Воздействие диметилдихлорвинилфосфата на иммунный статус животных

Кадушкин, Андрей Михайлович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Воздействие диметилдихлорвинилфосфата на иммунный статус животных
ВАК РФ 03.00.16, Экология

Автореферат диссертации по теме "Воздействие диметилдихлорвинилфосфата на иммунный статус животных"

На правах рукописи

ииаЦБ4441

Кадушкин Андрей Михайлович

ВОЗДЕЙСТВИЕ ДИМЕТИЛДИХЛОРВИНИЛФОСФАТА НА ИММУННЫЙ СТАТУС ЖИВОТНЫХ

03.00.16 - экология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

,1 6 АВГ 2007

Саратов - 2007

003064441

Работа выполнена на кафедре охраны окружающей среды и экологической безопасности процессов хранения и уничтожения химического оружия и токсичных веществ Саратовского военного института радиационной, химической и биологической защиты

Научный руководитель- доктор биологических наук, профессор,

Заслуженный деятель науки РФ Шляхтин Геннадий Викторович

Официальные оппоненты доктор биологических наук, профессор

Коннова Светлана Анатольевна

доктор биологических наук, профессор Игнатов Олег Владимирович

Ведущая организация' Саратовский государственный медицинский уни-

верситет

Защита состоится « 7 » сентября 2007 г. в 12 часов на заседании диссертационного совета Д 212.243 13 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Саратовский государственный университет им. Н Г. Чернышевского» по адресу 410012, г. Саратов, ул. Астраханская, д 83, E-mail- biosovet@sgu ru

С диссертацией можно ознакомиться в Зональной научной библиотеке ГОУ ВПО «Саратовский ГУ»

Автореферат разослан « Ц » августа 2007 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Невский С.А

Общая характеристика работы

Актуальность исследования В современных условиях особую актуальность представляет изучение действия веществ антропогенного происхождения на живые организмы, системы их жизнеобеспечения и ответные реакции, включая адаптивные Эта проблема является одной из центральных в общей и экспериментальной экологии Значительный интерес представляют фосфорорганические соединения (ФОС), которые, согласно оценке Всемирной организации здравоохранения (2002 г ), относятся к наиболее опасным ксенобиотикам окружающей среды Так, за последние 20 лет в 60 странах мира зарегистрировано 34ООО отравлений ФОС, при этом более 20% случаев интоксикации связано с их использованием в качестве инсектицидов в сельском хозяйстве, загрязнением данными токсикантами воды, воздуха и почвы

Иммунная система является наиболее чувствительной, тонко реагирующей на изменение среды обитания живых организмов под воздействием различных внешних факторов (Хаитов и др, 1995) Действие ФОС, в частности, диметилдихлорвинилфосфата (ДЦВФ), может существенно изменять доиммунные механизмы защиты организма и показатели системы иммунитета и рассматриваться как дистанционная его реакция к новым условиям существования или сигнал тревоги В более поздний период интоксикации (при остром воздействии больших доз и концентраций) развивается иммунодепрессия, а также сенсибилизация и проявляются аутоиммунные реакции, возникают различные инфекционные, онкологические и аллергические заболевания (Шубик, 1976, Забродский, 1998, 2000, Loose, 1985, Descotes, 1986, Kimber et al, 2001, Friedman et al, 2003 и др )

В настоящее время при возможных террористических актах применение ФОС может привести к серьезным экологическим последствиям и гибели большого числа людей, при этом заражение местности (почвы, воздуха, воды) оказывает неблагоприятное воздействие на человека, животных и растения в связи с нарушением механизмов, играющих важную роль в защите от различных инфекций (Забродский, 1998, 2002, Петров и др, 2004) Изложенное позволяет считать, что отравления ФОС являются серьезной социальной и эколого-токсикологической проблемой Несомненно, одной из актуальных задач экологии в настоящее время является оценка нарушений показателей системы иммунитета после острого и хронического действия ФОС (Забродский и др , 2001,2005, Luster et al, 1987, Sullivan, 1989)

Учитывая достаточно широкое распространение и использование ФОС, в частности, ДЦВФ в сельском хозяйстве и быту, возможность аварий прч уничтожении токсичных химикатор. относящихся к фосфо-

рорганическим антихолинэстеразным соединениям, высокую смертность при отравлении ими, недостаточно изученные особенности их острого и хронического действия на систему иммунитета, представляется актуальным провести комплексное исследование изменения состояния иммунной системы животных под влиянием ФОС на примере ДДВФ

Цель и задачи исследования Основной целью исследования является изучение нарушений доиммунных механизмов защиты и иммунного статуса при остром, подостром и хроническом воздействии ДДВФ В ходе реализации цели решались следующие задачи

- определить действие ДДВФ на интегральное состояние иммунологической резистентности организма и основные показатели доиммунных механизмов его защиты,

- изучить влияние ДДВФ на состав лимфоцитов тимуса и селезенки, процессы их пролиферации и миграции в органы иммунной системы, перераспределение этих клеток между органами системы иммунитета,

- исследовать изменения Т-зависимого и Т-независисмого иммунного ответа на фоне действия ДДВФ,

- оценить нарушения клеточных иммунных реакций, обусловленных функцией Thl-лимфоцитов, после действия ДДВФ,

- определить действие ДДВФ на механизмы формирования постинтоксикационного иммунодефититного состояния поражение Thl- и Th2-лимфоцитов, миграцию колониеобразующих единиц из костного мозга в селезенку, активность эстераз в Т-клетках, моноцитах и макрофагах, функцию коры надпочечников, перекисное окисление липидов

Научная новизна Впервые показано на примере Д ДВФ, что ФОС при остром и хроническом воздействии приводят к снижению интегрального состояния антиинфекционной неспецифической и иммунологической резистентности организма Установлено увеличение летальности от экспериментальной инфекции, вызванной Escherichia coli и Proteus vulgaris Экспериментально показано, что под влиянием острого и хронического действия ДДВФ происходит дозозависимое снижение показателей доиммунной биологической резистентности организма к инфекции Острое воздействие токсиканта снижает лимфоид-ный индекс тимуса и селезенки, содержание лимфоцитов в них, изменяет миграцию иммуноцитов из органов системы иммунитета

Установлено дозозависимое снижение Т-зависимого антителообра-зования при острой интоксикации ДДВФ, преимущественно в продук-4 ,

тивную фазу антителогенеза При хроническом воздействии ДДВФ (О 01 LDS0 в течение 30 сут) отмечается сопоставимое изменение показателей, как и при остром их действии в дозе 0 75 LD50 Выявлено, что под влиянием острой интоксикации ДДВФ происходит дозозависимое снижение синтеза IgM, IgG и функции Thl- и Th2-лимфоцитов Впервые показано, что хроническое отравление ДДВФ вызывает супрессию синтеза IgM и IgG сответственно в 1 6 и 1 4 раза Действие ДДВФ in vitro вызывает прямо связанное с концентрацией (106, 105и 104М) снижение кооперации Т- и В-лимфоцитов, вследствие преимущественного нарушения функции Т-клеток

Доказано, что супрессия иммунных реакций при действии токсиканта может быть связана с увеличением функции коры надпочечников и повышением в крови концентрации кортикостерона, а также ингиби-рованием эстераз Т-лимфоцитов, моноцитов и макрофагов, инициацией перекисного окисления липидов Впервые установлено, что подострое и острое отравления ДДВФ вызывают редукцию иммунных реакций, обусловленных активностью Thl-лимфоцитов, в большей степени по сравнению с иммунным ответом, связанным с функцией ТЬ2-клеток На организменном, клеточном и субклеточном уровнях доказано формирование вторичного иммунодефицитного состояния при действии ДДВФ на организм животных

Научно-практическая значимость Установлены наиболее информативные показатели в экспериментах на животных для оценки имму-носупрессивного действия ДДВФ содержание лимфоцитов в тимусе и селезенке, активность естественных клеток-киллеров, тимусзависимый гуморальный иммунный ответ в продуктивной фазе антителогенеза, функция Thl-клеток в реакции гиперчувствительности замедленного типа Для исследования хронического эффекта ДДВФ (в условиях экологического неблагополучия) могут быть использованы показатели иммунных реакции, полученных при остром отравлении токсикантом в дозе 0 75 LD5o

Материалы диссертации внедрены в учебный процесс кафедр охраны окружающей среды и экологической безопасности процессов хранения и уничтожения химического оружия и токсичных веществ, а также технологий уничтожения химического оружия и токсичных веществ Саратовского военного института радиационной, химической и биологической защиты, кафедры токсикологии и медицинской защиты ГОУ ВПО «Саратовский военно-медицинский институт», кафедры морфологии и экологии животных ГОУ ВПО «Саратовский государст-

венный университет им Н Г Чернышевского» Материалы работы использованы в плановых НИР Саратовского военного института радиационной, химической и биологической защиты

Апробация работы Результаты исследований были доложены на Всероссийской конференции молодых ученых «Иммунитет и аллергия от эксперимента к клинике» (Москва, 2005 г), V Всемирном конгрессе по иммунопатологии и аллергии (Москва, 2007 г ), заседаниях секции прикладных проблем безопасности хранения и уничтожения химического оружия Поволжского отделения АВН (2005-2007 гг ), научных конференциях кафедры токсикологии и медицинской защиты ГОУ ВПО «Саратовский военно-медицинский институт» (2006, 2007 гг.), кафедрах охраны окружающей среды и экологической безопасности процессов хранения и уничтожения химического оружия и токсичных веществ, а также технологий уничтожения химического оружия и токсичных веществ Саратовского военного института радиационной, химической и биологической защиты (2007 г), научных конференциях биологического факультета Саратовского государственного университета (2005,2007 гг ).

Публикации По теме диссертации опубликовано 13 работ, три из которых в изданиях перечня ВАК РФ

Декларация личного участия автора Автор лично участвовал в проведении лабораторных экспериментов Обработка полученных данных, их интерпретация и оформление осуществлены автором самостоятельно В совместных публикациях вклад автора составил 50-80%

Объем и структура диссертации Работа изложена на 135 страницах, состоит из введения, 7 глав, заключения, выводов и практических рекомендаций, иллюстрирована 38 таблицами и 2 рисунками Библиографический указатель включает 209 источников отечественной и зарубежной литературы

Основные положения, выносимые на защиту

1 Воздействие ДДВФ в условиях экологического неблагополучия сопровождается снижением доиммунных механизмов защиты организма, что проявляется в уменьшении его устойчивости к инфекциям

2 После действия ДДВФ происходит преимущественно редукция иммунных реакций, связанных с функцией ТЫ-лимфоцитов, по сравнению с гуморальными иммунными реакциями, обусловленными функцией ТЬ2-лимфоцитов и В-клеток

3 Супрессия показателей иммунного статуса при интоксикации ДДВФ обусловлена снижением миграции клеток в органы системы иммунитета из костного мозга, редукцией кооперации Т- и В-лимфоцитов,

ингибированием эстераз Т-лимфоцитов, моноцитов и макрофагов, увеличением кортикостерона в крови и инициацией перекисного окисления липидов

Содержание работы

Во введении обосновывается актуальность исследования, его практическая и теоретическая значимость, сформулированы основные цели и задачи, а также пути их реализации

Глава 1 НАРУШЕНИЕ ДОИММУННЫХ МЕХАНИЗМОВ ЗАЩИТЫ И ИММУННОГО СТАТУСА ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ ФОСФОРОРГА-НИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ (обзор литературы)

В данной главе на основании анализа отечественной и зарубежной литературы дается общая характеристика ФОС уровень их токсичности, основные механизмы воздействия на системы и органы живых организмов, характер и симптомы их поражения Описываются токсикологические свойства ДДВФ и приводятся данные о нарушениях доим-мунных механизмов резистентностности к инфекции и иммунного статуса животных при воздействии на них ФОС.

Глава 2 МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Перечень условных сокращений АЗКЦ — антителозависимая клеточная цитотоксичностъ, АОК - антителообразующие клетки, ГЗТ -гиперчувствительность замедленного типа, ЕКК — естественные клетки-киллеры, КОЕ — колониеобразующие единицы', НСТ-тест — нит-росиний тетразолиевый тест, ОДЛТА - отрицательный двоичный логарифм титра антител, ПОЛ - перикисное окисление липидов, ТКБ - тромбоцитарный катионный белок, ФМАН — фагоцитарно-метаболическая активность нейтрофилов, Et50 — среднеэффективное время жизни животных

Исследования проводились в 2001-2007 гг на 776 неинбредных крысах и 78 мышах обоего пола Масса животных составляла соответственно 180-240 и 18-22 г Эксперименты на грызунах проводили в соответствии с требованиями Женевской конвенции «International Guiding Principles for Biomedical Research Inroling Animals» (Geneva, 1990) В качестве вещества, моделирующего острое и хроническое действие ФОС (моделирование действие ФОС в условиях экологического загрязнения), применяли ДДВФ Токсикант вводили подкожно в дозах 0 2,0 5 и 0 75 ¿£>50, а также хронически в дозе 0 01 LDS0 в течение 30 сут

Опыты на мышах проводили при исследовании миграции КОЕ из костного мозга в селезенку и оценке нарушения кооперации Т- и В-кле-ток под влиянием ДДВФ Роль супрессии функции ТЫ- и ТЬ2-лимфоцитов в редукции иммунных реакций изучали при подост-ром отравлении ДДВФ. При этом токсикант вводили белым крысам в дозе 1/7 LDS0 ежедневно подкожно в течение 6 сут

Интегральное состояние неспецифической и иммунологической резистентности организма определяли по показателям течения экспериментальной инфекции, вызванной внутрибрюшинным введением крысам суспензии суточной культуры Е coli в дозах 4 5, 6 0 и 8 0 млрд микробных тел Кроме того, моделировалась экспериментальная пневмония путем введения крысам суспензии суточной культуры Р vulgaris в дозах 3 5, 5 0 и 6 5 млрд микробных тел в ткань легкого Микроорганизмы вводили через 4 сут после иммунизации в дозе 106 микробных тел Определяли летальность крыс в течение 48 ч от экспериментальной инфекции, а также среднелетальные дозы Е coli и Р vulgaris, Etso в опытной и контрольной группах (Забродский, 1987) Влияние ДДВФ на обсемененность селезенки и циркулирующей крови Е coli проводили общепринятыми методами

При исследовании факторов доиммунной защиты организма определяли сывороточную активность лизоцима, ТКБ, ФМАН, действие ДДВФ на миграцию лимфоцитов из органов иммунной системы общепринятыми методами (Хаитов и др, 1995, Бухарин и др , 1998, Бело-крылов, Попова, 2002), а КОЕ из костного мозга в селезенку - методом эндогенного колониеобразования (Петров, Хаитов, 1972; Till, Мс Culloch, 1961)

Исследование показателей Т-зависимого и Т-независимого гуморального иммунного ответа проводили через 5, 8 и 13 сут после иммунизации крыс эритроцитами барана и брюшнотифозным Vi-антигеном (Ag) по ОДЛТА, а также по числу АОК в селезенке (Белокрылов и др , 1980, Jeme, Nordin, 1963)

При исследовании кооперации Т- и B-клеток использовались клетки мышей в модели m vitro (Thomas, Imamura, 1986) Для оценки клеточного иммунного ответа определялись функция Т-лимфоцитов по секреции ими фактора, ингибирующего миграцию лейкоцитов (Гем-бицкий и др , 1987), активность Thl-лимфоцитов в реакции ГЗТ, показатель АЗКЦ (Зимин, Ляхов, 1985), активность EICK (Гордиенко, 1984)

Активность а-нафтил-АБ-ацетатэстеразы и а-нафтил-бутира-тэстеразы Т-клеток, моноцитов и макрофагов изучали гистохимиче-8

ским методом (Хейхоу, Кваглино, 1983), используя спленоциты Активность АХЭ в Т-лимфоцитах крыс определяли традиционным методом (Szelenyi et al, 1982) Для определения уровня кортикостерона в плазме крови крыс использовали флюорометрический метод (Moor et al, 1976) ПОЛ оценивали по активности каталазы и пероксидазы, содержанию малонового диальдегида в крови (Коробейникова, 1989, Ва-леева и др , 2002)

Полученные данные обрабатывались общепринятыми статистическими методами Расчеты проводились на персональном компьютере с использованием пакета программ Statgraphics.

Глава 3 ВОЗДЕЙСТВИЕ ДИМЕТИЛДИХЛОРВИНИЛФОСФАТА НА ИНТЕГРАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ И ИММУНОЛОГИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ОРГАНИЗМА И ФАКТОРЫ ДОИММУННОЙ ЗАЩИТЫ

Острое (0 75 LD50) и хроническое отравление ДДВФ приводит к увеличению летальности крыс от экспериментальной инфекции (перитонита) Так, по сравнению с контролем, составляющим 12 5 ±5 1%, этот показатель увеличивался после острой интоксикации ДДВФ и хронического его действия (0 01 LD 50 в течение 30 сут) соответственно на 17 5 и 25 0% (р < 0 05)

Увеличение летальности животных от экспериментальной инфекции было сопряжено с уменьшением LDS0E coli и Etso После острого и хронического действия ДДВФ LD 50 Е coli уменьшалась в 1 5 и 1 6 раза (р < 0 05), a Et50 - в 1 4 и 1 5 раза (р < 0 05) соответственно Аналогичные данные были получены при моделировании экспериментальной пневмонии, вызванной/' vulgaris

Установлено, что при остром и хроническом действии ДДВФ количество микробных тел Е coli в крови статистически значимо возрастало в23и25(р<0 05), а в селезенке - в 4 5 и 3 5 раза (р < 0 05) соответственно После острого (0 75 LD50) его действия через 6 сут происходит уменьшение сывороточной активности лизоцима и ТКБ соответственно в 1 6 и 1 8 раза {р < 0 05) Через 12 сут после действия токсиканта отмечалось восстановление исследованных показателей

При хроническом действии ДДВФ в дозе 0 01 LD 50 в течение 30 сут активность лизоцима и ТКБ снижались по сравнению с контролем соответственно в 1 8 и 1 4 раза (р < 0 05) Существенных отличий между показателями острого действия ДДВФ через 6 и спустя 30 сут после хронического воздействия не выявлено

В опытах на крысах показано, что острое действие ДДВФ (О 75 LD5o) приводило к существенной редукции ФМАН - фагоцитарного показателя и числа, НСТ-теста спонтанного и индуцированного -в течение 1-6 сут. Так, спонтанный НСТ-тест под влиянием ДДВФ через 1 сут снижался в 2.4 раза (р < 0 05) Восстановление показателей при остром действии токсикантом отмечалось к 9 сут Исследование ФМАН после острого отравления ДДВФ показало прямо связанное с дозой снижение данного параметра через 1 сут После хронического его воздействия в дозе 0 01 LD5a в течение 30 сут показатели ФМАН существенно снижались по сравнению с контролем (р < 0 05), причем степень их редукции приблизительно соответствовала уменьшению параметров после острого через 3 сут.

Таким образом, после острого и хронического действия ДДВФ происходит снижение неспецифической и иммунологической резистентности организма (увеличивается летальность животных от экспериментальной инфекции, уменьшается LD}0 Е coli, Р vulgaris и Etso, число микробных тел Е coli в циркулирующей крови и селезенке крыс), наблюдается супрессия доиммунных механизмов защиты (снижается активность лизоци-ма, ТКБ сыворотки крови, дозозависимо уменьшается ФМАН)

Глава 4 ВЛИЯНИЕ ДИМЕТИЛДИХЛОРВИНИЛФОСФАТА НА ПЕРЕРАСПРЕДЕЛЕНИЕ ЛИМФОЦИТОВ МЕЖДУ ОРГАНАМИ СИСТЕМЫ ИММУНИТЕТА

Установлено, что под влиянием ДДВФ в дозах 0 25, 0 50 и 0 75 LDS0 происходит дозозависимое уменьшение лимфоидного индекса тимуса и селезенки, а также содержания лимфоцитов в тимусе через 1 сут после интоксикации соответственно в 1 2, 1 4 и 1 6 раза (р < 0 05) Аналогично изменялось содержание лимфоцитов в селезенке В костном мозге, лимфоузлах и циркулирующей крови число лимфоцитов через 1-3 сут дозозависимо увеличивалось К 6 сут их число в органах системы иммунитета восстанавливалось до контрольных значений При хроническом действии ДДВФ (0 01 LD50 в течение 30 сут) отмечалось несколько иное изменение показателей, чем при остром в дозе 0.75 LD50 число лимфоцитов во всех органах системы иммунитета у крыс снижалось.

Таким образом, под влиянием острого действия Д ДВФ происходит дозозависимое снижение числа лимфоцитов в тимусе и селезенке, изменение механизмов регуляции миграции иммуноцитов из органов системы иммунитета в зависимости от характера интоксикации При хроническом действии ДДВФ наблюдалось снижение числа лимфоцитов во всех органах системы иммунитета у крыс

Глава 5 ДЕЙСТВИЕ ДИМЕТИЛДИХЛОРВИНИЛФОСФАТА НА ГУМОРАЛЬНЫЕ ИММУННЫЕ РЕАКЦИИ

Острая интоксикация ДДВФ через 5 и 8 сут вызывала дозозависи-мое снижение антителообразования, оцениваемое по ОДЛТА При хроническом действии ДДВФ отмечалось такое же изменение показателей, как и при остром в дозе 0 75 Ю50

Установлено снижение Т-зависимого антителообразования под влиянием острого и хронического действия ДДВФ, оцениваемого по ОДЛТА Число АОК к эритроцитам барана через 5 сут после острой интоксикации ДДВФ у крыс, характеризующее функцию ТЫ-лимфоцитов и связанный с ней синтез IgM, дозозависимо снижалось (при введении одновременно с эритроцитами барана) Так, при дозах ДДВФ, составляющих 0 25, 0 50 и 0 75 Ю50, показатель уменьшался соответственно в 1 3, 1 5 и 1 9 раза (р <0 05)

В продуктивную фазу гуморальной иммунной реакции (введение ДДВФ через 3 сут после эритроцитов барана), по сравнению с индуктивной (введение ДДВФ одновременно с эритроцитами барана), снижение антителопродукции было более выражено. При хроническом действии ДДВФ отмечалось приблизительно такое же изменение показателей, как и при остром в дозе 0 75 Ю50 Так, число АОК к эритроцитам барана, синтезирующим IgM, в селезенке крыс снижалось в 1 6 раза (р< 0 05)

Показано, что под влиянием ДДВФ через 8 сут происходит дозоза-висимое снижение функции ТЬ2-лимфоцитов и синтеза оцениваемого по числу АОК, синтезирующих иммуноглобулины данного класса Так, дозы ДДВФ, составляющие 0 25, 0 50 и 0 75 Ю50, вызывали редукцию показателя соответственно в 1 2, 1 5 и 1.6 раза (р < 0 05) При хроническом введении в дозе 0 01 ¿П50 однократно в течение 30 сут и иммунизации эритроцитами барана на 22 сут синтез АОК селезенки уменьшался в 1 5 раза

Острое и хроническое воздействие ДДВФ через 5 сут вызывало снижение Т-независимого антителообразования, оцениваемого по ОДЛТА При оценке содержания АОК к УьАц в селезенке у крыс после острой интоксикации через 5 сут было установлено, что дозы ДДВФ, составляющие 0 25, 0 50 и 0 75 ЬО50, вызывали снижение АОК к \fi-Ag соответственно в 1 2, 1 3 и15 раза (р < 0 05) Полученные результаты позволяют считать, что ДДВФ в сублетальных дозах оказывает значительно меньшее действие на Т-независимый синтез В-клетками ^М по сравнению с Т-зависимой антителопродукцией При хроническом дей-

ствии ДДВФ отмечалось приблизительно такое же изменение показателей, как и при остром в дозах 0 50-0 75 Ьй50

Таким образом, после острого и хронического действия ДДВФ происходит преимущественно снижение Т-зависимой антителопродук-ции В-клетками (синтеза 1§М и связанной с функцией ТЫ-,

ТЬ2-лимфоцитов, более выраженное в продуктивной фазе антителоге-неза по сравнению с индуктивным периодом

Глава 6 ВОЗДЕЙСТВИЕ ДИМЕТИЛДИХЛОРВИНИЛФОСФАТА НА КЛЕТОЧНЫЕ ИММУННЫЕ РЕАКЦИИ

После острой интоксикации ДДВФ (0 25, 0 50 и 0 75 ЬО50) У крыс через 1 сут дозозависимо снижается функция Т-клеток Так, дозы токсиканта, составляющие 0 25, 0 50 и 0 75 Ю5о, уменьшают функцию Т-клеток через 1 сут соответственно на 7 9, 27 0 и 34 4% (р< 0 05) Снижение показателя сохраняется до 3 сут К 6-м суткам функция Т-клеток полностью восстанавливается При хроническом действии Д ДВФ отмечается такая же редукция Т-клеток, как и при остром его действии в дозах 0 50-0 75 через 1 сут

При острой интоксикации ДДВФ происходит дозозависимое снижение функции ТЫ-лимфоцитов, оцениваемой по реакции ГЗТ соответственно в13, 15и17 раза (р< 0 05) При хроническом его действии (0 01 Ю50 в течение 30 сут) отмечается редукция ТЫ-клеток, оцениваемая по реакции ГЗТ, как и при остром в дозе 0 75 И)50 Так, в опытах на крысах

выявлено снижение формирования ГЗТ в 1 6 раза (р < 0.05)

Введение ДДВФ в дозах 0 25, 0 50 и 0 75 1£>5о приводит к прямо связанной с дозой редукцией АЗКЦ спленоцитов в 13, 17и22 раза, а тимоцитов - в 12, 17 и 24 раза соответственно (р < 0 05) в индуктивный период иммуногенеза Аналогичные, но более выраженные изменения были выявлены в продуктивной фазе иммуногенеза При хроническом действии ДДВФ отмечается уменьшение АЗКЦ спленоцитов и тимоцитов соответственно в 2.1 и 2 2 раза (р < 0 05) (рис 1) 12

20 -

ш *

ш т

Рис 1 Влияние хронического действия ДДВФ на АЗКЦ (и = 7) По оси ординат АЗКЦ, %, 1 - контроль, 2 - АЗКЦ спленоцитов (0 01 ¿£)50 х 30 сут), 3 - АЗКЦ тимоцитов (0 01 1£>5о х 30 сут), различия с контролем достоверны при <0 05

При действии ДДВФ через 1 и 3 сут наблюдается дозозависимое снижение активности ЕКК Так, дозы ДДВФ, составляющие 0 25, 0 50 и 0 75 LDS0, вызывают уменьшение активности ЕКК через 1 сут в 1 3, 1 6 и 2 2 раза (р < 0 05), а через 3 сут - в 1 2, 1 3 и 1 5 раза (р < 0 05) соответственно Через 6 сут активность ЕКК восстанавливается

Исследование влияния ДДВФ на активность ЕКК т vitro показало, что при его концентрациях, составляющих 106, 105и 10 4 М, происходит прямо связанное с ней уменьшение данного параметра соответственно в 1 3, 1 5 и 2 6 раза (р < 0 05) При хроническом действии ДДВФ отмечается супрессия функции ЕКК в 1 9 раза (р < 0 05) (табл 1)

Таблица 1

Влияние хронического действия ДДВФ на активность ЕКК, % (п = 7)

Доза и продолжительность действия ДДВФ Активность ЕКК, %

Контроль 33 7±3 6

0 01 LDsox 30 сут 17 6 ± 1 8*

Примечание различия с контролем достоверны при р < 0 05

Таким образом, действие ДДВФ сопровождается уменьшением функции Т-лимфоцитов, в частности ТЫ-лимфоцитов, оцениваемой по реакции ГЗТ, редукцией АЗКЦ и активности ЕКК ДДВФ т vltro в прямой зависимости от концентрации снижает активность ЕКК.

Глава 7. МЕХАНИЗМЫ НАРУШЕНИЯ ИММУННОГО СТАТУСА ЖИВОТНЫХ ПРИ ДЕЙСТВИИ ДИМЕТИЛДИХЛОРВИНИЛФОСФАТА

Под влиянием острой интоксикации ДДВФ в дозах 0 25 и 0 50 Ю50 происходит дозозависимое увеличение миграции КОЕ из костного мозга в селезенку В дозе 0 75 Ю50 и при хроническом действии токсиканта миграция КОЕ в селезенку снижается в 2 2 раза (р< 0 05) Хроническое действие приводит к уменьшению миграции КОЕ из костного мозга в 2 1 раза (р < 0 05)

ДДВФ в концентрациях 10 6,105 и 10 4 М /л гИго в прямой зависимости от концентрации снижает функцию В-клеток в кооперации с Т-лимфоцитами 1 3, 1 5 и 1 9 раза (р < 0 05), а функцию Т-клеток - в 1 6, 2 3 и 3 2 раза {р < 0 05) соответственно ДДВФ в большей степени уменьшает функцию Т-лимфоцитов (р < 0 05) (табл 2)

ДДВФ в дозе 0 75 1£>50 снижает активность ацетилхолинэстеразы Т-клеток тимоцитов и спленоцитов соответственно в 4 4 и 4 8 раза (р< 0 001) При остром действии в дозах 0 25, 0 50 и 0 75 Ю50 число

клеток (в основном Т-лимфоцитов, а также моноцитов и макрофагов), содержащих а-нафтил-АБ-ацетатэстеразу, в спленоцитах крыс снижается в 1 2, 1 4 и 1.8 раза (р< 0 05) Аналогично уменьшалось содержание а-нафтил-бутиратэстеразопозитивных клеток селезенки

Таблица 2

Влияние ДДВФ на кооперацию Т- и В-лимфоцитов мышей т vitro (число АОК на 10б В-клеток) (п = 7-8)

Варианты экспериментов Концентрация ДДВФ

0 10"6 ю-5 ю-4

В+Т (контроль)* 378 ± 35 - - -

В°+Т - 293 ± 29** 244 ±23** 195 ±21**

В+Г - 240 ±25** 165±18*** 118 ±20***

Примечание В0, Т° — В- и Т-клетки в течение 2 ч до добавления эритроцитов барана инкубировали с ДДВФ (контроль), **' различия с контролем (В+Т) достоверны при р < 0 05, при р < 0 05 по сравнению с В°+Т

Под влиянием кортикостерона в концентрации приблизительно соответствующей уровню содержания этого гормона в плазме крови крыс после острого действия Д ДВФ в дозе 0 75 LDS0 (212 5 ±15 4 и 110 0 ± 9.5 нг/мл через 1 и 5 ч соответственно) отмечается снижение Т-зависимой и Т-независимой иммунной реакции - АОК к эритроцитам баранам и Vi-Ag (р < 0 05), активности ЕКК, АЗКЦ и реакции ГЗТ (р < 0 05) При хроническом действии ДДВФ наблюдается увеличение кортикостерона в крови через 10, 15 и 30 сут по сравнению с контролем соответственно в13, 1 5 и 1 6 раза (р < 0 05), что свидетельствует о существенной роли активации гипоталамо-гипофизарно-адреналовой системы (стресс-реакции) в редукции иммунного ответа на токсикант

ДДВФ при остром и хроническом действии инициирует ПОЛ (рис 2) Так, активность каталазы и пероксидазы снижается в 1.4 и 1 6 раза (р < 0 05) при остром его действии в дозе 0 75 LD50, а содержание малонового диальдегида увеличивается в 1 3 раза Хроническое действие токсиканта через 30 сут вызывает приблизительно такие же изменения показателей ПОЛ

Установлено (табл 3), что под влиянием подострого действия ДДВФ (токсикант вводили в дозе 1/7 LDS0 ежедневно подкожно в течение 6 сут) происходило снижение гуморального иммунного ответа через 4 сут после иммунизации к Т-зависимому антигену (по числу АОК в селезенке), характеризующему функцию Thl -лимфоцитов, способствующих синтезу В-клетками IgM, по сравнению с контрольным уров-14

нем в 2 1 раза (р< 0 05) Через 7 сут после иммунизации отмечается уменьшение продукции (по числу АОК в селезенке) в 1 4 раза (р < 0 05), свидетельствующее о супрессии преимущественно функции ТИ2-лимфоцитов, а также В-клеток При отравлении ДДВФ отмечалась существенная редукция активности ЕКК и реакции ГЗТ соответственно в 2 4 и 1 9 раза (р < 0 05)

200100 -0 ■ * гЬ 3 30 ■ 20 • 10 ■ I * Г+1 3 12 -8 -4 • * * г+-| 3

а б в

Рис 2 Влияние ДЦВФ на показатели перекисного окисления липидов у крыс (п = 7-10) По оси ординат а - каталаза, ммоль/мин/л, б - пероксидаза, мкмоль/мин/л, в - малоновый диальдегид, нмоль/мл, 1 - контроль, 2 -ДЦВФ (0 75 1£>5о) определяли через 3 сут, 3 - ДЦВФ (0 01 ££>5о * 30 сут), различия с контролем достоверны при р < 0 05

Активность ЕКК и формирование ГЗТ характеризует способность ТЫ-лимфоцитов влиять на данные реакции (Ройт и др , 2000, Хаитов и др , 2002, 8ппа1о\У1сг е1 а1, 1992)

Показатели, характеризующие различные иммунные реакции, обусловленные функцией ТЫ- и ТЬ2-лимфоцитов, при действии ДДВФ в среднем снижаются соответственно в 2 1 и 1 4 раза Это свидетельствует о том, что он в существенно большей степени уменьшает функцию ТЫ-лимфоцитов и связанную с ними продукцию В-клетками 1§М, а также ЕКК и реакцию ГЗТ по с сравнению действием яда на лимфоциты ТЬ2-типа и В-лимфоциты, синтезирующие

Таблица 3

Влияние подострой интоксикации ДЦВФ (ежедневное подкожное введение в дозе 1/7 №¡0 в течение 6 сут) на показатели системы иммунитета крыс, характеризующие функцию ТЫ- и ТЬ2-лимфоцитов (и = 7-9)

Варианты экспериментов АОК к ЭБ, синтезирующим 1§М через 4 сут, х 103 АОК к ЭБ, синте-зирущим через 7 сут, х 103 ЕЦ, % Реакция ГЗТ (функция ТЪ1-лимфоцитов),%

Контроль 39 8 ± 3 7 18 3 ± 1 6 33 7 ± 3 3 34 9 ± 2 6

ДЦВФ 19 3 ± 1 8* 13 2± 1 1* 14 3 ± 2 1* 18 7± 2 0*

Примечание различия достоверны при р < 0 05 по сравнению с контролем

Таким образом, подострое и острое отравление ДДВФ вызывает редукцию иммунных реакций, обусловленных активностью Thl-лимфоцитов, в большей степени по сравнению с иммунным ответом, связанным с функцией ТЬ2-клеток Полученные результаты позволяют заключить, что супрессия показателей иммунного статуса при острой и хронической интоксикации ДДВФ обусловлена снижением миграции клеток в органы системы иммунитета из костного мозга (по числу КОЕ в селезенке), редукцией кооперации Т- и B-лимфоцитов, вследствие преимущественного поражения Т-клеток, более выраженным уменьшением активности Thl-лимфоцитов по сравнению с функцией ТЬ2-клеток, ингибированием эстераз Т-лимфоцитов, моноцитов и макрофагов, увеличением кортикостеро-на в крови (стресс-реакция) и инициацией ПОЛ

ВЫВОДЫ

1 ДДВФ относится к экологическим факторам антропогенного происхождения, вызывающим глубокие и стойкие нарушения доим-мунных биологических механизмов резистентности к инфекциям, иммунного статуса и отрицательно влияющим на жизнедеятельность животных. После острого и хронического его воздействия происходит снижение интегрального состояния антиинфекционной неспецифической резистентности организма и доиммунных механизмов его защиты Это проявляется в увеличении летальности от экспериментальной инфекции, уменьшении LD50 Е coli и Р vulgaris, среднеэффективного времени жизни животных, повышении содержания числа микробных тел Е coli в циркулирующей крови и селезенке крыс после их введения по сравнению с контролем, снижении активности лизоцима, тромбоци-тарно-катионного белка сыворотки крови, дозозависимом уменьшении фагоцитарно-метаболической активности нейтрофилов.

2 Под влиянием острого действия Д ДВФ происходит дозозависи-мое уменьшение лимфоидного индекса тимуса и селезенки, содержания лимфоцитов в этих органах, изменение механизмов регуляции миграции иммуноцитов из органов системы иммунитета

3 После острого и хронического действия ДДВФ происходит преимущественно снижение Т-зависимой антителопродукции В-клетками (синтеза IgM и IgG), связанной с функцией Thl- Th2-лимфоцитов, бо-16

лее выраженное в продуктивной фазе антителогенеза по сравнению с индуктивным периодом, нарушение функции Т- и В-лимфоцитов в эффекте кооперации клеток

4 Действие ДДВФ сопровождается уменьшением функции Т-лимфоцитов, в частности ТЫ-лимфоцитов, редукцией АЗКЦ и активности ЕКК

5 Формирование иммунодефицитного состояния при воздействии ДДВФ обусловлено изменением механизмов регуляции миграции иммуноцитов из органов системы иммунитета, снижением КОЕ в селезенке в зависимости от дозы и характера интоксикации, редукцией кооперацией Т- и В-лимфоцитов вследствие преимущественного поражения Т-клеток, более выраженным уменьшением активности ТЫ-лимфоцитов по сравнению с функцией ТЬ2-клеток, ингибированием эстераз Т-лимфоцитов, моноцитов и макрофагов, увеличением корти-костерона в крови и инициацией перекисного окисления липидов Хроническое действие ДДВФ снижает иммунные реакции в той же степени, что и острое воздействие токсиканта в дозах 0 50-0 75 ЬО50 через 1-3 сут

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

В экспериментах на животных наиболее информативными показателями для оценки иммуносупрессивных эффектов действия ДДВФ являются содержание лимфоцитов в тимусе и селезенке, активность ЕКК, тимусзависимый гуморальный иммунный ответ в продуктивной фазе антителогенеза, функция ТЫ-клеток в реакции ГЗТ

При остром отравлении ДДВФ в сублетальных дозах и хроническом воздействии антихолинэстеразных токсикантов в условиях экологического неблагополучия формируется вторичное постинтоксикационное иммунодефицитное состояние, обусловленное снижением доим-мунных механизмов защиты организма, преимущественной редукцией активности ТЫ-лимфоцитов по сравнению с функцией ТЬ2-клеток, ингибированием эстераз Т-лимфоцитов, моноцитов и макрофагов, увеличением кортикостерона в крови (стресс-реакция), инициацией ПОЛ Поэтому для оценки хронического эффекта ДДВФ (в условиях экологического неблагополучия) необходимо использовать показатели иммунных реакций, полученных при остром отравлении токсикантом в дозе 0 75 ¿£>50

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ * - публикации в печатных изданиях перечня ВАК РФ

1 Германчук В Г, Забродский П Ф , Киричук В Ф , Кадушкин А М Антихолинэстеразный механизм в возникновении супрессии антитело-образования при острой интоксикации фосфорорганическими соединениями // Биология, экология, медицина Саратов, 2002. Ч 2 С 76-78

2 Германчук В Г, Забродский П Ф , Кадушкин А М Антихолинэстеразный механизм как фактор иммунотоксичности ФОВ // Биология, экология, медицина Саратов, 2005 С 42-44

3 *Забродский П Ф , Кадушкин А М , Мандыч В Г Редукция функции ТЫ- и ТЬ2-лимфоцитов при остром отравлении фосфорорга-ническим соединением диметилдихлорвинилфосфатом // Вестник новых медицинских технологий 2007 Т XIV, №1 С 201-202

4 *Забродский П Ф , Кадушкин А М, Балашов С В Относительное увеличение функции Т112-лимфоцитов при интоксикации фосфорорганическими соединениями как фактор риска развития респираторных аллергических реакций // Аллергология и иммунология 2007 Т 8, № 1 С 156

5 Забродский П Ф , Германчук В Г, Ковалев А Ю , Кадушкин А М Нарушение функции субпопуляций Т-лимфоцитов при подостром отравлении токсичными химикатами // Российский хим журн 2007 №3 С 25-28

6 Кадушкин А М , Забродский П Ф Редукция иммунных реакций при отравлении антихолинэстеразным фосфорорганическим соединением метилдихлорвинилфосфатом Роль ТЫ- и ТЬ2-лимфоцитов Саратов, 2007 Деп в ВИНИТИ 26 02 2007 г, №1067-В2007 7 с

7 Кадушкин А М , Забродский П Ф Супрессия показателей системы иммунитета при остром отравлении диметилдихлорвинилфосфатом Роль симпатико-адренналовой системы. Саратов, 2007 Деп в ВИНИТИ 26 02 2007 г, №168-В2007 9 с

8 Кадушкин А М , Забродский П Ф , Мандыч В Г, Германчук В Г Снижение функции ТЫ- и ТЬ2-лимфоцитов при остром отравлении диметилдихлорвинилфосфатом // Биология, экология, медицина Саратов, 2007 С 112-114

9 Кадушкин А М , Забродский П Ф , Мандыч В Г , Германчук В Г Активация симпатико-адреналовой системы и ее влияние на иммунные реакции при острой интоксикации фосфорорганическими соединениями // Биология, экология, медицина Саратов, 2007 С 118-121

10 Кадушкин А М , Забродский П Ф , Германчук В Г Влияние по-лиоксидония на показатели системы иммунитета и перекисного окис-

ления липидов после отравления токсичными химическими веществами // Биология, экология, медицина Саратов, 2007 С. 125-127

11. Кадушкин А М, Забродский П Ф , Германчук В Г. Связь инактивации эстераз Т-клеток и естественных киллеров с иммунотоксично-стью фосфорорганических соединений // Биология, экология, медицина Саратов, 2007. С 128-130

12 Кадушкин А М, Забродский П Ф , Иванов Д Ю, Киричук В Ф Антихолинэстеразный механизм как фактор иммунотоксичности хлорированных углеводородов // Известия высших учебных заведений Поволжский регион Сер. Медицинские науки 2007 № 1. С 3-7.

13. *Шляхтин Г.В , Забродский П Ф, Кадушкин А М Влияние фосфорорганических инсектицидов на функцию ТЫ- и ТЪ2-лимфоцитов и продукцию ими цитокинов // Известия Самарского научного центра РАН 2007. Т. 9, №2 С 510-515

Кадушкин Андрей Михайлович

ВОЗДЕЙСТВИЕ ДИМЕТИЛДИХЛОРВИНИЛФОСФАТА НА ИММУННЫЙ СТАТУС ЖИВОТНЫХ

03 00 16-экология Автореферат Корректор О А Панина

Подписано в печать 27 07 2007 Формат 60х 841/16 Бумага офсетная № 1 Гарнитура Тайме Печать офсетная Уел печ л 1,25 Тираж 100 экз Заказ 85

Отпечатано в типографии ООО «Тироль» 410005, Саратов, ул Чернышевского, 203

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Кадушкин, Андрей Михайлович

Перечень сокращений

Введение

Глава 1. Нарушение доиммунных механизмов защиты иммунного статуса при воздействии фосфорорганических соединений (обзор литературы)

1.1. Общая характеристика фосфорорганических соединений

1.2. Токсикологические свойства диметилдихлорвинилфосфата

1.3. Нарушение доиммунных механизмов защиты и иммунного статуса при воздействии фосфорорганических соединений

Глава 2. Материал и методы исследований

Глава 3. Воздействие ДДВФ на интегральное состояние неспецифической и иммунологической резистентности организма и факторы доим-мунной защиты

3.1. Изменение антиинфекционной неспецифической и иммунологической резистентности организма при экспериментальном перитоните

3.2. Изменение неспецифической и иммунологической резистентности организма при экспериментальной пневмонии

3.3. Влияние острого и хронического отравления ДДВФ на обсемененность селезенки и циркулирующей крови Е. Coli

3.4. Сывороточная активность лизоцима при действии ДДВФ

3.5. Сывороточная активность тромбоцитарного катионного белка при действии ДДВФ

3.6. Фагоцитарно-метаболическая активность нейтрофилов при интоксикацииДЦВФ •

Глава 4. Влияние ДЦВФ на перераспределение лимфоцитов между органами системы иммунитета

4.1. Изменение лимфоидных индексов тимуса и селезенки

4.2. Перераспределение лимфоцитов между органами системы иммунитета и циркулирующей кровью

Глава 5. Действие ДЦВФ на гуморальные иммунные реакции

5.1. Влияние ДДВФ на тимусзависимый гуморальный иммунный ответ

5.2. Действие ДЦВФ на Т-независимый гуморальный иммунный ответ

Глава 6. Воздействие ДДВФ на клето.чные иммунные реакции

6.1. Оценка функции Т-лимфоцитов

6.2. Изменение функции Thl-лимфоцитов

6.3. Изучение антителозависимой клеточной цитотоксичности

6.4. Влияние ДДВФ на функцию естественных клеток-киллеров

Глава 7. Механизмы нарушения иммунного статуса при действии

7.1. Изменение миграции колониеобразующих единиц в селезенку

7.2. Влияние ДДВФ на кооперацию Т- и В-клеток

7.3. Изменение активности эстераз Т-клеток, моноцитов и макрофагов под влиянием ДЦВФ

7.4. Роль кортикостероидов в супрессии иммунного ответа при действии ДЦВФ

7.5. Действие ДДВФ на показатели перекисного окисления липидов

7.6. Роль супрессии функции Thl- ТЪ2-лимфоцитов в редукции иммунных реакций ДЦВФ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Воздействие диметилдихлорвинилфосфата на иммунный статус животных"

Актуальность исследования. В современных условиях особую актуальность представляет изучение действия веществ антропогенного происхождения на живые организмы, системы их жизнеобеспечения и ответные реакции, включая адаптивные. Эта проблема является одной из центральных в общей и экспериментальной экологии. Значительный интерес представляют ФОС, которые, согласно оценке Всемирной организации здравоохранения (2002), относятся к наиболее опасным ксенобиотикам окружающей среды. Так, за последние 20 лет в 60 странах мира зарегистрировано 34000 отравлений ФОС, при этом более 20% случаев интоксикаций связано с их использованием в качестве инсектицидов в сельском хозяйстве, загрязнением данными токсикантами воды, воздуха и почвы. Иммунная система организма является наиболее чувствительной, тонко реагирующей на изменение среды обитания животных к различным внешним воздействиям (Хаитов P.M. и др., 1995). Действие ФОС, в частности ДДВФ, могут существенно изменять доиммунные механизмы защиты организма и показатели системы иммунитета, что можно рассматриваться как дистанционную реакцию организма к новым условиям существования или сигнал тревоги. В более поздний период интоксикации (при остром воздействии больших доз и концентраций) развивается иммунодепрессия, а также сенсибилизация и аутоиммунные реакции. Возникают различные инфекционные, онкологические и аллергические заболевания (Шубик 1976; Забродский, 1998, 2000; Loose, 1985; Descotes, 1986; Kimber et al. 2001; Friedman et al., 2003 и др.). В настоящее время при возможных террористических актах применение ФОС может привести к серьезным экологическим последствиям и гибели большого числа людей, при этом заражение местности (почвы, воздуха, воды) оказывает неблагоприятное воздействие на человека, животных и растения в связи с нарушением механизмов, играющих важную роль в защите от различных инфекций (Забродский,

1998, 2002; Петров и др., 2004). Изложенное позволяет считать, что отравления ФОС являются серьезной социальной и эколого-токсикологической проблемой. Несомненно, одной из актуальных задач экологии в настоящее время является оценка нарушений показателей системы иммунитета после острого и хронического действия ФОС (Забродский и др., 2001, 2005; Luster et al., 1987; Sullivan, 1989). Учитывая достаточно широкое распространение и использование ФОС, в частности ДЦВФ в сельском хозяйстве и быту, возможность аварий при уничтожении токсичных химикатов, относящихся к фосфорорганическим антихолинэстеразным соединениям, высокую смертность при отравлении ими, недостаточно изученные особенности их острого и хронического действия на систему иммунитета представляется актуальным провести комплексное исследование изменения состояния иммунной системы животных под влиянием ФОС на примере ДЦВФ.

Цель исследования: изучение нарушения доиммунных механизмов защиты и иммунного статуса при остром, подостром и хроническом воздействии

ДДВФ.

Задачи исследования.

1. Определить действие ДДВФ на интегральное состояние иммунологической резистентности организма и основные показатели доиммунных механизмов его защиты;

2. Изучить влияние ДДВФ на состав лимфоцитов тимуса и селезенки, процессы их пролиферации и миграции в органы иммунной системы, перераспределение этих клеток между органами системы иммунитета;

3. Исследовать изменения Т-зависимого и Т-независисмого иммунного ответа на фоне действия ДЦВФ;

4. Оценить нарушения клеточных иммунных реакций, обусловленных функцией Thl-лимфоцитов, после действия ДЦВФ;

5. Определить действие ДДВФ на механизмы формирования постинтоксикационного иммунодефититного состояния: поражение Thl- и П12-лимфоцитов, миграцию колониеобразующих единиц из костного мозга в селезенку, активность эстераз в Т-клетках, моноцитах и макрофагах, функцию коры надпочечников, перекисное окисление липидов.

Научная новизна. Впервые показано на примере ДДВФ, что ФОС при остром и хроническом воздействии приводят к снижению интегрального состояния антиинфекционной неспецифической и иммунологической резистентности организма. Установлено увеличение летальности от экспериментальной инфекции, вызванной Escherichia coli и Proteus vulgaris. Экспериментально показано, что под влиянием острого и хронического действия ДДВФ происходит дозозависи мое снижение показателей доиммунной биологической резистентности организма к инфекции. Острое воздействие токсиканта снижает лимфоидный индекс тимуса и селезенки, содержание лимфоцитов в них, изменяет миграцию имму-ноцитов из органов системы иммунитета.

Установлено дозозависимое снижение Т-зависимого антителообразования при острой интоксикации ДДВФ, преимущественно в продуктивную фазу анти-телогенеза. При хроническом воздействии ДДВФ (0.01 LD50 в течение 30 сут) отмечалось сопоставимое изменение показателей, как и при остром их действии в дозе 0.75 LD50. Выявлено, что под влиянием острой интоксикации ДДВФ происходит дозозависимое снижение синтеза IgM, IgG и функции Thl- и Th2-лимфоцитов. Впервые показано, что хроническое отравление ДДВФ вызывает супрессию синтеза IgM и IgG сответственно в 1.6 и 1.4 раза. Действие ДДВФ in vitro вызывает прямо связанное с концентрацией (106, 105и104М) снижение кооперации Т- и В-лимфоцитов, вследствие преимущественного нарушения функции Т-клеток. Доказано, что супрессия иммунных реакций при действии токсиканта может быть связана с увеличением функции коры надпочечников и повышением в крови концентрации кортикостерона, а также ингибированием эстераз Т-лимфоцитов, моноцитов и макрофагов и инициацией перекисного окисления липидов. Впервые установлено, что подострое и острое отравления ДДВФ вызывают редукцию иммунных реакций, обусловленных активностью Thl-лимфоцитов, в большей степени по сравнению с иммунным ответом, связанным с функцией ТЬ2-клеток. На организменном, клеточном и субклеточном уровнях доказано формирование вторичного иммунодефицитного состояния при действии ДДВФ на организм животных.

Научно-практическая значимость. Установлены наиболее информативные показатели в экспериментах на животных для оценки иммуносупрессивного действия ДДВФ: содержание лимфоцитов в тимусе и селезенке, активность естественных клеток-киллеров, тимусзависимый гуморальный иммунный ответ в продуктивной фазе антителогенеза, функция Thl-клеток в реакции гиперчувствительности замедленного типа. Для исследования хронического эффекта ДДВФ (в условиях экологического неблагополучия) могут быть использованы показатели иммунных реакции, полученных при остром отравлении токсикантом в дозе 0.75 ЛД50.

Материалы диссертации внедрены в учебный процесс кафедр охраны окружающей среды и экологической безопасности процессов хранения и уничтожения химического оружия и токсичных веществ и технологий уничтожения химического оружия и токсичных веществ Саратовского военного института радиационной, химической и биологической защиты, кафедры токсикологии и медицинской защиты ГОУ ВПО "Саратовский военно-медицинский институт", кафедры морфологии и экологии животных ГОУ ВПО "Саратовский государственный университет им. Н.Г. Чернышевского". Материалы работы использованы в плановых НИР Саратовского военного института радиационной, химической и биологической защиты.

Апробация работы. Результаты исследований были доложены на Всероссийской конференции молодых ученых "Иммунитет и аллергия: от эксперимента к клинике" (Москва, 2005), V Всемирном конгрессе по иммунопатологии и аллергии (Москва, 2007 г.), заседаниях секции прикладных проблем безопасности хранения и уничтожения химического оружия Поволжского отделения АВН (2005-2007 гг.), научных конференциях кафедры токсикологии и медицинской защиты ГОУ ВПО "Саратовский военно-медицинский институт" (2006, 2007 гг.), кафедрах охраны окружающей среды и экологической безопасности процессов хранения и уничтожения химического оружия и токсичных веществ и технологий уничтожения химического оружия и токсичных веществ "Саратовский военный институт радиационной, химической и биологической защиты" (2007 г.), кафедры морфологии и экологии животных ГОУ ВПО "Саратовский государственный университет им. Н.Г. Чернышевского" (2005, 2007 гг.).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 13 работ, 3 из которых в изданиях перечня ВАК РФ.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 135 страницах, состоит из введения, 7 глав, заключения, выводов и практических рекомендаций. Работа иллюстрирована 38 таблицами и 2 рисунками. Библиографический указатель включает 209 источников отечественной и зарубежной литературы.

Заключение Диссертация по теме "Экология", Кадушкин, Андрей Михайлович

ВЫВОДЫ

1. ДДВФ относится к экологическим факторам антропогенного происхождения, вызывающим глубокие и стойкие нарушения доиммунных биологических механизмов резистентности к инфекциям, иммунного статуса и отрицательно влияющим на жизнедеятельность животных. После острого и хронического его воздействия происходит снижение интегрального состояния антиинфекционной неспецифической резистентности организма и доиммунных механизмов его защиты. Это проявляется в увеличении летальности от экспериментальной инфекции, уменьшении LD50 Е. coli и P. vulgaris, среднеэффективного времени 4 жизни животных, повышении содержания числа микробных тел Е. coli в циркулирующей крови и селезенке крыс после их введения по сравнению с контролем, снижении активности лизоцима, тромбоцитарно-катионного белка сыворотки крови, дозозависимом уменьшении фагоцитарно-метаболической активности нейтрофилов.

2. Под влиянием острого действия ДДВФ происходит дозозависимое уменьшение лимфоидного индекса тимуса и селезенки, содержания лимфоцитов в этих органах, изменение механизмов регуляции миграции иммуноцитов из органов системы иммунитета.

3. После острого и хронического'действия ДДВФ происходит преимущественно снижение Т-зависимой антителопродукции В-клетками (синтеза IgM и IgG), связанной с функцией Thl- И12-лимфоцитов, более выраженное в продуктивной фазе антителогенеза по сравнению с индуктивным периодом, нарушение функции Т- и В-лимфоцитов в эффекте кооперации клеток.

4. Действие ДДВФ сопровождается уменьшением функции Т-лимфоцитов, в частности Thl-лимфоцитов, редукцией АЗКЦ и активности ЕКК.

5. Формирование иммунодефицитного состояния при воздействии ДЦВФ обусловлено изменением механизмов регуляции миграции иммуноцитов из органов системы иммунитета, снижением КОЕ в селезенке в зависимости от дозы и характера интоксикации, редукцией кооперацией Т- и В-лимфоцитов вследствие преимущественного поражения Т-клеток, более выраженным уменьшением активности Thl-лимфоцитов по сравнению с функцией Th2-клеток, ингибированием эстераз Т-лимфоцитов, моноцитов и макрофагов, увеличением кортикостерона в крови и инициацией перекисного окисления липидов. Хроническое действие ДДВФ снижает иммунные реакции в той же степени, что и острое воздействие токсиканта в дозах 0.50-0.75 LD$о через 1-3 сут.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

В экспериментах на животных наиболее информативными показателями для оценки иммуносупрессивных эффектов действия ДДВФ являются: содержание лимфоцитов в тимусе и селезенке, активность ЕКК, тимусзависимый гуморальный иммунный ответ в продуктивной фазе антителогенеза, функция Thl-клеток в реакции ГЗТ.

При остром отравлении ДДВФ в сублетальных дозах и хроническом воздействии антихолинэстеразных токсикантов в условиях экологического неблагополучия формируется вторичное постинтоксикационное иммунодефицитное состояние, обусловленное снижением доиммунных механизмов защиты организма, преимущественной редукцией активности Thl-лимфоцитов по сравнению с функцией ТЬ2-клеток, ингибированием эстераз Т-лимфоцитов, моноцитов и макрофагов, увеличением кортикостерона в крови (стресс-реакция), инициацией

ПОЛ. Поэтому для оценки хронического эффекта ДЦВФ (в условиях экологического неблагополучия) необходимо использовать показатели иммунных реакций, полученных при остром отравлении токсикантом в дозе 0.75 LD5q.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Кадушкин, Андрей Михайлович, Саратов

1. Абдрашидова Н.Ф., Романов Ю.А. Состояние эритроцитарной системы ПОЛ-окислительная активность у больных хроническим бронхитом, вдыхавших и не вдыхавших озон // Бюл. эксперим. биол. и мед. 2001. - Т. 132, №9. -С. 317-319.

2. Адо А.Д. Некоторые вопросы нервной регуляции иммунных и аллергических реакций (об отношении холиновых и антигенсвязывающих рецепторов) // Эксперим. и клин, фармакология. 1995. - № 3. - С. 43 - 45.

3. Адо А.Д., Гольдштейн М.М., Донцов В.И. Ацетилхолининдуцированная подвижность лимфоцитов интактных и сенсибилизированных мышей // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1983. - № 4, - С. 66 - 67.

4. Александров В. Н. Гуморальный иммунный ответ после травмы различной тяжести // Пат. физиол. и эксперим. терапия. 1983. - №4. - С. 70 - 72.

5. Алимова М. Т., Маджидов А. В., Арипова Т. У. Влияние пестицидов на ан-тителообразование и иммунорегуляторные показатели лимфоцитов у мышей // Иммунология. -1991. № 2. - с. 33 - 34.

6. Ананченко В.Г., Лужников Е.А., Алехин Ю.Д. и др. Влияние фосфорорга-нических пестицидов на систему иммунитета при острых пероральных отравлениях // Сов. мед. -1987. № 3. - С. 106 - 108.

7. Арипова Т. У., Маджидов А. В., Алибекова М. Г., Камалов З.С. Влияние пестицидов на продукцию интерлейкина-2 // Иммунология. 1991. -№ 2. -С. 61- 68.

8. Арчаков А.И. Оксигенация биологических мембран. М.: Медицина, 1993. Ю.Бадюгин И.С., Забродский П.Ф., Поляруш В.П. и др. Военная токсиколгия, радиология и зашита от оружия массового поражения.- М.: Военное издательство, 1992. - С. 132 - 150.

9. Беленький М. JI. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта: 2-е изд., JL: Медицина, 1963. - 235 с.

10. Беликов В.Г. Коррекция тимогеном нарушений физиологических механизмов регуляции иммуногенеза при остром отравлении токсичными химическими веществами // Диссканд. мед. наук. Саратов, СГМУ. - 2001. - 149 с.

11. Белокрылов Г.А., Попова О.Я. Лизосомально-катионный тест и тест восстановления НСТ лишь частично отражают степень завершенности фагоцитарного процесса в ганулоцитах человека // Бюл. эксперим. биол. и мед.-1999.-Т.133, № 1.-С. 75-77.

12. Бельцкий С. М., Снастина Г. И. Механизм защиты от гнойной инфекции // Иммунология. 1985. - № 2. - С. 14 - 20.

13. Бровкина И.Л., Конопля А.А., Утешев Б.С., Рыбников В.Н. Иммуномодули-рующее действие пиридоксина, фолата икобаламина при различных формах анемии // Эксперимент, и клин. фармакол.-2004. Т.67, №1.-С. 32-36.

14. Брызгана Т.М. Изменение кооперации Т- и В-лимфоцитов при иммунном ответе на эритроциты барана на фоне поражения печени четыреххлористым углеродом//Физиол. журнал.-Киев, 1989.-Т. 35, № 1.-С. 25-30.

15. Брюхин Г.В., Михайлова Г.И. Интенсивность реакции гиперчувствительности замедленного типа у потомства крыс с хроническим поражением печени//Физиол. журн.-Киев, 1990.-Т. 36.-№ 6.-С. 94-100.

16. Бухарин О. В., Васильев Н. В. Лизоцим и его роль в биологии и медицине. -Томск, 1974. 209 с.

17. Бухарин О. В., Васильев Н. В. Система Р-лизина и его роль в клинической и экспериментальной медицине. Томск, 1977. - 166 с.

18. Бухарин О. В., Сетко Н. П., Желудева Г. Н. Иммунологические сдвиги у экспериментальных животных при воздействии комплекса химических веществ // Гигиена труда. 1985. - № 3. - С. 45 - 46.

19. Бухарин О. В., Сулейманов К. Г., Чернова О. Л., Иванов Ю. Б. Способность микроорганизмов к инактивации бактерицидного действия тромбоцитарного катионного белка (Р-лизина) // Бюл. экспер. биол. и мед. 1998. - № 7. - С. 66 -67.

20. Виноградов В.М., Гембицкий Е.В., Мухин Е.А., Фролов С.Ф. Фармакология (общая, частная и основы клинической) // Под ред. В.М.Виноградова. 2 изд., доп. и перераб. - Л.:Изд-во ВМА, 1985 - 515 с.

21. Гембицкий Е.В., Кожемякин Л.А., Королюк A.M., Морозов В.Г., Хавинсон В.Х. Оценка иммунного статуса организма в лечебных учреждениях Советской

22. Армии и Военно-Морского Флота // Метод, пособ. 1987. - М.: Изд-во ЦВМУ МО СССР. - С. 24 - 25.

23. Генес В. С., Шмутер Л. М., Буркина-Вовк 3. И. Об едином математическом подходе к выявлению хронического действия малых концентраций промышленных ядов//Гигиена труда. 1981. - №1. - С. 30 - 31.

24. Германчук В.Г. Нарушения регуляции физиологических механизмов иммуногенеза при остром отравлении нитрилами // Дисс. . канд. мед. наук. -Саратов, СВИРХБЗ. 2000. - 121 с.

25. Голиков С.Н. Профилактика и терапия отравлений фосфорорганическими инсектицидами. М., 1968. - 168 с.

26. Голиков С.Н., Саноцкий И.В., Тиунов JI.A. Общие механизмы токсического действия/ АМН СССР. JL: Медицина, 1986. - 280 с.

27. Гордиенко С.М. Приемлемый для клинической практики метод оценки активности естественных антителозависимых киллерных клеток // Лаб. дело. -1983.-№9.-С. 45-48.

28. Гордиенко С. М. Нерадиометрические методы оценки естественной цито-токсичности на эритроцитарные клетки-мишени // Иммунология. 1984. - № 1. -С. 31-36.

29. Горизонтов П. Д. Система крови как основа резистентности и адаптации организма // Физиол. журн. Киев. - 1981а. - Т 27. - № 3. - с. 317 - 321.

30. Горизонтов П. Д. Стресс. Система крови в механизме гомеостаза. Стрес и болезни. // В кн.: Гомеостаз. М.:Медицина, 19816. - С. 538 - 573.

31. Гребенюк А.Н., Антушевич А.Е., Беженарь В.Ф. и др. Нейтрофил и экстремальные воздействия/ Под ред. А.Н. Гребенюка и В.Г. Бовтюшко. -СПб., 1998.-215 с.

32. Гублер Е. В. Вычислительные методы анализа и распознавания патологических процессов. Л.: Медицина, 1978. - 296 с.

33. Гущин Н.В., Хайдарова Д.С., Кугушева Л.И. и др. Активность ацетилхоли-нэстеразы лимфоцитов крыс при интоксикации пестицидами // Бюл. эксперим. биол. и мед. 1991. - Т. 111, № 2. - С. 144 - 146.

34. Давыдов В.В. Флюорометрическое определение неконъюгированных 11-оксикортикостероидов в биологических средах организма // Патофизиология экстремальных состояний. Труды ВМА им. С.М. Кирова, т. 189.- Л.: ВмедА» 1970. С.-85-86.t

35. Денисенко П.П. Роль холинореактивных систем в регуляторных процессах.-М: Медицина. -1980. 296 с.

36. Дешевой Ю.Б. Горизонтов П.Д. Влияние препаратов, действующих преимущественно в области периферических М-холинореактивных систем на эо-зинофилы костного мозга // Бюл. экЬперим. биол. и мед. 1982. - Т. 94, № 5. -С. 61-63.

37. Дешевой Ю. Б. Влияние ацетилхолина на миграцию зрелых эозинофилов из костного мозга в циркулирующую кровь // Пат. физиол. и экс-перим. терапия. 1985. - №. 5. - С. 48 - 50.

38. Дорошевич A.JI. Влияние фосфорорганических соединений на содержание некоторых биогенных аминов: Автореф. дис. канд. мед. наук. Минск. -1971. -23 с.

39. Диноева С.К. Динамика изменений иммунной структуры лимфатических фолликулов селезенки при интоксикации пестицидами. // Гигиена и санитария. -1974. № 3. - С. 85 - 87.

40. Ефремов А. М. Исследование свободных радикалов крови, мозга, печени и селезенки белых крыс, подвергавшихся хроническому отравлению нитрилом акриловой кислоты//Здравоохр. Белоруссии.-1976.-№6.-С. 74-78.

41. Жамсаранова С.Д., Лебедева С.Н., Ляшенко В.А. Оценка функциональной активности макрофагов при воздействии карбофоса и 2,4 Д // Сборник науч. трудов ВНИИ гигиены и пестицидов, полимеров и пластмасс. 1988. - № 18. -С. 143 -147.

42. Жамсаранова С.Д., Миронова Э.С., Сергеева З.Д. и др. Использование показателей иммунной системы организма животных при оценке пороговых дозпестицидов // Гигиена и санитария. -1990. № 2. - С. 75 - 76.

43. Забродский П. Ф. Иммунотропные свойства ацетилхолинэстеразных веществ // Проблемы охраны здоровья населения и защиты окружающей среды от химических вредных факторов. Тез. докл. I Всес. съезда токсикологов. -Ростов н/Д, 1986. С. 342 - 343.

44. Забродский П. Ф. Влияние армина на факторы неспецифической резистентности организма и первичный гуморальный ответ // Фармакол. и токси-кол. 1987. - Т 49. - № 2. - С. 57 - 60.

45. Забродский П. Ф. Механизмы иммунотропных эффектов фосфорорганиче-ских соединений // Бюл. эксперим. биол. и мед. 1993. - Т 116. - № 8. - С. 181 -183.

46. Забродский П. Ф. Изменение антиинфекционной неспецифической резистентности организма под влиянием холинергической стимуляции // Бюл. эксперим. биол. и мед. 1995. - Т. 119. - № 8. - С. 164 - 167.

47. Забродский П. Ф. Иммунотропные свойства ядов и лекарственных средств. Саратов: Изд. СГМУ, 1998. - 213 с.

48. Зимин Ю. И., Ляхов В. Ф. Эффект кооперации в реакции зависимой от антител клеточной цитотоксичности // Иммунология. 1985. - № 1.- с. 27 - 30.

49. Золотникова Г.П. К вопросу о ранней диагностике и профилактике профпа-тологии пестицидной интоксикации у тепличниц // Гиг. труда и проф. заболеваний. -1978. № 12. - С. 14 -18.

50. Золотникова Г.П. О нарушении иммунологической реактивности организма под воздействием пестицидов в условиях теплиц // Гиг. труда. 1980. -№ 3. -С. 38-40.

51. Иванов В.В. Изменение численности и качественного состояния лимфоцитов при хроническом радиационно-химическом поражении крыс. // Гигиена и санитария. 1986. - № 3. - С. 37 - 40.

52. Идова В.Г., Чейдо М.А., Девойио JI.B. Иммунная реакция у мышей при психоэмоциональном напряжении в условиях снижения синтеза серотони-на в мозге // Сб. докл. Акад. Наук, 2004. Т. 398, №1. - С. 132-134.

53. Измеров Н. Ф., Саноцкий И. В., Сидоров К. К. Параметры токсикометрии промышленных ядов при однократном воздействии.-М: Медицина, 1977.-239 с.

54. Каган Ф.С. Токсикология фосфорорганических пестицидов.-М:. Медицина, 1977.-296 с.

55. Калинкович А.Г., Борисова JI.C., Инжеваткина С.М. и др. Влияние веществ, увеличивающих внутриклеточное содержание цГМФ, на функциональную активность В-клеток у мышей // Иммунология. 1988. - № 4. - С. 33 - 36.

56. Ковтун С.Д., Кокшарева Н.В. Электрофизиологический анализ действия ряда антихолинэстеразных веществ на функциональное состояние периферического нерва и нервно-мышечную передачу теплокровных животных // Физиол.журн. -1980. Т. 26, № 4. - С. 26 - 29.1

57. Корнева Е. А. Нервная система и иммунитет // Вестн. АМН СССР. 1985. -№11.- С. 76-85.

58. Корнева Е.А. Нарушение нейрогуморальной регуляции функций иммунной систем // Вест. АМН СССР. 1990. - № 11. - С. 36 - 42.

59. Коробейникова Э.Н. Фотометрический метод определения малонового альдегида//Лаб. дело.- 1989.- №7.- С.8-10.

60. Лакин Г. Ф. Биометрия.- М.: Высш. шк., 1980. 293 с.

61. Лудевиг Р., Лос К. Острые отравления: Пер. с нем. М.: Медицина, 1983. -560 с.

62. Лужников Е.А. Клиническая токсикология. М. Медицина. 1982. 368 с.

63. Лужников Е.А., Костомарова Л.Г. Острые отравления: Руководство для врачей. М.:Медицина. 1989. - 432 с.

64. Лужников Е.А., Костомарова Л.Г. Острые отравления: Руководство для врачей. 2-е изд., перераб и доп. М.:Медицина. 2000. - 434 с.

65. Маркова И.В., Афанасьева В.В., Цыбулькин Э.К., Беженцев М.В. Клиническая токсикология детей и подростков. Санкт-Петербург, Интермедика, 1998. - 304 с.

66. Медведь Л.И., Каган Ю.С., Спыну Е.И. Пестициды и проблемы здравоохранения. Журн. Всес. Хим. Об-ва им. Менделеева. - 1968. - № 3. - С. 263 - 271.

67. Меерсон Ф.З. Патогенез и предупреждение стрессорных и ишемических повреждений сердца. М.: Медицина-1984.- 272 с.

68. Могуш Г. Острые отравления // Пер. с рум. Бухарест, Медицинское издательство, 1984. - С. 440 - 464.

69. Москалева Е.Ю., Федоров Н.А., Кизенко О.А., Караулов А.В. Повреждения ДНК лимфоцитов и иммунодефицитные состояния // Вестн. РАМН. 1993. - № 4.-С. 12-17.

70. Мутускина Е.А., Багдасаров JI.A., Трубина И.Е., Заржецкий Ю.В. Некоторые показатели стресс-реакции организма на разных этапах постреанимационного периода // Бюл. эксперим. биол. и мед. 2001. - Т. 133, №1. - С. 38-41.

71. Николаев А.И. Пономарева JI.A. Гиллер И.С. и др. Иммунодепрессивное действие некоторых ядохимикатов // Фармакол. и токсикол. 1972. - Т. 35, № 3.-С. 352-355.

72. Перелыгин В.М. Шнирт М.Б., Арипов О.А. Действие некоторых пестицидов на иммунологическую реактивность // Гигиена и санитария. -1971. № 12. - С. 29 - 33.

73. Петров Р.В., Хаитов P.M. Миграция стволовых клеток из экранированного костного мозга у неравномерно облученных мышей // Радиология. 1972. - № 1.-С. 69-76.

74. Петров Р. В., Хаитов Р. М., Манько В. М., Михайлова А. А. Контроль и регуляция иммунного ответа. М.: Медицина, 1981а. - 312 с.

75. Петров Р. В., Хаитов Р. М. Иммунологические механизмы клеточного го-меостаза // В кн. Гомеостаз. М.: Медицина, 19816. - С. 312 - 365.

76. Петров Р. В. Иммунология. М.; Медицина 1987. - 416 с.

77. Петров Р.В., Михайлова А.А., Фонина JI.A. Миелопептиды и иммунный статус. // Аллергология и иммунология. 2005. - Т.6, № 2. - С. 204.

78. Пирцхалава А.В. Гетерогенная реакция острого отравления организма хлорофосом // Сообщ. АК ГССР. 1989. г Т. 133, № 2. - С. 421 - 424.

79. Присяжнюк Т.Н., Петровская О.Г., Кузьменко Н.М. Особенности воздействия хлорофоса на организм теплокровных // Гигиена и санитария. 1986. - № 6.-С. 65-67.

80. Прозоровский В.Б., Саватеев Н.В. Неантихолинэстеразные механизмы действия антихолинэстеразных средств.- Л.: Медицина, 1976. -160 с.

81. Ремезов А. И., Башмаков Г. А. Методы определения естественной (неспецифической) резистентности организма. Л., 1976. - 65 с.

82. Решетова Н.В., Мамонов А.В. Косников В.В., Малашенькова И.К. /Тр. 2 Науч. конф. мол. ученых НИИ физ.-хим. мед., Москва, 26 марта, 1987 // НИИ физ.-хим. мед.- М., 1987.-С. 49-54.

83. Ройт А. Основы иммунологии: Пер. с англ. М.: Мир, 1991. 327 с.

84. Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д. Иммунология. Пер. с англ. М.: Мир, 2000.-582 с.

85. Ротенберг Ю.С. Токсиколого-гигиенические аспекты биоэнергетики // Всесоюзн. учред. конф. по токсикологии. Тез. докл. М., 1980. - с. 108.

86. Ротенберг Ю.С. Классификация ксенобиотиков по локализации их действия на ферментные системы митохондрий // Бюл. эксперим. биол. и мед.-1982.- №9.-С. 42-45.

87. Румянцев А.П., Тиунова Л.В., Остроумова И.А. Метаболизм соединений жирного ряда // Итоги науки и техники: Серия токсикология.- М., ВИНИТИ, 1981.-Т. 12.-С. 65-116.

88. Рыбников B.H., Бровкина И.JI., Утешев Б.С. Влияние лизоцима на функционально-метаболическую активноссть полиморфноядерных лейкоцитов в условиях острой кровопотери // Эксперимент, и клин. фармакол.-2004. Т.67, №2.-С. 45-48.

89. Саватеев Н.В. Военная токсикология, радиология и медицинская защита. Л.: ВмедА, 1978.-333 с.

90. Сакаева Д.Д, Лазарева Д.Н. Влияние гентамицина на иммунитет при иммунодефиците и действие иммуномодуляторов // Эксперимент, и клин, фарма-кол. -1998.- Т.61, №3. С. 50-53.

91. Свирид В.Д. Синтез специфических белков в клетках некоторых органов белых мышей при действии температурного фактора внешней среды // Бюл. эксперим. биол. и мед. -2002. Т.133, №3. - С. 331-336.

92. Сидельникова Н. М. Характер и механизмы нарушения неспецифической резистентности организма и специфической иммунной защиты при остром отравлении веществом BZ // Дисс. . канд. мед. наук. Саратов, СГМУ. -2004.168 с.

93. Урбах В. Ю. Статистический анализ в биологических и медицинских исследованиях. М.: Медицина, 1975. - 295 с.

94. Утешев Б. С. О некоторых методологических вопросах скрининга имму-нотропныхсредств//Фармак.итоксикол.- 1984.-№3.-С. 5-13.

95. Федоров С.М., Мазина Н.М., Бухова В.П., Куршакова Т.С. Иммунологические показатели у больных профессиональными дерматозами, вызванными фосфорорганическими пестицидами // Вестн. дерматол. и венерол. 1988. - № 8.-С. 46-48.

96. Феерман И.С., Бонгард Э.М., Дащенко Н.С. К вопросу о хронической интоксикации хлорофосом // Гиг. труда. -1964. № 11. - С. 36 - 38.

97. Фримель X., Брок И. Основы иммунологии: Пер. с нем. 5-е изд. - М.: Мир, 1986. - 254 с.

98. Хаитов Р. М., Игнатьева Г.А., Сидорович И.Г. Иммунология. М.: Медицина, 2000. - 430 с.

99. Хаитов Р. М., Игнатьева Г.А., Сидорович И.Г. Иммунология. (2-е изд., перераб. и доп.) // М.: Медицина, 2002.- 536 с.

100. Хаитов P.M., Пинегин Б.В., Истамов Х.И. Экологическая иммунология.-М.: Изд-во ВНИРО, 1995. 219 с.

101. Хейхоу Ф. Г. Дж., Кваглино Д. Гематологическая цитохимия. М.: Медицина, 1983. - 319 с.i

102. Хусинов А.А., Хайдарова Д.С., Гущин Г.В., Лесникова М.П. Нейроэн-докринная система и специфические факторы иммунитета при отравлении пестицидами // Бюл. эксперим. биологии и мед. -1991. Т. 111, № 12. - с. 623 -624.

103. Чугунихина Н.В., Хасанова М.И. Влияние пестицидов на неспецифическую сопротивляемость организма инфекции. // Гиг. и санитария. 1994. - № 1. -С. 19-21.

104. Шафеев М.Ш. Влияние хлорофоса на некоторые показатели иммунологической реактивности организма // Изучение экстремальных состояний. -Казань, 1976. С. 60 - 63.

105. Шилов Ю.И., Ланин Д.В. Влияние гидрокортизона на функции фагоцитирующих клеток брюшной полости крыс в условиях блокады 0-адренорецепторов // Бюл. эксперим. биол. и мед. 2001. - Т.131, №10. - С. 439-442.

106. Ширшев С.В. Зависимость внутриклеточного уровня цАМФ интактных спленоцитов от популяционного состава клеточной суспензии и активности циклооксигеназы // Бюл. эксперим. биол. и мед. 1998. - № 6. - С. 666 -669.

107. Штенберг А.И., Джунусова P.M. Угнетение иммунологической реактивности организма животных под влиянием некотрых ФО пестицидов // Бюл. эксперим. биол. 1968. - № 3. - С. 86 - 88.

108. Шуршалина А.В., Верясов В.Н., Сухих Г.Т. Соотношение уровней цито-кинов при генитальном герпесе в различные фазы инфекционного процесса // Бюл. эксперим. биол. и мед. -2001. Т. 132, №7. - С. 59-61.

109. Abbas А.К., Murphy К.М., Sher A. Functional diversity of helper T lymphocytes // Nature. 1996. - Vol. 383. - P. 787-793.

110. Audre F., Gillon., Lafout S., Yourdan G. Pesticide-containing diets augments in anti-sheep red blood cell non reaginic antibody responses in mice but viay prolong murine infection with Giardia muris //Environ. Res.-1983.-Vol. 32, N l.-P. 145-150.

111. Becker E.Z. Concerning the mechanism of complement activity by di-isopropilfluorophosphate. //J. Immunol.-1956.-Vol. 77, N 6.-P. 462-468.

112. Becker E.Z., Austen K.F. A comparison the specificity of inhibbition by phosphonate esters of the first component of complement and the antigen-induced releaseiof histamine from guinea pig lung. //J. Exp. Med.-1964.-Vol. 120, N 4.-P. 491-506.

113. Becker E.Z., Austen K.F. Mechanisms of immunologic injury of rat peritoneal mast cells. I. The effect of phosponate inhibitors on the homocytotropic component of rat complement. //J. exp. med.-1966.-Vol. 124, N 3.-P. 379-395.

114. Becker E.Z., Phosphonate inhibition of the accumulation and retention of K+ by rabbit neutrophils in relation to chemotaxis //J. Immunol.-1971.-Vol. 106, N 3.-P. 689-697.

115. Becker E.L., Unanue E.R. The requirement for esterase activation in the anti-immunoglobulin-triggered movement of В lymphocytes //J.Immunol.-1976.-Vol. 117, N l.-P. 27-32.

116. Becker E.L., Ward P. A. Partia 1. Biochemical characterization of the activated esterase required in the complement-dependent chemotaxis of rabbit polymorphonuclear leucocytes //J.Exp.Med.-1967.-Vol.l25, N 6.-P. 1021-1030.

117. Casale G.P., Cohen S.D., DiCajwa. R.A. The effects of organophosphate-induced cholinergic stimulation on the antibody response to sheep erythrocytes in inbred mice // Toxicol, and Appl. Pharmacol.-1983.-Vol. 68, N 2.-P. 198-205.

118. Casale G.P., Cohen S.D., DiCapva R.A. Parathion of humoral immunity in inbred mice //Toxicol. Lett.-1984.-Vol. 23, N 2.-P. 239-247.

119. Claman H. N. Corticosteroids and lymphoid cells // New Engl. J. Med.-1972.-Vol.287.-N 8.- P. 388-397.

120. Claman H.N. Corticosteroids as immunomodulators //Immunomodulation drugs / Ann. of the N.-Y. Acad. Sci. 1993.-Vol. 685. -P. 288-292.

121. Descotes J. Immunotoxicology of drugs and chemicals. Amsterdam- -N. Y-. Oxford: Elsiver, 1986.- 400 p.

122. Desi I., Palotas M., Vetro G. et al. Biological monitoring and health surveillance of a group of greenhouse pesticide sprayers //Toxicol.Lett.-1986.-Vol. 33, N 153.-P. 91-105.

123. Desi I., Varga L., Farkas I. The effect of DDVP, on organophosphorus pesticide on the humoral and cell-mediated immunity of rabbits /Further studies in the assessment of toxic action//Arch. Toxicol.-1980,-Suppl. 4.-P. 171-174.

124. Dhabhar F. S., Millerr A. H., Mc Even B. S., Spenser R. L. Stress -induced in blood leukocyte distribution: A role of adrenal steroid hormones // J. Immunol.- 1996. Vol.l 57.- N 4.- P. 1638-1644.t

125. Devens B.H., Grayson H.M, Imammura Т., Rodgers K.E. 0,0,S-trimethyl phosphorothionate effects on immunocompetense //Pestic. Biochem. and Phisiol.-1985.-Vol. 24, N 2.- P. 251-259.

126. Dulis B.H., Gordon M.A., Wilson J.B. Identification of muscarinic binding sites in human neutrophilis by direct binding //Molec. Pharmacol.-1979.-Vol. 15, N l.-P. 28-34.

127. Ellman G.M., Countney K.D., Anders V. A new and rapid colorimetric determination of acetylcholinesterase activity // Biochem. Pharm. -1961.- Vol. 7, N 1. -P. 88.

128. Fergula J., Ashercon G. L., Becker E. L. The effect of organophosphorus inhibitors, p-nitrophenol and cytocholasin-B on cytotoxic killing of tumor cells and the effect of shaking //Immunol. 1972.- Vol. 23.- N 4. - P. 577 - 590.

129. Fleisher T.A., Oliveira J.B. Functional and molecular evaluation of lymphocytes // J. Allergy Clin. Immunol. 2004. - Vol. 114, N 4. - P. 227-234.

130. Friedman H., Newton C., Klein T.W. Microbial Infections, Immunomodula-tion, and Drugs of Abuse // Clin. Microb. Rev. 2003.- Vol. 16.- No 2. - P. 209-219.

131. Georgiev V.St., Albright J.E. Cytokines // Immunomodulation drugs / Ann. of the N.-Y. Acad. Sci. 1993,-Vol. 685. -P.284-602.

132. Garoroy M.R., Strom T.B., Kaliiier M., Carpenter C.B. Antibody-dependent lymphocyte mediated cytotoxicity mechanism and modulation by cyclic nucleotides //Cell. Immunol.-1975.-Vol. 20, N 2.-P. 197-204.

133. Gilbert R.V., Hoffmann M.K. cAMF is essential signal in the induction of antibody production by В cells but inhibits helper function of T cells// J. Immunol.-1985.-Vol.135, N 3.-P.2084-2089.

134. Grabczewska E., Lascowska- Bozek H., Maslinski M., Ryzewski J. Receptory muskarinowe na limfocytach ludzkich stymulowanych fitohemaglutynina //Rreumatologia.-1990.-T. XXVIII, N 4.-P. 171-179.

135. Heideman M., Bentgson A. Immunological interfence of high dose corticosteroids //Acta chir. scand.-1985.-Vol.151, N 526.-P. 48-55.

136. Jerne N. K., Nordin A. A. Plaque formation in agar by sirgte antibody producing cells // Science.- 1963.- Vol. 140.- N 4. P. 405.

137. Kimber I. Chemical Induced Hypersensitivity //In.: Exper. Immun.- Boca Raton, New York, London, Tokyo.-1996.- P. 391-417.

138. Koller L.D., Exon J.H., Roan J.G. Immunological surveilance and toxicity in mice exposed to the organophosphate pesticide coptophos //Envir. Res.-1976.-Vol. 12, N12.-P. 238.

139. Kossman S., Konieczny В., Panek E. Immunoelektroforogram oraz sterenie immunoglobulin G, A, M, W surowicy krwi procownikov zatrunionych przy pro-dukcji pestycydow fosforoorganicznych //Med. pr. -1985.-Vol. 36, N l.-P. 27-30.

140. Kullenkampff J., Janossy G., Greanes M.F. Acid esterase in human lymphoid cells and leukaemic blasts: a marker for T-lymphocytes //Brit. J. Haemat.-1977.-Vol. 36, N 2.-P. 231-240.

141. Kutty К. M., Chandra R. K., Chandra S. Acetylcholinesterase in erytrocytes and lymphocytes: its contribution to cell membrane structure and function //Experientia. 1976.- Vol. 32.- N 3. - P. 289.

142. Lee T.P., Moscati R., Park B.H. Effects of pesticides on human leukocyte functions//Res. Comm. Chem. Pathol. Pharmacol.-1979.-Vol. 23, N l.-P. 597-601.

143. Li C. G., Lam R. W., Gam L. T. Esterases in human leucocytes //J. Histo-chem. Cytochem.- 1973.-Vol. 21.-N 1.'-P. 1-12.

144. Loose, L.D. Immunotoxicology-1985. / L.D. Loose //Year Immunol.- 1985-1986.-Vol. 2.-Basel e.a., 1986.-P. 365-370.

145. Luster M. J., Blank J. A., Dean J. H. Molecular and cellular basis of chemically induced immunotoxicity //Annu. Rev. Pharmacol, and Toxicol.-Vol. 27.-Palo Alto, Calif.-1987.-P. 23-49.

146. MacManus J.P., Bounton A.L.,Whitefield J.F. et al. Aceytlcholine-induced initiation of thymic lymphoblast DNA synthesis and proliferation //J. Cell. Physiol.-1975.-Vol. 85, N2.-P. 321-330.

147. Madden K. S., Livnat S. Catecholamine action and immunologic reactivity // In: Psychoneuroimmunology, Second Edition.- academic Press, Inc.-1991.- 283-310.

148. Maekawa Y., Yasutomo K. Antigen-driven T-cell repertoire selection // Crit. Rev. Immunol. 2005. - Vol. 25, N 5. - P. 59-74.

149. Maslinski W., Krystyniak K., Grabczewska E. et al. Muscarinic acetylcholine receptous of rat lymphocytes // Biochim. biophis. Acta.-1983.-Vol. 758, N l.-P. 9397.

150. Maslinski W., Grabczewska E., Laskowska -Bozek H., Ruzewski H. Expression of muskarinic cholinergic receptors during T cell maturation in the thymus // Eur. J. Immunol. -1987.-Vol. 17, N 7.-P. 1059-1053.

151. Masuda N. , Tahatsu M., Mjnnau Y/ Ozawa T. Sarin poisonning in Tohyo subway//Lancet.- 1995.-N8962.-P. 1446-1447.

152. Nogueira N. Intracellular mechanisms of killing /Immunobiol. Parasit. and Parasitic. Infec.-New York-London, 1984.-P. 53-69.

153. Newcombe D.S. Immune surveillance, organophosphorus exposure, and lymphomagenesis //Lancet.-199l.-N 8792.-P. 539-541.

154. Nouragargh S., Holt J.R.S. Ingibition of human neutrophil degranulation by forskolin in the presence phosfodiesters ingibitors// Eur. J. Pharmacol.- 1986.- Vol. 222, N 2.-P. 205-212.

155. Pfeifer C., Murrey J., Madri J., Bottomly K. Selective activation of Thl- and Th2-like cells in vivo: Response to human collagen IV // Immunol. Rev. -1991.-Vol. 123,N2.-P. 65-84.

156. Richman D.P., Arnason B.G.W. Nicotinic acetylcholine receptor: evidence for a functionally distinct receptor on human lymphocytes //Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-1979.-Vol. 76, N 9.-P. 4632-4631

157. Rodgers K.E., Imamura Т., Devens B.H. Effects of subchronic treatment with 0,0,S-trimethyl phosphorothio ate on cellular and humoral immune response systems //Toxicol, and Appl, Pharmacol.-1985a.-Vol. 81, N 2.-P. 310-318.

158. Rodgers K.E., Imamura Т.,Devens B.H. Organophosphorus pesticide immu-notoxicity: effects of 0,0,S-trimethylphosphorothioate on cellular and humoral immune response systems //Immunopharmacology.-1986a.-Vol. 12, N 3.-P. 193-202.

159. Rodgers K.E., Leung N., Wae C.F. et al. Lack of acute and subacute administration of malathion on murine cellarar and humoral immune responses //Pestic. Biochem. and Physiol.-19866.-Vol. 25, N 3.-P. 358-365.

160. Rodica G., Srefania M. Effects of some insecticides on the bursa of Fabricius in chicken //Arch. Exp. Vetetinarmed.-1973.-Vol. 27, N 4.-P. 723-728.

161. Smialowicz R.J., Luebke R.W., Riddle M.M. Assesssment of the immunotoxic potential of the fungicide dinocap in mice // Toxicoliogy. 1992. - Vol.75, №5. - P .235-247.

162. Sullivan J. B. Immunological alterations and chemical exposure //J. Toxicol-Clin. Toxicol.-1989.-Vol. 27, N 6.-P. 311-343.

163. Sunil Kumar K.B., Ankathil R., Devi K.S. Chromosomal aberations induced by methyl parathion in human peripheral lymphocyts of alcoholics and smokers //Hum. and Exp. Toxicol.- 1993.-Vol. 12, N 4.-P. 285-287.

164. Szelenyi J.G., Bartha E., Hollan S.R. Acetilcholinestrase activity of lympho-sytes: an enzyme characteristic of T-cells // Brit. J. Haematol.- 1982.- Vol. 50, N 2. -P. 241-245.

165. Szot R.J., Murphy S.D. Phenobarbital and doxamethasone inhibition of the adrenocortical response of rats to toxic chemicals and other stresses //Toxicol. Applied Pharmacol.-1970.- Vol. 17, N 3.-P. 761-773.

166. Taurog J.D., Fewtrell C., Becker E.L. IgE mediated triggering of rat basophil leukemia cells: lack of evidence for serine esterase activation //J. Immunol.-1979.-Vol. 122, N6.-P. 2150-2153.

167. Thomas I.K., Imamura T. Modulation of cellular and humoral immune re-sponces by 0,0,S-trimethyl phosphorodithioate,an impurity of commercial malathion//Toxicologist.-l 9866.-Vol.6, N 1.-P. 169.

168. Thomas I.K., Koizumi A., Imamura T. Suppressive effect of 0,0,-dimethyl,S-ethyl phosphorothioate on immune response //J. Toxicol, and Environ. Health.-1986b.- Vol. 19, N 4.- P. 465-476. '

169. Tiefenbach В., Lange P. Studies on the action of dimethoate on the immune system //Arch. Toxicol.-1980.- Suppl. 4.- P. 167-170.

170. Tiefenbach В., Hennighauzen G., Lange P. Zum Mechanismus der akuten Wirkungen phosphororganiscer Pestizide auf Las Immunosystem //Zbl. Pharm.-1983.-Bd. 122, H. 2.-S. 156.

171. Tiefenbach В ., Wichner S. Dosisabhangigkeit und Mechanismus der acuten Wirkung von Methamidophos auf das Immunsystem der Maus //Z. gesamte Hyg. und Grenzdeb.-1985.-Bd. 31, N 4.-S. 228-231.

172. Trinchievi G., M. de Marchi. Antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity in humans III. Effect of protease inhibitors and substrates //J. Immunol.-1976.-Vol. 116, N4.-P. 885-891.

173. Till J.E., McCulloch E.A. A direct measurement of the radiation sensitivity of normal mouse bone marrow cells // Rad. Research. -1961. -Vol. 14, N2. -P. 213-222.

174. Wiltrout R. W., Ercegovich С. b., Ceglowski W. S. Humoral immunity in mice following oral administration of selected pesticides //Bull. Enviroum. Contain. Toxicol.-1978.-Vol. 20, N 3.-P. 423-431.

175. Woodin A.M., Harris A. The inhibition of locomotion of the polymorphonuclear leukocyte by organophosporus compounds //Exp. cell Research.-1973.-Vol. 77, N. 1-2.-P. 41-46.

176. Woodin A.M., Wieneke A.A. The action of phosphonates on the leukocyte in relation to the mode of action of leucocidin. The properties of the potassium pump and the inhibition of chemotaxis //Brit. J. Exp. Path.-1969.-Vol. 50, N 3.-P. 295.-308.

Информация о работе

Кадушкин, Андрей Михайлович
кандидата биологических наук
Саратов, 2007
ВАК 03.00.16

Диссертация

Воздействие диметилдихлорвинилфосфата на иммунный статус животных - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы