Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Эколого-иммунологические аспекты резистентности при инфекции и иммунизации

ВАК РФ 03.00.16, Экология

Автореферат диссертации по теме "Эколого-иммунологические аспекты резистентности при инфекции и иммунизации"

Тихомирова Елена Ивановна

ЭКОЛОГО-ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ПРИ ИНФЕКЦИИ И ИММУНИЗАЦИИ

(экспериментальные исследования на моделях лабораторных и диких грызунов)

03.00.16 - экология 03.00.07 - микробиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Саратов - 2005

Работа выполнена в Федеральном государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Саратовский государственный университет имени Н.Г. Чернышевского» на кафедре морфологии и экологии животных и кафедре микробиологии и физиологии растений

Научный консультант: доктор биологических наук, профессор,

заслуженный деятель науки РФ Шляхтин Геннадий Викторович

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор,

заслуженный деятель науки РФ Игнатов Владимир Владимирович

доктор медицинских наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ Шуб Геннадий Маркович

доктор биологических наук, профессор Коннова Светлана Анатольевна

Ведущая организация - Институт экологии растений и животных УрО РАН, г. Екатеринбург

Защита состоится » 2005 г. в на заседании диссертацион-

ного совета Д 212.243.13 при Федеральном государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Саратовский государственный университет им. Н.Г. Чернышевского» по адресу: 410012, г. Саратов, ул. Астраханская, д. 83.

С диссертацией можно ознакомиться в Зональной научной библиотеке ФГОУ ВПО «СГУ им. Н.Г. Чернышевского».

Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного совета

кандидат биологических наук,

доцент

ОлуЩЯ 2005 г.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Процесс адаптации микроорганизмов к таким экологическим нишам, как организм человека или животных, формирует различные нормы реакции взаимодействующих сторон как следствие адаптациоге-неза к существованию в новых условиях среды. Эти процессы важны и для макроорганизма - сохранения его жизнедеятельности в условиях изменения характера физиологических, биохимических и генетических процессов, обеспечивающих гомеостаз. Выяснение механизмов этого взаимодействия является одной из важнейших проблем современной экологии (Казначеев, 1980; Ивантер и др., 1985; Нетрусов и др., 2004; Atlas, Bartha, 1998).

Приспособление бактерий к организму человека и животных происходит на разных уровнях биологической интеграции - от клеточного до популяционно-видового. При этом ключевая роль в адаптационных процессах принадлежит механизмам, реализующимся на клеточном уровне (Сиротинин, 1956; Громов, Павленко, 1989). Сведения о физиологической, биохимической и молекулярной структуре приспособительных реакций макроорганизма в ответ на действие адаптационных факторов микроорганизмов противоречивы и недостаточны, чтобы составить четкое представление об общих экологических закономерностях адаптации к действию возбудителей инфекций, а бактерий - к новой среде обитания. Признание сложности и многофакторности процесса адаптации предполагает выделение ряда компонентов, обеспечивающих поддержание функционального состояния гомеостатических систем и приспособление организма в целом в условиях инфекционной нагрузки со стороны микроорганизмов (Ко-вальчук, Ястребов, 2003). В связи с этим, теоретический и практический интересы представляет исследование механизмов устойчивой адаптации как под влиянием отдельных антигенных структур бактерий, так и всего комплекса факторов патогенности, обеспечивающих жизнедеятельность бактериальных клеток. Изучение механизмов повреждения и стратегии адаптации организма человека и животных при воздействии адаптационных факторов микроорганизмов дает возможность оценить степень патогенности последних и найти подходы к разработке эффективных способов профилактики различных повреждений и заболеваний (Авербах и др., 1985; Покровский и др., 1998; Ройт и др., 2000). Дальнейшее развитие представлений о механизмах адаптации как макро-, так и микроорганизма, невозможно в отрыве от изучения состояния естественной и приобретенной резистентности макроорганизма и механизмов, определяющих и регулирующих ее.

В литературе на настоящий момент отсутствуют сведения об активности ведущих механизмов естественной резистентности - процесса фагоцитоза и синтеза провоспалительных эндогенных цитокинов - в сравнительном аспекте на внедрение в макроорганизм патогенных и условно-патогенных энтеробакте-рий и стафилококков. Представляется возможным на основе этих сведений судить не только о способности бактерий к персистенции в организме, но и о характере экологической стратегии паразитизма отдельных видов.

Для получения новых данных об экологии безусловных патогенов макроорганизма, возбудителей природно-очаговых инфекций, важным, на наш взгляд, являлось исследование механизмов приобретенной резистентности в сравнительном аспекте при инфекции и иммунизации на примере возбудителя чумы и его антигенов. Чума остается модельной инфекцией, на возбудителе которой изучаются все универсальные механизмы, обеспечивающие вирулентные свойства бактерий (Проценко и др., 1983; Кутырев, 1997; Репу, 1997; ВгиЬакег, 2000; Анисимов, 2002). Одновременно с изучением этих вопросов представляется важным исследование механизмов реализации иммуногенных свойств возбудителя на различных функционально-структурных уровнях иммунной системы макроорганизма.

Цель работы включает исследование адаптивных систем макроорганизма по уровню естественной и приобретенной резистентности на модели лабораторных животных и грызунов из природных популяций, механизмов структурно-функциональных перестроек, участвующих в мобилизации и регуляции защитных систем организма, в процессе адаптации к действию факторов патогенности бактерий с различными экологическими особенностями паразитизма.

Основные задачи исследования:

- обосновать эколого-иммунологический подход к изучению резистентности макроорганизма при инфекции и иммунизации и выбор наиболее адекватных методов оценки естественного и адаптивного иммунитета;

- оценить в сравнительном аспекте экологические стратегии преодоления основных механизмов естественной резистентности макроорганизма патогенными и условно-патогенными бактериями;

- установить роль миграции и пролиферации стволовых кроветворных клеток при адаптации организма экспериментальных животных к живой чумной вакцине и отдельным антигенам чумного микроба; изучить динамику и особенности изменений в популяционном составе лимфоцитов органов иммунной системы при формировании адаптивного иммунитета к чумной инфекции;

- определить на клеточном уровне роль антителогенеза в эффективности приобретенной резистентности к возбудителю чумы; установить взаимосвязь между характером и уровнем изменений показателей клеточного и гуморального иммунитета к чумной инфекции и его протективной активностью;

- изучить адаптивные реакции организма животных на введение лектина вакцинного штамма ЕВ чумного микроба по изменению показателей гормонального, метаболического и иммунного статуса;

- выяснить значение тимуса в развитии у животных полноценного адаптивного иммунитета к чумной инфекции на модели инбредных бестимусных мышей; установить зависимость эффективности резистентности от генотипа животного и природы иммунизирующего агента на модели инбредных мышей разных гаплотипов;

- провести исследования естественной и приобретенной резистентности к чумной инфекции у диких грызунов из естественных мест обитания - полуденных песчанок.

Научная новизна. Впервые научно обоснован эколого-иммунологический подход к изучению резистентности макроорганизма при инфекции и иммунизации, позволяющий оценить формирование адаптационного иммунитета и его функциональные проявления на различных уровнях организации иммунной системы и дана оценка основным экологическим особенностям паразитизма патогенных и условно-патогенных бактерий.

Исследованы механизмы естественной и приобретенной резистентности в организме разных видов лабораторных и диких грызунов на всех уровнях биологической интеграции: молекулярном, клеточном, органном, организменном и популяционном. Впервые поэтапно охарактеризован процесс формирования эффективного адаптивного иммунитета к чумной инфекции от пускового механизма иммунопоэза - миграции и пролиферации полипотентных стволовых кроветворных клеток - до становления в организме экспериментальных животных состояния невосприимчивости к возбудителю чумы. Установлено, что при адаптации организма экспериментальных животных к живой чумной вакцине и капсульному антигену чумного микроба происходит дозозависимое усиление миграции из костного мозга и пролиферации стволовых кроветворных клеток. Показано, что изменения в популяционном составе лимфоцитов органов иммунной системы адекватно отражают адаптивные сдвиги при формировании резистентности к чумной инфекции в организме привитых живой чумной вакциной мышей.

Впервые на клеточном уровне изучена активность антителогенеза в динамике формировании резистентности к чумной инфекции. Установлен факт незначительной стимуляции процессов пролиферации и дифференцировки В-лимфоцитов в антителообразующие клетки на фоне эффективной резистентности при однократном воздействии на организм экспериментальных животных живой чумной вакциной или капсульным антигеном чумного микроба.

Новым является сравнительный анализ уровня естественной и приобретенной резистентности к чумной инфекции у линейных животных разных гап-лотипов. Впервые установлено, что в основе различий естественной резистентности и инфекционной чувствительности у двух изученных подвидов полуденной песчанки лежат механизмы дифференцировки зрелых форм лимфоцитов и разная степень их функциональной активности.

Научно-практическая значимость Предложено сочетание метода регистрации электрофоретической подвижности лимфоцитов органов иммунной системы и крови с последующей идентификацией поверхностных маркеров в клеточных фракциях, что позволяет получить их функциональные характеристики по пролиферативной активности и степени зрелости. Такое комплексное исследование состава лимфоцитов позволяет получить иммунологические параметры, которые могут быть использованы для оценки иммунного статуса организма привитых против чумы животных. Разработан эффективный диагностикум и внесены собственные модификации в метод пассивного локального гемолиза в геле для определения антителообразующих клеток в иммунном к чуме организме. Предложенная методика использования модели Р.В. Петрова и P.M. Хаитова (1972) с введением в организм экспериментальных животных антиге-

нов чумного микроба через 2-3 часа после тотального облучения рекомендована для изучения вопросов стимуляции процессов миграции и пролиферации ПСКК в иммунном к чуме организме. Полученные данные имеют значение для оценки результатов опытов при отборе новых вакцинных штаммов, составлении рациональных схем иммунизации, при экспериментальной разработке вопросов стимуляции иммуногенеза к чуме.

Внедрение результатов работы в практику. По материалам экспериментальных исследований составлены методические рекомендации: "Применение разделительного клеточного электрофореза с последующим тестированием фракций методами розеткообразования для изучения популяционного состава лимфоцитов в организме вакцинированных против чумы животных" и "Использование хлористого хрома в качестве активатора насадки капсульного антигена чумного микроба на нативные эритроциты для определения специфических АОК при иммунизации против чумы в эксперименте", которые были одобрены Ученым Советом ВНИПЧИ "Микроб" (протокол № 4 от 20.03.90) и утверждены директором института 20.03.90 года.

Издано в соавторстве научно-информационное пособие «Лектины в иммунологии» (Саратов, изд-во СГМУ, 2001), методические рекомендации «Изучение влияния лектинов на активность процесса фагоцитоза патогенных бактерий» и «Изучение влияния лектинов на синтез цитокинов макрофагами» (Саратов, изд-во СГУ, 2004).

Материалы диссертационного исследования внедрены в учебный процесс и используются при чтении лекций общих курсов «Микробиология» и «Иммунология», специальных курсов «Иммунологические аспекты экологии живых организмов», «Медицинская микробиология», «Современные методы иммунологических исследований», «Молекулярная иммунология» студентам биологического факультета СГУ им. Н.Г. Чернышевского; при чтении лекций на кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии СГМУ; при чтении лекций общих и специальных курсов на кафедре микробиологии и санветэкспертизы СГАУ им. Н.И. Вавилова; на курсах специализации врачей и биологов по особо опасным инфекциям и курсах усовершенствования врачей-бактериологов противочумной системы МЗ РФ в РосНИПЧИ «Микроб».

Апробация работы. Материалы исследования были представлены и обсуждены на 28 научных конференциях и форумах различного ранга: Всесоюзном совещании молодых ученых и специалистов противочумных учреждений СССР (Саратов, 1986); II Всесоюзной конференции "Актуальные вопросы теоретической и прикладной инфекционной иммунологии. Механизмы противоинфекци-онного иммунитета" (Саратов, 1987); итоговых научных конференциях ВНИПЧИ "Микроб" (Саратов, 1983, 1989); конференции молодых ученых и специалистов учреждений, подведомственных РЭУ МЗ СССР, "Эпидемиология, микробиология и иммунология бактериальных и вирусных инфекций" (Ростов-на-Дону, 1989); Всесоюзной конференции "Молекулярные механизмы противоинфекционного иммунитета" (Звенигород, 1990); научно-практической конференции "Эколого-эпидемиологический надзор за природно-очаговыми инфекциями в Северном Прикаспии" (Астрахань, 1996); российских конферен-

циях "Гомеостаз и инфекционный процесс" (Саратов, 1996, 1998); юбилейной научной конференции, посвященной 90-летию СГУ и СГМУ (Саратов, 1997); научно-практической конференции, посвященной 100-летию образования противочумной службы России (Саратов, 1997); 7th International Congress on Yersinia (Голландия, 1998); международной научно-методической конференции «Экология - образование, наука и промышленность» (Белград, 2002); научно-практической конференции с международным участием «Окружающая среда и здоровье» (Саратов, 2002); первой региональной конференции молодых ученых «Стратегия взаимодействия микроорганизмов с окружающей средой» (Саратов, 2002); международной конференции «Цитокины. Воспаление. Иммунитет» (Санкт-Петербург, 2002); Y съезде иммунологов и аллергологов России (Санкт-Петербург, 2003); «International workshop on optical technologies in biophysics and medicine» (Саратов, 2003); объединенном иммунологическом форуме (Екатеринбург, 2004); научных конференциях биологического факультета СГУ (Саратов, 1996 - 2004) и др.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Эколого-иммунологический подход к изучению резистентности макроорганизма при инфекции и иммунизации предполагает проведение исследований механизмов формирования адаптационного иммунитета и его функциональное проявление на различных уровнях организации биологических систем: молекулярном, клеточном, органном, организменном и популяционном и позволяет дать оценку основным экологическим стратегиям паразитизма патогенных и условно-патогенных бактерий.

2. Сравнительный анализ данных по активности макрофагов, степени завершенности процесса фагоцитоза микробных клеток и индукции цитокинов дает возможность судить о характере экологической стратегии отдельных видов энтеробактерий и стафилококков по преодолению основных механизмов естественной резистентности.

3. Формирование адаптивного иммунитета к чумной инфекции в организме экспериментальных животных, иммунизированых живой чумной вакциной или капсульным антигеном чумного микроба, связано с активацией начального этапа иммунопоэза и изменениями в популяционном составе лимфоцитов органов иммунной системы.

4. По характеру действия на иммунную систему экспериментальных животных капсульный антиген чумного микроба является тимусзависимым, а основной соматический антиген - тимуснезависимым; лектин внешней мембраны вакцинного штамма Ypestis ЕВ является дополнительным фактором, обеспечивающим контакт патогена с клетками макроорганизма, и перспективным компонентом комбинированной чумной вакцины.

5. В развитии полноценного адаптивного иммунитета к чумной инфекции обязательно участие тимусзависимой системы лимфоцитов, неравнозначность естественной и приобретенной резистентности к чумному микробу генетически детерминирована у инбредных мышей разных гаплотипов.

6. В основе различий естественной резистентности и инфекционной чувствительности у полуденных песчанок из различных мест обитания лежат меха-

низмы дифференцировки зрелых форм лимфоцитов и разная степень их функциональной активности, которая зависит от генетически детерминированной чувствительности к отдельным антигенам чумного микроба.

Декларация личного участия автора Экспериментальные исследования выполнялись автором лично или при непосредственном участии в составе научных групп в период с 1983 по 2004 гг. Обработка полученных данных, их интерпретация и оформление осуществлены автором самостоятельно. В совместных публикациях вклад автора составил 50-70%.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 66 научных работ.

Объем и структура работы Диссертация изложена на 375 страницах текста, содержит введение, восемь глав, заключение, выводы и библиографический список, включающий 428 отечественных и 212 иностранных источника. Работа иллюстрирована 55 рисунками и 52 таблицами.

Работа частично поддержана грантом Министерства образования и науки РФ № 45434 в рамках Программы «Развитие научного потенциала высшей школы».

Содержание работы

Во введении обоснована актуальность работы, ее научная новизна и практическая значимость, сформулированы цели и задачи исследования и пути их реализации.

Глава 1. ОБОСНОВАНИЕ ЭКОЛОГО-ИММУНОЛОГИЧЕСКОГО ПОДХОДА К ИЗУЧЕНИЮ РЕЗИСТЕНТНОСТИ (обзор литературы)

При обосновании эколого-иммунологического подхода к изучению резистентности макроорганизма при инфекции и иммунизации необходимо было проанализировать имеющиеся в литературе данные об экологических стратегиях микроорганизмов, для которых средой обитания является организм человека и животных. В обзоре литературы приведены современные представления об адаптации и ее механизмах, особенности экологической стратегии и биотических связей у микроорганизмов, экологические аспекты реактивности и резистентности макроорганизма, характеристика функциональной системы иммунного гомеостаза, этапы формирования адаптивного иммунитета к инфекции и методы его оценки.

С утверждением экологического подхода в паразитологии (Павловский, 1934; Филипченко, 1937; Догель, 1947) стало общепринятым положение, что критерием паразитизма того или иного вида должна служить среда его обитания. Однако до сих пор вопрос о средах обитания паразитов остается весьма дискуссионным (Сомов, Литвин, 1988; Литвин, Шляхов, 1993).

Паразитизм - составная часть общей стратегии жизни микроорганизмов. Хозяин для паразита является средой обитания первого порядка, через него происходит регуляция взаимоотношений паразита с внешней средой — средой второго порядка. Особое отличие этого типа биотических связей от большинст-

ва других заключается в том, что влияние паразитов на состояние экосистем осуществляется благодаря не трофическим, а патогенным воздействиям их на популяцию хозяев (Бухарин, Литвин, 1997; Нетрусов и др., 2004). В то же время сам паразит приобретает качества, позволяющие ему успешно адаптироваться в новых условиях. Эти положения позволили сформулировать принцип экологической детерминации факторов персистенции бактерий (Бухарин, 1992).

Формирование специфических экологических систем - паразитоценозов, в которых организмы одного вида являются средой обитания и жертвами другого, сопровождается непрерывной борьбой с появлением и закреплением в генотипе специальных приспособлений, обеспечивающих развитие паразитов за счет веществ поражаемых организмов - хозяев и факторов, обеспечивающих защиту последних (Румянцев, 1983). Для человека и других млекопитающих важнейшими из таких приспособлений являются факторы естественной резистентности и специфическая иммунная система (Сиротинин, 1956, 1964; Роит и др, 2000).

Антагонистические отношения между патогенами самой различной природы и инфицируемым хозяином приводят к разнонаправленным адаптационным процессам, в основе которых лежит необходимость выжить в конкретных условиях среды. С одной стороны, патоген стремится преодолеть защитные механизмы хозяина, модифицируя посредством отбора свою антигенную и биосинтетическую характеристику (Atlas, Bartha, 1998). С другой, потребность выжить под натиском патогенов определяла совершенствование механизмов иммунной защиты. Следовательно, патогенность - не только (иногда - не столько) свойство микроорганизма, но и функция организма хозяина, иммунный статус которого "разрешает" тот или иной патогенез инфекции (Бухарин, Литвин, 1997). Подобные взгляды высказывал еще И. И. Мечников (Гамалея, 1951).

В процессе эволюции в живых организмах возникли три основные системы резистентности: конституциональная, фагоцитарная и лимфоидная. При этом конституциональная и фагоцитарная системы обеспечивают естественный иммунитет (иннатальный или врожденный), а лимфоидная система резистентности - приобретенный или адаптивный. Понятие «резистентность» принадлежит организму как целому, однако конкретные механизмы могут реализоваться, преимущественно, на каком-либо из структурно-функциональных уровней организации живой системы: молекулярном, субклеточном, клеточном, тканевом и органном, выделяют организменные и даже популяционные формы резистентности (Зайчик, Чурилов, 1999).

На настоящий момент основные механизмы, обеспечивающие естественную и приобретенную резистентность макроорганизма, достаточно детально изучены и представлены в научной литературе. Однако данные об эффективности этих механизмов по отношению к конкретным патогенам, в зависимости от особенностей их антигенного состава, а также в сравнительном аспекте экологических стратегий патогенных и условно-патогенных бактерий по преодолению факторов естественной резистентности, практически отсутствуют.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Экспериментальные исследования выполнялись на базе Российского научно-исследовательского противочумного института «Микроб» (г. Саратов), Российского Института иммунологии (г. Москва), научно-исследовательской лаборатории экспериментально-биологических моделей АМН РФ - НИЛ ЭБМ АМН РФ (п. Юрлово Московской области), кафедры морфологии и экологии животных и кафедры микробиологии и физиологии растений Саратовского государственного университета им. Н.Г. Чернышевского в период с 1983 по 2004 г.г.

Работа выполнена на биомоделях разных видов грызунов: 126 беспородных морских свинках и 540 беспородных белых мышах; 580 инбредных мышах различных гаплотипов и линий: H-2k (CBA/Lac Y, C3H/Sn Y), H-2a (DBA/2 Y, A/Sn Y), H-2d (BALB/c Y), H-2b (C57BL/6 Y, CC57W/Y, B1OCW/Y); 38 инбредных мышах СВА/nude J.Y. (бестимусных) гаплотипа Н-2к; 150 мышах -гибридах (СВА х C57Bl/6)F1 гаплотипа Н-2а; 256 радомбредных мышах; 86 полуденных песчанках подвидов Meriones meridianus meridianus Pallas (1.773) и Meriones meridianus nogaiorum Heptner (1.927).

Изучали взаимодействие с организмом экспериментальных животных in vivo и с отдельными клетками макроорганизма in vitro живых микробных клеток: эталонного вакцинного штамма чумного микроба Yersinia pestis EV; вирулентного штамма чумного микроба Yersinia pestis 231; музейных штаммов Yersinia enterocolitica, Staphylococcus aureus 209-P, Escherichia coli K-13, E. coli Ca-52; клинических штаммов S. aureus 100 6; S. haemolyticus 9; S. epidermidis 16; E. coli ЭПКП 0-127; Enterobacter agglomerans 17; Serratia sp. 138; Citrobacter sp. 142, а также антигенных структур бактерий: капсульного антигена (фракция 1 - FI) чумного микроба в дозах 2 и 20 мкг на грызуна; основного соматического антигена (ОСА) чумного микроба в дозе 20 мкг на грызуна; лектина (мембранного белка - МБ22) в дозе 100 мкг.

Показатели адаптационных процессов и иммунологической перестройки в организме экспериментальных животных определяли в динамике формирования резистентности. В работе использовали как общепринятые методы микробиологических и иммунологических исследований, так и собственные модификации.

Состояние резистентности к чумной инфекции в организме экспериментальных животных определяли в тесте активной защиты при заражении мышей типичным по всем свойствам вирулентным штаммом чумного микроба Y.pestis 231 дозой 200 DCL (1 DCL = 25 микробам). Морских свинок заражали дозой 50 LD5o (1800 КОЕ). Разделы работы по исследованию зараженного материала проводили в соответствии с требованиями Санитарных правил 1.2.036-95.

Органы иммунной системы грызунов выделяли по общепринятым методикам (Практикум по иммунологии, 2001). Перитонеальные макрофаги (ПМФ) получали по методу Пустовалова с соавт. (1986) с некоторыми модификациями, альвеолярные (АМФ) - по методу Myrvik, Leake, Fariss (1961) в модификации Пионтковского (1977). Лимфоцитарную взвесь из крови получали в градиенте фикол-верографин методом Boyum (1974), из органов иммунной системы - мо-

дифицированным методом Henney (1971). Выделение субклеточных фракций (ядер и митохондрий) проводили по методу Johnson, Lardy (1972).

Для оценки миграции и пролиферации стволовых кроветворных клеток (ПСКК) использовали модель Петрова, Хаитова (1972) с иммунизацией мышей через 2-3 часа после летального облучения с экранированием участка костного мозга. Число эндогенных колоний (КОЕ) в селезенках мышей определяли по методу Till, McCulloch (1963). Для характеристики изменений в популяционном составе лимфоцитов использовали метод клеточного электрофореза в свободном потоке. Об электрофоретической подвижности (ЭФП) лимфоцитов судили по расположению электрофоретической кривой распределения лимфоцитов после препаративной сортировки их на аппарате Elfor Vap-5 (Bender, Hobein, ФРГ) в соответствии с рекомендациями Малайцева и Богдановой (1977). В каждой полученной фракции лимфоцитов определяли процентное содержание Т-Н В- лимфоцитов в лимфотоксическом тесте (ЦТТ) с анти Т- и анти В- сыворотками, а также методами идентификации поверхностных дифференцировоч-ных антигенов (Практикум по иммунологии, 1988,2001).

Число антителообразующих клеток - АОК в селезенках мышей определяли методом пассивного локального гемолиза в геле реакцией Ерне (Ерне, Нор-дин, 1968) в нашей модификации. Оценку иммунобиологической перестройки привитых противочумными препаратами экспериментальных животных проводили путем определения сывороточных антител к фракции 1 чумного микроба при постановке системы однонаправленных серологических реакций РНГА -РНАг (реакция непрямой гемагглютинации и трехкомпонентная реакция нейтрализации антигена). Для определения антител к мембранному белку чумного микроба использовали экспериментальный антигенный эритроцитарный диаг-ностикум, сенситином в котором был бактериальный лектин Y.pestis EV(Задно-ва и др., 1994).

Для определения фагоцитарной активности макрофагов проводили моделирование процесса фагоцитоза бактерий in vitro. В качестве объектов фагоцитоза использовали суточные культуры изучаемых штаммов бактерий. Определяли фагоцитарные индексы и индекс завершенности фагоцитоза (Методы иммунологических исследований, 2000). Содержание провоспалительных эндогенных цитокинов (ИЛ-1, ИЛ-6 и ФНО-а) определяли с помощью иммунофер-ментных моноклональных тест-систем (ООО «Цитокин» ГНЦ особо чистых биопрепаратов, г. Санкт-Петербург). Результаты ИФА учитывали на аппарате MULTISKAN PLUS (VERSION 2.01) при длине волны 492 нм для ФНО-а и при длине волны 495 нм для ИЛ-1.

Содержание адениловых нуклеотидов в крови экспериментальных животных определяли ферментативным методом с использованием наборов реактивов фирмы "Boehringer Mannheim" (ФРГ). Определение уровня активности креатинфосфокиназы (КФК) в плазме крови животных проводили спектрофо-тометрическим методом при длине волны 340 нм с использованием набора реактивов фирмы "Calbiochem" (США).

Для определения 11-оксикортикостероидов (11-ОКС) в биологических жидкостях организма грызунов использовали общепринятую методику (Мин-

склер, Шмелева, 1968; Наугольных, 1969). Измерение интенсивности флюоресценции проводили на спектрофлюориметре JY 3D фирмы Jobin Yvon (Франция). Флюорометрически определяли 11-ОКС общие и свободные. Количество 11-ОКС, связанных с белками, учитывали в каждом отдельном случае по разнице между количеством общих и свободных гормонов.

Для морфологических исследований проводили окраску гистологических срезов и мазков по Браше и гематологическим красителем Гимза.

Все эксперименты проводили не менее чем в 5-ти кратных повторностях, результаты обработаны методами вариационной статистики с определением средних арифметических величин (М) и средней ошибки средней арифметической по формуле Петерса с использованием константы Молденгауэра (Ашма-рин, Воробьев. 1986). Определяли доверительные интервалы и сравнивали средние данные с помощью критерия Стъюдента при уровне статистической значимости различий не более 0,05. Для оценки результатов серологических реакций использовали метод арифметического усреднения, присваивая каждому разведению численный индекс (Лакин, 1973). При расчетах оперировали индексами в качестве вариант. Корреляционный анализ данных миграции и пролиферации клеток органов иммунной системы провели по программе «KOREL». Для оценки протективной активности живой чумной вакцины и отдельных антигенов чумного микроба определяли DCL и LD5o по Керберу (1976).

Графики и диаграммы выполнены в программе Excel 5.0, компьютерные версии фотоматериалов, отсканированные с оригиналов, - в Photoshop 8.0, реализованных на компьютере Pentium-4.

Глава 3. АКТИВНОСТЬ ФАКТОРОВ ЕСТЕСТВЕННОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ОРГАНИЗМА ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ ПРИ КОНТАКТЕ С БАКТЕРИАЛЬНЫМИ КЛЕТКАМИ

Для сравнительной оценки экологических стратегий патогенных и условно-патогенных бактерий по преодолению основных механизмов естественной резистентности макроорганизма, на первом этапе работы было проанализировано наличие основных факторов патогенности и антигенных структур у изучаемых бактерий. Отобранные клинические штаммы энтеробактерий, наиболее часто выделяемые в клиниках г. Саратова как возбудители внутрибольничных инфекций, характеризовались выраженной гетерогенностью и высоким адаптационным потенциалом к различным неблагоприятным факторам. Была показана устойчивость этих штаммов к целому ряду антибиотиков, детерминированная R-плазмидами.

Использованные в работе клинические штаммы стафилококков, идентифицированные по биохимическим тестам, имели плазмокоагулазную, гемолитическую, фибринолитическую и лецитовителлазную активность и устойчивость к широкому спектру антибиотиков, что позволило судить об их потенциальной способности к персистенции в организме.

Изучена активность процесса фагоцитоза перитонеальными и альвеолярными макрофагами энтеробактерий представителей разных родов семейства Enterobacteriaceae: Enterobacter agglomerans, Serratia sp., Citrobacter sp., Escherichia coli ЭПКП 0-127, E. coli Ca-52, E.coli K-13, Y. enterocolitica. Анализ результатов позволил выявить зависимость числа активных ПМФ от времени их инкубации с микробными клетками и от биологических характеристик энтеробактерий, их адаптивных возможностей. При этом активность процесса фагоцитоза большинства энтеробактерий была значительно ниже, чем контрольного штамма E.coli K-13, представителя нормальной микрофлоры. Число активных макрофагов при фагоцитозе контрольных микробных клеток сохранялось достаточно высоким до 48 часов наблюдения, достоверно не отличаясь от числа таковых через 24 и 12 часов. При фагоцитозе же других энтеро-бактерий практически во всех случаях наблюдения через 48 часов число активных ПМФ и АМФ достоверно снижалось, по сравнению с данными через 24 часа инкубации с микробными клетками. Полученные результаты позволили сделать заключение о частичном переваривании клинических штаммов эн-теробактерий перитонеальными макрофагами в отличие от контрольной анти-биотикочувствительной культуры E.coli K-13, фагоцитоз которой завершался к 24 часам (рис. 1). Для Y. enterocolitica фагоцитоз в ПМФ был незавершенным. В альвеолярных макрофагах расчет индекса завершенности фагоцитоза позволил установить незавершенность процесса для большинства энтеробактерий или частичное переваривание их микробных клеток.

Проведение сравнительного анализа данных по активности макрофагов, степени завершенности процесса фагоцитоза микробных клеток и индукции цитоки-нов позволило судить о характере экологической стратегии отдельных видов энте-робактерий по преодолению основных механизмов естественной резистентности. Было установлено, что процесс фагоцитоза клинического штамма Serratia sp. характеризовался незначительной активацией ПМФ и АМФ и частичным перевариванием микробных клеток на фоне активной индукции ФИО- а с максимальной концентрацией к 24 часам, и ИЛ-1 в ПМФ (рис. 2).

В динамике фагоцитоза ПМФ и АМФ клинического штамма Citrobacter sp. индукция ИЛ-1 была незначительной, что сочеталось с низкой активностью макрофагов и незавершенностью или частичным перевариванием микробных клеток. Индукция синтеза ФИО-а макрофагами сопровождалась увеличением концентрации этого цитокина к 24 часам, как и в случае фагоцитозе Serratia sp. Характерной особенностью фагоцитоза микробных клеток Е. agglomerans была повышенная индукция цитокинов к 12 часам процесса как в перитонеальных, так и в альвеолярных макрофагах. К 24 часам содержание цитокинов было значительно ниже по сравнению с аналогичными данными для фагоцитоза других энтеробактерий. При этом отмечена и незначительная динамика активности макрофагов, что приводило к частичному перевариванию микробных клеток Е. agglomerans в ПМФ и незавершенному фагоцитозу в АМФ (см. рис. 2).

При фагоцитозе клинического антибиотикоустойчивого штамма Е. coli ЭПКП 0-127 и контрольных музейных культур Е. coli K-13 и Е. coli Ca52, отмечена сходная индукция ИЛ-1 и ФИО-а в ПМФ и АМФ.

Рис. 1 Индексы завершенности фагоцитоза ПМФ (А) и АМФ (Б) разных видов энтеро-бактерий (различия считались достоверными при Р<0,05)

Содержание ИЛ-1 к 24 часам процесса фагоцитоза кишечных палочек было одинаково высоким. Аналогичные результаты были получены и для ФНО-а при фагоцитозе Е. coli ЭПКП и Е. coli K-13, в отличие от низкой индукции этого цитокина бактериями Е. coli Са-52. Однако динамика активности макрофагов была более выраженной по отношению к представителям нормальной микрофлоры Е. coli К-13 и Е. coli Са-52, что сопровождалось более завершенным фагоцитозом. Индукция провоспалительных цитокинов в ПМФ и АМФ при фагоцитозе микробных клеток Y. enterocolitica была незначительной. Увеличение содержания ИЛ-1 к 24 часам однако не способствовало увеличению активности ПМФ и степени завершенности фагоцитоза.

Беггаиа $р

У enteгocolltlca

вегтаНа 5р пг/мл 45

• .. СИгоЬайег Время, ч

Есо1|К-13

ФНО-а

Есо1|ЭПЮТ

Е со!| Са-52

Рис. 2. Сравнительный анализ динамики синтеза цитокинов в процессе фагоцитоза перитонеальными макрофагами разных видов энтеробактерий

Кроме того, был установлен цитопатический характер действия клинических штаммов энтеробактерий и микробных клеток Y enterocolitica на макрофаги к 48 часам процесса фагоцитоза, сопровождающийся появлением большого числа разрушенных клеток.

Сравнение индукции провоспалительных цитокинов при фагоцитозе клинических штаммов стафилококков позволило отметить сходную динамику: небольшое увеличение количества цитокинов к 2-м часам процесса фагоцитоза и резкое снижение их количества к концу срока наблюдения. Это сопровождалось снижением числа активных макрофагов и низким индексом завершенности фагоцитоза, показателем частичного переваривания микробных клеток.

При завершенном фагоцитозе бактерий контрольного антибиотикочувстви-тельного штамма S aureus 209-P была отмечена и выраженная индукция цитокинов, содержание которых резко возрастало к 24 часам (рис. 3)

время инкубации час

—.— ИЛ 1 - — -ИЛ-6 » ФНО

время инкубации час —«—ИЛ 1 - — -ИЛ-6 « ФНО

S aureus 100 б

время инкубации час —•—ИЛ 1 —«--ИЛ6 « ФНО

S aureus 209-Р

5 haemofyticus

время инкубации час —•—ИЛ 1 - — -ИЛ-6 « ФНО

5 epidennidis

Рис 3 Содержание цитокинов в динамике фагоцитоза перитонеальными макрофагами стафилококков (различия считались достоверными при Р<0,05)

Процесс фагоцитоза клинического антибиотикоустойчивого штамма S. aureus 100 б сопровождался незначительной индукцией ИЛ-1 как в ПМФ, так и в АМФ по сравнению с аналогичными данными для других видов стафилококков. Особенно выраженной была разница в содержании ИЛ-1 по сравнению с процессом фагоцитоза антибиотикочувствительного штамма S aureus 209-P. Это позволяет предположить блокирование синтеза основного провоспатительного цитокина в случае фагоцитоза этих микробных клеток, что негативно сказывается на активации механизмов естественной резистентности и характеризуется незавершенностью процесса фагоцитоза. В тоже время индукция ФНО-а была одинаково высокой для штаммов S. aureus в перитонеальных и альвеолярных макрофагах (см. рис. 3).

При фагоцитозе S. epidermidis менее выраженная динамика активности макрофагов и невысокие значения индекса завершенности сопровождались увеличением синтеза ИЛ-1 и снижением содержания ФНО-а до контрольных значений к 24 часам и в ПМФ и в АМФ. В тоже время отмечено максимальное содержание ФНО-а в первые часы контакта макрофагов с клетками S. epidermidis с последующим снижением концентрации. Аналогичная индукция ФНО-а в ПМФ и АМФ отмечена и в процессе фагоцитоза микробных клеток S. haemolyticus (максимальное содержание через 1 час и последующее снижение к 24 часам). Максимальное содержание ИЛ-1 при фагоцитозе S. haemolyticus в ПМФ отмечено через 6 часов, а в АМФ - через 12 часов с последующим снижением к 24 часам (см. рис. 3). При этом число активных макрофагов и значения индекса завершенности фагоцитоза были выше, чем для S. aureus. Проведенные исследования позволили выявить характер изменений активности основных механизмов естественной резистентности при контакте с разными видами бактериальных клеток и установить закономерности в зависимости от антигенных характеристик этих бактерий.

Дальнейшая экспериментальная работа была посвящена изучению механизмов формирования адаптивного иммунитета (приобретенной резистентности) при инфекции и иммунизации. Исследования в этом направлении представляют научный и практический интерес с точки зрения решения фундамен-татьных проблем экологии возбудителя. Принципиально важным в данном случае был выбор наиболее адекватных моделей, позволяющих всесторонне и наиболее полно охарактеризовать адаптивные реакции макроорганизма в сравнительном аспекте с особенностями экологической стратегии патогенного микроорганизма.

Глава 4. МЕХАНИЗМЫ ФОРМИРОВАНИЯ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ОРГАНИЗМА ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ ПРИ ВВЕДЕНИИ ЖИВОЙ ЧУМНОЙ ВАКЦИНЫ

Влияние живой чумной вакцины на поэтапное формирование адаптивного иммунитета в организме экспериментальных животных было изучено на органном, клеточном и молекулярном уровнях. В опытах на беспородных белых мышах и линейных мышах-гибридах (СВА х C57BL/6)Ft была показана наиболее выраженная стимуляция процессов миграции из костного мозга и пролиферации ПСКК у животных, иммунизированных 500 тыс. микробных клеток, в ре-

Рис 4 КОЕ в селезенках мышей, облученных в летальной дозе с экранированием участка костного мозга с последующей вакцинацией через 2-3 часа живой чумной вакциной в дозе 5 (А) и 500 (Б) тыс микробных клеток

Параллельно проводили оценку резистентности организма мышей к чумной инфекции в тесте активной защиты при заражении вирулентным штаммом 231 возбудителя чумы. Сравнение процента мышей с увеличенным числом КОЕ в каждой группе с аналогичным показателем выживших в соответствующих группах при заражении показало полную степень взаимосвязи этих признаков (коэффициент корреляции высокой степени достоверности), чем больше животных в группе было с повышенным числом КОЕ в селезенке, тем больше их выживало в опыте контрольного заражения. Установленный факт стимуляции начального этапа иммунопоэза у животных, приобретающих после иммунизации состояние выраженной невосприимчивости к чуме, указывает на значение активности процессов миграции из костного мозга и пролиферации стволовых кроветворных клеток для формирования адаптивного иммунитета к возбудителю чумы.

Для оценки изменений в популяционном составе лимфоцитов органов иммунной системы и крови при введении в организм мышей живой чумной вакцины (следующего этапа иммунного ответа) была изучена электрофоретическая подвижность клеток в динамике иммуногенеза с тестированием в получаемых фракциях после разделительного клеточного электрофореза кле-

ток. Параллельно были проведены исследования по оценке эффективности адаптивного иммунитета, формируемого в организме экспериментальных животных после иммунизации 500 тыс. микробных клеток живой вакцины в тесте активной защиты при заражении вирулентным штаммом 231 возбудителя чумы. Показано, что формирование адаптивного иммунитета к чумной инфекции сопровождается изменением ряда иммунологических параметров, характеризующих популяционный состав лимфоцитов органов иммунной системы экспериментальных животных.

В тимусе уменьшалось число лимфоцитов с высокой электрофоретической подвижностью и поверхностным СБ2-рецептором в ранние сроки иммуногене-

за (1-3 сутки), что являлось следствием их интенсивной миграции в кровь и периферические органы иммунной системы. В то же время в результате активации процессов пролиферации кортикальных тимоцитов увеличивалось число клеток с низкой ЭФП, что свидетельствовало об усиленной экспрессии на этих клетках специфического тимусного ©-антигена. В последующие сроки (7-14 сутки) происходило повышение ЭФП основной массы клеток тимуса, что было связано с усилением процессов дифференцировки Т-лимфоцитов и потерей ими ©-антигена. Подтверждением этому являлось и увеличение числа СБ2+-клеток среди этих лимфоцитов. Популяционный состав клеток тимуса на 21 сутки иммуногенеза к чуме характеризовался более высокой ЭФП по сравнению с тимо-цитами интактных мышей и большим содержанием СБ2+-клеток, которое в 2,5 раза превышало показатели в контроле. Следовательно, на 21 сутки после иммунизации живой чумной вакциной тимус был представлен большой популяцией иммунокомпетентных клеток (рис. 5).

В селезенке мышей в процессе иммуногенеза число СБ2+-клеток увеличивалось постепенно, достоверно отличаясь от контрольного значения на 14 и 21 сутки. Число СЯ1+- клеток в первые дни снижалось (на 3 сутки Р<0,05); в более поздние сроки восстанавливалось до нормы (7 сутки) и превышало ее на 21 сутки. Абсолютное содержание зрелых Т- и В-лимфоцитов варьировало довольно широко, коэффициент их численности составлял соответственно 26 и 34,8%. Варьирование относительного содержания Т- и В-клеток было выражено в значительно меньшей степени: коэффициент вариации составлял соответственно 13,3 и 16,4%, т е. отношение Т- и В-лимфоцитов стабилизировалось более четко, чем их абсолютная численность. Однако дважды в процессе формирования адаптивного иммунитета к чумной инфекции в селезенке изменялось соотношение Т- и В-клеток в сторону преобладания Т-лимфоцитов - в ранние и поздние сроки иммуногенеза. Изменение электрофоретической подвижности лимфоцитов селезенки носило фазный характер, зарегистрировано передвижение пиков в общей электрофоретической кривой в первые сутки иммуногенеза в сторону понижения ЭФП и на 21 сутки - в сторону повышения ЭФП. На 3, 7 и 14 сутки лимфоциты селезенки не разделялись электрофоретически на две основные популяции, а были представлены несколькими фракциями с различной ЭФП и содержанием СБ2+- и СЯ1+- клеток. Т-лимфоциты селезенки в ранние сроки иммуногенеза снижали свою ЭФП, дальнейшее ее восстановление (3, 7 сутки) завершалось превышением исходной ЭФП, что являлось показателем их иммунокомпетентности.

В составе лимфоцитов лимфатических узлов мышей после введения живой чумной вакцины были обнаружены сдвиги в соотношении основных популяций лимфоцитов и их электрофоретической подвижности в ранние сроки (1-3 сутки) иммуногенеза к чуме. Снижение ЭФП Т-лимфоцитов в первые дни после иммунизации и одновременное увеличение их относительного содержания в лимфоузлах свидетельствовало о накоплении незрелых Т-клеток, богатых ти-мусным ©-антигеном. Появление на 3 сутки небольшого числа зрелых Т-лим-фоцитов с высокой ЭФП являлось, по-видимому, отражением начала миграции в лимфоузлы иммунокомпетентных клеток.

Рис. 5. Электрофореграммы лимфоцитов тимуса в различные сроки после введения мышам живой чумной вакцины

К 14 суткам все Т-лимфоциты восстанавливали свою ЭФП до уровня контроля. Популяционный состав лимфоцитов лимфатических узлов по соотношению Т- и В-клеток и их электрофоретической подвижности, уже к 14 суткам иммуногенеза соответствовал контрольным показателям, т.е. по сравнению с другими иммунокомпетентными органами стабилизировался быстрее. При этом более активно в иммунологические события в лимфатических узлах включались Т-клетки.

В крови на первые же сутки после введения живой чумной вакцины происходило снижение ЭФП лимфоцитов. Для Т-клеток снижение носило кратковременный характер - уже на 3 сутки большинство Т-лимфоцитов восстанавливало ЭФП до уровня контроля. В-лимфоциты восстанавливали ЭФП частично на 7 сутки иммуногенеза. С 1 по 7 сутки в крови преобладало содержание Т-лимфоцитов, их число превышало содержание в крови интактных животных и по соотношению с В-лимфоцитами, т.е. в первую неделю иммуногенеза к чуме преобладал выход в кровь Т-клеток (рис. 6).

Рис. 6. Элекгрофореграммы лимфоцитов крови в различные сроки после введения мышам живой чумной вакцины

Число зрелых В-лимфоцитов увеличивалось достоверно только на 14 сутки; к этому сроку приходило в норму и соотношение в крови Т- и В-лимфоцитов. Это свидетельствовало о более поздних процессах пролиферации и дифференцировки популяции В-лимфоцитов в лимфоидных органах и соответственно более поздней их миграции в кровяное русло. На пике развития первичного иммунного ответа к чуме популяционный состав лимфоцитов крови был представлен несколькими субпопуляциями с различной ЭФП и рецептор-ной характеристикой, что отражало активную миграцию в кровь клеток, имеющих различную функциональную значимость (см. рис. 6). Группу клеток, определяемых нами в популяционном составе лимфоцитов с 1 по 21 сутки после иммунизации, не имеющих СБ2- и СЯ1- рецепторов и обладающих очень высокой ЭФП, следует отнести к популяции нормальных киллеров (ЫЕ- лимфоцитов).

Изучение активности антителообразования на клеточном уровне в процессе формирования адаптивного иммунитета к чумной инфекции проводили параллельно с определением титров специфических антител в сыворотке крови экспериментальных животных. Показано, что мыши, однократно привитые живой чумной вакциной, проявляли высокую степень защиты при заражении вирулентным штаммом возбудителя чумы при незначительном количестве специфических АОК в селезенке и относительно низких титрах специфических гуморальных антител. Это позволило сделать вывод о незначительной стимуляции процессов пролиферации и дифференцировки В-лимфоцитов в АОК у этих животных. При двукратном введении 500 тыс. микробных клеток живой чумной вакцины (с интервалом в 21 день) формирование резистентности к чумной инфекции сопровождалась значительным увеличением числа специфических АОК в селезенке и более высоким уровнем антител в сыворотке крови (табл. 1).

Таблица 1

Число антителообразующих клеток в селезенках мышей в различные сроки после повторного введения живой чумной вакцины

Сутки Число АОК на селезенку (М ± ш) Р Титры антител в сыворотке крови

Специфические АОК Неспецифические АОК

1 170 ±50 80 ±20 Р < 0,05 1:64

3 308 ±32 96 ±24 Р < 0,05 1:256

5 364 ±36 152 ±48 Р < 0,05 1:256

7 332 ±28 152 ±32 Р < 0,05 1:512

9 314 ± 26 114 ±34 Р < 0,05 1 • 1024

14 272 ±28 160 ±40 Р < 0,05 1 :1024

Примечание: Р - степень достоверности различий числа специфических АОК по от-

ношению к контрольным (фоновым) показателям

Следовательно, при повторном введении живой чумной вакцины происходила активация процессов дифференцировки В-клеток в плазматические, что приводило к усилению гуморального иммунитета. Однако следует учитывать

тот факт, что определяли только антитела к капсульному антигену, на основе которого сконструирован чумной эритроцитарный антигенный диагностикум.

Таким образом, нами впервые был использован системный подход к оценке адаптивного иммунитета привитых против чумы экспериментальных животных. Поэтапное изучение на клеточном уровне процесса формирования резистентности к чумной инфекции позволило оценить последовательные изменения в иммунной системе организма: увеличение пролиферативного пула ПСКК, усиленная миграция из костного мозга стволовых клеток в селезенку и тимус, ранняя активация процессов пролиферации и дифференцировки Т-клеток и более поздняя - В-клеток, преимущественная дифференцировка Т-лимфоцитов в сторону иммунокомпетентности.

Глава 5. МЕХАНИЗМЫ ФОРМИРОВАНИЯ РЕЗИСТЕНТНОСТИ В ОРГАНИЗМЕ ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ ПРИ ИММУНИЗАЦИИ

КАПСУЛЬНЫМ ИЛИ СОМАТИЧЕСКИМ АНТИГЕНАМИ ЧУМНОГО

МИКРОБА

Исследования механизмов формировании адаптивного иммунитета к чумной инфекции при введении в организм экспериментальных животных кап-сульного или соматического антигенов чумного микроба проводили по аналогичной схеме: от пускового механизма иммунопоэза - миграции и пролиферации ПСКК - до становления состояния резистентности к возбудителю чумы.

Было показано, что введение мышам капсульного антигена приводило к усилению эндоколонизации селезенки у отдельных животных, в отличие от основного соматического антигена, практически не повлиявшего на процессы миграции и пролиферации ПСКК (рис. 7).

Рис 7 КОЕ в селезенках мышей, облученной в летальной дозе с экранированием участка костного мозга с последующей иммунизацией капсульным (А) или основным соматическим (Б) антигенами чумного микроба

Достоверно отличалось от результатов в контрольной группе только количество КОЕ в селезенках мышей, иммунизированных 20 мкг фракции 1 (табл. 2).

Таблица 2

Число эндогенных колоний (КОЕ) в селезенках мышей, облученных в летальной дозе с экранированием участка костного мозга, после введения антигенов чумного микроба

Препарат доза Кол-во мышей Число КОЕ (М±ш) Р

Капсульный Антиген 2 мкг 20 23,9 ±2,8 0,1 >Р> 0,05

20 мкг 20 26,0 ±4,4 Р < 0,05

Основной соматический антиген 20 мкг 20 21,6 ±3,4 Р>0,1

Контроль Экранирования 26 19,0 ±2,1

Примечание: Р - степень достоверности по отношению к контролю

Оценка резистентности организма экспериментальных животных в эти же сроки исследования показала, что основной соматический антиген не защищает мышей от гибели при заражении вирулентным штаммом возбудителя чумы. Наиболее эффективной была защита от чумной инфекции у животных, привитых 20 мкг фракции 1 (табл. 3).

Таблица 3

Результаты заражения мышей, иммунизированных антигенами чумного микроба, вирулентным штаммом Yersinia pestis 231

Иммунизация Число мышей Рез! г'льтат заражения

Антиген Доза выжили абс/% (М ± ш) Средняя продолжительность жизни после заражения

Капсульный Антиген 2 мкг 30 6/20 ±12,9 5,4 сутки

20 мкг. 30 27/90 ±9,5 7,0 сутки

Основной соматический антиген 20 мкг 20 0/0 5,2 сутки

Контроль Заражения lDcl 10 0/0 6,7 сутки

200 Del 10 0/0 4,4 сутки

Параллельное изучение активности антителообразования на клеточном уровне и определение титров специфических антител в сыворотке крови мышей позволило отметить, что однократное введение 20 мкг капсульного антигена чумного микроба обеспечивало эффективную резистентность к инфекции при незначительном количестве специфических АОК в селезенке и относительно низких титрах антител к фракции 1. При двукратном введении капсульного антигена с интервалом в 21 день происходила активация процессов дифференци-ровки В-клеток в АОК, т.е. формирование резистентности к чумной инфекции у этих животных сопровождалось значительным увеличением числа специфических АОК в селезенке и более высоким уровнем антител в сыворотке крови.

Изучение изменений в популяционном составе лимфоцитов органов иммунной системы и крови животных, иммунизированных капсульным антигеном, позволило выявить значительную активацию процессов пролиферации и дифференцировки Т-лимфоцитов и формирование основного пула иммуноком-петентных клеток к 7 суткам иммуногенеза (рис.8).

Рис. 8. Электрофореграмма лимфоцитов крови морских свинок, иммунизированных капсульным антигеном чумного микроба

Результаты морфологических исследований подтверждали усиление про-лиферативных процессов преимущественно в тимусзависимых зонах органов иммунной системы экспериментальных животных. Полученные данные позволили нам сделать вывод о тимусзависимом характере действия данного антигена. Иммунохимическая характеристика фракции 1 чумного микроба была детально исследована в работах ВА Федоровой с соавторами (1998-2003), которые подтвердили данное положение.

Аналогичные исследования, проведенные при введении в организм основного соматического антигена, выявили противоположную закономерность: при незначительной активации процессов пролиферации и дифференцировки Т-кле-ток отмечены резкие изменения в популяционном составе B-лимфоцитов, увеличение их пролиферативного пула, отражающего поликлональную активацию этих клеток (рис. 9). Полученные результаты являются подтверждением тимус-независимого действия данного антигена.

Рис. 9. Элекгрофореграмма лимфоцитов крови в различные сроки после введения морским свинкам основного соматического антигена чумного микроба

Однако активация процессов пролиферации и дифференцировки В-клеток не сопровождалась увеличением эффективности гуморальной формы адаптивного иммунитета, что может быть объяснено отсутствием цитокиновых сигналов для синтеза антител от незадействованных Т-хелперов. Отмеченная поли-клональная активация В-лимфоцитов, согласно данным литературы, может стать причиной гипервоспалительной реакции организма и привести к развитию патологических процессов.

Системный подход к оценке адаптивного иммунитета к чумной инфекции в организме экспериментальных животных, иммунизированных антигенами чумного микроба, позволил оценить последовательные изменения в иммунной системе на клеточном уровне. Показано увеличение пролиферативного пула ПСКК, усиленная миграция из костного мозга стволовых клеток в селезенку и тимус, ранняя активация процессов пролиферации и дифференцировки Т-клеток и более поздняя - В-клеток, преимущественная дифференцировка Т-лимфоцитов в сторону иммунокомпетентности при введении в организм кап-сульного антигена чумного микроба.

Глава 6. ИЗМЕНЕНИЯ В ОРГАНИЗМЕ ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ ПРИ ИММУНИЗАЦИИ ЛЕКТИНОМ МБ 22 ЧУМНОГО МИКРОБА

В последние годы значительно возрос научный интерес к лектинам бактерий. Одной из главных причин повышенного внимания являются данные о ведущей роли бактериальных лектинов - адгезинов во взаимодействии "патоген -хозяин". A.A. Щербаковым (1986, 1990) был выделен из клеток вакцинного штамма ЕВ чумного микроба мембранный белок с молекулярной массой 22 кДа, который был охарактеризован как нетоксичный антиген с повышенной иммуногенностью. Было показано, что этот белок проявлял термолабильные свойства, являлся гликопротеином и содержал 16% углеводов (Щербаков, 1996; Заднова, 1998). Ярко выраженные агглютинирующие свойства этого гликопро-теина позволили нам предположительно отнести его к соединениям лектиновой природы, что и предопределило дальнейшую работу. С помощью эритроцитар-ного антигенного диагностикума, сенситином в котором был гликопротеин, было обнаружено, что коммерческие чумные сыворотки, полученные при иммунизации животных целыми клетками возбудителя чумы, содержали антитела к лектину в высоком титре (1:800-1:1600). Данный белок также обладал заметным протективным эффектом, проявляющимся в выживании 40% иммунизированных животных при экспериментальной чумной инфекции (Дробышева и др., 1990). Это указывало на то, что исследуемый препарат обладал достаточной иммуногенностью, и свидетельствовало о том, что гликопротеин, локализованный во внешней мембране чумного микроба, может рассматриваться как один из факторов, участвующих в формировании адаптивного иммунитета к инфекции. В связи с этим последующие наши эксперименты были связаны с изучением реакций организма животных при иммунизации выделенным глико-протеином. Основное внимание было уделено изменению показателей гормонального, метаболического и иммунного статуса. Исследования проводились на морских свинках, иммунизированных гликопротеином однократно подкожно (100 мкг белка в 0,2 мл). Получены данные о фазных изменениях содержания 11-ОКС и их фракций в плазме крови и органах экспериментальных животных до 14 суток иммуногенеза. Показано, что динамика 11-ОКС в ядрах и митохондриях была аналогична динамике гормонов в гепатоцитах, при этом во все сроки белковосвязанные 11-ОКС в субклеточных фракциях превышали биологически активные. Следовательно, резких изменений в содержании гормонов на субклеточном уровне не происходит и адаптация организма экспериментальных животных к лектину идет в основном на тканевом уровне. Установлены фазные изменения ЭФП лимфоцитов и достоверное увеличение их содержания в тимусе и селезенке во все сроки наблюдения.

Полученные данные об изменении содержания 11-ОКС (рис. 10) и популя-ционного состава лимфоцитов (рис. И), а также обнаружение специфических антител в сыворотке крови у морских свинок, иммунизированных лектином, свидетельствовали о том, что препарат обладал достаточной иммуногенностью и вызывал активацию процессов пролиферации и дифференцировки лимфоцитов в процессе иммуногенеза.

ill I ^

плазма печень селезенка надпочечники

плазма печень селезенка надпочечники

■ свободные 11-ОКС В связанные 11-ОКС

Рис. 10. Содержание 11-ОКС в организме морских свинок: а - в норме, б - на первые сутки иммуногенеза к лектину чумного микроба

JdiliJj

Рис. 11. Изменение абсолютного количества лимфоцитов в крови и органах иммунной системы морских свинок после иммунизации лектином чумного микроба

Полученные результаты свидетельствовали о быстрой и стойкой энергетической перестройке организма в процессе адаптации к лектину чумного микроба. Изменение содержания адениловых нуклеотидов и активности КФК в ответ на введение данного лектина экспериментальным животным происходило в течение первых двух недель иммуногенеза, но энергетический заряд крови и на 21-е сутки был выше контрольного значения (рис. 12). Можно предположить, что формирование адаптивного иммунитета к изучаемому гликопро-теину сопровождается существенными сдвигами в организме экспериментальных животных, и нормализация гомеостаза требует значительных энергетических затрат.

Полученные данные показали стойкую энергетическую перестройку организма в процессе адаптации к исследуемому препарату. Установлен также довольно активный процесс антителогенеза при введении в организм морских свинок лектина, приводящий к циркуляции в сыворотке крови антител с титрами от 1:200 до 1:400.

Рис. 12. Изменение энергетического баланса в организме морских свинок, иммунизированных лектином чумного микроба- а) изменение содержания адениловых нуклеотидов; б) изменение активности КФК и энергетического заряда (Е) в плазме крови

Результаты исследований дают основание заключить, что выделенный из внешней мембраны У.рвяНз ЕВ лектин может рассматриваться как дополнительный фактор, обеспечивающий контакт патогена с клетками макроорганизма, и как перспективный компонент комбинированной чумной вакцины.

Глава 7. ИЗУЧЕНИЕ ЕСТЕСТВЕННОЙ И ПРИОБРЕТЕННОЙ

РЕЗИСТЕНТНОСТИ У ИНБРЕДНЫХ И РАДОМБРЕДНЫХ МЫШЕЙ

На настоящий момент не вызывает сомнений, что различная видовая и индивидуальная восприимчивость к инфекциям во многом обусловлена наследственными механизмами (Петров и др., 1980; Авербах и др., 1985). Многочисленные исследования последних лет, выполненные преимущественно на линейных мышах, позволили получить принципиально важные факты о генетически детерминированных различиях в восприимчивости к инфекциям. Причем, генетический контроль может проявляться не только на уровне иммунокомпетентных клеток, но и на отдельных этапах формирования иммунного ответа. Роль генотипа в сопротивляемости к инфекциям определяется зависимостью иммунологических реакций от аллельного состава генетических систем, контролирующих иммунный ответ (Авербах и др ,1985; Апт, 1985). Использование в исследованиях животных с заведомо известным спектром изменчивости анатомо-физиологической организации иммунокомпетентной системы, величиной показателей неспецифической защиты, чувствительностью к изучаемому антигену, позволяет изучить закономерности формирования полноценного адаптивного иммунитета к инфекции.

Для выбора стратегии исследований, позволяющей приблизиться к решению вопроса о роли генотипа при чумной инфекции, нами были проанализированы научные данные о роли гуморальных и клеточных механизмов в процессе формирования адаптивного иммунитета к чуме. Было установлено, что в доказательстве преимущественной заинтересованности Т-системы лимфоцитов в развитии адаптивного иммунитета к чуме до сих пор много неизученного. Вопросы влияния тимуса на формирование резистентности к чумной инфекции при иммунизации антигенами чумного микроба до выполнения данной диссертационной работы были исследованы также недостаточно. Поэтому прежде всего была предпринята попытка в опытах на бестимусных мышах выяснить, как отсутствие этого органа влияет на развитие у животных адаптивного иммунитета к чуме.

Использовали бестимусных мышей на основе линии BALB/c Y - BALB/c nude, полученных из лаборатории экспериментальных моделей Всесоюзного онкологического центра, в качестве контроля были взяты радомбредные белые мыши. Для оценки резистентности к чумной инфекции животных заражали вирулентным штаммом Y pestis 231. Анализ полученных данных показал (табл. 4), что все бестимусные мыши (интактные и иммунизированные) погибли с выделением культуры чумного микроба и характерной патоморфологической картиной в сроки с 5 по 9 сутки (средняя продолжительность жизни 5,8 суток в группе иммунизированных живой чумной вакциной и 6,2 суток - у привитых капсульным антигеном). У незараженных бестимусных мышей на 21-е сутки после иммунизации живой чумной вакциной антитела к фракции 1 в сыворотке крови отсутствовали. У привитых капсульным антигеном бестимусных мышей специфические антитела были обнаружены лишь в разведении сывороток 1:2 (в РПГА)и1:4(вРНАг).

Таблица 4

Эффективность приобретенной резистентности у бестимусных и рацомбредных мышей, иммунизированных живой чумной вакциной

Группы Число Доза Результаты Срок

Животных мышей заражения заражения жизни,

(LD50)* пали выжили сутки

BALB/c nude мыши, 14 50 14 0 8

Иммунные

Радомбредные мыши, 10 50 2 8 4,5

Иммунные

Радомбредные мыши, 5 50 5 0 5,0

Интактные 5 10 5 0 5,6

Примечание: • - заражение вирулентным штаммом Y. pestis 231 возбудителя чумы

В то же время аналогичная иммунизация рацомбредных и обычных белых мышей, имеющих тимус, вызывала образование антител к фракции 1 в титрах от 1:8 до 1:128. Все радомбредные белые мыши, иммунизированные живой чумной вакциной, выжили в течение 30 суток после заражения 100 или 200 ЬБ5о вирулентного штамма У ре5Ш 231. Иммунизация 20 мкг капсульного антигена предохранила от гибели всех мышей, зараженных даже 6000 ЬБр того же вирулентного штамма.

Проведенные исследования показали, что у мышей, лишенных тимуса, введение живой чумной вакцины или капсульного антигена чумного микроба не вызывает защиты от последующего подкожного заражения вирулентным штаммом, т.е. адаптивный иммунитет не формируется. Радомбредные белые мыши, имеющие тимус, в аналогичных и даже более жестких условиях опытов (при большей дозе заражения) выжили в подавляющем большинстве. Полученные результаты позволяют сделать заключение об обязательном участии тимус-зависимой системы лимфоцитов в развитии полноценного адаптивного иммунитета против чумной инфекции.

В дальнейшей работе эффективность иммунологической защиты в зависимости от генотипа животного и природы иммунизирующего агента определяли также непосредственно при контрольном заражении вирулентным штаммом У ре5й5 231 инбредных мышей разных гаплотипов. Биомоделью служили линейные животные следующих гаплотипов: Н-2к (СБЛ/Ьас, СЗН/8п У), Н-2а (Л^п, ББЛ/У), Н-2а (БЛЬБ/с), Н-2Ь (С57БЬ/6, СС57^ БЮС^О и радомбред-ные мыши. Полученные данные показали, что естественная резистентность ин-бредных мышей к чумному микробу генетически детерминирована, так как она неравнозначна у животных разных гаплотипов, но близка у особей одного гап-лотипа (табл. 5). По результатам заражения мышей всех линий вирулентными бактериями штамма 231 чумного микроба было установлено, что самой резистентной линией является СВА, а наиболее чувствительной - С57БЬ/6. Морфологические исследования показали, что наименьшие изменения структуры внутренних органов были у мышей с гаплотипом Н-2к и Н-2а (СБЛ/Ьас и Л/8п), более значительные - с гаплотипом Н-2<1 и Н-2Ь (БЛЬБ/с, СС57^ С57БЬ/6,Б10С№).

Таблица 5

Эффективность иммунизации мышей разных генотипов капсульным антигеном и живой чумной вакциной (по результатам контрольного заражения)

Линии Иммунизи рующий агент Степень достоверности различий

мышей Капсульный а\г Клетки ЖЧВ Между имму- Между линиями мышей **

(Н-2 гап- Гибель Средняя Гибель Средняя низир. кап- Аут-

логип) после за- длипельн. после за- длительн. сульным а\ги ВАЬВ/с В10С\У С57В176 СС57\У бредные

ражения жизни, ражения, жизни, ЖЧВ мышами

% сутки % сутки одной линии

А/8п 0 - - - - <0.05 <0.02 < 0.001 <0.001 < 0.002

(Н-2») - - - - -

ВАЬВ/с 16,7 8,5±0,5 0 - <0,05 <0,05 < 0.001

(Н-211) <0,02 ^

В10С\У 42,8 6,0±0,6 0 - <0,02 < 0,001 <0.02

(Н-2Ь) " < 0,05

С57В1У6 60 7,5±1,0 12,5 5,0±0* <0,05

(Н-2Ь)

CC57W 100 5,3±0,2 28,6 18,5±5,5 < 0,001 < 0.001 <0.05 <0.001

(Н-2Ь) <0,02 <0,05

Аутбред- 40 9,5±1,0 0 - <0,02 <0.02 <0.001

ные -

Примечания: *- единичное наблюдение; **- приведены только значимые различия: справа от диагональной черты - по уровню гибели, слева - по показателю средней продолжительности жизни после заражения; в числителе - иммунизированные П, в знаменателе - иммунизированные вакцинным штаммом НВ;«-»- не определяли

Обнаружение различий в уровнях естественной резистентности у инбред-ных мышей требовало постановки экспериментов по выяснению подобного феномена в отношении формирования адаптивного иммунитета.

При анализе результатов по заражению мышей всех линий вирулентными бактериями штамма 231 чумного микроба выявлена меньшая степень резистентности к чумной инфекции при иммунизации капсульным антигеном по сравнению с живой чумной вакциной. Исследуемые линии мышей имели явные отличия между собой по способности формировать адаптивный иммунитет к чумной инфекции, реализуемый после заражения. Введение живой чумной вакцины обеспечивало формирование полноценного адаптивного иммунитета, защищающего от определенной дозы вирулентных клеток возбудителя чумы, только у мышей линии СВА. Особенно низкая приобретенная резистентность была у животных линии BALB/c. При иммунизации капсульным антигеном эти отличия были более демонстративны, хотя общие закономерности сохранялись и при введении живой чумной вакцины. Наилучшей защитой обладали мыши линии A/Sn, несколько слабее - BALB/c и C57BL/6, наихудшей - CC57W; промежуточное положение занимали мыши линии BIO.CW и радомбредные. Полученные данные позволили установить, что мыши с гаплотипом Н-2Ь слабее иммунизировались против чумы, чем мыши с гаплотипами Н-2а и H-2d.

Различия в иммунизирующем эффекте использованных нами агентов можно объяснить, с одной стороны, слабой иммуногенностью капсульного антигена для определенных линий мышей в связи с близостью его антигенных детерминант с антигенами некоторых клеток организма мышей, что и обусловливало неэффективность имхмунологических механизмов защиты (Мареев и др., 1984; Белякова и др., 1990). Высокочувствительные к чуме животные слабо иммунизируются против этой инфекции и редко дают положительные серологические реакции на фракцию 1 (Леви, 1973; Мареев и др., 1984; Белякова и др., 1990). Это обстоятельство хорошо согласуется с гипотезой Mitchell et al. (1982), по которой повышенная восприимчивость к внутриклеточным паразитам связана с отсутствием или плохим распознаванием Т-хелперами антигенов возбудителя на макрофагах в связи со сниженной экспрессией на них необходимых для взаимодействия 1а-антигенов и/или слабой модифицированностью их антигенами возбудителя.

Результаты настоящего раздела работы являются доказательством того, что при формировании адаптивного иммунитета к чуме принципиальное значение имеют генетические особенности гаплотипа макроорганизма; индивидуальное функционирование клеточных и гуморальных факторов защиты на начальных этапах инфекции играют большую роль в проявлении вирулентности бактерий, их роста и размножения. Проведенные исследования показали также, что уровень приобретенной резистентности к чуме при иммунизации капсуль-ным антигеном имеет зависимость от гаплотипа организма мышей. Это подтверждает точку зрения об участии генов главного комплекса гистосовмести-мости в контроле восприимчивости мышей к капсульному антигену (Алексеева и др., 1990). Зависимость протективного действия вакцин от генетически детерминированной эффективности механизмов резистентности к инфекции под-

тверждается и фактом оппозитной 100% защиты мышей Д/8п при иммунизации капсульным антигеном чумного микроба. Наши данные, свидетельствующие о неодинаковом уровне защиты у мышей разных линий (В10.С^, СС57В1/6, СС57^, но одного гаплотипа (Н-2Ь), согласуются с полигенной природой приобретенной резистентности к внутриклеточным инфекциям, ре-стриктированной комплексом Н-2 у мышей (Апт, 1985,1987).

Далее был проведен сравнительный анализ изменений популяционного состава лимфоцитов органов иммунной системы и крови в процессе иммуногенеза к чуме у мышей с генетически детерминированным иммунным ответом на антигены чумного микроба. В качестве биологической модели при статусе инбридинга использовалась линия мышей С57ВЬ/6 У, характеризующаяся низким уровнем естественной и высоким уровнем приобретенной резистентности к чумной инфекции. Показано, что у инбредных мышей этой линии были более выражены изменения в составе лимфоцитов крови и органов иммунной системы при формировании адаптивного иммунитета к чуме. Сдвиги в соотношении Т- и В-клеток в селезенке наблюдались до 21 суток иммуногенеза, а в крови это соотношение не нормализовывалось и в более поздние сроки (рис. 13).

Рис 13 Относительное содержание СБ2+ - и СЯГ - клеток в крови инбредных и радомбредных мышей в динамике формирования резистентности после введения живой чумной вакцины

Выявленные изменения свидетельствовали об интенсивности процессов пролиферации Т-клеток и их рециркуляции в иммунной системе. Для установления взаимосвязи изученных иммунологических показателей был проведен корреляционный анализ полученных данных. Установлена прямая взаимосвязь

в процессе иммуногенеза к чуме содержания CD2+- и CR1+- клеток в различных органах иммунной системы экспериментальных животных. При этом соотношение Т- и B-лимфоцитов в иммунокомпетентных органах стабилизировалось более четко, чем их абсолютная численность. Сравнительный анализ данных показал, что между численностью и соотношением лимфоцитов, с одной стороны, и уровнем формирования адаптивного иммунитета к возбудителю чумы в организме - с другой, существует прямая количественная взаимосвязь. С повышением числа клеток, участвующих в иммунном ответе, повышается эффективность защиты при введении в организм вирулентного штамма чумного микроба.

Результаты проведенных исследований показали, что генетически детерминированные различия линейных мышей в естественной резистентности к чуме и способности к формированию адаптивного противочумного иммунитета позволяют использовать их в качестве удобной экспериментальной модели для решения вопросов иммунопрофилактики и изучения механизмов, реализующих устойчивость или чувствительность к данной инфекций. Полученные иммунологические параметры можно использовать для оценки иммунного статуса организма привитых против чумы животных.

Глава 8. ЭКОЛОГО-ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ФОРМИРОВАНИЯ РЕЗИСТЕНТНОСТИ К ЧУМНОЙ ИНФЕКЦИИ У ПОЛУДЕННЫХ ПЕСЧАНОК

Популяционный уровень исследования механизмов адаптационного иммунитета предусматривает изучение его роли как селективного фактора, обуславливающего генетический полиморфизм и адаптацию популяций к условиям инфекционно опасной зоны жизнедеятельности. Для оценки механизмов резистентности на популяционном уровне были проведены исследования на модели диких грызунов из естественных мест обитания - полуденных песчанках двух подвидов: Meriones meridianus meridianus Pall, из окрестностей села До-санг и Meriones meridianus nogaiorum Hepth. из окрестностей села Енатаевка Астраханской области.

В аналитическом обзоре к этой главе проанализированы эколого-физиологические особенности и инфекционная чувствительность у полуденных песчанок по имеющимся в научной литературе сведениям. Известно, что степень изменчивости адаптивного иммунитета лево- и правобережных популяций песчанок весьма различна: у левобережных выражена ярко, правобережные по степени чувствительности к чумному микробу и его антигенам более однородны. Изучению причин этого явления посвящено много работ (Лобанов и др., 1938; Туманский, 1946, 1955; Калабухов и др., 1960, 1971; Малофеева, 1957, 1962; Леви, 1960; Штельман, 1966; Козакевич и др., 1977; Дятлов, Аванян, 1987; Донская и др., 1988, 1993; Штельман, 1994; Челова и др. 1986, 1990; Рас-тунцева и др., 1996 и др.). Анализ их четко определяет два направления в разрешении этих вопросов: морфофизиологическое и иммунологическое.

Иммунологическое направление в исследовании механизмов резистентности и инфекционной чувствительности разных популяций песчанок предпола-

гает изучение, прежде всего, особенностей функционирования иммунной системы организма животных на органном и клеточном уровнях. В связи с этим целесообразно было провести исследования с целью установления взаимосвязи резистентности организма с функциональной активностью лимфоцитов органов иммунной системы у песчанок, различающихся по инфекционной чувствительности к чумному микробу.

Исследовались морфологические особенности, функциональная активность и степень зрелости лимфоцитов тимуса, селезенки, лимфатических узлов и крови полуденных песчанок М т meridianus Pall и М т nogaiorum Hepth. Методом разделительного клеточного электрофореза были получены данные об отличиях ЭФП лимфоцитов органов иммунной системы у полуденных песчанок, выловленных с различных мест обитания и характеризующихся различной инфекционной чувствительностью. Отмечена высокая ЭФП лимфоцитов крови песчанок М т meridianus, у М. т nogawrum лимфоциты крови были представлены несколькими группами клеток с менее высокой и низкой ЭФП (рис. 14-А). Тимоциты песчанок подвида М. т meridianus распределялись на две группы клеток с высокой ЭФП, а у М т. nogaiorum на три группы с разной ЭФП (рис. 14-Б). Следует отметить также, что в количественном отношении активных клеток в тимусе правобережных песчанок было значительно меньше, чем у левобережных. Полученные результаты позволили сделать заключение о формировании в тимусе М. т meridianus двух функционально активных групп клеток с высокой степенью зрелости, а у М. т nogaiorum - трех групп клеток с разной степенью зрелости и функциональной активности.

Лимфоциты селезенки М. т meridianus были более высокой ЭФП, чем у М т nogaiorum, и количественно их было значительно больше (рис. 14-В). Аналогичные данные были получены и для лимфатических узлов песчанок разных подвидов (рис. 14-Г). Важен также, на наш взгляд, факт преобладания более зрелых лимфоцитов с высокой функциональной активностью в крови, селезенке и лимфатических узлах песчанок подвида М т meridianus. Морфологические исследования показали структурные отличия тимусзависимых зон периферических органов иммунной системы у исследованных подвидов песчанок; для М т. meridianus были характерны более широкие зоны пролиферации с преобладанием малых лимфоцитов. Проведенные исследования позволили установить, что в основе различий естественной резистентности и инфекционной чувствительности у двух изученных подвидов полуденной песчанки лежат механизмы дифференцировки зрелых форм лимфоцитов и разная степень их функциональной активности.

На следующем этапе работы были проведены исследования электрофоре-тической подвижности лимфоцитов крови, селезенки и тимуса левобережных и правобережных песчанок после введения им капсульного антигена (F1), основного соматического антигена (ОСА) и мышиного токсина (F2) чумного микроба. Полученные результаты показали существенные различия в процессе формирования адаптивного иммунитета у изучаемых животных при иммунизации антигенами чумного микроба.

Рис 14 Электрофореграммы лимфоцитов крови (А), тимуса (Б), лимфатических узлов (В) и селезенки (Г) полуденной песчанки

Были установлены фазные изменения ЭФП и общего количества лимфоцитов крови и органов иммунной системы в динамике иммуногенеза. Длительность и выраженность сдвигов зависели от характера иммунизирующего препарата.

При сравнительном анализе характера адаптационных изменений к кап-сульному антигену чумного микроба, прежде всего, была отмечена быстрая и усиленная реакция пролиферации и дифференцировки в органах иммунной системы и крови левобережных песчанок. У правобережных реакция была замедленной и характеризовалась незначительными изменениями функциональной активности и популяционного состава лимфоцитов. Можно предположить, что у резистентных животных капсульный антиген чумного микроба активизирует пул иммунокомпетентных эффекторных клеток, обеспечивающих при последующем контакте с возбудителем инфекции определенную устойчивость.

Введение токсина чумного микроба сопровождалось уменьшением относительного числа клеток с высокой ЭФП в органах иммунной системы у левобережных песчанок и с низкой ЭФП - у правобережных, на фоне повышения абсолютного числа лимфоцитов. Иммунизация экспериментальных животных ОСА чумного микроба сопровождалась практически однотипной реакцией, характеризующейся исчезновением в популяционном составе лимфоцитов функционально активных групп клеток с низкой ЭФП. В результате проведенных исследований были выявлены закономерности изменения популяционного состава лимфоцитов при формировании адаптивного иммунитета к чуме, показана зависимость функциональной активности лимфоцитов органов иммунной системы с генетически детерминированной чувствительностью песчанок двух подвидов к антигенам чумного микроба. Установление взаимосвязи инфекционной чувствительности у песчанок, обитающих на разных участках природного очага чумы, с изменением функциональной активности лимфоцитов может иметь важное значение для оценки общих механизмов адаптации популяций, и в сочетании с другими факторами (в том числе и с уровнем кортикостероидных гормонов) - для характеристики эпизоотического процесса.

Таким образом, эколого-иммунологический подход, использованный нами при изучении резистентности макроорганизма при инфекции и иммунизации, включающий исследования механизмов формирования адаптационного иммунитета на различных уровнях организации иммунной системы, позволил дать оценку основным экологическим стратегиям паразитизма патогенных и условно-патогенных бактерий.

ВЫВОДЫ

1. Выявлен характер изменений активности основных механизмов естественной резистентности макроорганизма при контакте с разными видами бактериальных клеток и установлены закономерности в зависимости от антигенного состава и особенностей экологической стратегии этих бактерий. Показана зависимость числа активных макрофагов от времени их инкубации с микробными клетками, биологических характеристик бактерий и их адаптивных возможностей

2. Условно-патогенные микроорганизмы (Serratia sp, Citrobacter sp, E agglomerans, E coll, S haemolyticus и S epidermidis) способны в разной степени противостоять активности процесса фагоцитоза, что сопровождается их частичным перевариванием в макрофагах. Выявлена видоспецифическая динамика синтеза ИЛ-1 и ФНО-а. Для патогенных бактерий (У enterocolitica, E coli

ЭПКП 0-127, S. aureus) незавершенный фагоцитоз в макрофагах сопровождается угнетением синтеза основного провоспалительного цитокина ИЛ-1. Цитопа-тический характер действия клинических штаммов энтеробактерий и микробных клеток Y. enterocolitica приводит к появлению через 48 часов процесса фагоцитоза большого числа разрушенных макрофагов.

3. Формирование адаптивного иммунитета к чумной инфекции в организме мышей, иммунизированных живой чумной вакциной или капсульным антигеном чумного микроба, связано с активацией начального этапа иммунопоэза -усилением миграции из костного мозга и пролиферации полипотентных стволовых кроветворных клеток. Основной соматический антиген Y.pestis, не защитивший мышей от гибели после заражения вирулентным штаммом чумного микроба, не влияет на процессы миграции и пролиферации ПСКК.

4. Введение в организм мышей живой чумной вакцины сопровождается фазными изменениями популяционного состава лимфоцитов органов иммунной системы и их электрофоретической подвижности. В тимусе уменьшение числа Т-клеток в ранние сроки иммуногенеза сменяется последующим превышением исходного значения к концу месяца. В периферических органах иммунной системы (селезенке, лимфатических узлах) и крови мышей в первую неделю формирования адаптивного иммунитета увеличивается абсолютное и относительное содержание Т-лимфоцитов. К 14 суткам соотношение Т- и B-клеток нормализуется. Понижение ЭФП в ранние сроки и повышение в более поздние свидетельствует об активации процессов пролиферации и дифференцировки лимфоцитов.

5. Выявлена взаимосвязь изменений популяционного состава лимфоцитов органов иммунной системы и крови с динамикой развития состояния резистентности к чумной инфекции в тесте активной защиты при заражении вирулентным штаммом чумного микроба. Между численностью и соотношением лимфоцитов и уровнем иммунного ответа в организме вакцинированных мышей существует прямая количественная взаимосвязь: с повышением числа клеток, участвующих в иммунном ответе, повышается эффективность защиты при введении в организм возбудителя чумы.

6. Количественная оценка активности антителообразования в процессе первичного иммунного ответа к возбудителю чумы не является показателем эффективности адаптивного иммунитета. Состояние резистентности к чумной инфекции отмечено в организме мышей, однократно привитых живой чумной вакциной или капсульным антигеном чумного микроба, при незначительном количестве специфических АОК и относительно низких титрах специфических гуморальных антител. Вторичный иммунный ответ на антигены чумного микроба сопровождается значительным увеличением специфических АОК и более высоким уровнем антител в сыворотке крови.

7. Выявлена значительная активация процессов пролиферации и диффе-ренцировки Т-лимфоцитов и формирование основного пула иммунокомпетент-ных клеток в органах иммунной системы и крови животных на 7 сутки после введения капсульного антигена чумного микроба, что свидетельствует о его тимусзависимом характере. Введение в организм экспериментальных живот-

ных основного соматического антигена чумного микроба сопровождается увеличением пролиферативного пула B-лимфоцитов, отражающего их поликло-нальную активацию, при незначительной стимуляции процессов пролиферации и дифференцировки Т-лимфоцитов, что подтверждает тимуснезависимый характер данного антигена.

8. Выделенный из внешней мембраны Ypestis ЕВ лектии, белок с м.м. 22 кДа, при введении в организм животных вызывает изменения содержания 11-ОКС и энергетическую перестройку в процессе их адаптации. Обнаружение специфических антител в сыворотке крови животных и активация процессов пролиферации и дифференцировки лимфоцитов в процессе формирования адаптивного иммунитета свидетельствует о достаточной его иммуногенности. Данный антиген может рассматриваться как дополнительный фактор, обеспечивающий контакт патогена с клетками макроорганизма, и перспективный компонент комбинированной чумной вакцины.

9. Установлено обязательное участие тимусзависимой системы лимфоцитов в развитии полноценного адаптивного иммунитета к чумной инфекции. У мышей, лишенных тимуса, введение живой чумной вакцины или капсульного антигена чумного микроба не вызывает защиты от последующего подкожного заражения вирулентным штаммом возбудителя чумы.

10. Показаны различия в уровне естественной и приобретенной резистентности к чумной инфекции инбредных мышей разных гаплотипов. Введение живой чумной вакцины обеспечивает формирование полноценного адаптивного иммунитета только у мышей линии СВА Уровень приобретенной резистентности к чумной инфекции при иммунизации капсульным антигеном был ниже в организме мышей гаплотипа Н-2Ь, чем гаплотипов Н-2" и H-2d. Сдвиги в попу-ляционном составе лимфоцитов наиболее выражены в процессе формирования адаптивного иммунитета к чумной инфекции у мышей линии C57BL/6 Y с генетически детерминированным уровнем иммунологической защиты при заражении вирулентным штаммом чумного микроба.

11. В основе различий естественной резистентности инфекционной чувствительности у полуденных песчанок из различных мест обитания лежат механизмы дифференцировки зрелых форм лимфоцитов и разная степень их функциональной активности. Показана зависимость функциональной активности лимфоцитов органов иммунной системы от генетически детерминированной чувствительности песчанок разных подвидов к антигенам чумного микроба.

СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ (* - публикации в печатных изданиях Перечня ВАК РФ)

1. Тихомирова Е.И., Павлова Л.П., Горькова A.B. Влияние на миграцию полипотентных стволовых кроветворных клеток различных сочетаний антигенного и радиационного воздействий у иммунизированных против чумы мышей // Лабораторная диагностика, биохимия и специфическая профилактика чумы и холеры. - Саратов, 1986. - С. 25-31.

2. Павлова Л.П., Тихомирова Е.И., Горькова A.B., Наумов A.B. Миграция из костного мозга полипотентных стволовых кроветворных клеток у иммунизированных против чумы мышей // Иммунология и специфическая профилактика особо опасных инфекций. - Саратов, 1986. - С. 3-9.

3. Тихомирова Е.И., Павлова Л.П., Горькова A.B. Изучение возможности применения метода локального гемолиза в геле для обнаружения антителообра-зующих клеток в процессе первичного иммунного ответа к чуме // Механизмы формирования иммунитета к особо опасным инфекциям. - Саратов, 1986. - С. 113-121.

4. Исупов И.В., Павлова Л.П., Горькова A.B., Задумина С.Ю., Тихомирова Е.И. Особенности развития иммунитета к чуме у бестимусных мышей // Лабораторная диагностика, биохимия и специфическая профилактика чумы и холеры. - Саратов, 1986. - С. 40-50.

5. Исупов И.В., Павлова Л.П., Горькова A.B., Задумина С.Ю., Тихомирова Е.И. Значение тимуса в формировании протективного иммунитета к чуме // Актуальные вопросы теоретической и прикладной инфекционной иммунологии. Механизмы противоинфекционного иммунитета: Тез. докл. II Всесоюз. конф. М., 1987.- С.51-52.

6. Горькова A.B., Павлова Л.П., Тихомирова Е.И. Клеточные механизмы формирования иммунитета к чуме // Актуальные вопросы теоретической и прикладной инфекционной иммунологии. Механизмы противоинфекционного иммунитета: Тез. докл. II Всесоюз. конф. - М., 1987. - С. 38-39.

7. Тихомирова Е.И. Применение метода пассивного локального гемолиза в геле для обнаружения антителообразующих клеток в процессе иммунного ответа к чуме. - Саратов, 1988. - 10 с. (Деп. ВИНИТИ 12.04.88 № 2777 - В.88). РЖ Иммунология. Аллергология. - 1988,7,53. 940 ДЕП.

8. Тихомирова Е.И., Горькова A.B., Тихомирова Л.А., Павлова Л.П. Изменения в популяционном составе лимфоцитов органов иммунной системы мышей в процессе формирования в организме протективного иммунитета к чуме. - Саратов, 1989. - 17 с. (Деп. В ВИНИТИ 15.08.89 - № 5488 - В.89).РЖ Биология, 1989. -12.53.1747.ДЕП.

9. Тихомирова Е.И. Сравнительный анализ изменений популяционного состава лимфоцитов органов иммунной системы инбредных и беспородных мышей, иммунизированных против чумы // Эпидемиология, микробиология, и иммунология бактериальных и вирусных инфекций: Тез. докл. Всесоюз. науч. конф. молодых ученых ГЭУ МЗ СССР. - Ростов н/Д, 1989. - С. 100-102.

10. Тихомирова Е.И., Павлова Л.П., Горькова A.B. Применение метода пассивного локального гемолиза в геле для изучения на клеточном уровне иммунного ответа к чуме // Биотехнология, иммунология и биохимия особо опасных инфекций. - Саратов, 1989. - С. 25-31.

11. Сердобинцев Л.Н., Карпунина Л.В., Тихомирова Е.И., Конов Н.П., Демченко Т.Л. Изучение гемагглютинирующей активности препаратов кап-сульного белка чумного микроба // Биотехнология, иммунология и биохимия особо опасных инфекций. - Саратов, 1989. - С. 36-42.

12. Исупов И.В., Горькова A.B., Павлова Л.П., Задумина С.Ю., Тихомирова Е.И. Использование иммунодефицитного состояния бестимусных мышей для изучения природы иммунитета при чуме // Материалы 8 Всесоюз. съезда патологоанатомов. - М., 1989.-С.54.

13. Горькова A.B., Челова ЛА., Тихомирова Л.А., Тихомирова Е.И., Донская Т.Н., Растунцева Е.В., Солодовникова Т.Н. Внутриклеточные механизмы гормональных, обменных сдвигов и динамика популяционного состава лимфоцитов при инфекции, интоксикации и при специфических и неспецифических изменениях резистентности организма к чуме // Молекулярные механизмы инфекционных заболеваний: Тез. докл. Всесоюз. конф. - Звенигород, 1990. - С. 24.

14. Сердобинцев Л.Н., Карпунина Л.В., Тихомирова Е.И., Конов Н.П., Гусева Н.П. Адгезивные свойства фракции 1 чумного микроба // Биохимия, иммунология и биотехнология особо опасных инфекций. - Саратов, 1990. - С. 7-13.

15*. Исупов И.В., Назарова Л.С., Павлова Л.П., Горькова A.B., Ревазова Е.С., Задумина С.Ю., Тараненко Т.М., Пионтковский СА., Девдариани З.Л., Тихомирова Е.И. Изучение влияния различных антигенов Yersiniapestis на клеточное звено иммунитета // ЖМЭИ. 1990. - № 9. - С. 85-89.

16. Петров Р.В., Горькова A.B., Хаитов P.M., Некрасов A.B., Наумов A.B., Алексеева Н.Ю., Тараненко Т.М., Павлова Л.П., Щуковская Т.Н., Тихомирова Е.И. Искусственные вакцинирующие препараты на основе капсульного антигена чумного микроба и синтетических полиэлектролитов // Сборник трудов НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи. - М„ 1990. - С. 191-196.

17. Тихомирова Е.И., Горькова A.B., Исупов И.В., Павлова Л.П., Лобанов К.Н. Сравнительная характеристика популяционного состава лимфоцитов иммунной системы и крови у инбредных и неинбредных мышей в процессе иммуногенеза // Лабораторные животные для медико-биологических и биотехнологических исследований: Тез. докл. междунар. конф. - М., 1990. - С. 38.

18. Тихомирова Е.И., Горькова A.B., Павлова Л.П., Лобанов К.Н. Изучение взаимосвязи в популяционном составе лимфоцитов органов иммунной системы с процессом формирования в организме протективного иммунитета к чуме //Актуальные проблемы и задачи биохимии, диагностики и иммунопрофилактики особо опасных инфекций. - Саратов, 1991. - С. 57-65.

19. Тихомирова Л.А., Челова Л.П., Тихомирова Е.И., Зарипов Ш.Н., Горь-кова A.B. Механизмы гормональной регуляции процессов иммунного гомеоста-за и их коррекция при формировании иммунитета к чуме. - Саратов, 1991.-15 с. (Депонир. в ВИНИТИ 17.12.91. - № 4566. - В.91) РЖ Биология: вирусология, микробиология, 1992. - № 116. - 1639 ДЕП.

20. Тихомирова Е.И., Тихомирова Л.А., Челова Л.А., Донская Т.Н., Штельман ЮА, Горькова A.B. Динамика популяционного состава лимфоцитов и гормонального баланса организма при формировании резистентности к чуме. - Саратов, 1992. - 17 с. (Депонир. в ВИНИТИ 13.02.92. - № 487. - В.92) РЖ Биология: вирусология, микробиология, 1992. -№ 11в. - 4278 ДЕП.

21. Тихомирова Л.А., Челова Л.А., Тихомирова Е.И., Донская Т.Н., Штельман ЮА, Горькова A.B. Показатели противочумного иммунитета у ла-

бораторных животных и диких грызунов и его направленная регуляция // Материалы 1 съезда иммунологов России. - Новосибирск, 1992.-С. 529.

22. Тихомирова Е.И., Горькова A.B., Тихомирова Л.А. Влияние вакцинного штамма ЕВ и антигенов чумного микроба на процесс формирования невосприимчивости к чуме // Материалы 1 съезда иммунологов России. — Новосибирск, 1992. - С. 478-479.

23. Тихомирова Е.И., Горькова A.B., Тихомирова Л.А. Взаимосвязь показателей клеточного и гуморального иммунитета к чуме с его протективной активностью // Факторы гуморального и клеточного иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях: Тез. докл. XI республ. конф. -Челябинск, 1992.-С. 103.

24. Горькова A.B., Тихомирова Л.А., Челова Л.А, Тихомирова Е.И., Рас-тунцева Е.В. Механизмы реализации гормональной регуляции в формировании специфической и неспецифической резистентности организма людей и лабораторных животных к чуме // Иммунология и специфическая профилактика особо опасных инфекций: Материалы Рос. науч. конф. - Саратов, 1993. - С. 16-17.

25. Тихомирова Л.А., Челова Л.А., Тихомирова Е.И., Донская Т.Н., Штельман Ю.А., Горькова A.B. Показатели противочумного иммунитета у лабораторных животных и диких грызунов и его направленная регуляция. — Саратов, 1993. - 13 с. (Депонир. в ВИНИТИ 15.02.93. № 487.B.93) РЖ Биология: вирусология, микробиология., 1993. -№ 116. - 4277 ДЕП .

26*. Tichomirova EI., Tichomirova L.A. The role of T- and B-lymphocytes in the development of antiplague immunity // International J. of Immunorehabilitation. 1994.-№1.-P.352.

27*. Tichomirova LA, Gor'kova A.V., Tichomirova E.I. The indices of the chandes of functional state of the immune system of people which are vaccinated against plague // International J. of Immunorehabilitation. 1994. - № 1. - P. 351.

28. Тихомирова Л.А., Горькова A.B., Тихомирова Е.И., Герасимова К.И. Некоторые вопросы регуляции противочумного иммунитета // Тез. докл. меж-государ. науч. конф. «100-летие открытия возбудителя чумы». - Алма-Ата, 1994.-С.78.

29. Тихомирова Е.И., Горькова A.B., Тихомирова Л.А., Челова Л.А. Механизмы формирования иммунитета к чуме // Тез. докл. межгосудар. науч. конф. «100-летие открытия возбудителя чумы». - Алма-Ата, 1994. - С.74.

30. Тихомирова Е.И., Тихомирова Л.А., Горькова А В., Герасимова К.И. Влияние вакцинации против чумы на функциональное состояние иммунной системы у людей // Актуальные проблемы разработки медицинских средств и методов сохранения боеспособности личного состава ВС: Тез. докл. науч.-практ. конф. - СПб, 1994. - С. 56-58.

31*. Задумина С.Ю., Назарова Л.С., Исупов И.В., Павлова Л.П. Тихомирова Е.И. Использование инбредных мышей для изучения протективности антигенов // ЖМЭИ. 1995. - № 6. - С. 69-70.

32. Тихомирова Е.И., Антонова O.A., Заднова СП., Щербаков A.A. Изменение содержания кортикостероидных гормонов у морских свинок, иммунизированных мембранным белком чумного микроба // Актуальные вопросы про-

филактики особо опасных и других инфекционных заболеваний: Тез. докл. на-уч.-практ. конф. - Ставрополь, 1995. - С. 256-257.

33. Тихомирова ЛА., Сероглазов В.В., Тихомирова Е.И. Функциональная активность лимфоцитов у полуденных песчанок различных популяций Волго-Уральского песчаного очага чумы // Актуальные вопросы профилактики особо опасных и других инфекционных заболеваний: Тез. докл. науч.-практ. конф. -Ставрополь, 1995. - С. 307-308.

34*. Задумина С.Ю., Назарова Л.С., Исупов И.В., Павлова Л.П., Тихомирова Е.И. Протективность антигенов чумного микроба для линейных мышей // Проблемы особо опасных инфекций. - 1995. - № 1. - С.91-99.

35. Тихомирова Е.И., Антонова O.A., Заднова СП. Динамика 11-ОКС в организме морских свинок, иммунизированных мембранным белком чумного микроба. - Саратов, 1996. - 12 с. (Депонир. в ВИНИТИ 15.04.96. № 1230. В.96) РЖ Биология: иммунология, 1996. - № 66. - 3276 ДЕП

36. Тихомирова Е.И., Растунцева Е.В., Горькова A.B., Герасимова К.И. Сравнительная информативность различных методов оценки гормонального и метаболического статуса людей в процессе формирования иммунитета к чуме // Эколого-эпидемиологический надзор за природно-очаговыми инфекциями в Северном Прикаспии. -Астрахань, 1996. - С. 157-159.

37. Антонова O.A., Тихомирова Е.И., Заднова СП., Щербаков A.A. Комплексное изучение изменений в организме морских свинок после введения мембранного белка чумного микроба //Гомеостаз и инфекционный процесс: Тез. докл. междунар. конф. - Саратов, 1996. - Ч.З. - С. 2-3.

38. Антонова O.A., Тихомирова Е.И., Растунцева Е.В., Тихомирова Л.А., Заднова СП. Оценка влияния мембранного белка 22 кД клеточной стенки Ypestis на организм экспериментальных животных // Проблемы общей биологии и прикладной экологии. - Саратов, 1997. - С 16-22.

39 . Tihomirova E.I., Tihomirova LA., Gerasimova K.I. Antiplague vaccination: effect on functional state of human immune system // Medishe Microbiologie. 1998.-Vol.6.-Sup.ll.-P.34.

40. Антонова OA, Дятлов ИА, Урусова A.C., Тихомирова Е.И. S-слои прокариот: теоретические основы и перспективы исследования // Проблемы общей биологии и прикладной экологии. - Саратов, 1998. - С. 3-10.

41. Антонова OA, Тихомирова Е.И., Заднова СП. Динамика показателей энергетического обмена в организме экспериментальных животных, иммунизированных МБ Ypestis II Проблемы санитарно-эпидемиологической охраны территории стран СНГ: Материалы междунар. науч.-практ. конф. - Саратов, 1998. -С. 166-167.

42. Тихомирова Е.И., Тихомирова Л.А., Растунцева Е.В. Сравнительный анализ изменений электрофоретической подвижности клеток иммунной системы у разных видов лабораторных животных и диких грызунов при введении вакцинного штамма чумного микроба и его антигенов // Диагностика, лечение и профилактика опасных инфекционных заболеваний. Биотехнология. Ветеринария. - Киров, 1998. - С.89-90.

43. Антонова O.A., Дятлов ИА, Кузембаева Н.Е, Урусова A.C., Тихомирова Е.И. Иммунохимические и биофизические свойства гликопротеида S-слоя чумного микроба // Изв. Сарат, гос. ун-та. Сер. биол. - 2001. - С. 134-137.

44. Никитина В.Е., Богомолова Н.В., Бугаева И.О., Пономарева Е.Г., Тихомирова Е.И. Лектины в иммунологии: Науч.-информ. пособие. - Саратов, 2001. -28 с.

45. Тихомирова Е.И., Семихатова С.Н. Состав лимфоцитов органов иммунной системы полуденной песчанки // Териофауна России и сопредельных территорий: Тез. докл. VII съезда Териол. о-ва. - М., 2002. - С. 87.

46*. Никитина В.Е., Бугаева И.О., Пономарева Е.А., Тихомирова Е.И., Богомолова Н.В. Влияние лектина Azospirillum brasilense на кинетику клеточных популяций мезентериальных лимфатических узлов и динамику цитокинового статуса экспериментальных животных // ЖМЭИ. - 2002. -№ 1 - С. 37-42.

47. Водянова Т.В., Елисеев Ю.Ю., Тихомирова Е.И. Индукция провоспали-тельных цитокинов при фагоцитозе возбудителей внутрибольничных инфекций // Материалы науч.-практ. конф., посвящ. 80-летию сан. эпид. службы. - Саратов, 2002. - С. 181-184.

48*. Тихомирова Е.И., Заднова СП., Волох O.A., Карпунина Л.В., Щербаков A.A. Лектин вакцинного штамма Yersinia pestis EVи изучение его иммунобиологических свойств //ЖМЭИ. - 2002. - №6. - С. 36-41.

49. Рудик Д.В., Тихомирова Е.И., Науменко Г.Ю. Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на активность процесса фагоцитоза // Международная информационная система по резонансным технологиям. Сборник 27. 2002 г. http://ikar.udm.ru/sb 27-l.htm.

50. Горельникова Е.А., Тихомирова Е.И., Кочергина О.В., Рудик Д.В., Му-хачева Е.В. Синтез провоспалительных цитокинов макрофагами мышей при действии лектина ЛИ Paenibacillus polymyxa 1460 //Актуальные проблемы медицины и биологии. Вып. 2. - Томск, 2003. - С. 106-107.

51. Кочергина О.В., Тихомирова Е.И., Горельникова Е.А., Рудик Д.В., Карпунина Л.В. Изменение фагоцитарной активности макрофагов при действии лектина ЛИ Paenibacillus polymyxa 1460 // Актуальные проблемы медицины и биологии. Вып. 2. - Томск, 2003. - С. 112-114.

52. Тихомирова Е.И, Водянова Т.В., Елисеев Ю.Ю. Продукция цитокинов перитонеальными макрофагами в процессе фагоцитоза возбудителей внутри-больничных инфекций //Актуальные проблемы медицины и биологии. Вып. 2. -Томск, 2003.-С. 227.

53. Бугаева И.О., Богомолова Т.В., Тихомирова Е.И. Изменение цитокино-вого статуса клеток лимфатических узлов и макрофагов под влиянием низкоинтенсивного лазерного излучения // Проблемы физической биомедицины. - Саратов, 2003. - С. 74-79.

54. Тихомирова Е.И., Тихомирова Л.А., Семихатова С.Н., Юсупова З.С. Эколого-иммунологические особенности полуденной песчанки Нижнего Поволжья //Поволжский экологический журнал. - 2003. - №1. - С. 172-177.

55. Тихомирова Е.И., Абросимова О.В., Мухачева Е.С., Карпунина Л.В. Изучение влияния лектинов бацилл на активность процесса фагоцитоза патогенных бактерий: Метод, рекомендации. - Саратов, 2004. - 12 с.

56. Тихомирова Е.И., Горельникова Е.А., Мухачева Е.С., Карпунина Л.В. Изучение влияния лектинов бацилл на синтез цитокинов макрофагами: Метод, рекомендации. - Саратов, 2004. - 12 с.

57*. Тихомирова Е.И., Абросимова О.В., Горельникова Е.А., Карпунина Л.В. Особенности фагоцитоза патогенных бактерий и индукция цитокинов на фоне действия бактериального лектина // Russsian J. of Immunology (Official Journal of Russian Society of Immunology). - 2004. - Vol. 9. - Sup.l. - P. 55.

58*. Рудик Д.В., Тихомирова Е.И., Бугаева И.О. Фагоцитарная активность макрофагов и синтез цитокинов на фоне действия НИЛИ in vivo и in vitro // Russsian J. of Immunology. - 2004. - Vol. 9. - Sup.l. - P. 47.

59*. Водянова Т.В., Елисеев Ю.Ю., Тихомирова Е.И. Цитокиновая активность макрофагов при фагоцитозе возбудителей внутрибольничных инфекций // Russsian J. of Immunology. - 2004. - Vol. 9. - Sup.l. - P. 186.

60. Rudik D.V., Tichomirova E.I., Bugaeva I.O. Influence of low level laser irradiation to phagocytosis activity and proinflammation cytokins production // Optical Technologies in Biophysics and Medicine V. Saratov Fall Meeting 2003: Pro-ceedigs of SPIE / Ed. Valery V. Tuchin. USA, Washington, 2004. - Vol. 5474. - P. 389-395.

Тихомирова Елена Ивановна

ЭКОЛОГО-ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ПРИ ИНФЕКЦИИ И ИММУНИЗАЦИИ

(экспериментальные исследования на моделях лабораторных и диких грызунов)

03.00.16 - экология 03.00.07. - микробиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Подписано в печать 10.03.05. Формат 60x84 1/16. Бумага офсетная. Гарнитура Тайме. Печать офсетная. Объем 3 п.л. Тираж 100. Заказ 3$

Типография Издательства Саратовского университета. 410012, Саратов, Астраханская, 83.

22 ДПР 2005

1108

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Тихомирова, Елена Ивановна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. Обоснование эколого-иммунологического подхода к изучению резистентности (обзор литературы).

1.1. Современные представления об адаптации и ее механизмах.

1.2. Особенности экологической стратегии и биотических связей микроорганизмов.

1.3. Экологические аспекты реактивности и резистентности макроорганизма.

1.4. Функциональная система иммунного гомеостаза.

1.5. Формирование адаптивного иммунитета к инфекции и методы его оценки.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Глава 2. Материалы и методы.

2. L Объекты исследования.

2.1.1. Экспериментальные животные.

2.1.2.Бактерии и бактериальные антигены.

2.2 Методы исследований.

2.2.1. Определение резистентности организма в тесте активной защиты животных от вирулентных бактерий.

2.2.2.Выделение органов и клеток иммунной системы грызунов.

2.2.3. Определение миграции и пролиферации стволовых кроветворных клеток костного мозга.

2.2.4.Определение электрофоретической подвижности клеток органов иммунной системы и крови.

2.2.5.Идентификация популяций лимфоцитов органов иммунной системы грызунов.

2.2.6. Определение антителообразующих клеток в селезенке.

2.2.7. Определение иммуноглобулинов в сыворотке крови.

2.2.8. Выделение альвеолярных и перитонеальных макрофагов.

2.2.9. Определение фагоцитарной активности макрофагов.

2.2.10. Определение синтеза эндогенных цитокинов.

2.2.11. Определение концентрации адениловых нуклеотидов и энергетического заряда крови.

2.2.12. Определение активности креатинфосфокиназы в плазме крови животных.

2.2.13. Выделение субклеточных фракций (ядер и митохондрий).

2.2.14. Определение 1.1-оксикортикостероидов в биологических жидкостях организма грызунов.

2.3. Методы статистической обработки полученных результатов.

Глава 3. Активность факторов естественной резистентности организма лабораторных животных при контакте с бактериальными клетками.

3.1. Аналитический обзор.

3.2. Изучение экологической стратегии разных видов бактерий по отношению к факторам естественной резистентности макроорганизма.

3.2.1. Характеристика энтеробактерий.

3.2.2. Изучение активности процесса фагоцитоза разных видов энтеробактерий.

3.2.3. Изучение индукции эндогенных цитокинов в процессе фагоцитоза разных видов энтеробактерий.

3.2.4. Характеристика стафилококков.

3.2.5. Изучение активности процесса фагоцитоза разных видов стафилококков.

3.2.6. Изучение индукции эндогенных цитокинов в процессе фагоцитоза разных видов стафилококков.

3.3. Обсуждение результатов.

Глава 4. Механизмы формирования резистентности организма лабораторных животных при введении живой чумной вакцины.

4.1. Аналитический обзор.

4.2. Миграция из костного мозга полипотентных стволовых клеток у вакцинированных животных.

4.3. Изменение популяционного состава и электрофоретической подвижности лимфоцитов органов иммунной системы и крови у лабораторных животных, иммунизированных живой чумной вакциной.

4.4. Активность процесса антителообразования при первичном и вторичном иммунном ответе в организме вакцинированных лабораторных животных.

4.5. Обсуждение результатов.

Глава 5. Механизмы формирования резистентности организма лабораторных животных при иммунизации капсульным или соматическим антигенами чумного микроба.

5.1. Аналитический обзор.

5.2. Миграция из костного мозга полипотентных стволовых клеток у иммунизированных антигенами лабораторных животных.

5.3. Изменение популяционного состава и электрофоретической подвижности лимфоцитов органов иммунной системы и крови у иммунизированных антигенами лабораторных животных.

5.4. Активность процесса антителообразования при первичном и вторичном иммунном ответе в организме иммунизированных капсульным антигеном лабораторных животных.

5.5. Обсуждение результатов.

Глава 6. Изменения в организме лабораторных животных при иммунизации лектином МБ 22 чумного микроба.

6.1. Аналитический обзор.

6.2. Оценка стрессорного действия лектина МБ 22 чумного микроба на организм экспериментальных животных.

6.3. Оценка изменений энергетического статуса организма животных, иммунизированных лектином МБ 22 чумного микроба.

6.4. Изменение популяционного состава и электрофоретической подвижности лимфоцитов органов иммунной системы и крови у иммунизированных лектином МБ 22 животных.

6.5. Обсуждение результатов.

Глава 7. Изучение естественной и приобретенной резистентности к чумной инфекции у инбредных и радомбредных грызунов.

7.1. Аналитический обзор.

7.2. Изучение естественной резистентности и уровня иммунологической защиты в организме бестимусных мышей.

7.3. Изучение естественной и приобретенной резистентности к чумной инфекции в организме инбредных мышей с различным Н-2 гаплотипом.

7.4. Сравнительное изучение популяционного состава лимфоцитов органов иммунной системы и крови инбредных и радомбредных мышей в норме и при вакцинации.

7.5. Обсуждение результатов.

Глава 8. Эколого-иммунологические особенности формирования резистентности к чумной инфекции у полуденных песчанок.

8.1. Аналитический обзор.

8.2. Изучение популяционного состава и электрофоретической подвижности лимфоцитов органов иммунной системы и крови у полуденных песчанок.

8.3. Изменения в популяционном составе лимфоцитов органов иммунной системы и крови у полуденных песчанок при иммунизации.

8.4 Обсуждение результатов.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Эколого-иммунологические аспекты резистентности при инфекции и иммунизации"

Общая характеристика работы

Актуальность проблемы. Процесс адаптации микроорганизмов к таким экологическим нишам, как организм человека или животных, формирует различные нормы реакции взаимодействующих сторон как следствие адаптациоге-неза к существованию в новых условиях среды. Эти процессы важны и для макроорганизма - сохранения его жизнедеятельности в условиях изменения характера физиологических, биохимических и генетических процессов, обеспечивающих гомеостаз. Выяснение механизмов этого взаимодействия является одной из важнейших проблем современной экологии (Казначеев, 1980; Ивантер и др., 1985; Нетрусов и др., 2004; Atlas, Bartha, 1998).

Приспособление бактерий к организму человека и животных происходит на разных уровнях биологической интеграции - от клеточного до популяционно-видового. При этом ключевая роль в адаптационных процессах принадлежит механизмам, реализующимся на клеточном уровне (Сиротинин, 1965; Громов, Павленко, 1989). Сведения о физиологической, биохимической и молекулярной структуре приспособительных реакций макроорганизма в ответ на действие адаптационных факторов микроорганизмов противоречивы и недостаточны, чтобы составить четкое представление об общих экологических закономерностях адаптации к действию возбудителей инфекций, а бактерий - к новой среде обитания. Признание сложности и многофакторности процесса адаптации предполагает выделение ряда компонентов, обеспечивающих поддержание функционального состояния гомеостатических систем и приспособление организма в целом в условиях инфекционной нагрузки со стороны микроорганизмов (Ко-вальчук, Ястребов, 2003). В связи с этим, теоретический и практический интересы представляет исследование механизмов устойчивой адаптации как под влиянием отдельных антигенных структур бактерий, так и всего комплекса факторов патогенности, обеспечивающих жизнедеятельность бактериальных клеток. Изучение механизмов повреждения и стратегии адаптации организма человека и животных при воздействии адаптационных факторов микроорганизмов дает возможность оценить степень патогенности последних и найти подходы к разработке эффективных способов профилактики различных повреждений и заболеваний (Авербах и др., 1985; Покровский и др., 1998; Ройт и др., 2000). Дальнейшее развитие представлений о механизмах адаптации как макро-, так и микроорганизма, невозможно в отрыве от изучения состояния естественной и приобретенной резистентности макроорганизма и механизмов, определяющих и регулирующих ее.

В литературе на настоящий момент отсутствуют сведения об активности ведущих механизмов естественной резистентности - процесса фагоцитоза и синтеза провоспалительных эндогенных цитокинов - в сравнительном аспекте на внедрение в макроорганизм патогенных и условно-патогенных энтеробактерий и стафилококков. Представляется возможным на основе этих сведений судить не только о способности бактерий к персистенции в организме, но и о характере экологической стратегии паразитизма отдельных видов.

Для получения новых данных об экологии безусловных патогенов макрр-организма, возбудителей природно-очаговых инфекций, важным, на наш взгляд, являлось исследование механизмов приобретенной резистентности в сравнительном аспекте при инфекции и иммунизации на примере возбудителя чумы и его антигенов. Чума остается модельной инфекцией, на возбудителе которой изучаются все универсальные механизмы, обеспечивающие вирулентные свойства бактерий (Проценко и др., 1983; Кутырев, 1997; Perry, Fetherston, 1997; Brubaker, 2000; Анисимов, 2002). Одновременно с изучением этих вопросов представляется важным исследование механизмов реализации иммуноген-ных свойств возбудителя на различных функционально-структурных уровнях иммунной системы макроорганизма.

Актуальность данной проблемы и ее состояние предопределили цель работы: исследование адаптивных систем макроорганизма по уровню естественной и приобретенной резистентности на модели лабораторных животных и грызунов из природных популяций, механизмов структурно-функциональных перестроек, участвующих в мобилизации и регуляции защитных систем организма, в процессе адаптации к действию факторов патогенности бактерий с различными экологическими особенностями паразитизма.

Основные задачи исследования

1. Обосновать эколого-иммунологический подход к изучению резистентности макроорганизма при инфекции и иммунизации и выбор наиболее адекватных методов оценки естественного и адаптивного иммунитета.

2. Оценить в сравнительном аспекте экологические стратегии преодоления основных механизмов естественной резистентности макроорганизма патогенными и условно-патогенными бактериями.

3. Установить роль миграции и пролиферации стволовых кроветворных клеток при адаптации организма экспериментальных животных к живой чумной вакцине и отдельным антигенам чумного микроба; изучить ,динамику и особенности изменений в популяционном составе лимфоцитов органов иммунной системы в процессе формирования адаптивного иммунитета к чумной инфекции.

4. Определить на клеточном уровне роль антителогенеза в эффективности приобретенной резистентности к возбудителю чумы; установить взаимосвязь между характером и уровнем изменений показателей клеточного и гуморального иммунитета к чумной инфекции и его протективной активностью.

5. Изучить адаптивные реакции организма животных на введение лектина вакцинного штамма ЕВ чумного микроба по изменению показателей гормонального, метаболического и иммунного статуса.

6. Выяснить значение тимуса в развитии у животных полноценного адаптивного иммунитета к чумной инфекции на модели инбредных бестимусных мышей; установить зависимость эффективности резистентности от генотипа животного и природы иммунизирующего агента на модели инбредных мышей разных гаплотипов.

7. Провести исследования естественной и приобретенной резистентности к чумной инфекции у диких грызунов из естественных мест обитания — полуденных песчанок.

Научная новизна. Впервые научно обоснован эколого-иммунологический подход к изучению резистентности макроорганизма при инфекции и иммунизации, позволяющий оценить формирование адаптационного иммунитета и его функциональные проявления на различных уровнях организации иммунной системы, и дана оценка основным экологическим особенностям паразитизма патогенных и условно-патогенных бактерий.

Исследованы механизмы естественной и приобретенной резистентности в организме разных видов лабораторных и диких грызунов на всех уровнях биологической интеграции: молекулярном, клеточном, органном, организменном.и популяцибнном. Впервые поэтапно охарактеризован процесс формирования эффективного адаптивного иммунитета к чумной инфекции от пускового механизма иммунопоэза - миграции и пролиферации полипотентных стволовых кроветворных клеток - до становления в организме экспериментальных животных состояния невосприимчивости к возбудителю чумы. Установлено, что при адаптации организма экспериментальных животных к живой чумной вакцине и капсульному антигену чумного микроба происходит дозозависимое усиление миграции из костного мозга и пролиферации стволовых кроветворных клеток. Показано, что изменения в популяционном составе лимфоцитов органов иммунной системы адекватно отражают адаптивные сдвиги при формировании резистентности к чумной инфекции в организме привитых живой чумной вакциной мышей.

Впервые на клеточном уровне изучена активность антителогенеза в динамике формировании резистентности к чумной инфекции. Установлен факт незначительной стимуляции процессов пролиферации и дифференцировки В-лимфоцитов в антителообразующие клетки на фоне эффективной резистентности при однократном воздействии на организм экспериментальных животных живой чумной вакциной или капсульным антигеном чумного микроба.

Новым является сравнительный анализ уровня естественной и приобретенной резистентности к чумной инфекции у линейных животных разных гап-лотипов. Впервые установлено, что в основе различий естественной резистентности и инфекционной чувствительности у двух изученных подвидов полуденной песчанки лежат механизмы дифференцировки зрелых форм лимфоцитов и разная степень их функциональной активности.

Научно-практическая значимость. Предложено сочетание метода регистрации электрофоретической подвижности лимфоцитов органов иммунной системы и крови с последующей идентификацией поверхностных маркеров в клеточных фракциях, что позволяет получить их функциональные характеристики по пролиферативной активности и степени зрелости. Такое комплексное исследование состава лимфоцитов позволяет получить иммунологические параметры, которые могут быть использованы для оценки иммунного статуса организма привитых против чумы животных. Разработан эффективный диагно-стикум и внесены собственные модификации в метод пассивного локального гемолиза в геле для определения антителообразующих клеток в иммунном к чуме организме. Предложенная методика использования модели Р.В. Петрова и P.M. Хаитова (1972) с введением в организм экспериментальных животных антигенов чумного микроба через 2-3 часа после тотального облучения рекомендована для изучения вопросов стимуляции процессов миграции и пролиферации ПСКК в иммунном к чуме организме. Полученные данные имеют значение для оценки результатов опытов при отборе новых вакцинных штаммов, составлении рациональных схем иммунизации, при экспериментальной разработке вопросов стимуляции иммуногенеза к чуме.

Внедрение результатов работы в практику. По материалам экспериментальных исследований составлены методические рекомендации: "Применение разделительного клеточного электрофореза с последующим тестированием фракций методами розеткообразования для изучения популяционного состава лимфоцитов в организме вакцинированных против чумы животных" и "Использование хлористого хрома в качестве активатора насадки капсульного антигена чумного микроба на нативные эритроциты для определения специфических АОК при иммунизации против чумы в эксперименте", которые были одобрены Ученым Советом ВНИПЧИ "Микроб" (протокол № 4 от 20.03.90) и утверждены директором института 20.03.90 года.

Издано в соавторстве научно-информационное пособие «Лектины в иммунологии» (Саратов, изд-во СГМУ, 2001), методические рекомендации «Изучение влияния лектинов на активность процесса фагоцитоза патогенных бактерий» и «Изучение влияния лектинов на синтез цитокинов макрофагами» (Саратов, изд-во СГУ, 2004).

Материалы диссертационного исследования внедрены в учебный процесс и используются при чтении лекций общих курсов «Микробиология» и «Иммунология», специальных курсов «Иммунологические аспекты экологии живых организмов», «Медицинская микробиология», «Современные методы иммунологических исследований», «Молекулярная иммунология» студентам биологического факультета СГУ им. Н.Г. Чернышевского; при чтении лекций на кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии СГМУ; при чтении лекций общих и специальных курсов на кафедре микробиологии и санветэкспертизы СГАУ им. Н.И. Вавилова; на курсах специализации врачей и биологов по особо опасным инфекциям и курсах усовершенствования врачей-бактериологов противочумной системы МЗ РФ в РосНИПЧИ «Микроб».

Апробация работы. Материалы исследования были представлены и обсуждены на 28 научных конференциях и форумах различного ранга:

- Всесоюзном совещании молодых ученых и специалистов противочумных учреждений СССР (Саратов, 1986);

- II Всесоюзной конференции "Актуальные вопросы теоретической и прикладной инфекционной иммунологии. Механизмы противоинфекционного иммунитета" (Саратов, 1987);

- итоговых научных конференциях ВНИПЧИ "Микроб" (Саратов, 1983, 1989);

- конференции молодых ученых и специалистов учреждений, подведомственных РЭУ МЗ СССР, "Эпидемиология, микробиология и иммунология бактериальных и вирусных инфекций" (Ростов-на-Дону, 1989);

- Всесоюзной конференции "Молекулярные механизмы противоинфекционного иммунитета" (Звенигород, 1990);

- научно-практической конференции "Эколого-эпидемиологический надзор за природно-очаговыми инфекциями в Северном Прикаспии" (Астрахань, 1996);

- российских конференциях "Гомеостаз и инфекционный процесс" (Саратов, 1996,1998);

- юбилейной научной конференции, посвященной 90-летию СГУ и СГМУ (Саратов, 1997);

- научно-практической конференции, посвященной 100-летию образования противочумной службы России (Саратов, 1997);

- 7th International Congress on Yersinia (Голландия, 1998);

- международной научно-методической конференции «Экология - образование, наука и промышленность» (Белград, 2002);

- научно-практической конференции с международным участием «Окружающая среда и здоровье» (Саратов, 2002);

- первой региональной конференции «Стратегия взаимодействия микроорганизмов с окружающей средой» (Саратов, 2002);

- международной конференции «Цитокины. Воспаление. Иммунитет» (Санкт-Петербург, 2002);

- Y съезде иммунологов и аллергологов России (Санкт-Петербург, 2003);

- «International workshop on optical technologies in biophysics and medicine V which were held in Saratov» (Саратов, 2003);

- объединенном иммунологическом форуме (Екатеринбург, 2004);

- научных конференциях биологического факультета СГУ (Саратов, 1996 -2004) и др.

Декларация личного участия автора. Экспериментальные исследования выполнялись автором лично или при непосредственном участии в составе научных групп в период с 1983 по 2004 гг. Обработка полученных данных, их интерпретация и оформление осуществлены автором самостоятельно. В совместных публикациях вклад автора составил 50-70%.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 66 научных работ.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 420 страницах текста, содержит введение, восемь глав, заключение, выводы и библиографический список, включающий 422 отечественных и 204 иностранных источника. Работа иллюстрирована 55 рисунками и 52 таблицами.

Заключение Диссертация по теме "Экология", Тихомирова, Елена Ивановна

выводы

1. Выявлен характер изменений активности основных механизмов естественной резистентности при контакте с разными видами бактериальных клеток и установлены закономерности в зависимости от антигенного состава и особенностей экологической стратегии этих бактерий. Показана зависимость числа активных макрофагов от времени их инкубации с микробными клетками, биологических характеристик бактерий и их адаптивных возможностей.

2. Условно-патогенные микроорганизмы {Serratia sp., Citrobacter sp., E. agglomerans, E. coli K-13 и Ca52, S. haemolyticus и S. epidermidis) способны в разной степени противостоять активности процесса фагоцитоза, что сопровождается их частичным перевариванием в макрофагах. Отмечена видоспецифиче-ская динамика синтеза ИЛ-1 и ФНО-а. Для патогенных бактерий (У. enterocolitica, Е. coli ЭПКП О-127, S. aureus 209-Р и S. aureus 100 б) незавершенный фагоцитоз в макрофагах сопровождался угнетением синтеза основного провос-палительного цитокина ИЛ-1. Цитопатический характер действия клинических штаммов энтеробактерий и микробных клеток Y. enterocolitica приводит к появлению к 48 часам процесса фагоцитоза большого числа разрушенных макрофагов.

3. Формирование адаптивного иммунитета к чумной инфекции в организме мышей, иммунизированных живой чумной вакциной или капсульным антигеном чумного микроба, связано с активацией начального этапа иммунопо-эза - усилением миграции из костного мозга и пролиферации полипотентных стволовых кроветворных клеток. Основной соматический антиген, не защитивший мышей от гибели после заражения вирулентным штаммом чумного микроба, не влиял на процессы миграции и пролиферации ПСКК.

4. Введение в организм мышей живой чумной вакцины сопровождается фазными изменениями популяционного состава лимфоцитов органов иммунной системы и их электрофоретической подвижности. В тимусе уменьшение числа

Т-клеток в ранние сроки иммуногенеза сменяется последующим превышением исходного значения к концу месяца. В периферических органах иммунной системы (селезенке, лимфатических узлах) и крови мышей в первую неделю формирования адаптивного иммунитета увеличивается абсолютное и относительное содержание Т-лимфоцитов. К 14 суткам соотношение Т- и В-клеток нормализуется. Понижение ЭФП в ранние сроки и повышение в более поздние свидетельствует об активации процессов пролиферации и дифференцировки лимфоцитов.

5. Выявлена взаимосвязь изменений популяционного состава лимфоцитов органов иммунной системы и крови с динамикой развития состояния резистентности к чумной инфекции в тесте активной защиты при заражении вирулентным штаммом чумного микроба. Между численностью и соотношением лимфоцитов и уровнем иммунного ответа в организме вакцинированных мышей существует прямая количественная взаимосвязь: с повышением числа клеток, участвующих в иммунном ответе, повышается эффективность защиты при введении в организм возбудителя чумы.

6. Количественная оценка активности антителообразования в процессе первичного иммунного ответа к возбудителю чумы не является показателем эффективности адаптивного иммунитета. Состояние резистентности к чумной инфекции отмечено в организме мышей, однократно привитых живой чумной вакциной или капсульным антигеном чумного микроба, при незначительном количестве специфических АОК и относительно низких титрах специфических гуморальных антител. Вторичный иммунный ответ на капсульный антиген чумного микроба сопровождается значительным увеличением специфических АОК и более высоким уровнем антител в сыворотке крови.

7. Выявлена значительная активация процессов пролиферации и дифференцировки Т-лимфоцитов и формирование основного пула иммунокомпетент-ных клеток в органах иммунной системы и крови животных на 7 сутки после введения капсульного антигена чумного микроба, что свидетельствует о его тимусзависимом характере. Введение в организм экспериментальных животных основного соматического антигена чумного микроба сопровождается увеличением пролиферативного пула В-лимфоцитов, отражающего их поликло-нальную активацию, при незначительной стимуляции процессов пролиферации и дифференцировки Т-лимфоцитов, что подтверждает тимуснезависимый характера данного антигена.

8. Выделенный из внешней мембраны Y.pestis ЕВ лектин, белок с м.м. 22 кДа, при введении в организм животных вызывает изменения содержания 11 -ОКС и энергетическую перестройку в процессе их адаптации. Обнаружение специфических антител в сыворотке крови животных и активация процессов пролиферации и дифференцировки лимфоцитов в процессе формирования адаптивного иммунитета свидетельствует о достаточной его иммуногенности. Данный антиген может рассматриваться как дополнительный фактор, обеспечивающий контакт патогена с клетками макроорганизма, и перспективный компонент комбинированной чумной вакцины.

9. Установлено обязательное участие тимусзависимой системы лимфоцитов в развитии полноценного адаптивного иммунитета к чумной инфекции. У мышей, лишенных тимуса, введение живой чумной вакцины или капсульного антигена чумного микроба не вызывает защиты от последующего подкожного заражения вирулентным штаммом возбудителя чумы.

10. Показаны различия в уровне естественной и приобретенной резистентности к чумной инфекции инбредных мышей разных гаплотипов. Введение живой чумной вакцины обеспечивает формирование полноценного адаптивного иммунитета только у мышей линии СВА. Уровень приобретенной резистентности к чумной инфекции при иммунизации капсульным антигеном был ниже в организме мышей гаплотипа Н-2Ь, чем у мышей гаплотипов Н-2а и H-2d. Сдвиги в популяционном составе лимфоцитов наиболее выражены в процессе формирования адаптивного иммунитета к чумной инфекции у мышей линии C57BL/6

Y с генетически детерминированным уровнем иммунологической защиты при заражении вирулентным штаммом чумного микроба.

11. В основе различий естественной резистентности и инфекционной чувствительности у полуденных песчанок с различных мест обитания лежат механизмы дифференцировки зрелых форм лимфоцитов и разная степень их функциональной активности. Показана зависимость функциональной активности лимфоцитов органов иммунной системы от генетически детерминированной чувствительности песчанок разных подвидов к антигенам чумного микроба.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В структуре современной экологии, как комплексной научной дисциплины, выделена биоэкология, изучающая экологию систематических групп, в том числе и прокариот (Реймерс, 1994). Значительным разделом биоэкологии является системная экология, которая, в свою очередь, подразделена на эндоэколо-гию и экзоэкологию. Эндоэкология рассматривает вопросы молекулярной экологии, экологии клеток и тканей, физиологической экологии индивида и консорциумов; экзоэкология включает разделы аутэкологии особей, популяцион-ной экологии, экологии вида, синэкологии и т.д. (Бигон и др., 1989). Следовательно, выбранное нами направление исследований резистентности макроорганизма при инфекционной и антигенной нагрузке непосредственным образом связано с решением некоторых вопросов физиологической экологии, аутэкологии и популяционной экологии. Поскольку в работе рассматривается резистентность макроорганизма с точки зрения экологической ниши для существования некоторых патогенных и условно патогенных бактерий, следовательно, эти вопросы непосредственно относятся к экологии прокариот, ведущих паразитический образ жизни.

Биологическая целесообразность убеждает в том, что используя хозяина как экологическую нишу и питательный субстрат, паразиту выгоднее как можно дольше находится в ней, и он пытается осуществить это латентно, без прямого поражения хозяина, без манифестных проявлений болезни (Бухарин, Литвин, 1997). В этом случае говорят о "сбалансированной патогенности" (Smith, 1995). Однако, не ясно, отражает ли это состояние отбор возросшего уровня генетически определенной устойчивости в популяции хозяина или представляет эволюционно закрепившуюся норму (Жданов, Львов, 1984). Оценка паразитизма - этого безусловного успеха эволюции с диалектической точки зрения, выявляет плюсы и минусы данного явления. К наиболее очевидным преимуществам паразитизма следует отнести метаболические, питательные и репродуктивные (Бергер, 1987). Паразитирующий микроорганизм получает от хозяина ряд метаболитов без значительных энергетических затрат со своей стороны. И поскольку патоген располагает собственными клеточными механизмами и муль-тиферментными системами для метаболической активности, то он лишь относительно зависит от хозяина (Адамов, 1994). К негативным моментам паразитизма как явления следует отнести очевидную зависимость развития патогена от хозяина .При отсутствии подходящего хозяина патоген может просто не выжить или вынужден перейти во внешнюю среду, находясь там некоторое время до обретения соответствующей экологической ниши. Вероятно, этим можно объяснить, почему многие бактериальные виды являются условно патогенными микроорганизмами или факультативно паразитирующими организмами, способными выживать (персистировать) как внутри, так и вне хозяина (Бухарин, Литвин, 1997).

Рассматривая паразитизм бактерий как образ жизни, следует отметить высокую динамичность жизненных устремлений симбионтов, что проявляется в высоком уровне адаптации к реакциям хозяина. В отличие от обычной окружающей среды хозяин для паразита - это высокоспециализированная среда обитания, которая активно реагирует на инфект (патоген). Эти ответные реакции в виде воспаления, фагоцитоза, антителогенеза являются препятствием для патогена, который для выживания в клетке должен совершенствовать свои тактические приемы, уклоняясь или преодолевая эти барьеры. В свою очередь хозяева находятся под постоянным давлением со стороны паразита, который является главным селектирующим фактором их развития и устойчивости (Адамов, 1994).

Особый смысл приобретает экологическая природа паразитизма, понимание которой невозможно без детального изучении молекулярных механизмов взаимодействия паразита и хозяина. Учитывая важное селективное значение факторов уклонения паразита от защитной системы хозяина (Gotschlich, 1983), совершенно очевидно, что факторы патогенности паразита предназначены прежде всего не для поражения хозяина, а для сопряжённой эволюции, взаимной адаптации, а следовательно - персистенции патогена (Бухарин, Усвяцов, 1966). При этом варьирующими признаками паразита являются, как правило, антигенность (вирулентность), а у хозяина - иммунокомпетентность.

Экологический аспект паразитизма включает изучение особенностей распространения паразита как среди популяции хозяина, так и внутри организма (места локализации); оценку динамики роста популяций паразита и хозяина; изучение регулирующего действия факторов внешней среды и т.д. (Кеннеди, 1978). По мнению Н. Smith (1995), наряду с хорошо изученными вопросами па-тогенности (адгезии к эпителиальным клеткам, продукции токсинов) имеются разделы недостаточно изученные. Применительно к обсуждаемой проблеме — это выяснение иммунных механизмов длительного персистирования, поскольку патогенность - не только (иногда - не столько) свойство микроорганизма, но и функция организма хозяина, иммунный статус которого "разрешает" тот или иной патогенез инфекции (Гамалея, 1951). Совокупность этих доводов, даже при дискуссионности некоторых из них, убеждает, насколько безграничны экологические возможности микроорганизмов на фоне привычно выделяемых категорий. В. Д. Тимаков еще в 1977 г. писал: "Патогенность - более широкое понятие, чем паразитизм, а группа патогенных микробов более обширна, чем группа микробов-паразитов". Именно недооценка экологической гибкости и потенциала изменчивости микроорганизмов в природе — причина периодических сенсаций, связанных с появлением "новых" возбудителей инфекционных заболеваний, еще вчера считавшихся вполне безопасными. Так появляются (точнее - проявляются) новые нозоформы, вызванные микроорганизмами, широко распространенными в природе. Удивляют и новые этиологические агенты давно известных нозоформ, например, условно патогенные бактерии (Бухарин, Литвин, 1997). Круг таких "новых" возбудителей старых инфекций непрерывно расширяется; в него входят многочисленные представители семейства Enterobacteriaceae - клебсиеллы, серрации, гафнии, энтеробактер, цитробактер, эшерихии, протеи, а также неферментирующие бактерии родов Pseudomonas и Acinetobacter. Эпидемиологическая значимость их резко возрастает, когда человек вводит эти микроорганизмы в непосредственное свое окружение, создавая для них оптимальные условия обитания и накопления. Возбудителей таких инфекций С. В. Прозоровский и др. (1987) называет "продуктом цивилизации".

Все вышесказанное свидетельствует о несомненной актуальности выяснения вопросов формирования резистентности макроорганизма на фоне антигенной и инфекционной нагрузки.

На основании данных литературы и с позиций междисциплинарного подхода к решению проблемы были сформулированы основные положения эколо-го-имунологического подхода к изучению резистентности макроорганизма:

1 - необходимость исследований механизмов формирования адаптационного иммунитета и его функционального проявления при инфекционной и антигенной нагрузке на различных уровнях организации биологических систем: молекулярном, клеточном, органном и организменном;

2 - использование в исследованиях различных биомоделей — традиционных лабораторных животных, инбредных мышей разных гаплотипов и диких грызунов из природных популяций, что позволит установить роль генотипа в реализации адаптивных иммунных механизмов и выяснить особенности формирования резистентности на популяционном уровне;

3 - исследование механизмов устойчивой адаптации как под влиянием отдельных антигенных структур бактерий, так и всего комплекса факторов патогенности, обеспечивающих жизнедеятельность бактериальных клеток, на основании чего представляется возможным судить не только о способности бактерий к персистенции в организме, но и о характере экологической стратегии паразитизма отдельных видов.

На первом этапе экспериментальных исследований нами были отобраны клинические штаммы энтеробактерий и стафилококков, характеризующиеся множественной лекарственной устойчивостью, детерминированной плазмида-ми, и широким набором биологических свойств, обеспечивающих им потенциальную персистенцию в макроорганизме. В качестве контроля для дальнейших экспериментов были взяты музейные культуры E.coli и S. aureus. Была изучена активность процесса фагоцитоза перитонеальными и альвеолярными макрофагами энтеробактерий: Е. agglomerans, Serratia spp, Citrobacter spp, E. coli ЭПКП 0-127, E. coli Ca-52, E.coli K-13, Y. enterocolitica. Анализ результатов позволил выявить с одной стороны - зависимость числа активных ПМФ от времени их инкубации с микробными клетками, а с другой - от биологических характеристик энтеробактерий, их адаптивных возможностей. При этом активность процесса фагоцитоза большинства энтеробактерий была значительно ниже, чем контрольного штамма E.coli К-13 - представителя нормальной микрофлоры. Число активных макрофагов при фагоцитозе контрольных микробных клеток сохранялось достаточно высоким до 48 часов наблюдения, достоверно не отличаясь от числа таковых через 24 часа и 12 часов. При фагоцитозе же других энтеробактерий практически во всех случаях наблюдения через 48 часов число активных ПМФ и АМФ достоверно снижалось, по сравнению с данными через 24 часа инкубации с микробными клетками.

Процесс фагоцитоза клинического штамма Serratia sp. сопровождался незначительной активацией ПМФ и АМФ и частичным перевариванием микробных клеток на фоне активной индукции ФНО-а, максимальная концентрация которого отмечена к 24 часам, и ИЛ-1 в ПМФ. В динамике фагоцитоза ПМФ и АМФ клинического штамма Citrobacter sp. индукция ИЛ-1 была незначительной, что сочеталось с низкой активностью макрофагов и незавершенностью или частичным перевариванием микробных клеток. Индукция синтеза ФНО-а макрофагами сопровождалась увеличением концентрации этого цитокина к 24 часам, как и в случае фагоцитозе Serratia sp. Характерной особенностью фагоцитоза микробных клеток Е. agglomerans была повышенная индукция цитокинов к 12 часам процесса как в перитонеальных, так и в альвеолярных макрофагах. К 24 часам содержание цитокинов было значительно ниже по сравнению с аналогичными данными для фагоцитоза других энтеробактерий. При этом отмечена и незначительная динамика активности макрофагов, что приводило к частичному перевариванию микробных клеток Е. agglomerans в ПМФ и незавершенному фагоцитозу в АМФ.

При фагоцитозе как клинического антибиотикоустойчивого штамма Е. coli ЭПКП 0-127, так и контрольных музейных культур Е. coli К-13 и Е. coli Са52, отмечена сходная индукция ИЛ-1 и ФНО-а в ПМФ и АМФ. Содержание ИЛ-1 к 24 часам процесса фагоцитоза кишечных палочек было одинаково высоким. Аналогичные результаты были получены и для ФНО-а при фагоцитозе Е. coli ЭПКП и Е. coli К-13, в отличие от низкой индукции этого цитокина бактериями Е. coli Ca-52. Однако динамика активности макрофагов была более выраженной по отношению к представителям нормальной микрофлоры Е. coli К-13 и Е. coli Ca-52, что сопровождалось более завершенным фагоцитозом. Индукция провоспалительных цитокинов в ПМФ и АМФ при фагоцитозе микробных клеток Y. enterocolitica была незначительной. Увеличение содержания ИЛ-1 к 24 часам однако не способствовало увеличению активности ПМФ и степени завершенности фагоцитоза. Кроме того, был установлен цитопатический характер действия клинических штаммов энтеробактерий и микробных клеток Y. enterocolitica на макрофаги к 48 часам процесса фагоцитоза, сопровождающийся появлением большого числа разрушенных клеток.

Сравнение индукции провоспалительных цитокинов при фагоцитозе клинических штаммов стафилококков позволило отметить сходную динамику: небольшое увеличение количества цитокинов к 2-м часам процесса фагоцитоза и резкое снижение их количества к концу срока наблюдения. Это сопровождалось снижением числа активных макрофагов и низким индексом завершенности фагоцитоза, показателем частичного переваривания микробных клеток. При завершенном фагоцитозе бактерий контрольного антибиотикочувствительного штамма S. aureus 209-Р была отмечена и выраженная индукция цито-кинов, содержание которых резко возрастало к 24 часам. Процесс фагоцитоза клинического антибиотикоустойчивого штамма S. aureus 100 б сопровождался незначительной индукцией ИЛ-1 как в ПМФ, так и в АМФ по сравнению с аналогичными данными для других видов стафилококков. Особенно выраженной была разница в содержании ИЛ-1 по сравнению с процессом фагоцитоза антибио-тикочувствительного штамма S. aureus 209-Р. Это позволяет предположить блокирование синтеза основного провоспалительного цитокина в случае фагоцитоза этих микробных клеток, что негативно сказывается на активации механизмов естественной резистентности и характеризуется незавершенностью процесса фагоцитоза. В то же время индукция ФНО-а была одинаково высокой для штаммов S. aureus и в перитонеальных и в альвеолярных макрофагах. При фагоцитозе S. epidermidis менее выраженная динамика активности макрофагов и невысокие значения индекса завершенности сопровождались увеличением синтеза ИЛ-1 и снижением содержания ФНО-а до контрольных значений к 24 часам и в ПМФ и в АМФ. В то же время отмечено максимальное содержание ФНО-а в первые часы контакта макрофагов с клетками S. epidermidis с последующим снижением концентрации. Аналогичная индукция ФНО-а в ПМФ и АМФ отмечена и в процессе фагоцитоза микробных клеток S. haemolyticus. Максимальное содержание ИЛ-1 при фагоцитозе S. haemolyticus в ПМФ отмечено через 6 часов, а в АМФ - через 12 часов с последующим снижением к 24 часам. При этом число активных макрофагов и значения индекса завершенности фагоцитоза были выше, чем для S. aureus.

Проведенные исследования выявили характер изменений активности основных механизмов естественной резистентности при контакте с разными видами бактериальных клеток и основные закономерности в зависимости от антигенных характеристик бактерий. Проведение сравнительного анализа данных по активности макрофагов, степени завершенности процесса фагоцитоза микробных клеток и индукции цитокинов позволило судить о характере экологической стратегии отдельных видов бактерий по преодолению основных механизмов естественной резистентности.

Для получения новых данных об экологии безусловных патогенов макроорганизма были изучены механизмы приобретенной резистентности в сравнительном аспекте при инфекции и иммунизации на примере возбудителя чумы и его антигенов. Исследование механизмов реализации иммуногенных свойств возбудителя было проведено на различных функционально-структурных уровнях иммунной системы организма разных видов лабораторных животных и ин-бредных мышей различных гаплотипов. Было показано, что при введении экспериментальным животным живой чумной вакцины в дозе 5 и 500 тыс. клеток, происходит выраженная стимуляция начального этапа иммунопоэза — усиление миграции из костного мозга и пролиферации стволовых кроветворных клеток и, соответственно, увеличение числа эндогенных колоний в селезенке экспериментальных животных. Значение активности процессов миграции и пролиферации ПСКК для формирования резистентности к возбудителю чумы подтверждается наличием у этих животных состояния выраженной невосприимчивости к чумной инфекции.

Изучение изменений в популяционном составе лимфоцитов органов иммунной системы и крови экспериментальных животных после иммунизации живой чумной вакциной позволило установить появление молодых форм с высоким содержанием специфического Т-клеточного рецептора, что подтверждается снижением их ЭФП и является следствием активации процессов пролиферации кортикальных тимоцитов. В эти же сроки отмечена интенсивная миграция из тимуса зрелых тимоцитов с высокой ЭФП в кровь и периферические органы иммунной системы. Постепенное восстановление ЭФП основной массы клеток тимуса и превышение контрольных значений на 21-е сутки связано, вероятно, с усилением процессов дифференцировки тимоцитов. В процессе формирования резистентности экспрессия рецепторов происходит и на части кортикальных тимоцитов, с повышением ЭФП которых увеличивается и процент

СБ2+-клеток. Следует отметить, что уже на 14-е сутки после иммунизации мышей число СБ2+-клеток в тимусе достоверно превышает контрольное значение и свидетельствует о повышении иммунокомпетентности в отношении изучаемой инфекции.

Абсолютное содержание зрелых Т- и В-лимфоцитов селезенки у иммунизированных живой чумной вакциной животных варьировало довольно широко, коэффициент их численности составлял соответственно 26 и 34,8%, что связано с происходящим после антигенной стимуляции обновлением клеточных популяций в результате рециркуляции и дифференцировки. Варьирование относительного содержания Т- и В-клеток выражено было в значительно меньшей степени: коэффициент вариации составлял соответственно 13,3 и 16,4%, т.е. отношение Т- и В-лимфоцитов стабилизировалось более четко, чем их абсолютная численность. Однако в процессе иммуногенеза к чуме дважды изменялось соотношение лимфоцитов в сторону преобладания Т-клеток: в ранние и поздние сроки иммуногенеза, что свидетельствовало о стимуляции клеточного звена иммунитета. Аналогичные изменения были отмечены и для лимфоцитов лимфатических узлов мышей в процессе формирования резистентности к чуме. Установлены наиболее выраженные изменения клеточного состава лимфоузлов в первые дни после иммунизации, когда происходило снижение ЭФП Т-лимфо-цитов и одновременное увеличение их относительного содержания. В то же время и по соотношению Т- и В-лимфоцитов и их электрофоретической подвижности, уже к 14 суткам иммуногенеза к чуме состав лимфоцитов лимфатических узлов мышей соответствовал контрольным показателям, т.е. по сравнению с другими органами иммунной системы нормализовался быстрее.

Нами отмечено также снижение ЭФП лимфоцитов крови в первые сутки после введения живой чумной вакцины в организм экспериментальных животных. Для Т-лимфоцитов это снижение ЭФП носило кратковременный характер; уже к 3 суткам основная часть Т-клеток восстанавливала ЭФП, одновременно увеличивалось в популяционном составе число С02+-клеток, что являлось отражением интенсивной миграции в кровяное русло зрелых Т-лимфоцитов. В-лимфоциты частично восстанавливали ЭФП к 7 суткам после иммунизации, число зрелых В-клеток достоверно увеличивалось лишь на 14 сутки. Это свидетельствует о более поздних процессах пролиферации этой популяции лимфоцитов в иммунокомпетентных органах и соответственно более поздней миграции в кровь. Определение индекса соотношения зрелых Т- и В-клеток в составе лимфоцитов крови показало преобладание Т-лимфоцитов с 1 по 7 сутки иммуногенеза к чуме. На 14 сутки индекс соотношения основных популяций лимфоцитов соответствовал контрольному, хотя абсолютное количество зрелых Т- и В-лимфоцитов было достоверно больше, чем у интактных животных. Формирование резистентности экспериментальных животных к чуме, начиная с 7 суток иммуногенеза и в последующие сроки исследования, сопровождалось активной миграцией в кровь из лимфоидных органов лимфоцитов, имеющих различную функциональную значимость. Изменения популяционного состава лимфоцитов крови в динамике иммуногенеза к чуме, по нашим данным, наиболее полно отражает иммунологические сдвиги, происходящие в целом в организме экспериментальных животных при формировании у них резистентности.

Полученные нами результаты позволяют сделать вывод о незначительной стимуляции процессов дифференцировки В-лимфоцитов в АОК при однократном воздействии на организм экспериментальных животных живой чумной вакциной. Такое антителообразование на фоне четко выраженной резистентности животных к чумной инфекции является подтверждением положения о ведущей роли Т - системы иммунитета. Формирование резистентности к возбудителю чумы при двукратном воздействии на организм живой чумной вакциной сопровождается более выраженным участием В - системы лимфоцитов, что подтверждается значительным увеличением числа специфических АОК в результате активации процессов дифференцировки лимфоцитов в плазматические клетки - продуценты антител.

Для установления роли отдельных антигенных структур патогена в формировании резистентности к чумной инфекции нами было проведено аналогичное поэтапное изучение иммуногенеза на клеточном уровне, от пускового механизма ПСКК до становления в организме экспериментальных животных состояния невосприимчивости к чумной инфекции, на фоне иммунизации капсульным антигеном или основным соматическим антигеном чумного микроба. Результаты проведенных исследований показали, что введение мышам различных доз капсульного антигена чумного микроба (2 и 20 мкг) приводило к усилению эндоколонизации селезенки у отдельных животных. При этом, чем больше животных в группе было с повышенным числом КОЕ в селезенке, тем больше их выживало в опыте контрольного заражения: коэффициент корреляции высокой степени достоверности (г = 0,99 + 0,08). Основной соматический антиген, совершенно не защитивший мышей от гибели после заражения вирулентным штаммом 231 чумного микроба, практически не влиял и на процессы миграции и пролиферации ПСКК по сравнению с результатами в контрольной группе.

Исследование динамики титров антител к фракции I в сыворотке крови однократно привитых животных выявило относительно низкие уровни гуморальных антител. Так, у животных, иммунизированных 20 мкг капсульного антигена, титры антител были 1:64 - 1:256, при этом титры в РНАг в несколько раз превышали показатели в РИГА. Увеличение числа АОК у двукратно привитых животных сопровождалось у них более высоким уровнем антител в сыворотке крови. Полученные результаты позволяют сделать вывод о незначительной стимуляции процессов пролиферации и дифференцировки В - лимфоцитов в АОК при однократном воздействии на организм экспериментальных животных капсульным антигеном чумного микроба. Незначительная стимуляция антителообразования на фоне формирования резистентности к чумной инфекции у экспериментальных животных является подтверждением положения о ведущей роли Т - системы иммунитета. Вторичное введение в организм экспериментальных Животных фракции I сопровождается увеличением в селезенке числа специфических антителообразующих клеток, что свидетельствует об активации процессов дифференцировки В - лимфоцитов в плазматические клетки — продуценты антител.

Данные об изменениях в популяционном составе лимфоцитов органов иммунной системы и крови животных, иммунизированных капсульным антигеном, значительная активация процессов пролиферации и дифференцировки Т-лимфоцитов и формирование основного пула иммунокомпетентных клеток к 7 суткам иммуногенеза позволили нам сделать предположение о тимусзависимом характере данного антигена. Аналогичные исследования, проведенные при введении в организм основного соматического антигена, выявили противоположную закономерность: при незначительной активации процессов пролиферации и дифференцировки Т-клеток отмечены резкие изменения в популяционном составе В-лимфоцитов, увеличение их пролиферативного пула, отражающего по-ликлональную активацию этих клеток. Полученные результаты являются подтверждением тимуснезависимого характера данного антигена. Однако активация процессов пролиферации и дифференцировки В-клеток не сопровождалась увеличением эффективности гуморальной формы адаптивного иммунитета.

Проведенные нами исследования, связанные с изучением реакций организма экспериментальных животных на введение лектина МБ 22 чумного микроба, позволили установить основные закономерности формирования адаптивного иммунитета к этому антигену. Были определены наиболее информативные для оценки адаптивного иммунитета показатели изменений гормонального, метаболического и иммунного статуса морских свинок, иммунизированных лек-тином. Выявлены изменения в содержании кортикостероидных гормонов, изменения популяционного состава лимфоцитов при формировании адаптивного иммунитета, а также наличие антител к. исследуемому препарату в сыворотках крови с титрами от 1:200 до 1:400. Иммунизация экспериментальных животных этим лектином вызывала формирование в их организме достаточно эффективной резистентности, проявляющейся в выживании 40% животных при экспериментальной чумной инфекции. Результаты изучения энергетического статуса организма'иммунизированных морских свинок свидетельствовали о быстрой и стойкой энергетической перестройке организма. Изменение содержания адени-ловых нуклеотидов и активности КФК происходило в течение первых двух недель иммуногенеза. Эти данные свидетельствуют о стойкой энергетической перестройке организма в процессе адаптации к исследуемому препарату. Наблюдаемые изменения свидетельствовали о том, что лектин МБ 22 чумного микроба обладает достаточной иммуногенностью и вызывает активацию процессов пролиферации и дифференцировки лимфоцитов в процессе иммуногенеза. Результаты исследований дают основание заключить, что выделенный из внешней мембраны Y.pestis ЕВ лектин может рассматриваться как новый дополнительный фактор, обеспечивающий контакт патогена с клетками макроорганизма, и как перспективный компонент комбинированной чумной вакцины.

Исследования, выполненные в сравнительном аспекте на инбредных и ра-домбредных мышах, позволили установить принципиально важные факты о генетически детерминированных различиях в восприимчивости к чумной инфекции. Результаты этого раздела работы, на наш взгляд, явились доказательством того, что при формировании адаптивного иммунитета к чуме принципиальное значение имеют генетические особенности гаплотипа макроорганизма, индивидуальное функционирование клеточных и гуморальных факторов защиты на начальных этапах инфекции играют большую роль в проявлении вирулентности бактерий, их роста и размножения. Было показано, что естественная резистентность инбредных мышей к чумному микробу генетически детерминирована, так как она неравнозначна у животных разных гаплотипов, но близка у особей одного гаплотипа. Наименьшие изменения структуры внутренних органов были у мышей с гаплотипом Н-2к и Н-2а (CBA/Lac и A/Sn), более значительные - у животных с гаплотипом H-2d и H-2b (BALB/c, CC57W, C57BL/6, B10CW). Самыми резистентными к чумной инфекции оказались мыши линии

СВА, а самыми чувствительными - C57BL/6. При анализе результатов экспериментов по заражению вирулентными бактериями штамма 231 чумного микроба мышей всех линий обращала на себя внимание меньшая степень напряженности иммунитета к чуме при предварительной иммунизации мышей кап-сульным антигеном по сравнению с живой чумной вакциной. Исследуемые линии мышей имели явные отличия между собой по способности формировать адаптивный иммунитет к чумной инфекции, реализуемый после заражения. Иммунизация живой чумной вакциной обеспечивала формирование полноценного адаптивного иммунитета (от определенной дозы вирулентных клеток возбудителя чумы) только у мышей СВА, у животных линии BALB/c резистентность была очень низкой.

При использовании для иммунизации капсульного антигена чумного микроба эти отличия были более демонстративны: наилучшей защитой обладали мыши A/Sn, несколько слабее - BALB/c, наихудшей - CC57W; промежуточное положение занимали мыши C57BL/6, BIO.CW и радомбредные. Таким образом, у мышей с гаплотипом Н-2Ь резистентность к чумной инфекции формировалась слабее, чем у мышей с гаплотипами Н-2а и H-2d. Генетически детерминированные различия линейных мышей в естественной резистентности к чуме и способности к формированию адаптивного противочумного иммунитета позволяют использовать их в качестве удобной экспериментальной модели для решения вопросов иммунопрофилактики и для изучения механизмов, реализующих устойчивость или чувствительность к данной инфекций.

Заинтересованность" Т-системы в создании адаптивного иммунитета к чуме подтверждается и нашими данными, полученными в опытах на бестимус-ных мышах BALB/c nude: при отсутствии тимуса резистентность к чумной инфекции у них не формируется после иммунизации как капсульным антигеном чумного микроба, так и живой чумной вакциной.

На модели инбредных мышей линии C57BL/6 было установлено, что помимо высокого исходного содержания Т-клеток в крови и органах иммунной системы, эти мыши характеризовались и более выраженными изменениями в популяционном составе лимфоцитов в процессе формирования адаптивного иммунитета к чумной инфекции. Сдвиги в соотношении Т- и В-клеток в селезенке наблюдались до 21-х суток иммуногенеза, а в крови это соотношение не нормализовывалось и в более поздние сроки. Выявленные изменения свидетельствовали об интенсивности процессов пролиферации Т-лимфоцитов и их рециркуляции в иммунной системе. Следует отметить также, что преобладание Т-клеток в соотношении лимфоцитов лимфатических узлов в ранние сроки иммуногенеза сменялось снижением их в поздние сроки.

Показано также, что формирование адаптивного иммунитета сопровождалось изменением ряда иммунологических параметров, характеризующих попу-ляционный состав лимфоцитов органов иммунной системы радомбредных животных. Установлена качественная и количественная сопряженность изменений показателей активности лимфоцитов органов иммунной системы с формированием в организме, в конечном итоге, невосприимчивости к возбудителю чумы.

Показано, что при иммунизации радомбредных мышей живой чумной вакциной соотношение Т- и В-лимфоцитов в иммунокомпетентных органах стабилизируется более строго, чем их абсолютная численность. Полученные данные свидетельствуют не только о направлении миграции антигенреактивных клеток, но и о перераспределении популяций лимфоцитов в органах иммунной системы в динамике формирования адаптивного иммунитета к чуме. Сравнительный анализ результатов проведенных экспериментов позволил установить, что между численностью и соотношением лимфоцитов с одной стороны и уровнем адаптивного иммунного ответа к возбудителю чумы - с другой, существует достаточно строгая количественная взаимосвязь. С повышением числа клеток, участвующих в иммунном ответе, повышается эффективность защиты при введении в организм вирулентного штамма возбудителя чумы. А изменения в популяционном составе лимфоцитов крови и органов иммунной системы являются адекватным отражением иммунологических сдвигов, свидетельствующих о становлении состояния резистентности к чуме. Полученные нами иммунологические параметры можно использовать для оценки иммунного статуса организма привитых против чумы животных.

Для оценки механизмов взаимодействия патогенного микроорганизма с макроорганизмом, как экологической нишей, и формирования резистентности на популяционном уровне, были проведены исследования на модели диких грызунов из природных мест обитания — полуденных песчанках, различающихся по инфекционной чувствительности к чумному микробу. Установлены морфологические особенности, функциональная активность и степень зрелости лимфоцитов тимуса, селезенки, лимфатических узлов и крови полуденных песчанок двух подвидов: Meriones meridianus meridianus Pall, и Meriones meridianus nogaiorum Hepth. При изучении изменений функциональной активности и популяционного состава лимфоцитов органов иммунной системы и крови левобережных и правобережных песчанок после введения им капсульного антигена, основного соматического антигена и «мышиного» токсина чумного микроба были выявлены существенные различия в процессе формирования адаптивного иммунитета. Показаны фазные изменения ЭФП и общего количества лимфоцитов крови и органов иммунной системы в динамике иммуногенеза. Длительность и выраженность сдвигов зависели от характера иммунизирующего препарата. Гистограммы распределения лимфоцитов по электрофоретической подвижности отличались у полуденных песчанок с различных мест обитания, характеризующихся различной инфекционной чувствительностью. Были выявлены закономерности изменения популяционного состава лимфоцитов при формировании адаптивного иммунитета к чуме, показана зависимость функциональной активности лимфоцитов органов иммунной системы от генетически детерминированной чувствительности песчанок двух подвидов к антигенам чумного микроба. Полученные результаты позволили сделать заключение, что в основе различий иммунологической резистентности у изученных подвидов полуденной песчанки лежат механизмы дифференцировки зрелых форм лимфоцитов и разная степень их функциональной активности.

Установление взаимосвязи инфекционной чувствительности у песчанок, обитающих на разных участках природного очага чумы, с изменением функциональной активности лимфоцитов может иметь важное значение для оценки общих механизмов адаптации популяций, и в сочетании с другими факторами (в том числе и с уровнем кортикостероидных гормонов) - для характеристики эпизоотического процесса.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Тихомирова, Елена Ивановна, Саратов

1. Авербах М. М, Мороз А. М, Апт А. С, Никоненко Б. В. Иммуногенетика инфекционных заболеваний. М, 1985. - 320 с.

2. Адамов А.К. Влияние на переиетенцию возбудителей инфекции особенностей взаимодействия их детерминант вирулентности с метаболическими и специфическими механизмами иммунитета // ЖМЭИ. 1994. - № 3. - Прил. С. 99-103.

3. Адамов А.К, Брандзишевский Ю.В, Пономарев Н.Г. и др. Роль Т-лимфоцитов в конституциональном иммунитете к возбудителям чумы // Иммунология и иммунопрофилактика чумы и холеры. — Саратов, 1980. С. 112-113.

4. Адо-А.Д. Проблемы повреждения клетки в современной патологической физиологии // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. — 1972.-№6.-С. 16-20.

5. Адо А.Д. Проблемы реактивности в современной общей патологии // Вестн. АМН СССР. 1979. - С. 57-64.

6. Амосов Н.М. Теоретические исследования физиологических систем. — Киев, 1977.-361 с.

7. Анисимов А.П, Захарова Н.М. Серовариация капсульного антигена возбудителя чумы // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. — 1992.-№9-10.-С. 26-29.

8. Анисимов А.П, Захарова Н.М, Говорунов И.Г. Модификация капсулы возбудителя чумы, изменяющая ее иммунохимические свойства // Материалы XIV науч.-практ. конф. «Новые технологии и биосистемы. Достижения и перспективы». — Оболенск, 1991.-С. 13—15.

9. Анисимов А.П. Факторы Y.pestis, обеспечивающие циркуляцию и сохранение возбудителя чумы в экосистемах природных очагов // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 2002. - № 4. - С. 3-11.

10. Анисимов П.И., Сердобинцев JI.H., Иванов Ю.В. и др. Некоторые физико-химические особенности капсульного белка чумного микроба // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 1987. - № 2. - С. 24—27.

11. Анисимова Т.И., Ледванов М.Ю., Адамов А.К. и др. Энергетический заряд адениловой системы Т- и В -лимфоцитов крови морских свинок, иммунизированных против чумы // Профилактика природно-очаговых инфекций. — Ставрополь, 1983. С. 369-370.

12. Анохин П.К. Общие принципы формирования защитных приспособлений организма // Вестн. АМН СССР. 1962. - № 4. - С. 16-26.

13. Анохин П.К. Принципиальные вопросы общей теории функциональных систем. М., 1971. - 61 с.

14. Анохин Ю.Н., Ярилин А.А. Миграция и расселение Т- и В-лимфоцитов // Успехи совр. биологии. 1980. - Т. 89, вып. 2. - С. 238-252.

15. Апт А.С. Иммуногенетические аспекты восприимчивости и резистентности к внутриклеточным инфекциям // Молекулярная и клеточная регуляция инфекционного иммунитета: Сб. науч. тр. / Под ред. К.Н. Кашкина. — М., 1985. С. 34-40.

16. Арнольд В.И. Теория катастроф // Природа. 1979. - Т. 770, № 10. - С. 54-63.

17. Архипов Н.И., Бакулов И.А., Соковых Л.И. Медленные инфекции животных.-М., 1987.- 191 с.

18. Ашмарин И.П., Васильев Н.Н., Амбросов В.А. Быстрые методы статистической обработки и планирование экспериментов. Л., 1974. — 76 с.

19. Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. Д., 1962. - 286 с.

20. Бабаева А.Г. Традиционные и нетрадиционные представления о роли системы иммуногенеза в организме // Вестн. АМН СССР. 1986. — № 1. - С. 22-28.

21. Бабин В.Н., Домарадский И.В., Дубинин А.В. и др. Биохимические и молекулярные аспекты симбиоза человека и его микрофлоры // Рос. хим. журн. 1994. - Т. 38, № 6. - С. 66-78.

22. Бакулина Э.В., Олейник И.И. Теория паразитоценозов и генетический обмен у бактерий. М., 1970. - 180 с.

23. Барбул Е.А., Тимченко Н.Ф., Павлова Т.Н. и др. Изучение взаимодействия бактерий псевдотуберкулеза с макрофагами // Материалы конф. по вопросам региональной гигиены, санитарии и эпидемиологии. Якутск, 1987. - С. 122-124.

24. Бауэр Э.С. Теоретическая биология. М., 1935. - 286 с.

25. Бахрах Е.Э., Коробкова Е.И., Шалаева А.Ф. О химической природе и серологических свойствах специфической полисахаридсодержащей фракции чумного микроба // Изв. Иркут. противочумного ин-та Сибири и Дальнего Востока. 1958. - Т. 18. - С. 127-133.

26. Бахрах Е.Э., Вейнблат В.И. Соматические полисахаридсодержащие антигены чумного микроба // ЖМЭИ. 1972. - № 3. - С. 12-16.

27. Бахрах Е.Э. Соматические антигены чумных бактерий и применение выделенных препаратов для выявления иммуноаллергической перестройки организма при чуме: Автореф. дис.д-ра мед. наук. Саратов, 1973. - 36 с.

28. Бахрах Е.Э., Тараненко Т.М., Гольдфарб JI.M. и др. Особенности строения соматических антигенов чумных бактерий // Проблемы особо опасных инфекций. Саратов, 1977. - Вып. 4. - С. 70-71.

29. Башенина Н.В. Пути адаптаций мышевидных грызунов. М., 1977. — 356 с.

30. Бейум А. Лимфоциты: выделение, фракционирование и характеристика. М., 1980. С. 9-20.

31. Белобородов Р.А. Морфология вакцинального процесса при отборе вариантов чумного микроба со свойствами вакцинных штаммов: Автореф. дис. .канд. мед. наук. Саратов, 1967. - 18 с.

32. Белов Л.Г., Дальвадянц С.М. Иммуноаллергенные свойства чумной живой сухой вакцины и основных антигенов чумного микроба // Микробиология, лабораторная диагностика и специфическая профилактика карантинных инфекций. Саратов, 1989. - С. 84-88.

33. Беляков В.Д. Общие закономерности функционирования паразитарных систем (механизмы саморегуляции) // Паразитология. 1986. - Т. 20, № 4. - С. 249-254.

34. Беляков В.Д. Проблема саморегуляции паразитарных систем и механизм развития эпидемического процесса // Вестн. АМН СССР. 1983. — № 5. - С. 3-9.

35. Беляков В.Д., Каминский Г.Д., Каминская С.Г. Гипотеза направленной самоперестройки популяций микроорганизмов и ее общебиологическое значение // ЖМЭИ. 1985. - № 1. - С. 93-100.

36. Бергер В.Я. Методологические аспекты изучения адаптивности явлений // Вопросы теории адаптации. Л., 1987. - С. 13-30.

37. Березовский В.А. Реактивность, индивидуальность и конституция // Фи-зиол. журнал (Киев). 1981. - Т. 27. - С. 332-338.

38. Бигон М., Харпер Дж., Таусенд К. Экология. Особи, популяции и сообщества. М., 1989. - Т.1. 667 е.; Т.2. 277 с.

39. Бойд У. Основы иммунологии. М., 1969. - 647 с.

40. Большаков В.Н., Ковальчук JI.A. Энергетика сердца и печени горных полевок // Докл. АН СССР. 1982. - Т. 266, № 3. - С. 748-752.

41. Большаков В.Н., Ковальчук JI.A. Адаптационные возможности окислительного метаболизма тканей и системы крови сибирского лемминга // Докл. АН СССР. 1984. - Т. 274, № 2. - С. 493-496.

42. Большаков В.Н., Ковальчук JI.A. Энергоресурсы клеток печени при адаптации организма к экстремальным условиям среды // Физиология и биохимия клетки при действии экстремальных факторов. Уфа, 1988. - С. 22-10.

43. Боровикова Т.П. Характеристика специфических полисахаридсодержа-щих комплексов субкультур штамма ЕВ чумного микроба: Автореф. дис. канд. биол. наук. Саратов, 1972. - 18 с.

44. Бухарин О.В. Биомедицинские аспекты персистенции бактерий // ЖМЭИ. 1994. -Прил. С. 4-13.

45. Бухарин О.В. Механизмы бактериальной персистенции // Персистенция бактерий / Под ред. О.В. Бухарина. Куйбышев, 1990. - С. 5-14.

46. Бухарин О.В., Литвин В.Ю. Патогенные бактерии в природных экосистемах. Екатеринбург, 1997. - 276 с.

47. Бухарин О.В., Усвяцов Б .Я. Бактерионосительство. Екатеринбург, 1996.- 180 с.

48. Вакцина чумная живая сухая / Регламент производства № 702-97 Срок действия до 16.12.2002 г..

49. Васенин А.С. К вопросу об эффективности двукратной подкожной вакцинации в предупреждении легочной чумы у морских свинок // Профилактика чумы в природных очагах. Саратов, 1973. — С. 227-229.

50. Васильева Г.И. Роль взаимодействия Y.pestis с клетками системы моно-нуклеарных фагоцитов в реализации вакцинального и инфекционного процессов: Автореф. дис. д-ра мед. наук. Саратов, 1990. - 40 с.

51. Васильева Г.И., Пустовалов B.JI. Фагоцитарная активность макрофагов морских свинок, иммунизированных антигенами FIA, FIB, водно-солевым экстрактом и живой чумной вакциной ЕВ // Проблемы особо опасных инфекций. -Саратов, 1977. Вып. 6(58). - С. 34-37.

52. Васильева Г.И., Пустовалов B.JL, Таранова В.Н. Оценка «латентной» вирулентности вакцинных штаммов чумного микроба по степени завершенности фагоцитоза // Проблемы особо опасных инфекций. Саратов, 1979. - Вып. 5(69). - С. 52-55.

53. Вейнблат В.А., Веренков М.С., Васенин А.С. Получение капсульного антигена из живых чумных микробов // Тез. Всесоюз. конф. «Иммунология и иммунопрофилактика чумы и холеры». — Саратов, 1980. С. 36—39.

54. Вейнблат В.И. Антигены Yersinia pestis (биохимические и иммунологические аспекты): Автореф. дис. д-ра мед. наук. — Саратов, 1972. 36 с.

55. Вейнблат В.И., Гусева Н.П., Ананьев В.В., Самыгин В.М. Липид препаратов капсульного антигена чумного микроба // Микробиология, лабораторная диагностика и специфическая профилактика карантинных инфекций. Саратов, 1989.-С. 90-92.

56. Вейнблат В.И., Тараненко Т.М., Наумов А.В. Антигены возбудителя чумы: функция, выделение, структура // Актуальные проблемы и задачи биохимии, диагностика и иммунопрофилактика особо опасных инфекций. Саратов, 1991.-С. 11-13.

57. Вейнблат В.И., Титенко М.М., Веренков М.С. и др. Характеристика препаратов капсульного антигена, выделенных из бульонной культуры штамма ЕВ Yersinia pestis // ЖМЭИ. 1985. - № 4. - С. 19-23.

58. Вейнблат В.И., Титенко М.М., Веренков М.С. и др. Видоспецифический поверхностно-соматический антиген возбудителя чумы // Молекулярная биология, генетика и иммунология возбудителей особо опасных инфекций. — Ростов-н/Д, 1984.-С. 94-96.

59. Верещагин В.Ю. Философские проблемы теории адаптации. Владивосток, 1988.- 164 с.

60. Виру А.А. Изменение белкового обмена в процессах адаптации // Физиологические проблемы адаптации: Тез. докл. IV Всесоюз. симпоз. По физиол. проблемам адаптации. Таллин, Тарту, 1984. - С. 13-18.

61. Воложин А.И, Субботин Ю.К. Адаптация и компенсация универсальный биологический механизм приспособления. - М, 1987. - 177 с.

62. Волосатов С.В. Функциональная активность Т-лимфоцитов у больных активными формами туберкулеза легких // Проблемы совершенствования медицинской помощи. JI, 1988.-С. 150.

63. Галактионов В.Г. Иммунология. М, 1998. 320 е.; 2004. - 528 с.

64. Гален Клавдий. О назначении частей человеческого тела. М, 1971. -124 с.

65. Георгиевский А.Б. Эволюция адаптаций (историко-методологическое исследование). JI, 1989. - 189 с.

66. Гиляров A.M. Популяционная экология. М, 1990. - 184 с.

67. Гиляров A.M. Современное состояние концепции экологической ниши // Успехи современной биологии. 1978. - Вып. 85, № 3. - С. 431-446.

68. Гинцбург A.JL, Романова Ю.М. Некультивируемые формы бактерий и их роль в сохранении возбудителей сапронозов во внешней среде // Журн. микробиологии. 1997.-№ 3 - С. 116-121.

69. Голиков С.Н, Сапоцкий Н.В, Глухов JI.A. Общие механизмы токсического действия. JL, 1986. - 280 с.

70. Горизонтов П.Д. Гомеостаз. М, 1975. - 464 с.

71. Горизонтов П.Д. Стресс. Система крови в механизме гомеостаза. Стресс и болезни. Гомеостаз. М, 1981. - С. 538-573.

72. Горькова А.В. Адениннуклеотиды и активность АТФ-азы митохондрий головного мозга и печени белых крыс при чумной интоксикации // Проблемы особо опасных инфекций. Саратов, 1971. - Вып. 1(17). - С. 67-70.

73. Горькова А.В, Мохин К.М, Лучникова И.К, Хинц И.В. Биоэнергетические сдвиги в процессе чумной интоксикации // Проблемы особо опасных инфекций. Саратов, 1970. - Вып. 5(15). - С. 56-60.

74. Гремякова Т.А., Анисимов А.П. Серологическая активность антигена «Фракция I» Yersinia pestis определяется его белковым компонентом // Тез. конф. «Гомеостаз и инфекционный процесс». Саратов, 1996. - Ч. II. - С. 319.

75. Гремякова Т.А., Анисимов А.П., Захарова Н.М. Взаимосвязь способности к экспрессии различных серовариантов капсульного антигена Yersinia pestis со степенью редуцированности липополисахарида бактериальных клеток // ЖМЭИ. 1995. - № 1. - С. 3-6.

76. Гремякова Т.А., Анисимов А.П., Степаншина В.Н., Говорунов И.Г. Экспрессия капсульного антигена чумного микроба в микроорганизмах с S- и R-формами липополисахаридов // Тез. докл. к Межвед. науч. конф. Киров, 1991. -С. 198-199.

77. Громов Б.В., Павленко Г.В. Экология бактерий. JL, 1989. —128 с.

78. Гублер Е.В. Вычислительные методы анализа и распознавания патологических процессов. М., 1978. - 121 с.

79. Гущин И.С., Васильева Е.В., Матвеева Г.П. ЕАС розеткообразование с эритроцитами фиксированными глютаральдегидом // Иммунология. — 1981. - № 5.-С. 85-87.

80. Давыдовский И.В. Учение об инфекции (биологический аспект проблемы). -М., 1956. 168 с.

81. Давыдовский И.В. Проблемы причинности в медицине (этиология). -М., 1965.-220 с.

82. Дажо Р. Основы экологии. М., 1975. - 320 с.

83. Дальвадянц С.М. Характеристика соматического антигена чумного микроба, изолированного из авирулентного, бескапсульного, атоксичного варианта методом Буавена // Проблемы особо опасных инфекций. Саратов, 1968. - № 2. -С. 134-138.

84. Дальвадянц С.М., Белобородов Р.А. Изучение токсических свойств антигена, изолированного из чумного микроба по методу Вестфаля-Людерица // Проблемы особо опасных инфекций. Саратов, 1969. - № 2. - С. 138-142.

85. Девдариани З.Л., Филиппов А.Ф. Иммунологическая эффективность одно-, дву- и трехкратных прививок живой чумной вакциной // Всесоюз. науч.-исслед. противочум. ин-т «Микроб». Саратов, 1985. — 16 с. (Деп. в ВИНИТИ 18.09.85 -№6701 -В. 85).

86. Денисова Е.П., Егорова В.Д. Химическая характеристика термостабильных антигенов чумного микроба // Особо опасные и природноочаговые инфекции. Саратов, 1962.-С. 185-188.

87. Догель В. А. Курс общей паразитологии. Л., 1947. — 360 с.

88. Дозморов И.М. Применение препаративного клеточного электрофореза в иммунологических исследованиях // Итоги науки и техники. Сер. Иммунология.- 1984.-№ 13.-С. 166-194.

89. Дозморов И.М., Левин А.Д., Луценко Т.В. и др. Характеристика элек-трофоретически разделяемых субпопуляций лимфоцитов // Иммунология. — 1984.-№6.-С. 43-48.

90. Домарадский И.В. Роль токсинов в экологии бактерий // ЖМЭИ. 1993. -№ 1.-С. 103-105.

91. Домарадский И.В. Чума: современное состояние, гипотезы, проблемы. -Саратов, 1993. -240 с.

92. Донская Т.Н., Челова Л.А., Штельман Ю.А. и др. Баланс глюкокорти-коидов у полуденных песчанок с разных берегов Волги по сезонам года // Профилактика особо опасных инфекций. Саратов, 1988. - С. 40-46.

93. Донская Т.Н., Растунцева Е. В., Штельман Ю.А. и др. Взаимосвязь инфекционной чувствительности, уровня кортикостероидов в плазме крови и численности полуденных песчанок из Волго-Уральского очага чумы //РЖ Биология. 1989. - Деп. № 5707.

94. Дорофеев Г.И., Кожемякин Л.А., Ивашкин В.Т. Циклические нуклеоти-ды и адаптация организма. Л., 1978. - 182 с.

95. Дунаев Г.С., Зыкин Л.Ф., Черченко И.И. и др. Выделение L-форм чумного микроба от диких грызунов в природном очаге // ЖМЭИ. 1982. - № 8. -С. 50-54.

96. Дятлов А.И. Природная очаговость чумы // Природа. 1992. - № 3. - С. 24-29.

97. Дятлов А.И. Эволюционные аспекты в природной очаговости чумы. -Ставрополь, 1989. 198 с.

98. Дятлов А.И., Аванян Л.А. Обоснование видового ранга для двух подвидов полуденных песчанок // Зоол. журн. 1987. - Т.1, вып. 7. - С. 1069-1074.

99. Езепчук Ю.В. Биомолекулярные основы патогенности бактерий. М., 1977.-215 с.

100. Езепчук Ю.В. Патогенность как функция биомолекул. М., 1985.-240 с.

101. Езепчук Ю.В. Стратегия возбудителя в организме хозяина. — Л., 1987. — 180 с.

102. Блинов Н.П. Химическая микробиология. М., 1989. - 480 с.

103. Елкин Ю.М. Материалы по инфекционной чувствительности к чуме полуденных песчанок // Тр. противочум. ин-та Кавказа и Закавказья. — 1960. -Вып. 4. С. 95 - 107.

104. Жданов В.М., Львов Д.К. Эволюция возбудителей инфекционных болезней. М., 1984. - 260 с.

105. Жуков-Вережников Н.Н. Иммунология чумы (Основы специфической терапии и профилактики бубонной и легочной чумы). М., 1940. - С. 109-113.

106. Заднова С.П. Влияние полипептида с молекулярной массой 22 kD на свойства клеточной поверхности штаммов возбудителя чумы: Автореф. дис. . канд. биол. наук. Саратов, 1998. - 21 с.

107. Задумина С.Ю. Изучение иммуногенеза при чуме методом направленной иммунодепрессии: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Саратов, 1984.-18 с.

108. Задумина С.Ю., Назарова Л.С., Исупов И.В. и др. Использование инбредных мышей для изучения протективности антигенов // ЖМЭИ, 1995. № 6. - С. 69-70.

109. Задумина С.Ю., Назарова JI.C., Исупов И.В. и др. Протективность антигенов чумного микроба для линейных мышей // Проблемы особо опасных инфекций. -1995.-№ 1.-С. 91-99.

110. Зайчик А.Ш., Чурилов Л.П. Основы общей патологии. 4.1. Основы общей патофизиологии. СПб., 1999. - 618 с.

111. Захарова И.Я. Эндотоксины О-антигены кишечной палочки. - Киев, 1980.-86 с.

112. Здоровский П.Ф., Гурвич Г.А. Физиологические основы иммуногенеза и его регуляция. М., 1972. - С. 56-88.

113. Зигль Э., Бем Э. Метод локального гемолиза в геле // Иммунол. методы. -М., 1979.-С. 96-107.

114. Иванов К.К. О-соматические и поверхностные антигены сальмонелл // Вестн. АМН СССР. 1973. - № 11. - С. 64-71.

115. Ивантер Э.В., Ивантер Т.В., Туманов И.Л. Адаптивные особенности мелких млекопитающих. Л., 1985. - 317 с.

116. Ивантер Э.В., Ивантер Т.В., Жигальский О.А. Закономерности и факторы динамики популяции рыжей полевки // Экология наземных позвоночных. — Петрозаводск, 1991. С. 86- 116.

117. Иммунологические методы исследования / Под ред. И. Лефковитса, Б. Перниса. М., 1988. - 528 с.

118. Исупов И.В., Горькова А.В., Павлова Л.П. и др. Использование имму-нодефицитного состояния бестимусных мышей для изучения природы иммунитета при чуме // Материалы 8-го Всесоюз. съезда патологоанатомов. — М., 1989. -С. 54.

119. Исупов И.В., Назарова Л.С., Павлова Л.П. и др. Изучение влияния различных антигенов Yersinia pestis на клеточное звено иммунитета // ЖМЭИ. -1990.-№9.-С. 85-89.

120. Исупов И.В., Павлова Л.П., Горькова А.В. и др. Особенности развития иммунитета к чуме у бестимусных мышей // Лабораторная диагностика, биохимия и специфическая профилактика чумы и холеры. Саратов, 1986. - С. 4050.

121. Казначеев В.П. Биосистема и адаптация. Новосибирск, 1973. - 214 с.

122. Казначеев В.П. Современные аспекты адаптации. Новосибирск, 1980. - 192 с.

123. Калабухов Н.И. Сохранение энергетического баланса организма как основа процесса адаптации // Журн. общ. биологии. — 1946. № 6-7. - С. 417-424.

124. Калабухов Н.И., Мокриевич Н.А., Штельман А.Н. Изменчивость эколо-го-физиологических особенностей полуденных песчанок и ее связь с их чувствительностью к чумной инфекции // Тр. ин-та «Микроб». 1959. - Вып. 3. - С. 16-19.

125. Калабухов Н.И. Некоторые адаптивные особенности двух географических форм полуденной песчанки // Зоол. журн. 1965. - Т. 44, вып. 7. - С. 1048-1063.

126. Калабухов Н.И., Илюхин А.А., Лабецкая А.А. Особенности состава жировых запасов и их сезонные сдвиги у право- и левобережных полуденных песчанок // Проблемы особо опасных инфекций. — Саратов, 1982. С. 19-27.

127. Калабухов Н.И. Периодические (сезонные и годичные) изменения в организме грызунов, их причины и последствия. Л., 1989. - 247 с.

128. Карасевич Ю.Н. Экспериментальная адаптация микроорганизмов. М., 1975.- 179 с.

129. Карлышев А.В, Черновская Т.В, Васильев A.M. и др. Генетический контроль капсулообразования у Yersinia pestis // Материалы Рос. науч. конф. «Иммунология и специфическая профилактика особо опасных инфекций». -Саратов, 1993. С. 289-290.

130. Карпов С.П, Васильев Н.В, Федорова Т.С. и др. Влияние антигенов на неспецифическую реактивность организма. Томск, 1978. - 224 с.

131. Карр Я. Макрофаги. Обзор ультраструктуры и функции. М, 1978. -128 с.

132. Карр Я. Механизмы биологической защиты. М, 1986. - 85 с

133. Каталог млекопитающих СССР. Плиоцен — современность /Под ред. И.М. Громова, Г.И. Барановой. JI, 1981. - С. 166.

134. Кашкин К.П. Уровни регуляции иммунного ответа на инфекционные агенты // Молекулярная и клеточная регуляция инфекционного иммунитета. -М, 1985.-С. 3-9.

135. Кашкин К.П, Карасев З.О. Иммунная реактивность организма и антибиотическая терапия. Л, 1984. - 128 с.

136. Кашкин К.П. Цитокины иммунной системы: основные свойства и иммунобиологическая активность // Клиническая лабораторная диагностика. -1998. -№ 11.-С. 21-32.

137. Кеннеди К.Р. Экологическая паразитология. М, 1978. - 230 с.

138. Книрель Ю.А, Кочетков Н.К. Строение липополисахаридов грамотрицательных бактерий. 1. Общая характеристика липополисахаридов и структура липида А (обзор) //Биохимия. 1993. - Т. 58, вып. 2. - С. 166-181.

139. Книрель Ю.А, Кочетков Н.К. Строение липополисахаридов грамотрицательных бактерий. II. Структура кора (обзор) // Там же. С. 182-201.

140. Книрель Ю.А, Кочетков Н.К. Строение липополисахаридов грамотрицательных бактерий. III. Структура О-специфических полисахаридов (обзор) // Биохимия.- 1994.-Т. 59, вып. 12.-С. 1784-1851.

141. Коваленко Э.А. Внеклеточные лектины бактерий // Микробиологический журн. 1990. - Т. 52, № 3. - С. 240-241.

142. Ковальчук Jl.А. Биохимические критерии оценки состояния гомеоста-тических систем при адаптации животных // Биохимическая экология и медицина. Свердловск, 1985.-С. 176-185.

143. Ковальчук Л.А. Эколого-физиологические и биохимические основы адаптации лесных полевок // Экология. 1989. - № 3. - С. 87-89.

144. Ковальчук Л.А., Ястребов А.П. Экологическая физиология мелких млекопитающих Урала. Екатеринбург, 2004. - 203 с.

145. Козакевич В.П. Физиологические изменения в организме сусликов и их связь с чувствительностью грызунов к чуме: Автореф. дис. . д-ра биол. наук. — Саратов, 1967.-385 с.

146. Козлов В.А. Методические аспекты современной иммунологии. Новосибирск, 1991.-С. 45-48.

147. Колесник Р.С. К экспериментально-морфологической характеристике вакцинального процесса, вызываемого чумными штаммами с различной "остаточной" вирулентностью // Проблемы особо опасных инфекций. Саратов, 1970.-Вып. 1.-С. 174-180.

148. Колесник Р.С. Экспериментально-морфологические данные о действии вакцинальных чумных штаммов на организм: Автореф. дис. . канд. мед. наук. -Иркутск, 1951. 18 с.

149. Кондратьева И.А., Воробьева И.В., Буракова О.В. и др. Практикум по иммунологии: Учебное пособие / Под ред. И.А. Кондратьевой, В.Д. Самуилова. -М., 2001.-224 с.

150. Коренберг Э.И. Современная популяционная экология и учение о природной очаговости болезней // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 1981. -№ 3. - С. 3-11.

151. Корнева Е.А. Взаимодействие нервной и иммунной систем в норме и патологии. Л., 1987.-216 с.

152. Корнева Е.А., Шхинек Э.К. Гормоны и иммунная система. — Л., 1988. — 251 с.

153. Корнеев Г.А. Неспецифическая резистентность большой песчанки в очагах чумы: Автореф. дис. . д-ра биол. наук. Саратов, 1986. - 460 с.

154. Корниенко И.А., Маслов С.П., Шилов И.А. О некоторых общих принципах адаптации биологических систем // Журн. общ. биологии. 1965. - Т. 26, № 1.-С. 121-126.

155. Коробкова Е.И. Методы повышения эффективности живой противочумной вакцины ЕВ // ЖМЭИ. 1955. - № 11. С. 15-21.

156. Коробкова Е.И. Живая противочумная вакцина. М., 1956. - 68 с.

157. Коробкова Е.И. Вакцинация против чумы в зарубежных странах и в СССР. Эффективность вакцинации против легочной чумы // Проблемы особо опасных инфекций. 1968. - Вып. 3. - С. 147-156.

158. Коробкова Е.И., Котельников Г.Ф., Урода Л.А., Быстренин А.И. О полном антигене чумного и псевдотуберкулезного микробов // ЖМЭИ. — 1944. № 12.-С. 22-28.

159. Коробкова Е.И., Кузнецова В.И., Бахрах Е.Э., Шалаева А.Ф. О поли-сахаридном комплексе чумного микроба // Тр. ин-та «Микроб». Саратов, 1951. -Вып. 1.-С. 99-103.

160. Коровина В.П., Сазонова Л.А., Вайсман И.Ш. Изучение механизма регуляции численности популяций в эксперименте на культурах бактерий // Экология. 1974. - № 6. - С. 5-9.

161. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. СПб., 2000. — 591 с.

162. Коссе Л.В. Характеристика препаратов капсульных антигенов чумного микроба, выделенных из генетически различающихся штаммов-продуцентов: Автореф. дис. . канд. биол. наук. Саратов, 1992. - 21 с.

163. Косее Л.В., Лебедева С.А., Кузнецова Л.С. и др. Новые данные, относящиеся к специфичности и генетическому контролю капсульного антигена (F1) Yersinia pestis // ЖМЭИ. 1997. - № 2. - С. 29-33.

164. Коссе Л.В., Некляев В.Н., Лебедева С.А., Заренков М.И. Генетический контроль FI-специфических компонентов капсульного антигена Yersinia pestis // ЖМЭИ. 1999. -№ 5. - С. 81-85.

165. Костюкова Н.Н. Начальный этап инфекционного процесса — колонизация и пути ее предотвращения // ЖМЭИ. 1989. - С. 103-109.

166. Куклева Л.М. Фагоцитоз перитонеальными и альвеолярными макрофагами штаммов возбудителя чумы, отличающихся по вирулентности и антигенному составу: Автореф. дис. . канд. биол. наук. Саратов, 1989. - 18 с.

167. Куклева Л.М., Кутырев В.В., Проценко О.А. Молекулярно-генетические аспекты инвазивных и антифагоцитарных свойств патогенных иерсиний // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 1996. - № 1. — С. 11—16.

168. Кульберг А.Я. Как регулируется биологическое равновесие // Природа. 1987.-№ 6 (862).-С. 3-11.

169. Кульберг А.Я. Молекулярная иммунология. М., 1985. - 180 с.

170. Кульберг А.Я. Регуляция иммунного ответа. М., 1986. - 224 с.

171. Кутырев В.В. Успехи и перспективы в изучении возбудителя чумы // Материалы науч.-практ. конф., посвящ. 100-летию образования противочумной службы России. Саратов, 1997. — Т. 2. — С. 72.

172. Кучерук В.В. Млекопитающие носители болезней, опасных для человека // Материалы I Международ, конгресса по млекопитающим. - М., 1974. -Т.1.- С. 335-336.

173. Лаврентьев А.Ф., Красноусова Л.Н., Никифорова Л.И. Некоторые вопросы экспериментальной чумы у полуденных песчанок Волго-Уральских песков // Материалы 5-й науч. конф. противочум. учреждений. Алма-Ата, 1967. -С. 289-290.

174. Лахтин В.М. Лектины в исследовании белков и углеводов // Итоги науки и техники. Сер. Биотехнологии. ВИНИТИ, 1987. - Т. 2. - 288 с.

175. Леви М.И., Вальков Б.Г., Штельман А.И., Канатов Ю.В. Экспериментальная чума у разных популяций полуденных песчанок // Сб. науч. тр. Элистинской ПЧС. Шахты, 1959. - Вып. 1. - С. 43-64.

176. Леви М.И., Момот А.Г. Серологические исследования при чуме. Сообщение 7. Реакция нейтрализации антител // Сб. науч. тр. Элистинской ПЧС. -Элиста, 1961. Вып. 2. - С. 207.

177. Леви М.И. Обнаружение капсульного антигена возбудителя чумы в диализате // ЖМЭИ. 1963. - № 3. - С. 65-69.

178. Леви М.И. Общие закономерности и классификация серологических реакций // ЖМЭИ. 1967. -№ 7. - С. 104-109.

179. Леви М.И. Сравнительно-иммунологические исследования и проблемы эволюции популяций некоторых видов песчанок // Журн. общ. биологии. -1973.-№ 1.-С. 147-155.

180. Леви М.И., Далин М.В., Накоряков В.А. и др. Влияние молекулярного веса растворимого антигена на иммуногенность // ЖМЭИ. 1973. — № 12. - С. 77-83.

181. Леви М.И., Улуханов И.Б., Кузнецова К.А. Обнаружение чумного микроба в организме блох с применением иммуноферментного анализа и монокло-нальных антител // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. -1989. — № 1.-С. 57.

182. Лекявичус Э. Элементы общей теории адаптации. Вильнюс, 1986. -274 с.

183. Ленинджер А. Основы биохимии. М., 1985. - Т. 2. - 368 с.

184. Лимфоциты. Методы / Под ред. Д. Клауса. М., 1990. - С. 49-53.

185. Линевич Л.И. Лектины и углевод-белковое узнавание на разных уровнях организации живого // Успехи биол. химии. М., 1979. - Т. 20. — С. 71-94.

186. Линии лабораторных животных для медико-биологических исследований.-М., 1983.- 190 с.

187. Лиознер Л.Д. Основные проблемы учения о регенерации. М., 1975. -103 с.

188. Литвин В.Ю. Возбудители зоонозов и среды обитания. Сообщение 1. Экологические аспекты паразитизма // Науч. докл. Высш. шк. Биол. науки. -1976. -№ 11. С. 42-48.

189. Литвин В.Ю. Возбудители зоонозов и среды обитания. Сообщение 2. Роль разных сред обитания и статус в экосистеме // Науч. докл. Высш. шк. Биол. науки. 1977. - № 2. - С. 50-59.

190. Литвин В.Ю. Природный очаг инфекции как экологическая система (функциональный анализ и моделирование процессов): Дис. . д-ра биол. наук. М., 1979.-386 с.

191. Литвин В.Ю. Принципы организации биологических систем в связи с общей методологией системного подхода // Актуальные вопросы инфекционной патологии человека. М., 1986. - С. 5-20.

192. Литвин В.Ю. Потенциальная патогенность и случайный паразитизм микроорганизмов // Потенциально патогенные бактерии в природе. М., 1991. - С. 9-30. •

193. Литвин В.Ю., Шляхов Э.Н. Экологические аспекты эпидемиологии // Руководство по эпидемиол. инф. болезней. М., 1993. — Т.1. - С. 37-57.

194. Литвин В.Ю., Гинцбург А.Л., Пушкарева В.И. и др. Эпидемиологические аспекты экологии бактерий. М., 1998. - 280 с.

195. Литвин В.Ю., Гинцбург А.Л., Пушкарева В.И. и др. Обратимый переход патогенных бактерий в покоящееся (некультивируемое) состояние. Экологические и генетические механизмы // Вестн. РАМН. 2000. - № 1. - С. 7-13.

196. Литвин В.Ю., Пушкарева В.И., Солохина Л.В. и др. Эколого-генетичес-кие механизмы перехода Salmonella typhimurium в покоящееся состояние в окружающей среде // ЖМЭИ. 2001. - № 6. - С. 32-36.

197. Лобанов В.Н. Опыт морфологических исследований и критерии пригодности живых противочумных вакцин // Материалы 2-го съезда эпидемиол., микробиол. и инфекционистов Азер. ССР. Баку, 1963. - С. 186-188.

198. Лобанов В.Н., Котурга Л.Н., Кузнецова О.Р. Патолого-анатомические и гистологические изменения, вызванные живыми противочумными вакцинами // Специфическая профилактика особо опасных инфекций. — М., 1964. — С. 141— 151.

199. Лобанов В.Н., Федоров В.Н. К вопросу о патогенезе экспериментальной чумы у полуденной песчанки // Вестн. микробиологии, эпидемиологии и паразитологии. 1939.-Т. 17, вып. 1-2.-С. 57-71.

200. Лобачев B.C., Канатов Ю.В., Леви М.И., Яхьяев А.Д. Обнаружение специфического антигена возбудителя чумы в субфоссильных костях млекопитающих // ЖМЭИ. 1972. - № 7. - С. 21-27.

201. Луцик М.Д., Панасюк У.Р., Луцик А.Д. Лектины. Львов, 1984. - 156 с.

202. Луцик А.Д., Детюк Е.С., Луцик М.Д. Лектины в гистохимии. Львов, 1989.- 112 с.

203. Ляшенко И.Э. Факторы персистенции Е. coli: Автореф. дис. . канд. мед. наук. — Оренбург, 1995. 38 с.

204. Максимов А.А. Многолетние колебания численности животных, их причины и прогноз. — Новосибирск, 1984. — 206 с.

205. Максимов А.А, Ердаков JI.H. Циклические процессы в сообществе животных. Новосибирск, 1985. — 236 с.

206. Малайцев В.В, Богданова И.М. Электрофоретическая и имунологиче-ская характеристики Fe+- и Fe"- фракций клеток селезенки мышей СВА // БМЭ. -М., 1977.-№ 10.-С. 451-454.

207. Малофеева JI.C. Воспримчивость к чуме и ее сезонные изменения у полуденной и гребенщиковой песчанок Волго-Уральских песков: Автореф. дис. . канд. мёд. наук. Саратов, 1962. - 15 с.

208. Мандэй К. Физиологический и экологический аспекты стресса // Механизмы биологической конкуренции. М, 1964. - С. 211-241.

209. Маслов М.С. Детский организм и среда // Руководство по педиатрии / Под ред. Ю.Ф.Домбровской. М,1960. - Т. 1.-С. 11-16.

210. Матюшина С.Б. Роль факторов персистенции стафилококков при бактерионосительстве: Автореф. дис. . канд. биол. наук. Оренбург, 1996. — 18 с.

211. Мацуга В.Г. Динамика инфекционной чувствительности полуденных песчанок на разных стадиях активности Волго-Уральского очага чумы: Дис. . канд. мед. наук. Астрахань, 1981. - 147 с.

212. Медицинская микробиология / Под ред. A.M. Королюка, В.Б. Сбойча-кова. СПб, 2002. - 268 с.

213. Медуницин Н.В, Литвинов В.Н, Мороз A.M. // Медиаторы межклеточного иммунитета и клеточного взаимодействия. М, 1980. - С. 57—63.

214. Медуницын Н.В. Приобретенный иммунитет при инфекциях // Иммунология инфекционного процесса. М, 1994. - С. 122-147.

215. Меерсон Ф.З. Роль синтеза нуклеиновых кислот и белков в приспособительных реакциях организма // Вестн. АМН СССР. — 1968. Т. 12. — С. 1-12.

216. Меерсон Ф.З. Общий механизм адаптации и профилактики. М, 1973. -186 с.

217. Меерсон Ф.З. Адаптация, стресс и профилактика. М, 1981. - 278 с.

218. Меерсон Ф.З. Физиология адаптационных процессов (Сер. Рук-во по физиологии). М, 1986. - 639 с.

219. Меерсон Ф.З., Пшенникова М.Г. Адаптация к стрессовым ситуациям и нагрузкам. М., 1988. - 250 с.

220. Месробяну И., Берчану Шт. Иммунобиология, иммунопатология, иммунохимия. Бухарест, 1977.-521 с.

221. Метлин В.Н. Характеристика вирулентности и токсичности чумного микроба, утратившего способность к синтезу фракции I Бейкера // Проблемы особо опасных инфекций. Саратов, 1968. - Вып. 3. - С. 39-43.

222. Методы изучения in vitro клеточного иммунитета / Под ред. Б. Блума, Ф. Глейда. М., 1974. - С. 93-94.

223. Методы исследования в иммунологии. М., 1981. — 386 с.

224. Мецлер Д. Биохимия. М., 1980.-380 с.

225. Мечников ИИ. Лекции о сравнительной патологии воспаления. — М., 1947.-200 с.

226. Микеров А.Н., Кутырев В.В. Белки внешней мембраны иерсиний, кодируемые плазмидой вирулентности // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 1997. - № 3. - С. 3-10.

227. Минсклер Э.И., Шмелева Л.И. Модификация флуорометрического метода определения 11-ОКС в плазме крови // Лабораторное дело. — 1968. — № 6. -С. 366-367.

228. Монцевичюте-Эрингене Е.В. Упрощенные математико-статистические методы в медицинской исследовательской работе // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 1964. - № 4. - С. 71-78.

229. Назарова Л.С., Исупов И.В., Тараненко Т.М., Евсеева Н.В. О митоген-ном действии некоторых антигенов чумного микроба на тимоциты мышей. — Саратов, 1988.-Деп. в ВИНИТИ 21.03.88, № 2136-В. 88.

230. Назарова Л.С. Иммуноморфологический анализ вакцинных и инфекционных процессов при холере и чуме в эксперименте: Дис. . д-ра мед. наук. — Саратов, 1995.-360 с.

231. Наугольных Э.З. Флуорометрическое определение кортикостероидов // Лабораторное дело. 1969. - № 9. - С. 532-539.

232. Наумов А.В., Ледванов М.Ю., Дроздов И.Г. Иммунология чумы. Саратов, 1992.- 120 с.

233. Наумов А.В., Самойлова Л.В. Руководство по профилактике чумы. — Саратов, 1992. С. 219-221.

234. Непряхин Т.Г., Новикова Е.И., Гурьева Е.П. Опыт двукратной профилактической вакцинации живой противочумной вакциной // Тр. Астрахан. про-тивочум. станции. 1955. - Вып. 1. - С. 38-69.

235. Нетрусов А.И., Бонч-Осмоловская Е.А., Горленко В.М. и др. Экология микроорганизмов / Под ред. А.И. Нетрусова. М., 2004. - 272 с.

236. Никитин Д.И., Васильева Л.В., Лохмачева Р.А. Новые и редкие формы почвенных микроорганизмов. М., 1966. - С. 38-40.

237. Никитина В.Е., Богомолова Н.В., Бугаева И.О. и др. Лектины в иммунологии: Науч.- информ. пособие. Саратов, 2001. - 28 с.

238. Новиков Н.А., Харламова М.Н. Организм и среда: основы аутэкологии. Мурманск, 1998. - 274 с.

239. Овчинников Ю.А. Биоорганическая химия. М., 1989. - 360 с.

240. Одум Ю. Экология. М., 1986. - Т. 1. 325 е.; Т. 2. 373 с.

241. Олескин А.В., Ботвинко И.В., Цавкелова Е.А. Колониальная организация и межклеточная коммуникация у микроорганизмов // Микробиология. — 2000. Т. 69, № 3. - С. 309-327.

242. Павловский Е.Н. Курс паразитологии человека. М.; Л., 1934. - 240 с.

243. Павловский Е.Н. Современное состояние учения о природной очаговости болезней // Природноочаговые болезни человека. М., 1960. - 368 с.

244. Панин Л.Е. Энергетические аспекты адаптации. Л., 1978. - 191 с.

245. Панин Л.Е. Биохимические механизмы стресса. Новосибирски, 1983. -233 с.

246. Петров Л.Н., Леви М.И., Спасская М.А. Инфекционная чувствительность и восприимчивость к чуме у различных популяций песчанки // Проблемы особо опасных инфекций. Саратов, 1969. - Вып. 3 (7). - С. 141-148.

247. Петров Р.В., Хаитов P.M. Миграция стволовых клеток из экранированного костного мозга при неравномерном облучении И Радиобиология. 1972. -Т. 12, вып. 1.-С. 69-76.

248. Петров Р.В., Дозморов И.М., Левин А.Д. Характеристика популяций лимфоцитов, полученных препаративным электрофорезом // Иммунология. -1980.-№5.-С. 5-8.

249. Петров Р.В., Хаитов P.M., Манько В.М., Михайлова А.А. Контроль и регуляция иммунного ответа. М., 1981. - 248 с.

250. Петровская В.Г. Генетические основы вирулентности шигелл Флексне-ра // Вестн. АМН СССР. М., 1973. - С. 6-15.

251. Петровская В.Г., Маракуша Б.И. Ранние этапы инфекционного процесса (достижения и проблемы) // ЖМЭИ. 1987. - № 10. - С. 107-116.

252. Пианка Э. Эволюционная экология. -М., 1981. 396 с.

253. Пионтковский С.А. // Проблемы особо опасных инфекций. — Саратов, 1977.-Вып. 4.-С. 36-39.

254. Плецитый Д.Ф., Аверьянова Л.Л. Иммуногенез и неспецифические факторы естественной резистентности // ЖМЭИ. 1975. - № 7. - С. 51-54.

255. Покровский В.И., Авербах М.М., Литвинов В.И., Рубцов И.В. Приобретенный иммунитет и инфекционный процесс. М., 1979. - 280 с.

256. Покровский В.И., Гордиенко С.П., Литвинов В.И. Иммунология инфекционного процесса (руководство для врачей). М., 1994. - 180 с.

257. Покровский В.И., Поздеев В.Н. Медицинская микробиология. — М., 1999.-580 с.

258. Пол У. Иммунология. М., 1989. - 420 с.

259. Проворов Н.А. Генетико-эволюционные основы учения о симбиозе. // Журн. общ. биологии. 2001. - Т. 62, № 6. - С. 412-495.

260. Прозоровский С.В. Микоплазмы // Руководство по эпидемиологии ин-фекционых болезней. М., 1993. - Т. 1. - С. 345-357.

261. Прозоровский С.В. Некоторые механизмы персистенции in vivo мико-плазм и L-форм бактерий // ЖМЭИ. 1994. - № 3. - Прил. С. 14-18.

262. Пронин А.В. От естественной резистентности к протективному иммунитету: роль древних антигенных структур // Медицинская иммунология. -2004.-Т. 6, №3-5.-С. 190-192.

263. Проценко О.А., Анисимов П.И., Можаров О.Т. и др. Внехромосомная наследственность чумного микроба // Эпидемиология и профилактика природ-ноочаговых инфекций. Саратов, 1981.-С. 131-140.

264. Проценко О.А., Анисимов П.И., Можаров О.Т. и др. Выявление и характеристика плазмид чумного микроба, детерминирующих синтез пестицина 1, антигена фракция 1 и экзотоксина "мышиного" токсина // Генетика. 1983. - Т. 19,№7.-С. 1081-1090.

265. Пустовалов B.JL, Васильева Г.И., Киселева А.К., Дорошенко Е.П. Методические рекомендации по применению индекса завершенности фагоцитоза для оценки иммуногенности субкультур вакцинного штамма чумного микроба ЕВ НИИЭГ. Ростов-н/Д., 1986. - 7 с.

266. Пушкарева В.И., Литвин В.Ю. Усиление вирулентности в процессе пассирования Yersinia enterocolitica через макрофаги и инфузорий // ЖМЭИ. -1991. -№ 7. -С. 2-5.

267. Ралль Ю.М. Введение в экологию полуденных песчанок Pallasiomys meridianus Pall // Вестн. микробиол., эпидемиол. и паразитол. 1940. — Т. 18, № 3-4.-С. 320-358.

268. Растунцева Е.В.Сравнительная оценка реактивности организма диких грызунов и лабораторных животных к возбудителю чумы и его антигенам по показателям иммунного и метаболического статуса: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Саратов, 1995. - 21 с.

269. Реймерс Н.Ф. Экология (теории, ьзаконы, правила, принципы и гипотезы).-М., 1994.-367 с.

270. Риклефс Р. Основы общей экологии. М., 1979. - 419 с.

271. Розенберг Г.С. О периодизации экологии // Экология. 1992. - № 4. -С. 3-19.

272. Ройт А. Основы иммунологии. М., 1991. - 248 с.

273. Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д. Иммунология. М., 2002. - 580 с.

274. Романова Ю.И., Гинцбург A.JI. Есть ли сходство в механизмах образования «некультивируемых форм» у грамотрицательных бактерий и спор у бацилл? // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 1993. - № 6. - С. 344-347.

275. Сагеева О.Ф., Сероглазое В.В. Морфологические изменения у белых мышей в зависимости от кратности прививок вакцинным штаммом ЕВ // Проблемы особо опасных инфекций. Саратов, 1971. - Вып. 4. - С. 58-60.

276. Сагимбеков У.А., Пейсахис JI.A., Шмутер М.Ф. О напряженности иммунитета при двукратной вакцинации морских свинок вакциной ЕВ // Проблемы особо опасных инфекций. Саратов, 1971. - Вып. 6. - С. 169-171.

277. Самойлова JI.B. Динамика развития иммунитета к чуме после прививки живой вакциной и особенности иммуногенеза при этой вакцинации: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Саратов, 1963. - 15 с.

278. Самойлова J1.B., Кузнецова К.А., Пионтковский С.А. и др. Современное состояние иммунопрофилактики чумы // Эпидемиология и профилактика особо опасных инфекций в МНР и СССР. Улан-Батор, 1982. - Ч. 2. - С. 45-49.

279. Самойлова Л.В., Пионтковский С.А., Плотникова Е.А. и др. Влияние многократных прививок против чумы на иммунологический статус организма вэксперименте // Патогенез и механизмы формирования иммунитета к особо опасным инфекциям. Саратов, 1987. - С. 3-9.

280. Саркисов Д.С. Очерки по структурным основам гомеостаза. — М, 1977. -351 с.

281. Саяпина JI.B. Пролиферация и популяционный состав иммунокомпе-тентных клеток в динамике вакцинального и инфекционного процессов при чуме: Автореф. дис. канд. мед. наук. Саратов, 1991. - 20 с.

282. Селье Г. Очерки об адаптационном синдроме. М, 1960. — 254 с.

283. Селье Г. Неспецифическая резистентность // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 1961. - № 3. - С. 3-9.

284. Селье Г. Концепция стресса как мы ее представляем в 1976 году // Новое о гормонах и механизме их действия / Отв. ред. Р.Е. Кавецкий. — Киев, 1976.-С. 27-51.

285. Селье Г. Стресс без дистресса. М, 1979. - 123 с.

286. Селье Г. От мечты к открытию. М, 1987. - 368 с.

287. Семина Н.А, Ковалева Е.П., Тихомиров Е.Д. Внутрибольничные инфекции // Руководство по эпидемиологии инфекционных болезней. — М, 1993. -Т. 1.-С: 452-462.

288. Сепиашвили Р.И. Основы физиологии иммунной системы. М, 2003. -240 с.

289. Сергеев П.В. Стероидные гормоны. М, 1984. - 299 с.

290. Сергеева Г.М. Оценка реактогенности и безвредности вакцинных штаммов чумного микроба и вакцин по их стрессорному действию: Автореф. дис. . канд. биол. наук. Москва-Саратов, 1981.-21 с.

291. Сергеева Г.М., Анисимова Т.И., Горькова А.В. и др. Определение ал-лергизирующего и стрессорного действия чумной живой сухой вакцины на организм людей // Патогенез, аллергия и иммунитет к особо опасным инфекциям. -Саратов, 1982.-С. 3-6.

292. Сердобинцев JI.H. Полиморфизм капсульного антигена чумного микроба: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Саратов, 1984. - 18 с.

293. Сероглазов В.В. Приживаемость и эффективность вакцинного штамма ЕВ в зависимости от кратности и интервалов между прививками // Проблемы особо опасных инфекций. 1969. - Вып. 6. - С. 151-154.

294. Серых М.М., Макурина О.Н., Петров A.M. и др. Общая и экологическая иммунология. Самара, 2000. - 174 с.

295. Сиротинин Н.Н. Гипоергия и ее значение в течении инфекции // Казан, мед. журн. 1934. - Т. 9. - С. 895-900.

296. Сиротинин Н.Н. Анафилаксия и иммунитет с точки зрения сравнительной патологии // Успехи совр. биол. 1937. - Т. 7, № 2. - С. 277-282.

297. Сиротинин Н.Н. Про роль микрооргашзму в шфекцн // Пращ Кшев. сан-бак. 1н-та. 1939. - Т. 2. - С. 5-10.

298. Сиротинин Н.Н. Об эволюции реактивности организма // Проблемы реактивности и шока. М., 1952. - С. 8-11.

299. Сиротинин Н.Н. Об эволюции инфекционного процесса // Вестн. АМН СССР. 1955. - № 2. - С. 53-57.

300. Сиротинин Н.Н. Аутоинфекция и значение реактивности организма в ее возникновении и течении // Вопросы патогенеза и патологической анатомии инфекционных болезней. Л., 1957. — С. 60-66.

301. Сиротинин Н.Н. О развитии понятия реактивности // Патол. физиол. -1957.-Вып. 2.-С. 6-12.

302. Сиротинин Н.Н. Значение снижения реактивности организма в возникновении и развитии патологических процессов // Вопросы гипотермии в патологии. Киев, 1969. - С. 5-10.

303. Сиротинин Н.Н. К эволюции резистентности организма // Вопросы иммунологии. Киев, 1965. - С. 7-11.

304. Сиротинин Н.Н. Реактивность и резистентность организма // Руководство по патологической физиологии / Под ред. И.Р. Петрова, A.M. Чернуха. Т. 1, гл. 10.-М., 1966.-С. 346-373.

305. Сиротинин Н.Н. Эволюционная физиология и эволюционная патология (к 120-летию со дня рождения И.И.Мечникова) // Журн. эволюц. биохимии. — 1966.-Т. 11.-С. 5-12.

306. Сиротинин Н.Н. Эволюция резистентности и реактивности организма. — М., 1981.-236 с.

307. Скиртачев B.JL, Беляева Л.И., Мещерякова Л.В. Размножение полуденных и гребенщиковых песчанок в естественных и искусственных популяциях // Эпидемиология и профилактика природно-очаговых инфекций. — Саратов, 1982.-С. 117-122.

308. Слоним А.Д. Частная экологическая физиология млекопитающих. М., 1962. - 432 с.

309. Слоним А.Д. Физиологические механизмы природных адаптаций животных и человека. — М., Л., 1964. — 63 с.

310. Слоним А.Д. Экологическая физиология животных. М., 1971. - 448 с.

311. Слоним А.Д. Экологическая физиология животных. 4.1. Общая экологическая физиология и физиология адаптаций. М., 1979. - 439 с.

312. Смирнова Е.Б., Аванян Л.А. Содержание 2,3 дифосфоглицериновой кислоты в эритроцитах чувствительных и резистентных к чуме полуденных песчанок// Патологическая физиология особо опасных инфекций. Саратов, 1981. -С. 21-24.

313. Смирнова J1.A., Олькова Н.В., Нерадовский В.А. Изучение чувствительности мышей различных линий к возбудителю чумы // Лабораторные животные в мед.-биол. исследованиях: Тез. докл. науч. конф. — М., 1974.-С. 59-60.

314. Смирнова Н.И., Лозовский Ю.В. Биопленка: структура, функция, ПЦР-диагностика // Современные технологии в диагностике особо опасных инфекционных болезней: Материалы 4-й Межгос. науч.-практ. конф. государств-участников СНГ. Саратов, 2003. - С. 175-177.

315. Сохин А.А. Парадокс инфекционного иммунитета // ЖМЭИ. — 1988. -№ 1. С. 73-80.

316. Станиер Р. Эволюционная и физиологическая адаптация или дарвинизм в микробиологии // Адаптация у микроорганизмов. М., 1956. - С. 13-32.

317. Степаншина В.Н., Коробова О.В., Анисимов А.П. и др. Изучение препаратов капсульного антигена, выделенных из иммуно-химически атипичных штаммов возбудителя чумы // Проблемы особо опасных инфекций. Саратов, 1995.-№5.-С. 94-96.

318. Стукова Н.Ю. Изменение функциональной активности кислородзави-симых бактерицидных систем фагоцитов при взаимодействии с чумным микробом и его антигенами: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Саратов, 1991. - 19 с.

319. Тайен М.Л. Онтогенез иммунной системы у мышей. Исследования in vivo и in vitro // Онтогенез. 1972. - Т. 3. - С. 27-39.

320. Тараненко Т.М., Дальвадянц С.М., Бахрах Е.Э. и др. Изучение химического состава и некоторых биологических свойств соматического антигена чумного микроба // Проблемы особо опасных инфекций. Саратов, 1972. -Вып. З.-С. 93-98.

321. Тараненко Т.М., Бахрах Е.Э., Гольдфарб Л.М., Андреева И.П. К характеристике липополисахаридов, изолированных из культур, выделенных на

322. Холмогорье Бадхыз // Проблемы особо опасных инфекций. 1977. — Вып. 6(58). -С. 17-20.

323. Тараненко Т.М., Бахрах Е.Э., Степанов В.М. К характеристике специфических полисахаридов вирулентного штамма Y.pestis и его ауксотрофных мутантов // Тез. докл. VI Всесоюз. конф. по химии и биохимии углеводов. — М., 1977.-С. 90-91.

324. Тараненко Т.М. Углеводсодержащие антигены чумного и псевдотуберкулезного микробов. Теоретические и прикладные аспекты: Дис. . д-ра биол. наук. Саратов, 1988. - 328 с.

325. Тараненко Т.М., Ермакова Г.В., Андреева И.П. и др. Структурно-функциональное изучение гликолипидного токсина чумных и псевдотуберкулезных иерсиний // Микробиология, биохимия и специфическая профилактика карантинных инфекций. Саратов, 1990. - С. 49-51.

326. Тимаков В.Д. Микробиология. М., 1977. - 328 с.

327. Титенко М.М., Кормилицын А.В., Можаров О.Т. К дальнейшей характеристике препаратов Ф1, выделенных из живых чумных микробов // Профилактика природноочаговых инфекций. Ставрополь, 1983. — С. 325—326.

328. Титенко М.М. Исследование антигенов, специфичных для возбудителя чумы, с целью совершенствования методов диагностики: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Саратов, 1985. - 18 с.

329. Тихомирова Е.И., Павлова Л.П., Горькова А.В. Применение метода пассивного локального гемолиза в геле для изучения на клеточном уровне иммунного ответа к чуме // Биотехнология, иммунология и биохимия особо опасных инфекций. Саратов, 1989. - С. 25-31.

330. Тихомирова Е.И., Горькова А.В., Павлова Л.П., Лобанов К.Н. Изучение взаимосвязи в популяционном составе лимфоцитов органов иммунной системы с процессом формирования в организме протективного иммунитета к чуме //

331. Актуальные проблемы и задачи биохимии, диагностики и иммунопрофилактики особо опасных инфекций. Саратов, 1991. - С. 57-65.

332. Тихомирова Е.И, Горькова А.В, Тихомирова JI.A. Влияние вакцинного штамма ЕВ и антигенов чумного микроба на процесс формирования невосприимчивости к чуме // Материалы 1 съезда иммунологов России. Новосибирск, 1992.-С. 478-479.

333. Тихомирова Е.И, Горькова А.В, Тихомирова JI.A, Челова JI.A. Механизмы формирования иммунитета к чуме // Тез. докл. Межгос. науч. конф. «100 -летие открытия возбудителя чумы». Алма-Ата, 1994. - С. 74.

334. Тихомирова Е.И., Заднова С.П., Волох О.А. и др. Лектин вакцинного штамма Yersinia pestis EV и изучение его иммунобиологических свойств // ЖМЭИ. 2002. - № 6. - С. 36-41.

335. Тихомирова Е.И., Семихатова С.Н. Состав лимфоцитов органов иммунной системы полуденной песчанки // Териофауна России и сопредельных территорий: Тез. докл. VII съезда Териол. о-ва. — М., 2002. С. 87.

336. Тихомирова Е.И., Тихомирова Л.А., Семихатова С.Н., Юсупова З.С. Эколого-иммунологические особенности полуденной песчанки Нижнего Поволжья // Поволж. экол. журн. 2003. - С. 172-177.

337. Тихомирова Е.И., Водянова Т.В., Елисеев Ю.Ю. Продукция цитокинов перитонеальными макрофагами в процессе фагоцитоза возбудителей внутри-больничных инфекций // Актуальные проблемы медицины и биологии. Вып. 2. -Томск, 2003.-С. 227.

338. Тихомирова Л.А., Горькова A.B., Пономарев Н.Г. и др. Сдвиги метаболизма в процессе формирования иммунитета к чуме и пути их коррекции II

339. Иммунология и иммунопрофилактика чумы и холеры. Саратов, 1980. - С. 7780.

340. Тихомирова Л.А.,Челова Л.А.,Зарипов Ш.Н. и др. Механизмы гормональной регуляции иммунного гомеостаза при формировании иммунитета к чуме, при чумной инфекции и интоксикации // РЖ Биология: вирусология, микробиология. 1993. - № 116. - 4263 ДЕП.

341. Тюлембаев М.А. Иммунная реакция организма белых мышей на кап-сульный антиген чумного микроба // Материалы Межгос. науч.-практ. конф. «Организация эпиднадзора при чуме и меры ее профилактики». Алма-Ата, 1992.-Т. 1.-С. 148-149.

342. Уайт А. и др. Основы биохимии: Т.З. / Пер. с анг. М., 1981. - С. 16081629.

343. Учитель И .Я. Макрофаги в иммунитете. М., 1978. - 200 с.

344. Федоров В.Д., Гильманов Т.Г. Экология. М., 1980. - 433 с.

345. Федорова В.А. Теоретико-экспериментальные аспекты изучения белковых и углеводсодержащих антигенов возбудителей чумы и холеры с использованием поли- и моноклональных антител: Дис. . д-ра мед. наук. Саратов, 2003.-362 с.

346. Физиология адаптационных процессов (Руководство по физиологии). -М., 1986.-С. 420.

347. Филиппов А.Ф., Николаев Н.И., Пономарев Н.Г. и др. Сравнительное изучение иммуногенности фракции I чумного микроба и чумной живой вакцины для морских свинок // Проблемы особо опасных инфекций. Саратов, 1973. -Вып. 4(32).-С. 57-61.

348. Фрейдлин И.С. Система мононуклеарных фагоцитов. М., 1984. -272 с.

349. Фролов А.Ф., Зарицкий A.M., Фельдман Ю.М. Еще раз об условной патогенности микроорганизмов (ответ оппоненту) // ЖМЭИ. 1989. — № 5. - С. 96-98.

350. Хаитов P.M., Игнатьева Г.А., Сидорович И.Г. Иммунология. М., 2000. -430 с.

351. Хаитов P.M., Пинегин Б.В., Истамов Х.И. Экологическая иммунология. -М., 1995.-230 с.

352. Харлова Г.В. Регенерация лимфоидных органов у млекопитающих. -М., 1987.- 126 с.

353. Хаскин В.В. О некоторых ошибках в теоретических концепциях индии-видуальной адаптации // Журн. общ. биологии. 1981. -Т. 48, № 6.-С. 748-755.

354. Хочачка П., Сомеро Дж. Стратегия биохимической адаптации. М., 1977.-400 с.

355. Цыбиков Н.И. Иммунологический механизм регуляции системы гомео-стаза // Нейро-гуморальная регуляция иммунного гомеостаза. — Л., 1986. — С. 255-256.

356. Челова Л.А. Изменение баланса кортикостероидных гормонов и активности аминотрансфераз и альдолаз при экспериментальной чуме: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Саратов, 1984. - 23 с.

357. Чернова Н.М., Былова A.M. Экология, 2-е изд. -М., 1988. 265 с.

358. Четверикова З.П. Креатинкиназная система и энергетический обмен // Журн. общ. биологии. 1981. - Т. XLII, № 4. - С. 586-596.

359. Шанина Л.Н., Дальвадянц С.М. Аутоиммунные реакции у животных, привитых живой, убитой и «химической» противочумными вакцинами // Проблемы особо опасных инфекций. Саратов, 1978. - Вып. 5. - С. 63-64.

360. Шевелев А.С. Территориальные проблемы иммунной системы // Иммунология. 1991. -№ 4. - С. 68-72.

361. Шендеров Б.А. Значение колонизационной резистентности в патогенезе инфекционных заболеваний // Иммунология инфекционного процесса. — М., 1994.-С. 112-122.

362. Шилов И.А. О механизмах популяционного гомеостаза у животных // Успехи совр. биологии. 1967. - Вып. 64, № 2. - С. 333-351.

363. Шилов И.А. Эколого-физиологические основы популяционных отношений у животных. М., 1977.-С. 140-193.

364. Шилов И.А. Стресс как экологическое явление П Зоол. журн. — 1984. — Вып. 63, №6. -С. 805-812.

365. Шилов И.А. Физиологическая экология животных. М., 1985. - 321 с.

366. Шилов И.А. Экология. М,, 2003. - 512 с.

367. Шилов Н.А. О механизмах популяционного гомеостаза у животных // Успехи совр. биологии. 1967. - Т. 64, вып. 2(5). - С. 333-351.

368. Шляхов Э.Н., Литвин В.Ю. Эколого-эпидемиологические принципы классификации инфекционных болезней человека//ЖМЭИ. 1989. — № 7. - С. 109-114.

369. Шмальгаузен И.И. Интеграция биологических систем и их саморегулирование // Бюл. МОИП. Сер. биология. 1961. - Т. 65, вып. 2. - С. 104-134.

370. Шмальгаузен И.И. Избранные труды. М., 1982. - 383 с.

371. Шмидт-Ниельсен К. Физиология животных. Приспособление и среда. — М., 1982.-Т.1, 2.-785 с.

372. Шмутер М.Ф., Егорова Р.П., Волохова В.А., Бибиков В.А. Чувствительность к чуме и течение инфекционного процесса у четырех видов песчанок в разные периоды их жизни // Тез. докл. науч. конф. Ставрополь, 1957. — С. 57— 60.

373. Шмутер М.Ф., Абрамова Г.Ф., Лопатухина Л.Г. О нецелесообразности проведения двукратных прививок против чумы // Материалы расширенной науч. конф., посвящ. 40-летию Казах. ССР. Алма-Ата, 1961. - С. 196-198.

374. Штельман Ю.А., Донская Т.Н. Влияние гормональных препаратов на инфекционную чувствительность полуденных песчанок и вирулентность возбудителя чумы // Тез. докл. обл. науч.-практ. конф. Астрахань, 1989. — С. 36— 37.

375. Штельман Ю.А. Влияние гормонального баланса в организме полуденных песчанок на их инфекционную чувствительность к чуме и вирулентные свойства чумного микроба: Дис. . канд. биол. наук. Саратов, 1994. — 168 с.

376. Шутова Н.Т., Черникова Е.Д. Патологическая физиология развивающегося организма. Л., 1974. - 152 с.

377. Шхинек Э.К., Достоевская Л.П., Бирюков В.Д. О роли глюкокортикои-дов в развитии гуморального иммунного ответа в целостном организме // Проблемы эндокринологии. 1982. - Т. 28, № 1. - С. 64-70.

378. Шхинек Э.К., Корнева Е.А., Достоевская Л.П. Глюкокортикоидные гормоны и иммунный ответ // Физиол. журн. СССР им. И.М. Сеченова. 1984. -Т. 70, №2.-С. 213-220.

379. Щербаков А.А. Мембранные белки чумного микроба (теоретические и прикладные аспекты): Автореф. дис. д-ра биол. наук. Саратов, 1991. —36 с.

380. Экологическая физиология животных. Ч. 1. Общая экологическая физиология и физиология адаптаций / Отв. ред. А.Д. Слоним. М, 1979. - 440 с.

381. Эльберт Б.Я. Советская иммунология в проблеме живых вакцин // ЖМЭИ.- 1957.-№ 11.-С. 40-46.

382. Эрлих П. Экспериментальные исследования о специфической терапии // Биологические этюды. СПб., 1911. - 115 с.

383. Ярилин А.А. Иммунологические функции тимуса // Итоги науки и техники. Сер. Иммунология. М, 1990. - 188 с.

384. Ярилин А.А. Основы иммунологии. М, 2002. - 480 с.

385. Яровая JI.M, Алешкин В.А. Новые данные о химической структуре липополисахаридов и практические перспективы // ЖМЭИ. 1991. - № 3. — С. 73— 78.

386. Akira S. Mammalian Toll-like receptors // Current Opinion in Immunol. — 2003.-Vol. 15.-P. 5-11.

387. Altare F., Lammas D, Revy P. et al. Inherited Interleukin 12 Deficiency in a Child with Bacille Calmette-Guerin and Salmonella enteritidis Disseminated Infection//J. Clin. Invest. 1998. - Vol. 102, № 12. - P. 2035-2040.

388. Alzona M, Jack H.-M, Fisher R, Ellis T. IL-12 activates IFN-y production through the preferential activation of CD30+ T cells // J. Immunol. 1995. - Vol. 154, № l.-P. 9-16.

389. Atlas R.M, Bartha R. Microbial Ecology. Fundamentals and applications. -An imprint of Addison Wesley Longman, Ins, 1998. 340 p.

390. Baker E., Sommer H., Foster L. et al. Antigenic structure of Pasleurella pestis and the isolation of a installine antigen // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1947. - Vol. 64.-P. 139-141.

391. Baker E.E., Sommer H., Foster L. et al. Studies of immunisation against plague. 1. The isolation and characterization of the soluble antigen of the Past, pestis // J. Immunol. 1952. - Vol. 68, № 2. - P.131-145.

392. Bennet L.G., Tomabene Т.О. Characterization of the antigenic subunits of the envelope protein of Yersinia pestis // J. Bacteriol. 1974. - Vol. 117, № 1. — P. 48-54.

393. Beveridge T.J. Occurence of S-layers // 7th Intern. Congress of Bacteriol. and Applied Microbiol. Division. Prague, Czech Republic, 1994. — P. 58.

394. Bieling R. Resistenz und Immunitat // Handbuch der allgemeinen Patholo-gie. Berlin, Springer, 1956. - Bd. 1. - S. 601-603.

395. Blakley B.R., Hamilton D.L. The effect of copper deficiency on the immune response in mice // Drag-Nutr Interact. 1987. - Vol. 5, № 2. - P. 103-111.

396. Blalock J.E. A molekular basis for bidirectional communication be twin the immune and neuroendokrine systems // Physiol. Rev. 1989. — Vol. 69, № 1. — P. 1-32.

397. Bona C.A., Bonilla F.A. Textbook of Immunology. 2nd edition. Harwood Academic Pub. -1996. - ISBN: 3718605961.

398. Borowitz M.J., Croker B.P., Burchette J. Immunocytochemical detection of lymphocyte surface antigens in fixed tissue sections // J. Histochem. Cytochem. -1982.-Vol. 30.-P. 171-174.

399. Bovin A., Mesrobeanu J., Mesrobeanu L. Technique pour la preparation des polyosides microbiens specifiques // Conp. Rend. Soc. Biol. — 1933. — Vol. 113. — P. 490-492.

400. Boyden S.V. The adsorption of protein on erythrocytes treated with tannic acid and subsequent hemmaglutination by antiprotein sera // J. Exp. Med. 1951. -Vol. 93, №2.-P. 107-120.

401. Boyum A. Separation of blood leycocytes, granulocytes and lymphocytes // Tissue antigens. 1974. - Vol. 4. - P. 269-274.

402. Boyum A. Separation of leucocytes from blood and bone marrow // Scand. J. Clin. Lab. Invest. 1968. - Vol. 21. - P. 97-99.

403. Brade L., Rietschel E.T., Kusumoto S. et al. Immunogenicity and antigenicity of synthetic Escherichia coli lipid A // Infect. Immunol. 1986. - Vol. 51, № 1. - P. 110-114.

404. Brade L., Brandenburg K., Kulin H.M. et al. The immunogenicity and antigenicity of lipid A are influence by physio-chemical state and environment // Infect. Immun.- 1987. Vol. 55, № 11. - P. 2636-2644.

405. Bradford M.M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding // Anal. Bio-chem. 1976. - Vol. 72. - P. 248-254.

406. Breitwieser A., Kupcu S., Howorka S., et al. 2-D protein crystals as an immobilization matrix for producing reaction zones in dipstick-style immunoassays // Biotechniques. 1996. - Vol. 21, № 5. - P. 918-925.

407. Brubaker R.R., Beesley E.D., Surgalla M.J. Pasieurella pestis: Role of pes-ticin I and Ipon in Experimental Plague // Science. 1965. - Vol. 149. - P. 422-424.

408. Brubaker R.R. The genus Yersinia: biochemistry and genetics of virulence // Curr. Top. Microbiol. Immunol. 1972. - Vol. 57. - P. 111-158.

409. Brubaker R.R. Expression of virulence in Yersinia // Microbiology. — 1979 / Ed. D. Schlessinger. American Society for Microbiology. - Washington, D.C., 1979.-P. 168-171.

410. Brubaker R.R. Factors promoting acute and chronic diseases caused by Yersinia // Clinical Microbiology Reviews. 1991. - Vol. 4, № 3. - P. 309-324.

411. Brubaker R.R. Yersinia pestis and bubonic placue // The Procaryotes / Ed. M. Dworkin, S. Falkow. Springer-Verlag. - New York, 2000. - P.

412. Burrows T.W. Virulence of Pasteurella pestis and immunity to plague // Er-geb. Microbiol. Immunol. Exp. Ther. 1963. - Vol. 37. - P. 59-113.

413. Caston J.R., Berenguer J., Kocsis E., Carrascosa J.L. 3-Dimensional structure of different aggregates built-up by the S-layer protein of Thermus thermophilus // J. Struct. Biology. 1994. - Vol. 113, № 2. - P. 164-176.

414. Chapes S.K. Glukokortikoid effects on immune cell activation by staphylococcal exotoxin and lipopolisaccharide //Trans kens. Acad. Sci. 1992. - Vol. 95, № 8.-P. 23-28.

415. Charmetzky W.T., Shuford W.W. Survival and growth of Yersinia pestis within macrophages and an effect of the loss of the 47-megadalton plasmid on growth in macrophages // Infect. Immunol. 1985. - Vol. 47. - P. 234-241.

416. Chen Т.Н. The antigenic structure of Pasteurella peslis and the relationship to virulence and immunity // Acta Trop. 1965. - Vol. 22, № 2. - P. 97-117.

417. Collier W. Iranda Bacterien-haemagglutination // J. Microbiol. Serol. 1955. -Vol. 21.-P. 133-140.

418. Colonna M., Krug A., Cella M. Interferonproducing cells: on the front line in immune responses against pathogens // Currant Opinion in Immunol. 2002. -Vol. 14.-P. 373-379.

419. Cusumano V., Tufano M.A., Mancuso G. et al. Porins of Pseudomonas aeruginosa.induce release of tumor necrosis factor alfa and interleukin-6 by hyman leykocytes // Infection and immunity. 1997. - Vol. 65, № 5. - P. 1683-1687.

420. Daly К., Nguyen P., Zhang W. J. et al. Contribution of the T cell receptor alpha chain to differential recognition of bacterial and retroviral superantigens // J. Immunol. 1995. - Vol. 155. - P. 27-34.

421. Davies D.A.L. A specific polysaccharide of Pasteurella pestis // Biochem. J. 1956. - Vol. 63. - P. 105-116.

422. Davies D.A.L. Polysaccharides of gram-negative bacteria // Advan. Carbohydrate Chem. 1960. - Vol. 15. - P. 271-340.

423. Degani H., Langhlin M., Campbell S., Shalman R.G. Kinetics of createne kinase in heart: a 31 p WMR saturation and inversion - transfer study // Biochemistry. - 1985. - Vol. 24.-P. 5510-5516.

424. Dinarello C.A. The biological properties of interleukin-1 // Eur. Cytokine Netw. 1994. - Vol. 5. - P. 517-531.

425. Dixon T.F., Purdom M. Serum 5-nucleotidase // J. Clin. Pathol. 1954. -Vol. 7.-P. 341-343.

426. Donavan J.E., Nam D., Fukui G., Surgalla M.T. Role of the capsule of P. pestis in bubonic plague in the guinea pig // J. Infect. Dis. 1961. - Vol. 109, № 2. - P. 154-157.

427. Dugas N., Palacios-Calender M., Dugas B. et al. Regulation by endogenous interleukin-10 of the expression of nitric oxide synthase induced after ligation of CD23 in human macrophages // Cytokine. 1998. - Vol. 10. - P. 680-689.

428. Dybedal I., Larsen S., Jacobsen S.E IL-12 directly enhances in vitro murine erythropoiesis in combination with IL-4 and stem cell factor // J. Immunol. 1995. -Vol. 154.-P. 4950-4955.

429. Egelseer E., Schocher I., Sara M., Sleytr U.B. S-layers from Bacillus stearothermophilus DSM 2358 fiincctions as an adhesion site for a high-molecular-weight amylase //J. Bacteriol. 1995. - Vol. 177, № 6. - P. 1444-1451.

430. Eshdat Y., Sharon E. Recognitory bacteriol sarface lectins whish mediate its mannose-specific adherense to bucaiyotio cells // Biol. Cell. 1984. - Vol. 51. - P.259.266.

431. Fearon D.T., Locksley R.M. The instructive role of innate immunity in the acquired immune response // Science. 1996. - Vol. 272. - P. 50-53.

432. Fisher R.A. The genetical theory of natural selection. Oxford: Clarendon press, 1930.-272 p.

433. Fisher R.A. The genetical theory of natural selection (2-nd ed.). N.Y.: Dover, 1976.-291 p.

434. Ford L.A., Thune R.L. Immunization of channel cattish with a crude acid-extracted preparation of motile Aeromonad S-layer protein // Biomed. Lett. 1992. -Vol. 47.-P. 386-392.

435. Fox E.U., Higuchi K. Synthesis of the fraction 1 antigenic protein by Pas-teurella peslis // J. Bacteriol. 1958. - Vol. 75. - P. 209-216.

436. Galanos C., Luderitz O., Westphal O. Preparation and properties of antisera against the lipid-A component of bacterial lipopolysaccharides // Eur. J. Biochem. —1971.-Vol. 24.-P. 116-122.

437. Gearing A.J.H., Newman W. Circulating adhesion molecules in disease // Immunol. 1993.-Vol. 14/10.-P. 506-511.

438. Gessani S., Belardelli F. IFN-y expression in macrophages and its possible biological significance // Cytok. & Grow. Fac. Rev. 1998. - Vol. 9. - P. 117-123.

439. Gilboa-Garber N. The Biological Functions of Ps. aeruginosa Lectins // Lectins: Biol. Biochem. Clin.Biochim. 1983. - Vol. 3. - P. 485-501.

440. Gilboa-Garber N. Rossible application of Pseudomonas aeruginosa Ieclins // Avsstacts 8-th Intern. Congress of bacteriology and Applied Microbiology Division Ierusalim. Israel, 1996. - P. 92.

441. Girard G. Absence d'antigene glucido-lipidique chez le bacille de la peste et le bacilla de la pseudotuberculose des rongeurs // C. R. Soc. Biol. 1941. - Vol. 135. -P. 1577-1579.

442. Glosnicka R. Studies on Yersinia pestis antigens // Bull. Inst, marit. Trop. Med. Gdynia. 1980. - Vol. 31, № l.-P. 93-95.

443. Glosnicka R, Gruszkiewicz E. Chemical composition and biological activity of the Yersinia pestis envelope substanse // Infect. Immunol. 1980. - Vol. 30, № 2. -P. 506-512.

444. Godfrey D.L, MacDonald H.R., Kronenberg M. et al. NKT cells: what's in a name? // Nature Review Immunol. 2004. - Vol. 4. - P. 231-237.

445. Gonzalo J.A., Mazuchelli R, Mellado M. et al. Enterotoxin septic shock protection and deficient T helper 2 cytokine production in growth hormone transgenic mice // J. Immunol. 1996. - Vol. 157. - P. 3298—3304.

446. Gordon S, Clarke S, Greaves D, Doyle A. Molecular immunobiology of macrophages: recent progress. Sir William Dunn School of Pathology, University of Oxford, UK.

447. Gorkova A.V, Naumsina M.S., Scurcina J.J, Adamov A.K. Some aspect of studyng regulatory mechanisms of the immunogenesis functional-structural levels of the organism integration // Epidemiologie, microbiologie, immunologie. 1972. - .№ 6.-P. 281.

448. Gossman W, Oldfield E. Quantitative Structure- Activity Relations for y5 T Cell Activation by Phosphoantigens // J. Med. Chem. 2002. - Vol. 45. - P. 48684874.

449. Greenberg S, Grinstein S. Phagocytosis and innate immunity // Current Opinion in Immunol. 2002. - Vol. 14. - P. 136-145.

450. Guyot G. Uder die bakteriale Haemagglutination // Azbl. Bakt. 1. Abt. Orig. 1988.-Vol. 47.-P. 640-653.

451. Hancock C.E, Shaedler R. W, MacDonald Th. T. Multigenic control of resistance to Yersinia enterocolitica in inbred stains of mice // Infect. Immunol. 1988. -Vol. 56, №2.-P. 532-533.

452. Haraguchi S., Good R.A., Day N.K. Immunosuppressive retroviral peptides: cAMP and cytokine patterns // J. Immunol. 1995. - Vol. 16(12). - P. 595-603.

453. Haraguchi S., Day N.K., Nelson R.P. et al. Good Interleukin 12 deficiency associated with recurrent infections // J. Immunol. 1998. - Vol. 95. — P. 1312513129.

454. Harding C.V., Ramachandra L., Wick M.J. Interaction of bacteria with antigen presenting cells: influences of antigen presentation and antibacterial immunity // Current Opinion in Immunol. 2003. - Vol. 15. - P. 112-119.

455. Henney M. Guantitation of the cellmediated immune response. l.The number of cytolitically active mouse lymphoid cells induced by immunisation with allogenlic cells//J. Immunol.-1971.-Vol. 107, №6.-P. 1558-1566.

456. Hironata S. Human Thl responses driven by IL-12 are associated with enhanced expression of CD40 ligand // Clinical & Experimental Immunology. — 1999. -Vol. 115, № 1- P. 78-85.

457. Hitchcock P.J., Brown T.M. Morphological heterogeneity among Salmonella lipopolysaccharide chemotipes in silver-stained polyacrylamide gels // J. Bacteriol. -1983. Vol. 154. - P. 269-277.

458. Hitchcock P.J., Leive L., Makela H. et al. Lipopolysaccharide Nomen-clature past, present and future (minireview) // J. Bacteriol. - 1986. - Vol. 166. - P. 699705.

459. Hoist O., Ulmer A.J., Brade H. et al. Biochemistry and cell biology of bacterial endotoxins // FEMS Immunol. Med. Microbiol. 1996. - Vol. 16. - P. 83-104.

460. Hoist O., Susskind M., Grimmecke D., Brade H. Core structures of enterobacterial lipopolysaccharides // Prog. Clin. Biol. Res. 1998. - Vol. 397. - P. 23-35.

461. Hoist O. Chemical structure of the core region of lipopolysaccharides // Endotoxin in Health and disease / Ed. H. Brade, D.C. Horrison, S. Opal, S. Vogel. -New York: Marcel Dekkev Inc., 1999. P. 115-154.

462. Jan'eway C.A., Travers P. Immunobiology. The immune system in health and disease. London, UK: Current Biol. Ltd., 1997.

463. Jann K., Westphal O. Microbial polysaccharides // The Antigens /Ed. M. Sela. N.Y.: Acad. Press, 1975. - Vol. 3. - P. 1-125.

464. Jerne N.K., Nordin A. A. // Science. 1963. - Vol. 140. - P. 405.

465. Jerne N.K. Towards a network theory of the immune system // Ann. Inst. Pasteur Immunol. 1974. - Vol. 125. - P. 373-389.

466. Jondal M., Holm G., Wigzell H. Surface markers on human T and В lymphocytes. I. A larg population of lymphocytes forming non-immune resettes with sheep red blood cells // J. Exp. Med. 1972. - Vol. 136. - P. 207-211.

467. Joyce S., Van Kaer L. CD 1-restricted antigen presentation: an oily matter // Current Opinion in Immunol. 2003. - Vol. 15. - P. 95-104.

468. Kadis S., Ajl S. Site and mode of murine toxin of Pasteurella pestis // Microbiol. Toxins. 1970. - Vol. 3. - P. 39-63.

469. Kessel M. S-layers and crystalline porins: structure and function // 7th Intern. Congress of Bacteriol. and Applied Microbiol. Division. Prague, Czech Republic, 1994.-P. 58.

470. Kitasato S. The bacillus of bubonic plague // Lancet. 1894. — Vol. 2. - P. 428-430. •

471. Kleitke B. Vorstellungen zum biochemichen Mechanismus der Entstehung einer Herzhypertrophie // Abh. Akad. Wiss. DDR. Abt. Math. Natur. Wiss. Techn., 1981.-№ 1.-P. 227-232.

472. Kostrzynska M., Dooley J.S.G., Shimojo T. et al. Autogenic diversity of the S-layers protein from pathogenic strains of Aeromonas hydrophhyla and Aeromonas veronii biotype sobiria // J. Bacteriol. 1992. - Vol. 174, № 1. - P. 40-47.

473. Kraus R., Ludwig S. Uber Bakterien haemagglutinine und Antihaemag- glu-tinine. Wiener keinishe Wochenschrift, 1902. - Vol. 15. - P. 120.

474. Kutyrev V.V., Popov Yu.A., Protsenko O.A. Pathogenicity plasmids of the plague microbe (Yersinia pestis) // Mol. Genet. Microbiol. Virusol. 1986. - № 6. — P. 3-11.

475. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 // Nature. 1970. - № 227. - P. 680-685.

476. Larrabee A.R., Marshall J.D., Crozier D. Isolation of antigens of Past, pestis. I. Lipopolysaccharide-Protein complex and R and S antigens // J. Bacteriol. 1965. — Vol. 90.-P. 116-119.

477. Larson C.L., Philip C.B., Wicht W.C. et al. Precipitin reactions with soluble antigens from suspensions of Pasteurella pestis of from tissues of animals dead of plague // J. Immunol. 1951. - Vol. 67. - P. 289-298.

478. Lawton W.D., Surgalla MJ. Immunization against plague by a specific fraction of Past, pseudotuberculosis // J. Inf. Dis. 1963. - Vol. 113. - P. 39^2.

479. Leal N.C., Almeida A.M.P., Ferreira L.C.S. Plasmid composition and virulence-associated factors of Yersinia pestis isolates from a plague outbreak at the Pa-raiba state, Brazil // Rev. Inst. Med. trop. S. Paulo. 1989. - Vol. 31 .-P. 295-300.

480. Lindberg A.A. Surface carbohydrates of prokaryotic cell. N.Y.: Acad. Press, 1977.-P. 289-356.

481. Losick R., Robbins P. W. The receptor site for a bacterial virus // Sci. Amer. -1969.-Vol. 221.-P. 121-124.

482. Loosdrecht M.C.M. van, Lyklema J., Norde W. et al. The role of bacterial cell wall hydrophobicity in adhesion // Appl. and Enviromental Microbiol. 1987. -Vol. 53, № 8. - P. 1893-1897.

483. Luderitz 0., Staub A.M., Westphal O. Immunochemistry of О and R antigens of Salmonella and related Enterobacteriaceae // Bacterial. Rev. 1966. - Vol. 30. -P. 192-255.

484. Luderitz O., Jann K., Wheat R. Somatic and capsular antigens of gramne- ga-tive bacteria // Compr. Biochem. 1968. - Vol. 26A. - P. 105-228.

485. Luderitz O., Freudenberg M.A., Galanos Ch. et al. Lipopolysaccharides of gramnegative bacteria // Current topics in membranes and transport. N.Y.: Acad. Press, 1982.-Vol. 17.-P. 79-151.

486. Luderitz O., Tanamoto K., Galanos C., Westphal O. Structural principles of lipopolysaccharides and biological properties of synthetic partial structures // Bacterial Lipopolysaccharides. 1983. - P. 1-17.

487. Lugtenberg В., Bronstein H., Selm N. van, Peters R. // Biochim. Biophys. Acta. 1977. - Vol. 433. - P. 118.

488. Luster A.D. The role of chemokines in linking innate and adaptive immunity // Current Opinion in Immunol. 2002. - Vol. 14. - P. 129-135.

489. Luster M., Ackermann M., Germolec D., Rosenthal G. Perturbations of the immune system by xenobiotics // Environ. Health Perspect. 1989. - № 81. - P. 157-162.

490. Maffise A., Gurlist R.H. Elaboration of cellulose fibrils by Agrobacterium tumefaciens during attachment to carrjt cells // J. Bacteriol. 1988. - Vol. 145. - P. 586-595.

491. Maslinski W. Cholinergic receptors of lymphocytes // Brin. Behav. and Immunol. 1989. - № 1. - P. 1-3.

492. Maslinski W., Grabczeowska E., Lakowska-Bozzek H., Ruzewski J. // Eu-rop. J. Immunol. 1987. - Vol. 17, № 7. - P. 1059-1063.

493. Mastrantonio P., Cerquetti M., Sebastianelli A. A. et al. Properties of a cell wall protein antigen of Clostridium difficile // 7th Intern. Congress of Bacteriol. and Applied Microbiol. Division. Prague, Czech Republic, 1994. — P.60.

494. Medearis D., Camitta B.M., Heath E.G. Cell wall composition and virulence in E. coli // Exp. Med. 1968. - Vol. 128. - P. 399.

495. Mei H.C. van der, Weerkamp A.H., Busscher H.J. A comparison of various methods to determine hydrophobic properties of streptococcal cell surfaces // J. Microbiol. Meth. 1987. - Vol. 6. - P. 277-287.

496. Messner P., Christian R., Kolbe J. et al. Analysis of a novel linkage unit of O-linkage carbohydrates from the crystalline surface layer glycoprotein of Clostridiuv thermohydrosulfuricum S102-70 // J.Bacteriol. 1992. - Vol. 174, № 7. - P. 22362240.

497. Messner P., Christian R., Neuniger C., Schulz G. Similarity of core structures in 2 different glycans of tyrosine-linked eubacterial S-layer glycoproteins // J. Bacteriol. 1995. - Vol. 177, № 8. - P. 2188-2193.

498. Meyer K.F. Immunity in plague: A critical review of some recent studies // J. Immunol. 1950. - Vol. 64. - P. 139-163.

499. Meyer K.F. Active immunisation of man against plague. Lecture 2 // WHO. Travelling Seminar on Plague Control. Moscow, USSR, 1965. - P. 23.

500. Meyer K.F., Cavanaugh D.C., Dartelloni P.J., Marshall J.D. Plague immunization. 1. Past and present trends//J. Infect. Dis. 1974. - V. 129.-P. 13-18.

501. Meyer K.F., Smith G., Foster L.E. et al. Plague immunization. IY. Clinical reactions and serologic response to inoculations of Haffkine and freese-dried plague vaccine // J. Infect. Dis. 1974. - V. 129. - P. 530-536.

502. Meyer K.F., Hightower J.A., McCrumb F.R. Plague immunization. VI. Vaccination with the fraction I antigen of Yersinia pestis // J. Infect. Dis. 1974. - Vol. 129.-P. 541-545.

503. Miller V, Farmer J, Hill W, Falkow S. // Infect. Immunol. 1989. - Vol. 57.-P. 121-131.

504. Mitchell G.F, Anders R.F, Brown G.V. et al. // Immunol. Rev. 1982.1. Vol. 61.-P. 137-188.

505. Mohan K, Sam H, Stevenson M. // Infect, and Immunol. 1999. - Vol. 67. -P. 513-519.

506. Moode D.B. Polyisoprenyl glycolipids as targets of GDI-mediated T cell responses // Cell. Mol. Life Sci. 2001. - Vol. 58. - P. 1461-1474.

507. Moody D.B., Besra G.S. Glycolipid targets of CDl-mediated T-cell responses // Immunology. 2001. - Vol. 104. - P. 243-251.

508. Morita C.T, Lee H.K, Wang H. et al. Structural features of nonpeptide prenyl pyrophosphates that determine their antigeneity for human y5 T cells // J. Immunol. 2001. - Vol. 167. - P. 36-41.

509. Nakajima R, Motin V.L, Brubaker R.R. Suppression of cytokines in mice by protein A-V antigen fusion peptide and restoration of synthesis by active immunization // Infect. Immunol. 1995. - Vol. 63. - P. 3021-3029.

510. Nakano M, Saito K. Chemical components in the cell wall of Salmonella ty-phimurium affecting its virulence and immunogenicity in mice // Nature. 1969. — Vol. 14, №222(198).-P. 1085-1086.

511. Narovliansky A.N, Sanin A.V, Danilov L.L. et al. Antiviral effects or ter-pene compounds may be due to their immunomodulatory properties // ASM conferences: Immunity, Bacterial, Viral and Protozoal Pathogens. Georgia, USA, 2002. -P. 26-27.

512. Nishikimi M. The occurrence of superoxide anion in the reaction of reduced phenazine methosulfate and molecular oxygen // Biochem. Biophys. Res. Commun. —

513. A 1972. Vol. 46. - P. 849-854.

514. Novotney J, Handschumaker M, Haber E. Location of the antigenic epitopes on antibody molecules // J. Mol. Biol. 1986. - Vol. 189. - P. 715-721.

515. Nowotny A. Molecular aspests of endotoxic reactions // Bacteriol. rev. — 1969.-Vol. 33.-P. 72-98.

516. Ogaard A., Bukholm G., Berdal B. Correlation betuen adhesion of Pseudo-monas aeruginosa bacteria to cell surface and the presence of some factors related tovirulence // Acta pathol. microbiol., immunol. Scand. -1985. № 4. - P. 13.

517. Oliver J.D. Formation of viable but nonculturable cells // Starvation in Bacteria / Ed. S. Kjelleberg. -N.Y.: Plenum Press, 1993. P. 239.

518. Owen P. The gram-negative outer membrane: structure, biochemistry ahd vaccine potential // Biochem. Soc. Trans. 1992. - Vol. 20, № 1. - P. 1-6.

519. Ozherelkov S.V., Godunov R.S., Kozhevnikova T.N. et al. Polyprenyls of plant origin augment specific biologic activity of tick-born encephalitis and rabies vaccines // Clin. Microbiol, and Infection. 2004. - Vol. 10. - Suppl. 3. - P. 1202.

520. Ozherelkov S.V., Sanin A.V., Deyeva A.V. et al. Phosprenyl stimulates in vivo production of IL-4, IL-5, and IL-12 in BALB/c mice // J. Interferon and cytokine res. 2002. - Vol. 22. - Suppl. - P. 183.л

521. Palucka K., Banchereau J. How dendritic cells and microbes interact to elicit or subvert protective immune responses // Current Opinion in Immunol. 2002. — Vol. 14.-P. 420-431.

522. Papermaster B.W., Condie R.M., Finstad I.K., et al. Evolution of the immune response. I. The physiogenetic debelopment of adaptive immunologic responsiveness in vertebrates // J. exp. Med. 1964. - Vol. 119. - P. 105-130.

523. Perry R.D., Fetherston J.D. Yersinia pestis etiologic agent of plague // Clin. Microbiol. Rev. - 1997. - Vol. 10. - P. 35-66.

524. Pronin A.V., Grigorieva E.A., Sanin A.V. et al. Polyorenols as possible factors that determine an instructive role of the innate immunity in the acquired immune response // Russ. J. Immunol. 2002. - Vol. 7. - P. 136-142.

525. Pronin A.V., Ozerelkov S.V., Narovlyansky A.N. et al. Role of cytokines in immunomodulatory effects of polyprenyl phosphate: new generation of antiviral drug // Russ. J. Immunol. 2000. - Vol. 5. - P. 156-164.

526. Rauch J., Gumperz J., Robinson C. et al. Structural features of the acyl chain determine self-phospholipid antigen recognition by CD2d-restricted invariant NKT (iNKT) cell // J. Biol. Chem. 2003. - Vol. 278. - P. 47508-47515.

527. Rietschel E.T., Brade H., Hoist O. Bacterial endotoxin: Chemical constitution, biological recognition, host response, and immunological detoxification // Clin.

528. Top. Microbiol. Immunol. 1996. - Vol. 216. - P. 39-81.

529. Rietschel E.T., Brade L., Hoist O. Cellular and molecular aspects of endotoxin reactions / Eds. A. Nowotny, J.J. Spitser, E.J. Ziegler. Amsterdam: Elsevier, 1990.-P. 15-32.

530. Rietschel E.T., Gotteit H., Luderitz O., Westphal O. Nature and linkages of the fatty acids present in the lipid-A component of Salmonella lipopolysacharides // Eur. J. Biochem. 1972. - Vol. 28. - P. 166-173.

531. Rinner I., Schauenstein K. The parasympathetic nervous system takes part in the immuno-neuroendocrine dialogue // J. Neuroimmunol. 1991. - Vol. 34, № 2-3. -P. 165-172.

532. Rosquist R., Skurnik M., Wolf-Watz H. Increased virulence of Yersinia pseudotuberculosis by two independent mutations // Nature. 1988. - Vol. 334. — P. 522-525.

533. Rowland S. The morphology of the plague bacillus // J. Hyg. Plague Suppl. — 1914.-Vol. 13.-P. 418^22.

534. Sara M., Pum D., Sleytr U.B. Permeability and charge-dependent adsorption properties of the S-layer lattice from Bacillus coagulans E 38-66 // J. Bacteriol. -1992.-Vol. 174,№ 11.-P. 3487-3493.

535. Schutze H. Studies in Bacterium pestis antigens. I. The antigens and immunity reactions of B. pestis // Br. J. Exp. Pathol. 1932. - Vol. 13. - P. 284-288.

536. Seal S.C. Isolation of an active polysaccharide fraction from plague organism // Proc. Soc. exp. Biol. Med. 1951. - Vol. 77. - P. 675-677.

537. Simpson W.J., Thomas R.E., Schwan Т.О. Recombinant capsular antigen (fraction 1) from Yersinia pestis induces a protective antibody response in Balb/c mice // Amer. J. Trop. Med. Hyg. 1990. - Vol. 43. - P. 389-396.

538. Singer S.J., Nikolson G.L. The structure and chemistry of mammalian cell membranes // Amer. J. Pathol. 1971. - Vol. 65. - P. 427-438.

539. Sirotinin N.N. A comparative physiological study of the mechanism of antibody Formation // Mechanisms of antibody formation. Prague, 1960. - P. 113-116.

540. Sleytr U.B., Sara M. Bacterial and archaeal S-layer proteins: structure-function relationships and their biotechnological applications // Trends Biotechnol. -1997.-Vol. 15, № 1. -P. 20-26.

541. Sleytr U.B. Basic and applied S-layer research: an overview // FEMS Microbiol. Rev.-1997.-Vol. 20, № 1-2.-P. 5-12.

542. Spada P. M., Grant E.P., Peters P. J. et al. Self-recognition of GDI by y/5T-cells: implications for innate immunity // J. Exp. Med. 2000. - Vol. 191. - P. 937948.

543. Stadecker M.J., Bishop G., Wortis H.H. Rosette formation by guinea pig thymocytes and thymus derived lymphocytes with rabbix red blood cells // J. Immu- nol. 1973.-Vol. Ill, №6.-P. 1834-1837.

544. Standiford T.J., Strieter R.M., Chensue S.W. et al. IL-4 inhibits the expression of IL-8 from stimulated human monocytes // J. Immunol. 1990. - Vol. 145. — P. 1435-1439.

545. Stilmark H. Ricinus Communis und einigen aderen Euphorbiaceaen. Inaug: Dissertation Dopart, 1888. P. 96.

546. Sto'll S., Jonuleit H., Schmitt E. et al. Production of functional IL-18 by different subtypes of murine and human dendritic cells (DC): DC-derived IL-18 enщ hances IL-12-dependent Thl development // Eur. J. Immunol. 1998. - Vol. 28. - P.3231-3239.

547. Straley S.C., Brubaker R.R. Localization in Yersinia pestis of peptides associated with virulence // Infect. Immunol. 1982. - Vol. 36. - P. 129-135.

548. Straley S.C., Harmon P.A. Growth in mouse peritoneal macrophages of Yersinia pestis lacking established virulence determinants // Infect. Immunol. 1984. -Vol. 45.-P. 649-654.

549. Straley S.C., Harmon P.A. Yersinia pestis grows within phagolysosomes in mouse peritoneal macrophages // Infect. Immunol. 1984. - Vol. 45. - P. 655-659.

550. Straley S. C., Skrzypek E., Piano G. V., Bliska J. B. Yops of Yersinia spp. pathogenic for humans // Infect. Immunol. 1993. - Vol. 61. - P. 3105-3110.

551. Strieter R.M., Kunkel S.L., Showell H.J. et al. Endothelial cell gene expression of a neutrophil chemotactic factor by TNF-a, LPS and IL-ip // Science (Wash. DC). 1989. - Vol. 243. - P. 1467-1469.

552. Sugii S., Hortiguchi Y., Hemura T. Haemagglutinating activiti of tripsinizid Clostridium perfringens enterotoxin // FEMS Microbiol. Lett. 1986. - Vol. 34, № 2.- P. 205-209.

553. Taniguchi M., Miller J.F. Enrichment of specific suppressor T cells and characterization of their surface markers // J. Exp. Med. 1977. - Vol. 146. — P. 14501454.

554. Tarinenbaum C.S., Wicker N., Armstrong D. et al. Cytokine and chemokine expression in tumors of mice receiving systemic therapy with IL-12 // J. Immunol. -1996. Vol. 156. - P. 693-699.

555. Tichomirova E.I., Tichomirova L.A. The role of T- and B-lymphocytes in the development of antiplague immunity // Intern. J. of Immunorehabil. 1994. — № 1. — P. 352.

556. Tihomirova E.I., Tihomirova LA., Gerasimova K.I. Antiplague vaccination: effect on functional state of human immune system // Medishe Microbiologie, 1998.1. Vol.6. Sup.II.-P. 34.

557. Tichomirova L.A., Gor'kova A.V., Tichomirova E.I. The indices of the chandes of functional state of the immune system of people which are vaccinated against plague // Intern. J. of Immunorehabil. 1994. - № 1. - P. 351.

558. Towbin H., Stacbelin Т., Gordon J.: Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1979. - Vol. 76. - P. 4350-4354.

559. Underbill D.M., Ozinsky A. Toll-like receptors: key mediators of microbe detection // Current Opinion in Immunol. 2002. - Vol. 14. - P. 103-110.

560. Vivier E., Tomasello E., Paul P. Lymphocyte activation via NKG2D: towards a new paradigm in immune recognition? // Current Opinion in Immunol. 2002. -Vol. 14.-P. 306-311.

561. Wake A., Morita H., Wake M. // Immunology. 1978. -Vol. 34. - P. 10451052.

562. Wake A. Genetic control of natural resistance to infection and malignancy // N. Y.: Acad. Press, 1980. P. 179-184.

563. Wake A., Suton Y. Mechanisms of protection against virulent Yersinia pestis infection without participation of humoral antibody: H-2 restriction in athymic mouse model // Current Microbiol. 1983. - Vol. 8, № 2. - P. 79-84.

564. Walker R.V., Barnes M.G., Higgins E.D. Composition of and physiopatholo-gy produced by plague endotoxins // Nature. 1966. - Vol. 209. - P. 1246.

565. Walker R.V. Plague toxins a critical review // Ergebnisse der Microbiologic und Immitatsforschung. - 1967. - Vol. 41. - P. 23-42.

566. Walker R.V. Comparative physiopathology of plague endotoxin in mice, guinea-pigs and monkeys // J. Infect. Dis. 1968. - Vol. 118. - P. 188-196.

567. Walz A., Peveri P., Aschauer H., Baggiolini M. Purification and amino acid sequencing of NAF, a novel neutrophil-activating factor produced by monocytes // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1987. - Vol. 149. - P. 755-761.

568. Williams J.E., Altieri P.L., Berman S. et al. Potency of killed plague vaccines prepared from avirulent Yersinia pestis // Bull WHO. 1980. - Vol. 56, № 5. - P. 753-756.

569. Williams R.C.G., Gevvurz H.Q.P. Effects of fraction I from Yersinia pestis on phagocytosis in vitro // J. Infect. Dis. 1972. - Vol. 126. - P. 235-241.

570. Wong J.F., Elberg S.S. Cellular immune response to Yersinia pestis modulated by product(s) from thymus-derived lymphocytes // J. Infect. Dis. 1977. - Vol. 135(1).-P.67-78.

571. Yoshimoto Т., Nagase H., Yoneto T. et al. Interleukin-12 expression in В cells by transformation with Epstein-Barr virus // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1998. - Vol. 252(3). - P. 556-560.

572. Yoshimura Т., Matsushima K., Tanaka S. et al. Purification of a human ^ monocyte-derived neutrophil chemotactic factor that has peptide sequence similarityto other host defense cytokines // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1987. - Vol. 84. - P. 9233-9237.

573. Zajonc D.M., Elsliger M.A., Teyton L, Wilson LA. Crystal structure od CD la in complex with a sulfatide self antigen at a resolution of 2.15 A // Nature Immunol. 2003". - Vol. 4. - P. 808-815.

574. Zav'yalov V., Denesyuk A., Zav'yalova G., Korpela T. Molecular modeling of the steric structure of the envelope F1 antigen of Yersinia pestis // Immunol. Lett. -1995.-Vol. 45.-P. 19-22.

575. Zeiller K., Pescher G., Hannig K. A study of the differentiation pathway us! ing theree flow electroh poretically separated subpopulations of direct PFC progenifor cells // J. Immunol. 1971. - Vol. 3. - P. 863-879.

576. Perry R.D., Fetherston J.D. Yersinia pestis Etiologic agent of plague // Clinical. Microbiol. - 1997. - Vol. 10. - P. 35-66.