Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Питательная среда для выделения Yersinia Pseudotuberculosis

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Татарникова, Ольга Георгиевна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Физиологические особенности возбудителя псевдотуберкулеза и сопутствующей ему в патологическом материале микрофлоры.

1.2. Питательные среды для выделения и культивирования псевдотуберкулезного микроба.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Штаммы.

2.2. Реактивы, питательные основы, питательные среды.

2.3. Биохимические методы.

2.4. Биологические методы.

2.5. Физико-химические методы.

2.6. Статистические методы.

ГЛАВА 3. РАЗРАБОТКА СОСТАВА ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ ПСЕВДОТУБЕРКУЛЕЗНОГО МИКРОБА .'.

3.1. Дыхательная активность псевдотуберкулезного микроба в динамике роста при температуре культивирования 28 и 37 °С.

3.2. Влияние на редукцию 2,3,5-трифенилтетразолия хлористого псевдотуберкулезным микробом соотношения питательных основ и содержания в них аминного азота.

3.3. Влияние химических соединений на способность псевдотуберкулезного микроба к редукции 2,3,5-трифенилтетразолия хлористого.

3.4. Ингибиторы посторонней микрофлоры.

3.5. Другие факторы роста.

ГЛАВА 4. ТЕХНОЛОГИЯ ПОЛУЧЕНИЯ И ХАРАКТЕРИСТИКА ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ ПСЕВДОТУБЕРКУЛЕЗНОГО МИКРОБА

4.1. Состав питательной среды, технология ее приготовления.

4.2. Физико-химические показатели среды.

4.3. Биологические свойства среды.

4.4. Дыхательная активность псевдотуберкулезного микроба, выращенного на сконструированной среде.

4.5. Стабильность основных свойств питательной среды для выделения псевдотуберкулезного микроба при хранении.

ГЛАВА 5. ИСПЫТАНИЕ ДИАГНОСТИЧЕСКОЙ ЦЕННОСТИ СКОНСТРУИРОВАННОЙ СРЕДЫ В ЛАБОРАТОРНЫХ И ПОЛЕВЫХ УСЛОВИЯХ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Питательная среда для выделения Yersinia Pseudotuberculosis"

Актуальность темы. Проблема псевдотуберкулеза в последние два десятилетия становится все более глобальной в плане как территориального распространения, так и интенсивности охвата населения. Эпидемические вспышки псевдотуберкулезной инфекции, возникающие в организованных коллективах, предприятиях общественного питания в разных странах мира, наносят значительный социально-экономический ущерб. В связи с выраженным полиморфизмом клинического течения заболевания лабораторная диагностика псевдотуберкулеза имеет решающее значение. При этом наряду с современными диагностическими методами - полимеразной цепной реакцией, иммунологическим исследованием - классическим и основным доказательством этиологической роли микроорганизма в возникновении инфекционного заболевания остаются выделение и идентификация возбудителя.

В настоящее время для выделения Yersinia pseudotuberculosis применяют дифференциально-диагностические питательные среды, предложенные Г.Д. Серовым с соавт. [69], Г.Я. Ценевой с соавт. [88, 90], среду Эндо, питательную среду для выделения возбудителей кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза Государственного научного центра прикладной микробиологии (ГНЦПМ, г. Оболенск) [68] и другие. Псевдотуберкулезный микроб вырастает на этих средах, как правило, не ранее чем через 48-72 ч, что увеличивает сроки его выделения и идентификации. Из перечисленных сред только среды Эндо и ГНЦПМ являются средами промышленного изготовления и выпускаются в обезвоженном виде, что значительно упрощает их приготовление на этапе применения. Остальные питательные среды готовятся непосредственно в бактериологических лабораториях, что нередко оказывается затруднительным, особенно в полевых условиях, из-за необходимости подбора питательной основы, введения в основу компонентов среды, корректировки рН, фильтрации, стерилизации. Вследствие этого они менее стандартны, имеют небольшой срок хранения. Кроме того, в состав некоторых питательных сред входят дефицитное и дорогостоящее пищевое сырье и импортные реактивы.

В связи с отмеченным исследования, направленные на разработку эффективных, стандартных, стабильных и удобных в применении питательных сред для выделения и дифференциальной диагностики возбудителя псевдотуберкулеза в возможно короткие сроки из дешевого непищевого сырья отечественного производства, актуальны.

При целенаправленном усовершенствовании существующих и создании новых питательных сред необходимо учитывать физиологическое состояние микроба, важным показателем которого является дыхательная (окислительно-восстановительная) активность.

Цель исследования. Целью настоящего исследования является конструирование питательной среды для выделения псевдотуберкулезного микроба с учетом влияния ее компонентов на интенсивность окислительного метаболизма микроорганизма.

Задачи исследования. Для выполнения поставленной цели предусматривается решение следующих задач:

• изучить дыхательную активность псевдотуберкулезного микроба в динамике роста на питательных средах разного состава, не содержащих ингибиторов, в различном температурном режиме;

• оценить возможность использования гидролизатов казеина и кормовых дрожжей в качестве питательной основы среды для выделения псевдотуберкулезного микроба;

• изучить влияние некоторых химических соединений на. редукцию псевдотуберкулезным микробом 2,3,5-трифенилтетразолия хлористого (ТТХ) с целью их использования в качестве активаторов роста;

• определить оптимальные состав и соотношение ингредиентов питательной среды;

• разработать технологию изготовления питательной среды;

• провести оценку ростовых свойств сконструированной среды;

• исследовать диагностическую ценность сконструированной питательной среды в лабораторных условиях и при осложнении эпидемической ситуации по псевдотуберкулезу.

Научная новизна. Показана возможность целенаправленного конструирования питательной среды для выделения конкретного возбудителя инфекции путем активации его окислительного метаболизма. Выявлено стимулирующее действие на дыхательную активность и рост псевдотуберкулезного микроба марганца сернокислого, натрия лимоннокислого и глюкозы, что позволило использовать их для оптимизации состава питательной среды. Разработана оригинальная по составу и технологии изготовления питательная среда для бактериологической диагностики псевдотуберкулеза, обладающая достаточной чувствительностью и обеспечивающая высокую скорость роста при выращивании на ней возбудителя при 28 и 37 °С. Получено решение от 25.09.2000 о выдаче патента по заявке на изобретение № 99111061/13 (011667) "Питательная среда для выделения псевдотуберкулезного микроба", приоритет от 26.05.99.

Научно-практическая ценность. Сконструирована на основе непищевого сырья отечественного производства питательная среда для выделения псевдотуберкулезного микроба, выпускаемая в обезвоженном виде с длительным сроком годности (срок наблюдения более 2 лет). Для практического применения питательную среду получают путем растворения и расплавления навески сухой среды в дистиллированной или водопроводной воде при температуре 100 °С (время приготовления - 5-7 мин). Среда стандартна, не требует фильтрации, корректировки рН, стерилизации, добавления ex tempore ингредиентов, чувствительна, обеспечивает высокую скорость роста, характерную морфологию колоний и оптимальное физиологическое состояние микроба.

Разработаны "Методические рекомендации по применению питательной среды для выделения псевдотуберкулезного микроба", одобренные ученым советом Иркутского научно-исследовательского противочумного института Сибири и Дальнего Востока (НИПЧИ Сибири и ДВ) (протокол № 8 от 14.09.99) и утвержденные директором . института.

Результаты исследования использованы при изготовлении экспериментально-производственных серий питательной среды для выделения Yersinia pseudotuberculosis и в научно-исследовательской работе.

Сконструированная питательная среда прошла испытания в лабораторных условиях и практических учреждениях ЦГСЭН. Во всех случаях получены положительные заключения, рекомендующие ее использование для выделения У. pseudotuberculosis.

На защиту выносятся следующие положения:

1. Способ конструирования питательной среды для выделения псевдотуберкулезного микроба с учетом его биологических свойств.

2. Высокая эффективность сконструированной среды.

3. Преимущество предложенной питательной среды для выделения псевдотуберкулезного микроба перед отечественными питательными средами, применяемыми для бактериологической диагностики псевдотуберкулеза.

Апробация. Материалы диссертации обсуждены на:

•Международной научной конференции "Разработка и производство диагностических сухих питательных сред и микросистем". Махачкала, 1998;

• Российской научной конференции "Актуальные вопросы инфекционной патологии". Барнаул, 1999;

• Юбилейной научно-практической конференции "Проблемы медицинской и экологической биотехнологии". Оболенск, 1999;

• научных конференциях, ученом совете НИПЧИ Сибири и ДВ (1989-2000 гг.).

Публикации. По материалам диссертации подготовлено 12 научных работ, 11 из них опубликованы в центральной печати и региональных сборниках.

Объем и структура работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, изложения собственных экспериментальных результатов и их обсуждения, заключения, выводов, списка цитированной литературы и приложения. Объем рукописи составляет 120 страниц, включая 20 таблиц. Список цитированной литературы содержит 100 отечественных и 46 зарубежных источников.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Татарникова, Ольга Георгиевна

выводы

1. Дыхательная активность псевдотуберкулезного микроба зависит от состава питательной основы, температуры и продолжительности культивирования и является объективным показателем его физиологического состояния.

2. На основе изучения окислительного метаболизма, в частности дыхательной активности, псевдотуберкулезного микроба определены оптимальный состав и соотношение ингредиентов питательной среды, обеспечивающие высокий темп роста микробной популяции: комбинация гидролизатов казеина и кормовых дрожжей в соотношении 10:1 удовлетворяет питательные потребности псевдотуберкулезного микроба; марганец сернокислый, натрий лимоннокислый и глюкоза повышают в микробной клетке интенсивность окислительно-восстановительных процессов.

3. Введение в состав среды глюкозы, мочевины, желчи и бромтимолового синего в оттитрованных количествах позволяет дифференцировать псевдотуберкулезный микроб от сопутствующей в исследуемом материале микрофлоры.

4. Разработана технология изготовления питательной среды для выделения Yersinia pseudotuberculosis, предусматривающая выпуск продукта в обезвоженном состоянии, обеспечивающем высокую стабильность при хранении, удобство при транспортировке, простоту приготовления рабочих образцов. Среда состоит из непищевого сырья и отечественных реактивов, не нуждается в фильтрации, стерилизации, коррекции рН, внесении ex tempore дополнительных ингредиентов.

5. Сконструированная питательная среда для выделения Yersinia pseudotuberculosis по чувствительности, ростовым качествам превосходит применяемые в настоящее время питательные среды аналогичного назначения: рост псевдотуберкулезного микроба при посеве единичных клеток регистрируется уже через 24 ч культивирования при температуре 28 и 37 °С.

6. Питательная среда для выделения Yersinia pseudotuberculosis обеспечивает рост штаммов псевдотуберкулезного микроба независимо от антигенного или плазмидного состава в типичной форме с сохранением исходных диагностических признаков.

7. По итогам проведенной апробации в лабораторных условиях и при осложнении эпидемической ситуации по псевдотуберкулезу сконструированная питательная среда признана пригодной для практического применения.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Заболеваемость псевдотуберкулезом и кишечным иерсиниозом в Сибири и на Дальнем Востоке, как, впрочем, и в других географических регионах мира, остается одной из малоизученных проблем инфекционной патологии. В связи с полиморфизмом клинического течения заболевания лабораторная диагностика псевдотуберкулеза имеет решающее значение. В настоящее время получены новые данные о биологических и антигенных свойствах возбудителя псевдотуберкулеза, которые легли в основу эффективных методов лабораторной диагностики инфекции - полимеразной цепной реакции, иммунологических методов. Однако, классическим способом доказательства этиологической роли микроорганизма в возникновении инфекционного заболевания по-прежнему является выделение и идентификация возбудителя, основанные на физиологических и биохимических особенностях иерсиний.

В настоящее время исследование материала, подозрительного на зараженность иерсиниями, ведется, как правило, несколькими способами: методом холодового (при температуре 4-6 °С) обогащения в средах накопления с последующим высевом на селективные или дифференциально-диагностические среды, методом холодового обогащения с последующей щелочной обработкой перед посевом на плотные дифференциально-диагностические среды и методом прямого посева на питательные среды для выделения и дифференциальной диагностики иерсиний.

В нашей стране для выделения и дифференциальной диагностики возбудителя псевдотуберкулеза применяют среды Г. Д. Серова с соавт. [69], Г. Я. Ценевой с соавт. -СБС [88, 90]. Обе среды лабораторного изготовления и при их практическом применении необходимы подбор питательной основы, внесение дополнительных компонентов, корректировка рН, стерилизация. Вследствие этого они не стандартны и не стабильны при хранении. Скорость роста псевдотуберкулезного микроба на этих средах недостаточно высока: дифференцируемый рост Y. pseudotuberculosis регистрируется на них не ранее, чем через 48 ч культивирования.

Существенным достижением является создание питательных сред промышленного изготовления в обезвоженном виде, не требующих стерилизации в автоклаве при изготовлении потребителем из сухого порошка. К их числу относится питательная среда для выделения возбудителей кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза, экспериментальные серии которой выпускает Государственный научный центр прикладной микробиологии (г. Оболенск) и питательная среда для выделения псевдотуберкулезного микроба, созданная в НИПЧИ Сибири и ДВ [49]. По сравнению с питательными средами лабораторного изготовления эти питательные среды более стандартны, стабильны при хранении, удобны для работы. Однако они также обеспечивают невысокую скорость роста псевдотуберкулезного микроба: дифференциация возбудителя псевдотуберкулеза от других микроорганизмов возможна лишь через 48 ч инкубации (через 24 ч виден росинчатый рост). Кроме того, в их состав входят импортные реактивы и сырье, используемое в животноводстве (рыбная мука).

Для дальнейшего повышения эффективности бактериологического исследования необходимо работать над конструированием новых или модификацией уже имеющихся питательных сред, позволяющих сократить сроки выделения возбудителя и увеличить чувствительность среды (рост микроба при малых посевных дозах).

Отмеченные выше обстоятельства привели нас к выводу о необходимости создания стандартной питательной среды для выделения псевдотуберкулезного микроба, включающей компоненты отечественного изготовления, высокотехнологичной в производстве, выпускаемой в обезвоженном состоянии, поэтому стабильной при хранении и удобной при транспортировке, с простым способом приготовления потребителем, не требующим фильтрации, стерилизации, корректировки рН, добавления ex tempore дополнительных ингредиентов. Естественно, такая среда должна обеспечивать рост возбудителя псевдотуберкулеза всех разновидностей независимо от антигенного и плаз-мидного состава через 24 ч инкубации при температуре 28 и 37 °С.

Конструирование питательной среды для выделения конкретного вида возбудителя предполагает создание наиболее благоприятных условий для его роста, либо условий, препятствующих росту сопутствующей в исследуемом материале микрофлоры, либо сочетания обоих этих приемов. Очевидно, что решение столь сложной задачи невозможно без учета физиологического состояния псевдотуберкулезного микроба, в том числе его окислительного метаболизма, определяющего в значительной степени темп роста клетки.

В связи с тем, что в очагах псевдотуберкулеза имеет место гетерогенная популяция возбудителя, а на формирование морфологии колоний псевдотуберкулезного микроба оказывает воздействие наличие родоспецифической плазмиды вирулентности иерсиний молекулярной массой 45-47 MDa [10, 95, 96], на первом этапе нашего исследования были отобраны штаммы Y. pseudotuberculosis разных серо- и плазмидовариан-тов. В ходе анализа паспортных данных и тщательного изучения биологических свойств для работы были отобраны 13 штаммов Y. pseudotuberculosis, хранившихся в музее НИПЧИ Сибири и ДВ, 5 из которых - плазмидосодержащие. Штаммы выделены в разное время из разных источников на территории Сибири и Дальнего Востока, но обладали типичными морфологическими, фаголизабельными и другими свойствами. Для изучения ингибирующих и дифференцирующих способностей питательных сред для выделения псевдотуберкулезного микроба использовали штаммы Y. enterocolitica, Е. coli и P. vulgaris, также характеризующиеся типичными для представителей своих родов свойствами.

При оценке физиологического состояния микробной популяции важным показателем является ее дыхание. Вследствие того, что на активность некоторых ферментов дыхательной цепи влияют состав питательных основ, концентрация аминного азота, величина рН, возраст культуры [55, 139], а температура культивирования - на размеры клеток, темпы их размножения, скорость метаболических процессов [75, 125], на следующем этапе работы мы определили уровень редукции 2,3,5-трифенилтетразолия хлористого псевдотуберкулезным микробом в динамике роста при температуре 28 и 37 °С на общепринятых в бактериологической практике питательных средах (агары Мартена, Хоттингера, казеиново-дрожжевой), не содержащих ингибиторов роста. Одновременно изучали жизнеспособность микробной популяции, выращенной в аналогичных условиях. Эти исследования были предприняты для того, чтобы установить те показатели окислительно-восстановительной активности микроба, на которые следует ориентироваться при создании питательных сред для его выделения, которые, как правило, содержат ингибиторы роста, а также определиться с выбором питательной основы, количества аминного азота, рН среды, качественного и количественного состава вводимых в нее компонентов.

Выбор ТТХ как индикатора дыхания микробных клеток, не был случайным -окислительно-восстановительные индикаторы взаимодействуют с определенными дыхательными ферментами на разных уровнях цепи переноса электронов. ТТХ, в частности, конкурирует за водород с цитохромоксидазой [128, 140]. Изучение дыхательной активности возбудителя псевдотуберкулеза проводили по методу Е. Кип, L.G. Abood [119]. В ходе предварительных опытов был установлен оптимальный состав реакционной смеси.

Результаты изучения тетразолредуктазной активности штаммов псевдотуберкулезного микроба в динамике роста на питательных средах с разным содержанием аминного азота в присутствии цитрата, сукцината, фумарата, малата и глюкозы показало, что одним из важнейших факторов, определяющих жизнеспособность и скорость роста клеток является температура культивирования: наивысшие значения как эндогенной, так и индуцируемой редукции ТТХ наблюдали у культур, выращенных при

28 °С. Заметим при этом, что увеличение редуцирующей активности псевдотуберкулезного микроба в присутствии метаболитов ЦТК наиболее выражено у 24-часовых культур, выращенных на казеиново-дрожжевой среде.

Другим фактором, влияющим на скорость редукции тетразолхлорида псевдотуберкулезным микробом является фаза его роста. В молодых культурах (18-24 ч) отмечен наиболее высокий уровень эндогенный редукции ТТХ, причем экзогенные углеводородные субстраты (цитрат, сукцинат, фумарат, малат) при добавлении в питательную среду в этих условиях не оказывали значительного стимулирующего воздействия на скорость восстановления тетразолхлорида. По мере старения культуры и, соответственно, снижения уровня эндогенной редукции ТТХ показатели индуцируемой окислительно-восстановительной активности существенно возрастали. В дальнейшем культуры утрачивали способность сначала к эндогенной, а затем и к индуцируемой редукции ТТХ в присутствии метаболитов ЦТК. Сходная закономерность в динамике тетразол-редуктазной активности отмечена ранее у холерного вибриона [11].

Из опытов по определению ТТХ-редуктазной активности возбудителя псевдотуберкулеза, выращенного на питательных агарах Мартена, Хоттингера и казеиново-дрожжевом с содержанием соответственно 56, 156 и 100 мг% аминного азота, следует, что питательным потребностям этого микроорганизма в наибольшей мере соответствует казеиново-дрожжевой агар. Наиболее высокая ТТХ-редуктазная активность псевдотуберкулезного микроба отмечена при использовании для его культивирования агаризо-ванной основы, содержащей сухие ферментативные гидролизаты казеина и кормовых дрожжей в соотношении 10:1, и наличии 100 мг% аминного азота.

Поскольку одна из целей исследования - создание среды, обеспечивающей рост и дифференциацию возбудителя псевдотуберкулеза от сопутствующей микрофлоры через 24 ч инкубации исследуемого материала, важным разделом работы было изыскание возможных стимуляторов и ингибиторов его дыхания. Из апробованных неорганических и органических соединений (соли железа окисного и закисного, кальция, магния, марганца, меди, натрий лимоннокислый, глюкоза) наиболее эффективным ингибитором дыхания признана медь сернокислая, наиболее эффективными активаторами -марганец сернокислый, натрий лимоннокислый и глюкоза. Важно, что стимулирующее действие последних трех соединений реализуется не только при добавлении в реакционную смесь, но и при внесении в среду культивирования.

Естественно, при решении вопроса о составе питательной среды для выделения псевдотуберкулезного микроба приняты во внимание не только собственные, но и литературные данные. В частности, привлекли внимание как ингибиторы роста микробов-сателлитов бромтимоловый синий и желчь крупного рогатого скота, причем первый, кроме того, - и как наиболее подходящий индикатор [88,90].

Во многих дифференциальных питательных средах в качестве важного компонента выступает мочевина [49, 69]. В нашем случае мочевина как субстрат, позволяющий отличить содержащие уреазу штаммы Y. pseudotuberculosis от уреазонегативных Е. coli, также предположительно могла усилить дифференциальные возможности конструируемой среды.

Полученные данные позволили ввести в состав питательной среды для выделения псевдотуберкулезного микроба компоненты, обеспечивающие удовлетворение в полном объеме его питательных потребностей, прежде всего в источниках углерода и азота, и способствующие его дифференциации. С учетом данных определения влияния компонентов среды на интенсивность дыхания возбудителя псевдотуберкулеза были созданы оптимальные условия для его развития, не ухудшающиеся при введении в состав среды бромтимолового синего.

В результате проведенной работы сконструирована питательная среда для выделения Yersinia pseudotuberculosis, в которую в качестве источника питания мы ввели сухие ферментативные гидролизаты кормовых дрожжей (1.2 г/л) и казеина (12.0 г/л). глюкозу (5.0 г/л); для создания буферной системы среды - фосфорнокислые соли натрия (8.0 г/л) и калия (2.0 г/л); индикаторной системой являются глюкоза в указанной концентрации, мочевина (2.5 г/л) и бромтимоловый синий (0.128 г/л). Последний в сочетании с желчью (5.0 г/л) ингибирует рост посторонней микрофлоры. В состав среды в качестве активаторов роста псевдотуберкулезного микроба ввели также марганец сернокислый (0.02 г/л) и натрий лимоннокислый (2.0 г/л). Оптимальная прочность агарового студня (400 ± 50) г, обеспечиваемая введением в состав среды (12.0 ± 1.0) г/л агара микробиологического, препятствует роению вульгарного протея.

Важным моментом в процессе производства питательных сред является отработка технологических приемов, позволяющих получить качественный препарат. Питательную среду готовили методом смешивания сухих компонентов с использованием приема тритурации при введении малых количеств марганца сернокислого и бромтимолового синего. Для равномерного распределения в среде их предварительно смешивали с агаром микробиологическим в соотношении 1:10, затем с остальными ингредиентами среды в шаровой мельнице.

Сконструированная питательная среда прошла всестороннюю проверку - изучены ее физико-химические и биологические свойства. Навеска среды, необходимая для приготовления конкретной серии, полностью растворяется в 1 л дистиллированной воды при помешивании и кипячении в течение 3-5 мин. Расплавленная среда прозрачна, травянисто-зеленого цвета, рН - 7.5±0.1, содержание аминного азота - (3.5±0.5) % , потеря в массе при высушивании - не более 7 % , прочность студня среды - (400±50) г.

Физические свойства питательной среды, приготовленной из обезвоженного полуфабриката, позволяют проводить дифференциацию и выделение псевдотуберкулезного микроба. На сконструированной питательной среде возможен рост широкого спектра возбудителя псевдотуберкулеза, в том числе представителей пяти серологических вариантов, штаммов, содержащих плазмиды и не имеющих плазмид. Питательная среда высокочувствительна при посеве единичных клеток псевдотуберкулезного микроба, обеспечивает более высокую скорость его роста, чем общепризнанные питательные среды этого назначения. Выделение возбудителя псевдотуберкулеза на сконструированной среде возможно через 24 ч роста при температуре 28 °С. Среда обладает хорошими ростовыми качествами при выращивании Y. pseudotuberculosis в широком температурном диапазоне: при 37 °С микроб растет так же успешно, как и при 28 °С.

Таким образом, полностью решены поставленные задачи и достигнута цель нашего исследования: сконструирована питательная среда для выделения псевдотуберкулезного микроба с учетом влияния ее компонентов на интенсивность окислительного метаболизма микроорганизма. Разработана технология ее приготовления. Сравнительное изучение ростовых свойств сконструированной среды показало, что по чувствительности она превосходит широко применяемые в настоящее время питательные среды.

Субкультуры псевдотуберкулезного микроба, выращенного на сконструированной среде, обладают типичными для данного микроорганизма свойствами и имеют высокую жизнеспособность. По интенсивности дыхания Y. pseudotuberculosis, выращенная на сконструированной среде, содержащей бромтимоловый синий, равноценна микроорганизму, выращенному на питательной среде без ингибиторов роста.

Среда обеспечивает рост штаммов псевдотуберкулезного микроба независимо от его биологических свойств через 24 ч инкубации при температурах 28 и 37 °С в виде серо-голубых колоний диаметром более 1.0 мм. Ее прозрачность позволяет проводить изучение морфологии колоний выросшей культуры при малом увеличении микроскопа. Среда стандартна, готовится в течение 5-7 мин, не требует фильтрации, корректировки рН, стерилизации благодаря ингибирующему воздействию на воздушную микрофлору, добавления компонентов ex tempore. По нашим наблюдениям, сконструированная среда, разлитая в стерильные флаконы, может храниться до месяца в условиях холодильника при температуре 4-6 °С без изменения первоначальных ростовых свойств и нарушения стерильности. Среда удобна в транспортировке и не требует специального бокса при приготовлении. Среда стабильна при хранении: через два года хранения в помещении с относительной влажностью воздуха не более 60 % при температуре (22±2) °С ее биологические и физико-химические свойства не изменились. Достоинством среды является доступность отечественных ингредиентов, простота ее изготовления.

Преимуществом предлагаемой среды является довольно заметная селективность: при посеве нативного материала среда ограничивает роение P. vulgaris, а после щелочной обработки инфицированного материала в соответствии с инструкцией "Эпидемиология, лабораторная диагностика иерсиниозов, организация и проведение профилактических и противоэпидемических мероприятий" [34], ее возможности еще более возрастают. Величина, цвет, форма, структура и консистенция колоний позволяют провести ориентировочную дифференциацию Y. pseudotuberculosis от Y. enterocolitica, Е. coli и P. vulgaris.

Сконструированная питательная среда прошла комплексные испытания в эпидемиологическом отделе НИПЧИ Сибири и ДВ, в ЦГСЭН в Иркутской области, во время вспышки псевдотуберкулеза в г. Зиме Иркутской области. Во всех случаях получены положительные отзывы, свидетельствующие о возможности применения среды в диагностических целях. Ъ

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Татарникова, Ольга Георгиевна, Иркутск

1. Авакян А.А., Кац Л.Н., Павлова И.Б. Атлас анатомии бактерий, патогенных для человека и животных. М.: Медицина, 1972. - С. 14-15, 41, 57.

2. Авакян А.А., Губина Н.Е. Действие железа на рост и вирулентность чумного микроба // Тр. Армянской противочум. станции. 1960. - № 1. - С. 149.

3. А.с. 742463 СССР С 12 К 1/06 Способ получения питательной основы / З.И. Васильева, Н.З. Трофименко, Л.С. Дьячкова, Л.С. Липаева, А.А. Мохрякова (СССР). -№ 2592196/28-13. Заявлено 15.03.78; Опубл. 30. 06. 80; Бюл. № 23. 2 с.

4. А.с. 1301841 СССР МКИ5 С RQ 1/32. Способ определения активности сукцинатдегидрогеназы в биологических объектах / О.П. Иванова, В.М. Васюточкин, А.Н. Коржавин, И.П. Стамат (СССР). № 3891964/28-14; Заявлено 29.04.85; Опубл. 07.04.87; Бюлл. № 13.-2 с.

5. А.с. 1585335 СССР МКИ5 С 12 Q 1/04. Способ выделения иерсиний / З.В. Пуч-кина, Г.П.Сомов, Л.С. Бузолева (СССР). № 4432081/30-13; Заявлено 15.04.88; Опубл. 15.08.90; Бюлл. № 30. - 3 с.

6. Ашмарин И.П., Воробьева А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. JL, 1962. - 180 с.

7. Балахонов С.В., Чеснокова М.В., Бренева Н.В., Марамович А.С., Климов В.Т. Псевдотуберкулез // Лаб. диагностика возбудителей опас. инфекционных болезней. -Саратов, 1998. Т. 1. - С. 144-165.

8. Батустина Н.Г., Яромюк Г.А. К вопросу о редуцирующей активности холерного вибриона // Международные и национальные аспекты эпиднадзора при чуме. -Иркутск, 1975. Ч. 2. - С. 153-159.

9. Бендас Л.Г., Раскин Б.М., Баранова А.К. Стимулятор бактериального роста из кормовых дрожжей // Лаб. дело. 1974. - №1. - С. 43-45.

10. Бирюзова В.И. Митохондрии бактерий // Докл. АН СССР. 1960. - Т. 135. -С. 1519.

11. Бирюзова В.И., Боровягин В.Л., Гилев В.П., Киселев Н.А., Тихоненко А.С., Ченцов Ю.С. Электронно-микроскопические методы исследования биологических объектов. М., 1963. - 203 с.

12. Борисов Л.Б. Физиология и биохимия микроорганизмов (бактерий): Медицинская микробиол., вирусол., иммунол.: Учебник / Под ред. Л.Б. Борисова, A.M. Смирновой. М., 1994. - С. 44-56.

13. Бузолева Л.С., Чумак А.Д., Дзадзаева М.Ф., Эпштейн Л.М., Сомов Г.П. Газотрофия патогенных бактерий // Журн. микробиол . 1997. - № 5. - С. 63-67.

14. Бурцева Т.И., Бузолева Л.С., Сомов Г.П. Биохимическая характеристика продуктов жизнедеятельности Y. pseudotuberculosis в зависимости от температуры культивирования // Там же. 1997. - № 5. - С. 29-33.

15. Вагнер В.К., Насонкин О.С., Борискина Н.Д. Количественная оценка теста восстановления нитросинего тетразолия // Лаб. дело. 1980. - № 2. - С. 31-33.

16. Варвашевич Т.Н., Никифорова Л.С. Механизмы регуляции метаболизма иерсиний // Иерсиниозы. Микробиол., эпидемиол., клиника, патогенез, иммунол.: Тез. докл. Всесоюз. науч.-практ. конф. Владивосток, 1986. - С. 86-87.

17. Варвашевич Т.Н., Сидорова В.Е. Популяционная изменчивость и биологические свойства бактерий функция условий культивирования // Вопр. микробиол., патогенеза и лаб. диагностики иерсиниозов. - Новосибирск, 1985. - С.3-8.

18. Варвашевич Т.Н., Сидорова В.Е., Никифорова Л.С. Изучение термоадаптационной изменчивости псевдотуберкулезного микроба // Тез. докл. Всесоюз. конф. по природной очаговости болезней М., 1984. - С. 28-29.

19. Вартанян Н.С., Каравайко Г.И., Пивоварова Т.А., Дорофеев А.Г. Устойчивость Sulfobacillus thermosulfidooxidans subsp. asporogenes к ионам Cu2+, Zn2+, Ni2+ // Микробиология. 1990. - Т. 59, Вып. 4. - С. 587-593.

20. Верховцева Н.В., Дубинина Г.А., Глебова И.Н. Трансформация соединений трехвалентного железа Leptothrixpseudoochracea И Микробиол. 1992. - Т. 61, Вып. 5. - С. 830-837.

21. Гомимид В.К., Богословская Л.Н., Ландсман Н.М., Токинова Т.Н. Применение веществ,стимулирующих рост энтеробактерий в практике получения микробных адсорбентов // Журн. микробиол. 1984. - № 6. - С. 47-50.

22. Джантемирова К.М. Экология Yersinia enterocolitica во внешней среде: Авто-реф. дис. .канд. вет. наук. М., 1990. - 21 с.

23. Дроздовская Ф.К., Глушко Л.И. Изменение ТТХ-редуктазной активности в цикле развития аэрируемой культуры чумного микроба // Пробл. особо опас. инфекций. Саратов, 1971. - № 5. - С. 109.

24. Дунаев В.И., Ющенко Г.В., Елкина Ю.Б. Сравнительная оценка трех методов выделения У. enterocolitica от больных // Иерсиниозы (микробиол., эпидемиол., клиника, патогенез, иммунол.): Тез. Всесоюз. науч.-практ. конф. Владивосток, 1986. - С. 3637.

25. Зайцева Е.А., Шубин Ф.Н., Беседнова Н.Н. Изучение чувствительности Yersinia pseudotuberculosis к фторхинолонам и эффективности цефлоксацина при экспериментальном псевдотуберкулезе // Журн. микробиол. 1997. - № 5. - С. 49-52.

26. Инструкция "Эпидемиология, лабораторная диагностика иерсиниозов, организация и проведение профилактических и противоэпидемических мероприятий": Утв. Зам. начальника ГЭУ МЗ СССР Г.Г. Онищенко 30.10.90 № 156/42. М., 1990. - 48 с.

27. Каретникова Э.С. Двукратное использование питательной среды для производственного выращивания холерных вибрионов: Автореф. дис. . канд. мед. наук. -Саратов, 1981. -23 с.

28. Классовский JI.H., Осадчая Л.М., Петров B.C. Об углеводном и азотном питании возбудителя псевдотуберкулеза. Сообщение 1. //Журн. микробиол. 1965. - № 4. -С. 37-41.

29. Климова И.М., Яромюк Г.А., Нечецкая P.M., Назарова Е.И. Способность чумного, псевдотуберкулезного и холерного микробов синтезировать резервные углеводы // Докл. Иркутского противочум. ин-та. Иркутск, 1971. - Вып. 10. - С. 58-59.

30. Криг Н. Получение накопительных и чистых культур: Методы общей бактериологии в 3 томах / Под ред. Ф.Г. Герхардта и др. М, 1983. - Т. 1. - С. 277-356.

31. Кузнецов В.Г., Тимченко Н.Ф. Взаимодействия между бактериями рода Yersinia в водной среде // Журн. микробиол. 1998. - № 6. - С. 26-29.

32. Кушнарев В.М. Выявление центров активности сукцинатдегидрогеназы в Клетках кишечной палочки // Бюл. эксп. биол. мед. 1960. - № 8. - С. 106.

33. Кушнарев В.М. Эквиваленты митохондрий кишечной палочки // Бюл. эксп. биол. мед. 1962. - № 3. - С. 65.

34. Ленинджер А. Основы биохимии. / Пер. с англ. М., 1985. - Т. 2. - С. 445-454, 487,494.

35. Маганчук В.П., Боброва С.Е., Головня Г.М. Выделение кишечных иерсиний при различных условиях культивирования // Лаб. дело. 1989. - № 10. - С. 64-65.

36. Малатян М.Н., Бирюзова В.И. О локализации дегидрогеназной активности в аналогах митохондрий бактериальных клеток // Докл. АН СССР. 1965. - Т. 160, № 5. -С. 1182.

37. Методические рекомендации к контролю питательных сред по биологическим показателям / Андреева З.М., Бендас Л.Г., Ельчинова Е.А., Шепилова Р.Г.- М., 1980.- 15 с.

38. Методические рекомендации по приготовлению и использованию сухой питательной среды для выделения псевдотуберкулезного микроба / Васильева З.И., Миронова Л.П., Кузнецова Л.М. Иркутск, 1991. - 6 с.

39. Методические рекомендации по определению дыхательной активности Fran-cisella tularensis фотометрическим методом с использованием 2,3,5-трифенил-тетра-золия хлористого / Тафельштейн Э.Е., Попова Ю.О., Мирончук Ю.В., Мазепа А.В. -Иркутск, 2000. 8 с.

40. Методические указания по применению физико-химических методов контроля питательных сред / Рунова В.Ф., Бендас Л.Г., Максимова Г.А., Преображенская Е.И., Раскин Б.М., Мельникова В.А. М., 1977. - 18 с.

41. Миронова Л.П. О метаболизме Yersinia pseudotuberculosis II Соврем, аспекты профилакт. зооноз. инфекций. Иркутск. - 1984. - С.33-34.

42. Наумов А.В. Влияние некоторых условий культивирования на активность ферментов начальных этапов углеводного обмена у субкультур чумного микроба // Пробл. особо опас. инфекций. Саратов, 1970. - № 2. - С. 87-90.

43. Определитель бактерий Берджи. Под ред. Дж. Хоулта, Н. Крига, П. Снита, Дж. Стейли, С. Уилльямса. Пер. с англ. Девятое издание. В двух томах. М., 1997. -Т. 1. - С. 195-196.

44. Перминова Н.Г. Роль некоторых компонентов цикла Кребса в редукции теллурита калия холерным вибрионом и конструирование селективных сред для диагностики холеры: Автореф. дис. канд. мед. наук. Саратов, 1983. - 13 с.

45. Петровская В.Г., Маркуша Б.И. Факторы патогенности и их генетическийконтроль // Журн. микробиол. 1988. - №.7 - С. 78-87.

46. Платонова Н.Г., Костюкова К.П., Шаповалова Н.Г., Максютина З.Н. Сравнительные данные об использовании разных методик для выделения иерсиний из фекалий // Микробиол. и иммунол. иерсиниозов. Сб. науч. тр. - Рязань, 1985. - Т. 84. -С. 64-67.

47. Поздеев O.K., Покровский В.И. Бактериологические исследования // Медицинская микробиол. / Гл. ред. В.И. Покровский, O.K. Поздеев. М.: ГЭОТАР Медицина, 1999.- С. 113-136.

48. Регламент производства № 933-00. Основа питательной среды для культивирования туляремийного микроба сухая. Иркутск, 2000. - 116 с.

49. Регламент производства № 949-00. Вакцина холерная (холероген-анатоксин +0-антиген) сухая и жидкая. Саратов, 2000. - 275 с.

50. Регламент производства № 983-00. Питательная среда для выделения и культивирования чумного микроба сухая. Иркутск, 2000. - 137 с.

51. Сагатовский В.Н., Сагатовская А.А. К вопросу об оценке вирулентности бактерий чумы восстановлением метиленовой сини и тетразолхлорида // Генетика, биохимия и иммунохимия особо опас. инфекций. Ростов-на-Дону, 1967. - С. 234-241.

52. Самыкина JI.H. Поиск новых путей управления микробиологическими процессами на основе регуляторных возможностей дегидрогеназ // Микроорганизмы в сельском хозяйстве: Тез. докл. 4 Всесоюз. науч. конф. Пущино, 1992. - С. 179.

53. Серов Г.Д., Знаменский В.А., Вишняков А.К. Дифференциальная среда для выделения микроба псевдотуберкулеза // Журн. микробиол. 1968. - № 6. - С. 146-149.

54. Сидорова В.Б., Варвашевич Т.Н., Никифорова Л.С., Богомазова В.И. Влияние температуры культивирования на функциональное состояние псевдотуберкулезного микроба // Психрофильность патогенных микроорганизмов. Новосибирск, 1986. -С. 14-19.

55. Смирнов И.В., Ценева Г.Я. Культуральные свойства и вирулентность иерси-ний // Журн. микробиол. 1991. - № 9. - С. 13-16.

56. Степанов В.М., Некрасова Л.Е., Безрукова Л.С. Особенности чувствительности к антибиотикам культур иерсиний, выделенных из различных объектов // Пробл. инфекционных болезней. Алма-Ата, 1989. - С.86-90.

57. Сомов Г.П., Бузолева Л.С., Черкасова С.А., Никитин Д.И., Слабова О.И. О миксотрофии патогенных бактерий // Журн. микробиол. 1994. - № 5. - С. 3-6.

58. Сомов Г.П., Варвашевич Т.Н. Ферментативные механизмы психрофильности псевдотуберкулезного микроба // Там же. 1984. - № 2. - С. 42-47.f 75. Сомов Г.П., Покровский В.И., Беседнова Н.Н. // Псевдотуберкулез. М., 1990.- 240 с.

59. Сомов Г.П. Тимченко Н.Ф. Основные итоги изучения психрофильности патогенных бактерий. // Журн. микробиол. 1997. - № 5. - С. 12-16.

60. Тафельштейн Э.Е., Голубинский Е.П., Марамович А.С., Попов А.В. Адаптивные механизмы в экологии псевдотуберкулезного микроба // Мед. паразитол. и паразитарные болезни. 1995. - № 4. - С. 30-34.

61. Тимченко Н.Ф., Сомов Г.П. Патогенетическое значение психрофильности Yersinia pseudotuberculosis //Журн. микробиол. 1986.- № 3.- С. 34-38.

62. Тихоненко А.С., Куимова Т.Ф. Влияние фиксации на морфологию бактериофага Bacillus mycoides Н Микробиол. 1960. - Т. XXIX, вып. 3. - С. 395-400.

63. Торджян И.Х. Сравнительное электронно-цитохимическое исследование отложения восстановленных соединений тетразолия и теллурита у Staphylococcus aureus II Докл. АН СССР. 1968. - Т. 181, № 2. - С. 473.

64. Троицкая В.В., Четина Е.В., Аляпкина Ю.С., Литвин В.Ю., Гинцбург А.Л. Некультивируемые формы Yersinia pseudotuberculosis в почвах природного очага псевдотуберкулеза // Журн. микробиол. 1996. - № 5. - С. 13-15.

65. Туманский В.М. Опыты конструирования чувствительно-элективных сред для чумного микроба // Тр. науч. конф., посвящ. 25-летию ин-та "Микроб". Саратов, 1948.-С. 171-177.

66. Фармакопейная статья 42-3874-99 Физико-химические, физические и имму-нохимические методы контроля медицинских иммунобиологических препаратов. М., 1999. - 70 с.

67. Федорова О.В., Малофеева Л.С., Лобанов Ф.И., Шер А.А. Влияние компонентного состава питательных сред и стерилизации на связывание ионов железа // Биотехнология. -1991. № 3. - С. 60-61.

68. Хоулт Дж. Краткий определитель Берги. 8-е изд. - М., 1980. - 195 с.

69. Ценева Г.Я. Иерсиниоз и псевдотуберкулез (пособие для врачей). Санкт-Петербург, 1992. - 60 с.

70. Ценева Г.Я., Дятлов Ф.Г., Идина М.С., Курова Г.А. Жидкая питательная среда для выделения иерсиний // Лаб. дело. 1990. - № 5. - С. 66-68.

71. Ценева Г.Я., Дятлов Ф.Г., Мессорош В.Г. ДифференциаАьно-диагности-ческая питательная среда для выделения иерсиний // Клиническая лаб. диагностика. -1993.-№6. -С. 69-70.

72. Чистякова Т.П., Дедюхина Э.Г., Ерошин В.К. Влияние повышенных концентраций ионов цинка или марганца на показатели роста и состав биомассы дрожжей // Микробиол. -1991. Т. 60, № 6. - С. 53-59.

73. Шмелев В.А., Носова Л.Ю., Галеев В.-С.К., Ставицкий С.Б., Лущиков С.Б., Попов С.Г., Герасимов В.Н. Гетерогенность музейных штаммов Yersinia pseudotuberculosis и их молекулярно-биологические свойства // Журн. микробиол. -1991. № 1. - С. 4-8.У

74. Шубин Ф.Н. Новые проявления изменчивости псевдотуберкулезного микроба // Иерсиниозы. Новосибирск, 1983. - С.19-25.

75. Шубин Ф.Н., Сибирцев Ю.Т., Рассказов В.А., Багрянцев В.Н. Некоторые особенности Yersinia pseudotuberculosis, определяемые плазмидой 45 мД, связанной с кальцийзависимостью // Молекул, генетика, микробиол. и вирусол. 1986. - № 10. - С. 26-31.

76. Шубин Ф.Н., Гинцбург А.Л., Китаев В.М., Янищевский Н.М., Зенкова З.Г. Анализ плазмидного состава штаммов Yersinia pseudotuberculosis и его применение для типирования возбудителя псевдотуберкулеза // Молекул, генетика. 1989. - № 6. - С. 20-25.

77. Угримов С.А., Пивоварова Н.И., Мельникова В.А., Раскин Б.М., Ковтун Ю.С. Определение физиологических показателей роста тест-штаммов при сравнительном изучении различных белковых основ питательных сред // Журн. микробиол. 1989. -№ 1. - С. 96-97.

78. Яковлев В.А., Левченко А.А. Гидрогеназа и сукцинатдегидрогеназа As. vi-nelandii II Докл. АН СССР. 1966. - Т. 171. - С. 1224.

79. Яромюк Г.А., Каретникова Э.С., Нечецкая P.M., Макарова Л.К., Пермино-ва Н.Г. Дегидрогеназная активность холерных вибрионов в динамике роста культуры в реакторе // Соврем, аспекты профилакт. зооноз. инфекций: Тез. докл. Иркутск, 1984. -Ч. 3.-С.129-130.

80. Aulisio C.C., Mehlman I.J., Sanders A.G. Alkali method for rapid recovery of Yersinia enterocolitica and Yersinia pseudotuberculosis from foods // Appl. Environ. Microbiol. 1980. - Vol. 39, N 1. - P.135-140.

81. Bercovier H., Mollaret H.H. Genus XIV. Yersinia Van Loghem 1944 // The shorter Bergey's manual of determinative bacteriology. Eds N. R. Krieg, J. G. Holt. 9-th ed. -New York, 1984. - P. 498 - 506.

82. Bezkorovainy A., Solberg L. Ferrous iron uptake by Bifidobacterium breve II Biol. Trace Elem. Res. 1989. - Vol. 20, N 3. - P. 251-267.

83. Boelart R., Van Landuyt H.W., Valcke J.G. et al. The role of iron overload in Yersinia enterocolitica and Yersinia pseudotuberculosis bacteremia in hemodialysis patients I I J. Infect. Dis. 1987. - Vol.156, N 2. - P.384-387.

84. Bouvet O.M., Pernoud S., Grimont P.A. Temperature-dependent fermentation of D-sorbitol in Escherichia coli 0157:H7 // Appl. Environ. Microbiol. 1999.- V. 65, N 9. -P. 4245-4257.

85. Chao Wei-Liang, Ding Ren-Jei, Chen Ren-Shen. Survival of Yersinia enterocolitica in the environment II Can. J. Microbiol. 1988. - Vol. 34, N 6. - P. 753-756.

86. Cornelis G., Laroche Y., Balligand G., Sory M.P., Wauters G. Yersinia enterocolitica, a primary model for bacterial invasiveness // Rev. Infect. Dis. 1987. - Vol. 9, N 1. - P. 64- 87.

87. Crosa J. H. Genetics and molecular biology of siderophore-mediated iron transport in bacteria // Microbiol. Rev. 1989. - V. 53, N 4. - P. 517-530.

88. Fukui M., Takii S. Reduction of tetrazolium salts by sulfate-reducing bacteria // FEMS Microbiol. Ecol. 1989. - Vol. 62, N 1. - P.13-19.

89. Fukushima H., Gomioda M., Tsubokura M, Aleksic S. Isolation of Yersinia pseudotuberculosis from river waters in Japan and Germany using direct KOH and HeLa cell treatments // Zentralbl. Bakteriol. 1995. - Bd. 282, H 1. - S. 40-49.

90. Fukushima H., Hoshina К., Nakamura R., Ito Y., Gomyoda M. Epidemiological study of Yersinia enterocolitica and Yersinia pseudotuberculosis in Shimane Prefecture, Japan // Contrib. Microbiol. Immunol. 1987. - Vol. 9. - P.103-110.

91. Fukushima H., Gomyoda M. Growth of Yersinia pseudotuberculosis and Yersinia enterocolitica biotype 3B serotype 03 inhibited on cefsulodin-irgosan-novobiocin agar // J. Clin. Microbiol. 1986. - Vol. 24, N 1. - P. 116 - 120.

92. Fukushima H., Gomyoda M., Shiozawa K., Kaneko S., Tsubokura M. Yersinia pseudotuberculosis infection contracted through water contaminated by a wild animal // J. Clin. Microbiol. 1988. - Vol. 26, N 3. - P. 584-585.

93. Funk J.A., Troutt H.F., Davis S.A., Fossler C.P. In vitro susceptibility of Yersinia enterocolitica isolated from the oral cavity of swine // J. Food Prot. 2000. - Vol. 63, N 3. - P. 395-399.

94. Greenwood M.H., Hooper W.L. The use of alkalinity and incubation at 9 degrees С for improved recovery of Yersinia spp. from faeces // Epidemiol. Infect. 1988. - Vol.101, Nl.-P. 53-58.

95. Harrison W.A., Peters A.C., Fielding L.M. Growth of Listeria monocytogenes and Yersinia enterocolitica colonies under modified atmospheres of 4 and 8 degrees С using a model food system //J. Appl. Microbiol. 2000. - Vol.88, Nl.-P. 38-43.

96. Hoogkamp-Korstanje A.A. Yersiniosis in childhood: incidence and diagnosis // Diagnosis of Infectious Diseases. New Aspects. - Stuttgart. - New York, 1986. - P. 69-77.

97. Kanazawa Y., Ikemura K., Kuramata T. Drug susceptibility of Yersinia enterocolitica and Yersinia pseudotuberculosis // Contr. Microbiol. Immunol. 1987. - Vol. 9. - P. 127-135.

98. Kun E., Abood L.G. Colorimetric estimation of succinate dehydrogenase by triphenyltetrazoliumchloride // Science. 1949. - Vol.109. - P. 144-146.

99. Кип Е., Jerchel D. Reduction von Tetrazoliumsalze durch Bakterien // Ber. Deut. Chem. Ges. 1941. - Bd. 74. - S. 949-952.

100. Kussovski V.K., Veljanov D.K. Certain biochemical specificities of Yersinia pseudotuberculosis and Pseudomonas aeruginosa depending of the phase of development of the population in vitro // Докл. Болгарской АН. -1991. Т. 44, N 7. - С. 61-64.

101. Leighton P.M., Macsween H.M. Yersinia hepatic abscesses subsequent to long-term iron therapy // J. Amer. Med. Ass. 1987. - Vol. 257, N 7. - P. 964-965.

102. Malkomes H.-P. Untersuchungen zur Eingnung der Dehydrogenaseaktivitat als Indikator fur Pflanzenschutzmittel-Wirkungen auf Bodenmikroorganismen // Nachrichtenbl. Dtsch. Pflanzenschutzdienst (BRD). 1991. - Bd. 43, H. 10. - S. 209-215.

103. Marcheva D.S., Nicolova S.F., Rachev R.H., Veljanov D.K. Growth temperature effect on the characteristics of Yersinia pseudotuberculosis catalases // Докл. Болгарской АН. 1989. - Т. 42, N 6. - С. 93-96.

104. Mollee Т., Tilse М. Yersinia enterocolitica: isolation from faeces of adults and children in Queens Land // Med. J. Austr. 1985. - Vol. 143, N 11. - P. 488-489.

105. Mudd S. The mitochondria of bacteria // J. Histochem. Cytochem. 1953. - Vol. 1. - P. 248-253

106. Nachlos M., Maigulias S., Seligman A. Sites of electron transfer to tetrazolium salts in the succinoxydase system // J. Biol. Chem. 1960. - P.235-273.

107. Naktin J., Beavis K.G. Yersinia enterocolitica and Yersinia pseudotuberculosis IIt

108. Clin. Lab. Med. 1999. - Vol.19, N 3. - P.523-536.

109. Oka N., Yoshitake Т., Wada E. Inhibitory effect of manganous ion on nitrifying bacteria// Trans. 14th Int. Congr. Soil Sci., Kyoto, Aug., 1990. Kyoto, 1990. - Vol. 4, N 4. -P. 756-757.

110. Old S.L., Johnson M. Methods of microphotometric assay of succinate dehydrogenase and cytochrome с oxidase activities for use on human skeletal muscule // Histochem. J. 1989. - Vol. 21, N 9-10. - P. 545-555.

111. Paterson J.S., Cook R.A. Method for the recovery of Pasteurella pseudotuberculosis from faeces //J. Path. Bacteriol. 1963. - Vol. 85. - P. 241-242.

112. Piroth L., Meyer P., Bielefeld P., Besancenot J.F. Yersinia bacteremia and iron overload // Rev. Med. Interne. 1997. - Vol.18, N 12. - P. 932-938.

113. Poumeyrol M. Bacteries des viandes potentiellement pathogenes et capables de se multiplier au froid // Rev. Gen. Froid. 1988. - V. 78, N 9. - P. 460-464.

114. Raghubeer E.V., Matches J.R. Temperature range for growth of Escherichia coli serotype 0157:H7 and selected coliforms in E. coli medium // J. Clin. Microbiol. 1990. -V. 28,N4.-P. 803-805.

115. Sedar A.W., Burde R.M. The demonstration of the succinic dehydrogenase system in Bacillus subtilis using tetranitro-blue tetrazolium combined with techniques of electron microscopy // J. Cell. Biol. 1965. - Vol. 27, N 1. - P. 53-66.

116. Sheridan J. J., Logue С. M., McDowell D. A., Blair I. S., Hegarty T. A study of the growth kinetics of Yersinia enterocolitica serotype 0:3 in pure and meat culture systems. // J. Appl. Microbiol. 1998. - Vol. 85, N 2. - P. 293-301.

117. Slater Т., Sawyer В., Stranli U. Studies on succinate-tetrazolium reductase systems. 3. Points of four different tetrazolium salts // Biochim. Biophys. Acta. 1963. - Vol. 77. -P. 383.

118. Stephens P. J., Johnson J. A. Direct inoculation into media containing bile salts and antibiotics is unsuitable for the detection of acid/salt stressed Escherichia coli 0157:H7 // Lett. Appl. Microbiol. 1998. - Vol. 27, N 3. - P. 147 -151.

119. Swaminathan В., Harmon M. C., Mehlman I. J. Yersinia enterocolitica. II J. Appl. Bacteriol. 1982. - Vol. 52, N 2. - P. 151 - 183.

120. Tuovila B.J., LaRock P.A. Effect of species difference and growth rate in the use of INT as an indicator of bacterial respiration // J. Microbiol. Meth. 1985. - Vol. 4, N 3-4. -P. 185-188.

121. Wachstein M. Reduction of potassium tellurite by living tissue // Proc. Soc. Exp. Biol.- 1949. Vol.72. - P.175-179.

122. Weber A., Lembke C. Comparison of two enrichment methods and five selective media for the isolation of Yersinia enterocolitica from tonsils of slaughter pigs // Zentralbl. Bakt. -1981. Bd. 250, H 1-2. - S.72-77.

123. Yambor В., Roberts I.W., Deway M. Experiments on the penetrations and reduction of 2,3,5-triphenyltetrazoliumchloride in plant tissues // Phyton (Buenos-Aires). -1958.-Vol. 6.-P. 89-93.t

124. МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИг664047, г.Иркутск, ул.Трилиссера.51 Телефоны: 23-13-66, 23-13-67, 23-13-69 Телеграф, адрес: Иркутск-47 Центр Госсанэпиднадзора в Иркутской области Телетайп: Иркутск 231-563 "Воздух" Факс: 23-13-70

125. Электронная почта (E-mail): sesoirk@chat.ru,gsen@mail.ru, alexg17@irk.ru

126. Мы, ниже подписавшиеся врачи-бактериолош лаборатории отдела особо опасных инфекций Носарева ЛИ., Хуторенко Н.П. и лаборант бактериолог Киселева В.П., составили акт по проверке среды для выделения псевдотуберкулезного микроба.

127. Среда получена го отдела питательных сред Иркутского научно-исследовательского Противочумного института.

128. Для проверки среды использовались штаммы иерсиний, выделенные в г. Усть-Илимске, г. Железногорске, г. Иркутске, г. Зиме Иркутской области и присланные в лабораторию особо опасного отдела для идентификации.

129. На среде Серова колонии Y. pseudotuberculosis появились лишь через 48 ч культивирования при 28°С.

130. Среда проста в приготовлении, обладает элективностыо и вполне применима в практических лабораториях.

131. URL: http:\\imet.ru\sesoii

132. RL: http:\\imet.ru\sesoirk л ,и.Жж*Шг1. АКТ1. Врачи бактериологи ОЦГСЭН

133. Носарева Л.И. Хуторенко Н.П.

134. Лаборант-бактериолог ОЦГСЭН1. КиселеваВ.П.1. АКТ от 15 декабря 1998 г.

135. Посевы патогенных культур на опытную и контрольные среды проводили раздельно, а также в смешанных культурах с кишечной палочкой и протеем в соотношении 1:10 и 1:100. Результаты роста учитывали через 18, 24 и 48 часов инкубации при28°С.

136. Колонии Е. coli через 24 часа культивирования при температуре 28°С отличаются по цвету: они беловато-желтоватые, округлой формы, выпуклые, влажные.

137. Колонии P. vulgaris крупные, синего цвета, влажные, округлой формы, изменяют цвет среды на синий.