Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Эколого-токсикологическое воздействие нитрила акриловой кислоты на иммунную систему животных

ВАК РФ 03.00.16, Экология

Автореферат диссертации по теме "Эколого-токсикологическое воздействие нитрила акриловой кислоты на иммунную систему животных"

На правах рукописи

Мысник Леонид Владимирович

ЭКОЛОГО-ТОКСЖОЛОГИЧЕСКОЕ ВОЗДЕЙСТВИЕ НИТРИЛА АКРИЛОВОЙ КИСЛОТЫ НА ИММУННУЮ СИСТЕМУ ЖИВОТНЫХ

03 00 16-экология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

иил722Ю

Саратов-2008

003172210

Работа выполнена на кафедре технологий уничтожения химического оружия и токсичных веществ Саратовского военного института биологической и химической безопасности

Научный руководитель

доктор биологических наук, профессор, Заслуженный деятель науки РФ Шляхтин Геннадий Викторович

Официальные оппоненты- доктор биологических наук, профессор

Тихомирова Елена Ивановна

доктор биологических наук, профессор Игнатов Олег Владимирович

Ведущая организация

Саратовский государственный медицинский университет

Защита состоится «2» июля 2008 г. в 13 часов на заседании диссертационного совета Д 212 243 13 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Саратовский государственный университет им Н Г Чернышевского» по адресу 410012, г. Саратов, ул. Астраханская, д 83 Е-пш1 Ьюзоуе1@5§и ги

С диссертацией можно ознакомиться в Зональной научной библиотеке ГОУ ВПО «Саратовский ГУ»

Автореферат разослан « Зо» мая 2008 г Ученый секретарь

диссертационного совета

С А Невский

Общая характеристика работы

Актуальность исследования Важной и актуальной проблемой общей и факториалыюй экологии является изучение действия веществ антропогенного (техногенного) происхождения на биологические системы различных уровней организации - молекулярные, субклеточные, клеточные, системные, органные и организменные. К числу таких веществ относится нитрил акриловой кислоты (HAK, акрилонитрил), который используется как сырье для производства полиакриловых и модакриловых нитей, синтетических каучуков, нитриловых эластиков, акриламида, клея, оргстекла и других материалов, а также применяется в синтезе ароматических веществ На Конференции ООН по окружающей среде и развитию (Рио-де-Жанейро, 1992) акрилаты, в частности, HAK включены в перечень приоритетных химических загрязнителей (Курляндский и др, 2005). Данные литературы свидетельствуют о том, что в последнее время загрязнение окружающей среды токсикантами общеядовитого действия, в частности, HAK, существенно увеличилось Это обусловлено постоянно растущим широким использованием акрилонитрила в промышленности (Саватеев, Куценко, 1982, 1993; Забродский, 1993, 2002, Германчук, 2000, Tarskikh, 2006)

Наиболее чувствительной к действию экотоксикантов является иммунная система человека и животных, изменения в функционировании которой предваряют различные патологические состояния (Сиротинин, 1979, Петров и др, 1987, Хаитов и др, 1995, Ройт и др, 2000). При этом ответные реакции организма достаточно информативно могут характеризовать специфику воздействия экотоксикантов и могут быть использованы для оценки экологического риска ксенобиотиков, в том числе HAK Высокая чувствительность факторов неспецифической резистентности организма и системы адаптивного иммунитета к действию токсикантов позволяет оценить нарушения иммунного гомеостаза после действия акрилонитрила в условиях экологического неблагополучия (Сидорин и др, 1996, Забродский, 1993, 2002, Descotes, 1986, Kimber, 1996, Friedman et al, 2003) Загрязнение окружающей среды HAK, как и другими веществами общеядовитого действия, может вызвать формирование вторичных иммунодефицитных состояний и развитие обусловленных ими различных заболеваний (Шубик 1976, Хаитов и др, 199э, Забродский, 1998, Descotes, 1986, Luster et aí, 1987)

Однако на настоящий момент особенности действия HAK на неспецифическую резистентность организма и систему адаптивного иммунитета

з

животных изучены недостаточно В этой связи представляется актуальным исследование нарушений иммунного гомеостаза организма животных на фоне экологического действия акрилонитрила

Цель исследования Эколого-токсикологическое исследование острого, подострого и хронического воздействия нитрила акриловой кислоты на активность факторов естественной резистентности и механизмы адаптивного иммунитета в организме экспериментальных животных.

Задачи исследования

1 Определить действие HAK на интегральное состояние неспецифической и иммунологической резистентности организма и показатели неспецифической защиты организма

2 Изучить влияние интоксикации HAK на содержание лимфоцитов в органах иммунной системы экспериментальных животных.

3 Исследовать изменения гуморального звена иммунного ответа при остром, подостром и хроническом действии HAK.

4 Оценить клеточные иммунные реакции после острого, подострого и хронического действия HAK

5. Определить влияние HAK на формирование вторичного иммунодефицитного состояния по активности миграции стволовых кроветворных клеток из костного мозга в селезенку, участию макрофагов в индукции гуморального иммунного ответа, кооперации Т- и В-лимфоцитов, содержанию ТЫ- и Th2-лимфоцитов и активности эстераз Т-клеток

6 Изучить нарушения функции коры надпочечников и состояние перекисного окисления липидов в клетках органов иммунной системы на фоне действия HAK.

Научная новизна Впервые дана комплексная эколого-токсшсологическая оценка действия HAK на активность факторов естественной резистентности и механизмов формирования адаптивного иммунитета у животных Экспериментально установлено, что острое действие в дозе 0 75 LD50, подострое действие акрилонитрила в течение 6 сут в дозе 1/7 LDso, а также хроническая интоксикация HAK в течение 30 и 60 сут (в дозах соответственно 0.01 и 0 005 LDsü) приводит к супрессии факторов неспецифической защиты и интегрального состояния резистентности организма Установлено, что острое отравление акрилонитрилом вызывает дозозависимое снижение лизоцима сыворотки крови, фагоцитарно-метаболической активности нейтрофилов, уменьшение лимфоидного индекса тимуса и селезенки и содержания лимфоцитов в органах системы иммунитета

4

Впервые на клеточном и системном уровне показано снижение функций гуморального иммунитета под влиянием острой, подострой и хронической интоксикации HAK: уменьшение числа антителообразующих клеток в селезенке, содержания IgM и IgG в сыворотке крови экспериментальных животных и супрессию функции ТЪ2-лимфоцитов в большей степени по сравнению с иммунным ответом, связанным с функцией Thl-лимфоцитов Воздействие акрилонитрила вызывает также торможение миграции стволовых кроветворных клеток костного мозга и способности макрофагов индуцировать гуморальный иммунный ответ. Впервые установлено, что HAK вызывает снижение активности ацетилхолинэстеразы Т-лимфоцитов, дозозависимое уменьшение числа эстеразопозитивных клеток в селезенке и концентрации кортикостерона в плазме крови животных, инициацию перекисного окисления липидов

Полученные экспериментальные данные позволяют считать, что при остром, подостром и хроническом действии акрилонитрила в организме животных формируется комбинированное вторичное иммунодефицитное состояние, характеризующееся одновременным снижением функционирования клеточного и гуморального звеньев адаптивного иммунитета

Научно-практическая значимость Установлены наиболее информативные показатели иммуносупрессивного действия HAK снижение содержания лимфоцитов в тимусе и селезенке, активности естественных клеток-киллеров, Т-зависимого гуморального иммунного ответа в продуктивной фазе антителогенеза, функции ТЪ2-клеток в индукции синтеза IgG Эти тссты могут быть использованы для оценки иммунотоксичности нитрилов и других соединений общстоксического действия Для исследования хронического эффекта действия HAK могут быть использованы показатели иммунных реакций, полученных при остром отравлении ядом в дозах 0.5 и 0 75 LDSÜ

Материалы диссертации внедрены в учебный процесс кафедры технологий уничтожения химического оружия и токсичных веществ Саратовского военного института биологической и химической безопасности, кафедры токсикологии и медицинской защиты ГОУ ВПО «Саратовский военно-медицинский институт», кафедры морфологии и экологии животных ГОУ ВПО «Саратовский государственный университет им Н Г. Чернышевского» Материалы диссертационной работы использованы в плановых НИР Саратовского военного института биологической и химической безопасности, а также в монографии «Иммунотоксикологая ксенобиотиков» (Саратов СВИБХБ, 2007)

Апробация работы Результаты исследований были доложены на XII Международном конгрессе по реабилитации в медицине и иммунореабилитации

5

(Патайя, Таиланд, 2007), Российской научной конференции «Медико-биологические проблемы токсикологии и радиологии» (Санкт-Петербург, 2008), заседаниях секции прикладных проблем безопасности хранения и уничтожения химического оружия Поволжского отделения АВН (2005-2008 гг.), научных конференциях кафедры токсикологии и медицинской защиты ГОУ ВПО «Саратовский военно-медицинский институт» (2007, 2008 гг), кафедр охраны окружающей среды и экологической безопасности процессов хранения и уничтожения химического оружия и токсичных веществ и технологий уничтожения химического оружия и токсичных веществ Саратовского военного института биологической и химической безопасности (2002 - 2008 гг ).

Публикации По теме диссертации опубликовано 13 работ, 2 из которых в изданиях перечня ВАК РФ

Декларация личного участия автора Автор лично участвовал в проведении лабораторных экспериментов Обработка полученных данных, их интерпретация и оформление осуществлены автором самостоятельно В совместных публикациях вклад автора составил 50-80 %

Объем и структура диссертации Работа изложена на 140 страницах, состоит га введения, 7 глав, заключения, выводов и практических рекомендаций Работа иллюстрирована 38 таблицами и 14 рисунками Библиографический указатель включает 234 источника отечественной и зарубежной литературы

Основные положения, выносимые на защиту

1 Воздействие НАК в условиях экологического неблагополучия сопровождается снижением активности факторов неспецифической и иммунологической резистентности организма животных, что проявляется увеличением их чувствительности к инфекции

2 Интоксикация НАК приводит к супрессии гуморальных и клеточных иммунных реакций, преимущественному снижению Т-зависимого антителообразования по сравнению с Т-независимым, при этом поражение лимфоцитов ТЬ2-типа более выражено, чем Thl-клеток

3 НАК вызывает нарушение иммунного гомеостаза в организме животных и формирование вторичного иммунодефицитного состояния вследствие снижения миграции стволовых кроветворных клеток из костного мозга, Т- и В-кле-ток в органы иммунной системы, кооперации Т- и В-клеток, способности макрофагов к индукции гуморального иммунного ответа, ингибирования эстсраз Т-лимфоцитов, активизации перекисного окисления липидов.

Содержание работы

Во введении обосновывается актуальность исследования, его теоретическая и практическая значимость, сформулированы основная цель и задачи

Глава 1 СОВРЕМЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О НАРУШЕНИЯХ ИММУННОГО СТАТУСА ПОД ВЛИЯНИЕМ ТОКСИКАНТОВ ОБЩЕЯДОВИТОГО ДЕЙСТВИЯ (обзор литературы)

В данной главе на основании анализа отечественной и зарубежной литературы дается токсикокинетическая и токсикодинамическая характеристика химических соединений общеядовитого действия, в том числе и HAK. Приводятся токсикометрические параметры акрилотприла, особенности его воздействия на органы, системы, ткани и клетки живых организмов Анализируются известные данные о нарушениях неспецифической резистентности организма и иммупного статуса животных при воздействии акрилонитрила. Кратко описываются клинические проявления отравлений HAK Указаны дозы, которые формируют зону экологического неблагополучия

Глава 2 МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Перечень условных сокращений АЗКЦ - антителозависимая клеточная цитотоксичность, АОК - антителообразующие клетки, ГЗТ - гиперчувствительность замедленного типа, ГГНС - гипоталамо-гипофизарно-иадпочечникоеая система, ЕКК - естественные клетки-киллеры, КОЕ - колониеобразующие единицы; НИРО - неспецифическая и иммунологическая резистентность организма, ШО-неспецифическая резистентность организма, НСТ-тест -нитросиний тетразолиевый тест, ОДЛТА - отрицательный двоичный логарифм титра антител, ПОЛ - перекисное окисление липидов, ФМАН - фагоцитарно-метаболическая активность пейтрофилов, Etso - среднеэффективное время жизни животных

Исследования проводились в 2002-2008 гг. на 785 неинбредных крысах и 83 мышах обоего пола Масса животных составляла соответственно 180-240 и 18-22 г. Эксперименты на грызунах проводили в соответствии с требованиями Женевской конвенции «International Guiding Principles for Biomedical Research Inrolmg Animals» (Geneva, 1990) В качестве вещества, моделирующего острое и хроническое действие веществ общеядовитого действия, применяли HAK

HAK вводили подкожно в дозах 0 25,0 5 и 0.75 LD¡о {LD¡o HAK для мышей и крыс составляла 38+4 и 77+6 мг/кг соответственно). Подострое действие моделировалось введением HAK в течение 6 сут в дозе 1/7 LDso, а хроническое — в дозе 0 01 и 0 005 LD¡о в течение 30 и 60 сут соответственно

Интегральное состояние НРО и НИР О определяли по показателям течения экспериментальной инфекции, вызванной внутрибрюшинным введением мышам и крысам суспензии суточной культуры Е coli (НРО - в дозах 1.5,2 0 и 2 5 млрд микробных тел без предварительной иммунизации, НИРО - в дозах 4 0, 6 0, 9 0 млрд микробных тел) Кроме того, моделировалась экспериментальная пневмония путем введения крысам суспензии суточной культуры P. vulgaris в дозах 3 5, 5 0, 6 5 млрд. микробных тел в ткань легкого с предварительной иммунизацией данной культурой в дозе 106 микробных тел за 4 сут до моделирования инфекционного процесса (Забродский, 1987)

При изучении факторов доиммунной защиты организма определяли сывороточную активность лизоцима, ФМАН общепринятыми методами (Хаитов и др, 1995, Бухарин и др , 1998, Бровкина и др, 2004; Рыбников и др, 2004) Действие HAK на миграцию лимфоцитов из органов иммунной системы определяли методом Хаитова и др (1985), а КОЕ го костного мозга в селезенку -методом эндогенного колокиеобразования (Петров, Хаитов, 1972, Till, Мс Culloch, 1961)

Исследование показателей Т-зависимого и Т-независимого гуморального иммунного ответа проводили через 5, 8, 14 и 20 сут после острой интоксикации HAK после иммунизации крыс эритроцитами барана и брюшнотифозным Vi-ан-тигеном (Vi-Ag) по ОДЛТА к эритроцитам барана и Vi-Ag, а также по числу АОК в селезенке (Белокрылов и др., 1980, Jeme, Nordin, 1963) При подострой интоксикации HAK иммунизацию антигенами осуществляли на 2 сут после первого введения HAK (исследование проводили на 7 сут) При хроническом действии HAK в течение 30 и 60 сут иммунизацию делали соответственно на 26 и 56 сут хронической интоксикации (исследование проводили на 31 и 61 сут соответственно) При исследовании кооперации Т- и B-клеток использовались клетки мышей в модели ex vivo (Thomas, Imamura, 1986)

Для оценки клеточного иммунного ответа определяли функцию Т- лимфоцитов по секреции ими фактора, ингибирующего миграцию лейкоцитов (Гембицкий и др, 1987), активность Thl -лимфоцитов в реакции ГЗТ, показатель АЗКЦ (Зимин, Ляхов, 1985), активность ЕКК (Гордиенко, 1984)

Активность ацетилхолинэстеразы в Т-лимфоцитах крыс определяли традиционным методом (Szelenyi et al, 1982) Содержание а-нафтил-AS-8

ацетатэстеразо- и а-нафтилбутиратэстеразолозитивных клеток (Т-лимфоцитов, моноцитов и макрофагов) изучали гистохимическим методом (Хейхоу, Кваглино, 1983), используя спленоциты Для определения уровня эритроцитов барана в плазме крови крыс использовали флюоромегрический метод (Moor et al, 1976) ПОЛ оценивали по активности каталазы и пероксидазы, суммарной продукции радикалов (СПР), содержанию малонового диальдегида (МДА) в крови (Коробейникова, 1989, Валеева и др , 2002)

Полученные данные обрабатывались с использованием общепринятых статистических методов Расчеты проводились на персональном компьютере с использованием пакета программ Statgraphics

Глава 3. ВЛИЯНИЕ ОСТРОГО ОТРАВЛЕНИЯ НИТРИЛОМ АКРИЛОВОЙ КИСЛОТЫ НА СОСТОЯНИЕ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ И ИММУНОЛОГИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ОРГАНИЗМА

HAK в дозах 0 25, 0 50 и 0 75 LD$о приводил к увеличению летальности мышей и крыс от экспериментальной инфекции Так, у мышей летальность по сравнению с контролем, составляющим 50%, увеличивалась соответственно на 16 6, 29 и 35%, а у крыс, при летальности в контроле 30% (р<0 05) соответственно на 3 3, 20 и 31.1% При введении HAK в дозах 0 25, 0 50 и 0.75 LDS0 у мышей и крыс отмечалось уменьшение 1Ц>о Е coli и Etj0 (статистически значимое - р<0 05 - при дозах 0 50 и 0 75 LD50)

При подостром и хроническом действии HAK летальность крыс увеличивалась по сравнению с контролем соответственно на 33 7, 50 0 н 38 4% (р<0 05), статистически значимо уменьшались LD50 Е coli и Etso р<0 05)

При изучении антиинфекционной НИРО установлено, что HAK (0 75 LDS0) приводит к увеличению летальности крыс от экспериментального перитонита Так, по сравнению с контролем, составляющим 15 5+5 3%, после острой интоксикащш этот показатель увеличивался на 22 6% (р<0 05), при этом, LD5Q Е coli уменьшалось в 1 6 раза (р^0 05), a Etso— в 1 3 раза (р<0 05).

При подостром и хроническом действии HAK летальность крыс увеличивалась по сравнению с контролем соответственно на 34 5, 24 5 и 23 3% (р<0 05) При данных воздействиях HAK статистически значимо уменьшались LDS0 Е coli и Et50 (р<0 05)

Острое, подострое и хроническое действие HAK приводит к увеличению летальности крыс от экспериментальной пневмонии, вызванной Р vulgaris Так, по сравнению с контролем, составляющим 22 8+7 1%, этот показатель

9

увеличивался после острой, подострой и хронической интоксикации НАК при экспозиции 30 и 60 сут соответственно на 34.5, 40 0, 30 0 и 33 3% (р<0 05). При остром, подостром и хроническом отравлении НАК при экспозиции 30 и 60 сут соответственно LD¡oP. vulgaris уменьшалась в 1.8,2,1.7 и 1 9 раза (р<0 05), a Et5¡> -в 1 5,1 9,1 5и 1.9 раза (р<0 05)

При остром действии НАК в дозах 0 25, 0 5 и 0.75 LD¡o отмечался дозозависимый эффект- содержание лизоцима в крови снижалось соответственно в 1 26 (р>0 05), 1 49 (р<0 05) и 1 82 (р<0 05) раза. Через 1 сут после подострого отравления НАК параметр уменьшался - в 2 раза (р<0 05), а после хронического воздействия - в 2 4 и 2 6 раза (р<0.05)

Под влиянием острого, подострого и хронического воздействия НАК ФМАН существенно снижалась Воздействие НАК приводило к значительному уменьшению фагоцитарного показателя и фагоцитарного числа Показатели спонтанного и индуцированного НСТ-теста под влиянием НАК через 1 сут снижались соответственно в 2 4 и 3 6 раза (р<0.05) Восстановление показателей при остром действии НАК отмечалось к 12 сут.

После подострого и хронического действия НАК в дозах 0 01 и 0.005 LDS0 показатели ФМАН существенно снижались по сравнению с контролем (р<0 05), причем степень их уменьшения приблизительно соответствовала редукции параметров после острого действия НАК в дозе 0 75 LD¡f> через 3 сут Исследование ФМАН после острого отравления НАК показало прямо связанное с дозой снижение данного параметра через 1 сут

Таким образом, после острого, подострого и хронического действия НАК происходит снижение НРО и НИРО (увеличивается летальность животных от экспериментальной инфекции, уменьшается LDiQ Е coli, Р vulgaris и Et-,0), наблюдается супрессия доиммунных факторов защиты (снижается активность лизоцима, дозозависимо уменьшается ФМАН)

Глава 4 ВЛИЯНИЕ НИТРИЛА АКРИЛОВОЙ КИСЛОТЫ НА СОДЕРЖАНИЕ ЛИМФОЦИТОВ В ОРГАНАХ СИСТЕМЫ ИММУНИТЕТА

Под влиянием НАК в дозах 0 25, 0 50 и 0.75 LD¡о, как показали наши исследования, дозозависимо уменьшается содержание лимфоцитов в тимусе через 1 сут после интоксикации в 1 3, 1 7 и 1 9 раза соответственно Аналогично изменяется содержание лимфоцитов в селезенке, костном мозге и лимфоузлах В крови и лимфоидных органах через 1 и 6 сут при дозе НАК 0 75 LD$0 снижалось содержание лимфоцитов, статистически значимое в крови (через 1-4 сут), тимусе 10

(через 1-6 сут), селезенке (через 1-6 сут), костном мозге (через 1 сут) и лимфоузлах (через 1 сут) (р<0 05). Через 9 сут отмечалось восстановление параметров до контрольного значения.

При подостром и хроническом действии HAK отмечалось приблизительно такое же снижение показателей, как и при действии HAK в дозе 0 75 LDS0 через 1-6 сут Это свидетельствует о выраженном лимфотоксическом действии HAK.

При исследовании цитограммы тимуса нами установлено, что под влиянием HAK в вилочковой железе через 6 сут происходит статистически достоверное уменьшение числа малых лимфоцитов по сравнению с контролем (р<0 05) При этом относительное количество незрелых и зрелых нейтрофилов, эозинофилов, моноцитов, макрофагов, ретикулярных и плазматических клеток увеличивалось (р<0 05). После острого отравления HAK уменьшение количества лимфоцитов в тимусе сопровождалось увеличением числа других клеток

После воздействия HAK через 6 сут в цитограмме селезенки в целом отмечались такие же изменения, как и в тимограмме Значимо (р<0.05) возрастало относительное число ретикулярных клеток Механизмы выявленных эффектов, видимо, такие же, как и обусловливающие изменение цитограммы тимуса

Таким образом, под влиянием острого действия HAK происходит дозозависимое снижение числа лимфоцитов в органах системы иммунитета и в крови, сопровождающееся изменением цитограммы тимуса и селезенки. При подостром и хроническом воздействии HAK отмечается снижение числа лимфоцитов во всех лимфоидных органах

Глава 5 ВОЗДЕЙСТВИЕ НИТРИЛА АКРИЛОВОЙ КИСЛОТЫ НА ГУМОРАЛЬНЫЕ ИММУННЫЕ РЕАКЦИИ

Установлено, что под влиянием острого, подострого и хронического действия HAK в индуктивной фазе иммунного ответа (введение яда одновременно с иммунизацией эритроцитами барана) статистически значимо снижался ОДЛТА к эритроцитам барана через 5, 8, 16 и 20 сут после иммунизации. Так, острая интоксикация HAK в дозах 0 25, 0 50 и 0 75 LDSо приводила к редукции ОДЛТА через 5 сут соответственно в 1 3, I 4 и 1 6 раза (р<0 05), а через 8 сут - в 1 2, 1 3 и 1 4 раза (р<0 05), 14 сут - в 1 2, 1.4 и 1 5 раз (р<0 05), 20 сут - в 1 1, 1 2 и 1 3 раза (р<0 05) по сравнению с контролем соответственно Полученные данные свидетельствуют о том, что при остром действии HAK иммуносупрессивные эффекты прямо связаны с дозой токсиканта

и

При подостром и хроническом действии HAK через 30 и 60 сут отмечалось снижение ОДЛТА При подостром действии HAK ОДЛТА снижался в 1.4 раза (р<0 05), а при хроническом - в 1 7 и 1 6 раза (р<0.05) HAK при остром воздействии дозозависимо уменьшает синтез IgM, а также продукцию IgG до 20 сут, что свидетельствует о супрессии соответственно активности ТЫ- и ТЪ2-лимфоцитов

Подострое и хроническое действие HAK сопровождалось приблизительно таким же изменением показателей, как и при остром в дозе 0 75 LDS0 через 5 сут (на синтез IgM и функцию Thl-лимфоцитов) и 8 и 14 сут (на продукцию IgG и функцию ТЬ2-лимфоцитов)

Показано (табл. 1), что в селезенке число АОК к эритроцитам барана у белых крыс через 5 сут после острой интоксикации HAK (при введении яда одновременно с эритроцитами барана) дозозависимо снижалось Так, при дозах HAK, составляющих 0.25, 0 50 и 0 75 LD50, показатель уменьшался в 1 6, 2 и 3 раза (р< 0 05) соответственно Более выраженные изменения числа АОК к эритроцитам барана были обнаружены при введении HAK через 3 сут после иммунизации В продуктивной фазе антителогенеза число АОК в селезенке при дозах HAK, составляющих 0 25, 0 50 и 0 75 LDSÜ, снижалось соответственно в 2 3,3 и 4 5 раза (р< 0 05)

Таблица 1

Влияние острого действия HAK на число АОК к эритроцитам барана (* 103), синтезирующим IgM, в селезенке крыс через 5 сут после иммунизации

Доза, LDso Число АОК х Ю3 ±

Индуктивная фаза Продуктивная фаза

Контроль 45 3+3 5

0 25 28 2±2 6 20 1±2 1*

0 50 22 1±2 2* 15 3±2 3*

0 75 15 3±2 7* 10 0+2 0*

Примечание в каждой серии использовалось от б до 8 крыс, * - различие с контролем достоверно - р<0 05

Подострое и хроническое действие HAK в течение соответственно 30 и 60 сут характеризовалось приблизительно таким же изменением показателей, как и острое в дозе 0 75 LDi0 через 5 сут (на синтез IgM и функцию ТЫ-лимфоцитов) Так, число АОК, синтезирующим IgM, к эритроцитам барана в селезенке крыс снижалось в 2 7, 2 4 и 2.3 раза (р<0 05) Установлено, что после острого отравления HAK через 8 и 14 сут происходит дозозависимое снижение синтеза

IgG, оцениваемого по числу АОК, синтезирующих иммуноглобулины данного класса. Дозы HAK, составляющие 0 25, 0 50 и 0 75 LD}0 вызывали снижение показателя через 8 сут соответственно в 1 3, 1.6 и 2 раза (р<0 05), а через 14 сут -соответственно в 1.4,1 9 и 2 4 раза (р<0 05)

При подостром и хроническом в течение соответственно 30 и 60 сут действии HAK продукция IgG, оцениваемая по числу АОК через 8 сут после иммунизации, уменьшалась соответственно в 1 7, 1 5 и 1 9 раза (р<0 05), а через 14 сут - соответственно в19,21и18 раза (р<0 05)

Дозы HAK, составляющие 0 25, 0 50 и 0.75 LDS0, вызывали снижение АОК к Vi-Ag соответственно в 1 3, 1.8 и 2 1 раза (р< 0 05) Полученные результаты показывают, что HAK в сублетальных дозах оказывает значительно меньшее действие на Т-независимый синтез B-клетками IgM по сравнению с Т -зависимой антителопродукцией. При подостром и хроническом действии HAK через 30 и 60 сут в дозах соответственно 0 01 и 0 005 LDS0 отмечалось уменьшение числа АОК к Vi-Ag соответственно в 2,1 9 и 1.7 раза (р<0 05).

Таким образом, после действия HAK происходит преимущественно снижение Т-зависимой антителопродукции B-клетками (синтеза IgM и IgG), связанной с функцией Thl- и ТЬД-лимфоцитов, более выраженное в продуктивной фазе антителогенеза по сравнению с индуктивным периодом Иными словами, происходит снижение гуморального иммунного ответа под влиянием HAK

Глава 6 ВЛИЯНИЕ НИТРИЛА АКРИЛОВОЙ КИСЛОТЫ НА КЛЕТОЧНЫЙ ИММУННЫЙ ОТВЕТ

Установлено, что после острой интоксикации HAK у крыс через 1 и 3 сут дозозависимо снижается функция Т-клеток Так, дозы HAK, составляющие 0 25, 0 50 и 0 75 ZAo, уменьшали функцию Т-клеток через 1 сут соответственно на 19 0 (р>0.05), 35 4 (р<0 05) и 42 9% (р<0 05) Снижение показателя сохранялось до 12 сут, причем оно было статистически значимым (р<0 05) при дозе HAK, составляющей 0 5 и 0 75 LDS0 в течение 9 сут При подостром и хроническом действии HAK через 30 и 60 сут в дозах соответственно 0 01 и 0 005 LDso отмечалось снижение функции Т-клеток соответственно на 26 3, 36 9 и 33 8% (р<0 05).

При острой интоксикации HAK происходит дозозависимое снижение реакции ГЗТ, характеризующей функцию ТЫ-лимфоцитов соответственно в 1 6,

1 9 и 2 4 раза (р<0 05) без переноса клеток (рис 1) и в 1 9,1 6 и 1 7 раза (р<0 05) соответственно при переносе клеток крысам-реципиентам Выявленные изменения формирования ГЗТ позволяют заключить, что HAK в дозах 0 25, 0 50 и 0 75 LDSо вызывает супрессию ТЫ-лимфоцитов в реализации как первичного, так и вторичного клеточного иммунного ответа

% ЕКК, %

40i

Н 30-

£ 20-

& 10-

ш

40 -i

30 -

20-

10-

12 3 4 Рис 1 Влияние острой интоксикации НАК на функцию Thl-лимфоцитов по реакции ГЗТ у крыс

По оси ординат—уровень реакции ГЗТ у крыс, % По оси абсцисс - доза LDso, 1 - контроль, 2 - 0 25 LDso, 3 - 0 50 LD50, 4 - 0 75 LD¡o, * • различие с контролем достоверно - р<0 05

12 3 4 Рис 2 Влияние подострого и хронического действия НАК на ЕКК По оси ординат - показатель активности ЕКК, % По оси абсцисс - доза ¿£)50 экспозиция, сут, 1 - контроль, 2 - 1/7 ££>5о х 6 сут, 3 - 001 1£)50хЗО сут, 4 - 0 005 Л£>5о* 60 сут, * - различие с контролем достоверно - р<0 05

При подостром и хроническом действии НАК через 30 и 60 сут отмечалось снижение функции Thl-клеток в первичном клеточном иммунном ответе соответственно в 2 1, 2 7 и 2 2 раза (р<0 05), а во вторичном - соответственно в 1 86,1 8 и 1 9 раза (р<0.05).

Острое отравление НАК в дозах 0 25, 0 50 и 0 75 LDso приводило к прямо связанной с дозой супрессией АЗКЦ спленоцигов соответственно в 1 5, 1 8 и 2 5 раза (р<0 05), а АЗКЦ тимоцитов — в 1 5,17и28 раза (р<0 05) При подостром (в течение 6 сут) и хроническом действии НАК через 30 и 60 сут в дозах соответственно 0 01 и 0 005 LDso отмечалось уменьшение АЗКЦ спленоцигов соответственно в 1 9, 1 86 и 1 88 раза (р<0 05), а тимоцитов - в2 2, 19и2 раза (р<0 05) соответственно

При исследовании влияния на ЕКК НАК нами установлено (рис 2), что при действии токсиканта через 1 и 9 сут происходит дозозависимое снижение активности ЕКК Так, дозы НАК 0 25, 0 50 и 0 75 LDso, вызывали уменьшение активности ЕКК через 1 сут в 1 4, 1 8 и 2 5 раза (р<0 05), а на 9 сут - в 1 3, 1 5 и 16 раз (р<0 05) соответственно На 12 сут происходило восстановление

14

активности ЕКК, однако отмечалась прямо связанная с дозой тенденция к редукции показателя

При подостром (в течение 6 сут) и хроническом действии HAK через 30 и 60 сут в дозах 0 01 и 0 005 LDS0 отмечалась супрессия функции ЕКК соответственно в 1 9,2 2 и 2 раза (р<0 05)

Таким образом, острое, подострое и хроническое действие HAK сопровождается уменьшением функции Т-лимфоцитов, в частности Thl-лимфоцитов, супрессией АЗКЦ и снижением активности ЕКК.

Глава 7 МЕХАНИЗМЫ ФОРМИРОВАНИЯ ВТОРИЧНОГО ИММУНОДЕФИЦИТА ПРИ ДЕЙСТВИИ НИТРИЛА АКРИЛОВОЙ КИСЛОТЫ

Нами показано (рис 3), что острая интоксикация НАК в дозах 0 25, 0.50 и 0.75 ¿£>50 вызывает дозозависимое снижение числа КОЕ в селезенке соответственно в 1 5 (р> 0.05), 2 2 (р< 0 05) и 3.3 раза (р< 0 05) При подостром (в течение 6 сут) и хроническом действии НАК через 30 и 60 сут в дозах соответственно 0 01 и 0.005 LD¡0 отмечалось снижение миграции СКК из костного мозга в селезенку в 2 5, 2 1 и23 раза (р<0 05) Полученные данные свидетельствуют о снижении миграции из костного мозга СКК, В-клеток и предшественников Т-лимфоцитов (Петров и др, 1981)

После действия НАК ex vivo через 1 сут функция В-клеток в кооперации с Т-лимфоцитами снижалась в 1 4 раза (р<0 05), а функция Т-клеток - в 2 раза (р<0 05) по сравнению с контролем

16 т

12-

25 1

20 ■

15 -

и

г; 10-

>>

а 5-

о

U!

о -1

Рис

12 3 4

3 Влияние НАК на число КОЕ в селезенке мышей

По оси ординат - число КОЕс, уел ед По оси абсцисс - доза LD¡o, 1 - контроль, 2 - доза 0,25 LDso, 3 - доза 0,50 LDso, 4 - доза 0 75 ¿Oso, * - различие с контролем достоверно -р<0 05

1 2 3 4 5 Рис 4 Влияние НАК на способность макрофагов индуцировать гуморальный иммунный ответ у крыс (по числу АОК к ЭБ х 103 через 5 сут) По оси ординат -значение числа АОК к ЭБ х 103 По оси абсцисс - доза экспозиция, суг, 1 -контроль, 2 - доза 0 75 ££>50, 3 - доза 1/7 ££>5о х б сут, 4 - доза 0 01 Шщ х 30 сут, 5 -доза 0 005 £До х 60 сут, * - различие с контролем достоверно - р<0 05

При исследовании способности макрофагов индуцировать гуморальный иммунный ответ крыс через 1 сут нами установлено (рис 4), что острое действие HAK в дозе 0 75 LD¡о снижает способность макрофагов к индукции антителообразования, оцениваемой по числу АОК к эритроцитам барана в селезенке, в 2 3 раза (р<0.05) по сравнению с контролем При подостром (в течение 6 сут) и хроническом действии HAK через 30 и 60 сут в дозах соответственно 0 01 и 0.005 LD50 отмечалось снижение показателя в 1 7,1 5 и 1 8 раза (р<0 05)

Острое отравление HAK вызывало повышение содержания кортикостерона в крови через 1 ч в 1 58 раза (р<0 05) по сравнению с контрольным уровнем, видимо, в результате действия адрено-кортикотропного гормона, которое сменялось снижением его синтеза через 3 и 24 ч, вероятно, в результате ингибирования основным метаболитом нитрилов циан-ионом компонента аз цитохром-с-оксядазы системы энзимов тканевого дыхания митохондрий коры надпочечников (Dhabhar et al, 1996) Через 24 ч концентрация кортикостерона в плазме крови при действии HAK была ниже, чем в контроле в 1 6 раз (р<0.05) Через 3 сут острое отравление HAK (0 75 Ю50) вызывало снижение кортикостерона в крови в 2.1 раза (р<0 05) по сравнению с контрольным уровнем, а через 6 сут его концентрация существенно не отличалась от контрольного значения

При подостром и хроническом действии HAK через 30 и 60 сут в дозах соответственно 0 01 и 0 005 ¿D¡o отмечалось уменьшение концентрации кортикостерона соответственно в 1.8, 1 6 и 1 9 раза (р<0 05) Нами установлено, что HAK в дозе 0 75 LD¡о через 3 сут снижает активность ацетилхолинэстеразы Т-клеток тимоцитов и спленоцитов соответственно в 1 4 и 1 5 раза (р<0 001) При подостром (в течение 6 сут) и хроническом действии HAK через 30 и 60 сут в дозах соответственно 0.01 и 0 005 LDS0 отмечалось приблизительно такое же снижение показателя, как и при остром через 3 сут

При остром действии HAK в дозах 0 25 и 0 50 LD$o число клеток (в основном Т-лимфоцитов, а также моноцитов и макрофагов), содержащих а-наф-тил-АБ-ацетатэстеразу в спленоцитах крыс, практически не снижалось При действии HAK в дозе 0,75 LD¡0 число исследованных клеток уменьшалось в 1 3 раза (р<0 05)

Содержание а-нафтил-бутиратэстеразопозитивных клеток селезенки при действии HAK в дозах 0 25, 0 50 LD$о существенно не снижалось, а при дозе 0 75 LD¡o- уменьшалось в 1 4 раза (р<0 05)

HAK при остром, подостром и хроническом действии инициирует ПОЛ. Так, при острой интоксикации HAK активность каталазы и пероксидазы, характеризующей антиоксидантную систему, уменьшалась соответственно на 32.1 и 37.1% (р<0.05). Концентрация основного продукта ПОЛ — МДА при остром отравлении HAK повышалась на 22.1% (р<0 05), а СПР - на 22.8% (р<0,05) При подостром действии HAK отмечалось снижение каталазы и пероксидазы соответственно на 35.6 и 47 3%, при хронической интоксикации в дозе 0 Ol LD5d _ соответственно на 27.6 и 27 4, а в дозе 0 005 LD}0 - на 40 7 и 38.2% (р<0 05) СПР и содержание МДА при подостром и хроническом действии HAK изменялись приблизительно так же, как и при остром отравлении HAK

Установлена выраженная прямая (г=0 69-0 78) корреляция между параметрами системы иммунитета и показателями антиоксидантной системы и обратная (г= - 0 67-0.78) корреляция между параметрами системы иммунитета и показателями ПОЛ Установлено, что показатели, характеризующие различные иммунные реакции и связанную с ними функцию Thl- и Т112-лимфоцитов, при действии HAK в среднем снижались соответственно в 2 и 3.1 раза Это свидетельствует о том, что HAK в существенно большей степени поражает функцию ТЬ2-лимфоцитов по сравнению с действием яда на ТЫ-лимфоциты

Полученные результаты позволяют заключить, что формирование вторичного иммунодефицитного состояния в организме экспериментальных животных при острой, подострой и хронической интоксикации HAK обусловлено уменьшением миграции клеток в органы системы иммунитета из костного мозга, снижением кооперации Т- и B-лимфоцитов, вследствие преимущественного поражения Т-клеток, менее выраженным снижением активности Thl-лимфоцитов по сравнению с функцией ТЬ2-клеток, ингибированием эстераз Т-лимфоцитов, моноцитов, макрофагов и активацией пероксидации липидов

ВЫВОДЫ

1 Эколого-токсикологическое воздействие нитрила акриловой кислоты характеризуется супрессией интегрального состояния неспецифической резистентности и адаптивного иммунитета в организме животных, снижением активности лизоцима сыворотки крови и фагоцитарно-метаболической активности нейтрофилов

2 Под влиянием острого, подострого и хронического воздействия нитрила акриловой кислоты происходит уменьшение содержания лимфоцитов в органах

17

системы иммунитета и крови, изменение цитограммы тимуса и селезенки

3. После действия нитрила акриловой кислоты происходит преимущественно снижение Т-зависимого антителообразования по сравнению с Т-независимым, индукции синтеза ^М и Уменьшение

антителообразования, связанное с функцией ТЫ-лимфоцитов, более выражено в продуктивном периоде антителогенеза по сравнению с его индуктивной фазой

4 Действие нитрила акриловой кислоты вызывает снижение активности Т-лимфоцитов, оцениваемой по реакции ингибирования миграции лейкоцитов, функции ТЫ-лимфоцитов, антителозависимой клеточной цитотоксичности и активности естественных клепок-киллеров

5 Нитрил акриловой кислоты вызывает нарушение иммунного гомеостаза и формирование вторичного иммунодеф ицитиого состояния у животных вследствие реализации следующих механизмов: снижения миграции стволовых клеток из костного мозга, содержания лимфоцитов в органах системы иммунитета, кооперации Т- и В-лимфоцитов, способности макрофагов индуцировать гуморальный иммунный ответ, более выраженной супрессии активности ТЬ2-лимфоцитов по сравнению с функцией ТЫ-клеток.

6 На фоне действия нитрила акриловой кислоты происходит дозозависимое ингибирование эстераз Т-лимфоцитов, моноцитов и макрофагов, снижение концентрации кортикостерона в плазме крови, активация перекисного окисления липидов в клетках органов иммунной системы животных

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1 Наиболее информативными показателями эколого-токсикологического действия нитрила акриловой кислоты, которые могут быть использованы для оценки иммуносупрессивных эффектов нитрилов и других соединений общетоксического действия, являются- снижение содержания лимфоцитов в органах системы иммунитета, способности макрофагов индуцировать гуморальный иммунный ответ, уровень активности естественных клеток-киллеров, показатели активности Т-зависимого гуморального иммунного ответа в продуктивной фазе антителогенеза и функции ТЪ2-клеток

2 При остром отравлении нитрилом акриловой кислоты в сублетальных дозах, подостром и хроническом воздействии в условиях экологического неблагополучия формируется вторичное постинтоксикационное иммунодефицитное состояние, требующее проведения профилактических мероприятий, направленных на восстановление функций системы иммунитета

18

3. Для оценки хронического эффекта действия нитрила акриловой кислоты в концентрациях, действующих в условиях экологического неблагополучия, могут быть использованы показатели иммунных реакций, полученные при остром отравлении этим ядом в дозах 0 50 - 0 75 Юьй

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ * - публикации в печатных изданиях перечня ВАК РФ

1 Германчук В Г, Забродский П Ф, Мысник Л В Редукция естественных клеток-киллеров при острой интоксикации нитрилами // Сборник научных статей 4 2 Биология, экология, медицина Саратов, Саратовский военный институт РХБЗ, 2002 С 81-82

2 Германчук В Г., Забродский П.Ф, Мысник Л В Механизмы им-мунотоксичности нитрила акриловой кислоты // Сборник научных статей Саратов, Саратовский военный институт РХБЗ, 2004 С 52-54

3 *Забродский П.Ф, Мысник Л.В Восстановление функции ТЫ- и ТЬ2-лимфоцитов полиоксидонием при интоксикации нитрилом акриловой кислоты // Аллергология и иммунология 2007. Том 8, № 3 С 328

4 *Забродский ПФ., Мандыч В Г, Мысник Л В Иммунотоксические свойства нитрила акриловой кислоты и их связь с перекисным окислением липидов // Вестник новых медицинских технологий 2007 Т XIV, №4 С 19-20

5 Забродский П Ф„ Мысник Л.В Супрессия нитрилом акриловой кислоты показателей системы иммунитета и её связь с инициацией перекисного окисления липидов П Саратовский военный институт РБХЗ Деп в ВИНИТИ 31 10 2007 г., № 1005 - В2007 8 с

6 Мысник Л В , Забродский П Ф, Шляхтин Г В Снижение нитрилом акриловой кислоты доиммунных механизмов защиты организма и иммунного статуса животных // Саратовский военный институт РБХЗ Деп в ВИНИТИ 31 10 2007 г, № 1006 - В2007 8 с

7 Мысник Л В, Шляхтин Г В, Забродский П Ф Редукция акрилонитрилом неспецифической и иммунологической резистентности организма // Саратовский военный институт РБХЗ Деп в ВИНИТИ 31 10 2007г, № 1007 - В2007.9 с.

8 Мысник Л В, Забродский П Ф Нарушение доиммунных механизмов защиты при интоксикации нитрилом акриловой кислоты // Сборник научных работ Саратов, Саратовский военно-медицинский институт, 2007 С 171-172

/

9 Мысник JIВ, Забродский П Ф Редукция показателей системы иммунитета при интоксикации нитрилом акриловой кислоты // Сборник научных работ. Саратов, Саратовский военно-медицинский институт, 2007 С 172 -174

10 Забродский ПФ, Мысник ЛВ, Шляхтин ГВ, Германчук В Г Нарушение доиммунного механизма защиты организма от инфекций и иммунного статуса при действии нитрила акриловой кислоты // Сборник научных трудов Выпуск 9 - Саратов, СВИБХБ, 2007. С. 147-150

11 Мысник Л В, Забродский П.Ф Иммунотоксичность акрилонитрила и ее связь с инициацией перекисного окисления липидов // Сборник научных трудов Выпуск 9 - Саратов, СВИБХБ, 2007 С 151-154

12 Шляхтин Г В , Забродский П. Ф., Мысник Л.В. Снижение функции Thl-и Т112-лимфоцитов и продуцируемых ими цитокинов у животных при отравлении нитрилом акриловой кислоты II Вопросы биологии, экологии, химии и методики обучения* Сборник научных статей Вып 10 - Саратов, 2008 С 8689 Саратовский государственный университет им Н.Г Чернышевского.

13 Забродский ПФ, Мысник Л В. Влияние острого отравления акрилонитрилом на систему иммунитета и перекисное окисление липидов // Медико-биологические проблемы токсикологии и радиологии.- СПб.. ООО «Изд-воФолиант»,2008 -С 92-94

Подписано в печать 27 05 2008 Формат 60 * 841/,6 Бумага офсетная № 1. Гарнитура Тайме Печать офсетная Усл. печ л 1,0 Тираж 100 экз Заказ №265.

Отпечатано в типографии Издательства Саратовского университета 410012, г Саратов, ул Астраханская, 83

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Мысник, Леонид Владимирович

Перечень сокращений.

Введение.

Глава 1. Современные представления о нарушениях иммунного статуса под влиянием токсикантов общеядовитого действия (обзор литературы)

1.1. Общая токсикологическая характеристика токсикантов общеядовитого действия.

1.2. Токсикологическая характеристика нитрила акриловой кислоты.

1.3. Влияние нитрила акриловой кислоты на систему иммунитета.

Глава 2. Материал и методы исследований.

Глава 3. Влияние острого отравления нитрилом акриловой кислоты на 38 состояние неспецифической и иммунологической резистентности организма

3.1. Влияние НАК на неспецифическую резистентность организма к 38 инфекции

3.2. Влияние острого, подострого и хронического отравления НАК на 41 обсемененность селезенки и циркулирующей крови Е. coli

3.3. Изменение антиинфекционной неспецифической и иммунологической резистентности организма при экспериментальном перитоните после острой интоксикации НАК

3.4. Влияние НАК на антиинфекционную неспецифическую и 44 иммунологическую резистентность организма при экспериментальной пневмонии

3.5. Влияние острого, подострого и хронического воздействия НАК на 45 сывороточную активность лизоцима

3.6. Изменение фагоцитарно-метаболической активности нейтрофилов при интоксикации НАК.

Глава 4. Влияние нитрила акриловой кислоты на содержание 53 лимфоцитов в органах системы иммунитета

4.1. Изменение лимфоидных индексов тимуса и селезенки

4.2. Содержание лимфоцитов в органах системы иммунитета

4.3. Изменение под влиянием НАК цитограмы тимуса и селезенки

Глава 5. Воздействие нитрила акриловой кислоты на гуморальные 63 иммунные реакции

5.1. Влияние на тимусзависимый гуморальный иммунный ответ

5.2. Влияние на тимуснезависимый гуморальный иммунный ответ

Глава 6. Влияние нитрила акриловой кислоты на клеточный иммунный 76 ответ

6.1. Оценка функции Т-лимфоцитов

6.2. Изменение функции Thl-лимфоцитов

6.3. Оценка антителозависимой клеточной цитотоксичности

6.4. Нарушение НАК функции естественных клеток-киллеров

Глава 7. Механизмы формирования вторичного иммунодефицита при 86 действии нитрила акриловой кислоты

7.1. Влияние НАК на миграции колониеобразующих единиц в 86 селезенку

7.2. Оценка кооперации Т- и В-лимфоцитов

7.3. Оценка способности макрофагов индуцировать гуморальный 90 иммунный ответ

7.4. Оценка массы надпочечников

7.5. Действие НАК на концентрацию кортикостерона в плазме крови

7.6. Изменение активности эстераз Т-клеток, моноцитов и макрофагов 96 под влиянием НАК

7.7. Влияние НАК на показатели перекисного окисления липидов

7.8. Роль супрессии функции Thl- ТЬ2-лимфоцитов в редукции 100 иммунных реакций под влиянием НАК

Введение Диссертация по биологии, на тему "Эколого-токсикологическое воздействие нитрила акриловой кислоты на иммунную систему животных"

Актуальность темы. Важной и актуальной проблемой общей и факториальной экологии является изучение действия веществ антропогенного (техногенного) происхождения на биологические системы различных уровней организации — молекулярные, субклеточные, клеточные, системные, органные и организменные. К числу таких веществ относится нитрил акриловой кислоты (НАК, акрилонитрил), который используется как сырье для производства полиакриловых и модакриловых нитей, синтетических каучуков, нитриловых эластиков, акриламида, клея, оргстекла и других материалов, а также применяется в синтезе ароматических веществ. На Конференции ООН по окружающей среде и развитию (Рио-де-Жанейро, 1992) акрилаты, в частности, НАК включены в перечень приоритетных химических загрязнителей (Курляндский и др., 2005). Данные литературы свидетельствуют о том, что в последнее время загрязнение окружающей среды токсикантами общеядовитого действия, в частности, НАК, существенно увеличилось. Это обусловлено постоянно растущим широким использованием акрилонитрила в промышленности (Саватеев, Куценко, 1982, 1993; Забродский, 1993, 2002; Германчук, 2000; Tarskikh, 2006).

Наиболее чувствительной к действию экотоксикантов является иммунная система человека и животных, изменения в функционировании которой предваряют различные патологические состояния (Сиротинин, 1979; Петров и др., 1987; Хаитов и др., 1995; Ройт и др., 2000). При этом ответные реакции организма достаточно информативно могут характеризовать специфику воздействия экотоксикантов и могут быть использованы для оценки экологического риска ксенобиотиков, в том числе НАК. Высокая чувствительность факторов неспецифической резистентности организма и системы адаптивного иммунитета к действию токсикантов позволяет оценить нарушения иммунного гомеостаза после действия акрилонитрила в условиях экологического неблагополучия (Сидорин и др., 1996; Забродский, 1993, 2002; Descotes, 1986; Kimber, 1996; Friedman et al., 2003). Загрязнение окружающей среды НАК, как и другими веществами общеядовитого действия, может вызвать формирование вторичных иммунодефицитных состояний и развитие обусловленных ими различных заболеваний (Шубик 1976; Хаитов и др., 1995; Забродский, 1998; Descotes, 1986; Luster et al., 1987).

Однако на настоящий момент особенности действия НАК на неспецифическую резистентность организма и систему адаптивного иммунитета животных изучены недостаточно. В этой связи представляется актуальным исследование нарушений иммунного гомеостаза организма животных на фоне экологического действия акрилонитрила.

Цель исследования: Эколого-токсикологическое исследование острого, подострого и хронического воздействия нитрила акриловой кислоты на активность факторов естественной резистентности и механизмы адаптивного иммунитета в организме экспериментальных животных.

Задачи исследования:

1. Определить действие НАК на интегральное состояние неспецифической и иммунологической резистентности организма и показатели неспецифической защиты организма.

2. Изучить влияние интоксикации НАК на содержание лимфоцитов в органах иммунной системы экспериментальных животных.

3. Исследовать изменения гуморального звена иммунного ответа при остром, подостром и хроническом действии НАК.

4. Оценить клеточные иммунные реакции после острого, подострого и хронического действия НАК.

5. Определить влияние НАК на формирование вторичного иммунодефицитного состояния по активности миграции стволовых кроветворных клеток из костного мозга в селезенку, участию макрофагов в индукции гуморального иммунного ответа, кооперации Т- и В-лимфоцитов, содержанию Thl- и ТЪ2-лимфоцитов и активности эстераз Т-клеток.

6. Изучить нарушения функции коры надпочечников и состояние перекисного окисления липидов в клетках органов иммунной системы на фоне действия НАК.

Научная новизна. Впервые дана комплексная эколого-токсикологическая оценка действия НАК на активность факторов естественной резистентности и механизмов формирования адаптивного иммунитета у животных. Экспериментально установлено, что острое действие в дозе 0.75 LD5Q, подострое действие акрилонитрила в течение 6 сут в дозе 1/7 LD$о, а также хроническая интоксикация НАК в течение 30 и 60 сут (в дозах соответственно 0.01 и 0.005 LD5Q) приводит к супрессии факторов неспецифической защиты и интегрального состояния резистентности организма. Установлено, что острое отравление акрилонитрилом вызывает дозозависимое снижение лизоцима сыворотки крови, фагоцитарно-метаболической активности нейтрофилов, уменьшение лимфоидного индекса тимуса и селезенки и содержания лимфоцитов в органах системы иммунитета.

Впервые на клеточном и системном уровне показано снижение функций гуморального иммунитета под влиянием острой, подострой и хронической интоксикации НАК: уменьшение числа антителообразующих клеток в селезенке, содержания IgM и IgG в сыворотке крови экспериментальных животных и супрессию функции ТЬ2-лимфоцитов в большей степени по сравнению с иммунным ответом, связанным с функцией Thl-лимфоцитов. Воздействие акрилонитрила вызывает также торможение миграции стволовых кроветворных клеток костного мозга и способности макрофагов индуцировать гуморальный иммунный ответ. Впервые установлено, что НАК вызывает снижение активности ацетилхолинэстеразы Т-лимфоцитов, дозозависимое уменьшение числа эстеразопозитивных клеток в селезенке и концентрации кортикостерона в плазме крови животных, инициацию перекисного окисления липидов.

Полученные экспериментальные данные позволяют считать, что при остром, подостром и хроническом действии акрилонитрила в организме животных формируется комбинированное вторичное иммунодефицитное состояние, характеризующееся одновременным снижением функционирования клеточного и гуморального звеньев адаптивного иммунитета.

Научно-практическая значимость. Установлены наиболее информативные показатели иммуносупрессивного действия НАК: снижение содержания лимфоцитов в тимусе и селезенке, активности естественных клеток-киллеров, Т-зависимого гуморального иммунного ответа в продуктивной фазе антителогенеза, функции ТЬ2-клеток в индукции синтеза IgG. Эти тесты могут быть использованы для оценки иммунотоксичности нитрилов и других соединений общетоксического действия. Для исследования хронического эффекта действия НАК могут быть использованы показатели иммунных реакций, полученных при остром отравлении ядом в дозах 0.5 и 0.75 LD50.

Материалы диссертации внедрены в учебный процесс кафедры технологий уничтожения химического оружия и токсичных веществ Саратовского военного института биологической и химической безопасности, кафедры токсикологии и медицинской защиты ГОУ ВПО «Саратовский военно-медицинский институт», кафедры морфологии и экологии животных ГОУ ВПО «Саратовский государственный университет им. Н.Г. Чернышевского». Материалы диссертационной работы использованы в плановых НИР Саратовского военного института биологической и химической безопасности, а также в монографии «Иммунотоксикология ксенобиотиков» (Саратов. СВИБХБ, 2007).

Апробация работы. Результаты исследований были доложены на: XII Международном конгрессе по реабилитации в медицине и иммунореабилитации (Патайя, Таиланд, 2007); Российской научной конференции «Медико-биологические проблемы токсикологии и радиологии» (Санкт-Петербург, 2008); заседаниях секции прикладных проблем безопасности хранения и уничтожения химического оружия Поволжского отделения АВН (2005-2008 гг.); научных конференциях кафедры токсикологии и медицинской защиты ГОУ ВПО «Саратовский военно-медицинский институт» (2007, 2008 гг.), кафедр охраны окружающей среды и экологической безопасности процессов хранения и уничтожения химического оружия и токсичных веществ и технологий уничтожения химического оружия и токсичных веществ Саратовского военного института биологической и химической безопасности (2002 - 2008 гг.), научных конференциях биологического факультета Саратовского государственного университета им. Н.Г. Чернышевского (2006 - 2008 гг.).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 13 работ, 2 из которых в изданиях перечня ВАК РФ.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Воздействие НАК в условиях экологического неблагополучия сопровождается снижением активности факторов неспецифической и иммунологической резистентности организма животных, что проявляется увеличением их чувствительности к инфекции.

2. Интоксикация НАК приводит к супрессии гуморальных и клеточных иммунных реакций, преимущественному снижению Т-зависимого антителообразования по сравнению с Т-независимым, при этом поражение лимфоцитов ТЬ2-типа более выражено, чем Thl-клеток.

3. НАК вызывает нарушение иммунного гомеостаза в организме животных и формирование вторичного иммунодефицитного состояния вследствие снижения миграции стволовых кроветворных клеток из костного мозга, Т- и В-клеток в органы иммунной системы, кооперации Т- и В-клеток, способности макрофагов к индукции гуморального иммунного ответа, ингибирования эстераз Т-лимфоцитов, активизации перекисного окисления липидов.

Заключение Диссертация по теме "Экология", Мысник, Леонид Владимирович

выводы

1. Эколого-токсикологическое воздействие нитрила акриловой кислоты характеризуется супрессией интегрального состояния неспецифической резистентности и адаптивного иммунитета в организме животных, снижением активности лизоцима сыворотки крови и фагоцитарно-метаболической активности нейтрофилов.

2. Под влиянием острого, подострого и хронического воздействия нитрила акриловой кислоты происходит уменьшение содержания лимфоцитов в органах системы иммунитета и крови, изменение цитограммы тимуса и селезенки.

3. После действия нитрила акриловой кислоты происходит преимущественно снижение Т-зависимого антителообразования по сравнению с Т-независимым, индукции синтеза IgM и IgG. Уменьшение антителообразования, связанное с функцией Thl-лимфоцитов, более выражено в продуктивном периоде антителогенеза по сравнению с его индуктивной фазой.

4. Действие нитрила акриловой кислоты вызывает снижение активности Т-лимфоцитов, оцениваемой по реакции ингибирования миграции лейкоцитов, функции Thl-лимфоцитов, антителозависимой клеточной цитотоксичности и активности естественных клеток-киллеров.

5. Нитрил акриловой кислоты вызывает нарушение иммунного гомеостаза и формирование вторичного иммунодефицитного состояния у животных вследствие реализации следующих механизмов: снижения миграции стволовых клеток из костного мозга, содержания лимфоцитов в органах системы иммунитета, кооперации Т- и В-лимфоцитов, способности макрофагов индуцировать гуморальный иммунный ответ, более выраженной супрессии активности ТЬ2-лимфоцитов по сравнению с функцией Thl-клеток.

6. На фоне действия нитрила акриловой кислоты происходит дозозависимое ингибирование эстераз Т-лимфоцитов, моноцитов и макрофагов, снижение концентрации кортикостерона в плазме крови, активация перекисного окисления липидов в клетках органов иммунной системы животных.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Наиболее информативными показателями эколого-токсикологического действия нитрила акриловой кислоты, которые могут быть использованы для оценки иммуносупрессивных эффектов нитрилов и других соединений общетоксического действия, являются: снижение содержания лимфоцитов в органах системы иммунитета, способности макрофагов индуцировать гуморальный иммунный ответ, уровень активности естественных клеток-киллеров, показатели активности Т-зависимого гуморального иммунного ответа в продуктивной фазе антителогенеза и функции ТЬ2-клеток.

2. При остром отравлении нитрилом акриловой кислоты в сублетальных дозах, подостром и хроническом воздействии в условиях экологического неблагополучия формируется вторичное постинтоксикационное иммунодефицитное состояние, требующее проведения профилактических мероприятий, направленных на восстановление функций системы иммунитета.

3. Для оценки хронического эффекта действия нитрила акриловой кислоты в концентрациях, действующих в условиях экологического неблагополучия, могут быть использованы показатели иммунных реакций, полученные при остром отравлении этим ядом в дозах 0.50 - 0.75 LD50.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Мысник, Леонид Владимирович, Саратов

1. Абдрашидова Н.Ф., Романов Ю.А. Состояние эритроцитарной системы ПОЛ-окислительная активность у больных хроническим бронхитом, вдыхавших и не вдыхавших озон // Бюл. эксперим. биол. и мед. — 2001. -Т. 132, №9.-С. 317-319.

2. Александров В.Н. Гуморальный иммунный ответ после травмы различной тяжести // Пат. физиол. и эксперим. терапия. 1983. - №4. - с. 70-72.

3. Арчаков А.И. Оксигенация биологических мембран. М.: Медицина, 1993.

4. Бабанов Г.П. Местные проявления действия нитрила акриловой кислоты на кожу и слизистые оболочки //Врач. дело. -1957.-№5.- с. 511-514.

5. Беленький М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта: 2-е изд., Л.: Медицина, 1963. - 235 с.

6. Беликов В.Г. Коррекция тимогеном нарушений физиологических механизмов регуляции иммуногенеза при остром отравлении токсичными химическими веществами // Дисс. . канд. мед. наук. — Саратов, СГМУ. -2001.- 149 с.

7. Белокрылов Г.А., Попова О.Я., Сорочинская Е.И. Сходство иммуно-, фагоцитозмодулирующих и антитоксических свойств дипептидов и составляющих их аминокислот //Бюл. эксперим. биол. и мед.-1999.-Т. 127, № 6.-С. 674-676.

8. Бельцкий С. М., Снастина Г. И. Механизм защиты от гнойной инфекции // Иммунология. 1985. - №2. - с. 14-20.

9. Бирбин B.C. Нарушения регуляции иммунного гомеостаза при еочетанном действии ядов общетоксического действия (нитрилов) и механической травмы // Автореф. дисс. . канд. мед. наук.— Саратов, СГМУ. -2002.- 24 с.

10. Бравве Г.П., Федюкович JI.B., Клюмина Г.Н. Влияние акрилатов на иммунную систему в эксперименте и пути коррекции //Матер. Всес. иммунол. съезда, Сочи. 15-17 нояб. 1989 и стенд, сообщ.: Т 1. М., 1989.- с. 277.

11. Бровкина И.Л., Конопля А.А., Утешев Б.С., Рыбников В.Н. Иммуномодулирующее действие пиридоксина, фолата и кобаламина при различных формах анемии // Эксперимент, и клин, фармакол.-2004а. Т.67, №1.-с. 32-36.

12. Бровкина И.Л., Конопля А.А., Утешев Б.С. Иммунометаболические эффекты взвимодействия жирорастворимых и водорастворимых витаминов при токсических формах анемиии // Эксперимент, и клин, фармакол.-20046. Т.67, №3.-с. 51-55.

13. Брызгина Т.М. Изменение кооперации Т- и В-лимфоцитов при иммунном ответе на эритроциты барана на фоне поражения печени четыреххлористым углеродом // Физиол. журн. Киев.- 1989.-Т 35.-№1.-с. 25-30.

14. Брюхин Г.В., Михайлова Г.И. Интенсивность реакции гиперчувствительности замедленного типа у потомства крыс с хроническими поражениями печени //Физиол. журн.-Киев.-1990.-Т 36.-№6.-с. 94-100.

15. Бухарин О.В., Васильев Н.В. Лизоцим и его роль в биологии и медицине. Томск, 1974. - 209 с.

16. Бухарин О.В., Сетко Н.П., Желудева Г.Н. Иммунологические сдвиги у экспериментальных животных при воздействии комплекса химических веществ //Гигиена труда.-1985.-№3.-с. 45-46.

17. Бухарин О.В., Сулейманов К.Г., Чернова О.Л., Иванов Ю.Б. Способность микроорганизмов к инактивации бактерицидного действия тромбоцитарного катионного белка ((3-лизина) // Бюл. экспер. биол. и мед.-1998.-№7.-с. 66-67.

18. Варенин С. А., Поделякин Н.А., Кашеварова А. Д. Проблемы медицинской защиты населения при химических катастрофах. 1992.-№1.- С. 66-71.

19. Василенко О.А. Характер и механизмы нарушения неспецифической резистентности организма и специфической иммунной защиты при остром отравлении арсенитами // Дисс. . канд. мед. наук. Саратов, СГМУ. -2004.- 165 с.

20. Галактионов В.Г. Графические модели в иммунологии. М. : Медицина, 1986.-240 с.

21. Гембицкий Е.В., Кожемякин Л.А., Королюк A.M., Морозов В.Г., Хавинсон В.Х. Оценка иммунного статуса организма в лечебных учреждениях Советской Армии и Военно-Морского Флота/ Метод, пособ.- 1987.- М.: Изд-во ЦВМУ МО СССР. С.24-25.

22. Генес В. С., Шмутер Л. М., Буркина-Вовк 3. И. Об едином математическом подходе к выявлению хронического действия малыхконцентраций промышленных ядов // Гигиена труда.-1981.-№ 1.-е. 3032.

23. Германчук В.Г. Нарушения регуляции физиологических механизмов иммуногенеза при остром отравлении нитрилами //Дисс. канд. мед. наук. Саратов, СВИРХБЗ. -2000.- 121 с.

24. Голиков С.Н., Саноцкий И.В., Тиунов JI.A. Общие механизмы токсического действия/ АМН СССР. -Д.: Медицина, 1986. -280 с.

25. Гольдберг Д.И., Гольдберг Е.Д. Справочник по гематологии. Томск, изд-во Томского ун-та.- 1980. - 266 с.

26. Гольдберг Е.Д., Штернберг И.Б., Михайлова Т.Н. Состояние лимфоидной ткани при введении рубомицина С//Пат. физиол. и эксперим. терапия.-1972.-№2.-с. 67-68.

27. Горизонтов П.Д. Система крови как основа резистентности и адаптации организма //Физиол. журн. Киев.- 1981а.-Т 27.-№3.-с. 317-321.

28. Горизонтов П.Д. Стресс. Система крови в механизме гомеостаза. Стресс и болезни. /В кн.: Гомеостаз. М.:Медицина, 19816.- С. 538-573.

29. Гордиенко С.М. Приемлемый для клинической практики метод оценки активности естественных и антителозависимых киллерных клеток //Лаб. дело.-1983.-N 9.-С. 45-48.

30. Гордиенко С.М. Нерадиометрические методы оценки естественной цитотоксичности на эритроцитарные клетки-мишени // Иммунология.-1984.-№ 1.-е. 31-36.

31. Гребенюк А.Н., Антушевич А.Е., Беженарь В.Ф. и др. Нейтрофил и экстремальные воздействия/ Под ред. А.Н. Гребенюка и В.Г. Бовтюшко. -СПб., 1998.- 215 с.

32. Гублер Е.В. Вычислительные методы анализа и распознавания патологических процессов. Л.: Медицина, 1978.-296 с.

33. Давыдов В.В. Флюорометрическое определение неконъюгированных 11-оксикортикостероидов в биологических средах организма // Патофизиология экстремальных состояний. Труды ВМА им. С.М. Кирова, т. 189.- Л.: ВмедА, 1970. С. 85-86.

34. Денисенко П.П. Роль холинореактивных систем в регуляторных процессах.- М: Медицина.-1980.-С. 296.

35. Дорошевич А. Л. Влияние фосфорорганических соединений на содержание некоторых биогенных аминов: Автореф. дис. канд. мед. наук.- Минск.-1971.-С. 23.

36. Ефремов А. М. Исследование свободных радикалов крови, мозга, печени и селезенки белых крыс, подвергавшихся хроническому отравлению нитрилом акриловой кислоты //Здравоохр. Белоруссии.-1976.-№6.-с. 74-78.

37. Забродский П.Ф. Влияние армина на факторы неспецифической резистентности организма и первичный гуморальный ответ //Фармакол. и токсикол. 1987.- Т 49.-№2.-с. 57-60.

38. Забродский П.Ф. Механизмы иммунотропных эффектов фосфорорганических соединений // Бюл. эксперим. биол. и мед. 1993. -Т 116, №8.-С. 181-183.

39. Забродский П.Ф., Киричук В.Ф., Грызунов А.В. Изменение неспецифической и иммунологической резистентности организма при остром отравлении дихлорэтаном //Бюл. эксперим. биол. и мед. — 1997.Т. 123.-№1.-С. 51-53.

40. Забродский П.Ф. Иммунотропные свойства ядов и лекарственных средств.- Саратов: Изд. СГМУ, 1998.-213 с.

41. Забродский П.Ф., Германчук В.Г. Оценка роли кортикостерона в реализации иммуносупрессивных эффектов при остром отравлении токсичными химическими веществами //Бюл. эксперим. биол. и мед. — 2000.-Т. 129.-№5.-С. 552-555.

42. Забродский П.Ф., Киричук В.Ф. Изменение показателей неспецифической резистентности организма, гуморальных и клеточных иммунных реакций после острого отравления ацетонитрилом //Бюл. эксперим. биол. и мед. 1998.-Т 125.-№5.-С. 548-550.

43. Забродский П.Ф., Киричук В.Ф. Фармакологическая коррекция постинтоксикационных иммунодефицитных состояний // Докл. АВН.-1999.-№2.-С.45-54.

44. Забродский П.Ф., Киричук В.Ф., Германчук В.Г., Беликов В.Г. Механизмы иммунотропных эффектов акрилонитрила //Бюл. эксперим. биол. и мед. -2000.-Т 129.-№5.-С. 547-549.

45. Забродский П.Ф., Ромащенко С.А. Влияние тиосульфата натрия на неспецифическую резистентность организма и иммунные реакции при остром отравлении акрилонитрилом //Эксперим. и клин, фармакол. — 1998.-Т 61.-№5.-с. 56-58.

46. Забродский П.Ф., Германчук В.Г., Трошкин Н.М. Иммуностимуляторы. Саратов, «Аквариус». — 2001.- 109 с.

47. Забродский П. Ф. Влияние ксенобиотиков на иммунный гомеостаз. В кн.: Общая токсикология / Под ред. Б.А. Курляндского, В.А. Филова.-М.: Медицина, 2002. - С. 352-384.

48. Забродский П.Ф., Лим В.Г., Мальцева Г.М., Молотков А.О. Иммунотропные свойства холинергических веществ / Под ред. П.Ф. Забродского. Саратов: Изд. «Научная книга», 2005. - 251 с.

49. Зарубина И.В., Миронова О.П. Антиоксидантная защита головного мозга при острой гипоксии беметилом // Бюл. эксперим. биол. и мед. — 2001. — Т. 133, №2. С. 165-167.

50. Заугольников С.Д., Кочанов М.М., Лойт А.О., Ставчинский И.И. Экспрессные методы определения токсичности и опасности химических веществ // Л.: Медицина, 1978.- 184 с.

51. Зотова Л.В. О токсическом действии акрилонитрила на организм экспериментальных животных при его поступлении через кожу //Гигиена и санит. -1976.-№10.-с. 103-105.

52. Иванов В. В. Окислительные превращения акрилонитрила как основа его токсического действия //Фармакол. и токсикол. 1987.- Т 43.-№3.-с. 383384.

53. Иванова А. С. Характер вовлечения эндокринной системы в стресс ответе на отравления нейротропными средствами // Токсикол. вест. -1998.-№4.-С. 16-19.

54. Измеров Н. Ф., Саноцкий И. В., Сидоров К. К. Параметры токсикометрии промышленных ядов при однократном воздействии. -М: Медицина, 1977.-239 с.

55. Кадушкин A.M. Воздействие диметилдихлорвинилфосфата на иммунный статус животных. // Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук.- СГУ им. Н.Г. Чернышевского, Саратов, 2007.- 20 с.

56. Кемилева 3. Вилочковая железа: Пер. с болг,- М.:Медицина,1984 256с.

57. Козяков В.П., Куценко С.А., Маркин Б.А. и др. Проблемы создания средств оказания экстренной медицинской помощи при авариях на объектах уничтожения химического оружия // Рос. Хим. журн. — 1993.-Т.37, №3.-С.99-101.

58. Комиссаренко В.П., Резников А.Г. Ингибиторы функции коры надпочечниковых желез. Киев, Здоров'я, 1972.- 374 с.

59. Корнева Е.А. Нервная система и иммунитет //Вестн. АМН СССР.-1985.-№11.-с. 76-85.

60. Корнева Е.А. Нарушение нейрогуморальной регуляции функций иммунной систем // Вест. АМН СССР.- 1990.- №11.- С. 36-42.

61. Корнева Е.А., Лесникова М.П., Яковлева Е.Э. Молекулярно-биологические аспекты изучения взаимодействия нервной, эндокринной и иммунной систем //Пробл. и перспективы соврем, иммунол.: Методол. анал. Изд. Новосибирск, 1988.- с. 87-100.

62. Коробейникова Э.Н. Фотометрический метод определения молонового альдегида // Лаб. дело.- 1989.- №7.- С.8-10.

63. Курляндский Б.А., Хамидулина Х.Х., Кудинова О.Н. Современные тенденции промышленного развития России и токсикологические проблемы химической безопасности // Токсикол. вестник. — 2005.- № 1.-С. 2-14.

64. Куценко С.А. Основы токсикологии: Научно-методическое издание / С.А. Куценко. -СПб., ООО Изд. «Фолиант», 2004. -720 с.

65. Куценко С.А. Военная токсикология, радиобиология и медицинская защита / С.А. Куценко, Н.В. Бутомо, А.Н. Гребенюк и др. -СПб., ООО Изд. «Фолиант», 2004. -528 с.

66. Лазарев Н.В. Вредные вещества в производстве. -Л: Химия, 1976.- Т 2.-с. 94-95.

67. Лазарева Д.Н., Алехин Е.К. Стимуляторы иммунитета.- М.: Медицина, 1985.-256 с.

68. Лакин Г.Ф. Биометрия.- М.: Высш. шк., 1980.- 293 с.

69. Лемус В.Б., Давыдов В.В. Нервные механизмы и кортикостероиды при ожогах. Л.: Медицина. Ленингр. отд-ние, 1974. -182 с.

70. Ленинджер А. Биохимия: Молекулярные основы структуры и функции клетки. Под ред. А.А. Баева, Я.В.Варшавского. Пер. с англ. М.: Мир, 1974.-957 с.

71. Лим В.Г. Нарушения неспецифической резистентности организма и иммунного статуса при острых отравлениях спиртами и хлорированными углеводородами и их коррекция // Автореф. дисс. . докт. мед. наук. Саратов, СГМУ. -2006.- 49 с.

72. Литовская А.В., Оскерко У.Ф., Егорова И.В., Шальнова В.А. Разработка экспериментальной модели оценки иммунотоксичности малых концентраций ксенобиотиков//Иммунология.-1997.-№4.-с. 53-57.

73. Лудевиг Р., Лос К. Острые отравления: Пер. с нем. —М.: Медицина, 1983.- 560 с.

74. Лужников Е.А. Клиническая токсикология. М.:Медицина. 1982. 368 с.

75. Лужников Е.А., Костомарова Л.Г. Острые отравления: Руководство для врачей.- М.: Медицина. 1989. 432 с.

76. Маркова И.В., Афанасьева В.В., Цыбулькин Э.К., Неженцев М.В. Клиническая токсикология детей и подростков. — Санкт-Петербург, Интермедика, 1998. 304 с.

77. Меерсон Ф.З. Патогенез и предупреждение стрессорных и ишемических повреждений сердца. М.: Медицина-1984.- 272 с.

78. Могуш Г. Острые отравления /Пер. с рум.- Бухарест, Медицинское издательство, 1984. с. 440-464.

79. Мутускина Е.А., Багдасаров JT.A., Трубина И.Е., Заржецкий Ю.В. Некоторые показатели стресс-реакции организма на разных этапах постреанимационного периода // Бюл. эксперим. биол. и мед. 2001. — Т.133, №1. - С. 38-41.

80. Петров Р.В., Хаитов P.M. Миграция стволовых клеток из экранированного костного мозга у неравномерно облученных мышей //Радиология.- 1972.-N 1.-С. 69-76.

81. Петров Р.В., Хаитов P.M., Манько В.М., Михайлова А.А. Контроль и регуляция иммунного ответа. М.: Медицина, 1981а. - 312 с.

82. Петров Р.В., Хаитов P.M. Иммунологические механизмы клеточного гомеостаза//В кн. Гомеостаз. -М.: Медицина, 19816.- с. 312-365.

83. Петров Р.В. Иммунология. -М.; Медицина 1987.- 416 с.

84. Ремезов А.И., Башмаков Г.А. Методы определения естественной (неспецифической) резистентности организма.-Л.,1976.- 65 с.

85. Ройт А. Основы иммунологии: Пер. с англ. М.: Мир, 1991.-327 с.

86. Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д. Иммунология. Пер. с англ.- М.: Мир, 2000. 582 с.

87. Ротенберг Ю.С. Токсиколого-гигиенические аспекты биоэнергетики // Всесоюзн. учред. конф. по токсикологии. Тез. докл.- М., 1980.- С. 108.

88. Ротенберг Ю.С. Классификация ксенобиотиков по локализации их действия на ферментные системы митохондрий // Бюл. эксперим. биол. и мед.- 1982.- №9.-С. 42-45.

89. Румянцев А.П., Тиунова Л.В., Остроумова И.А. Метаболизм соединений жирного ряда // Итоги науки и техники: Серия токсикология.-М., ВИНИТИ, 1981.-Т. 12.-С. 65-116.

90. Рыбников В.Н., Бровкина И.Л., Утешев Б.С. Влияние лизоцима на функционально-метаболическую активноссть полиморфно-ядерных лейкоцитов в условиях острой кровопотери // Эксперимент, и клин. фармакол.-2004. Т.67, №2.-с. 45-48.

91. Саватеев Н.В. Военная токсикология, радиология и медицинская защита. Л.: ВмедА, 1978,- 333 с.

92. Саватеев Н.В., Куценко С.А. Характеристика токсического действия веществ, представляющих опасность при разрушении промышленных объектов. Л.: ВмедА им. С.М. Кирова, 1982.- 44 с.

93. Саватеев Н.В., Куценко С.А. Ядовитые вещества, выделяющиеся при разрушении промышленных объектов, и мероприятия по оказанию медицинской помощи пострадавшим // Воен.-мед. журн. 1993.- №6.-С. 36-40.

94. Савченко А.А., Булыгнн В.Г., Федюкович JI.B. Влияние производных акриловой кислоты на метаболизм иммунокомпетентных клеток крыс in vivo //Институт мед. пробл. Севера СО РАМН.- Красноярск.-1995.-15 е.: Деп. ВИНИТИ 05. 07. 95.-№2015-В95.

95. Савченко В.М. Влияние роданистого аммония и тиомочевины на иммунологическую систему организма //Гигиена и санит. -1987.- №11.-с. 29-31.

96. Сакаева Д.Д, Лазарева Д.Н. Влияние гентамицина на иммунитет при иммунодефиците и действие иммуномодуляторов // Эксперимент, и клин. фармакол.-1998.- Т.61, №3. С. 50-53.

97. Селье Г. На уровне целостного организма. Пер. с англ.- М.,-1972.

98. Страйер Л. Биохимия: Пер. с нем. -М.: Мир, 1985.-Т 2.- с. 71-82.

99. Тихонов В.Н. К оценке изменений массы внутренних органов животных в токсикологических исследованиях //Гигиена и санит. -1981.-№7.-с. 5859.

100. Ш.Урбах В.Ю. Статистический анализ в биологических и медицинских исследованиях. -М.: Медицина, 1975.- 295 с.

101. Утешев Б.С. О некоторых методологических вопросах скрининга иммунотропных средств //Фармак. и токсикол.- 1984.-№3.- с. 5-13.

102. ПЗ.Фримель X., Брок И. Основы иммунологии: Пер. с нем. -5-е изд. — М.: Мир, 1986.-254 с.

103. Хаитов P.M., Пинегин Б.В., Истамов Х.И. Экологическая иммунология.-М.: Изд-во ВНИРО, 1995.-219 с.

104. Хаитов P.M., Игнатьева Г.А., Сидорович И.Г. Иммунология. М.: Медицина, 2000.- 430 с.

105. Хаитов P.M., Игнатьева Г.А., Сидорович И.Г. Иммунология. 2-е изд., перераб. и доп. -М.: Медицина, 2002.- 536 с.

106. Хейхоу Ф.Г.Дж., Кваглино Д. Гематологтческая цитохимия. М.: Медицина, 1983.-319 с.

107. Хусинов А. А., Хайдарова Д.С., Гущин Г.В., Лесникова М.П. Нейроэндокринная система и специфические факторы иммунитета при отравлении пестицидами //Бюл. эксперим. биологии и мед.-1991.-Т. 111, N 12.-С. 623-624.

108. Чертков И.Л., Дерюга Е.И., Дризе Н.И. Примитивная стволовая кроветворная клетка// Вест. АМН СССР. -1990.- №9. С.35-37.

109. Шилов Ю.И., Ланин Д.В. Влияние гидрокортизона на функции фагоцитирующих клеток брюшной полости крыс в условиях блокады 3-адренорецепторов // Бюл. эксперим. биол. и мед. 2001. - Т. 131, №10. -С. 439-442.

110. Ширшев С.В. // Зависимость внутриклеточного уровня цАМФ интактных спленоцитов от популяционного состава клеточной суспензии и активности циклооксигеназы // Бюл. эксперим. биол. и мед. -1998.-№6.- с. 666-669.

111. Шубик В.М. Проблемы экологической иммунологии. Л., Медицина.-1976.-240 с.

112. Шуршалина А.В., Верясов В.Н., Сухих Г.Т. Соотношение уровней цитокинов при генитальном герпесе в различные фазы инфекционного процесса//Бюл. эксперим. биол. и мед. 2001. - Т. 132, №7. - С. 59-61.

113. Шустов В.Я., Маврина Е.А. К клинике хронической интоксикации в производстве нитрона //Гигиена труда -1975.-№3.- с.18-21.

114. Шустов В.Я., Ольховская А.Г., Кузнецов П.П., Ильина В.А. Ранняя диагностика и профилактика интоксикаций в производстве вискозного корда, капрона, натрона.- Саратов, 1985. — 114 с.

115. Шустов В .Я., Довжанский И.С. Анализ адаптивных реакций у рабочих в условиях производства химических волокон //Гигиена труда и проф. заболев.- 1987.-№6-с. 18-21.

116. Юрина Н.А., Тамахина А.Д. Действие кортикостероидов на аргофильные премедуллярные клетки тимуса // Бюл. эксперим. биол. и мед.-1996. -№10. -с. 461-464.

117. Ягмуров О.Д., Огурцов О.П. Функциональная активность лимфоцитов селезенки и периферической крови при стрессорной иммунодепрессии // Бюл. эксперим. биол. и мед.-1996.-Т 122, №7. -с. 64-68.

118. Abbas А.К., Murphy К.М., Sher A. Functional diversity of helper T lymphocytes // Nature. 1996. - Vol. 383. - P. 787-793.

119. Ahmed A.E., Farooqui M.Y.H., Upreti R.K., El-Shabrawy O. Distribution and covalent interactions of (1-14C) acrylonitrile in the rat //Toxycology.- 1982.-No. 23.-P. 159-175.

120. Ahmed A.E., Patel K. Acrylonitrile: in vivo metabolism in rats and mice. // Drug. Metab. Dispos.- 1981.- Vol.9, N 3.- P.219-222.

121. American Cyanamid Company. Handing storage analyses acrylonitrile. Wayne, New Jersey, 1974.- 42 p.

122. Appel K.E., Peter H., Bolt M., Bolt H.M. Interaction of acrylonitrile with hepatic microsomes of rats and men // Toxicol. Lett.- 1981.- Vol.7, N 4-5.-P.335-339.

123. Argyris B.F.// Role of macrophages in antibody production. Immune respons to sheep red blood cells //Immunol.- 1967.- Vol.99, № 4. P. 744-750.

124. Bacer R.A. Theshold odors of organic chemicals // J. Am. Water Works Assoc.- 1963.- No. 55.- P. 913-916.

125. Butterworth B.E., Eldridge S.R., Sprankle C.S. et al. Tissue-specific genotoxic effects of acrylamide and acrylonitrile // Environ Mol. Mutagen.-1992,- Vol.20, N 3,- P.148-155.

126. Brieger H., Rieders F., Hodes A.B. Acrylonitrile: spectrophotometric determination, acute toxicity, and mechanism of action //Ind. Hyg. occup. Med.- 1952.-No. 6. P. 128-140.

127. Casale G.P., Cohen S.D., DiCapva. R.A. The effects of organophosphate-induced cholinergic stimulation on the antibody response to sheep erythrocytes in inbred mice // Toxicol, and Appl. Pharmacol.-1983.-Vol. 68, N2.-P. 198-205.

128. Casale G.P., Cohen S.D., DiCapva R.A. Parathion of humoral immunity in inbred mice //Toxicol. Lett.-1984.-Vol. 23, N 2.-P. 239-247.

129. Claman H.N. Corticosteroids and lymphoid cells //New Engl. J. jf Med.-1972.- Vol.287.-No 8.- P. 388-397.

130. Claman H.N. Corticosteroids as immunomodulators //Immunomodulation drugs / Ann. of the N.-Y. Acad. Sci. 1993.-Vol. 685. -P. 288-292.

131. Collins J.J., Strother D.E. CNS tumors and exposure to acrylonitrile: inconsistency between experimental and epidemiology studies. // Neuro Oncol.-. 1999,- Vol.1, N 3.- P.221-230.

132. Cote I.L., Bowers A., Jaeger R.J. Effects of acrylonitrile on tissue glutathione concentrations in rat, mouse, and hamster // Res. Commun. Chem. Pathol Pharmacol.- 1984.- Vol.43, N 3.- P.507-510.

133. Delves P.J., Roitt I.M. The immune system (Part 1) // N. Engl. J. Med. 2000. -Vol. 343, N2.-P. 37-49.

134. Descotes J. Immunotoxicology of drugs and chemicals. Amsterdam N.Y. Oxford: Elsiver, 1986,- 400 p.

135. Descotes J., Mazue G. Immunotoxicology /Adv. Vet. Sci. and Сотр. Med. Vol. 31.-Orlando е. a., 1987.-P. 95-119.

136. Dhabhar F.S., Millerr A.H., Mc Even B.S., Spenser R.L. Stress -induced in blood leukocyte distribution: A role of adrenal steroid hormones // J. Immunol.-1996. Vol.157.- N 4.- P. 1638-1644.

137. Durant S. In vivo effects of catecholamines and glucocorticoids on mouse thymic cAMP content and thymolysis// Cell Immunol. -1986,-Vol. 102, N 1. -P. 136-143.

138. Ellman G.M., Countney K.D., Anders V. A new and rapid colorimetric determination of acetylcholinesterase activity // Biochem. Pharm. -1961.-Vol. 7, N 1. P. 88.

139. Emmert В., Bunger J., Keuch K. et al. Mutagenicity of cytochrome P450 2E1 substrates in the Ames test with the metabolic competent S. typhimurium strain YG7108pin3ERb5 // Toxicology.- 2006.- Vol.228, N 1.- P.66-76.

140. Fennell T.R., Kedderis G.L., Sumner S.C. Urinary metabolites of 1,2,3-13C.acrylonitrile in rats and mice detected by 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy // Chem. Res. Toxicol.- 1991.- Vol.4, N 6.- P. 678687.

141. Fergula J., Ashercon G.L., Becker E.L. The effect of organophosphorus inhibitors, p-nitrophenol and cytocholasin-B on cytotoxic killing of tumor cells and the effect of shaking //Immunol. 1972.- Vol. 23.- No 4. - P. 577 -"590.

142. Ficek W. Changes in biological processes in lymphatic cells and tissues after loading with by glycocorticoids // Bioche. Arch.- 1997.- Vol. 13.- N 1. P. 1 -6.

143. Fleisher T.A., Oliveira J.B. Functional and molecular evaluation of lymphocytes // J. Allergy Clin. Immunol. 2004. - Vol. 114, N 4. - P. 227234.

144. Frankenberg L. Enzyme therapy in cyanide poisoning: effect on rhodanese and sulfur compounds //Arch. Toxicol.- 1980.- No 40. P. 315-323.

145. Friedman H., Newton C., Klein T.W. Microbial Infections, Immunomodulation, and Drugs of Abuse // Clin. Microb. Rev. 2003.- Vol. 16.- No 2. - P. 209-219.

146. Georgiev V.St., Albright J.E. Cytokines // Immunomodulation drugs / Ann. of the N.-Y. Acad. Sci. 1993.-Vol. 685. -P.284-602.

147. Graham J.P.D. Hydroxycobalamin as an antidote to acrylonitrile //Toxicol, appl. Phrmacol.- 1965.- No 7. P. 367-372.

148. Guengerichh F.P., Geiger L.G., Hogy L.L., Wright P.L. In vivo metabolism of acrylonitrile to 2-cyanoethylene oxide reaction with glutatione, and irrever sible binding to proteins and nucleic acids //Cancer Res.- 1981.- No 41. P. 4925-4933.

149. Gut I., Kopecky J., Nerudova J. Relationship between acrylonitrile biotransformation, pharmacokinetics, and acute toxicity. A short review //G. Ital. Med. Lav.- 1981.-No 3. P. 131-136.

150. Hart M.N., Fabry Z. CNS antigen presentation //Trends Neurosci. 1995.-Vol. 18.-No 11.-P. 475-481.

151. Huff J. Chemicals studied and evaluated in long-term carcinogenesis bioassays by both the Ramazzini Foundation and the National Toxicology Program: in tribute to Cesare Maltoni and David Rail. // Ann N. Y. Acad. Sci.- 2002.- Vol.982.- P.208-230.

152. Husband A.I. The immune system and integrated homeostasis //Immunol, and Cell Biol.- 1995.- Vol. 73.- No 4. P. 377-382.

153. Hamada F.M., Abdel-Aziz A.H., Abd-Allah A.R., Ahmed A.E. Possible functional immunotoxicity of acrylonitrile (VCN). // Pharmacol. Res.- 1998.-Vol.37, N 2.- P.123-129.

154. Jackson I. C., Bloch E. F., Jackson R. Т., ChanLDer J. P., Kim I. L. Cyanide // J. Nat. Med. Assoc.- 1985.- Vol. 77.- No 10. P. 777-782.

155. Jacob S., Ahmed A.E. Species difference in the disposition of acrylonitrile: quantitative whole-body autoradiographic study in rats and mice // Toxicol Ind Health.- 2004,- Vol.20, N 1-5,- P. 9-19.

156. Jerne N.K., Nordin A.A. Plaque formation in agar by sirgte antibody producing cells //Seince.- 1963.- Vol. 140.- No 4. P. 405.

157. Johannsen F.R., Levinskas G.J. Chronic toxicity and oncogenic dose-response effects of lifetime oral acrylonitrile exposure to Fischer 344 rats. // Toxicol Lett.- 2002.- Vol.132, N 3.- P.221-247.

158. Kedderis G.L., Teo S.K., Batra R. et al. Refinement and verification of the physiologically based dosimetry description for acrylonitrile in rats. // Toxicol Appl. Pharmacol.- 1996.- Vol.140, N 2.- P.422-435.

159. Kimber I. Chemical — Induced Hypersensitivity // In.: Exper. Immun.- Boca Raton, New York, London, Tokyo.- 1996,- P. 391-417.

160. Kopecky J., Gut I., Nerudova J., Zachardova D., Holechek V., Filip J. Acrylonitrile metabolism in the rat //Arch. Toxicol., Suppl. 4.- 1980.- P. 322324.

161. Kopecky J. Development and methodology for assessment of urinary excretion of S-cyanoethylmercapturic acid in man // Final Report to the WHO Regional Office for Europe, ICP/RCE 903, 1982.

162. Kullenkampff J., Janossy G., Greanes M.F. Acid esterase in human lymphoid cells and leukaemic blasts: a marker for T-lymphocytes //Brit. J. Haemat.-1977.-Vol. 36, N 2.-P. 231-240.

163. Kutty K.M., Chandra R.K., Chandra S. Acetylcholinesterase in erytrocytes and lymphocytes: its contribution to cell membrane structure and function //Experientia. 1976.- Vol. 32.- No 3. - P. 289-291.

164. Lambotte-Vandepaer M., Duverger-van Bogaert M., de Meester C. et al. Mutagenicity of urine from rats and mice treated with acrylonitrile // Toxicology.- 1980.- Vol.16, N 1.- P.67-71.

165. Li C.G., Lam R.W., Gam L.T. Esterases in hunian leucocytes //J. Histochem. Cytochem.- 1973.- Vol. 21.- No 1. P. 1 -12.

166. Loose L.D. Immunotoxicology-1985 //Year Immunol.- 1985-1986.-Vol. 2.-Basel e.a., 1986.-P. 365-370.

167. Luster M. J., Blank J. A., Dean J. H. Molecular and cellular basis of chemically induced immunotoxicity //Annu. Rev. Pharmacol, and Toxicol.-Vol. 27.-Palo Alto, Calif.- 1987.-P. 23-49.

168. Madden K. S., Livnat S. Catecholamine action and immunologic reactivity // In: Psychoneuroimmunology, Second Edition.- academic Press, Inc.-1991.-283-310.

169. Maekawa Y., Yasutomo K. Antigen-driven T-cell repertoire selection // Crit. Rev. Immunol. 2005. - Vol. 25, N 5. - P. 59-74.

170. Marshak-Rothstein A., Fink P., GrLLDey T. et al. Properties and application of monoclonal antibodies directed against determinants of the Thy-1 locus //J.Immunol. -1979.-Vol.122.-P. 2491-2497.

171. Meester C., Duverger-Van Bogaert M., Lambotte-Vandepaer M. Liver extract mediated mutagenicity of acrylonitrile. // Toxicology.- 1979.- Vol.13, N 1.-P.7-15.

172. Meester С., Poncelet F., Roberfroid M., Mercier M. Mutagenicity of acrylonitrile // Toxicology.- 1978.- Vol. 11, N 1,- P. 19-27.

173. Miller K. Immunotoxicology //Clin, and Exp. Immunol.-1985.-Vol 61, N 2,-P. 219-223.

174. Nerudova J., Kopecky J., Gut I., Holechek V. Metabolism of acrylonitrile in the rats in vitro //Prakt. Lek.- 1980,- No 32.- P. 98-103.

175. Nerudova J., Gut I., Kopecky J. Cyanide effect in acute acrylonitrile poisoinning in mice // Industrial and environmental xenobioties.- Berlin: Springer Verlag, 1981.- P. 245-250.

176. Nilsen O.G., Tofgard R., Eneroth P. Effect of acrylonitrile on rat liver cytochrome P-450, benz(a)pyrene metabolism, and serum hormone levels //Toxical. Lett. 1980.- No 6.- P. 399-404.

177. Nogueira N. Intracellular mechanisms of killing /Immunobiol. Parasit. and Parasitic. Infec.-New York-London, 1984.-P. 53-69.

178. Nouragargh S., Holt J.R.S. Ingibition of human neutrophil degranulation by forskolin in the presence phosfodiesters ingibitors// Eur. J. Pharmacol.-1986.- Vol. 222, N2.-P. 205-212.

179. Parsons J.S., Mitzner S. Gas chromatographic method for concentration and analysis of traces of industrial organic pollutants in enveronmetal air and stacks //Environ. Sci. Technol. 1975.- No 9.- P. 1053-1058.

180. Peter H., Appel K.E., Berg R., Bolt H.M. Irreversible binding of acrylonitrile to nuclear acids //Xenobiotica. 1983. - Vol. 13. - No 1. - P. 19-25.

181. Pfeifer C., Murrey J., Madri J., Bottomly K. Selective activation of Thl- and Th2-like cells in vivo: Response to human collagen IV // Immunol. Rev. -1991.- Vol. 123, No 2. P. 65-84.

182. Quast J.F. Two-year toxicity and oncogenicity study with acrylonitrile incorporated in the drinking water of rats. // Toxicol Lett.- 2002.- Vol.132, N 3.- P.153-196.

183. Roberts A.E., Kedderis G.L., Turner M.J. et al. Species comparison of acrylonitrile epoxidation by microsomes from mice, rats and humans: relationship to epoxide concentrations in mouse and rat blood // Carcinogenesis.- 1991.- Vol.12, N 3,- P.401-404.

184. Sandberg E.C., Slanina P. Distribution of 1-14C. acrylonitrile in rat and monkey. // Toxicol. Lett.- 1990,- Vol.6, N 3,- P. 187-191.

185. Sapota A., Chmielnicka J. Toxicity and metabolism of acrylonitrile // Med. Pr.- 1981,- Vol.32, N 1.- P.25-33.

186. Sartorelli E. Acute acrylonitrile intoxication //Med. Lav. 1966. - No 57. - P. 184-187.

187. Sato M., Hirasawa F., Ogata M., TakizawaG., Kojima H., Yoshida T. Distribution and accumulation of (2,3-14C) acrylonitrile in rat after single injection //Ecotoxycol. environ. Safety.- 1982.- Vol.5. No 6. - P. 489-494.

188. Schulz M.R, Hertz-Picciotto I., Todd L. et al. Reconciling animal and human data in a cancer risk assessment of acrylonitrile // Scand. J. Work Environ Health.- 2001.- Vol.27, N 1.- P.14-20.

189. Scorrano L., Ashiya M., Buttel K. Et al. A distinct pathway remodels mitochondrial cristae and mobilizes cytochrome с during apoptosis // Dev. Cell. -2002.-Vol.2.- P.55-67.

190. Shrikant P., Benveniste E. N. The central nervous system as an immunocompetent organ: Role of glial cells in antigen presentation //J. Immunol.- 1996,- Vol. 157. No. 5. - P. 1819-1822.

191. Silver E.H., Szabo S. Possible role of lipid peroxidation in the action of acrylonitrile on the adrenals, liver and gastrointestinal tract //Res. Comm. Chem. Pathol, pharmacol. 1982.- Vol. 36. - No 1. - P. 33-43.

192. Smialowicz R. J., Luebke R.W., RicLLDe M. M. Assesssment of the immunotoxic potential of the fungicide dinocap in mice // Toxicoliogy. -1992. Vol.75, № 5. - P.235-247.

193. Szabo S., Selye H. Adrenal apoplexy and necrosis produced by acrylonitrile //Endocrinol. 1971.- No 57. - P. 405-408.

194. Szabo S., Selye H. Effect of phenobarbital and steroid on the adrenal apoplexy produced by acrylonitrile in rats //Endocrinol. 1972.- No 6. - P. 141-146.

195. Szelenyi J.G., Bartha E., Hollan S.R. Acetilcholinestrase activity of lymphosytes: an enzyme characteristic of T-cells // Brit. J. Haematol.- 1982.-Vol. 50, N2. P. 241-245.

196. Szot R.J., Murphy S.D. Phenobarbital and doxamethasone inhibition of the adrenocortical response of rats to toxic chemicals and other stresses //Toxicol. Applied Pharmacol.-1970.- Vol. 17, N 3.-P. 761-773.

197. Tarskikh M.M. Damage to erythrocyte membranes as the mechanism for acrylate toxicity // Bull. Exp. Biol. Med.- 2006.- Vol. 142, N 6.- P.690-692.

198. Thier R., Lewalter J., Bolt H.M. Species differences in acrylonitrile metabolism and toxicity between experimental animals and humans based on observations in human accidental poisonings // Arch. Toxicol.- 2000.- Vol.74, N 4-5.- P.184-189.

199. Tiefenbach В., Lange P. Studies on the action of dimethoate on the immune system //Arch. Toxicol.-1980.- Suppl. 4.- P. 167-170.

200. Tiefenbach В., Hennighauzen G., Lange P. Zum Mechanismus der akuten Wirkungen phosphororganiscer Pestizide auf Las Immunosystem //Zbl. Pharm.-1983.-Bd. 122, H. 2.-S. 156.

201. Tiefenbach В ., Wichner S. Dosisabhangigkeit und Mechanismus der acuten Wirkung von Methamidophos auf das Immunsystem der Maus //Z. gesamte Hyg. und Grenzdeb.-1985.-Bd. 31, N 4.-S. 228-231.

202. Till J.E., Mc Culloch E.A.A direct measurement of the radiation sensitivity of mouse bone marrow cells //Radiat. Res. 1961.- Vol. 14.- No 2. - P. 213-222.

203. Trinchievi G., de Marchi M. Antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity in humans III. Effect of protease inhibitors and substrates //J. Immunol.-1976.-Vol. 116, N 4.-P. 885-891.

204. Tucek M., Tenglerova J., Kollarova B. et al. Effect of acrylate chemistry on human health. // Int. Arch Occup. Environ Health.- 2002.- Vol.75.- P.67-72.

205. Tucher A.N., Bucher I.R., Geanoleo D.R., Silver M.T. Immunological studies on mice exposed subaculely — to methyl isocyanate //Environ. Health, perspect. 1987.-No 72. - P. 139-141.

206. Vainio H., Makinen A. Styrene and acrylonitrile induced depression of hepatic nonprotein sulfhydryl content in various rodent species. // Res. Commun. Chem. Pathol. Pharmacol.- 1977.- Vol.17, N 1.- P.l 15-124.

207. Wang H., Chanas В., Ghanayem B.I. Cytochrome P450 2E1 (CYP2E1) is essential for acrylonitrile metabolism to cyanide: comparative studies using CYP2El-null and wild-type mice // Drug. Metab. Dispos.- 2002.- Vol.30, N 8. -P.911-917.

208. Ward C.E., Starr T.B. Comparison of cancer risks projected from animal bioassays to epidemiologic studies of acrylonitrile-exposed workers // Regul. Toxicol. Pharmacol.- 1993,- Vol.18, N 2.-P.214-232.

209. Willem S., Rund A., Ellen van E., Cees de H., Raymond P. Sensitization of the immune system. A. challenge for in vitro toxicology: Abstr. 2nd World

210. Congr. Internat. and Anim. Use Lite Sci, Utrecht, 20-24 Oct. 1996 //ATLA. -1996.- 24, Spec. Issece.- P. 126.

211. Willhite C.C., Smith R.P. The role cyanide liberation in the acute toxicity of aliphatic nitriles //Toxicol, appl. Pharmacol. 1981.- No 59. - P. 701-703.

212. Wilson S., Mireille D. Immune neuroendocrine interactions //Immunol. Today. - 1995. - Vol. 16. - No 7. - P. 318-322.