Эколого-физиологические особенности медицинской пиявки (Hirudo medicinalis L.) из природных популяций и выращенной на биофабрике

Нохрина, Екатерина Сергеевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Эколого-физиологические особенности медицинской пиявки (Hirudo medicinalis L.) из природных популяций и выращенной на биофабрике
ВАК РФ 03.02.08, Экология (по отраслям)

Автореферат диссертации по теме "Эколого-физиологические особенности медицинской пиявки (Hirudo medicinalis L.) из природных популяций и выращенной на биофабрике"

На правах рукописи

Нохрина Екатерина Сергеевна

эколого-физиологические особенности медицинскои пиявки (нтиоо МЕВ1СШАШ Ь.) из природных популяций и выращенной на биофабрике

03. 02. 08 - экология

- 9 ЛЕН 2010

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Екатеринбург - 2010

004616246

Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Институте экологии растений и животных Уральского отделения РАН

Научный руководитель:

доктор биологических наук Ковальчук Людмила Ахметовна

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук Вершинин Владимир Леонидович доктор биологических наук, профессор Бароненко Валентина Александровна

Ведущая организация:

ГОУ ВПО «Челябинский государственный педагогический университет»

Защита состоится «21» декабря 2010 г. в 13:00 часов на заседании диссертационного совета Д 004.005.01 при Институте экологии растений и животных УрО РАН по адресу: 620144, г. Екатеринбург, ул. 8 Марта, 202. Е-таП: dissovet@ipae.uran.ru Адрес сайта института: http://www.ipae.uran.ru

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Института экологии растений и животных УрО РАН.

Автореферат разослан <<Ц)» ноября 2010 г. Ученый секретарь диссертационного совета

кандидат биологических наук Золотарёва Н.В.

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Проблема сохранения редких и исчезающих видов чрезвычайно важна для регионов с экстремальными условиями обитания, определяемыми как природными, так и антропогенными факторами. В исследованиях В.Н. Большакова (1972), С.С. Шварца (1980), В.П. Казначеева, (1980), П.Д. Горизонтова (1983), Э.И. Колчинского (1990), Ф.З. Меерсона (1993), Е.А. Коваленко (2000), Д.З. Шибковой, A.B. Аклеева (2006), показано, что организм при воздействии стрессирующих факторов внутренней и внешней среды мобилизует различные структурно-метаболические и молекулярные механизмы аварийного регулирования систем поддержания гомеостаза, снижая негативные последствия их влияния на патогенетические механизмы повреждения органов и систем.

В этом аспекте несомненна актуальность исследований роли физиологических процессов в функционировании экологических групп животных, в поддержании численности, структуры вида и определении характера микроэволюционных преобразований в популяциях . животных (Тимофеев-Ресовский, 1958; Одум, 1975; Слоним, 1982; Большаков и др., 1984, 1991, 2009; Вершинин, 2009).

Указанная проблема в полной мере приложима к медицинской пиявке (,Hirudo medicinalis L.), на которую распространяется действие международной конвенции CUES. Медицинская пиявка - значимый биологический ресурс России, широко применяется в практической медицине. Используется она и как сырьё для получения лекарственных препаратов и пищевых биодобавок (Исаханян, 1991; Селезнев, 1996; Самойлов, 2001; Живогляд, 2001; Березовская и др, 2003; Геращенко, Никонов, 2005; Каменев, Барановский, 2006; Никонов, 2007).

Сохранение ресурсов медицинской пиявки в России и ее рациональное использование в современных условиях высокого спроса является одной из актуальных проблем природопользования. Спрос на медицинскую пиявку на фармацевтическом рынке, неконтролируемый браконьерский отлов, а также глобальное загрязнение привели к тому, что к настоящему времени медицинская пиявка является исчезающим видом (Каменев, 2007). Одним из факторов, приводящих к сокращению численности, а в итоге к исчезновению отдельных видов гидробионтов, считается и техногенное загрязнение водной среды такими поллютантами, как тяжёлые металлы (TM) - Си, Zn, Cd, Pb (Майстренко, 1996; Агаджанян, Скальный, 2001; Рахманин, Русаков и др., 2005; Безель, 2006).

Исследованиями Н.А. Агаджаняна, А.В. Скального (2001), Д. Оберлис и др. (2008) показано, что в общую регуляторную систему организма на всех стадиях развития включена микроэлементная физиологическая система гомеостаза, определяющая реакцию организма на аккумуляцию загрязнителей изменениями в процессах метаболизма. Это тем более важно, так как медицинскую пиявку для лечебных целей выращивают в контролируемых условиях на биофабриках, изначально используя пиявок-маток из природных популяций.

Литературный обзор показал, что к настоящему времени подробно изучены фармакологические аспекты применения биологически активных соединений, продуцируемых медицинскими пиявками, тем не менее, комплексные сведения, касающиеся физиологического состояния медицинской пиявки из природных популяций и выращенной на биофабрике, практически отсутствуют. Нет полного представления о содержании микроэлементов (МЭ) в тканях пиявок, в том числе и о влиянии солей ТМ на жизнеспособность и лечебное действие медицинской пиявки. Исследования в эколого-физиологическом сравнительном аспекте медицинской пиявки из природных популяций и выращенной на биофабрике практически отсутствуют как на популяционном, организменном, так и на клеточном уровне, в то время как оценка физиологического состояния с позиции оптимального аминокислотного баланса в организме способна пролить свет и на резервные адаптивные возможности пиявок в перманентно изменяющихся условиях среды обитания.

Различия в образе жизни и в условиях содержания или обитания влияют на физиологию медицинской пиявки, а, следовательно, и на выбор правильной стратегии выживания. Актуальность и состояние вопроса об экологии, физиологии и адаптивных возможностях представителей гирудофауны - двух подвидов медицинской пиявки в современных условиях обитания в природных популяциях и при их воспроизводстве на биофабриках, предопределило цели и задачи нашего исследования.

Цель исследования: изучить эколого-физиологические особенности двух подвидов медицинской пиявки (Hirudo medicinalis L.)\ аптечной (Hirudo medicinalis officinalis) и лечебной (Hirudo medicinalis medicinalis) из природных популяций и выращенных на биофабрике.

Задачи исследования:

1. исследовать состояние основного обмена лечебной (H.m.medicinalis) и аптечной (H.m.officinalis) пиявок, обитающих в естественных условиях и выращенных на биофабрике;

2. определить содержание микроэлементов (Си, 2п, Мп, Бе, №, Сё, РЬ) в тканях медицинской пиявки (Шпи1о тесНЫпаИз Ь.) из природных популяций и выращенной на биофабрике;

3. изучить состояние фонда свободных аминокислот в тканях лечебной и аптечной пиявок различных физиологических групп;

4. экспериментально, в контролируемых условиях, провести сравнительный анализ хронического воздействия экотоксикантов на динамику их накопления и состояние аминокислотного пула в тканях пиявок из природных популяций и выращенных на биофабрике.

Научная новизна исследования

Впервые на единой методологической (эколого-физиологической) основе проведены комплексные полевые и экспериментальные исследования энергетического обмена, аминокислотного фонда, микроэлементного состава тканей двух подвидов ШгиЛо те<ИЫпаИ$\ аптечной и лечебной из природных популяций Тамбовской, Луганской областей, Краснодарского края и выращенных на биофабриках: ГирудИ.Н. (Саратовская область), «Международный Центр медицинской пиявки» (Московская область) и «Гирудо-Мед.Юг» (Краснодарский край).

Показаны особенности основного обмена лечебной и аптечной пиявок, обитающих в природных водоёмах и выращенных на биофабрике.

Выявлены внутривидовые и географические различия в содержании микроэлементов МЭ (Си, Zn, Мп, Бе, Сс1, РЬ, №) в тканях медицинских пиявок из природных популяций. Ранговый корреляционный анализ выявил статистически значимые положительные связи между содержанием в донных отложениях Си, Ре, Сс1, РЬ, № и их биоаккумуляцией в тканях медицинских пиявок из природных популяций (г = 0,8 - 0,95, при р<0,0001). Медицинские пиявки в условиях искусственного разведения аккумулируют в своих тканях Си, С<1, РЬ и № в более высоких концентрациях, чем пиявки из природных популяций.

Установлено, что зависимость концентраций свободных аминокислот от времени воздействия ТМ указывает на их активное участие в процессах детоксикации и адаптации пиявок к избыточному присутствию токсикантов в водной среде и, соответственно, в тканях. В модельном эксперименте установлено, что пиявки, выращенные на биофабрике, обладают более высокой резистентностью к воздействию экстремально высоких концентраций ТМ.

Теоретическая и практическая значимость работы

Оценка физиологической валентности вида и подвидов медицинской пиявки даёт возможность по новому подойти к решению практических и теоретических задач экологии, связанных как с рациональным использованием биологических ресурсов, так и с возможностью глубокого и всестороннего понимания закономерностей эволюционного процесса.

Полученные экспериментальные результаты, дополняя данные других исследователей, показали, что ткани медицинских пиявок содержат высокие концентрации свободных аминокислот - жизненно необходимых биологически активных соединений, что является дополнительным показанием к использованию гомогенатов Н.т.о£рЫпаИз и Н-т-тесИстаШ в фармацевтике и косметологии при условии сохранения их численности и видового разнообразия в естественной среде обитания.

Материалы научных исследований используются в учебно-педагогическом процессе на кафедре биологии и медицинской генетики Уральской государственной медицинской академии г. Екатеринбурга. Результаты исследований внедрены в практическую работу лаборатории «Проблемы адаптации» при ГУ Средне - Уральского научного центра Российской академии медицинских наук и Правительства Свердловской области.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Основной обмен лечебной (Н. т.тесИстаЫз) и аптечной (Н.т.о$лстаШ) пиявок, обитающих в природных водоёмах и выращенных в условиях биофабрики, предопределяется биогеохимической обстановкой экосистем и существенно зависит от популяции и физиологического состояния гидробионтов.

2. Характер накопления и распределения микроэлементов в тканях аптечных и лечебных пиявок различен, зависит от природы и продолжительности воздействия фактора. Медицинские пиявки проявляют высокую кумулятивную активность по отношению к биофильным элементам и к ксенобиотикам.

3. Фонд свободных аминокислот достоверно различен у аптечной и лечебной пиявок из природных популяций и выращенных на биофабрике. В тканях медицинских пиявок, выращенных на биофабрике, повышено содержание свободных аминокислот, участвующих в процессах детоксикации высоких концентраций ТМ.

4. Медицинские пиявки, выращенные в контролируемых условиях биофабрики, обладают механизмами защиты от повреждающего хронического воздействия смеси экотоксикантов.

Апробация работы. Материалы диссертационного исследования представлены на различных научных форумах международного, республиканского и региональных уровней:

Всероссийские конференции молодых ученых (Екатеринбург, 2005, 2006, 2008, 2009, 2010); I Съезд физиологов СНГ (Сочи, Дагомыс, 2005); IX Всероссийский популяционный семинар «Особь и популяция - стратегии жизни» (Уфа, 2006); II Международная научно-практическая конференция «Адаптация биологических систем к естественным и экстремальным факторам среды» (Челябинск, 2008); VIII молодежная научная конференция «Физиология человека и животных: от эксперимента к клинической практике» (Сыктывкар, 2009); Симпозиум «Эколого-физиологические проблемы адаптации» (Москва, 2009); Всероссийская научно-практическая конференция «Экология в высшей школе: синтез науки и образования» (Челябинск, 2009); IV съезд физиологов Урала (Екатеринбург, 2009); XXII Всероссийская медико-биологическая конференция молодых исследователей «Фундаментальная наука и клиническая медицина» (Санкт-Петербург, 2009). 4th International FESTEM Symposium on Trace Elements and Minerals in Medicine and Biology (St. Petersburg, 2010); Первые Международные Беккеровские чтения (Волгоград, 2010); XXI Съезд Физиологического общества им. И.П.Павлова (Калуга, 2010); XI Международная научно-практическая экологическая конференция «Видовые популяции и сообщества в естественных и антропогенно трансформированных ландшафтах: состояние и методы его диагностики» (Белгород, 2010); Международная конференция «Наука, природа и общество» (Миасс, 2010).

Декларация личного участия автора. Автором самостоятельно собран в полевых условиях и обработан в лаборатории материал по двум подвидам медицинской пиявки: аптечной (H.m.ofßcinalis) и лечебной (H.m.medicinalis) из природных популяций и выращенных на биофабрике. Определены концентрации микроэлементов: Cu, Zn, Mn, Fe, Cd, Pb, Ni, проведён сравнительный анализ содержания заменимых и незаменимых аминокислот в тканях. Проведён эксперимент по исследованию адаптационно-компенсаторных возможностей микроэлементной физиологической системы гомеостаза и фонда свободных аминокислот, определяющих реакцию

организма на аккумуляцию техногенных загрязнителей изменениями в процессах метаболизма.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 20 работ, в рецензируемых журналах - б, из которых 3 - в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 195 страницах и включает введение, 4 главы, заключение, выводы, библиографический список. Работа иллюстрирована 27 рисунками и 33 таблицами. Список используемой литературы включает 305 работ, в том числе 87 работ иностранных авторов.

Благодарности

Выражаю искреннюю благодарность к.б.н. Л.В. Черной, к.х.н. Н.В. Микшевичу, Е.А. Басмаджян, за оказанную помощь при сборе и обработке биологического материала. Искренняя признательность руководителю «Международного центра медицинской пиявки» д.б.н. Г.И. Никонову и директору биофабрики «Гирудо-Мед.Юг» Н.Т. Казиеву за предоставленный материал. Автор считает своим долгом выразить признательность зав. лаборатории Эволюционной экологии д.б.н. А.Г. Васильеву, д.б.н. И.М. Хохуткину, к.б.н. Ю.Л. Вигорову, к.б.н. К.И. Бердюгину, к.б.н. Н.И. Маркову, к.б.н. М.В. Чибиряку, а также всем коллегам и сотрудникам Института экологии растений и животных УрО РАН за участие в обсуждении результатов исследований. Автор признателен к.б.н. Н.В. Николаевой за ценные советы и проявленный ею искренний интерес к настоящим исследованиям.

Автор чрезвычайно признателен академику РАН, д.б.н. В.Н. Большакову за постоянную поддержку и научный интерес к исследуемой проблеме.

Особая благодарность моему научному руководителю д.б.н. Л.А. Ковальчук, которой я глубоко признательна за общее руководство работой, за оказанную повседневную помощь при проведении исследований и обработке полученных результатов, за ценные советы и критические замечания.

Глава 1. Экологические и физиологические особенности гидробионтов класса ШгиНпеа (литературный обзор)

Приведён обзор и анализ литературных данных об экологии и физиологических особенностях гидробионтов класса ШгисИпеа. Изложены современные представления о роли микроэлементного обмена и участия

аминокислотного Метаболизма в гомеостатических функциях организма в перманентно изменяющихся условиях среды обитания.

Глава 2. Материалы и методы исследования

В основу работы положены результаты экспедиционных и лабораторных исследований с 2003 по 2009 годы. Содержание животных, доставленных в лабораторию, осуществляли в соответствии с правилами, принятыми Европейской Конвенцией по защите животных, используемых для экспериментальных и научных целей (Европейская конвенция ..., 1986). Исследования проведены на 628 экземплярах медицинской пиявки, выполнено 7018 анализов.

Лечебные медицинские пиявки H.m.medicinalis отловлены в зодных объектах Тамбовской области (Мичуринский район, река Лесной Воронеж) и Луганской области (Луганский национальный заповедник, озеро Глубокое) и приобретены на биофабрике «ГирудИ.Н.» (Саратовская область). Аптечные медицинские пиявки H.m.officinalis отловлены в Краснодарском крае (Каневской район, река Челбас) и приобретены на биофабриках «Гирудо-Мед.Юг» (Краснодарский край) и «Международный центр медицинской пиявки» (Московская область).

На основании анализа литературных источников дана краткая характеристика местообитаний исследованных нами лечебной (H.m.medicinalis) и аптечной {H.m.officinalis) пиявок, включающая описание водного режима, рельефа и их минерализации.

Параметры основного обмена исследовали по потреблению кислорода с помощью оптико-акустического газоанализатора МН-5130. Потребление кислорода выражали в миллилитрах на грамм массы тела животного в течение одного часа (мл02/г-час).

Методика определения микроэлементов. Пробоподготовку образцов проводили в соответствии с требованиями МАГАТЭ и методическими рекомендациями, утверждёнными МЗ РФ в 1999 году. Содержание МЭ в донных отложениях и тканях пиявок исследовали методом атомно-абсорбционной спектрометрии на спектрофотометре AAS-3 и на приборе Analist 100 фирмы Perkin Elmer (Хавезов, Цалев, 1983; Никаноров, Жулидов, 1991; Майстренко и др. 1996; Другов, Родин, 2009). Концентрацию МЭ в биосубстратах определяли в мкг/г.

Пул свободных АК в кожно-мышечной ткани пиявок определяли методом ионообменной хроматографии (Казаренко, 1975) с помощью автоматического анализатора аминокислот ААА-339 М. (Микротехна, Прага). Концентрацию свободных АК в тканях пиявок выражали в мкмоль/л и в % от суммарного содержания.

В модельном эксперименте динамику накопления Си, Zn, Cd, Pb (мкг/г сырой массы) и содержание свободных аминокислот (мкмоль/л;" %) в тканях медицинских пиявок из природных популяций и выращенных на биофабрике, изучали на 7-е, 14-е и 21-е сутки нахождения их в водных растворах экстремально высоких концентраций меди (0,05 мг/л), цинка (0,5 мг/л), кадмия (0,025 мг/л), свинца (0,03 мг/л) и их смеси (Си + Zn + Cd + Pb).

Весь экспериментальный материал обработан стандартными методами математической статистики с использованием программ MS Excel 2003 и Statistica (версия 6.0). При оценке однородности групп и достоверности различий средних между группами использовали параметрический t-критерий Стьюдента и непараметрический U-тест Манна-Уитни, дисперсионный анализ ANOVA. Взаимозависимость между рядами оценивали с помощью рангового анализа сопряжённости по Спирмену. Различия между сравниваемыми выборками считали достоверными при р<0,05, р<0,01, р<0,001, р<0,0001.

Глава 3. Экологические аспекты физиологического состояния медицинской пиявки из природных популяций и выращенной на биофабрике

У аптечных медицинских пиявок, выращенных на биофабрике («Гирудо-Мед.Юг»), уровень основного обмена достигает 0,8б±0,069 мл02/г-час, что значимо выше, чем у лечебных пиявок («ГирудИ.Н.»), у которых он составляет 0,64±0,035 млОг/г-час. Уровень основного обмена аптечных пиявок, выращенных на биофабрике, вдвое превышает аналогичные показатели у этого же подвида пиявок из природных популяций. Интенсивность потребления кислорода у медицинских пиявок, выращенных на биофабрике, зависит и от физиологического состояния особей. Основной обмен лечебных пиявок в состоянии голода превышает интенсивность потребления кислорода сытых пиявок в 7 раз (Черная, Ковальчук, Нохрина, 2006; Нохрина, 2009).

Условия содержания пиявок на биофабрике , можно считать экстремальными: круглогодичный постоянный температурный режим, искусственное освещение, отсутствие зимней спячки, регулярное частое кормление без права выбора жертвы, качество отстоянной водопроводной

воды, высокая плотность популяции и т.д., в силу чего в режиме искусственного разведения медицинские пиявки достигают половой зрелости не в 3 года, как в природе, а за 8-12 месяцев. Ускоренному половому созреванию особей медицинских пиявок, выращиваемых на биофабриках, помимо прочих условий, способствует повышенный уровень энергетического обмена.

При оценке уровня содержания ТМ в донных отложениях из мест обитания изучаемых подвидов пиявок выявлено, что во всех исследованных водных объектах концентрации МЭ располагаются в единый ряд: Ге > Мп > Хп > N1 > РЬ > Си > Сс1. В донных отложениях исследованных водоёмов концентрации Си, Ъл, Мп, Ре, РЬ, N1 соответствуют фоновому уровню.

Сравнительный анализ содержания МЭ в тканях медицинских пиявок двух подвидов различных географических популяций выявил существенные различия в характере их накопления (Нохрина, 2010). Так, лечебные пиявки из «тамбовской» популяции являются макроконцентраторами (коэффициент накопления КН>2) цинка и деконцентраторами (КН<1) всех остальных МЭ (табл.1). Представители этого же подвида пиявок Н.т.тесИстаШ, но обитающие в Луганской области, напротив, активно депонируют в своих тканях практически все изучаемые микроэлементы, являясь их макроконцентраторами; исключение составляют железо и марганец, по отношению к которому они - деконцентраторы. Аптечные пиявки, обитающие в Краснодарском крае, по отношению к меди, цинку, кадмию и свинцу являются макроконцентраторами, а к марганцу, железу и никелю -деконцентраторами (табл.1).

Таблица 1 - Коэффициенты накопления микроэлементов у медицинских пиявок из природных популяций ______

Подвид / регион Си Ъа Мп Ре Сё РЬ N1

Аптечная / Краснодарский край 2,16 16,05 0,07 0,72 3,21 2,58 0,98

Лечебная/ Луганская обл. 4,43 9,37 0,65 0,38 7,95 3,40 2,97

Лечебная / Тамбовская обл. 0,48 8,91 0,06 . Р,73 0,13 0,15 0,13

Поступление, распределение и усвоение тяжёлых металлов тканями пиявок находится в прямой зависимости от уровня их содержания в донных отложениях (табл. 2).

Корреляционный анализ выявил статистически значимые положительные связи между содержанием в донных отложениях Си, Бе, Сс1, РЬ, № и их концентрацией в тканях медицинских пиявок из природных популяций (корреляционный коэффициент Спирмена г = 0,87-0,95, при р<0,0001). При этом не обнаружено связи между содержанием цинка, марганца в донных отложениях и в тканях пиявок (г = -0,23 при р = 0,405 и г = -0,39 при р = 0,147 соответственно), что свидетельствует о способности пиявок регулировать концентрации данных микроэлементов независимо от их содержания в окружающей среде (Нохрина, Черная, 2009; СЬегпауа, Коуакйшк, ЫокЬгта 2010).

Таблица 2 - Корреляционные связи между микроэлементами в донных отложениях и их содержанием в тканях пиявок _

МЭ г Р

Си 0,90 <0,0001

гп -0,23 0,405

Мп -0,39 0,147

Бе 0,95 <0,0001

Сй 0,87 <0,0001

РЬ 0,89 <0,0001

№ 0,90 <0,0001

В искусственных условиях разведения на биофабрике, аптечные пиявки, являющиеся потомками первого поколения особей из природных популяций, существенно активизируют свои биоаккумуляционные возможности по накоплению микроэлементов (р<0,05) (рис.1) (Основной обмен ..., 2007; Нохрина, Ковальчук, Черная, 2009).

Си гп* Мп Ре** са РЬ N1

* - концентрации МЭ уменьшены в 10 раз, ** - в 100 раз

Рисунок 1 - Содержание микроэлементов в тканях аптечных пиявок из природных популяций и выращенных на биофабрике 12

Так, биофильной меди содержится в 2,3 раза больше, а никеля - в 2,5 раза (р<0,05). Отмечена тенденция к возрастанию концентраций ксенобиотиков: свинца и кадмия - в 1,2 и в 1,3 раза соответственно, тогда как содержание физиологически необходимых МЭ в тканях пиявок на биофабрике достоверно снижается: цинка - на 26%, железа - на 11%, марганца - на 24%, (р<0,05) (рис.2).

Аминокислотный фонд тканей медицинских пиявок представлен 22 свободными аминокислотами. Сравнительный анализ состояния аминокислотного спектра у двух подвидов медицинских пиявок природных популяций (время отлова - май) Тамбовской области (лечебные) и Краснодарского края (аптечные) показал достоверные различия по суммарным концентрациям АК (4545,97±35,707 мкмоль/л и 6020,57+59,37 мкмоль/л соответственно при р<0,05). Суммарная концентрация свободных АК в тканях аптечных пиявок выше на 32,4%, чем у лечебных. /

Показана географическая изменчивость АК фонда тканей лечебных пиявок (время отлова - май): из Луганской области - 6489,2+54,99 мкмоль/л, что в 1,4 раза выше, чем у «тамбовских» особей - 4545,97+35,707 мкмоль/л.

Выявлена сезонная изменчивость АК спектра у обоих подвидов. Так, суммарные концентрации свободных аминокислот в тканях пиявок из весенних популяций, на выходе из зимнего анабиоза, более, чем в два раза превышают величину аминокислотного пула тканей летних особей: 1926,39+29,374 мкмоль/л у лечебных (Тамбовская обл.) и 2692,44±60,75 мкмоль/л у аптечных (Краснодарский край) (р<0,01) (Нохрина, 2009).

В тканях аптечных пиявок, выращенных на биофабрике суммарное содержание свободных аминокислот (3864,27+19,440 мкмоль/л), достоверно превышает величину аминокислотного пула (2692,44+60,747 мкмоль/л) у пиявок из природных популяций (время отлова - август) (р<0,05) (рис.2).

Показано, что ткани пиявок, выращенных в искусственных условиях, в сравнении с природными, содержат в 2 раза больше аминокислот, участвующих в процессах детоксикации, способных связывать тяжелые металлы в нетоксичные комплексы: метионина (0,64% и 0,32% соответственно), гистидина (0,12% и 0,06% соответственно), цистеина (0,32% и 0,15% соответственно), изолейцина (1,31% и 0,65% соответственно), что коррелирует с повышенным содержанием ксенобиотиков (Нохрина, 2009; Состояние микроэлементного 2008).

иса «си.' + сим яуа!. аьви а сизы

ОДвР ВРЯО ЯСУЗ ЙТ^Я ВЬУв

ИТНЯ и сиу Я МЕТ а РНЕ ВН18

Швея ИА1.А ПНЕ ИСАВА 0АР(С

С биофабрики Из природных популяций

Рисунок 2 - Содержание свободных аминокислот (мкмолъ/л) в тканях аптечных пиявок из природных популяций и выращенных на биофабрике

Глава 4. Оценка адаптационно-компенсаторных возможностей медицинской пиявки в условиях модельного эксперимента

Пиявки, выращенные на биофабрике, обладают более высокой резистентностью к воздействию экстремально высоких концентраций ТМ, чем особи из природных популяций.

Методом дисперсионного анализа показано, что на качественный и количественный состав свободных аминокислот в тканях наиболее значимое влияние оказывают Сс1 и смесь ТМ, а также продолжительность воздействия данных факторов на пиявок природных популяций и с биофабрики (Нохрина, Ковальчук, Черная, 2009). Показано, что в тканях пиявок обеих групп наибольшей дисперсией отличается аминокислотный фонд у пиявок с биофабрики (Р=1961,0; р<0,0001) и у пиявок из природных популяций (Б=2152,6; р<0,0001). Для обеих групп пиявок наибольший вклад после 14-го дня экспозиции в дисперсию аминокислотного пула вносит смесь ТМ (р<0,05) (рис.3).

Особи медицинской пиявки, выращенные в условиях биофабрики, отличаются от пиявок из природных популяций повышенным содержанием МЭ. Повышенный пул аспарагиновой и глутаминовой кислот, цистеина, гистидина, метионина, изолейцина - аминокислот, способных связывать ТМ в нетоксичные комплексы «металл-белок», обеспечивая им высокую резистентность к избыточному присутствию токсикантов, поступающих извне, участвуют в регулировании обменных процессов и обеспечивают высокий

уровень биологически активных веществ.

Р(6, 52)=2152,6, р=0,0000

Я «

Я о

о *

я о. га

13000 12000 11000 10000

Б(12, 130)=1961,0, р=0,0000

4000 3000

1 2 I

-о- Си 2п ■О - Сё — - РЬ сТМ

0 - контроль, 1 - 7 суток; 2-14 суток; 3-21 день Рисунок 3 -Динамика аминокислотного фонда в тканях пиявок (А ■

из

природных популяций, Б-с биофабрики) при хроническом воздействии Сс1, Си, РЬ, 2пиих смеси ТМ(Сй+Си+РЬ+2п) в условиях эксперимента

Установлено принципиальное значение положительных и отрицательных связей между основными системами азотистого и микроэлементного обмена при поддержании динамического равновесия этой системы в экспериментальных условиях. Особую роль с точки зрения межсистемной кооперации в процессах роста, развития и детоксикационных процессов выполняет аминокислотный обмен. Аминокислоты, являясь регуляторами

функций организма, обеспечивают развитие защитных реакций и поддержание гомеостаза при различных воздействиях.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Особый научный интерес представляют отдельные виды гидробионтов, которые интегрируют неблагоприятные эффекты комплекса биотических и абиотических воздействий, и могут быть использованы как индикаторы состояния водных экосистем.

Актуальность исследований состоит в необходимости изучения влияния современных биогеохимических условий среды на медицинскую пиявку Шгийо тесИстаШ Ь. и получения данных об эколого-физиологических параметрах двух подвидов медицинских пиявок, обитающих в разных регионах, с целью функциональной оценки производителей при искусственном воспроизводстве различных подвидов для эффективного воспроизводства и восполнения биологических ресурсов медицинской пиявки России.

В работе проведены комплексные полевые и экспериментальные исследования энергетического обмена, аминокислотного фонда и микроэлементного состава тканей двух подвидов медицинской пиявки: аптечной и лечебной.

Показано, что медицинские пиявки из природных популяций отличаются от своих потомков - пиявок, выращенных на биофабриках, по всем изученным параметрам. Выявлены внутривидовые особенности пиявок из природных популяций различных географических зон, и выращенных на биофабриках различных регионов России.

Модельный эксперимент по оценке адаптационно-компенсаторных возможностей медицинской пиявки показал, что пиявки, выращенные на биофабрике, обладают большей устойчивостью к токсической нагрузке, нежели пиявки из природных популяций. Выращивание пиявок в искусственных условиях биофабрик можно считать периодом акклимации или предадаптации к стресс-факторам среды. Высокой резистентности выращенных особей, по-нашему мнению, способствует повышенный исходный уровень основного, аминокислотного обменов, который в свою очередь является результатом интенсивного питания, роста и развития в экстремальных условиях.

выводы

1. Проведены комплексные полевые и экспериментальные исследования энергетического обмена, аминокислотного фонда и микроэлементного состава тканей двух подвидов медицинской пиявки (ШгиАо тесИстаНя Ь.): аптечной (ll.tn.officina.lis) и лечебной (Н.т.тесИстаИя) из природных популяций Тамбовской и Луганской областей и Краснодарского края и, выращенных в искусственных условиях на биофабриках: ГирудИ.Н. (Саратовская область), «Международный Центр медицинской пиявки» (Московская область) и «Гирудо-Мед.ГОг» (Краснодарский край).

2. Показано достоверное различие по основному обмену пиявок H.m.offlcinalis и Н.т.тесИстаИз. Потребление кислорода интенсивнее у пиявок, выращенных в условиях биофабрики, при этом, уровень потребления кислорода голодных пиявок превышает интенсивность обмена сытых в 7 раз.

3. Выявлены внутривидовые и географические различия в содержании микроэлементов (Си, 2п, Мп, Ре, С<1, РЬ, №) в тканях лечебных и аптечных пиявок. Корреляционный анализ выявил статистически значимые положительные связи между содержанием в донных отложениях Си, Ре, Сё, РЬ, N1 и их биоаккумуляцией тканями медицинских пиявок из природных популяций (г = 0,87-0,95, при р<0,0001).

4. Установлено, что медицинские пиявки, выращенные на биофабрике, и из природных популяций, проявляют кумулятивную активность по отношению к биофильным элементам и к ксенобиотикам.

5. Показаны достоверные внутривидовые различия по содержанию свободных аминокислот в тканях аптечных и лечебных пиявок, наиболее четко проявляющиеся в условиях биофабрики. Установлено наличие статистически значимой (р<0,0001) связи между содержанием микроэлементов и показателями аминокислотного обмена в тканях исследуемых групп пиявок. Регуляторные связи в системе метаболических процессов микроэлементного и азотистого обмена в условиях перманентного воздействия тяжёлых металлов на организм подвержены и качественным, и количественным изменениям.

6. Экспериментально показано, что повышенный пул свободных АК (аспарагиновая и глутаминовая кислоты, цистеин, гистидин, метионин, изолейцин), способных связывать тяжелые металлы в нетоксичные комплексы «металл-белок», обеспечивает аптечным пиявкам, выращенным на биофабрике, высокую резистентность к избыточному присутствию тяжёлых металлов.

Список основных работ по теме диссертации Публикации в изданиях, рекомендованных ВАК РФ

1. Основной обмен и содержание микроэлементов в тканях медицинских пиявок из природных популяций и выращенных в искусственных условиях биофабрики / Л.А. Ковальчук, Л.В. Чёрная, А. Э. Тарханова, Е. С. Нохрина // Вестн. Урал. мед. акад. науки. - 2007. - № 4. - С. 49-53.

2. Оценка состояния аминокислотного пула в тканях медицинской пиявки Hirudo medicinalis L. при хроническом голодании / Л.В. Черная, Л.А. Ковальчук, Н.Т. Казиев, Е.С. Нохрина // Вестн. Урал. мед.акад. науки. - 2009. -№ 2 (25). - С. 240-241.

3. Нохрина Е.С., Ковальчук Л.А., Черная Л.В. Динамика накопления тяжелых металлов в тканях медицинской пиявки Hirudo medicinalis L. в модельном эксперименте // Вестн. Урал. мед. акад. науки. - 2009. - № 2 (23). -С. 145-146.

Публикации в рецензируемых журналах

4. Состояние микроэлементного и азотистого обмена при адаптации медицинских пиявок (Hirudo medicinalis L.) к условиям искусственного разведения на биофабрике / Е.С. Нохрина, Л.А. Ковальчук, Л.В. Черная, А.Э. Тарханова // Микроэлементы в медицине. — 2008. - Т.9, вып. 12. - С. 26-27.

5. Черная Л.В., Ковальчук Л.А., Нохрина Е.С. Оценка микроэлементного обмена медицинских пиявок Hirudo medicinalis officinalis // Микроэлементы в медицине. - 2008. - Т.9, вып. 12. - С. 33-34.

6. Chemaya L.V., Kovalchuk L.A., Nokhrina E.S. Peculiarities of microelement metabolism in the medical leech (Hirudo medicinalis L.) tissues from natural populations // Trace elements in medicine. - 2010. - Vol. 11, No.2. - P. 6.

Статьи и тезисы, опубликованные в других научных изданиях

7. Черная Л.В., Ковальчук Л.А., Нохрина Е.С. Изучение свободных аминокислот в тканях медицинской пиявки Hirudo medicinalis из природной популяции // Научные труды I съезда физиологов СНГ. - М., 2005. - Т.2 - С. 15.

8. Сравнительная характеристика физиологических особенностей медицинских пиявок (Hirudo medicinalis) из природных популяций и выращенных в искусственных условиях биофабрики / Е.С. Нохрина, Е.А. Басмаджян, Л.В.Черная, Л. А Ковальчук // Экология в меняющемся мире: материалы конф. молодых ученых. - Екатеринбург, 2006. - С. 170-171.

9. Черная Л.В., Ковальчук Л.А., Нохрина Е.С. Энергетический обмен

медицинской пиявки в различных физиологических состояниях // Особь и

популяция - стратегии жизни: материалы докладов IX Всерос. популяционного семинара. - Уфа, 2006. - С. 276-278.

10. Черная Л.В., Ковальчук Л.А., Нохрина Е.С. Роль свободных аминокислот в адаптации медицинских пиявок (Hirudo medicinalis L.) к экстремально высоким концентрациям тяжелых металлов в водной среде // Эколого-физиологические проблемы адаптации: сб. док. симпозиума. - М.: РУДН, 2009.-С. 442-444.

11. Нохрина Е.С. Обменные процессы медицинской пиявки в различных физиологических состояниях // Физиология человека и животных: от эксперимента к клинической практике: III Молодежная научная конференция Института физиологии Коми НЦ УрО РАН: тез. док. -Сыктывкар, 2009. - С. 144-146.

12. Нохрина Е.С., Черная Л.В. Эколого-физиологические особенности двух подвидов медицинских пиявок Hirudo medicinalis из природных популяций // Экология в высшей школе: синтез науки и образования: сб. материалов Всерос. науч.-практ. конф.: в 2 ч. - Челябинск, 2009. - 4.1. - С. 8690.

13. Нохрина Е.С. Сезонная изменчивость аминокислотного состава тканей медицинских пиявок Hirudo medicinalis L. из природных популяций // Эволюционная и популяционная экология (назад в будущее): материалы конф. молодых ученых. - Екатеринбург, 2009. - 147-148.

14. Нохрина Е.С. Свободные аминокислоты в тканях медицинских пиявок из природных популяций и выращенных на биофабрике // Фундаментальная наука и клиническая медицина: материалы ХХП Всерос. мед.-биол. конф. молодых исследователей. - СПб. 2009. - С.47-48.

15. Черная Л.В., Ковальчук Л.А., Нохрина Е.С. Адаптационно-компенсаторные возможности медицинских пиявок к экстремально высоким концентрациям тяжелых металлов в модельном эксперименте // Проблемы экологии: тез. докл. Междунар. науч. конф. и Междунар. шк. для молодых ученых. - Иркутск, 2010. - С. 479.

16. Нохрина Е.С., Ковальчук Л.А., Черная Л.В. Оценка физиологического состояния медицинских пиявок (Hirudo verbana Carena), выращенных в условиях интенсивного питания и роста // XXI Съезд Физиологического общества им. И.П.Павлова: тез. докл. - М.- Калуга, 2010. -С. 446.

17. Черная Л.В., Ковальчук Л.А., Нохрина Е.С. Сравнительный анализ состояния аминокислотного пула хищных и кровососущих пиявок // XXI Съезд Физиологического общества им. И.П.Павлова: тез. докл. - М.- Калуга, 2010. -

18. Нохрина Е.С. Оценка физиологического состояния медицинских пиявок Шгис1о тесИстаШ обитающих в Луганском национальном заповеднике // Видовые популяции и сообщества в естественных и антропогенно трансформированных ландшафтах: состояние и методы его диагностики: материалы XI Междунар. науч.-практ. экол. конф. - Белгород,

19. Нохрина Е.С., Ковальчук Л.А., Черная Л.В. Сравнительная оценка содержания свободных аминокислот в тканях медицинских пиявок, выращенных на биофабриках различных регионов России // Первые Международные Беккеровские чтении: сб. науч. трудов: в 2 ч. - Волгоград, 2010. -4.1. - С. 471-473.

20. Нохрина Е.С. Микроэлементный и аминокислотный статус медицинских пиявок (Hirudo medicinalis L.) в водоемах, не подверженных активному воздействию антропогенных потоков тяжёлых металлов И Наука, природа и общество: материалы Междунар. конф. - Миасс; Екатеринбург, 2010.

С. 672.

2010.-С. 175.

-С. 169-172.

Подписано в печать 18.11.2010. Формат 60x84 1/16 Бумага офсетная. Усл. печ. л. 1,2. Тираж 140 экз. Заказ № ни

Отпечатано в типографии ИПЦ «Издательство УрГУ» 620000, Екатеринбург, ул. Тургенева, 4

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Нохрина, Екатерина Сергеевна

Введение.

Глава 1. Экологические и физиологические особенности гидробионтов класса ШгиШпеа (литературный обзор).

1.1 Экология и физиология медицинской пиявки Шгис1о тесИс'таШ.

1.2 Экологическая обусловленность микроэлементного статуса гидробионтов.

1.3 Роль аминокислот в поддержании гомеостаза.

Глава 2. Материалы и методы исследования.

2.1 Общая характеристика экспериментального материала.

2.2 Краткая характеристика основных водоёмов отлова лечебной (Н.т.тесИстаШ) и аптечной (Н.т.о^гстаШ) пиявок.

2.3 Методика исследования основного обмена.

2.4 Методика определения микроэлементов.

2.5 Анализ аминокислотного состава кожно-мышечной ткани медицинской пиявки.

2.6 Лабораторный эксперимент по изучению динамики накопления тяжёлых металлов и состояния аминокислотного пула в тканях медицинской пиявки из природных популяций и выращенной на биофабрике.

2.7 Статистические методы обработки полученных результатов.

Глава 3. Экологические аспекты физиологического состояния медицинской пиявки из природных популяций и выращенной на биофабрике.7$

3.1 Видовые и популяционные особенности основного обмена медицинской пиявки.

3.2 Анализ содержания микроэлементов в тканях медицинской пиявки из природных популяций и выращенной на биофабрике.

3.2.1 Содержание тяжёлых металлов в донных отложениях исследуемых, водоёмов медицинской пиявки.

3.2.2 Содержание микроэлементов в тканях пиявок из природных популяций различных географических зон.

3.2.3 Содержание микроэлементов в тканях пиявок, выращенных на биофабриках различных регионов России.

3.2.4 Сравнительный анализ содержания биологически активных металлов в тканях пиявок из природных популяций и выращенных на биофабрике.

3.3 Состояние фонда свободных аминокислот в тканях медицинской пиявки.

3.3.1 Содержание свободных аминокислот в тканях лечебной и аптечной пиявок из природных популяций различных географических

3.3.2 Взаимосвязь спектра свободных аминокислот и микроэлементов в тканях пиявок природных популяций различных географических зон.

3.3.3 Сезонная изменчивость содержания свободных аминокислот в тканях пиявок из природных популяций.

3.3.4 Содержание свободных аминокислот в тканях пиявок, выращенных на биофабриках различных регионов России.

3.3.5 Сравнительная оценка аминокислотного состава тканей пиявок из природных популяций и выращенных на биофабрике.

Глава 4. Оценка адаптационно-компенсаторных возможностей медицинской пиявки в условиях модельного эксперимента.

4.1 Состояние аминокислотного пула и особенности накопления | тяжёлых металлов в тканях медицинской пиявки в условиях длительного I воздействия ионов меди и кадмия.

4.1.1 Динамика накопления цинка, меди, кадмия, свинца и состояние аминокислотного пула в тканях медицинской пиявки при длительном воздействии ионов меди.

4.1.2 Динамика накопления цинка, меди, кадмия, свинца и состояние аминокислотного пула в тканях медицинской пиявки при длительном воздействии ионов кадмия.

4.2 Сравнительный анализ адаптационно-компенсаторных механизмов микроэлементного обмена и азотистого метаболизма в тканях медицинской пиявки из природных популяций и выращенной на биофабрике.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Эколого-физиологические особенности медицинской пиявки (Hirudo medicinalis L.) из природных популяций и выращенной на биофабрике"

Актуальность проблемы. Проблема сохранения редких и исчезающих видов чрезвычайно важна для регионов с экстремальными условиями обитания, определяемыми как природными, так и антропогенными факторами. В исследованиях В.Н. Большакова (1972), С.С. Шварца (1980), В.П. Казначеева, (1980), П.Д. Горизонтова (1983), Э.И. Колчинского (1990), Ф.З. Меерсона (1993), Д.З. Шибковой, А.В. Аклеева (2006) показано, что организм при воздействии стрессирующих факторов внутренней и внешней среды мобилизует различные структурно-метаболические и молекулярные механизмы аварийного регулирования систем поддержания гомеостаза, снижая негативные последствия их влияния на патогенетические механизмы повреждения органов и систем.

В этом аспекте несомненна актуальность исследований роли физиологических процессов в функционировании экологических групп животных, в поддержании численности, структуры вида и определении характера микроэволюционных преобразований в популяциях животных (Тимофеев-Ресовский, 1958; Одум, 1975; Слоним, 1982; Большаков и др., 1984, 1991, 2009; Вершинин, 2009).

Указанная проблема в полной мере приложима к медицинской пиявке (Hirudo medicinalis L.), на которую распространяется действие международной конвенции CITES. Медицинская пиявка - значимый биологический ресурс России, широко применяется в практической медицине. Используется она и как сырьё для получения лекарственных препаратов и пищевых биодобавок (Исаханян, 1991; Селезнев, 1996; Самойлов, 2001; Живогляд, 2001; Березовская и др, 2003; Геращенко, Никонов, 2005; Каменев, Барановский, 2006; Никонов, 2007).

Сохранение ресурсов медицинской пиявки в России и ее рациональное использование в современных условиях высокого спроса является одной из актуальных проблем природопользования. Спрос на медицинскую пиявку на фармацевтическом рынке, неконтролируемый браконьерский отлов, а также глобальное загрязнение привели к тому, что к настоящему времени медицинская пиявка является исчезающим видом (Каменев, 2007). Одним из факторов, приводящих к сокращению численности, а в итоге к исчезновению отдельных видов гидробионтов, считается и техногенное загрязнение водной среды такими поллютантами, как тяжёлые металлы (ТМ) - Си, Хп, Сс1, РЬ (Майстренко, 1996; Агаджанян, Скальный, 2001; Актуальные задачи ., 2005, Безель, 2006).

Исследованиями Н.А. Агаджаняна, А.В. Скального (2001); Д. Оберлис и др. (2008) показано, что в общую регуляторную систему организма на всех стадиях развития включена микроэлементная физиологическая система гомеостаза, определяющая реакцию организма на аккумуляцию загрязнителей изменениями в процессах метаболизма. Это тем более важно, так как медицинскую пиявку для лечебных целей выращивают в контролируемых условиях на биофабриках, изначально используя пиявок-маток из природных популяций.

Различия в образе жизни и в условиях содержания или обитания влияют на физиологию медицинской пиявки, а, следовательно, и на выбор правильной стратегии выживания. Актуальность и состояние вопроса об экологии, физиологии и адаптивных возможностях представителей гирудофауны — двух подвидов медицинской пиявки в современных условиях обитания в природных популяциях и при их воспроизводстве на биофабриках, предопределило цели и задачи нашего исследования.

Цель исследования: Изучить эколого-физиологические особенности двух подвидов медицинской пиявки (Шгис1о тесИстаШ Ь.): аптечной (Шгис1о тесИстаИз о^гстаШ) и лечебной (Шгис1о тесИстаШ тесИстаШ) из природных популяций и выращенных на биофабрике.

Задачи исследования:

1. исследовать состояние основного обмена лечебной (Н.т.тесИстаИя) и аптечной (Н.т.о$1стаИз) пиявок, обитающих в естественных условиях и выращенных на биофабрике;

2. определить содержание микроэлементов (Си, Ъл, Мп, Бе, №, С<1, РЬ) в тканях медицинской пиявки (Штс1о тесИстаШ Ь.) из природных популяций и выращенной на биофабрике;

Научная новизна исследования

Впервые на единой методологической (эколого-физиологической) основе проведены комплексные полевые и экспериментальные исследования энергетического обмена, аминокислотного фонда, микроэлементного состава тканей двух подвидов Н1гис1о тесИстаШ: аптечной и лечебной из природных популяций Тамбовской, Луганской областей, Краснодарского края и выращенных на биофабриках: ГирудИ.Н. (Саратовская область), «Международный Центр медицинской пиявки» (Московская область) и «Гирудо-Мед.Юг» (Краснодарский край).

Выявлены внутривидовые и географические различия в содержании микроэлементов (Си, Ъс\, Мп, Бе, Сё, РЬ, N1) в тканях медицинских пиявок из природных популяций. Корреляционный анализ выявил статистически значимые положительные связи между содержанием в донных отложениях Си, Ре, Сс1, РЬ, № и их биоаккумуляцией в тканях медицинских пиявок из природных популяций (г = 0,8-0,95, при р<0,0001). Медицинские "пиявки в условиях искусственного разведения аккумулируют в своих тканях Си, Сё, РЬ и N1 в более высоких концентрациях, чем пиявки из природных популяций.

Теоретическая и практическая значимость работы

Полученные экспериментальные результаты, дополняя данные других исследователей, показали, что ткани медицинских пиявок содержат высокие концентрации свободных аминокислот — жизненно необходимых биологически активных соединений, что является дополнительным показанием к использованию гомогенатов Н. т. о$1ста1 и Н. т. тесИстаШ в фармацевтике и косметологии при условии сохранения их численности и видового разнообразия в естественной среде обитания.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Основной обмен лечебной (Н.т.тесИстаШ) и аптечной (Н. т. о/АстаШ) пиявок, обитающих в природных водоёмах и выращенных в условиях биофабрики, предопределяется биогеохимической обстановкой экосистем и существенно зависит от популяции и физиологического состояния гидробионтов.

Всероссийские конференции молодых ученых (Екатеринбург, 2005, 2006, 2008, 2009, 2010); I Съезд физиологов СНГ (Сочи, Дагомыс, 2005); IX Всероссийский популяционный семинар «Особь и популяция — стратегии жизни» (Уфа, 2006); II Международная научно-практическая конференция «Адаптация биологических систем к естественным и экстремальным факторам среды» (Челябинск, 2008); VIII молодежная научная конференция «Физиология человека и животных: от эксперимента к клинической практике» (Сыктывкар, 2009); Симпозиум «Эколого-физиологические проблемы адаптации» (Москва, 2009); Всероссийская научно-практическая конференция «Экология в высшей школе: синтез науки и образования» (Челябинск, 2009); IV съезд физиологов Урала (Екатеринбург, 2009); XXII Всероссийская медико-биологическая конференция молодых исследователей «Фундаментальная наука и клиническая медицина» (Санкт-Петербург, 2009). 4th International FESTEM Symposium on Trace Elements and Minerals in Medicine and Biology (St. Petersburg, 2010); Первые Международные Беккеровские чтения (Волгоград, 2010); XXI Съезд Физиологического общества им. И.П.Павлова (Калуга, 2010); XI Международная научно-практическая экологическая конференция «Видовые популяции и сообщества в естественных и антропогенно трансформированных ландшафтах: состояние и методы его диагностики» (Белгород, 2010); Международная конференция «Наука, природа и общество» (Миасс, 2010).

Декларация личного участия автора. Автором самостоятельно собран в полевых условиях и обработан в лаборатории материал по двум подвидам медицинской пиявки: аптечной и лечебной из природных популяций и выращенных на биофабрике. Определены концентрации микроэлементов, свободных аминокислот в тканях пиявок в натурных и экспериментальных исследованиях.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 20 работ, в рецензируемых журналах - 6, из которых 3 - в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Благодарности. Выражаю искреннюю благодарность к.б.н. Л.В. Черной, к.х.н. Н.В. Микшевичу, Е.А. Басмаджян, за оказанную помощь при сборе и обработке биологического материала. Искренняя признательность руководителю «Международного центра медицинской пиявки» д.б.н. Г.И. Никонову и директору биофабрики «Гирудо-Мед.Юг» Н.Т. Казиеву за предоставленный материал. Автор считает своим долгом выразить признательность зав. лаборатории Эволюционной экологии д.б.н. А.Г. Васильеву, д.б.н. И.М. Хохуткину, к.б.н. Ю.Л. Вигорову, к.б.н. К.И. Бердюгину, к.б.н. Н.И. Маркову, к.б.н. М.В. Чибиряку, а также всем коллегам и сотрудникам Института экологии растений и животных УрО РАН за участие в обсуждении результатов исследований. Автор признателен к.б.н. Н.В. Николаевой за ценные советы и проявленный ею искренний интерес к настоящим исследованиям.

Заключение Диссертация по теме "Экология (по отраслям)", Нохрина, Екатерина Сергеевна

выводы

1. Проведены комплексные полевые и экспериментальные исследования энергетического обмена, аминокислотного фонда и микроэлементного состава тканей двух подвидов медицинской пиявки {НЪч1(1о тесИстаШ Ь.)\ аптечной (Н.т.о/АстаНя) и лечебной (Н.т.тесИстаНз) из природных популяций Тамбовской и Луганской областей и Краснодарского края и, выращенных в искусственных условиях на биофабриках: ГирудИ.Н. (Саратовская область), «Международный Центр медицинской пиявки» (Московская область) и «Гирудо-Мед.Юг» (Краснодарский край).

2. Показано достоверное различие по основному обмену пиявок Н.т.о/АстаШ и Н.т.тесИстаШ. Потребление кислорода интенсивнее у пиявок, выращенных в условиях биофабрики, при этом, уровень потребления кислорода голодных пиявок превышает интенсивность обмена сытых в 7 раз.

3. Выявлены внутривидовые и географические различия в содержании микроэлементов (Си, 2п, Мп, Ре, Сс1, РЬ, N1) в тканях лечебных и аптечных пиявок. Корреляционный анализ выявил статистически значимые положительные связи между содержанием в донных отложениях Си, Ре, Сс1, РЬ, № и их биоаккумуляцией тканями медицинских пиявок из природных популяций (г = 0,87-0,95, при р<0,0001).

5. Показаны достоверные внутривидовые различия по содержанию свободных аминокислот в тканях аптечных и лечебных пиявок, наиболее четко проявляющиеся в условиях биофабрики. Установлено наличие статистически значимой (р<0,0001) связи между содержанием микроэлементов и показателями аминокислотного обмена" в. тканях исследуемых групп пиявок. Регуляторные связи в системе метаболических процессов микроэлементного и азотистого обмена в условиях перманентного воздействия тяжёлых металлов на организм подвержены и качественным, и количественным изменениям.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Помимо того, что пресноводные экосистемы являются объектом научных исследований вообще, особый интерес представляют отдельные виды гидробионтов, которые интегрируют неблагоприятные эффекты комплекса биотических и абиотических воздействий, и, несомненно, могут быть использованы как индикаторы состояния водных экосистем.

Актуальность исследований предопределена необходимостью изучения влияния современных биогеохимических условий среды на медицинскую пиявку №гис1о тесИстаШ Ь. и получения данных об эколого-физиологических параметрах двух подвидов медицинских пиявок, обитающих в разных регионах, с целью функциональной оценки производителей при искусственном воспроизводстве различных подвидов для эффективного воспроизводства и восполнения биологических' ресурсов медицинской пиявки России.

Нами показано, что медицинские пиявки из природных популяций отличаются от своих потомков — пиявок, выращенных в искусственных условиях на биофабриках, по всем изученным параметрам. При этом были выявлены как видовые, так и внутривидовые (популяционные) особенности двух подвидов медицинской пиявки - аптечной и лечебной.

Интенсивность потребления кислорода у медицинских пиявок, зависит от физиологического состояния особей. Так, уровень энергетического обмена голодных пиявок превышает таковой для сытых в 7 раз (р<0,05).

Установлено, что при одинаковом физиологическом состоянии особей уровень основного обмена аптечных пиявок, выращенных на биофабрике вдвое превышает аналогичные показатели у этого же подвида из природных популяций (р<0,05).

Исследования показали достоверные внутривидовые различия основного обмена: у двух подвидов медицинской пиявки (Н.т.аЦгстаНБ и Н.т.тесНстаШ). Установлены популяционные отличия по интенсивности обмена у медицинских пиявок природных популяций и выращенных в искусственных условиях биофабрики, а также у медицинских пиявок, находящихся в различных физиологических состояниях — «голодные» и «сытые».

Анализ содержания тяжелых металлов (Си, Ъъ, Мп, Ре, Сс1, РЬ, N1) в тканях медицинских пиявок двух подвидов из географически различных природных популяций выявил, как сходства, так и существенные различия в характере накопления изучаемых микроэлементов.

Показано, что присутствуют внутривидовые и биотопические различия в содержании микроэлементов в тканях медицинских пиявок из природных популяций. Внутривидовые различия обусловлены как экологическими факторами, так и физиолого-биохимическими особенностями вида. Во всех случаях в тканях пиявок элементами, характеризующимися высокими содержаниями, являются биофильные металлы: железо и цинк, а самые низкие концентрации характерны для высокотоксичного ксенобиотика кадмия.

Установлено, что медицинские пиявки, независимо от подвидовой принадлежности и места обитания, являются макроконцентраторами цинка и деконцентраторами марганца и железа — металлов, являющихся эссенциальными элементами, что и объясняет высокие уровни их содержания. По отношению к меди, кадмию, свинцу и никелю, пиявки, в зависимости от видовой принадлежности и места обитания могут быть микро-, макро- и деконцентраторами. У всех групп пиявок максимально высокими значениями коэффициента накопления отличается цинк, а минимальными - марганец.

Показано наличие положительной связи между содержанием большинства металлов в донных отложениях и их концентрациями в тканях пиявок (г = 0,87-0,95; р<0,0001). Уровень содержания меди, железа,, кадмия, свинца и никеля в тканях пиявок определяется концентрацией этих металлов в среде обитания; в данном случае, в донных отложениях. Однако такой связи для цинка и марганца не обнаружено, что, возможно, определено трофической природой поступления этих микроэлементов в организм.

Обнаруженные внутривидовые и популяционные различия в микроэлементном составе тканей медицинских пиявок, могут быть обусловлены, как географическими особенностями водных объектов, так и степенью антропогенной нагрузки на изучаемых территориях.

Показана высокая кумулятивная активность медицинских пиявок и к биофильным элементам, и к ксенобиотикам даже в экологически благополучных условиях. При этом кумуляция специфична: лечебные пиявки, выращенные на биофабрике Саратовской области, по сравнению с особями аптечных пиявок из Краснодарского края и Московской области накапливают достоверно больше цинка, марганца, свинца, кадмия и никеля (р<0,05), тогда как аптечные пиявки в сравнении с лечебными накапливают больше эссенциальных элементов: меди и железа (р<0,05).

Сравнительная оценка микроэлементного состава тканей пиявок из природных популяций и с биофабрики, показала, что у пиявок, выращенных, в условиях биофабрики медь, кадмий, свинец и никель присутствуют в тканях в более высоких концентрациях, чем у пиявок из природных популяций (р<0,05). Пиявки, отловленные в естественном водоеме, отличаются кумулятивной активностью к биофильным цинку, марганцу и железу (р<0,05).

Таким образом, в условиях искусственного разведения медицинские пиявки, являющиеся потомками первого поколения особей из природных популяций, существенно активизируют свои биоаккумуляционные способности. Повышенные концентрации ксенобиотиков в тканях медицинских пиявок, выращенных на биофабрике, вероятно, определяются как качеством водопроводной отстоянной воды, в которой содержатся пиявки, так и качеством и количеством крови крупного рогатого скота, которой они питаются. Этому способствует и обнаруженный нами повышенный уровень основного обмена у выращенных пиявок.

Сравнительный анализ аминокислотного пула двух подвидов медицинских пиявок из различных природных популяций выявил различия как по его мощности, так и по структуре. Суммарные концентрации свободных аминокислот в тканях медицинских пиявок из различных регионов значимо (р<0,05) увеличиваются в ряду популяций: «тамбовские» < «краснодарские» < «луганские».

Подобный же ряд выстраивался и по уровням загрязнения тяжелыми металлами водных объектов (водоёмов отлова), по содержаниям изучаемых микроэлементов в тканях пиявок. Последнее обусловливает высокий исходный уровень азотистого метаболизма в их тканях.

Длительное воздействие ТМ приводит к перестройке прямых и обратных регулирующих связей между основными параметрами микроэлементного и азотистого обмена, обусловливающих поддержание динамического равновесия в условиях хронического стресса. Так выявлена сильная положительная корреляция (г >0,7; р<0,05) между содержанием меди, марганца, железа, кадмия, свинца и никеля и суммарными^ концентрациями свободных аминокислот в тканях пиявок из природных популяций. Это указывает на то, что тяжелые металлы в тканях медицинских пиявок являются существенным фактором, определяющим содержание отдельных аминокислот в тканях.

Так, выявлена сильная положительная связь между содержанием глутаминовой кислоты, глутамина и концентрациями изучаемых металлов (за исключением цинка), между аланином и медью, железом, кадмием, свинцом и никелем; между пролином и марганцем, железом, свинцом (р<0,05).

Снижение содержания незаменимых аминокислот (метионина, изолейцина, гистидина) и заменимой ароматической аминокислоты тирозина в тканях пиявок наблюдали при повышенных концентрациях в них меди, марганца, железа, кадмия, свинца и никеля, на что указывают сильные отрицательные корреляционные связи между АК и МЭ (р<0,05).

Обнаружено, что для 5-ти аминокислот (цистеиновой, валина, лейцина, орнитина и гистидина) статус не менялся.

Характерным для лечебных и аптечных пиявок является наличие в тканях следовых количеств таурина и аспарагина. У всех исследованных групп пиявок уровень незаменимых аминокислот в тканях невысок.

Содержание свободных аминокислот в тканях пиявок обоих подвидов, подвержено сезонным изменениям (весна-лето). Весной АК фонд пиявок достоверно (более чем в два раза) выше, что свидетельствует о катаболических процессах в тканях, происходящих в период зимней спячки медицинских пиявок и на выходе из нее. Величина антитоксического ИФ свидетельствует о дисбалансе аминокислот и незначительном эндотоксикозе, обусловленном накоплением продуктов метаболизма в тканях в период зимнего анабиоза. Обнаруженный дисбаланс свидетельствует о том, что выход из зимней спячки носит стрессовый характер, и для нормализации гомеостаза организм вынужден повышать уровень свободных аминокислот за счет межуточного обмена тканевых ресурсов.

При сравнительном анализе количественного и качественного состава аминокислотного фонда тканей двух подвидов медицинских пиявок, выращенных на биофабриках различных регионов России, обнаружено, что качественный состав свободных аминокислот в тканях исследуемых пиявок постоянен и включает 22 аминокислоты, тогда как количественные характеристики аминокислотного фонда тканей показали существенные различия, как на популяционном, так и на подвидовом уровне.

Аптечные пиявки по сравнению с лечебными, содержат в своих тканях достоверно больше аспарагиновой кислоты, серина, глицина, валина, цистеина, изолейцина, лейцина, орнитина и лизина, но меньше цистеиновой кислоты, глутаминовой кислоты и глутамина, аланина и гистидина (р<0,05).

У лечебных пиявок, по сравнению с аптечными, снижено содержание незаменимых аминокислот и аминокислот с разветвленной углеводородной цепью (валин, изолейцин, лейцин). В тканях лечебных пиявок с повышенным содержанием ксенобиотиков (Сё, РЬ и КП) отмечали нарастание концентрации глутаминовой кислоты и гистидина, что указывает на их роль в процессах детоксикации и связывании тяжелых металлов в хелатные комплексы.

Сильная положительная связь присутствует в тканях пиявок, выращенных на биофабрике между концентрациями меди и глицина, метионина, фенилаланина; цинка и глутаминовой кислоты и глутамина, у-аминомасляной кислоты; марганца и глутаминовой кислоты и глутамина; железа и аспарагиновой кислоты, цистеина, изолейцина (р<0,05). Отрицательная корреляция существует между содержанием свободных АК и эндогенных металлов для гистидина; аспарагиновой кислоты, изолейцина; цистеина, изолейцина, лейцина, орнитина; глутаминовой кислоты, глутамина, у-аминомасляной кислоты; глицина, метионина, лейцина, фенилаланина и лизина(р<0,05).

Анализ корреляционных связей ТМ - АК в тканях пиявок из природных популяций и выращенных на биофабрике показал, что на состояние аминокислотного фонда наибольшее влияние оказывают содержащиеся в их тканях марганец, свинец и никель.

Аминокислотный пул медицинских пиявок из природных популяций и выращенных на биофабрике содержит в равных долях серин (5,97% и 5,16%), глутаминовую кислоту и глутамин (26,75% и 24,93%), лейцин (4,35% и 4,05%), орнитин (1,64% и 1,34%), следовые количества таурина и аспарагина, тогда как суммарные концентрации свободных АК выше у пиявок с биофабрики. Показано, что более 60% от общего количества АК и у пиявок природных популяций и у выращенных на биофабрике приходится на аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту с глутамином, аланин.

Различия в образе жизни определяют различия в содержании незаменимых АК в тканях: у пиявок с биофабрики их доля составляет 17,59%, из природных популяций - 11,80%. Пиявки, выращенные на биофабрике содержат в 2 раза больше аминокислот, способных связывать тяжелые металлы в нетоксичные комплексы (метионин, гистидин, цистеин), что коррелирует с повышенным содержанием в них ксенобиотиков.

Для тканей медицинских пиявок характерно высокое содержание свободных аминокислот — жизненно необходимых биологически активных соединений, что является дополнительным показанием к использованию гомогенатов Н.т.о^гс'таНя и Н.т.тесИстаШ в фармацевтике и косметологии. Однако повышенные концентрации ксенобиотиков в воде могут обусловить снижение содержания незаменимых аминокислот в тканях медицинских пиявок, что требует контроля качества воды и питания медицинских пиявок.

Обнаруженное у выращенных на биофабрике пиявок увеличение суммарных концентраций свободных аминокислот в тканях на фоне повышенного уровня основного и микроэлементного обмена является одной из форм адаптации медицинских пиявок к условиям искусственного разведения и содержания и обеспечивает им высокую резистентность к избыточному присутствию токсикантов, поступающих извне. В этих условиях у медицинских пиявок, в отличие от пиявок из природных популяций, более четко проявляются межвидовые различия и по микроэлементному и по аминокислотному составу тканей.

Это подтверждает и модельный эксперимент по изучению адаптационно-компенсаторных возможностей медицинских пиявок Н.т.о//ютаШ, показавший более высокую резистентность пиявок выращенных на биофабрике к воздействию высоких концентраций ТМ, в сравнении с особями из природных популяций.

Обнаружены различия и в динамике и в характере накопления изучаемых тяжелых металлов пиявками различных опытных групп. Максимальные концентрации ТМ в тканях пиявок, выращенных на биофабрике, наблюдали на 21-е сутки эксперимента в растворе смеси ТМ, тогда как у пиявок из природных популяций максимальные содержания биофильного цинка, превышающие контроль в полтора раза, а также ксенобиотика кадмия (в 12,5 раза больше нормы) отмечены на седьмые сутки эксперимента в растворе кадмия. Больше всего меди и свинца пиявки из природных популяций накапливают в растворе смеси ТМ на первом этапе эксперимента (р<0,05).

Сравнительная оценка аккумуляционных возможностей показала, большую способность пиявок, выращенных на биофабрике депонировать медь и кадмий, нежели особи из природных популяций. При этом, по отношению к свинцу существенных различий пиявки обеих групп не показали, что объясняется повышенным исходным уровнем содержания Си и Cd в тканях выращенных пиявок, позволяющим им, активно использовать механизмы аккумуляции и элиминации.

Наибольшему колебанию подвержены концентрации кадмия в тканях пиявок обеих групп (F=882,94 и F=251,5; р<0,001). Высокий уровень дисперсии характерен и для концентраций меди в тканях пиявок из природных популяций (F=l39,54; р<0,001). При этом наибольший вклад в дисперсию вносят растворы меди и смеси ТМ.

При изучении влияния экстремально высоких концентраций ТМ на. обменные процессы в тканях пиявок была выявлена четкая тенденция увеличения пула свободных АК. Максимальные значения АК пул достигал, на 14-е сутки нахождения пиявок в растворе смеси ТМ. Здесь суммарные концентрации АК превысили контрольные значения в 2,5 раза в тканях пиявок с биофабрики и в 4 раза - у пиявок природных популяций. В тканях медицинских пиявок рост происходит главным образом за счёт аланина и аспарагиновой кислоты. Кроме того, практически на всех этапах эксперимента отмечено и повышение концентраций цистеиновой кислоты, серина, глицина, валина, цистеина, метионина и лизина.

При рассмотрении отдельных групп АК было обнаружено падение соотношения незаменимых АК к заменимым у пиявок с биофабрики при экспозиции меди, свинца и смеси ТМ на фоне его стабильности или роста у пиявок из природных популяций. Связано это, скорее всего, с обвальным снижением в тканях испытуемых пиявок из природных популяций процентного содержания глутаминовой кислоты и глутамина, исходные значения которых в контроле достигали 29,4%, а концу эксперимента не превышали 6,6%.

Отмечено, что в отличие от влияния других ТМ, при действии кадмия в тканях пиявок обеих групп наблюдали увеличение содержания незаменимых АК, вследствие чего, по-нашему мнению, в условиях кадмиевой интоксикации у пиявок отсутствовали признаки развития эндотоксикоза в организме, критерием которого является ИФ. Наиболее сильный эндотоксикоз развивался у пиявок из природных популяций при нахождении их в растворе смеси ТМ на 14 сутки, (антитоксический ИФ при этом превысил норму в 5 раз). Для этого же времени характерны и максимальные суммарные концентрации свободных АК в тканях, и значительный рост содержания незаменимых АК за счет пятикратного снижения процентного содержания глутаминовой кислоты и глутамина и дальнейшая гибель всех особей.

Дисперсионный анализ показал, что в тканях медицинских пиявок обеих групп наибольшей дисперсией отличается суммарный аминокислотный фонд, а наибольший вклад в дисперсию аминокислотного пула вносит смесь ТМ на 14-е сутки эксперимента (р<0,001).

Сходство в реакциях некоторых АК на хроническое действие ТМ выявил и корреляционный анализ (снижение процентного содержания глутаминовой кислоты и глутамина, у-аминомасляной кислоты и аргинина в тканях пиявок обеих групп на фоне роста фонда АК и содержания аланина на всем протяжении эксперимента).

Положительные корреляционные связи (коэффициент Спирмена г > 0,7) выявлены между содержанием отдельных АК в тканях пиявок обеих групп и временем воздействия агентов для свинца и аланина; кадмия и тирозина; смеси ТМ и аспарагиновой кислоты, а отрицательные корреляционные связи (г < -0,7) обнаружены для: смеси ТМ и тирозина, фенил аланина, у-аминомасляной кислоты, аргинина; свинца и глутаминовой кислоты и глутамина, лейцина, аргинина; кадмия и глутаминовой кислоты и глутамина, тирозина, аргинина; меди и фенилаланина, аргинина. Эти связи указывают на их ключевую роль в процессах детоксикации и адаптации пиявок обеих групп к избыточному присутствию токсикантов в водной и среде и, соответственно, в тканях.

Корреляционный анализ выявил вытеснение ряда связей, характеризующих состояние АК фонда у пиявок из природных популяций и формирование у них новых нетипичных связей. У пиявок с биофабрики в условиях сочетанного воздействия смеси тяжёлых металлов отсутствуют связи аминокислот (валин, цистеин, гистидин, лейцин), участвующих в детоксикации ТМ. Число стабилизирующих систему достоверных отрицательных связей снижается у пиявок природных популяций к 21-м суткам хронического сочетанного воздействия сТМ. Отсутствуют связи между пролином и сТМ у пиявок обеих опытных групп.

Модельный эксперимент показал, что наибольшую токсическую нагрузку медицинские пиявки обеих групп испытывают при сочетанном воздействии сТМ. Установлено принципиальное значение прямых и обратных связей между основными системами азотистого и микроэлементного обмена в поддержании динамического равновесия этой системы в экспериментальных условиях.

В целом, корреляционный анализ показал, что регуляторные связи в системе метаболических процессов микроэлементного и азотистого обмена в условиях перманентного воздействия тяжёлых металлов на организм пиявок подвержены и качественным, и количественным изменениям.

В механизме адаптации наиболее важную роль играют универсальные факторы регуляции физиологических и биохимических систем. Аминокислоты, являясь регуляторами функций организма, обеспечивают развитие защитных реакций и поддержание гомеостаза при различных воздействиях. Общим необходимым условием для запуска механизмов адаптации к влиянию экстремально высоких концентраций тяжелых металлов в водной среде является значительное повышение суммарных концентраций свободных аминокислот в тканях (в основном за счет аланина, аспарагиновой кислоты, глицина, цистеина, лизина) на фоне активной утилизации глутаминовой аминокислоты и глутамина, у-аминомасляной кислоты и аргинина.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Нохрина, Екатерина Сергеевна, Екатеринбург

1. Агаджанян H.A., Скальный А. В. Химические элементы в среде обитания и экологический портрет человека. М.: КМК, 2001. — 83с.

2. Агрохимия / под ред Б.А.Ягодина. М.: Агропромиздат, 1989.639 с.

3. Актуальные задачи экологии человека и гигиены окружающей среды / Ю.А. Рахманин и др. // Вестн. Урал. мед. акад. науки. 2005. - №2. -С. 18-23.

4. Аминокислоты в медицине / В.И. Западнюк и др.. Киев: Здоров я, 1982.- 199с.

5. Андреев П.Н. О сохраняемости микроорганизмов и иммунных тел в пищеварительном канале пиявок и о роли последних в распространении заразных болезней // арх. науч. и практ. Ветеринарии. -1923. -№1.- С. 38-45.

6. Артюх В.П., Штутман Ц.М. Вплив селену, метюншу та в1тамшу Е на обмш метюшну I метюнш — аденозилтрансферази в печшщ пщнв // Укр. бкгам журн. 1972. -№4. - С. 504-507.

7. Атарская Л.И., Фридман Я.Д., Немальцева Т.Г. Противогипоксическая и нейронная активность смешанно-лигандных соединений кобальта и с аскорбиновой кислотой и аминокислотами // Хим.-фарм. журн. 1990. -№10. - С. 34-38.

8. Бабенко Г. А. Микроэлементозы человека: патогенез, профилактика, лечение // Микроэлементы в медицине. 2001. - Т.2, №1. - С. 2-5.

9. Баев A.C., Бударин В.Ф., Буренин Н.С. Охрана окружающей среды, природопользование и обеспечение экологической безопасности в

10. Санкт-Петербурге в 1977 г. / под ред A.C. Баева, Н.Д. Сорокина. СПб: НИИ химии СПбГУ, 1998. - 306с.

11. Балог К.В., Шаланки Я. Использование рачкового зоопланктона (Crustacea) для оценки загрязнения оз. Балатон тяжелыми металлами // Гидробиол. журн. 1984. - Т. 20, № 2. - С. 56-63.

12. Баскова И.П. Белки системы гомеостаза // Белки и пептиды. М.: Наука, 1995.-С. 397-433.

13. Баскова И.П. Биологически активные вещества, продуцируемые медицинской пиявкой (Hirudo medicinalis), и механизмы их действия: автореф. дис. . д-ра биол. наук. М., 1988. - 46 с.

14. Бауман В.К. Всасывание двухвалентных катионов // Физиология всасывания. Л.: Наука, 1977. - С. 152-222.

15. Безель B.C. Экологическая токсикология: популяционный и биоценотические аспекты. — Екатеринбург: Гощицкий, 2006 279с.

16. Беличенко Ю.П., Березюк В.Г., Микшевич Н.В. Экологические проблемы охраны водных ресурсов в цветной металлургии. Свердловск, 1987.-55с.

17. Березина H.A. Влияние pH среды на пресноводных беспозвоночных в экспериментальных условиях // Экология. —2001. —№ 5. — С. 372-381.

18. Березовская И.В., Рымарцева В.И., Тычинин В.В. Изучение общетоксического действия «Пиявита» // Лечение медицинскими пиявками и препаратами из них: сб. ст.- Люберцы, 2003. кн. 2. - С.51-52.

19. Большаков В. Н. Пути приспособления мелких млекопитающих к горным условиям. М.: Наука, 1972. - 202 с.

20. Большаков В. Н., Ковальчук Л. А., Ястребов А.П. Энергетический обмен у полевок и его изменения в экстремальных условиях. Свердловск: УНЦ АН СССР, 1984. - 115 с.165

21. Большаков В.Н., Добринский Л.Н., Кубанцев Б.С. Развитие идей академика С.С.Шварца в современной экологии. М.: Наука, 1991. - 276 с.

22. Большаков В.Н., Моисеенко Т.И. Антропогенная эволюция животных: факты и их интерпретация // Экология. — 2009. №5. - С. 323-332.

23. Бондаренко Л.Б., Сапрыкина H.A., Коваленко В.Н. Пул свободных аминокислот сердца крыс в норме и при введении пиразинамида // Токсикол. вестн. 2007. - №6. - С. 24-28.

24. Брагин Б.И. Роль донных отложений в самоочищении пресноводных водоемов // Биологические основы рыбного хозяйства водоемов Средней Азии и Казахстана: тез. докл. XIX конф. Ашхабад, 1986. -С. 41-42.

25. Браунштейн А.Е. Биохимия аминокислотного обмена. М.: АМН, 1949.-426с.

26. Вершинин В.Л. Адаптивные и микроэволюционные процессы в популяциях амфибий урбанизированных территорий // Пращ Украшського герпетолопчного товариства. 2009. - №2. - С. 7-20.

27. Вигдорович В.И., Цыганкова Л.Е. История и экология г. Тамбова. 1996.-216 с.

28. Влияние медицинской пиявки на реологические показатели крови крыс в норме и при развитии экспериментального липоидоза / С.С. Григорян и др. // Физиология. 1995. - Т.340, №6. - С. 830-831.

29. Влияние препаратов из медицинских пиявок на показатели атерогенеза / И.П. Баскова и др. // Кардиология. 1989. - Т.29. - С. 75-79.

30. Влияние хронического воздействия ионов свинца и кадмия на содержание общего белка и его фракций в тканях сеголеток карпа (Cyprinus carpió L.) / М.М. Габибов и др. // Изв. Самар. науч. центра Рос. акад. наук. -2009.-T.il, №1(5). -С.1066-1069.

31. Водохранилища мира / А.Б. Авакян и др.. М.: Наука, 1979.288с.

32. Войнар А.И. Биологическая роль микроэлементов в организме животных и человека. М.: Высш. шк., 1960. - 544с.

33. Воробьёв Д.В. Функциональные особенности метаболизма металлов у рыб в современных биогеохимических условиях дельты Волги: автореф. дис. .канд. биол. наук. Астрахань, 2008. -22с.

34. Воробьев Д.В., Воробьев В.И.Физиологическая характеристика карповых рыб в условиях дельты р. Волги // Естеств. науки: журн. фундам. и прикл. исследований. 2008. - №1 (22). - С. 15-17.

35. Воскресенский Р.Н., Жутаев A.A., Бобырев В.Н. Антиоксидантная система, онтогенез, старение // Вопр. мед. химии. — 1982. -№1. С. 14-27.

36. Вредные химические вещества. Неорганические соединения I-IV групп: справ, изд. / под ред. В.А. Филова и др.. Л.: Химия, 1988. - 512 с.

37. Вредные химические вещества. Неорганические соединения V-VIII групп: справ, изд. / под ред. В.А. Филова и др.. Л.: Химия, 1989. - 592 с.

38. Вредные химические вещества. Углеводороды. Галогенпроизводные углеводородов: справ, изд. / под ред. В.А. Филова и др.. Л.: Химия, 1990. - 732 с.

39. Гаранина С.Н. Действие тяжелых металлов на некоторые элементы углеводного обмена каспийских гаммарид // Гидробиол. журн. — 1984. -Т. 20, № 4. С. 67-69.

40. Геращенко Л., Никонов Г. Вам поможет медицинская пиявка: энциклопедия гирудотерапии: лечение без лекарств. — М.: ACT, Астрель, Транзиткнига, 2005. 334с.

41. Глотов H.A. Окислительные процессы в митохондриях при гипоксии и их коррекция глутаминовой кислотой: автореф. дис. . д-ра. мед. наук. Свердловск, 1973. - 28 с.

42. Глутаминовая и аспарагиновая кислоты в комплексном лечении циркуляторной гипоксии / Г.А. Баскович и др. // Патол. физиология и эксперим. терапия. 1978. - №1. - С. 20-25.

43. Глутаминовая кислота: биохимич. обоснование практич. использования / М.С. Волков и др.. Свердловск: Сред.-Урал. кн. изд-во, 1975.- 119с.

44. Голиков С.Н., Сапоцкий Н.В., Глухов Л.А. Общие механизмы токсического действия. Л.: Медицина, 1998. - 280 с.

45. Гольдберг Д.И. Гольдберг Е.Д. Справочник по гематологии. — Томск: Изд-во Том. ун-та, 1980. 268 с.

46. Горизонтов П.Д. Гомеостаз. М.: Медицина. 1981. — 576 с.

47. Готовский Ю.В., Косарева Л.Б., Перов Ю.Ф. Амнокислоты. М.: ИМЕДИС, 2002. — 43 с.168

48. Гринберг A.A. Введение в химию комплексных соединений. Л.: Химия, 1971. — 326 с.

49. Давид О.Ф. Морфофизиологические основы локомоции аннелид. -Л.: Наука, 1990.- 168 с.

50. Дажо Р. Основные экологии. М.: Мир, 1975. 415 с.

51. Данилин И.А. Металлотионеины как биомаркёры при действии на организмы тяжёлых металлов и ионизирующего излучения: автореф. дис. . д-ра биол. Наук. М., 2010. - 39 с.

52. Данилин И. А., Павловская В.В. Удельное содержание металлотионеинов в тканях моллюсков — биоиндикатор загрязнения водоема тяжелыми металлами // Вестн. РУДН. Серия «Экология и безопасность жизнедеятельности». 2006. - №2 (14). - С. 87-92.

53. Данилин И.А., Сынзыныс Б.И., Козьмин Г.М. Экспериментальное обоснование нового метода биотестирования пресноводных водоемов по содержанию белков-металлотионеинов в органах и тканях двустворчатых моллюсков // Экология. — 2002. — № 5. — С 383-386.

54. Дегтярева И.И., Солодова Е.В. Нарушение аминокислотного фонда сыворотки крови и слизистой оболочки желудка у больных язвенной болезнью // Терапевт, арх. 1984. - №8. - С. 100-106.

55. Другов Ю.С., Родин A.A. Пробоподготовка в экологическом анализе: практическое руководство. — 3-е изд. доп. и перераб. М.:БИНОМ, 2009. - 855 с.

56. Дьюсбери Д. Поведение животных. М.: Мир, 1981. - 479 с.

57. Европейская конвенция о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях (ets п 123) (Страсбург, 18 марта 1986 года). Режим доступа: http://conventions.coe.int/Treaty/Commun/QueVoulezVous.

58. Жадкевич М. М., Баратова JI. А., Матвеев Д. В. Аминокислоты плазмы крови у больных перитонитом: значение индекса Фишера // Лаб. дело. 1989. - № 2. - С. 29-32.

59. Живогляд Р.Н. Гирудотерапия при эндометриозе, гиперпластических процессах эндометрия и хронического сальпингоофорита в стадии обострения по инфекционно-токсическому типу // Гирудотерапия и гирудофармакотерапия. 2001. - Т.З. - С. 65-71.

60. Завалова Л. Л., Кузина Е.В., Баскова И.П. Появление неспецифической протеолитической активности у дестабилазы — эндо-£-(у-глутамил)-лизил-изопептидазы в присутствии DS-Na // Биохимия. — 1994. -Т.59, вып.б.-С. 905-910.

61. Зайденберг М.А., Писаржевский С.А., Носова И.М. Исследование репаративных процессов в тканях ран экспериментальных животных после введения глицина // Бюл. эксперим. биологии и медицины. -1981. Т.92, № 11. - С. 599-601.

62. Запкувене Д.В. Разведение и выращивание медицинских пиявок в лабораторных условиях // Тр. АН Лит. ССР. Серия В 1972. - Т.З, №59. -С. 71-84.

63. Зверев В.П. Гидрогеохимия осадочного процесса. — М.:Наука, 1993.-184 с.

64. Зенин A.A., Белоусова Н.В. Гидрохимический словарь. Л.: Гидрометеоиздат, 1988. -240 с.

65. Зоология беспозвоночных: в 2 томах / под ред. В. Вестхайде и Р. Ригера. М.: 2008. — Том 1: от простейших до моллюсков и артропод. - 512 с.

66. Иванов В. К. Макрозообентос малых озер Дарвинского заповедника в условиях ацидификации // Тезисы, докладов, международной, конференции. Петрозаводск, 1995. - С. 30.

67. Изучение гирудофауны Белоярского водохранилища / Е.С. Нохрина и др. // Экология: от генов до экосистем: материалы Всерос. конф. молодых ученых. Екатеринбург, 2005. - С. 193-194.

68. Иогансон JL Определитель пиявок. Л.: Изд-во АН СССР, 1935.-95 с.

69. Исаханян Г.С. Гирудотерапия в клинике внутренних болезней / под ред. В.М.Арутюнян. Ереван: Айстан, 1991. - 176 с.

70. Исследование острой токсичности аминокислотного комплекса хрома (III) / Е.Л. Гоголь и др. // Токсикол. вестн. 2001. - №2. - С. 18-19.

71. Кадастр беспозвоночных животных Самарской Луки: учеб. пособие / под ред. Розенберга Г.С. Самара, 2007. - 471с.

72. Казаренко Т.Д. Ионообменная хроматография аминокислот. -Новосибирск: Наука, 1975. 133с.

73. Казначеев В.П. Современные аспекты адаптации. — Новосибирск: Наука, 1980.- 192 с.

74. Каменев О.Ю. Ресурсы медицинской пиявки (Hirudo medicinalis L,) в акваториях Западного Предкавказья и их рациональное использование:, автореф. дис. . канд. биол. наук / Кубан. гос. аграр. Ун-т. Краснодар, 2007. - 24с.

75. Каменев О.Ю., Барановский А.Ю. Теория и практика гирудотерапии: лечение пиявками: руководство для врачей. СПб.: Весь, 2006. - 302 с.

76. Каменев Ю.Я., Каменев О.Ю. Вам поможет пиявка: практ. руководство по гирудотерапии. СПб.: Весь, 2003. - 253 с.

77. Кобахидзе Д.Н. К выяснению местообитаний медицинской пиявки в природных условиях Грузии // Сообщ. АН Груз. ССР. 1942. - Т.З, вып.1.-С. 69-72.

78. Кобахидзе Д.Н. К изучению гидростойкости медицинской пиявки // Сообщения АН Грузинской ССР. Тбилиси, 1944. - 5. 4. - С. 423429.

79. Кобахидзе Д.Н. Материалы к инвентаризации гидрофауны Грузии // Тр. Зоол. ин-та АН Груз. ССР. 1946. - Т.6. - С. 291-297.

80. Ковальский В.В. Геохимическая среда и жизнь. — М.: Наука, 1982.-77с.

81. Ковальский В.В. Современные направления и задачи биогеохимии // Биологическая роль микроэлементов. М.:Наука, 1983. - С. 3-17.

82. Ковальчук JI.A. Эколого-физиологические аспекты адаптации к условиям техногенных экосистем. Екатеринбург: УрО РАН, 2008. - 215 с.

83. Ковальчук JI.A., Микшевич Н.В. Энергетический обмен мелких млекопитающих в зоне действия выбросов медеплавильного комбината // Экология. 1988. -№4. - С. 86-88.

84. Ковальчук JI.A., Сатонкина О. А., Тарханова А. Э. Тяжелые металлы в окружающей среде Среднего Урала и их влияние на организм // Экология. 2002. - №5. - С. 358-361.

85. Ковальчук Л.А., Ястребов А.П. Экологическая физиология мелких млекопитающих Урала. Екатеринбург: Изд-во Урал. Ун-та, 2003. — 204 с.

86. Колчинский Э.И. Эволюция биосферы. Л.: Наука, 1990. — 236с.

87. Кондрашова М.Н. Накопление и использование янтарной кислоты в митохондриях // Митохондрии. Молекулярные механизмы ферментативных реакций. М.: Наука, 1972. - С. 67-82.

88. Константинов А.С. Общая гидробиология: учебник. М.: Высш. шк., 1979.-480 с.

89. Кулаев С.И. К биологии Herpobdella testacea Savigny, 1820 // Рус. гидробиол. журн. 1925. - Т. 4. - С. 102-103.

90. Кустов С.Ю. Изучение плодовитости медицинской пиявки при закладке маток в различные субстраты и оценка эффективности их использования в масштабах производства: отчет о НИР (заключит.). — Орджоникодзе, 2003. 34с.

91. Лапенко Л.А., Виленский М.Г. Метод атомно-абсорбционной спектрофотометрии в фоновом мониторинге тяжелых металлов //

92. Мониторинг фонового загрязнения природной среды / под ред. Ю.А. Израэля, Ф.Я. Ровинского. Л.: Гидрометеоиздат, 1986. - Вып.З. - С.216-223.

93. Ларионов М.В., Ларионов Н.В. Влияние степени загрязнения окружающей среды на здоровье населения в Саратовской области // Вестн. ОГУ. -2009. -№4. С. 122-126.

94. Ленинджер А. Метаболизм аминокислот // Основы биохимии. -М.: Мир, 1985. Т.1. - С.107-137; Т.2. - С.571-601, 653-683; Т.З. - С.812-849.

95. Лукин Е.И. Географическое распространение пресноводных пиявок на территории СССР // Проблемы зоогеографии суши. Львов, 1958. -С. 144-149.

96. Лукин Е.И. К вопросу о распространении медицинской пиявки в СССР // Зоол. журн. 1957. - Т.36, вып.5. - С. 658-669.

97. Лукин Е.И. Класс пиявки (ШгисИпеа) // Жизнь животных. М.: Просвещение, 1968. - Т.1. - С. 509-526.

98. Лукин Е.И. Определитель пресноводных беспозвоночных Европейской части СССР: Класс пиявки ШгисИпеа Л.: Гидрометеоиздат, 1977.-204 с.

99. Лукин Е.И. Пиявки пресных и солоноватых водоемов. — Л., 1976. Т. 1. - 484 с. - (Фауна СССР, №109).

100. Майстер А. Биохимия аминокислот. М.: Иностр. Литература, 1961.-530с.

101. Майстренко В.Н., Хамитов Р.З., Будников Г.К. Эколого-аналитический мониторинг супертоксикантов. М.: Химия, 1996. - 319 с.

102. Максимова Е.А. Животные водоемов Челябинской области (беспозвоночные) // Доклады к научно-краеведческой конференции, посвященной 95-летию со дня рождения В.И.Ленина. Челябинск, 1965. - С. 67-70.

103. Машковский М.Д. Лекарственные средства. М.: Медицина. 1993. -4.2, гл.7-8. - С. 111-122.

104. Меерсон Ф.З. Концепция адаптационной медицины. — М.: Дело, 1993.- 137с.

105. Мешкова A.M. Пиявки озера Севан: автореф. дис. . канд. биол. наук. Баку, 1956. - 13 с.

106. Микроэлементы человека: этиология, классификация, органопатология / А.П. Авцын и др.. М.: Медицина, 1991. - 496 с.

107. Мискевич Д.А. Влияние введения некоторых неполярных аминокислот на состояние углеводного обмена в печени крыс на фоне тиоацетамидного гепатита // Аминокислоты и их производные в биологии и медицине: материалы конф. Гродно, 2001. - С. 79-80.

108. Михайлов C.B. Распространение и биология медицинской пиявки (Hirudo medicinalis L.) в краснодарском крае: автореф. дис. . канд. биол. наук. Ставрополь, 2006 - 24 с.

109. Михайлов C.B., Ярошенко В.А. Особенности биологии, экологии и распространения кубанской медицинской пиявки // Актуальные вопросы экологии и охраны природы экосистем южных регионов России и сопредельных территорий. Краснодар, 2005. - С. 136-138.

110. Мищук Е.В. Мыхайлив Р.Л. Роль металлотионеинов в тканях двустворчатого моллюска Anodonta cygnea в детоксикации ионов меди // Биология наука XXI века: 7 Пущин, шк.-конф. молодых ученых: сб. тез. -Пущино, 2003. - С. 193-194.

111. Москалев Ю. И. Минеральный обмен. — М.: Медицина, 1985.288с.

112. Мур Дж.В., Рамамурти С. Тяжелые металлы в природных водах. — М.: Мир, 1987.-288 с.

113. Накопление тяжелых металлов в водных экосистемах разной степени загрязненности / T.JI. Егоршина и др. // Пробл. регион, экологии. -2007.-№2.-С. 17-23.

114. Неклюдов А.Д. Биологические свойства ароматических, гетероциклических, алифатических аминокислот // Антибиотики и химиотерапия. 1990. - Т.35, №5. - С.51-54.

115. Неоднозначность действия больших и малых доз аминокислотных препаратов на иммунный ответ и фагоцитоз у мышей / Г.А. Белокрылов и др. // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1994. — Т. 117, №5.-С. 500-501.

116. Нетахата Ж.Н., Ляпун С.Н. Показатели аминокислотного обмена при патологии внутренних органов // Сов. медицина. — 1973. — №3. С.38-43.

117. Нефедов Л.И. Формирование фонда свободных аминокислот и их производных в условиях метаболического дисбаланса: автореф. дис. . д-ра мед. наук. Минск, 1993. - 36 с.

118. Нечипоренко H.A., Нефёдов Л.И., Климович И.И. Изменения белкового обмена и фонд свободных аминокислот у больных раком мочевого пузыря // Вопр. онкологии. 1990. - Т.36, №10. - С. 1201-1205.

119. Никаноров A.M. Гидрохимия: учеб. пособие. — Л.: Гидрометеоиздат, 1989.-351 с.

120. Никаноров A.M., Жулидов A.B. Биомониторинг металлов в пресноводных экосистемах. Л.: Гидрометеоиздат, 1991. - 312 с.

121. Никаноров A.M., Жулидов A.B., Покаржевский А.Д. Биомониторинг тяжелых металлов в пресноводных экосистемах. Л., 1985. — 144 с.

122. Никаноров A.M., Жулидов A.B., Покаржевский А.Д. Биомониторинг тяжелых металлов в пресноводных экосистемах. Л.: Гидрометеоиздат, 1993.-291 с.

123. Никонов Г.И. Гирудотерапия: наука и практика // Гирудотерапия и гирудофармакотерапия. 2007. - Т.5. - С. 8-22.

124. Никонов Г.И. Медицинская пиявка: вчера, сегодня, завтра. М.: Электроника, 1992. - 123 с.

125. Никонов Г.И. Медицинская пиявка: основы гирудотерапии. -СПб.: СДС, 1998.-294 с.

126. Нохрина Е.С. Свободные аминокислоты в тканях медицинских пиявок из природных популяций и выращенных на биофабрике // Фундаментальная наука и клиническая медицина: материалы XXII Всерос. мед.-биол. конф. молодых исследователей. СПб. 20096. - С.47-48.

127. Нохрина Е.С., Ковальчук JI.A., Черная JI.B. Динамика накопления тяжелых металлов в тканях медицинской пиявки Hirudo medicinalis L. в модельном эксперименте // Вестн. Урал. мед. акад. науки. — 2009. -№2(23).-С. 145-146.

128. Нюкканов А.Н. Воздействие природный экотоксикантов на гидробионты Республики Сака (Якутия): автореф. дис. . д-ра биол. наук. -Красноярск, 2004. 30 с.

129. Оберлис Д., Харланд Б., Скальный А. Биологическая роль макро-и микроэлементов у человека и животных. СПб.: Наука, 2008. - 543с.

130. Одум Ю. Основы экологии. М.: Мир, 1975. - 740с.

131. Оценка состояния аминокислотного пула в тканях медицинской пиявки при хроническом голодании / JI.B. Чёрная, JI.A. Ковальчук, Н.Т. Казиев, Е.С. Нохрина // Вестн. Урал. мед. акад. науки. 2009. - №2 (25) - С. 171-172.

132. Павловская В.В. Экологические аспекты реакции моллюсков Dreissena polymorpha (Pallas, 1771) на действие ионов тяжелых металлов: автореф. дис. . канд. биол. наук. Калининград, 2007. - 25с.

133. Павлюк Т.Е., Попов А.Н. Методика оценки экологического' состояния водных экосистем на основе анализа состояния донных биоценозов: отчет о НИР Рос НИИВХ. Екатеринбург, 2001. - 115с.

134. Патология человека на Севере / А.П. Авцын и др.. М.: Медицина, 1985.-415с.

135. Перова С.Н. Содержание некоторых металлов в моллюсках и донных отложениях Рыбинского водохранилища // Биология внутренних вод. 1996.-№99.-С. 35-39.

136. Подгурская О.В. Механизмы детоксикации тяжёлых металлов у моллюсков семейства Mytilidae: автореф. дис. . канд. биол. наук -Владивосток, 2006. 22 с.

137. Проссер JI. Сравнительная физиология. М.: Мир, 1977. — 153 с.

138. Рассадина Е.В. Экологически обоснованная биотехнология воспроизводства Hirudo medicinalis L. в лабораторных условиях: автореф. дис. . канд. биол. наук. Ульяновск, 2006. - 23 с.

139. Реймерс Н.Ф. Азбука природы: микроэнциклопедия биосферы. -М.: Знание, 1980.-208 с.

140. Розанов А .Я., Трещинский А.И., Хмелевский Ю.В. Ферментативные процессы и их коррекция при экстремальных состояниях. — Киев.: Здоров я, 1985. 208 с.

141. Роль металлотионеинов в детоксикации ионов Си" Zn" Мп~ в тканях двустворчатого моллюска Anodonta cygnea при их действии в отдельности и в смеси / О.Б. Столяр и др. // Гидробиологич. журн. 2004. -40. №3.-С. 91-102.

142. Руководство по химическому анализу поверхностных вод суши / под ред. А.Д. Семенова. Л.: Гидрометеоиздат, 1977. - 354 с.

143. Рыженков В.Е., Молоковский Д.С., Иоффе Д.В. Гиполипидемическое действие глицина и его производных // Вопросы мед. химии. 1984. - №2. - С. 78-81.

144. Савинов В.А. Гирудотерапия в гастроэнтерологии. — Брянск: Асклепейон, 2002. 51 с.

145. Самойлов А.Н. «Пиявит»: сравнит, оценка эффективности при травме роговицы в эксперименте // Гирудотерапия и гирудофармакотерапия. — 2001. — Т.З. — С. 103-109.

146. Сборник санитарно-гигенических нормативов и методов контроля вредных веществ в объектах окружающей среды / Центр, экол. пробл. -М., 1991.-225 с.

147. Селезнев К.Г. Сравнительный анализ эффективности лекарственных препаратов Пиявит и Супер-пиявит по результатам коинических испытаний // Гирудотерапия и гирудофармакотерапия. 1996. -С.30-43.

148. Сивков И.И., Лебедева H.A. Свободные аминокислоты сыворотки крови некоторые показатели функционального состояния печени у больных с нарушениями кровообращения // Кардиология. 1974. - №1. -С. 43-48.

149. Силкина Н.И. Микряков В.Р. Влияние сублетальных концентраций ионов кадмия на некоторые показатели липидного обмена рыб // Токсикол. вестн. 2006. - №1. - С. 20-24.

150. Синева М.В. Биологические наблюдения над размножением медицинской пиявки // Зоол. журн. 1949. - Т.28,вып.З. - С. 213-224.

151. Синева М.В. Наблюдения над выращиванием медицинских пиявок // Зоол. журн. 1944. - Т.23, вып.6. - С. 293-303.

152. Скальный A.B. Химические элементы в физиологии и экологии человека. М.: Мир, 2004. - 215 с.

153. Скальская И.А. Реакция зооперифитона озер Дарвинского заповедника на ацидификацию. СПб.: Наука, 1994. - С. 170-185.

154. Скурлатов Ю.И., Дука Г.Г., Мизити А. Введение в экологическую химию. М.: Высш. шк., 1994. - 399 с.

155. Слока H.A. Определитель животных Латвийской ССР. Пиявки (Hirudinea). Рига: ЛГУ, 1983. - 63 с.

156. Слоним А.Д. Энергетические основы адаптации организма животных к горным условиям: устойчивость к холоду и гипоксии // Экология горных млекопитающих. Свердловск, 1982. - С. 105.

157. Слотвицкий С.М., Зуев Б.Н. Влияние условий высокогорья Киргизии на гомеостаз свободных аминокислот крови белых крыс // Вопросы анатомии и гистологии: сб. науч. тр. Фрунзе, 1971. - Т.74. - С. 279-284.

158. Степанова Н.Ю. Факторы и критерии оценки экологического риска для устойчивого функционирования Куйбышевского водохранилища: автореф. дис.д-ра биол. наук. Ульяновск, 2008. -40 с.

159. Стероиды, гистамин и серотонин в составе секрета слюнных желез медицинской пиявки / И.П. Баскова и др. // Биом. химия. —2008. -Т.54, вып.2, С. 127-139.

160. Стимулирующее влияние дестабилазы, компонента секрета слюнных желез медицинской пиявки, на рост нейритов чувствительных нейронов в органотипической культуре // Н.И. Чалисова и др. // Цитология.- 1999. Т.41, №1. - С. 48-52.

161. Стояновский Д.Н. Медицинская пиявка. Кровопускание. -Донецк, 2002. 125с.

162. Суджян A.B., Горбунова В.А. Современные тенденции парентерального питания в США // Гематология и трансфузиология. — 1983.- Т.28, №6. С. 58-61.

163. Тарханова А.Э., Ковальчук Л.А. Особенности спектра незаменимых аминокислот плазмы крови у женщин при физиологически протекающей беременности в условиях промышленного города // Вестн. Урал. мед. акад. науки. 2009. - № 2(25) - С.171-172.

164. Тарханова А.Э., Ковальчук Л.А., Прохоров В.Н. Диагностическое аспект определения аминокислот в сыворотке крови беременных при развитии внутриутробной гипоксии плода // Вестн. Урал, мед. акад. науки. 2007. - № 4 (18). - С. 75-78.

165. Тер-Григорян М.А. Некоторые наблюдения над распространением медицинской пиявки в Армении // Зоол. сб. — 1950. Т.7. -С. 122-126.

166. Тимофеев-Ресовский Н.В. Избранные труды: Генетика. Эвоюция. Биосфера / под ред О.Г. Гозенко, В.И. Иванова. М.: Медицина, 1996. - 480 с.

167. Титова Е.А. Биология медицинской пиявки // Гирудотерапия и гирудофармакотерапия. 2002. - Т.4.- С. 12-17.

168. Титова Е.А., Никонов Г.И. Краткие сведения по биологии медицинских пиявок // Гирудотерапия и гирудофармакотерапия. — 2007. — Т.5. С. 207-247.

169. Уголев A.M. Теория адекватного питания и трофология. Л.: Наука, 1991.-272 с.

170. Физическая география материков и океанов: учебное пособие для студ. высш. пед. учеб. заведений / Т.В. Власова и др.. М.: Академия, 2005.- 640 с.

171. Филенко О.Ф., Хоботьев В.Г. Загрязнение металлами // Водн. токсикология. М.: ВИНИТИ, 1976. - Т.З. - С. 110-150.

172. Флеров Б.А. Эколого-физиологические аспекты токсикологии пресноводных животных. Л.: Наука, 1989. - 144 с.

173. Формы соединений тяжелых металлов в почвах Среднего Поволжья / O.A. Самонова и др.. Казань, 1988. - 128 с.

174. Хавезов И., Цалев Д. Атомно-абсорбционный анализ / пер. с болг. Г. А. Шейниной; под ред. С. 3. Яковлевой. Л.: Химия, 1983. - 144с.

175. Химия тяжелых металлов, мышьяка и молибдена в почвах / под ред. Н.Г. Зырина и Л.К. Садовниковой. М.: Изд-во МГУ, 1985. - 208 с.

176. Чалисова Н.И., Князькин И.В., Кветной И.М. Нейроиммуноэндокринные механизмы действия пептидов и аминокислот в тканевых культурах. СПб.: ДЕАН, 2005. - 125с.

177. Чалисова Н.И., Пеннияйнен В.А., Ноздрачёв А.Д. Регулирующее действие аминокислот в органотипической культуре лимфоидных тканей.с различной степенью иммунологической зрелости // Доклады АН 2003. — Т.389, №5. - С.714 - 717.

178. Чалисова Н.И., Пеннияйнен В.А., Хаазе Г. Регулирующая роль некоторых аминокислот при развитии апоптоза в культуре нервной и лимфоидной ткани // Рос. физиолог, журн. им. И.М. Сеченова. 2002. - Т.88, №5.-С. 627-633.

179. Черная Л.В. Сравнительная эколого-физиологическая характеристика представителей гирудофауны Среднего Урала: автореф. дис. . канд. биол. наук. Екатеринбург, 2003. - 24 с.

180. Черная JI.B., Ковальчук Л.А. Свободные аминокислоты пиявок с различной трофической организацией // Вестн. ОГУ. 20086. - № 10. - С. 225-229.

181. Чистякова A.M., Мирошкина В.Н., Рыженков В.Е. Влияние некоторых аминокислот на показатели липидного обмена в эксперименте // Вопр. питания. 1990. - №1. - С. 40-44.

182. Чужекова Т.А., Шатских Е.В., Зимарева Л.Б. О макрозообентосе ручьев г. Жигулевска и его окрестностей // Водные и наземные экосистемы: пробл. и перспективы исследований: материалы Всерос. конф. с междунар. участием. Вологда, 2008. - С. 234-237.

183. Шарманов Т. Ш., Мухамеджанов Э.К. Синтез, транспорт и утилизация аланина (аланин-глюкозный цикл) // Вопросы медицинской химии. 1981. -№ 3. - С. 300-310.

184. Шарова И.Х. Зоология беспозвоночных М.: ВЛАДОС, 2002.592 с.

185. Шварц С.С. Экологические закономерности эволюции. — М.: Наука, 1980.-278 с.

186. Шемякина Е.В., Никольская Е.А., Фридман А.Д. Влияние состава аминокислотных соединений меди на жизнедеятельность гидромикрофлоры // Вопросы физико-химической биологии в ветеринарии: сб. науч. тр. МГАВМиБ им. К.И. Скрябина. М.5 1998. - С. 47-52.

187. Шибкова Д.З., Аклеев A.B. Адаптационно-компенсаторные реакции системы кроветворения при хроническом радиационном воздействии. -М.: РАДЭКОН; Челябинск: ЧГПУ, 2006. 346 с.

188. Шишкина И.Д. Влияние медицинских пиявок на микроорганизмы и на организм человека: автореф. дис. . канд. мед. наук -Рязань, 1953. -24 с.

189. Щеголев Г.Г. Жизнь пресных вод СССР. М.;Л., 1949. - Т.2: Пиявки (Hirudinea). - С. 131-145.

190. Щеголев Г.Г. Наблюдения над многократной откладкой коконов медицинскими пиявками // Зоологич. журн. 1948. - Т.27, №1 - С. 13-16.

191. Щеголев Г.Г. О применении видоизмененного метода Лонера для выкормки медицинских пиявок // Зоологич. журн. 1946. - Т.25, №2. - С. 111-114.

192. Щеголев Г.Г. Федорова М.С. Медицинская пиявка и ее применение. М., 1955. - 67с.

193. Щеголев Г.Г., Щеголева З.А. Пиявки Туркменистана // Тр. Мургаб. гидробиол. станции. 1951. - Т. 1. - С. 77-102.

194. Щербань Э.П. Токсичность ионов некоторых тяжелых металлов для Daphnia magna Strans в зависимости от температуры // Гидробиол. журн. 1977. — Т.13, № 4. - С. 86-91.

195. Эйхлер В. Яды в нашей пище. М.: Мир, 1993. - 189 с.

196. Экологическое нормирование содержания загрязняющих веществ в донных отложениях / Н.Ю. Степанова и др. // Пробл; регион, экологии. 2007. - №4. - С.40-47.

197. Яковлев В.А. Воздействие тяжелых металлов на пресноводный зообентос: 1 бионакопление // Экол. химия. -2002. T.l 1, вып.1. - С. 27-39.

198. Ярошенко В.А., Михайлов С.В., Кустов С.Ю. Об изучении и сохранении медицинской пиявки на территории Краснодарского края: отчет о НИР Кубан. гос. ун-та (заключит.) Краснодар, 2003. - 94 с.

199. Amino acids in earthworms: are earthworms ecosystemivorous / A.D. Pokarzhevskii et al. // Soil Biol. Biochem. 1997. - Vol.29, №3/4. - P. 559-597.

200. Autrum H. Hirudinea // Die Tierwelt Mitteleuropas. Leipzig, 1958. -Vol.1, 7b.-S. 1-30.

201. Azuoma I., Halliwell В., Haey B.M. The antioxidant action of taurine, hypotaurine and their precursors // Biochem. J. 1988. - Vol.256, №1. - P. 251255.

202. Barbul A., Wasserkrug H.L., Seifter E. Immunostimulatory effects of arginine in normal and injured rats // J. Surg. Res. 1980. - Vol.29, №3. - P. 228235.

203. Bazyluk W. Przyczynek do znajomosci fauny pijawek (Hirudinea) Podlasia // Fragm. faun. Mus. Zool. Polonici. 1957. - Vol.6, 6. - S. 129-133.

204. Bender D.A. Amino acid metabolism. New York: Willey&Sons, 1975.-530 p.

205. Bennike S.A. Contribution to the ecology of Danish freshwater leeches (.Hirudinea). Kobenhawn, 1943. -109 p.

206. Bioaccumulation of trace metal in the Antarctic amphipod Paramoera walkeri (Stebbing, 1906): comparion of two-compartment and hyperbolic toxicokinetic models / B. Clason et al. // Aquat. Toxicol. 2003. - Vol.65, №2117. — C. 140.

207. Briggs Le Baron R. Effect of cadmium on the intracellular pool of free amino acids in Mytilus edulis // Bull. Environ. Contam. and Toxicol. 1979. -Vol.22, №6.-P. 838-845.

208. Budzinski A.Z. Interaction of hementin with fibrinogen and fibrin // Fibrinolyses. 1991. - Vol.2. - P. 149-152.

209. Burk R.F., Hill K.E., Motley A.K. Selenoprotein metabolism and function: Evidence for more than one function for selenoprotein P // J. Nutr. -2003.-Vol.133, №5, Supple. 1. — P. 1517-1520.

210. Cairo G., Pietrangelo A. Iron regulatory proteins in pathobiology // Biochem. J. 2000.- Vol.352, №2. - P. 241-250.

211. Chang J.Y. Evidence for the underlying cause of disulfide folding patway // Biochemistry. 2004. - №4. - P. 22-29.

212. Chang Y.C., Kan Y.W. A sensitive new prenatal test for sicklecells anemia // New Engl. J. Med. 1982. - Vol.307. - P. 30-32.

213. Chromosome numbers for three species of medicinal leeches {Hirudo spp.) / S. Utevsky et al. // Syst Parasitol. 2009. - Vol.74. - P. 95-102.

214. Costopulos James I., Stephens Gover C., Wright Stephen H. Uptake of amino acids by marine polychaetes under anoxic conditions // Biol. Bull. — 1979. Vol.157, №3. - P. 434-444.

215. Cousins R.J. Regulatory aspects of zinc metabolism in liver and metabolism in liver and intestine // Nutr. Rev. 1979. - Vol.37, №4. - P. 97-103.

216. Crisp K.M., Klukas K.A., Gilchrist L.S. Distribution and development of dopamine- and octopamine- synthesizing neurons in the medicinal leech // Comp. Neurol. 2002. - №1. - P. 115-129.

217. Dathe H. Beitrag zum Vorkommen von Hirudo medicinalis in Mitteldeutschland // Zool. Anz. 1934. - Vol. 106. - S. 94.

218. Deijen J.B., Orlebeke J.F. Effect of tyrosine on cognitive function and blood pressure under stress // Brain Res. Bull. 1994. - Vol.33, №3. - P. 319-323.

219. Deyl Z., Hyanken J., Hovakova M. Profillings of amino acids in body fluids and tissues by means of liquid chromatography // J. of Chromatography. -1986. Vol.379, № 1. - P. 177-250.

220. Dimitrova C.R., DeGroot K., Myers A.K. Estrogen and homocysteine // Cardiovascular Res. 2002. - Vol.53. - P. 577-588.

221. Diverse molecular data demonstrate that commercially available medicinal leeches are not Hirudo medicinalis / Siddall Mark E. et al. // Proc. R. Soc. B. 2007. - Vol.274. - P. 1481-1487.

222. Eichhorn G.L. Intra metal ions and genetic regulation // Metabolism of trace metal in man / ed. O.M. Rennert., W.Y. Chan. Boca Raton, 1984. - P. 16.

223. Elumalai M., Antunes C., Guilhermino L. Effects of single metals and their mixtures on selected enzymes of Carcinus maenas // Water, Air, and Soil Pollut.-2002.-Vol.141, № 1/4.-C. 273-280.

224. Essential and toxic effects of macro, trace and ultratrace elements in the nutrition of man / M. Anke et al. // Elements and their Compounds in the Environment. -Weinheim: VCH, 2004. Vol.1: General Aspects. - P. 343-367.

225. Fau D. Imbalance through lysine excess and correction by a threonine supplement, as a function of nutrional status // Ann. Nutr. Aliment. 1975. -Vol.29, №4. - P. 321-335.

226. Febe E., Roters F.-J., Koeiping B. Metabolic changes in the medical leech Hirudo medicinalis following feeding // Comp. Biochem. and Physiol. A. -1986. Vol.84, №1. - S. 49-55.

227. Fisher J. E. Nutritional support in the seriously ill patient // Curr. Probl. Surg. 1980. - Vol.17, № 9. - P. 465-532.

228. Frazier John M. Cadmium-binding proteins in the mussel, Mytilus edulis // Environ. Health Perspect. 1986. - Vol.65. - P. 39-43.

229. Fu Y.M., Yu Z.X., Li Y.Q. Specific amino acid dependency regulated invasiveness and viability of androgen-independed prostate cancer cells // Nutr. Cancer. 2003. - Vol.45, No. 1. - P. 60-73.

230. Hambidge K.M., Casey C.E., Krebs N.F. Zinc // Trace Elements in Human and Animals Nutrition, 5 th / ed. Mertz W. New York: Academic Press, 1986.-Vol.2.-P. 1-137.

231. Harper A. E. Some recent development in the study of amino acid metabolism // Proc. Nutr. Soc. 1983. - Vol.42, №3. - P. 437-449.

232. Hecht G. Beiträge zur Verbreitung von Hirudo medicinalis in Deutsch-land // Zool. Anz. 1929. - Vol.85. - S. 105-110.

233. Herter K. Der medicinische Blutegel und seine Verwandten. A. Zeinsen Verlag. Wittenberg; Lutherstadt, 1968. - 199 s.

234. Herter K. Die Ökologie der Hirudineer // Bronn Klassen und Ordnungen des Tierreichs. 1937. - Teil 2. - S. 321-496.

235. Herter K. Die Physiologie der Hirudineen // Bronn Klassen und Ordnungen des Tierreichs. Leipzig, 1936. - Bd.4, Abt.4, Teil 2. - S. 123-319.

236. Herter K. Hirudineen // Egel. Biologie der Tiere Deutschland: — 1932. Vol.35, b.12. - S. 1-158.

237. Hesse E. Über einige faunistische Vorkommen aus dem Leipziger Gebiet // Zool. Anz. 1920. - Vol.51. - S. 258.

238. Huxtable RJ. Physiological action of taurine // Physiol. Rev. 1992. -Vol.72.-P. 101-183.

239. Indergand S., Graf J. Ingested blood contributes to the specificity of the symbiosis of Aeromonas veronii biovar sobria and Hirudo medicinalis, the medicinal leech // Appl. and Environ. Microbiol. 2000. - Vol.66, №11. - P. 4735-4741.

240. Iorgensen N., Kristensen E. Uptake of amino acids by three species of Nereis (Annelidae: Polychaeta). I. Transport kinetics and net uptake from natural concentrations // Mar. Ecol. Pror. Scr. 1980a. - Vol.3, №4. - P. 329-340.

241. Iorgensen N., Kristensen E. Uptake of amino acids by three species of Nereis (Annelidae: Polychaeta). II. Effects of anaerobiosis // Mar. Ecol. Progr. Ser.- 1980b. Vol.3, №4. - P. 341-346.

242. Klemm D.L. Leeches (Annelida: hirudinea of North America) -Washington: Gov. print, off., 1982. 350 p.

243. Laufer A.S., Siddall M.E., Graf J. Characterization of the digestive-tract microbiota of Hirudo orientalis, a European medicinal leech // Applied and Environmental Microbiology. 2008. - № 74. - P. 6151-6154.

244. Lent Charles M., Dickinson Michael H. On the termination of ingestive behaviour by the medicinal leech // J. Exp. Biol. 1987. - Vol.131. - P. 1-15.

245. Lewis T.E., Mc Intonsh A.W. Uptake of sediment-bound lead and Zinc by the freshwater Isoped Asellus communis at three Different pH levels // Arch. Environ. Contam. and Toxicol. 1986. - Vol.15, №5. - P. 495-504.

246. Li J.Y. Sequential changes of free amino acid pool in burned rabbits // ZhonghuaZh. 1991. - Vol.7, №3 - P. 208-211.

247. Lithner G., Holm K., Borg H., Bioconcentration factors for metals in humic waters at different pH in the Ronnskar area (N, Sweden) // Water, Air and Soil Pollut. 1995. - Vol. 85. - P. 785-790.

248. Loeb L.A., Zakour R.A. Metals and genetic miscoding // Nucleic acid- metal ion interactions / ed. T.G. Spiro. New York, 1980. - P. 145-178.

249. Marks D.B. Biochemistry / ed. Williams&Wilkins. Baltimore, 1994.-P. 234-249.

250. Martinez M.J., Giraldez J. Plasma aminogram in critical patients // Nutr. Hosp. 1993. - Vol.8, №2. - P. 79-93.191

251. Molecular basis of gap junctional communication in the CNS of the leech Hirudo medicinalis / I.M. Dykes et al. // Neurol. 2004. - №1 - P. 886894.

252. Moquin-Tandon A. Monographie de la famille des Hirudinees. -Paris, 1846. -448 p.

253. Nielsen F.H. Nickel // Trace Elements in Human and Animal Nutrition, 5th / ed. Mertz W. New York: Academic Press, 1988 - Vol.1. - P. 245273.

254. Nigriotis J.G., Hennesey P.J., Andrassy R.J. The effects of an arginine-free enteral diet on wound healing and immune function in the postsurgical rat // J. Pediatr. Surg. 1991. - Vol.26, №8. - P. 936-941.

255. Nogushi Т., Naito H. Mechanism and requlation of intracellular ptotein degradation // Nutrition, proteins and amino acids / Jap. Sci. Soc. press. -Tokyo: Springer-Uerlag, 1990. -.P.26-27.

256. CTDell S.I., Stephens G.C. Uptake of amino acids by Pareurythoe californica: substrate interaction modifies net influx from the enviroment // Biol. Bull. 1986. - Vol.171, № 3. - P. 682-693.

257. Oberleas D. Mechanism of Zinc Homeostasis // J. Inorg. Biochem. -1996.-Vol.62-P. 231-241.

258. Oehler R., Roth E. Regulative capacity of glutamine // Curr. Opin. Clin. Nutr. Metab. Care. 2003. - Vol.6, No.3. - P. 277-282.

259. Pan Lu-qing, Ren Jia-Yun, Wu Zhong-wang. Влияние тяжелых металлов на активность антиокислительных ферментов в гепатопанкреасе и жабрах краба Eriocheir sinensis II J. Ocean Univ. China. 2004. - Vol.34, №2. -C. 189-194.

260. Pawlowski L.K. Pijawki (Hirudinea). Warszawa, 1936. - 176c. -(Fauna slodkowodna Polski).

261. Peca M.M. O., Lee J.L., Thiele D.J. A delicate balance: Homeostatic control of copper uptake and distribution // J. Nutr. 1999 - Vol.129. - P. 12511260.

262. Petrauskiene L. Water and sediment toxicity assessment by use of behavioural responses of medicinal leeches // Environ. Int. — 2003. Vol.28, №8. -C. 729-736.

263. Prasad A.S. Clinical, biochemical and pharmacological role of zinc // Annu. Rew. Pharm. Toxicol. 1979. - Vol.19. - P. 241-269.

264. Protease inhibitors from European medicinal leech Hirudo medicinalis, structural and biomedical aspects / P. Ascenzi et al. // Mol. Aspect Med. 1995.-Vol.16.-P. 215-313.

265. Quartermann J. Lead // Trace Elements in Human and Animal Nutrition, 5th / ed. Mertz W. New York: Academic Press, 1986.- Vol.2. - P. 281317.

266. Remy P. Sangsues de Yugoslavie // Bull.Soc. Zool. France. 1937. — Vol.62.-P. 140-148.

267. Richards Sylvia K., Arme C. Transintegumentary up take of amino acid by the lumbricid earthworm Eisenia foetida // Comp. Biochem. and Physiol. 1979. Vol.64, № 3. - P. 351-356.

268. Rodriguez M.J., Iscla I.R., Szczupak L. Modulation of mechanosensory responses by motoneurons that regulate skin surface topology in the leech // J. Neurophysiol. 2004. - №5. - P. 2366-2375.

269. Rutt G.P., Wetherley N. S., Osmerod S.J. The macrozoobenthc communities of ocid streams // Freshwater Biol. 1990. - Vol.24, №3. - p. 463480.

270. Sandner H. Badania nad fauna pijawek // Acta zool. et oecol. Univ. lodzoenzis. 1951. - Vol.4. - S. 5-50.

271. Schrauser G.N. The discovery of the essential trace elements: An outline of the history of biological trace elements research // Biochemistry of the ultratrace elements / ed. E. Freiden. New York; London: Plenum Press, 1994. -P. 17-32.

272. Servisi I.A., Marteus D.W. Effects of selected heavy metals on early life of sockeye and pink solmon: Progress Report, № 39 / Intern. Pacific Salmon Fisneries Commission. New Westmulster, B. C. Geneva, 1978. - 20 p.

273. Stein T.P., Settle R.G. Metabolism of nonessential N-labeled amino acid and the measurement of human whole-body ptotein syntesis rates // J. Nutr. — 1986. Vol.116, № 9. - P. 1651-1659.

274. Stumm W., Morgan J.J. Aquatic chemistry. New York: Willey&Sons, 1996. - 1022 p.

275. Trontelj P., Sotler M., Verovnik R. Genetic differentiation between two species of the medicinal leech, Hirudo medicinalis and the neglected H. verbana, based on random-amplified polymorphic DNA // Parasitol Res. 2004. -Vol.94.-P. 118-124.

276. Trueta C., Mendez B., De Miguel F.F. Somatic exocytosis of serotonin mediated by 1 type calcium channels in cultured leech neurons // J. Physiol. -2003. - Vol.547. - P. 405-416.

277. Underwood E.J. Trace Elements in Human and Animal Nutrition: 3-rd Edition. New York; London: Academic Press. - 1977. - 312 p.

278. Van Campenhout K., Bervoets L., Blust R Metallothionein concentrations in natural populations of gudgeon (Gobio gobio): relationship with metal concentrations in tissues and environment // Environ. Toxicol, and Chem. -2003. Vol.22, № 7.-C. 1548-1555.

279. Walsch C.T., Orme-Johnson W.H. Nickel enzymes // Biochem. -1987. Vol.26, № 16 - P. 4901 -4906.

280. Wei Wei, Liu Kewu, Zhao Xinping. Влияние Cu2+ и Ca2+ на три фермента в печени устрицы // Chin. J. Appl. and Environ. Biol. 2004. -Vol.10, №2.-C. 170-173.

281. Wright D. A. Cadmium and calcium interactions in the freshwater amphipod Gammaruspulex И Freshwater Biol. 1980. - Vol. 10. -P. 123-133.

282. Young U.R. Kinetics of human amino acids metabolism: Nutrional implications and some lessons // Amer. J. Clin. Nutr. 1987. - Vol.46, №5. - P. 709-725.

283. Zick K. Zur Frage der Verbreitung des Medizinischen Blutegels (Hirudo medicinalis) in Deutschland // Zool. Anz. 1931. - Vol.96. - S. 328-330.

Информация о работе

Нохрина, Екатерина Сергеевна
кандидата биологических наук
Екатеринбург, 2010
ВАК 03.02.08

Диссертация

Эколого-физиологические особенности медицинской пиявки (Hirudo medicinalis L.) из природных популяций и выращенной на биофабрике - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Эколого-физиологические особенности медицинской пиявки (Hirudo medicinalis L.) из природных популяций и выращенной на биофабрике - тема автореферата по биологии, скачайте бесплатно автореферат диссертации

Похожие работы