Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Экологические аспекты трансформации ферментного пула почвы при нефтяном загрязнении и рекультивации

ВАК РФ 03.00.27, Почвоведение

Автореферат диссертации по теме "Экологические аспекты трансформации ферментного пула почвы при нефтяном загрязнении и рекультивации"

На правах рукописи

Новоселова Евдокия Ивановна

ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ТРАНСФОРМАЦИИ ФЕРМЕНТНОГО ПУЛА ПОЧВЫ ПРИ НЕФТЯНОМ ЗАГРЯЗНЕНИИ И РЕКУЛЬТИВАЦИИ

Специальность 03.00.27 - почвоведение 03.00.16 - экология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

□ОЗ164183

Воронеж 2008

003164183

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Башкирский государственный университет»

Научные консультанты доктор биологических наук, профессор

Киреева Наиля Ахняфовна

доктор биологических наук, профессор Хазиев Фангат Хаматович

Официальные оппоненты доктор биологических наук, профессор

Девятова Татьяна Анатольевна

доктор биологических наук, профессор Селивановская Светлана Юрьевна

доктор биологических наук, профессор Русанов Александр Михайлович

Ведущая организация Московский государственный

университет им М В Ломоносова, факультет почвоведения

Защита состоится « 26 » февраля 2008г в 13 часов на заседании диссертационного совета Д 212 038 02 при Воронежском государственном университете по адресу 394006, г Воронеж, Университетская пл , 1

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Воронежского государственного университета

Автореферат разослан «^7» декабря 2007 г

Ученый секретарь диссертационного совета Брехова Л И

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования Почва является неотъемлемой частью любой наземной экосистемы и играет важную роль в поддержании устойчивости биосферы Ее бесконтрольное использование приводит к разрушению почвенного покрова Деградация почв носит глобальный характер и является одной из самых главных причин экологического кризиса (Добровольский, 1997,2003, Никитин, 2003)

Антропогенная деградация почв в районах добычи, транспортировки и переработки нефти часто связана с загрязнением нефтью и нефтепродуктами, относящимися к приоритетным загрязнителям биосферы На сегодняшний день это загрязнение является экологической проблемой мирового масштаба (Аржанни-ков, Громова, 2001) По экспертным оценкам, загрязнение почвы в результате деятельности нефтедобывающих и транспортных предприятий на территории России достигает сотен тысяч гектаров В Башкирии ежегодно загрязняется 72 тыс м2 поверхности в год (Абдрахманов, 1993) Разливы нефти вследствие аварий на нефтепроводах оцениваются миллионами тонн

Загрязнение почвы нефтью нарушает ее стабильное функционирование меняются физико-химические свойства, характер биохимических процессов, подавляется активность микробиоты (Kiss, 1985, Исмаилов, 1988, Пиковский, 1993, Гузев и др, 1989, Oberbremer, Müller-Hurtig, 1989, Киреева и др, 1994, Kiss, 1995, Киреева и др , 1996, Киреева и др , 1997, Гилязов, 1999, Margesin et al, 2000, Хабиров и др , 2001, Kiss, 2001; Габбасова, 2002, Киреева и др , 2004, Рахимова и др , 2005)

Почвы, несмотря на техногенные воздействия, способны поддерживать го-меостаз за счет регуляторных механизмов, основанных на микробном пуле и пуле ферментов, контролирующих синтетико-деструктивные биохимические процессы в почве (Звягинцев, 1978, 2003, Хазиев, 1982) Ферменты участвуют в процессах «самоочищения» почв от экзогенных веществ, трансформируя, нейтрализуя, разрушая не свойственные почвам вещества, которые могут быть токсичными изначально или в результате их накопления выше определенных пределов (Исмаилов, 1982, Пиковский, 1988) Гидролитические и окислительно-восстанон.ительные ферментные системы включают в биогеохимические циклы азот, фосфор, углерод, серу Тем самым пул ферментов непосредственно участвует в осуществлении почвой ряда экологических функций трофической, сани-тарно-восстановительной и др Ферменты системы микроорганизмы - почва играют важную роль в сохранении биохимического равновесия в почве при ее различных загрязнениях (Хазиев, 1982) Благодаря ферментному пулу метаболизм почвы может сохраняться стабильным, даже если условия окружающей среды неблагоприятны для жизнедеятельности микроорганизмов

Вторжение потоков углеводородов, имеющих различные физико-химические характеристики, в биосферу происходит в разных природно-климатических условиях, что ведет к обилию ответных реакций природных сис-

тем Процесс «самоочищения» и восстановления почв до исходного уровня длителен, это вызывает необходимость разработки приемов рекультивации с учетом их региональных особенностей, несмотря на значительное число исследований, выполненных по этой проблеме

Цель работы - комплексная оценка состояния ферментного пула почв в условиях нефтяного загрязнения и при рекультивации

Задачи исследований:

1 Изучить трансформацию агрохимических свойств нефтезагрязненных почв и распределение нефти по почвенному профилю

2 Изучить в почвах, загрязненных нефтью и нефтепродуктами, состояние пула ферментов, участвующего в обмене азотсодержащих органических веществ, в углеводном обмене, особенности обмена фосфорсодержащих органических веществ, серусодержащих соединений, активность гидролазы эфиров кар-боновых кислот - триацилглицерол-липазы

3. Изучить состояние окислительно-восстановительных процессов в почвах, загрязненных нефтью и нефтепродуктами по активности оксидоредукгаз

4 Изучить состояние ферментного пула, пула микроорганизмов в нефтезагрязненных почвах при проведении различных рекультивационных мероприятий.

Научная новизна исследований

Впервые на территории Башкортостана в полевых, микрополевых, лабораторных опытах проведена комплексная оценка состояния ферментов азотного, углеводного, серного, фосфорного обмена серой лесной почвы и выщелоченного чернозема в условиях нефтяного загрязнения. Охвачен большой спектр ферментов различных классов и проанализированы изменения их активности при загрязнении почв сырой, товарной нефтью и различными нефтяными фракциями [ЛГК (легкий газойль коксования), ЭМ И (экстракт второй масляной фракции), Г (гудрон), КО (крекинг остаток), А (асфальтит), ДТ (дизельное топливо), ММ (моторное масло), Б (бензин), ДГФ (дистилят газойлевой фракции)], нефтяными углеводородами (н-парафины, циклопарафины, циклогексан, н-гексадекан, ароматические углеводороды), продуктами окисления углеводородов (гексадецило-вый спирт, пальмитиновая, бензойная и салициловая кислоты). В результате исследований предложено использовать активность некоторых ферментов в качестве диагностических показателей загрязненности почв нефтью - уреазы, нитрат-, нитритредуктазы, липазы, аскорбатоксидазы Показано появление «компенсационных механизмов», за счет действия которых предотвращаются потери серы Приведен материал многолетних исследований по окислительно-восстановительным ферментам, участвующим в трансформации нефтяных углеводородов (пероксидаза, полифенолоксидаза, каталаза, дегидрогеназа) Впервые изучена аскорбатоксидазная, липазная активность в почвах, подвергшихся нефтяному загрязнению в Южном Предуралье. Модифицированы методы определения активности дегидрогеназы и липазы

Разработаны и проверены на практике приемы рекультивации нефтезагряз-ненных почв с учетом природно-климатических условий Южного Предуралья и их влияние на ферментативную активность почв Первый ряд приемов направлен на стимуляцию естественной углеводородокисляющей мнкробноты, он включает в себя ежегодное внесение органо-минерального комплекса Второе направление - внесение активного ила биохимкомбината, содержащего естественную ассоциацию углеводородокисляющих микроорганизмов и питательные вещества - соединения азота, фосфора, калия, микроэлементы в составе ила Третье направление - очистка почв путем внесения препарата Бациспецин, полученного на основе природного штамма Bacillus sp. 739 в Институте биологии УНЦ РАН (г Уфа), четвертое - фитомелиорация нефтезагрязненной почвы с использованием люцерны в качестве фитомелиоранта Все испытанные приемы рекультивации показали свою эффективность в повышении активности ферментного ]пула загрязненных нефтью почв и в ускорении процессов их восстановления

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Нефтяное загрязнение является фактором, нарушающим систему физических, химических и биологических свойств почвы Существенные изменения выявляются в активности пула ферментов, участвующих в обмене азот-, фосфор-, серу содержащих органических веществ, в углеводном обмене, в окислительно-восстановительных реакциях Уменьшается активность изученных ферментов, участвующих в углеводном обмене, обмене соединений органического фосфора почвы, активность большинства изученных ферментов обмена азотсодержащих органических соединений При загрязнении почв нефтью меняются процессы грансформации соединений серы

2 Нефтяные углеводороды отличаются по своему действию на активность изученных ферментов

3 Внесение органо-минеральных удобрений, активного ила, использование биопрепарата Бациспецин, фитомелиорация эффективны в восстановлении активности ферментного пула, пула микроорганизмов загрязненных нефтью почв и ускорении процессов их рекультивации

Практическая значимость работы Установленная специфика функционирования пула ферментов, участвующего в азотном, углеводном, серном, фосфорном обменах, позволяет научно обоснованно корректировать направленность биохимических процессов в нефтезагрязненных почвах для наиболее полного обеспечения доступными элементами питания как микроорганизмов, так и растений Активность ряда ферментов можно использовать в практике биомониторинга почв, подвергшихся нефтяному загрязнению Предложенный метод рекультивации серой лесной почвы, загрязненной в результате прорыва магистрального нефтепровода, опубликован в информационном листке ЦНТИ и внедрен в котхозе «Рассвет» Калтасинского района Препарат Бациспецин опроби-рован в условиях Южного Предуралья на Сергиевском месторождении (Чекма-гушевский район), Западной Сибири (территория Быстринскнефть ПО Сургут-

нефтегаз) и показал свою эффективность в разных климатических зонах (на основе разработанного метода получен патент РФ №2077397, МКИ В 09 с 1/10)

. Апробация работы. Материалы диссертационной работы апробированы на международных симпозиумах и конференциях «Современные проблемы биоиндикации и биомониторинга» (Сыктывкар, 2001, 2003), «Почва как связующее звено функционирования природных и антропогенно-преобразованных экосистем» (Иркутск, 2001), «Проблемы биодеструкции техногенных загрязнений окружающей среды» (Саратов, 2005), «Вщновлення порушених природных экосистем» (Донецьк, 2002), «Экология и биология почв» (Ростов - на - Дону, 2004, 2007), «Биологическая рекультивация и мониторинг нарушенных земель» (Екатеринбург, 2007), «Экология биосистем проблемы изучения, индикации и прогнозирования» (Астрахань, 2007), на Всесоюзных и Всероссийских съездах, конференциях и симпозиумах микробиологического общества (Алма-Ата, 1985) и общества почвоведов (Ташкент, 1985, Новосибирск, 1989, 2004, Санкт-Петербург, 1996), общества биотехнологов России (Москва, 2005), «Мониторинг нефти и нефтепродуктов в окружающей среде» (Уфа, 1985), «Проблемы рекультивации нарушенных земель» (Свердловск, 1988), «Региональные проблемы экологии» (Казань, 1985), «Микробиологические процессы в почвах и урожайность сельскохозяйственных культур» (Вильнюс, 1986), «Биология почв антропогенных ландшафтов» (Днепропетровск, 1991), «Актуальные вопросы мониторинга экосистем антропогенно-нарушенных территорий» (Ульяновск, 2000), «Проблемы экологии Южного Урала» (Оренбург, 2007), на региональных конференциях (Уфа 1983, 1984, 1985, 1986, 1987, 1989, 1995, 1996)

Личный вклад автора в работу Диссертационная работа является результатом многолетних (1982-2007 гг) исследований по изучению влияния нефти и нефтепродуктов на биологическую активность почв Южного Предуралья Все результаты получены лично автором или при его непосредственном участии. Доля личного участия в совместных публикациях пропорциональна числу соавторов

Публикации. По теме диссертации опубликовано 72 работы, в том числе 2 монографии, 2 учебных пособия, 1 внедрение, 1 патент, 14 работ опубликованы в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК

Структура и объем диссертации Диссертация состоит из введения, 10 глав, защночения, выводов, списка литературы Работа изложена на 334 страницах машинописного текста, в том числе 57 таблиц, 70 рисунков Список литературы включает 535 источников, из них 124 на иностранном языке

Выражаю искреннюю благодарность проф, д б н Киреевой Н А , заслуженному деятелю науки РФ, главному научному сотруднику лаборатории почвоведения Института биологии УНЦ РАН, чл корр АН РБ проф , д б н Хазиеву Ф X за поддержку, помощь в проведении экспериментов и консультации, д б н заведующему лабораторией почвоведения Института биологии УНЦ РАН Габ-басовой И М за консультации при написании работы, сотрудникам лаборатории почвоведения Института биологии УНЦ РАН, а также коллегам по работе, при-

нимавшим участие в проведении экспериментов к б н Ямалетдиновой Г Ф, аспирантам Тарасенко Е М, Валиуллиной (Шамаевой) А А, Онеговой Т С и многим другим за неоценимую помощь в работе

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ В главе 1 «Структурно-функциональная трансформация биогеоценоза при нефтяном загрязнении и пути его восстановления» (Обзор литературы)

в п 1 1 «Влияние нефтяного загрязнения на физические и химические свойства почв» приведены данные исследований по распределению нефти в почвенном профиле и ее влиянии на физико-химические свойства почв (Przedwojski et al, 1980, Андресон, Хазиев, 1981; Пиковский, Солнцева, 1981; 1993, Солнцева, 1998, Гилязов, 1999, Хабиров и др, 2001, Габбасова, 2002, Плешакова и др, 2005)

В п 1 2 «Состояние микробиоты и ферментативной активности почв при нефтяном загрязнении» рассмотрено влияние различных концентраций нефти и углеводородов на состояние микробиоты и ферментативной активности почв в различны < климатических условиях (Donnelly, Mikucki, 1987, Oberbremer, Muller-Hurtig, 1989, Гузев и др , 1989, Халимов и др , 1996, Киреева и др, 1996 а, б, 1997, 1998 а, 2004, Гилязов, 1999, Margesin et al, 2000, Kiss, 1985, 1995, 2001, Рахимова и др , 2005)

В п I 3 «Рост и развитие растений в нефтезагрязненных почвах» подробно проанализированы причины ухудшения роста и развития растений на загрязненных почвах (Mac'kiewicz et al, 1982, Демидиенко и др, 1983, Тупицина и др, 2001, Аниськина и др , 2001, Киреева и др, 2002), использование высших растений как фитоиндикаторов техногенного загрязнения (Кавеленова, 1999,2006)

В п 1 4 «Биоремедиация нефтезагрязненных почв» проведен анализ различных методов рекультивации нефтезагрязненных почв (Melier et al, 1995, Braddock et al, 1997, Киреева и др , 1998, Емцев и др, 2000, Аржанников, Громова, 2001, Медведева, 2002, Карасева и др , 2005)

В главе 2 «Объекты и методы исследований» описаны особенности природно-климатических условий изучаемого района, дана подробная характеристика исс тедуемых почв

В течение более двадцати лет в многолетних полевых, микрополевых и лабораторных опытах изучалось влияние различных концентраций нефти и отдельных углеводородов на ферментативную активность серой лесной тяжелосуглинистой, темно-серой лесной среднесуглинистой, песЧаной иллювИалЬНо-железисто-гумусовоЙ почвы, чернозема выщелоченного среднесуглинистого Условия постановки и проведения опытов приведены в диссертации

Исследовались почвы, загрязненные сырой арланской, тюменской товарной (обессоленной, обезвоженной) нефтью, нефтепродуктами, краткая характеристика которых приведена в диссертации

Аналитические исследования проводили на свежих образцах почвы Разрыв во времени с момента отбора и поступления образцов в лабораторию составлял

2-3 дня О биологической активности почвы и ее способности к самоочищению судили по ферментативной активности почв, численности основных физиологических групп микроорганизмов, интенсивности дыхания, содержанию остаточной нефти в почве, коэффициенту минерализации углеводородов, всхожести семян, урожайности сельскохозяйственных культур Активность ферментов азотного, углеводного, фосфорного, серного, липидного обмена, окислительно-восстановительных ферментов, участвующих в биодеградации углеводородов, определяли по методам, описанным Ф.Х.Хазиевым (1976, 1990,2005)

1 азотного обмена

- протеазы субстрат - 1,5% казеин, время инкубации 24 часа, температура инкубации 30°С, активность выражали в мг тирозина на 1г почвы за 24 часа

- уреазы. субстрат 10% мочевина, время инкубации 24 часа, температура инкубации 30°С, активность выражали в мг ИН3 на 1г почвы за 24 часа

- аспарагиназы субстрат 3,3% аспарагин, время инкубации 48 часов, температура инкубации 30°С, активность выражали в мг ЫНз на 1г почвы за 48часов

- глутаминазы 3% глутамин, время инкубации 24 часа, температура инкубации 30°С, активность выражали в мг N113 на 1г почвы за 24 часа

- нитратредуктазы субстрат 1% азотнокислый калий, время инкубации 24 часа, температура инкубации 30°С, активность выражали в мг восстановленного ТЧОз'на Юг почвы за 24 часа

- нитритредуктазы субстрат 0,5% раствор НаЖ)2, время инкубации 24 часа, температура инкубации 30°С, активность выражали в мг восстановленного Т>Ю2"на Юг почвы за 24 часа.

- гидроксиламинредуктазы субстрат 0,5% солянокислый гидроксиламин, время инкубации 5 часов, температура инкубации 30°С, активность выражали в мг восстановленного ЫН2ОН на 1г почвы за 5 часов

2 карбогидраз:

- инвертазы субстрат 5% сахароза, время инкубации 24 часа, температура инкубации 30°С, активность выражали в мг глюкозы на 1г почвы за 24 часа

- целлюлоз субстрат 50мг целлофана, время инкубации 10 дней, температура инкубации 30° С, активность выражали в мг глюкозы на 20г почвы

- амилаз субстрат 2% раствор крахмала, время инкубации 24 часа, температура инкубации 30° С, активность выражали в мг мальтозы на 1г почвы за 24 часа

- ксипаназы субстрат 1% ксилан, время инкубации 3 суток, температура инкубации 30° С, активность выражали в мг ксилозы на 1мл реакционной смеси

3 оксидоредуктаз:

- каталазы субстрат 3% Н202, время инкубации 1 мин, температура инкубации 30°С, активность выражали в мл 02 на 1г почвы за 1 мин

- дегидрогеназ субстрат 1% тритетразолий хлористый, время инкубации 24 часа, температура инкубации 30°С, активность выражали в мг формазана на Юг почвы за 24 часа Для определения активности дегидрогеназ нами был дополни-

тельно введен контроль для нефтезагрязненной почвы без субстрата, так как в спиртовой элюат экстрагируются сильно измененные в гипергенных условиях окисленные компоненты нефти, которые значительно завышают данные по де-гидрогеназной активности

- пероксидаз субстрат 1% гидрохинон, 1 мл 0,05% перекись водорода, время инкубации 1час, температура инкубации 30°С, активность выражали в мг 1,4-и-бензохинона на 1 г почвы за 1 час

- полифенопоксидаз субстрат 1% гидрохинон, время инкубации 1час, температура инкубации 30° С, активность выражали в мг 1,4-и-бензохинона на 1г почвы за 1 час

- аскорбатоксидазы субстрат 1% аскорбиновая кислота, время инкубации 1час, температура инкубации 30°С, активность выражали в мг дигидроаскорби-новой кис юты на 100г почвы за 1час

4 фосфогидролаз:

- фосфатазы субстрат 1% фенолфталеинфосфат натрия, время инкубации 1час, температура инкубации 30°С, активность выражали в мг фенолфталеина на 1г почвы за 1час

- фитазы. субстрат 5% пирофосфат натрия, время инкубации 1час, температура ин*убации 30° С, активность выражали в мг Р205 на Юг почвы за 1час

- АТФазы субстрат 0,02М АТФ-Ыа, время инкубации 1час, температура инкубации 30° С, активность выражали в мг Р на ЮОг почвы за 1час

- нуклеаз (РНК-аза, ДНК-аза) субстрат РНК или ДНК, время инкубации 1час, темпгратура инкубации 30°С, активность выражали в мг деполимеризован-ной нуклеиновой кислоты за 1 час на 1г почвы

5 серного обмена:

- цистеиндегидрогеназы. субстрат 0,ЗМ раствор цистеина, время инкубации 2 часа, температура инкубации 30°С, активность выражали в мг формазана на Юг почвы за 2часа

- сульфатредуктазы. субстрат 0,5н Ыа2В04, время инкубации неделя, температура инкубации 30°С, активность выражали в мг восстановленного БО2-,» на 1 г почвы

- сульфитредуктазы субстрат 0,6М сульфит натрия, время инкубации 24 часа, температура инкубации 30°С, активность выражали в мг восстановленного 802-з на 1 г почвы за 24 часа

- сульфидоксидазы субстрат 1% №28, время инкубации 48 часов, температура инкубации 30°С, активность выражали в мг 802-4 на ЮОг почвы за 24 часа

- сульфитоксидазы субстрат 0,5М раствор сернистокислого натрия, время инкубации 1 час, температура инкубации 30°С, активность выражали в мг 802-3 на 1г почвы за 1 час

- арилсульфатазы субстрат 1% раствор п-нитрофенилсульфата калия, время инкубации 1 час, температура инкубации 30°С, активность выражали в мг Б на ЮОг почвы за 1 час

6 гидролазы эфиров карбоновых кислот

- триацилглицерол-лилазы Методика модифицирована Вместо подсолнечного масла в качестве субстрата использовали 3,3% оливковое масло, эмульгированное на ультразвуковом диспергаторе УЗДН - 1 в поливиниловом спирте, время инкубации 72 часа, температура инкубации 30°С, активность выражали в мл 0,05N КОН на 1г почвы.

Учет численности основных физиологических групп микроорганизмов проводили общепринятыми методами посева почвенной суспензии на агаризо-ванные питательные среды гетеротрофные микроорганизмы - на МПА, целлю-лозоразрушающие аэробы - на среду Гетчинсона, актиномицеты - на КАА, грибы - на среду Чапека, сульфатвосстанавливающие бактерии (СВБ) - на среду Постгейта, тионовые бактерии - на среду Ваксмана и Бейеринка, нитрификаторы I и II фаз - на голодный агар с аммониево-магниевыми солями, углеводородо-кисляющие микроорганизмы - на среду Ворошиловой - Диановой (Егоров, 1976, Колешко, 1981, Методы , 1991) Агрохимические и агрофизические анализы почв проводили общепринятыми методами (Аринушкина, 1970, Вадюнина, Корчагина, 1989) Содержание остаточных нефтепродуктов определяли горячей экстракцией метиленхлоридом (McGill, Rowell, 1980), содержание серы - спектральным методом на инфракрасном анализаторе ИК-4250, интенсивность дыхания почв по А Ш Галстяну (1974), коэффициент минерализации углеводородов по Н.М Исмаилову с соавт (1984)

Статистическая обработка результатов проводилась по Б А Дмитриеву (1995) и с использованием пакета прикладных программ Excel, Statistica V 4 5 В таблицах приведены среднестатистические данные

В главе 3 «Влияние нефтяного загрязнения на агрохимические свойства почв и распределение нефти по профилю» показан характер распределения сырой нефти по профилю серой лесной почвы после загрязнения и через три года Установлено изменение агрофизических и агрохимических свойств серой лесной и темно-серой лесной почв при загрязнении сырой и товарной нефтью (структурно-агрегатный состав, содержание общего углерода, поглощенных катионов, рН, содержание аммиачного и нитратного азота, подвижного фосфора) Степень их изменчивости зависела от свойств почвы и типа загрязняющей нефти

В главе 4 «Ферменты обмена азотсодержащих веществ в нефтезагряз-ненных почвах» приведены результаты изучения влияния различных видов и доз нефти на пул ферментов азотного обмена Показано, что с ростом дозы нефти активность протеаз снижалась пропорционально концентрации поллютанта (табл 1), параллельно отмечалось уменьшение содержания аммиачного и нитратного азота В течение продолжительного времени (7-8 лет) активность про-теазы оставалась ниже контрольного значения и только через 10 лет в вариантах опыта с концентрацией нефти 8 л/м2, 16 л/м2 становилась выше, что свидетельствовало о длительности восстановления процесса протеолиза в нефтезагрязнен-ных почвах

Таблица 1

Аш ивность гидролаз обмена азотсодержащих веществ серой лесной почвы в слое АПах в разные сроки после загрязнения товарной нефтью (микрополевой

опыт)

Ферменты Сроки Концентрация нефти, л/м2 НСР о 95

0 8 16 25

Протеаза,мг тирозина 1 мес 0,33 0,24 0,12 0,05 0,09

6 мес 0,32 0,20 0,10 0 0,11

12 мес 0,33 0,16 0,08 0,02 0,10

Уреа:.а, мг NH3 1 мес 0,39 0,48 0,68 1,24 0,10

6 мес 0,36 0,52 0,74 1,20 0,07

12 мес 0,37 0,53 0,76 1,20 0,10

Аспарагиназа, мг NH3 1 мес 0,05 0,04 0,03 0,02 0,02

6 мес 0,05 0,04 0,03 0,02 0,02

12 мес 0,05 0,04 0,03 0,02 0,03

Глутаминаза, мг NH3 1 мес 0,58 0,41 0,24 0,10 0,12

6 мес 0,62 0,40 0,20 0,08 0,15

12 мес 0,60 0,40 0,18 0,08 0,15

В сгрой лесной почве, загрязненной сырой и товарной нефтью (обессоленной, обезвоженной), гидролиз мочевины, осуществляемый уреазой, возрастал (табл 1) Высокие значения активности уреазы не всегда благоприятны, так как приводили к значительным потерям азота мочевины

Характер изменения активности ферментов зависел и от состава углеводородов Из изученных фракций нефти циклогексан и н-гексадекан повышали активность уреазы, ароматические углеводороды оказывали ингибирующий эффект (рис 1)

Это, очевидно, связано с наличием в их составе соединений фенольной и хиноидной природы (Долгова, 1975, Douglas, Bremner, 1971, Gonzales, Carcedo et al, 1982), что подтверждалось также исследованиями по влиянию фракций ЛГК (легкий газойль коксования), ЭМ II (экстракт второй масляной фракции) и Г (гудрон) на активность уреазы Наибольшее ингибирующее действие через сутки после зафязнения даже при минимальной концентрации 0,5% оказывала фракция нефти ЛГК, которая содержала в своем составе ароматические углеводороды

Из пула ферментов, участвующих в обмене азоторганических соединений, нефть значительно угнетала активность аспарагиназы, глутаминазы в серой лесной почве (табл. 1). Это связано, очевидно, с тем, что при нефтяном загрязнении в почве уменьшалось содержание аминокислот, так как в составе связанных и свободных аминокислот азоторганического комплекса почв аспарагин и аспара-гиновая кислота составляют их доминирующую часть (Адерихин, Щербаков, 1974) Между двумя этими величинами нами установлена тесная корреляционная связь (г = 0,90-0,92, р<0,05)

ГШ,

О 0,5 1 2 ароматическая фракция,%

10 -г

О 0,5 1 2

циклогексан,%

10 8 6 -4 -

2 -О

О 0,5 1 2 н -гексадекан, %

□ 1мес.

□ 6 мес.

Рис.1. Влияние различных концентраций ароматических фракций, цикло-гексана, н-гексадекана на активность уреазы.

Нитрат-, нитритредуктаза и гидроксиламинредуктаза в анаэробных условиях участвуют в процессах восстановления окисленных форм азота до аммиака. Активность нитрат- и нитритредуктазы под действием нефти в почве снижалась, а гидроксиламинредуктазы повышалась (табл.2).

Таблица 2

Активность редуктаз азотного обмена в нефтезагрязненной серой лесной

почве

Концентрация нефти, л/м2 Нитритредуктаза, мг Ж)2~ Нитратредук-таза, мг N03" Гидроксиламинредуктаза, мг МН2ОН

1 мес. 6 мес. 12 мес. 1 мес. 6 мес. 12 мес. 1 мес. 6 мес. 12 мес.

0 0,87 0,86 0,86 1,25 1,32 1,27 1,85 1,80 1,72

8 0,76 0,75 0,74 1,01 1,00 0,94 2,16 2,44 2,08

16 0,36 0,32 0,28 0,65 0,52 0,57 2,59 2,62 2,81

25 0,12 0,10 0,07 0,28 0,12 0,08 3,18 3,57 3,44

НСР 0.95 0,09 0,07 0,09 0,05 0,07 0,05 0,41 0,63 0,58

Выявлена тесная связь между активностью этих ферментов (г = 0,99 для нитрат- и г = 0,92 для нитритредуктазы; р<0,05) и нитрификационной активностью почвы. Низкая нитрификационная активность нефтезагрязненной почвы и

низкое содержание нитратов (Хазиев и др , 1988) свидетельствовало о незначительном содержании специфического субстрата для образования и функционирования этих ферментов в почве Повышение гидроксиламинредуктазной активности, вероятно, связано с тем, что восстановление нитратов в загрязненных почвах шло по пути ассимиляционной (неспецифической) денитрификации Косвенным свидетельством этого являлось повышение содержания аммиачного азота в почве Между активностью гидроксиламинредуктазы и содержанием аммиачных форм азота в загрязненной почве выявлена положительная корреляционная связь (г = 0,76, р<0,05)

Таким образом, при загрязнении почв нефтью подавлялась активность большинства изученных ферментов, участвующих в обмене азотсодержащих веществ Нефтяные углеводороды неоднозначно влияли на их активность

В главе 5 «Активность карбогидраз в нефтезагрязненных почвах» показан характер изменений активности группы ферментов - карбогидраз, участвующих в круговороте углерода и расщепляющих углеводы различной природы и происхождения В почвах, подвергшихся загрязнению сырой нефтью, ингиби-ровалась активность инвертазы, что обусловлено снижением численности и активности целлюлозоразрушающих микроорганизмов (г = 0,5 в первый год после загрязнения, на второй - 0,79, на третий - 0,76, р<0,05), соответственно это сопровождалось уменьшением содержания в почве дисахаридов — субстрата инвертазы, структурных фракций 0,25мм, в которых сосредоточена максимальная активность инвертазы (в первый год исследований коэффициент корреляции составил 0,46, на второй год г = 0,60, р<0,05)

Характер влияния нефтяного загрязнения определялся свойствами загрязняемой почвы, главным образом, ее естественной буферностью Активность инвертазы тгмно- серой лесной почвы, загрязненной товарной нефтью, в основном была на уровне контроля или выше на протяжении трех лет наблюдений, а в серой лесной почве - ниже контрольного уровня в течение трех лет (табл 3), и степень ее ингибирования пропорциональна концентрации загрязнителя

Таблица 3

Изменения инвертазной активности (мг глюкозы) темно-серой среднесуг-линистой и серой лесной тяжелосуглинистой почв при загрязнении различными дозами товарной нефти (Апах 0-20см)__

Концентрация нефти, л/м2 Темно-серая лесная почва Серая лесная почва

1 2 3 4 2 3 4 5

0 42,6 44,7 36,5 34,0 15,7 13,9 17,2 17,2

8 43,3 48,4 34,8 31,9 9,9 12,4 12,2 23,3

16 41,3 48,1 35,5 33,5 9,1 11,1 13,2 26,1

25 39,6 40,7 31,7 35,2 9,0 10,6 9,2 28,6

НСР 0.О5 2,3 3,5 1,5 2,7 0,9 1,3 2,4 1,7

Примечание 1 - через 3 суток после загрязнения, 2 - через год, 3 - через 2 года, 4 - через 3 года, 5 - через 10 лет

По истечении времени нивелировались различия в активности инвертазы между вариантами с различными дозами загрязнения Через 10 лет ее активность в загрязненной серой лесной почве была выше, чем в контроле (табл 3) и она увеличивалась пропорционально степени загрязнения Стимуляторами ее активности могли быть продукты метаболизма нефти или остаточные компоненты растений

Снижение активности ферментов целлюлазы, амилазы, ксиланазы при загрязнении серой лесной почвы нефтью прямо пропорционально концентрации внесенного в почву поллютанта (табл 4) В качестве иллюстрации приведены данные по активность целлюлазы, так как характер влияния нефти на активность этих ферментов одинаков

Таблица 4

Влияние товарной нефти на целлюлазную активность серой лесной почвы (Апах, 0-20см)_

Концентрация нефти, л/м2 Целлюлаза, мг глюкозы

3 сут 1мес 6 мес 12 мес

0 0,53 0,52 0,53 0,52

8 0,48 0,41 0,38 0,30

16 0,37 0,23 0,21 0,12

25 0,26 0,12 0,10 0,07

НСР 0.95 0,09 од 0,1 0,07

Снижение активности ксиланазы с увеличением концентрации нефти связано в первую очередь с уменьшением поступления в почву ксиланов вместе с растительным опадом В темно-серой лесной почве наблюдалась аналогичная закономерность Снижение целлюлазной, амилазной активности при загрязнении коррелировало с численностью в них целлюлозоразрушающих микроорганизмов (г = 0,78-0,97, р<0,05), являющихся специфическими продуцентами цел-люлаз

Н-парафины и циклопарафины стимулировали активность инвертазы, целлюлазы, амилазы, ксиланазы прямо пропорционально их концентрации (0,5-2%) в течение всего лабораторного опыта Ароматические фракции ингибировали активность этих ферментов, причем их ингибирующее действие с увеличением концентрации возрастало (рис 2) Наличие полициклических ароматических углеводородов в легкой фракции нефти (ЛГК) делало ее токсичной для инвертазы даже при минимальном уровне загрязнения - 0,5% Данный эффект сохранялся и через три месяца инкубации

Конечные продукты метаболизма нефти в почве (кислородсодержащие соединения спирты, кислоты, альдегиды и др (Пиковский, 1993)) инактивируют пул ферментов, участвующих в углеводном обмене, особенно салициловая кислота (табл 5) Очевидно, при длительном загрязнении может происходить инак-

тивация ферментного комплекса продуктами окисления или сополимеризации нефти в почве.

Таким образом, загрязнение почвы нефтью снижало активность карбогид-раз. Характер этих изменений зависел от состава нефти, ее химических и физических снойств, от естественной буферности почв.

инвертаза, мг глюкозы амилаза, мг мальтозы

углеводороды углеводороды

целлюлаза, мг глюкозы ксиланаза, мг ксилозы

2 3

углеводороды

1 2 3 углеводороды

Рис. 2. Влияние нефтяных углеводородов (2%) на активность инвертазы, целлюлазы, амилазы, ксиланазы в серой лесной почве через 3 мес.: 1 - контроль; 2 - н-парафины; 3 - циклопарафины; 4 - ароматические углеводороды.

Таблица 5

Влияние некоторых продуктов окисления углеводородов (2%) на активность гидролаз, участвующих в круговороте углерода серой лесной почвы_

Вариант Инвертаза, мг глюкозы Амилаза, мг мальтозы Целлюлаза, мг глюкозы Ксиланаза, мг ксилозы

Гексадециловый спирт Пальмитиновая кислота Бензойная кислота Салициловая кислота 16,6 ±0,9 12,4 ±0,06 8.3 ± 0,04 1.4 ±0,07 0,38 ± 0,02 0,24 ± 0,01 0,18 ±0,01 0,12 ±0,01 0,41 ±0,02 0,28 ±0,01 0,10 ± 0,01 0,06 ±0,01 0,31± 0,02 0,22 ±0,01 0,12 ±0,01 0,08 ±0,01

В главе 6 «Фосфогидролазная активность нефтезагрязненных почв»

рассмотрены материалы, полученные в экспериментах по влиянию нефтяного загрязнения на особенности обмена фосфорсодержащих веществ Загрязнение серой лесной почвы товарной нефтью вело к снижению активности фосфатазы с ростом дозы загрязнителя на протяжении всего периода наблюдений (табл 6)

Таблица 6

Влияние товарной нефти на рН, содержание подвижного фосфора, фосфа-

Доза нефти, л/м2 рНводн Подвижный фосфор, мг Р205/ 100 г почвы Фосфатаза, мг фенолфталеина

1 1 2 1 2 3 4

0 6,2 4,0 3,5 4,23 3,15 5,29 6,4

8 6,0 2,9 1,8 2,12 2,02 1,56 9,0

16 5,9 0,8 0,6 1,76 1,26 1,34 4,0

25 5,8 0,02 0,12 0,18 0,27 0,95 3,4

НСР 0.95 0,5 0,5 1,1 1,0 0,7 0,5

Примечание- 1 - через 1 мес , 2 - через 6 мес , 3 - через 12 мес , 4 - через 10

лет

Высокие значения фосфатазы через 10 лет в варианте опыта с концентрацией нефти 8 л/м2, вероятно, связаны как с почти полной биодеградацией нефти, так, возможно, и со стимулирующим эффектом продуктов ее разложения. Однако более высокие концентрации оставались токсичными и через 10 лет после внесения

Влияние н-парафиновых, циклопарафиновых и ароматических углеводородов было аналогичным влиянию на активность уреазы и карбогидраз Рост концентрации ароматических углеводородов и длительность срока их воздействия усиливал ингибирующий эффект

Гидролиз фитина - одной из основных форм почвенных фосфатов (Маркова, 1971) - осуществляется фитазами, уровень которых при нефтяном загрязнении серой лесной почвы значительно снижался (табл 7) при низких дозах нефти по сравнению с незагрязненной почвой на 16,7-22,2%, средних - на 50,0-55,6% и высоких - на 83,3-100%, что связано с токсичностью компонентов нефти

Загрязнение нефтью замедляло процессы разложения РНК и ДНК в серой лесной почве Одной из причин снижения их активности является высокая чувствительность нуклеаз к микроэлементам, которые поступают в почву с нефтью и могут быть ингибиторами этих ферментов (Юсупова и др, 1973)

Активность АТФазы в серой лесной почве низкая и редуцировалась пропорционально росту дозы загрязнителя (табл 7) вследствие токсичности нефти, влияющей на растения и животные, что вело к уменьшению поступления АТФ в почву и индукции АТФаз Снижение активности фосфогидролаз вело к умень-

шению содержания подвижного фосфора в нефтезагрязненной почве (г = 0,83, р<0,05) (габл 6)

Таблица 7

Влишие нефтяного загрязнения на активность фосфогидролаз в серой лесной почве'

Концентрация нефти, л/м2 Фитаза, мг Р2О5 РНКаза, мг РНК ДНКаза, мг ДНК АТФаза, мг Р

1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3

0 0,24 0,22 0,18 0,78 0,79 0,82 0,40 0,39 0,41 0,09 0,10 0,09

0,20 0,18 0,14 0,51 0,44 0,40 0,20 0,18 0,12 0,05 0,04 0,04

16 0,12 0,10 0,08 0,25 0,22 0,18 0,05 0,02 0,01 0,03 0,02 0,02

25 0,04 0,01 следы 0,11 0,08 0,04 0,01 0,01 следы 0,01 0,01 следы

НСР095 0,04 0,06 0,06 0,11 0,12 0,10 0,09 0,10 0,09 0,04 0,05 0,05

Примечание 1- через месяц, 2- через 6 месяцев, 3 - через 12 месяцев

Из вышеизложенного следует, что загрязнение нефтью серой лесной тяжелосуглинистой почвы вело к инактивации фосфогидролаз, уменьшению содержания подвижных фосфатов, ухудшению фосфорного режима в почве

В главе 7 «Ферменты обмена серусодержащих соединений в нефтезаг-рязненных почвах» рассмотрены особенности серного обмена в нефтезагряз-ненных почвах Сульфаты образуются в результате действия арилсульфатазы -фермента группы сульфогидролаз Загрязнение почвы низкими дозами товарной нефти повышало активность этого фермента, что связано с внесением в почву органических соединений серы с нефтью, токсический эффект которых в низких концентра циях может не проявляться

При моделировании через 3 дня после загрязнения низкие дозы поллютанта увеличивали активность цистеиндегидрогеназы (ЦДГ) на 66% по сравнению с контрольным вариантом Дальнейшее повышение дозы нефти приводило к снижению активности до фонового уровня и ниже Вероятно, при невысоких концентрациях нефтяного загрязнения дополнительным субстратом могут выступать меркаптаны, содержащие БН-группы Через месяц токсичность нефти в отношении 1ДДГ снижалась, и активность ее в загрязненных вариантах увеличивалась, достигая наибольшего значения при 4% загрязнении В микрополевых опытах через 3 дня и через 6 месяцев наблюдалась аналогичная картина (табл 8) В промежуточные сроки активность ЦДГ была снижена

Первоначальное загрязнение выщелоченного чернозема и серой лесной почвы нефтью приводило к увеличению содержания БОз2" вследствие роста активности почвенной сульфитоксидазы Причем этот показатель при повышении дозы нефти уменьшался, но, тем не менее, оставался выше контрольного варианта Появле ние токсичных для данного фермента продуктов, образовавшихся в

результате разложения нефти, через полгода снижало активность сульфитокси-дазы при всех концентрациях нефти

В серой лесной почве, в отличие от выщелоченного чернозема, уменьшение активности сульфитоксидазы носило нелинейный характер, и интенсивность окисления сульфитов была снижена вследствие ее меньшей устойчивости к действию загрязнителя В полевых опытах с увеличением концентрации поллютанта активность этого фермента снижалась по сравнению с контрольным вариантом (табл 8) в течение первых 3 месяцев после загрязнения нефтью

Через 6 месяцев достоверные изменения активности фермента в различных вариантах опытов не наблюдались (за исключением варианта с дозой 25 л/м2 нефти, в котором интенсивность окисления сульфитов нарастала)

Таблица 8

Влияние товарной нефти на активность ферментов обмена серусодержащих веществ и содержание серы в серой лесной почве_

Фермент Концентрация нефти, л/м НСР

время 0 8 16 25 0,95

Цистеиндегидрогеназа, мг формазана 1 0,43 0,60 0,29 0,31 0,07

2 0,45 0,37 0,20 0,19 0,08

3 0,59 0,52 0,29 0,32 0,06

4 0,35 0,51 0,21 0,20 0,07

Сульфитоксидаза, мг БОз 1 5,3 5,0 5,1 4,8 1,1

2 6,1 4,2 4,1 3,6 1,0

3 14,8 14,0 13,7 13,2 1,2

4 1,7 1,7 1,7 2,0 0,5

Сульфидоксидаза, мг БОд 1 4,2 4,2 4,0 3,9 0,9

2 2,9 3,3 2,8 2,8 0,8

3 0,5 1,0 0,8 1,3 0,4

4 2,0 2,2 2,6 2,5 0,6

Сульфитредуктаза, мг мг 803 1 2,3 2,1 1,6 1,7 0,6

2 8,0 7,5 7,4 7,2 1,0

3 7,1 6,6 5,7 5,4 0,9

4 1,0 1,0 1,2 1,0 0,5

Сульфатредуктаза, мг Б04 1 4,0 4,2 4,3 5,4 1,1

2 10,3 11,5 11,1 10,9 1,5

3 5,2 4,0 4,0 5,3 1,0

4 4,7 4,7 5,8 4,4 1,2

Сера, мг/кг 1 4,0 14,8 16,2 18,2 0,5

2 4,8 13,5 15,9 23,6 0,5

3 3,7 7,0 9,5 8,4 0,4

4 5,0 5,1 4,6 4,9 1,0

рНводн 2 6,2 6,0 5,9 5,8 0,5

Примечание* 1 - через 3 суток после загрязнения, 2 - через 1 мес , 3- через 3 мес , 4 - через 6 мес

Изучение активности сульфидоксидазы показало, что в лабораторных опытах через 3 дня низкие концентрации нефти вызывали незначительное повышение ее активности, а увеличение дозы загрязнителя приводило к снижению Прямо пропорционального снижения интенсивности окисления сульфидов с увеличением концентрации нефти не наблюдалось и в полевом опыте (табл 8) Через 3 месяца после внесения загрязнителя затормаживающее действие нефти, отмечаемое в первые периоды наблюдения, нивелировалось, и отмечалось усиление интенсивности окисления сульфидов Таким образом, низкие дозы нефти стимулировали активность ферментов серного обмена или не влияли на нее, а высокие-ингибировали

В первые дни после загрязнения чернозема выщелоченного и серой лесной почвы рнзкими и средними дозами нефти наблюдалось увеличение активности сульфитредуктазы на 16-26%, а высокими дозами - ее уменьшение Через 6 мес при 6% загрязнении активность этого фермента в черноземе выщелоченном ин-гибировалась Критическая доза поллютанта в серой лесной почве составляла для этого фермента 15% Далее с увеличением срока инкубации критическая доза нефти в ней сдвигалась в сторону более низких концентраций через 1 мес -это 10%, через 3 мес - 4%, через полгода -1%, что может быть обусловлено появлением токсичных продуктов деградации нефти

В полевых условиях нефтяное загрязнение приводило к снижению активности сульфитредуктазы в течение трех месяцев наблюдений (табл 8), и к концу вегетации ее активность выравнивалась Через 3 дня после загрязнения активность сульфатредуктазы повышалась прямо пропорционально дозам нефти Через месяц активность фермента на фоне нефтяного загрязнения оставалась выше контрольного варианта, но наибольший стимулирующий эффект проявлялся при низкой (8 л/м2) концентрации поллютанта В последующие сроки инкубации ее активность повышалась при дозе 25 л/м2 - через 3 мес и при 16 л/м2 -через б мес, что, очевидно, связано с изменением окислительно-восстановительного режима почвы (табл 8)

Ингибирование активности сульфитоксидазы и сульфитредуктазы в нефте-загрязненной почве компенсировалось увеличением численности сульфатвос-станавливающих (рис 3) и тионовых бактерий, которые продуцировали в среду сульфиты - субстрат для проявления активности рассмотренных оксидоредуктаз серного обмена, что способствовало сохранению процессов биологической трансформации серы

В главе 8 «Влияние нефтяного загрязнения на активность оксидоредуктаз» рассмотрена активность ферментного пула оксидоредуктаз. пероксидаз, полифен олоксидаз, каталазы, дегидрогеназ, аскорбатоксидазы в нефтезагрязнен-ных почвах.

Пу1 полифеиолоксидаз (ПФО) и пероксидаз (ПО) играет важную роль в процесс.« гумификации, разрушении органических соединений ароматического ряда (Раськова, 1995)

мес мес

Рис. 3. Численность сульфатвосстанавливающих бактерий в зафязненных товарной нефтью черноземе выщелоченном (А) и серой лесной почве (Б).

В серой лесной почве активность ПО и ПФО была ниже, чем в выщелоченном черноземе, в котором биохимические реакции с участием данных ферментов протекали энергичнее в начальный период после загрязнения, затем затухали. Ингибирование активности этих ферментов средними и высокими дозами нефти наблюдалось в полевых условиях (табл. 9) на серой лесной почве и в лабораторных на серой лесной и темно-серой лесной почвах. По прошествии длительного времени после загрязнения почвы (через 10 лет) активность ПО и ПФО стимулировалась, что связано со значительным восстановлением агроэкологических свойств почв. Чем выше концентрация нефти и длительность воздействия загрязнителя, тем интенсивнее шла биодеградация. При этом возрастали интенсивность дыхания и коэффициент минерализации углеводородов (табл.9).

Нефтепродукты разной степени конденсированности, используемые для получения структурообразователей, в серой лесной почве, в основном, обладали ингибирующим действием за исключением гудрона. И в дальнейшем, через 1 мес. и 12 мес., наблюдалось его ингибирующее действие. Токсичнее оказался ДГФ (дистиллят газойлевой фракции), имеющей в своем составе большое количество ароматических углеводородов. По уровню снижения ингибирующего действия нефтепродукты в дозе 0,5% через 3 суток после загрязнения располагались следующим образом ДГФ > асфальтит > бензин > крекинг-остаток (рис.4). С ростом концентрации загрязнителя ПО активность увеличивалась, кроме варианта с асфальтитом, который менее доступен ферментативному окислению.

Аналогичная закономерность сохранялась на протяжении всего срока наблюдения. При загрязнении нефтепродуктами в концентрации 8% их можно было расположить по убыванию стимулирующего действия на ПО в ряд: бензин > асфальтит > ДГФ > крекинг-остаток. Низкие дозы нефти стимулировали активность ПО и ПФО, высокие - ингибировали.

Таблица 9

Влияние нефтяного загрязнения на активность ферментов, коэффициент

Время Концентрация нефти, л/м2 Аскорба-токсидаза, мг ДГАК Перокси-даза, мг парабен-зохинона Полифе-нолоксида-за, мг па-рабензо-хинона Коэффициент минерализации со2, мг/г почвы

3 сут 0 34,5 0,13 0,18 1,36 2,98

8 56,2 0,13 0,19 1,39 3,28

16 66,2 0,11 0,15 1,36 1,58

25 71,0 0,09 0,12 1,46 1,21

1 мес. 0 36,2 0,13 0,18 1,42 2,80

8 58,5 0,15 0,20 1,29 3,24

16 70,5 0,09 0,14 1,54 1,86

25 75,2 0,08 0,11 1,44 1,06

6 мес. 0 35,0 0,13 0,18 1,36 2,75

8 59,5 0,16 0,21 1,32 4,12

16 71,2 0,09 0,13 1,45 2,80

25 81,5 0,05 0,10 1,88 1,98

12 мес. 0 37,5 0,13 0,17 1,33 2,84

8 63,0 0,17 0,23 1,22 3,05

16 74,4 0,07 0,11 1,71 4,50

25 84,0 0,04 0,08 1,81 3,98

НСР о.95 1,49 0,06 0,07 0,22 0,30

2 3 4

нефтепродукты

1

I контроль QO,5% ЕЭ 5% О 8%

Рис.4. Влияние нефтепродуктов разной степени конденсированности на активность пероксидазы через трое суток после загрязнения. 1 - бензин, 2 - дистиллят газойлевой фракции, 3 - гудрон, 4 - крекинг - остаток, 5 - асфальтит.

При загрязнении нефтью в почву попадали фенольные компоненты, которые косвенно, через образование хинонов и других окисленных продуктов, вызывали в почве окисление ряда веществ, в том числе и аскорбиновой кислоты Окисление ее может проходить и при участии аскорбатоксидазы, активность которой возрастала пропорционально увеличению концентрации нефти С увеличением срока инкубации активность Фермента цоьниалась, и оставалась достоверно выше контрольного варианта (рисА53 Между интенсивностью выделения С02 и аскорбатоксидазной активностью существует тесная корреляция (г = 0,67-0,88, р<0,05), подтверждающая взаимосвязь этих процессов, что является косвенным свидетельством ее участия в процессах биотрансформации углеводородов

С окислительно-восстановительными процессами в почве, происходящими при участии каталазы и дегидрогеназ, связан распад нефтяных углеводородов (Бкщтз, 1978, Ма^евт й а1, 2000) Активность этих ферментов в опытах на серой лесной и темно-серой лесной почвах через 3 суток после загрязнения нефтью была достоверно ниже по сравнению с активностью незагрязненного варианта

Рис 5 Активность аскорбатоксидазы в серой лесной почве, загрязненной различными концентрациями нефти 1 - незагрязненная почва, 2 -8 л/м2, 3-16 л/м2, 4-25 л/м2.

Интенсификация активности дегидрогеназы в темно-серой лесной почве в варианте с максимальным загрязнением на второй и третий год после внесения нефти, а в серой лесной почве - только на третий год, может служить одним из показателей большей способности темно-серой лесной почвы к восстановлению при загрязнении высокими дозами нефти по сравнению с серой лесной Через десять лет при высоких концентрациях нефти активность каталазы возрастала почти в два раза по сравнению с активностью незагрязненной почвы, а дегидрогеназы - в 1,8 раза Активность этих ферментов тесно связана с общей численностью микроорганизмов соответственно для каталазы (через три дня после за-

грязнения г = 0,68, через год - г = 0,40, через два - г = 0,63, через три - г = 0,61), для дегидрогеназы (г = 0,67, г = 0,70, г = 0,69, г = 0,48, р<0,05)

Сырая нефть в оптимальных и полевых условиях (табл. 10) снижала активность каталазы так же, как и товарная (обессоленная и обезвоженная) на протяжении всего срока обследования, но не оказывала существенного влияния на процессы анаэробного дегидрирования

Из фракций нефти ЛГК являлся наиболее токсичной для этих ферментов. Уже через три дня с ростом концентрации ингибирующее действие усиливалось ЭМ и ЭМ + Г в концентрации 0,5% оказывали стимулирующее действие на активность окислительно-восстановительных ферментов, что может явиться косвенным доказательством их участия в биодеградации данной группы углеводородов ЛГК вследствие своей большей летучести уже через три месяца становился менее токсичным Во всех вариантах опыта по истечении одного года активность дегидрогеназы снижалась в сравнении с ее активностью в незагрязненной почве

Внес ение в серую лесную почву отдельных углеводородов (н-гексадекана, циклогекс ана, бенз(а)пирена) в различных концентрациях показало, что цикло-гексан и н-гексадекан стимулировали активность каталазы и дегидрогеназы, а бенз(а)пирен ингибировал

Таблица 10

Активность каталазы и дегидрогеназы в серой лесной почве, загрязненной сырой нефтью (лабораторный и полевой опыт) _

Варианты Катал аза, мл 02 Дегидрогеназа, мг формазана

1 2 3 1 2 3

Почва (контроль ла- 5,8 5,5 4,4 2,9 2,6 2,0

бор опыт)- Л

Л + нефть 2,9 1,7 1,8 6,1 2,2 0,8

Почва (контроль по- 4,5 6,9 7,5 3,5 2,4 2,9

левой опыт) - П

П + нефть 2,3 3,0 3,7 3,6 3,0 2,7

НСР о.95 1,1 0,5 0,1 0,6 0,6 0,2

Примечание лабораторный опыт 1 - 1 мес ,2-3 мес ,3 — 1 год, полевой опыт 1-1 год, 2-2 года, 3-3 года

Таким образом, окислительно-восстановительные реакции, протекающие с участием оксидоредуктаз интенсивнее в почвах с большей буферной емкостью Через деспъ лет активность данной группы ферментов возрастала Нефтяные фракции в силу различного углеводородного состава по-разному влияли на изученные ферменты Нефтяное загрязнение повышало активность аскорбатоксида-зы пропорционально концентрации загрязнителя

В главе 9 «Активность липазы в нефтезагрязненных почвах» приведены результаты изучения липазной активности в почвах загрязненных нефтью Исследования показали, что через три дня после загрязнения серой лесной поч-

вы происходило снижение активности липазы пропорционально дозе загрязнителя (табл.11)

Таблица 11

Активность липазы и содержание остаточной нефти в нефтезагрязненной серой лесной почве (полевой опыт)__

Концентрация нефти, г/100г почвы Активность липазы, мл 0,05 N КОН Остаточная нефть, г/ЮОг

1 2 3 1 2 3

0 9,68 10,11 9,76 10,76 - - -

5,67 8,29 11,25 11,89 12,89 4,75 4,12 0,65

7,32 7,92 10,10 12,34 13,45 6,31 5,23 1,82

9,65 7,22 10,38 11,43 13,25 8,45 7,43 2,63

10,11 6,38 8,31 7,98 10,55 9,11 8,34 3,42

НСР 0.95 0,9 1,2 1,0 1,0 0,6 0,8 0,8

Примечание 1 - через 3 сут., 2 - через 6 мес 3 - через год ;4- через 2 года

По-видимому, первоначальный ингибирующий эффект связан с воздействием наиболее токсичных легких фракций В полевых условиях при воздействии низких концентраций загрязнителя активность фермента повышалась и через год превосходила значения контрольного варианта опыта, что, в первую очередь, связано с улетучиванием наиболее токсичных фракций. Высокие дозы поллю-танта (10,11г /100 г почвы) ингибпровали активность фермента в течение длительного периода. Через год этот показатель приближался до контрольных значений, но не достигал их Через два года липазная активность повышалась, превосходя контрольный уровень (табл 11)

Это связано с накоплением не разлагающихся и малоактивных биологических веществ, которые возникали в процессе биодеградации (Allard, Nelson, 1997), в частности, остаточных компонентов нефти Установлено, что по мере увеличения давности загрязнения почв нефтью выход липидов, в состав которых входят высокомолекулярные нелетучие углеводороды, возрастал (Пиковский, 1993, Амосова, Бочарникова, 1994, Бочарникова, Амосова, 1997).

Повышение интенсивности процессов липолиза связано и с тем, что в деградации липидов участвуют ферментные системы очень похожие на системы биодеградации нефти (Margesm et al, 1999) Численность углеводородокисляю-щих микроорганйзМов (УОМ) в лабораторных условиях 6 загрязненной Нефтью серой лесной почве значительно увеличивалась уже через 3 суток после постановки опыта. Через год в полевых условиях и 1 -3 месяцев в лабораторных численность УОМ на несколько порядков превосходила уровень фоновой почвы. Содержание нефти в почве уменьшалось К 6 месяцу убыль нефти составила 9,9% Выявлена обратная зависимость численности УОМ с содержанием остаточной нефти в почве (г = (- 0,89)- (-0,96), при Р<0,05)

Непосредственно после загрязнения почвы наиболее токсичными в отношении ли политических ферментов являлись легкие фракции нефти (бензин, дизельное топливо), содержащие значительное количество летучих токсичных углеводородов, которые в наибольшей степени ингибировали процессы липолиза в серой лесной почве, независимо от их дозы Известно, что летучие компоненты нефти ингибируют нефтеокисляющую активность микроорганизмов (Atlas, Ваг-tha, 1992) Токсический эффект моторного масла менее выражен Асфальтит -тяжелая фракция нефти, первоначально также обладал ингибирующим эффектом, вероятно за счет создания анаэробных условий При длительной инкубации почвы с нефтепродуктами и нефтью наблюдалось значительное повышение ли-политической активности

Таким образом, активность липазы в нефтезагрязненной серой лесной почве возрастала и коррелировала с увеличением численности УОМ, с уменьшением содержания остаточных компонентов нефти в почве

В главе 10 «Биологическая активность рекультивируемых почв» рассмотрено влияние различных приемов рекультивации на восстановление активности ферментов, участвующих в углеводном, серном, азотном, фосфорном обменах, и окислительно-восстановительные процессы

10.1 Влияние минеральных, органических удобрений и их сочетаний иа биологическую активность почв, загрязненных нефтью Проведенные исследования показали, что внесение полного минерального удобрения (NPK) неэффективно в интенсификации биохимической активности и численности изучаемых групп микроорганизмов нефтезагрязненной почвы Компостирование загрязненной нефтью почвы с органо-минеральным комплексом и навозом (при высоких дозах его внесения) ведет к достоверному повышению активности каталазы, дегидрогеназы, инвертазы и уреазы (на протяжении первых трех месяцев), численности бактерий на МПА, актиномицетов, целлюло-зоразрушащих аэробов, грибов, нитрификаторов Интенсификация биологической активности усиливала процессы биодеградации загрязнителя Если принять первоначальную дозу загрязнения 9,бг/ 100г почвы за 100%, то через месяц после постановки опыта в неудобренном варианте почвы разложилось 16,2 %, через три месяца - 22,8 %, а через год - 38,3 % нефти Внесение двойной дозы удобрений вело к росту биогенности почвы и снижению содержания нефти в большей степени, чем внесение одинарной дозы, что наблюдалось и в полевых опытах (табл 12) Это связано с созданием более благоприятных условий для роста и развития микроорганизмов Минеральные удобрения менее эффективны в ускорении процессов деградация нефти в почве, чем органические и органо-минеральный комплекс Так, в лабораторных условиях при внесении NPK за год разлагалось от 39,4 до 42, 8 % нефти, а при компостировании с навозом, комплексом NPK + навоз соответственно 42,2 и 46,3 %, и процессы минерализации углеводородов в этих вариантах протекали с большей интенсивностью В полевых условилх в почве разложилось 46 % нефти, то есть на 7,7 % больше, чем в лабораторных, а через два года процент разложившейся нефти составил 56,3%.

Следовательно, в деградации нефти наряду с биологическим фактором существенная роль принадлежит в полевых условиях, в отличие от лабораторных, и физико-химическим (температура, солнечная энергия) С течением времени процесс разложения нефти затормаживался В удобренных почвах процесс очищения шел быстрее, чем в неудобренных в первые два года, затем интенсивность биоразложения нефти была выше в неудобренной почве

Интегральным показателем плодородия почв является урожайность Уже в первый год при внесении полного минерального удобрения урожайность ячменя повысилась в 1,2-2,9 раза, органо-минерального комплекса - в 2,5-5,2 раза, навоза - в 2-3,8 раза С течением времени токсичность почвы снижалась Если в первый год после загрязнения урожайность на загрязненной почве была меньше в 11,9 раза, чем на незагрязненной, то на третий год - в 3,5 раза Однократное внесение удобрений оказалось менее эффективным, чем ежегодное Двойная доза вносимых удобрений повышала урожайность в большей степени, чем одинарная Так, ежегодное внесение двойной дозы органо-минеральных удобрений повышало урожайность горохо-ячменной смеси (зеленая масса) в 8,6 раза, а к третьему году урожайность ячменя в этом варианте достигала уровня незагрязненной почвы (табл 12)

Положительное влияние комплекса И^оР^К^о +140 т/га навоза проявлялось и в почвах, загрязненных различными фракциями нефти (ЛТК 6%, ЭМ 6%, Г 6%) Интенсивность дыхания через 1,3 и 12 месяцев после постановки опыта возросла в 2-4,5 раза, достоверно повышалась активность дегидрогеназы Усиливалась активность уреазы в течение трех месяцев (кроме варианта с ЛТК) Повышалась активность инвертазы в вариантах с загрязнением фракцией ЛГК В целом, компостирование загрязненной фракциями нефти почвы с комплексом М12оР18оК,8о + 140 т/га навоза повышало ее биологическую активность и ускоряло процессы биодеградации нефтяных углеводородов, что подтверждалось ростом коэффициента минерализации углеводородов

Таким образом, внесение комплекса навоз + ОТК в большей степени стимулирует биологическую активность загрязненной почвы, а, следовательно, процессы биодеградации нефтяных углеводородов

10.2. Использование активного ила для рекультивации почв, загрязненных нефтью

На серой лесной почве, загрязненной нефтью, внесение АИ через 3 суток после загрязнения снижало токсичность нефти для многих физиологических групп микроорганизмов. Так, разные дозы АИ поддерживали на фоновом уровне численность бактерий, растущих на КАА, аммонифицирующих бактерий, акти-номицетов, целлюлозоразрушающих микроорганизмов, олигонитрофилов и нит-рификаторов АИ активизировал биологические процессы в почве и повышал интенсивность ее дыхания, отмечался стойкий рост численности углеводородо-кисляющих микроорганизмов (рис 6) Внесение АИ благоприятно сказывалось и на биохимических параметрах почвы, возвращая к исходному уровню активность окислительно-восстановительных и гидролитических ферментов Актив-

ность дегидрогеназы при внесении АИ значительно возрастала, повышалась всхожесть семян и значительно интенсифицировалось биоразложение нефти (табл 13) Аналогичные данные получены и в полевых условиях.

АИ ускорял биодеградацию нефти, стимулировал жизнедеятельность мик-робиоты, 1 увеличив ал активность каталазы, дегидрогеназы, уреазы и инвертазы Внесение АИ позволило получить урожай ячменя в первый же год, значительно превышающий урожай на нефтезагрязненной почве, однако он не достигал уровня контрольного варианта (рис 7) В последующие годы урожай ячменя был несколько выше на рекультивируемой почве, чем на незагрязненной

Таблица 12

Влияние органических и минеральных удобрений на ферментативную активность и урожай сельскохозяйственных культур на серой лесной почве, загрязненной сырой нефтью

Варианты Катал аза, мл о2 Дегидрогеназа, мг формазана Инвертаза, мг глюкозы

1 2 3 1 2 3 1 2 3

Незагрязненная почва 4,5 6,9 7,5 0,3 0,3 0,2 3,5 2,4 2,9

Загрязненная почва - К 2,3 3,0 3,7 1,1 0,6 0,9 3,6 3,0 2,7

К+ЫбоРэдКсо- 1раз 2,9 2,6 3,1 0,9 0,9 0,4 3,7 2,7 2,3

К+^оРэд^о - ежегодно - 4,3 5,2 - 0,6 0,5 - 2,7 2,4

К+ М12оР18оК18о - 1 раз 2,9 2,7 4,1 1,0 0,8 0,7 4,2 2,6 2,1

К + К120Р180К180 - ежегодно - 3,0 3,6 - 0,8 0,7 - 2,5 2,4

К + МбоРадКзо + 70т / га навоза -1 раз 3,1 3,4 4,8 1,3 0,7 0,8 4,7 3,4 2,3

К + ЫбоРроКм + 70т / га навоза - ежегодно - 5,6 5,0 - 1,1 0,9 - 5,0 3,2

К + Т^120Р18оК1ао+ 140т / га навоза - 1 раз 4,6 6,2 6,2 1,6 0,9 1,1 5,9 4,6 4,0

К +К12оРц!оК18о+ 140т /га навоза - ежегодно - 4,1 5,7 - 1,1 2,1 - 5,2 3,9

К + 70т / га навоза -1 раз 3,6 5,0 4,9 1,1 0,8 0,8 4,8 3,9 2,2

К + 70т / га навоза -ежегодно - 5,7 4,6 - 1,5 1,3 - 3,6 3,9

К + 140т / га навоза - 1 раз 4,1 5,4 5,5 1,3 0,9 0,8 6,4 4,6 4,4

К + 140т / га навоза -ежегодно - 5,4 4,2 - 1,1 1,4 - 4,3 3,8

НСР о,95 1,2 0,8 0,3 0,6 | 0,2 0,2 1,2 1,3

Продолжение таблицы 12

Варианты Уреаза, мг ЫН3 Урожай ц/га

1 2 3 1 ячмень 2 горохо-ячменная смесь 3 ячмень

Незагрязненная почва 20,1 14,8 16,0 23,8 28,0 16,6

Загрязненная почва - К 12,0 8,3 9,7 2,0 6,6 4,7

К+ИбоРдоКад- 1ра3 12,8 8,8 9,9 2,4 10,0 5,5

К+МбоР^Кэд - ежегодно - 9,3 10,5 - 27,9 7,3

К+ МиоРиоКио - 1 раз 12,3 12,0 8,9 5,9 17,8 10,0

К + ИшРшоЬиво - ежегодно - Н,1 13,3 - 47,5 15,4

К + КГбоР.юК.ю + 70т / га навоза -1 раз 13,9 11,0 12,1 4,9 49,5 9,1

К + Н60Р90К90 + 70т / га навоза - ежегодно - 13,9 14,3 - 56,7 14,0

К + К12оРтКш+ 140т / га навоза — 1 раз 15,1 13,0 12,8 10,4 47,0 10,4

К +МШР180К180+ 140т /га навоза - ежегодно - 13,5 13,8 - 54,0 17,4

К + 70т / га навоза -1 раз 13,1 11,8 10,8 5,0 29,8 6,3

К + 70т / га навоза - ежегодно - 11,7 10,5 - 44,0 9,0

К + 140т / га навоза -1 раз 13,4 10,9 12,3 7,7 47,0 10,0

К + 140т / га навоза - ежегодно - 11,4 12,0 - 49,5 10,3

НСР 0,95 4,0 3,4 1,5 2,3 15,37 1,2

Примечание 1 - первый год, 2 - второй год, 3 - третий год

АИ повышал биологическую активность серой лесной почвы, загрязненной высокими концентрациями нефтяных фракций ЛГК 6%, ЭМ 6%, ЭМ6% + Г 6%, что выражалось в некоторой стабилизации численности отдельных эколого-трофических групп микроорганизмов и восстановлении активности ферментов Внесение АИ повышало коэффициент минерализации углеводородов при загрязнении ЛГК в 4,7 раза, ЭМ - в 4,3 раза, ЭМ + Г - в 5,2 раза Комплекс АИ и опилок (в качестве адсорбента), используемый для очистки нефтезагрязненной почвы, по рекультивирующему действию существенно не отличался от АИ

| 500 ■ & 400 • 300 ■

i—

« 200 ■

Ш

X

Ш 100 ■ ^

со 0 • о

1

□ Контроль - К Ш К+Нефть

□ К+Нефть+АИ

2 3

сроки наблюдений

Рис.6. Численность актиномицетов (1,2) и углеводородокисляющих микроорганизмов (3,4) в нефтезагрязненной почве и обработанной активным илом (АИ). Примечание: 1,3— через месяц после загрязнения; 2, 4 - через 12 месяцев.

Таблица 13

Влияние активного ила на активность ферментов (на 1г абс. сухой почвы), всхожесть. семян (%), содержание остаточных компонентов нефти (г/100 г почвы) в неф тезагрязненной почве_ __

Вариант опыта Ферменты Всхожесть семян, % Остаточная нефть, г/1 ООг почвы

Дегид-роге-наза, мг форма-зана Ката-лаза, мл 02 Уреаза, мгКНз Инверта- за, мг глюкозы

Через 1 мес. после загрязнения

Контроль (К) 6,1 5,8 0,35 25,40 100 -

К + нефть 2,9 2,9 1,53 15,85 55 8,04

К + нефть + АИ 4,0 4,4 2,19 18,30 62 6,11

Через 12 мес. после загрязнения

Контроль (К) 6,9 5,5 0,37 27,16 100 -

К + нефть 0,8 1,7 1,10 20,38 55 5,92

К+ нефть + АИ 6,1 5,4 1,10 26,00 100 3,04

Лишь для отдельных параметров биологической активности почв внесение комплекса АИ + опилки было благоприятнее, чем одного АИ.

Таким образом, использование АИ способствовало интенсификации самоочищения почв, загрязненных нефтью и нефтепродуктами. Применение активного ила благоприятно сказывалось на микробном и ферментном пуле загрязненных почв.

1 2 3

Рис.7. Влияние активного ила (АИ) на урожайность ячменя.

Примечание: 1 - через год, 2 - через 2 года, 3 - через 3 года.

10.3. Использование бакпрепарата Бациспецин для рекультивации нефтезагрязненных почв

Очистка почв и грунтов путем внесения специальных культур микроорганизмов - один из наиболее распространенных способов рекультивации нефте- ! загрязненных почв. Использование биопрепарата Бациспецин увеличивало численность УОМ (рис.8) и ускоряло в два раза деструкцию остаточных компонентов нефти в почве (табл.14) как в полевых, так и в лабораторных условиях; усиливалась липолитическая активность серой лесной почвы, загрязненной различными дозами нефти. Самая высокая скорость липолиза отмечалась через 2 года в полевых условиях и через 1 год в лабораторных. Вероятно, в результате биодеградации нефти в почве образовывались сложные эфиры карбоновых кислот, которые являются субстратом для липаз.

Внесение Бациспецина в выщелоченный чернозем, загрязненный сырой нефтью в дозе 25 л/м2, ускоряло разложение нефти на 45 - 60% в течение 2,5 месяцев и повышало биомассу овса в 15-20 раз по сравнению с биомассой необработанной Бациспецином нефтезагрязненной почвы. Через 10 лет после загрязнения песчаного иллювиально-железистогумусового подзола нефтью на территории Быстринскнефть ПО Сургутнефтегаз в него вносили препарат Бациспецин. По истечении 2,5 месяцев после внесения препарата в нефтезагряз-ненную почву возрастала доля гетеротрофных бактерий, участвующих в деструкции органического вещества в 5-8 раз, бацилл - в 2-2,8 раза. В вариантах опыта с внесением Бациспецина уменьшалась численность микроскопических грибов в результате конкурентных взаимоотношений.

ШЗдня 06 мес. 012 мес. Ш 24 мес.

Рис. 8. Численность УОМ в полевых условиях при различных концентрациях нефти (г/100г почвы) с внесением Бациспецина.

Примечание: 1 - контроль; дозы нефти г/100 г: 2 - 5,67; 3 - 7,32; 4 - 9,65; 5 -10,11.

Таблица 14

Активность липазы и содержание остаточных компонентов нефти в серой лесной нефтезагрязненной почве и при рекультивации (полевой опыт)_

Варианты опыта Активность липазы, мл 0,05 N КОН Остаточная нефть, г/100г

1 2 3 4 2 3 4

Контроль -К 9,68 пщт~ 9,76 10,76 - - -

К+Бациспецпн 9,79 10,23 0,97 Г12Л5 - - -

Первоначальная концентрация нефти 5,67 г/100г почвы

|НЗП 8,29 11,25 11,89 12,89 4,75 4,12 0,65

, НЗП+Бациспзцин 8,96 12,12 14 Д)2_ 14,62 3,70 2,78 Сл.

Первоначальная концентрация нефти 7,32 г/100г почвы

НЗП 7,92 10,10 12,34 13,45 6,31 5,23 1,82

1 НЗП+Бациспецин 7,86 10,32 15,23 15,74 4,97 3,95 0,45

Первоначальная концентрация нефти 9,65г/100г почвы

НЗП 7,22 10,38 11,43 13,25 8,45 7,43 2,63

НЗП+Бациспецин 7,18 10,55 14,56 15,56 6,79 5,21 0,84

Первоначальная концентрация нефти 10,11 г/100г почвы

^ЗП 6,38 8,31 7.98 10,55 9,11 8,34 3,42

НЗП+Бациспецин - 10,02 12,95 16,44 8,99 7,32 1,12

Примечание: НЗП - нефтезагрязненная почва; 1 - через 3 сут.; 2 - через 6 мес.: 3 - через 1 год.;4- через 2 года.

С течением времени в загрязненной нефтью почве активизировались окислительно-восстановительные процессы. Активность дегидрогеназы увеличивалась в 5 раз, пероксидазы - в 9,6 раза по сравнению с незагрязненной почвой. В

результате процесса трансформации нефти под действием препарата Бациспецин уменьшалось содержание общего органического углерода по сравнению с фоном на 3,6 - 5,6% (табл 15) Высокой эффективностью действия препарат обладал как при раздельном применении, так и в сочетании с минеральными удобрениями В этих вариантах разложилось за 2,5 месяца 52,4 - 55,8% нефти Внесение препарата вело к снижению фитотоксичности, остаточной нефти и повышению урожайности овса на рекультивируемой почве

Таблица 15

Содержание органического углерода и продуцирование С02 микроорганизмами при биологической рекультивации песчаного иллювиально-железисто-гумусового подзола (0-20см)____

Варианты опыта С общ % с-со2 мг/100г почвы Остаточная нефть г/100г почвы %раз-ложе-ния нефти Ферментативная активность

Дегвд-рогена-за, Перок-си-даза По- лифе- но- локси даза

Нефтезагряз-ненная почва -К 7,8 0,7 10,30 1,67 0,21 0,009

Целинная незагрязненная почва 0,8 0,6 не об-нар 0,32 0,02 0

К+К180Р180К180 6,0 0,8 7,20 30,6 0,97 0,48 0,003

К+Бациспецин 500 г/м2 3,6 1,4 4,52 55,8 0,93 0,56 0,005

К+Бациспецин 500 г/мЧ N,80? 18оКх80 5,6 1,6 4,92 52,4 0,34 0,01 0,004

НСР 0.95 0,3 0,4 0,52

Таким образом, внесение в нефтезагрязненную почву углеводородокис-ляющих микроорганизмов в составе препарата Бациспецин способствовало повышению биологической активности серой лесной почвы и песчаного иллюви-ально-железисто-гумусового подзола, ускорению разложения углеводородов.

10.4.Фитомеяиорация нефтезагрязненных почв

Перспективным методом восстановления плодородия антропогенно загрязненных почв является их фитомелиорация (Meagher, 2000, Kramer, Chardonnes, 2001). Посев люцерны в полевом опыте на нефтезагрязненной серой лесной почве способствовал увеличению липолитической активности, которая

стабилизировалась и сохранялась на высоком уровне в течение двух лет, независимо от дозы нефти (табл 16)

Такие же закономерности выявлены и в лабораторных условиях. Под посевами люцерны более интенсивно уменьшалось содержание остаточных компонентов нефти в почве (табл.16), увеличивалась численность УОМ. Между активностью липазы и содержанием остаточной нефти в рекультивируемой почве обнаружена обратная связь (г = (- 0,85)-(-0,98), р<0,05), а между активностью липазы и численностью УОМ - прямая коррелятивная зависимость (г = 0,82-0,96, р<0,05) Ускорение деструкции нефти при использовании фитомелиоранта способствовало накоплению в почве продуктов деградации, что в свою очередь повышало липолитическую активность почв

Таблица 16

Активность липазы и содержание остаточных компонентов нефти в серой лесной нефтезагрязненной почве и при рекультивации (полевой опыт)_

Варианты опыта Активность липазы, мл 0,05 N КОН Остаточная нефть,г/100г почвы

1 2 3 4 2 3 4

Контроль (1С) 9,68 10,11 9,76 10,76 - - -

К+Фитомелиорант 9,83 11,93 11,03 14,16 - - -

Первоначальная концентрация нефти 5,67 г/100г почвы

НЗП 8,29 11,25 11,89 12,89 4,75 4,12 0,65

НЗП+Фитомелиорант - 12,67 13,10 14,51 3,89 3,32 следы

Первоначальная концентрация нефти 7,32 г/100г почвы

НЗП 7,92 10,10 12,341 13,45 6,31 5,23 1,82

НЗП+Фитомелиорант - 10,31 12,74 15,22 5,18 4,29 0,51

Первоначальная концентрация нефти 9,65г/100гпочвы

НЗП 7,22 10,38 11,43 13,25 8,45 7,43 2,63

НЗП+Фитомелиорант - 11,67 13,45 16,21 7,11 6,13 1,02

Первоначальная концент рация нефти 10,11 г/100г почвы

НЗП 6,38 8,31 7,98 10,55 9Д1 8,34 3,42

НЗП+Фитомелиорант - 10,02 12,95 16,44 8,99 7,32 1,12

Примечание НЗП - нефтезагрязненная почва, 1 - через 3 сут, 2 - через 6 мес , 3 - через 12 мес , 4- через 24 месяца

Таким образом, фитомелиорант - люцерна повышал активность липазы серой лесной почвы и ускорял деструкцию углеводородов

В заключении приведены схемы участия пула ферментов в обмене азот-, фосфор-, серусодержащих органических веществ, в углеводном обмене, характера влияния нефти на активность изученных ферментов

Выводы

1 Почб а аккумулирует и трансформирует нефтяные углеводороды Загрязнение почв нефтью ведет к трансформации ее ферментного пула, изменению

характера ферментативных реакций, физико-химических свойств почвы, инги-бирующему или активизирующему влиянию компонентов нефти на ферменты Ферментный пул в нефтезагрязненной почве трансформирует в подвижное состояние труднодоступные соединения и разрушает поступающие в почву ингредиенты, особенно органические. Активность ферментного пула тесно связана с численностью микроорганизмов Нефтяное загрязнение приводит к увеличению содержания органического углерода, расширяет соотношение С N. уменьшает выход поглощенных оснований, содержание нитратного азота, увеличивает долю аммиачной формы азота, подвижного фосфора, меняет реакцию почвенной среды Степень изменения зависит от типа загрязняющей нефти и ее свойств

2. Загрязнение почв нефтью влияет на пул ферментов, формирующих азотный режим почвы активизируется действие уреазы и гидроксиламинредуктаз, ингибируется действие протеазы, аспарагиназы, глутаминазы, нитрат- и нитрит-редуктазы Высокие дозы сырой нефти и товарной отличаются по своему воздействию на уреазную активность в силу различного химического состава Сырая нефть увеличивает активность уреазы и повышает содержание аммиачной формы азота в почве Товарная нефть через два года ингибирует Это позволяет использовать активность уреазы, нитрат- , нитритредуктазы в качестве диагностических показателей загрязненности почв нефтью

3 Нефть ингибирует активность ферментов, участвующих в углеводном обмене, следствием чего является замедление процессов распада растительных остатков, изменение трансформации органических соединений Прослеживается четкая зависимость активности карбогидраз от степени загрязнения почвы нефтью Характер этих изменений зависит от состава нефти, ее химических и физических свойств, от естественной буферности почв. Сырая и товарная нефть ин-гибируют активность инвертазы Со временем вследствие трансформации углеводородов в почве меняется характер их воздействия на ферментативную активность Наиболее токсичной для ферментов группы карбогидраз из продуктов разложения углеводородов является салициловая кислота

4. Поступление нефти в почву ведет к инактивации фосфогидролаз, уменьшению содержания подвижных фосфатов, что ухудшает передвижение фосфора в пищевых цепях, фосфорное питание растений и обеспеченность их доступными формами соединений фосфора

5 Низкие дозы нефти стимулируют активность изученных ферментов серного обмена, высокие - подавляют При моделировании нефтяное загрязнение приводит к снижению активности арилсульфатазы, сульфидоксидазы и активизирует сульфатредуктазу, сульфитоксидазу и сульфитредуктаз В естественных условиях с увеличением дозы нефти снижается активность сульфитоксидазы, сульфитредуктазы, цистеиндегидрогеназы, повышается активность сульфатре-дуктазы Отмечается активация арилсульфатазы, цистеиндегидрогеназы и сульфидоксидазы при низких концентрациях поллютанта С увеличением срока воздействия активность ферментов в загрязненной почве приближается к контрольному варианту Наряду с ингибирующим действием нефти на активность основ-

ных ферментов серного обмена наблюдается увеличение численности тионовых и сульфатвосстанавливающих бактерий, что предотвращает потери серы в почве В нефтезагрязенных почвах интенсивнее идут процессы, направленные на восстановление сульфитов и сульфатов по сравнению с окислением соединений серы Это может привести к уменьшению содержания сульфатной формы серы, используемой для питания растениями, и накоплению восстановленных соединений

6. Активность пероксидазы и полифенолоксидазы выше в выщелоченном черноземе в начальный период после загрязнения, а в серой лесной почве она нарастает постепенно В обоих типах почв низкие дозы нефти стимулируют пе-роксидазу и полифенолоксидазу, высокие - ингибируют. Из нефтепродуктов наиболее токсичное действие оказывал ДГФ, содержащий в своем составе ароматические углеводороды Менее доступен ферментативному окислению асфальтит. Нефтяное загрязнение повышает активность аскорбатоксидазы пропорционально концентрации загрязнителя, и ее можно использовать в качестве одного из показателей загрязненности почв нефтью

В темно-серой лесной почве при загрязнении товарной нефтью и нефтепродуктами окислительно-восстановительные реакции с участием каталазы и дегидрогеназ протекают интенсивнее, чем в серой лесной Нефтяное загрязнение снижает активность оксидоредуктаз Сырая нефть в течение длительного времени уменьшает активность каталазы, не влияя существенно на дегидрогеназную активность Через десять лет после загрязнения окислительно-восстановительные реакции в почве интенсифицируются Изменение активности ферментов зависит как от состава, так и от дозы загрязнителя Первоначально ингибирующее действие на активность каталазы и дегидрогеназы оказывает ЛТК, по истечении трех месяцев - ЭМ + Г и ЭМ, а через год все фракции ингибируют активность дегидрогеназы, для каталазы менее токсичным был ЛГК в низких концентрациях.

7 Активность липазы в нефтезагрязненной серой лесной почве возрастает, со временем стабилизируется и сохраняется длительное время на достаточно высоком уровне Интенсивный липолиз коррелирует с увеличением численности УОМ и с уменьшением содержания остаточных компонентов нефти в почве

8 Парафиновые и циклопарафиновые углеводороды активизируют, а ароматические углеводороды ингибируют активность уреазы, амилазы, инвертазы, ксиланазы, целлюлазы, фосфатазы, каталазы, дегидрогеназы

9 Приемы биорекультивации, направленные на стимуляцию аборигенной углеводородокисляющей микробиоты (внесение минеральных, органических удобрений и их сочетания), внесение активного ила, углеводородокисляющих микроорганизмов в виде бакпрепарата Бациспецин и использование люцерны в качестве фитомелиоранта, значительно повышают биологическую активность почв, ускоряют процессы биоразложения нефтяных углеводородов, снижают их токсичность, нормализуют ферментативную активность и в более короткие сроки ведут к восстановлению почв до исходного состояния

Список основных трудов, опубликованных по теме диссертации Монографии, брошюры и учебные пособия:

1. Новоселова Е.И. Структурно-функциональная трансформация биогеоценоза при нефтяном загрязнении и пути его восстановления Уфа, РИО БашГУ, 2004. - 126с

2 Киреева Н.А, Водопьянов В В , Новоселова Е.И., Онегова Т.С., Жданова Н В Микробиологическая рекультивация нефтезагрязненных почв. Москва, ОАО «ВНИИОЭНГ», 2001 -40с

3 Кузяхметов Г Г, Мифтахова AM, Киреева НА, Новоселова Е.И. Практикум по почвоведению Учебное пособие Уфа: РиО БашГУ, 2004 - 120с

4 Мифтахова А М, Киреева Н А, Кузяхметов Г Г, Новоселова Е.И Биологическая активность почв Руководство к практическим занятиям. Уфа. РИЦ БашГУ, 2007. 102с

Статьи в журналах, рекомендуемых ВАК для публикаций основных результатов докторской диссертации

5 Хазиев Ф.Х, Тишкина Е.И., Киреева Н.А, Кузяхметов Г Г Влияние нефтяного загрязнения на некоторые компоненты агроэкосистемы // Агрохимия -1988 №2.-С 56-61.

6 Хазиев Ф X, Тишкина Е.И., Киреева Н.А Влияние нефтепродуктов на биологическую активность почв // Научн докл высш шк. Биол. науки - 1988 № 10 - С 93-99.

7 Киреева Н.А, Новоселова Е.И, Хазиев Ф X Использование активного ила для рекультивации почв, загрязненных нефтью // Почвоведение. - 1996. № 11.-С 1399-1403

8 Киреева Н А., Новоселова Е.И., Хазиев Ф X Ферменты азотного обмена в нефтезагрязненных почвах//Известия АН Сер биол - 1997 - С 755-759

9 Киреева Н.А, Новоселова Е.И., Хазиев Ф X Фосфогидролазная активность нефтезагрязненных почв // Почвоведение. - 1997. №6 - С 723-725

10 Киреева Н А, Новоселова Е.И., Хазиев Ф.Х Активность карбогидраз в нефтезагрязненных почвах // Почвоведение - 1998. №12. - С 1444-1448.

11 Киреева НА, Новоселова Е.И, Ямалетдинова Г.Ф. Активность окси-доредуктаз в нефтезагрязненных и рекультивируемых почвах // Агрохимия -2001 №4. -С. 53-60

12 Киреева Н.А, Новоселова Е.И, Ямалетдинова Г Ф. Диагностические критерии самоочищения почвы от нефти // Экология и промышленность России. -2001.№ 12.-С 34-35.

13 Киреева H.A., Ямалетдинова Г Ф , Новоселова Е.И, Хазиев Ф X. Ферменты серного обмена в нефтезагрязненных почвах // Почвоведение - 2002. №4.

- С. 474-480

14 Киреева Н А, Новоселова Е.И., Онегова Т С. Активность каталазы и дегидрогеназы в почвах, загрязненных нефтью и нефтепродуктами // Агрохимия.

- 2002 №8 - С 64-72.

15 Киреева Н А, Бакаева М Д, Тарасенко Е М, Галимзянова Н Ф, Новоселова Е.И. Снижение фитотоксичности нефтезагрязненной серой лесной почвы при биорекультивации //Афохимия - 2003 №2 - С 50-55

16. Киреева Н.А , Тарасенко Е.М , Шамаева А А, Новоселова Е.И. Влияние загрязнения почв нефтью и нефтепродуктами на активность липазы // Почвоведение -2006 №8 - С 1005-1011

17 Новоселова Е.И. Использование ферментативной активности для мониторинга биоремедиации нефтезагрязненных почв // Вестник Оренбургского государственного университета - 2007 №75 - С 246-247.

18. Щемелинина Т.Н, Новоселова Е.И., Киреева НА, Маркарова МЮ Диагностирование степени загрязненности почв нефтью по показателям ферментативной активности // Вестник Оренбургского государственного университета - 2007. №75 - С 432-434

Патенты

19 Патент РФ №2077397, МКИ В 09 с 1/10 Способ рекультивации почв, зафязненных нефтью и нефтепродуктами /Андресон Р К, Хазиев Ф X, Дешура В С, Багаутдинов Ф Я, Бойко Т Ф , Новоселова Е.И Заявл 15 06 93 Опубл 20 04 97 Бюлл №11

Внедрения

20 Тишкина Е.И. Восстановление плодородия почв Внедрение - Информационный листок ЦНТИ № 196-86 - 1986 - 2с

Статьи, материалы, тезисы

21. Тишкина Е.И., Киреева НА Ускорение деструкции нефти в черноземах микроорганизмами Тез докл «Роль черноземов Башкирии в решении продовольственной программы». - Уфа, 1983 -С 56-57.

22 Тишкина Е.И, Киреева НА Влияние нефтяного загрязнения на биологические свойства почв Тез докл научн конф БФ АН СССР - Уфа, 1983 -С. 127.

23 Тишкина Е.И., Киреева Н А Активность ферментов фосфорного обмена в эродированных почвах Сб. научн. тр «Эрозия почв Южного Приуралья» -Уфа Изд-воБФАН, 1984 - С 103-110.

24 Тишкина Е.И Влияние нефтяного загрязнения на активность почвенных ферментов под посевами проса и овса Тез докл науч. конф «Вклад ботаников Башкирии в осуществление продовольственной программы» - Уфа, 1984 -С 30

25 Хазиев Ф X, Тишкина Е.И., Киреева Н А Некоторые способы стимуляции самоочищения почв от нефтепродуктов Тез докл «Вопросы офаничения циркуляции зафязняющих веществ в объектах окружающей среды» - Уфа, 1984 - С 23-25

26 Тишкина Е.И, Киреева Н А Эффективность некоторых приемов повышения биологической активности нефтезафязненных почв Тез докл научн конф «Изучение, охрана и рациональное использование природных ресурсов» БФ АН СССР -Уфа, 1985 С 83.

27 Тишкина Е.И , Киреева H А Изменение биохимических и микробиологических параметров нефтезагрязненных почв Тез докл VII делегатского съезда ВОП -Ташкент, 1985 - 42 - С 188.

28 Хазиев Ф X., Тишкина Е.И., Киреева H А, Шамратова В Г Некоторые критерии оценки почв, загрязненных нефтью и нефтепродуктами // Актуальные вопросы гигиены окружающей среды в связи с интенсивным развитием нефтяной и газовой промышленности -Уфа, 1985 - С 99-100

29 Киреева H А, Тишкина Е.И., Хазиев Ф X Участие микроорганизмов в самоочищении нефтезагрязненных почв Тез докл VII делегатского съезда микробиологического общества - Алма-Ата, 1985. - Т.6. - С 83

30. Тишкина Е.И., Хазиев Ф X. Изменение биохимических свойств почв при загрязнении нефтью и трансформация нефти в почвенной экосистеме Тез докл Всес совещания «Мониторинг нефти и нефтепродуктов в окружающей среде» -Уфа, 1985 - С. 66-69

31 Хазиев Ф X, Тишкина Е.И., Кузяхметов Г Г, Киреева H А, Минибаев Р Г., Сайфуллина 3 H Изучение влияния нефтяного загрязнения на некоторые компоненты агробиоценозов Тез конф «Региональные проблемы экологии» Казань, 1985 - 4 1 -С.44-46

32 Тишкина Е.И., Киреева H А Окультуривание нефтезагрязненных серых лесных почв Сб статей «Повышение плодородия почв в условиях интенсивной системы земледелия» -Уфа БФ АН СССР, 1986 - С 146-152

33 Тишкина Е.И., Киреева НА Микробиологические процессы и урожайность сельскохозяйственных культур в нефтезагрязненных почвах Материалы Всес конф «Микробиологические процессы в почвах и урожайность сельскохозяйственных культур» -Вильнюс, 1986 -С 360

34 Киреева H А , Тишкина Е.И. Скрининг микроорганизмов, устойчивых к действию нефти1 Тез докл конф «Скрининг в системе интенсификации научных исследований» - Уфа, 1986 - С 49-50

35 Киреева H А , Тишкина Е.И., Сайфуллина 3 H Состояние почвенного микробоценоза при воздействии нефти и нефтепродуктов Тез докл «Проблемы изучения, охраны и рационального использования природных ресурсов Башкирии».-Уфа, 1987. - С 157-158

36 Юмагузина X А , Киреева H А, Тишкина Е.И. Анализ действия нефти на культуру овса и рекультивация загрязненных нефтью земель Тез. докл «Актуальные вопросы охраны окружающей среды» — Тамбов, 1987 - С 37-38

37 Новоселова Е.И.* Хазиев Ф X. Изменение свойств серой лесной йефте-загрязненной почвы и пути восстановления ее плодородия ТеЗ докл V Уральского совещания «Проблемы рекультивации нарушенных земель» 14-18 ноября 1988г - Свердловск, 1988 - С 139-140

38. Хазиев Ф X, Мукатанов А X , Кольцова Г А, Новоселова Е.И. и др Восстановление и повышение плодородия техногенно нарушенных земель -Комплексная программа повышения плодородия почв Башкирской АССР на 1989- 1995ГГ-Уфа, 1989 - С 139-150

39 Тишкина Е.И, Киреева Н А Влияние различных нефтепродуктов на биологическую активность карбонатного чернозема Тез докл. VIII Всесоюзного съезда почвоведов - Новосибирск, 1989 -Т2 - С 337

40 Тишкина Е.И , Киреева Н А Влияние навоза на урожайность ячменя в почве, зафязненной нефтью Тез докл « Экологические проблемы агропромышленного комплекса Башкирской АССР» -Уфа, 1989 -С 55

41 Тишкина Е.И. Влияние нефтяного загрязнения на свойства серых лесных поче! Предуралья и пути восстановления их плодородия Автореф дис канц биол наук - Воронеж, 1989 -23с

42 Киреева Н А , Тишкина Е.И. Ускорение биодеструкции нефтяных загрязнений при рекультивации почв Межвуз сб научн статей « Актуальные вопросы биотехнологии» - Уфа БашГУ, 1990 - С 36-44.

43 Андресон Р К , Бойко Т Ф , Багаутдинов Ф Я, Даниленко Л А , Денеж-кин Е М, Новоселова Е.И., Хазиев Ф X, Андресон Б А Применение биологического метода для очистки и рекультивации нефтегазозагрязненных почв // Защита от коррозии и охрана окружающей среды - 1994 №2 - С. 16-18.

44 Новоселова Е.И. Использование активного ила для ускорения биодеструкции нефти в почве Тез докл I Всесоюз науч конф «Биология почв антропогенных ландшафтов» 15-17 октября 1991 г - Днепропетровск Изд-во ДГУ, 1995 - С 57

45 Андресон Р.К, Бойко Т Ф , Багаутдинов Ф Я, Новоселова Е.И., Хазиев Ф X Применение бактериального препарата для рекультивации нефтезагрязнен-ных почв Межвуз научн сб «Вопросы биотехнологии» - Уфа Изд-во БашГУ, 1995 - С 9-14

46 Киреева Н А, Тишкина Е.И Изучение интенсивности процессов самоочищения нефтезагрязненных почв. Тез докл «Актуальные вопросы экологии Республики Башкортостан» - Уфа, 1995 -С 37-38

47 Киреева Н А, Новоселова Е.И Сравнительное изучение биодеградации нефти в естественных и лабораторных условиях // Итоги исследований биологическою факультета Башкирского государственного университета за 1994г -Уфа, 1995 - С 95-96

48 Клреева Н.А, Новоселова Е.И Особенности микробоценоза серой лесной почвы, загрязненной нефтяными фракциями // Итоги исследований биологического факультета Башкирского государственного университета за 1994г -Уфа, 1995 - С 96-97

49 Киреева НА, Новоселова Е.И Некоторые приемы рекультивации нефтезагрязненной серой лесной почвы Сб статей науч конф. по науч -технич программам Госком вуза России - Уфа. БашГУ, 1996 - С 195-196.

50 Новоселова Е.И., Киреева Н А Моделирование условий рекультивации нефтезагрязненных почв в лабораторных условиях П Итоги науч исследований биологического факультета Башкирского госуниверситета за 1995 год -Уфа БашГУ, 1996 - С 11-12

51 Киреева Н А, Новоселова Е.И. Влияние нефтепродуктов на биологическую активность серой лесной почвы- Тез докл II съезда общества почвоведов - С - Петербург, 1996. - Кн 1 - С. 261

52. Kireeva N A., Novoselova E.I., Khaziev F X Use of active sludge for reclamation of oil - polluted soils // Eurasian Soil Sei - 1996 - V29 N11. - P 13051308

53 Киреева H.A., Новоселова Е.И., Кузяхметов Г Г. Продуктивность сельскохозяйственных культур на нефтезагрязненных и рекультивируемых почвах Межвуз сб научн тр «Экологические проблемы Республики Башкортостан» -Уфа: БГПИ, 1997. - С. 293-299

54 Kireeva N А, Novoselova E.I., Khaziev F X. The phosphohydrolase activity of the oil -polluted soils //Eurasian Soil Sei - 1997.-V 30. №6 -P 639-641

55 Киреева H A, Новоселова Е.И., Хазиев Ф X. Изменение свойств серой лесной почвы при загрязнении нефтью и в процессе рекультивации // Башкирский экологический вестник. -1998. № 3 -С 3-7

56 Kireeva N.A, Novoselova E.I., Khaziev F X Carbohydrase activity in oil -contaminated soils//Eurasian Soil Sei -1998 -V31 №12 -P. 1314-1318

57 Киреева H A, Ямалетдинова Г Ф , Мифтахова А М, Новоселова Е.И. Комплексная система показателей биологической активности почв для индикации токсичности нефтяных загрязнений // Башкирский экологический вестник -2000 №2(9) - С. 26-30

58 Киреева Н А., Онегова Т С , Новоселова Е.И. Использование ферментативной активности для биоиндикации нефтезагрязненных и рекультивируемых почв Тез докл Всеросс науч -практ. конф «Актуальные вопросы мониторинга экосистем антропогенно-нарушенных территорий» — Ульяновск, 2000 - С 5153

59 Тарасенко Е.М, Новоселова Е.И., Валиуллина А А,Онегова Т С Использование ферментативной активности для диагностики антропогенной трансформации почв Матер междунар. конфер «Почва как связующее звено функционирования природных и антропогенно-преобразованных экосистем» 812 октября2001г - Иркутск, 2001.-С 156.

60 Киреева Н А, Новоселова Е.И., Ямалетдинова Г.Ф Оценка состояния почв, загрязненных нефтью, по показателям ферментативной активности. Тез докл XI Межд. симпозиума по биоиндикаторам «Современные проблемы биоиндикации и биомониторинга» - Сыктывкар, 2001 - С. 77-78.

61 Киреева Н А, Новоселова Е.И., Тарасенко Е М, Онегова Т С. Микробиологическая рекультивация нефтезагрязненных почв: Матер 1али Першо1 HayxoBoi конференцп «Вщновлення порушених природных екосистем». - До-непьк, 2002 - С 191-193.

62 Kireeva N А, Yamaletdinova G F, Novoselova E.I., Khaziev F X Sulfur -metabolizing enzymes in oil - contaminated soils // Eurasian Soil Sei - 2002 - V 35. №4 -P.421-427

63 F иреева H А, Новоселова Е.И Загрязненной почве поможет ил // Та-бигат Экологический журнал -2003. №4-5 -С 21

64 Kireeva N А , Vodopyanov V V , Tarasenko Е М ,Onegova T.S , No-voselova E.I. Assesment of toxicity of oil-contammated soil by microbial activity indexes // Modern problems of bioindication and biomonitoring Proceeding of the XI International symposium of bioindicators. - Syktyvkar, 2003 -P 182-188

65. Киреева H A, Новоселова Е.И, Валиуллина А А Использование ли-пазной активности для биомониторинга деградации нефти и нефтепродуктов в почве. Матер IV съезда Докучаевского общества почвоведов «Почвы — национальное достояние Россию) 9-13 августа 2004г - Новосибирск Наука-Центр, 2004.-С 630

66 Новоселова Е.И. Биодиагностика и мониторинг состояния загрязненных нефтью почв Матер междун конф « Экология и биология почв». — Ростов - на - Дону, 2004 - С 201

67 Киреева Н А, Новоселова Е.И., Онегова Т С Биоремедиация почв, за-грязненны к нефтью, внесением органических отходов Материалы третьего съезда общества биотехнологов России 25-27 октября 2005г - Москва, 2005 - С 185-186

68 Киреева Н А, Новоселова Е.И., Онегова Т.С. Активизация разложения нефти в почве при внесении органических отходов Матер межд конф. «Проблемы био деструкции техногенных загрязнений окружающей среды» - Саратов, 2005 - С. 75-76.

69. Kireeva N А, Tarasenko Е М, Shamaeva A A. and Novoselova E.I. Effect of Oil and Oil Products on Lipase Activity in Gray Forest Soil // Eurasian Soil Science -2006 -V39 №8 -P 905-910.

70 Новоселова Е.И, Киреева H А Мониторинг состояния нефтезагряз-ненных почв по активности аскорбатоксидазы Тез конф «Экология биосистем-проблемы изучения, индикации и прогнозирования» - Астрахань, 2007. С 101.

71 Новоселова Е.И., Киреева НА Мониторинг состояния нефтезагряз-ненных почв по активности окислительно-восстановительных ферментов Матер Междун научн конф «Биологическая рекультивация и мониторинг нарушенных земель» 4-8 июня 2007г - Екатеринбург, 2007 - С 536-543

72 Новоселова Е.И., Тарасенко Е М Ферментативная активность как индикатор эффективности рекультивации нефтезагрязненных почв Матер-VI Междун заочной научн конф «Экология и биология почв», окт 2007г - Ростов -на-Дону, 2007 - С 172-173

Новоселова Евдокия Ивановна

ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ТРАНСФОРМАЦИИ ФЕРМЕНТНОГО ПУЛА ПОЧВЫ ПРИ НЕФТЯНОМ ЗАГРЯЗНЕНИИ И РЕКУЛЬТИВАЦИИ

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Лицензия на издательскую деятельность ЛР№ 021319 от 05 01 99 г

Подписано в печать 19 12 2007 г Бумага офсетная Формат 60x84/16 Гарнитура Times Отпечатано на ризографе Уел печ л 2,42 Уч -изд л 3,02 Тираж 100 экз Заказ 731

Редакционно-издательский центр Башкирского государственного университета 450074, РБ, г Уфа, ул Фрунзе, 32

Отпечатано на множительном участке Башкирского государственного университета 450074, РБ, г Уфа, ул Фрунзе, 32

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Новоселова, Евдокия Ивановна

Введение.

Глава 1. Обзор литературы

Структурно - функциональная трансформация биогеоценоза при нефтяном загрязнении и пути его восстановления

1.1. Влияние нефтяного.загрязнения на физические и химические свойства почв.

1.2. Состояние микробиоты и ферментативной активности почв при нефтяном загрязнении.

1.3. Рост и развитие растений в нефтезагрязненных почвах.

1.4. Биоремедиация нефтезагрязненных почв.

Глава 2. Объекты и методы исследований

2.1. Особенности природно-климатических условий района исследований.

2.2. Объекты исследования.

2.3. Условия проведения опытов.

2.4. Методы исследований.

Глава 3. Влияние нефтяного загрязнения на агрохимические свойства почв и распределение нефти по профилю

3.1. Распределение нефти в почвенном профиле.

3.2. Агрофизические и агрохимические свойства почв, загрязненных неф- 106 тью.

Глава 4. Активность ферментов азотного обмена в нефтезагрязненных 114 почвах.

4.1.Протеаз а.

4.2. Уреаза.

4.3. Влияние нефти и нефтепродуктов на активность аспарагиназы, глута-миназы, нитрат-, нитритредуктазы и гидроксиламинредуктазы.

Глава 5. Активность карбогидраз в нефтезагрязненных почвах

5.1. Инвертаза.

5.2. Целлюлаза.

5.3. Амилаза, ксиланаза.

Глава 6. Фосфогидролазная активность нефтезагрязненных почв

6.1. Фосфатаза.

6.2. Фитаза, РНКаза, ДНКаза, АТФаза.

Глава 7. Ферменты серного обмена в нефтезагрязненных почвах 7.1. Арилсульфатаза, цистеиндегидрогеназы.

7.2. Сульфидоксидаза, сульфитоксидаза.

7.3. Сульфатредуктаза, сульфитредуктаза.

Глава 8. Влияние нефтяного загрязнения на активность оксидоредуктаз

8.1. Пероксидаза, полифенолоксидаза.

8.2. Аскорбатоксидаза.

8.3. Дегидрогеназа, катал аза.

Глава 9. Активность липазы в нефтезагрязненных почвах.

Глава 10. Биологическая активность рекультивируемых почв

10.1. Влияние минеральных, органических удобрений и их сочетания на биологическую активность почв, загрязненных нефтью.

10.1.1. Влияние минеральных, органических удобрений и их сочетания на ферментативную и микробиологическую активность серой лесной почвы, загрязненной сырой нефтью.

10.1.2. Влияние минеральных, органических удобрений и их комплекса на некоторые показатели биологической активности серой лесной почвы, загрязненной нефтепродуктами.

10.1.3. Влияние минеральных, органических удобрений и их сочетания на урожайность сельскохозяйственных культур серой лесной почвы, загрязненной сырой нефтью.

10.1.4. Влияние минеральных, органических удобрений и их сочетания на некоторые показатели биологической активности серой лесной почвы загрязненной обессоленной обезвоженной нефтью и процессы биодеградации нефти.

10.2. Использование активного ила для рекультивации почв, загрязненных нефтью.

10.2.1. Влияние активного ила на показатели биологической активности серой лесной почвы, загрязненной товарной нефтью и нефтепродуктами

10.3. Использование бакпрепарата Бациспецина для рекультивации нефтезагрязненных почв

10.3.1. Использование бакпрепарата Бациспецина как рекультивирующего средства нефтезагрязненных почв в условиях Башкортостана и Севера и для снижения фитотоксичности почвы.

10.4. Фитомелиорация нефтезагрязненных почв.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Экологические аспекты трансформации ферментного пула почвы при нефтяном загрязнении и рекультивации"

Почва является неотъемлемой частью любого наземного биогеоценоза и играет важную роль в устойчивом развитии биосферы. Ее бесконтрольное использование приводит к разрушению почвенного покрова. Деградация почв имеет глобальные размеры и является одной из самых главных угроз экологического кризиса (Добровольский, 1997, 2003, 2006; Никитин, 2003).

Антропогенная деградация почв часто вызвана нефтью и нефтепродуктами, относящимися к приоритетным загрязнителям биосферы. На сегодняшний день это экологическая проблема мирового масштаба (Аржанников, Громова, 2001). По экспертным оценкам, загрязнение почвы в результате хозяйственной деятельности нефтедобывающих и транспортных предприятий на территории России достигает сотен тысяч гектаров. В Башкирии ежегодно загрязняется 72 тыс. м поверхности в год (Абдрахманов, 1993). Разливы нефти вследствие аварий на нефтепроводах оцениваются миллионами тонн.

Загрязнение почвы нефтью нарушает ее стабильное функционирование: меняются физико-химические свойства почвы, характер биохимических процессов, подавляется активность микробиоты (Исмаилов, 1988; Пиковский, 1993; Гузев и др., 1989; Oberbremer, Muller-Hurtig, 1989; Гилязов, 1999; Marge-sin et al., 2000; Хабиров и др., 2001; Габбасова и др., 2002; Kiss, 1985;1995, 2001; Киреева и др., 1996а, 19966, 1997; Рахимова и др., 2005).

Почвы, несмотря на техногенные воздействия, способны поддерживать гомеостаз за счет регуляторных механизмов основанных на микробном пуле и пуле ферментов, контролирующих синтетико - деструктивные биохимические процессы в почве (Звягинцев, 1978; 2003; Хазиев, 1982). Почвенные ферменты участвуют в процессах «самоочищения» от экзогенных веществ, трансформируя, нейтрализуя, разрушая не свойственные почвам вещества, которые могут быть токсичными изначально или в результате их накопления в ней выше определенных пределов (Исмаилов, 1982; Пиковский, 1988). Гидролитические и окислительно-восстановительные ферментные системы включают в биогеохимические циклы азот, фосфор, углерод, серу. Тем самым пул ферментов непосредственно участвует в осуществлении почвой ряда экологических функций: трофической, санитарно-восстановительной функции и др. Ферменты системы микроорганизмы - почва играют важную роль при сохранении биохимического равновесия в почве во время ее различных загрязнений (Хазиев, 1982). Благодаря ферментному пулу почвы ее метаболизм может сохраниться стабильным, даже если условия окружающей среды неблагоприятны для жизнедеятельности микроорганизмов.

Вторжение потоков углеводородов, имеющих различные физико-химические характеристики, в биосферу происходит в различных природно-климатических условиях, поэтому отмечается разнообразие ответных реакций природных систем. Процесс самоочищения и восстановления почв до исходного уровня длителен и это вызывает необходимость разработки приемов рекультивации с учетом региональных особенностей несмотря на значительное количество исследований по данному вопросу.

В связи с вышеизложенным целью нашей работы явилась целостная оценка состояния ферментативного пула почв в условиях нефтяного загрязнения и при рекультивации. В соответствии с поставленной целью в работе решались следующие задачи:

1. Изучить трансформацию агрохимических свойств нефтезагрязненных почв и распределение нефти по почвенному профилю.

2. Изучить в почвах, загрязненных нефтью и нефтепродуктами состояние пула ферментов, участвующего в обмене азотсодержащих органических веществ, в углеводном обмене, особенности обмена фосфорсодержащих органических веществ, серусодержащих соединений, активность гидролазы эфиров карбоновых кислот: триацилглицерол-липазы.

3. Изучить состояние окислительно-восстановительных процессов в почвах, загрязненных нефтью и нефтепродуктами по активности оксидоредуктаз.

4. Изучить состояние ферментного пула, пула микроорганизмов в нефте-загрязненных почвах при проведении различных рекультивационных мероприятий.

Научная новизна исследований.

Впервые на территории Башкортостана в полевых, микрополевых, лабораторных опытах проведена комплексная оценка состояния ферментов азотного, углеводного, серного, фосфорного обмена серой лесной почвы и выщелоченного чернозема в условиях нефтяного загрязнения. Охвачен большой спектр ферментов различных классов и проанализированы изменения их активности при загрязнении почв сырой, товарной нефтью и различными нефтяными фракциями [ЛГК (легкий газойль коксования), ЭМ II (экстракт второй масляной фракции), Г (гудрон), КО (крекинг остаток), А (асфальтит), ДТ (дизельное топливо), ММ (моторное масло), Б (бензин), ДГФ (дистилят газойлевой фракции)], нефтяными углеводородами (н-парафины, циклопарафины, циклогексан, н-гексадекан, ароматические углеводороды), продуктами окисления углеводородов (гексадециловый спирт, пальмитиновая, бензойная и салициловая кислоты). В результате исследований предложено использовать активность некоторых ферментов в качестве диагностических показателей загрязненности почв нефтью - уреазы, нитрат-, нитритредуктазы, липазы, аскорбатоксидазы. Показано появление «компенсационных механизмов», за счет действия которых предотвращаются потери серы. Приведен материал многолетних исследований по окислительно-восстановительным ферментам, участвующим в трансформации нефтяных углеводородов (пероксидаза, полифенолоксидаза, каталаза, дегидро-геназа). Впервые изучена аскорбатоксидазная, липазная активность в почвах, подвергшихся нефтяному загрязнению в Южном Предуралье. Модифицированы методы определения активности дегидрогеназы и липазы.

Разработаны и проверены на практике приемы рекультивации нефтезаг-рязненных почв с учетом природно-климатических условий Южного Предура-лья и их влияние на ферментативную активность почв. Первый ряд приемов направлен на стимуляцию естественной углеводородокисляющей микробиоты, он включает в себя ежегодное внесение органо-минерального комплекса. Второе направление - внесение активного ила биохимкомбината, содержащего естественную ассоциацию углеводородокисляющих микроорганизмов и питательные вещества - соединения азота, фосфора, калия, микроэлементы в составе ила. Третье направление - очистка почв путем внесения препарата Бациспе-цин, полученного на основе природного штамма Bacillus sp. 739 в Институте биологии УНЦ РАН (г.Уфа), четвертое - фитомелиорация нефтезагрязненной почвы с использованием люцерны в качестве фитомелиоранта. Все испытанные приемы рекультивации показали свою эффективность в повышении активности ферментного пула загрязненных нефтью почв и в ускорении процессов их восстановления.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Нефтяное загрязнение является фактором, нарушающим систему физических, химических и биологических свойств почвы. Существенные изменения выявляются в активности пула ферментов, участвующих в обмене азот-, фосфор-, серусодержащих органических веществ, в углеводном обмене, в окислительно-восстановительных реакциях. Уменьшается активность изученных ферментов, участвующих в углеводном обмене, обмене соединений органического фосфора почвы, активность большинства изученных ферментов обмена азотсодержащих органических соединений. При загрязнении почв нефтью меняются процессы трансформации соединений серы.

2. Нефтяные углеводороды отличаются по своему действию на активность изученных ферментов.

3. Внесение органо-минеральных удобрений, активного ила, использование биопрепарата Бациспецин, фитомелиорация эффективны в восстановлении активности ферментного пула, пула микроорганизмов загрязненных нефтью почв и ускорении процессов их рекультивации.

Практическая значимость работы. Установленная специфика функционирования пула ферментов, участвующего в азотном, углеводном, серном, фосфорном обменах, позволяет научно обоснованно корректировать направленность биохимических процессов в нефтезагрязненных почвах для наиболее полного обеспечения доступными элементами питания как микроорганизмов, так и растений. Активность ряда ферментов можно использовать в практике биомониторинга почв, подвергшихся нефтяному загрязнению. Предложенный метод рекультивации серой лесной почвы, загрязненной в результате прорыва магистрального нефтепровода, опубликован в информационном листке ЦНТИ и внедрен в колхозе «Рассвет» Калтасинского района. Препарат Бациспецин оп-робирован в условиях Южного Предуралья на Сергиевском месторождении (Чекмагушевский район), Западной Сибири (территория Быстринскнефть ПО Сургутнефтегаз) и показал свою эффективность в разных климатических зонах (на основе разработанного метода получен патент РФ №2077397, МЕСИ В 09 с 1/10.).

Апробация работы. Материалы диссертационной работы апробированы на международных симпозиумах и конференциях: «Современные проблемы биоиндикации и биомониторинга» (Сыктывкар, 2001; 2003), «Почва как связующее звено функционирования природных и антропогенно-преобразованных экосистем» (Иркутск, 2001), «Проблемы биодеструкции техногенных загрязнений окружающей среды» (Саратов, 2005), «Вщновлення порушених природных экосистем» (Донецьк, 2002), «Экология и биология почв» (Ростов - на - Дону, 2004, 2007); «Биологическая рекультивация и мониторинг нарушенных земель» (Екатеринбург, 2007), «Экология биосистем: проблемы изучения, индикации и прогнозирования» (Астрахань, 2007); на Всесоюзных и Всероссийских съездах, конференгщях и симпозиумах: микробиологического общества (Алма-Ата, 1985) и общества почвоведов (Ташкент, 1985; Новосибирск, 1989, 2004; Санкт-Петербург, 1996), общества биотехнологов России (Москва, 2005); «Мониторинг нефти и нефтепродуктов в окружающей среде» (Уфа, 1985), «Проблемы рекультивации нарушенных земель» (Свердловск, 1988); «Региональные проблемы экологии» (Казань, 1985), «Микробиологические процессы в почвах и урожайность сельскохозяйственных культур» (Вильнюс, 1986), «Биология почв антропогенных ландшафтов» (Днепропетровск, 1991), «Актуальные вопросы мониторинга экосистем антропогенно-нарушенных территорий» (Ульяновск, 2000); «Проблемы экологии Южного Урала» (Оренбург, 2007); на региональных конференциях (Уфа 1983, 1984, 1985, 1986, 1987, 1989, 1995, 1996).

Личный вклад автора в работу. Диссертационная работа является результатом многолетних (1982-2007 гг.) исследований по изучению влияния нефти и нефтепродуктов на биологическую активность почв Южного Предура-лья. Все результаты получены лично автором или при его непосредственном участии. Доля личного участия в совместных публикациях пропорциональна числу соавторов.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 72 работа, в том числе 2 монографии, 2 учебных пособия, 1 внедрение, 1 патент, 14 работ опубликованы в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, 10 глав, заключения, выводов, списка литературы. Работа изложена на 334 страницах машинописного текста, в том числе 57 таблиц, 70 рисунков. Список литературы включает 535 источников, из них 124 на иностранном языке.

Заключение Диссертация по теме "Почвоведение", Новоселова, Евдокия Ивановна

ВЫВОДЫ

1. Почва аккумулирует и трансформирует нефтяные углеводороды. Загрязнение почв нефтью ведет к трансформации ее ферментного пула, изменению характера ферментативных реакций, физико-химических свойств почвы, ингибирующему или активизирующему влиянию компонентов нефти на ферменты. Ферментный пул в нефтезагрязненной почве трансформирует в подвижное состояние труднодоступные соединения и разрушает поступающие в почву ингредиенты, особенно органические. Активность ферментного пула тесно связана с численностью микроорганизмов. Нефтяное загрязнение приводит к увеличению содержание органического углерода, расширяет соотношение С : 1М, уменьшает выход поглощенных оснований, содержание нитратного азота, увеличивает долю аммиачной формы азота, подвижного фосфора, меняет реакцию почвенной среды. Степень изменения зависит от типа загрязняющей нефти и ее свойств.

2. Загрязнение почв нефтью влияет на пул ферментов, формирующих азотный режим почвы: активизируется действие уреазы и гидроксиламинредук-таз, ингибируется действие протеазы, аспарагиназы, глутаминазы, нитрат- и нитритредуктазы. Высокие дозы сырой нефти и товарной отличаются по своему действию на уреазную активность в силу различного химического состава. Сырая нефть увеличивает активность уреазы и повышает содержание аммиачной формы азота в почве. Товарная нефть через два года ингибирует. Это позволяет использовать активность уреазы, нитрат- , нитритредуктазы в качестве диагностических показателей загрязненности почв нефтью.

3. Нефть ингибирует активность ферментов, участвующих в углеводном обмене, следствием чего является замедление процессов распада растительных остатков, изменение трансформации органических соединений. Прослеживается четкая зависимость активности карбогидраз от степени загрязнения почвы нефтью. Характер этих изменений зависит от состава нефти, ее химических и физических свойств, от естественной буферности почв. Сырая и товарная нефть ингибируют активность инвертазы. Со временем вследствие трансформации углеводородов в почве меняется характер их воздействия на ферментативную активность. Наиболее токсичной для ферментов группы карбогидраз из продуктов разложения углеводородов является салициловая кислота.

4. Поступление нефти в почву ведет к инактивации фосфогидролаз, уменьшению содержания подвижных фосфатов, что ухудшает передвижение фосфора в пищевых цепях, фосфорное питание растений и обеспеченность их доступными формами соединений фосфора.

5. Низкие дозы нефти стимулируют активность изученных ферментов серного обмена, высокие - подавляют. При моделировании нефтяное загрязнение приводит к снижению активности арилсульфатазы, сульфидоксидазы и активизирует сульфатредуктазу, сульфитоксидазу и сульфитредуктазу, в естественных условиях с увеличением дозы нефти снижается активность сульфиток-сидазы, сульфитредуктазы, цистеиндегидрогеназы, повышается активность сульфатредуктазы. Отмечается активация арилсульфатазы, цистеиндегидрогеназы и сульфидоксидазы при низких концентрациях поллютанта. С увеличением срока воздействия активность ферментов в загрязненной почве приближается к контрольному варианту. Наряду с ингибирующим действием нефти на активность основных ферментов серного обмена наблюдается увеличение численности тионовых и сульфатвосстанавливающих бактерий, что предотвращает потери серы. В нефтезагрязенных почвах интенсивнее идут процессы, направленные на восстановление сульфитов и сульфатов по сравнению с окислением соединений серы. Это может привести к уменьшению содержания сульфатной формы серы, используемой растениями в питании, и накоплению восстановленных соединений.

6. Активность пероксидазы и полифенолоксидазы выше в выщелоченном черноземе в начальный период после загрязнения, в серой лесной почве она нарастает постепенно. В обоих типах почв низкие дозы нефти стимулируют пе-роксидазу и полифенолоксидазу, высокие - ингибируют. Из нефтепродуктов наиболее токсичным был ДГФ, содержащий в составе ароматические углеводороды. Менее доступен ферментативному окислению асфальтит. Нефтяное загрязнение повышает активность аскорбатоксидазы пропорционально концентрации загрязнителя и ее можно использовать в качестве одного из показателей загрязненности почв нефтью.

В темно-серой лесной почве при загрязнении товарной нефтью и нефтепродуктами окислительно-восстановительные реакции с участием каталазы и дегидрогеназы протекают интенсивнее, чем в серой лесной. Нефтяное загрязнение снижает активность оксидоредуктаз. Сырая нефть в течение длительного времени уменьшает активность каталазы, не влияя существенно на дегидроге-назную. Через десять лет после загрязнения окислительно-восстановительные реакции в почве интенсифицируются. Изменение активности ферментов зависит как от состава, так и от дозы загрязнителя. Первоначально ингибирующее действие на активность каталазы и дегидрогеназы оказывает ЛГК, по истечении трех месяцев - ЭМ + Г и ЭМ, а через год все фракции ингибируют активность дегидрогеназы, для каталазы менее токсичным был ЛГК в низких концентрациях.

7. Активность липазы в нефтезагрязненной серой лесной почве возрастает, со временем стабилизируется и сохраняется длительное время на достаточно высоком уровне. Интенсивный липолиз коррелирует с увеличением численности УОМ и с уменьшением содержания остаточных компонентов нефти в почве.

8. Парафиновые и циклопарафиновые углеводороды активизируют, а ароматические углеводороды ингибируют активность уреазы, амилазы, инвертазы, ксиланазы, целлюлазы, фосфатазы, каталазы, дегидрогеназы.

9. Приемы биорекультивации, направленные на стимуляцию аборигенной углеводородокисляющей микробиоты (внесение минеральных, органических удобрений и их сочетания), внесение активного ила, углеводородокисляющих микроорганизмов в виде бакпрепарата Бациспецин и использование люцерны в качестве фитомелиоранта, значительно повышают биологическую активность почв, ускоряют процессы биоразложения нефтяных углеводородов, снижают их токсичность, нормализуют ферментативную активность и в более короткие сроки ведут к восстановлению почв до исходного состояния.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Нефть, попадая в почву, ведет к полной перестройке структуры и функциональной активности биогеоценозов. Почва перестает выполнять ряд своих функций. Вследствие миграции нефтяных углеводородов по почвенному профилю почвенные частицы пропитываются нефтью, меняются ее физико-химические свойства: ухудшается структурный состав, происходят изменения в почвенно-поглощающем комплексе, рН, растет соотношение С : >1, уменьшается содержание доступных форм основных элементов питания Т<Г, Р, К и тем самым создаются неблагоприятные условия для существования микробиоты, роста и развития растений.

Одним из параметров метаболической активности биоценозов, который необходимо измерять, наряду с общей численностью микроорганизмов, интенсивностью дыхания, является пул ферментов. Ферментативная активность почв - один из показателей ее потенциальной биологической активности, характеризующий потенциальную способность системы сохранять гомеостаз и один из показателей метаболической активности микрофлоры. Гидролитические и окислительно-восстановительные ферментные системы играют важнейшую роль в биогеоценозе, включая в биогеохимические циклы азот, фосфор, углерод, серу и др. элементы.

При нефтяном загрязнении происходит трансформация ферментного пула почвы, что ведет к изменению характера биохимических реакций в почве.

Процессы превращения азота и его соединений в почве в доступные для растений и микроорганизмов формы происходят с участием пула ферментов азотного обмена. Высокая активность протеазы, уреазы, аспарагиназы, глута-миназы, нитрат-, нитритредуктазы, гидроксиламинредуктазы непосредственно и через промежуточные реакции обогащает почву аммиачной формой азота (схема 1).

Мочевина

Белки

Глутамин

Аспарапротеаза уреаза аспарагинаглутаминаза

ЫН3

Гидроксилагидроксил аминредуктаза нитритредук нитратредуктаза

N2 оксидо редуктаза

М)3~

Схема 1 .Участие пула ферментов в азотном обмене.

Нефтяное загрязнение ингибирует активность большей части изученных нами ферментов: протеазы, аспарагиназы, глутаминазы, нитрат- и нитритредук-тазы и повышает активность уреазы, гидроксиламинредуктазы (схема 2). Трансформация пула ферментов азотного обмена в сторону повышения активности уреазы может приводить к значительным потерям азота мочевины.

Нитрит

Схема 2. Влияние нефти на активность ферментов азотного обмена. Примечание: + стимуляция активности, - ингибирование.

В цикле углерода активное участие принимает группа ферментов карбо-гидраз: инвертаза, целлюлаза, а и (3-амилаза, ксиланаза.

Загрязнение почв нефтью ингибирует активность изученных ферментов, участвующих в углеводном обмене следствием чего является замедление процессов распада растительных остатков, изменение трансформации органических соединений. Характер этих изменений зависит от состава нефти, ее химических и физических свойств, от естественной буферности почв. Сырая и товарная нефть ингибируют активность инвертазы. Со временем вследствие трансформации углеводородов в почве меняется их характер воздействия на ферментативную активность, которая зависит также и от численности целлюло-зоразрушающих микроорганизмов.

Пул фосфогидролаз осуществляет мобилизацию органических соединений фосфора и выполняет важную роль в круговороте фосфора в биогеоценозах. Он обеспечивает растения и микроорганизмы доступными соединениями фосфора (схема 3). Нефтяное загрязнение снижает активность фосфатазы, фи-тазы, РНКазы, ДНКазы, АТФазы. С уменьшением активности ферментов данной группы снижается содержание подвижных фосфатов.

ДНК органические фосфаты

РНКаза

Р04 з

РНК

ЧАТФ

Схема 3. Участие пула ферментов в фосфорном обмене.

Ферменты серного обмена участвуют в круговороте серы (схема 4). Влияние нефтяного загрязнения на активность ферментов серного обмена зависит от буферности почв.

Схема 4. Участие ферментов серного обмена в круговороте серы.

Так, в серой лесной почве нефть снижает активность большинства ферментов серного обмена: арилсульфатазы, цистеиндегидрогеназы, сульфат-, сульфитредуктазы, сульфит-, сульфидоксидазы. В почве с большей буферной емкостью (выщелоченный чернозем) активность сульфит-, сульфидоксидазы, сульфат-, сульфитредуктазы повышается. Противоречие между ингибирующим влиянием нефти на активность ферментов серного обмена и стимуляцией роста численности тионовых и сульфатвосстанавливающих бактерий можно объяснить развитием своеобразного «компенсационного» механизма, способствующего сохранению динамики серы и ее соединений в почве (схема 5).

Группа окислительно-восстановительных ферментов (пероксидаза, поли-фенолоксидаза, каталаза, дегидрогеназа, аскорбатоксидаза) играет важную роль в процессах гумификации, разрушения соединений ароматического ряда. Характер влияния нефти на их активность определяется буферной емкостью почвы, свойствами нефти. Низкие дозы нефти стимулируют активность ПО, ПФО, высокие - ингибируют. Загрязнение почвы нефтью активизирует активность аскорбатоксидазы.

Нефтяное загрязнение стимулирует активность липазы, которая коррелирует положительно с численностью УОМ и отрицательно с содержанием остаточных компонентов нефти.

А — активация, И — ингибирование Серая лесная почва

Выщелоченный чернозем

Схема 5. Влияние нефти и нефтепродуктов на активность ферментов, участвующих в серном обмене.

Разнонаправленная трансформация активности ферментов при загрязнении нефтью связана с ее поликомпонентностью и их разным влиянием на активность ферментов: н-парафины, циклопарафины — стимулируют активность целлюлазы, амилазы, ксиланазы, фосфатазы; ароматические фракции - ингиби-руют. Наиболее токсичной для ферментов группы карбогидраз из продуктов разложения углеводородов является салициловая кислота. Нефтепродукты разной степени конденсированности (ДГФ, бензин, крекинг-остаток), за исключением асфальтита, ингибируют активность ПО. Фракции нефти, содержащие в своем составе ароматические углеводороды, ингибируют активность каталазы и дегидрогеназы. Н-гексадекан и циклогексан стимулируют активность каталазы и дегидрогеназы. Бензапирен - ингибирует.

Процесс «самовосстановления» биохимической активности нефтезагряз-ненной почвы до уровня незагрязненной достаточно длителен. Активность ряда ферментов: протеазы, инвертазы, фосфатазы достигает контрольного уровня и превышает его в нефтезагрязненных почвах только через 10 лет.

Механизм «самовосстановления» экосистемы после нефтяного загрязнения достаточно сложен. Необходим поиск эффективных способов возвращения экосистемы в границы стабильного состояния. Нами рассмотрены четыре способа рекультивации нефтезагрязненных почв. Первый ряд приемов направлен на стимуляцию естественной микробиоты, который включает в себя ежегодное внесение органо - минерального комплекса. Второе направление - внесение активного ила биохимкомбината, содержащего естественную ассоциацию углево-дородокисляющих микроорганизмов и питательные вещества (N, Р, К), иммобилизованные на частицах ила. Третье направление - очистка почв путем внесения препарата Бациспецин, полученного на основе природного штамма Bacillus sp. 739 в Институте биологии УНЦ РАН, четвертое - фитомелиорация неф-тезагрязненной почвы с использованием люцерны в качестве фитомелиоранта. Все испытанные приемы рекультивации показали свою эффективность в повышении активности ферментного пула загрязненных нефтью почв и в ускорении процессов их восстановления.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Новоселова, Евдокия Ивановна, Уфа

1. Абдрахманов Р.Ф. Техногенез в подземной гидросфере Предуралья. -УНЦ РАН. Уфа, 1993. - 208с.

2. Абдуев М.Р., Аскеров А.О. Рекультивация нефтезагрязненных земель в Азербайджане // Вестн. с.-х. науки. 1979. № I. - С. 57-61.

3. Абрамян С.А. Изменение ферментативной активности почвы под воздействием естественных и антропогенных факторов // Почвоведение. 1992. № 7. - С. 70-82.

4. Автухович И.Е. Роль ризосферы в детоксикации почв, загрязненных тяжелыми металлами // Биология — наука XXI века: Тез. 6-ой Пущинской школы конф. Т.З. - Пущино, 2002. - С. 82.

5. Агрохимические методы исследования почв. М.: Наука, 1975.656с.

6. Адерихин П.Г., Щербаков А.П. Азот в почвах Центральночерноземной полосы. Воронеж, 1974. - 169с.

7. Айдинян Р.Х. Содержание и формы соединений серы в различных почвах СССР и ее значение в обмене веществ между почвой и растением // Агрохимия. 1964. № 10. - С. 3-15.

8. Акбиров P.A. Бонтировка почв под зерновые культуры северной лесостепи Башкирской АССР: Автореф. дис. к. с.-х. наук. Баку, 1986. 21с.

9. Алиев С.А., Гаджиев Д.А. Влияние загрязнения нефтяным органическим веществом на активность биологических процессов почв // Изв. АН

10. АзССР. Сер. биол. наук. 1977. № 2. - С. 46-49.

11. Алтынцева О.В., Плотникова Е.Г., Демаков В.А. Сообщество микробов-деструкторов полиароматических углеводородов из почв с высокой промышленной нагрузкой: Тез. 14 Комиреспубликанской молодежной научной конф. Т.П. Сыктывкар, 2000. - С. 7.

12. Амосова Я.М., Бочарникова Е.А. Методы контроля нефтезагрязнен-ных почв / Физические и химические методы исследования почв: Сб. науч. тр./ Под ред. А.Д.Воронина и Д.С.Орлова. М.: Изд-во МГУ, 1994. - С. 69-86.

13. Андерсон Р. К, Хазиев Ф. X. Борьба с загрязнением почвогрунтов нефтью: Обзорная информация. Сер. «Коррозия и защита в нефтегазовой промышленности». М.: ВНИИОЭНГ, 1981. 45с.

14. Андреева А.Е. Ферментативная активность как эколого-диагностический показатель функционального состояния почв: Тез. науч.- ко-ординац. совещания «Экологическое нормирование, проблемы и методы» (Пущине, 13-17 апреля 1992г.). М., 1992. - С. 5-7.

15. Андресон Р.К., Мукатанов А.Х., Бойко Т.Ф. Экологические последствия загрязнения нефтью // Экология. 1980. № 6. - С. 21-25.

16. Андресон Р.К., Хазиев Ф.Х., Бойко Т.Ф., Пропадущая Л.А., Прочухан Т.О. Биоэкологические аспекты загрязнения почв нефтью: Тез. докл. Всесоюзного совещания семинара по охране окружающей среды в нефтяной промышленности. - Уфа, 1980. - С. 27-29.

17. Андресон Р.К., Хазипов Р.Х. Охрана окружающей среды от загрязнения нефтью, промысловыми сточными водами // Сер. Коррозия и защита в нефтегазовой промышленности. М.: ВНИИОЭНГ, 1978. - 38с.

18. Андрусенко Р.К., Бильмас Б.И., Джамалов Т.Д., Рунов В.И. Распространение углеводородокисляющих микроорганизмов в почвах основных нефтеносных месторождений Узбекистана // Микробиология. 1969. - Т.39. № 5. -С. 873-877.

19. Аниськина М.В. Использование традесканции (клон 02) в биоиндикации нефтяных загрязнений: Тез. 14 Комиреспубликанской молодежной научной конф. Т.П. - Сыктывкар, 2000. - С. 8-9.

20. Антоненко A.M. Аллювиальные техногенно-преобразованные почвы оз. Байкал: микрофлора и биохимические процессы: Тез. докл. Междунар. конф. «Проблемы антропогенного почвообразования». М., 1997. - Т.1. - С. 260-262.

21. Антоненко A.M., Занина О.В. Влияние нефти на ферментативную активность аллювиальных почв Западной Сибири // Почвоведение. 1992. № 1. -С. 38-43.

22. Аринушкина Е.В. Руководство по химическому анализу почв. М., 1970.-491с.

23. Артемьева Т.И. Комплексы почвенных животных и вопросы рекультивации техногенных территорий. М., 1989. - 110с.

24. Артемьева Т.И. Почвенные животные как индикаторы загрязнения почвы нефтью и нефтепромысловыми сточными водами // Защита растений и охрана окружающей среды в Татарской АССР. Казань, 1982. - С. 166-167.

25. Артемьева Т.И., Жеребцов А.К., Борисович Т.Н. Влияние загрязнения почвы нефтью и нефтепромысловыми сточными водами на комплексы почвенных животных // Восстановление нефтезагрязненных почвенных экосистем. М.: Наука, 1988. - С. 82-99.

26. Ахмедов А.Г., Ильин Н.П., Исмаилов Н.М., Пиковский Ю.И. Особенности деградации тяжелой нефти в светлых светло-коричневых почвах сухих субтропиках Азербайджана / Добыча полезных ископаемых и геохимия природных экосистем. М.: Наука, 1982. - С. 217-225.

27. Ахмедов В.А., Байрамов JI.A., Кахраманова Т.Е., Кулиева Я.А. Приемы рекультивации нефтезагрязненных земель // Проблемы рекультивации нарушенных земель: Тез. докл. V Уральского совещания 14-18 ноября 1988. -Свердловск, 1988. С. 137-138.

28. Ахундов В.Ю., Сеидов И.М., Ахундова JI.X., Масловецкая Г.Ю. К гигиенической характеристике загрязнения почвы Апшеронского полуострова нефтью и ее продуктами // Азерб. тиббж. Азерб. мед. ж. 1981. С. 37-40.

29. Ахундова JI.X., Масловецкая Г.Ю. Влияние нефтепродуктов на ферментативные процессы в почве // Научные основы гигиены окружающей среды и инфекционной патологии. Баку, 1980. - С. 29-33.

30. Бабьева И.П., Зенова Г.М. Биология почв. М.: Изд-во МГУ, 1989.336с.

31. Бакаева М.Л., Мифтахова A.M. Биоиндикация нефтезагрязненных почв по видовому разнообразию микромицетов: Тез. XI Междунар. симпоз. по биоиндикаторам «Современные проблемы биоиндикации и биомониторинга». 17-21 сентября 2001г. Сыктывкар, 2001. - С. 11.

32. Барахнина В.Б. Способы интенсификации биоочистки почвы и воды от нефти, нефтепродуктов и некоторых буровых отходов: Автореф. дис. к. т. н. Уфа, 1999. 23с.

33. Барковский А.Л. Почвенная культура рода Acinotobacter, утилизирующая ароматические соединения // Вопросы биохимии и физиологии микроорганизмов. Саратов, 1986. - Вып. 10. - С. 38-40.

34. Безуглова О.С., Курносов A.A., Казеев К.Ш. К вопросу о биологическом мониторинге почв: Тез. XI Междунар. симпоз. по биоиндикаторам «Современные проблемы биоиндикации и биомониторинга». 17-21 сентября 2001г. Сыктывкар, 2001. - С. 14-15.

35. Белова Н.В., Маркарова М.Ю., Бушнев Д.А. Методика выделения фракций насыщенных и ароматических углеводородов из растительных образцов: Тез. 14 Комиреспубликанской молодежной научной конф. Т.П. - Сыктывкар, 2000. - С. 14-15.

36. Беляева М.И., Лещинская И.Б., Юсупова Д.В. Нуклеодеполимеразы бактерий / Нуклеазы микроорганизмов. М.: Наука, 1974. - С. 7-116.

37. Берадзе H.A., Ошакмашвили Н.Л. Биологическая активность нефтезагрязненных почв // Сообщ. АН ГССР 1987. 128. № I. - С. 129-132.

38. Билай В.И., Коваль Э.З. Рост грибов на углеводородах нефти Киев: Наук, думка, 1980. - 254с.

39. Бирштехер Э. Нефтяная микробиология / Под ред. М.Ф. Двали, Т.Л. Силиковой. JL: Гостоптехиздат, 1957. 314с.

40. Битюцкий Н.П., Соловьева А.Н., Лукина Е.И., Лапшина И.Н., Власов Д.Ю., Кудряшова Н.В. Влияние дождевых червей на модификацию популяции микроорганизмов и активность ферментов в почве // Почвоведение. 2005. №1. -С. 82-91.

41. Воронин A.M., Старовойтов И.И. Биотехнология защиты окружающей среды: Тез. Докл. (Пущино, 18-19 октября 1994г.). Пущино, 1994. С. 37.

42. Бочарникова Е.А. Влияние нефтяного загрязнения на свойства серобурых почв Апшерона и серых лесных почв Башкирии: Автореф. дис.канд.биол. наук. М., 1990. 16с.

43. Бреус И.П., Смирнова-Ефстифеева Е.В., Неклюдов С.А., Бреус В.А. Транспорт жидких углеводородов в выщелоченном черноземе // Почвоведение.- 2005. № 6. С. 672-684.

44. Бузмаков С.А., Ладыгин И.В. К влиянию нефтепромыслов на растительный и животный мир Камского Предуралья: Тез. докл. межгосуд. науч. конф. «Геоэкол. аспекты хозяйствования, здоровья и отдыха». Пермь, 1993.4. 1.-С. 201-205.

45. Буравцев В.Н., Крылова Н.П. Современные технологические схемы фиторемедиации загрязненных почв//Сельскохозяйственная биология. 2005. №5. С. 67-74

46. Бусыгина Е.А. Влияние концентрации нефти на активную альгофло-ру, отражающую состояние почвы: Тез. докл. Ш Всесоюзной научной конференции «Микроорганизмы в сельском хозяйстве». Москва, 23-25 декабря 1986г. -М., 1987.-С. 124-125.

47. Вадюнина А.Ф., Корчагина 3. А. Методы исследования физических свойств почв и грунтов. М., 1989. - 399с.

48. Важенин И.Г. О разработке предельно допустимых концентраций (ПДК) химических веществ в почве // Бюл. Почв, ин-та им. В.В.Докучаева, 1983.-Вып. 35. -С. 3-6.

49. Вальников И.У. Баланс серы в земледелии Среднего Поволжья // Агрохимия. 1981. № 1. - С. 50-57.

50. Вальников И.У. Формы серы и их распространение по профилю черноземов Среднего Поволжья // Почвоведение. 1973. № 11. - С. 70-76.

51. Водопьянов В.В., Киреева H.A. Использование математической модели для прогозирования динамики численности микроорганизмов в нефтезаг-рязненных почвах: Тез. Докл. II съезда общества почвоведов. С.- Петербург, 1996.-кн. 1.-С. 55.

52. Вологжанина Т.В. Серые лесные почвы зоны широколиственных лесов Русской равнины: Автореф. дис. д-ра с.-х. наук. М., 1984. 50с.

53. Воробейчик E.JL, Садыков О.Ф., Фарафонтов М.Г. Экологическое нормирование техногенных загрязнений наземных экосистем (локальный уровень). Екатеринбург: УИФ «Наука», 1994. - 280с.

54. Ворошилова A.A., Дианова Е.В. Окисляющие нефть бактерии показатели интенсивности биологического окисления нефти в природных условиях // Микробиология. - 1952. - Т. 21. - Вып. 4. - С. 408-415.

55. Восстановление нефтезагрязненных почвенных экосистем. М.: Наука, 1988. - 254с.

56. Габбасова И.М. Деградация и рекультивация почв Южного Приура-лья: Автореф. дис. д-ра с.-х. наук. М.: ТСХА, 2001. 45 с.

57. Габбасова И.М., Абдрахманов Р.Ф., Хабиров И.К., Хазиев Ф.Х. Изменение свойств почв и состава грунтовых вод при загрязнении нефтью и нефтепромысловыми сточными водами в Башкирии // Почвоведение. 1997. №11. - С. 1362-1372.

58. Габбасова И.М., Хазиев Ф.Х., Сулейманов P.P. Оценка состояния почв с давними сроками загрязнения сырой нефтью после биологической рекультивации // Почвоведение. 2002. №10. - С. 1259-1273.

59. Гайнутдинов М.З., Гайсин И.А., Храмов И.Т., Гилязов М.Ю. О токсичности нефти: Всесоюз. научн.-техн. конф. «Пробл. разраб. автоматизир. систем наблюдения, контроля и оценки состояния окружающей среды». Казань, 1979.-С. 141-143.

60. Гайнутдинов М.З., Гилязов М.Ю., Храмов И.Т. Изменение агрохимических свойств выщелоченных черноземов под влиянием нефтепромысловых сточных вод и их рекультивация // Агрохимия. 1982. № 7. - С. 111-116.

61. Галиуллин Р.В. Индикация загрязнения почв тяжелыми металлами путем определения активности почвенных ферментов // Агрохимия. 1989. № 11.-С. 133-142.

62. Галиуллин Р.В., Пинский Д.Л. Действие свинца на дегидрогеназную активность сероземно-луговой почвы // Агрохимия. 1988. № 6. - С. 93-99.

63. Галстян А.Ш. Ферментативная активность почв Армении. Ереван: Айастан, 1974. - 260с.

64. Галстян А.Ш. Роль ферментов в процессах образования соды в почве //Почвоведение. 1967. №5. - С. 89-96.

65. Галстян А.Ш. Ферментативная активность почв Армении. Изд. Айастан. Ереван, 1974. - 275с.

66. Галстян А.Ш. Ферментативная диагностика почв / Пробл. и методы биол. диагностики и индикации почв. М., 1980. - С. 110-121

67. Галстян А.Ш., Антонян Э.В. О превращении цистеина в почве //

68. Докл. АН Арм. ССР. 19816. - Т.73. № 3. - С. 168-170.

69. Галстян А.Ш., Антонян Э.В. Определение активности сульфитокси-дазы почвы // Докл. Арм. ССР. 1981а. - Т. 72. № 3. - С. 183-187.

70. Галстян А.Ш., Арутюнян Э.А. Методы определения активности сульфидоксидазы почвы // АН Арм. ССР. 1968. - Т. 47. № 5. - С. 287-289.

71. Галстян А.Ш., Базоян Г.В. Об активности арилсульфатазы почвы // Докл. АН Арм. ССР. 1974. - Т. 59. №3. - С. 184-187.

72. Галстян А.Ш., Григорян К.В. Ферментативная диагностика почв // Тр. НИИ почвовед, и агрохимии / М-во сельск. хоз-ва АрмССР. 1978. № 13. -С. 132-140.

73. Гамзеги Е. Взаимодействие нефти и ее продуктов с илистыми минералами / Сб. докл. VIII Междунар. симпозиума. Т.2. Доклады о гумусе. Прага, 29 авг. - 3 сент. 1983. - Чехословакия, 1983. - С. 231.

74. Гарифуллин Ф.Ш., Ишемьяров А.Ш. Почвы Южного Урала и их рациональное использование. Ульяновск, 1987. - 83с.

75. Гателье С. Получение путем естественной адаптации различных типов микроорганизмов, способных усваивать и перерабатывать нефтяные фракции: Применение к депарафинизации и синтезу белков // Нефтехимия. -1963. -Т.З. № 5. С. 25-31.

76. Гилязов М.Ю. Агроэкологическая характеристика нарушенных при нефтедобыче черноземов и приемы их рекультивации в условиях Закамья Татарстана: Автореф. дис. .док. с/х наук. Саратов, 1999. 43с.

77. Гилязов М.Ю. Изменение некоторых агрофизических свойств выщелоченного чернозема при загрязнении товарной нефтью в условиях Татарстана //Почвоведение. 2002. № 12. - С. 1515-1519.

78. Гилязов М.Ю. Изменение некоторых агрохимических свойств выщелоченного чернозема при загрязнении его нефтью // Агрохимия. 1980. № 12. -С. 72-75.

79. Гилязов М.Ю., Гайсин И.А., Рязанов В.И. Рекультивация земель, нарушенных нефтяной промышленностью: Тез. докл. У Уральского совещания «Проблемы рекультивации нарушенных земель». 14-18 ноября 1988 г. Свердловск, 1988.-С. 133-134.

80. Головлева JI.A. Микробные методы деконтаминации почв и грунтовых вод // Биотехнология. 1992. №5. - С. 60-64.

81. Голодяев Г.П. Консорциум штаммов микроорганизмов-деструкторов, используемых для очистки почв, почвогрунтов от нефтепродуктов: Тез. докл. III съезда Докучаевского общества почвоведов (11-15 июля 2000г., Суздаль). -кн. 2. Москва, 2000. - С. 11-12.

82. Голодяев Г.П. Микробиологическая деструкция нефтепродуктов в почве / Достижения микробиологии практике. Экология, геохимическая деятельность микроорганизмов и охрана окружающей среды. - Изд.: Наука Казахской ССР. - Алма-Ата, 1985. - Т.6. - С. 42.

83. Голодяев Г.П., Никитина З.И. Санация нефтезагрязненных почв юга Дальнего Востока: Тез. Докл. II съезда общества почвоведов. С.- Петербург, 1996. - кн. 1. - С. 246.

84. Горлатов С.Н., Беляев С.С. Аэробная микрофлора нефтяного месторождения и способность ее к деструкции нефти // Микробиология. 1984. - Т. 53. №5. - С. 843-849.

85. Горлатов С.Н., Беляев С.С. Аэробная микрофлора нефтяного месторождения и способность ее к деструкции нефти // Микробиология. 1984. - Т. 53. №5. - С. 843-850.

86. Градова Н.Б., Диканская Э.М., Михалева В.В. Использование углеводородов дрожжами. М., 1971. - 120с.

87. Григорян К.В. Влияние ионов тяжелых металлов на активность ферментов почв // Биол. журн. Армении. 1982. - Т. 35. № 8. - С. 653-656.

88. Григорян К.В. Экологическая оценка компонентов биогеоценоза по активности ферментов: Автореф. дис. док. биол. наук. Ереван, 1990. 32с.

89. Григорян К.В., Галстян А.Ш. Влияние загрязненных промышленными отходами оросительных вод на ферментативную активность почв // Почвоведение. 1979. №3. - С. 130-138.

90. Григорян К.В., Галстян А.Ш. Диагностика загрязненных тяжелыми металлами орошаемых почв по активности фосфатазы. // Почвоведение. 1986. № 8. - С. 63-67.

91. Григорян К.В., Галстян А.Ш. Оценка степени загрязненности почвы по активности инвертазы // Методы и проблемы экотоксикологического моделирования и прогнозирования. Пущино: ТИ НЦБИ АН СССР, 1979. С. 164165.

92. Гродзинский A.M., Головко Э.А. Естественные и искусственные аг-роэкосистемы: проблемы и методы изучения почвоутомления: Всес. научн. конф. «Современные методы исслед. почв». М., 1985. - С. 96-97.

93. Гузев B.C. Экологическая оценка антропогенных воздействий на микробную систему почвы: Автореф. дис.док. биол. наук. Москва, 1988. 38с.

94. Гузев B.C., Левин C.B., Селецкий Г.И. и др. Роль почвенной микро-биоты в рекультивации нефтезагрязненных почв / Микроорганизмы и охрана почв.-М., 1989.-С. 129-150.

95. Гулиев И.С. Роль биосферы в процессе дегазации Земли / Дегазация Земли и геотектоника. М., 1980. - С. 275-276.

96. Гулько А.Е., Хазиев Ф.Х. Фенолоксидазы почв: продуцирование, иммобилизация, активность // Почвоведение. 1992. № 11. - С. 55-67.

97. Гусев М.В., Коронелли Т.В. Микробиологическое разрушение нефтяного загрязнения // Изв. АН СССР. Сер. биол. - 1981. № 6. - С. 835-846.

98. Гусева O.A. Экспериментальное моделирование миграции нефти и нефтепродуктов в почвах тундры ЕТР: Тез. докл. II съезда общества почвоведов. С.- Петербург, 1996. - кн. 1. - С. 160.

99. Гусейнов Д.М., Гвозденко Д.В. Опыты по рекультивации нефтезагрязненных земель, расположенных на окраинах г. Баку: Тез. докл. X научн. сессии. Баку, 1972. - С. 84-86.

100. Гусейнова Э.А., Кернова И.Г., Реджек М. Влияние нефтяных загрязнений на состояние и биоразнообразие энтомофауны в лесных ценозах северо-восточного Азербайджана. 2001. - 168с.

101. Давыдова М.Н., Мухшпова Ф.К., Ибатуллин P.P. Анаэробная трансформация нефти под действием экстрактов клеток Desulfovibrio desulfuri-cans // Микробиология. 1998. № 2. - С. 202-207.

102. Девятова Т.А. Биоэкологические принципы мониторинга и диагностики загрязнения почв // Вестник ВГУ. Серия: Химия, Биология, Фармация. -2005. №1. С.105-106.

103. Деградация и охрана почв / Под общей ред. Г.В.Добровольского. -М.: Изд-во МГУ, 2002. 654с.

104. Дедюхина Э.Г., Желифонова В.П., Ерошин В.К. Углеводороды микроорганизмов // Успехи микробиологии. М., 1980. - Вып.15. - С. 84-98.

105. Демидиенко А.Я., Демурджан В.М. Пути восстановления плодородия нефтезагрязненных почв черноземной зоны Украины / Восстановление нефтезагрязненных почвенных экосистем. М.: Наука, 1988. - С. 197-206.

106. Демидиенко А.Я., Демурджан В.М., Шеянова Л.Д. Изучение питательного режима почв, загрязненных нефтью // Агрохимия. 1983. № 9. - С. 100-103.

107. Дмитриев Е.А. Математическая статистика в почвоведении. М.: Изд-во Моск. ун-та, 1995. - 320с.

108. Добровольский Г.В. Место и роль почвоведения в изучении и решении современных экологических проблем // Вестн. Моск. ун-та. сер. 17. Почвоведение. - 2006. № 2. - С. 3-7.

109. Добровольский Г.В. Тихий кризис планеты // Вести РАН. 1997. -Т. 67. №4. -С. 313-320.

110. Добровольский Г.В., Никитин Е.Д. Функция почв в биосфере и экосистемах (экологическое значение почв). М.: Наука, 1990. - 261с.

111. Добровольский Г.В., Никитин Е.Д. Экологические функции почвы. М.: Изд-во МГУ, 1986. - 289с.

112. Добровольский Г.В., Никитин Е.Д.Сохранение почв как наземных компонентов биосферы. Функционально-экологический подход.- М.: Наука. -МАИК, Наука / Интерпериодика, 2000. 185с.

113. Доброворльский Г.В., Никитин Е.Д. Экология почв.- М.: Наука. -МГУ, 2006. 362с.

114. Долгова Л.Г. Активность оксидоредуктаз как диагностический показатель загрязнения почвы промышленными отходами // Почвоведение. 1978. №7.-С. 152-157.

115. Долгова Л.Г. Биохимическая активность почвы при загрязнении // Почвоведение. 1975. № 4. - С. 113-118.

116. Долгова Л.Г. О фенолоксидазной активности почвы в условиях промышленного загрязнения // Почвоведение. 1973. № 9. - С. 64-69.

117. Дубовик И.Е. Альгоиндикация почв, загрязненных нефтью и нефтепродуктами: Тез. XI Междунар. симпоз. по биоиндикаторам «Современные проблемы биоиндикации и биомониторинга». 17-21 сентября. Сыктывкар, 2001.-С. 41.

118. Егоров Н.С. Практикум по микробиологии. Изд. Московского унта, 1976. - 307с.

119. Емцев В. Т. Экология анаэробных почвенных бактерий / Почвенные организмы как компоненты биогеоценоза. М.: Наука, 1984. - С. 141-162.

120. Емцев В.Т., Селицкая О.В., Станкевич Д.С., Алехин В.Г. Микробная биоремедиация нефтезагрязненных почв: Тез. докл. III съезда Докучаевско-го общества почвоведов (11-15 июля 2000г., Суздаль). Москва, 2000. - кн. 2. -С. 18.

121. Ермакова Е.И., Панова Г.Г. Стратегия биореставрации химически загрязненных почв в зонах экологического риска: Тез. докл. междун. конф. «Освоение Севера и проблемы природовосстановления». Сыктывкар, 2001. -С. 84.

122. Ермоленко З.М., Чугунов В.А., Герасимов В.Н., Мартовецкая И.И., Холоденко В.П., Влияние некоторых факторов окружающей среды на выживаемость внесенных бактерий, разрушающих нефтяные углеводороды // Биотехнология. 1997. № 5. - С. 33-38.

123. Ерцев Г.Н. Исследование влияния остаточной концентрации нефтепродуктов в почве на произростание многолетних трав: Тез. V междунар. конф. «Освоение Севера и проблемы природовосстановления». 5-8 июня 2001. -Сыктывкар, 2001. С. 86- 87.

124. Ефремов A.JI. Ферментативная активность и свободные аминокислоты в почвах пойменных лугов Белорусского Полесья // Почвоведение. 2003. №7. - С. 828-834.

125. Жаврид Е.В. Мониторинговые системы в нефтяной отрасли: Тез. 14 Комиреспубликанской молодежной научной конф. Т.П. - Сыктывкар, 2000. -С.71-72.

126. Жегневская JI.B. Биодеградация компонентов нефти и нефтепродуктов микроорганизмами: Автореф. дис.к.т.н. Уфа, 1999. 21с.

127. Закиров А.З., Тесликова H.A., Султанова С.Т., Умаров X. О влиянии южноузбекистанской нефти на биогенность почв в ранние периоды вегетации хлопчатника // Узбекский биол. журнал. 1982. № 1. - С. 19-21.

128. Звягинцев Д.Г. Биологическая активность почв и шкалы для оценки некоторых ее показателей // Почвоведение. 1978. № 6. - С. 48-54.

129. Звягинцев Д.Г. Почва и микроорганизмы. М., 1987. - 256с.

130. Звягинцев Д.Г., Гузев B.C., Левин C.B. и др. Диагностические признаки различных уровней загрязнения почвы нефтью // Почвоведение. 1989. № 1.-С. 72-78.

131. Зименко Т.Г., Картыжова Л.Е. Влияние нефтяного загрязнения на биологическую активность дерново-подзолистой легкосуглинистой почвы // Вестн. АН БССР. Сер. биол. н. - 1986а. № 6. - С. 52-55.

132. Зименко Т.Г., Картыжова Л.Е. Влияние речицкой нефти на биоген-ность дерново-подзолистой почвы: Матер, конф. «Микробиологические процессы в почвах и урожайность сельскохозяйственных культур». Вильнюс, 19866.-С. 125.

133. Зимонина Н.М. Почвенные водоросли как индикаторы нефтезагряз-ненности почв: Тез. XI Междунар. симпоз. по биоиндикаторам «Современные проблемы биоиндикации и биомониторинга». 17-21 сентября 2001г.- Сыктывкар, 2001. С. 69.

134. Иванникова Л.А., Мироненко Е.В. Теория регионализованных переменных при исследовании пространственной вариабельности показателей агрохимических свойств почвы // Почвоведение. 1988. №5.-С. 113-121.

135. Иванов М.В., Беляев С.С., Лауринавичус К.С., Образцова А.Я., Гор-латов С.Н. Распространение и геохимическая деятельность микроорганизмов в заводняемом нефтяном месторождении // Микробиология. 1982. - Т. 51. - Вып. 2. - С. 336-341.

136. Ившина И.Б., Филп Д., Куюкина М.С., Кристофи Н. Биоремедиация почв, загрязненных сырой нефтью: Междунар. конф. посвящ. памяти акад. А.А.Баева. Москва, 20-22 мая 1996г. М., 19966. - С. 160.

137. Исмаилов Н.М. Биодеградация нефтяных углеводородов в почве, инокулированной дрожжами // Микробиология. 1985. - Т. 54. № 5. - С. 835841.

138. Исмаилов Н.М. Влияние нефтяного загрязнения на круговорот азота в почве // Микробиология. 1983. - Т. 52. № 6. - С. 1003-1007.

139. Исмаилов Н.М. Микробиологическая и ферментативная активность нефтезагрязненных почв / Восстановление нефтезагрязненных почвенных экосистем. М.: Наука, 1988.- С. 42-56.

140. Исмаилов Н.М. Нефтяное загрязнение и биологическая активность почв / Добыча полезных ископаемых и геохимия природных экосистем. М.: Наука, 1982. - С. 227-235.

141. Исмаилов Н.М. Особенности регуляции трансформации 2-метил-нафталина дрожжами С. guelliermondi // Доклады Ак. Азерб. ССР. Микробиология. - 1980. - Т.ХХХУ. № 1. - С. 84-87.

142. Исмаилов Н.М. Разложение ароматических углеводородов дрожжами Candida и Torulopsis: Автореф. дис. док. биол. наук: 03.00.07. М., 1986. -50с.

143. Исмаилов Н.М. Способ рекультивации нефтезагрязненных почв / Сектор микробиол. АН Аз. ССР, A.c. II58258, СССР, заявл. 28.01. 83, № 35 87100/30-15, опубл. в Б.И., 1985, № 20 МКИ В 09 В 3/00 С 12 1/72.

144. Исмаилов Н.М., Ахмедов А.Г., Ахмедов В. А. Рекультивация нефтезагрязненных земель сухих субтропиков Азербайджана / Восстановление нефтезагрязненных почвенных экосистем. М.: Наука, 1988. С. 206-222.

145. Исмаилов Н.М., Пиковский Ю.И. Современное состояние методов рекультивации нефтезагрязненных земель / Восстановление нефтезагрязненных почвенных экосистем. М.: Наука, 1988. - С. 222-231.

146. Путинская Г.А., Серая Л.И. Аскорбатоксидазная активность почвы, загрязненной медью и кадмием // Микробиол. журн. 1996. - Т.58. №5. - С. 1217.

147. Кабиров P.P. Влияние загрязнения почвы бензином на группировки водорослей // Почвоведение. 1982. № 10. - С. 111-119.

148. Кабиров P.P., Минибаев Р.Г. Влияние нефти на почвенные водоросли //Почвоведение. 1982. № 1. - С. 86-92.

149. Кавеленова Л.М. Проблемы организации системы фитомониторин-га городской среды в условиях лесостепи. Самара, 2006. - 222с.

150. Кайгородова С.Ю. Биологическая активность нефтезагрязненных болотных почв Тюменской области: Программа и тезисы IV Национальной конференции Ин-та биологии. Сыктывкар, 1996. - С. 56.

151. Калачников В.А. Нитрофенольная токсичность почв // Почвоведение. 1983. № 2. - С. 118-124.

152. Карасева Э.В., Гирич И.Е., Худокормов A.A., Алешина Н.Ю., Кара-сев С.Г. Биоремедиация черноземной почвы, загрязненной нефтью // Биотехнология. 2005. № 2. - С. 67-72.

153. Карбан В.И., Кучер Р.В., Мироненко H.H. О химизме и физико-химических особенностях процессов микробиологического окисления углеводородов нефти // Успехи химии. 1969. - Т. 38. - Вып. 3. - С. 539-554.

154. Квасников Е.И., Клюшникова Т.М. Трансформация углеводородов нефти в биосфере: Тез. докл. республ. конф. «Структура и функции микробных сообществ почв с различной антропогенной нагрузкой». Чернигов, 17-21 мая 1982. Киев: Наукова думка, 1982. - С. 5-9.

155. Квасников Е.И., Клюшникова Т.М., Куберская С.Л., Касаткина Т.П., Смирнова Г.Ф., Сумневич В.Г. Опыт использования ассоциаций микроорганизмов для очистки подсланевых вод от нефтепродуктов. // Микробиол. ж. -1982.-Т. 44. №2.-С. 75-77.

156. Квасникова Е.И., Клюшникова Т.М. Микроорганизмы деструкторы нефти в водных бассейнах. - Киев: Наукова думка, 1981. - 132с.

157. Квасникова Е.И., Клюшникова Т.М., Нестеренко O.A., Писарчук E.H., Павленко Н.И. Фиксация атмосферного азота микроорганизмами, окисляющими углеводороды // Докл. АН СССР 1973. - Т. 208. № 3. - С .714-716.

158. Киреева H.A., Галимзянова Н.Ф. Влияние загрязнения почв нефтью и нефтепродуктами на численность и видовой состав микромицетов // Почвоведение. 1995. № 2. - С. 211-216.

159. Киреева H.A. Биохимическая индикация почв, загрязненных нефтью и нефтепродуктами // Защита от коррозии и охрана окружающей среды. -1998. №3.- С. 11-14.

160. Киреева H.A. Использование биогумуса для ускорения деструкции нефти в почве // Биотехнология. 1995а. № 5-6. - С. 32-35.

161. Киреева H.A. Консортивные связи микроорганизмов и высших растений в нефтезагрязненной почве: Тез. докл. 2 Междунар. науч.- практ. конф. «Экол. и охрана окруж. среды». 12-15 сент. 1995г. Пермь, 19956. - Ч.З. - С. 1617.

162. Киреева H.A. Микробиологические процессы в нефтезагрязненных почвах. Уфа: Изд-во БашГУ, 1994. - 171с.

163. Киреева H.A., Бакаева М.Д., Тарасенко Е.М., Галимзянова Н.Ф., Новоселова Е.И. Снижение фитотоксичности нефтезагрязненной серой лесной почвыпри биорекультивации // Агрохимия. 2003. №2. - С.50 - 55.

164. Киреева H.A., Водопьянов В.В., Мифтахова A.M. Биологическая активность нефтезагрязненных почв. Уфа : Гилем, 20016. - 376 с.

165. Киреева H.A., Водопьянов В.В., Новоселова Е.И., Онегова Т.С., Жданова Н.В. Микробиологическая рекультивация нефтезагрязненных почв. -М.: ОАО «ВНИИОЭНГ», 2001 в. 40с.

166. Киреева H.A., Кузяхметов Г.Г. Способы ускорения биологического разрушения нефтяных углеводородов в почве: Тез. докл. науч. конф. по прогр. «Ун-ты России». Уфа, 1995. - С.61-62.

167. Киреева H.A., Кузяхметов Г.Г., Мифтахова A.M., Водопьянов В.В. Фитотоксичность антропогенно-загрязненных почв. Уфа: Гилем, 2003. - 226с.

168. Киреева H.A., Мифтахова A.M., Кузяхметов Г.Г.Влияние загрязнения нефтью на фитотоксичность серой лесной почвы // Агрохимия. 2001. № 5. - С. 64-69.

169. Киреева H.A., Новоселова Е.И. Влияние нефтепродуктов на биологическую активность серой лесной почвы: Тез. докл. II съезда общества почвоведов. С,- Петербург, 1996а. - кн. 1. - С. 261.

170. Киреева H.A., Новоселова Е.И., Онегова Т.С. Активность каталазы и дегидрогеназы в почвах, загрязненных нефтью и нефтепродуктами // Агрохимия. 2002а. №8. - С. 64-72.

171. Киреева H.A., Новоселова Е.И., Хазиев Ф.Х. Активность карбогид-раз в нефтезагрязненных почвах // Почвоведение. 1998а. №12. - С. 1444-1448.

172. Киреева H.A., Новоселова Е.И., Хазиев Ф.Х. Изменение свойств серой лесной почвы при загрязнении нефтью и в процессе рекультивации // Башкирский экологический вестник. 19986. № 3. - С. 3-7.

173. Киреева H.A., Новоселова Е.И., Хазиев Ф.Х. Использование активного ила для рекультивации почв, загрязненных нефтью // Почвоведение. -1996. № 11.-С. 1399-1403.

174. Киреева H.A., Новоселова Е.И., Хазиев Ф.Х. Ферменты азотного обмена в нефтезагрязненных почвах // Известия АН. Сер. биол. - 1997а. № 6. -С. 755-759.

175. Киреева H.A., Новоселова Е.И., Хазиев Ф.Х. Фосфогидролазная активность нефтезагрязненных почв // Почвоведение. 19976. №6. - С. 723-725.

176. Киреева H.A., Новоселова Е.И., Ямалетдинова Г.Ф. Активность ок-сидоредуктаз в нефтезагрязненных и рекультивируемых почвах // Агрохимия. -2001а. №4. С. 53-59.

177. Киреева H.A., Тишкина Е.И. Ускорение биодеструкции нефтяных загрязнений при рекультивации почв: Межвуз. сб. «Актуальные вопросы биотехнологии». Уфа: Изд-во БГУ, 1990. - С. 36-44.

178. Киреева H.A., Ямалетдинова Г.Ф., Новоселова Е.И., Хазиев Ф.Х. Ферменты серного обмена в нефтезагрязненных почвах // Почвоведение. 2002. № 4. - С. 474-480.

179. Киреева H.A., Ямалетдинова Г.Ф., Тарасенко Е.М. Восстановление биологической активности нефтезагрязненных почв при биорекультивации: Тез.У междунар. конф. «Освоение Севера и проблемы природовосстановле-ния». 5-8 июня 2001е. С. 125-126.

180. Киселева Н.И., Марченко А.И., Воробьев A.B., Жариков Г.А. Изучение влияния фенантрена на рост растений: Тез. докл. конф. «Экобиотехноло-гия: борьба с нефтяным загрязнением окружающей среды». Пущино: ИБФМ РАН, 2001.-С. 82-83.

181. Кислицына BJI. Методика определения целлюлазной активности почв / Микробиологические биохимические исследования почв. Киев: Урожай, 1971.-С. 111-115.

182. Коваль Э.З., Редчиц Т.И. Микрофлора почв, заливаемых нефтепродуктами / Систематика, экология и физиология почвенных грибов. Киев: Нау-кова думка, 1975. - С. 64-65.

183. Козлов К.А. Биологическая активность почв // Изв. АН СССР. Сер. биол. наук. - 1966. №5. - С. 719-733.

184. Козлов К.А. Кислицына В.П., Маркова Ю.А., Станикова Г.А. Цел-люлазная, фосфатазная и липазная активность некоторых почв Восточной Сибири: Тез. докл. Всес. делег. съезда почвоведов СССР. Тарту, 1966. - С. 93-94.

185. Козловская Н.В. Трансформация почвы и травяного покрова под влиянием пластовых минерализованных вод при нефтедобыче в условиях Удмуртии: Автореф. дис.канд. биол. н. Пермь: ПТУ, 2001. 16с.

186. Колесников С.И., Казеев К.Ш., Вальков В.Ф. Влияние загрязнения тяжелыми металлами на эколого-биологические свойства чернозема обыкновенного // Экология. 2000а. №3. - С. 193-201.

187. Колесников С.И., Казеев К.Ш., Вальков В.Ф. Экологические последствия загрязнения почв тяжелыми металлами. — Ростов на - Дону: Изд-во СКНЦ ВШ, 20006. - 232с.

188. Колесников С.И., Казеев К.Ш., Вальков В.Ф. Экологические функции почв и влияние на них загрязнения тяжелыми металлами // Почвоведение. -2002. № 12.-С. 1509-1514.

189. Колесникова Н.М., Базенкова Е.И., Благиных A.B., Плещева О.В. Методы рекультивации нефтезагрязненных почв: Тез.докл. «Микробиол. методы защиты окруж. среды». 5-7 апр. 1988. Пущино, 1988. - С. 149. .

190. Колесниченко В.Т., Рынке И.Н., Помазкина Л.В.,Шкирпене ММ. Отходы гидролизных и целлюлозных заводов как удобрения. Новосибирск: Наука. Сиб. отд-ние, 1976. - 127с.

191. Колешко О.И. Экология микроорганизмов почвы: Лаб. Практикум. -М.: Выш. школа, 1981. 176с.

192. Колоскова A.B., Муртазина С.Г. Формы азота и активность ферментов при азотном обмене в некоторых почвах Татарии // Почвоведение. 1978. № 5. - С. 58-65.

193. Кондратюк E.H., Тарабрин В.Н., Бакланов В.И., Бурда Р.И., Хархота А.И. Прмышленная ботаника. Киев: Наукова Думка, 1980. - 260с.

194. Кореньков Д.А. Агрохимия азотных удобрений. М.: Наука, 1972.200с.

195. Коронелли Т.В. Микробиологическая деградация углеводородов и ее экологические последствия // Науч. докл. высш. шк. Биол. науки. - 1982. № З.-С. 5-13.

196. Коронелли Т.В. Поступление углеводородов в клетки микроорганизмов // Успехи микробиологии. 1980. - Вып. 15. - С. 99-111.

197. Коронелли Т.В. Физиология, биохимия и экология углеводородо-кисляющих микроорганизмов: Тез. докл. Всес. совещ. «Монитортнг нефти и нефтепродуктов в окружающей среде» Уфа, 1985. - С. 58-61.

198. Коротченко Н.И., Воробьева Г.И., Чепиго C.B., Самохина О.В. Об утилизации активного ила // Биотехнология. 1985. № 1. - С. 110-115.

199. Кочетков И.А., Бадонова О.В. Некоторые особенности каталазной активности почвы в условиях лесных биотопов степного Заволжья // Вестник университета Наяновой. Самара, 1999. - С. 85-89.

200. Кочетков И.А., Лазарева И.О. Влияние некоторых загрязнителей на показатели биологической активности почвы: Сб. науч. тр. междунар. межведомствен. «Вопросы экологии и охраны природы в лесостепной и степной зонах». Самара, 1999. - С. 160-165.

201. Краснова Н.М. Активность почвенных ферментов в условиях техногенного загрязнения // Химия в сельском хозяйстве. 19826. T. XX. № 3. - С. 28-30.

202. Краснова Н.М. Ферментативная активность, как биоиндикатор загрязнения почв тяжелыми металлами: Автореф. дис. канд. с.-х. наук. М., 1982а. 25с.

203. Краснова Н.М. Ферментативная активность, как биоиндикатор загрязнения почв тяжелыми металлами // Докл. ВАСХНИЛ. 1983. № 7. - С.41-43.

204. Кузнецов С.И. Роль микроорганизмов в преобразовании месторождений нефти // Изв. АН СССР. Сер. биол. - 1969. №6. - С. 803-819.

205. Купревич В.Ф., Щербакова Т.А. Почвенная энзимология. Минск: Наука и техника, 1966. - 275с.

206. Лавриненко О.В., Лавриненко И.А. Тяжелые металлы в растениях в условиях нефтезагрязнения: Тез. V междунар. конф. «Освоение Севера и проблемы природовосстановления». 5-8 июня 2001. Сыктывкар, 20016. - С. 157158.

207. Ларионова Н.Л., Бреус И.П. Устойчивочть к углеводородному загрязнению почвы и эффект фиторемедиации культурных и дикорастущих растений: Тез. докл. межд. научн. конф. «Современные проблемы загрязнения почв». М.: МГУ, 2004. - С. 319-321.

208. Ларионова Н.Л., Хорькова Е.В., Зарипова С.К. Фиторемедиация загрязненных углеводородами почв: Матер. V Республиканской конф. «Актуальные экологические проблемы Республики Татарстан». Казань: Отечество, 2003.-С. 170-171.

209. Лебедева Ж.Д., Волкова И.М., Рубан Е.М. Влияние ионов металлов на липолитическую активность Mycobacterium rubrum и Actinomyces streptomy-cini // Микробиология. 1976. № 4. - С. 104- 109.

210. Логинов О.Н., Силищев Н.Н., Бойко Т.Ф., Галимзянова Н.Ф. Биотехнологические методы очистки окружающей среды от техногенных загрязнений. Гос. Изд-во научно-технической литературы «Реактив». Уфа, 2000. -100с.

211. Лукьянов О.А. К проблеме оценки качества и состояния нарушенных экосистем / Животные в условиях антропогенного ландшафта. Свердловск, 1990. - С. 61-69.

212. Мамедьяров М.А., Исмаилов Н.М., Двейрин В.Л. Влияние молочной сыворотки и стоков производства дрожжей на рост утлеводородокисляю-щих микроорганизмов и разложение ими нефти // Изв. АН Аз. ССР. Сер.биол. - 1984. № 5. - С. 94-100.

213. Маркарова М.Ю. Использование углеводородокисляющих бактерий для восстановления нефтезагрязненных земель в условиях Крайнего Севера: Автореф. дис.к.б.н. Пермь, 1999. 25с.

214. Маркарова М.Ю., Канева Ю.С. Взаимосвязь между ферментативной и микробиологической активностью нефтезагрязненных почв Севера: Тез. 14 Комиреспубликанской молодежной научной конф. Т. II. - Сыктывкар, 2000. -С. 132-133.

215. Маркова Ю.А. Методика определения активности фитазы в почве и факторов, ее определяющих / Микробиологические и биохимические исследования почв. Киев: Урожай, 1971. - С. 135-138.

216. Марфенина O.E. Антропогенные изменения комплексов микроскопических грибов в почвах: Автореф. дис. . док. биол. наук. М.: МГУ, 1999. -49с.

217. Марфенина O.E. Реакции микроскопических грибов на загрязнение почв тяжелыми металлами // Биол. науки. 1989. № 9. - С. 89-93.

218. Масленников П.В., Бородей A.B. Антоцианины как тест на нефтяное загрязнение: Тез. XI Междунар. симпоз. по биоиндикаторам «Современные проблемы биоиндикации и биомониторинга». 17-21 сентября 2001г. Сыктывкар, 2001.-С. 124-125.

219. Медведев В.А., Давыдов В.Д. Трансформация отдельных органических продуктов коксохимии в черноземной почве // Почвоведение. 1972. № 11.- С.22-29.

220. Медведева Е.И. Биологическая активность нефтезагрязненных почв в условиях Среднего Поволжья: Автореф. дис. к.б.н. Тольятти, 2002. 18с.

221. Мелентьев А.И., Усанов Н.Г., Логинов О.М. и др. Штамм бактерий Bacillus sp. для получения препарата против грибных возбудителей болезней злаковых культур: Пат. 1743019 РФ, А 01N63/00,C12Nl/20, 1989. Заявл. 3.10.89; Опубл. 23.03.93.

222. Меренюк Г.В. Взаимодействие химических загрязнителей окружающей среды с почвенной микрофлорой // Изв. АН Молдавской ССР Сер. биол. и. хим. наук. - 1982. № 5. - С. 17-32.

223. Методы почвенной микробиологии и биохимии / Под ред. Д.Г. Звягинцева. М.: Изд-во МГУ, 1991. - 304с.

224. Мехтиева H.A., Кандинская Л.И. Закономерность распространения микрофлоры почв в нефтяных месторождениях Апшерона: Тезисы докладов. V Съезда Всес. микробиологического общества. Секц. «Экология микроорганизмов». Ереван, 1975. - С. 22-23.

225. Мифтахова A.M. Комплекс микроскопических грибов в условиях нефтяного загрязнения: Тез. 14 Комиреспубликанской молодежной научной конф. Т. И. - Сыктывкар, 2000.- С. 144-145.

226. Михайловская H.A. Ферментативная активность как показатель плодородия дерново-подзолистой легко суглинистой почвы: Автореф. дис. . канд.с.-х. наук. Минск, 1988. 17с.

227. Мишустин E.H., Емцев В.Т. Микробиология. М.: Агропромиздат, 1987. - 368с.

228. Мишустин E.H., Петрова А.Н. Образование свободных аминокислот на разрушающейся в почве целлюлозе // Микробиология. 1966. - Т. 35. № З.-С. 491-500.

229. Мукатанов А.Х., Ривкин П.Р. Влияние нефти на свойства почв // Нефтяное хозяйство. 1980. № 4. - С. 53-54.

230. Муратова А.Ю., Турковская О.В., Антонюк Л.П., Макаров O.E., Позднякова Л.И., Игнатов В.В. Нефтеокисляющий потенциал ассоциативных ризобактерий рода Azospirillum // Микробиология. 2005. - Т. 74. № 2. - С. 248254.

231. Муратова А.Ю., Турковская О.В., Хюбнер Т., Кушк П. Использование люцерны и тростника для фиторемедиации загрязненного углеводородами грунта // Прикладная биохимия и микробиология. 2003. - Т. 39. № 6. - С. 681688.

232. Назаров A.B. Микробно-растительное взаимодействие при нефтяном загрязнении дерново-подзолистых почв Южной тайги Предуралья: Авто-реф. дис.канд. биол. н. Пермь, 2000. 24с.

233. Наплекова H.H. Анаэробное разложение целлюлозы микроорганизмами в почвах Западной Сибири. Новосибирск: Наука, 1974. - 249с.

234. Наплекова H.H., Булавко Г.И. Ферментативная активность почв, загрязненных соединениями свинца // Почвоведение. 1983. № 7. - С. 35-40.

235. Напрасникова Е.В. Уреазная активность и pH как показатели состояния почв городов Восточной Сибири // Почвоведение. 2005. № 11. - С. 1345-1352.

236. Невзоров В.М. О вредном воздействии нефти на почву и растения // Лесной журнал. Архангельск. 1976. № 2. - С. 56-58.

237. Некрасова К.А., Бусыгина Е.А. Альгофлора как показатель загрязнения почв нефтью (на примере черноземов Татарии): Тез. докл. 7 Делегат, съезда Всес. ботан. о-ва. Донецк, 11-14 мая 1983. Л., 1983. - С. 91.

238. Некрасова Л.С. Изучение почвенной мезофауны в районе нефтяного загрязнения Среднего Приобья // Животные в условиях антропогенного ландшафта. УрЦ АН СССР. - Свердловск, 1990. - С. 37-48.

239. Никитин Е.Д. Почва как биокостная полифункциональная система, разнообразие и взаимосвязь почвенных экофункций. Структурно-функциональная роль почвы в биосфере. М.: ГЕОС, 1999. - С. 74-82.

240. Никитина З.И. Динамические аспекты антропогенной экологии микроорганизмов: Тез. докладов Ш Всесоюзный симпозиума «Биодинамика почв» 2. 25-27 октября, 1988г. Таллин, 1988. - С. 10.

241. Никифорова В.М., Солнцева Н.П., Кабанова Н.В. Геохимическая трансформация пахотных дерново-подзолистых почв под воздействием нефти:

242. Матер. Всес.конф. «Влияние пром. предприятий на окруж.среду». Звенигород, янв. 1985. М., 1987. - С. 241-253.

243. Новак В. Значение органического вещества в почве на современном этапе его изучения и в будущем при поддерживании и повышении плодородия почв: Докл.8 Межд. симпоз., Т. 2 (резюме). Доклады о гумусе. Чехословакия, 1983.-С. 197-204.

244. Новикова А.Ф., Гололобова A.B. О мелиорации солонцов темно-каштановой подзоны Кустанайской обасти // Почвоведение. 1976. № 4. - С. 97106.

245. Норенкова И.К., Брежнева И.В., Карпенко М.Н., Куликова Е.М. Роль микроорганизмов в окислении нефти месторождения Ярега // Микробиология. 1976. - Т. 45. № 4. - С. 724-728.

246. Овчинникова М.Ф. Изменение каталазной активности дерново-подзолистой почвы под влиянием симазина // Химия в сел. хоз-ве. 1982. № 3. -С. 56-59.

247. Овчинникова М.Ф., Гомонова Н.Ф., Зенова Г.М. Изменение свойств почвы и продуктивности агроценозов при длительном применении различных систем удобрений // Почвоведение. 2005. № 1. - С. 104-112.

248. Орлова Е.Е, Богданова Е.Г. Трансформация гумусовых веществ при нефтезагрязнениях почв: Тез. Докл. II съезда общества почвоведов. С.- Петербург, 1996.-кн. 1.-С. 207.

249. Паллюкова Н.Ф., Долгова Л.Г. Индикация эдафотопов, загрязненных техногенными веществами, по активности ферментов // Почвоведение. — 1993. №3.-С. 45-48.

250. Паников Н.С., Перцовская А.Ф. Влияние тяжелых металлов на ферментативную активность почвы: Матер. Всесоюз. симпоз. «Микроорганизмы как компонент биогеоценоза». 27-29 сентября 1982г. Алма-Ата, 1982. - С. 103-105.

251. Перцовская А.Ф., Панникова Е.Л., Тонкопий Н.И. и др. Схема гигиенического нормирования тяжелых металлов в почве // Химия в сел. хоз-ве. -1982. Т.20. №3. - С. 12-13.

252. Петров A.A. Углеводороды нефти. Изд. Наука. М., 1984. - 262с.

253. Пиковский Ю.И. Природные и техногенные потоки углеводородов в окружающей среде. М.: Изд-во МГУ, 1993. - 280с.

254. Пиковский Ю.И. Трансформация техногенных потоков нефти в почвенных экосистемах / Восстановление нефтезагрязненных почвенных экосистем. М.: Наука, 1988. - С. 7-22.

255. Пиковский Ю.И., Солнцева И.П. Геохимическая трансформация дерново-подзолистых почв под влиянием потоков нефти / Техногенные потоки вещества в ландшафтах и состояние экосистем. М., Наука, 1981. - С. 149-154.

256. Пинтус И.Ф., Филонов А.Е., Кошелева И.А., Гаязов P.P., Карпов A.B., Воронин A.M. Выделение и характеристика микроорганизмов-деструкторов полициклических ароматических углеводородов // Микробиология. 1997. - Т. 66. № 2. - С. 269-272.

257. Плешакова Е.В., Дубровская Е.В., Турковская О.В. Приемы стимуляции аборигенной нефтеокисляющей микрофлоры // Биотехнология. 2005. № 1.-С. 42-50.

258. Плешакова Е.В., Позднякова H.H., Турковская О.В. Получение неф-теокисляющего биопрепарата путем стимуляции аборигенной углеводородо-кисляющей микрофлоры // Прикладная биохимия и микробиология. 2005. - Т. 41. №6.-С. 634-639.

259. Покаржевский А.Д.,Тэрыцэ К.В. Принципы экологического нормирования загрязнений почв и метод определения экологических нормативов: Тез. докл. «Методология экологического нормирования». Харьков, 1990. - С. 120121.

260. Покорна В. К методике определения липолитической способности верховых и низинных торфов и грязей // Почвоведение. 1964. № 1. - С. 106 -109.

261. Пономарева Л.В., Осипов А.И. Биоремедиация нефтезагрязненных почв: Тез. V междунар. конф. «Освоение Севера и проблемы природовосста-новления». 5-8 июня 2001. Сыктывкар, 2001. - С. 205.

262. Почвы Башкортостана. Т. 2: Воспроизводство плодородия: зонально-экологические аспекты / Ф.Х.Хазиев, Г.А.Кольцова, Р.Я.Рамазанов и др. / Под редакцией Ф.Х.Хазиева. Уфа: Гилем, 1997. - 328с.

263. Практикум по агрохимии / Под ред. Минеева В.Г. М.: Изд-во МГУ, 1989. - 304с.

264. Пуриш JIM., Рожанская A.M., Пиляшенко-Новохатный А.И., Козлова И.А. Влияние техногенных факторов на микробные сообщества грунтов // Микробиол. ж. 1996. - Т. 58. № 3. - С. 17-24.

265. Работнова И.Л. Общая микробиология. М., Высшая школа, 1966.271с.

266. Расъкова Н.В. Активность и свойства пероксидазы и полифенолок-сидазы в дерново-подзолистых почвах под лесными биоценозами // Почвоведение. 1995. № 11. - С. 1363-1368.

267. Раськова Н.В., Гелъцер Ю.Г. Активность ферментов азотного обмена в почвах естественных фитоценозов / Почвенные организмы как компоненты биогеоценоза. М.: Наука, 1984. - С. 218-231.

268. Раськова Н.В., Скворцова И.Н., Обухов А.И., Дерябин Н.Ф. Влияние свинца на биологическую активность почв / Миграция загрязненных веществ в почвах и сопряженных средах. Л.: Гидрометеоиздат, 1989. - С. 289296.

269. Рахимова Э.Р., Гарусов A.B., Зарипова С.К. Биологическая активность нефтезагрязненной почвы при засолении // Почвоведение. 2005. № 4. -С. 481-485.

270. Рачинский В.В., Давидова Е.Г., Лопатышкина А.И. Локализация окисления н-парафинов дрожжами // ДАН СССР. 1971. - Т. 200. № 2. - С. 457460.

271. Резяпова И.Б. Сульфатвосстанавливающие бактерии при разработке нефтяных месторождений. Уфа: Гилем, 1997. - 51с.

272. Розанова Е.П. Использование углеводородов микроорганизмами // Успехи микробиологии. 1967. - Вып. 4. - С. 61-96.

273. Розанова Е.П., Назина Т.Н. Углеводородокислящие бактерии и их активность в нефтяных пластах // Микробиология. 1982. - Т. 51. - Вып. 2. - С. 342-348.

274. Розанова Е.П., Штурм Л.Д. Изменение состава озокерита под действием микроорганизмов // Микробиология. 1966. - Т. 35. № 1. - С. 138-145.

275. Рукосуева Н.П., Гукасян А.Б. Биологическая активность почв горных лесов Сибири. Новосибирск: Наука, 1985. - 88с.

276. Рыбак В.К., Овчарова Е.П., Коваль Э.З. Микрофлора почвы, загрязненной нефтью // Микробиол. ж. 1984. - Т. 46. № 4. - С. 29-33.

277. Саламатова Т.С., Зауралова O.A. Физиология выделения веществ растениями: Уч. пособие.- Л.: Изд-во ЛГУ, 1991. 152с.

278. Самедов П.А. Биоиндикация нефтезагрязненных серо-бурых почв Апшерона: Тез. XI Междунар. симпоз. по биоиндикаторам «Современные проблемы биоиндикации и биомониторинга». Сыктывкар, 17-21 сентября 2001г. -Сыктывкар, 2001. С. 166.

279. Самосова С.М., Минибаев В.Г., Артемьева Т.И. Влияние засоления почвы нефтепромысловыми сточными водами на свойства почвы и ее биологическую активность / Сезонная динамика почвенных процессов / АН ЭстССР. -Таллин, 1979а. С. 183-185.

280. Самосова С.М., Фильченкова В.И., Мусина Г.Х., Кипрова P.P., Гу-байдуллина Т.С. Изыскание путей стимуляции биодеградации нефти в почве: Тез. докл. «Микробиологические методы борьбы с загрязнением окружающей среды». Пущино, 19796. - С. 8-10.

281. Самосова С.М.,.Фильченкова В.И., Кипрова P.P., Мусина Г.Х., Гу-байдуллина Т.С., Махмутова Ф.Б. Микрофлора черноземных почв и ее активность при загрязнении нефтью. Казань, 1983. ВИНИТИ. № 6073 - 83. Деп. 19с.

282. Семиколенных A.A. Каталазная активность почв северной тайги (Архангельская область) // Почвоведение. 2001. № 1. - С. 90-96.

283. Ситдиков Р.Н., Сулейманов P.P. Технология рекультивации нефте-загрязненных почв и грунтов: Тез. V междунар. конф. «Освоение Севера и проблемы природовосстановления». 5-8 июня 2001. Сыктывкар, 2001. - С. 227229.

284. Славнина Т.П., Цуцаева В.В., Кахаткина М.И. и др. Влияние загрязнений нефтью и нефтепродуктов на свойства почв севера Томской области: Тез. X Всесоюзн. симпоз. «Биол. пробл. Севера». Магадан, 1983. - 4.1. - С. 300.

285. Солнцева Н.П. Геохимическая трансформация дерново-подзолистых почв под влиянием потоков высокоминерализованных сточных вод / Техногенные потоки вещества, в ландшафтах и состояние экосистем. М. Наука, 1981.-С. 155-192.

286. Солнцева Н.П. Добыча нефти и геохимия природных ландшафтов. -М.: Изд-во МГУ, 1998. 376с.

287. Солнцева Н.П. Общие закономерности трансформации почв в районах добычи нефти (формы проявления, основные процессы, модели) // Восстановление нефтезагрязненных почвенных экосистем. М., Наука, 1988. - С. 2342.

288. Солнцева Н.П., Гусева O.A., Горячкин С.В. Моделирование процессов миграции нефти и нефтепродуктов в почвах тундры // Вестн. Моск. Ун-та. -Сер. 17. Почвоведение. - 1996. № 2. - С. 10-17.

289. Солнцева Н.П., Никифорова Е.М. Региональный геохимический анализ загрязнения почв нефтью (на примере Пермского Прикамья) / Восстановление нефтезагрязненных почвенных экосистем. М., Наука, 1988. - С. 122140.

290. Стебаев И.В., Пивоварова Ж.Ф., Смоляков Б.С., Неделькина C.B. Общая биогеосистемная экология. Новосибирск: ВО «Наука». Сибирская издательская фирма, 1993. - С. 91-111.

291. Стенина A.C. Сообщества диатомовых водорослей как биоиндикатор нефтяных загрязнений в Субарктике: Тез. XI Междунар. симпоз. по биоиндикаторам «Современные проблемы биоиндикации и биомониторинга». 17-21 сентября 2001г. Сыктывкар, 2001. - С. 178-179.

292. Сулейманов P.P. Изменение свойств нефтезагрязненных серых лесных почв при биологической рекультивации: Автореф. дис. . канд. с.-х. наук. Уфа. БГАУ, 1999. 155с.

293. Сулейманов P.P. Изменение свойств почв в результате загрязнения высокоминерализованными нефтепромысловыми сточными водами на территории Туймазинского месторождения нефти (Республика Башкортостан) // Известия РАН. Сер. биол. - 2005. № 5. - С. 613-620.

294. Сулейманов P.P. Использование различных биогенных добавок для рекультивации нефтезагрязненных почв: Тез. V междунар. конф. «Освоение Севера и проблемы природовосстановления». 5-8 июня 2001. Сыктывкар, 2001.-С. 235-237.

295. Суслякова Г.О. Фитомелиоративное освоение вторично засоленных земель Калмыкии: Материалы IV Докучаевского общества почвоведов «Почвы- национальное состояние России». Новосибирск: Наука - Центр, 2004. - Кн. 2.- С. 486.

296. Тажина Т.О. Влияние различной степени засоления на инвертазную и дегидрогеназную активность почв: Тез. Всесоюзной научн. конференции «Микроорганизмы в сельском хозяйстве». Москва, 23-25 декабря 1986г. Изд. Московского ун-та, 1986. - С. 134.

297. Тарасенко Е.М., Женин Р.И. Микробиологическая трансформация нефти в почве: Тез. 14 Комиреспубликанской молодежной научной конф. Т.Н.- Сыктывкар, 2000. С. 221.

298. Тишкина Е.И. Влияние нефтяного загрязнения на свойства серых лесных почв Предуралья и пути восстановления их плодородия: Автореф. дис.канд. биол. наук. Воронеж, 1990. 23с.

299. Тишкина Е.И., Киреева H.A. Окультуривание нефтезагрязненных серых лесных почв // Повышение плодородия почв в условиях интенсивной системы земледелия: Сб. статей / БФ АН СССР. Уфа, 1986. - С. 145-151.

300. Трофимов С.Я., Розанова М.С.Изменение свойств почв под влиянием нефтяного загрязнения / Деградация и охрана почв. Под общ. ред. Акад. РАН Г.В.Добровольского. М.: Изд-во МГУ, 2002. - С. 359-373.

301. Тульская Е.М., Звягинцев Д.Г. Специфика иммобилизованных ферментов почв / Экологическая роль микробных метаболитов. М.: Изд-во Моск. ун-та, 1986. - С. 5-28.

302. Тупицина JI.C., Лисовец И.А., Бодрягина Е.Г. Уменьшение геноток-сического эффекта тюменских нефтей: Тез. V междунар. конф. «Освоение Севера и проблемы природовосстановления». 5-8 июня 2001. Сыктывкар, 2001. -С. 254-256.

303. Тэрыцэ К.В., Покаржевский А.Д. Методический подход к оценке влияния загрязняющих веществ на почвы (на примере мощных черноземов) / Биоиндикация и биомониторинг. М., 1991. - С. 247-263.

304. Фердман В.М. Комплесная технология утилизации промысловых нефтешламмов: Автореф. дис.канд. технич. наук. Уфа, 2002. 23с.

305. Фильченкова В.И. Биологическая активность карбонатного чернозема при нефтяном загрязнении / Защита растений и охрана окружающей среды в Татарской АССР / Областное правление НТО сельского хозяйства. Казань, 1982.-С. 168-170.

306. Хабибулина Ф.М., Арчегова И.Б. Микробиота как биоиндикатор при восстановлении нефтезагрязненных почв: Тез. XI Междунар. симпоз. по биоиндикаторам «Современные проблемы биоиндикации и биомониторинга». 17-21 сентября 2001г. Сыктывкар, 2001. - С. 198.

307. Хабиров И.К. Физические свойства и ферментативная активность почв. Экологические условия и ферментативная активность почв. - Уфа, 1979. -С. 99-111.

308. Хабиров И.К. Экология и биохимия азота в почвах Приуралья. -Уфа. УНЦ РАН, 1993. 224с.

309. Хабиров И.К., Габбасова И.М., Хазиев Ф.Х. Устойчивость почвенных процессов. Уфа, 2001. - 326с.

310. Хазиев Ф.Х. Методы почвенной энзимологии. М.: Наука, 1990.189с.

311. Хазиев Ф.Х. Почвенные ферменты. Знание. М., 1972. - 32с.

312. Хазиев Ф.Х. Роль ферментативной активности в осуществлении почвой экологических функций: Матер, межд. научн. конф. «Экология и биология почв». Ростов - на - Дону, 2005. - С. 514-515.

313. Хазиев Ф.Х. Системно-экологический анализ ферментативной активности почв. М.: Наука, 1982. - 203с.

314. Хазиев Ф.Х. Ферментативная активность почв (Методическое пособие). М.: Наука, 1976. 180с.

315. Хазиев Ф.Х., Агафарова Я.М. Активность ферментов азотного обмена и динамика азота в черноземах / Азотный фонд и биохимические свойства почв Башкирии. Уфа, 1977. - С. 41-69.

316. Хазиев Ф.Х., Агафарова Я.М., Киреева H.A. Ферментативный путь превращения азота в почве / Экология и физиолого-биохимические основы микробиологического превращения азота. Тарту, 1972. - С. 333-338.

317. Хазиев Ф.Х., Багаутдинов Ф.Я. Углеводные компоненты органического вещества почвы. Уфа: БФАН СССР, 1987. - 146с.

318. Хазиев Ф.Х., Тишкина Е.И., Киреева H.A. Влияние нефтепродуктов на биологическую активность почв // Биологические науки. 1988а. № 10. - С. 93-99.

319. Хазиев ф.Х., Тишкина Е.И., Киреева H.A., Кузяхметов Г.Г. Влияние нефтяного загрязнения на некоторые компоненты агроэкосистемы // Агрохимия. 19886. № 2. - С. 56-61.

320. Хазиев Ф.Х., Фатхиев Ф.Ф. Изменение биохимических процессов в почвах при нефтяном загрязнении и активация разложения нефти // Агрохимия. 1981. № 10.-С. 102-111.

321. Халимов Э.М. Эколого-микробиологические основы рекультивациипочв, загрязненных нефтью и нефтепродуктами: Автореф. дис.к.б.н. Москва,1996. 24с.

322. Халимов Э.М., Левин С.М., Гузев B.C. Экологические и микробиологические аспекты повреждающего действия нефти на свойства почвы // Вестн. Моск. ун-та. Сер. 17. - Почвоведение. - 1996. №2. - С. 59-64.

323. Химия нефти. Л., 1984. - 360с

324. Хорькова Е.В., Норина О.С., Зарипова С.К. Активность микробиоценозов выщелоченного чернозема, загрязненного керосином, под действием растений: Тез. докл. межд. научн. конф. «Современные проблемы загрязнения почв». М.: МГУ, 2004. - С. 383-384.

325. Цилосани Г.А., Панозишвилй К.П., Сахвадзе Л.И., Чубинидзе Н.Д., Андреева Л.П. Бактериальное разложение нефти // Бюл. ВНИИ с.-х. микробиологии. 1983. № 39. - С. 35-36.

326. Черников В.А., Алексахин P.M., Голубев A.B. и др. Агроэкология / Под ред. В.А.Черникова, А.И.Чекереса. М.: Колос, 2000. - 536с.

327. Чугунова М.В., Капелькина Л.П., Хозяинова А.Ф. Оценка биологической активности торфяно-болотной почвы, загрязненной нефтью: Тез. V междунар. конф. «Освоение Севера и проблемы природовосстановления». 5-8 июня 2001. Сыктывкар, 2001. - С. 278-279.

328. Чундерова А.И. Биохимическая деятельность микрофлоры и плодородие почвы / Агрономическая микробиология. Л.: Колос. Ленингр. отд-ние, 1976.-С. 47-82.

329. Шакирова Р.Х., Хазиев Ф.Х. Влияние агротехники на содержание свободных аминокислот в оподзоленном черноземе // Почвоведение. 1978. № 7.-С. 63-71.

330. Шебалова Н.М., Бабушкина Л.Г. Микробиологическая и ферментативная активность лесной подстилки в верхних горизонтах почв в условиях техногенного загрязнения / Тр. Коми НЦ УрО РАН. 1997. № 155. - С. 125-136.

331. Шилова И.И. Биологическая рекультивация нефтезагрязненных земель в условиях таежной зоны / Восстановление нефтезагрязненных почвенных экосистем. М., 1988. - С. 159-167.

332. Шипилин H.H. Техногенно загрязненные почвы пашни и их биоиндикация: Автореф. дис.к. с/х. н. Барнаул, 1996. 20с.

333. Шкель М.П., Владимирова Э.Д., Чаховский A.A., Русый М.Г. Применение серосодержащих удобрений на дерново-подзолистых почвах Белоруссии. Минск, 1988. - 16с.

334. Штина Э.А., Андронова М.Ф. Почвенные водоросли как индикатор загрязнения почвы промышленными выбросами // Бюл. Почв, ин-та ВАСХ-НИЛ. 1983. № 35. - С. 68-72.

335. Штина.Э.А., Некрасова К.А. Водоросли загрязненных нефтью почв / Восстановление нефтезагряненных почвенных экосистем. М:. Наука, 1988. -С. 57-82.

336. Щелчкова М.В., Пестерев А.П., Саввинов Г.Н. Показатели ферментативной активности и микроэлементного состава в оценке загрязнения мерзлотных почв горюче-смазочными материалами // Наука и образование. 2001. № 1.- С. 1-5.

337. Щербакова Т.А. Ферментативная активность почв и трансформация органического вещества (в естественных и искусственных фитоценозах). -Минск: Наука и техника, 1983. 220с.

338. Щербакова Т.А., Галушко H.A. Характеристика некоторых свойств активного белка, выделенного из почвы / Физиолого-биохимические основы повышения продуктивности растений. Минск: Наука и техника, 1974. - С. 163169.

339. Эмих Т.А., Киреева H.A., Касимова Д.И. Действие активного ила на физиологические процессы и ризосферную микрофлору томатов: Межвуз. науч. сб. «Вопросы биохимии и физиологии микроорганизмов». Физиология. Саратов: Изд-во Сарат. ун-та, 1987. - С. 32-36.

340. Эфендиева И.М. Деградация нефтяных веществ микроорганизмами Бакинской бухты: Тез. УП съезда Всесоюзн. микробиол. общества «Экология,геохимическая деятельность микроорганизмов и охрана окружающей среды». -Т. 6. Алма-Ата, 1985. - С. 202.

341. Юсупова Д.В. Влияние экологических условий на нуклеазную активность бактерий / Бактериальные нуклеазы. Казань: Изд-во Казанск. ун-та, 1964.-С. 44-49.

342. Юсупова Д.В., Сайманова Р.А., Лещинская И.Б., Беляева М.И., Соколова Р.Б. Нуклеодеполимеразы некоторых видов бактерий / Ферменты микроорганизмов. М.: Наука, 1973. - С. 163-170.

343. Ягафарова Г.Г., Скворцова И.Н., Зиновьев А.П., Ягафаров И.Р. Штамм бактерий Rhodococcus erythropolis, используемый для очистки воды и почвы от нефти и нефтепродуктов // Изобретения. 1993. № 12. - С. 52.

344. Ямалетдинова Г.Ф. Изучение процессов биологической трансформации серы в нефтезагрязненных почвах: Тез. 14 Комиреспубликанской молодежной научной конф. T. II. - Сыктывкар, 2000. - С. 276.

345. Янкевич М.И., Квитко К.В. Биоремедиация нефтезагрязненных водоемов // Экология и промышленность России. 1998. - Октябрь. - С. 21-26.

346. Яшвили И.Н., Берадзе И.А., Думбадзе Т.К. Влияние загрязнения нефтью на биологическую активность некоторых типов почв Восточной Грузии //Плодородие почв. Тбилиси, 1983. - С. 53-85.

347. Яшвили Н.Н., Берадзе И.А., Думбадзе Т.К., Мардалейшвили Р.К., Кобахидзе Н.В. Влияние загрязнения нефтью и нефтепродуктами на биологическую активность почв Колхидской низменности // Изв. АН ГССР. Сер. биол.- 1982.-Т. 8. №6.-С. 413-418.

348. А1 Hasan R.H., Sorkhon N.A., Al Bader D., Radwar S.S. Utilization of hydrocarbons by cyanobacteria from microbial mats on oily wasts of the Gulf // Appl. Microbiol. And Biotechnol. 1994. - V. 41. № 5. - P. 615-619.

349. Allard A.S., Neilson A.H. Bioremediation of organic waste sites: a critical review of microbiological aspects // Int. Biodeterioration Biodégradation. 1997.- V. 39. P. 253 -285.

350. Antal M., Anton A. Effect of NPK nutrients on the szacharase activity ofdifferent hungarian soils / Proc. 9th Int. Symp. Soil Biol and conserve. Biosphere, So-pron, Aug. 27-30, 1985. V. 2. - Budapest, 1987. - S. 761-770.

351. Antal M., Anton A. Kiilônbôzô magyaraszâgi talajok szacharasa-activitasanak ôosszehasonlito virsgâlata. Brezovesikné // Agrokém. és talaj. 1985. -V. 34. № 1-2. - S. 67-69.

352. Appert L., Louis M. Note sur Î attaque des pe'troles par les microorganismes // Rev. Inst, franc, pe'trole et ann. combust liquides. 1955. - V. 10. N 5. - P. 345-348.

353. Atlas R.M. Stimulaed petroleum biodégradation // CRC. Grit. Hevs. Mikrobiol. 1977. - V. 5. № 4. - P. 371 - 386.

354. Atlas R.M., Bartha R. Hydrocarbon biodégradation and oil spill biore-mediation//Adv. Microbial Ecol. 1992. -V. 12. - P. 287 -338.

355. Atlas R.M., Schofild E. A., Morelli P. A„ Cameron R.E. Effect of petroleum pollutans on Arctic microbial populations // Environ. Pollut. 1976. - V. 10. N 1.-P. 35-43.

356. Beastall S., Hughes D. E. Microbial aspects of the breakdoun of crude oil in the environment // J. Appel. Chem. and Biotechnol. 1972. - V. 22. № 7. - P. 877-878.

357. Beri Viraj, Brar S.S. Urease activity in subtropical, alkaline soils of India // Soil Sci. 1978. V. 126. № 6. - P. 330-335.

358. Binet Ph., Portal T.M., Leyval C. Fate of polycyclic aromatic hydrocarbons (PAH) in the phyzosphere and mycrorhizosphere of ryegrass // Plant and Soil. -2000. № 227. P. 207-213.

359. Bizili S.P., Rugh C.L., Meagher R.B. Phytodetoxification of Hazardous organomercurialis by genetically engineered plants //Nat. Biotechnol. 2000. № 18. -P. 213-217.

360. Blakebrough IT. Interactions of oil and microorganisms in soil // Oil Ind. and Microb. Ecosyst. Proc. Meet., Warwick. 1977. London, 1978. - P. 28-40.

361. Bossert I., Kachel W. Fale of hydrocarbons during oily sludge disposal in soil // Appl. and Environ. Microbiol. 1984. - V. 47. № 4. - P. 763-767.

362. Brohon B., Gourdon R.Influence of soil microbial activity level on the determination of contaminated soil toxicity using Lumistox and Met Plate bioassays // Soil. Biol. Biochem. 2000. - V. 32. - P. 853-857.

363. Budau P., Torok G., Gergely Z., Szakäcs A., Koltai A., Farkas I. Microbiological recultivation of oil polluted areas // Acta microbiol.- Acad. Sei. hung. -1978.-V. 25.-№2.-P. 149.

364. Carmen E.P., Crossman T.L., Gatiff E.G. Phytoremediation of No 2 fuel oil-contaminated soil // J. Soil. Cont. 1998. - V. 7. - P. 455-466.

365. Cerna S. Vliv organickych Làtek a pomeru G:N dehydrogenäzovon ak-tivitu v pudé // Rostl. vyroba. 1973. - rocz. 19. - C 9. - S. 923-930.

366. Cooper A.B., Morgan H.W. Improved fluorometric method to assay for soillipase activity // Soil Biol, and Biochem. 1981. - V. 13. № 4. - P. 307 -311.

367. Coper E. E., Hedrick H. G. Activity of soil bacteria on petrole um waste adjacent to an active oil well // Soil Sei. 1976 - V. 122. № 6. - P. 331-338.

368. Criquet S., Joner E., Leglize P., Leyval K. Anthracene and mycorrhiza affect the activity of oxidoreductases in the roots and the rhizosphere of lucerne (Medicago sativa L.) // Biotechnology Letters. 2000. № 22. - P. 1733-1737.

369. De Borger R., Vanloocke H., VerlindeA., Verstraete W. Microbial degradation of oil in surface soil horizons // Rev. ecol. et biol soil. 1978. V. 15. № 4. -P. 445-452.

370. De Cunh C.D., Leite S.G.F.Optimization of some environment al conditions to enhance gasoline biodégradation in soil microcosms bioaugmented with Pseudomonas putida //Rev. Microbiol. 1997. - 28. № 2. - P.129-134.

371. Dibble J.T., Bartha S. Rehabilitation of oil inundated agricultural land : a case history//Soil Sei. 1979. -V. 128. № i.-P. 56-60.

372. Doelman P., Haanstra L. Effect of lead on soil respiration and dehydro-genaie actyvity // Soil Biol, and Biochem. 1979. - V. 11. № 5. - P. 475-479.

373. Douglas L.A., Bremner J.M. A rapid method of evaluting different compounds as inhibitors of urease activity in soils // Soil. Biol. Biochem. 1971. - V. 3. №4.-P. 309-315.

374. Dutzler Franz G. Besiehungen zwischen der Enzymaktivität verschiedener Bodentypen, der microbiellen Aktivität, der wurzelmasse und einigen Klimafaktoren // Z. Pflanzenernährung und Bodenk. - 1977. - V. 140. № 3-4. - S. 345-374.

375. Faw G.M, Holloway S.L., Sizemore R.C. The bacterial of an active oil field in the Northwestern Gulf of Mexico // Abstr. 79 th Annu. Meet. Amer. Soc. Microbiol., Loa Angeles, Cal, 1979. Wash. (D.C.). 1979. - P. 192.

376. Frankenberger W. T, Johanson J.B. Influence of crude oil and refined petroleum products on soil dehydrogenase activity //J. Environ.Qual. 1982. № 4. -P. 602-607.

377. Fusey P, Oudot J, Benkirane Beens S. Influence de la vitamine В12 de l'extrait de levure et du magnesium sur d'un petrole brut // Mater und Organism. -1980. - 15. №2.-P. 149-159.

378. Gonzales С.S, Perez M.M, Fuente Marcos MA. Actividad ureasica y poblaciones microbians: effecto del folueno // An edafol. y agrobiol. 1982. - V. 41. № 11-12. - P. 2345-2355.

379. Gorska B. Wplyw weglowodorow aromatycznych na mikroorganizmy glebowe // Acta biol. Sites. 1986. - V. 3. - P. 139-154.

380. Gudin C, Syratt W. J. Biological aspects land rehabilitation following hydrocarbon contamination // Environ. Pollut (8). 1975. - P. 107-112.

381. Günther T. Dornberger U, Fritsche W. Effect of ryegrass on biodégradation of hydrocarbons in soil // Chemosphere. 1996. № 3. - P. 203-215.

382. Haby P.A., Crowley D.E. Biodegradation of 3- chlorobenzoate as affected by rhizodeposition and selected carbon substrates // J. Environ. Qual. 1996. -25. №2.-P. 304-310.

383. Hemida S.A., Omar S.A., Abdel-Mallek A.Y. Microbial populations and enzyme activity in soil treated with heavy metals // Water, Air and Soil Pollution 95: 1997.-P. 13-22.

384. Hersman L. Jii, Klein D. A. Retorted oil shale effects on soil microbiological characteristics // J. Environ. Qual. 1979. - V. 8. № 4. - p. 520-524.

385. Hill JB. G. Bodeterioration of petroleum products // Microb. Aspects De-terior. Matero London e. a, 1975. - P. 127-136.

386. Hübner T, Tischer S. Pflanzenunterstutze Sanierung vor mit Kohlenwasserstoffen belasteten Industieflachen // VDLUFA Sehr. - R. / Verb. Dt. Landw. UnterS. Forsch. - Anst. - Darmstadt, 1999. № 52. - S. 469-472.

387. Hunt E. G, Rickard W. E, Deneke F. F, Koutz F. R, Murrman R. P. Terrestrial oil spills in Alaska : environmental effects and recovery 1973. In Prol. ofthe gaint conference on prevention an control of oil spills // Am. Pet. Inst. Washington D.-S.175.

388. Hupe K., Luth J. C., Heerenklage J., Stegmann R. Enhancement of the biologica degradation of soils contaminated with oil by the addition of cumpost // Acta biotechnol. 1996. - 16. № 1. - P. 19-30.

389. Ierusik R. I., Finnerty W. R. The microbiol metabolism of sulfur containing hydrocarbons present in crude oil // Abstra. 79 th Annu, Meet. Amer. Soc. Microbiol., Los Angeles, Colif, 1979. -Washington, D. G., 1979. P. 233.

390. Jones J.G., Knigt M., Byron J.A. Effect of Gross Pollution by Kerosine Hydrocarbons on the Microflora of Moorland soil // Nature. 1970. - V. 227. - September 12. - P. 1166.

391. Kandeler E., Kampichler C.,Horak O. Influence of heavy metals on the functional diversity of soil microbial communities / /Biol. Fert. Soils. 1994. - 23. P. 299-306.

392. Kelly J.J., Haggblom M., Tate R.L. Ill, Changes in soil microbial communities over time resulting from one time application of zinc: a labaratory microcosm study // Soil Biol. Biochem. 1999. № 31. - P. 1455-1465.

393. Kiss S. Advences in soil enzymology (Part I-II) // Studia Univesitates Bades-Bolyai Biologia. 2001. № 1. - P. 3-48.

394. Kiss S. Enzymology of oil-contaminated soils // Studia Univesitates Bades-Bolyai Biologia. 1995. - V. 40. № 1-2. - P. 3-25.

395. Kiss S., Dragan Bularda M., Pasca D. Enzymological study of the evolution of technogenic soil. // Evol. and Adaptation. - Vol 2. - Cluj - Napoca, 1985. -P. 159-186.

396. Kiss S., Pasca D., Dragan Bularda M. Enzymology of Disturbed soils. -1998. Elsevier Science. - P. 3-62.

397. Kobus I., Kabata Pendias A. Effect of heavy metals on biological activity of soil and their accumulation by plants // Soil. Biol, and Conserv. Biosphere. -Budapest, 1977. - P. 405-413.

398. Kommalapati H.R., Ray D. Bioenhancement of soil microorganisms in natural surfactant solutions // J. Environ. Sci. And Health.A. 1996. - 3. № 8. - P. 1951-1964.

399. Kramer U., Chardonnes A.N. The use of transgenic plants in the biore-mediation of soils contaminated with trace elements // Appl. Microbiol. Biotechnol. -2001.-V. 55. P.661-672.

400. Lee E. Banks M.K, Bioremediation of petroleum contaminated soil using vegetation: a microbial study // J. Environ.Sci. and Health A. 1993. - V. 28. №10. -P. 2187-2198.

401. Lee K., de -Mora S. In situ bioremediation strategies for oiled shoreline environments // Environ Thechnol. 1999. - V. 20. - P. 783-794.

402. Leenheer J. A., Stuber H. A. Migration through soil of organic solutes in an oil shole process water // Environ. Sci. and Technol. - 1981. - V. 15. - № 12. - P. 1467-1475.

403. Legay S., Chaineau C.H. Phitoremediation de sols pollutes par de creosote: Etude experimentale de biodégradation et de phytorestaration // Eau, ind., nuisances. 1999. № 225. - P. 57-59.

404. Lehtomàki M., Niemelâ S. Improving microbial degradation of oil in soil // AMBIO. 1975. - V. 4. № 3. - P. 126-129.

405. Linking A.E., Fetcher N. Effect of surface-applied prudhoe bay crude oil on vegetation and soil processes in tus sock tundra // Perma frost: 4-th Int. Conf. Proc. July, 17—22 1983. Washington D. C, 1983. - P. 723-728.

406. Llanos C., Kjoller A. Changens in the flora of soil fungi following oil waste application // Oikos. 1976. № 27. - P. 377-382.

407. Lode A. Changes in the bacterial community after application of oily se-undge to soil // Appl. Microbiol, and Biotechnol. -1986. V. 25. № 3. - P. 295-299.

408. Lorbacher H., Schlipkôter H-W. Untersuchungen uber den mikrobiellen Abbau von oil // Arch. Hyg. Und Bacteriol. 1971. - V.154. - № 6. - S. 577-580.

409. Louynachan T.E. Low-Temperature Mineralization of crude oil in soil // J. Environ. Qual. 1978. - V. 7. № 4. - P. 494-500.

410. Mackiewicz J. et al. Reakciga roslin uprawnych na skazenia gleb ropa nagtowa .// Geod. Urzadzenia rolne. Olsztyn. 1982. № 11. - P. 191-200.

411. Margesin R., Zimmerbauer A., Schinner F. Monitoring of bioremedia-tion by soil biological activities.// Chemosphere. 2000 . - V. 40. - P. 339-346.

412. Margesin R., Zimmerbauer A., Schinner F.Soil lipase activity a useful indicator of oil biodégradation // Biotechnology Techniques. - 1999. - V. 13. № 3. -P. 859-863.

413. McGill W.B., Rowell MJ. Determination of oil contaminated soil // Sci. Total. Environ. 1980. - V. 14. № 3. - P. 245-253.

414. Meagher R.B. Phytoremediation of toxic elemental and organic pollutans // Curr. Opin Plant Biol. 2000. № 3. - P.153-162.

415. Mitchell W. W., Lounachan T. E., Mikendrick J. D. Effects of tillage and fertilization on persistenze of crude oil contamination in an Alaskan soil // J. Environ. Quality. 1979. - V. 8. - P. 525-532.

416. Niewolak S. Mikrobiologiczne aspecty rekultywacji gleb uprawnych skazonych ropa naftowa // Wiad ecol. 1978. - V. 24. № 2. - P. 109-118.

417. Oberbremer A., Muller-Hurtig R. Aerobic stepwise hydrocarbon degradation and formation of biosurfactants by an original soil population in a stirred reactor Appl. Microbiol, and Biotechnol. 1989. - V. 31. № 5-6. - P. 582-586.

418. Odu C.T.I. Biological aspects of land rehabilitation following hydrocarbons contamination // J. Inst. Petrol. 1972. № 58. - P. 201-206.

419. Odu C.T.I. Oil degradation and microbiological change in soils deliberately contaminated with petroleum hydrocarbons // J. Inst. Petrol. Techn. Pap.. -1977. №5.-P. 1-11.

420. Odu G. T. I. The effect of nutrient application and aeration oil degradation in soil // Environ. Pollut. 1978. - V. 15. № 3. - P. 235-240.

421. Organic solvents and petroleum hydrocarbons in the subsurface : transport and cleanup //News Quart. 1986. - V. 36. № 4. - S. 1-6.

422. Oudot J. Contribution a l'etude de la degradation bacterienne des hydrocarbures. Produits et factuers susceptibles de modifier la cinetique du prenomene Thèse doct. ing. ac. sei vie et environ. Univ. Dijon, 1975. - 121p.

423. Pancholy S.K. Lynd J.O. Quantitative fluorescence analysis of soil lipase activity // Soil Biol. And Biochem. 1972. - V.4. № 2. - P. 257-259.

424. Pettit N.M., Smith A.R., Freedman R.B., Burns R.G. Soil urease: activity, stability and kinetic properties // Soil Biol. Biochem. 1976. - V. 8. № 6. - P. 479-489.

425. Piutti S., Hallet S., Rousseaux S., Phillippot L., Soulas G., MartinLaurent F. Accelerated mineralization of antrazine in maize rhizosphere soil // Biol. Fertil. Soils. 2002. № 36. - P. 434-441.

426. Popa A. Activitatea dehidrogenazica in sol ca test ecotoxicologic pentru poluanti anorganic! si organici //Stud. Univ. Babes-Bolyai. Biol. 1999. - V. 44. № 1-2.-P. 169-178.

427. Popa A. Inductia enzymatica in sol ca test ecotoxicologic pentru poluanti anorganici si oreanici // Stud. Univ.Babes-Bolyai. Biol. 2000. - V. 1. № 45. - P. 129-138.

428. Przedwojski R., Mackiewicz J., Rytelewski J. .Zmiany wlasciwasci sro-dowiska glebowego wywola ne silngnn skazeniem гора, naftowa // Rocz. glebozn. -1980.-V. 31. №3-4.-P. 185-192.

429. Raymond R., Hydson J.O., Jamison V. W. Oil degradation in soil // Appl. environm. Microbiol. 1976. - V. 31. № 4. - P. 522-535.

430. Rehm H. I., Kirchner К. Verfahren zur Bodenkontaminierung mittels Mikroorganismen. Dechema Deutsche Ges für chemisches Apparatewesen. Заявка. P 3545325.7, ФРГ. Заявл. -20.12.85, №854325 25.6.87. MK А 62 D.3/00.

431. Reilley К. A., Bancs М.К., Schwab A.P. Dissipation of poly cyclic aromatic hydrocarbons in the rhizosphere // J. Environ Qual. 1996. - 25. № 2. - P. 212219.

432. Reviere J., Gatellier C. Evolution de la macroflore d'un sol imprégné d h'ydrocarbures // Ann. Agron. 1976. - V. 27. № 1. - P. 85-99.

433. Ross DJ. Effecrs of air-dry, refrigerated and frozen storage on activities of enzymes hydrolysing sucrose and starch in soils // Ind. J. Soil. Sei. 1965. - V. 16. № 1. - P. 86-94.

434. Roy J.L., McGill W.B. Soil water repellency as a long term consequence of terrestrial oil spills // Canad. J. Soil Sc. 1996. - V. 76. - P. 244.

435. Rüddiger G. Biologische in situ Sanierung von Mineralöl -Kohlenwasserstoffen - Ja oder Nein? // Erdöl- Erdgas - Kohle. - 1987. - V. 103. № 78. - S. 333-336.

436. Schwab A.P., Banks M.R. Phytoremediation of petroleum contaminated soils // Amer. Soc. Agronomy Monograph. 1999. - V. 37. - P. 783-795.

437. Schwendinger R. B. Reclamation of soil contaminated with oil J. Inst. Petrol. 1968. - V. 54. № 35. - P. 183-197.

438. Sekstone A. G., Winter G., Atlas P. M. Pesponse of microorganisms in Arctic tundra soils to application of crude oil // Abstrs Annu. Meet. Amer. Soc. Microbiol., Atlantic. City, N. J., 1976.- Washington, D. C., 1976. P. 194.

439. Sekstone A.G., Atlas P.M. Response of microbial populations in Arctic tundra soils to crude oil // Canad. J. Microbiol. 1977. - V. 23. № 10. - P. 1327-1333.

440. Siciliano S.D., Germida J.I. Mechanisms of phitoremediation: biochemical and ecological interactions between plants and bacteria // Environ. Rev. 1998. -V. 6. - P. 65-79.

441. Skujins J. History of abiotic soil enzyme research // SoilEnzymes / Ed. Burns R.G. N. Y.: Academic Press Inc., 1978. P. 1-19.

442. Soczö E. R., Staps J. J. M., Yisscher K. Forschungs resultate auf dem Gebiet der biologischen Bodenreinigung in den Niederlanden // Müll und Abfall. -1988.-V. 20. № 4. S. 163-170.

443. Soczö E. R., Visscher K. Biological treatment techniques for contaminated soil //Resour. and Conserve. 1987. - V. 15. № 1-2. - S. 125-136.

444. Solnseva N.P. Oil pollution of soils: Geochemical aspects and ecology // Global Changes and Georg.: 16 U Conf., Moscow, 1995. P. 404.

445. Sorensen N. Xylanase in the soil and the rumen // Nature. 1955. - V. 176. №4471. - P. 74.

446. Steinberg C.E.W., M.Haitzer, R.Bruggemann, I.V.Perminova, N.Y.Yashchenko and V.S.Petrosyan, 2000: Towards a Quantitative Structure Activity

447. Relationship (QSAR)of Dissolved Humic Substances as Detoxifying Agents in Freshwaters.- Internat. Rev. Hydrobiol. 85: P. 253-266.

448. Stirling L.F, Watkinson R.J, Higgins I J. Microbial metabolism of ali-cyclic hydrocarbons: Isolation and properties of cyclohexanedegrading bacterium // J. Gen. Microbiol. 1977. - V. 99. - P. 119-125.

449. Sveum H, Faksness L.G. Enhanctd biological degradation of crude oil in a Spitsberge tundra site // Proc.16 th Arct. And Mar. Oilspill Program Techn. Semin, Calgary, June 7-9, 1993. V. 1. - P. 377-391.

450. Szegi J. Some soil microbiological problems of the recultivation of tech-nogenous areas // Soil Biol, and Conserv. Biosphere. V.2. - Budapest, 1984. - P. 779-786.

451. Takahashi D, Kawabata J, Yamada K. Studies on the utilization of hydrocarbons by microorganisms. Pt V. Screening of yeasts cell production from hydrocarbons and their RNA contents // Arctic. Biol. Chem. 1965. - V. 29. - P. 796803.

452. Tassi Т., Barbafieri V, Cervelli S, Petruzzelli G, Pedrom F, Szymura I. Phytoremediation test in PAH cjntaminated soil // Agrochimica. 2004. - V.48. № V2. - P.73-76.

453. Thornton-Moiling J.R, Jones D.D. Federle T.W. Effect of experimental manipulation of environmental factors on phenol mineralisation in soil // Environ. Toxicol.And. Chem. 1987. - V. 6. № 8. - P. 615-621.

454. Trapp S, Karlson U. Aspects of phytoremediation of organic pollutants //J. Soils Sed. 2001. - V. l.№ l.-P. 37-43.

455. Tyler G. Heavy metal pollution and soil enzymatio activiti // Plant and Soil. 1974.-V. 41. №2.-P. 184-191.

456. Udo E. J, Fayemi A. A. The effect of oil pollution of soil on germination, growth and nutrient uptake of corn // J. Environ. Quality. — 1975. V. 4. № 4. -P. 537-540.

457. Van Kemende I, Anderson W.A, Scharer J,M„ Moo-Young M. Biore-mediation enhancement of phenanthrene contaminated soils by chemical pre-oxidation // Hazardous Waste and Hazardous Mater. 1995. - 12. №4. - P. 345-355.

458. Vanloocke R, Verlinde A-M, Verstraete W. Microbial release of oil from soil columns // Environ. Sci. and Technol. 1979. - V. 13. - № 5. - P. 346-348.

459. Vaughan D., Sparling G, P., Ord B. G. Amelioration of the phytotoxicity of phenolic acids by some soil microbes // Soil Biol and Biochem. 1983. - V. 15. № 5.-P. 613-614.

460. Verstacten L.M.J. Interaction between urease activity and soil characteristics //Agrochimica. 1978. - V. 22. № 5/6. - P. 455-464.

461. Walker J. D., Colwell R. R., Petrakis L. Microbial petroleum degradation application of computerized mass spektrometry // Gan. J. Microbiol. 1975. - V. 21. № 11.-P. 1760-1767.

462. Westlake D, U. S., Jobson A. M., Cook F. D. In situ degradation of.oil in a soil of the boreal region of the northwest Territories // Gand. J. Microbiol. 1978. -V. 24. №3.-P. 254-260.

463. Wilke B.-M. Effects of non-pesticide organic pollutants on soil microbial activity // Adv. GeoEcol. Reiskirchen. 1997. № 30. - P. 117-132.

464. Wilke B.-M., Koch G. Combination effects of selected PAHs, PCBs and heavy metals on bacteria and dehydrogenase activity of sewage farm soils // Res. 16 Congr.Mondial Sci. Soil. Motpellier, 1998. V. 2. - P. 685.

465. Wplyw skazenia gleby produktami ropy naftowej na mikroflore gle-bowa. Cz. 1. Mikroorganizmy glebowe w sasiedztwie magazynow paliw. Zeszyty nauk. / Akad. Roln. Szczecin. - 1983. - 94. - P. 33-44.