Экспериментальное исследование эффективности совместного применения цистамина и интерлейкина- 1 [В] при остром радиационном поражении

Зацепин, Виктор Викторович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Экспериментальное исследование эффективности совместного применения цистамина и интерлейкина- 1 [В] при остром радиационном поражении
ВАК РФ 03.00.01, Радиобиология

Автореферат диссертации по теме "Экспериментальное исследование эффективности совместного применения цистамина и интерлейкина- 1 [В] при остром радиационном поражении"

На правах рукописи

0034баь>

ЗАЦЕПИН Виктор Викторович

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ СОВМЕСТНОГО

ПРИМЕНЕНИЯ ЦИСТАМИНА И ИНТЕРЛЕЙКИНА-10 ПРИ ОСТРОМ РАДИАЦИОННОМ ПОРАЖЕНИИ

03.00.01 - радиобиологии

АВТОРЕФЕРАТ диссертации: на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

1 4 МАЙ 2009

Ганкт-Петербург 2009

003469672

Работа выполнена в ФГОУ ВГЮ «Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова» МО РФ.

Научный руководитель:

доктор медицинских наук профессор

А.Н. Гребенюк

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук профессор доктор медицинских наук профессор

A. Е. Антутсвич

B.А. Баринов

Ведущая организация: НИИЦ (МБЗ) ГНИИИ военной медицины МО РФ

Защита диссертации состоится " 3 " ил-ои-^ 2009 10да в часов на часедан и и диссертационного совета Д 215.002.11 при Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова (194044, Санкт-Петербург, ул. Лебедева, 6).

С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова.

Автореферат разослан Оч 2009 года

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук профессор

Б.И. Ищенко

Актуальность. В настоящее время, в связи с расширением сфер использования источников ионизирующих излучений в различных областях жизнедеятельности человека, повышается актуальность защиты от поражающих факторов радиационной природы [Гуськова А.К., 2008; Котенко К.В., Бушманов А.Ю., 2008; Pellmar T.S., Rockwell S., 2005]. Особую значимость мероприятия противорадиационной защиты будут иметь при возникновении аварийных ситуаций на объектах атомной энергетики, в случае применения ядерного оружия в современных войнах и локальных военных конфликтах, а также при использовании радиоактивных веществ в террористических или диверсионных целях [Бутомо Н.В., Смирнов H.A., 1992; Куцеико С.А., 2001; Алексанин С.С. и др., 2008; Cirincione J., 2002]. Важной представляется и проблема предотвращения лучевых поражений у экипажей длительных пилотируемых космических экспедиций [Ушаков И.Б. и др., 2007]. В этих условиях технические решения - экранирование частей тела, создание гипоксических условий и т.п., не в состоянии в полной мере обеспечить достаточный уровень противолучевой защиты людей и дальнейший прогресс в этой области, может быть достигнут лишь при комплексном использовании физических методов защиты и применения медикаментозных средств, повышающих радиорезистентность организма [Аветисов Г.М., Гончаров С.Ф., 2002; Гребенюк А.Н. и др., 2009].

Среди средств медицинской противорадиационной защиты представлены препараты для профилактики радиационных поражений (радиопротекторы), средства повышения радиорезистентности организма, средства ранней патогенетической терапии лучевых поражений, средства профилактики и купирования первичной реакции на облучение и средства профилактики ранней преходящей недееспособности [Легеза В.И. и др., 2001; Васин М.В., 2006; Walker R.J., 1988]. Отдельная группа лекарственных препаратов предназначена для профилактики внутреннего облучения и оказания помощи при попадании радиоактивных веществ внутрь организма.

Наиболее изученными и высокоэффективными медицинскими средствами противорадиационной защиты являются радиопротекторы [Владимиров В.Г, 2001; Giambarresi L.J., Walker R.J., 1989; Bump Е., 1997]. Однако их применение ограничено сроками использования (исключительно до радиационного воздействия), часто - малой терапевтической широтой и,

как следствие, достаточно высокой токсичностью в оптимальных радиозащитных дозах [Васин М.В, 2003; Landauer M.R, 1992; Seed Т., 2005].

Этих недостатков практически лишены средства длительного поддержания повышенной радиорезистентности организма, но они менее эффективны, чем радиопротекторы [Бутомо Н.В. и др., 2004; Лукашии Б.П, 2007]. В связи с этим разрабатываются новые радиопротекторы и рецептуры, исследуется возможность повышения эффективности и безопасности существующих препаратов, изучается перспективность применения нескольких радиозащитных средств в дозах, при которых не проявляется их токсическое действие [Владимиров В.Г. и др., 1994; Seed Т. et al., 2002; Monoba М. et al., 2006]. Тем не менее, в настоящее время для практического применения в РФ подходят лишь радиопротекторы из групп аминотиолов и индолилалкиламинов: цистамин и препарат Б-190, а. также средство длительного поддержания повышенной радиорезистентности организма -гепарин [Назаров В.Б., Гребенюк А.Н., 2008].

Другим важным направлением современной радиобиологии является разработка средств ранней патогенетической терапии радиационных поражений [Легеза В.И. и др., 2008; Song J.Y., 2003; Weiss J.F., Landauer M.R., 2006]. В экспериментальных исследованиях доказана высокая Эффективность экстракорпоральных методов детоксикации, гормональных препаратов, адаптогенов, стимуляторов регенерации, предшественников глутатиона и др. [Антушевич А.Е. и др., 2008; Whitnall М.Н., 2001; Mouthon М., 2002; Otsolie N. et al., 2007; Shukla J. et al., 2009]. В то же время многочисленные отечественные и зарубежные исследования м области создания новых средств лечения радиационных поражений доказывают высокую эффективность использования для этих целей стимуляторов гемопоэза, в частности цитокинов [Легеза В.И., 2000; Neta R., 1991, 1997; Signore А., 2000; Meeren А. et al., 2002]. Одним из- наиболее эффективных средств ранней терапии лучевых поражений из группы цитокинов является интерлейкил-1 ß [Рогачева С.А.,1997; Рождественский Л.М. и др., 2002; Гребенюк А.Н. и др., 2005; Тимошевский A.A., 2009; Neta R., 1988, 1994; Singh V.K. et al, 2005].

Seed Т., 2005]. Наиболее перспективной из таких схем представляется применение профилактических противолучевых средств - цистамина, Б-190 или гепарина до облучения со стимулятором гемопоэза интерлейккном-113, внедренном в качестве средства экстренной терапии радиационных поражений. Однако, в литературе практически отсутствуют сведения о радиомодифицирующих эффектах совместного применения радиопротекторов и цитокинов. Вместе с тем, изучение эффектов и механизмов комплексного применения противолучевых препаратов и интерлейкина-1 [3 является необходимым условием для их использования' в современных схемах медицинской противорадиационной защиты.

Целыо исследования явилась экспериментальная оценка эффективности комплексной схемы профилактики и . ранней терапии радиационных поражений, включающей последовательное применение цистамина и интерлейкина-1 р, при остром внешнем радиационном воздействии.

Для реализации поставленной цели предстояло решить следующие основные задачи исследования:

1. Изучить влияние интерлейкина-ip на радиозащитную эффективность цистамина, препарата Б-190 и гепарина по показателям выживаемости и средней продолжительности жизни мышей, подвергнутых внешнему относительно равномерному облучению в дозах СД 50.100/30

2. Определить особенности постлучевых изменений костномозгового кроветворения в условиях профилактического применения цистамина и раннего терапевтического использования интерлейкина-1 ¡3.

3. Выявить модифицирующее влияние последовательного применения цистамина и интерлейкина-ip на динамику количества лейкоцитов, лимфоцитов и нейтрофилов периферической крови после облучения.

4. Оценить функционально-метаболическое состояние нейтрофилов периферической крови у животных, подвергнутых радиационному воздействию на фоне профилактического введения цистамина и/или раннего терапевтического применения интерлейкина-1 р.

5. Исследовать эффекты изолированного и совместного применения цистамина и интерлейкина-1 Р в отношении постлучевых изменений клеточности органов кроветворения, количества и функциональной активности иммунокомпетентных клеток у облученных животных.

Научная новизна. Впервые проведена комплексная оценка радиозащитной эффективности последовательного введения

профилактических противолучевых средств и интерлейкина-ф при острых радиационных поражениях.

Показано, что интерлейкшНр при его применении в ранние сроки после острого относительно равномерного облучения увеличивает радиопротекторную эффективность цистамина, препарата Б-190 и гепарина, что проявляется повышением выживаемости облученных мышей. Установлено, что наиболее выраженный радиозащитный эффект развивается при последовательном профилактическом применении цистамина за 20-30 мин до облучения и раннем терапевтическом использовании интерлейкина-1р через 15 мин послерадиационного воздействия.

Выявлено, что совместное применение цистамина и интерлейкина-ф позволяет снизить выраженность постлучевой цитопении в кроветворных органах и сохранить большее количество жизнеспособных гемопоэтических клеток, чем изолированное использование этих препаратов. Обнаружено позитивное влияние этой лечебно-профилактической схемы на динамику лейкопенического синдрома, развивающегося у мышей после радиационного воздействия. Установлено, что последовательное введение 'цистамина и интерлейкина-ф позволяет снизить глубину постлучевой лейкопении и ускорить темп восстановления количества нейтрофилов и лимфоцитов. Показано также, что в нейтрофилах периферической крови облученных животных, получавших цистамин и интерлейкин-ф, более быстро нормализуется содержание гликогена, активность миелопероксидазы и щелочной фосфатазы.

Выявлено, что совместное введение данных препаратов предотвращает снижение количества СОЗ+ и С019+ лимфоцитов в периферической крови и повышает число зрелых и промежуточных форм нейтрофилов в костном мозге облученных мышей. Кроме того, установлено, что цистамин и интерлейкнн-ф при их последовательном применении увеличивают спонтанную и митоген-индуцированную пролиферативную активность клеток красного костного мозга и селезенки, а также стимулируют продукцию интерлейкина-2 спленоцитами облученных животных.

Практическая значимость. Экспериментально обоснован новый подход к повышению эффективности медицинской противорадиационной защиты путем последовательного применения радиопротекторов и средств ранней терапии радиационных поражений. Показана целесообразность использования комплексных схем, включающих введение нистамина, препарата Б-190 или гепарина до облучения и интерлейкина-'1р после радиационного воздействия, для повышения радиорезистентности организма в условиях острого внешнего относительно равномерного облучения.

Предложен алгоритм экспериментальной оценки эффективности радиопротекторов и средств ранней терапии лучевых поражений, включающий последовательное изучение критериев выживаемости облученных животных, параметров радиочувствительности гемолоэтическнх клеток костного мозга, количества лейкоцитов циркулирующего пула, цитохимических показателен нейтрофилов, количественного состава и функциональной активности основных иммунокомпетентных клеток в периферической крови и кроветворных органах.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Последовательное введение цистамина до облучения и интерлейкина-1(5 в ранние сроки после лучевого воздействия увеличивает выживаемость лабораторных животных, подвергнутых внешнем острому относительно равномерному облучению, з большей степени, чем их изолированное применение.

2. Совместное применение цистамина и интерлейкина-ф позволяет снизить глубину постлучевых нарушений гемопоэза, предотвратить развитие цитопении в кроветворных органах, уменьшить выраженность лейкопенического синдрома, ускорить восстановление основных субпопуляций лимфоцитов и нейтрофилов, стимулировать функциональную и метаболическую активность этих клеток.

Реализация результатов исследования. Рекомендации, разработанные на. основе полученных в ходе диссертационного исследования данных, используются в ходе учебного процесса и научно-исследовательской работы на кафедрах военной токсикологии и медицинской защиты и военно-полевой терапии Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова, а также

лаборатории нммунофармакологии Государственного научно-исследовательского института особо чистых биопрепаратов ФМБА России.

В процессе выполнения диссертационного исследования подано и принято к использованию 3 рационализаторских предложения.

Апробация работы. Результаты работы доложены на Международной научной конференции «Экспериментальная и клиническая фармакология» (Минск, 2007), Международной научно-практической конференции "Медицинские и экологические эффекты ионизирующего излучения" (Северск, 2007), Российской научной конференции «Медико-биологические проблемы токсикологии и радиологии» (Санкт-Петербург, 2008).

Связь диссертационного исследования с плановой тематикой научно-исследовательской работы учреждения. Исследование выполнялось в соответствии с плановой тематикой научно-исследовательских работ Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова (темы НИР № 2 VMA.03.02.01.0808/0292 шифр «Гемопоэз», № VMA.02.02.02.0810/0192 шифр «Цитокин»),

Публикации. По теме диссертации опубликовано 10 научных работ, в том числе 3 статьи в научных журналах, рекомендованных ВАК для публикации основных научных результатов диссертации на соискание ученой степени кандидата наук.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 162 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, главы собственных результатов, обсуждения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. В диссертации представлены 17 таблицы и 10 рисунка. Список литературы содержит 169 библиографических источников, из них 87 отечественных и 82 иностранных публикаций.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Экспериментальные исследования выполнены на 1250 мышах-самцах (550 белых беспородных и 700 гибридах СВА х С57В1 первого поколения) массой 18-20 г. Животные были выращены в питомнике РАМН "Рагшолово" и в ходе исследования находились на обычном виварном режиме.

Радиобиологические эксперименты, связанные с облучением лабораторных животных, проводили в рентгеновском кабинете кафедры военной токсикологии и медицинской защиты Воснно-медицинской академии им. С.М. Кирова, в отделе моделирования радиационных поражений Научно-исследовательского испытательного центра (мсдико-биологической защиты) ГНИИИ военной медицины МО РФ (Санкт-Петербург).

Общее относительно равномерное рентгеновское облучение мышей осуществляли на рентгенотерапевтической установке РУМ-17 при условиях: напряжение 180 кВ, сила тока 15 мА, фильтр 0,5 мм Си + 1,0 мм А1, мощность дозы 0,282 мА/кг (52,2 Р/мин), кожно-фокусное расстояние 50 .см, облучение одностороннее, направление облучения: спина-грудь. Внешнее у-облучение мышей осуществляли на установке ИГУР-1 с источником 137Сь'; мощность экспозиционной дозы составляла 0,703 мА/кг (130 Р/мин), кожно-фокусное расстояние 1 м, облучение двухстороннее боковое. Дозиметрический контроль условий облучения осуществляли расчетным и ферросульфатным методами с последующей оценкой результатов на спектрофотометре.

В работе использовался рекомбинантный ИЛ-1 р человека производства Государственного научно-исследовательского института особо чистых биопрепаратов ФМБА России (Санкт-Петербург). Препарат вводили внутрибрюшинно в дозе 50 мкг/кг (1 мкг/особь) через 15 мин после облучения, разведенным в 0,2 мл физиологического раствора. Препарат Б-190, выпущенный Научно-производственным центром «Фармзащита» ФМБА России, вводили внутрижелудочно в дозе 200 мг/кг (4 мг/особь) за 15-20 мин до облучения а 0,5 мл 0,5 % раствора крахмала. Цистамин вводили в дозе 225 мг/кг (4,5 мг/особь) хлористоводородной соли за 20-30 мин до облучения в 0,2 мл физиологического раствора. Животные контрольных групп вместо цистамина получали 0,2 мл физиологического раствора в те же сроки, что и животные опытных групп. Гепарин производства Меркле ГмбХ (Германия) вводили внутрибрюшинно в дозе 5 ед./особь (250 ед./кг), разведенным в 0,2 мл физиологического раствора за 2 суток до лучевого воздействия. Животным контрольных групп вместо изучаемых препаратов вводили растворитель по той же схеме.и в те же сроки, что и животным опытных групп.

Схема экспериментальной оценки -радиозащитной эффективности изучаемых препаратов включала последовательное изучение показателей

выживаемости и средней продолжительности жизни облученных животных, параметров радиочувствительности гемопоэтических клеток костного мозга, динамики клеток циркулирующего пула периферической крови, постлучевых изменений функционально-метаболического статуса нейтрофилов периферической крови и иммунологических показателей.

Изучение выживаемости и средней продолжительности жизни погибших животных проводили в течение 30 сут после облучения. По результатам оценки выживаемости при дозах СД50/Л0 рассчитывали фактор изменения дозы (ФИД) препаратов при их изолированном и последовательном введении.

Оценку числа и функциональной активности стволовых кроветворных клеток осуществляли методами эндогенного и экзогенного колониеобразования [Till J.E., McCulloch Е.А., 1961] по количеству колоний, выросших на селезенках мышей на 9 сут после облучения.

Общее количество лейкоцитов определяли меланжерным методом с последующим подсчетом клеток в камере Горяева. Дня исследования лейкоцитарной формулы применяли способ быстрой окраски мазков крови краской Романовского [Альтгаузен, 1964].

Цитохимическое определение миелопероксидазы проводили по методу R.K. Root, Т.Р. Stossel (1974) в модификации А.Н. Гребенюка с соавторами (1999) при помощи набора реагентов Диахим-ЦитоОгейн-МПО. Интрацеллюлярное выявление щелочной фосфатазы осуществляли методом азосочетания [Kaplow L.S., 1955] при помощи набора реагентов Диахим-ЦитоСтейн-ЩФ. Цитохимическое выявление гликогена в нейтрофилах периферической крови проводили методом ШИК-реакции при помощи набора реагентов Диахим-ЦитоСтейн-ПАС. Реагенты для цитохимических исследований производились НПФ «Абрис+» (Санкт-Петербург).

Клеточность костного мозга, тимуса и селезенки облученных животных определяли в камере Горяева [Лефковитс И. и др., 1988 ]. Абсолютное количество и относительное содержание Ly6+CDllb+, Ly6-CD11Ы-, CD3+, CD19+ оценивали с помощью соответствующих моноклонапьных антител методом проточной цитофлюорометрии [Williams J.J., 1992]: Пролиферативную активность лимфоцитов изучали в реакции бласттрансформации путем определения ответа на КонА в дозах 0,5 и 1,0 мкг/мл, ЛПС в дозах 0,1 и 1,0 мкг/мл [Кетлинский С.А., Калинина Н.М.,

1998]. Способность спленоцитов синтезировать и продуцировать интерлейкина-2 в ответ на введение КонА в дозах 1 и 5 мкг/мл определяли по Б. ОНИя (1982).

Обследование экспериментальных животных с оценкой гематологических, цитохимических и иммунологических показателе'1 проводили до облучения, а также через 1,9, 18 и 30 сут после облучения.

Полученные данные подвергали обработке методами вариационной статистики с расчетом среднего значения, ошибки средней и среднего квадратического отклонения. Данные в таблицах представлены в виде X ± Оценку различий средних значений в экспериментах с большим количеством животных и нормальным распределением средних величин проводили с помощыо (-критерия Стьюдента. Оценку различий данных, полученных при анализе выборок малого объема, проводили непараметрическими методами с использованием критерия Вилкоксона-Манна-Уитни. Обработка результатов, представленных в относительных единицах, осуществлялась с помощью таблиц В.С. Генеса (1967). Вероятность р < 0,05 и выше считали достаточной для вывода о статистической достоверности различий полученных данных.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

В условиях внешнего радиационного воздействия последовательное применение цистамина в дозе 225 мг/кг и раннее терапевтическое введение интерлейкина-1р в дозе 50 мкг/кг позволяет существенно увеличить выживаемость облученных животных (табл. 1).

ФИД, оцененный по показателю выживаемости облученных мышей при применении цистамина в дозе 225 мг/кг составил 1,5, при введении препарата Б-190 в дозе 200 мг/кг - 1,3, при применении гепарина за 2 сут до лучевого воздействия в дозе 250 ед./кг - 1,0, при раннем терапевтическом введении интерлейкина-1Р в дозе 50 мкг/кг - 1,2. Следует отметить, что при последовательном введении препарата Б-190 с интерлейкином-1[} показатель ФИД вырос до 1,5, а при последовательном применении гепарина с цитокином до 1,4. Наиболее эффективным оказалось последовательное применение цистамина и интерлейкина-ф: ФИД, но критерию выживаемости облученных в дозе СД50шбелых мышей, составляет 1,6.

- Таблица!

Влияние профилактического применения цистамина, препарата Б-190, гепарина и раннего терапевтического применения интерлейкина-1 р на выживаемость (%) облученных белых беспородных мышей

Условия эксперимента Дозы облучения, Гр Условия эксперимента Дозы облучения, Гр Условия эксперимента Дозы облучения, Гр

7 (п=10) 8 (и-10) 9 (п=10) 6,3 (п=10) 6,8 (п=12) 7,3 (п=15) 7 (п=10) 8 (п=12) 9 (п=15)

Облучение 77,8 ± 5,2 11,1 ± 0,5 0,0 ± 0,5 Облучение 50,0 ± 5,0 25,0 ± 2,5 0,0 ± 0,5 Облучение 20,0 ± 2,0 8,3 ± 0,4 0,0 ± " 0,5

Цистамин + облучение 100,0 ± 5,0 55,6 ± 3,5 70,0 ± 4,0 Б-190 + облучение 60,0 ± 6,0 40,0 ± 4,0 33,3 ± 5,0' Гепарин + облучение 20,0 ± 2,0 16,7 ± 1,7 0,0 ± . 0,5

Облучение + ИЛ-1 . 66,7 ± 5,3 44,4 ± 2,2 40,0 ± 3,0 . Облучение + ИЛ-1 60,0 ± 6,0 . 25,0 ± 2,5 20,0 ± 2,0 Облучение + ИЛ-1 40,0 ± 4,0 13,3 ± 1,1 8,3 ± • 0,4

Цистамин + облучение + ИЛ-1 100,0 ± 5,0 *# 88,9 ± 4,5 * # " 80,0 ± 4,5 * # " Б-190 + облучение + ИЛ-1 90,0 ± 9,0 * # " 83,3 ± 8,0 * # " 46.7 + 5,0 * # " Гепарин + облучение + ИЛ-1 30,0 ± 3,0 * " 41,7± 4,2 * #" 13,3 ± 1,1 *#"

* - р < 0,05 по сравнению с контролем (облучением); " - р < 0,05 но сравнению с введением цистамина (Б-190, гепарина) и последующим облучением; # - р < 0,05 по сравнению с облучением и последующим введением интерлейкина-1р

Примечание:

- Животных, получивших цистамин, гепарин или их сочетания с интерлейкином-1(3, подвергали рентгеновскому облучению на установке

РУМ-17.

Животных, получивших препарат Б-190 и его сочетание с интерлейкином-lß, подвергали гамма-облучению на установке ИГУР-1. Данные представлены в виде М ± m

Полученные нами данные о высокой радиопротекторной эффективности цистамина согласуются с данными других - авторов [Владимиров В.Г, 1989; Куна П, 1989]. Экспериментальные данные о высокой ранней терапевтической эффективности интерлейкина-1 ¡3 в отношении выживаемости животных в условиях внешнего острого рентгеновского облучения, полученные нами, также подтверждаются многочисленными, данными других исследователей [Легеза В.И., 2000; Гребенюк А.Н, 2005].

По мнению ряда авторов, применение ИЛ-1[3 в ранние сроки после радиационного воздействия не только способствует повышению выживаемости облученных мышей, но и приводит к увеличению клеточности костного мозга и повышению числа КОЕ па селезенке по сравнению с животными контрольной группы [Рождественский Л.М, 2002; Нег/е V, 1996].

Стимуляция пролиферативной активности гемопоэтических клеток-предшественников под влиянием раннего терапевтического введения интерлейкина-1 Р и, как следствие этого, увеличение. числа КОЕ-С.) в методиках эндогенного и экзогенного колониеобразования было обнаружено и в наших исследованиях.

Таблица 2

Влияние профилактического введения цистамина и раннего терапевтического применения интерлейкина-1 р на количество 9-ти суточных колониеобразующих единиц на селезенках белых беспородных мышей-самцов, выявленных в методике эндогенного колониеобразования

Условия облучения Доза облучения, Гр

6,5 7,5 8,5

Облучение (контроль) 16,7 ±4,0 9,2 ± 4,2 6,0 ± 0,0

Цистамин + облучение 21,2 ±5,4 17,2 ±4,8* 17,3 :± 4,9*

Облучение + ИЛ-1(3 21,7 ±9,0 19,8 ± 7,8* 6,7 =ь 0,9

Цистамин + облучение + ИЛ-1р 36,3 ± 3,4* *" 32,0 ±9,3* " 25,8 ± 5,1* " "

* - р < 0,05 по сравнению с контролем (облучением); " - р < 0,05 по сравнению с введением цистамина и облучением; # - р < 0,05 по сравнению с облучением и введением интерлейкина-1 Р

Показано, что последовательное применение цистамина и интерлейкина-1(3 способствует снижению зыраженности постлучевых нарушений костномозгового кроветворения и увеличению пролиферативной активности гемопоэтических клеток в большей степени, чем изолированное введение изучаемых препаратов (табл. 2).

ФИД, оцененный по критерию образования эндогенных 9-ти суточных колониеобразующих единиц на селезенках облученных мышей при изолированном применении цистамина в дозе 225 мг/кг составил 1,45, при терапевтическом введении интерлейкша-1р в дозе 50 мкг/'кг - 1,13, при последовательном введении цистамина и раннем лечебном применении интерлейкина-ф -1,64.

Содержание экзогенных колониеобразующих единиц в костном мозге облученных в дозе 2 Гр мышей-самцов гибридов (СВА х С57В1) Р1 при последовательном введении цистамина и раннем лечебном применении интерлейкина-1р превышало аналогичные значения в группах животных, получивших цистамин или интерлейкин-1 Р (табл. 3).

18 16 14 12 10 8 6 4

* # Ла

11 ■ I

ш Ш

ет

•г

КЦ

[М&

-1-

2 Гр

4 Гр

6Гр

И облучение И1 {-облучение

¡1 облучение+ИЛ-1 □ Ц+облучение+КИ-1

Рис. 1. Содержание КОЕ-С® на селезенке мышей гибридов (СВА х С57В1) Р1 после воздействия различных доз облучения на фоне применения цистамина и интерлейкияа-1р (в перерасчете на 106 мкц)

* - р < 0,05 по сравнению с облучением.;".- р < 0,05 по сравнению с введением цистамина;

# - р < 0,05 по сравнению с введением шперлейкина-ф

Таким образом, и по критерию экзогенного колониеобразования последовательное применение цистамина и интерлейкина-1Р было более эффективным, чем изолированное использование отдельных препаратов.

Повышение пролиферативной активности стволовых кроветворных клеток, в свою очередь, приводит к ускорению темпов восстановления нарушенного вследствие радиационного воздействия гемопоэза н, как .итог ~ увеличению числа зрелых клеток в периферической крови.

Подтверждением возможности существования подобного механизма реализации ранней терапевтической активности интерлейкина-1Р могут являться и данные, полученные нами при изучении показателей периферической крови у облученных животных (рис. 2).

- о- - контроль --Ж--1шстамин .--<>.- ИЛ-1 —х—Ц+ИЛ-1

к а

«А,-

а ю о

19 18

Сроки после облучения,'суг

.Рис. 2. Динамика общего числа лейкоцитов периферической крови мышей гибридов (СВА х С57В1) Б1, подвергнутых облучению в дозе 8 Гр, на фоне применении цистамина и интерлейкина-1(3

Так, установлено, что в условиях внешнего облучения .в. дозах СДгод« последовательное применение цистамина и интерлейкина-1Э более эффективно снижает выраженность ранней постлучевой лейко- и нейтрофилопении и увеличивает темп восстановления количества клеток белой крови, чем изолированное применение интерлейкина-1 р. Общее число лейкоцитов в периферической крови у облученных в дозе 8 Гр мышей-

гибридов, получивших оба препарата, на 1 сут после облучения в 2 раза, на 9 сут - в 4 раза, на 18 сут - в 2,4 раза, а к 30 суг после облучения - почти в 2 раза превышало аналогичные показатели контрольной группы, хотя и не достигало значений физиологической нормы интактных мышей.

Динамика числа нейтрофияов и лимфоцитов в периферической крови облученных животных, получивших оба препарата, практически полностью повторяла изменения, регистрировавшиеся при изучении общего числа лейкоцитов. Однако в ранние сроки наблюдения в1 крови животных, получивших и цистамин и иктерлейкин-lß, отмечен нейтрофилез: содержание нейтрофилов в 1,4 раза превышало данный показатель интактных мышей и в 2,8 раза - число клеток у животных контрольной группы. Следует отметить, что эффект в отношении клеток белой крови при использовании данной схемы введения цистамина и интерлейкина-lß реализовывался, в основном, за счет . влияния на нейтрофильный пул лейкоцитов периферической крови.

Ускорение темпов восстановления гемопоэза у облученных животных под влиянием раннего терапевтического применения интерлейкин-3 ß было показано также в работе Н.В. Аксеновой (2004).

Одним из возможных механизмов радиомодифицирующего действия интерлейкина-lß является стимуляция им факторов неспецифической радиорезистентности [Гребешок А.Н, 2002; Тимошевский A.A., 2009]. Выраженное активирующее действие рекомбпнантного интелейкина-lß на показатели, характеризующие функционально-метаболическую активность нейтрофилов, являющихся наиболее чувствительными и мобильными клетками системы неспецифической резистентности организма, выявлено и в ■ходе проведенных нами исследований.

В частности установлено, что лечебное введение интерлейкина-lß увеличивало количество гликогена а нейтрофялах периферической крови у облученных животных в ранние сроки после воздействия, а с 9 сут -достоверно превышало показатели соответствующего нелеченного контроля (рис. 3). При этом профилактическое применение цистамина практически не оказывало влияния на содержание гликогена в нейгрофилах облученных мышей.

- -о- - контроль --Ж--цистамин •■•<>■■ ИЛ-1 —я—Ц+1Ш-1

у 1 -г ^ "ф

сз г

£ 1,8 о

' . £ 1,6-

Е 3

| 1,4-

КЗ

е. ь2 -

° 1 -и 1 ^

фон 1 '9 18 30

- Сроки после облучения, сут

Рис. 3. Динамика содержания гликогена в нейтрофилах периферической крови мышей гибридов (СВА х С57В1) И1, подвергнутых облучению в дозе 8 Гр, на фоне применения дистамина и интерлейкина-1р

Наиболее выраженный эффект на количество гликогена в нейтрофилах периферической крови оказывало последовательное введение дистамина и интерлейкина-1 р.

Также установлено, что последовательное применение дистамина и интерлейкина-1р практически полностью ' предотвращало вызванное ионизирующим излучением снижение активности миелопероксидазы в нейтрофилах, а, начиная с 12-14 сут эксперимента активность данного фермента превышала показатели мышей контрольной группы. Кроме того, на протяжении всего срока наблюдения данный показатель у животных, получивших и цистамин и интерлейкин-1(3, достоверно превышал аналогичные значения других опытных групп.

Результаты изучения активности щелочной фосфатазы в нейтрофилах подвергшихся облучению животных свидетельствуют о высокой радиопротекторной активности дистамина ■ и о выраженном стимулирующем влиянии интерлейкина-1|5 в отношении функционально-метаболического состояния нейтрофилов периферической крови и их костномозговых предшественников. Последовательное введение препаратов достоверно увеличивает активность щелочной фосфатазы в нейтрофилах периферической крови по сравнению с контролем и опытными группами животных,

получивших цистамин и интерлейкин-1Р изолированно, на протяжении всего срока наблюдения.

В ходе дальнейших исследований было установлено, что последовательное применение цистамина и интерлейкина-1 р достоверно снижало глубину клеточного опустошения в красном костном мозге (рис. 4) и селезенке мышей на 1 сут после облучения, а также позволяло практически восстановить их клеточность до исходного значения к 9 сут наблюдения.

Следует отметить, что последовательное введение препаратов не снижало глубину клеточного опустошения в тимусе мышей на 1 сут после облучения, но восстанавливало клеточность органа к 9 сут наблюдения до значений необлученного фона.

-■©— контроль - -Ж- - цистамин -.-О - - ИЛ-1 —X—Ц+ИЛ-1

Рис.4. Динамика клеточности ¡фасного костного мозга у мышей гибридов (СВА х С57В1) Р1, подвергнутых облучению в дозе 8 Гр, на фоне применения цистамина к интерлейкина-1(3

"Установлено также, что последовательное применение цистамина и интерлейкииа-1р в значительной степени предотвращало снижение количества Т- и В- лимфоцитов б периферической крови, а также оказывало позитивное влияние на количество 'Г- и В- лимфоцитов в селезенке облученных в дозе 8 Гр мышей (табл. 3).

Таблица 3

Влияние профилактического введения шктамина я раннего герапевзичесшго введения янтерлейкина-1|3 на динашжу клеточных маркере» _____селезенки у мышей-гибридов (СВЛ х С57В1) П, подвергнутых рентгеновскому облучению в дозе 8.Гр, мла./мл _

! Сроки исследования, сут

1 Показатель Условия облучения До облучения Сроки исследования после облучения, сут

1 Г^ 9 18 30

Облучение (контроль) 7,8 ± 1,9 4,3 ±0,4 7,5 ± 2,4 - .

сэз+ Цистамин + облучение 36,2 ± 2,3 8,8 ± 2,8 16,0±2,8*# 34,9 ± 7,9*# 17,2±1,5

Облучение + ИЛ-1Р 9,1 ±2,1 6,0 ± 1,0* 20,3 ±5,0* 17,4±3,2

Цистамин + облучение + ИЛ-1Р 9,1 ± 1,9 17,0 ± 4,0*# 20,5 ± 3,0*" 19,2±3,9

Облучение (контроль) 1,1 ±0,3 1,0 ±0,2 1,1 ±0,3 -

СБ19+ Цистамин + облучение 28,7 ±1,1 0,3 ± 0,1 1,2 ± 0,3# 3,7±0,4*# 10,7±2,6

Облучение + ИЛ-1р 1,1 ±0,1 0,5 ±0,1 1,6 ±0,3 10,3±3,2

Цистамин + облучение + ИЛ-1Р 1,4 ±0,3" 1,3±0,3# 5,6 ± 1,5*# 10,9±3,0

Облучение (контроль) 4,6 ± 0,9 0,1 ±0,1 22,9 ± 4,9 -

1,у6+СО 11Ь+ Цистамин + облучение 1,3 ±0,3 7,9 ± 1,6 0,1 ±0,1 21,6 ±4,4 2,'8±0,4

Облучение + ИЛ-1 р 2,5 ± 0,6 0,1 ±0,1 9,8 ± 1,9* 4,1±1,3

Цистамин + облучение + ИЛ-1р 5,5 ± 0,7#" 0,5 ± 0Д*#" 18,4 ± 4,1# . 1,3±0,2#"

55 - р < 0,05 по сравнению с контролем (облучением); " - р < 0,05 по сравнению с введением цистамина и последующим облучением; # - р < 0,05 по сравнению с облучением и последующим введением интерлейкин а-1р

Кроме того, последовательное применение цистамина и интерлейкина-1(3 увеличивало содержание незрелых форм гранулоцитов в селезенке облученных в дозе 8 Гр мышей-гибридов (СВА х С57В1) Р1 на 1 (в б раз по сравнению с контролем) и 9 сут исследования (в 4 раза по сравнению с контролем). До 18 сут наблюдения-'количество зрелых клеток в селезенке облучённых мышей, которым вводили цистамин к интерлейкин-1Р, бь>ло достоверно выше, чем в группе животных, получивших только.интерлейкин-1(3, а на 9 сут после облучения превышало аналогичные показатели и во всех остальных группах.

Также установлено, что последовательное применение цистамина и интерлейкина-1 р повышало число зрелых форм нейтрофилов в костном мозге облученных мышей-гибридов на протяжении всего срока наблюдения. Кроме того, последовательное введение препаратов также предотвращало снижение числа промежуточных форм гранулоцитов в костном мозге мышей после облучения.

В результате проведенных нами исследований было установлено, что лучевое воздействие приводило к резкому снижению количества Т- и В-лимфоцмтов в периферической крови и селезенке облученных мышей в ранние сроки после облучения. Применение интерлейкина-1 р как изолированно, так и с пистампном, практически не оказывало позитивного влияния на содержание С1)3+ и СО 19+ клеток в периферической крови и селезенке у облученных мышей на 1 сут наблюдения по сравнению с контролем.

Установлено, что раннее лечебное применение интерлейкина-1 р не влияло на спонтанную продукцию спяеноцитами ИЛ-2 на протяжении всего эксперимента, однако позволяло увеличить продукцию данного цитокина в ответ на введение КонА в дозах 1 и 5 мкг/мл в ранние сроки после лучевого воздействия. Вместе с тем, последовательное применение цистамина и интерлейкина-1р предотвращало постлучевое снижение спонтанной продукции ИЛ-2 спленоцитами облученных животных, а также увеличивало на 9 сут после облучения митоген-индуцированную продукцию ИЛ-2 по сравнению с контрольной группой и группами мышей, получивших только цистамин или интерлейкин-1р.

При изучений функционального состояния клеток костного мозга, селезенки и тимуса облученных животных установлено, что введение

цистамина, как и лечебное введение интерлейкина-1, не оказывало позитивного влияния на спонтанную пролиферацию клеток нммунокомпетентных органов животных в ранние сроки после облучения (табл. 4). В то же время, последовательное введение цистамина и интерлейкина-1 (3 увеличивало спонтанную пролиферативпую активность клеток костного мозга у облученных мышей на 1 сут после облучения по сравнению с контролем и группами животных, получивших данные препараты изолированно. Спонтанная пролиферативная активность спленоцитов у облученных мышей, получивших и цистамип и иптерлейкин-]р, на 1 сут наблюдения превышала показатели контроля и группы мышей, получивших интерлейкин-ip, по не отличалась от аналогичного значения в группе животных, получивших только цистамин.

Оценка пролиферативной активности Т- и В-лимфоцитов была проведена в реакции бласттраксформации. Раннее лечебное введение интерлейкина-1 р как изолированно, так и в сочетании с цистамином, практически не вызывало изменений стимулированной активности Т- и В-лимфоцитов в ответ на введение субоптимальных доз митогенов (КонА в дозе 0,5 мкг/мл и ЛПС в дозе 0,1 мкг/мл, соответственно). Активирующее действие последовательного введения цистамина и ИЛ-1 на индуцированную пролиферативпую активность Т- и В-лимфоцитов удалось получить только при применении максимальных доз митогенов (КонА в дозе 1,0 мкг/мл и ЛПС в дозе 1,0 мкг/мл). Возможно, что низкая митоген-ипдуцировапная пролиферативная активность лимфоцитов при изолированном введении интерлейкина-1 р и последовательном применении цистамина и интерлейкина-1 р уже ira 1 сут после-облучения связана с прохождением пика пролиферативной активности лимфоцитов в более ранний период, чем без индукции под влиянием экзогенно введенного ИЛ-1.

Таким образом, в результате проведенных исследований установлено, что совместное применение цистамина и интерлейкина-1 Р позволяет снизить выраженность постлучевых нарушений костномозгового кроветворения, предотвратить развитие цитопении в кроветворных органах, уменьшить выраженность лейкопенического . синдрома, ускорить восстановление основных субпопуляций 'лимфоцитов и иейтрофилов, стимулировать функциональную и метаболическую активность этих клеток.

Таблица 4

Влияние профилактического введения цистамина и раннего терапевтического введения ингерлейкина-1Р на спонтанную пролиферацию клеток костного мозга, селезенки и тимуса у мышей-гибридов (СБА х С57В1) Р1 после облучения в дозе 8 Гр, тыс. имп./мин

Орган Условия облучения Сроки исследования

До облучения Сроки исследования после облучения, сут

1 9 18 30

Костный мозг Облучение (контроль) 32,2 ± 4,5 6,6 ± 1,2 49,3 ± 1,9 23,6 ±7,7 -

Цистамин + облучение 9,1 ±2,2 28,9 ± 7,4 * 24,1 ±3,6 8,8 ± 2,2

Облучение + ИЛ-10 8,7 ± 1,9 18,4 ±3,8* 26,7 ± 3,9 9,8 ±1,9

Цистамин + облучение + ИЛ-1Р 16,4 ± 2,6* # " 26,1 ± 5,8 * 25,0 ±3,6 16,1 ± 4,0 #"

Селезенка Облучение (контроль) 3,9 ± 1,1 1,3 ±0,3 19,5 ±2,9 .26,9 ±5,3 -

Цистамин + облучение 2,4 ± 0,4* 3,3 ±0,9* 16,2 ±3,1 * 3,7 ±1,2

Облучение + ИЛ-1Р 1,5 ± 0,3 ' 10,1 ±2,1 * 16,5 ± 3,0 * 8,3 ±3,2"

Цистамин + облучение + ИЛ-1(3 2,5 ± 0,3*# 7,7 ± 1,6 *" 18,9 ±0,7* 22,4 ±3,9"

. Тимус Облучение (контроль) 52,2 ± 5,9 2,3 ±0,1 55,5 ± 5,7 18,4 ±2,0 '

Цистамин + облучение 2,9 ± 0,2 45,3 ±5,1 40,8 ± 9,9* 55,3 ± 7,1

Облучение + ИЛ-1Р 2,3 ± 0,5 55,2 ± 4,9 41,3 ±2,4* 40,8 ± 7,9

Цистамин + облучение + ИЛ-1Р 2,5 ± 0,6 50,8 ± 7,0 42,2 ± 2,8* 52,7 ± 4,7

* - р < 0,05 по сравнению с контролем (облучением); " - р < 0,05 по сравнению с введением цистаыкна и последующим облучением; # - р < 0,05 по сравнению с облучением и последующим введением интерлейкина-1 р

ВЫВОДЫ

1. Применение интерлейкина-1 р ;з ранние сроки после радиационного воздействия позволяет на 25-40% увеличить радионротекторную эффективность цистамина, препарата Б-190 и гепарина, оцененную по выживаемости белых беспородных мышей-самцов, подвергнутых внешнему относительно равномерному облучению в дозах СДоо.шо/.то- Наиболее эффективной из изученных лечебно-профилактических схем противорадиационной защиты является последовательное введение цистамина в дозе 225 мг/кг за 20-30 мин до облучения и интерлейкина-1 Р в дозе 50 мкт/кг через 15 мин после радиационного воздействия: ФИД по критериям выживаемости облученных в дозах СД5одо мышей составляет 1,6.

2. В условиях внешнего радиационного воздействия как изолированное, так и совместное применение цистамина и интерлейкина-1 Р способствует снижению выраженности пос;тлучевых нарушений гемопоэза и увеличению пролиферативной активности стволовых кроветворных клеток. Наибольшее количество колониеобразующих единиц на селезенках облученных мышей в методиках эндогенного и экзогенного колониеобразования определяется при последовательном введении цистамина за 20-30 мин до облучения и интерлейкина-1 р через 15 мин после радиационного воздействия.

3. При рентгеновском облучении мышей в дозах СД^по последовательное профилактическое введение цистамина и раннее терапевтическое, использование интерлейкина-1 Р более эффективно предотвращает развитие ранней постлучевой лейко-, лимфо- и нейтрофилопению и значительнее ускоряет темп восстановления количества клеток белой крови, чем изолированное применение этих препаратов.

4. Стимулирующий эффект совместного применения цистамина к интерлейкина-1 р в отношении показателей функционально-метаболического статуса нейтрофилов, измененных в результате облучения, проявляется в предотвращении снижения содержания миелопероксидазы и щелочной фосфатазы, поддержании более высокого уровня гликогена в клетках.

5. Последовательное введение цистамина до облучения и интердейкина-1р после радиационного воздействия позволяет значительно уменьшись выраженность постлучевой цйтопении в красном костном мозге и селезенке, предотвратить критическое снижение числа СОЗ+ и СО 19+ лимфоцитов в

периферической крови и селезенке, сохранить на физиологическом уровне количество зрелых и промежуточных форм гранулоцитов в костном мозге, а также увеличить функциональную активность миелокариоцитов и спленоцитов у мышей мышей-гибридов (СБА х С57В1) Fl, облученных в дозе 8 Гр.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Данные о высокой радиозащитной . ■ эффективности последовательного применения цистамина и интерлейкина-lß в отношении облученных мышей позволяют рекомендовать дальнейшее изучение комплексных схем профилактики и ранней терапии радиационных поражений в экспериментах на крупных лабораторных животных.

2. Для экспериментальной оценки радиозащитной эффективности средств профилактики и ранней терапии радиационных поражений может быть рекомендован алгоритм,- включающий последовательное изучение выживаемости облученных животных, параметров радиочувствительности стволовых кроветворных клеток, количества лейкоцитов циркулирующего пула, цитохимических характеристик нейтрофилов периферической крови, клеточности органов кроветворения, числа и функциональной активности иммунокомпетентных.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Аксенова Н.В. Перспективы совершенствования средств и методов профилактики радиационных поражений / Н.В. Аксенова, В.В. Зацепин, Д.А. Сидоров, A.A. Тимошевский /7 Вестник Российской Военно-медицинской академии. - 2006. - № 1 (15). - Приложение, - С. 404-405.

2. Гребешок А.Н. Принципы, средства и методы медицинской противорадиационной защиты / А.Н. Гребешок, В.В. Зацепин, A.A. Тимошевский // Медицина катастроф. •- 2007.№ 3(59). - С. 32-35.

3. Зацепин В.В. Снижение побочных токсических эффектов цистамина путем его совместного применения с интерлейкином-lß // Вопросы обеспечения химической безопасности в Российской Федерации: Сб. науч. трудов - СПб.: ООО "Изд-во ФОЛИАНТ', 2007. — С. 112-114.

4. Лукашин Б.П. Гепарин и гепариноиды: источники получения, структура и биологические эффекты / Б.П. Лукашин, А.Н. Гребешок, В.В. Зацепин // Вестник Российской Военно-медицинской академии. - 2007. - Лг» 4 (20). - С. 141-147.

.->. Зацепин В.В. Экспериментальная оценка эффективности изолированного и совместного применения интерлейкина-Jß и Бестима в качестве средств ранней терапии радиационных лоражени / В.В. Зацепин, A.B. Петров // Медицинские и экологические эффекты ионизирующего излучения: Материалы IV междунар. науч.-практ. конф. - Ссверск-Томек: ООО «Графика», 2007. - С. 30-31.

6. Зацепин В.В. Влияние раннего терапевтического применения интерлейкина-lß па выживаемость и костномозговое кроветворение облученных мышей / В.В. Зацепин, А.Н. Гребенкж, Н.В. Аксенова, A.A. Тимошевский // Вестник Российской Военно-медицинской академии. - 2008. -№ 1 (21).- Приложение.-С. 135-138.

7. Г'ребенюк А.Н. Влияние раннего терапевтического применения интерлейкина-lß на количество иммунокомпетентных клеток в периферической крови, тимусе, селезенке и костном мозге облученных мышей / А.Н. Гребешок, В.В. Зацепин, A.B. Петров, Н.В. Пигарева, A.C. Симбирцев, A.A. Тимошевский // Вестник Российской Военно-медицинской академии. - 2008. - № 3 (23). - Приложение. - С. 29-35.

8. Антушевич A.A. Сравнительная оценка эффективности Бгталейкина, Бестима и препаратов глутатиона в качестве средств ранней терапии радиационных поражений / A.A. Антушевич, В.В. Зацепин, A.C. Воронова,. A.B. Петров // Вестник Российской Военно-медицинской академии. - 2008. -№ 3 (23). - Приложение. - С. 207-208.

9. Зацепин В.В. Влияние интерлейкина-lß на радиозащитную эффективность цистамина / В.В. Зацепин // Вестник Российской Военно-медицинской академии. - 2008. - № 3 (23). - Приложение. - С. 212-213.

10. Гребешок А.Н. Медицинская противорадиационная защита специалистов аварийно-спасательных формирований / А.Н. Гребешок, В.В. Зацепин, Н.М. Калинина, A.A. Тимошевский // Медико-биологические и социально-психологические проблемы безопасности в чрезвычайных ситуациях. - 2008. - № 4. - С. 13-18.

Подписано в печать 23.04.09 Формат 60x84/16

Объем 1 п.л. Тираж юо экз. Заказ №400

Типография BMA им. СМ. Кирова 194044, СПб., ул. Академика Лебедева, 6

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Зацепин, Виктор Викторович

Список используемых сокращений.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. СОСТОЯНИЕ И ПЕРСПЕКТИВЫ РАЗРАБОТКИ СРЕДСТВ И МЕТОДОВ ПРОФИЛАКТИКИ И РАННЕЙ ПАТОГЕНЕТИЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ РАДИАЦИОННЫХ 13 ПОРАЖЕНИЙ.

1.1. Радиопротекторы.

1.2. Средства длительного повышения радиорезистентности

1.3. Средства ранней терапии радиационных поражений.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Выбор и содержание лабораторных животных.

2.2. Методика проведения радиобиологических экспериментов.

2.3. Общая характеристика исследуемых препаратов.

2.4. Методы исследований.

2.5. Методы статистической обработки результатов исследования.

Глава 3. ВЛИЯНИЕ ИНТЕРЛЕЙКИНА-1 р НА РАДИОЗАЩИТНУЮ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ЦИСТ АМИНА (РЕЗУЛЬТАТЫ

СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ).

3.1. Оценка радиозащитной эффективности цистамина, препарата Б-190, гепарина и интерлейкина-1(3 по критериям выживаемости и средней продолжительности жизни облученных мышей.

3.2. Оценка радиозащитной эффективности цистамина и к интерлейкина-1р по числу сохранивших жизнеспособность клеток-предшественников костномозгового кроветворения облученных мышей.

3.3. Оценка радиозащитной эффективности цистамина и интерлейкина-1|3 по критерию клеточного состава периферической крови облученных животных.

3.4. Оценка радиозащитной эффективности цистамина и интерлейкина-1 (3 по критерию функционально-метаболического статуса нейтрофилов облученных животных

3.5. Оценка радиозащитной эффективности цистамина и иитерлейкина-ф в отношении иммунологических показателей облученных мышей-гибридов (СВА х С57В1) Б

Глава 4. ВОЗМОЖНЫЕ МЕХАНИЗМЫ РАДИОЗАЩИТНОГО ЭФФЕКТА, РАЗВИВАЮЩЕГОСЯ ПРИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОМ ПРИМЕНЕНИИ ЦИСТАМИНА И ИНТЕРЛЕЙКИНА-1 р 126 (ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ).

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Экспериментальное исследование эффективности совместного применения цистамина и интерлейкина- 1 [В] при остром радиационном поражении"

Актуальность. В настоящее время, в связи с расширением сфер использования источников ионизирующих излучений в различных областях жизнедеятельности' человека, повышается актуальность защиты от поражающих факторов радиационной природы [36, 139]. Особую значимость мероприятия противорадиационной защиты будут иметь при возникновении аварийных ситуаций на объектах атомной энергетики, в случае применения ядерного оружия в современных войнах и локальных военных конфликтах, а также при использовании радиоактивных веществ в террористических или диверсионных целях [11, 55, 95]. Важной представляется и проблема предотвращения лучевых поражений у экипажей длительных пилотируемых космических экспедиций [143]. В этих условиях технические решения — экранирование частей тела, создание гипоксических условий и т.п., не в состоянии в полной мере обеспечить достаточный уровень противолучевой защиты людей и дальнейший прогресс в этой области, может быть достигнут лишь при комплексном использовании физических методов защиты и применения медикаментозных средств, повышающих радиорезистентность организма [2].

О важности исследований в области разработки новых средств и методов противолучевой защиты свидетельствует создание в 2005 г. межведомственной рабочей группы при Совете Безопасности США, в результате работы которой были сформированы приоритетные направления в противодействии нарастающим угрозам применения ядерного оружия. Наибольшее значение придается созданию новых радиопротекторов, средств и методов ранней терапии лучевых поражений, исследованию цитокинов и факторов роста, а также антибактериальной терапии инфекционных осложнений, возникающих после облучения [139]. В 2007 г. президентом США подписаны директивы HSPD-18 Medical Countermeasures against

Weapon of Mass Destruction и HSPD-21 Public Health and Medical Preparedness, в соответствии с которыми в стране строится государственная система медицинских контрмер по ликвидации последствий массовых радиационных поражений, радиационных аварий и радиационного терроризма.

Существующая система медицинской защиты от поражающих факторов радиационной природы основана на проведении комплекса лечебно-профилактических мероприятий, направленных на сохранение жизни и здоровья людей, подвергшихся воздействию ионизирующих излучений. Уменьшение выраженности неблагоприятных последствий облучения в опасных для человека дозах, достигается путем применения специальных фармакологических средств, оказывающих профилактическое и (или) лечебное действие [56, 160]. Средства медицинской противорадиационной защиты в настоящее время представлены препаратами для профилактики радиационных поражений (радиопротекторы), средствами повышения радиорезистентности организма, средствами ранней патогенетической терапии лучевых поражений, средствами профилактики и купирования первичпой реакции на облучение, средствами профилактики ранней преходящей недееспособности [18, 57, 160]. Отдельная группа лекарственных препаратов предназначена для профилактики внутреннего облучения и оказания помощи при попадании радиоактивных веществ внутрь организма.

Наиболее изученными и высокоэффективными медицинскими средствами противорадиационной защиты являются радиопротекторы [24, 92, 106, 161]. Однако их применение ограничено сроками использования (исключительно до радиационного воздействия), часто - малой терапевтической широтой и, как следствие, достаточно высокой токсичностью в оптимальных радиозащитных дозах [19, 116, 144].

Этих недостатков практически лишены средства длительного поддержания повышенной радиорезистентности организма, но они менее эффективны, чем радиопротекторы [10, 60]. В связи с этим разрабатываются новые радиопротекторы и рецептуры, исследуется возможность повышения эффективности и безопасности существующих препаратов, изучается перспективность применения нескольких радиозащитных средств в дозах, при которых не проявляется их токсическое действие [24, 125, 143]. Тем не менее, в настоящее время для практического применения в РФ подходят лишь радиопротекторы из групп аминотиолов и индолилалкиламинов: цистамин и препарат Б-190, а также средство длительного поддержания повышенной радиорезистентности организма — гепарин.

Другим важным направлением современной радиобиологии является разработка средств ранней патогенетической терапии радиационных поражений [56, 150, 164]. В экспериментальных исследованиях доказана высокая эффективность экстракорпоральных методов детоксикации, гормональных препаратов, адаптогенов, стимуляторов регенерации, предшественников глутатиона и др. [166, 128, 138, 145]. В то же время многочисленные отечественные и зарубежные исследования в области создания новых средств лечения радиационных поражений доказывают высокую эффективность использования для этих целей стимуляторов гемопоэза, в частности цитокинов [58, 131, 137]. Одним из наиболее эффективных средств ранней терапии лучевых поражений из группы цитокинов является интерлейкин-1(3 [28, 68, 74, 135, 137, 149].

Повышение эффективности медицинской противорадиационной защиты может быть достигнуто путем использования лечебно-профилактических схем, включающих в себя применение препаратов с различными механизмами противолучевого действия [139, 144]. Наиболее перспективной из таких схем представляется применение профилактических противолучевых средств - цистамина, Б-190 или гепарина до облучения со стимулятором гемопоэза интерлейкином-1 Р, внедренном в качестве средства экстренной терапии радиационных поражений. Однако, в литературе практически отсутствуют сведения о радиомодифицирующих эффектах совместного применения радиопротекторов и цитокинов. Вместе с тем, изучение эффектов и механизмов комплексного применения противолучевых препаратов и интерлейкина-1 р является необходимым условием для их использования в современных схемах медицинской противорадиационной защиты.

Цель исследования: экспериментальная оценка эффективности комплексной схемы профилактики и ранней терапии радиационных поражений, включающей последовательное применение цистамина и интерлейкина-1 (3, при остром внешнем радиационном воздействии.

Для реализации поставленной цели предстояло решить следующие основные задачи исследования:

1. Изучить влияние интерлейкина-1 р на радиозащитную эффективность цистамина, препарата Б-190 и гепарина по показателям выживаемости и средней продолжительности жизни мышей, подвергнутых внешнему относительно равномерному облучению в дозах СДбо-шо/зо

3. Выявить модифицирующее влияние последовательного применения цистамина и интерлейкина-1 Р на динамику количества лейкоцитов, лимфоцитов и нейтрофилов периферической крови после облучения.

Научная новизна. Впервые проведена комплексная оценка радиозащитной эффективности последовательного введения профилактических противолучевых средств и интерлейкина-1 (3 при острых радиационных поражениях.

Показано, что интерлейкин-1(3 при его применении в ранние сроки после острого относительно равномерного облучения увеличивает радиопротекторную эффективность цистамина, препарата Б-190 и гепарина, что проявляется повышением выживаемости облученных мышей. Установлено, что наиболее выраженный радиозащитный эффект развивается при последовательном профилактическом применении цистамина за 20-30 мин до облучения и раннем терапевтическом использовании интерлейкина-1(3 через 15 мин послерадиационного воздействия.

Выявлено, что совместное применение цистамина и интерлейкина-1 (3 позволяет снизить выраженность постлучевой цитопении в кроветворных органах и сохранить большее количество жизнеспособных гемопоэтических клеток, чем изолированное использование этих препаратов. Обнаружено позитивное влияние этой лечебно-профилактической схемы на динамику лейкопенического синдрома, развивающегося у мышей после радиационного воздействия. Установлено, что последовательное введение цистамина и интерлейкина-113 позволяет снизить глубину постлучевой лейкопении и ускорить темп восстановления количества нейтрофилов и лимфоцитов. Показано также, что в нейтрофилах периферической крови облученных животных, получавших цистамин и интерлейкин-1 р, более быстро нормализуется содержание гликогена, активность миелопероксидазы и щелочной фосфатазы.

Выявлено, что совместное введение данных препаратов предотвращает снижение количества СБЗ+ и СО 19+ лимфоцитов в периферической крови и повышает число зрелых и промежуточных форм нейтрофилов в костном мозге облученных мышей. Кроме того, установлено, что цистамин и интерлейкин-1р при их последовательном применении увеличивают спонтанную и митоген-индуцированную пролиферативную активность клеток красного костного мозга и селезенки, а также стимулируют продукцию интерлейкина-2 спленоцитами облученных животных.

Практическая значимость. Экспериментально обоснован новый подход к повышению эффективности медицинской противорадиационной защиты путем последовательного применения радиопротекторов и средств ранней терапии радиационных поражений. Показана целесообразность использования комплексных схем, включающих введение цистамина, препарата Б-190 или гепарина до облучения и интерлейкина-1 р после радиационного воздействия, для повышения радиорезистентности организма в условиях острого внешнего относительно равномерного облучения.

Предложен алгоритм экспериментальной оценки эффективности радиопротекторов и средств ранней терапии лучевых поражений, включающий последовательное изучение критериев выживаемости облученных животных, параметров радиочувствительности гемопоэтических клеток костного мозга, количества лейкоцитов циркулирующего пула, цитохимических показателей нейтрофилов, количественного состава и функциональной активности основных иммунокомпетентных клеток в периферической крови и кроветворных органах.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Последовательное введение цистамина до облучения и интерлейкина-1 Р в ранние сроки после лучевого воздействия увеличивает выживаемость лабораторных животных, подвергнутых внешнем острому относительно равномерному облучению, в большей степени, чем их изолированное применение.

2. Совместное применение цистамина и интерлейкина-1 (3 позволяет снизить глубину постлучевых нарушений гемопоэза, предотвратить развитие цитопении в кроветворных органах, уменьшить выраженность лейкопенического синдрома, ускорить восстановление основных субпопуляций лимфоцитов и нейтрофилов, стимулировать функциональную и метаболическую активность этих клеток.

Реализация результатов исследования. Результаты, полученные в ходе диссертационного исследования, используются в учебном процессе и научно-исследовательской работе на кафедре военной токсикологии и медицинской защиты Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова, а также в научной деятельности лаборатории иммунофармакологии Государственного научно-исследовательского института особо чистых биопрепаратов ФМБА России.

Связь диссертационного исследования с плановой тематикой научно-исследовательской работы учреждения. Исследование выполнялось в соответствии с плановой тематикой научно-исследовательских работ Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова (темы НИР № VMA.02.02.02.0810/0192 шифр «Цитокин» и № VMA.03.02.01.0808/0292 шифр «Гемопоэз»).

Апробация работы. Результаты исследования доложены на Международной научной конференции «Экспериментальная и клиническая фармакология» (Минск, 2007), Международной научно-практической конференции "Медицинские и экологические эффекты ионизирующего излучения" (Северск, 2007), Российской научной конференции «Медико-биологические проблемы токсикологии и радиологии» (Санкт-Петербург, 2008).

Заключение Диссертация по теме "Радиобиология", Зацепин, Виктор Викторович

ВЫВОДЫ

1. Применение интерлейкина-1 Р в ранние сроки после радиационного воздействия позволяет на 25-40% увеличить радиопротекторную эффективность цистамина, препарата Б-190 и гепарина, оцененную по выживаемости белых беспородных мышей-самцов, подвергнутых внешнему относительно равномерному облучению в дозах СД5о-юо/зо- Наиболее эффективной из изученных лечебно-профилактических схем противорадиационной защиты является последовательное введение цистамина в дозе 225 мг/кг за 20-30 мин до облучения и интерлейкина-1 Р в дозе 50 мкг/кг через 15 мин после радиационного воздействия: ФИД по критериям выживаемости облученных в дозах СДзо/зо мышей составляет 1,6.

2. В условиях внешнего радиационного воздействия как изолированное, так и совместное применение цистамина и интерлейкина-1 Р способствует снижению выраженности постлучевых нарушений гемопоэза и увеличению пролиферативной активности стволовых кроветворных клеток. Наибольшее количество колониеобразующих единиц на селезенках облученных мышей в методиках эндогенного и экзогенного колониеобразования определяется при последовательном введении цистамина за 20-30 мин до облучения и интерлейкина-1 Р через 15 мин после радиационного воздействия.

3. При рентгеновском облучении мышей в дозах СД70/з0 последовательное профилактическое введение цистамина и раннее терапевтическое использование интерлейкина-1 р более эффективно предотвращает развитие ранней постлучевой лейко-, лимфо- и нейтрофилопению и значительнее ускоряет темп восстановления количества клеток белой крови, чем изолированное применение этих препаратов.

4. Стимулирующий эффект совместного применения цистамина и ин-терлейкина-1 (3 в отношении показателей функционально-метаболического статуса нейтрофилов, измененных в результате облучения, проявляется в предотвращении снижения содержания миелопероксидазы и щелочной фос-фатазы, поддержании более высокого уровня гликогена в клетках.

5. Последовательное введение цистамина до облучения и интерлейки-на-1(3 после радиационного воздействия позволяет значительно уменьшить выраженность постлучевой цитопении в красном костном мозге и селезенке, предотвратить критическое снижение числа СОЗ+ и С019+ лимфоцитов в периферической крови и селезенке, сохранить на физиологическом уровне количество зрелых и промежуточных форм гранулоцитов в костном мозге, а также увеличить функциональную активность миелокариоцитов и спленоци-тов у мышей мышей-гибридов (СВА х С57В1) Р1, облученных в дозе 8 Гр.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Данные о высокой радиозащитной эффективности последовательного применения цистамина и интерлейкина-1 (3 в отношении облученных мышей позволяют рекомендовать дальнейшее изучение комплексных схем профилактики и ранней терапии радиационных поражений в экспериментах на крупных лабораторных животных.

2. Для экспериментальной оценки радиозащитной эффективности средств профилактики и ранней терапии радиационных поражений может быть рекомендован алгоритм, включающий последовательное изучение выживаемости облученных животных, параметров радиочувствительности стволовых кроветворных клеток, количества лейкоцитов циркулирующего пула, цитохимических характеристик нейтрофилов периферической крови, клеточности органов кроветворения, числа и функциональной активности имму некомпетентных.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Зацепин, Виктор Викторович, Санкт-Петербург

1. Абрамов В.В. Интерлейкин-1 в цитокиновой сети: фундаментальные и прикладные аспекты / В.В. Абрамов, Т.Я. Абрамова // Успехи современной биологии. 2007. - Т. 127, № 6. - С. 570-579.

2. Аветисов Г.М., Гончаров С.Ф. Медицинские и санитарно-гигиенические проблемы ликвидации последствий радиационных аварий // Медицина катастроф. 2002. - № 3-4(39-40). - С. 38^2.

3. Аксенова Н.В. Экспериментальное обоснование использования интерлейкина-1 ß при различных вариантах радиационного воздействия: автореф. дис. . канд. мед. наук / Н.В. Аксенова. СПб., 2004. - 20 с.

4. Альтгаузен А.Я. Лабораторные клинические исследования / АЛ. Альтгаузен. М.: Медицина, 1964. - 330 с.

5. Богданов А.Н. Клиническая гематология: Руководство для врачей / А.Н. Богданов, В.И. Мазуров (ред.). СПб.: Фолиант, 2008. - 488 с.

6. Бонд В. Сравнительная клеточная и видовая радиочувствительность. Пер. с англ. / В. Бонд, Т. Сугахара. М.: Атомиздат, 1974 . - 247 с.

7. Боровиков В.П. Прогнозирование в системе STAT1STICA в среде WINDOWS / В.П. Боровиков, Г.И. Ивченко. М.: "Финансы и статистика", 1999.-382 с.

8. Будагов P.C. Сравнительный анализ уровня провоспалительных цитокипов в сыворотке мышей после облучения и комбинированных радиационных поражений / P.C. Будагов, Л.П. Ульянова // Радиац. биология. Радиоэкология. 2000. - Т. 40, № 2. - С. 188 - 191.

9. Бутомо Н.В. Механизмы восстановления радиорезистентности после субтотального облучения / Н.В. Бутомо // Военная медицина. Проблемы профилактики, диагностики, лечения экстремальных состояний: Сб. науч. статей.-М.: Воениздат, 1994.-С. 33-41.

10. Бутомо Н.В. Основы медицинской радиобиологии / Н.В. Бутомо, А.Н.

11. Гребенюк, В.И. Легеза и др.. СПб.: Фолиант, 2004. - 384 с. П.Бутомо Н.В. Практикум по военной токсикологии, радиобиологии и медицинской защите. Часть I. Военная радиобиология / Н.В. Бутомо, Г.А. Софронов (ред.). - СПб., 1992. - 109 с.

12. Бутомо Н.В. Радиочувствительность функции эндогенного колониеобразования у интактных и предварительно облученных мышей / Н.В. Бутомо, A.A. Пегов // Радиобиология. 1979. - Т. 19, вып. 1. - С. 140— 142.

13. З.Васин М.В. Исследование радиозащитного эффекта индралина на кроветворной системе у различных видов животных / М.В. Васин, В.В. Антипов, Г.А. Чернов и др. // Радиац. биология. Радиоэкол. 1996. - Т. 36, №2.-С. 168-189.

14. H.Васин М.В. К механизму противолучевого действия индралина / М.В. Васин, Ю.Н. Чернов, Л.В. Королева // Радиац. биология. Радиоэкол. 1996. -Т. 36, № 1.-С. 36-46.

15. Васин М.В. К фармакологическому анализу противолучевого действия индралина / М.В. Васин, И.Б. Ушаков, Л.А. Семенова // Радиац. биология. Радиоэкол. 2001. - Т. 41, № 3. - С. 307-309.

16. Васин М.В. Поиск и исследование новых эффективных средств фармакохимической защиты организма от поражающего действия ионизирующего излучения в ряду индолилалкиламинов: дис. . докт. мед. паук / М.В. Васин. М., 1977. - 510 с.

17. Васин М.В. Роль вазоконстрикторного эффекта в реализации противолучевых свойств индралина в опытах на собаках / М.В. Васин, В.В. Антипов, Г.А. Чернов и др. // Радиац. биология. Радиоэкол. 1997. - Т. 37, №1.-С. 46-55.

18. Васин М.В. Средства профилактики и лечения лучевых поражений / М.В. Васин. М.: ВЦМК "Защита", 2006. - 340 с.

19. Васин М.В. Характеристика противолучевых свойств радиопротектора Б190 при его применении после облучения / М.В. Васин, И.Б. Ушаков, В.Ю. Ковтун и др. // Радиац. биология. Радиоэкол. 2008. - Т. 48, № б. - С. 730733.

20. Васин М.В. Широта радиозащитного действия индралина в сравнительных исследованиях на различных видах животных / М.В. Васин, Г.А. Чернов, В.В. Антипов // Радиац. биология. Радиоэкол. 1997. - Т. 37, № 6. - С. 896-904.

21. Владимиров В.Г. Радиологические аспекты медицины катастроф / В.Г. Владимиров, С.Ф. Гончаров, В.И. Легеза и др.. М., 1997. - 220 с. •

22. Владимиров В.Г. Радиопротекторы: структура и функция / В.Г. Владимиров, И.И. Красильников, О.В. Арапов; Под ред. В.Г. Владимирова. -Киев: Наук, думка, 1989. 264 с.

23. Владимиров В.Г. Фармакологические механизмы радиозащитного эффекта в условиях целостного организма и перспективы изыскания радиопротекторов / В.Г. Владимиров, И.И. Красильников // Радиац. биология. Радиоэкология. 1994.-Т. 34, вып. 1.-С. 121-133.

24. Гамова О.Н. Сравнительный анализ адаптогенных свойств некоторых зоотоксинов в условиях фракционированного гамма-облучениия / О.Н. Гамова // Материалы 12 сессии молодых ученых. Н. Новгород, 2007. - С. 11.

25. Гребенюк А.Н. Перспективы применения рекомбинантных цитокинов в радиобиологии и токсикологии / А.Н. Гребенюк // Цитокины и воспаление. -2002. Т. 1, № 2. - С. 86-87.

26. Гребенюк А.Н. Препараты интерлейкина-1 в лечении поражений ионизирующими излучениями / А.Н. Гребенюк, Н.В. Аксенова, В.В. Конев и др. // Вестн. Рос. Воен.-мед. акад. 2005. - № 1. - Приложение. - С. 161-162.

27. Гребенюк А.Н. Состояние нейтрофилов при радиационных воздействиях / А.Н. Гребенюк: автореф. дис. . д-ра мед. наук. СПб., 2002. - 40 с.

28. Гребенюк А.Н. Цитохимия нейтрофилов / А.Н. Гребенюк, H.A. Смирнов, Е.В. Давыдова и др.; Под ред. А.Н. Гребенюка и H.A. Смирнова. СПб., 1999. - 68 с.

29. Гребенюк А.Н. Экспериментальное обоснование целесообразности использования рекомбинантпого IL-lß для коррекции эффектов фракционированного облучения / А.Н. Гребенюк, В.В. Конев, A.A. Тимошевский//Мед. иммунол. -2005. Т. 7, № 5-6.-С. 605-610.

30. Груздев Г.П. Острый радиационный костномозговой синдром / Г.П. Груздев. М.: Медицина, 1988. - 144 с.

31. Гудков C.B. Антиоксидантные и радиозащитные свойства гуанозина и инозина (рибоксина): автореф. дис. . канд. биол. наук / C.B. Гудков. -Пущино, 2006.- 17 с.

32. Гудков C.B. Гуанозин и инозин как природные генопротекторы для клеток крови мышей при воздействии рентгеновского излучения / C.B. Гудков, О.Ю. Гудкова, И.Н. Штаркман и др. // Радиац. биол. Радиоэкол. 2006. - Т. 46, № 6.-С. 713-718.

33. Гуськова А.К. Актуальные вопросы клинической радиобиологии и пути их экспериментального решения / А.К. Гуськова // Радиац. биология. Радиоэкология. 1997. - Т. 37, вып. 4. - С. 604-612.

34. Гуськова А.К. Актуальные проблемы современной радиационноймедицины / A.K. Гуськова // Вестн. Рос. Воен.-мед. акад. 2008. - № 3(23). -Приложение. - С. 176-177.

35. Дегтярев М.В. Радиопротекторные свойства препарата «Витулин»: автореф. дис. . канд. биол. наук / М.В. Дегтярев. СПб., 2006. - 20 с.

36. Жербин Е.А.Радиационная гематология / Е.А. Жербин, А.Б. Чухловин. -М.: Медицина, 1989. 176 с.

37. Иванов A.A. Способ профилактики радиационного поражения: Пат. 2312675, Россия, МПК7, А61К 39/145, А61К 39/385 / A.A. Иванов, Ю.Б. Дешевой, A.C. Иванова и др. //Заявл. 23.05.2006; Опубл. 20.12.2007.

38. Ильин Л. А. Индралин — радиопротектор экстренного действия. Противолучевые свойства, фармакология, механизм действия, клиника / Л.А. Ильин, Н.М. Рудный, H.H. Суворов. М., 1994. - 436 с.

39. Ильин Л.А. Радиационная безопасность и защита / Л.А. Ильин, В.Ф. Кириллов, И.П. Коренков. М.: Медицина, 1996. - 336 с.

40. Кетлинский С.А. Цитокины / С.А. Кетлинский, A.C. Симбирцев. СПб.: ООО «Издательство Фолиант», 2008. - С. 117-123.

41. Кетлинский С.А. Роль цитокинов в восстановлении костного мозга после радиационного воздействия / С.А. Кетлинский // Третий съезд по радиационным исследованиям: Тез. докл. Пущино, 1997. - Т. 1. - С. 94-95.

42. Кетлинский С.А. Эндогенные иммуномодуляторы / С.А. Кетлинский, A.C. Симбирцев, A.A. Воробьев. СПб.: Гиппократ, 1992. - 256 с.

43. Кетлинский С.А. Иммунология для врача / С.А. Кетлинский, Н.М. Калинина. СПб.: «Гиппократ», 1998. - 230 с.

44. Конев В.В. Экспериментальное обоснование использования рекомбинантного интерлейкина-lß человека при фракционированном радиационном воздействии: автореф. дис. . канд. мед. наук / В.В. Конев. -СПб., 1999.-24 с.

45. Конопляников А.Г. Радиобиология стволовых клеток / А.Г. Конопляников. М.: Энергоатомиздат, 1984. - 312 с.

46. Кочетков O.A. Радиационная медицина: Руководство для врачей-исследователей и организаторов здравоохранения и специалистов по радиационной безопасности. В 4-х томах. Том 3: Радиационная гигиена / О.А.Кочетков и др. М.: ИздАТ, 2002. - 608 с.

47. Краснюк В.И. Принципы антидототерапии при инкорпорации радионуклидов / В.И. Краснюк, А.Т. Иванников // Мед. радиология и радиац. безопасность. 2001. - Т. 46, № 4. - С. 33-39.

48. Куна П. Химическая радиозащита: Пер. с чешек / П. Куна. М.: Медицина, 1989.-192 с.

49. Куценко С.А. Проблемы медицинского обеспечения радиационной и химической безопасности Вооруженных Сил в современных условиях / С.А. Куценко, М.Б. Мурин, А.Н. Гребенюк // Военно-медицинский журнал. -2001.-№ 1.-С. 4-10.

50. Легеза В.И. Медицинские средства противорадиационной защиты: Пособие для врачей / В.И. Легеза, А.Н. Гребенюк, Н.В. Бутомо и др..: Подред. В.И. Легезы, А.Н. Гребенюка. СПб.: Изд-во "Лань", 2001. - 96 с.

51. Легеза В.И. Новая классификация профилактических противолучевых средств / В.И. Легеза, В.Г. Владимиров // Радиац. биология. Радиоэкология. -1998. Т. 38, № 3. - С. 416-425.

52. Легеза В.И. Цитокины как средства ранней патогенетической терапии радиационных поражений. Эффективность и механизм действия / В.И. Легеза Н.Г. Чигарева, Ю.А. Абдуль и др. // Радиац. биология. Радиоэкология. -2000. Т. 40, № 4. - С. 420-424.

53. Легеза В.И. Экспериментальное исследование эффективности интерлейки на-lß при лучевом поражении / В.И. Легеза, Н.Г. Чигарева, Н.В. Петкевич и др. // Гематология и трансфузиология. 1995. - Т. 40, № 3. - С. 10-13.

54. Пальцев М.А. Цитокины и их роль в межклеточных взаимодействиях / М.А. Пальцев // Арх. патологии. 1996. - Т. 58, № 6. - С. 3-7.

55. Ремизов Д.В. Экспериментальное изучение эффективности совместного применения ронколейкина с радиопротекторами экстренного действия / Д.В. Ремизов // Вестн. Рос. Воен.-мед. академии. — 2005. № 1. —С. 171.

56. Рогачева С.А. Применение рекомбинантных интерлейкинов-1а и lß человека в качестве средств раннего лечения острой лучевой болезни в эксперименте / С.А. Рогачева, A.C. Симбирцев // Радиац. биология. Радиоэкология. 1997. - Т. 37, вып. 1. - С. 61-67.

57. Рогачева С.А. Экспериментальное обоснование применения цитокинов при острой лучевой болезни / С.А. Рогачева // Радиац. биология. Радиоэкология. 1998. - Т. 38, вып. 6. - С. 854-871.

58. Радиоэкология. 1994. - Т. 34, вып. 4-5. - С. 520-536.

59. Рождественский JIM. Цитокины в аспекте патогенеза и терапии острого лучевого поражения / JI.M. Рождественский // Радиац. биология. Радиоэкология. 1997. - Т. 37, вып. 4. - С. 590-596.

60. Рождественский J1.M. Зависимость лечебной эффективности интерлейкина-1 ß от срока введения препарата после облучения мышей / JLM. Рождественский, Ю.Б. Дешевой, В.Г. Лебедев и др. // Радиац. биология. Радиоэкология. 2002. - Т. 42, № 1. - С. 65-69.

61. Сидоров Д.А. Экспериментальная оценка эффективности иптерлейкина-lß при радиационных воздействиях и интоксикации циклофосфаном: авчореф. дис. . канд. мед. наук / Д.А. Сидоров. СПб., 2000. — 20 с.

62. Сидоров Д.А. Перспективы совершенствования средств и методов профилактики радиационных поражений / Д.А. Сидоров, П.В. Аксенова, A.A. Тимошевский // Вестн. Рос. Воен.-мед. академии. — 2006. — № 1 (15). — Приложение. С. 404-405.

63. Сидоров Д.А. Перспективы применения цитокинов для профилактики и лечения костномозгового синдрома радиационного поражения / Д.А. Сидоров, А.Н. Гребенюк, С.А. Куценко и др. // Морской мед. журн. 1999. -Т. 6, №4.-С. 29-33.

64. Симбирцев A.C. Биология семейства интерлейкина-1 человека / A.C. Симбирцев // Иммунология. 1998. - № 6. - С. 9-17.

65. Симбирцев A.C. Изучение биологической активности рекомбинантного интерлейкина-1 ß человека при введении in vivo / A.C. Симбирцев, H.B. Пигарева, В.Г. Конусова // Вестн. РАМН. 1993. -№ 2. - С. 18-22.

66. Симбирцев A.C. Цитокины и вопросы экстренной ранней терапии лучевых поражений человека / A.C. Симбирцев // Цитокины и воспаление. -2002.-Т. 1, № 1. С. 9-16.

67. Тимошевский A.A. Оценка радиозащитной эффективности препарата «Беталейкин» в исследованиях in vitro / A.A. Тимошевский, Н.М. Калинина,

68. О.С. Солнцева// Фундаментальные и прикладные проблемы биотехнологии и медицины: Тез. докл. юбилейной науч.-техн. конф. СПб., 2000. - С. 30.

69. Фрейдлин И.С. Иммунные комплексы и цитокины / И.С. Фрейдлин, С.А. Кузнецова // Медицинская иммунология. 1997. - Т. 1, № 1-2. - С. 27—36.

70. Хафизов А.Ш. Изыскание радиозащитных средств из класса веществ микробного происхождения: автореф. дис. . канд. биол. наук / А.Ш. Хафизов. Казань, 2007. — 20 с.

71. Чигарева Н.Г. Комплексное лечение острых лучевых поражений / Н.Г. Чигарева, Н.В. Петкевич, В.И. Легеза // Третий съезд по радиационным исследованиям: Тез. докл. Пущино, 1997. - Т. 2. - С. 267-268.

72. Ярилин А.А. Радиация и иммунитет. Вмешательство ионизирующих излучений в ключевые иммунные процессы / А.А. Ярилин // Радиац. биол. Радиоэкология, 1999.-39, № 1.-С. 181-189.

73. Агп К. The effects of ozagreb solium on photochemical thrombosis in rat: therapeutic window and combined therapy with heparin sodium / K. Arii, H. Igarashi, I. Katayama // Live Sci. 2002. - Vol. 71, № 25. - P. 2983-2994.

74. Benjamini E. Immunology, a short course / E. Benjamini, G. Sunshine, S. Leskowitz. New York: Wileyliss, 1996. - 451 p.

75. Broudy V.C. Interleukin-1 stimulates human endothelial cells to produce granulocyte-macrophage colony-stimulating factor and granulocyte colony-stimulating factor / V.C. Broudy, K. Kaushansky, J.M. Harlan // J. Immunol. -1987.-Vol. 139, №3.-P. 464-468.

76. Broudy V.C. Monocytes stimulate fibroblastoid bone marrow stromal cells to produce multilineage hemopoietic growth factors / V.C. Broudy, K.S. Zuckerman, S. Jetmelani // Blood. 1986. - Vol. 68, № 2. - P. 530-534.

77. Bump E. Radioprotectors: Chemical, Biological, and Clinical Perspectives / E. Bump, K. Malaker. Boca Raton, FL: CRC Press, 1997. - 448 p.

78. Casparetto C. Effects of interleukin-1 on hematopoietic progenitor. Evidence of stimulatory and inhibitory activities in a primate model / C. Casparetto, J. Laver, M. Abdoud // Blood. 1989. - Vol. 74, № 2. - P. 547-550.

79. Cirincione J. Deadly arsenals: tracking weapons of mass distraction / J. Cirincione, J.B. Wolfsthal, M. Rajkumar. Washington: Carnegie Endowment for Intenational Peace, 2002. - P. 175-186.

80. Dainiak N. The Hematologist and Radiation Casualties / N. Dainiak, J.K. Waselenko // Hematology. 2003. - Vol.1, № 1. - P. 473.

81. Dalmau S.R. Interleukin-1 and tumor necrosis factor-alpha as radio- and chemoprotectors of bone marrow / S.R. Dalmau, C.S. Freitas, D.G. Tabak // Bone Marrow Transplant. 1993. - № 12. - P. 551-563.

82. Dinarello C.A. Multiple biological properties of recombinant human interleukin-1 beta / C.A. Dinarello // Tmmunobiology. 1986. - Vol. 172, № 3. -P. 301-315.

83. Dinarello C.A. The biological properties of interleukin-1 / C.A Dinarello // Eur. Cytokine Netw. 1994. - № 5. - P. 517-531.

84. Fibbe W.E. A single low dose of human recombinant interleukin-1 accelerates the recovery of neutrophils in mice with cyclophosphamide-induced neutropenia / W.E. Fibbe, J.W. van der Meer, J.H. Falkenburg // Exp. Hematol. -1989.-Vol. 17.-P. 85-808.

85. Fibbe W.E. Inlerleukin-1 (22-k factor) induces release of granulocyte-macrophage colony-stimulating activity from human mononuclear phagocytes / W.E. Fibbe, J. van Damme, A. Billiau // Blood. 1986. - Vol. 68, № 1. - P. 13161321.

86. Fibbe W.E. Proliferation of myeloid progenitor cells in human long-term bone marrow cultures is stimulated by interleukin-1 / W.E. Fibbe, H.M. Goslink, G. van Eden // Blood. 1988. - Vol. 72. - P. 1242-1247.

87. Gallicchio V.S. Accelerated recovery of hematopoiesis following sub-lethal whole body irradiation with recombinant murine interleukin-1 (IL-1) / V.S. Gallicchio//J. Leukoc. Biol. 1988.-Vol. 43, №3,-P. 211-215.

88. Giambarresi L.J. Prospects for radioprotection / L.J. Giambarresi, R.J. Walker // Textbook of Military Medicine. New York, 1989. - Part I - Vol. 2. -P. 245-273.

89. Gillis S. Molecular characterization of interleukin 2 / S. Gillis, D. Mochizuki, P. Conlon // Immunol. Rev. 1982. - Vol.63. - P. 167-209.

90. Guo Jun Studying of preventive and therapeutic effects of extracts of the Chinese herbs on rats with damage of the marrow induced by radiation / Jun Guo, Bao-tian Chen, Hua Meng // J. Radiol. Med. and Prot. 2006. - Vol.26, № 3. - P. 235-238.

91. Johnell M. The influence of different heparin surface concentrations and anti thrombinding capacity on inflammation and coagulation / M. Johnell, R. Larsson, A. Siegbahn// Biomaterials. — 2005. — Vol. 26, № 14.-P. 1731-1739.

92. Kang A. Oxygen transport to tissue / A. Kang, D.K. Harrison, D.F. Bruley. -Springer, 2008.-P. 165-178.

93. Ka Xiao-yan Clinical research of radiations damage / Ka Xiao-yan, Jia Ting-zhen, Wang Ji-jun // Chin. J. Radiol. Med. and Prot. 2006. - Vol.26, № 1. - P. 15-19.

94. Kaplow L.S. Leukocyte alkaline phosphatase cytochemistry: application and methods / L.S. Kaplow // Ann. N.Y. Acad. Sci. 1968. - Vol. 155, № 3. - P. 911928.

95. Kaushansky K. Interleukin-1 stimulates fibroblasts to synthesize granulocyte-macrophage and granulocyte colony-stimulating factors / K. Kaushansky, N. Lin, J.W. Adamson // J. Clin. Invest. 1988. - Vol. 81, № 1. - P. 92-97.

96. Koichi H. Placental growth factor reconstitutes hematopoiesis by recruiting VEGFR1 + stem cells from bone-marrow microenvironment / H. Koichi, B. Heissig, Y. Wu // Nature Medicine. 2002. - № 8. - P. 841-849.

97. Landauer M.R. Behavioral toxicity of selected radioprotectors / M.R. Landauer, H.D. Davis, K.S. Kumar, J.F. Weiss // Adv. Space Res. 1992. - Vol. 12, №2-3.-P. 273-283.

98. Laver J. Effect of IL-1 on hematopoietic progenitors after myelosuppressive chemoradiotherapy / J. Laver, M. Abdoud, C. Casparetto // Biotherapy. 1989. -Vol. 1, № 4. - P. 293-300.

99. Lu Yi Radioprotective effects oligosaccharide derivatives of caragenan / Lu

100. Yi, Wang Hai-ging // Chin. J. Radiol. Med. and Prot. 2005. - Vol.25, № 2. - P. 116-117.

101. Lutton J.D. Synergistic effect of heme and IL-1 on hematopoietic stromal regeneration after radiation / J.D. Lutton, J.L. Chertkov, S. Jiang // Am. J. Hematol.- 1993.-Vol. 44, №3.-P. 172-178.

102. Malaise E.P. Radiosensitivity of human cell lines to small doses / E.P. Malaise, P. Lambin, M.C. Joiner // Rad. Res. 1994. - Vol. 127, Suppl. 1. - P. 2527.

103. McConkey D.J. Interleukin-1 inhibits T-cell receptor-mediated apoptosis in immature thymocytes / D.J. McConkey, P. Hartzell, S.C. Chow // J. Biol. Chemist. 1990,- Vol. 265.-P. 3009-301 1.

104. Michurina T. Nitric oxide is regulator of hematopoietic stem cell activity / T. Michurina, P. Krasnov, A. Balazs // Mol. Ther. 2004. - № 10. - P. 241-248.

105. Monoba M. Effects of glycine betaine on bone marrow death and intestinal damage by gamma rays and carbon ions / M. Monoba, N. Hamano, M. Sumi // Radiat. Prot. Dosim. 2006. - Vol. 122, № 14. - P. 494-497.

106. Morrissey P. The influence of IL-1 treatment on the reconstitution of the hemopoietic and immune systems after sublethal radiation / P. Morrissey, K. Charier, L. Bressler et al. // J. Immunol. 1988. - Vol. 124, № 2. - P. 376-385.

107. Morrissey P.J. lnterleukin-1 is identical to hemopoietin-1: studies on its therapeutic effects on myelopoiesis and lymphopoiesis / P.J. Morrissey, D.Y.

108. Mochizuki // Biotherapia. 1989. - Vol. 1, № 4. - P. 281-291.

109. Mouthon M. Thrombopoietin protects mice from mortality and myelosuppression following high-dose irradiation: importance of time scheduling/ M. Mouthon, A. van der Meeren, M. Vandamme // Can. J. Physiol. Pharmacol. -2002. Vol. 80, № 7. - P. 717-721.

110. Mouthon M. Single administration of thrombopoietin to lethally irradiated mice prevents infectious and thrombotic events leading to mortality / M. Mouthon, M. Gaugler, A. van der Meeren // Exp. Hematol. 2001. - Vol. 29, № 1. - P. 3040.

111. Neta R. Cytokines in radioprotection and therapy of radiation injury / R. Neta // Biotherapy. 1988. - Vol. 1, № 1. - P. 41-45.

112. Neta R. Modulation of radiation damage by cytokines / R. Neta // Stem. Cells. 1997. - Vol. 15, Suppl. 2. - P. 87-94.

113. Neta R. Radioprotection and therapy of radiation injury with cytokines / R. Neta // Proc. Clin. Biol. Res. 1990. - Vol. 352. - P. 471-478.

114. Neta R. Radioprotection with cytokines learning from nature to cope with radiation damage / R. Neta, J.J. Oppenheim // Cancer Cells. - 1991. - Vol. 3, № 10.-P. 391-396.

115. Neta R. Interleukin-1 is a radioprotector / R. Neta, S. Douches, J.J. Oppenheim // J. Immunol. 1986. - Vol. 136, № 7. - P. 2483-2485.

116. Neta R. Cytokines in therapy of radiation injury / R. Neta, J.J. Oppenheim // Blood. 1988.-Vol. 72, №3.-P. 1093-1095.

117. Otsolic N. Assessment by survival analysis of the radioprotective properties of propolis and its polyphenolic compounds / N. Otsolic, V. Bencovic, A. Horvat-Knezevic // Biol. Pharm. Bull. 2007. - Vol. 30, № 5. - P. 946-951.

118. Pellmar T.C. Radiological and Nuclear Threat Countermeasures Working Group. Priority list of research areas for radiological nuclear threat countermeasures / T.C. Pellmar, S. Rockwell // Radiat. Res. 2005. - Vol. 163. -P. 115-123.

119. Pu R. Radioprotective effect of bifidumbacteries / R. Pu, Z. Dechun // Chin. J. Microecol.-2007.-Vol. 19, № 2. P. 121-122.

120. Rodriguez C. Interleukin-1 (3 suppressed apoptosis in CD34 positive bone marrow cells through activation of the type I IL-1 receptor / C. Rodriguez, C. Lacasse, T. Hoang // J. Cell. Physiol. 1996. - Vol. 166, № 3. - P. 387-395.

121. Root R.K. Myeloperoxidase-mediated iodination by granulocytes. Intracellular site of operation and some regulating factors / R.K. Root, T.P. Stossel // J. Clin. Invest. 1974. - Vol. 53, № 5. - P. 1207-1215.

122. Seed T. New Strategies for the prevention of radiation injury: possible implications for countering radiation hazards of long-term space travel / T. Seed, S. Kumar, M. Whitnall // J. Radiat. Res. 2002. - Vol. 43. - P. 239-244.

123. Seed T. Radiation protectants: current status and future prospects / T. Seed // Health Physics. 2005. - Vol. 89, № 5. - P. 531-545.

124. Shukla J. 1-Arginine reverses radiation-induced immune dysfunction: the need for optimum treatment window / J. Shukla, S. Chatterjee, V. Thakur // Radiat. Res.-2009.-Vol. 17, № l.-P. 180-187.

125. Signore A. The developing role of cytokines for imaging inflammation and infection / A. Signore, E. Procaccini, A. Annovazzi // Cytokine. 2000. - Vol. 12, № 10.-P. 1445-1454.

126. Singh V. K. Radioprotection by N-palmitoylated nonapeptide of humaninterleukin-lß / V. K. Singh, V. Srinivasan, T.M. Seed // Peptides. 2005. - Vol. 26. — P. 413-418.

127. Singh V.K. Radioprotective domain of interleukin-1 inhibits LPS-induced nitric oxide production / V.K. Singh, W. Jackson, T.M. Seed // Immunopharmacol. Immunotoxicol. 2004. - Vol. 26. - P. 193-202.

128. Singh V.K. Role of cytokines and growth factors in radioprotection / V.K. Singh, V.S. Yadav // Exp. Mol. Pathol. 2005. - Vol. 78. - P. 156-169.

129. Song J-Y. Radioprotective Effects of Ginsan, an Immunomodulator / J-Y. Song, S-K. Han, K-G. Bae // Radiat. Res. 2003. - Vol. 15, № 9. - P. 768-774.

130. Stylianov E. Interleukin-1 / E. Stylianov, J. Saklatvala // Int. J. Biochem. Cell Biol. 1998.-Vol. 3, № 10.-P. 1075-1079.

131. Testa N.G. Cytokines and hematological response to radiation / N.G. Testa // Int. J. Radiat. Biol. 1991.-Vol. 60, № 6.-P. 940-941.

132. Till J.E. A direct measurement of the radiation sensitivity of normal mouse bone marrow cells / J.E. Till, E.A. McCulloch // Rad. Res. 1961. - Vol. 14. - P. 213- 222.

133. Trotta P.P. Cytokines: an overview / P.P. Trotta // Am. J. Reprod. Immunol. 1991,-Vol. 25.-P. 137- 141.

134. Van Damme J. Homogenous interferon-inducing 22K factor is related to endogenous pyrogen and interleukin-1 / J. van Damme, M. De Ley, G. Opdenakker et al./Nature. 1987.-Vol. 314.-P. 266-267.

135. Van der Meeren A. Administration of recombinant human IL11 after supralethal radiation exposure promotes survival in mice: interactive effect with thrombopoietin / A. Van der Meeren, M. Mouthon, M. Gaugler // Radiat Res.2002. № 157(6). - P. 642- 649.

136. Varioushina E. The study of proinflammatory cytokine production and neutrophil Chemotaxis at sites of local inflammation / E. Varioushina, V. Konusova, A. Kotov // Russian J. of HIV/AIDS and related problems. 1998. -Vol. 2, №3.-P. 110-111.

137. Vogel S.N. Induction colony stimulating factor in vivo by recombinant interleukin-lß and recombinant tumor necrosis factor-a / S.N. Vogel, S.D. Douches, E.N. Kaufman et al.J// J. Immunol. 1987. - Vol. 138. - P. 2143-3248.

138. Walker R.J. Requirements of radioprotectors for military and emergency needs / R.J. Walker // Pharmacol. Ther. 1988. - Vol. 39, № 1-3. - P. 13-20.

139. Walker R.J. Textbook of military medicine: Medical consequences of nuclear warfare / R.J. Walker, T.J. Cerveny. Falls Church, VA: Office of the Surgeon General; 1989. - 120 p.

140. Wang Hai-tao Radioprotective effects of trombocyte factor-4 on immune function of the irradiated mice / Hai-tao Wang, Lan Yang, Qiong Tian // Med. J. Nat. Def. 2006. - 27. - № 3. - P. 161-163.

141. Wang Xin-ru Treatment of dogs by IL-11 and G-CSF at the radiating syndrome induced by a neutron irradiation / Xin-ru Wang, Huang Hai-xiao, Xong Cuo-lin // Chin. J. Radiol. Med. and Prot. 2006. - 26. - №3. - P. 221-224.

142. Weiss J. F. Radioprotection by antioxidants / J. F. Weiss , M.R. Landauer // Ann. N.Y. Acad. Sei. 2006. - Vol. 899. - P. 44-60.

143. Whitnall M.H. Androstenediol stimulates myelopoiesis and enhances resistance to infection in gamma-irradiated mice / M.H. Whitnall, T.B. Elliott // Int. J. Immunopharmacol. 2000. - Vol. 22. - P. 1-14.

144. Whitnall M.H. In vivo radioprotection by 5-androstenediol: stimulation of the innate immune system / M.H. Whitnall, C.E. Inal, W.E. Jackson // Radiat. Res. -2001.-Vol. 15, №6. -P. 283-293.

145. Xino Yuan-mei Influence of Zn on the radiation induced damages of haemopoetic cells of a bone marrow / Yuan-mei Xino, Ling-fu Zeng // Mod. Pren.

146. Med. 2007. - 34. - № 2. - P. 284-291.

147. Zucali J.R. Human N-terminal analogs of interleukin-1 beta demonstrate altered binding and function in hematopoiesis / J.R. Zucali, J. Moreb, R.C. Newton et al. // Exp. Hematol. 1990. - Vol. 18. - P. 1078-1082.

148. Zucali J.R. Interleukin-1 stimulates fibroblasts to produce granulocyte-macrophage colony-stimulating activity and prostaglandin E2 / J.R. Zucali, C.A. Dinarello, D. Oblong // J. Clin. Invest. 1986. - Vol. 77. - P. 1857-1863.

Информация о работе

Зацепин, Виктор Викторович
кандидата медицинских наук
Санкт-Петербург, 2009
ВАК 03.00.01

Диссертация

Экспериментальное исследование эффективности совместного применения цистамина и интерлейкина- 1 [В] при остром радиационном поражении - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы