Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Экспрессия белков теплового шока пшеницы и их роль в адаптации растений к действию высоких температур

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Экспрессия белков теплового шока пшеницы и их роль в адаптации растений к действию высоких температур"



СИБИРСКОЕ ОТДЕЛЕНИЕ АКАДЕМИИ НАУК СССР ИНСТИТУТ ШО ОРГАНИЧЕСКОЙ ХИМИИ

На правах рукописи

ДИАНОВА Ирина Иосифовна

УДК 577.218:577.216.4

ЭКСПРЕССИЯ БЕЛКОВ ТЕПЛОВОГО ШОКА ПШЕНИЦЫ И ИХ РОЛЬ В АДАПТАЦИИ РАСТЕНИЙ К ДЕЙСТВИЮ ВЫСОКИХ ТЕМПЕРАТУР

03.00.04 - биохимия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Новосибирск 1988

Ра<$ота выполнена в Институте цитологии и генетики СО АН СССР

г. Новосибирск

Научный руководитель - член-корреспондент АН СССР, доктор

биологических наук Р.И.Салганик

Официальные оппоненты: доктор биологических наук В.К.Войников

Сибирский институт физиологии и биохимии растений, г. Иркутск

доктор биологических наук Н.П.Мертвецов Новосибирский институт биоорганической химии

Ведущая организация: Институт молекулярной биологии АН СССР

Защита состоится "Ц " ЬЛу^С/-^-- 1988 г. в часов на заседании Специализированного совета К 003.52.01 в Новосибирском институте биоорганической химии СО АН СССР по адресу: 630090 Новосибирск 90, просп.ак.Лаврентьева, 8.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Новосибирского института биоорганической химии

Автореферат разослан "¿6" Lt.Cc-У' 1968 г.

Ученый секретарь Специализированного совета кандидат химических наук

О.С.Федорова

Ж-'i'" '

; Г " л ' <

-,-дея «Актуальность nPoCtaevn. Среда клеточных механизмов, odecne-^ртащкфщдс адаптацию sebhx организмов к экстремальным факторам внешней среды, особое место занимает защитная система, известная как "ответ на тепловой шок", обеспечивающая синтез группы специальных белков в ответ на резкое повышение температуры внешней средн.

С:ятез белков теплового шока (БТШ) происходит у всех исследованных про- и эукарзот - от бактерии до человека - в ответ не только на повышение внешней температуры за пределы, характерные для обычных условий обитания, но и на многие иные экстремальные факторы, такие как оксидативннй стресс, осмотический стресс, раневой шок и др. ( Schlesinger et.al.,1982 ).

Большинство работ, посвященных организации генов БТШ в геноме и регуляции их экспрессии, выполнено на бактериях, дрожжах, дрозофиле, культуре клеток животных ( Lindquist,l986 ). Значительно менее исследованы в этом отношении растения (к1ир1е, Key,1985 ).

Учитывая почти полное отсутствие биохимических характе -ристик клеточного ответа пшеницы на действие высоких температур, и принимая во внимание важное значение этой культуры в жизни человека, представлялось целесообразным изучить экспрессию генов теплового шока пшеницы в ответ на действие высоких температур.

Даль работы. Целью настоящей работы являлось изучение особенностей экспрессии генов, кодирующих БТШ пшеницы, их роли как в адаптации к действию высокой температуры, так и в процессе восстановления растений после температурного шока.

Научная новизна работы. В результате проведенного исследования получены следующие основные результаты:

Описаны БИЛ пшеницы и впервые на уровне транскрипции и трансляции определены временные характеристики экспрессии под действием высокой температуры генов, кодирущих эти белки.

Впервые исследованы режимы адаптации проростков пшеницы к действию высокой температуры и сформулированы критерии выбора таких режимов, основанные на изучении синтеза БТШ.

Получены данные об экспрессии генов БШ в процессе восстановления адаптированных растений после действия высокой

температуры, позволяющие высказать предположение о том, что БШ выполняют не только защитную роль, но и участвуют в восстановлении клеточных структур, поврежденных действием высокой температуры. Впервые на проростках пшеницы показано, что в клетках растений под действием высоких темперазур, наряду с экспрессией генов БШ, происходит экспрессия генов, кодирующих уби-квитин, подобно тому, как это имеет место в клетках животных.

Практическая ценность работы. В настоящей работе получены Данные о температурных и временных реаимах индукции белков теплового шока и сформулированы молекулярно-биохимические критерии адаптации проростков пшеницы к действию высоких температур. Эти данные могут быть использованы в работах по "закаливанию" растений, а также в исследованиях по селекции растений, устойчивых к различным формам стресса.

Публикации и апробация работы. По материалам диссертации опубликовано 4 печатных работы. Результаты работы обсуздались на рабочем совещании "Стрессовые балки растений", Иркутск, IS87 и на рабочем совещании "Белки теплового шока", Ленинград, 1987.

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, 4 глав, выводов и списка цитированной литературы из 243 наименований.

Диссертационная работа изложена на 132 страницах и включает 20 рисунков и 3 таблицы.

ЭКСШЕРИМШГГАЛЪНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Балки теплового шока пшеницы. Известно, что индукция генов теплового шока происходит при повышении средних для данного организма температурных условий на 8-I0°C ( Lind<juiet,1986 ). Ш ясслвдовалп валяние высоких температур на синтез белков в проростках пшеницы, принимая за средние температурные условия, необходимые для роста пшеницы, температуру 23-25°С. Кусочки проростков пшеницы подвергали действию индуцирующих БТШ высоких температур в течение часа; затем эти образцы переносили в термостат с температурой 23-25°С, метили s -метионином,

выделяли и анализировали балки.

Повышение температуры приводит к заметному уменьшению общего синтеза белков, регистрируемому по включению ^э-метио -нтаа в кислотонерастворимуш фракцию. Типичная кривая изменения интенсивности биосинтеза белков цри повышении температуры приведена на рис. I.

•35

Рис. I. Включение э-метионина в кисяотонерастворимую фракцию при изменении температуры. По оси ординат - включение Б-метионина на мг белка

Фракционный состав белков анализировали электрофорезом в полиакриламидном геле.

При 23°С синтезируется большое количество разнообразных белков (Рис. 2, дорожка I).

Картина резко меняется после теплового шока. Под действием теплового шока (35°С - I час) происходит снижение интенсивности синтеза большого количества белков, сопровождающееся исчезновением на алектрофореграмме ряда белковых фракций; при этом щюисходит интенсивный синтез ограниченного количества белков (Рис. 2, дорожка 2).

1 2

Рис. 2. Белки теплового шока шенвды

Авторадиография электрофореза белков в полиакриламидном геле.

1 - включение 35 Б -штионина при 23°С

2 - включение 35Б -ыетионина при 23°С после теплового шока при 35°С.

На дорожки нанесено одинаковое количество радиоактивного материала. Справа приведены молекулярные кассы маркерных белков (кило-даль тоны)

Г?

Щ щ. "94

&J 1 -67

I -60

и -43

£4 -зо

О-'-

ЙСЗ-20 U—UA

Как н у большинства изученных растении, БТШ гсенпш представлены значительным количество;.! фракций, которые цогно разбить на четыре основные груша:

1. Небольсая группа васокомодекуллрных белков (80-110 ЗД)

2. Группа белков с молекулярными массами 70-74 КД

3. Больсая группа балков с молекулярными массаш 30-60 дД

4. Ннзкомолекулярные белки (15-20 ВД)

Наиболее интенсивно осуществляется синтез высокомолекулярных БТШ, группы белков 70-74 КД и низкомолекулярных БТЕ с моле-кулярныш массами около 20 КД.

Роль БТШ пшеницы в адаптации к действии высоких температур. Принимая во внимание современные представления о роли Б!Ш в формировании термотолерантности, представлялось целесообразным прежде всего определить оптимальные температуры индукции БТШ. На рис. ЗА представлена электрофореграмма 35s -меченых белков проростков пшеницы, синтез которых был индуцирован при действии различных температур. Как видно из этого рисунка, индукция

БТШ наблюдается уже при переходе от 23°С к 30°С, однако максимальный уровень их синтеза достигается при 35-40°С. Следует от-

п

метить, что если при 35 С э -метионин активно включается не только в БТШ, но и в другие клеточные белки, то при 40°С, по-видимому, синтезируются исключительно БТШ, а синтез иных белков подавляется. При температуре 45°С подавляется синтез всех белков, включая БТШ. В дальнейшем эту температуру мы будем называть критической.

Рис. 3. Авторадиография электрофореза э-меченых белков теплового шока.

А - влияние температуры прогрева проростков на спектр синтезируемых белков: I - синтез при 23°С; 2 - после прогрева-ва при 30°С; 3 - 35°С; 4 - 40°С.

Б - синтез белков теплового шока после прогрева цри 45°С с предварительной часовой адаптацией при различных температурах: I - адаптация при 30°С; 2 - 35°С; 3 - 40°С; 4 - прогрев при 45°С без адаптации. Справа приведены молекулярные массы стандартных белков.

Таким образом, если принять за нормальные условия роста проростков пшеницы температуру 23-25°С, температуры 35 и 40°С ыохно использовать дня индукции синтеза Б1Ш.

Наин установлено, что температурный резким теплового шока в диапазоне 35-40°С является оптимальным для индукции БТШ пшеницы. Однако не известно, какой релям адаптации является наиболее эффективным для защиты клеток от действия критических температур.

Для того, чтобы ответить на этот вопрос, необходимо иметь критерий эффективности адаптации. Таким критерием может быть способность проростков осуществлять биосинтез белков после действия критической температуры. При этом можно рассматривать как уровень биосинтеза, так и фракционный состав синтезируемых белков.

На рис. ЗБ приведена авторадиография алектрофореграшы белков теплового шока, синтезирующихся после прогрева растений при 45°С с предварительной часовой адаптацией при разных температурах. Из данных, представленных на этом рисунке, следует, что если в качестве критерия адаптации использовать способность проростков осуществлять после действия критической температуры синтез балков, то температура 35°С является, очевидно, оптимальной для адаптации проростков пшеницы к действию критических температур. Растения, адаптированные в этих условиях, даже после действия температуры 45°С сохраняют способность активно синтезировать клеточные белки, максимально соответствующие по фракционному составу тем, которые синтезируются проростками пшеницы при умеренном тепловом шоке (ср. рис. ЗА и ЗБ). К такому же выводу можно прийти, сравнивая в аналогичном эксперименте эффективность включения 35 з -метионина в кислотонерастворимую фракцию. Типичная диаграмма приведена на рис. 4.

8

30й % те

Рис. 4. Влияние температуры адаптации на синтез белков после температурного шока при 45°С. По оси ординат - включение (имп/мин на мг балка) ^з - метионина в кислотонерастворимую фракцию

Временной режим адаптации. Нами был исследован временной режим адаптации проростков к действию критических температур. Для этого адаптации проростков проводили в течение 5, 15, 30 и 60 минут, затем их инкубировали I час при 45°С и после этого в течение I часа инкубировали с -метионином при температуре 23°С. Меченые белки выделяли и анализировали электрофорезом.

Как показал анализ злектрофореграмм, в проростках, адаптированных 5 или 15 минут при 35°С не происходит сколько-нибудь заметного синтеза белков при 45°С. Незначительный синтез наблюдается в этих условиях после 30 минут адаптации и только часовая адаптация является достаточной для того, чтобы обеспечить растениям способность синтезировать в заметных количествах белки теплового шока при температуре 45°С.

Влияние адаптации на развитие проростков пшеницы. Для выяснения взаимосвязи между синтезом БТШ и физиологическими характеристиками растений мы исследовали способность к развитию проростков пшеницы, подвергнутых действию критической температуры после адаптации и без такой обработки.

Адаптацию проростков проводили I час при 35°С, после этого инкубировали 2 часа при 45°С и затем выращивали их при температуре 23°С. Измерение дайны проростков проводили до шока и через 24 часа. Через сутки процедуру повторяли в той же последовательности. Результаты этих опытов представлены в таблще.

Таблица

Влияние адаптации на ростовые показатели проростков пшеницы, подвергнутых действию температуры 45°С

Условия теплового шока Прирост (мм) за Количество проростков

24 часа 48 часов в %, прирост которых за 48 час. составляет

_10мм 10-20мм 20 мм

Без шока, 23°С 23,4+5,7 0 28,3 71,7

45°С (2 часа) 7,6+3,2 12,3+2,5 25,2 74,8 0

35°С (I час), а затем

45°С (2 часа) 11,0+3,3 17,0+3,3 9,5 55,9 34,5

Превде всего, следует отметить, что адаптированные и неадаптированные проростки, подвергнутые действию критической температуры, отстают в росте от контрольных растений, что особенно заметно после повторного воздействия. Однако при этом неадаптированные проростки значительно отстают в росте от адаптированных растений.

Как показано в приведенных выше экспериментах, адаптированные проростки сохраняют способность к синтезу БТШ в условиях 1фитической температуры. Следовательно, результаты этих экспериментов позволяют говорить о том, что адаптация к действию высоких температур обеспечивает не только способность к. синтезу БТШ, но и лучшую способность к росту в условиях критических температур.

Влияние адаптации на восстановление синтеза белков после действия высокой температуры. Повреждающее влияние температуры окружающей среды на организмы определяется двумя факторами: величиной температуры и продолжительностью ее действия.

В случае часового воздействия на проростки пшеницы, максимальной температуройпосле воздействия которой в проростках осуществляется синтез БТШ, является температура 40-42°С.

Инкубация проростков при 45°С подавляет синтез всех клеточных белков (рис. ЗБ, дорожка 4). Восстановление синтеза белков не происходит в этом случае даже через 5 часов после того, как кусочки проростков, подвергнутых часовой инкубации цри 45°С были перенесены в условия температуры 23°С (рис. 4, дорожка 3).

В контрольных экспериментах, в которых проверялась жизнеспособность кусочков проростков, биосинтез белков при 23°С наблюдали через 3 и через б часов после их отделения от растений (рис. 5, дорокки I и 2).

3

=3 еэСЭОо

а

О

о

Рис. 5

Рис. 6

Рис. 5. Синтез белков при 23 С в кусочках проростков через 3 и 6 часов после отделения их от растения (дорожки I и 2 соответственно). На 3 дорожку нанесены белки, меченые через 5 часов инкубации проростков при 23°С после действия температуры 45°С.

Рис. 6. Восстановление синтеза белков в адаптированных проростках после прогрева при 45°С. Дорожки 1-5 включение 35 э-метионина проводили I час при 23°с через 1,2,3,4 и 5 часов инкубации при 23°С после часового прогрева при 45°С. Дорожка 6-синтез балков при 35°с ^

Результаты этих опытов свидетельствуют о том, что в неадаптированных проростках синтез белков,нарушенный высокой температурой, не восстанавливается.

Как мы уже отмечали, у адаптированных проростков способность к синтезу белков сохраняется и после шока при 45°С (рис. ЗБ, дорожки 1-3). Более того, оказалось, что дальнейшая инкубация таких проростков уже при 23°С приводит к значительному усилению синтеза БГШ (рис. 6). Это явление представляет, очевидно, существенный интерес.

Казалось бы, что адаптированные растения, пережив тепловой шок при 45°С, должны через 2-3 часа переходить к синтезу обычных клеточных белков, как это происходит в том случае; если температура шока не превышала 40°С. Однако, как показали наши наблюдения, у этих растений синтез БТШ происходит в течение 4 часов с возрастающей интенсивностью. Только через 5 часов количество БТШ уменьшается и начинают синтезироваться другие клеточные белки (рис. 6).

Представляло интерес выяснить, с чем связан столь длительный синтез БИЛ после инкубации адаптированных проростков при 45°С.

Появление БТШ в процессе восстановления растений, подвергнутых действию критической температуры можно объяснить, по крайней мере, двумя причинами:

1. Происходит восстановление белок-синтезирующего аппарата, и мРНК, накопленные в процессе адаптации, начинают транслироваться.

2. В процессе восстановления происходит индукция транскрипции генов БИЛ и появление новых мЕНК.

Для того, чтобы цроверить, какое из этих цредооложений справедливо, необходимо изучить динамику изменения количества мРНК, транс1фиб1фОванных с генов теплового шока в процессе адаптации и восстановления.

При отсутствии клонированных генов теплового шока пшеницы, для проведения такого исследования можно использовать клонированные гены БТШ других организмов. Наиболее подходящим для этого является БТПГ70, самый консервативный из исследованных генов БТШ. Однако необходимо было убедиться в том, что ген БТШ70 дрозофилы в значительной степени гомологичен БТИГ70 пшеницы.

С этой целью мы использовали для гибридизации с ДНК пшеницы 32Р-меченую ДИК БаЮ 1-фрагмента плазмиды 132ЕЭ, содержащую последовательность гена БТШ70 дрозофилы. Специфичность гибридизации оценивали по уровню гибридизации с ДНК бактериофага Т7, которая не содержит последовательностей, комплементарных БТШ70. Результаты дот-гибридизации, представленные на рис. 5, свидетельствуют о том, что в геноме пшеницы содержатся нуклеотидные последовательности, гомологичные гену Б1Ш70 дрозофилы.

О О О О

1 2 3 и

Рис. 7. Дот-гибридизация ДНК пшеницы с ДНК гена БТШ70 дрозофилы.

На нитроцаялшозный фильтр наносили 10 мпс ДНК дрозофилы (I), 5 или 10 мкг ДНК пшеницы (2 и 3 соответственно), 10 мкг ДНК фага Т7 (4) и гиб-ридизовали при 55°С.

Для более детального анализа последовательностей генома пшеницы, гомологичных гену Б1Ш0 дрозофилы, проводили блот-гибрвдизацию ДНК пшеницы, гидродизованной эндонуклеазой рестрикции ЗаЮ1 с ^Р-меченым ЗаЮ1-фрашентом ДНК шгазми-ды 132ЕЗ.

Оказалось, что расположение сайтов гидролиза для эвдону-клеазы За1С1 в генах БШ70 пшеницы и дрозофилы не отличается.

Полученные данные позволяют говорить о том, что ген, кодирующий БТИГ70 пшеницы, гомологичен гену БЖ70 дрозофилы и иных, ранее исследованных организмов. Гомология нуклеотидаой последовательности этих генов позволяет использовать ДКК шга-змиды 132ЕЭ для анализа динамики изменения количества мРНК БЛ1Г70.

Анализ динамки изменения, количества мРНК ВТД70 в процессе адаптации и восстановления. Известно, что у растений мРНК, транскрибщюванные с генов теплового шока, нестабильны и разрушаются в течение 1-2 часов после прекращения действия высокой температуры (К1тр1е,Кеу,1985 ). Представлялось вероятным, что индукция синтеза БТИ в процессе восстановления проростков после действия критической температуры связана с тем, что в проростках длительное время сохраняется некий фактор, стимулирующий транскрипцию генов теплового шока и соответственно синтез БИЯ.

Для того, чтобы проверить это предположение, мы определили наличие мРНК, транскрибированной с гена БТШ70, в проростках в разных условиях экспериментов.

Для этого из проростков получали препараты суммарной мРПК и затем из них выделяли поли(А)+РНК, которую иммобилизовали на нитроцеллкшозных фильтрах и гибридизовали с ^2Р-меченой ДНК плазмиды 1Э2ЕЗ.

1 2 3 Л 5 6

Рис. 8. Гибридизация поли(А)+РНК с ДНК плазмиды 132ЕЭ.

Как показали результаты гибрвдизации, препараты, полученные из интактных проростков практически не содержат поли(А)"ьРНК кодирующих БТШ70 (рис. 8-1). Такая полиШ+РНК появляется через час после теплового шока - воздействия температурой в 35°С (рис. 8-2) и практически полностью исчезает через 3 часа после того, как проростки переносят в температуру 23°С (рис. 8-3).

Не синтезируется мРНК БШ70 и у растений, которые без предварительной адаптации подвергли часовому шоку при 45°С (рис. 8-4).

Однако большое количество мРНК БТИГ70 обнаружено через 2 часа и немного меньшее через 4 часа после снятия критической температуры (45°С - I час) у тех растений, которые были предварительно адаптированы при 35°С (рис. 6 - 5 и 6).

Эти данные говорят о том, что синтез Б1ЕГ70, и, очевидно, прочих БТШ, в период восстановления адаптированных проростков обеспечивается за счет активации транскрипции мРНК генов теплового сока непосредственно после действия критической температуры.

Что ке является причиной активации генов БТШ в период восстановления растений?

В последние годы получен ряд данных, указывашщх на то, что индукторами синтеза БТШ могут быть клеточные балки, денатурированные или поврежденные в результате действия высоких температур или иных стрессорных факторов ( АгааЯмш е1:.га. ,1°е6 ).

Естественно преддалезить, что после действия критической температуры возникает бсшьсое количество денатурированных балков.

Согласно гипотезе ?.!анро и Палхэм, это приведет к активации транскрипции генов БТ13 ( ^-шго,х,с1ксз,1585 ).

Недавно было показано наличие убггзгтнна у растений ( 'Легз-Ьга е1;.а1.,1935 ). Однако, из известно, является ли убаквитнн растений белксм теплсвого зека, л е связи с эти:!, остается открытым воггрсс о пршаздмсстя гниотэгы '.Ьнзо и Пэд— хзм для растительных сбъектоз.

Представлялось существенном затенить, является ли убя-квитин растений белксм теплового зока и исследовать динамику изменения хаяясства нодгрунсгй убипззтдя з процессе

адаптации и восстановления растений.

Анализ дпна."нки синтеза мРНК убткЕигтчз в процессе адаптация и зосстзноалс-нпя. Убиквитлн - один лз самых ксясорватив-ных балков, известных в настоящее время. Полная гомология аминокислотной последовательности показана для убиквитина насекомых и человека ('Сау11алез 91;.а1.,19в2 ).

В связи с этим, мы использовали для анализа динамики синтеза мРНК убиквитина ДНК плазмиды риВ2, содержащей ген уби-квитина дрояжей.без предварительного анализа гомологии этого гена с геном убиквитина растений.

©Г < ФШ

12 3 4 5

Рис. 9. Гибридизация псли(А)+РНК с ДНК плазмидн риВ2

Как показал гибридизационный анализ, в проростках пшеницы, подвергнутых тепловому шоку при 35°С, происходит активный синтез мРНК, кодирующих убиквитш (рис. 9-1). Количество этих мРНК в значительной степени снижается уже через 3 часа после снятия шока (рис. 9-2). Убиквитиновые мРНК не синтезируются в клетках, подвергнутых тепловому шоку при 45°С (рис. 9-3) без предварительной адаптации и в то же время активный синтез этих мРНК происходит и через 2, и через 4 часа после снятия критической температуры (45°С) у адаптированных растений (рис. 94, 5).

Следовательно, во-первых, убиквитш растений является белком теплового шока, так как его транскрипция активируется под действием теплового шока и, во-вторых, динамика изменения в цроцессе адаптации и восстановления количества мРНК, транскрибированных с гена, кодирующего убиквитин, свидетельствует в пользу представлений о регуляции генов теплового шока с участием убиквитиновой системы.

вывода

1. Описаны белки теплового шока БТШ пшеницы и показано, что их синтез активяфуется при повышении температуры внешней среды на 8-Ю°С по отношению к средней температуре обитания и обеспечивается активацией транскрипции соответствующих генов.

2. Установлено, что состав БТШ пшеницы изменяется по мере повышения температуры среды, а в условиях критической для пшеницы температуры 45°С подавляется синтез всех белков, включая БТШ.

3. Предварительная инкубация проростков пшеницы в течение одного часа при 30-40°С обеспечивает растениям способность к интенсивному синтезу БТШ и после действия критической температуры 45°С; при этом у адаптированных таким образом растений сохраняется в значительной степени способность к росту.

4. Обнаружена высокая степень гомологии гена БТШ70 пшеницы и гена БТШ70 дрозофилы.

5. Впервые показано, что в период восстановления адаптированных растений после действия критической температуры происходит интенсивный синтез БТШ, который обеспечивается индуцированной транскрипцией генов теплового шока.

6. Показано впервые, что ген, кодирующий убиквитин растений, входит в семейство генов теплового шока.

17

Список публикаций по теме диссертации

1. Дианова И.И. Экспрессия белков теплового иока пшеницы. Физиол. и биохим. культ, растений, 1988, т. 20, Л 2, стр. 133137.

2. Дианова И.И. Роль белков теплового шока при адаптации растений к действию высоких температур. Тез.докл. У съезда Всесоюзного общества.генетиков и селекционеров, Москва, 1987, т. 4, ч. I, стр. 128.

3. Дианова И.И. Экспрессия белков теплового шока пшеницы и их.роль в адаптации к действию высокой температуры. Тез. докл. Всесоюзной конференции "Экологическая генетика растений и хшвотных", Кишинев, 1987, стр. 116.

4. Дианова И.И. Динамика синтеза мРНК белков теплового шока пшеницы в период адаптации к действию высокой температуры. Тез. докл. Всесоюзного совещания "Физиолого-биохимлческие основы иммунитета растений к грибным болезням", Уфа, 1988,

стр. 25.

ПОДПИСАНО К ПЕЧАТИ 18/05 1988. МН 08321 ФОРМАТ БУМАГИ 60x90. ПЕЧ. Л. 1. УЧ.ИЗД. Л. 0,7 ТИРАЖ 100. ЗАКАЗ 173.

Ротапринт Института цитологии и генетики СО АН СССР 630090.Новосибирск,проспект академика Лаврентьева,10