Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Энзимопатология герпетического кератита

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Энзимопатология герпетического кератита"

Кбимат^^ Vс/л яо.ег.зо

А0

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО НАРОДНОМУ ОБРАЗОВАНИЮ

ОРДЕНА ДРУЖБЫ НАРОДОВ УНИВЕРСИТЕТ ДРУЖБЫ НАРОДОВ имени ПАТРИСА ЛУМУМБЫ

На правах рукописи

ТЕРЕХИНА Наталья Александровна

УДК 577.15:617.713—002

ЭНЗИМОПАТОЛОГИЯ ГЕРПЕТИЧЕСКОГО КЕРАТИТА

(03.00.04 — биохимия)

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Москва—1990

Работа выполнена на кафедре биохимии и в лаборатории электронной микроскопии Пермского государственного медицинского института, на кафедре биохимии Московского медицинского стоматологического института.

Научный консультант —

доктор медицинских наук, профессор Ю. А. Петрович.

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Л. Ф. Панченко, доктор биологических наук, профессор А. А. Карелин, доктор медицинских паук, профессор Р. Т. Тогузов.

Ведущая организация — Институт биологической и медицинской химии АМН СССР.

Защита состоится « » 1990 года в

часов на заседании специализированного совета Д 053.22.02 при Университете дружбы народов имени Патриса Лумумбы по адресу: 117198, Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 8, медицинский корпус, к. 224.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Университета дружбы народов имени Патриса Лумумбы по адресу: Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 6.

Автореферат разослан « » 1990 года.

Ученый секретарь специализированного совета доктор медицинских наук

Щ/ я 3 Т0РБЕК

ОНЦЛЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РЛБОТН

Актуальность проблош. Выяснение механизмов взаимодействия вируса и инфицированного им организма - фундаментальная проблема биохимии и но менее вакная проблема медицины. Это касается'и самой распространенной вирусной инфекции герпетической.

. Вирус простого герпеса /ВПГ/ вызывает длительную, преимущественно латентную ин'Токщш с более или менее частыми обострениям!. 60% детей до 3-5 лет и 90£ людой старит 15 лет заражено ШГ в латентной фор,та /Баринский II.ф. с соавт., 1986 ; jcauftnen , Rayfield t 1988/. ВПГ первого типа /ШГ-I/ чаще всего поражает коду, слизистую оболочку полости рта, глаз, мозг. Инфекция ВПГ второго типа /ШГ-2/ передается в основном половым путем и преимущественно поражает гениталии у'взрослых и головной мозг у новорожденных.

Герпетическим кератитом в СССР ежегодно страдают 300 000-500 ООО человек /Г.:аПчук Ю.Ф., ID0I ; Каспаров A.A., 1285/.Большинство герпетических порикений приходится на рецидивирующий оО/гальмогерпес. Дано при использовании лучших противовирусных препаратов удаотся излечить не более 2/3 болышх герпетическим кератитом /Каспаров A.A., 1987/. При этом у многих болышх с • ддптолышм рецидив лруюпцш герпетическим кератоиридоциклитом на-блгодгиэтся тятолые осложнения.

По-видимому, неполноценность лечения и прогнозирования рецидивов герпетического кератита в известной мере связаны о недостаточностью сведений по биохимии герпетической инрекцин. Биохимия взаимодействия ШГ с клетками изучена недостаточно, в. частности, это касается ферментных механизмов. Ейохимия латентного состояния в нервной системе, в клетках крови а механизмов, он{щдоляппих рецидивы герпетической инфекции, мало исследована. Сведения о V ei*.:orrax лимфоцитов при офтальмогерпесе в литературе мы не нашли. Имеется небольшое количество работ, в которых изучалась активность ферментов тканой глаза кролика при о^таль-могорпесе /Потрогич Ю.А., ТорехинаЛКА., 1976 s Тервхина Н»А., IS77 ; ;4u!î4jк В.Г., K8I ; Касавина B.C., 1082 ; Чесиокова Н.Б. о соапт., I98I jCrmpbeli IC80 ; Birkl« et «1. . 1986/.

:1ало исследовано антг.оксидантная система /АОС/ роговицы, активность <?рг.:снтот< олега при очтальмогерпесе. Отсутствуют данные'

- 2 -

В^ биохимии роговицу человека при этом заболевании.-

Вместе с тем, изучение энзимологии вирусной инфекции перспективно не только для фундаментальной биохимии, молекулярной биологии, -экспериментально:! вирусологии, но может быть полозшш для научно обоснованных диагностики, лечения и прогнозирования вирусных болезней. ■

Цель и задачи исследования. Целью данной работы явилось изучение энзимологии герпесинфидировшшого глаза, слезы, лшдро-цигов периферической крови для установления биохимических звеньев патологии при герпетической кератите, а такхе для ох,лоси эффективности лечения и прогнозирования рецидивов.

Соответственно цели бшш поставлены задачи:

1. Изучить активность рода дегидрогеназ в роговице человека при различных клинических формах герпетического кератита, провести гистохимическиЛ и ультрахцгтохиьшческнй анализ аерменгов здоровой и герпесин^ицировашюЛ рогоь^х,ы кролика, и тихсде о.:роде-лить содерсание ряда метаболитов углеводного обмена в глазу.

2. Изучить активность дегидрогеназ, ^ос^атаи, гликозидаз слезы человека при разных клинических формах герпетического кератита в динамике заболевания. Использовать полученные розульта-ты для прогнозирования рецидива герпетического кератита и оценки эффективности его лечения.

3. Исследовать свободнорадакальноо окисление /СРО/ и анта-оксидантную систему /АОС/ здоровой и герпесинфихшровшшоЛ роговицы, слези, лим^оцнтоц периферической крови человека и кролики ири офталыюгерпесе.

4. Провести энзимологическое исследование лшд; оцитов периферической крови большхх герпетический кератитом в диншико заболевания и при кератитах другой. негвриетичоской этиология.

б. Изучить включение антивирусного препарата !;-]1од-2'-деа-оксиуридшт /ИДУ/ в роговицу здоровой крисы а его изменение при герпетическом кератите.

Научная новизна. Вперше у человека опродилона актшшость фердентов здоровой и герпесишцщировшшол рогоы-лм. Проведены вааимолох'ичеекко исследования слиаи и лим.о^итов перн^вричиокой крови в динамике инфекции. Баервиэ установлена ультраструкчурнан доксишзедия ферментов в эдоролой роговчцо ж ее мзшношш ара о>-тальюгерпосе.

Показано, что метаболизм ткниеН гл-ан 1.' дан^пки герпотиче-

cKoii инфекции перостраивается d связи с реализацией генетической ищхэрмации вируса. Впервые определены изменения содержания мета-бататов углеводного обмена и пешшошю вшпочегаот ВДУ, печенного '

, в роговицу при герпетическом кератите.

Отмечено, что разные методы получоши слези могут привести к различшш результата!,!. Отработан» оптимальные условия сбора • слези для ферментной диагностики. Впервые прогнозировали рецидив герпетического кератита по активности (¿¡орментов слезы.

Впервце при pasimx формах офтальмогорпеса в динамике забо-левшптя в лимфоцитах и сыворотке крови изучена активность окси-доредуктаз и ооссТагаз. Проведен сравнительный анализ активности ферментов лимфоцитов при кератитах различной этиологии /герпетических, аденовирусных, травматических/.

Впервые исследованы ферменты АОО глаза, слезы, лимфоцитов при герпетическом кератите у человека и кролика. Изучено влия-цио на их активность шггиоксидаптоп селенита натрия, сС-токоферо-ла, аскорбиновой кислоты.

Установлены при герпетическом кератите интенсификация хош-лшииесценции /ХЛ/ в роговице и лимфоцитах крови, падение активности антиоксидшгпшх /АО/ ферментов, изменошю диэлектрических характеристик, потеря слезой человека способности ингибировать образованно гидроксилрадшсала, исчезновение из слезы аскорбиновой кислоты.

Внявлон ряд патохимических звеньев герпетического поражения: иумоиягатся охясллтолыю-восстаповитолыше процессы, падает АО защита роговицы, лимфоцитов, нарушается.ингибирование образования гидроксилрадикала слезой, усиливается СРО, нарушается проницаемость не только гемато-офтальмпчоского барьера, но и клеточных и митохондркалышх мембран.

Прлктичоскач г.етгость. Исследование слезы важно не только'в тооретичоском плане для биохимии и медицины. Оно имеет диагностическое и прогностическое значение в офтальмологии и других раз-■ долах медицины.

При незначительной репллкации^вируса в роговице и внешне практически здоровом глазу в период рекигекк инфекции БПГ по активности дегид!Х)геназ в слезе можно прогнозировать рецидив rojv-потического кератита. "Способ прогнозирования рецидива герпетического кератита" задачей A.C. JE 1320755 /1987г./. Эй&ектив-' ность внедрения способа в том, что даже при отсутствии клиничоо-

к1-" признаков ыонно, проведя своевременно предупредительную терапию, избегать рецидива.

• На патогенетическом значении резкого снижения АО защити роговицы, падения в ней содержания аскорбиновой кислоты, АТФ при герпетическом кератите основан предложенный наш совместно с офтальмологами способ, его комплексного лечешш путем внутри органного электрофореза /31>/ аскорбиновой кислоты, АТФ и фонофореза с1-токоферола. Способ сокращает сроки лечения, повшает остроту зрения, может бить применен при разных формах герпетического кератита.

На основании обнаружения близкого содержания мочевшш в олезе и крови подана заявка 4375429/28-14 на "Способ диагностики уремии" с помощью определения мочевшш в слезе. Боложитолыюе решение по ней о выдаче авторского свидетельства от 17 марта 1082 года.

' Внедрение в практику результатов исследования. Утверждены 113 РСФСР и разосланы методические рекомв1щащш "Прогнозирование рецидивов герпетического кератита с помоцью определения в слезо активности ферментов1"/1988/. Этот способ прогнозирования внедрен в практику глазных отделений Пермской областной клинической болышцы, на кафедрах глазных болезней Пермского, Пяевского, Полтавского медицинских институтов.

Способ комплексного лечения герпетического кератита с включением шггиоксидантов внедрен в практику глазных отделений Пермской областной клинической болышцн, на кафедре глазных болезноП Пермского медицинского института. Написаны методические ¡юкомон-дации /1908/.

Материалы диссертации внедрены' при чтении лекций на кафедрах биохимии Шсковского медицинского стоматологического института, Порлского, Ижевского медицинских институтов, на ка; едрах глазных болезней Порлского, Ижевского и Полтавского медицинских институтов.

, ролояонкп ■ выдвигаемые на защиту.

1. Знание пнзимологии герпетического нораменлд позволяет на строго объективной основе изыскивать новно сгоеЫн леи.1 над и прадупрвздоюш отой инфекции.

2. Еиохнмичеокне показатели слези отражает состояние не только тканой глаза, но и всего организма. с их ионошьо можно оценивать состояние многих систои оргщшз/ла в целое прогноза, диыг-аоаи и хг.^хктеркстьки доче:тя.

3. Биохимические и ультрацитохишческпе данные подтвердили наличие субкллнически протекающего процесса во внешне здоровом контрлатералыюм глазу.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены: на 3 и 4 Всесоюзных симпозиумах по медицинской энзимологги МЛ! СССР /Астрахань, 1979 ; Алма-Ата, 1983/, 5 совещании по проблеме "Гисто-. тематические барьеры" Alt СССР /Москва-, 1978/, 5 и 6 Всесоюзных съездах офтальмологов /Ташкент, 1979 ; Ашхабад, 1985/, 3 Всорос-сиПском пленуме по трансплантации и гомосорбции /Москва, 1980/, на Всесоюзной конференции патофизиологов /Киев, 1981/, на конференции офтальмологов Западной, Восточной Сибири и Дальнего Востока /Владивосток, 1983/, на Всесоюзном симпозиуме "Пентозофос-фатный путь превращения утловодов, ого механизмы и регуляция" /Калинин, 1984/, на 5 Всесоюзном симпозиуме "Циклические нуклео-тида и система регуляции ферментативных реакций" /Рязань, 1985/, на 3 Всесоюзном симпозиуме с Мввдународным участием "Структура и функция лизосом" /Тбилиси, 1986/, на научных конференциях биохимиков Урала п Западно!! Сибири /Тюмень, 1982 ; Ilept^, 1984 ; Свердловск, 1985/, на I и 3 Всесоюзных конференциях "Биоантиоксидант" АН СССР /1983, 1989/, на 4 конференции "Ульграструктурные основы патологии органов и тканой" /Тбилиси, 1989/, на 4 Всесоюзном оъезде патофизиологов /Кишинев, 1989/, на Всесоюзном совещании "Транспорт кислорода л антиокевдантная система" /Гродно, 1989/, па совместном заседании ка^др биохимии, мперобиологии, глазных болоэпой, 1Д1ИЛ, патофизиологии Пермского медицинского ¡тститута /Порта», 1989/, на совместном заседании кафедр биохимии, физиологии, ДОИЛ псковского медицинского стоматологического института /1989/, на научной конфоронцил кафедра бпохлмлн медицинского факультета Университета Дружбы народов пм.П.Лумумбн /1990/. '

Структура и объем работы. Диссертация излонена в основном-тома па 350 страницах машинописи, содержит 61 рясупок и 38 таблиц. Том состоит из введения, обзора литературы, описания обьбк-« тов л методов исследоваши, результатов п пх обоулденпя, выводбв; практических рекомендаций. Список цитированной литературу включает 556 наименований, из них 125 отечествешшх авторов, 431 иностранный. Приложение в отдельной тош на страницах, содерзят 109 таблиц. 2-177

- 6 -

СОДЕРЖАНИЕ. РАБОТЫ

' Обьектн у. петого.! исследования. Оугальмогерпос у кролика -наиболее близкая к естественной инфекции человека модель. Исследовали 180 здоровых и герпесинхэдировашшх взрослых кроликов породы шиншилла. Наносили 2 капли жидкости с ШГ-1 штамм VR 3 /титр 4,0 lglfflÄ 5О/мл/ на анестезировашото 1% раствором дикаина скарифицированную правую роговицу. Через 2, 5-7, 14 дней после этого исследовали эпителий, строму, эндотелий роговицы, радужку, хрусталик, водянистую влагу.

Исследовали также эпителий и строму дисков 44 роговиц, удаленных офтальмологами ири послойной кератопластике у людей с тяжелыми герпетическими кератоиридоциклитами после безуспешного консервативного лечения. Исследовали слезу, сыворотку и лимфоциты периферической крови 189 больных герпетическим кератитом. Контроль --слеза, лимфоциты и сыворотка крови 218 здорових доноров, а также роговицы 15 здоровых людей, взятые через 2 часа после смерти при транспортных авариях.

Кров$ и слезу получали со станций переливания крови, глазных отделешШ областной клинической больницы и других лечебных учреждений города Перми. Лимфоциты из 4 мл периферической крови выделяли методом разделения в градиенте плотности фиколл-веро-графин /а-1,077 г/л/ по Воугт /1968/.

Наш отработаны оптимальные условия сбора слезы. Стимулировали слезоотделение поднесенным к носу комочком виты, смоченной раствором нашатырного спирта. Не кас&чсь глаза, чтобы избодать даже небольшой микротравмы, глазной пипеткой соб1[рали 0,3мл слезы о наружной поверхности нижнего вока.

Активность ферментов определяли в экстрактах тканей в в жвд-коотях на спектрофотометре СФ-4А и СФ-26: ДДГ /КФ 1.1.1.27/ по И опту е. a ./I9G0/, шлатдегидрогеназы /ЩЦ1/.- Кй I.I.I.37 но Berg -o®yoff .Berat /1974/. глшозо-б-фосфатдегидрогешзы /Г-б-ЩУ КФ 1.1,1.49 по Börnberg , Ноге с leer /1955/, гл>íаматдогидро-геназн /ГДДГ/ КФ J.4.I.S - ио Schaidt /1974/. кислой ^осфатазы /Ш/ КФ S.I.S.2 ВО Audemoh « Sscsyplnakl /ISC2/. щелочноИ фосфатам /Щ/ КФ ЗЛ.3.1 ПО Веввеу ®t al. /1946/, гдугитионпер-оковдааы /ГПО/ КФ 1.ИЛ.9 по Гут кину ¿.В., Петровичу 10.A./KÍS2/, "супвроксаддисыугйзы /СОЛ/ КФ 1.15.1.1 no Pridovieh /1975/, Bietre »PridOTicb /1972/, Дубштно.: ¿I.E. с соаит./Г {©/,

_£-глгакоэидазн'КФ 3.2.1.2, J-/У-ацетилглюкозаминидазы КФ 3.2.1.30, ^-глюкуронидазы КФ 3.2.1.31 по Dengelmaier » Но1и8вп /1980/.

Содержание глюкозы определяли по Bergneyer et al. /1970/, пировиноградной кислоты по czok , Lanprecht '

/1970/, молочной кислоты, по Hohoret /1962/, содержание мочевины. уреазшш методом /Делекторская Л".II., 1987/, аскорбиновой кислоты методом индофенольного титрования по Tillmanu , HirechI932/, ингибирование образования гидроксилрадшсала слезой ПО Richmond et al. /1981/ И Kuiaenga et al. /1987/.

Для анализа хеМшгошносценции /ХЛ/ из энузслвировашшх и замороженных жидкшл азотом глаз кролика но лимбу вырезали роговицы, гомогенизировали, помещали в сцинтилляциошше флаконы с 8 мл 0,2 М фосфатного буфера,рН=7,4 на 30 минут при 37°0. Добавляли I мл раствора Н202 и I мл 25 мМ ?ез04, регистрировали ишуль-сы за 10 о на сцинтилляционном счетчике СБС-2. Дяя анализа ХЛ выделяли лимфоциты из 10 га крови кролика по Boyum /1968/, доводили концентрацию до 7«105 в I га и добавляли их к 7 мл раствора Хэшсса. Далее методика на отличалась от анализа ХЛ роговицы.

На автоматическом двухкаыальном диэльспектрометре регистрировали частотные характеристики диэлектрической проницаемости"и фактора диэлектрических потерь роговицы.

Гистохммнчоски в здоровой и. герпесинфицировшшой. роговице кролика изучали распределение ЛДГ по Рангов /1972/, КФ по so -llgraaa, Kanholrasr /1949/, АТФ-азы, б'-нуклеотидази по ЯаоЬ -ateln . Maieel /1957/.

Ультрацптохишческнй анализ КФ, АТФ-азы, Б'-пуклеотцдазы в роговице проведен по ¡'.Б.Бухвалову /1982/, ДЦГ по Hanker. /1975< Просмотр проводили в электронном микроскопе JEM IOO-3X и Тсэ1а Bs-540. Научный консультант по электронной микроскопии я ультра-цитохимпи ферментов профессор И.Б.Еухвалов /зав.лаб.электронной микроскопия БШЯ1 биотехнологии/.

Герпетическую природу заболевания подтверждали прягяш методом флюоресцирующих антител, выявляя антиген ШГ в соскобо котгь-югастипы больного герпетическим кератитом ио Муравьевой Т.В. /ПЮ8/. Цифровой материал обработан статистически о пошиыз t-крнтерпя Стыпдопта.

- 8 -

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

I. Биохимия переднего отдела глаза при герпетическом

кератите

В эпителии контрольных роговяц человека активность ЛДГДЩГ, ГЛДГ примерно на порядок выше, чем в строме, а активность Г-6-ФДГ в стропе роговицы отсутствовала, хотя в эпителии обнаруживалась. Наибольшой активность» в эпителии контрольных роговиц обладала ДДГ, в 8 раз ниже активной ВДГ, в 16 раз ниже активность ГДЦГ и на 2 порядка ниже активность Г-6-ФДГ.

Выявлена общая закономерность при герпетической кератите для человека и кролика: падение активности ДДГ, ВДГ, ГДДГ, Г-6-ФДГ в эпителии роговицы, снижение ДДГ, МДГ, ГДЦГ и появление Г-6-ФДГ в ее строме /рис.1/. Появление активности Г-6-ФДГ можно объяснить эмиграцией лейкоцитов, врастанием сосудов в роговицу, так как лейкоциты, эритроциты, стенки сосудов отличаются высокой активностью Г-6-ФДГ / ciine , 1975 ; yrei et al. 1975/. Наибольшие изменения активности ферментов роговицы человека отмечены при сапой тяжелой клинической форме герпетической язве роговицы: в эпителии роговицы активность ДДГ падает более чем в 16 раз, ГЛДГ и Г-6-ФДГ в 3 раза, МДГ в 2 раза. Это совпадает с и8-шшениями, обнаруженными в роговице кролика при остром инфицировании ВПГ /Петрович Ю.А. о соавт., 1976; Терехина H.A.,1977/.-

Измэнения удельной активности ферментов при герпетическом коратите напоминают сдвиги при расчете активности на г ткани, так как общее количество белка в тканях глаза мало колебалось.

Падение активности дегвдрогеназ в эпителии и стропе роговицу при поражении ВПГ приводит к замедлению превращения углеводов, связанного о окислительно-вооотановительнши процессами и соответственно о энергетическим обманом.

Но лоключсшо, что вн'зишше сдвиги в герпеоннфацированных роговицах человека и кролика вызваны ни только локальным влия-шем варуоа на обман роговицы, но возмокно и днотантшы сффек-чаа чороэ тройничный вера. В латентной форыз ШГ находитоя в уала тройнвчного нерва в ара реактивации инфекции двинется но парзой вотвя тройничного нерва п роговице, вишлшя во паТОЛО-ГЕЭ / Cook et »1. , 1987 j sebb«£« , 1988/.

Сштэшв едтжвноотн догидрогеыаз нарушает энергетический С0азн роговица, что вадыо оо райкому паденкю уровня АТФ. Сын-

2ÜO

too-

20

to

i»

г to е

s*

VAjUÁ

ё

•jf.

IT®"

ùLl

ЛДГ

70

/О

мдг,

ГАД Г

гЕ-

"Î7

¿Á

■ь

s i

Ofi

Г-б-фДГ qis

rá-

I

uiTkiífA

К 1 2 J 4 Эпителий

0,1

0,05 0

M

i

MÁ.

m

л

12 3 4 Cm (з ом а

-i

Pao. I. Актпвнооть догпдрогопаз в эшгголав и отроги горпооппфзцп-ровапных роговпц человека (икмоль/ши на г). ff- контроль, I - гврпатапеоная язва, 2 - метагзрпетгчоокнй нерагоирядоцнклат о взыгавлэквем, 3 - дяоковадный квратонрядоциюшт без взъяэвяо-ппя, 4 - буллезянй каратоарадоцяюшт. 3-177

О

- 10 -

*ише в роговице активности митохондриального маркера ГЛДГ свидетельствует в пользу нарушения функции митохондриальншс мембран. В пользу этого говорят и ультраструктурше нарушения иитохондриальных мембран роговицы.

При гистохимическом анализе через 2 дня после заражения кроликов ВПГ видно ослабление окраски на ЛДГ, АТФ-азу, КФ, 5'-нуклеотидазу во всех слоях роговицы, более значительное в эпителии. Через 5-7. дней активность ферментов снижалась еще сильнее.

При герпетическом кератите меняется ультраструктура и то-похимия ферментов в роговице. Через 2 дня после заражения в эпителии роговицы расширяется межклеточное пространство, разрушаются десмосомы, усиливается вакуолизация цитоплазмы, повреждается ендоплазматический ретикулум, цистерны которого выявляются короткими фрагментами. На отдельных участках цитоплазмы исчезают рибосомы. Спустя неделю после заражения ВПГ деструкция клеток эпителия и стромы роговицы выражена еще сильнее. Цитоплазма клеток разрежена, митохондрии вакуолизированы, десмосо-ыы и плазыолемма многих клеток разрушены, происходит слияние цитоплазмы 2-3 клеток.

Под электронным микроскопом установлено, что продукт реакции на ЛДГ в эпителии здоровой роговицы локализован преимущественно на плазмолемме, в матриксе цитоплазмы, на канальцах эн-_. дойлазматического ретикулума /ЭР/. Его содержание через 2 дам пооле заражения ШГ.уменьшается в цитоплазме и на плазмолемме, сохраняется в ЭР. Через надело в эпителии роговицы продукт реакции на ЛДГ рассеян точечно в цитоплазме, на мембранах ЭР.

АТФ-аза в эпителии здоровой роговицы локализуется в основном в межклеточном пространстве, митохондриях. Продукт реакции раополояон диффузно в цитоплазме. Спустя неделю после зарадашш АТФ-аза отоутотвуот в шасклеточном пространства, но обнаруаи-саогоя в раврушенных митохондриях,

В шштолии эдоровой роговицы продукт ре шиши на 5'-нукло-отндаау локализуется дисперсно в хроматине ядра, на деоыоооаах влаш&дешш, в цистернах ЭР, штриксо ыятохондрай и обильно в цэеоплаша. Чаре а 2 дня пооле аарьаошш уменьшается отлозонио продукта реакции па 6• -цукдвотидаау о цитоалкзмв и иа поврав-дэшшх дасьюсомах, во усиливается его отлоаакие иа гхашгцв ешшя в базальной мембраны, что, возлошо, оогясн>:отся кон-

- II -

центрацией HIT в базальном слоо эпитолия.

Продукт реакции на КФ в эпителии здоровой роговицы кролика сооредоточен в ооноеном в лизосомах, слабее в межклеточном пространстве, рассеян по цитоплазме. Через неделю после заражения активность КФ сохраняется на мембранах разрушенных лизо-* сом.

В эпителии роговицы и кератоцитах строш уже через 2 дня после заражения выявлен ЕПГ, на наружной оболочке которого обнаружен продукт реакции на ЛДГ, ЛТФ-азу.

Через неделю после заражения ШГ обнаружен также и в эпителии роговицы контрлатерального глаза. Ультраструктура и топо-1-химия ферментов эпителия этого глаза изменены, но меньше, чем в непосредственно инфицированном глазу. Это подтверждает наличие субклинического процесса на внешне здоровом контрлатеральном глазу и свидетельствует о необходимости лечения обоих глаз при герпетическом коратите.

2. Биохимия слезы у здоровых людей и при

Энзимологические анализы слезы провели у больных до лечения при поступлении в глазное отделением ходе лечения, при выписке после лечения, при диспансерном наблюдении несколько раз па протяжении длительного времени /до 4 лет/. При щадящем сборе слезы здоровых людей активность ВДГ, Г-6-ФДГ низкая, а ЛДГ отсутствует вовсо /рис.2/. При обострении герпетического кератита в слезу из эпителия роговицы, где активность ДПГ, МДГ» Г-6-ФДГ очень высокая, усиленно поступает дегидрогеназы, что начинается сто до клинических проявлений рецидива герпетического кератита. Это связано с тем, что ШГ, при переходе пз ла- : тентиого состояния в активное реплицирует в роговицо без вира-, генных клинических проявлений п только после достнаенпя определенного уровня инфицирования становятся видимыми морфологические нарушения.

Переход ферментов пз роговицы в слезу совпадает со сшко-пием их активности в роговице человека и кролика пра герпетическом коратпто, причем с наиболее резким падении! в эпителии роговицы, гдо преимущественно они оосредоточепы /Петрович D.A. с соавт., I97G ; Терехлпа H.A., 1977/. Переход в слезу дегидрог гоназ из роговицы, а но из слозиой келези и копъппктиви подтверждается том, что активность ЛДГ в роговицо в 70 pas вето,

АДГ - 12 -

у/ш/тттщ I ко., л х у.

* 1 2 3 Н 5 К 113 4 5

Да лечения Пасла лечения

Рсо. З.Аеуивнооть дсгадрогенаэ а одэзысй ¡ыдаоотв больных герио-

совку вератюгоы (ыкшш/ыан.д-*). Цифра шд отоябвашэ: а - косхооль, I - горпетачаопай ворага«, 2 - сзгогсривгичзогий сьэатсаоадоцаклат о ивьа&Елонаеи, 3 - даововвдный кеоотоврадо-цв&щт боа Еэгазвлаиая, 4 - глубокий атвпачшШ вератовсидоцаЕ-£39, § - Д£>шзацдацЯ водатнт о изъязвлением.

чем в слезной железе / КаЬап , 1982/ и в 50 раз вше, чем в конъюнктиве / Thof t , Friend , 1977/.

Так как прогнозирование рецидива офтальмогерпеса было сложной и нерешенной задачей, мы совместно с офтальмологом профессором Н.Г.Гольдфельд разработали простой и быстрый спо-' соб прогнозирования рецидива у лиц, раньше перенесших обоотре-' нив офтальмогерпеса по появлению в слезе активности ЛДГ и при значениях 1.ЩГ больше или равных 0,06 мкмоль/мин в I мл и Г-6-ФДГ больше или равных 0,01 мкмоль/мин в I мл. При повторных осмотрах.либо при выписке из стационара из-за отсутствия нормализации ферментов слезы рецидив герпетического кератита был нами прогнозирован у 49 человек, причем особенно важно, что у 38 из них глаза казались клинически здоровы. У 20 из 49 человек рецидив возник через 2 недоли - 1,5 года после выписки из стационара, йи 20 больных из отдаленных районов Пермской области отказались от лечения. У остальных 29 человек при прогнозе рецидива его удалось предупредить ранним противорецидивннм леченном. Следовательно, при выписке больных помимо шшничес-кого выздоровления необходимо учитывать активность ферментов слезы и давать соответствующие рекомендации для профилактики рецидива, если активность энзимов слезы свидетельствует о возможности рецидива. Тем более, что этот способ прогнозирования простой, безболезненный, доступный рядовым клшлко-биохимичес-кнм лабораториям.

Гак как при герпотпчоском кератите нарушена структура роговицы, богатой глияозидсодержащими соединениями, изучили активность гликозидаз. В слезе здоровых лиц обнаружена ^З-УУ-ацо-тплглшозамшшдаза, а активность Д-глюкозндазы и^5-глюкурон?-. дазы отсутствует. D слезо при офтальмогерпооо появляется jS-глп-козидаза и Д-г.джуронидаза, а активность л-#-ацбтилглюкозами-' нядазн увеличивается в 3-4 раза по сравнении о контролем /рно. 3/. При выписке больных посла лечения активность гликозидаз п ' слезе имеет тенденцию к нормализации.

Основным источником гликозидаз слезы у здоровых лиц являются ллэосош секреторных клеток слезнчх аолез. Вместо о тем, в роговице активность кислых гликозидаз высокая Дасавина Б.С., Двлгат Л.Д., 1982/. Поэтому эпителий роговицы при герпетичос-ком кератите становится основным продуцентом лиэосомных глико^-

зидаз слезы, а в роговице повышается их свободная активность, . 4-177

200

- 14 -

ß-//~ ацегпшг/1нзкозаАшнидсиа

Г. fr .

Y/.'í,Ù1A.

Efe

fi - глюкозидаза

VA

k

Ш

15 г

ß-z/tHJxypoHudasa

н t 2 j H До лечения

-t-

jfetTtní^vLffrrtdEa

vT * 2 J V X После лечения

Рво. 3. Аятивнооть гликозкдаз в слезной шдкооти дольных гераети-чеояям xepamoM (нмояьЛшн.ш""1). Цнфри вод огол&каш: к -нейтраль, I - говде?вчес213 кемтвт, 2 - натагахшетвчеокий хвра-тоарядоццишт о иамэмвнавм, 3 - древовидны! »ератвт с изъяав-геявем, 4 - даоковадшА «ератомрадощиишт дез ваадзыення, 5 -«тишгщн! яератят»

что, вероятно, связано с лабилизацией лизосомных мембран. Активность кислых гликозидаз слези может повивать и интенсификация их синтеза в инфицированных глотках. Все это способствует деградации мембран и быстрейшему распространению вируса. Изменение структуры гликозидсодержада соединений роговицы нарушат ет функцию и прозрачность роговицы.

Установив, что в гергшсинфицироваиной роговице падает активность ЩФ и КФ /Терехина H.A., 1977/, мы исследовали их активность в слезе. При герпотическом кератите в слезе пораженного глаза активность фосфатаз падает в 3-3,5 раза, в слезе кон-трлатералыюго глаза в 1,5 раза. Изменения КФ слезы при различных клинических формах офтальмогериеса аналогичны, a UP) наиболее выракены при метагерпетическом кератоиридоцшслнте с изъязвлением. При выписке болышх после -лечения а1стивность фосфатаз слезы пораженного глаза остается сниженной в 1,5-2 раза.-

Основным источником ЩФ и КФ в слозе здорового глаза являются слезные жолезы / van Haeringen • 1981/. При офтальмо-горпосе из роговицы фосТатазы также могут попадать в слезу, но так как активность фосфатаз падаот в эпителии роговицы и слезной жолезе из-за поврездащего действия БПГ, то и в слезе активность фосфатаз снижается.

В слезе контрлатерального глаза активность изученных ферментов изменяется в том же направлении, что и в слезо пораженного глаза, но менее выраяэнно. Изменения активности ферментов слезы и тканей контрлатерального глаза могут найти объяснения, во-первых, в проявлении субклинических нарушений метаболизма пз-за слабо выраженной репликации вируса и, во-вторых, из-за проникновения нейротропного герпесвируса в другой глаз по нервной системе.

3. Фетентя лимйоштов при герпетическом поражении

При острой герпетической инфекции с вирусемией лимфоциты периферической крови транспортируют БПГ, способствуют латентной инфекции / Teuta et а1. , 1983 ; Ursen et al. . 1984$ Lehtinen , 1985/. Лимфоциты человека имеют на своей поверхности рецептора для герпэсвирусов / Johnson . et al. »1980/. В лимфоцитах ШГ способен реплицироваться / TQUt« et al. > I98V.

Форкенишй анализ лимфоцитов провели у- 92 здоровых людей, 125 болышх кератитами различной этиологии: герпетическими,

- 16 -

ч^ашатичвскшш, аденовирусными.

В лимфоцитах периферической крови здоровых людей наибольшая активность среди дегидрогеназ у ВДГ, почти в 4 раза низе у ВДГ, в 5 раз ниде у ГЛДГ, самая низкая у Г-6-ФДГ, ' Прд

обострении герпетического кератита активность ЛДГ, МДГ, ГДПГ в лимфоцитах периферической крови падает в 3-5 раз, а активность Г-6-ФДГ повышается: при герпетической язве роговицы в 9 раз, ■ шзтагорпетическом кератоиридоциклите с изъязвлением и диско-видиом кератоиридоциклите без изъязвления в 4-5 раз, при древовидном кератите с изъязвлением в 3 раза.

В клетке, зараженной ШГ, индуцируется синтез вирусспеци-фических энзимов, нужных для ауторепродукции вируса. Возможно, повышение активности Г-6-ФДГ в лимфоцитах периферической крови больных офтальмогерпесом связано с необходимостью пентозофосфа-тодз для синтеза вирусспецифическпх нуклеиновых кислот.

Интенсивность изменения активности дегидрогеназ в лимфоцн- ' тах зависит от клинической формы кератита к глубины поражения роговицы. При герпетической язве роговицы наиболее падает активность ВДГ, более резко увеличивается активность Г-6-ФДГ. Посла лечения герпетического кератита активность окслдоредуктаз лимфоцитов имеет тенде}щшо к нормализации. Так, оксидоредук-газы лимфоцитов • чутко реагируют на герпотпчесг.ую инфзкцш^ определение их. активности монет служить показателем эффективное.-» та терапии. Измененная активность оксидородуктаз при выписке больных говорит о необходимости раннего противорацидшзного лечения.

При кератитах негерпетической стиологив /аденовирусных, травматических/ активность ферментов в лимфоцитах почти но отличалась * от контроля. Только при травматическом кератите активность Г-6-ФДГ увеличена вдвое. Активность ДДГ в лимфоцитах крови больных аденовирусный кератитом в отличие от герпетического кератита увеличена в 2 раза по сравнению с контролем. Следовательно, изменения ферментного статуса лимфоцитов при Сфгальыогерпесе.зависят от инфицирования ШГ.

' Провели шалив ХЛ лимфоцитов периферической крови 15 гор-аоонкфзадровшшых кроликов. Изучили активность НЮ к СОД в даи^оцитах крови 33 больных герпетическим кератитом ы 49 здо-роиа ладей. Интенсивность ХЛ лтфэщгтоь крова через 2 душ по-оло интракорноального заражения кроликов ШГ возросла вдвое,

а через 5-7 дной на порядок, что свидетельствует об усилении СРО.

В лимфоцитах крови больных герпетическим кератитом в 9 раз падала активность ГПО по сравнешш с контролем, из них почти в 17 раз ври герпетической язве роговицы, несколько меньше при метагорпотическом кератоиридоциклите с изъязвленном ц при древовидном кератите, в 6 раз при дисковидном ко-ратоиридоциилито без изъязвления.

Вероятно, резкое повышение концентрации супероксидрадика-ла вызывает индукцию СОД в лимфоцитах при обострении горпети-ческого кератита.

Высокая чувствительность ХЛ и активности АО ферментов лимфоцитов к РЛГ-инфокции, по-видимому, позволит в дальней., jm воспользоваться этими показателями в эксперименте и клинике, так как интенсивность ХЛ в известной мере соответствует интенсивности патологического процесса.

В лимфоцитах периферической крови здоровых людей 11$ но •выявлена, а активность КФ, являющейся маркером активации Т-кло-ток / Myuliwaka et el. . 1985/, была достаточно высокой.

Однако почти у половины болышх герпетическим кератитом в лимфоцитах обнаружена слабая активность ЩФ. Причиной снижения активности КФ в лимфоцитах при герпетическом кератите,вероятно, нояет сложить повышенное поступление незрелых лимфоцитов в кровь при офтальмогерпесе /Белокриницкий Д.В. с соавт.,1987/, В которых активность КФ снижена / Kraaijenhagcn et «1.Л982/.

Как известно, характер метаболизма лимфоцитов определяет иммунологическую роактивность организма и обеспечивает'основу иммунных решений /Робинсон М.В. с соавт., 1986/. В этой связи следует отметить, что определенное значение в изменении активности Ферментов лимфоцитов при герпетической инфекции имеет участив лимфоцитов в клеточном иммунитете против ШГ, при подавлении которого наступает рецидив герпетической инфекции / lehtlnen . 1985 ; Kit et el. . Т987/. Дофицит зрелых Т-ЛШ-фоцитов способствует формированию хроничоокой инфекции /мальха-нов В.Б., 1982/.

Повышенное поступление незрелых лимфоцитов в кровь больных офтальмогорпосом, по-видимому, приводит к тому, что лимфоциты но ограничивают распространения HIT с места инокуляции, а напротиь, способствуют усиленной репликации вируса в них, что

сопровождается выраженным изменением ферментного статуса лимфоцитов и снижением их функциональной деятельности.

В сыворотке крови при о^тальмогорпесе но выявлено существенных отличий активности ферментов по сравнению с контролем.

4. Своболиоргшикольноо окисление и антиоксидантная систома тканой глаза и слезы прц гоопетическоц кератите

Нарушение окислительно-восстановителышх процессов при герпс-р^ком кератите усугубляется интенсификацией СРО d глазу. (^одоленную роль во влиянии ВПГ на фюрменты играет деградация биомомбран, вызванная активацией порекисного окисления липидов /НОЛ/. Гто подтверждено анализом ХЛ и динамикой диэлектрических характеристик горпесинфицироваиной роговицы.

Copiro опытов поставили на 10 здоровых к 50 герпесг.нфици-рованных взрослых кроликах. Интенсивность ХЛ гериесинфмцхро-венкых рогожи воз]юсла в 2,5-4 раза чероз 2, 5-7 и 14 дней после заражения /рис Л /. Рост интенсивности ХЛ горпесинфици-ровашшх роговиц свидетельствует об усилении ПОЛ. Активация ПОЛ при нораконии глаза ШГ в известной море обусловлена падением активности ГПО я СОД. Рти Формонтц в норме нейтрализуют Н202 и 02".

В эпителии и эндотелии роговицы здорового кролика активность ШО выше, чем в других тканях глаза. Примерно вдвое ниже активность в хрусталике и на порядок ниже в радужке. Активность ГПО снижается в эпителии, эндотелии роговицы, радужке герпосинфицпрованного глаза. Ужо через 2 дня после заражения она падает в 4 раза в эпителии пораженного глаза, в 2 раза в эпителии контрлатералыюго глаза. '

Активность СОД в эпителии здоровой роговицы кролика в 1,6 раза выше, чем в эндотелии роговицы, а на порядок выше, чем в радужке, хрусталике в строио роговицы. Поело заражения ШГ активность СОД больше падает в роговице и радужко пораженного, чей контрлатералыюго глаза.

Падение активности ГПО в СОД при герпотячоском кератнто человека и кролика вызвано главным образом снижением их активности в эпителии роговивд/Рй0'6/»

Способность олезы здорового человека примерно на 30¡S ип-гибировать образованно гидроксилрадикала в ксантин-ксантинок-евдазной системе полностью теряется в герпвсинфицированном глазу /рис.5"/. Можно было предположить, что нарушение ингибиро-

Рво.^> Хеиалшинеоцевция (выпульоы за 10 овнунд) роговиц при инфицировании ВПГ-1 правого глаза .

По оои абсцноо - тянуты после начала контакта гомогената роговицы о вереквоью.водорояа я ОДО^ • ^О. По ооа ордзнат - виз. за 10 оехунх. I - правил глаз, 2 - левый глаз. А - здоровий вро-лаа, £ - через 2 дня, В - чореа 5-7. Г - Чврвв 14 ДЯвЯ поолв заражения.

- 20 -

вешил образования гидроксилрадикала, во-первых, основано на снижении активности СОД в слезе. Во-вторых, можно было допустить значение мочевины как антиоксиданта, правда, с нерезко внраяешшм действием. Наконец, в-третьих, можно было думать о роли аскорбиновой кислоты, обладающей большей АО активностьюt чем мочевина.

Пропорка пер- ">го предположения показала, что СОД в слезе здорового человека ни одним из трех примененных нами методов не определяется либо выявляется следовая активность.

В терое предположение тоже не подтвердилось. Уровень мочевины в слезе здоровых людей и больных офтальмогерпоеом не отличался достоверно /Р>0,Сб/. Но при этом установили, что он очонь близок к уровню мочевшш в крови как у здоровых лиц, так и при патологии, например, при уромии. Нами предложен способ диагностики уремил, согласно которому при содержании свыше 8,9 ммоль/л мочевины в слозе можно диагностировать уремию. Предложенный способ проще и быстрое исследования мочевину в крови, так как не требует свертывания и центрифугирования слезы. Валено ото при многократных определениях мочевины в динамике заболевания. Способ прост, надежен, доступен рядовым клинико-био-хямическим лабораториям.

При определении аскорбиновой кислоты в слезе оказалось, что у здоровых людей ее концентрация превышала 100 мкмоль/л, в у больных герпетическим кератитом она практически отсутствовала /рио. 5/. Таким образом, есть основания предполагать, что одним из ингибиторов образования гидроксилрадикала в слезе может служить аскорбиновая кислота.

В связи с том, что аскорбиновая кислота может транопортн-роваться из роговицы в слезу и в водянистую влагу, а также в обратном направлении, представляет интг^ео падение содержание втого антиоксиданта в шунтированной ВПГ роговице /Каплунович П.С., Ванькова Г.А., 1973/ и водянистой влаге /Терехина П.А., 1977/. Следовательно, в роговице создаются условия, препятот-вутопо ингибировша» образования гпдрсксилрадикала. Наличие такой ситуации подтверждается еще и резким падошгем в герпео-ивфицированной роговица человека и кролика активности АО ферментов.

При герпетическом кератите иаруиается щюницаемооть гека-то-офтальмпческого барьера, митохондриадьных и клеточных мзмб-

/23 / 2 з

Рзо. 5.Процент апгабнрованая образования гадрсаоал радааши (А) а оодеряанве воаорбановой пполоти (Б) о слезной садасотп одорезих глаз а о офтолыигерпсооц (Ц^т). I - здоровнэ лада, 3 - офталыазгерлео до лачеезя, 3 - ефталылогзрпво поогэ лечо-пая етгаокоадентакз.

Рас. 6. Дитвеноот» глутвтаазпороковдпеи (А) а оупоропсаддзо-

цутаса (Б) в опатэлаа (I) п отре::э (3) адорвиа а горпсапкфп-Езраэанпи рогоезц человека . Овотлнэ пвшотгошявп -

здороеыо глаза, гэптрэхозапшю отллбапа - глаза, сорягэпгао гош&ооа.

- 22 -

ран. Снижение активности ГПО и СОД могло явиться следствием гидролиза ферментов лизосомными протеиназами, свободная актив-кость которых возрастала при инфицировании глаза ВПГ /Петрович С.А. с соавт., 1979/.

У контрольных кроликов разность коэффициента диэлектрических потерь роговиц правого и левого глаза не превышала 3£. Максимальные сдвиг /2&%/ на частоте 10 кГц этого показателя наблюдались через 2 дня после заражения ВПГ. Выраженное изменений разности коэффициента диэлектрических потерь роговиц эдо-ровсг и герпесинфицированного глаза, динамика диэлектрической проницаемости и фактора диэлектрических потерь указывают на увеличение частоты релаксации роговицы при герпетическом кератите. Это свидетельствует о деструкции мембран и распадо полиэлектролитных комплексов роговицы, в основе которых лежит активация СРО и истощение АО фонда роговицы. Можно с большой долей вероятности предположить, что снятие ингибировання образования г идрокс ил радикала приводит к разрушению мембранных систем роговицы, и воспалению, для которого характерна активация СРО.

Таким образом, в патогенезе герпетического кератита существенную роль играет снижение активности АОС роговицы, слезы, приводящее к пероксидациг структурных липидов и нарушению проницаемости мембран.

Нами показано в екопврвивптв на кроликах, что неферконта-гевныо АО оказывают положительный ефф«кт на течение офтакьмо-герпеса.

В эксперименте, начиная со дня инфицирования ВПГ, 10 кроликов ежедневно получали о шпией по 0,2 ко* селенита натрия. Другие 10 кроликов ежедневно получали, начиная со дня инфицирования ВОТ, раотворсб-токоферола одет«'-а по 50 мг на I кг во-оа тела. Во всех тканях переднего отдела глаза этих кивотных черев 2, 5-7 дней после заражения определяли активность ПЮ и СОД и сравнивали ее о активностью АО фор*лентов у инфицированных, но не получавших АО кроликов.

Под влиянием дв активность ГПО чорез 2 дня после заражения резко увеличивалась и эпителии в эндотелии роговиц обоих глаз н несколько уменьшалась в строме роговгащ и рплужко обоих глав по сравнению с инфицированными животными, но не получавшими Зе. ■

Активность СОД под влиянием Sa повышалась в тканях переднего отдела инфицированного и контрлатерального глаза через 2 и 5-7 дней после заражения, но меньше, чем ГПО.

Увеличение активнооти ГПО под влиянием So понятно, так как ГПО являотся селенозависиыым ферментом /Петрович D.A., Подорожная Р.П., 1981 ; Dowd , QettiriB , 1988/. Что же касается влияния 3« на активность СОД в герпесинфицированном глазу, то здесь можно высказать предположение od опосредованном механизме действия. Вероятно, более высокий уровень СОД в глазах кроликов, получавших з« , вызван непрямым эффектом путем активации иы ГПО, что приводило к повышении АО защиты и тем самым способствовало стабилизации СОД. Be , предупреждая повреждение мембран, уменьшал выход лизосомных протеиназ в цитоплазму и тем самым црепятотвовал протеолиэу цитоплазматмческих белков, в том числе СОД и ГПО. АО эффект селенита, кроме того, обусловлен его ингибирувдим влиянием на ксантиноксидазу /ко1а . • Vijayayvaeguja , 1980/, являющуюся одним из "поставщиков" 'супероксиданиона.

Токоферол повышал активность ГПО через 2 дня после заражения ШГ и СОД через 5-7 дней, что, вероятно, связано со способностью л -токоферола реагировать с синглетным киолородом, стабилизировать мембраны. Токоферол при герпетическом кератите очевидно положительно влиял не только как "ловушка свободных радикалов", мембранопротектор, но и другими путями. Например, способствуя синтезу глнкопротеина фибронектина, повышающего адгезию клеток роговицы и заживление поверхностных повреждений / Satterfield et al. , 1988/. Этот белок выполняет интегрирув-• щую роль в организации межклеточного вещества, присоединяясь к углеводным группам сиалопротеинов плазматических мембран, к гиалуроновой и хондроитинсерной кислотам. Токоферол повышал устойчивость тканей к гипоксии /Яхнина Д.Н., I98Q/, улучшал оксигенацню роговицы /Гыкун B.C., Смирнова В.Г., 1985/, уоили-вил действие интарфярона /Аианенко A.A. о ооавт., 1987/, играл важную роль при осуществлении функций иммунной сиоте»лы /вед -dich et ai, 1985/» Использование 10£ раотьора «¿-токоферола а виде глазных капель в комплексе лечебных мер споооботвов&чо уменьшению количества осложнений и неблагоприятных пооледотвиЯ, сокращало длительность лечения больных офя&льмогерпесоы /Тикун B.C., НаЗчук И.Ф., 198а/.

- 24 -

В связи о обнаружением падения ЛО защиты в роговице и слозе, резким снижением в герпесинфицированной роговице содержания АТФ, мы совместно с офтальмологом профессором Н.Г.Гольд-фольд предложили комплексный способ лечения герпетического кератита, состояний из 14 процедур внутриорганного электрофореза /3D/ аскорбиновоЛ кислоты, AT® и фонофореза Л-токсророла.Способ заэдои АД У. J'?1337 от 7.09.1988, приоритет от 26.09.86. В основе внутриорганного ЭФ лежит принцип электроэлиминации, благодаря чо?ду циркулирующие в кропи лекарства выводятся в ткани ?,йШ воздействия. В экспериментах на кроликах показано, что внут^срганный эд повышает содержание витамина С в роговице и водянистой влаге.

Аскорбиновая кислота стимулирует закивлепие роговичшх ран, вллля на синтез коллигеновнх болкоп / Sobrare , 1985/,сти-мулируот об{»аз01)аш!0 гликозашиогликанов, активирует транспорт ионов и аминокислот с поверхности эндотелия по толще роговицы, регулирует щюгодимость нервных импульсов. Витамин С водянистой влаги иигибируот корнеальнум липоксигеназу /ищем , r»terron , 1906/, защищает глазные ткани от СРО и метаболитов, освобо.т.давднхсл при инфильтрации полимор! неядерными лейкоцитами. Аскорбиновая кислоты оказывает противоинфокционное, обезвреживающее, дезаллергизируадео действие. Витамин С поддерживает в тканях уровень витамина Е, увеличивает АО активность токоферола, иигибирует его потребление, реагирует о промежуточными продуктами окисления токоферола /Морозкииа Т.О., 1986 ;

Clalr« et «l. , 1988/. Совместное применение витаминов С и'Е угнетает ПОЛ почти в 100 раз /Dlllard et *i. , 1982/. Поело субко1гьюш<тивальных введений витамина С в поврежденной роговице повышается содержание ^Р в АТФ /sae» , 1974/. Таким образом, витамин С способствовал и скнт иу АТФ, содержание которой резко падает в роговице при офтальмогорпесе. Токоферол, как ловушка свободных радикалов, нормализует окислительно-восстановительные процеосы в роговице, улучшает ее биоэнергетику, связанную о выработкой АТФ.

Положительный эффект фонофореза токоферола связан о тем, что ультразвук повышает проницаемость гемато-офтачъмического барьера, сорбциошшо свойства роговицы, улучшает трофику и регенерацию тканей /1Ипак Т.Н., 1980/, ахтивируот обт.'ешшо процессы, стимулирует тканевое дыхание, способствует рассасыванию

- 25 -

сформировавшейся рубцовой ткшш.

Всего данный способ применили у 57 больннх в глазных отделениях Пермской областной клинической больницы. Первичный кератит был у 16 человек, у остальных рецидивирующий. 46 человек из 57 до лечения антиоксидантами безуспешно лечились 1-3 месяца общепринятыми средствами. Все они получили курс интерферона /субконъюшстивалыю или 3D/. Из 57 больных, получивших АО курс, выздоровели 34 /60!?/, улучшение у 19 /33#/, отсутствовал оффект у 4 больных /Ч%/. Чаще опителизация и уменьшение инфильтрации начинаются после 2-6 процедур и оканчиваются к 10-14 дню лечения. О положительном последействии говорит тот факт,что при осмотре больных через месяц после проведенного курса нарастает прозрачность роговицы, повышается острота зрения. Преимущества лечения АО: атравматичность, безболезненность, отсутствие побочных явлений и осложнений, сокраценло сроков лечения.

Применение предложенного наш способа у больных герпетическим кератитом наряду с улучшением клинического состояния привело к появлению в слезе аскорбиновой кислоты, восстановлению способности ингибировать образованно гидроксилрадикала /рас.5 /, нормализации активности ферментов слезы.

АО при офталъиогерпесе не только защищают от СРО, но и способны увеличивать уровень синтеза ^интерферона. Это обьяо* няется более полной сохранностью жизнеспособных интврферонпро-дуцнрувдих клеток, благодаря стабилизирующему действию АО на мембраны клеток /Малиновская В.В. о соавт., IS88/. <&-токоферол увеличивает в 2-4 раза, а СОД в 4 раза продукцию У-интер-ферона.

Обнаруженное ними наруше!ше ингибирования образовшшя гид-роксилрадикшш в сочетании о падением актийнооти АО формантов в уровля аскорбиновой кислоты в горпеоинфицированной роговице, слезе, водянистой влаго, по-видимому, додано рассматриваться как одно us звеньев патогэнеза офтальмогоряооа. Пололатолглоэ алняшго дополнительно введете« токоферола и аскорбиновой кислоты подтверждают ото положение.

Тиши образом, патогэяотичоокп обооловшшоа пазначопва ярз гериетачоокоы кератите АО, (¿-токофэроля, аскорбиновой «еоло-ты, а тшшэ назначевио ATS даэт выраконшй полоадтелышА фект, по-вадояоцу, благодаря сппоргнзму действий каздого прэ-варата.

- 26 -

Выясняя возможный механизм действия синтетических аналогов нуклеозидов, дающих положительный эффект при герпетическом кератите, мы изучили включение мечешюго ИДУ в роговицу.

Известно, что для синтеза ДНК ВПГ требуется значительное количество четырех нуклеозидтрифосфатов: AW, ГТФ, ЦТО, ТТФ. В здоровой клетке фосфорилированных производных тимидина, в том числе его первого роизводного который образуется с помощью тимидинкиназы из тимидина и А1Ф, во много раз меньше, чем фосфорилированных производных других нуклеозидов /Петрович Ю.А., Торехина H.A., 1977/. ВПГ перестраивает работу инфицированной клетки, кодируя выработку нового высокоактивного вируо-специфического изофермента тимидинкиназы, снижая дефицит ШФ /Kit et Ol., I960; KlliB et al., 1987/. Вирусспецифмческий изофермонт, а также ранее существовавший в клетке изофермент тимидинкиназы не отличают естественный тимидии от его искусственного аналога ИЛУ и фосфорилируют последний о помощью АТФ в йоддозоксиуридинмонофосфат, который другими кнназами клетки далее фосфорилируется в йоддезокоиуридинтрифосфат. Затем ДНК-зависимая ДНК-полимераза и другие форкенты системы синтеза ДНК но отличают йоддезокоиуридинтрифосфат от остествешюго ТТФ и включают остаток йоддеэоксиуридинмонофосфага в синтезируемую цепь ДНК БПГ. Но так кок ДНК ШГ, содвряодая вместо остатков ТШ остатки йоддеэоксиуридиндимонофоофата, не ыогет способствовать воспроизведению полноценных поляпептидных и полннуклао-тшшых цепей ШГ, то сто резко нарушает воспроизводство ШГ в клетко,прекращая острую атаку герпетической инфекции. Наряду о ингибпрованием ДНК-зависимой ДНК-полимеразы клетки в ©том очевидно в состоит один пз возможных механизмов вирусостатическо-го действия синтетических аналогов нуклеозида тимидина. На иад-ло1ШО текущий синтез ДНК клоткк хозяина "TJ также влияет, но слабоо, чем на быстрый синтез ДНК HIT.

В ходо эволюции выработалась и закрепилась стратегия ШГ, направленная на перестройку ферментных систем ш^ицпровшшой пм клоткн. Взрус активирует Формонты к нндуцируот синтез иообнч-Ш1а для кптактной клоткп пдоформонтон. катализирующих воспроизводство Еирусспоцифкчосккх нуклеиновых кислот к их предшественников, клакоо содорглнно которых х; клотко лимитирует репродукцию BIT. Болоо всего интенсифшшруются ферментные слетьч-н, катали зируиишо образование тщ.шдшк|оститов.

- 27 -

Изучение» энзкмологии герпет*иескоЛ ¡шфокции на примерз герпетического кератита дало возможность установить ряд биохимических звеньев патологии при герпотичоском кератите, разработать способ прогнозирования ого рецидивов и патогенотичоски обоснованный способ его комплексного лочения, а также установить ряд закономерностей взаимодействия ВПГ с клоткой и субклеточными органелламн.

БШЗОДЦ

1. Важное значение в нарушении обмена роговицы имеет падение активности ряда дегидрогеназ ее эпителия при остальмогер-песе, естественно возникшем у человека и при экспериментально вызванном у кролика. Степень изменения активности дегидрог*" чаз роговицы человека зависит от формы герпетического кератита.

2. В патогенезе герпетического кератита существенную роль играет снижение антиоксидантной /АО/ защиты, приводящее к интенсификации свободнорадикального окисления и пероксидации .структурных липидов и нарушении проницаемости биологических мембран. При герпетическом кератите резко повышена хемилюмине-сценция, изменены диэлектрические характеристики роговицы, что свидетельствует о деструкции мембран, активации ПОЛ и истощении АО фонда роговину. У больных герпетическим кератитом людей и у герпесишрицироранных крюликов снижена активность АО ферментов ГПО и СОЛ в роговице, главным образом в ее епитолии.

3. "Введение антиоксидантов селенита натрия или ¿-токоферола нормализует активность АО ферментов в тканях герпесинфици-рованиого глаза кролика. При герпетическом коратите у человека безболезненное, атривматичное комплексное введоние внутриоргын-ыыы электрофорезом аскорбиновой кислоты с АТФ и фонофорезом токоферола дает положительный клинический эффект. Предложенный способ комплексного введения АО при офтальмогера1есе основан на бис ходш чо с /с и х исследованиях, показавших патогенетическое значение падения содержания витамина С и АТФ, разного снижения АО эйциты роговица при этом ваболеванш.

4. При офтольмогертпесе слева чоловока терцет оиоообность ип-гнбировать образованно гидроксилрадикала. Из нее исчезает антп-окседант аскорбиновая кислота. После коыплоколого введения АО иармду с улучшением ошшчвеного состояния глаза восстанавливается способность слезы ингибировать ооразование гидроксилрада-кила а поьшаи'Гся собери,ание аскорбиновой ллолоты, но на доо-

- 28 -

тягает уровня здоровых людей.

5. Повышение активности ДДГ, ВДГ, Г-6-ФДГ слезы болышх герпетическим кератитом - ранний и чувствительный показатель повреждающего действия ВПГ в роговице. Отсутствие нормализации активности всех трех дегидрогеназ слезы дает возможность раннего прогнозирования рецидива герпетического кератита у больных без выраяеншх клинич ких признаков рецидива заболевания, что позволяет своевременно провести противороцидивную терапию больному с кажущимся выздоровевшим глазом.

6. В елезо при герпетическом кератите возрастает активность ^-№-оцотилглюкозами1шдазы, появляется активность ^-глюкозидазы

и й-глюкуронидазы, отсутствующие в слезе здоровых лиц.

7. Исследование активности ферментов слезы в динамике заболевания служит показателем оФ1ективности лечения, дает возможность откоррогировать терапию. Биохимический анализ слезы представляет интерес не только для оценки излеченности герпетичео-кого кератита, но и других заболевший. Нами предложен простой, безболезненный, атравматичный способ диагностики уремии по анализу содо]х::ания мочевины в слеза, уровень которой в слезе и крови изменяется аналогично.

8. ВПГ, реплицируя в люфзцитах, перестраивает их ферментные системы, снижает активнооть ДДГ, ЦДГ, ГЛДГ, ГПО, КФ, но увеличивает активнооть СОД и Г-6-ФДГ. Степень изменений акткв-нооти ферментов лимфоцитов аависит от клинической фород корати-та. Отсутствие нормаливацнв активности ферментов лимфоцитов после леченая свидетельствует о необходимости проткворецндввноа терапии пря оЗтальмогррпеое,

9. Пра химиотерапия в варавенной HIT роговице глаза повыза-стся включение аналоге ттоддна 5-йод-2' -дезогсиурадина в да, препятствуя тем сеши репродукций ШГ.

10. БВохимичеокнв а ультрацатохямпчоскио данные подтвердит наличие субклиняческн протекавшего процесса на внешне здоровой г.онгрлаторальноа глазу, что свидетельствует о необходимости леченая обоих глав ара герпетическом кератите. Hps этоы асболо-ванаа меняется не только ультраструктура роговицы, но ш ультра-цатояшая. ДДГ, К9 в других ^¡ментов в ней.

11. Реализуя свои генетическую информацию, ШГ перостраява-ет обмен клетка в оначитольяой море через Зерментнно скотема. Изучение визимолопш горпоткчоского поранения даот возможность

- 29 -

глубже понять закономерности взаимодействия БПГ о клеткой и субклеточными органеллами, внести коррективы в патогенез и лечение заболеваний, вызванных ШТ.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Путем определения в слезе активности трех ферментов: лак-татдегндрогеназн, малатдегидрогеназы и глшоэо-б-фосфатдегидро-геназы рекомендуем прогнозировать рецидив герпетического кератита еще при отсутствии клинических признаков заболевания у больных, которые раньше перенесли острую атаку герпетического кератита. После лечония больного герпетическим кератитом помн-{¿о клинического выздоровления необходимо учитывать активность ферментов слезы, что дает возможность прогнозировать роцвд...; офтальмогерпеса и позволяет своевременно провести противореци-дцвную терапию.

2. Для диагностики урэмиа рекомендуем простой, быстрый,боэ-бол.езнешшй способ путем определения мочевины в слезе, а но в крови. ?то ваяно при многократных опредолениях в динамике заболевания .

3. Для правильной инторпротадш дшпшх биохимического анализа олевы слс-дуот учитывать метод ео обора, исключать механичоо-кио повроздешш спитолия рогошищ, избегать сильной стимуляции сокреции с.юзи, чтобы уцоньишть риск искусственных различий з концентрации компонентов слезы. Для получения точных рззульта-тов необходимо и г оченно суток ио^хзд форионтныш определениями воздеваться от применения глазных каполь, чтобы избежать разведения слези и влияния медикаментов на секроцию слеэы'и на ак-

. тивность ферментов.

4. Рекомендуем способ лечения герпетического кератита путец внутриоргшного олвктро<£ореза витамина С, АТФ и фонофораза токо^ерола. Перед началом лечения шлиоксидантами больных герпетическим ке^титом необходимо сделать посев о конъюнктивы но бактериальною фдору, так кик отсутствие е#екта лечения может быть связано ео вторичной инфекцией.

СПИСОК ОСНОМШ РАБОТ 110 МАТКРШАМ ДИССЕРТАЦИИ

I. Селективность гемато-офталытеского барьера и ее связь с обменом веществ в условиях физиология и патологии /Ю.А.Петрович Л). А. Оболонский, В. Л. Поносов и др.//Тез.докл. У совощаяия по проломе "Гисю-гомйгичоскио бирьари",посвященного 100-летию оо

дня рождения академика Л.С.Штерн АН СССР.- М. ,1978.-С.202-200.

2. Петрович Ю.А..Майчук В.Ю.Дерехина H.A.Кислая дозоксири-бонуклеаза и ферменты обмена аминокислот в тканях и жидкостях глаза при горпетическом кератите//Тез.докл.5 Всесоюзного съезда о<]тальмологоп.-М.,1979.-С.П9-120.

3.Энзимные механизмы вирусной инфекции /вирус простого герпеса/ /Ю.А.Иотрови ■ H.A.Торехина,В.Ю.Майчук,Н.Ф.Трусова//Тоз. W Всесоюзного симпозиума по медицинской энзимологии.-Астрахань,

1979.-П.116.

4. "j-охина H.A., Гольдфельд Н.Г. Знзимотопография герпесин-цицирсмшмх роговиц,удаленных при послойной кератопластике // Современные проблемы гомосорбции л трансплантации:Материалы Ш Всероссийского нлонума по трансплантации и гемосорбции.-М.,

1980.- С.100-101.

5. Метаболизм при воспалении и нарушении ишюрвации / Т.П. Вавилова, Г.А.Корош1К,Н.В.Калиновы и др.//Тез.докл.Всесоюзной конференции,посвященной 100-лотига со дня рождения А.А.Богомольца .-Киов,I9BI.-С.70-72.

6.Петрович Ю.А.,Торехина Н.А.Латонтность вируса простого герпеса и поражения норвной системы//Советская медицина.-1981.-JF 2.-С.77-81.

7. Торехина H.A. энергетический обмен в мембранная проницаемость глаза при герпетическом порйжошш//Патохиш!л обмела веществ и механизмы ого рогуляции:Тоз.докл.Ш зональной конференция биохимиков Урала я Западной Сибири.-Тюмень,1962.-С.44.

8. Гольдфельд Н.Г..Петрович Г.А.,Торехина Н.А.^г.онты ¡юго-вицы человека,при тяжелом герпетическом .чератито//5изиология и патология механизмов адаптации органа зрения:Тоз.иа}чно-приктв-чэской конференции офтальмологов Западной,Восточной Сибири и Дальнего Востока.-Владивосток,ICK?,-C.t.' 53.

9. Антиокслдантная система гла-ла при горпетическом кератите

/ С.А.Петрович,H.A.Терохина,В.П.Аба]1ы;ин,Е.ЛЛ1идемскиП//Теэ.Всесоюзного совещания "Биошггиоксидант" АН СССР.-М.,1963.-С.135.

10. Терехина H.A..Гольдфельд Н.Г..Петрович Ю.А.Активность дегидроганаэ в лимфоцитах периферической крови человека пра поражениях вирусом простого гсрпоса//Тоз.4 Всосокзного симпозиума по медицинской энзимологии.-Алма-Ата,1903.-С.253-254.

II.Особенности изменения актипиости глюкозо-б-л'.оейвтдегидро-геназы Д'-С-О/ЦУ при разных нарушениях иннервации различных ор-

ганов / Ю.А.Петрович,В.М.Аксенова.Г.А.Боровик и др.//Пентозофо-сфатныЛ путь превращения углеводов,его механизмы и регуляция: Тез.докл.Всесоюзного сишозиума.-Иалинлн, 1984.-С. IO-II.

12.Гольдфельд Н.Г..Петрович Ю.А..Терохина H.A.Диагностическое и прогностическое значение определения активности ферментов при герпетическом кератите у человека //Гез.докл.6 Всесоюзного съе зда офтальмологов.-М.,1985.-Т.6.-С.60-62.

13.Петрович Ю.А..Торохина H.A.Влияние сАМР и сСМР на ферменты тканей глаза,инфицированных вирусом простого горпеса/УЦикли-чвские нуклеотиды и система регуляции ферментативных реакций: Тез.докл.5 Всесоюзного симпозиума.-Рязань,1£Ь5.-С.95.

14.Терехина H.A.Диэлектрическая проницаемость и антиоксидан-тныо ферменты ГериесинфщированноЛ рогосшш //Мошслеточные пространства и электрическая активность животных тканей.-Пермь, I9Ü5.-C.II5-II9.

15.Терехина H.A..Абанькин В.П.Активность глутатиошшроксида-еы и диэлектрическая структура роговицы при герпетическом кератите //Биохимическая экология.Окспериментальная и клиническая биохимия:Тез.докл.научной конференции биохимиков Урала и Западной Сибири.-Свердловск,I&U5.-С.136-139.

16.Петрович Ю.А..Гольдфельд Н.Г..Терохина Н.А.Дегидрогеназы эпителия и стромы ¡юговицы человека при тяжелом герпетичеоком кератите //Ol-тальмол. журнал.-1986.-.'* I.-С.52-55.

17.Торохина H.A..Гольдфельд Ц.Г.Кислая фосфотаза лиы;ои:тов иериферическо.1 крови и тканей глана при офтальмогерпесе //Структура и функции лизосом:Тез.3 Всесоюзного симпозиума с Мевдуна-родным участием.-М.,19Ь6.-С.199-200.

1ь.1орехнна H.A.,Гольде«льд Н.Г.Реакция специфической актива ции при офяальмогорнесе //Патологическая физиология экстремальных состояний.Патофизиологические аспекты гематологии и иммуно-логии:Тез.до1сл,12 научной конференции патофизиологов Урала.-Пермь,1966.-С.1I0-III.

19.Терехина 11,Л. .Гольдфельд Н.Г.Модифицированный способ ио-слодовашш протиьогерпетических антител н ранней диагностике офтацыоге]Я1аса//Новиб методы иммунологического исследования и актуальные вопросы иммунодиагностики ¡1 иммунопрофилактики акфо-кци й. ~По1кл,, I.0EC. -С. 46-48.

20.ИегроьпI а.А..Термина H.A..Гольдфельд Н.Г.Активность он-си,.01"'.дус1таз л:ш;оцмтоп пори.; ирическоИ к;"опи болышх гериетиче-

- 32 -

ским кератигом//Вопр.мед.химия.-I987.-Я 4.-С.59-61.

21.Петрович Ю.А..Терехина H.A..Шыагель К.В.Влияние селенита натрия но активность глутатионпероксидазы и супероксиддисмутазы в тканях глаза при герпетическом кератите//Взлл.вкспер.биол.мед. -1987.4.-С.405-407.

22.Терехина Н.А.Новые методологические подходы к изучению онэимологии герцот. ¡еского кератита//Тез.докл.конференции "Ео-тоствешше науки здравоохранению".-Пермь,1987.-С.II-I2.

23.Терехина H.A..Петрович Ю.А.,Гольд£ельд Н.Г.Прогнозирование 1; ддивов герпетического кератита с помощью определения активности дегкдрогеназ олозы//0естняк офтальмологии.-1988.-Я 6.

- С.42-45.

24.Прогнозирование рецидивов герпетического кератита с помощью определения о слазе активности ^ерлентов:/.Методические рекомендации |<0 РСФСР/.М. ,1988.-7с. /Сост.H.A.Терехина,Ю.А.Петрович, Н .Г. Гольд(]сльд, В. Г. Федотов/.

25.Петрович Ю.А..Терехина Н.А.Свободнорадикальноо окисление и антиоксвданты при инфекции глаза к лимфоцитов вирусом простого горпеса//Теэ.докл.З Всесоюзной конференции "Биоантиоксвдант? -М.,1989.-Т.2.-С.247.

26.Обмен йоддезоксиуридина в тканях полости рта и ого изменения при инфицировании вирусом простого герпеса /Ю.А.Петрович, В.Е.Скляр,Р.П.Подорожная н др.//Стоматология.-IfJ89.-»V 4.-С.8-10.

27.Терехина И.А.Коррекция антиоксидантами нарушенной проницаемости мембран при офтшп>могерпесе//Нарушен'ия механизмов регуляции и их коррекция.Тез.докл.4 Всесоюзного съезда патоЛизи-ологов.-М.,I9Ц9.-Т.2.-С.Ь57.

28.Терехина Н. А. Скислнтольно-pooctuhoi г/голыше процессы в клетке при репликации к латентности вируса пустого герпеса // Тез.докл.конг.'о^нции "Естественные наук; на службе здравоохранения". -Перкь, 1989. -С. 14.

29.Терехина Н.А.,ГлаэачеюЛ.Е. Лйхиало» 1М;.Ультр<1Структур-ннй и ультрицитохимическяй анализ повреждения рогогшм при вирусной инфекции // Ультраструктурные основы патологии органов и тканей:Материалы 4 конференции,- Тбилиои, 101'<.'•.- С.256-257.

30.Терехина II.А. .Петрович D.A..Батуеиа Р.ЛЛПюшио метода сбора слезной жидкости на ее состип // Лаборпторное ,;;оло.-1989." * 6,- С.И7-30.

31. Терехниа Н. Л., Петрович 10. А., Гольдфельд Н. Г. Активность гликозидаз слезы больных офтальмогерпесом // Офтальмологический журнал. — 1989. — № 3. — С. 184—187.

32. Петрович Ю. А., Терехина Н. А. Биохимия слезы и ее изменения при патологии // Вопросы медицинской химии. — 1990.— № 3. — С.

33. Петрович Ю. А., Терехина Н. А. Ферментная стратегия вируса простого герпеса. // Успехи современной биологии. — 1990. — № 1. — С.

34. Терехина Н. А., Петрович Ю. А., Гольдфельд Н. Г. Способ прогнозирования рецидивов герпетического кератита: А. С. 1320755 СССР МКИ 4 й 01 № 33/68.

35. Терехина Н. А., Гольдфельд Н. Г., Петрович Ю. А., Вдо-вичснко Е. Я. Способ лечения герпетического кератита: А. С. 1421337 МКИ 4 А 61 Р 9/00.

36. Терехина Н. А., Петрович Ю. А., Дворянских Т. А. Способ диагностики уремии: Положительное решение по заявке № 4375429/28-14 о выдаче А. С. от 17 марта 1939 г.

Тематический план 1990 г., № 242

Подписано к печати 14.02.90. Л-34С81. Формат СОХЭО'/ш- Ротапринтная печать. Усл. псч. л. 2,0. Уч.-изд. л. 1,98. Усл. кр.-отт. 2,25. Тираж 100 экз.

Заказ 177. Бесплатно Издательство Университета дружбы пародов 1 17923, ГСП-1, Москва, ул. Орджоникидзе. 3

Типография Издательства УДИ. 117923, ГСП-1, Москва, ул. Орджоникидзе, 3