Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Элементы генома джунгарского хомячка, родственные вирусу рака молочной железы мышей

ВАК РФ 03.00.06, Вирусология

Автореферат диссертации по теме "Элементы генома джунгарского хомячка, родственные вирусу рака молочной железы мышей"

li f, S 9 »

HOCSOBCKffit ОРДЕНА ЛЕНИНА. ОРДЕНА трудового красного сшиаи И ОРДЕНА ОКТЯБРЬСКОЙ РЕВОЛЮЦИИ ГОСУДАРСТВШШЫЯ УНИВЕРСИТЕТ ИМЕНИ н.в.ломоносовА БИОЛОГИЧЕСКИМ ФАКУЛЬТК? Кафедре вирусологии

fin прлвох рукописи УДК 678.Q29.-1.M3.2-J

ВзсощасЧ ¡¡лгшта Сергеевич

ЭЛЕМЕНТЫ ГЕНОМА ДЖУНГАРСКОГО ХОМЯЧКА, ■ РОДСТВЕННЫЕ ВИРУСУ РАКА КОЛОЧЛОЯ ЖЕЛЕЗЫ МШЕН

Специальность 03.00.03 ~ вирусология

АВТОРЕФЕРАТ ■ • диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Научный руководитель чгд.-корр. АН СССР, д.б.н.

Г.И.Абелев

Моокаа 1992

Vn6<>ra еиполнеиа e лаборатории молекулярной гонетикн КИИ Камиврсг«

ф

».язи BOHli РА««

Научный руководитель:

чл.-корр. АН СССР. я.С.н. Г.И.АОелев

Офш:иплънив оппоненты: я.б.и. Д.А.Крамеров, д.б.н. С. t). Moroco».

Ведущей учреждение:

институт сельскохозяйственной биотехнологии ВАСХНИЛ.

Ззиамта состоится в 14вч 5 октября 1Э92 г. на засолами,. сп«ииалиэир< ванного совета Д.сьз.ез.й? яри Иосяовском Государственном Уннверо тете- им. М.В.Ломоносова.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке биологического

Московского Государственного Университете им. М.В.Ломоносова.

»

Автореферат разослан 1 сентября 1992 г. Учвнып секретарь специализированного сооото.

к.х.н. В.Н.Каграмаи:

вшшкшго

актуальность проблемы. Генетические элементы - продукт» о£р«т-ч транскрипции - составляют не менее 16Х генома млекогжтал-лил . вди «их: короткие и длинные рассеянные повторы (SINE«, LIÜEo) n пив элементы обладающие выраяенньм сходством с провирусноп ДНК гровнрусоэ - эндогенными провнрусами (ЗП). Однако, проблема эиокождения и распространения ЭП и их роли п жизнедеятельности ганмэма остаются актуадьиычи и во многом иереоеннимн.

Одним из классических объектов ре тровирусо до пш является вирус ta молочной железы мызen (MMTV). И все же его происхождение, элюционныз взаимосвязи и распространение изучены недостаточно, гь фрагментарны» данные о родственных MMTV последовательностях » чомах позвоночных [Drohen. Schlo«. 1979; Callahan, 1082; Tnnnka, 54) и охарактеризовано несколько таких последовательностей в чоме человека [Callahan, 1985; Kay, Weatley, 1386; Опо et .»1987J н доковой многозубии [Yanasawa et aJ-, 1S883.

Цель и за.чачи исед«лпияния. Цель» кастоявеп работы была харак-;>иотмка структуры, Функции н эволюции представителя одного иа »ссов родственных MMTV последовательностей (KRS-Ps).

Для »того предстояло решить следующие экспериментальные задачи: Оценка распространения отдаленно родственных MMTV последовательностей о геномах широкого спектра кииотных. Разносторонний анализ особенностей одной иэ них (из генома д*ун~

горокого хомячио, HRS-Pe). клонирование if секвокироаанив представителя HRS-Pe. Анализ пооледов&тельностеП MBS-Pa.

Научила нопиаад. Открыт нооыя эндогенный ретроаирус дяунгарско-хомячка <KRS-Po). Описаны многие его характеристики (например, ¡прэссия или число копий в геноме). MRS-Ра был клонирован и тонирован, его функции и эволюция охарактеризованы на основе ииаа последовательностей.

Пзздщаосгвп значки,PCTt>. Клонированы родственные MMTV послодо-■альностн гвиома дгунгарокогр хомячка, которые могут быть исполь-■«лы в качлотве молекулярных оондов для поиока новых MRS. Опреде-та перзичнап структура MRS-Pa, обогатившая банки белковых и деинопыя пооледозатольнг тея. Получена коллекция образцja ДНК гкх видов мдойопитавккх и птиц. ,

Am-oLsm;г...г*-..ilи. Результаты исследований были продст$олв»ш i 8-м саиетско-гермлиском симпозиуме "Организация генома и рогуляш «ктионостм генов" (Иркутск, 1889) и не всесо&эноЯ контракции i гам^тихе осмотических клеток в культуре (Звенигород, 1989). Осиопм материалы рлботы изложены в 5 публикациях. .Диссертация быга úíipooi ponina на совместном заселении ksS>. вирусологии биологического ф-1 МО' ü лаборатория иммунохимии и механизмов канцерогенез* 1ШИ Кешц< рогенеэп ВОНП РАМН 31 октября 1991 г.

Cxciuuxca_1:&£а:ш. Диссертация состоит на г.эелеиин, oSsoj

литературы, результатов и обсуждения собственные МССЯО^ОВвНИЯ выводов. Работа изяовема на страницах, соло рант 10 р^сумпоо и таблицы. Список литературы включает публикаций.

маткриалы u »штош В этом разделе описаны различные методики, нслодьэосамкш p»fioT<*. Ср>?лн «их:

1. Выл*лен«« нуклеиновых кислот (фаговых, плвзкмдкшс, й toreo РНЕ

геноммкх ЛНК из различных органов ясиеогню. .

2. Фракииснлроаакпе и очистке нуклеином,« кислот (рестрикция. ед««

тро^орез и проч.).

3. Гибридизация ДНК и РНК на фильтрах.

4. Скрининг геномикх 'банков .

5. Клонирование фрагментов ЛИК.

6. Секпе-нчрорлние ДНК.

7. Анализ белковых и нуклеиновых ггаследоавтельностей.

результаты в одагцдшг;

Пащ-.-к- дадстпенлиу. ¡tíTL падА«лааатальнйС1сЛ .гвлшав„яозвошаииа.

На первом »тапе кы поптаяись определить сп«<т$. распрсстрамеии MRS в геномах мдекспнтаыянх. С »той иолы» кы поставили вгот-гибриди зацию гемомнол ЛНК млоког.нтахеих н птиц с ffifTV-»видом. О »»eren условиях гибридизации «гиоотт» моаио разделить »<& иоскояьно групп п числу и интенсивности КМТ7-сп*ш«$ичмь« полос.. Млекопитающие: даун гарскип хомячок, бурундук и северна« »едзовка - много полос Сояьоо интенсивности; сирийский хомячок, кр»еа, »вилеройкв и аятлясвий «ро - средняя интенсивность и число полос; баран, ласка и двенья пилеек

ало слабогибридизугоихс* полоо: морская свинка, коикч vi собака -■ KMTV-специфичиьа полос. Ппшы: недровка. кукушка и дрозд -дняя интенсивность II число полос; сорокопут, мухоловка, курица к ■харь - надо слабогибридиэуюшихся полос: пеночка - единствонная оса; снегирь, свиристель и рябчик - нет MMTV-спеннфичт« полос.

Чтовы оценить степень родства с MMTV, ми поменяли условия риднзации и отмывхи. Все полосы, соответствующие MRS, исчезают ; вботкоп отмывке; при промежуточных по жесткости отмывках MKS в омах дяуигарского хомячка или мухоловки выявляются.■ а в гиномпх ich или сорокопута - нет. Скорее всего это сояэпно с разным онвм гомологии с MMTV-зондом.

Далее мы убедились о специфичности MHTV-эондв. Поскольку гоны артаэ гомологичны друг другу, нал зонд мог выявлять родственные элементы лиаь в области »того гена. Для этого мы гибрилизовали омкув ДНК с зондами, месувими LTR MMTV и RSV (вирус саркомы са, рвтровируо другого типа). Выяснилось, что ММТУ-специФнчные осы не выявляются RSV-асидом, на большая их часть выявляется L.TR V. Таким образом, MRS родственны именно MMTV.

Поокольяу MRS родственны MMTV, полно было предположить, что они геноме тоже является провирусами. В таком случав они могли быть огвнмыни или эндогенными. Чтобы выяснить это, мм провели блот-ридмэаци» геномной ДНК из разных органов разных особеп (джунгар-Я хомячок) с KMTV-зокдом. Все пробы содержали одинаковые MMTV-иифичкыа фрагменты. Это, если и не строгое доказательство, то кэ сарьвоноэ указание на эндогенную природу MRS генома джунгар-го хомячка.

киропаниа-и..йналиа HR5 гинома лкунгноокпго »рмпчдя.

Далее мы решили детально охарактеризовать один из родственных I элементов- и выбрали для этого MRS из генома джунгарского гсчка (KRS-Pa - от Phodopua випдогив), поскольку он обладает зкительно высокой гомологией о MMTV и, по-видимому, представлен аПКМ числом копил в геноме.

С jto« целью MRS-Pa были проклонированы из библиотеки генов ?областов даунгарского хомячка. Мы провели скрининг библиотеки f-эондом н получили 11 клоноа, содержащих MRS-Pe. Нужно 5чло oi V гь ' несколько клонов ддя , более деталь.юго анализа. Для этого мы

попытались пыясиить, насколько отличаются полученные клони друг Лругст И к га KV!M ОБЛАСТЯМ MMTV ОНИ ГОМОЛОГИЧНЫ.

Набор гч!стриктиых фрагментов и блот-гибридияация с MMTV-эон,! прэд^мемст!пропали независимость 10 И9 И выделенные клонов. А гибридизация с: различными районами MMTV позволила сделать следуос выводы: 1} рое клоны ИЯЗ-Ра гомологичны pol району MMTV; 2) ярялиеп мер* т.-.« клопа гомологичны LTR MHTV и один нэ нкя содера дна таких рлпонч; 2} по крайней мере два клона гомологичны 0 району КМ ГУ; 4) виделенние MRS-Pe более гомологичны pol* чем проч рапон&м MKTV. В ¡х-чультлтв ми выбрали два клона (ХЗ и Х14А), гомол гичньве наибольшему числу районов KMTV, причем клон Х14А содериал д района гомологии с LTR KMTV.

На следуемом этапе мы определили число копня MRS-Pe в геном Вяла поставлена бло- гибридизация геномной ДНК джунг&рсксго хомдч и серии рчзиедвнип фрагмента ДНК, присутствовавшего почти во вс клонированных MRS-Fo с fCiTV-эондом. Сравнивал интенсиокость подо можно заключить, что представленность HRS-Pe соответствует 80 копи на гамак. Этому выводу соответствует • и числ^ сигналов

авторвдиогрпммв первичного скрининге геномной библиотеки.

Два- иыбраммьос нами клоиа были суСклокнроолны и сбхвеимрооамы. результате была определена полная последовательность 1Ш>-Ро вдо ХНА (6Э90 Ър) и три «-рогмвнта НТШ-Ре клоиа ХЗ (;092, Э61 и 523 Ьр Как мы и ожидали» «ЯЯ-Ря окаэа/ся очень поиска на проротроекрус имел структуру Х/ГК-{гены)-ЬТВ. Низд будут россмотрэки особенное .структуры МЯ5-Ра.

Длинны» яонцрагл? повгоры. В маазм распордаеиии . последовотольности трох ЬТй рис. I). На нх вйииа* ивходит!

типично ретрсиирусныл кероткия (а лаямоя елуча«, ?»иукдвэтидмы: ТС-СА »мавртнровайныя певтор. Как и у всея рат^ювирусоо, 1/ГК несет сигналы, контролирую»«® начало и окончание тронск^пши ТАТА-боке н сигнал полиаленнлировлмия. Корсрь» последовательное связывания с глюкокертнкоидньм геркон-рецвг,торию« комплексом (КЯЕ) с ядерным фактором I (НИ) так*« могут принимать участие в рагуляш экспрессии ИКЗ-Рв.

АГУЖГГТСС«ЛТУ!Л.Ш attgccatgaataataatgatagac

'4

' >4X'ACJ\il А

. ... ХГЛТК saaoijcata

............ЖГКШЯт'ШЛ^А»^^

ТГА!ПСЛАСИТАТГПА®ХЛХЯМ(ХЖ>1СТЛ<Л7^^

____________________лссмтс^ШКШ^АШЗМШШ

+ +

++

АОАТОГСЛШааЗСХХЛиГГАААТС^^

+ + 4- + + + +

ÄAATCAACACTATr ИМТАйй'ГТ

^ШШвЖЖМвШ&мш_______________

АСХХтХ&СЛАСАААСАталгаШйШХ»(^^

IH'HItW ++++++ + + +

* +■ ++ + + ++++ + +

1ААА0ЕЛ0(ЛТСХЛ^АА-'ГАТССАСТГССГйЛНА-

А.\стпу1ЛА0саААГпгпм--слтсгет ++ +

Älv PBS

40. X. Выравненные- последовательности I»TR MKS-Pa. Сверху вниз: З'-LTR (Х14А), 5--LTR (Х14А) и 5"-LTR (ХЗ). Последовательности > LTR выделены агирным шрифтом, а последовательности, Фланкирующие > MRS-Pa, показаны маленькими буквами. Значки +• и # означают одно и два несовпадения, соответственно. Концевой инвертированный повтор подчеркнут; DR - прямой повтор; R - район гомологичный R-области LTR. MMTVs TATA - ТАТА-бокс; An - сигнал полнаде-нилированип; HRS и HFI - норовые последовательности саг ов связывании с глюкокс тикоидным гормон-рецептг^иым коь.ллексом и о ядерным фактором I. Кроме того, курсивом ьыделены последовательности вне WR: полипуриновыя тракт (poly-Pu) Ч сайт связывания ватравки (РВЗ).

Гк-е три последовательности LTR MRS-Pe довольно сильно, раэли ьтея: 15.4 , 14.2 и. 1С». 9Х несовпадения у LTR Х14Л, 8'-! ХД4А/3'-LTK ХЭ и 3 -LTR Х14А/3"-LTR ХЗ, соответственно. Иа рис можно видеть довольно большие {до 16 основания) вотавки и делец» присущие лиэь. одному иэ LTR.

LTR MMTV и MRS-Po оказались гомологичны (66Х) лиаь на дооол коротком (1С0 Ър) учлстке вблизи их 3*-концов и вялючажхаем в с« R-обласгь I/TK MMTV.

Тело В KRS-Po били обнаружены другие. типично ретро«

русиые. структурL Это полипуриновыЯ тракт, прсдпсстоуишя З'-LTR, расположенная после ü'-LTR клона ХЗ несовершенный (G3X) сайт свяэ еяння t f'iJA.it-»'» затравки (PBS). Как » i и ожидали, последовательное HRS-Pe и MMTV оказались похожи. На рис. 2 представлена карте яокал ного сходства иукл'м-новых последовательностей HRS-Pe (клон ХНА) ММТV. Видна явная непр-ерывиая (-5,3 kb) гомология HRS-Pe с MMTV районе генов pro, ра2 и onv MMTV. Никаких гомология с геном е обнаружено не было.

Можно било ожидать, что KRS-Рв кодируют -оотовтетоугоив бед* Однако осе рмлены предполагаемых генов оказались испсрчениьдеи ииог численными стоп-кодонами, И все же при сравнении лоследоватжА» мост белков MMTV с тремя валковыми последовательностями MRS-Po, получи ными в результате трансляции о хапдэЛ и» трех рамок ечнткэвн независимо от стоп-колонов, выяснилось, чти рляон гомологии белками MMTV, фактически не прерываясь и ив первкрьгоаясь, прмгает i трем рамкам считывания (рис. 3).

Видимо. кодировавшие белки последовательности были испорчв! мутаииями сдвига ранки. Это подтверждаете» тем, что искусственна "идеальная", последовательность тела HRS-Pe, создание« путей »«юд< ни* точечных вставок и дел»чип таким образом, чтобы »лихиннроаа »ти мутации, прахтичоски лигеиа стоп-*одонов в одной иа рамок д. каждого иэ предполагаемых Селкра.

Филогенетические связи HKS-Pa. Мы попытались оиенить аволюиио ныв связи MRS-Pe посредством гоискв гомологип по банку иукденпош последовательностей. Никаких гомология ив было налгано для LT8 районов pro и «ли MRS-Pe, креме уже описанных rc-нологнД с КМТ< Район ро2, напротив, оказался гомологичен с гелгк-тгт румыну ге> множества ретровирусоя: MMTV, HHRV-K, HIV-?, i.4V-1, KPMV. SMKV,

LTR

aso

pro

pol

Cftv

LTR

CS

мс. 2. Sapra лояояьмого сходств« гккмедоаатодьиоств« HWTV и HRS-Pe (XI-íA).

CAEV. IAJP С-в8Ю.

Для боле« корректной otiCHSH вэодеиим генов им реаилм оттрвмс-ирооатк созданным явим " идеал kKtn" (см. ) гоны н подучить

адмоси* последовательности pro. pol м envKRS-Pa. Кая мы и слидллм. а С«л>"'оом урсаме Соде« чотккв задокомармости проявились у*« при DWCKO по банку. Белок pro окаэплс« гомологичен нескольким р«троои-усньм прот«азеи: W1TV, JAP. SR7-1. WWW. H2BV-K. Белое pol оказался размой степени в/что« практически всем и эметин»« р*тровчруснмм

. MRS—Pu 14A

i-)---г—1

H «м

th-m {чмсм —«

ДОМ «4*.

од С» CS? «w СВГ IV «fif

MMTV

Рио. 3. Сравнение аминокислотных последовательностей. MRS-p& {Х1& н Mffrv. Под изображение*« MRS-Ре схематически представлены о; белковые последовательности в трек райках считывания. Еиркы линиями выделены районы' гомологии о белками HiiTV, котор« внизу представлены ORF KMTV ,

ptfj-полипротеннсм (KHTV - Q2X, НЛП/ и SRV-1 - 45Я, KEEV-K - 435 IAP - 40%, прочна - 33-35%). Бел о к env MilS-Po оказался гомологмч* esb env К ГУ (45%).

Затем для болвов pro и домонов »еве'ртаэы и ннтеграэы pol HRS-! и других ретроиирусов Ctww построена ®оо*юийониыз деревья, првдота! ленные на рио. 4. Для нкк есех сохраняется одинакова порялс родотва: KKTV, SRV-1 и HPHV, HERV-K. За нини следуют IAP, ESV » SA] о FIV. Таким, образом, MMXV действительно является ближ&Явим ро; стввнчикси KRS-Рв.

КоплалпваниА_авсммссии MRS.-Pfl. Хотя иавоотииэ нем последовательно;

ти MRS-Pe ке кодирует протяяенкдо белков, можно Вшо к&деягьоя s существование активнья копня MRS-Po. Однако ном кв удалооь обиорз »ить MKS-Рв-опецифичнш: РНК во Фракции тотальной РНК иа различи: органов дхсуигарского хомячка, Это говорит об отсутствии ективкс вкопреоски KRS-Po, хотя примененная метод Могthorn блот-гибридизаш недостаточно чувствителен для выявлю ля незначительных . воличоот

—-HW-J

— JttTV

— tSS-Рв P taw I-, SSV-J

4

SÎAV

w

H'tAP wtsv-s tttrv nss-Гв ssv-i

£SV

w

_ (MAP

- HEW-К

— ÏÎ1T7

— KRS-14A

— HSS-ГЗ

— Stt-1 ï

— KV

не- 4. Эаолюииснкма д«рев»а балков pro (J>PO) м доквио» реоертаэм (RT) и интвгразм ( IK) pel «»которых p»rpoet»p/ron.

Il

иРНК ео фракции тотальной РНК.

чгиш!. Все *ти данные скдадывмотся в следупаую к apt им/, какся-тс/ момент на еволвциониом древе ретроеируооо появилась нова sntoh - разделились пути даух ретровирусов, MMYV и НКБ-Ро. Он сказались у разных хозяев (что обусловило различия в бвлкок системах регуляции »кспрессии) и у MMTV появился новый белок D LTÍ fio »сея видимости, ретроаирусы, Слизкие MMTV, приспособились весьма широкому спектру хозяев, вклвчакхаему даже птиц.

В дальнейшем MRS-Po в силу неизвестны» причин перестал «уикцио нировать (производить вирионы, »кслрессировать белки и РНК и- ннтег риросаться в геном хозяина). Впрочем, нави результаты не исключав возможности существования активных MRS-Pe, просто н&ои подходы н позволили ик выявить (скажем, они активны лияь о каком-то редко типе клеток и/или на определенных стадиях онтогркеаа).

Так или иначе, андогеннью провирусы MRS-Pe деградировали Исследованный нами влеиеит клона Х14А утратил г;он в&й (скорее всего уае в виде провируса) и, как и я случае клона ХЗ, постепенно теря способность функционировать. Какое-то враыл тому назад они утратил всякуг» активность и, выпав из-пол давления отбора, отели лоотеленк удаляться от предкоаой последовательности.

1. Показано присутствие отдаленно родственных MMTV последовательное

топ (MRS) в геномах сирокого спектра 'киеотных. Чиодо копий i степень гомологии о KHTV различаются у MRS разный видов.

2. MRS джунгарского хомячке (MRS-Po) квдютсл емдогенкьми еяемзнте.

ми, о разной степени родственными районом KMTV, и представлен! Í копиями на геном.

3. Десять независимых клопов, нвсуких MES-Po, были выделзии и<

библиотеки генов джунгарского хомячка. ДНК-послвдоватеяьност: были определены для одного из них полноотью, а для другого частично.

4. Последовательность MRS-Po имеет р: гровирусмуо структуру LTR-гекы-

LTR, его LTR несут обычные регудяторные ©асхонты, a rewos кодирует обычные ретровирускыа белки.

HRS-Pa дауа иэучФнгаа злокоо прэлстаадяют ооЗоа неакшвнмо г«нкмэ премируем, нспорчонгшэ многочисдонмм«« мутациями. • Гнлн смяплфны вводоциоиик» еалимосвпзм NRS-Po о другими р«тропи-

уусамн на основ« анализе их лоололоватвдькостеп. lía было обнаружено 'Ш1-Рэ-споцисм«<кыя НРНЙ о осгам&я

.»уигарского домячпа.

«жа seSJo», ©ятвгмзвпеикнз г» тема диовертеге«*: Colovhlna T.V., Tlkhonsnbo А.Т.. Veaeetakjr Я.в., VbtfioX В. 1., OudJtov A.V. Dletrlbution <э? поив» авяэдгу tustor vlru»»-relatad Ов<зиопс0э «loeв not corroíate with the taxor»o*ilo poolllon ot t".'.4ir hoate. Virus Ghnao, 19S0, vol.4, 31, pp. 85-02.

З.ГодоайИна, Д.Т.Тнкононно. M.C.Влсециия. Й.Н.Поотоль, Л.З.Г5тд*оз, Последовательности, гомодогнчюгэ вирусу раке иолоч-святы (■ftssufJ, гз»роао лрэдставлекы 9 retío««« мл в к о питвгеаш íi ятии. !1олвауляриая Зиодогид. 1990, т.24, 0Х, о. 127-133. Tthhonanio А.Т., VeoootJthy Ü.3.. GolovMni» Т.7.. aujlsov А.У.

ríoloculer Clonln.i ejid Prlnsry St ruó tu го Алз1уа1а of the Исчел ttessary Tvrror Vlruo-Rolated Slcwssnt frca Dwarf Hasta ta г Gano«*». Vtrva Oenso, 100Э, v.3, 83, pí>.2G7- 229. Н.С.Сзсеи*.«, Л.Т.лкзоиевво, ?.З.Го«оая»м»а. А.П.Гудков.

üaoH;ipocan:4í> tt «ИЙЛИЭ яврсмчион структуры родстмп-

кого еирусу рлаа модонися. кадвва и» renosta «вунгарсяого

ксмячка. Цодояулериея генетика, и«ровнодогид м гярусологмя:

íess?. sio. o.ie-19.

A.T.Tlfcbirvanko, A.Folotebaya, íJ.O.tfeeeetafey. .T.V.Oolovbtna, ñ.V.OudSov. Vane Terninal fSapeeta of tfcwrff tte»ta'r 2n<Joceneue rtitr«vlruo ¿Ir« Mlehly Dlvor.-xa^ and Do Kot Kalntal» Bffialent tr«necrlptlon. Vlraiogy. 1СЭ1. v.101, p?.337-3TQ.

Похксаао з ~<т?ь Л,ЗЭ.£2. Заюэ 34ó L'ccicaa. Таззгуо5ля ?l?LI