Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Экспериментальное обоснование клинического применения тинростима при псевдотуберкулезной инфекции

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Экспериментальное обоснование клинического применения тинростима при псевдотуберкулезной инфекции"

На правах рукописи

ПУШКАРЕВА ТАТЬЯНА ВЛАДИМИРОВНА

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ КЛИНИЧЕСКОГО ПРИМЕНЕНИЯ ТИНРОСТИМА ПРИ ПСЕВДОТУБЕРКУЛЕЗНОЙ

ИНФЕКЦИИ

( 03.00.07 - микробиология )

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Владивосток - 2004 г.

Диссертация выполнена в Научно-исследовательском институте эпидемиологии и микробиологии СО РАМН г. Владивостока.

Научные руководители:

Академик РАМН,

доктор медицинских наук, профессор Беседнова Наталья Николаевна

доктор медицинских наук Сомова Лариса Михайловна

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор Туркутюков Вячеслав Борисович

кандидат медицинских наук Фисенко Анна Юрьевна

Ведущая организация, дающая внешний отзыв о научно-практической ценности работы: НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Л. Пастера.

Защита диссертации состоится «2004 г. в /У_

на заседании диссертационного Совета Д 208.007.02 при Владивостокском Государственном медицинском университете по адресу: 690600 ГСП, г. Владивосток, пр. Острякова, 2 С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Владивостокского Государственного медицинского университета.

Автореферат разослан г.

Ученый секретарь диссертационного Совета, кандидат медицинских наук

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Несмотря на то, что псевдотуберкулез уже несколько десятилетий привлекает внимание ученых и многие вопросы патогенеза и иммунитета хорошо изучены, заболеваемость этой инфекцией в РФ продолжает оставаться на высоком уровне (Ющенко Г.В., 1999). Псевдотуберкулез имеет много клинических форм, и нередко сопровождается развитием рецидивов, обострений, может принимать хроническое течение.. Причиной этому является способность возбудителя Y. pseudotuberculosis поддерживать жизнеспособность в фагоцитах макроорганизма (Беседнова Н.Н., 1979). Кроме того, целый ряд работ свидетельствует о том, что при этом инфекционном заболевании развивается вторичное иммунодефицитное состояние, которое требует коррекции (Беседнова Н.Н., 1979, Исачкова Л.М. 1990 и др.). Несмотря на то, что за последние десятилетия было создано достаточно много лекарственных, средств, обладающих иммунотропной активностью, по-прежнему существует дефицит природных высокоэффективных и безопасных иммунокоррегирующих препаратов.

Сведений о применении иммунокорректоров при псевдотуберкулезе в литературе мало (Запорожец Т.С., 1986, Прокопенкова А.П., 1989, Тартаковская Р.А., 1989, Ющук Н.Д. и.соавт., 1995). Экспериментальные исследования А.К. Гажа (1994) и А.А. Логвиненко (2000) показали, что тинростим - пептид из нервной ткани промыслового вида кальмара -является эффективным стимулятором фагоцитарной активности полиморфноядерных лейкоцитов (ПМЯЛ) и макрофагов и снижает патогенное действие, токсина возбудителя псевдотуберкулеза. Таким образом, актуальным является изучение механизмов действия этого иммуностимулятора на модели псевдотуберкулезной инфекции.

Тинростим разрешен к применению в виде биологически активной добавки и в настоящее время идет подготовка к его

| БИБЛИОТЕКА 1 !

испытаниям в качестве лекарственной формы.

Цель работы. Исследовать фагоцитозстимулирующую активность и терапевтическую эффективность тинростима на модели псевдотуберкулезной инфекции в эксперименте. Обосновать возможность его клинического применения при псевдотуберкулезе у людей. Основные задачи исследования.

1. Оценить значение макрофагов в защите организма от псевдотуберкулезной инфекции при применении тинростима.

2. Изучить профилактическое и терапевтическое действие тинростима при экспериментальной псевдотуберкулезной инфекции:

3. Определить оптимальные сроки и способ введения иммунокорректора для повышения выживаемости и продолжительности жизни животных.

4. Изучить патоморфоз экспериментального псевдотуберкулеза под действием тинростима.

Научная новизна и теоретическая значимость. В работе представлены новые данные, свидетельствующие об эффективности тинростима в профилактике и лечении экспериментального псевдотуберкулеза. Впервые установлено, что препарат значительно повышает выживаемость и продолжительность жизни животных, зараженных псевдотуберкулезом, независимо от способа его введения как при профилактической, так и при лечебной схеме его применения. Раскрыты некоторые механизмы повышения фагоцитарной активности макрофагов под действием иммунокорректора (повышение уровня адгезии, активности ферментатов антиокислительной системы этих клеточных элементов). Установлено регулирующее влияние тинростима на продукцию макрофагами провоспалительных цитокинов. Впервые прослежена в динамике морфологическая картина экспериментального псевдотуберкулеза на фоне применения антибактериальной, иммуномодулирующей и сочетанной

(антибиотик + тинростим) терапии. Впервые показаны ультраструктурные изменения макрофагов под действием тинростима.

Практическая значимость. Прикладное значение работы обусловлено обоснованием возможности использования тинростима в клинической практике при псевдотуберкулезе с целью снижения частоты случаев тяжелого затяжного, рецидивирующего и хронического течения болезни.

Апробация материалов диссертации. Материалы диссертации представлены на следующих научных форумах: V Международный симпозиум «Биологически активные добавки к пище и проблемы здоровья семьи», 27-29 июня 2001г.; 3-я Тихоокеанская научно-практическая конференция студентов и молодых ученых с международным участием «Актуальные проблемы экспериментальной, профилактической и клинической медицины», апрель 2002г.; 4-я Тихоокеанская научно-практическая конференция студентов и молодых ученых с международным участием «Актуальные проблемы экспериментальной, профилактической и клинической медицины», апрель 2003г. Работа апробирована на заседании ученого совета НИИЭМ СО РАМН (24'марта 2004г.) и рекомендована к защите.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 155 страницах машинописного текста, состоит из введения, 2 глав обзора литературы, 4 глав собственных исследований, заключения, выводов и библиографии. Список использованной литературы содержит 244 источников, в том числе 174 на русском языке. Материалы работы иллюстрированы 7 таблицами и 34 рисунками.

Основные положения, выносимые на защиту. 1. Тинростим как средство монотерапии и в комбинации с антибиотиком существенно снижает летальность и увеличивает продолжительность жизни животных в условиях экспериментальной псевдотуберкулезной инфекции, оказывая системный иммуномодулирующий эффект.

2. Тинростим повышает антиинфекционную резистентность при псевдотуберкулезной инфекции за счет стимуляции фагоцитарного звена иммунной системы. Ультраструктурные изменения макрофагов под действием тинростима подтверждают факт их активации.

3. Патоморфоз псевдотуберкулезной инфекции под влиянием тинростима, прослеженный в экспериментах in vivo, свидетельствует об эффективности препарата как при монотерапии, так и особенно в сочетании с этиотропной антибактериальной терапией. В результате уменьшаются явления септикопиемии, усиливаются репаративно-регенераторные и иммуноморфологические изменения в органах» с формированием местного (тканевого) иммунитета.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ.

Материал и методы исследования. При выполнении экспериментов использовали штамм Y.pseudotubercuiosis 2781 (I серовар) с плазмидой. вирулентности с мол. массой 48 Мд (pYV) из коллекции. НИИ эпидемиологии и микробиологии СО РАМН, выделенный от больного псевдотуберкулезом. LD50 составила 125 тыс. микробных тел. Культурально - морфологические, биохимические, вирулентные свойства определяли согласно инструкции «Эпидемиологическая, лабораторная диагностика иерсиниозов, организация и проведение профилактических и противоэпидемических мероприятий» №15-6/42 от 30.10.90 г.

Экспериментальная часть работы выполнена на 38 морских свинках весом 300-350 гр., а также на 1885 неинбредных мышах и 20 мышах линии BALB весом 16-18 гр. Все животные были получены из питомника РАМН "Столбовая" и находились на стандартной диете в боксированных помещениях с соблюдением всех правил и международных рекомендаций Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых в экспериментальных работах, «Правил проведения работ и использования экспериментальных животных», утвержденным приказом Министра

здравоохранения СССР от №755 от 12.08.1977г. При работе с животными были применены внутрибрюшинный, подкожный и пероральный способы введения материала, внутрибрюшинный способ заражения. В работе была использована кровь 30 здоровых доноров.

Таблица 1.

Объем исследований, выполненных в работе.

№ п/п Направление исследований Методы исследований Объем работы

1. Изучение ультраструктуры макрофагов Электронная (трансмиссионная, сканирующая) микроскопия 20 мышей линии ВАЬВ (20 блоков)

2. Определение функциональной-активности перитонеальных макрофагов под действием < тинростима Показатели фагоцитоза 1 35 морскти свинок» (70 мазков)

3. Определение адгезивной активности и НСТ-тест на' перитонеальных макрофагах*, под действием тинростима Спектрофотометри, ческий метод 90 мышей, 102 образца

4. Исследование влияния тинростима па активность ферментов антаоксидантной системы (супероксиддисмутаза, катал аза, глутатионпероксидаза, глутатионредуктаза Спектрофотометри ческий метод 25 мышей, 75 образцов

5. Определение действия тинростима на продукцию • цитокинов перитонеальными макрофагами Электрохемилюми несцентный, метод, твердофазного > иммунофермент • ного анализа кровь 30-доноров, 102 пробы

6. Изучение действия тинростима на исход экспериментального псевдотуберкулеза Выживаемость и продолжительность жизни 190 мышей

7. Высеваемость • микроба из печени и селезенки 980 мышей, 1960 кусочков органов

8- Изучение патоморфоза экспериментального псевдотуберкулеза > ; Патоморфологи-ческий с окраской > мазков гемотоксилином и эозином 30 морских свинок (150 образцов), 240 мышей (1200 образцов)

9. Статистическая обработка -результатов программа InStat-Guide Version 3.01; 32 bit for Win 95/NT. Creaed July 28,1998" вес цифровые показатели

Объектом, экспериментального изучения был, тинростим -полипептид, полученный из оптических ганглиев промыслового кальмара Berriteuthis magister в лаборатории биохимии сырья Тихоокеанского научно-исследовательского рыбохозяйственного центра. Препарат растворим в воде и 0,85%-ном растворе хлорида натрия, представляет собой смесь 45 пептидных фракций. Основная масса тинростима представлена пептидами с молекулярной массой от 1 до 12,5 кД. Препарат вводили животным подкожно или перорально.

В работе использовали гентамицин - антибиотик широкого спектра действия из группы аминогликозидов. Концентрация активного вещества -0,04г гентамиципа сульфата в 1 мл препарата. Изготовитель: ОАО «Дальхимфарм».

Привлечение перитонеальных макрофагов осуществляли внутрибрюшинным введением 10% пептона (1 мл для мышей и 2 мл для морских свинок), полученные перитонеальные макрофаги отмывали трижды раствором Хенкса.

Монослойные культуры макрофагов морских свинок готовили по методу Н.И. Брауде (1964) и инфицировали Y, pseudotuberculosis в соотношении макрофаг по отношению к микробу 1:10.

Изучение влияния тинростима на функциональную активность макрофагов проводили в системах in vivo и in vitro по методу В.М. Бермана и Е.М. Славской.

Определение активности ферментов проводили по методам: Л.Б. Юсуповой (1989) - для глутатионредуктазы (ГР), А.А. Савченко (1991) -для. глутатионпероксидазы (ГП), по Н. АеЫ (1984) - для каталазы, С. Beachamp at el (1971) - для супсроксиддисмутазы (СОД).

Выделение мононуклеарных лейкоцитов из периферической крови проводили на градиенте плотности фиколл-верографин.

Оценку очищения органов от возбудителя проводили путем посевов взвеси органов на питательную среду 67 с последующим подсчетом КОЕ.

Эффект противоинфекционной активности исследуемого препарата на модели псевдотуберкулезной инфекции оценивали по продолжительности жизни и проценту выживших животных.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

Влияние тинростима на клетки системы мононуклеарных фагоцитов. В настоящем разделе работы были изучены некоторые механизмы действия тинростима на клетки системы мононуклеарных фагоцитов.

Электропномикроскопическое исследование макрофагов от животных, получавших тинростим, а также этих клеток, непосредственно обработанных пептидом, имело цель определить изменения структуры и топографической организации макрофагов под действием иммунокорректора. В обеих системах мы получили аналогичные результаты. Поверхность увеличенных в размерах клеток состояла из многочисленных гребнеподобных выростов, различных по величине и превышающих размеры псевдоподий интактных клеток. Наличие включений внутри многочисленных вакуолей, уплотнение матрикса митохондрий, преобладание в ядре макрофагов диспергированного хроматина, увеличение рибосомальной насыщенности цитоплазмы свидетельствовали об активизации биоэнергетических и метаболических процессов в перитонеальных макрофагах после стимуляции тинростимом in vitro и in vivo.

Для определения действия тинростима на фагоцитарную активность макрофагов морским свинкам однократно подкожно вводили тинростим, полученные от них перитонеальные макрофаги заражали вирулентным возбудителем псевдотуберкулеза (табл.1). Было установлено, что количество участвующих в фагоцитозе макрофагов и их переваривающая активность возрастали уже через 1 час. Исследование прямого действия тинростима на монослойную культуру перитонеальных макрофагов, полученных от морских свинок, позволило установить, что через час процент вовлеченных в фагоцитарный процесс клеток и число поглощенных микробов одним макрофагом также возрастали. В обеих системах через 12 часов мы наблюдали полное уничтожение Y. pseudotuberculosis стимулированными макрофагами, тогда как в контрольных образцах через 24 часа наблюдалась гибель всех макрофагов. Как видно, в условиях наших экспериментов тинростим стимулировал не только поглотительную, но и переваривающую активность макрофагов

Таблица 1.

Фагоцитарные показатели макрофагов морских свинок при применении тинростима в системах in vivo и in vitro.

Время наблюдения, час Показатель активности Фагоцитарная активность макрофагов

Контрольные макрофаги Макрофаги, активированные тинростимом

in vitro in vivo

1 ФП, % 54,6 ±2,8 76,4 ±5,2* 84,6 ±3,9 *

ФЧ 2,6 ±0,09 6,9 ±1,3 * 8,2 2,7 *

6 ФП, % 82,1 ±3,7 36,0 ±4,2 * 28 ±4,1 *

ФЧ 3,9 ±0,6 2,1 ±0,9 * 1,8 ±0,4 *

12 ФП,% 88,6 ±5,7 микроорганизмов нет микроорганизмов нет

ФЧ 4,9 ±1,2

24 ФП, % макрофаги разрушены

ФЧ

опытные по сравнению с контролем

как при введении в организм животных, так и в системе in vitro.

Исследовано влияние тинростима на адгезивные свойства, синтез АФК и активность антиоксидантных ферментов перитонеальных макрофагов мышей в динамике без дополнительной антигенной стимуляции инфекционным агентом. Повышение адгезивной активности макрофагов в системе in vivo в 1,6 раза наблюдалось уже через 4 часа после воздействия тинростима.

Установлено, что тинростим в системе in vitro, вызывал дозозависимое усиление способности макрофагов к продукции АФК (табл.2,3). В системе in vivo тинростим стимулировал выработку супероксид-аниона также через 4 часа после введения. Кроме того, макрофаги, стимулированные тинростимом, не отвечали на рестимуляцию зимозаном в обеих системах. Положительное воздействие на выработку макрофагами АФК в системе in vitro и in vivo показывает, что исследуемый препарат может как. непосредственно воздействовать на мембрану макрофагов, так и опосредованное - через систему цитокинов и другие механизмы.

Стимуляция выработки макрофагами АФК под действием тинростима ведет к повышению активности системы антиоксидантной защиты.

При выборе иммуномодуляторов P.M. Хаитов (1998-2001) рекомендует учитывать их антиоксидантное действие, а также тот факт, что наиболее эффективными защитными свойствами считаются препараты, которые в системе in vivo наряду со стимуляцией НСТ-теста увеличивают активность супероксиддисмутазы (Устинов Б.С. и соавт., 1988). В результате проведенных нами исследований было установлено (рис.1), что уже через 24-48 часов после парентерального введения тинростим оказывал стимулирующее влияние на ферменты антиокислительной системы макрофагов. К 72 часам активность большинства ферментов достоверно не

Таблица 3. Продукция супероксид-аниона макрофагами при введении тинростима в системе in vitro (по НСТ-тесту).

Группа Результат Индекс стимуляции

Спонтанный Индуцированный Спонтанный Индуцированный

Контроль 54 ±7 78 ±7

Тинростим в конечной концентрации 0,1 мкг/мл 53 ±4 68 ±6 1 0,8

Тинростим в конечной концентрации 0,01 мкг/мл 104 ±14 * 96 ±11 * 2 1,2

Тинростим в конечной концентрации 0,001 мкг/мл 82 ±9* 82 ±7 1,5 1

* р < 0,01 в сравнении с контролем

Таблица 4. Продукция супероксид-аниона макрофагами при введении тинростима в системе in vivo (по НСТ-тесту).

Группы Контроль Через 4 часа Через 1 сутки Через 2 суток Через 3 суток

Тип теста Спонт анный Индуцир ованный Спонт анный Индуцир ованный Спонт анный Индуцир ованный Спонт анный Индуцир ованный Спонт анный Индуцир ованный

Результаты 54 ±7 78 ±7 164 ±9* 161 ±13* 160±11» 165 ±15* 66 ±9 79±10 57 ±4 66 ±4

Индекс стимуляции 3 1,8 2,9 1,8 1,2 1 1 0,8

* р < 0,01 в сравнении с контролем

Рис.1

Динамика изменения активности антиокислительных ферментов макрофагов мышей при однократном парентеральном введении тинростима (0,05 мг/кг).

а) СОД, б) каталаза, в) ГП, г) ГР По оси абсцисс -время от введения тинростима до вскрытия, час: 1- контроль, 2- 4,3- 24,4- 48, 5- 72 часа.

По оси ординат - единицы активности фермента а) условн. единицы /10 млн кл, б) нмоль Н2О2 / мин на 10 млн кл, в) нмоль НАДФ / мин на 10 млн кл, г) нмоль НАДФ / мин на 10 млн кл Примечание: * - р 0,01 относительно контроля

отличалась от контрольных значений, исключение составляла ГР, активность которой продолжала оставаться на высоком уровне, что по нашему мнению говорит об активации всей антиоксидантной системы и накоплении окисленной формы глутатиона в ходе других реакций.

Это позволяет предполагать, что однократное введение тинростима кратковременно повышает активность антиокислительных ферментов в макрофагах без нарушения окислительно - антиокислительного баланса.

Гуморальная составляющая межклеточных взаимодействий в иммунной системе опосредуется продуктами взаимодействующих клеток -цитокинами.

Нами было установлено, что тинростим не оказывает влияния на выработку клетками системы мононуклеарных фагоцитов ФНО-а, но вызывает повышение уровня других провоспалительных цитокинов. Уровень спонтанной секреции ИЛ-ф составлял 893 ± 614 pg/ml, исследуемый препарат стимулировал секрецию этого цитокина макрофагами (2625 1653 pg/ml). При исходно средненормальных значениях ИЛ-8 (59 49 pg/ml) тинростим стимулировал его выработку в крови доноров опытной группы (1449 ±92 pg/ml). В случаях повышенной и нормальной спонтанной секреции этого цитокина, тинростим проявлял свойства-модулятора. По-видимому, определенный вклад в повышение антиинфекционной резистснтности организма вносит обусловленное тинростимом повышение уровня ИЛ-1 и ИЛ-8, которые являются аутокринными стимуляторами защитных функций макрофагов.

Действие тинростима на- исход экспериментального псевдотуберкулеза. Штамм Yersinia pseudotuberculosis 2781, с которым мы работали, выделен от больного и содержит плазмиду вирулентности 48 МД, является высоко вирулентным, приводящим к генерализации инфекции и гибели животных. В первой серии экспериментов была

исследована выживаемость белых мышей при использовании различных схем введения препарата (табл.5).

Таблица 5. Выживаемость мышей при различных сроках парентерального введения тинростима.

№ Группа животных выживаемость, % М±ш<

1. Тинростим введен за 1 сутки до заражения 53,3 ±9 *

2. Тинростим одновременно с заражением однократно 13,3 ±5,1 *

3. Тинростим вводили в течение 7 суток до заражения 46,7 ±7,2 *

4. Тинростим введен через 1 сутки после заражения' 33,3 ±4,3 *

5. Тинростим'вводили в течение ? суток после заражения 66,7 ±7*

6. Контроль 0

* р 3),01 опытные в сравнении с контролем

Лучшие результаты были получены, при подкожном введении тинростима в течение 7 дней после заражения, а также при профилактическом подкожном введении тинростима. На основании полученных данных можно заключить, что профилактическое применение тинростима и использование его. в ранние сроки после заражения позволяет значительно повысить выживаемость белых мышей при заражении смертельной дозой Y. pseudotuberculosis.

Для решения вопроса о предпочтительном способе введения тинростима препарат применяли подкожно и пероралыю, начиная с различных сроков относительно момента заражения (табл.5). Лучшие результаты по выживаемости и продолжительности жизни были получены

при применении тинростима, начиная с 3х суток после заражения, независимо от способа введения препарата при гибели всех животных в контроле.

Таблица 6. Выживаемость и средняя продолжительность жизни мышей, зараженных Y. pseudotuberculosis, в зависимости от срока и способа введения тинростима.

№ Группа животных выживаемость, % М±ш продолжительность жизни, дни М±ш

1. контрольная группа - 5,8 ±1

2. тинростим per os с 3 суток после заражения 66,7 ±2 21,3 ±2,3 *

3. тинростим per os с 5 суток после заражения 53,3 ±4 17,9 ±2,1 *

4. тинростим подкожно с 3 суток после заражения 67,7 ±8 21,5 ±4*

5. тинростим подкожно с 5 суток после заражения 60+4 18,8 ±3,2*

* р ^),01 опытные в сравнении с контролем

Таким образом, раннее применение тинростима относительно времени заражепия даже в качестве средства монотерапии независимо от способа введения предотвращает гибель более половины мышей при заражении смертельной дозой возбудителя псевдотуберкулеза.

Исследование влияния тинростима (начиная с 3,5 и 7 суток) в сочетании с этиотропной терапией гентамицином начиная с первых суток после заражения псевдотуберкулезом показало, что достоверных различий в выживаемости и продолжительности жизни при выбранных схемах лечения нет.

По данным Г.П. Сомова и соавт. (1990), больные псевдотуберкулезом зачастую не сразу обращаются за медицинской помощью, а спустя 3-7 дней и более после начала болезни. Учитывая это,-наши результаты можно считать обоснованием для применения иммунокорректора в комплексе лечения псевдотуберкулеза «с момента обращения за медицинской помощью.

Элиминация иерсиний из организма была прослежена в динамике (30 суток после заражения). Выявлено значительное возрастание показателей выживаемости и продолжительности жизни в опытных группах по сравнению с контролем. Полное очищение органов от возбудителя при парентеральном введении тинростима (с 3 и 5 суток) и при пероральном применении (с 3 суток) происходило к 21 суткам после заражения, тогда как в контрольной группе возбудитель продолжал высеваться. При использовании гентамицииа в сочетании с тинростимом при различных схемах введения иммуномодулятора лучшие результаты были получены в группах, где тинростим применялся с ранних сроков (3 и 5 сутки после заражения). Полное очищение органов происходило к 14 суткам при сохраняющейся обсемененности органов в контроле.

Мы снова пришли к выводу, что раннее введение тинростима способствует активации фагоцитарных процессов и скорейшей элиминации микроорганизмов из исследованных органов как при изолированном применении' тинростима, так и в сочетании с антибиотиком.

Тинростим способствует повышению выживаемости животных в результате активации киллинга возбудителя фагоцитами и освобождения органов от него.

Патоморфоз экспериментального псевдотуберкулеза при применении тинростима. Эффективность применения тинростима в качестве средства монотерапии была подтверждена в опытах по изучению патоморфоза

псевдотуберкулезной инфекции в эксперименте на морских свинках, зараженных 100-процентной летальной дозой вирулентного штамма 2781 Y. pseudotuberculosis. Наиболее демонстративно явления патоморфоза септической псевдотуберкулезной инфекции проявлялись в органах-мишенях - печени, селезенке, брызжеечных лимфатических узлах, легких. Введение тинростима значительно уменьшало бактериальную обсемененность органов. Гемоциркуляторные расстройства, характерные для ДВС-синдрома при септической инфекции, практически исчезали, отмечались резорбтивные явления в некротических очагах с очищением их от клеточного детрита, а также выявлялись репаративные изменения в органах-мишенях. Кроме того, тинростим усиливал инфильтративно -пролиферативные изменения с развитием более или менее выраженного гранулематозного воспаления с нарастанием реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ). Картина лимфатических узлов и селезенки указывала на уменьшение тяжести иммунодефицитного состояния в сравнении с контрольными группами. Однако это отчетливо определялось только у животных после перорального введения тинростима. Вероятно, при отсутствии антибактериальной терапии раннее парентеральное введение тинростима может усугублять функциональную недостаточность лимфоидных органов, являющихся мишенями при псевдотуберкулезной инфекции.

Применение тинростима в комплексе с этиотропной терапией гентамицином, оказало более существенное влияние на патологический процесс в органах-мишенях. В опытных группах скопления, бактерий в тканях не визуализировались, уменьшалась обширность некротических очагов в печени и селезенке, что связано с бактерицидным действием антибиотика, на возбудителя, факторы патогенности которого (в частности термостабильный токсин) вызывают прямое повреждение паренхимы органов (Разник С.Д. 1999). Эффект тинростима проявляется стимуляцией

инфильтративно-иролиферативных изменений в виде образования макрофагально-лимфоидных инфильтратов и гранулем в печени, гигантоклеточной реакции в селезенке, а также фибробластической реакцией с инкапсуляцией некротических очажков. Введение тинростима в комплексе с гентамицином. вызывало более отчетливую гиперплазию лимфоидной ткани с преобладанием реакции в Т-зависимых зонах (клеточный иммунитет), что нивелировало, состояние вторичного иммунодефицита.

Регресс деструктивных и гемоциркуляторных изменений в органах происходил эффективнее при более раннем применении тинростима (3-5 сутки после заражения Y. pseudotuberculosis). При парентеральном (подкожном) введении препарата более интенсивно выражены «явления иммунного гранулематозного воспаления, с преобладанием ГЗТ, сопровождающейся сосудистой реакцией.

Таким образом, тинростим приводит в движение всю иммунную систему. Как показали наши исследования, препарат активирует макрофаги (центростремительная активация); что является предпочтительным при выборе иммунокорректора (Хаитов P.M. 1995, 2000).

ВЫВОДЫ

1. Тинростим является эффективным иммуномодулятором и может быть рекомендован для применения его с профилактической и лечебной целью в комплексном лечении больных псевдотуберкулезом.

2. Тинростим существенно повышает выживаемость и продолжительность жизни мышей при применении его в ранние сроки независимо от способа введения.

3. Тинростим в значительной степени стимулирует поглотительную и переваривающую активность макрофагов по отношению к

возбудителю псевдотуберкулеза.

4. Ультраструктурные изменения перигонеальных макрофагов свидетельствуют о том, что тинростим при прямом воздействии на клеточную мембрану вызывает активацию функционального состояния макрофагов с появлением у них признаков, указывающих на повышение фагоцитарных, белоксинтстических и биоэнергетических процессов.

5. Тинростим стимулирует адгезивные свойства перитонеальных макрофагов мышей в системе in vivo, продукцию этими клетками супероксид-аниона (in vivo и in vitro) и активность ферментов антиокислительной системы (супероксиддисмутаза, кататаза, глутатионпероксидаза, глутатионредуктаза) в системе in vivo.

6. Тинростим модулирует продукцию макрофагами провоспалительных цитокинов ИЛ- 1(3 и ИЛ-8 и не оказывает влияния на выработку ФНОа

7. Патоморфоз экспериментальной псевдотуберкулезной инфекции у морских свинок при применении тинростима. проявляется в виде отчетливого уменьшения количества скоплений бактерий в органах, снижения интенсивности ДВС-синдрома, стимуляции макрофагальной реакции с резорбцией клеточного детрита в очагах воспаления.

8. На модели псевдотуберкулезной инфекции у неинбредных мышей показано, что тинростим в сочетании с этиотропной терапией гентамицином значительно уменьшает выраженность некротического компонента патологического процесса и в целом септикопиемии, а также явлений вторичного иммунодефицита с формированием местного (тканевого) иммунитета в органах.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Полученные экспериментальные данные позволяют нам

рекомендовать применение тинростима в комплексном лечении псевдотуберкулеза на раннем этапе инфекции с целью предотвращения рецидивов, сокращения сроков лечения и нахождения больного в стационаре. Результатом диссертационной работы является внедрение в работу инфекционного филиала В/Ч 26826 кишечного инфекционного отделения (№25) и инфекционного отделения 2ой Краевой клинической больницы биологически активной добавки к пище тинростима для стимуляции иммунитета у больных.

Кроме коррекции нарушений механизмов антиинфекционной защиты и повышения эффективности антибактериальной терапии, тинростим может оказаться ценным для усиления специфической иммунотерапии и иммунопрофилактики псевдотуберкулеза, экстренной индукции неспецифической резистентности в эпидемически опасной ситуации, а также при возможном контакте с неизвестным возбудителем (превентивное применение) и в других случаях повышенного риска возникновения инфекционного заболевания или безуспешности традиционных средств терапии.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ.

1. Взаимодействие возбудителя псевдотуберкулеза и его термостабильного токсина клетками системы мононуклеарных фагоцитов и влияние на этот процесс тинростима. // Тихоокеанский медицинский журнал. - 2001. - С. 128-129 (соавт. Исачкова Л.М., Плехова Н.Г., Беседнова Н.Н.)

2. Патоморфология экспериментальной исевдотуберкулезной инфекции на фоне применения тинростима. // Тихоокеанский.

медицинский журнал. - 2001. - С. 21-23 (соавт. Исачкова Л.М., Плехова Н.Г., Беседнова Н.Н.)

3. Иммунотропное действие композиции «тинростим + хитозан». // Тез. докл. V Международного симпозиума «Биологические добавки к пище и проблемы здоровья семьи». - 2001. - С. 89-91 (соавт. Запорожец Т.С., Иванушкао Л.А., Боровская ГА, Макаренкова И.Д.).

4. Влияние тинростима на продолжительность жизни мышей и высеваемость Y. pseudotuberculosis из органов животных при экспериментальной псевдотуберкулезной инфекции. // Актуальные проблемы экспериментальной, профилактической и клинической медицины.—Владивосток.—2002.—С.37.

5. Влияние тинростима на систему антиокислительных ферментов макрофагов. // Актуальные проблемы экспериментальной, профилактической и клинической медицины. - Владивосток. - 2003. - С.38 (соавт.Запорожец Т.С., Иванушко Л.А., Боровская ГА, Макаренкова И.Д).

6. Влияние тинростима на антиокислительную ферментную систему макрофагов мышей. // Дальневосточный журнал инфекционной патологии. - 2003. - С. 81-83 (соавт. Долматова Л.С., Эпштейн Л.М.).

№-8 0 4 9

Автореферат Пушкарева Татьяна Владимировна

Экспериментальное обоснование клинического применения тинростима при псевдотуберкулезной инфекции 03.00.07 - микробиология

Подписано в печать 07.04.2004 Формат 60x84/16. Усл.Печ.Л. 1,5 Тираж 100 экз. Заказ 83.

Отпечатано 0 0 0 «ПК «Полигон» 690002, г.Владивосток, Океанский пр-т, 157

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Пушкарева, Татьяна Владимировна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРА ТУРЫ.

ГЛАВА 1. Современные представления об аштшнфещионной резистентности организма.

1.1.Клеточные н гуморальные факторы защиты.

1.2. Антшшфекционная резистентность при псевдотуберкулезе.

ГЛАВА 2. Иммуноактивные пептиды и их применение при инфекционных болезнях.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

ГЛАВА 3. Материалы и методы исследований.

ГЛАВА 4. Влияние тинростима на клетки системы монопуклеарных фагоцитов.

4.1. Трансмиссионная электронная микроскопия.

4.2. Сканирующая электронная микроскопия.

4.3. Действие тинростима на фагоцитарную активность перитоиеальных макрофагов морской свинки.

4.4. Действие тннростима на адгезивную активность макрофагов.

4.5. Влияние тинростима на продукцию активных форм кислорода.

4.6. Влияние тннростима на антиоксидантную систему макрофагов.

4.7. Действие тинростима на продукцию цитокинов моноиуклеарными фагоцитами периферической крови.

ГЛАВА 5. Действие тинростима на исход экспериментального псевдотуберкулеза.

ГЛАВА 6. Патоморфоз экспериментального псевдотуберкулеза при применении тинростима.

6.1. Патоморфологические изменения при псевдотуберкулезе у морских свинок, леченных тинростимом.

6.2. Патоморфологические изменения у белых мышей при применении тинростима на фоне этиотропной терапии псевдотуберкулеза.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Экспериментальное обоснование клинического применения тинростима при псевдотуберкулезной инфекции"

Многолетнее комплексное изучение псевдотуберкулезной инфекции на Дальнем Востоке позволило раскрыть многие вопросы патогенеза и иммунитета этой нозологической формы. Установлено, что при этом инфекционном заболевании развивается вторичное иммунодефицитное состояние, приводящее в ряде случаев к тяжелому рецидивирующему затяжному течению (Исачкова ЛМ., 1990, Сомов Т.П. и соавт. 1990). В 2,57,2% случаев болезнь заканчивается хронизацией процесса (Бениова Н. 2003, Борисова М.А. 1991,). Поскольку возбудитель псевдотуберкулеза - Yersinia pseudotuberculosis - является факультативным внутриклеточным паразитом, преимущественным местом сохранения которого являются мононуклеарные фагоциты, можно считать, что длительная лерсистенция возбудителя в организме может определяться в значительной степени этим фактором. При этом секретируемые белки наружной мембраны иерсиний (Yops) вызывают апоптоз макрофагов в ассоциации с угнетением продукции этими клетками ФНО-ос (Bingisser P. et al, 1996, Cornells et al, 1997).Согласно современным представлениям, фагоцитарная система рассматривается как важнейший эффектор структурного гомеостаза, в котором реакции, приводящие к киллингу возбудителя, являются частью каскада взаимосвязанных и взаимообусловленных реакций, направленных на защиту организма от эндогенных и экзогенных факторов, нарушающих постоянство внутренней среды макроорганизма (Хаитов P.M. 1999). Дисбаланс, развивающийся на уровне фагоцитирующих клеток, с угнетением широкого спектра функций полиморфноядерных лейкоцитов и клеток системы, мононуклеарных фагоцитов, играет решающую роль в исходе псевдотуберкулезной инфекции (Плехова Н.Г. и соавт., 1997, 1998). Такие нарушения, безусловно, требуют иммунологической коррекции.Несмотря на то, что за последние десятилетия было создано достаточно много лекарственных средств, обладающих иммунотропной активностью, попрежнему существует дефицит высокоэффективных и безопасных иммунокоррегирующих препаратов.Сведений о применении иммунокорректоров при псевдотуберкулезе в литературе очень мало (Запорожец Т.С., 1986, Прокопенкова А.П., 1989, Тартаковская Р.А., 1989, Ющук Н.Д. и соавт., 1995). Экспериментальные исследования А.К. Гажа (1994) и А.А. Логвиненко (2000, 2001) показали, что тинростим - пептид из нервной ткани промыслового вида кальмара - является эффективным стимулятором фагоцитарной активности ПМЯЛ и макрофагов и снижает патогенное действие токсина возбудителя псевдотуберкулеза.Тинростим разрешен к применению в виде биологически активной добавки. В настоящее время идет подготовка к его клиническим испытаниям в качестве лекарственной формы.ЦЕЛЬ РАБОТЫ. Исследовать фагоцитозстимулирующую активность и терапевтическую эффективность тинростима на модели псевдотуберкулезной инфекции в эксперименте. Обосновать возможность его клинического применения при псевдотуберкулезе у людей.ОСНОВНЫЕ ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ.

1. Оценить значение макрофагов в защите организма от псевдотуберкулезной инфекции при применении тинростима.2. Изучить профилактическое и терапевтическое действие тинростима при экспериментальной псевдотуберкулезной инфекции.3. Определить оптимальные сроки и способ введения иммунокорректора для повышения выживаемости и продолжительности жизни животных.4. Изучить патоморфоз экспериментального псевдотуберкулеза под действием тинростима.НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ. В работе представлены новые данные, обосновывающие применение тинростима для профилактики и лечения экспериментального псевдотуберкулеза. Впервые установлено, что препарат значительно повышает выживаемость и продолжительность жизни животных, зараженных псевдотуберкулезом, независимо от способа его введения как при профилактической, так и при лечебной схеме его применения. Раскрыты некоторые механизмы повышения фагоцитарной активности макрофагов под действием иммунокорректора (повышение уровня адгезии, стимуляция выработки активных форм кислорода и активности ферментов антиокислительной системы этих клеточных элементов). Установлено регулирующее влияние тинростима на продукцию макрофагами провоспалительных цитокинов. Впервые прослежена в динамике морфологическая картина экспериментального псевдотуберкулеза на фоне применения антибактериальной, иммуномодулирующей и сочетаннои (антибиотик + тинростим) терапии. Впервые показаны ультраструктурные изменения макрофагов под действием тинростима.ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ. В работе экспериментально на моделях in vivo и in vitro обоснованы и сформулированы подходы к клиническому применению тинростима у больных псевдотуберкулезом. Результаты работы позволяют экстраполировать их и на другие инфекционные процессы с внутриклеточной персистенцией возбудителей (листериоз, сальмонеллез и др.), сопровождающиеся вторичным иммунодефицитом, при которых целесообразно применение иммуномодуляторов.ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ. Прикладное значение работы обусловлено обоснованием возможности использования тинростима в клинической практике при псевдотуберкулезе с целью снижения частоты случаев тяжелого затяжного, рецидивирующего и хронического течения болезни.АПРОБАЦИЯ МАТЕРИАЛОВ ДИССЕРТАЦИИ. Материалы диссертации представлены на следующих научных форумах: V Международный симпозиум «Биологически активные добавки к пище и проблемы здоровья семьи», 27-29 июня 2001г.; 3-я Тихоокеанская научнопрактическая конференция студентов и молодых ученых с международным участием «Актуальные проблемы экспериментальной, профилактической и клинической медицины», апрель 2002г.; 4-я Тихоокеанская научнопрактическая конференция студентов и молодых ученых с международным участием «Актуальные проблемы экспериментальной, профилактической и клинической медицины», апрель 2003г. Работа апробирована на заседании ученого совета НИИЭМ СО РАМН (24 марта 2004г.) и рекомендована к защите.По материалам диссертации опубликовано 6 печатных работ.ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ.

1. Тинростим как средство монотерапии и в комбинации с антибиотиком существенно снижает летальность и увеличивает продолжительность жизни животных в условиях экспериментальной псевдотуберкулезной инфекции, оказывая системный иммуномодулирующий эффект.2. Тинростим повышает антиинфекционную резистентность при псевдотуберкулезной инфекции за счет стимуляции фагоцитарного звена иммунной системы. Ультраструктурные изменения макрофагов под действием тинростима подтверждают факт их активации.3. Патоморфоз псевдотуберкулезной инфекции под влиянием тинростима, прослеженный в экспериментах in vivo, свидетельствует об эффективности препарата как при монотерапии, так и особенно в сочетании с этиотропной антибактериальной терапией. В результате уменьшаются явления септикопиемии, усиливаются репаративно-регенераторные и иммуноморфологические изменения в органах с формированием местного (тканевого) иммунитета.Выражаю глубокую благодарность научным руководителям диссертации академику РАМН, доктору медицинских наук, профессору Н.Н. Беседновой и доктору медицинских наук Л.М. Сомовой за предоставленную тему работы, всестороннюю помощь при ее выполнении, за понимание, терпение и тактичность по отношению к автору.За деловые советы и помощь в проведении экспериментов и обработке полученных результатов выражаю искреннюю признательность д.м.н., проф.А.А. Максимовичу, к.б.н. Л.С.Долматовой, к.б.н. Н.Г.Плеховои, сотрудникам лаборатории иммунологии, лаборатории патоморфологии и электронной микроскопии НИИЭМ СО РАМН.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Пушкарева, Татьяна Владимировна

1. Тинростим является эффективным иммуномодулятором и может быть рекомендован для применения его с профилактической и лечебной целью в комплексном лечении больных псевдотуберкулезом.2. Тинростим существенно повышает выживаемость и продолжительность жизни мышей при применении его в ранние сроки независимо от способа введения.3. Тинростим в значительной степени стимулирует поглотительную и переваривающую активность макрофагов по отношению к возбудителю псевдотуберкулеза.4. Ультраструктурные изменения перитонеальных макрофагов свидетельствуют о том, что тинростим при прямом воздействии на клеточную мембрану вызывает активацию функционального состояния макрофагов с появлением у них признаков, указывающих на повышение фагоцитарных, белоксинтетических и биоэнергетических процессов.5. Тинростим стимулирует адгезивные свойства перитонеальных макрофагов мышей в системе in vivo, продукцию этими клетками супероксид-аниона (in vivo и in vitro) и активность ферментов антиокислительной системы (супероксиддисмутаза, кататаза, глутатионпероксидаза, глутатионредуктаза) в системе in vivo.6. Тинростим модулирует продукцию макрофагами провоспалительных цитокинов ИЛ-1(3 и ИЛ-8 и не оказывает влияния на выработку ФНОое.7. Патоморфоз экспериментальной псевдотуберкулезной инфекции у морских свинок при применении тинростима проявляется в виде отчетливого уменьшения количества скоплений бактерий в органах, снижения интенсивности ДВС-синдрома, стимуляции макрофагальной реакции с резорбцией клеточного детрита в очагах воспаления.8. На модели псевдотуберкулезной инфекции у неинбредных мышей показано, что тинростим в сочетании с этиотропной терапией гентамицином значительно уменьшает выраженность некротического компонента патологического процесса и в целом септикопиемии, а также явлений вторичного иммунодефицита с формированием местного

(тканевого) иммунитета в органах.ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ Полученные экспериментальные данные позволяют нам рекомендовать применение тинростима в комплексном лечении псевдотуберкулеза на раннем этапе инфекции с целью предотвращения рецидивов, сокращения сроков лечения и нахождения больного в стационаре. Результатом диссертационной работы является внедрение в работу инфекционного филиала В/Ч 26826 кишечного инфекционного отделения (№25) и инфекционного отделения 2ой Краевой клинической больницы биологически активной добавки к пище тинростима для стимуляции иммунитета у больных.Кроме коррекции нарушений механизмов антиинфекционной зашиты и повышения эффективности антибактериальной терапии, тинростим может оказаться ценным для усиления специфической иммунотерапии и иммунопрофилактики псевдотуберкулеза, экстренной индукции неспецифической резистентности в эпидемически опасной ситуации, а также при возможном контакте с неизвестным возбудителем (превентивное

применение) и в других случаях повышенного риска возникновения инфекционного заболевания или безуспешности традиционных средств терапии.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Пушкарева, Татьяна Владимировна, Владивосток

1. Арион В.Я., Иммунологически активные факторы тимуса // Итоги науки и техники. Сер. Иммунология. -М/.ВИНИТИ, 1981. -Т.9. -С . 10-50.

2. Арцимович Н.Г., Корнев А.В., Иванова Т.М. и др. Синдром хронической усталости и иммунной дисфункции // Иммунология. — 1994. - №6. — 10-13.

3. Атлас сканирующей электронной микроскопии клеток, тканей и органов. / Под ред. О.В. Волковой, В.А. Щахламова, А.А. Миронова. -М.: Медицина, 1987.-464 с.

4. Афонина Г.Б., Русин Е.В., Брюзгина Т.С. Изучение антиоксидантной устойчивости иммунокомпетентных клеток // Клиническая лабораторная диагностика. - 1998. -№6. - 35-37.

5. Белевская Р.Г., Михайлова А.А., Фонина Л.А. и др. Миелопид-3 - костномозговой медиатор, стимулирующий фагоцитарную активность макрофагов //Докл. РАН. - 1998. - Т. 358. - 847-849.

6. Белокрылов Г.А., Молчанова М.В., Попова О.Я. Стимуляция иммуногенеза нейротензином, пентагастрином, тимопентином и пути ее реализации // Бюлл. эксп. биол. - 1989. - №11. - 584-587.

7. Бениова Н. Органные поражения у детей, больных псевдотуберкулезом, в динамике болезни: клиника, диагностика, патогенез, исходы. Автореф. дисс. докт. мед. наук. - 2003. - Хабаровск. - 45 с.

8. Берман В.М., Славская Е.М. Завершенный фагоцитоз: Сообщение I. Новый методический принцип изучения завершенности фагоцитарной реакции. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 1985. — №3. -С.8-13.

9. Беседнова Н.Н. Экспериментальное и клинико- иммунологическое изучение псевдотуберкулезной инфекции: Дисс. ... докт. мед. наук. -М., 1979. -203с.

10. Беседнова Н.Н., Гажа А.К., Эпштейн Л.М. и др. Действие пептида из оптических ганглиев моллюсков на функциональную активность макрофагов // Антибиотики и химиотерапия. - 1996. - Т.41. — №1. — 7-12.

11. Беседнова Н.Н., Запорожец Т.С. Иммунотропные свойства биополимеров из морских гидробионтов Вестник ДВО РАН. - 1993. - №415. - 37-45.

12. Беседнова Н.Н., Павлов И.Ф., Эпштейн Л.М. Влияние ганглиина на обучение. -Бюл. СО. РАМН. - 1999. - январь-март. - 83-84.

13. Беседнова Н.Н, Сергиенко А.К., Крылова Н.В. и др. Иммуноактивныи пептид, полученный из оптических ганглиев кальмара // Антибиотики и химиотерапия. - 1991. -т.36. -№7. -С.35-37.

14. Беседнова Н.Н., Эпштейн Л.М. Тинростим (пособие для врачей). Владивосток, 2003. - 48 с.

15. Беседнова Н.Н., Эпштейн Л.М., Боровская Г.А. и др. Перспективы перорального применения ганглиина в ветеринарии // Ветеринария. — 1998. -№6 . -С . 49-52.

16. Беседнова Н.Н., Эпштейн Л.М., Гажа А.К. Иммуноактивные пептиды из морских организмов // Тихоокеанский медицинский журнал. - 1999. - №3. -С. 50-54.

17. Бобырев В.Н., Почерняева В.Ф., Стародубцев Г. и др. Специфичность систем антиоксидантной защиты органов и тканей - основа дифференцированной фармакотерапии антиоксидантами // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 1994. - №1. - 47-54.

18. Бондаренко А.Л. Тималин в комплексной терапии больных гепатитом В // Иммунология. - 2001. - №2. - 42-45.

19. Бондаренко В.М. Факторы патогенности бактерий и их роль в развитии инфекционного процесса // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 1999. -№5. -С.34-39.

20. Борисов Л.Б. Медицинская микробиология, врусология, иммунология: Учебник.: М.: ООО «Медицинское информационное агенство». - 2001. -736 с.

21. Борисова М.А. Клиника иерсиниозов. -Вл-к: изд. ДВГУ, 1991. - 197 с.

22. Бухарин О.В. Биомедицинские аспекты персистенции бактерий. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 1994. - прил. - 4-13.

23. Бухарин О.В. Персистенция патогенных бактерий. -М. : Медицина, 1999. - 5-7.

24. Бухарин О.В. Персистенция патогенных бактерий: теория и практика. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 2000. - №4 прил. - 4-7.

25. Бухарин О.В., Усвяцов Б.Я., Чернова О.Л. Патогенетические особенности формирования бактерионосительства // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. -1996. - №2. - 98-101.

26. Внуков В.А. Получение и сравнительная характеристика тимозина морских млекопитающих. - Автореф. дисс. канд. биол. наук. -М. - 1987. -16 с.

27. Войно-Ясенецкий М.В. Биология и патология инфекционных процессов / АМН СССР. - Л.: Медицина, 1981. - 208 с.

28. Воложин А.И., Агапов. B.C., Сашкина Т.И. и др. Иммунореабилитация больных с острыми воспалительными процессами в челюстно-лицевой области // Int. on Immunorehabil. - 1997. - №4. - С, 173.

29. Воскресенский О.Н. Витамины-антиоксиданты и системность биологического ингибирования перекисного окисления липидов и биополимеров // Биофизические и физико-химические исследования в витаминологии. -М. - 1981. - 6-9.

30. Воскресенский О.Н. Значение системности биологического перекисного окисления липидов в атерогенезе // Биоантиокислители: Труды Московского общества испытателей природы. -М. - 1975. - 121- 125.

31. Воскресенский О.Н., Жутаев Н.А., Бобырев В.Н. Антиоксидантная система, онтогенез и старение (обзор) // Вопр. мед. химии. - 1982. - Т.28. - № 1,-С. 14-27.

32. Гажа А.К. Иммуноактивный пептид из оптических ганглиев кальмара: Дисс... канд. мед. наук. -Владивосток, 1994. - 162с.

33. Галанкин В.Н., Токмаков A.M. Проблемы воспаления с позиции теории и практики. Москва. - 1991. - 120 с.

34. Ганковская Л.В., Соколова Е.В., Крымкина Т.Н. и др. Оценка действия некоторых иммунологически активных препаратов в системе выработки фактора, угнетающего миграцию // Коррекция нарушений иммунитета в клинике и эксперименте. -М., 1985. - 56-60.

35. Герасимов A.M., Антиокислительная функция глутатиона // Проблемы молекулярной и клеточной патологии и фармакологии: Тез. докл. отчет, научн., конф. медико-биол. фак., ноябрь 1973. -М., 1973. - 53-54.

36. Герасимов A.M., Граменицкий П.М., Панченко Л.Ф. Внутриклеточные механизмы защиты от токсического действия кислорода // Гипербарическая оксигенация: Тез. докл. ПВсесоюзн. симпозиума. - М., 1976. - 251-252.

37. Гильмиярова Ф.Н., Радомская В.М., Кретова И.Г. и др. Шарафутдинова Ю.М., Пономарева Л.А. Синдром хронического утомления: объективные критерии метаболических нарушений // Клиническая лабораторная диагностика. - 1999. -№2. - 9-11.

38. Глушков А.Н. Иммунорегуляция клеточных взаимодействий // Иммунология. - 1989. - №4. - 10-13.

39. Голубович В.П., Кирнарский Л.И., Ахрем А.А. и др. Исследования структурных механизмов иммунотропного действия сывороточного фактора тимуса и его аналогов // Итоги науки и техники. Сер. Иммунология. - М.: ВИНИТИ, 1988.-Т.26.-С. 10-15.

40. Гриневич Ю.А., Чеботарев В.Ф., Никольский И.С. Иммунобиология гормонов тимуса. -Киев: Здоровья, 1989. - 151 с.

41. Губанова А.Г., Битютская О.Е., Симонова Л.И. и др. Биполановый биологический радиопротектор из молюсков // V Рос. нац. контр. «Человек и лекарство». - Москва, 21-25 апреля. - 1998. - 360-361.

42. Демидов СВ. Влияние тималина на системы циклических неклеотидов и обмен Са2+ в Т-лимфоцитах сенсибилизированных животных // Иммунология и аллергология. - Киев: Здоровья, 1990. - Вып. 24. - 116-119.

43. Дроздова Т.Г., Кашуба Э.А., Анцупова Л.Т. К вопросу иммунопатологических повреждений при псевдотуберкулезе у детей // Всесоюзная конф. «Молекулярные механихмы развития инфекционных заболеваний» : Тезисы докладов. -Звенигород, 1990. -С.31.

44. Дубина Е.Е. Биологическая роль супероксидного анион-радикала и супероксиддисмутазы в тканях организма // Успехи современной биологии. - 1989. -Т . 108. -№6. -С . 3-17. бО.Езепчук Ю.В. Патогенность как функция биомолекул. - М., Медицина. -1985.-240 с.

45. Ермолаев Е.Д., Лудрика Р. А. Основные проблемы комплексной переработки тимуса мелкопитающих // Биологически активные вещества при комплексной утилизации гидробионтов. - Владивосток. - 1988. - 64-65.

46. Запорожец Т.С. Влияние зостерина - пектина из морской травы Zosteria на выживаемость животных с экспериментальным псевдотуберкулезом // Всесоюзн. научн. практич. конф. «Иерсиниозы»: Тез. докл. - Владивосток, 1989.-С. 27-28.

47. Иммунодефицитные состояния / Под ред.- проф. B.C. Смирнов и проф. И.С. Фрейдлин - Спб: «Фолиант», 2000. - 568с.

48. Иммунологическое адъюванты. Докл. научной группы ВОЗ №595; Медицина, 1978. -46с.

49. Исачкова Л.М. Псевдотуберкулез (пато- и морфогенез): Дисс. ... докт. мед. наук.-М., 1990.-350 с.

50. Исачкова Л.М., Жаворонков А.А., Антоненко Ф.Ф. Патология пседотуберкулеза. Владивосток: Дальнаука, 1994. - 191 с.

51. Исачкова Л.М., Плехова Н.Г. Нейтрофильные лейкоциты и их влияние на функции макрофагов при некоторых бактериальных инфекциях // Медицинский журнал России. - №1-2. - 1998. - 71-76.

52. Исмагилова З.И., Эткина Э.И., Школьная О.Н. и др. Комплексная терапия внутриклеточных инфекций у детей с бронхолегочной патологией // V нац. контр. "Человек и лекарство". - 1998. - 277.

53. Казьянин А.В., Юшков В.В. Иммунотропные эффекты молокина // Журн. микробиол. - 1998. - №2. - С 97-99.

54. Калинин А.В., Борисова М.А. Новое в изучении патогенеза иерсиниозов // Научн. практич. конф. «Инфекционная патология в Приморском крае»: Тез. докл.-Владивосток, 1994.-С. 138-139.

55. Каримов Х.Я., Иноятова Ф.Х., Дадажанов Ш.Н. Участие глутатиона в механизмах естественной детоксикации // Патология. - 1998. - №1. - 3-6.

56. Карр Я., Хэнко Б., Хенри Л., Уорд А. Лимфоретикулярные болезни: Пер. с ант. -М., 1978. -142 с.

57. Карсонова М.И., Пинегин Б.В., Хаитов P.M. // Практикующий врач. - 1998. - №12.-С.5-8.

58. Кашкин К.П. Цитокины иммунной системы: основные свойства и иммунобиологическая активность (лекция) // Клин. лаб. диаг. - 1998. - №11. -С . 21-32.

59. Китаев В.М. Плазмидный анализ Y. pseudotuberculosis и его применение для характеристики популяции микробы и микробиологического мониторинга. //Владивосток. - 1993. -23 с.

60. Ковальчук Л.В., Ганковская Л.В. Иммуноцитокины и локальная иммунокоррекция // Иммунология. - 1995. - №1. - 4-7.

61. Козлов В. А., Цимбалистов А.В., Некачалов В.В. и др. Влияние тимарина на процессы регенерации при переломах нижней челюсти // Стоматология. -1979.-№5.-С. 1-4.

62. Козодаев В.О., Орлов СМ., Богова А.В. и др. Эффективность комбинированной иммуникорригирующей терапии при бронхиальной астме // bit J/ on ImmunorehabiL - 1997. - №4. - 13.

63. Кокряков В.Н., Данилова М.А. Ультраструктурное проявление антимикробного действия катионных белков нейтрофилов. // Сб. науч. трудов «Вопр. иммунол. и молнк. биол.»: Тез. докл. - Нальчик, 1981.- Т.2. — 60.

64. Коротяев А.И., Бабичев А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. - СПб: «Специальная литература», 1998. - 592 с. i

65. Косовер H.C., Косовер Э. М. Глутатиондисульфидная система // Свободные радикалы в биологии. - М., 1979. - 65-95.

66. Крылова Н.В. Химиотерапевтические и иммуномодулирующие свойства глюкана из Crenomytilus grajanus при экспериметальных инфекциях. Дисс. канд. мед. наук. М., 1986. - 142 с.

67. Кудрина Н.В., Беседнова Н.Н., Вавилова Л.М. Система комплемента при бактериальных инфекциях // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 1997. -№5. - 74-77.

68. Кузнецов В.П., Чихладзе М.В., Сепиашвили Я.Р. Тактика иммунокорригирующего лечения при инфекциях // Аллергология и иммунология. - 2001. - Т.2. - №1. - 92-104.

69. Кузнецова Т.А. Иммуногенные и иммуномодулирующие свойства липополисахарида псевдотуберкулезного микроба. - Автореф. дисс. канд. мед. наук. -Новосибирск. - 1987.-20 с.

70. Кузник Б.И., Витковский Ю.А., Хавинсон В.Х. Влияние тималина и вилона на уровень провоспалительных цитокинов при отморожениях // Иммунология. - 2001. - №6. - 32-34.

71. Кузник Б.И., Морозов В.Г., Хавинсон В.Х. Цитомедины. - СПб. «Наука». - 1998.-305с.

72. Кулинский В.И., Колесниченко Л.С. Биологическая роль глутатиона //Успехи совр. биологии. - 1990. - Т. 110, Вып. 1. (4). - 20-33.

73. Кулинский В.И., Конесниченко Л.С. Структура, свойства, биологическая роль и регуляция глутатионпероксидазы //Успехи совр. биологии. - 1993. -Т.113.,Вып.1.-С. 107-122.

74. Куляшова Л.Б., Ценева Г.Я., Буйнович Ю.Б. Роль антигенов наружной мембраны Yersinia pseudotuberculosis в патогенезе и диагностике псевдотуберкулеза. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. — 1997. -№2. - 14-18.

75. Ленинджер А. Биохимия /пер. с англ. Под ред. акад. А.А. Баева Изд-во «Мир». М. - 1974. - 198 с.

76. Лилли Р. Патогистологическая техника и практическая гистохимия / Пер сангл.-М.э 1969.-206 с.

77. Лимфоциты: выделение, фракционирование и характеристика. Под ред. Д. Натвига, П. Перлманна, X. Викзелля, - М.; Мир, 1980. - 9-12.

78. Логвиненко А.А. Влияние термостабильного токсина Yersinia pseudotuberculosis на иммунную систему (экспериментальные исследования): Дисс... канд. мед. наук. -Владивосток, 2000. - 140с.

79. Лопухин Ю.М. Клинический опыт коррекции иммунной системы активным фактором тимуса (Т-активином) // Итоги науки и техники. Сер. иммунология. -М.: ВИНИТИ, 1982. - Т. 10. - 30-41.

80. Мазинг Ю.А. Гистологическая и цитохимическая характеристика экспериментальной и спонтанной псевдотуберкулезной инфекции: Дисс. ...канд. биол. наук. Санкт-Петербург, 1993. -345 с.

81. Мазинг Ю.А., Данилова М.А. // Моделирование и клиническая характеристика фагоцитарных реакции. - Горький, 1989. - 103-109.

82. Максимова О XL, Будажабон Г.Б., Кузник Б.И. Влияние тималина на течение гнойного перитонита у детей // Вестн. хирургии. - 1987. - Т. 138, №3.-С. 111-112.

83. Манько В.М., Петров Р.В., Хаитов P.M. Иммуномодуляция: история, тенденции развития, современное состояние и перспективы //Иммунология. - 2002. - Т.23. - №3. - 132-138.

84. Маянский А.Н., Маянский Д.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге. - Новосибирск: Наука, 1983. - 256 с.

85. Маянский А.Н., Невматулин А.Л., Маянский Н.А. Проблемы управления фагоцитарными механизмами иммунитета // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 1995. -№3. - С 21-26.

86. Маянский Д.Н., Щербаков В.И., Макарова О.П. Комплексная оценка функции фагоцитов при воспалительных заболеваниях. Метод, реком. -Новосибирск, 1988. - 123 с.

87. Михеенко Т.В., Громыхина Н.Ю., Козлов В.А., Лозовой В.П. Комплекс методов изучения иммунорегуляторной функции мононуклеарных фагоцитов при оценке иммунного статуса человека: Методические рекомендации. Новосибирск, 1991. -27с.

88. Морозов В.Г., Хавинсон В.Х. Характеристика и изучение тимуса (тимарина) // Докл. АН СССР. - №4. - 1004-1007.

89. Мотавкина Н.С., Малый В.П., Туркутюков В.Б. Рецидивирующий псевдотуберкулез (Иммуногенетика, клиника, иммунология). - М.: Голос, 1999. -145 с.

90. Мотавкина Н.С., Туркутюков В.Б., Каоеник Т.К. Способ получения иммуномодулирующих пептидов. А.с. 1836954 СССРб МКИ 5 А 61 К 35/28. - №4877893/14 Опубл. 30.08.93. Бюлл. №32.

91. Нестерова И.В., Колесникова Н.В., Чудилова Г.А. Иммуномодулирующие эффекты ликопида при экспериментальной депрессии нейтрофильных транулоцитов // Иммунология. - 1999. - №6. - 60-61.

92. Новиков B.C., Яковлев Г.М., Смирнов B.C. Биорегуляция в медицине катастроф. СПб.: Наука, 1992.-47 с.

93. Петрович Ю.А., Гуткин Д.В. Глутатионпероксидаза в системе антиоксидантной защиты мембран // Патол. физиология и эксперим. терапия. - 1981. -№5. -С . 76-78.

94. Пигаревский В.Е. Зернистые лейкоциты и их свойства. М., «Медицина», 1978. -128 с.

95. Пинегин Б.В. Современные представления о стимуляции антиинфекционного иммунитета с помощью иммуномодулирующих препаратов // Антибиотики и химиотерапия. — 2000. - Т.45. — №12. - 3-8.

96. Пиотрович А.К., Протасеня И.И. Об участии биологически активных веществ в развитии аллергических проявлений псевдотуберкулеза у детей // Всесоюзная науч.-практ. конф. (28-29 авг. 1986) : Тезисы докладов. -Владивосток, 1986.-С. 193-194.

97. Плейфер Д. Наглядная иммунология: Пер. с англ. - М: ГЭОТАР Медицина, 2000. - 96с.

98. Плехова Н.Г., Исачкова Л.М. К вопросу о взаимодействии нетрофилов и макрофагов в системе антиинфекционной защиты // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 1997. - №5. - 70-73.

99. Прокопенкова А.П. Динамика некоторых показателей иммунитета у больных иерсиниозами в процессе лечения Т-активином // Всесоюзн. научн. практич. конф. «Иерсиниозы»: Тез. докл. - Владивосток, 1989. - 59-60.

100. Разник Д. Характеристика биологического действия термостабильного токсина Yersinia pseudotuberculosis. Автореф. канд. мед. наук. Владивосток, 1999.-23 с.

101. Рябиченко Е.В,, Бондаренко В.М., Рябиченко В.В. Роль активных форм кислорода, генерируемых фагоцитами, в патогенезе заболеваний // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. — 2000. - №4. — 65-71.

102. Савченко А.А. Биолюминисцентное определение НАД- и НАДФ- зависимых глутамат дегидрогеназ лимфоцитов. // Лабораторное дело. -1991.-№11.-С. 22-25.

103. Санддер Н.Б. Гормоны тимуса китов и перспективы их использования в медицине: Дисс. ...канд. мед. наук. -Владивосток. - 1987.-350 с.

104. Сомов Г.П., Покровский В.И., Беседнова Н.Н. Псевдотуберкулез / АМН ССР. - М.: Медицина, 1990. - 240 с.

105. Степанов М., Малежик Л., Кижло Л. Эффект иммуномодулятора тималина при лечении больных вирусным гепатитом // Int. J. on Immunoreabilitation. - 1997. -№4. - P . 149. I

106. Стефани Д.В., Виноградов Т.В.. Ружицкая Е.А. и др. Функциональная клиническая иммунология - перспективное направление современной науки // Иммунология. - 2002. - №3. - 164-166.

107. Тарасенков В.Н., Орловская Л.Е, Андреев В.П. Т-активин в терапии глаукомы. // IV конгресс «Человек и лекарство», 1997. - 126.

108. Тартаковская Р.А. Клеточный иммунитет у детей с генерализованными формами иерсиниоза и влияние на него иммуникоррегирующей терапии // Всесоюзн. научн. практич. конф. «Иерсиниозы»: Тез. докл. - Владивосток, 1989.-С. 72-73.

109. Тарусов Б.Н. Авторегуляционная роль аншоксидантов при адаптации организмов к условиям внешней среды // Биофизика. - 1970.- № 2.-С. 324-332.

110. Тарусов Б.Н. Свободнорадикальные ценные реакции в лшшдах биологических систем // Свободнорадикальное окисление липидов в норме и патологии. -М., 1976.-С. 176-178.

111. Тимофеев В.Т., Минкин Л.Н., Головзин М.В. Тимопоэтин в лечении больных с сочетанной челюстно-лицевой травмой // IV конгресс «Человек и лекарство, 1997. -С . 298. 112. Тимченко Н.Ф. Материалы по микробиологической характеристике возбудителя дальневосточной скарлатиноподобной лихорадки (псевдотуберкулез человека): Автореф. дис. ... канд. мед. наук. -Владивосток, 1972. - 130 с.

113. Тимченко Н.Ф. Патогенетическое значение психрофильности Yersmia pseudotuberculosis. Автореф. дисс. д-ра мед. наук. - Владивосток, 1989. - 350 с.

114. Тимченко Н.Ф. Патогенность Yersinia pseudotuberculosis с более выраженной токсической функцией // Бюл. СО АМН СССР. - 1986. - №4. -С. 66-71.

115. Тимченко Н.Ф. Факторы патогенности Yersinia pseudotuberculosis и некоторые аспекты патогенеза псевдотуберкулеза // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 1997. - №5. - 25-29.

116. Тимченко Н.Ф., Сомов Г.П. К патогенезу псевдотуберкулеза // Сб. Иерсиниозы. - 1983. - 56-62.

117. Толыбеков А.С. // Морфофункциональные аспекты неспецифической резистентностии димиелинизированных заболеваний. - Л., 1981. - 18-24.

118. Турков М.К. Супероксиддисмутаза: свойства и функции // Успехи соврем, биологии. -1976.-Вып. 3. -С.341.

119. Тяготин Ю.В., Рыбакова Л.П., Тутова И.Ю. и др. Низкомолекулярный пептид лимфоидной ткани тимфотилин как модулятор иммунологических реакций // Иммунология. - 1999. - №3. - 36-38.

120. Устинов Б.С., Юркевич Ю.В., Данилейко А.В. и др. Иммуномодуляторы в инфекционной патологии,- М. -1988. - 100с.

121. Фрейдлин И.С. Иммунная система и ее дефекты. Руководство для врачей. СПб, 1998.-113 с.

122. Фрейдлин И.С. Система мононуклеарный фагоцитов. - М., «Медицина». -1984.-272 с.

123. Фридович Н. Радикалы кислорода, пероксид водорода и токсичность кислорода// Свободные радикалы в биологии. - М., 1979,- Т. 1. - 272-314.

124. Хавинсон В.Х., Жуков В.В. Пептиды тимуса и механизмы иммуномодуляции // Успехи совр. бтологии. - 1992. - ТЛИ, в.4. - 554-570.

125. Хаитов Р. М., Пинегин Б. В. Иммунодефицита: диагностика и иммунотерапия // Лечащий врач №2. - Т.З. - 1999. - 63-69.

126. Хаитов Р. М., Пинегин Б. В. Основные принципы иммуномодулирующей терапии //Биопрепараты. - 2001. - №12. - 2-5.

127. Хаитов Р. М., Пинегин Б. В., Андронова Т.М. Отечественные иммунотропные лекарственные средства последнего поколения и стратегия их применения // Лечащий врач. - 1998. - №4. - 46-51.

128. Хаитов P.M., Земсков В.М. Некоторые избранные проблемы функциональной активности макрофагов // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 1995. - №3. - 27-32.

129. Хаитов P.M., Пинегин Б.В. Основные задачи клинической иммунологии по изучению функциональной активности фаго1дитирующих клеток // Иммунология. - 1995. - №3. - 6-10.

130. Хаитов P.M., Пинегин Б.В. Современные представления о защите организма от инфекции // Иммунология. - 2000. - №1. - 61-64.

131. Хаитов P.M., Пинегин Б.В., Истамов Х.И. Экологическая иммунология. - М. -Изд-во ВНИРО. - 1995. - 220 с.

132. Худзик Л.Б., Морозова Т.И., Ребров А.П. Эффективность иммунокорригирующей терапии цитомединами при инфильтративном туберкулезе легких и хроническом бронхите // Казан, мед. журн. - 1994. -Том LXXV.-С. 412-417.

133. Чекановская Л.А., Генералов А.В. Влияние препарата гамма-план на продукцию ФНОос, ИЛ-1р, ИЛ-6 мононуклеарными клетками периферической крови человека in vitro // Вопросы медицинской химии. -2001. - Т.47, Вып. 2. - 34-41.

134. Чипенс Г.И., Веретенникова Н.И., Вегнер Р.Э. и др. Структурные основы действия пептидных и белковых иммуномодуляторов. - Рига. - 1990. - 322.

135. Чумаков В.Н., Осинская Л.Ф. Количественный метод определения активности цинк -, медь зависимой супероксиддисмутазы в биологическом материале // Вопр. мед.химии.-1977.-Т.23, №5.- 712-716.

136. Ширинский B.C., Жук Е.А. Проблемы фармако динамики и фармакокинетики иммуностимулирующих препаратов // Иммунология. -1994. -№6. -С . 27-29.

137. Шишкина М.Я., Мктчян Т.В., Соколова И.А. и др. Создание лечебно- профилактических средств для повышения естественнолй резистентности организма // IV Рос. нац. конгр. «Человек и лекарство», Москва, 8-12 апр., 1997: Тез. докл. -М., 1997. - 304.

138. Юсупова Л.Б. О повышении точности определения активности глутатионредуктазы эритроцитов // Лаб. дело. - 1989. - № 4. - 19-21.

139. Ющук Н.Д., Ценева Г.Я., Аленушкина Т.В. и др. Эффективность применения тимогена при экспериментальной инфекции, вызванной Y. enterocolitica//Журн. микробиол. - 1995. -№3. - 106-110.

140. Aebi H. Catalase in vitro. In: Methods in enzymology. Oldlander: 1984. - V.105.-P. 121-123.

141. Agrigoroaei St., Neacsu Т., Rotinberg P., Kelemen S., Oita N. hnmunomodulation effects of some low molecular weight agents // Rev. roum. biol. Ser. biol. anim. - 1996. -№2. - С 139-145.

142. Akerboom Т., Gather M., Sies H. Cellular hyperoxide metabolism: the roles of glutathione peroxidase and of catalase in liver // Bull. Eur. Physiopathol. Res. -1981. -Vol 17, Suppl. - P . 221-227.

143. Andhya Т., Schlesinger D.N., Goldstein G. Isolation and complete amino acid sequece of human thymopoietin and splenin //Proc. Nat. Acad. Sci. USA. - 1987. -Vol. 84,№11.-P. 3545-3549.

144. Babior B.M. Oxygen-dependent microbial killing by phagocytes // New England J. med. - 1978. - Vol. 298. - P. 659-668.

145. Bach I. R, Dardenne M. Studies on thymic products. Demonstration and characterization of a circolating thymic hormone // Immunol. - 1983. - Vol. 25, №3.-P. 353-366.

146. Beachamp C, Fridovich I. Superoxide dismutase: improved assays and an assay applicable to acrilamide gells. //Anal. Biachem. - 1971. -V.44. - №1. - P. 276-287.

147. Berggren M., Dawson J., Moldeus P. Glutathione biosynthesis in the isolated perfused rat lung, utilization of extracellular glutathione // FEBS Lett, 1984. - V. 176, №1.-P. 189-192.

148. Bielski J., Kaska M. Wplyw metalowych uzupelnien protelycznych na pocesy electrochemizne w jamie ustnej // Protet. Stomat- 1973.-Bd. 23. - N 5. - P. 379-386.

149. Bingisser P., Stey C, Webler M. et al Apoptosis in human alveolar macrophages is induced by endotoxin and is modulated by cytokines // Amer. J. Cell. Mol. Biol. - 1996. -Vol. 15. -№1 . - P . 64-70.

150. Blakburn G.F., Shah H.P., Kenten J.H. et al Electrochemiluminescnce detection for development of immunoassays and DNA probe assay for clinical diagnostcs. // Clin. Chem. 1987. - 37. - P . 1534-1539.

151. Brunori M.5 Rotilio G. Biochemistry of oxygen radical species // Chemistry and biochemistry of oxygen. - 1984. -Vol. 105. - P . 23-37.

152. Buchrieser C, Brosch R., Bach S. et al. The high pathogenity island of Yersinia pseudotuberculosis can be inserted into any of the three chromosomal asn tRNA genes. Ibid. - 1998. - №30. -P.965-978.

153. Cariberg J., Mannervik B. Purification and characterization of the flavoenzyme glutathione reductase from rat liver // J. Biol. Chem. - 1975. - V. 250, N14 .-P. 5475-5480.

154. Chance В., Sies H., Boveris A. Hydroperoxide metabolism in mammalian organs // Physiol. Rev. - 1979. - V. 59, N 3. - P. 527-605.

155. Cornelis G.R., Woif-Waltz H. The Yersinia Yop virulon: a bacterial system for subverting eucariotic cells. Mol. Microbiol. -1997. - №23. - 861-867.

156. Cornelis G., Boland A., Boyd A. et al The plasmid of Yersinia, an antihost genome//Microbiol. Mol. Biol. Rev. - 1998. -Vol 62. - №4. - P . 1315-1352.

157. Darderm M., Plean I.M., Calenda A. et al Immune regulation by characterized polypeptides: UCLA Sympos. mol. and cell. biol. New Ser. V.41. - N.Y.: A.R. 1.iss, 1987.-P. 259.

158. Dinarello C, Wolff S. The role of interlleukin-1 in disease || N. Enge J. Med. - 1993.-Vol. 328. - P . 106-115.

159. Elsbach P;, Weiss J. A revalution* of the roles of the O2 independent microbicidal systems of phagocytes //Rev. of Infect. Dis. - 1983. - V.5. - P . 843-854.

160. Fhlenbruck Y., Mil Van A. Fminosauren als therapic // MTA. - 1993. - V. 8, №12.-С 1216-1229.

161. Flohe L., Otting F. Superoxide Dismutase assay // Metods in enzymology, 1999.-Vol. 105.-P, 93-105.

162. Geiger P. G., Lin F. A, Girotti A.W. Selenoperoxidases - mediated cytoprotection against the damaging effects of tret - butyl hydroperoxide on leukemia cells. //Free Radical Biol. Med. -№14. -1996. - P . 251-266.

163. Goldstein A.L., Guha A. Purification and biological activity of thymosin a hormones of the thymus gland//Proc. Natl. Acad. Sci. 1972. -V. 69. - P . 1800.

164. Goldstein A.L., Manarano A. Thymin: a thymic polypeptide cousing the neuromuscular blok of a myastenia gravis // Ann N.Y. Acad. Sci. - 1971. - Vol. 183.-P. 230/

165. Goldstein A.L., Whate A. Thymosin and other thymic hormones: ther nature and roles in the thymic dependency of immunological phenomena. Contemp Topics Immunibiol. New York, London 1973, V. 2. - P . 399-450.

166. Goldstein G., Lau C. Y. Immunoregulation by thymopoietin // J. Supramolecular structure. - 1980. - Vol. 14, №3. - p. 397-403.

167. Goodal G.J., Horecker B.L. Immune regulation by characterized polypeptides: UCLA Sumpos. mol. and cell. biol. New Ser. V.41. - N.Y.: A.R. Liss, 1987. P. 283.

168. Hadden I.W., hnmunostimulants. Immunol. Today. - 1993. - №4. - P. 275- 280.

169. Hassan H.M., Fridovich J. Chemie und Biochemie der Superoxid - Dismutasen //Notab. Med.-1983.-V. 13, N 7.-P. 569-576.

170. Heeseemann J., Algermissen B. Genetically manipulation virulence of Yersinia enterocolitica // Lifec. bnmonol. - 1984 - Vol. 46, №1. - P. 105-110.

171. Heeseman J., Gaede K., Autenrieth I. Experimental Yersinia enterocolitica infection in rodents: a model for human yersiniosis // APNIS. - 1993. - Vol. 101. -№6. - P . 417-429. i

172. Heesemann J., Grater I. Genetic evidence that the oyther membrane protein YOP 1 of Yersinia enterocolitica mediates phagocytosis resistance and adherence to human epitalial cells // FEMS Microbiol. Lett. - 1987. - Vol. 40. - P. 37.

173. Iriarte M., Cornelis G. Molecular determinants of Yersinia pathogenesis // Microbiologic - 1996. -Vol. 12. - №2. - P . 267-280.

174. Jose M., Sanchez-Jimenez M., Sanchez-Jimenez F. Antioxidant enzymes and their implications in pathophysiologic processes // Frontiers in bioscience 1999. -d339-345.-№4.-P. 1-8.

175. Kaufmann S. Immunity to intracellular bacteria // Annu. Rev. Immunol. - 1993.-Vol.11.-P. 129-163.

176. Kaye J.S., Gifflis S., Mizel S.B. et al. Cleaned monoclonal antibody specific for the expression of receptors: interleukin-1 is requized for olic expression of receptors for interleukin-2 //1. Immunol. - 1984. -Vol 11, №6. - P . 1339-1345.

177. Kejari D., Luna S. A modified spectrophotometric assay of superoxide dismutase using nitrite formation by superoxide radicals. Indian Jornal of Biochemistry and Biophysics. - 2000. - V.37. - P . 201-204.

178. Klein J.J., Golgstein A.L., White A. Effects of the thymus lymphocytopoietic factor // Ann. N. Y. Acad. Sci. - 1966. - Vol 135. - P. 485-501.

179. Kosower N.S., Kosower E.M. The glutathione status of cells // bit. Rev. Cytol-1980. - V. 54. - P . 109-160.

180. Lahesmaa-Rantala R., Granfors K., Lehtonen O. P., Toivanen A. Characterization of circulating Yersinia-Specific Immune Complexes in Patients with Yersiniosis // Clin. Immunol, and immunopath. - 1987. - Vol. 42. - P . 202-210.

181. Larry W., Spitz O., Spitz D. Assay of superoxide dismutase activity in tumor tissue Methods in enzymology. - 1984. - V.105. - P. 457-465.

182. Leding M., Fried R., Ziessel M., Mandel Regional distribution of superoxide dismutase in rat brain during postnatal development // Dev. Brain Res.-1982.-V.4, №3.-P.333-337.

183. Lefkowitz D.L., Mills К., Morgan D., Lefkowitz S.S. // Proceed, of the Society for Exsper. biol. and Medicine. - 1992. - Vol. 199, No.2. - P. 204-210.

184. Leuhg K.-P., Joren M. B. // Cell and Tiss. Res. - 1989. - Vol. 257, №3. - P. 653-656.

185. Lian C.-J., Pai Ch. H. Supression of phagocytosis by plasmid-associated outer membrane proteins of Yersinia enterocolitica // Anmi. Meet. Amer. Soc. Microbiol., 86th: Abstr. Washington, 1986. - P . 51.

186. Magnani M., Beretta E. Cell survival and glutathione reductase // J. Theor. Biol.-1982. - V. 94, №4. - P.995-997.

187. Marklund S. Distribution of Cu-, Zn-superoxide dismutase and Mn-superoxide dismutase in human tissue and extracellular fluids // Acta Physiol. Scand.-1980.-V.IIO, Suppl. 492.-P. 19-22.

188. Monack D., Mecsas J., Bauley D. et al Yersinia induced apoptosis in vivo aids in the establishment of a systemic infection of mice //J. esp. Med. - 1998. - Vol. 188. -№11. - P . 2127-2137.

189. Nakoneezna I , Hsu H.S. Histopathology study of protective immunity against murine salmonellosis induced by killed vaccine // Infect, and Immun. - 1983. -Vol. 39.-P. 423-430.

190. Nemeikaite A., Cenas N. The changes of prooxidant and antioxidant enzyme activities in bovine leukemia virus-transformed cells.- Their influence on quinone cytotoxicity. FEBS Lettes. -1993. -V. 326. - P . 65-68.

191. Njamkepo E., Pinot F., Francois D. et al Adaptive Responses of human monocytes infected by Bordetella pertussis: the role of adenylate cyclase hemolysin // Journal of cellular physiology. - 2000. -183. - P. 91-99.

192. Noll A., Roggenkamp A., Heesemann J. et al Protecive rob for heat shock protein reactive a/p T-cells in murine yersiniosis // Infect. Immun. - 1994. - Vol. 62.-№7.-P. 2784-2791.

193. Olinescu R., Nith S. The variation of total free sulfhydryl groups and the glutathione with peroxidase from rat tissues following the irradiation different dose tates//Rev. Rourn. Biochem.-1974. - V. Ii. -№2 . - P . 121-128.

194. Olson J.M., Pierson B.K. Evolution of reaction centers in photosynthetic prokaryotes //Intern. Rev. Cytology. — 1987. — Vol. 108. — P . 209-211.

195. Quantilliam M., Babiello R., Tamba M. Gorin Radiation chemical basis for the role of glutathione in cellular radiation sensitivity // Modific Radiosensitivity Biological Systems. - Vienna, 1976. - P . 29-37.

196. Rabinowitch H.D., Fridovich I. Superoxide radicals, superoxide dismutases and oxygen toxicity in plants // Photochem. Photobiol. - 1983. - №6. - P.679-690.

197. Rosqvist R., Bolin I., Wolf-Watz H. Inhibition of phagocytosis in Yersinia pseudotuberculosis: virulrnce plazmid-encoded ability involving the Yop2b protein //Infect. Immun. - 1988. - Vol. 56, №8. - P . 2139-2143.

198. Schonbaum G.R., Chance B. Catalase // The Enzymes.-New York: Academic, 1976.-V.VIII.-P. 363-408.

199. Shubich M. G., Avdeeva M. G. Cytochemical criteria of immunoreabilitation //bit. J. Immunoreabilitation. - 1994. -№1 . - P . 324-328.

200. Simonet M,5 Fauchere J. L., Berche P. Role of virulence-associated plasmid in the uptake and killing of Yersinia pseudotuberculosis by resident macrophages // Ann. Inst. Pasteur. Microbiol. - 1985. -Vol. 136 B. - P . 283-294.

201. Sjober L., Eriksen Т.Е., Revesz L. The reaction of hydroxyl radical with glutathione in neutral and alkaline aqueus solution // Radiat. Res. - 1982. - V. 89, N2.-P. 255-263.

202. Tappel A.L. Will antioxidant nutrients slow aging processes // Geriatrics. - 1968. - V. 23, N 10. - P. 97-107.

203. Vesikari Т., Sudgvist C, Maki M. Adherense and toxicity of Yersinia enterocolitica 0:3 and 0:9 containing virulince-assciated plasmids for various cultured cell // Acta Path. Microbiol. Scand. - 1983. - Vol. 91, № 2B. - P. 121-127.

204. Yang H., Leland G., Yost D., Massey R. A new diagnostic and research tool biotechnology. 1994.-Vol.12.-P. 1301-1304.

205. Zakowski J.J., Tappel A.L. Purification and properties of rat liver mitochondrial glutathione peroxidase //Biochim. Biophys. Acta. - 1978. - V.526, №1 . - p . 65-76.