва, 2008-2011 гг.); на Международной научной конференции студентов и молодых ученых «Экологически безопасные ресурсосберегающие технологии и средства переработки сельскохозяйственного сырья и производства продуктов питания» (М., 2009); на VIII Международной научной конференции студентов и молодых ученых «Живые системы и биологическая безопасность населения» (М., 2010); на III Международной научно-практической конференции «Научно-техническое творчество молодежи - путь к обществу, основанному на знаниях» (М., 2011), работа удостоена медали «Лауреат ВВЦ» (удостоверение № 267 от 30.06.2011).

Основные положения, выносимые на защиту:

• количественный и видовой -состав, чувствительность к антибиотикам энтеробактерий, доминирующих в микробиоценозах кишечника при желудочно-кишечных болезнях телят;

• антигенная структура изолятов Escherichia coli\

• патогенные, вирулентные и токсигенные свойства изолятов энтеробактерий, циркулирующих в животноводческих хозяйствах;

• эффективность тест-систем «VET-RPLA» и «VTEC-RPLA» для индикации энтеротоксинов и вероцитотоксинов Escherichia coli;

• динамика изменений гематологических, иммунологических и морфологических показателей при эшерихиозе телят.

Заключение Диссертация по теме "Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов", Моторыгин, Антон Валерьевич

выводы

2. Из патологического материала и feces телят, смывов с объектов репродукторных помещений выделено 86 культур микроорганизмов семейства Enterobacteriaceae: E.coli (81,17 %); P.mirabilis (10,13 %); K.pneumoniae (6,13 %); S.typhimurium (2,36 %).

4. При оценке токсигенных свойств Escherichia coli с применением лабораторных моделей наличие энтеротоксина выявлено у 53,9 % изолятов, при этом умереннотоксигенными и слаботоксигенными свойствами характеризовались 15,4 и 38,5 % изолятов соответственно, нетоксигенными -46,1%; с применением тест-систем «VET-RPLA» и «VTEC-RPLA» было выявлено наличие энтеротоксина у 59,86 % эшерихий.

СПА - 4,49±0,24) индекс колонизации - 0,65±0,10 %, у низкоадгезивных штаммов (СПА - 1,37±0,16) - 0,63±0,30 %.

8. При введении TJI-токсина Escherichia coli в плантарную поверхность лап лабораторных мышей гистологические изменения характеризовались деструкцией ороговевшего слоя эпидермиса кожи, отеком и гиперемией соединительной ткани дермы, гемоциркуляторные изменения проявлялись в виде полнокровия сосудов микроциркуляторного русла, вдоль эндотелия сосудов наблюдалось пограничное расположение лейкоцитов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата ветеринарных наук, Моторыгин, Антон Валерьевич, Москва

1. Авакаяц Б.М. Лекарственные растения при диарее новорожденных телят / Б.М. Авакаяц, A.B. Коробов, A.M. Шабанов // Ветеринария. 1992. - № 78. -С. 44-45.

2. Адамов А.К. Влияние на персистенцию возбудителей инфекции особенностей взаимодействия их детерминант вирулентности с метаболическими и специфическими механизмами иммунитета / А.К. Адамов // ЖМЭИ. 1994. -прил. авг./сент. - С. 99-103.

3. Аликаев В.А. Борьба с острыми расстройствами пищеварения у новорожденных телят/ В.А. Аликаев, В.В. Митюшин // Ветеринария. 1983. - №2. -С. 53-55.

4. Афонюшкин В.Н. Дискриминация штаммов некоторых таксономических единиц семейства энтеробактерий по биохимическим характеристикам с использованием кластерного метода / В.Н. Афонюшкин. М.: ГНУИЭВСиДВ, 2007.

5. Белая О.Ф. Реакция коагглютинации при кишечных инфекционных заболеваниях : методические рекомендации / О.Ф. Белая, В.Л. Черкасов, Ю.А. Белая и др.. М., 1990. - 12 с.

6. Белая Ю.А., Белая О.Ф. Вирулентность энтеробактерий и иммунитет / Ю.А. Белая, О.Ф. Белая // Микробиол. Ж. 1996. - Т. 41 - №4. - С. 108-112.

7. Блохина И.Н. Новое в классификации и идентификации энтеробактерий / И.Н. Блохина, К .Я. Соколова, Г.Ф. Леванова // ЖМЭИ. 1992. - №1. - С. 49-52.

8. Бондаренко В.М. Факторы патогенности бактерий и их роль в развитии инфекционного процесса / В.М. Бондаренко // ЖМЭИ. 1999. - №5. - С. 34-39.

9. Брилис В.И. Методические возможности изучения роли адгезии и колонизирующей способности микроорганизмов / В.И. Брилис, Т.А. Брилене, Л.А. Левков // Теоретические и практические проблемы гнотобиологии. М. : Агропромиздат, 1986. - С. 206-212.

10. Вартанян Г.Г. Факторы патогенности энтеробактерий, выделенных при диареях новорожденных телят : автореф. дисс. . канд. биол. наук / Г.Г. Вартанян. -Абовян, 1991.-23 с.

11. Вартанян Ю.П. Методы биологического тестирования энтеротоксинов / Ю.П. Вартанян // Микробиология, эпидемиология и иммунология. 1981. - № 3. -С. 18-23.

12. Вертиев Ю.В. Бактериальные токсины: биологическая сущность и происхождение / Ю.В. Вертиев // ЖМЭИ. 1996. - №3. - С. 43-45.

13. Гаффаров Х.З. Моно- и смешанные инфекционные диареи новорожденных телят и поросят / Х.З. Гаффаров, A.B. Иванов, EJI. Непоклонов, А.З. Равилов. Казань: Фэн, 2002.

14. Головко А.Н. Фимбриальные адгезины энтеротоксигенных эшерихий / А.Н. Головко // Ветеринария. 1993. - № 9. - С. 31-32.

15. Горелова Т.И. Идентификация эшерихий энтеропатогенных для цыплят / Т.И. Горелова, Г.А. Зон // Н.- техн. Бюллетень №17 1984. - С. 44-46.

16. Гутковский A.A., Дворкин Г.Л. Колибактериоз телят и поросят / A.A. Гутковский, Г.Л. Дворкин // Минск. Ураджай. - 1989. - С. 160.

17. Далин М.В. Адгезины микроорганизмов / М.В. Далин, Н.Г. Фиш // Итоги науки и техники. Микробиология. 1985. - Т. 16. - С. 3-57.

18. Джупина С.И. Методы эпизоотологического исследования и теория эпизоотологического процесса / С.И. Джупина. Новосибирск : Наука. Сиб. От-ние, 1991.- 142с.

19. Домарадский И.В. Вирулентность бактерий как функция адаптации / И.В. Домарадский // ЖМЭИ. 1997. - №4. - С. 16-20.

20. Дробыш B.C. Факторы патогенности Yersinia enterocolitica : автореф. дисс. .канд. биол. наук / B.C. Довбыш. М., 2004.

21. Езепчук Ю.В. Биомолекулярные основы патогенности бактерий / Ю.В. Езепчук. М.: Наука, 1977. - 216 с.

22. Езепчук Ю.В. Патогенность как функция биомолекул / Ю.В. Езепчук. -М.: Медицина, 1985. 240 с.

23. Желудков М.М. Характеристика антигенных комплексов, обусловленных перекрестными реакциями между бруцеллами и Yersinia enterocolitica 09 / М.М. Желудков, Е.А. Драновская // ЖМЭИ. 1985. - №5. - С. 49-51.

24. Зароза В.Г. Эшерихиоз телят / В.Г. Зароза. М. : ВО "Агропромиздат", 1991.-С. 15-32.

25. Заславский В.А. Выделение кишечных палочек, продуцирующих сероводород / В.А. Заславский, В.А. Степанова // Лабораторное дело. 1986. -№12.-С. 746-747.

26. Золотухин С.Н. Этиологическая структура возбудителей смешанной кишечной инфекции у телят в колхозе «Родина» сызранского района самарской области / С.Н. Золотухин, Э.А. Афонин, О.П. Северов, Д.А. Васильев. 1999.

27. Идентификация энтеробактерий и стафилококков : информационный материал. Н. Новгород, 2007.

28. Каврук Л.С. Тесты, критерии и методы ускоренной санитарно-бактериологической оценки репродукторных помещений животноводческих ферм и пути оптимизации в них микробиоценоза : автореф. дисс. . д-ра вет. наук / Л.С. Каврук. -М.: ВНИИВСГЭ, 1994. 43с.

29. Капустин A.B. Этиологическая структура эшерихиоза кур : дис. . канд. вет. наук / A.B. Капустин. М., 2001. - 105 с.

30. Ковальчук К.М. Иммунохимическое выявление термостабильного энтеротоксина эшерихии в кишечном содержимом телят : автореф. дисс.канд. веет, наук / К.М. Ковальчук. М., 1985. - 18 с.

31. Коткова Н.В. Экспериментальная колиэнтеротоксемия, обусловленная шигаподобным токсином Escherichia coli : дис. . канд. вет. наук / Н.В. Коткова. -Киев, 2007.- 127 с.

32. Кирьянов Е.А. Колибактериоз животных и его профилактика / Е.А. Кирьянов, А.Т. Больных. Уссурийск: Приморский СХИ, 1986. - 46 с.

33. Компанченко А.С. Колибактериоз (эшерихиоз) телят в Ростовской области (эпизоотология, диагностика, профилактика, меры борьбы) : автореф. дисс. .канд. биол. наук / А.С. Компанченко. Ставрополь, 2005.

34. Костюкова Н.Н. Начальный этап инфекционного процесса колонизация и пути ее предотвращения / Н.Н. Костюкова // ЖМЭИ. - 1989. - №9. -С. 103 -109.

35. Куликовский А.В. Токсигенные эшерихии актуальная проблема ветеринарии и медицины / А.В. Куликовский, А.Н. Панин, В.В. Соснина // Ветеринария. - 1997. - №3. - С. 9-10

36. Литвин В.Ю. Эпидемиологические аспекты экологии бактерий / В.Ю. Литвин, А.Л. Гащбург, В.И. Пушкарева, Ю.М. Романова, Б.В. Боев. М. 1999. -256 с.

37. Мавзютов А.Р. Молекулярно-генетические основы токсигенности условно-патогенных представителей Enterobacteriaceae : дисс. .д-ра мед. наук / А.Р. Мавзютов. Уфа, 2001. - 236 с.

38. Малахов Ю.А. Специфическая профилактика эшерихиоза животных / Ю.А. Малахов, О.А. Тугаринов, М.К. Пирожков, Е.И. Исхакова // Ветеринария. 1993.-№8.-С. 5-7.

39. Макавчик С.К. Новая питательная среда для диагностики энтеробактерий / С.К. Макавчик. СПб., 2006.

40. Макаров В.В. Эпизоотологический метод исследования / В.В. Макаров, А.В. Святковский, В.А. Кузьмин, О.И. Сухарев. СПб., 2009.

41. Методические указания по бактериологической диагностике смешанной кишечной инфекции молодняка животных, вызываемой патогенными энтеробактериями. М.: Департамент ветеринарии, 1999.

42. Методические указания по бактериологической диагностике колибактериоза (эшерихиоза) животных № 13-7-2/2117. М. : Минсельхоз России, Департамент ветеринарии, 2000. - 17 с.

43. Михайлов Л.М. Использование моноклональных антител для выявления общих антигенных детерминант Brucella spp. и Yersinia enterocolitica 09 / Л.М. Михайлов, A.M. Титенко, М.П. Рудник, О.Д. Захлебная // ЖМЭИ. -2000. -№3.~ С. 63-66.

44. Мусаева М.Н. Эпизоотология, лечение и профилактика инфекционных гастроэнтеритов новорожденных телят в условиях Дагестана : дис. . канд. вет. наук / М.Н. Мусаева. Киев, 2010.-143 с.

45. Онищенко Г.Т. О состоянии инфекционной заболеваемости в Российской Федерации в 2000 г. и принимаемых мерах по ее стабилизации / Г.Т. Онищенко // ЖМЭИ. 2001. - №5. - С. 3-7.

46. Онищенко И.С. Фенотипические свойства и эпизоотологическая значимость E.coli 0157:Н7 : автореф. дис. . канд. вет. наук / И.С. Онищеннко. -Новосибирск, 2008.

47. Павлов Д.К. Заболевания желудочно-кишечного тракта у новорожденных телят / Д.К. Павлов // Ветеринарная жизнь. -2006. С. 5.

48. Петровская В.Г. Проблема вирулентности бактерий (химические, метаболические, экологические и генетические аспекты) / В.Г. Петровская. Л. : Медицина, 1967. -247 с.

49. Петровская В.Г. Роль хромосомы и ее взаимодействие с внехромо-сомными детерминантами в процессе генетического контроля патогенности бактерий / В.Г. Петровская, В.М. Бондаренко // Молекулярная генетика. М. : Медицина, 1994. - №5. - С. 3-8.

50. Пирожков M.K. Усовершенствованная вакцина против колибакте-риоза (эшерихиоза) поросят: дис. . канд. вет. наук / М.К. Пирожков. М., 1989.- 153 с.

51. Пирожков М.К. Биологические препараты для специфической профилактики и терапии эшерихиоза животных : автореф. дис. . д-ра вет. наук / М.К. Пирожков. М.: ВГНКИ, 2002. - 50 с.

52. Покровский В.И. Патогенез кишечных инфекций как проявление взаимодействия возбудителей с организмом хозяина / В.И. Покровский, Ю.Е. Полоцкий, Н.Д. Ющук, В.М. Бондаренко // ЖМЭИ. 1989. - №4. - С. 80-87.

53. Полоцкий Ю.Е. Адгезивность, инвазивность и энтеротоксигенность возбудителей кишечных инфекций / Ю.Е. Полоцкий, Т.А. Авдеева // ЖМЭИ. -1981.-№5.-С. 23-32.

54. Полоцкий Ю.Е. Патогенез кишечных инфекций и морфологическая оценка вакцин / Ю.Е.Полоцкий, В.М. Бондаренко, В.Е. Ефремов // ЖМЭИ. 1992. -№5-6.-С. 51-57.

55. Пушкарева B.JI. Патогенные бактерии в почвенных и водных сообществах (экспериментально-экологическое исследование) : дисс. . д-ра биол. наук / B.JI. Пушкарева. М., 1994.

56. Радчук H.A. Возбудитель колибактериоза / H.A. Радчук // Ветеринарная микробиология и иммунология. М. : Агропромиздат, 1991. - С. 205-209

57. Ритшел Э.Т. Бактериальные эндотоксины / Э.Т.Ритшел, X. Браде // В мире науки. 1992. - №9. - С. 92-100.

58. Розанов Н.И. Микробиологическая диагностика заболеваний сельскохозяйственных животных / Н.И. Розанов. М. : Гос. изд сельхоз. литры, 1952.-239 с.

59. Романенкова Н.И. Сравнительное изучение двух методов определения на мышах-сосунках способности кишечных палочек к продукции термостабильного энтеротоксина / Н.И. Романенкова, Т.А. Авдеева // Дизентерия.

60. Эшерихиозы. Сальмонеллезы : труды ин-та им. Пастера. Л., 1978. - Т. 50. - С.14669.73.

61. Светоч Э.А. Факторы патогенности возбудителей эшерихиозов сельскохозяйственных животных : автореф. дисс. . д-ра вет. наук / Э.А. Светоч. -1992.-22с.

62. Сидоров М.А. Определитель зоопатогенных микроорганизмов : справочник / М.А. Сидоров, Д.И. Скородумов, В.Б. Федотов. М. : Колос, 1995. -320 с.

63. Сидоров М.А. Плазмиды колициногенности и патогенность эшерихий / М.А. Сидоров, Н.А. Соколова // Ветеринария. 1982. - № 2. - С. 3235.

64. Смирнова J1.A. Способ определения энтеротоксигенностн у кишечных палочек на мышах-сосунках / JI.A. Смирнова, Т.А. Авдеева, В.Е. Ефремов // Дизентерия. Эшерихиозы. Сальмонеллезы : труды ин-та им. Пастера. Л., 1978.-Т. 50.-С. 65-69.

65. Ставцева Л.Я. Энтеротоксигенность условно патогенных энтеробактерий / Л.Я. Ставцева, Д.А. Девришов, М.К. Федорова, С.С. Гизатулина // Вестник сельскохозяйственной науки. 1992. - №2. - С. 149-152

66. Тетерникова Е.В. Гипериммунная сыворотка против колибактериоза животных : дис. канд. вет. наук / Е.В. Тетерникова. М., 1987. - 194 с.

67. Тимченко Н.Ф. Токсины Yersinia pseudotuberculosis / Е.В. Тимченко, Е.П. Недашковская, Л.С. Долматова, Л.М. Сомова-Исачкова. Владивосток «ОАО Примполиграфкомбинат», 2004. - 219 с.

68. Толпыгин М.А. Этиологическая структура эшерихиоза пушных зверей и кроликов: дис. . канд. вет. наук / М.А. Толпыгин. М., 2006. - 117 с.

69. Тугаринов O.A. Колибактериоз // Справочник. Инфекционные болезни животных / под ред. Д.Ф. Осидзе. М. : Агропромиздат, 1987. - С. 210211.

70. Тутов И.К. Распространение и этиологическая структура колибактериоза в Ставропольском крае / И.К. Тутов, Э.В. Олиферова // Вестник ветеринарии №2. - 1992. - С. 48-50.

71. Черневская О.М. Биологическая характеристика условно патогенных энтеробактерий, выделенных в промышленных животноводческих комплексах / О.М. Черневская. -М.: РУДН, 1995.

72. Шпонько Ю.Б. Этиологические факторы, профилактика и терапия диарей телят и поросят в краснодарском крае : автореф. дис. . канд. вет. наук / Ю.Б. Шпонько. Воронеж, 2007. - 24с.

73. Юдина И.С. Агглютинирующие О-коли сыворотки : дис. . канд. вет. наук / И.С. Юдина. М., 1984. 200 с.

74. Acres S. Immunization of calves against enterotoxgenic colibacillosis vaccinating dams with purifield K99 antigen and whole cell bacterms // Inf/mmun., 1979, Vol.25, №1, p. 121-126.

75. Acres S.D. Enterotoxigenic Escherichia coli infections in newborn calves: revies // J. Dairy Sc., 1985, 68, 1, p.229-256.

76. Acres S.D., Forman A.J., Kapitany R.A. Antigenextinction profile in regnant cows, using a K99-conteining whole-cell bacterin, to induce passive ro-tection against eterotoxigenic colibacillosis of calves // Am. J. vet. Res., 1982, 4, p.569-576.

77. Agricultural Bureau. Farnham Royal. England, 1965.

78. Alfieri, A.A.; Alfleri, A.F.; Freitas,J.C./ at ai.,Ocurrence of Escherichia coli, rotavirus, picobirnavirus and Cryptosporidium parvum in a postweaning iarrhoea fotels // Wien. tier. Mschr., 1983, 70, 5, p. 151-157.

79. Anderson E. S., Threlfalt E. The characterization of plasmids in the enterobacteriaceae. //J. Hyg., 1974. Vol. 72. P. 471-473.

80. Approved lists of bacterial names / Eds. V. B. D. Skerman, V. McGowan, P. H. A. Sneath. //Int. J. System. Bact. 1980. Vol. 30. N 1. P. 225-420.

81. Assemat J. M. Contribution a l'etude des principaux facteurs prédisposant aux gastroenterites chez le jeune veau application dans trois elevages du torn. — Toulous, 1985.

82. Awad-Masalmeb M. Zum Vorkommen des K88-Antigens bei ntcrophato-genen E.coli // Wien. tier. Mschr., 1983, 70, 4, p. 122-128.

83. Awad-Masalmeh M., Sagmeister H., Jurinka A., Willinger H. Peroral in-munisation with autogenous vaccine to protect // Proceeding, 1984, p.89.

84. Bamum D. A., Glantz P. J., Moon H. W. Colibacillosis. USA: CIBA, 1967. Y Bywater R. J. Pathophysiologie et traitement de la diarrhe'e du veau//Ann. Med. Vet. 1983. V. 127, N 1. P. 5-13.

85. BaumgartnerA., NicoleU. Plasmidgehalt von schweinepathogenen E.coli, I ieger von Diarrhoe und Enterotoxamie // Schweiz. Arch. Tierh., 1983, 125, K, p.497-506.

86. Besser R.E. An outbreak of diarrhea and hemolytic-uremic syndrome from Escherichia coli 0157:H7 in fresh-pressed applecider / R.E. Besser, S.M. Lett, J.T. Weber et al. // JAMA. 1993. Vol. 269. - P. 2217-2220.

87. Bibel D. J. Bacterial interference, bacteriotherapy and bacterioprophy-laxis, in Bacterial Interference / Ed. R. Aly and H. R. Shinefield. CRC Press, Florida // 1982. P. 1-12.

88. Bijlsma J.G.W., Nijs A., Frik J.F. Serological variants of E.coli K88 antigen: differences in Aghesion and haemagglutination // Rev.sci.tech. office Jnternat. Epiz., 1984, v.3, №4, p.871-879.

89. Black, F.T. Prophylactic efficacy of lactobacilli on traveler's diarrhea. / P.L. Anderson, J. Orskov, F. Orskov, K. Gaarslev,, S. Laulund, // Travel Medicine, 1989. P. 333-335.

90. Brenner D. L Opposition to the proposal to replace the family name Enterobacteriaceae //Int. J. System. Bad. 1983. Vol. 33. N4. P. 892-895.

91. Cain D. V. Vitamins: their role in therapy and prophylaxis in the neonatal calf//The bovine practitioner. 1983. N 18. P. 34-40.

92. Clonal relationship among bloodstream isolates of Escherichia coli. Josef N. Whiuttman, Charles F. Gilka at al. // Infect. Immun. 1995. Vol. 63. N 7. P 24092417.

93. Contrepois M., MartelJ.L., Bordaes C. et.,al. Frequence des pili FY et K99 parmi des souches de Escherichia coli issolees de veaux dirrheiques en France // Ann. Rech, vet., 1985, 16-1, p.25-28.

94. Contrepois M., Mohamed O. U., Said A. et aL Factors involved in calf septicaemic E. coli virulence. A simple test for identifying invasive E. coli//IV th International Symposium of Vet. Labor. Diagnosticians. Netherland. 1986.-P. 544547.

95. Correlation entre la production de l'enterotoxine STI chez les colibacilles du veau / P. Pohl, P. Lintermans, A. Kaeckenbeeck e.a. Ann. Med. veter., 1984, t. 128, N2, p. 119-124.-Bibliogr.: p. 123-124.

96. Coutrepois M., Girardean J.P., Dubourquier H.C. et.al. Vacciation anti-K99 et protection colostrale des veaux in fectes expérimentalement avec Esherichia coli K99 //Ann. Rech. Vet., 1985, Vol.16, №1, p.41-46.

97. Decum M. Verifi carea comparaüna a un or noimetode de epreciere a calitaiii dezinfectiei in adiiposturile de animale propuse de Decum hihei (Lungcannz.) // Rev. Rom. Med. Ret -1991, -1, Jft 3, S. 51-55.

98. De Gregorio R.M. Recent developments in the use of immunoglobulins for young animals / Pfoc. Cornell nutrition conf. for feed manufactures. — Ithaca (N.Y.), 1991, p.102-108.

99. DobbelaarP., Noordhuizen J.P.T.M., Keulen K.A.S. van. Anepidemi-ological study of gammaglobulin levels in newborn calves // Prev. vet. Med., 1987, 5,- 1 p.51-62.

100. Dodd C. C. Prevalence of Escherichia coli 0157 in Cattle Feeds in Midwestern Feedlots / M.W. Sanderson, J.M. Sargeant, T.G. Nagaraja, R.D. Oberst, R.A. Smith, D.D. Griffin // The Veterinary Journal 2007 p.52-59.

101. Donaldson R. M. J. Normal Bacterial Populations of the Intestine and Then-Relation to Intestinal Function // New Engl. J. Med. 1964. Vol. 270. N 19. P. 994-1001;N20. P. 1050-1056.

102. Dictionary of veterinary epidemiology / Ed. B. Torna et.al. — ISU Press, 1999.-375 p.

103. Ederman, R. Summary of works hop on Enteropathogenic E. coli / Eder-man R., Levine M. // J. of Infect. Diseases. 1983. V. 7. - № 6. - P. 1108-1118.

104. Enterotoxigenic E. coli isolated in the Tel-Aviv ared / Coldhax R., Peri A., Lilberberg G. et al. // Med. Microbiol. Immun. 1980. № 169. - P. 53-61.

105. Enterotoxigenic E. coli isolated from patients with severe cholere like disease / R.B. Sack, S.L. Gorbech, J.G. Btfnwell et al. // J. Inf. dis. 1971. - № 123. -P. 378-385.

106. Enzime-linrtd immunosorbent assay for detection of E. coli head-labile enterotoxin / R.H. Yolken, H.B. Grinberg, M.H. Mtrson et al. // J. Clin. Microbiol. -1977.-№ 6.-P. 439-444.

107. Eschtrichia coli K 99 + ST et diarrhea du vtan / Coutrepoid V., Dudonrguer H.C., Bordes C. et al. // Reel. Med. Vet. 1979. V. 155. - № 6. - P. 553558.

108. Etiollogical studies on enterotoxigenic E. coli among isong isolates from domestic animals in Japan / Veda J., Tarakodo N. et al. // Nat. Inat. Anim. Health Quart. 1981. -V. 21. № 2. - P. 108-109.

109. Etkin, S. Studies on enterotoxin from E. coli associated with acute diarrhea in man / Etkin S., Gorbach S.L. // J. Lab. Clin. Med. 1971. № 78. - P. 81.

110. Evans, A. Causation and disease: the Henle-Koch postulates revised Yale / Evans A. // J. Biol. Med. 1976. V. 49. - P. 49-98.

111. Evans, D.G. Virulence Factors of enterotoxigenic E. coli / Evans D.G., Evans D.J., DuportH.L. // J. Inf. Dis. 1977.-№ 136.-P. 118-123.

112. Evans, D.G. Identificfnion of enterotoxigenic E. coli and serym antitoxinactivity by the vascular permeabillity faktor assae / Evans D.G., Evans D.J., Gorbach S.L. // J. Inf. Immun. 1973. № 8. - P. 731-735.

113. Evans, D.G. Differences in the respoce of rabbit small intestine to heat-labile and heat-stable enterotoxins of E. coli / Evans D.G., Evans D.J., Piercl N.F. // J. Infect. Immun. 1972. № 7. - P. 873-880.

114. Evans, D.J. Direct serological assay for the heat-labile enterotoxin of E. coli using passive immune hemolisis / Evans D.J., Evans D.G. // J. Inf. Immun. — 1977.-№ 16.-P. 604-609.

115. Evans, D.J. Three characteristics associated with enterotoxigenic E. coli isolated from man / Evans D.J., Evans D.G. // J. Infect. Immun. 1973. № 8. - P. 322328.

116. Evans, D.J. Polimixin B-induced releases of low molecular weight heat-labile enterotoxin E. coli / Evans D.J., Evans D.G., Gorbach S.L. // J. Infect. Immun. 1974. -№ 10.-P. 1010-1017.

117. Evans, D J. Production of vascular permeability factor by enterotoxigenic E.coli From man / Evans D.J., Evans D.G., Gorbach S.L. // J. Infect. Immun. 1973. -№ 8. P. 725-730.

118. Extrachomosomal determinants which contribute to bacterial pathogenicity / So M., Crandal 1 J.F., Grossa J.H., Falkow S. // In: Microbiology,1974, ed. By Schiessinger, Am. Societ. For microbiolog. Washington D.C. 1975. P. 16-26.

119. Field, M. Intestinal secretion / Field M. // Gastroenterology. 1974. V. 66.-P. 1063-1084.

120. Field, M. Regulation of active ion transport in the smoll intestine in acute diarrhoes in childhood / Field M. // Foundation Symposium, 42, North Holland Am-sterd. Ciba. 1976. P. 109-127.

121. Herrington D.A., Tzipori S., Robins-Browne R. et al. Plesiomonas shigelloides in vitro and in vivo studies of pathogenicity // Infect, and Immun. — 1987.-V.55.-P. 979-985.

122. Marques, J.L. Altered ventricular repolarization during hypoglycaemia in patients with diabetes / Marques J.L., George E., Peacey S.R. et al. // Diabet Med. 1997. 14:P. 648-654.

123. Morris J.A., Sojka W.J. K99 and 987P adhesins on E.coli enteropathogenis for piglets.//Vet. Ree. 1982 v.lll - p. 165166.

124. Otoi T. Outbreak of K99 Escherichia coli infection and serologial survey in calves / T. Otoi, T. Toujou, H. Toujou, M. Hasimoto // J. Japan Veter. Med. Assn., 1990. T. 43. №3. - P. 193-196.

125. Semiya Y., Ohshima K., Itoh H., Ogasawara N., Okutomo M., Tanaka S., Central nervus system lesions due to Esherichia coli infection in neonatal calves. //J. veter. med. Sc.-1992.-P.767-768.

126. Senf W., Neue Aspekt der Diagnostik und Bekanfung der Koli- infection des Kalbes. // Mh. Vet. Med.,-1978.-Bd.33.-N2.-S846-850.

127. Soika W.J. Esherichia coli in domestik animals und poultry. // London.1965.

128. Salajka E., Ulman L. Dec experimentelle kolienteritis bei kalbern Portpjlanz.besam und Aufzucht. Haustiere, 1970, vol. 6, No.5, p.289-292.

129. Stiglimer-Herb M.T., Pospischil A., Hess R.G. Enzyme histochemistry of the small intestinal mucosa in exsperimental infections of calves vith rotavirus and enterotoxigenic Esherichia coli. //Veter. Pathol.-1986.-T.23.-N2.-P. 125-131.

130. Swensmark В., NielsenK., Willeberg P., Jorsal S. Epidemiogical studies of piglet diarrheoea in intensivily managed Danich sow herds.// Acta veter. Scand.-1989.-T.30.-N1.-P.55-62. ,

131. Sweneey E., O'Connor P., Weawers E. Esherichia coli in enteric disease of swine: serotypes assoceated witch irich cases during the 1976-84 period. // Inch veter. News.-1986.-T.June.-P.31-32.

132. Takeda J. Purification and partial characterisation of head stable enterotoxin of enterotoxigenic E. coli. // Jnfect. Jmmun.-1979.-V.25.-N.3.-P.978-985.

133. Tattini A. Malattia degli edemi, controllo di in caso. // Riv. Suinic.-1988.-T.29.-N2.-P.29-33.

134. Tainturier D., Bezille P. Etiologie et profllaxic des ententes du vean nouveane. //Rev. Med. vet.-1981.-vol.l32.-N2.-P.107-120.

135. Taylor D.J. Кишечные заболевания-похитители прибылей. // Международное животноводство .-2000.-№5\2. -Сю23-26.

136. Tzipori S. The actilogy and diagnosis of calf diarrhoae. // Veter. Rec.,-1981.-Vol. 108.-N13.-P510-514.

137. Verweyen H.M., Karh H., Braudis M. Et al. Enterohemorragic E. coli infections: following transmission routes. // Pediatr. Nephrol.-2000.-N14.-P.73-83.

138. Wathes C.M. Airborne transmission of enteric patogens in farm livestock. // Rapp. Sver. Lanbruksuniv . Veter.- Med. Fak. Inst. Husdjurshyg. Skara.-1988.-T.20.- S.421-427.

139. Wolter R. Les "pribiotiques" dans alimentation du pore // Eleveur Porcs.-1987.-T.42.-N10.-P.825-828.

140. Wust A.R. Diarrea de los lechones por colibacilosis // Gac. Veter. 1983.-T.45 .-N3 81 .-P.601 -613.

141. Wray C., Mc Laren J., Pearson G.R. Occurrens of, attaching and effacing lesionsin the small intestine of calves experimentally infected with bovine isolates of verocytotoxis E.coli. // Veter. Rec.-1989.-T.125.-N14.-P.365-368.

Информация о работе

Моторыгин, Антон Валерьевич
кандидата ветеринарных наук
Москва, 2011
ВАК 06.02.02

Диссертация

Этиологическая структура, морфофункциональная характеристика эшерихиоза телят - тема диссертации по сельскому хозяйству, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы