Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Эпизоотологические особенности, диагностика, профилактика и лечение эшерихиоза кроликов в Краснодарском крае

ВАК РФ 06.02.02, Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов

Автореферат диссертации по теме "Эпизоотологические особенности, диагностика, профилактика и лечение эшерихиоза кроликов в Краснодарском крае"

На правах рукописи

ДВАДНЕНКО АЛЕКСЕЙ ИГОРЬЕВИЧ

ЭПИЗООГОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ, ДИАГНОСТИКА, ПРОФИЛАКТИКА И ЛЕЧЕНИЕ ЭШЕРИХИОЗА КРОЛИКОВ В КРАСНОДАРСКОМ КРАЕ

06.02.02. - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

1 5 МДР ЯК2

г. Краснодар 2012

005013698

Работа выполнена на кафедре микробиологии, эпизоотологии и вирусологии ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет»

Научный руководитель: заслуженный работник сельского хозяйства РФ,

лауреат премии Правительства РФ в области науки,

доктор ветеринарных наук,

профессор Шевченко Александр Алексеевич

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

Басова Наталья Юрьевна

кандидат ветеринарных наук Марченко Татьяна Витальевна

Ведущая организация: ФГБОУ ВПО «Ставропольский государственный аграрный университет»

Защита состоится «¿"« а 2012 г. а?%сов на заседании дис-

сертационного совета Д 220.038.07 при ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» по адресу: 350044, г. Краснодар, ул. Калинина, 13.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет».

Автореферат размещен на официальном сайте ФГБОУ ВПО «Кубанский ГАУ» http://www.kubsau.ru «/ » ^<»2012 г. и официальном сайте ВАК РФ http://www.vak.ed.gov.ru.

Автореферат разослан «Л< г л 2012 г.

Ученый секретарь диссертационного совец»

>И.А. Родин

1. Общая характеристика

Актуальность темы. Звероводство является важной отраслью животноводства. Значительную часть дохода этой отрасли приносят кролики. Кролиководство служит дополнительным источником мяса, которое относится к диетическим продуктам питания, используемым для лечебного питания при заболеваниях печени, желудочно-кишечного тракта, желчного пузыря, при пищевой аллергии, гипертонической болезни, малокровии и гастритах. Мясо кроликов отличается нежной консистенцией, сочностью, имеет хороший вкус, легко усваивается в организме человека, не имеет специфического привкуса, характеризуется тонковолокнистой структурой и мраморностью, которую образуют чередования мускульной, соединительной и жировой тканей. Соотношение мякоти мяса и костей с хрящами составляет 85 и 15%, в туше крупного рогатого скота доля костей достигает 30%. В 100 г мяса кроликов содержится около 220-250 ккал. Это значительно меньше, чем энергетическая ценность мяса крупного рогатого скота (270-330 ккал), баранины (320) и свинины (390 ккал). В мясе кролика холестерина содержится в среднем 25 мг в 100 г продукта, в мясе кур - 35-100 мг, телят -38-80 и в говядине -35-45 мг. Поэтому мясо кроликов особенно ценно для питания пожилых людей и детей [Шевченко, A.A., Шевченко Л.В., 2005; 2010].

У кроликов хорошая шкурка, мех пользуется устойчивым спросом в промышленности и у населения. В России разведением кроликов занимаются повсеместно. Среди населения имеется большой спрос на продукты кролиководства. Поэтому на основе использования прогрессивных технологий в стране создана сеть кролиководческих ферм. Разведением кроликов в России занимаются в различных климатических зонах государственные, фермерские хозяйства и кролиководы-любители. Однако, интенсивному развитию кролиководства препятствуют инфекционные болезни: вирусная геморрагическая болезнь кроликов, миксоматоз, колибактериоз, сальмонеллез, стрептхжоккоз, пастереллез, энтерококковая инфекция и другие, наносящие значительный экономический ущерб отрасли [Евтушенко А.Ф.,1992; Бакулов H.A., Вишняков И.Ф., Власова Т.А., Шевченко A.A., 1994; Шевченко A.A., Шевченко Л.В., Литвинов A.M., 2002; Шевченко A.A., Шевченко Л.В., 2005; 2010].

Надежной защитой кроликов от инфекционных болезней является специфическая профилактика. Применение вакцин в звероводстве, позволяет снизить стрессовые ситуации у прививаемых животных, уменьшить трудозатраты и создать напряженный иммунитет в сжатые сроки [Ахмедов A.M., 1983; Вачугов В.И., 1989]. По мнению многих ученых, инактивированные вакцины, изготовленные из штаммов возбудителей инфекционных болезней, выделенные из эпизоотического очага, обладают более высокими антигенными и иммуногенными свойствами и способствуют созданию иммунитета достаточной напряженности [Калымов P.A., 1990; Маннапова Р.Т., 1998; Шульга H.H., 2006].

В связи с этим необходимо разрабатывать средства для специфической профилактики инфекционных болезней кроликов и совершенствовать их лечение.

Цель работы: изучить особенности эпизоотического процесса, клинические симптомы и патологоанатомические изменения при эшерихиозе кроликов, разработать эффективную систему лечебно - профилактических мероприятий заболевания в Краснодарском крае. Задачи исследования:

• изучить особенности эпизоотического процесса эшерихиоза кроликов в условиях Краснодарского края за 10 лет (2001-2010 годы);

• выявить нозологический профиль инфекционной патологии кроликов и определить удельный вес эшерихиоза в нем;

• изучить территориальные, временные и возрастные особенности эшерихиоза кроликов;

• изучить клинические признаки, патоморфологические и гистологические изменения при эшерихиозе кроликов;

• определить этиологическую структуру и основные причины распространения эшерихиоза кроликов в Краснодарском крае;

• определить чувствительность выделенных культур эшерихий к антибактериальным препаратам;

• разработать новую вакцину и схему лечения кроликов при эшерихиозе в комплексе противоэпизоотических мероприятий.

Научная новизна. Впервые в условиях Краснодарского края изучен нозологический профиль инфекционных болезней кроликов, характер и особенности проявления эпизоотического процесса эшерихиоза кроликов, заболеваемость возрастных групп, клиническое проявление, патоморфологические и гистолог ические изменения при эшерихиозе кроликов.

Разработана технология изготовления и изучены иммунобиологические свойства новой инактивированной вакцины против эшерихиоза кроликов.

Изучены антибактериальные препараты для лечения эшерихиоза кроликов и определенны наиболее эффективные из них (абактан, энрофлон). Установлена чувствительность Е. coli к абактану, энрофлону, к левомицетину, канамицину. Препарат абактан впервые применен при эшерихиозе кроликов. Апробированы и внедрены рекомендации, в которых предложены для внедрения в ветеринарную практику новые схемы лечения и система профилактики при эшерихиозе кроликов. Научная новизна подтверждена патентом на изобретение.

Практическая значимость. На основании изучения эпизоотической ситуации для лечения эшерихиоза у кроликов рекомендуется применять абактан и энрофлон, для специфической профилактики разработана и предложена для внедрения новая инактивированная вакцина против эшерихиоза кроликов. Разработан и утвержден в установленном порядке проект нормативно-технической документации на производство и применение вакцины

против эшерихиоза кроликов. Производство инактивированной вакцины против эшерихиоза кроликов освоено в ФГУП «Армавирская биофабрика».

На основании теоретических, экспериментальных и производственных исследований разработана и внедрена в ветеринарную практику комплексная система диагностики, профилактики и лечения эшерихиоза кроликов в Краснодарском крае.

Основные положения, выносимые на защиту:

• изучение эпизоотологии эшерихиоза кроликов в Краснодарском крае;

• изучение клинических признаков, патоморфологических и гистологических изменений при эшерихиозе кроликов;

• изучение иммунобиологических свойств и эффективность новой инактивированной вакцины против эшерихиоза кроликов;

• эффективность антибактериальных препаратов при эшерихиозе кроликов;

• комплексная система мероприятий по профилактике и терапии эшерихиоза кроликов.

Реализация результатов исследований. На основании полученных результатов улучшена система профилактических и лечебных мероприятий с использованием абактана и знрофлона в хозяйствах Краснодарского края. Разработаны и внедрены рекомендации по диагностике, профилактике и лечению эшерихиоза кроликов в Краснодарском крае.

Внедрение системы профилактических и лечебных мероприятий в ветеринарную практику кролиководческих хозяйств Краснодарского края позволит сохранить поголовье кроликов и оздоровить их от эшерихиоза.

Результаты исследований используются в учебном процессе на кафедре микробиологии, эпизоотологии и вирусологии Кубанского государственного аграрного университета.

Апробация работы. Результаты исследований и основные положения диссертации доложены и обсуждены на Международных научно-практических конференциях (г. Барнаул, 2010 г.; г. Краснодар, 2011г.); на Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых (г. Краснодар, 2011г.); на совещании кролиководов Краснодарского края (г. Краснодар, 2010г.); на заседаниях ученого совета Кубанского государственного аграрного университета (г. Краснодар, 2010-2011гг.); на научных студенческих конференциях факультета ветеринарной медицины Кубанского государственного аграрного университета (г. Краснодар, 2010-2011гг.).

Публикации: по теме диссертации опубликовано 8 научных работ, в том числе две в журналах, рецензируемых ВАК РФ.

Структура диссертации. Диссертация изложена на 138 страницах компьютерного текста (Microsoft Word) и включает в себя введение, обзор литературы, собственные исследования, заключение, выводы и предложения, список литературы и приложения. Работа иллюстрирована 27 рисунками, 16 таблицами. Список литературы включает 224 источников, в том числе 44 иностранных авторов.

2. Собственные исследования 2.1 Материалы и методы исследований

Работа выполнялась в период 2010 по 2012 годы на кафедре микробиологии, эпизоотологии и вирусологии ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» в соответствии с темой, государственный регистрационный №01200113464, ГУ «Кропоткинская краевая ветеринарная лаборатория», в звероводческих фермерских хозяйствах Краснодарского края, в ФГУП «Армавирская биофабрика».

С целью изучения эпизоотологии эшерихиоза кроликов и особенностей возникновения заболевания у животных, проведены статистические исследования на основании данных учета, отчетности и статистических обзоров государственного управления ветеринарии Краснодарского края, ГУ «Кропоткинская краевая ветеринарная лаборатория».

В работе использован комплексный эпизоотологический подход, включающий все современные основные методики эпизоотологических исследований согласно «Методическим указаниям по эпизоотологическому исследованию» (1982), а так же некоторые методы современной диагностики. [И.А. Бакулов, В.А. Ведерников, A.J1. Семенихин, 2000; С.И Джупина, 1984; В.П. Урбан, Н.М. Калишин, 1994].

Эксперименты на лабораторных животных и кроликах проводили в виварии ГУ «Кропоткинская краевая ветеринарная лаборатория», на базе фермерских хозяйств Гулькевического, Кавказского, Тбилисского районов, в ФГУП «Армавирская биофабрика» Краснодарского края. В работе использовали выделенные от павших кроликов штаммы возбудителя эшерихиоза (Е. coli 018, 020).

Лабораторные исследования на эшерихиоз проводили в соответствии с «Методическими указаниями по лабораторной диагностике колибактериоза (эшерихиоза) животных», утвержденным Департаментом ветеринарии РФ [М., 2000].

Патогенные свойства эшерихий определяли на белых мышах массой 12-16 г., путем внутрибрюшинного заражения. Культуры признавались патогенными, если из 3-х зараженных белых мышей в течение 5 дней погибало не менее 2-х животных.

Для определения патогенности возбудителей, испытаний вакцин на безвредность, реактогенность, иммуногенность, пассажей и титрования возбудителей использовали белых беспородных мышей (Muriiis) массой 16-18 г - 250 гол, кроликов различного возраста и окраса - 3,5 тыс.

Исследования проведены на клинически здоровых кроликах, которые были подобраны по принципу аналогов (породной принадлежности, возрасту, физиологическому состоянию, упитанности). Рационы животных

соответствовали нормам, разработанным в НИИ пушного звероводства и кролиководства им. В.А. Афанасьева.

Для проведения научных исследований и производственных испытаний использовали опытные серии вакцин, разработанных нами для специфической профилактики эшерихиоза кроликов. Использовали реактивы, диагностикумы, наборы, тест-системы:

• формалин технический с содержанием формальдегида не менее 36% (ГОСТ-1625-61); гидроокись алюминия (ГОА, с 6% сухого остатка); парфюмерное масло Marcol - 52

• сыворотки О-коли агглютинирующие, поливалентные и моновалентные ФГУ «Армавирская биофабрика»;

• антиадгезивные коли-сыворотки НПФ «ДИАВАК», п. Оболенск Московской области.

Всего было проведено: клиническое обследование у 3748 голов, из них больных 593, патологоанатомических вскрытий павших животных 128 голов, отобрано проб, проведено 348 бакисследований, выделено 52 культуры эше-рихий, при этом проведено 104 биохимических и 85 серотипизирующих тестов.

Клинические, экспериментальные и научно-производственные опыты проводили в соответствии с требованиями к врачебно-биологическому эксперименту по подбору аналогов, постановке контроля, соблюдению основных условий кормления и содержания животных в период проведения и учета результатов [И.Т. Фролов]. В проведенных опытах были использованы бактериологические, биохимические, клинические, серологические, эпизо-отологические и другие методы исследований.

Патоморфологические и гистологические исследования проводили по общепринятым методикам. Во время вскрытия трупов павших кроликов отбирали кусочки пораженных органов: печени, почек, селезенки, сердца, легких, кишечника, лимфатических узлов, фиксировали в 10%-ном растворе нейтрального формалина, изготавливали парафиновые срезы толщиной 6-8 ц, окрашивали гематоксилин-эозином, изучали и фотографировали с помощью микроскопа МБИ-15.

Бактериологические исследования включали: посевы культур микроорганизмов на питательные среды, определение чистоты их роста, идентификацию штаммов; посевы на специальные среды для изучения биохимических свойств микроорганизмов, определение устойчивости их к антибиотикам; определение концентрации микробных клеток, проведение биопробы на лабораторных животных и кроликах [Б.И. Антонов, 1986].

Определение чувствительности выделенных изолятов Е. coli О¡8.020 к антибактериальным препаратам проводили методом диффузии в агар с применением дисков и лунок, методом серийных разведений в бульоне или агаре согласно методическим указаниям по определению чувствительности к антибиотикам возбудителей инфекционных болезней с.-х. животных [М, 1972], ре-

комендаций по определению чувствительности микроорганизмов к антибиотикам [A.B. Скориков, 2005].

Серологическую типизацию кишечной палочки и определение уровня антител в сыворотке крови кроликов проводили в реакции агглютинации (РА) согласно методическим указаниям по лабораторной диагностике коли-бактериоза животных, утвержденным Департаментом ветеринарии РФ [М., 2000].

Уровень специфических антител в сыворотке крови иммунизированных нутрий и процент защиты определяли на 30-е сутки и выборочно у 5% животных через 270 дней после прививки инактивированными вакцинами против эшерихиоза кроликов.

Безвредность инактивированных вакцин против эшерихиоза кроликов проверяли на белых беспородных мышах массой 18-20 г, кроликах в возрасте 40450 дней путем подкожного (мыши) и внутримышечного (кролики) введения вакцины в 3-5-кратной иммунизирующей дозе.

Иммуногенность вакцинных препаратов оценивали по проценту выживаемости (защиты) привитых кроликов (белых мышей) после заражения вирулентными возбудителями эшерихиоза (Е. coli 018,020) в летальных дозах, определяемых на кроликах и белых мышах предварительным титрованием.

Статистическую обработку массовых цифровых материалов проводили на персональном компьютере IBM с использованием пакета статистических программ «Microsoft», «Microsoft Word» и «Microsoft Excel».

3. Результаты собственных исследований

3.1 Эпизоотическая ситуация по инфекционным болезням кроликов в Краснодарском крае

Для этого провели анализ уровня заболеваемости и падежа кроликов от инфекционных болезней в сравнительном аспекте и динамике. За основу были взяты ветеринарная отчетность по инфекционной патологии животных в Краснодарском крае за 2001-2010 гг. и результаты собственных исследований - количество и видовой состав выделенных культур возбудителей.

В результате установлено, что в течение 10 лет заболеваемость и падеж кроликов в Краснодарском крае регистрируются ежегодно от различных инфекционных болезней: эшерихиоза, стрептококкоза, сальмонеллеза, псев-домоноза, стафилококкоза, энтерококковой инфекции, анаэробной энтеро-токсемии. Среди них доминирует эшерихиоз.

В нозологическом профиле инфекционных болезней кроликов в Краснодарском крае эшерихиоз составляет 45%, стреггтококкоз - 24%, сальмонел-лез - 13%, псевдомоноз - 9%, стафилококкоз 7%, энтерококковая инфекция и анаэробная энтеротоксемия по 1% (рис. 1 ).

Рисунок 1 - Нозологический профиль инфекционных болезней кроликов в Краснодарском крае

При рассмотрении удельного веса эшерихиоза в течение срока наблюдения видно, что идет постепенное увеличение удельного веса эшерихиоза в нозологическом профиле, так в 2001 году 46,0%, а в 2010 году 47,0%, изменяясь из года в год (рис. 2).

2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010

Г°ДЫ Я прочие

□ эшерихиоз

Рисунок 2 - Удельный вес эшерихиоза в инфекционной патологии кроликов в Краснодарском крае (2001-2010гг.)

При изучении территориальных и временных границ эшерихиоза кроликов в Краснодарском крае установлено, что распространение имеет выраженные региональные особенности (рис. 3).

ЕЗ Белореченский И Ейский П Кавказский

□ Каневской

■ Крымский 0 Кущевский

Ш Ленинградский О Северский

■ Славянский в Тбилисский

□ Тимашевский О Тихорецкий

■ Усть-Лабинский

■ Краснодар

Рисунок 3 - Распространение эшерихиоза кроликов по районам в Краснодарском крае (2001 -2010гг.)

Наибольшее количество случаев регистрации эшерихиоза наблюдается в Кавказском (38%), Каневском (23%), Усть-Лабинском (10%) районах, меньше в г. Краснодаре (6%), в Славянском и Тимашевском районах по 5%.

Значительное количество выделяемых культур эшерихий именно в данных районах говорит о более изменчивой погоде в переходные периоды времен года (весна, осень), а также зимой. Характерно, что от сельскохозяйственных животных в этот период также выделяется значительное количество культур эшерихий.

При изучении годовой динамики заболеваемости кроликов эшерихио-зом проанализировали данные периода с 2005 по 2010 гг. установлено, что вспышки заболеваемости кроликов эшерихиозом в зимний и весенний периоды (январь-апрель) связаны, с нарушением кормления и содержания животных. Кормление кроликов не сбалансированными рационами по витаминам, микроэлементам, содержание их в занавоженных помещениях с высокой влажностью все это приводит к снижению резистентности организма. В дальнейшем кролики становятся подвержены воздействию условно-патогенной микрофлоре, в том числе и к эшерихиям.

При изучении восприимчивости различных возрастных групп к эшери-хиозу установлено, что к эшерихиозу восприимчивы кролики с 1 дневного возраста ло взрослых кроликов: в возрасте 1-10 дней 50%, в 10-20 дней — 30%, в 20-60 дней - 10%, в 60-120 дней - 6%, взрослые - 4%. Наиболее восприимчиво поголовье кроликов с 1 до 20 дней. Взрослое поголовье заболевает реже молодняка и чаше в хронической форме, являясь часто бактерионосителями.

Таким образом, в нозологическом профиле инфекционной патологии кроликов в Краснодарском крае за период (2001 -2010гг.) основную роль

10

играет эшерихиоз, удельный вес этого заболевания постоянно повышается, чаще регистрируется в Кавказском (38%), Каневском (23%), Усть-Лабинском (10%) районах. Вспышки эшерихиоза у кроликов чаще наблюдаются в зимний и весенний периоды (январь-апрель). К эшерихиозу кролики восприимчивы с 1 дневного возраста, наиболее чаще болеет поголовье с 1 до 20 дней. Взрослое поголовье заболевает реже молодняка и чаще в хронической форме, являясь часто бактерионосителями.

3.2. Диагностика, клинические признаки, патоморфологические и гистологические изменения эшерихиоза кроликов

Диагностику эшерихиоза проводили с учетом эпизоотологических, клинических, патоморфологических данных и подтверждением лабораторных исследований. Лабораторная диагностика основана на результатах бактериологического исследования. Бактериологическое исследование включает обнаружение возбудителя в исходном материале методом световой микроскопии, выделение чистой культуры посевом на питательные среды или методом биопробы, идентификацию возбудителя по тинкториальным, культурально-морфологическим, ферментативным, патогенным и серологическим признакам с использованием микротест-систем ММТ-Е1 и ММТ-Е2.

Клиническое проявление эшерихиоза у кроликов зависит от патогенно-сти, дозы эшерихий и уровня резистентности организма. В соответствии с этим наблюдаются различные клинические симптомы проявления заболевания.

ГТри обследовании поголовья в неблагополучном хозяйстве клинически диагноз был установлен у кроликов различного возраста. При этом наблюдались следующие клинические признаки течения болезни.

Острое течение заболевания с проявлением диареи и септических явлений. При этом болезнь длится в течение 3-5 дней. Наблюдается сильное угнетение, отказ от корма, малоподвижность. Температура тела повышается до 40,5 - 41,0 С . Шерсть взъерошена, слезотечение. Дыхание учащенное. Отмечалось наличие отечности в области шеи и головы, у некоторых животных развивался паралич задних конечностей. Летальность 70-80%.

При подостром течении заболевания болезнь продолжается до 14 дней и заканчивается либо гибелью животного, либо выздоровлением (с последующим бактерионосительством). При подостром течении животное отказывается от корма, плохо ест, наблюдается диарея, поражения центральной нервной системы. Дыхание учащено и затруднено. Истечение из носовых отверстий незначительное, слизистой консистенции. Летальность до 50%.

Хроническое течение наблюдается реже у взрослых животных, прогрессирующее истощение животного. Животное часто мало угнетено, температура колеблется в пределах физиологической нормы. Наблюдается периодически диарея, органные поражения (абсцесс, уроцистит, уретрит, мастит).

Таким образом, эшерихиоз у кроликов протекает остро и подостро преимущественно болеют с 2-3-х дней после рождения и до 120 дней жизни и взрослые, проявляется септицемией, токсинемией, энтеритами, поражением центральной нервной системы, а иногда и других органов. Заболевание регистрируется в течение года, чаще всего в периоды (январь - апрель). Летальность кроликов составила 50-80%.

3.3 Изучение патоморфологических и гистологических изменений при эшерихиозе кроликов

В этом разделе обобщили материалы патоморфологических и гистологических исследований 31 трупа кроликов, у которых предварительно был поставлен диагноз по эпизоотологическим, клиническим данным на эшерихиоз и затем подтвержден бактериологическими исследованиями. Вскрытие трупов проводили в соответствии с требованиями. В кишечнике наблюдали катаральное, серозно-катарапьное или геморрагическое воспаление, слизистая оболочка кишечника была гиперемирована, иногда в слизистой и под слизистой оболочками встречались кровоизлияния, отмечали нефриты, пневмонии, гепатиты и миокардиты.

Гистологическим методом исследования пораженных легких от павших кроликов при эшерихиозе установлено, что сосуды легкого сильно расширены и заполнены кровью. Просветы альвеол и мелких бронхов заполнены экссудатом в виде войлокообразной, сетчатой массы (фибрин), в экссудате много эритроцитов с примесью полиморфно-ядерных лейкоцитов и спущенных клеток альвеолярн-ного эпителия, находящихся в состоянии дистрофии. Некоторые альвеолы заполнены эритроцитами, другие спавшиеся.

При гистологическом исследовании пораженных почек от павших кроликов при эшерихиозе установлена зернистая дистрофия почечных канальцев. Отмечены участки скопления эозинофилов, кровоизлияния.

При исследовании печени от павших кроликов при эшерихиозе нарушена структура балочного строения. Отмечены дистрофические изменения, гепатоци-ты разрушены, между балками скопление лимфоидных клеток.

При гистологическом исследовании миокарда от павших кроликов при эшерихиозе установлено, что структура не нарушена, между мышечными волокнами незначительные кровоизлияния.

Таким образом, при эшерихиозе кроликов отмечали серозно-катаральный и геморрагический гастроэнтерит (40%), гепатит (30%), нефрит (15%), пневмония (10%), кровоизлияния в мышце сердца (5%).

3.4. Выделение, идентификация культур эшерихий, циркулирующих в организме кроликов в Краснодарском крае

Выделение чистой культуры возбудителя эшерихиоза и изучали характеристику его в соответствии с «Методическими указаниями по бактериологической диагностике колибактериоза (эшерихиоза) животных», утвержденных 27.07.2000 г. №13-7-2/2117, Департаментом ветеринарии МСХ РФ.

Патологический материал отбирали по правилам от павших (не позднее 2-3 ч. после гибели) или вынужденно убитых животных, не подвергавшихся лечению антибактериальными препаратами. Взятие и доставку материала осуществляли в соответствии с действующими правилами взятия патологического материала, крови, кормов и пересылки их для лабораторного исследования. Для исследования использовали свежие трупы, трубчатую кость, долю печени с желчным пузырем, селезенку, почку, сердце, перевязанное лигатурой у аорты, брыжеечные лимфоузлы, отрезок тонкого кишечника, перевязанный с двух сторон и головной мозг. Для прижизненной диагностики исследовали фекалии, кровь.

Из поступившего материала готовили мазки-отпечатки, окрашивали по Граму и микроскопировапи под иммерсионной системой микроскопа. При микроскопировании препаратов под иммерсионной системой микроскопа наблюдали палочки размером (1,0-3.0x0,3-0,6 мкм) с закругленными концами красного цвета, расположенные одиночно, что характерно для Е.соН.

Для определения культуральных свойств возбудителя эшерихиоза кроликов Е.соН делали посевы выделенной культуры из патологического материала в мясо - пептонный бульон (МПБ), на среду Эндо, на мясо - пептон-ный агар (МПА) и инкубировали в термостате при 37° С в течение 18-24 часов. На чашках Петри с МПА вырастали влажные колонии с ровными краями и гладкой поверхностью серого цвета. В пробирках с МПБ наблюдали равномерное помутнение питательной среды с небольшим осадком, разбивающимся при встряхивании. В чашках Петри, на среде Эндо наблюдали рост колоний малиново-красного цвета с розовым ободком диаметром 2-3 мм, характерные для Е.соН.

При определении биохимической активности чистых культур проводили посевы на дифференциально - диагностические среды с различным набором компонентов и с использованием микротест-систем ММТ-Е1 и ММТ-Е2. Для Е.соН характерно расщепление глюкозы и лактозы с образованием кислоты и газа, выделение индола, отсутствие уреазы.

Патогенность изучаемых культур эшерихий определяли в биопробе на белых мышах. Для этого испытуемый штамм выращивали на МПА при 3738° С в течение 18-24 часов, смывали стерильным физиологическим раствором, готовили суспензию концентрацией I млрд. микробных клеток в 1см~ по оптическому стандарту мутности и вводили внутрибрюшинно по 0,5 см трем белым мышам массой 14-16 г. Наблюдение за зараженными животными про-

водили в течение трех суток. При гибели двух и более зараженных мышей выделенный штамм признавали патогенным и считали возбудителем.

Для подтверждения специфичности гибели мышей из паренхиматозных органов павших мышей готовили мазки - отпечатки, окрашивали их по Гра-му. Серологическую типизацию кишечной палочки проводили в реакции агглютинации с набором типоспецифических сывороток по общепринятой методике. В реакции агглютинации исследуемая культура кишечной палочки реагирует с колисывороткой и виден хлопьевидный осадок (положительный результат) при отрицательном контроле.

Выделенные чистые культуры микроорганизмов с характерными для эшерихий культуральными, морфологическими, тинкториальными и ферментативными свойствами окончательно относили к роду Escherichia и виду E.coli.

При лабораторных исследованиях от больных и павших кроликов мы выделяли сероварианты Е. coli, доля которых составила (%): 020 - 24,0, 018 - 10,0, 026 - 9,0, К-88 - 7,0, 09 - 6,0, 078 - 6,0, 055 - 4,0, 0103 - 4,0, 035 -4,0, 086 - 3,0, 0115 - 3,0, 0127 - 3,0, А-24 - 3,0, 987Р - 3,0, 0137 - 2,0, F- 41 -2,0,0119-2,0, 015 - 1,0,01 - 1, 0, 08 - 1,0, 041 - 1,0,0111 - 1,0,01191,0, 0139, - 1,0, 0149 - 1,0, К-99 - 1,0. Доминирующими среди них были се-ротипы Е. coli 020 - 24,0% и 018 - 10,0.

Рисунок 4 - Выделение серотипов Е. coli от кроликов в Краснодарском

Таким образом, нами из 125 исследованных культур эшерихий были изучены морфологические, тинкториальные, культуральные, биохимические и серологические свойства 52 эшерихий, доминировали штаммы Е coli 018 и 020, которые использовали в дальнейшей работе.

6% / I \ \^026

055 J 041 V035 9% 4% 1% 3%

крае

3.5. Разработка технологии изготовления и контроля ииактивированкой вакшшы против эшерихиоза кроликов

Нами были изучены биологические свойства наиболее часто выделяемых сероваров 52 культур эшерихий, и на основании проведенных исследований по антигенности, иммуногенности, стабильности отобраны штаммы Е. coli 018 и 020 для изготовления вакцины. Накопление микробных клеток (м.к./см3) изучали на обогащенных питательных средах: Эндо, Левина, селенитовой, желчном, мясо-пептонном и глюкозо-сывороточном бульонах. Оно составило от 10 до 20 млрд м.к./см3. Для получения бактериального сырья для производства вакцин нами был взят как наиболее доступный и дешевый мясо-пептонный бульон, обогащенный глюкозой, который позволяет получать необходимую концентрацию микробных клеток.

Для изготовления опытных образцов инаетивированных вакцин вирулентные штаммы эшерихиоза (А. coli 018, 020) освежали в пробирках с МП Б биофабричного производства, pH 7,2-7,-4, в условиях термостата при 37°С в течение 16-18 ч (/:. coli 018, 020). Проверку на чистоту роста проводили на МПА, МПБ, средах Эндо и Плоскирева, Китта-Тароцци, агаре и бульоне Сабуро, окраской по методу Грама.

Матровую расплодку A coli O/S, 020 нарабатывали отдельно во флаконах емкостью 250 мл. В каждый из них вносили 80-100 мл МПБ (£. coli 018, 020) pH 7,2-7,4 и 1-2 мл освеженной культуры возбудителя с концентрацией не менее 4-8 млрд микробных клеток в 1 мл по оптическому стандарту ГИСК им. Тарасевича. Посевы инкубировали при 37°С в условиях термостата в течение 16-18ч (А. coli 018, 020). Проверку на чистоту роста проводили на МПА, МПБ, средах Эндо и Плоскирева, Китта-Тароцци, агаре и бульоне Сабуро, окраской по методу Грама.

Бактериальную массу А. coli 018, 020 нарабатывали в 3-5-литровых бутылях. В каждую из них вносили МПБ и 5-10% матровой расплодки культуры возбудителя от объема питательной среды, инкубировали при 37°С в течение 12-16 ч, pH 7,6-7,8. Проверку на чистоту роста проводили на МПА, МПБ, средах Эндо, Китта-Тароцци, агаре и бульоне Сабуро, окраской по методу Грама.

Полученную бактериальную культуру с концентрацией не менее 4-8 млрд м. к./см3 по оптическому стандарту ГИСК им. Тарасевича А. coli 018, 020 инактивировали отдельно путем внесения формалина в 0,4-0,5%-ной конечной концентрации в течение 48-96 ч при температуре 37°С. Проверку полноты инактивации проводили посевом бактериальной массы на МПА, МПБ, среды Эндо и Плоскирева и просмотра их в течение Юсут, а также при необходимости заражением исследуемым материалом белых мышей и наблюдением за их клиническим состоянием в течение 10 сут.

Для получения инактивированной вакцины необходимо было подобрать эффективный препарат и щадящий режим для инактивации, позволяющий подавить патогенность возбудителя, но сохранить его иммуногенные свойства. При отработке параметров инактивации брали отдельно выращенную культуру

E. coli 018, 020 с концентрацией 5-8 млрд м. к./см3 по оптическому стандарту ГИСК им. Тарасевича, вносили в нее концентрации формалина от 0,1 до 0,4% по активности формальдегида, оставляли при температуре 37±2°С и 22±2°С в течение 15 суг, периодически перемешивая. Полноту инактивации возбудителя определяли путем посева бактериального сырья на стерильные питательные среды (МПА, МПБ, Эндо, окраска по Граму) и просмотра их в течение 10 сут, а также при необходимости заражением исследуемым материалом белых мышей и наблюдением за их клиническим состоянием в течение 10 сут. В результате нами был разработан режим для инактивации возбудителя эшерихиоза кроликов:

1. инактиватор формалин в 0,4%-ной концентрации;

2. температура 37±2°С; время инактивации в течение 2-3 сут;

3. температура 22±2°С; время инактивации 5-6 сут.

При указанных режимах обработки возбудитель эшерихиоза кроликов инактивируется полностью.

Таким образом, в результате проведенных экспериментов были разработаны эффективные режимы инактивации возбудителя колибактериоза (/:. coli 018, 020) кроликов на основе совместного действия формалина в 0,4—0,5%-ной концентрации и температуры 37±2°С. Они позволили в 4 раза сократить время инактивации микроорганизмов по сравнению с традиционной технологией.

Инактивированную бактериальную массу подвергали стандартизации путем разбавления ее физиологическим раствором до концентрации 4 млрд микробных клеток в 1 смэ по оптическому стандарту ГИСК им. Тарасевича. Депонирование биомассы проводили путем внесения адъюванта - 6%-ного гидрата окиси алюминия до 10; 20; 30% к объему и выдерживания с ним в течение 12-24 ч при температуре 20-25°С.

В результате проведенных исследований нами была разработана технологическая схема изготовления инактивированной вакцин против эшерихиоза кроликов.

3.5.1. Изучение иммунобиологических свойств вакцины против эшерихиоза кроликов в экспериментальных и производственных

условиях

По разработанной нами технологии на основе выделенного и изученного вирулентного штамма /•.'. coli OI8, О20 были изготовлены опытные образцы вакцины против эшерихиоза нутрий: серия № 1 - гидроокисьалюми-ниевая (ГОА) формолвакцина; серия № 2 - формолвакцина с масляным адъ-ювантом; серия № 3 - формолвакцина без адъюванта.

Иммуногенность и безвредность серий вакцины оценивали на кроликах. На каждую серию биопрепарата брали по 5 животных в возрасте 4050 дней, вакцинировали однократно и двукратно: первая доза - 1,0 см', вторая - 1,5 см' с интервалом 10 сут и заражения их через 14 сут после ревакцинации вирулентной культурой Е. coli OI8, 020 в смертельной дозе -

2 млрд м.к./см3 внутримышечно. Наблюдение за животными вели в течение 30 сут.

В результате установлено, что у кроликов через 14 сут после однократной прививки ГОА-формолвакциной против эшерихиоза в дозе 1,0 см3 формировался напряженный иммунитет, обеспечивающий 80%-ную защиту животных от вирулентной культуры Е. coli 018. 020, вакциной без адъюванта -60%. У животных, иммунизированных формолвакциной против эшерихиоза кроликов с масляным адъювантом, наблюдали хромоту в течение 2-3 дней, защита кроликов от возбудителя эшерихиоза составила 80%.

При изучении иммунобиологических свойств ГОА-формолвакцины против эшерихиоза кроликов после двукратной прививки животных установлено, что у кроликов через 14 сут после ревакцинации ГОА-формолвакциной против эшерихиоза формировался напряженный иммунитет, обеспечивающий 100%-ную защиту животных от Е. coli О¡8, 020. Поствакцинальных осложнений у кроликов не наблюдали.

Таким образом, нами была разработана и испытана в лабораторных условиях безвредная и высокоиммуногенная ГОА-формолвакцина против эшерихиоза кроликов, которая после одно- и двукратной иммунизации обеспечивала соответственно 80 и 100%-ную защиту животных от возбудителя.

В соответствии с международными требованиями и национальными стандартами по ветеринарным биопрепаратам для применения пригодны вакцины, которые безвредны для животных, стерильны и главное обладают иммуногенностью. Поэтому для производства вакцин необходимо разрабатывать методы контроля качества.

Вакцину против эшерихиоза кроликов контролировали по внешнему виду, цвету, стерильности, безвредности и полноте инактивации, иммуноген-ности.

Внешний вид, цвет, отсутствие посторонней примеси, нарушение укупорки и наличие трещин флаконов определяли визуально. Вакцина представляет собой жидкость светло-желтого цвета с рыхлым осадком, который при встряхивании легко разбивается в гомогенную взвесь без посторонних примесей.

Контроль возможной контаминации вакцины бактериальной и грибковой микрофлорой осуществляли по ГОСТ 28085-89 путем посева ее на питательные среды (МПБ, МПА, бульон и агар Сабуро, Китта-Тароцци) и выдерживания их в течение 10 сут при температуре термостата 37°С. Рост микрофлоры отсутствовал.

Контроль вакцины на полноту инактивации проводили высевом на питательные среды: МПА, МПБ, Эндо, на безвредность - на 5 белых мышах массой 18-20 г. С этой целью им вводили вакцину подкожно в дозе 0,5 см3 и вели наблюдение в течение 5 сут. Все мыши остались живы и здоровы в течение эксперимента. У привитых мышей не отмечали признаков заболевания и отклонений от физиологической нормы, а также изменений в месте введения биопрепарата.

Иммуногенкую активность вакцины проверяли путем прививки 10 белых мышей массой 18-20 г подкожно в дозе 0,5 см3 двукратно с интервалом Юсут, а 10 животных (контроль) не вакцинировали. Через 14 сут после повторной вакцинации всех мышей заражали внутрибрюшинно Е. coli 018, 020 в подтитрованной дозе (2 млрд м.к./см3). Вакцину считают активной при выживании не менее 8 из 10 вакцинированных и гибели 8 из 10 контрольных мышей в течение 72-96 ч после заражения.

Эффективность предложенного метода контроля подтверждена при производстве 3 опытных серий вакцины против эшерихиоза кроликов.

Таким образом, разработанные методы контроля на безвредность, полноту инактивации, иммуногенную активность, стерильность позволяют выпускать безвредную, стерильную и высокоиммуногенную вакцину против эшерихиоза кроликов.

3.5.2. Изучение инактивированной вакцины против эшерихиоза кроликов в производственных условиях

Производственные испытания биопрепарата проводили в фермерских хозяйствах Гулькевического, Кавказского и Тбилисского районов Краснодарского края. С этой целью нами по ранее разработанной технологии были изготовлены две серии инактивированной вакцины против эшерихиоза кроликов и проверены на безвредность и иммуногенность на белых мышах. В хозяйстве иммунизировали по 1000 кроликов 40-45-дневного возраста двукратно внутримышечно в область бедра: первая доза - 1,0 см3, через 10 дней вторая - 1,5 см3. За привитыми животными вели наблюдение в течение 9 мес.

Для оценки напряженности иммунитета у вакцинированных кроликов мы изучали накопление специфических антител. Уровень их в сыворотке крови иммунизированных кроликов определяли выборочно (у 5% животных) после повторной прививки в РА к £ coli 018, 020 по общепринятым методикам.

Установлено, что у кроликов, привитых инактивированной вакциной против эшерихиоза двукратно, отклонений от физиологической нормы не было, через 14 сут после ревакцинации формировался напряженный иммунитет. Уровень специфических антител в сыворотке крови вакцинированных кроликов через 30 сут колебался в пределах 1:256 до 2048, а через 9 мес наблюдения к Е coli 020 и серотипу 018 составлял 1:1281:512, обеспечивающий защиту 97,5 - 98,9% привитых животных (табл. 1).

Таблица 1 - Иммунобиологические свойства вакцины против эшерихиоза кроликов в производственных условиях

№ Наименование Кол-во Доза в см Сохранность Иммуногениость

. и/ хозяйства жив-х (титр антител)

II в опыте Кол-во гол. % через 30 сут через 270 сут

¡~ 1..... ЛПХ Кавказского 1000" " первая 985 98,5 1:256- 1:128-

! района - 1,0, вторая - 1,5 1:512 1:256

i 2 ЛИХ Гульксвического района 1000 первая - 1Д вторая - 1,5 989 98.9 1:5121:1024 1:2561:512

3 ЛПХ Тбилисского района 1000 первая - 1,0, вторая - 1.5 975 97.5 1:5121:2048 1:2561:512

Таким образом, испытания в производственных условиях инактивированной вакцины против эшерихиоза кроликов показали, что новая вакцина безвредна и высокоиммуногена.

3.6. Разработка лечении при эшерихиозе кроликов

В последние годы для лечения большинства бактериальных инфекций применяется широкий спектр антибактериальных средств: нитрофураны, сульфаниламиды, антибиотики. Эффективность лечения инфекционных заболеваний антимикробными препаратами зависит от правильного выбора лекарственного средства с учетом чувствительности к нему возбудителя, выбора оптимальной дозы, кратности и длительности его применения, что возможно после постановки точного диагноза, выделения возбудителя заболевания и определения его чувствительности.

Особое внимание заслуживают антибиотики, как препараты наиболее эффективные к микроорганизмам. Антибиотики это продукты жизнедеятельности, образуемые микроорганизмами или полученные из иных природных источников, а также их производные и синтетические продукты, обладающие бактерицидным или бактериостатическим действием. В настоящее время выделено и описано более 3800 микробных метаболитов и около 35 тыс. их производных и полностью синтезированных, проявляющих бактерицидное или бактериостатическое действие. Для установления действия антибиотиков на /-.' coli провели исследования по общепринятой методике. Установлено, что штаммы /•,". coli наиболее чувствительны к абактану и энрофлону • 97,62%, к левомицетину - 55,7!%, аминогликозидам: канамицину - 45,24%,

неомицину - 28,57%, мономицину - 26,19%. тетрациклину - 12,86% и ампициллину - 35,71%.

Для испытаний в производственных условиях были взяты абактан, эн-рофлон и для сравнения биовит-80 (контроль), применяемый в хозяйстве. Терапевтическую эффективность лечебных препаратов определяли на кроликах 40-50-дневного возраста при эшерихиозе в фермерском хозяйстве. На каждый препарат взяли по 50 больных животных. Для лечения больным кроликам задавали с кормом биовит-80 из расчета 0,5 г на кролика в течение 12 дней, энрофлон - в дозе 0,25 г на 1 кг массы тела животного в течение 7 дней (согласно наставления по применению), абактан вводили внутримышечно в дозе 5 мг/кг массы в течение 3 дней. Абактан, действующее вещество пеф-локсацин, является отечественным антибиотиком из группы фторхинолов, который активно ингибирует бактериальную ДНК-гидразу, а также влияет на РНК бактерий и синтез бактериальных белков, на стабильность мембран и другие жизненные процессы бактериальных клеток. Абактан обладает оптимальной фармакокинетической активностью при парентеральном и перо-ральном применении, всасывается более чем на 90% и имеет длительный период полувыведения из организма (11 часов). Результаты исследований представлены в таблице 2.

Таблица 2 - Терапевтическая эффективность антибактериальных препаратов при лечении эшерихиоза кроликов

! ; Живот-| ные 1 Прспара ты Дни лечения Выздоровело Пало

1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 1 1 1 2 гол % гол %

| Кролики, ■ больные | ошери- | х йотом абактан биовит-80 + ♦ • 49 22 — 98,0 1 2,0 56.0 ""

+ 4 г + 44.0 28

энрофлон f + + •г 4 48 96,0 2 4,0

Установлено, что наиболее эффективным оказался абактан в дозе 5мг/кг массы тела при внутримышечной инъекции в течение 3-х дней. По этой схеме лечили 50 голов, из них выздоровело 49 (98,0 %). При применении энрофлона с кормом в дозе 0,25 г/кг массы тела животного в течение 7 дней выздоровело 48 гол из 50 (96,0 %), а биовит-80 соответственно 0,5 г/голову в течение 12 дней - 22 гол из 50 (56,0 %).

Таким образом, в производственных условиях при эшерихиозе кроликов высокую терапевтическую эффективность показали абактан (98,0%) и энрофлон (96,0%).

3.7. Разработка мероприятий по профилактике и ликвидации эшерихио-

за кроликов

Учитывая, что в России комплексная система диагностики, лечения и профилактики эшерихиоза кроликов отсутствует, нами разработана такая система по каждой указанной инфекции.

Мероприятия по профилактике эшерихиоза кроликов строятся по четкой, предельно жесткой системе, охватывающей весь комплекс организационно-хозяйственных, зооинженерных, ветеринарно-санитарных, зоогигиени-ческих и специфических мероприятий.

3.7.1 Комплексная система профилактики эшерихиоза кроликов

Диагностика эшерихиоза. Диагностику эшерихиоза проводят с учетом эпизоотологических, клинических, патоморфологических данных и подтверждением лабораторных исследований. Для проведения лабораторных исследований в ветеринарную лабораторию направляют 2-3 трупа кроликов или кусочки пораженных органов, завернутые в пергаментную бумагу, целлофановый пакет. Бактериологическое исследование включает обнаружение возбудителя в исходном материале методом световой микроскопии, выделение чистой культуры посевом на питательные среды или методом биопробы, идентификацию возбудителя по тинкториальным, культурально-морфологическим, ферментативным, серологическим и патогенным признакам с использованием микротест-систем ММТ-Е1 и ММТ-Е2.

Мероприятия по профилактике эшерихиоза кроликов. Профилактика эшерихиоза основывается на проведении комплекса технологических, зоогигиенических, ветеринарно-санитарных и специфических мероприятий, направленных на повышение резистентности организма матери и новорожденного молодняка, снижение уровня контаминации помещений репродук-торного отделения фермы возбудителями болезни и предотвращения заражения животных в период их рождения и выращивания патогенными микроорганизмами через корма, объекты внешней среды.

С целью предупреждения возникновения эшерихиоза у новорожденных животных своевременно и грамотно проводят иммунизацию маточного поголовья и молодняка вакцинами против эшерихиоза в сроки и в дозах, указанных в наставлениях по их применению. Мы рекомендуем для специфической профилактики эшерихиоза применять вакцины, изготовленные по разработанной нами технологии из штаммов, выделенных непосредственно в конкретном хозяйстве. Наряду с вакцинами рекомендуем применять иммуномо-дуляторы (поливедрин, вестин, левамизол, полиоксидонин, Т- и В-активин и др., которые вводят одновременно с вакциной одно- или двукратно согласно наставлению по их применению; поливалентную гипериммунную колисыво-ротку, а также колифаг в соответствии с действующими наставлениями по их применению; нормальные глобулины сывороток крови животных. Препарат

21

вводят внутримышечно или подкожно по 0,7 мл на I кг массы тела один раз в сутки в течение 2-3 дней; пробиотики (ветом - 1.1. споробактерин, субалин, ромакол, бифидумбактерин, бифацидобактерин, лактицин и др.) применяют в профилактической дозе по схеме, указанной в наставлении по применению.

Для предупреждения заболевания эшерихиозом кроликов руководители, специалисты, рабочие хозяйств (ферм), предприятий по приемке, транспортировке и переработке кроликов и сырья, заготовительные конторы, склады, граждане-владельцы кроликов обязаны строго выполнять утвержденные ветеринарно-санитарные правила для кролиководческих ферм.

Ветеринарные специалисты кролиководческих хозяйств (ферм), кооперативных организаций, обществ кролиководов-любителей, а также учреждений государственной ветеринарной сети обязаны: обеспечить систематическое наблюдение за состоянием кроликов в зоне обслуживания; проводить плановые профилактические прививки против эшерихиоза, обратив внимание на иммунизацию кроликов, содержащихся вокруг заготовительных контор, складов, баз и холодильников мехового сырья, перерабатывающих предприятий.

Мероприятия по ликвидации эшерихиоза кроликов. По установлению диагноза на эшерихиоз администрация района (города) в порядке, предусмотренном Федеральным законом «О ветеринарии», по представлению главного ветеринарного врача района (города) выносит решение об объявлении хозяйства (фермы), населенного пункта (или его отдельной самостоятельной части - в зависимости от эпизоотической обстановки) неблагополучными по эшерихиозу и установлении ограничений. В решении указывают точные границы эпизоотического очага болезни, неблагополучного пункта, угрожаемой зоны, а также определяют основные мероприятия по ликвидации болезни в неблагополучном пункте и ее профилактике в угрожаемой зоне.

По условиям ограничений в неблагополучном пункте запрещают: ввоз и вывоз кроликов, продуктов их убоя, шкурок, инвентаря и кормов; перегруппировку кроликов; организацию выставок и других мероприятий, связанных со скоплением кроликов; торговлю кроликами, продуктами их убоя, шкурками: обмен животными между кролиководами; заготовку и скармливание кроликам травы и сена из мест, где могли находиться больные или имелись трупы этих животных.

В неблагополучном хозяйстве (пункте): проводят точный учет всего поголовья кроликов; для лечения больным кроликам задают с кормом энроф-лон в дозе 0,25 г на 1 кг массы тела животного в течение 7 дней или пефлок-сацин внутримышечно в дозе 10 мг/кг массы в течение 3 дней. Затем данное поголовье иммунизируют вакциной против эшерихиоза; применяют специфическую сыворотку против колибактериоза согласно наставлению по применению, а затем через 10-14 дней проводят вакцинацию этого поголовья; проводят тщательную механическую очистку и дезинфекцию кролиководческих ферм, вьп-ульных дворов, оборудования, а также помещений, где содержались животные у граждан-владельцев кроликов; шкурки от кроликов из небла-

гополучных пунктов (хозяйств) дезинфицируют в процессе их технологической обработки на перерабатывающем предприятии согласно действующей инструкции по дезинфекции шкурок.

Снятие ограничений. Хозяйство (пункт) объявляют благополучным через 15 дней после проведения в нем вакцинации кроликов и заключительных ветеринарно-санитарных мероприятий. Ввоз кроликов в бывший неблагополучный пункт и угрожаемую зону допускается после их вакцинации против эшерихиоза в хозяйствах-поставщиках, которые обязаны сделать об этом соответствующую запись в ветеринарном документе.

Ответственность за проведение технологических, организационно-хозяйственных, зоотехнических и ветеринарно-санитарных мероприятий возлагается на руководителя хозяйства, а за проведение лечебных и противо-эпизоотических мероприятий - на ветеринарных специалистов.

ВЫВОДЫ

1. Установлено, что эпизоотическая ситуация по инфекционным болезням кроликов в Краснодарском крае напряженная. За 2001-2010 гг. у кроликов в крае зарегистрированы инфекционные болезни: эшерихиоз (45%), стрептококкоз (24%), сальмонеллез (13%), псевдомоноз (9%), стафилококкоз (7%), энтерококковая инфекция и анаэробная знтеротоксемия по 1%.

2. В нозологическом профиле инфекционной патологии кроликов в Краснодарском крае доминирует эшерихиоз. За 2001-2010 гг. неблагополучными по эшерихиозу кроликов являются 13 районов, а также г. Краснодар: в Кавказском (38%), Каневском (23%), Усть-Лабинском (10%) районах, меньше в г. Краснодаре (6%), в Славянском и Тимашевском районах по 5%.

3. В хозяйствах Краснодарского края от кроликов выделены 26 серовариан-тов Е. coli, доминируют среди них 020 (24,0%) и 018 (10,0%). Изучены их морфологические, тинкториальные, антигенные, биологические свойства.

4. К эшерихиозу восприимчивы кролики всех возрастных групп, но преимущественно в возрасте 10-20 дней (27-44%), заболеваемость кроликов чаще отмечается в зимний и весенний периоды (январь-апрель). Взрослое поголовье чаше переболевает в хронической форме, являясь бактерионосителями.

5. Эшерихиоз у кроликов протекает остро и подостро, проявляется угнетением, нарушением аппетита, малоподвижностью, септицемией, токсинемией, энтеритами, поражением центральной нервной системы, а иногда и других органов, быстрой потерей веса и заканчивается гибелью через 3-5 дней. Летальность составляет 50- 70%.

6. При патоморфологических и гистологических исследованиях при эшери-хиозе у кроликов отмечали следующие основные изменения: серозно-катаральный и геморрагический гастроэнтерит (40%), гепатит (30%), нефрит (15%), пневмония (10%), кровоизлияния в мышце сердца (5%).

7. Разработаны режимы инактивации возбудителя эшерихиоза формалином в

0.4.0,5%-ной концентрации при температуре 37°С в течение 2-4 суток, а при температуре 22±2°С - в течение 4-14 суток, позволяющие полностью инакти-вировать возбудитель, при сохранении иммуногенной активности.

8. В экспериментальных и производственных условиях изучены иммунобиологические свойства новой инактивированной вакцины против эшерихиоза кроликов. Вакцина признана безвредной и высокоиммуногенной. После однократной иммунизации в дозе 1,0 см3 и двукратной: первая доза 1,0 см3, вторая - 1,5 см3 с интервалом 10 суток, у привитых кроликов формируется напряжённый иммунитет, обеспечивающий не менее 80% защиту от возбудителя эшерихиоза.

9. В производственных условиях установлена высокая экономическая эффективность применения инактивированной вакцины против эшерихиоза кроликов - 26 руб. на 1 руб затрат и высокая терапевтическая эффективность отечественного антибактериального препарата абактана - 7,68 руб. на 1 руб. затрат при лечении кроликов, больных эшерихиозом.

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ

1. Для специфической профилактики эшерихиоза кроликов предложена новая инактивированная вакцина, производство освоено на ФГУП «Армавирская биофабрика».

2. Для лечения эшерихиоза кроликов в Краснодарском крае предложена комплексная система лечебно-профилактических мероприятий с использованием абактана и энрофлона.

3. На основе результатов исследования разработаны и изданы «Рекомендации по диагностике, профилактике и лечению эшерихиоза кроликов в Краснодарском крае».

4. Результаты могут быть использованы в учебном процессе, при планировании противоэпизоотических мероприятий и ФПК зооветеринарных специалистов.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Двадненко, А.И. Эпизоотологические особенности колибактериоза кроликов /A.A. Шевченко, А.И. Двадненко, Д.Ю. Зеркалев // Аграрная наука - сельскому хозяйству: матер. 5-й межд. науч.-практич.конф., сборник статей, книга 3. •- Барнаул, 2010. - С. 417-420.

2. Двадненко. А.И. Иммунобиологические свойства вакцины против колибактериоза кроликов / A.A. Шевченко, А.И. Двадненко //Актуальные проблемы интенсивного развития животноводства, посвященной 80-летию образования зооинженерного факультета УО БГСХА: матер. 13-ой межд. науч.-практич.конф. - Горки, 2010. -С. 225-228.

3. Двадненко, А.И. Эпизоотологические особенности и профилактика колибактериоза кроликов / А.И. Двадненко//«Опыт сотрудничества в области экологии, лесного хозяйства, ветеринарной медицины и охотоведения» 11-13 июля 2011 г.: матер. 2-ой межд. научн.-практич. конф., посвященной 90-летию со дня образования Кубанского государственного аграрного университета. - Краснодар, 2011,-С. 57-61.

4. Двадненко, А.И. Эпизоотологические особенности и специфическая профилактика колибактериоза кроликов/ А.И. Двадненко, Левченко Т.В., A.A. Шевченко// Научный журнал. Университет. Наука, идеи и решения. №1, Краснодар, 2010. - С. 46-49.

5. Двадненко, А.И. Терапевтическая эффективность эшерихиоза кроликов

/ А.И. Двадненко, A.A. Шевченко//Труды Кубанского ГАУ. - 2012. - № 2(35)-2012г.

6. Двадненко, А.И. Эпизоотологические особенности, специфическая профилактика и лечение эшерихиоза кроликов/ А.И. Двадненко//Ветеринария Кубани. - 2012. - № 2 - С.5-7.

7. Положительное решение на выдачу патента, Российской Федерации. Способ изготовления вакцины ассоциированной против колибактериоза, стреп-тококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов/ Шевченко A.A., Зеркалев Д.Ю., Шевченко Л.В., Черных О.Ю., Двадненко А.И.; заявитель и патентообладатель ФГБУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет», заявка №2010126692/10(037989); заявл. 26.06.2010.

8. Двадненко, А.И., Шевченко A.A. Рекомендации по диагностике, профилактике, лечению и ликвидации эшерихиоза кроликов в Краснодарском крае. - Краснодар, 2012.-34 с.

Подписано в печать . 2.03. 2012 г. Бумага офсетная Печ. л,-1,0 Тираж 100 экз.

Формат 60><84 1/16 Офсетная печать Заказ № 180

Отпечатано в типографии КубГАУ 350044, г. Краснодар, ул. Калинина,13

Текст научной работыДиссертация по сельскому хозяйству, кандидата ветеринарных наук, Двадненко, Алексей Игорьевич, Краснодар

61 12-16/84

Кубанский государственный аграрный университет

На правах рукописи

ДВАДНЕНКО АЛЕКСЕЙ ИГОРЬЕВИЧ

ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ, ДИАГНОСТИКА, ПРОФИЛАКТИКА И ЛЕЧЕНИЕ ЭШЕРИХИОЗА КРОЛИКОВ В

КРАСНОДАРСКОМ КРАЕ

06.02.02. - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

ДИССЕРТАЦИЯ

на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Научный руководитель: заслуженный работник сельского хозяйства РФ,

лауреат премии Правительства РФ в области науки, доктор ветеринарных наук, профессор Шевченко А.А

г. Краснодар 2012

СОДЕРЖАНИЕ

стр.

Введение....................................................................................4

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ................................................................9

1.1. Таксономия эшерихиоза............................................................9

1.2. Морфологические, тинкториальные, культуральные и биохимические свойства эшерихий.......................................................................10

1.3. Антигенная структура эшерихий................................................12

1.4. Устойчивость эшерихий...........................................................14

1.5. Диагностика эшерихиоза.........................................................14

1.6. Эпизоотический процесс при эшерихиозе....................................18

1.7. Лечение эшерихиоза...............................................................25

1.8. Специфическая профилактика инфекционных болезней пушных зверей...........................................................................................29

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ...............................41

2.1. Материалы............................................................................41

2.2. Методы исследований..............................................................44

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ........................48

3.1. Эпизоотическая ситуация по инфекционным болезням кроликов в Краснодарском крае............................................................................48

3.1.1. Нозологический профиль и место эшерихиоза в инфекционной патологии кроликов...............................................................................50

3.1.2. Временные и территориальные границы эшерихиоза кроликов........52

3.1.3. Возрастная восприимчивость кроликов к эшерихиозу....................54

3.2. Диагностика, клинические признаки, патоморфологические и гистологические изменения эшерихиоза кроликов.............................................56

3.2.1. Изучение клинического проявления эшерихиоза у кроликов............56

3.2.2. Изучение патоморфологических и гистологических изменений при эшерихиозе кроликов.....................................................................57

3.2.3. Выделение, идентификация культур эшерихий, циркулирующих в организме кроликов в Краснодарском крае...............................................63

3.3. Разработка технологии изготовления и контроля инактивированной вакцины против эшерихиоза кроликов....................................................71

3.3.1. Разработка технологии получения и оценка качества биосырья для изготовления вакцины против эшерихиоза кроликов.................................71

3.3.2. Изучение кинетики инактивации возбудителя эшерихиоза...............72

3.3.3. Изучение иммунобиологических свойств вакцины против эшерихиоза кроликов в экспериментальных и производственных условиях.................78

3.3.3.1. Изучение иммунобиологических свойств вакцины против эшерихиоза кроликов в экспериментальных условиях............................................78

3.3.3.2. Разработка методов контроля вакцины против эшерихиоза кроликов.............................................................................................81

3.3.3.3. Изучение вакцины против эшерихиоза кроликов в производственных условиях.....................................................................................83

3.4. Разработка лечения при эшерихиозе кроликов................................86

3.5. Разработка мероприятий по профилактике и ликвидации эшерихиоза кроликов....................................................................................90

3.6. Экономическая эффективность применения вакцины против эшерихиоза кроликов....................................................................................97

3.7. Экономическая эффективность лечения эшерихиоза кроликов...........103

3.8. Обсуждение результатов исследований........................................109

4. Выводы..................................................................................116

5. Предложения производству.........................................................118

6. Список использованной литературы.............................................119

Приложения...............................................................................138

Введение

Актуальность темы. Звероводство является важной отраслью животноводства. Значительную часть дохода этой отрасли приносят кролики. Кролиководство служит дополнительным источником мяса, которое относится к диетическим продуктам питания, используемым для лечебного питания при заболеваниях печени, желудочно-кишечного тракта, желчного пузыря, при пищевой аллергии, гипертонической болезни, малокровии и гастритах. Мясо кроликов отличается нежной консистенцией, сочностью, имеет хороший вкус, легко усваивается в организме человека, не имеет специфического привкуса. Мясо характеризуется тонковолокнистой структурой и мраморно-стью, которую образуют чередования мускульной, соединительной и жировой тканей. Соотношение мякоти мяса и костей с хрящами составляет 85 и 15%, в туше крупного рогатого скота доля костей достигает 30%. В 100 г мяса кроликов содержится около 220-250 ккал. Это значительно меньше, чем энергетическая ценность мяса крупного рогатого скота (270-330 ккал), баранины (320) и свинины (390 ккал). В мясе кролика холестерина содержится в среднем 25 мг в 100 г продукта, в мясе кур - 35-100 мг, телят -38-80 и в говядине - 35-45 мг. Поэтому мясо кроликов особенно ценно для питания пожилых людей и детей.

У кроликов хорошая шкурка, мех пользуется устойчивым спросом в промышленности и у населения. Она применяется при производстве различных манто, головных уборов, воротников, жакетов и шуб. В России разведением кроликов занимаются повсеместно. Среди населения имеется большой спрос на продукты кролиководства. Поэтому на основе использования прогрессивных технологий в стране создана сеть кролиководческих ферм. Разведением кроликов в России занимаются в различных климатических зонах государственные, фермерские хозяйства и кролиководы-любители. Однако, интенсивному развитию кролиководства препятствуют инфекционные болезни: вирусная геморрагическая болезнь кроликов, миксоматоз, эшерихиоз, саль-

4

монеллез, стрептококкоз, пастереллез, энтерококковая инфекция и другие, наносящие значительный экономический ущерб отрасли [А.Ф. Евтушенко, 1992; И.А. Бакулов, И.Ф. Вишняков, Т.А. Власова, A.A. Шевченко, 1994; A.A. Шевченко, Л.В. Шевченко, A.M. Литвинов, 2002; A.A. Шевченко, Л.В. Шевченко, 2005; 2010].

Надежной защитой кроликов от инфекционных болезней является специфическая профилактика. Применение вакцин в звероводстве, позволяет снизить стрессовые ситуации у прививаемых животных, уменьшить трудозатраты и создать напряженный иммунитет в сжатые сроки [A.M. Ахмедов, 1983; В.И. Вачугов, 1989]. По мнению многих ученых, инактивированные вакцины, изготовленные из штаммов возбудителей инфекционных болезней, выделенные из эпизоотического очага, обладают более высокими антигенными и иммуногенными свойствами и способствуют созданию иммунитета достаточной напряженности [P.A. Кадымов, 1990; Р.Т. Маннапова, 1998; H.H. Шульга, 2006].

В связи с этим необходимо разрабатывать средства для специфической профилактики инфекционных болезней кроликов и совершенствовать их лечение.

Цель работы: изучить особенности эпизоотического процесса, клинические симптомы и патологоанатомические изменения при эшерихиозе кроликов, разработать эффективную систему лечебно - профилактических мероприятий заболевания в Краснодарском крае.

Задачи исследования:

• изучить особенности эпизоотического процесса эшерихиоза кроликов в условиях Краснодарского края за 10 лет (2001-2010 годы);

• выявить нозологический профиль инфекционной патологии кроликов и определить удельный вес эшерихиоза в нем;

• изучить территориальные, временные и возрастные особенности эшерихиоза кроликов;

• изучить клинические признаки, патоморфологические и гистологические изменения при эшерихиозе кроликов;

• определить этиологическую структуру и основные причины распространения эшерихиоза кроликов в Краснодарском крае;

• определить чувствительность выделенных культур эшерихий к антибактериальным препаратам;

• разработать новую вакцину и схему лечения кроликов при эшерихиозе в комплексе противоэпизоотических мероприятий.

Научная новизна. Впервые в условиях Краснодарского края изучен нозологический профиль инфекционных болезней кроликов, характер и особенности проявления эпизоотического процесса эшерихиоза кроликов, заболеваемость возрастных групп, клиническое проявление, патоморфологические и гистологические изменения при эшерихиозе кроликов.

Разработана технология изготовления и изучены иммунобиологические свойства новой инактивированной вакцины против эшерихиоза кроликов.

Изучены антибактериальные препараты для лечения эшерихиоза кроликов и определенны наиболее эффективные из них (абактан, энрофлон). Установлена чувствительность Е. coli к абактану, энрофлону, к левомицетину, ка-намицину. Препарат абактан впервые применен при эшерихиозе кроликов. Апробированы и внедрены рекомендации, в которых предложены для внедрения в ветеринарную практику новые схемы лечения и система профилактики при эшерихиозе кроликов. Научная новизна подтверждена патентом на изобретение.

Практическая значимость. На основании изучения эпизоотической ситуации для лечения эшерихиоза у кроликов рекомендуется применять абактан и энрофлон, для специфической профилактики разработана и предложена для внедрения новая инактивированная вакцина против эшерихиоза кроликов. Разработан и утвержден в установленном порядке проект нормативно-технической документации на производство и применение вакцины против

эшерихиоза кроликов. Производство инактивированной вакцины против эшерихиоза кроликов освоено в ФГУП «Армавирская биофабрика».

На основании теоретических, экспериментальных и производственных исследований разработана и внедрена в ветеринарную практику комплексная система диагностики, профилактики и лечения эшерихиоза кроликов в Краснодарском крае.

Основные положения, выносимые на защиту:

- изучение эпизоотологии эшерихиоза кроликов в Краснодарском крае;

- изучение клинических признаков, патоморфологических и гистологических изменений при эшерихиозе кроликов;

- изучение иммунобиологических свойств и эффективность новой инактивированной вакцины против эшерихиоза кроликов;

- эффективность антибактериальных препаратов при эшерихиозе кроликов;

- комплексная система мероприятий по профилактике и терапии эшерихиоза кроликов.

Реализация результатов исследований. На основании полученных результатов улучшена система профилактических и лечебных мероприятий с использованием абактана и энрофлона в хозяйствах Краснодарского края. Разработаны и внедрены рекомендации по диагностике, профилактике и лечению эшерихиоза кроликов в Краснодарском крае.

Внедрение системы профилактических и лечебных мероприятий в ветеринарную практику кролиководческих хозяйств Краснодарского края позволит сохранить поголовье кроликов и оздоровить их от эшерихиоза.

Результаты исследований используются в учебном процессе на кафедре микробиологии, эпизоотологии и вирусологии Кубанского государственного аграрного университета.

Апробация работы. Результаты исследований и основные положения диссертации доложены и обсуждены на Международных научно-практических конференциях (г. Барнаул, 2010г.; г. Краснодар, 2011г.); на совещании кролиководов Краснодарского края (г. Краснодар, 2010г.); на засе-

7

даниях ученого совета Кубанского государственного аграрного университета (г. Краснодар, 2010-2011гг.); на научных студенческих конференциях факультета ветеринарной медицины Кубанского государственного аграрного университета (г. Краснодар, 2010-2011гг.).

Публикации: по теме диссертации опубликовано 8 научных работ, в том числе две в журналах, рецензируемых ВАК РФ.

Структура диссертации. Диссертация изложена на 138 страницах компьютерного текста (Microsoft Word) и включает в себя введение, обзор литературы, собственные исследования, заключение, выводы и предложения, список литературы и приложения. Работа иллюстрирована 27 рисунками, 16 таблицами. Список литературы включает 224 источника, в том числе 44 иностранных авторов.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Таксономия эшерихиоза

Эшерихиоз (колибактериоз) - инфекционная болезнь молодняка всех видов животных, протекающая преимущественно септически с явлениями поноса, вызывает поражения органов дыхания или центральной нервной системы. Болеет и человек. Возбудителем болезни являются энтеропатогенные штаммы Escherichia coli. Впервые возбудитель Escherichia coli выделил в 1885 г. немецкий педиатр Т. Эшерих из фекалий больного ребенка с признаками диареи [Т. Escherich, 1885, 1886]. Поэтому в соответствии с международной номенклатурой инфекционная болезнь называется эшерихиоз.

У полновозрастных самок пушных зверей болезнь проявляется абортом или рождением мертвых щенков. При септической форме возбудитель локализуется в крови, внутренних органах и тканях, кишечнике и регионарных лимфатических узлах; при энтеритной форме — в кишечнике и брыжеечных лимфатических узлах [Е.П. Данилов, 1984; H.Ch. Loliger, 1960].

По Международной классификации в пятом издании Определителя микробов Д. Берджи [1939] род Escherichia был включен в 5 группу (факультативно анаэробные грамотрицательные палочки), семейства Enterobacteriaceae. Согласно современной систематике род Escherichia включает в себя несколько видов: Е. coli, Е. blate, Е. ferrusonii, Е. hermanii, Е. vulneris, а также с неустановленным систематическим положением Е. adecar-boxylata.

Роль Е. coli как возбудителя инфекционной болезни молодняка разных видов сельскохозяйственных животных общепризнанна и имеет более чем вековую историю. Этиологическая роль Е. coli в возникновении инфекционной диареи молодняка животных впервые была установлена датским ученым К.О. Иенсеном в 1893 году, а затем подтверждена другими отечественными и зарубежными исследователями [Г.Н. Габричесвский, 1894; А.А. Орловский,

1897; J. Poels, 1899; А.Г. Разумовский, 1901; M. Christiansen, 1917; A. Adam, 1927; M. Климмер, 1930] и другие. Патогенные штаммы кишечной палочки вызывают заболевания у молодняка самостоятельно [Н.А. Михин, 1940; И.И. Архангельский, 1951; А.И. Улендеев, 1968; 1974; Я.Е. Коляков, С.С. Гитель-сон, Л.С. Каврук, 1970; М.А. Сидоров, 1980; О.А. Тугаринов, 1987; В.Г. Захаров, 1995; Н.А. Головко, 1977] или в ассоциации с другими патогенными микроорганизмами [О.А. Полякова, 1976; Л.С. Каврук, 1986; 1994; Е.С. Воронин и др., 1989; С.Н. Золотухин. 1994; Л.С. Каврук, С.Н. Золотухин и др., 1997; 1998; Х.З. Хаффаров и др., 2002].

В семейство Enterobacteriaceae входят роды Escherichia, Klebsiella, Morganella, Proteus,Citrobacter, Enterobacter, Providencia, вид Yersinia enterocoli-tica. Эти микроорганизмы могут вызывать самостоятельно инфекционные болезни с поражением желудочно-кишечного тракта и различные внекишеч-ные инфекции, такие, как бактериемия, менингит, инфекции мочевыводящих путей, дыхательных путей, раневые инфекции и другие [Д.И. Скородумов, В .В. Субботин, М.А. Сидоров, Т.С. Костенко, 2005].

1.2. Морфологические, тинкториальные, культуральные и биохимические свойства эшерихий

По морфологии Е. coli имеет форму прямой палочки, короткие, относительно толстые, с закругленными концами, длиной 2—3 мкм, толщиной 0,6-1,0 мкм. Располагаются одиночно, реже попарно, в организме могут принимать коккоподобную форму. Бактерии подвижны (перетрихи) и неподвижные, спор не образуют, отдельные серовары образуют микрокапсулу (О8, 09, 0101). Кишечная палочка по методу Грама окрашивается отрицательно, хорошо красится обычными анилиновыми красителями, часто биполярна, особенно в тканях и экссудатах. Под воздействием разных абиотических факторов могут образовывать L-формы и приобретать способность прохождения через бактерийные фильтры.

E. coli неприхотлива в отношении питательных сред, может расти в пределах от 15° до 55°С (температурный оптимум около 37-38°С). Это аэроб или факультативный анаэроб, pH 7,0-7,4. Хорошо растет на обычных питательных средах - МПА, МПБ; средах Эндо и Левина. На МПА через 24 ч образуются прозрачные с серовато-голубым отливом сочные колонии, легко сливающиеся между собой, с ровными краями и гладкой блестящей поверхностью (S-форма) или плоские, сухие со слегка волнистым краем и шероховатой поверхностью (R-формы). В МПБ Е. coli вызывает обильный рост при значительном и интенсивном помутнении среды и наличие сероватого, легко разбивающегося осадка при встряхивании, иногда образуют пленку на поверхности или пристеночное кольцо. При посеве на среду с желатином разжижение среды не наступает. По уколу получается серовато-белый рост. Молоко свертывается, лакмусовое молоко быстро розовеет (образование кислоты) и коагулируется.

На диагностической среде Левина Е. coli образует темно-фиолетовые или черные колонии, на дифференциально-диагностической среде Эндо лактозо-положительные штаммы образуют колонии малиново-красного цвета с металлическим блеском или без него; на среде Мак-Конки