Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Экспериментальные модели для воспроизведения вирусного гепатита Е

ВАК РФ 03.00.06, Вирусология

Автореферат диссертации по теме "Экспериментальные модели для воспроизведения вирусного гепатита Е"

л

А

о,

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК ИНСТИТУТ ПОЛИОМИЕЛИТА И ВИРУСНЫХ ЭНЦЕФАЛИТОВ

На правах рукописи

ДЖУМАЛИЕВА ДИНАРА ИШЕНОВНА

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ МОДЕЛИ ДЛЯ ВОСПРОИЗВЕДЕНИЯ ВИРУСНОГО ГЕПАТИТА Е

03.00.06 — Вирусология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва 1992

Работа выполнена в Институте полиомиелита и вирусных энцефалитов РАМН и Кыргызском НШ профилактики и медицинской экологии МЗ Кыргызстана.

Научные руководители: кандидат медицинских наук Р.К.Усмаяов.

хацавдаг медицинских наук Н.А.Замягина

Официальные оппоненты: доктор биологических наук

М.Б.Королев

доктор медицинских наук М. И.Михайлов

Ведущая организация: Научно-исследовательский институт

эпидемиологии и микробиологии им. Н.'З.Гаыелеи РЛШ

Защита состоится -и" Лы/СутЯ 1992т» в Со час на заседании Специализированного совета при Институте полиомиелига и вирусных энцефалитов РАМН по адресу: 142782, Московская область, Денинский район, д/о Институт полиошаггита.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института полиомиелига л вирусных энцефалитов РАМН.

Автореферат разослан •" АХ " ^-^-¿Ти 1992г.

Учёный секретарь Специализированного совета кавдидаг биологических наук

О.А.Медведкина

ОС"/ .. .

- 3 -

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Вирусные гепатиты (ВГ) представляют собой важную проблеыу здравоохранения, имевшую не только «ада-цинсиоз, ао и социальное значение. Среди всех вирусных инфенцзй человека ВГ по своей распространенности, показателя!» заболеваемости и прачиняеиону экономическому ущербу занимают одно из ведущих мест.

Распространение ВГ в ивре весьма неравноиернс, Не территории вайей страны однии из регионов с высоким уровней заболеваемости являются республики Средней Азии, где несмотря на достигнутые успехи, уровень заболеваецссти почти в 3 раза превышает срзднесосэный показатель (Нарнезич,19Э1).

К настоящему врзаени хороио известно, что вирусные поранения печени этиологически неоднородны. Наиболее подробно изучены и описаны две нозологические формы - гепатит А (ГА) и гепатит В (ГБ). Гепатит Е (бывший гепатит ни-А, ни-Б с фензльно-оральныи механизмом передачи) приобрёл в настоящее время статус самостоятельной ВОЗОЛОГИЧйСХСЙ единицы ( Bradley et а1. ,1950). ЭТО 3й-болевание широко распространено в странах тропического и субтропического регионов мира. В республике Кыргызстан гепатит Е начал регистрироваться о IS86r., когда впервые было замечено, что с ним связаны крупные эпидемические всяаяки, охватывающие до населения отдельных адкинасгративно-торриториальных районов. Эпидемический уровень заболеваемости гепатитом Е на пораженных территориях сохранялся в течение двух лет (Уснанов и осавт.,1991).

Отличительной особенностью ГЕ является то, что ок поражает, в основном, подростков и молодых взрослых. При этой инфекции йн5-ет моста высокая летальность среди жбнцин во второй полоеинз бе-

ременноохи (Khuroo et al. ,1980; Tandon et al. ,1982; Kane et al.,1984; llyint et al. ,1985* Фаворов И др.,1986; Tandon et al. ,1989). Ыногие вопросы патогенеза инфекции ГЕ, методов её диагностики, профилактики и лечения остаются ещё не изученными. Одним из путей их познания является моделирование инфекции на лабораторных яивотвых. Развитие этого направления во многом способствовал опыт, накопленный в экспериментах по моделированию не приматах гепатитной А инфекции Deiaatag " et al,1976; Deinstag et al. ,1976; Krawczynski et al. ,1981; lîargolis etal, 1988; lapin ,1989)...

В настоящее время известно, что более 10 видов приматов, включая обезьян Старого и Нового Свете, в той или иной степени восприимчивы и ГЕ инфекции. Моделирование инфекции ГЕ на животных является эффективным средством познания инфекционного процесса. Кроме того, оно даёт возможность накопления возбудителя этого заболевания в количествах, необходимых для полной таксономической характеристики вируса, и для создания доступных диагностических тестов; пока вирус гепатита Е (ВГЕ) не мокет быть получен путём его размножения в культуре ткани. Однако, по ряду причин (ограничение на отлов s местах естественного обитания, трудности разведения и содержания в неволе, высокая стоимость обезьян и т.д.) обезьяны ке могут быть универсальными лабораторными моделями для воспроизведения инфекции ГЕ. Поэтому нами было предпринято исследование возможностей использования других видов хаьогных для моделирования егой инфекции и сопоставления их с известной моделью з виде экспериментально зараженных обезьян.

Цель и задачи исследования. Основной целью настоящей работы явилось определение возможностей моделирования инфекции ГЕ на более доступных животных, чем. приматы. Работа включала в се-

бя несколько частных задач:

экспериментально установить возможность использования домашних поросят для моделирования инфекции ГЕ;

экспериментально установить возможность использования лабораторных белых крыс для моделирования инфекции ГЕ;

экспериментально подтвердить возможность использования в качестве лабораторной модели для воспроизведения инфекции ГЕ яванских макак;

определить возможность экспериментальной передачи вируса гепатита Е от одного вида животного другому;

используя комплекс различных методов показать идентичность вирусных частиц, выделенных от зараженных животных, частицам вируса ГЕ, присутствующим в пробах фекалий от больных ГЕ;

исследовать сыворотки дикоживущих грызунов на наличие в них антител к вирусу гепатита Е.

Научная новизна работы. Впервые инфекция гепатита К воспроизведена на домашних поросятах при экспериментальном заражении их изолятом вируса гепатита К от больного ГЕ. Было установлено, что экспериментальный гепатит Е у поросят имеет многие признаки острого гепатита Е у человека.

Впервые показана принципиальная возможность использования лабораторных белых крыс в качестве альтернативной модели для воспроизведения отдельных признаков инфекции ГЕ.

Впервые продемонстрирована экспериментальная передача вируса гепатита Е от яванских макак белым крысам и от поросят яванским макакам.

Впервые выявлены антитела к вирусу гепатита Е в сыворотках дикоживущих грызунов.

Практическая ценность работы. Результаты работы позволяют

научно обосновать выбор модели при работе с вирусным гепатитом Е;

моделирование гепатитной Е инфекции на более доступных видах животных, чем приматы, создаёт реальную перспективу расширения знаний о патогенезе к иммуногенезе этой инфекции;

открываются перспективы выявления естественных резервуаров инфекции гепатита Е б виде инфицированных дикоживущих грызунов, обитающих в эндемичных по ГЕ районах.

По результатам выполненного исследования на защиту выносятся следующие основные положения диссертации:

I, Домашние поросята могут быть использованы в качестве лабораторной модели для воспроизведения инфекции гепатита Е. Экспериментальный гепатит Е у поросят имеет многие патогенетические признаки, свойственные инфекции гепатита^' у человека.

. 2. Отдельные признаки инфекции гепатита Е человека удаётся моделировать на лабораторных белых крысах.

3. Экспериментально подтверждена возможность использования яванских макак для воспроизведения инфекции гепатита Е.

4; Показана возможность экспериментальной передачи вируса гепатита Е от яванских макак белым красам и от домашних, поросят яванским макакам,, причём, передача инфекции от одного вида животного другому происходит без какой-либо дополнительной адаптации видуса.

5, Показана идентичность.вирусных частиц, выделенных от зараженных животных частицам БГЕ, присутствующим в пробах фекалий от больных ГЛ.

6. Дикоживущие грызуны, обитающие в эндемичных по ГЕ районах могут служить резервуаром инфекции гепатита Е в ыежэшшеми-ческио периоды.

Апробация диссертации состоялась 16 июня 1992г. на заседании Мэялабораторного Ученого совета по проблеем общей вирусо-

догии Института полиомиелита к вирусных анцафалитов А.МН России.

Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 8 печатных работ.

Объём и структура диссертации. Работа излогана на 129 страницах машинописного текста (включая II таблиц и 21 рисунок) и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и списка литературы, включающего 151 цитированнув работу.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материал и методы. 13 работе были использованы обезьяны Старого Света, по примятой классификации принадлежащие роду манак (Macaca), семейству иарзвднообразных ( Cercopithecidae ), яванские макани (Macaca 'fascicuiaris ). Обезьяны были приобретены на коммерческой основа в Индонезии и Эфиопии, отловленные в местах естественного обитания, весом от 1,5 до 2,5 кг.

В качестве второй модели для воспроизведения инфекции ГЕ были использованы домашние поросята породы"Крупная белая"( sue-orofa domestica ), масса тела 8-10 кг (возраст - 2 месяца).

В опытах по воспроизведению ивфенцаи IE у грызунов использованы лабораторные беспородные белые крысы, весом 350-400 г. Для заражения использовали иаоляты ВГЕ от больных людей собранные в остром периоде болезни и иаоляты ВГЕ от экспериментально зараженных обезьян. Зти материалы представляли собой частично очищенные фекальные пробы, суспензии содерхиыого яелчного пузыря, взятые при аутопсии животных. Эксперименты выполняли в соответствии с 'Правилами проведения работ с использованием экспериментальных кивотных",

Заражение обезьян осуществляли путём внутривенного (в бедренную зену) и перорального введения по 1,0 мл вируссодержашего

материала; поросяг - внутривенно (в подключичную вену) и перо-рально по 2,0 мл; крыс - внутривенно (в хвостовую вену) и перо-рально по 0,3 мл. Период наблюдений за животными составил от 2 до 6 "недель. £ этот период у всех животных определяли уровни сывороточных аминотрансфераз, наличие вируса в фекальных пробах и органах, образование специфических антител, патогисталогические изменения в печени, наличие вирусного антигена в печени, а также присутствие вирусной РНК в фекальных пробах и органах.

Для выявления частиц ВГЕ была использованы сыворотки от ре-конвалесцентов ГЕ, аттестованные в нашей лаборатории; сыворотка Fausta (предоставленная доктором D.w. Bradley - Центр по контролю за болезнями, Атланта, США); для исключения ВГА - сыворотка Burton (предоставленная докторомJ.E.Maynard - Центр по контролю за инфекционными болезнями, феникс, США).

Наличие вируса в материале, его типовую принадлежность, а ханже антитела в сыворотках зараженных животных определяли используя метод шшуноэлектронной микроскопии (ИЭЫ) (Almeida et al., 1971; Dienstag ,1976; Field ,1982); метод негативного контрастирования (Johanson ,1978); пряной и непрямой методы флюоресцирующих антител (МФА)(В.Я.Кармышева,1979 ); стандартный им-иуноферментный метод (ИФМ) (Duermeyer ,1980). Антитела к ВГА класса II определяли по общепринятой методике с использованием ИФИ.

Препараты изучали в электронной микроскопе лм-юосхп Приготовление гистологических препаратов печени проводили согласно методической рекомендации (А.С.Логинов и др.,1979).

Определение активности сывороточных аминотрансфераэ осуществляли кинетическим методом с использованием диагностических наборов и?-Test ( Pennognost ,Германия) на многоканальном спек-

трофотометре Ferkin Eimer , а такке на биоанализаторе vp-su-persLsrtam ( Abbott ,США), о использованием реактивов той же фирмы.

Для выявления вирусной РНК использовали зонды, полученные на основе клона нДНК ВГЕ ЕТ,1Д (предоставленного доктором j.r. Heyes ,СИА). Радиоактивные зонды были получены с использованием набора для кик-трансляции и 5000 ( Amersham .Англия). РНК из 10% фенальных гнет рангов была выделена при помосда гуани-дин-фенольного метода ( Maniatia ,1982). Гибридизация проводилась, з основной, как описано в инструкции производителей мембраны ( Hybor.d О Amersliom ,Англия).

Для статистической обработки материалов к построения гистограммы использовали стандартные методы биометрии (Бейли,19?0; Лакин,1980).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

I. Опыты по воспроизведению гепатита Е у иараыякообрэзных ооезьян при заражении их изолятаыи вируса гепатита iü человека

На первых этапах наших исследований был проведен ряд экспериментов по дальнейшему изучению ГЕ инфекции на яванских макаках. Полученные результаты экспериментального заражения обезьян изолятаыи ВГЕ от больных, в целом совпадают с данными,полученными раное другими исследователями ( Анджапаридзе и соавг.,1976; Балаян,1986;Bradley et al. ,1987; Ushida et al. ,1990; Замятина,1990).

Инфекция, которая воспроизводится на обезьянах, в результате заражения их ВГЕ, имеет многиэ патЬгенетические прязвани, сходные с таковыьи у человека: повышение уровня активности сывороточных амчнотрансфераз, экскреция вируса с фекалиями, характерные для острого вирусного гепатита патоморфолсгическке изме-

-Гонения в печени и появление специфических антител.

Как правило, экскреция вируса с фекалиями начиналась на 1017 день после введения /нохулята, в эти ¿е срони вирусные частицы выявлялись в еодерздмом *елчнсго пузыря. Энскреция вируса с фекалиями у экспериментально зараженных обезьян напоминает характер экскреции ВГЕ при'¡зстё смени ой днфекции у человека (Фавор ов и соаБТ.,1981; cao e-t ai. ,1989; Балаян и соавт.,1993).

Сывороточные антитела, которые определялись методом ИЭМ,выявлялись, начиная с 25-30 дня после заражения.

В результате патогистологичёских исследований у 4 из 9 обследованных обезьян в печенй были сонарунены изменения, которые в общих чертах могут Сыть обозначены как диффузно-очаговкй гепатит с преобладанием про лифе ративнык реакций . Изменения чаще всего обнаруживались по периферии долек, около мелних кровеносных сосудов. Обрацало ва себя внимание отсутствие чётких некротических изменений со стсронь гепатоцитов. Это свидетельствует, возможно, о сравнительно благоприятном течении инфекционного процесса, при котором пролиферативные реакции преобладали над некротическими изменениями. Таким образон, пааоморфологичесние изменения клеток и структуры ткани печени зараженных обезьян не имени каких-либо специфических особенностей и в целом были менее выражены, чем у человека ( Dienes et al. ,1962; Kryger et al. ,1983; Хузне-цсь,19е5).

Метод фдьоресцируювдх антител был пременен. нами, как и другими исследователями ( Krawcaynski,Bradley ,1589), для выязлекая сценического вирусного антигена в гепатоцитах зараженных животных. Вирусный антиген присутствовал в 5 случаях из Э обследованных в печеночных клетках обезьян на второй и третьей неделях от заражения.

- П -

В каиих экспериментах по заражению обезьян ВГЕ человека не удалось воспроизвести тягелув фулминантную форму инфекции ГЕ, встречающуюся у больных, особенно у беременных сеншин (Фавсров и соанг.,1986; v/aidu et al. ,1937; Purcell et al, . ,1988; Балаян и соавт.,1951). Заражение обезьян па фоне химически индуцированной иммуиодепрэссии не приводило к утяселенкю инфекционного процесса.

В целом, в опытах на обезьянах было использовано 3 иэолята ВГЕ, выделенные от больных ГЕ из вспышек этой инфекции на юге Кыргызстана. Все указанные штаыны были способны вызывать у обезьян гепатитоподобную инфекцию, сопровождающуюся экскрецией вируса и образованием антител и нему.

Таким образом, полученные нами результаты подтверждают данные некоторых исследователей (Анднапаридзе и соазт.,1986; Kraw-czynskietaL,I989; Uchída et al. ,1990) O ВОСПРИИМЧИВОСТИ ЛВ8Н-сних макак к аирусу гепатита Е человена в экспериментальных условиях. Кроме того, наши исследования показали способность вируса сохраняться в пассажах на обезьянах, тем самым, создавая некий источник для получения-вируса в виде конкретного изолята (штампа).

2. Экспериментальное заражение домашних поросят изолятаыи вируса гепатита я человека

Во время Еспыаек инфекции ГЕ на юге Кыргызстана были получены образцы фекалий от больных, в которых методом ИЭМ были обнаружены вирусоподобные частицы сферической формы диаметром 2734 ны. По данным некоторых исследователей'( Balayan et al. ,1983; Капе et al. ,1984; Arankaile et al. ,1988) вирус гепатита E Нв вызывает продуктивной инфекции в различных культивируемых клетках и не патогенен для новорожденных белых мывей.Отсутствие патсгев-

- ч -

кости для мызей-сссунков и для культур клеток исключают лринад-. яежнооть вьшденных вирусоподобных частиц- в пробах фекалий от больных к типичным антероварусак. Наличие антител к ВГЕ у естественно инфицированных людей и пахогенкость выделенных изолятоь для обезьян являются признанными критериями этиологической связи оОнаружеянит вирусных частиц с заболеванием. В экспериментах на поросятах нами было использовано 5 »эолитов ВГЕ от больных ь острой стадии ваболэвания.

Доманкие поросята стала объектом наших дальнейших исследований, в основном, по трём причинам: во-первых, поросята являются более доступными, чем приыаты; во-вторых, по некоторый морфологическим и физиологическим показателям поросята являются наиболее близкими человеку; в-третьих, известно, что поражения печени у поросят могут сопровождаться желтухой.

Полученные нами результаты экспериментального заражения поросят маслятами ВГЕ от больных, свидетельствуют о том, что они способны вызывать у этих животных инфекция, напоминающую по своим признакам экспериментальную инфекцию ГЕ у обезьян С Balayan e>í al. ,1963; Sarthcm et al. ,1986; Bradley et al. ,I988;Sce et al. ,IS89; rauda ,1989). Динамика развития экспери-

ментальной инфекции ГЕ у поросят, в делом, соответствует той, которая наблюдается у экспериментально зараженных обезьян.

. У воросят, зараженных BIT,, s отличие от экспериментального ГЕ у приматов, отмечалось пожелтение кожных покровов и склер, примерно через три недели после введения инокулита, Экскреция вируса с фекалиями предшествовала развитию желтухи, что характерно для человека (Кетиладае,19б4; фаворов и соазт.,1966; Cao et al. ,1989).

Показательным являлся и toi факт, что у зарахонных поросят

.имело место двухфазное повышение уровня активности алавинамино-трансферазы (АлАТ) на протяжении острого периода инфекции примерно в те же срони, что и у зараженных обезьян.

Каи правило, экскреция вируса с фекалиями наблюдалась в интервале между двумя подъёмами уровня активности АлАТ. Срока начала энснреции вируса и его продолжительность у порооят во многой совпадают с таковыми у экспериментально зараженных обезьян.

Сывороточные антитела у эясперимедталько зараженных обезьян, по нашим данным, появляются после второго подъёма уровня активности АлАТ. У поросят, зараггенных ВГЕ, антитела появляются несколько раньше, примерно на 7-10 день.

Метод флюоресцирующих антител был нрииенен нами для выявления специфического вирусного антигена а гепатоцитах зараженных поросят. Если антиген ВГЕ, по Еашим и литературным данным, достаточно регулярно присутствует в печеночных клетках обазьян па второй и третьей неделях посла заражения, то у перооят указанный антиген был выявлен только у одного из 8 обследованных. Возможно, это связано о более поздним орокои аутопсии поросят.

Наряду с методом ИЭМ, о помощью которого определяли наличие вирусных частиц в фекальных пробах и органах, был также использован метод молекулярной гибридизации с использованием кДЁК зондов для выявления вирусной РНК. Вирусные частицы (в ИЭЬ1) и РНК (в УГ) были выявлены в печени и содержимом желчного пузыря зараженных животных, начиная с 10 дня после заражения, и кишечнике с 5 дня после введения инонулята. Кроме того, вирусаые частицы и РНК ВГЕ определялась в почках, лимфоузлах и селезенке, но не были обнаруины в лёгких и головной мозге. Не исключено, что органы, в которых были выявлены данные частицы на ранних этапах после зарахозия являются местом первичного размножения ВГЕ.

-запри пазогистслсгичеснок исследовании в печени у 10 из 14 обследованных животных были обнаружены изменения, которые напоминали картины, описанные при остром вирусном гепатите человека и экспериментально зараженных обезьян. В печени наблюдаются гнезд-но располокенные участки некроза геиатодктов, инфильтраты из лиы-фоидных и плазматических клеток. Цитоплазма генатоцитов подвержена зернистом дистрофии или мутнону набуханию, ядра - кариопикно-зу или лизису.

Таким образои, результаты, полученные нами при заражении поросят изолятами ВГЕ человека свидетельствуют о том, чтс указанные животные могут стать адекватно лабораторной моделью для воспроизведения инфекции ГС, более доступной по сравнению с приметными моделями.

Восприимчивость поросят к экспериментальному заражению ВГЕ человеческого происхождения даёт основание для умозрительного предположения, что домашние поросята могут вовлекаться в циркуляцию этого вируса з естественных условиях. Некоторые авторы предполагают, что циркуляция БГЕ среди дикогавущих обезьян может происходить независимо, без вовлечения в неё человека (Анджапаридзе ,1988), Однако, в литературе отсутствуют какие-либо эпидемиологические данные о передаче ВГЕ от поросят человеку. Исторически сложилось тан, что большинство населения эндемичных по ГЕ регионов проповедуют Ислам, а мусульмане, как известно, не употребляй? в пищу саннику. Тем не менее, в странах Азии и Ближнего Воотона достаточно часто регистрируются вспышки инфекции ГЕ. Таким образом, доыашние поросята, пе будучи столь распространенными з этих регионах, возможно, и не могут служить природным резервуаром для сохранения ВГЕ в межэпидемические периоды.

Анджапаридзе и.соавторы сообщили об обнаружении антител к

ВГЕ в сыворотках отловленных дикоживущих яванских макан (Macaca faacicuiaria ), ареал обитания которых совпадает с эндемичной зоной инфекции ГЕ. Учитывая предположение авторов о возможном существовании циркуляции ВГЕ вне человеческих популяций, объектом наыих дальнейиих исследований стали диноиивупше грызуны, как наиболее распространенные в численном соотношении представителя фауны, обитающие в непосредствейной близости от человечеснах поселений и имеющие доступ к источникам водоснабжения. Наличие антител к ВГЕ у дикоаивуцих грызунов, отловленных вблизи очагов инфекции ГЕ, дало основание предположить, что ВГЕ может циркулировать среди грызунов в эндемичных по ГЕ районах. Вполне возможно, что при определенных условиях, экскреты инфицированных лиеот-ных могут попадать в источники водоснабжения и, таким образом, представлять опасность передачи инфекции человеку. В то ке время, нельзя исключить возиохное существование инфекционного агента или агентов, патогенных исключительно для грызунов, но имеющих антигенное сходство с ВГЕ человека.

3. Экспериментальное заракение белых лабораторных крыо изолятами вируса гепатита человека-и. экспериментально зарайонных обезьян .

На следующем этапе наш« исследований была проведена серия экспериментов по заражении белых крыс изолятами ВГЕ человека, выделенных от больных в острой стадии заболевания. В качестве инокулятов были такке использованы частично очищенные экстракты фекалий от зарагенных ВГЕ обезьяк. В результате этих опытов нам удалось в той или иной степени, воспроизвести гепатитоподобную инфекцию, которая сопровоздалаЬь повышением уровня активности АлАТ, экскрецией вируса с фекалиями и образованием антител к нему. Выли отмечены и некоторые Особенности экспериментальной

- к -

ннфенции, которая развивалась у экспериментально зараженных крыс. Так, вирусные частицы в пробах фекалий от зараженных крыс были обнаружены методой ИЭ11 уже на 4 день после введения инокулята. Кроме того, экскреция вируса о фекалиями была более продолжительна по сравнению с таковой у обезьян, но менее интенсивна. Антитела к БГЕ начинали появляться на .I5-2Í3 дней позже, чем у зараженных обезьян. У обезьян, аутопсироваяных на высоте инфекции, выявлялись частицы ВГЕ в печени и содержимом желчного пузыря на 2-3 неделе от заражения. В печени и пробах желчи инфицированных крыс не удалось обнаружить частицы ВГЕ. И, наконец, в гепатоцитах не было выявлено никаких патологических изменений при морфологических исследованиях.

Таким образом, общее заключение сводится к тому, что помимо яванских макак, которые являются в некоторых аспектах удовлетворительной моделью для воспроизведения инфекции ГЕ в лабораторных условиях, поросята также могут быть использованы з качестве альтернативной лабораторной модели. Что касается использования для зтих целей белых нрыс| то результаты наших исследований показали неадекватность данного вида животного для моделирования гепатитной £ инфекции, в отличие ст приматной модели. Сходство и различие экспериментального гепатита Е у обезьян, поросят и крыс показаны в таблице I. На крысах нам удалось воспроизвести лишь некоторые черты (признаки) экспериментальной инфекции ГЕ. Кроме того, сроки (временные соотношения) развития экспериментальной инфекции ГЕ у крыс не соответствовали таковым при гепатитной Е инфекции у человека и обезьян.

Результаты выявления частиц ВГЕ в органах зараженных и в разные сроки аутопсированньх обезьян, поросят а крыс представлены в таблице 2. У обезьян и поросят примерно с одинаковой часто-

Таблица I. Сходство и различия экспериментального гепатита д у обезьян,поросят к г.р::

---- ->1М йИвбГНОГб признаки обезьяны поросята крысы

I. Повышение уровня активности АлАТ 9/17 9/14 4/7

Сроки (пни после инокуляции) 1-й подъём 7-8 2-й подъём 30 1-й подъём 4-7 2-й подъём 20-28 1-й подъём '¿г-й подъём 7-20 35

2. Экскреция ВГЕ 10/16 12/14 ПЛ4

Сроки (дни после инокуляции) 10-17 10-17 4-10

Продолжительность (дни) ■ 4-7 4-У 0-Ю

3. Образование антител к ВГЕ 7Л1 8/10 8Д0

Сроки (дни поело инокуляции). 23-30 13-30 48-57

4. Патогисгологические изменения в печени 4/9 10 Д 4 0/14

Сроки (пни после инокуляции) 14-31 20; 36 -

5, Антиген ВГЕ в печени о/Э 1/8 0/8

Сроки (пни после иноку-| ляции) 15-27 13 -

Таблица 2. Частота выявления частиц НГЕ в органах от зараженных животных

по срокам инфекции

Яелупочно-китеч .тракт Прочие органы

Вид жив. ^органы. I признаки"-—^^^ I ^ печень кишечник соиерк. Ж0ЛЧН. пузыря почки 1 1 ! селезенка 1 'лимфо- |УЭЛК ыочевой| пузырь | 1 лёгкие! мозг 1

обе- Частота(п1/п2; 1/6 1/3 •3/6 0/3 н.о. н.о. и.о. н.о. н.о.

зьяны День аутопсии 15 14 14.17. 27 - - - - - -

по- Частота(ц1/п2) 2/8 3/4 2/4 3/4 2/7 5/7 1/1 0/3 0/2

ро-ся-та День аутопсии 21.28 5.10.13 10,15 5,10.15 5.10 5 ДО. 14. 10 15.20 - -

к р частота (п1/п2) 0/3 0/3 0/3 0/3 0/3 н.о. н.о. 0/3 н.о.

ы с ы День аутопсии - — - — — — - — —•

п1 - число яявотшх с указанным признаком, п2 - число обследованных животных.

той обнаруживались частицы ВГЕ в пробах содергимого желчного пузыря, печени и кишечника. Ни з одном органе грех исследованных крыс не было обнаружено частиц ВГЕ.

Кроме непосредственного заражения животных первичными изоля-тани ВГЕ, наки проводилось ласоирование вируса путём передачи его от одного вида животного другому (рис.1). При атом передача инфекции от обезьян крысам и от поросят обезьянам достигалась без какой-либо дополнительной адаптации вируса. В то же время, нам но удалось воспроизвести экспериментальную передачу инфекции ГЕ от крыс обезьяны.

В заключение следует отметить, что многие вопросы экологии вируса гепатита Е остаются не изученными. По-прежнему остро стоят проблемы разработки методов специфической и неспецифичесной профилактики, диагностики л лечения инфекции ГЕ. В создании новых моделей для воспроизведения инфекции ГЕ кроется перспектива для дальнейшего изучения экологических аспенгов этого заболевания. Ыы рассчитываем, что это будет способствовать сокращению, а впоследствии и искоренению заболеваемости гепатита Е.

Изолят ВГЕ Ош-2599

Изолят ВГЕ 0ш-205

Обозначения

- проявление признаков инфекции ГБ с подъемом уровня активности АлАТ

- проявление признаков инфекции ГБ без подъема уровня активности АлАТ

- отсутствие признаков гвфекцнн ГБ

Рис. I. Проявление признаков инфекции ГЕ при передаче ВГЕ человека от одного вида животного другому

- 21 -выводы

1. Впервые инфекция гепатита Е воспроизведена на домашних поросятах при экспериментальном заражении их изолятов вируса гепатита Е от больного ГЕ. Экспериментальный гепатит Е у поросят имеет многие признани острого гепатита Е у людей, а именно: повышение уровней активности сывороточных ашшотрансфераз, специфические патоморфологические изменения в печени, экскреция вируса с фекалиями, образование антител я вирусу гепатита Е у отдельных животных имело место развитие желтухи в сроки, соответствующие острому периоду инфекции. Кроме того, частицы ВГЕ и РНК ВГЕ были выявлены в печени, пробах желчи, почках, лимфоузлах и селезенке, начиная о 5-10 дня после заражения.

2. Впервые показана принципиальная возможность использования лабораторных белых крыс в качестве альтернативной модели для воспроизведения отдельных признаков инфекции гепатита Е, в частности, повышения уровней активности сывороточных аминотрансфераз, экскреции вируса с фэналилми и образования антител к нему.

3. Экспериментально подтверждена возможность использования

в качестве лабораторной модели для воспроиззедения инфекции гепатита Е яванских макак, при заражении которых вирусом гепатита Е развивается инфекция, сопровождающаяся экскрецией вируса с фекалиями, повышением активности сывороточных аминотрансфераз, пато-морфологическими изменениями в печени, характерными для вируоно- -го гепатита и образованием антител н зирусу гепатита Е.

4. Показана возможность экспериментальной передачи вируса гепатита Е от яванских иакак лабораторным крысам и от поросят яванским макакам, причём, передача Инфекции от одного вида животного другому происходит без какой-либо дополнительной адаптации вируса.

- 22 -

5. Метопами флюоресцирующих антител, иммуноэлоктронной микроскопии и молекулярной гибридизации показала идентичность вирусных частиц, выделенных от зараженных животных, частицам вируса гепатита Е, присутствующим з пробах фекалий от больных ГЕ.

6. В результате обследования небольшого количества сывороток дикоаивущих грызунов(всего 23 пробы), у отдельных особей обнаружены антитела к вирусу гепатита Е (I Туркестанская крыса, 2 домовые и 2 лесные мыж).

С П И С О К

научных работ, опубликованных по гаме диссертации

1. Диагностика фекально-орального вирусного гепатита ни-А,ни-В методом иммунной электронной микроскопии /Джумалиева Д.И., Алымбазва Л.Б..Усманов Р.К. - Здравоохранение Киргизии.-Фр.унзеЛ969 - с. 47-48.

2. Изучение этиологии вспышек вирусных гепатитов в районах Оисной области метопом шмуБо-электронной микроскопии/ Джумалиева Д.И,.Алкмбаева Д.Б.,Усманов Р.К. и др. - Тез.докл. яаучно-прахт.коаф. - Сш. - 1989. - с.44-46.

3. Изучение этиологии вспышек вирусных гепатитов в Оыской области е эксперименте на яванских макаках / Замятина Н.А., Усманов Р.К., Дкумадиева Д,И. и яр. - Тез.докл. научно-практ. конф„ - Ош. - I98S. - с.47-49.

4. Экспериментальная инфекция гепатита Е у домашних поросят/ Усманов Р.К.,Балаян М,С.,Джумалиеза Д.И. и др. - Итоги науки а техники,вирусология г.22 - Материалы международ.симпо-зиума.г.Ростов, 1990. - с.ПО.

5. Experimental Hepatitis Е Infeotioii in Domostic Pigo/ Balayan .3 . .Uraaanov к.К. ,Sany atina Ы.А. ,I!juinalieva D.I.et al.-■J.of Le di с al Virology .-1 990 .v. 32.-Но .1 -p .55-59.

6. Возможная циркуляция возбудителя гепатита S среди грызунов/ ДжумалиеЕа Д,И.,Каретный Ю.В.,Усманов Р.К. и др. - Матер, II съезда гиг. эпш.шкробжш. паразит.и инйекц.peca.Кыргызстан.-Бишкек, 1991. - 1991. - c.lü2-l64.

7. Сравнительное изучение энгерального гепатита Е (ни-А, ни-3) в долинных и горных местностях Киргизии/ Усманов F.K.. ФавороЕ М.О., Васильева В.И. Джумалиева Д.И. - Ьопр.варусол. 1991. - й I. - с.66-69,

8. Pocsible involveisent of rodento in the tranamission of Hepatitis E(H¿)/ Karetnyi Yu.V, Djumalieva D.1.,Usraanov il.K. et al. - Liemo randa íTeuatitis. 1991. - 2466. - p.33-3o.

Типография ЦНИЭИугсль.