Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Экологические факторы формирования микробиоты и способ её регулирования в продуктах медоносных пчёл

ВАК РФ 03.02.08, Экология (по отраслям)

Автореферат диссертации по теме "Экологические факторы формирования микробиоты и способ её регулирования в продуктах медоносных пчёл"

На правах рукописи

ЧЕКРЫГА Галина Петровна

ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ ФОРМИРОВАНИЯ МИКРОБИОТЫ И СПОСОБ ЕЁ РЕГУЛИРОВАНИЯ В ПРОДУКТАХ МЕДОНОСНЫХ ПЧЁЛ

03.02.08 - экология (биология)

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени доктора биологических наук

Краснообск-2014

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном научном учреждении «Сибирский научно-исследовательский и технологический институт переработки сельскохозяйственной продукции»

Научный консультант: доктор биологических наук, профессор,

член-корреспондент Россельхозакадеми и Мотовилов Константин Яковлевич

Официальные оппоненты: Маннапов Альфир Габдулловнч

доктор биологических наук, профессор, ФГБОУ ВПО «Российский государственный аграрный университет - МСХА имени К.А. Тимирязева», зав. кафедрой аквакультуры и пчеловодства

Теплякова Тамара Владимировна

доктор биологических наук, профессор, ФБУН «Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор», зав. лабораторией микологии

Гродницкая Ирина Дмитриевна

доктор биологических наук, доцент, ФГБУН «Институт леса им. В.Н. Сукачева» СО РАН, старший научный сотрудник лаборатории микробиологии и экологической биотехнологии

Ведущая организация: ФГБНУ «Красноярский научно-

исследовательский институт животноводства»

Защита состоится «23» апреля 2015 г. в 09°° часов на заседании диссертационного совета Д 220.037.04 при ФГБОУ ВПО "Красноярский государственный аграрный университет" по адресу: 660049 г. Красноярск, пр. Мира, 90, тел/факс: 8(391) 227-36-09, e-mail: dissovet@kgau.ru

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Красноярский государственный аграрный университет» и на сайте http: // www.kgau.ru

Автореферат разослан «_» января 2015 г.

Учёный секретарь ■■■ч

диссертационного совета ■Ъ&г Г.А. Демиденко

; |, 7 ; i Л 1' ! . ' l i ' I Н А Я

Актуальность работы. В настоящее время появилось большое число пасек, расположенных в экологически неблагополучных районах, получающих продукцию с нарушением гигиенических требований. В продукты питания растительного происхождения, к которым частично относятся и продукты пчёл, опасные загрязнители могут поступать из окружающей среды.

Имеются многочисленные сведения, что готовые продукты пчёл и биологически активные добавки, в которых они используются, могут быть загрязнены патогенными микроорганизмами, в том числе токсинообразующими плесневыми грибами и дрожжами (Полтев и др., 1969; Frisvad, 2006; Чекрыга, 2006, 2011; Kac&nidva et al., 2011; Ayansola, 2012). Вопросы, касающиеся контаминации микроскопическими грибами пищевых продуктов, ранее считавшихся безопасными, к которым относили и продукты пчёл, мало изучены. Недостаточно выяснено распространение плесневых грибов в различных регионах Сибири, мало изучен состав микробиоты растений и продуктов пчеловодства, получаемых не только в экологически благополучных регионах, но и с повышенным техногенным воздействием.

Экология, определяемая природно-климатическими особенностями мест расположения пасек юга Западной Сибири: дождливая погода, сопровождающаяся высокой влажностью, невысокие летние температуры, расположение пасек в низинных местах с высоким травостоем - способствуют увеличению в окружающей среде спор плесневых грибов и, следовательно, загрязнению ими продуктов медоносных пчёл. Контаминация плесневыми грибами пчелопродуктов в трофической цепи «почва - вода - растения -пыльца, нектар - пчёлы - продукты пчёл» может происходить на любом этапе.

Сложность состоит в том, что обсеменённость этих продуктов указанными микроорганизмами, за исключением пыльцевой обножки, не нормируется НД (Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов, 2002).

Цель работы - комплексное изучение экологических факторов влияющих на формирования микробиоты продуктов медоносных пчёл и разработка способа её регулирования.

Задачи исследований:

1. Изучить возможность оценки нектаро-пыльценосных сообществ растений по пыльцевой обножке, собранной медоносной пчелой.

2. Установить влияние вида продукта, района сбора, ботанического происхождения и погодных условий года сбора на количественные и качественные характеристики микробиоты продуктов медоносных пчёл.

3. Изучить закономерности распределения микромицетов в цепочке «вегетативные органы растений - генеративные органы растений -пыльцевая обножка медоносных пчёл».

4. Выявить влияние сопутствующих микроорганизмов (бактерий рода Bacillus) на микромицеты пчелопродуктов.

5. Изучить видовое разнообразие микобиоты продуктов медоносных пчёл. Дать санитарно-гигиеническую оценку микроскопических грибов, выделенных с продуктов медоносных пчёл.

6. Разработать способ регулирования микробиоты продуктов медоносных пчёл, обеспечивающий микробиологическую безопасность и сохранность нутриентов в них.

Научная гипотеза работы заключается в установлении закономерностей между абиотическими и биотическими факторами и их влияние на формирование микробиоты продуктов медоносных пчёл.

Научная новизна работы. Обоснована диагностическая ценность пыльцевой обножки для оценки нектаро-пыльценосных сообществ растений. Апробирован способ определения сообществ нектаро-пыльценосных растений по пыльцевой обножке, собранной Apis mellifera, который позволяет объективно оценить сообщества медоносных растений в различных местностях и сезонах года, что упрощает получение информации без дополнительных затрат при минимальном вмешательстве человека.

Установлено, что в экологической оценке микробиоты продуктов медоносных пчёл определяющее значение имеют район (природно-климатическая зона), год сбора (температура и увлажненность), ботаническое происхождение, а также вид продукта.

Установлены значимые связи дифференциации микроорганизмов в системе «вегетативные - генеративные органы растений - пыльцевая обножка» для дрожжей и бактерий рода Bacillus.

Впервые изучена структура и видовой состав микобиоты продуктов медоносных пчёл, полученных в условиях Западной Сибири. Выделено и идентифицировано 141 вид микромицетов. Микобиота продуктов медоносных пчёл представлена видами почвенной (рода Aspergillus, Pénicillium, Trichoderma, Mucor, Rhizopus, Fusarium, Cladosporium) и эпифитной (рода Alternaría, Peyronellaea, Stemphylium, Candida, Rhodotorula) экологических групп, в том числе токсигенными видами (Aspergillus flavus Link, A. nidulans (Eidam) G. Winter, A. versicolor (Vuill.) Tirab., Pénicillium expansum Link, P. cyclopium Westling, P. lanosogriseum Thom, Alternaría alternata (Fr.) Keissl., Fusarium solani (Mart.) Sacc. и др.).

Получены впервые научные данные по способу обработки цветочной пыльцы (патент № 2453135) и трутнёвого гомогената (патент № 25238850) ИК-излучением, установлены технологические параметры, обеспечивающие сохранность биологически активных веществ и снижение уровня контаминации микроорганизмами.

Теоретическая и практическая значимость работы. При

характеристике естественных сообществ нектаро-пыльценосных растений обоснована диагностическая ценность пыльцевой обножки. Разработан и апробирован доступный для практиков способ установления состава сообществ

пыльценосных и медоносных растений по пыльцевой обножке, собранной медоносной пчелой.

Получены научные данные по микробиоте пчелопродуктов юга Западной Сибири. Научно обосновано влияние вида продукта, района, года сбора, ботанического происхождения на контаминацию микроорганизмами.

Результаты исследований могут служить основой для разработки концептуальной модели получения микробиологически безопасных продуктов медоносных пчёл юга Западной Сибири и нормативных документов, с учетом естественного уровня микробиоты продуктов медоносных пчёл, регламентации по контаминации плесневыми грибами и дрожжами с обязательным нормированием содержания микотоксинов.

Микробная колонизация любого биологического объекта начинается с момента взаимодействия его с окружающей средой и пчёлы в этом плане не исключение, поэтому полученные данные могут быть основой для прогнозирования и разработки экологически безопасных приёмов сохранения пчёл.

Приведённые морфологические характеристики (фотографии) идентифицированных микромицетов, выделенных с продуктов медоносных пчёл, могут быть использованы как определитель для дальнейших исследований.

Определена диагностическая значимость микобиоты пыльцевой обножки как индикатора для экологической оценки районов производства.

Разработан способ регулирования микробиоты пчелопродуктов (пыльцевая обножка, трутнёвый гомогенат), используемых человеком для восполнения необходимых нутриентов. Разработаны методические пособия для практиков по использованию ИК- излучения для консервирования биологически активных продуктов медоносных пчёл.

Защищаемые положения:

1. Способ определения нектаро-пыльценосных растений по пыльцевой обножке, собранной медоносной пчелой.

2. Закономерности распределения микромицетов в цепочке «вегетативные органы растений - генеративные органы растений - пыльцевая обножка медоносных пчёл».

3. Влияние экологических факторов (района, года сбора, ботанического происхождения, вида продукта) на уровень микробной загрязнённости пчелопродуктов.

5. Видовое разнообразие микобиоты продуктов медоносных пчёл юга Западной Сибири.

6. Способ регулирования микробиоты продуктов медоносных пчёл для обеспечения безопасности их использования.

Публикация результатов исследования. Результаты исследований опубликованы в 74 статьях, из них 27 в журналах, рекомендованных ВАК для публикации основных материалов диссертации: «Сельскохозяйственная

биология», «Пчеловодство», «Микология и фитопатология», «Вестник Российской академии наук», «Иммунология, аллергология, инфектология», «Сибирский экологический журнал», «Сибирский вестник сельскохозяйственной науки», «Вестник КрасГАУ», в зарубежных изданиях «Italian Science Review», в материалах конгрессов, конференций, двух методических пособиях и двух патентах на изобретение. По теме диссертации опубликованы монографии «Улучшение качества пшеничной муки и пчелиной обножки инфракрасной обработкой» и «Характеристика основных медоносов Западной Сибири по пыльцевой обножке, собранной Apis mellifera».

Структура и объём диссертации. Диссертация изложена на 404 листах машинописного текста, содержит 48 таблиц, 141 рисунок и приложение. Библиографический список включает 404 наименования, в том числе 78 на иностранных языках.

Личный вклад автора. Представленная работа является обобщением научных исследований. Личное участие автора выразилось в анализе информационного материала, постановке проблемы, определении цели и задач исследований, получении экспериментального материала, его обработке и систематизации, анализе и интерпретации полученных результатов. Благодарность. Автор выражает благодарность научному консультанту член-корреспонденту, доктору биологических наук, профессору К.Я. Мотовилову и коллективу ФГБНУ Сибирского научно-исследовательского и технологического института переработки сельскохозяйственной продукции. Особую признательность автор выражает доктору биологических наук, профессору Л.А. Осинцевой за помощь в проведении экспериментальных работ и обработке материала.

СОДЕРЖАНИЕ И ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ РАБОТЫ

Во введении обоснована актуальность расширения знаний о микробиологической загрязненности продуктов медоносных пчёл. Это вызвано отсутствием информации о сообществах нектаро-пыльценосной флоры, экологии микроорганизмов продуктов, производимых медоносными пчёлами, о факторах, определяющих видовое разнообразие микробиоты и, в частности, микобиоты и их роли в формировании качества, безопасности и возможного целевого использования продуктов пчёл. Вопрос видового разнообразия микобиоты в продуктах пчёл связан с решением проблемы выявления грибов, устойчивых к воздействию бактерицидных факторов, которыми обладают продукты пчёл, с оценкой их санитарно-гигиенической роли в составе продуктов питания и биологически активных добавок, созданных на основе продуктов медоносных пчёл.

Глава 1. Формирование микробиоты продуктов медоносных пчёл.

Обзор литературы

Первая глава представлена аналитическим обзором современной отечественной и зарубежной литературы, посвящённой изучаемой проблеме. Описаны условия формирования фитоценозов, определяющие производство продуктов медоносными пчёлами. Показано влияние внешней среды на формирование характера микробиоты. Рассмотрены вопросы распространения и экологии микромицетов, опасность их для медоносных пчёл, роль микобиоты как индикатора состояния окружающей среды. Описаны методы, используемые для сохранности биологически активных продуктов медоносных пчёл.

Анализ литературных данных в этой области свидетельствует о том, что проблемная ситуация заключается в недостаточности знаний механизма и степени контаминации микроорганизмами продуктов медоносных пчёл, а также в отсутствии эффективных способов снижения загрязнённости конечной продукции. Комплексное изучение формирования микробиоты продуктов медоносных пчёл проведено впервые.

Анализ патентной и научно-технической информации в области снижения микробной загрязнённости пчелопродуктов показал, что данная проблема актуальна и перспективна.

Глава 2. Материалы и методы исследований

Решение поставленных задач осуществлялось в соответствии со структурой проведения исследований (рисунок 1).

Районы проведения натурных исследовании

Отбор образцов проводили с июня по август 2006-2012 гг. на пасеках, расположенных в Залесовском районе Алтайского края (таёжная зона, зона центральной лесостепи), Коченёвском районе Новосибирской области (северная лесостепь) и Первомайском районе Новосибирска (центральная лесостепь). Выбор районов сбора был обусловлен экологическими особенностями мест расположения пасек.

Объекты и районы исследований представлены в таблице 1.

Таблица 1 - Объекты и районы исследований

Эколого-трофические группы микроорганизмов Тип и название биотопа Район исследования

Природные биогеоценозы

Эпифитные и эдафитные бактерии Эпифитые и эдафитные микромицеты Растения нектаро-пыльценосной флоры Воздух припасечных участков Продукты медоносных пчел: пыльцевая обножка, перга, прополис, мед 1. Залесовский район Алтайского края (таежная зона центральной лесостепи) 2. Коченевский район Новосибирской области (северная лесостепь) 3. Первомайский район (Новосибирск) Новосибирской области (центральная лесостепь)

Объекты исследований

Сообщества нектаро-пылъценосных растений Микробиота растений Микобиота растений Микробиота продуктов медоносных ПЧЁЛ Микобиота продуктов медоносных ПЧЁЛ

Изучаемые показатели

П алинологические

Микробиологической безопасности

Цветовой

Морфологический

КМАФАнМ

Плесневые грибы

Дрожжи

БГКП

Бактерии рода Bacillus

Выводы и предложения

Рисунок 1 - Общая структура исследований

Экспериментальные исследования проводили в лицензированной (Лицензия № 54 HC. 11.0001J1. 000054.06.09) лаборатории микологического и бактериологического анализа пищевых продуктов ФГБНУ Сибирского научно-исследовательского и технологического института переработки сельскохозяйственной продукции.

Обсеменённость продуктов медоносных пчёл микроорганизмами определяли по показателям КМАФАнМ (ГОСТ 10444.15-94), БГКП (ГОСТ Р 52816-2007), содержанию условно-патогенных бактерий рода Bacillus (ГОСТ 10444.8-88) и микроорганизмов порчи - плесневые грибы и дрожжи (ГОСТ 10444.12-88).

Для выделения грибов использовали стандартный метод глубинного посева в плотные питательные среды Сабуро с левомецитином, Чапека и МПА.

Для анализа микроморфологии изоляты культивировали на агаре Чапека при температуре 24±1°С. На 2, 5, 10, 14-е сутки органы спороношения просматривали под микроскопом (*100) непосредственно в чашках Петри и на стекле (*400). В работе использовали фазово-контрастную микроскопию (микроскоп Primo Star (ZEISS) и окулярный винтовой микрометр МОВ-1-16).

Видовую идентификацию (морфологические особенности: диаметр колонии, текстура, цвет, морфология гифа и репродуктивных структур) проводили по определителям грибов (Thom et al., 1945; Râper et al., 1949; Domsch et al., 1970; Гребенюк, 1971; Кузнецова, 1971; Пидопличко, 1972; Gerlach, 1982; Билай и др., 1988; Мельник, 1997, 2000; Сатгон и др., 2001; Andreoni et al., 2004; Александрова, 2006)). В некоторых случаях использовали электронные интерактивные «ключи» и информационные сайты Интернет-ресурсов: http: biodiversity.bio.uno..endu/~fungi/; и др. Ссылки на систематическое положение видов грибов даны по Каталогу 2010 г. (Species 2000 & IT IS Catalogue of Life: 2010). Латинские названия вида и сокращения авторов даны в соответствии с Index Fungorum http: www.indexftingorum.org/Names/Names.asp.

Основные параметры характеристики микобиоты. Общую численность микромицетов выражали в колониеобразующих единицах (КОЕ) на 1 г исследуемого субстрата. Для определения разнообразия популяций, применяемого в качестве критерия, проводили идентификацию выделенных изолятов. Морфо-культуралъные признаки колоний (MKT) позволили проанализировать выборки грибов и получить данные для статистической обработки. Обилие представителей вида (видовое богатство) определяли отношением содержания изолятов одного вида к общему числу изолятов (%). Анализ популяционной изменчивости грибных ценозов проводили по Л.А. Животовскому (1991).

Видовую структуру микобиоты пчелопродуктов характеризовали по частоте встречаемости представителей выделенных видов и по частоте их доминирования. Частоту встречаемости определяли в процентах по доле образцов, в которых обнаружен данный вид, от общего числа проанализированных образцов. Частоту доминирования оценивали в процентах по доле образцов, в которых данный вид превышал 30% общей численности микромицетов, от общей численности проанализированных образцов.

С целью выявления типичных видов микобиоты продуктов пчёл использовали показатель встречаемости вида, используемый в общей экологии. Типичными считали виды, встречаемость которых превышала 30%, а случайными - встречаемость которых ниже 10%.

Для оценки постоянства встречаемости микромицетов использовали показатель временной встречаемости вида, который определяли как отношение числа моментов времени (даты сбора), когда вид обнаружен, к общему числу моментов отбора образцов (все даты сбора).

Анализ величин обоих показателей встречаемости позволил выявить в микобиоте продуктов пчёл типичные виды микромицетов, которые дифференцировали на доминантные, «частые редкие». Виды с пространственной и временной встречаемостью более 60% относили к доминантным, более 30% - к частым, виды с низкой пространственной, но высокой временной встречаемостью, - к редким, но типичным, виды микромицетов с низкой пространственной и временной встречаемостью (<30%) - к случайным.

В целом исследовано более 500 образцов (нектаро-пыльценосные растения, воздух, продукты медоносных пчёл).

В основном исследования проведены в вегетационный период (весна, лето) и в межгодовой динамике.

Часть результатов получена в лабораторных экспериментах по воздействию ИК- излучения, воздействию бактерий рода Bacillus на микромицеты и оценке токсического действия экстрактов на простейшие. Санитарно-гигиеническое значение выделенных штаммов оценивали с помощью выявления токсического действия их водных растворов и водных растворов ацетоновых экстрактов на выживаемость культуры простейших Stylonychia mytilus. В качестве исходной методики использован ГОСТ Р 523372005 «Методы определения общей токсичности». Микробиологические анализы проведены в 3-5 повторностях.

Экспериментальные данные анализировали с использованием методов вариационной статистики (Лакин, 1980). Обрабатывали экспериментальные данные с использованием пакета прикладных программ Snedecor V4. Значимости влияния факторов оценивали методом дисперсионного анализа по Фишеру и методом регрессионного анализа. Анализ популяционной изменчивости грибных ценозов проводили по Л.А. Животовскому (1991).

Глава 3. Изучение сообществ нектаро-пылыденосных растений

Сообщества нектаро-пыльценосных растений характеризовали по доминирующим видам, условиям обитания, функциональным особенностям. Наши исследования были направлены на изучение сообщества как пространственного нахождения, так и функционального назначения растительности, имеющих свою специфику. Дальность лёта медоносной пчелы в радиусе 2,5-4,0 км, а иногда и больше при сборе нектара и пыльцы, охватывает большую территорию (Олифир, 1973). Принесённая в улей медоносной пчелой пыльцевая обножка и отобранная при помощи пыльцеуловителя обеспечила упрощённое получение информации о сообществе нектаро-пыльценосных растений без лишних затрат, при минимальном вмешательстве человека.

Для определения сообществ нектаро-пыльценосных растений использовали способ, суть которого заключалась в изучении цветового (основной признак) и палинологического (подтверждающий) анализов пыльцевой обножки (рисунок 2).

Определение фитоисноэов неютро- пыльисносной

направленности *

Определение микро- и микоценспоя определенной местности по пыльцевой обножке, собранной медоносной пчелой

Рисунок 2 - Схема установления ботанического происхождения пыльцевой обножки

Кроме того использование цвета пыльцевой обножки как диагностического признака в экологической оценке и сравнении сообществ растений нектаро-пыльценосной направленности, позволило определить индексы сходства этих сообществ в один и тот же период разных природно-климатических зон (таблица 2).

Таблица 2 - Индекс сходства (К) сообществ растений по пыльцевой обножке, собранной на пасеках в одно и то же время в разных природно-климатических зонах

Время и место сбора Центральная лесостепная зона Северная лесостепная зона

16.07. 17.07. 18.07. 16.07. 17.07. 18.07.

Центральная лесостепная зона 16.07. X

17.07. 0,31 X

18.07. 0,47 0,29 X

Северная лесостепная зона 16.07. 0,12 0,06 0,12 X

17.07. 0,17 0,05 0,16 0,44 X

18.07. 0,17 0,05 0,16 0,44 0,4 X

Индекс сходства сообществ нектаро-пыльценосных растений (К) разных природно-климатических зон был низким и варьировал 0,05 до 0,16, в то время как в одной природно-климатической зоне - высоким (центральная лесостепь) К= 0,47, (северная лесостепь) К= 0,44.

Таким образом, при характеристике естественных сообществ нектаро-пыльценосных растений обоснована диагностическая ценность пыльцевой обножки. Разработан и апробирован доступный для практиков способ установления состава сообществ нектаро-пыльценосных растений по

пыльцевой обножке, собранной медоносной пчелой. На основе проведённых исследований составлен атлас 50 основных нектаро-пыльценосных растений Западной Сибири. В дальнейшем наши исследования опирались на данный способ, который позволил объективно оценивать не только фитоценозы нектаро- пыльценосной флоры пасек, но и влияние их ботанического происхождения на формирование микробиоты продуктов медоносных пчёл.

Глава 4. Формирование микробиоты продуктов медоносных пчёл Западной Сибири

При изучении факторов влияющих на микробную загрязненность продуктов медоносных пчёл установлено, что максимальная доля влияния (50,0%) на бактериальную флору выявлена для фактора «вид продукта» (таблица 3).

Таблица 3 - Влияние района сбора и вида продукта на его контаминацию бактериальной флорой__

Вид продукта (А) Среднее количество МАФАнМ по районам сбора (В), КОЕ/г

КоченСвский район. Новосибирская область Новосибирск, Новосибирская область Залесовский, Алтайский край

Обножке ЬЗхЮ1 4,7x10' 3,0x10"

Перга 8,25x10' 2,5*10' 2,5*10'

мед 5,0*10 0,5*10 1,2*10"

Прополис 1,6* 10* 1,2x10' 2,0*10

П А - 54,7 (Рт= 4,4); В - 13,3 (Рт= 5,2); АВ - 11,4 <ТГ= 3,3); частные средние - 23,5, при р=0,01

Влияние фактора, % А - 50,0; В - 8,7; АВ - 29,0

НСРо.5 А - 11,6; В - 13,5; АВ -23; частные средние - 23

Наибольшая величина КМАФАнМ отмечена для пыльцевой обножки (от 3,0*10* до 1,3*105 КОЕ/г в зависимости от района сбора). На один - два порядка ниже изучаемый показатель для перги (от 2,5*103 до 8,25* 103 КОЕ/г). Наименьшая контаминация микроорганизмами характерна для мёда и прополиса.

Район сбора определял 8,7% вариации изучаемого признака и оказывал достоверное > влияние на величину КМАФАнМ. Контаминация микроорганизмами обножки и перги Коченёвского района была достоверно выше, чем собранных в Новосибирском и Залесовском районах. Следовательно, использование показателя общей микробной обсеменённости обножки позволяет дифференцировать район её сбора.

Множественные сравнения средних показателей КМАФАнМ для продуктов пчёл разных районов сбора подтверждают вывод о том, что контаминация пыльцевой обножки микроорганизмами достоверно выше, чем других пчелопродуктов, а наиболее высокая микробная обсеменённость у продуктов пчеловодства, собранных в Коченёвском районе (таблицы 4,5).

Таблица 4 - Множественные сравнения по показателю КМАФАнМ

разных видов прод уктов медоносных пчёл

Виды продуктов Разница средних КМАФАнМ КОЕ/г Достоверность разницы средних:** достоверна при Р=0,01; - не достоверна

По Стьюденту (НСР5%=13,46) По Шефе (НСР5./=19,47) По Тькжи (НСР5./1=17,84)

Мед и прополис 0,04 - -

Мёд и перга 4,37 - - -

Мед и обножка 70,79 •• ** ••

Прополис и перга 4,33 - - _

Прополис и обножка 70,75 •• фф

Обножка и перга 66,42 ** фф фф

Таблица 5 - Множественные сравнения по показателю КМАФАнМ ]азных районов сбора продуктов медоносных пчёл_

Районы сбора Разница средних КМАФАнМ КОЕ/г Достоверность разницы средних:** достоверна при Р=0,01; - не достоверна

По Стьюденту (НСР5./.=! 1.6) По Шефе (НСР5,.=14,6) По Тьюки (НСР5./.=14,0)

Новосибирский и Залесовский 4,19 - - -

Новосибирский и Коченевский 27,5 •• •• ••

Коченввский и Залесовский 23.3 *« •• **

Изучение уровня контаминации продуктов пчёл плесневыми грибами и дрожжами показало, что их загрязнённость достоверно различается в сборах из Коченёвского и Залесовского районов, но в целом влияние фактора «район сбора» не существенно (/ф < /ч) и определяет 1,8% вариации изучаемого признака (таблица 6).

Таблица 6 - Влияние вида продукта, места и года его сбора на показатель «плесневые грибы»_

Год сбора (С) Вид продукта (А) Среднее количество плесневых грибов и дрожжей по районам сбора (В), КОЕ/гх 102

Залесовский, Алтайский край Коченевский район Новосибирская область Новосибирск Новосибирская область

2006 Обножка 28,7 8.9 31,1

2007 35,0 138,0 49,8

2006 Перга 3,6 2.7 1.9

2007 7,5 8,2 1.9

2006 Прополис 0.5 0,5 5,3

2007 15.3 7,6 0,8

2006 мед 4.2 0,2 0.1

2007 1.0 1,1 0.2

А - 21,7; В - 2,3; С- 13,5; АС- 6,3; АВ - 5.9; ВС -4.6; АВС- 5.2; при р=0,01

Влияние фактора, % А - 26,0; В -1,8; С - 5,4; АС - 7.6; АВ - 14,2; ВС- 3,6; АВС- 12,5

НСРо.5 А - 13,1; В - 11,3; С -9,2

Год сбора (С) оказывал достоверное влияние (р=0,01) на численность плесневых грибов и составил 5,4% вариации изучаемого признака.

Существенное значение в загрязнённости микромицетами имеет вид продукта, доля влияния этого фактора составила 26%. По степени обсеменённости спорами плесеней и дрожжей пыльцевая обножка превосходила все другие изученные продукты медоносных пчёл.

Оценка взаимодействия изучаемых факторов показала, что влияние вида продукта, места и года сбора носит аддитивный характер. Доля влияния факторов на численность грибов составила 12,5%.

Анализ видового сходства комплексов микромицетов по виду продукта и по районам сбора показал достоверно высокий Щ < )?) (>=0,7) показатель сходства только между комплексами микромицетов прополиса, собранного на пасеках Залесовского района (Алтайский край) и Новосибирска (Новосибирская область) (таблица 7).

Таблица 7 - Сходство комплексов микромицетов продуктов медоносных пчёл по районам сбора___

Район сбора Пыльцевая обножка мед

Критерий идентичности, и Г/ /« = 45.6> Критерий идентичности, М«)?т= 26,12;

Коченвв-ский Залесовский Новосибирск КоченСв-ский Залесовский Новосибирск

Коченевский ]/- 462,4 338,4 1/- 47,3 14.1

Залесовский 0,12±0,01 1/- 448,5 0,2±0,07 1/- 184

Новосибирск 0,3±0,03 0,5±0,03 V- 0,1±0,07 0,01±0,в 1 /-

Перга Прополис

Критерий идентичности, М ((Х* /* = 44.32) Критерий идентичности, М ((*> 1% = 32,0)

КоченСвский М- 102,2 106,4 V- 226,3 79,7

Залесовский 0,2*0,04 1/- 106,9 0,2±0,05 1 /- 193

Новосибирск 0,4±0,05 0,06±0,03 1/- 0,3±0,01 0,7±0,05 1/-

Установлены достоверные различия видового представительства микромицетов продуктов медоносных пчёл по годам сбора (2006, 2007 гг.) одного района, за исключением мёда (2006 г.), показатель сходства которого с прополисом (2006 г.) был достоверно (М < х2) высоким (г=0,7) (таблица 8). Выявлено существенное, но невысокое (от /=0,01 до г=0,4) сходство лишь у 35,7% сравниваемых микоценозов.

Таблица 8 - Сходство комплексов микромицетов продуктов медоносных пчёл по годам (Коченёвский район Новосибирской области)

л Критерий идентичности. Id ((/ т = 48,28)

о С Вид продукте, год сбора Обножка, 2007 Обножка, 2006 Перга, 2006 Перга, 2007 Мёд, 2006 Мёд, 2007 Прополис, 2006 Прополис, 2007

Обножка, 2007 1/- 164,2 65,2 91,4 55,2 4,9 376,0 172,7

Обножка, 2006 0,2±0,02 V- 113,5 49,1 32,18 4,1 133,2 57,8

Перга,2006 0,7±0,02 0,3±0,04 1/- 81.1 55,5 3,9 280,8 111,9

Б Перга.2007 0,2±0,04 0,5±0,05 0,4±0,02 V- 37,3 2.9 103,4 74,8

+1 Мёд, 2006 0,1±0,05 0,4±0,06 0,2±0,05 0,1±0,05 1/- 3,9 22,8 49.8

Мвд. 2007 0,1±0,03 0310,05 0,01±0.0 0,4±0,08 0Д±0,1 1/- 5.4 3.9

Прополис, 2006 0,2±0,008 0,5±0,05 0,1±0,05 0.03±0,01 0,7±0,08 0,07±0,03 1/- 175,6

Прополис, 2007 0,1 ±0,02 0,6±0,05 0,2±0,04 0,1 ±0,06 0,1 ±0,05 0,01±0,0 0,2±0,06 1/-

Анализ попарного сходства комплексов микромицетов пчелопродуктов разных годов сбора показал, что критерий идентичности превышал табличное X* для 1% уровня значимости, что свидетельствует о достоверных различиях исследуемых комплексов (таблицы 9 и 10).

Таблица 9 - Сходство комплексов микромицетов по виду продукта (пыльцевая обножка) (2007-2010 гг.)__

Год Новосибирск Новосибирская область Залесовский районн Алтайский край

1 сбора Критерий идентичности, U ((/,% = 63.74) Критерий идентичности. Id (()?,%= 58.67)

о С 2007 2008 2009 2010 2007 2008 2009 2010

2007 1 /- 135,6 102,2 180,6 1/- 796,1 101,9 130,9

Е +1 2008 0,2±0,02 1/- 178,8 382,0 0,1 ±0,02 I/- 815,4 600,8

2009 0,09±0,03 0,03±0,01 1/- 171,1 0,09±0,02 0,2±0,02 1/- 964,4

2010 0,08±0,02 0,03±0,009 0,03±0,01 1/- 0,8±0,1 0,02±0,007 0,2±0,02 1/-

Таблица 10 - Сходство комплексов микромицетов по виду продукта (перга), 2007-2010 годов сбора (Новосибирск Новосибирская область)_

Показатель сходства Критерий идентичности, Id //%= 49.59)

Тол сбора 2007 2008 2009 2010

г + тг 2007 1/- 113,1 103,9 55,29

2008 0,1 ±0,03 1/- 97,64 61,9

2009 0,2±0,03 0,2±0,03 1/- 52,6

2010 0,3±0,05 0,2±0,04 0,4±0,07 1/-

В составе микобиоты медов разных районов и годов сбора не отмечено достоверного сходства (Id > х ; />=0.01), которое можно объяснить специфичностью видового состава грибов родов Pénicillium и Aspergillus.

Установили, что на степень загрязнения микроорганизмами пыльцевой обножки оказывало влияние её ботаническое происхождение. Наибольшую контаминацию микроорганизмами выявили для пыльцевой обножки, состоящей из 20 видов пыльцевых зёрен. Следующей по микробной загрязнённости была обножка, состоящая из пыльцы 13 видов растений (таблица 12).

Таблица 12 - Влияние погодных условий (ГТК) и полифлёрности пыльцевой обножки на загрязненность микроорганизмами_

Район сбора Полифлёрность ГТК за период КМАФАнМ Плесневые Соотношение

обножки формирования грибы и бактерии

пыльценосной дрожжи грибы

флоры

Новосибирская область 4 0,3 0,5 хЮ' 2,2x10 2: 1

20 0,5 3,3x10' 1,01x10' 3 : 1

7 0,7 2,4x1 0,4x10 60 : 1

8 1,2 1,5x10- 7,4x10 20 : 1

6 0,7 7,9x102 3,1x10 25 : 1

13 0,4 1,7x103 6,1x10" 3 : 1

Алтайский край 8 0,8 в.^Ю2 2,4x10 34 : 1

8 1,2 7,0x10" 1,6x10 4 : 1

ГТК - гидротермический коэффициент

Достоверное на порядок снижение (до 0,5x102 КОЕ/г) и возрастание (от 1,7* 103 до 3,3* 103 КОЕ/г) отмечено соответственно в образцах с низкой (4 вида) и высокой (13 и 20 видов) полифлёрностью. Обножка, состоящая из 6 и 8 видов пыльцевых зёрен, не оказывала существенного влияния на показатель КМАФАнМ, который изменялся от 2,4*102 до 8,1 *102 КОЕ/г.

Анализ погодных условий в период производства пыльцевой обножки показывал, что в засушливых условиях (ГТК от 0,3 до 0,5) преобладание бактерий в микробиоте обножки было незначительным - соотношение бактерии : грибы (2 : 1 - 3 : 1) соответственно, что свидетельствует о недостатке влаги для развития бактериальной флоры и об усиленном развитии эпифитных видов микромицетов семейства Оета^асеае. В условиях устойчивого увлажнения (ГТК от 0,7 до 0,8) соотношение изменялось от 25: 1 до 60 : 1, так как при дождях происходит значительное смывание микромицетов с растений, а повышение влажности способствует развитию бактерий. Следовательно, формирование микробиоты пыльцевой обножки зависит от теплообеспеченности и увлажнения периода её производства.

Продолжая оценку влияния района сбора, отметили, что микробиота обножки, собранной с 8 видов растений в условиях оптимального увлажнения (ГТК=1,2) в Новосибирской области и Алтайском крае характеризовалась различным соотношением бактерий и микромицетов (20 : 1 и 4 : 1) соответственно. Это свидетельствует о существенных различиях микробиоценозов, сформированных в разных районах, характеризующихся различными природно-климатическими условиями. Последнее связано, в первую очередь, с видовым разнообразием фитоценозов нектаро-пыльценосной

флоры. Косвенным подтверждением этой гипотезы является несовпадение цветовых оттенков в полифлёрных образцах из указанных районов.

Закономерности загрязнения микроорганизмами в системе «вегетативные - генеративные органы растений - пыльцевая обножка»

Изменение численности мицелиальных грибов в микробиоте пыльцевой обножки (у) определялось изменениями их численности в микробиоте генеративных (х,) и вегетативных (х2) органов растений-пыльценосов (г = 0,41) и описывалось уравнением у = [2,1+0,003*1 -0,000005*2]*103. С увеличением численности микромицетов на генеративных органах пыльценосов отмечено снижение их в микобиоте пыльцевой обножки (г= -0,39), а также в микобиоте вегетативных частей растений (г= - 0,47).

Входящие в микробный ценоз дрожжевые микромицеты исследуемых субстратов преобладали по численности на генеративных органах. С увеличением их численности на генеративных органах пыльценосов отмечено снижение в микобиоте пыльцевой обножки (г= -0,11), а также в микобиоте вегетативных частей растений (/= -0,48). Сопряженность количества дрожжевой микофлоры пыльцевой обножки медоносных пчёл, генеративных (jti) и вегетативных органов растений (дг2) была существенной, оценивалась коэффициентом множественной корреляции 0,45 и описывалась уравнением у = [3,6+0,004*1- 0,0002jr2]*102.

Одним из биотических факторов, определяющих формирование микобиоты продуктов медоносных пчёл, являлись бактерии рода Bacillus -естественные обитатели почв, проявляющие тесную связь с растениями. С исследуемых субстратов выделены колонии спорообразующих бактерий 9 морфотипов.

Проведённые исследования дифференциации распределения численности спорообразующих бактерий в микробиоте пыльцевой обножки (у) выявили тесную корреляцию (г = 0,84) с таковой на растениях (*i) и цветках (х2), которая описывалась уравнением у = [1.8+0.048*1-0.004.х2]х102. С уменьшением численности бактерий рода Bacillus на вегетативных частях растений наблюдали их снижение на генеративных органах (г = 0,74) и незначительное снижение в микробиоте обножки (г = 0,83). Максимальное количество бацилл выделялось из образцов, собранных в июне (ГТК от 0,3 до 0,5 засушливость), в июле (ГТК от 0,7 до 0,8 - неустойчивое увлажнение) наблюдали снижение их численности в микробиоте вегетативных и генеративных органов пыльценосов. В августе (ГТК = 1,2 - избыточная увлажнённость) на вегетативных органах пыльценосных растений бактерии рода Bacillus не обнаруживали, но контаминация ими цветков и обножки была на сопоставимом уровне.

Скрининг бактерий p. Bacillus на противогрибковую активность (ПА), проведенный в лабораторных условиях, выявил, что наиболее перспективным в качестве продуцентов противогрибковых веществ является штамм Bsl В. subtilis. Он полностью ингибировал рост проверенных мицелиальных грибов: Aspergillus niger Tiegh., Penicillium puberulum Bainier., Mucor hiemalis Wehmer., Alternaría alternata (Fr.) Keissl. Достаточно высокую противогрибковую активность показал штамм 221 Bt ssp. thuringiensis (ПА). Штамм 1204 Bt ssp.

yurtanensis проявлял высокую ПА только в отношении А. niger и Р. puberulum. Полученные результаты дают основание считать, что бактерии рода Bacillus обладают способностью подавлять развитие микромицетов не только в лабораторных условиях, но и на естественных субстратах.

Таким образом, закономерности изменений уровня микробной загрязнённости продуктов пчёл, обусловлены видом продукта, районом, годом сбора и ботаническим происхождением.

На уровень и характер контаминации продуктов медоносных пчёл микроорганизмами существенно влияют следующие экологические факторы погодные условия годов сбора, (теплообеспеченность и увлажнённость) периода формирования пыльценосной флоры и ботаническое происхождение (степень полифлёрности и её видовой состав).

В системе «вегетативные, генеративные органы растений - пыльцевая обножка» установлены значимые связи дифференциации микроорганизмов для дрожжей и бактерий рода Bacillus.

Установлено, что взаимоотношения микроорганизмов в микроценозах является биотическим фактором для их формирования (противогрибковое действие бактерий рода Bacillus).

Глава 5. Видовое разнообразие микобиоты продуктов медоносных пчёл.

Анализ разнообразия комплексов микромицетов продуктов пчёл (20062010) показал, что численность микромицетов в зависимости от района сбора варьировала, но была выше (по средним) в пыльцевой обножке, чем в перге в 6,4 раза (Новосибирск НСО), в 6,8 раза (Коченёвский район НСО) и 8,2 (Залесовский р-н Алт.кр.), больше чем в прополисе в 1,8; 3,2 и 2,9 раза и в 9,9; 19,7 и 12,6 раза - у медов соответственно.

Родовое представительство комплексов микромицетов пыльцевой обножки характеризовалось наибольшим разнообразием, о чём свидетельствует среди изученных продуктов (среднее по годам) максимальное число родов (8,2) при довольно высокой доле редких родов (50,0%). Численность изолятов микромицетов в комплексах пыльцевой обножки на порядок превышала таковую перги и мёда и в 2,9 раза была выше, чем у прополиса (таблица 11).

Наиболее загрязнённой микромицетами оказалась перга, собранная на пасеке Коченёвского района в 2009 году (210 изолятов), отличающаяся высокой долей редких родов 65,0%, хотя численность родов было незначительной (3,8±0,36).

Самая высокая численность микромицетов наблюдалась в микобиоте прополиса, собранного в Коченёвском районе Новосибирской области в 2010 году (330 изолятов) с высокой долей редких родов (58,0%).

Наименьшее количество изолятов микромицетов выявлено в медах (от 1 до 83). На этом субстрате в основном сохраняют жизнеспособность споры грибов рр. Penicillium и Aspergillus (46,2%), для которых известно большое число ксеротолерантных и ксерофильных видов.

| Среднее по годам 1 Залесовский район Алтайский край (таёжная и центральная лесостепь) I Среднее по годам Новосибирск Новосибирская область (центральная лесостепь) I Среднее по годам Коченевскнй район Новосибирская область (северная лесостепь) Район сбора

ы о о К) 8 N0 ю § оо ю 8 ю 8 К1 о о К) 8 К) 8 00 К) 8 ю 8 ю о о к» 8 «о ю 8 00 ы 8 -о ю 8 Оч Год сбора

к» «в "в ы ы ы СП № к> «о ы V© К) оо и, § N1 1л* Ы СП ОО СП Оч К| ОС оо ю к> к» к> ? СП Численность комплексов Пыльцевая обножка | о ё а

ЕХ <г> о V о ъ 00 & V» СП К) N0 СП СП & ъ 00 1 сп N и СП 00 I Ял -л СП I * СП и 1 00 1 Ъ\ ЧО ^ § о ъ» 00 * Число родов, X ±5,

« о* и? о СП * ы о * К) о (л V ы "о •и о 12 £ ■о сп Е о ■и и о СП * и* о СП £ о & о СП Й? ы о ы ГГ о 1 о си » ы "о Доля редких родов, х±Б„%

и* « ш Оч к» СП о § & ё £ Оч К» СП Оч г >о ю К) к> о оо о к Численность комплексов Я п ТЗ 3

Оо « ы оо СП £ VI 00 оо V» оо £ 1л у> ■ь. СП 1 ъ. и и & Ъ и» V 1« ¿л N СП "Е % и) ъ Оч чо СП о Число родов,

Б н- оо о -4 ? о м к о ■Ь. о £ * СП О к» I о 4». и* & О сп О ш £ о К> О, к> О СП н- ы о 1 о к> { о 1 о Доля редких родов, х ± 5„ %

и« N0 — СП сп о СП и> оо и* СП ы к» -и сп ы — Численность 2 г !

и, <л СП I V си о 1 и СП "-о & СП ъ 00 £ У1 Е * ОО £ ы N1 1 Ъ К» и* V N0 ь ОЧ 1 & £ о Число родов,

к> г >>4 О о о к> 1 о ы 8; о £ о VI 'о ю 1 о к» £ о 1 С 00 й о О 1 ы о ю 1 о * \о о о Доля редких родов, х ± 5„ %

£ О ю К) V© о о ы « N о* о к> и» СП 1» ы о СП 00 чО -и V© Численность комплексов я 8 а § X о

и» & ы СП £ СП £ о сп & "о* и* I V и. а» о сл 'о ОО & ЧО I & !*» & Ь Оч 4м <Л ы I 00 СП I ь К) Б ы 1 ы Е ы Число родов,

* СИ 1 о ы СП Н-и> о Ы 1 о о* N1 £ о и> £ "о © О СП ы О к> 00 £ о ы £ о 4 СП 00 £ -о и £ о $ о\ о СП !Р ы о м & о Доля редких родов, х ± %

Полученные данные свидетельствуют о влиянии физико-химических свойств вида продукта на формирование их микобиоты.

Анализ результатов мкобиоты продуктов медоносных пчёл свидетельствует, что плесневые грибы являются её обычными представителя м и.

За период исследований с 2006 по 2010 гг. продуктов медоносных пчёл, собранных на пасеках юга Западной Сибири, выявлены представители различных систематических групп, но большая часть отнесена к классу Hyhomycetes - 28 родов, что составило около 70% всего грибного сообщества. Представители класса Zygomycetes семейства Mucorales - 12,5%. Виды родов Cryptococcus, Candida, Rhodotorula и Trichosporon - дрожжи с аэробным типом дыхания, класс Blastomycetes - 10%. Вид, который довольно часто встречается в микобиоте пыльцы растений Hiphopichia burtonii (род Hiphopichià) гетероталлические аскомицеты - 2,5%. Класс Coelomycetes, представленный двумя родами Phoma и Peyronellaea - 5% от всего грибного сообщества.

Идентифицировано более 141 вида грибов, принадлежащих к 40 родам, подавляющее число видов (116) отнесено к несовершенным грибам.

Отмечено существенное преобладание видов рода Pénicillium, что, по мнению ряда авторов, обусловлено природными условиями региона: а именно почвами северных широт (Литвинов и др. 1991; Сизова, 1977). Причём в микобиоте пчелопродуктов наблюдали преобладание видов микромицетов секций Assymmetrica - 43,1% и Divaricata - 18,4% от общего числа идентифицированных видов рода Pénicillium. Группа гифомицетов семейства Dematiaceae с тёмноокрашенными колониями составила 12% от общего числа видов, принадлежащих этому классу. Наибольшее количество видов семейства Dematiaceae отнесено к роду Cladosporium.

Специфика микобиоты каждого вида продукта проявлялась не только в сочетании различия видов грибов, объясняемых свойствами продуктов, но и в количественном и качественном их соотношении. От вида продукта изменялся статус выделенных видов по частоте встречаемости (таблица 13).

Таблица 13 - Группировки микромицетов продуктов медоносных пчёл (с учётом пространственной и временной встречаемости)__

Группировки Коченевский Новосибирск Залесовский

2 * Перга О S § s * Перга и s § 2 * Перга О s §

8 Мед £ к X 8 Мед 8. с X Мед & с

Число видов

Типично доминирующие 1 0 0 0 1 0 0 0 1 0 0 1

Типично частые 4 4 0 0 3 4 0 0 2 1 0 0

Типично редкие 10 6 2 7 6 10 1 5 6 10 1 4

Случайные 38 17 13 29 35 17 19 24 31 25 19 24

Число выделенных видов по 53 27 15 36 45 31 20 29 40 36 20 29

продуктам

В микобиоте обножки независимо от места расположения пасеки доминировал по частоте встречаемости вид Alternaria alternata. Типично частые виды отличались в зависимости от места расположения пасеки и особенностей фитоценоза, исключение составлял вид Cladosporium cladosporioides (Fresen.) G.A. de Vries, который отмечен среди типично частых видов большинства видов изучаемых продуктов.

Из других типично частых видов в Коченёвском районе были Aspergillus versicolor (Vuill.) Tirab. и Pénicillium thomii Maire, в Новосибирском районе -Aureobasidium pullulons (de Bary) G. Arnaud, и Stemphyllium botriosum Wallr., в Залесовском районе Алтайского края - Cryptococcus albidus (Saito) C.E. Skinner. В микобиоте перги Коченёвского района к ним отнесены Aureobasidium pullulons, Cladosporium cladosporioides, Cryptococcus albidus и Pénicillium thomii. В микобиоте перги с пасеки Новосибирского района - Alternaria alternata из типично доминирующих переходила в типично частые. Кроме этого вида, типично частыми были Aspergillus flavus Link., Cladosporium cladosporioides и Candida sp. В Залесовском районе из типично частых выделялся только Cladosporium cladosporioides.

В микобиоте прополиса доминантом выступал лишь один вид Alternaría alternata. В мёде и прополисе Коченёвского района отмечены только типично редкие и случайные виды.

С учётом пространственной и временной встречаемости доминантные виды не выявлены. К частым отнесены эпифитные виды Alternaría alternata (рисунок 3) и Cladosporium cladosporioides с низкой пространственной, но высокой временной встречаемостью, другими словами, редкие, но типичные виды Aureobasidium pullulons, Aspergillus flavus, A. niger, A. versicolor, Pénicillium atrovirens G. Sm. Остальные 134 вида с низкой пространственной и

Рисунок 3 - Alternaría alternata: а) - 10-суточная культура на среде Чапека, 24 °С; б) - ветвление цепочек с конидиями (х400)

Большинство видов, идентифицированных в комплексе микромицетов пчелопродуктов, являются эвритопными и выделяются из различных

местообитаний всех биоценозов средней полосы России и Сибири. Среди них преобладают деструкторы углеводосодержащих субстратов, что характерно для продуктов медоносных пчёл.

С санитарно-гигиенической оценки, по литературным данным, более 46,0%, являются продуцентами микотоксинов, опасных для здоровья человека. Из 15 образцов водных фракций микромицетов, обнаруженных в микобиоте продуктов медоносных пчёл, 53,3% обладали высокой токсичностью по отношению к выживаемости простейших Stylonychia mytilus. Токсичность водных фракции эдафитного вида Aspergillus nidulans (рисунок 4) составила 95,4, а водного экстракта ацетонового раствора 88,7%. Следующим по токсическому действию на простейших был эпифитный вид Alternaría altérnala (частота встречаемости 41,7%) - 86,9 и 83,5% соответственно.

Рисунок 4 - Aspergillus nidulans: а) - 7 суточная культура на среде Чапека, 24 °С; б) - конидиеносец с конидиями («400)

Таким образом, результаты исследований подтвердили, что определяющим специфичность комплексов микромицетов продуктов медоносных пчёл являются природно-климатические условия районов сбора. Состав эдафитных грибов родов Penicillium и Aspergillus специфичен для каждого района сбора. Влияние мест формирования подтверждает и факт выделения видов, характерных для определённой местности. Только в микобиоте продуктов пчёл Коченеёского района выделен вид Dematophora necatrix R. Hartig, a Залесовского района Алтайского края - Exserohilum rostratum (Drechsler) Leonard et Sugss., но чаще выделялись космополиты - эпифитные виды родов Alternaría, Cladosporium, Stemphylium встречаемость которых в зависимости от вида продукта варьировала от 33,3 до 100,0%.

Наиболее показательна (диагностически) в оценке окружающей среды, из всех изученных видов продуктов медоносных пчёл, является микобиота пыльцевой обножки, формирующаяся в контакте с внешней средой и совершенно не защищенная от её воздействия.

а

б

Глава 6. Способ регулирования микробиоты в продуктах медоносных пчёл

Для исключения потерь ценного продукта и возможных проблем у пользователей, в связи с развитием различных видов порчи в продуктах медоносных пчёл, разработан способ регулирования микробиоты. Условием снижения микробной обсеменённости является обезвоживание продукта.

Механизм действия заключается в том, что инфракрасные лучи определенной длины волны усиливают в режиме резонанса колебания молекул воды. Это приводит к выделению большого количества теплоты, которая расходуется на испарение влаги, причём установлено, что ИК - лучи способны проникать внутрь большинства обрабатываемых объектов на глубину 5-7 мм и более (Гинзбург, 1966; Ильясов, 1978).

Возбуждение молекул воды и её испарение происходят внутри объекта, при этом внутри него повышается давление. Отключение генератора ИК-излучения обеспечивает снижение температуры на поверхности объекта, при этом градиенты температуры и давления совпадают по направлению и испарённая влага поднимается к поверхности, где удаляется потоком воздуха, создаваемым вентилятором.

Для проведения исследований были изготовлены 1- 2- и 6-поддонные сушилки. При определении режимов сушки априори была принята средняя температура 40±3°С. Продолжительность вспышки ИК- ламп колебалась в пределах 2,5-3,0 секунд. Температура в камере сушки напрямую зависела от продолжительности вспышки. Общая продолжительность сушки составляла от 15 до 40 минут.

Такая методика позволила получить большой массив данных о влиянии ИК- излучения на качественные показатели (микробиологическая безопасность) пыльцевой обножки медоносных пчёл, из которого были отобраны для дальнейшей работы рациональные параметры:

продолжительность вспышки ламп 2,5-3,0 секунд; температура в камере не более 40±3 'С;

• толщина слоя пыльцы - 10 мм;

• время сушки - 25-35 минут.

Анализ воздействия ИК- излучения на микробиоту пыльцевой обножки показал эффективность этого способа обезвоживания (таблица 14).

Таблица 14 - Микробиота пыльцевой обножки медоносных пчёл до и после ИК- сушки ______

Сырьб Вид обработки КМАФАнМ, КОЕ/г БГКП Е.соЧ !>а1топе11а Дрожжи, КОЕ/г Плесени, КОЕ/г

Пыльца цветочная Сырая 1,31x10" Обнар. Обнар. Не обнар. 2,7* 103 5,0*103

Пыльца цветочная ИК-сушка 7,7*10' Не обнар. Не обнар. Не обнар. Не обнар. 7,2*10"

СанПиН 2.1 .2.1078-01 1x10' 0,1 1,0 10 103 10'

После обработки

Рисунок 5 - Обсеменённость пыльцевой обножки плесневыми грибами до и после ИК- обработки

Не выявлены бактерии группы кишечной палочки и Е. соЧ, произошло снижение плесневых грибов с 5,0х103 до 7,2х 102 КОЕ/г и дрожжей с 2,7*102 до 0,0 КОЕ/г.

Видовое разнообразие микобиоты пыльцевой обножки сократилось в 3 раза (рисунок 5). Не выявлены грибы семейства Mucorales, дрожжеподобные грибы - Aureobasidium pullulans, дрожжи - Cryptococcus albidus, виды семейства Dematiaceae - Alternaría hartarum, Phoma lingam Sacc. Более чем в 3 раза сократилась численность основного контаминанта обножки С. cladosporioides. Под действием ИК- излучения происходили морфологические изменения грибов семейства Dematiaceae.

До обработки

Отмеченные нами изменения структуры и численности микобиоты пыльцевой обножки при ИК- обработке, возможно, вызваны не только обезвоживанием микроорганизмов. В связи с этим, на примере вида Alternaría altérnala исследовали морфологические изменения, вызванные воздействием ИК- излучения. Ингибирующий эффект характеризовался снижением жизнеспособности спор этого вида, который в среднем составил 77,5% (таблица 15).

Таблица 15 - Показатели воздействия ИК-излучения на жизнеспособность вида A ¡ternaria alternata_

Образец Жизнеспособность спор Alternaría altérnala Подавление роста Alternaría altérnala

КОЕ/ мл Ингибирующий эффект % d колонии 7 -суточной культуры, см Подавление роста колонии,% d зоны спороношсния, см Подавление зоны споропошения, %

Контроль 3,86x10J 7,1 3,9

Опыт 1 9,0x1o2 73,8 5,5 77,5 1,8 46,2

Опыт 2 7,6x1o2 81,1 5,6 75,9 2,0 51,3

Опыт 3 6,9x102 77,6 5,7 82,5 2,2 53,4

Подавление роста колоний проявлялось в слабом развитии субстратного и воздушного мицелия. Происходило изменение пигментации колоний от

светло-оливкового (контроль) до тёмно-коричневого цвета (опыт), Меланинсодержащие пигменты, присутствующие в трибах семейства Dematiaceae обладают определённой степенью защитного эффекта. Устойчивость к лучам с разной длиной волны, присутствующих в солнечном спектре (в том числе и инфракрасные лучи составляют около 50% излучения солнца), в какой-то мере определяют количество пигмента в грибной оболочке, что соответствует обычному экранированию (защита) (Жданова, 1988).

В контроле образование цепочек конидий происходило на 2-3-й день, а в опыте цепочки из 2-3 конидий появлялись только на 5-10-й день. Конидии также претерпевали изменения: в основном наблюдали конидии мелкие, с 1-2 поперечными перегородками, а конидии с муральным септированием, характерным для Alternaría altérnala, встречалось крайне мало. В опытных образцах наблюдали образование хламидоспор и грануляцию цитоплазмы -ответная реакция на неблагоприятные условия для существования.

Трутнёвый гомогенат, обладающий полезными биологически активными свойствами, в отличие от мёда, перги и маточного молочка и даже пыльцевой обножки не содержит факторов самостерилизации. Проведённые исследования обезвоживания трутнёвого гомогената при помощи ИК- лучей показали эффективность этого способа. Наблюдали снижение на порядок численности МАФАнМ и дрожжей, а также гибель бактерий группы кишечных палочек (таблица 16).

Таблица 16 - Влияние ИК- сушки на микробиологические показатели, определяющие безопасность использования трутнёвого гомогената_

Образец Микробиологические показатели

КМАФАнМ БГКП Е. cotí Saimonella £ aureus Плесени Дрожжи

10' 10

Нативный, партия № 1 1,7*103 + + Обн. Не обн. Не обн. н/р 1,6x102

После ИК-сушки, партия № 1 1,5x1o1 Не обн. Не обн. Не обн. н/р 3,6x10'

Нативный, партия № 2 1,4*10J - - Не обн. Не обн. Не обн. н/р 1,2x102

После ИК-сушки, партия №2 1,4x1o' Не обн. Не обн. Не обн. н/р 4,5x10'

Примечание: н/р - нет рост

Обращает на себя внимание факт сохранения при сушке ИК- излучением аминокислот, наиболее сильно реагирующих на температурные режимы. Из 16 определённых аминокислот 11 (68,7%) имели более высокий показатель при

сушке ИК- излучением по сравнению с другими способами сушки (рисунок 6).

Конвективная

20 25 30 Аминокислоты, %

[□сумма аминокислот Исумма незаменимых аминокислот |

Рисунок 6 - Сохранность аминокислот в зависимости от вида обработки

Анализ различия факторных средних влияния способов сушки на сохранность аминокислот был статистически достоверным (Р= 0,95) при конвективной сушке и сушке ИК- излучением.

Сохранность биологически активных нутриентов пыльцевой обножки во многом зависит от условий хранения, особенно от влагонепроницаемости упаковки (рисунок 7).

Бумажный пакет Пластиковый Пластиковы Склянка темного Вид уПЭКОВКН мешочек с замком контейнер стекла

□ После обработки

16 мес хранения □ 12 мес хранения

Рисунок 7 - Влияние вида упаковки на потерю влаги пыльцевой обножкой в период

хранения

Пластиковые пакеты с замочком, пластиковые контейнеры и склянка тёмного стекла с притёртой пробкой предполагают наименьшее поступление воздуха, а вместе с ним и влаги извне, так как сохранность некоторых микроорганизмов напрямую зависит от соотношения доступа кислорода и влажности.

В образцах, подвергнутых хранению, не выявлены бактерии группы кишечной палочки. В последние месяцы хранения происходило снижение показателей «КМАФАнМ» и «плесневые грибы и дрожжи». После 6 месяцев хранения произошло значительное сокращение численности плесеней, в основном за счёт грибов семейства Dematiaceae: родов Cladosporium, Alternaría, исчезли дрожжеподобные грибы рода Aureobasidium.

Между сроком хранения и логарифмом снижения показателей «КМАФАнМ» и «плесневые грибы и дрожжи» наблюдали прямую зависимость (рисунок 8).

Анализ различия факторных средних влияния вида упаковки на сохранность аминокислот в течение 12 месяцев был статистически достоверным, только для упаковки из тёмного стекла с притёртой крышкой при Р=0,95.

Ь4

во .

2 4 3 2 I 0

Влажность, %

□ КМАФАнМ Щ Плесневые грибы и дрожжи

Рисунок 8 - Влияние сроков хранения и влажности на численность микробиоты пыльцевой обножки при хранении в пластиковом пакете с замочком

Необходимо отметить, что дрожжи, которые довольно часто присутствуют в микобиоте пыльцевой обножки в аэробных условиях выдерживают гораздо меньшую влажность чем в анаэробных. Основное преимущество дрожжей над плесенями сводится к их способности расти в анаэробных условиях, продуцировать спирт, СО2, органические кислоты и быть устойчивыми к ним, а основной недостаток - к неспособности проникать в твёрдые субстраты и образовывать в них колонии, что доступно плесневым фибам. В связи с этим, остаточная влажность после обработки и попавший при фасовке воздух некоторое время поддерживают сохранность спор микромицетов, но со временем в результате жизнедеятельности дрожжей кислород и влага иссякают, происходит выделение С02, который подавляет многие аэробные микроорганизмы, в том числе плесневые грибы.

Таким образом, показана эффективность воздействия ИК- излучения на микробиоту продуктов медоносных пчёл. В пыльцевой обножке и трутнёвом гомогенате произошло сокращение численности МАФАнМ, не выявлены

27

бактерии группы кишечных палочек и патогенные виды рода Salmonella, снизилась численность плесеней, исчезли дрожжевые формы микромицетов. Видовое разнообразие микобиоты пыльцевой обножки сократилось в 3 раза.

Под действием ИК- лучей наблюдали морфологические изменения грибов семейства Dematiaceae - подавление интенсивности роста колоний, снижение зоны спорообразования и жизнеспособности их спор.

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ РАБОТЫ

С 2003 по 2009 г. на предприятии ООО «Таёжный мед» Залесовского района Алтайского края проведены производственные выработки образцов на 6-поддонной инфракрасной сушилке «Фермер». Выработку проводили с целью установления возможности использования указанной сушилки для подсушки и обеззараживания пыльцевой обножки для длительного хранения (Акт внедрения в производство научно-технического достижения от 15 августа 2009г.).

За время исследований ИК-сушке подвергалась пыльцевая обножка, собранная в разные сроки при различных погодных условиях. За этот период наработано 5195 кг, пыльцевой обножки на сумму более 5 млн. рублей.

С мая 2011 г. по июль 2012 года на том же предприятии проведены производственные выработки на 6-поддонной инфракрасной сушилке «Фермер» с целью установления возможности использования указанной сушилки для подсушки и обеззараживания трутнёво-расплодного гомогената медоносных пчёл для длительного хранения (Акт внедрения в производство научно-технического достижения от 27 августа 2012). Наработано 231 кг продукта на сумму 808 тыс. рублей.

ВЫВОДЫ

1. Обоснована диагностическая ценность пыльцевой обножки естественных сообществ нектаро-пыльценосных растений. Разработан и апробирован доступный для практиков способ установления сообществ пыльценосных и медоносных растений по пыльцевой обножке, собранной медоносной пчелой.

2. В системе «вегетативные - генеративные органы растений -пыльцевая обножка» установлены значимые связи дифференциации микроорганизмов для дрожжей и бактерий рода Bacillus. Возрастание численности дрожжей и бацилл на растениях и цветках, сопряжено с изменением их численности в микробиоте пыльцевой обножки медоносных пчёл.

3. В экологической оценке микробиоты продуктов медоносных пчёл определяющее значение имеют район (природно-климатическая зона), год сбора (температура и увлажненность), ботаническое происхождение (полифлёрность), а также вид продукта.

4. Контаминация микромицетами по районам достоверно различалась, но в целом степень влияния «район сбора» несущественна < FT). Существенное значение в загрязнении микромицетами имел «вид продукта», доля влияния которого на уровень контаминации составила 26%. Оценка взаимодействия изученных факторов показала, что их влияние на численность микромицетов носит аддитивный характер. Доля влияния факторов составила 12,5%.

5. Установлено, что ботаническое происхождение пыльцевой обножки влияет на содержание общего микробного числа. Достоверное на порядок снижение (до 0,5*102 КОЕ/г) и возрастание (от 1,7*103 до 3,3*103КОЕ/г) отмечено соответственно в образцах с низкой (4 вида) и высокой (13 и 20 видов) полифлёрностью. Установлено, что взаимоотношения микроорганизмов являются биотическим фактором формирования микробиоты (противогрибковое действие бактерий рода Bacillus).

6. Показано существенное различие видового состава микобиоты по виду продукта, специфика которых проявляется как в сочетании различия видов грибов, объясняемых свойствами продуктов, так и в их количественном и качественном соотношении. Установлено, что в зависимости от вида продукта изменяется статус выделенных микромицетов по частоте встречаемости.

7. Год сбора определяет высокую видовую специфичность микромицетов, выделенных с продуктов медоносных пчёл, что подтверждается величиной критерия идентичности (ld>)?\ Р=0,01).

8. Анализ видового сходства микобиоты продуктов пчёл по районам сбора выявил достоверные различия практически во всех исследованных продуктах, обусловленные разными природно-климатическими условиями, которые проявляются в первую очередь в видовом составе эдафитных грибов родов Aspergillus и Pénicillium.

9. В микобиоте продуктов медоносных пчёл выделено и идентифицировано более 141 вида микромицетов, принадлежащих к 40 родам, подавляющее число видов (116) отнесено к несовершенным грибам. Из них 70% относятся к классу Hyhomycetes, 12,5% - представители класса Zygomycetes, 10% - к классу Blastomycetes, 2,5% - к гетероталличным аскомицетам и 5% - к классу Coelomycetes. Наибольшее число видов класса Hyhomycetes принадлежит типично почвенным грибам pp. Pénicillium - 47,7% и Aspergillus - 13,2%. Доминантные виды не выявлены, к частым отнесены эпифитные виды Alternaria alternata и Cladosporium cladosporioides с низкой пространственной, но высокой временной встречаемостью, другими словами, редкие, но типичные виды: Aureobasidium pullulons, Aspergillus flavus, A. niger, A. versicolor, Pénicillium atrovirens, остальные 134 видов с низкой пространственной и временной встречаемостью отнесены к случайным.

Из 15 протестированных видов микромицетов, выделенных с продуктов медоносных пчёл 53,3% обладали высокой токсичностью по отношению к выживаемости простейших Stylonychia mytilu.

9. Показана эффективность воздействия на микробиоту продуктов медоносных пчёл способом обезвоживания ИК- излучением. В пыльцевой обножке на два порядка произошло сокращение численности МАФАнМ, не выявлены бактерии группы кишечных палочек и патогенные виды рода Salmonella, снизилась на порядок численность плесеней, исчезли дрожжевые формы микромицетов. Видовое разнообразие микобиоты пыльцевой обножки сократилось в 3 раза. Под действием ИК- лучей происходят морфологические изменения грибов семейства Dematiaceae, подавление интенсивности роста колоний, снижение зоны спорообразования и жизнеспособности их спор.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для контроля безопасности использования продуктов медоносных пчёл целесообразным является пересмотр существующих регламентов по санитарно-микологической оценке пыльцевой обножки и необходимости введения в регламент Гигиенических требований безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов невнесённых видов пчелопродуктов. В данном случае полученные результаты могут служить основой для разработки нормативных документов по микробиологической безопасности.

2. Опираясь на знание фенологии цветения пыльценосов определенных природно-климатических зон, рекомендовать для практиков наиболее удобный способ - цветовой анализ по пыльцевой обножке для характеристики нектаро-пыльценосной флоры, а также целенаправленного использования пыльцевой обножки в апитерапии.

3. Для лабораторий рекомендовать использование пыльцевого анализа. По существу это качественный анализ, основанный на предположении, что цветки почти всех видов содержат нектар с примесью пыльцы. Необходимо оценивать сорт мёда на основании содержания пыльцевых зёрен, а пыльцевую обножку - как основу кормовой базы места расположения пасеки.

4. Рекомендовать предприятиям по переработке продуктов медоносных пчёл использовать способ снижения микробиоты ИК- излучением для получения экологичной пчелопродукции.

5. Представленные морфологические характеристики (цветные фотографии) микромицетов, выделенных с продуктов медоносных пчёл можно использовать как определитель для микологов- исследователей и учебных вузов.

Практические предложения отражены в методическом пособии для пчеловодов «Сушка пыльцевой обножки медоносных пчёл с использованием инфракрасного излучения» (протокол № 1 от 01.08.2010 г. НТС Министерства сельского хозяйства Новосибирской области), а также методическом пособии для пчеловодов, исследовательских лабораторий и дегустационных комиссий по медам «Мёд и его оценка качества» (протокол № 1 от 15.08.2011 г. НТС Министерства сельского хозяйства Новосибирской области).

Патентный анализ свидетельствует, что проведённые исследования являются охраноспособными и отвечают критериям изобретения.

Социальный эффект выполненной работы определяется расширением знаний о микробиологической загрязнённости продуктов медоносных пчёл и возможности использования нового способа консервирования, сохраняя их биологическую ценность, которая будет способствовать улучшению здоровья населения.

Основное содержание диссертации опубликовано в следующих работах:

1. Монографии

1. Волончук, С.К. Новые технологии. Улучшение качества пшеничной муки и пчелиной пыльцевой обножки инфракрасным излучением: монография / С.К. Волончук, Г.П. Чекрыга. - Германия: ЛАМБЕРТ, 2012 - 88 с.

2. Г.П., Чекрыга Характеристика основных медоносов Западной Сибири по пыльцевой обножке, собранной Apis mellifera / Г.П. Чекрыга, A.A. Плахова, И.В. Науменко, И.Г. Трещук. - Новосибирск, 2014. - 96 с.

2. Статьи в изданиях, рекомендованных ВАК

3. Осинцева, Л.А. Влияние сроков сбора пыльцевой обножки на родовую структуру её микобиоты / Л.А. Осинцева, Г.П. Чекрыга, К.Я. Мотовилов // Вестник КрасГАУ, 2007. -№ 1.-С. 131-133.

4. Осинцева, Л.А. Содержание полютантов в пыльцевой обножке медоносных пчёл в зависимости от экологических факторов / Л.А. Осинцева, К.Я. Мотовилов, Г.П. Чекрыга [и др.] // С.-х. биология. - 2007. - № 2. -С. 114-114.

5. Чекрыга, Г.П. Микробиота продуктов пчёл / Г.П. Чекрыга // Пчеловодство. - 2007. - № 6. - С. 54-55.

6. Шорникова, Л.П. Энергия инфракрасного излучения и микробиологическая безопасность сушеных овощных продуктов / Л.П. Шорникова, С.К. Волончук, Л.А. Осинцева, Г.П. Чекрыга // Вестн. Рос. акад. с.-х. наук. - 2008. - № 1.- С. 91-93.

7. Чекрыга, Г.П. Формирование микобиоты пыльцевой обножки собранной медоносными пчёлами с Эспарцета посевного и Синяка обыкновенного / Г.П. Чекрыга, Л.А. Осинцева // Сиб. вест. с.-х. науки. - 2008. - № 4. - С. 90-95.

8. Чекрыга, Г.П. Формирование микобиоты продуктов пчёл / Г.П. Чекрыга, К.Я. Мотовилов // Пчеловодство. - 2008. - № 7. - С. 48^9.

9. Чекрыга, Г.П. Виды микромицетов продуктов пчёл Коченёвского района Новосибирской области / Г.П. Чекрыга // Сиб. вест. с.-х. науки. - 2008. - № 12. -С. 101-106.

10. Осинцева, Л.А. Грибы пыльцевой обножки медоносных пчёл // Л.А. Осинцева, Г.П. Чекрыга // Микология и фитопатология. - 2008. - Т. 42, вып. 5.- С. 464-469.

11. Чекрыга, Г.П. Изучение микобиоты дикорастущих пыльценосов, воздуха и продуктов пчёл Залесовского района Алтайского края / Г.П. Чекрыга, B.C. Лёвин // Сиб. вест. с.-х. науки. - 2009. - № 10. - С. 129-135.

12. Чекрыга, Г.П. Влияние микрофлоры воздуха на формирование микобиоты пыльцевой обножки / Г.П. Чекрыга, Т.Т. Кузнецова // Иммунология, аллергология, инфектология. - 2010. - № 1. - С. 136-137.

13. Калмыкова, Г.В., Противогрибковая активность штаммов Bacillus thuringiensis / Г.В. Калмыкова, Т.Т. Кузнецова, Г.П. Чекрыга [и др.] // Иммунология, аллергология, инфектология. - 2010. - № 1.- С. 220.

14. Волончук, С.К. Сушка пыльцевой обножки в инфракрасных лучах / С.К. Волончук, Г.П. Чекрыга, Т.Т. Кузнецова [и др.] // Пчеловодство. - 2010. -№2.- С. 52-53.

15. Плахова, A.A. Виды растений, определяющие ботанический состав пыльцевой обножки в условиях Васюганских болот Новосибирской области /

A.A. Плахова, Г.П. Чекрыга / Вестник НГАУ,2011.-Т.1,№17.- С.74-79.

16. Чекрыга, Г.П. Микобиота продуктов пчёловодства / Г.П. Чекрыга, К.Я. Мотовилов // Микология и фитопатология. - 2011. - Т.45, вып. 2. - С. 158-163.

17. Чекрыга, Г.П. Производство пыльцевой обножки медоносными пчёлами II Г.П. Чекрыга, A.A. Плахова // Сиб. вест. с.-х. науки. - 2011. -№ 5 - 6. - С. 60-64.

18. Чекрыга, Г.П. Качество меда на юге Западной Сибири / Г.П. Чекрыга, A.A. Плахова// Пчеловодство. - 2012. -№ 6. - С.55-56.

19. Чекрыга, Г.П. Экологические условия формирования микобиоты дикорастущих пыльценосов / Г.П. Чекрыга, Т.Т. Кузнецова // Сиб. эколог, журн. - 2012. - № 3. - С. 383-388. [Chekryga, G.P.; Kuznetsova Т.Т. Ecological conditions for the formation of mycobiota of wild-growing pollen plants // Contemporary Problems of Ecology (2012) 5: 281-285 , May 01, 2012].

20. Чекрыга, Г.П. Хранение пыльцевой обножки / Г.П. Чекрыга,

B.C. Левин // Вести. Рос. акад. с.-х. Наук. - 2013. - № 2. - С. 97-88.

21. Чекрыга, Г.П. Производство нектаров в условиях Западной Сибири / Г.П. Чекрыга, A.A. Плахова // Сиб. вест. с.-х. науки. - 2013. - № 3. - С. 74-79.

22. Чекрыга, Г.П. Факторы, определяющие микробную загрязненность продуктов медоносных пчёл / Сиб. вест. с.-х. науки. - 2013. - № 6. - С. 32-39.

Статьи в иностранных изданиях

23. G.P. Chekryga, Motovilov К. Ja. Rapporto come fattore di mircrorganismi microbiota (battema attivita antifunfgina r. Bacillus)/ Italian Science Review. 2014; 5(14). PP. 202-206.

24. G.P. Chekryga Analisi comparative delle plante comunitaria-polline-nettareportanti delle diverse zone climatiche dal polline polline, sono raccolti apis mellifera // Italian Science Review. 2014; 10 (19 ). PP. 10-15.

3. Статьи в сборниках научных трудов, тезисы и материалы конгрессов

и конференций

25. Чекрыга, Г.П. Причины порчи пыльцевой обножки медоносных пчёл / Г.П. Чекрыга, Л.А. Осинцева // Проблема повышения эффективности

производства животноводческой продукции: тез. докл. Междунар. науч.- практ. конф. - Жодино (Беларуссия), 2007. - С. 407-409.

26. Чекрыга, Г.П. Микобиота пыльцевой обножки медоносных пчёл по срокам сбора / Г.П. Чекрыга, Л.А. Осинцева // Биология, теория, практика, эксперимент: тр. Междунар. науч.-практ. конф.; в 2 кн. - Саранск, 2008. -С. 117-122.

27. Осинцева, Л.А. Особенности формирования микобиоты монофлёрной пыльцевой обножки медоносных пчёл /Л.А. Осинцева, Г.П. Чекрыга // Аграрная наука сельскому хозяйству: сб. тр. III Междунар. науч.-практ. конф. - Барнаул, 2008; кн. 2. - С. 105-108.

28. Чекрыга Г.П. Микобиота пыльцы дикорастущих пыльценосов / Г.П. Чекрыга, Л.А. Осинцева // Пища, экология, качество: тр. V Междунар. науч.-практ. конф. - Новосибирск, 2008. - С. 310-311.

29. Чекрыга, Г.П. Микромицеты прополиса И Пища, экология, качество: тр. Междунар. науч.-практ. конф. - Кемерово, 2009. - С. 301-306.

30. Чекрыга, Г.П. Видовая структура микобиоты медов пасек юга Западной Сибири // Аграрная наука сельскохозяйственному производству Казахстана, Сибири и Монголии: тр. XII Междунар. науч.-практ. конф. - Алматы, 2009. -С. 338-342.

31. Чекрыга, Г.П. Микобиота перги / Г.П. Чекрыга, Т.Т. Кузнецова // Пища, экология, качество: тр. IV Междунар. науч.-практ. конф. (Краснообск, 21-22 сентября 2010 г.). - Новосибирск, 2010. - С. 161-163.

32. Волончук, С.К. Эффективность обработки пыльцевой обножки медоносных пчёл мнфракрасным излучением / С.К. Волончук, Г.П. Чекрыга, Т.Т. Кузнецова // Пчелопродукты - здоровье нации: тр. V Междунар. науч.-практ. форума. - Новосибирск, 2010. - С.116-118.

33. Чекрыга, Г.П. Микобиота растений-пыльценосов // Экологические проблемы животных и человека: сб. докл. II Междунар. симп. (29-30 октября 2009).-Новосибирск, 2010.- С. 168-172.

34. Чекрыга, Г.П. К вопросу бактерицидности медов // Современные технологии производства и переработки сельскохозяйственной продукции: сб. материалов Междунар. науч.-практ. конф. (21 апреля 2011г.).- Новосибирск, 2011,- С. 119-120.

35. Чекрыга, Г.П. Микологическая безопасность продуктов пчёл / Г.П. Чекрыга, Т.Т. Кузнецова // Пища, экология, качество: тр. VID междунар. науч.-практ. конф. (Алматы, 23-24 сентября 2011 г.). - Алматы, 2011. -С. 256-258.

36. Чекрыга, Г.П. Изменения в микобиоте пыльцевой обножки медоносных пчел под воздействием ИК- лучей / Г.П. Чекрыга, С.К. Волончук, Т.Т. Кузнецова // Пчелопродукты - здоровье нации: сб. тр. V Междунар. науч.-практ. форума по пчеловодству. - Новосибирск, 2011. - С. 116-118

37. Чекрыга, Г.П. Влияние инфракрасных лучей на жизнеспособность вида Alternaría altérnala // Современная микология в России. Т. 3: материалы 3-го

съезда микологов России. - М.: Национальная академия микологов, 2012. -С. 146.

38. Чекрыга, Г.П. Оптимальные режимы обработки пыльцевой обножки ИК- излучением / Г.П. Чекрыга, B.C. Левин, С.К. Волончук // Пища, экология, качество: тр. X Междунар. науч.-практ. конф. (Краснообск, 1-3 июля 2013 г.). -Новосибирск, 2013.-С. 154-157.

39. Чекрыга, Г.П. Микобиота пыльцевой обножки медоносных пчёл как индикатор состояния окружающей природной среды // Аграрная наука -сельскохозяйственному производству Монголии, Сибирского региона, Казахстана и Болгарии: сб. науч. докл. XVI Междунар. науч.-практ. конф. Монгол, акад. аграр. наук, Уланбаатор, 2013. - С. 339-341.

40. Чекрыга, Г.П. Формирование микобиоты растений пыльценосов и пыльцевой обножки И Проблемы микологии и фитопатологии в XXI веке: материалы Междунар. науч. конф. - (Санкт-Петербург, октябрь, 2013 г.) - СПб, 2013,- С. 285-287.

41. Чекрыга, Г.П. Технологические особенности производства трутнёвого гомогената / Г.П. Чекрыга, C.B. Волончук, B.C. Левин, A.A. Плахова // Пища, экология, качество: тр. IX Междунар. науч.-практ. конф. (Краснообск, 11-12 сентября 2012 г.). - Новосибирск, 2012. -С. 215-217.

42. Чекрыга, Г.П. Сопряжённость погодных условий производства нектара и пыльцы растениями и развитием микромицетов на них // Пища, экология, качество: тр. XI Междунар. науч.-практ. конф. (Екатеринбург, 14-16 мая 2014 г.). - Екатеринбург, 2014. - С. 224-226.

4. Патенты

43. Патент РФ № 2453135 Способ сушки цветочной пыльцы медоносных пчёл инфракрасным излучением (авторы: С.К. Волончук, Г.П. Чекрыга, B.C. Лёвин). Опубликовано 20.06.2012, Бюл. № 17.

44. Патент РФ № 2523886 Способ сушки трутнёвого гомогената медоносных пчёл инфракрасным излучением (авторы: Г.П. Чекрыга, С.К. Волончук, B.C. Лёвин). Опубликовано 27.07.2014, Бюл. 21.

5.Учебно-методические труды

45. Волончук, С.К. Сушка пыльцевой обножки медоносных пчёл с использованием инфракрасного излучения: методическое пособие для пчеловодов / С.К Волончук, Г.П. Чекрыга, Т.Т. Кузнецова, B.C. Левин. -Новосибирск, 2010. - 20 с.

46. Кашковский В.Г. Мёд и его оценка качества: методическое пособие для пчеловодов, исследовательских лабораторий и дегустационных комиссий по медам / В.Г. Кашковский, Г.П. Чекрыга, A.A. Плахова. - Новосибирск, 2012. -32 с.

Подписано в печать 27.12.20H Формат 60x84 '/|6. Объем 3,0 уч. изд. л.; 2,25 усл. печ. л. _Бумага офсетная Тираж 100 эю. Заказ №49

Отпечатано в типографии «Ареал» 630058, г. Новосибирск, ул. Русская ,41

15 - - 2 4 1 6

314270275

2014270275