Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Экогенетические аспекты мутагенеза и их изучение в модельных системах

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Экогенетические аспекты мутагенеза и их изучение в модельных системах"

АКАДЕМИЯ НАУК СССР ИНСТИТУТ БИОЛОГИИ РАЗВИТИЯ им. Н. К. КОЛЬЦОВА

На правах рукописи

УДК 575.224.044 ПОРОШЕН КО Геннадий Григорьевич

ЭКОГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ МУТАГЕНЕЗА И ИХ ИЗУЧЕНИЕ В МОДЕЛЬНЫХ СИСТЕМАХ

03.00.15 — генетика

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

МОСКВА -

1988

Работа выполнена во Всесоюзном научно-исследовательском институте биотехнологии Министерства медицинской и микробиологической промышленности.

член-корреспондент АМН СССР, доктор биологических наук, профессор В. И. Иванов

доктор биологических наук В. Г. Митрофанов доктор биологических наук Л. М. Фонштейн

Ведущее учреждение: Научно-исследовательский институт онкологии имени проф. Н. Н. Петрова

Министерства здравоохранения СССР

на заседании специализированного совета Д002.85.01 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора наук при Институте биологии развития им. Н. К. Кольцова АН СССР по адресу: Москва, ул. Вавилова, 26, конференц-зал.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института биологии развития им. Н. К. Кольцова АН СССР (Москва, ул. Вавилова, 26).

Официальные оппоненты:

Защита состоится

час.

Автореферат разослан

Ученый секретарь специализированного совета, к. б. н.

Е. М. Протопопова

ОЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Научно-техническая революция с особой остротой поставила вопрос об охране окружающей среды от разнообразных загрязнений, в том числе и об увеличении в среде мутагенных факторов. Борьба за всемерное уменьшение поступления в окружающую среду мутагенных веществ становится все более актуальной задачей. Но несмотря на прилагаемые усилия как на национальном, так и на международном уровнях, количество мутагенных факторов, если не увеличивается, то и не уменьшается.

В последние годы на повестку дня выдвинулось представление о важности выяснения вопроса о наследственных различиях в реакции разных индивидов на одинаковые внешние воздействия, что способствовало возникновению новой отрасли генетики - генетики экологической (о.J.Brewer). Первоначально это направление зародилось как фармакогенетика, т.е. направление, изучающее наследственные различия в реакции на сходные фармакологические препараты. Но позднее стало ясно, что такие различия существуют не только по отношению к лекарственным препаратам, а и по отношению ко всем другим факторам внешней среда.

При перечислении проблем экологической генетики в их число, как правило, не включает проблемы мутагенеза. Такое положение следует считать неправильным, т.к. специфика мутагенеза во многом определяется генетическими особенностями того организма, в котором мутагенез осуществляется. Уже представлялось возможным рассмотреть этот вопрос в печати (Порошенко, 1982). В данной диссертации сформулирована целостная концепция физиологии мутагенеза и его зкогенетических аспектов.

Проблемы экологической генетики представляют из себя дальнейшее развитие вопросов генетического полиморфизма популяций, разработка которых началась еще в классической работе С.С.Четверикова (1926), но стали особенно актуальными в настоящее время. С другой стороны, экогенетические аспекты мутагенеза потребовали развития на современном уровне знаний представлений М.Е.Лобашева (1947) о физиологии мутационного процесса. В этом плане имеет место срастание ряда представлений о судьбе ксенобиотиков в организме, разрабатываемых токсикологами, с данными генетиков. В настоящее время все чаще говорят о генетической токсикологии. Появились монографии с таким названием И одна из серий известного журнала "Mutation Research". В плане данных по экогенетическим аспектам мутагенеза, приведенных в настоящей диссертации, представляется необходимым различать генетическую токсикологию, изучающую последствия воздействия токсических веществ на генетический аппарат, и токсикологическую генетику, изучавшую наследственные различия в реакции разных индивидов на одно токсическое (мутагенное) соединение. Этот последний аспект и рассматривается в данной диссертации.

Следует подчеркнуть также, что понятие "мутаген" в настоящее время стало несколько шире, чем "вещество, вызывающее пе-редапциеся по наследству изменения". В достаточно большом проценте случаев мутагены вызывают нарушения, несовместимые с жизнью (летальные), которые не могут передаваться по наследству. Поэтому правильнее говорить, что "мутаген - это вещество, изменяющее или повреждающее генетический аппарат организма или клетки". В этой связи все чаще стали употреблять по отношению

к мутагенам термин "кластогены", в особенности в тех случаях, когда анализируют аберрации хромосом, вызванные химическими соединениями.

Цель и задачи настоящей работы. Изучение проблем экологической генетики на уровне популяций животных - задача довольно трудная, требующая охарактеризовать каждый индивид по тем или другим признакам, выделить по этому признаку какие-то группы внутри популяции и изучить различия в их реакциях на изменяющиеся (¿акторы внешней среды. Работая с перевиваемыми штаммами асцитных опухолей мыши, мы поставили перед собой задачу охарактеризовать каждый исследуемый штамм как популяцию, приложить к этой популяции соматических клеток некоторые закономерности, известные для популяций организмов, размножающихся половым путем, и попытаться проследить на них некоторые экогенетические процессы. Для этого необходимо было выделить среди популяций опухолевых клеток этих штаммов группы клеток, за которыми можно было бы следить. Со времен классической работы С.С.Четверн-кова (1926) известна перспективность использования для изучения полиморфизма популяций цитогенетических характеристик. Используя этот опыт, в популяциях опухолевых клеток удалось выделить несколько линий клеток, обладающих различным набором перестроенных хромосом, с помощью которых можно маркировать такие клетки и в дальнейшем следить за их судьбой. Определенные сочетания хромосом в одной клетке оказались достаточно стабильными, что позволило использовать их как характеристику определенной линии клеток.

В задачи исследований входило проанализировать судьбу разных клеточных линий на протяжении одного пассажа опухали

и на протяжении нескольких ее пассажей в бртной полости беспородных мышей различных линий. После обнаружения динамики соотношения клеточных линий с разным набором маркерных хромосом возникла необходимость изучить влияние на них некоторых физиологических факторов (иммунологические системы животного-реципиента, изменения процессов обмена веществ при введении экзогенной глюкозы) и мутагенов (нитрозометилмочевины и некоторых других химиотерадевтических препаратов). Были изучены закономерности такой изменчивости и сделан вывод о том, что клетки с разным набором маркерных хромосом обладают разными фенотшшческими свойствами и по-разному реагируют на мутагенные воздействия. Учитывая проблемы практической химиотерапии опухолей, в задачи настоящего исследования входило выяснение некоторых питогенетических закономерностей развития устойчивости опухолевых клеток к ранее эффективному химиотерапевти-ческому препарату.

В задачи настоящей работы входило также на основе анализа литературных и собственных данных определить основные точки приложения генетических и средовых факторов, модифицирующих мутационный процесс, с особым вниманием к этапу репарации ДНК. Необходимо было Ьыяснить, существуют ли межиндивидуальные различия между практически здоровыми людьми по способности к репарации ДЕК и как влияют на эту способность неспецифические заболевания й малые дозы мутагенов.

Научная новизна результатов. В результате проведенных исследований впервые:

- установлено, что перевиваемые асцитные опухоли мышей могут служить удобной моделью для изучения экогенетических

аспектов мутагенеза. Показано, что клеточные линии, различакь щяеся по своим цитогенетическим характеристикам, по-разному реагируют на один мутаген. Обнаружены также качественные различия в реакции на одно мутагенное соединение нормальных и опухолевых клеток.

Показано, что среди практически здоровых доноров имеются лица с низкой способностью лимфоцитов периферической крови к репарации ДНК. Установлено, что неспецифические воспалительные заболевания легких и острый инфаркт миокарда приводят к снижению способности лимфоцитов периферической крови к репарации ДНК.

Предложена новая классификация антимутагенов, позволяющая сделать более целенаправленным поиск новых антимутагенных препаратов.

Практическая значимость работы. На основании проведенных исследований для работающих в области цитогенетики опухолевого роста даны методические рекомендации о необходимости изучать цитогенетические характеристики опухоли не однократно, как это делает еще большинство исследователей, а многократно на протяжении всего срока развития опухолевого процесса. Предложено использовать перевиваемые штаммы асцитных опухолей мышей в качестве модельной системы для изучения экогенетических закономерностей мутагенеза.

Предложено использовать различия в реакции на один мутаген (химиотерапевтический препарат) различных клеточных линий из полиморфной популяции клеток одной опухоли для разработки объективных критериев рациональной комбинированной хтшотера-

> шш опухолей.

>

5

Предложено использовать различия в способности разных индивидов к репарации ДНК в качестве метода профессионального отбора лиц для работы в условия! с повышенным содержанием мутагенов.

Материалы диссертации использованы в ряде монографий. Принципы классификации этапов мутагенеза и антиыутагенов положены в основу рубрикации соответствующих разделов в реферативном журнале ВИНИТИ "Общая генетика".

Апробашя работы. Материалы диссертации доложены на:

12 Международном генетическом конгрессе (Токио, 1968), Семинаре МГУ по проблемам онкологии в 1968 и 1975 гг., 10 Международном онкологическом конгрессе (Хьюстон, 1970), Всесоюзной конференции "Экспериментальное и математическое моделирование искусственна и природных экосистем" (Красноярск, 1973),

13 Международном генетическом конгрессе (США, 1973), Советско-итальянском симпозиуме "Противоопухолевые антибиотики" (Москва, 1975), Международном конгрессе по химиотерапии (Лондон, 1976), Третьем (Ленинград, 1977) и Пятом (Москва, 1987) съездах ВОГиС, 14 Международном генетическом конгрессе (Москва, 1978), Всесоюзном симпозиуме "Генетические процессы в популяциях опухолевых клеток" (Ленинград, 1980), 5 Всесоюзном биохимическом съезде (Киев, 1986).

Публикация результатов исследований. Основные результаты и научные положения диссертации отражены в 52 публикациях в центральных советских научных журналах, в сборниках тезисов и трудов всесоюзных и международных симпозиумов и съездов, в сборниках "Итоги науки и техники ВИНИТИ". Экспериментальные материалы, изложенные в диссертации, получены в основном в

соавторстве с сотрудниками, работавшими под руководством диссертанта и являющимися соавторами его работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация содержит 317 страниц машинописного текста и включает в себя 27 таблиц и 74 рисунка. Диссертация построена по монографическому плану и состоит из введения и четырех глав. Список литературы включает 338 названий, из них 168 - на русском языке.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Введение. Во введении обосновываются актуальность изучения экогенетических аспектов мутагенеза и возможности моделирования некоторых из них на популяциях клеток перевиваемых ас-цитных штаммов опухолей мышей, важность и перспективность таких исследований для решения ряда теоретических и практических задач, связанных с выяснением физиологических механизмов мутационного процесса, проблем модификации этого процесса, направленных на снижение частоты мутирования при достаточно высоком уровне мутагенов в окружающей среде. Формулируются основные задачи диссертационной работы, а также излагаются главные результаты исследования.

I. Судьба мутагена в организме. В этой главе на основе анализа мировой литературы по проблеме на современном уровне развиваются представления Е.М.Лобашева (1947) о физиологических механизмах мутагенеза. Мутагенез рассматривается как процесс, включающий в себя проникновение мутагена в организм через покровные ткани, транспорт его к клеткам-мишеням, прохождение через клеточную мембрану, метаболические превращения мутагена внутри клетки с участием микросомных ферментов, репа-

радии первичных повреждений ДНК, вызванных мутагеном ели его -активными метаболитами- Обсуждается роль каждого из этих этапов в судьбе мутагена и конечном мутагенном эффекте. Рассматриваются также литературные данные по антимутагенам и предлагается новая классификация антимутагенов, основанная на механизмах их действия.

2. Генетическое разнообразие носителей мутаций. В предыдущей главе было показано, что существует, по крайней мере, пять ключевых моментов в судьбе мутагена в организме, на которых возможно воздействие как наследственных, так и средовых факторов, модифицирующих мутационный процесс. Но анализ литературы свидетельствует о том, что до настоящего времени основное внимание уделяли лишь двум из них - метаболическим превращениям мутагенов и репарации ДНК. Соответственно, в данной главе рассматривается генетическое разнообразие носителей мутаций по этим дауы признакам.

2.1. Генетаческое_разнооб£азие носителей мутаций по_спо-собности_метабошзировать »мутагены. Практически все живые организмы различаются генетически по этому признаку. Но в данной работе рассматриваются эти признаки только у мышей и людей.

2.1.1. Генетаческое_Еазнооб£азие мышей по_способности к ыетаболическ™_П£евра!ценкям мутагенов. В достаточно обширной литературе по этому вопросу показано, что мтпт существенно различаются по данному признаку, что позволило выявить межлинейные различия и установить, особи каких линий активно осуществляют метаболические превращения химических мутагенов, а каких плохо. Найден локус АЬ , ответственный за такие превращения, и показано, что частота мутаций у особей с различны-

ми аллелями этого локуса различается при одной дозе одного мутагена.

2.1.2. Генетическое_разнооб£азие людей по_стособности к метаболичес™л_п£еврапе!шш «зутагенов. Анализ литературных данных свидетельствует о том, что люди различаются по этому признаку. Такие различия носят наследственный характер. К настоящему времени разработаны тест-системы, основанные на изу- " чении метаболических превращений безвредных фармакологических препаратов, которые позволяют различать людей по способности метаболизировать различные классы мутагенов, и тем выделять группу риска быть пораженным соответствующим мутагеном.

2.2. Ра2Нообразие_носотелей_цЕтапэй_по способности к рэ-пададии 2£К. В этом разделе диссертации также рассмотрены по отдельности эти процессы у животных и у человека.

2.2.1. Меалитейные ^азот^_в_способнозта_к^епарап2и_ДНК £ животных. В литературе имеются данные о межлинейных различиях в активности процессов репарации ДНК у дрозофилы. Описаны и линии мышей со сниженной активностью процессов репарации ДНК. В ряде работ показано, что частота мутаций, возникающих лод влиянием 1<утагенов, существенно выше у животных со сниженной активностью процессов репарации ДНК.

2.2.2. ^етатряшр^арные оазл2чта_в_способноста_к_^пеха-3™ 21 человека. В литературе описаны наследственные заболевания человека (пигментная ксеродерыа, синдром Блуна, анемия Фанкони и атакскя-телеангиэктазЕя) со_значительно сниженной активностью систем репарации ДНК и повышенным уровнем мутирования. Отсутствие четких даншх о состоянии этого показателя у практически здоровых лиц подтолкнуло нас на проведение такого исследования.

Мы исследовали репарацию ДНК в ответ на УФ-облучение лимфоцитов периферической крови человека в стандартной дозе. Лимфоциты были избраны как наиболее легко получаемые клетки человека. Отношение репарационного синтеза ДНК после тест-воздействия (УФ-облучения в стандартной дозе) к спонтанному репарационному синтезу приняли за меру способности лимфоцитов к репарации ДНК. При таком подходе учитываются индивидуальные различия в величине эндогенного пула тимидина в клетках.

Лимфоциты выделяли из периферической крови здоровых доноров станции переливания крови на градиенте плотности фиколл-гипак, суспендировали в физиологическом растворе и облучали уф-издучением. Контролем для определения спонтанного репарационного синтеза ДНК служили лимфоциты того же донора, не подвергавшиеся УФ-облучению. Затем клетки центрифугировали и ре-суспендировали в среде Игла с глутатионом, доводя до концентрации 1-2'10® клеток на чашку. К полученной суспензии клеток добавляли аутологичную плазму (до конечной концентрации 10%) и 10 Ш оксимочевины. Через 15 мин в инкубационную среду вносили 10 мкКи ^Н-тимидина, после чего пробу инкубировали в течение 2 часов при 37°С. Включение меченого тимидина останавливали добавлением 200 мМ немеченого тимидина, клетки отмывали физиологическим раствором, кислотонерастворимый материал осаждали в течение I часа на холоду 50% раствором трихлоруксусной кислоты и переносили на фильтры "Сннпор" й 2 и измеряли радиоактивность на жидкостно-сцинтидляционном счетчике. После радиометрии фильтры высушивали, высвобождая ДНК гидролизом {0,5% раствор НС104 при 70°С) И определяли ее количество по методу G.Richardson. После этого рассчитывали способность лимфоцитов к репа-

рации ДНК (отношение удельной радиоактивности УФ-облученных лимфоцитов к удельной радиоактивности необдученных клеток).

В результате исследования по такой методике 39 здоровых доноров станции переливания крови установили, что существует выраженные межиндивидуальные различия в способности лимфоцитов периферической крови практически здоровых лвдей к репарации ДНК. Среднее значение в этой группе обследованных составляло 4,9+0,4 единицы (25% доверительный интервал 4,2-5,7).

Мы сочли целесообразным разделить доноров по способности лимфоцитов периферической крови к репарации ДНК на три группы. Способность к репарации ДНК менее 2 единиц мы считали низкой, от 2 до 5 единиц - средней, и более 5 единиц - высокой. При использовании такой шкалы в группу лиц с низкой способностью к репарации ДНК попадали 2,6/6 обследованных доноров, в группу лиц со средней способностью к репарации ДНК - 56,4$, а в группу лиц с высокой способностью - 41%.

Эта данные мы использовали как исходные в характеристике практически здоровых лиц из городского населения по способности лимфоцитов периферической крови к репарации ДНК. При таком подходе видно, что городское население гетерогенно по этому показателю. Нам удалось обнаружить 6-кратные индивидуальные различия в способности лимфоцитов периферической крови здоровых доноров к репарации ДНК. Оказалось, что даже среди практически здоровых лиц есть лвди с низкой репарационной способностью. В то яе время среди здорового городского населения имеется немало {41% из нашей выборки) лиц с высокой способностью к репарации ДНК.

Учитывая отмеченное выше положение о том, что репарация

ДНК является ключевым моментом в становлении мутации, т.к. с ее участием могут быть полностью устранены первичные нарушения в структуре ДНК, следует ожидать, что среди городского населения существует примерно такое же распределение лиц по чувствительности к мутагенам. При этом лица с низким уровнем этого показателя, которые составляли среди обследованных нами доноров 2,6$, представляют группу риска при нахождении в условиях с повышенным содержанием мутагенов.

2.2.3. Линии клеток_Еивотньа и человека^ разжчащиеся по способности к .репарации ЦНК. Для экспериментального изучения процессов репарации ДНК болыцую помощь оказывают линии клеток. С этой целью в ряде лабораторий были получены линии клеток мышей, китайского хомячка, лягушек и человека, ыутантные по репарации ДНК. В диссертации приведены краткие характеристики таких линий клеток человека.

3. Популяции клеток перевиваемых асцитных штаммов опухолей мышей как модельные системы для изучения зкогенетических аспектов мутагенеза.

3.1. История из2четн_п2тогенетгаш пе£евиваит_опухолевых штаммов мышей. В результате анализа мировой научной литературы цо проблеме к началу наших исследований удалось установить, что для клеток ряда перевиваемых асцитных штаммов опухолей мышей, в первую очередь, для наиболее широко используемого и хорошо изученного штамма Эрлиха характерно наличие маркерных хромосом. Было ясно также, что эти опухоли представляют из себя достаточно гетерогенную по патогенетическим показателям систему.

3.2. Ютетические_закономерности из£ченга_1щтогенэтичесшк характеристик пе^вита£мга_щташов_опухолей мышей. Изучая цито-

генетические характеристики асцитных перевивавшее штаммов опухолей мышей Зрлиха, НК/Ху, 1-5178 и С-37, мы обратили внимание на то обстоятельство, что патогенетические характеристики клеток одного опухолевого штамма, полученные в разные сроки его развития, несколько различаются. Это подтолкнуло нас к проведению многократных исследований таких характеристик в динамике развития опухолевого штамма, т.е. на получение кинетических закономерностей изменения цитогенетических характеристик одного опухолевого штамма.

3.2.1. Кияетические_закономерности изменения дитогенети-че£кт_характе^ст^_щталма ь-5.118 . При развитии штамма в брюшной полости белых беспородных мышей не происходит безудержного размножения всех опухолевых клеток. Увеличение количества опухолевых клеток происходит с постепенным замедлением, что до 12-х суток хорошо описывается степенным законом. В дальнейшем увеличение общего количества опухолевых клеток прекращается вообще. На более поздних сроках развития опухолевого процесса отмечается даже снижение общего количества опухолевых клеток, так что общая кинетическая кривая изменения его от момента перевивки штамма до гибели животного-опухоленосителя имеет экстремальный характер. Такой характер кривой изменения общего количества опухолевых клеток не может быть объяснен простым "перенаселением", т.к. количество асцитической жидкости на протяжении всего времени развития опухолевого штамма возрастает, что приводит к экспоненциальному уменьшению концентрации в ней опухолевых клеток. В диссертации приведены кинетические кривые изменения концентрации опухолевых клеток в асцитической э жидкости в процессе развития штамма ь-5178, изменения иитоти-

ческого индекса, количества клеток, а также кинетические кривые изменения веса селезенки мышей-опухоленосителей и изменения в их периферической крови количества лейкоцитов.

Также в динамике развития опухолевого штамма Ь-5178 мы изучали и его патогенетические характеристики с 3 по 23 сутки опухолевого процесса. Популяция опухолевых клеток штамма характеризовалась выраженной гетерогенностью по наборам хромосом.

Анализ чисел хромосом в метафазах перевиваемого опухолевого штамма ь-5178 показал, что числа хромосом в околодиплоидной зоне варьируют от 38 до 46, но можно выделить модальный и околомодальный класс клеток. Модальный класс клеток состоял из даух линий клеток с 43 и 44 хромосомами. Б течение всего периода развития штамма в брюшной полости белых беспородных мышей, начиная с 3-х суток после прививки и до терминальной стадии, между этими двумя линиями клеток наблвдалось динамическое равновесие, при котором количество клеток с 43 хромосомами, хотя и варьировало от 34 до 55$, но всегда было больше, чем число клеток с 44 хромосомами.

Наряду с клетками модального класса, составлявшими 61-92/2, в популяции постоянно присутствовали варианты клеток с отклоняющимися от него числами хромосом. Суммарное количество мета-фаз околомодального класса также изменялось в ходе развития опухолевого процесса.

Хотя популяция опухолевых клеток перевиваемого асцитного штамма ь-5178 может быть в целом охарактеризована как гипердиплоидная, в ней постоянно тлеются околотетраплоидные и полиплоидные варианты клеток, количество которых изменяется в процессе развития штамма. В течение первых 9 суток развития штамма

в бршной полости белых беспородных мышей количество таких клеток было невелико - Ъ-11%. В последующие сроки наблюдалось интенсивное возрастание количества их, доходящее до 505?. Максимальное накопление околотетраплоидных клеток наблвдалось на 21-22-е сутки, после чего количество их начинало уменьшаться, достигая к 27-м суткам 2В%.

Начиная с 9-х суток развития штамма ь-5178 в популяции делящихся клеток начинают появляться метафазы с полиплоидным набором хромосом от За до 5з ♦ Процесс увеличения количества полиплоидных метафаз среди популяции делящихся клеток штамма можно описать экстремальной кривой с максимумами на 21-22-е сутки. Максимумы увеличения количества околотетраплоидных и полиплоидных метафаз среди делящихся клеток штамма совпадали, но последних было значительно меньше.

Как и в большинстве других перевиваемых опухолевых штаммов мышей в штамме ь-5178 встречались клетки с эндоредупликацией хромосом. Феномен эндоредушшкации хромосом наблюдали в клетках различной плоидности. Метафазы с эндоредупликацией хромосом начинали появляться среди популяции делящихся клеток штамма ь-5178 на 7-е сутки после прекращения перевивки штамма, составляя всего 0,05$ от всех делящихся клеток. В процессе опухолевого роста количество их значительно увеличивалось, достигая к 15-17 суткам 5%, а в терминальной фазе к 25-м суткам уменьшалось до 0,6.

Для популяции клеток асцитного штамма Ь-5178 была характерна не только выраженная гетерогенность по числу хромосом в метафазе, но и наличие хромосом необычной формы - маркерных хромосом. Таковыми являлись большая акроцентрическая хромосома с выраженной вторичной перетяжкой (маркер А), большая метацент-

рическая хромосома (маркер В) и малые хромосомы (маркеры С). Кроме того, как маркерную хромосому среди набора хромосом штамма ь-5178, вероятно, следует рассматривать большую акро-центрическую хромосому, примерно в полтора раза болыцую, чем наибольшая хромосома нормального кариотипа мнши (маркер Б).

3.2.2. Кинетичес:кие_закшомерности изменения £итогенети-чecI^Jxapaктe£иcтик_щтaiI^лa ик^ь^ . Кинетические характеристики развития опухолевого штамма ик/Ьу были подробно изучены В.А.Андреевым с соавт. (1966). Эти авторы отметили степенную зависимость увеличения числа клеток опухолевого штамма нк/1у во времени на протяжении первых 6 суток развития штамма в брш-ной полости белых беспородных мышей при прививке опухоли 1015 илн. клеток.

В ходе изучения патогенетических характеристик клеток штамма нк/Ьу особое внимание уделяли характеристике маркерных хромосом. Для анализа этих хромосом мы разработали специальную методику (исследования проводились до внедрения в практику ци-тогенетических исследований методов дифференциальной окраски хромосом) сканирования микрофотографий (негативов) хромосом узкой щелью с автоматической записью.

По цитогенетическим характеристикам асцитный штамм тс/1<у представляет из себя гетерогенную популяцию клеток как по числу хромосом в метафазе, так и по сочетаниям маркерных хромосом. Сочетания маркерных хромосом позволяют выделить отдельные линии клеток. В изученном штамме можно было четко выделить две стволовые линии клеток: одну с набором маркерных хромосом А+В+2С и общим числом хромосом в метафазе 44 и другую - с набором маркеров - Д+В+2С и общим числом хромосом в метафазе 43.

Маркерная хромосома Д являлась результатом транслокации одной из среднеразмерных акроцентрических хромосом на маркерную хромосому А. Это достаточно крупная субметоцентрическая хромосома с выраженной вторичной перетяжкой примерно по средине длинных плеч. При развитии штамма лк/Ьу в бршной полости белых беспородных мышей первая линия клеток (с маркером А) оставалась модальной на всем протяжении развития опухолевого штамма. Но степень выраженности модального класса клеток колебалась. Изменялось в процессе развития штамма и соотношение

числа метафаз с набором хромосом 2з по отношению ко всем делящимся клеткам. Максимальное количество таких метафаз (2056) наблюдали на 4-е сутки.

3.2.3. Кшети2ес_ете_закономерности изменения дитогенети-ческих^сарактеристик_щтамаа ЭржихаЧ^Ф. При изучении кинетических закономерностей изменения общего количества опухолевых клеток штамма Эрлиха-ЙХФ мы выяснили,что до 10-х суток этот процесс описывается степенным законом, т.е. наблюдается постепенное замедление его скорости развития. На более поздних сроках развития штамма общее количество опухолевых клеток начинает уменьшаться, так что кинетическая кривая, описывающая этот процесс, носит экстремальный характер. Одновременно с изучением кинетических закономерностей развития штамма Эрашха-йХФ, являвдегося околодиплоидным вариантом, мы исследовали эти же закономерности для околотетраплоидного варианта штамма Эрлиха, подученного нами из Института генетики и цитологии АН БССР. Мы установили, что кривая развития этого варианта штамма также носит экстремальный характер, а до максимума описывается степенным законом. На протяжении первых 10 суток рост общего чис-

да опухолевых клеток обоих штаммов в логарифмических координатах аппроксимируется прямой. В результате применения регрессионного анализа экспериментальных данных получены уравнения кинетических кривых, описывающих рост числа опухолевых клеток, соответственно, околодиплоидного в околотетраплоидного вариантов: Кд = 1,50*107.г1,56 и Лр =.1,82*107**1,61. Оценка значимости различий показала, что различия ыедду соответствующими кинетическими константами статистически незначимы. Эффективное время удвоения числа опухолевых клеток обоих вариантов, вычисленное из кинетических кривых и определенное радиоавтографичес-ки, было примерно одинаковым как для околодиплоидного, так и для околотетраплоидного штаммов, что ыы объяснили, исходи из полирепликонной модели хромосом.

Для изучаемого штамма типердипдоидной асцитной опухоли 5рлиха-ИХФ было характерно необычайное разнообразие маркерных хромосом. Так, акроцентрическая хромосома, содержащая вторичную. перетяжку, встречалась в трех вариантах, обозначенных нами как А, ¿^ и ¿2* £ доступной нам литературе не встречалось описания такого варианта гипердиплоидного штамма опухоли Эрли-ха, для которого были бы характерны столь разнообразные маркерные хромосомы. Это дало нам основание назвать данный штамм штаммом Эрлша-ИХФ.

При столь выраженном разнообразии структурно перестроенных хромосом сочетания их в разных клетках не носили случайного характера. Напротив, можно было отметить строгую определенность в сочетаниях различных маркерных хромосом. Особенно четко неслучайность сочетания маркерных хромосом проявлялась среди хромосом с вторичной перетяжкой. Хромосомы А и взаимо-

исключающими и никогда не встречались в одной метафазе одновременно. Ото позволило выделить в изученном штамме две стволовые линии клеток с 45 и 46 хромосомами. В клетках линии с 45 хромосомами, как правило, имелась хромосома А, тогда как в клетках с 44 хромосомами - сочетание хромосом А^ и А2-

3.2.4. Кинетические_закономерности изменения пртогенети-чес!от_ха|^те£истот:_птам.га £-37. Кинетические закономерности развития штамма С-37 достаточно полно изучены и описаны Е.А.Миненковой с соавт. (1967). Авторы отметили степенную зависимость увеличения числа опухолевых клеток на начальном этапе развития этого штамма.

При изучении цитогенетических характеристик этого штамма мы отметили, что в целом штамм был гипердиплоидным, хотя числа хромосом в отдельных метафазах варьировали от 41 до 47. Модальными были метафазы с 45 хромосомами. Имелись и околотетраплоид-ные клетки. Их количество закономерно изменялось на протяжении развития опухолевого процесса, достигая максимума на 9-е сутки, а затем постепенно снижалось. В метафазных пластинках штамма имелись маркерные хромосомы А, В и С.

3.3. Различия в реакции на экологические факторы разных клеток.

3.3.1. £азошто1_в_реакгщи_на нейлагопдиэтные факторы внешней среда тает0к_с_^зотчн0й_пл02п20стью_и2 одной популядии. При анализе цитогенетических характеристик перевиваемых асцитных штаммов опухолей мышей обращает на себя внимание обнаружение среди в целом околодиплоидной популяции опухолевых клеток некоторого количества клеток с околотетрадлоидными наборами, т.е. с набором хромосом а и 2в . Представляло интерес' выяснить,

существуют ли различия в чувствительности этих вариантов клеток из одной полиморфной популяции опухолевых клеток по отношению к таким внешним факторам, как иммунологические силы защиты со стороны животного-реципиента и сильный мутаген - нитро-зометилмочевина.

3.3.1.1. Рааличда_в_реакщи_клеток с. ^1£ной_пло2дностью на_иотл^алогиче.ские (¡шсторы пе^евивет опухолевого штамма. При исследовании динамики развития опухолевого процесса было отмечено, что процентное соотношение околотетраплоидных метафаз среди околодиплоцдных не остается постоянным, а закономерно изменяется во времени. Мы связали подъем количества полиплоидных клеток с взаимодействиями, возникающими в системе опухоль -организм животного-реципиента. С этой целью мы предприняли . сравнение увеличения частоты метафаз с удвоенным набором хромосом в популяции опухолевых клеток и увеличения количества лейкоцитов в периферической крови мышей, в брюшной полости которых развивается соответствующий (не лейкозный) штамм. Особый интерес представляло проведение такого сравнительного исследования на двух штаммах, у которых максимумы количества метафаз с набором хромосом 2в не совпадали по срока-«». У штамма С-37 резкое увеличение количества метафаз с набором хромосом 2а наблюдается на 9-е сутки развития штамма в брюшной полости белых беспородных мышей. У этих же мышей при развитии у них штамма С-37 с 4-х по 16-е сутки отмечается увеличение количества лейкоцитов в периферической крови, достигающее максимума значений на 8-е сутки развития штамма. Б ходе развития асцитного опухолевого штамма ь-5178 количество метафаз с набором хромосом 2а начинало возрастать с 9-х суток и постепенно увеличивалось,

достигая максимума к 22-м суткам. Соответственно этому и увеличенное количество лейкоцитов в периферической крови живот-ных-опухоленосителей сохранялось с 6-х по 24-е сутки.

Приведенные данные свидетельствуют о существовании взаимосвязи между иммунологическими защитными реакциями на привитый опухолевый штамм со стороны животного-реципиента и увеличением среди делящихся клеток этого штамма количества метафаз с околотетрадлоидннм набором хромосом. Для решения вопроса о механизмах, ведущих в этих условиях к увеличению количества'метафаз с околотетраплоидннм набором хромосом, мы сопоставили числа хромосом в метафазах околодиплоидной и околотетраплоидной зон четырех перевиваемых опухолевых штаммов. Б каждом штамме выделили модальную линию клеток как среди околотетраплоидных, так и среди околодиплоидных метафаз. Оказалось, что числа хромосом в модальном классе околотетраплоидных клеток соответствуют удвоенному количеству хромосом в модальной линии околодиплоидных клеток. Так, в штамме С-37 в околодиплоидной зоне модальной является линия клеток с 43 хромосомами, а в околотетраплоидной зоне - с 86 хромосомами; в штамме нк/Ьу в околотетраплоидной зоне модальной являлась линия клеток с 88 хромосомами, а в диплоидной зоне - с 88 хромосомами; в штамме Эрлиха-ИХФ имелись две стволовые линии, обусловливавшие два модальных' числа в околодиплоидной зоне - 44 и 45 хромосом, а в околотетраплоидной - 88 и 90 хромосом; в штамме ь-5178 также имелись две стволовые линии, обусловливавшие два модальных класса в околодиплоидной зоне - 43 и 44, а в околотетраплоидной - 86 и 88 хромосом. Подобное соотношение наблвдали и при анализе наборов маркерных хромосом. Особенно удачной моделью для' такого

сравнения является штамм Эрлиха-ИХФ. В этом штамме при анализе маркерных хромосом в околодиплоидных и околотетраплоидных ме-тафазах на протяжении одного пассажа обнаружили строгую корреляцию между соотношением метафаз с маркером А и маркером А-^ как в околотетраплоидных, так и околодиплоидных вариантах. Эти данные, с нашей точки зрения, свидетельствуют о том, что в определенные моменты развития опухолевого процесса количество полиплоидных клеток среди делящихся клеток опухолевого штамма увеличивается не столько за счет избирательного вступления в митоз околотетраплоидных клеток, постоянно имеющихся среди гетерогенной популяции опухолевых клеток, сколько за счет появления новых, возникающих в результате полиплоидизации околодиплоидных вариантов. Вероятно, одним из основных механизмов, осуществляющих этот процесс, является эндоредупликация хромосом, которую мы часто наблюдали, особенно в препаратах из штамма ъ-5178. Постоянное появление новых околотетраплоидных клеток в моменты наибольшей иммунологической защиты со стороны животного-реципиента в условиях постоянной перевивки штамма через каждые 10 суток на новое животное неизбежно должно было бы привести к постепенному увеличению количества околотетраплоидных клеток с превращением околодиплоидного штамма в околотетраплоид-ный. Так как этого не происходит, то необходимо допустить наличие в популяции опухолевых клеток обратных механизмов, ведущих к превращению околотетраплоидных клеток в околодиплоидные.

3.3.1.2. Разоттая_в_реакп2и_клеток с £азной_плоидностью на_щт£озомети™оч^шщ. С целью выяснения различий в реакции на и-нитрозоыегилыочевину (Е.Г.1) клеток с разной пловдностью из одной популяции мы провели специальное исследование, направлен-

нов на получение штамма ик/Ьу, устойчивого к действию этого препарата. НММ вводили однократно на высоте развития опухолевого процесса на 6-е или 8-10-е сутки в зависимости от степени накопления асцита. Начальная доза НММ составляла 50 мг/кг. В последних пассажах эта доза была повышена до 80 мг/кг. Перевивку на группу здоровых мышей производили через 48 часов после введения препарата. После того, как штамм прошел 20 пассажей с постоянным введением НММ, была проверена его чувствительность к этому препарату.

Чувствительность к НШ полученного варианта штамма шс/Ьу изменилась. Доза 40 мг/кг, введенная внутрибршинно однократно, не только не тормозила развития полученного варианта штамма, а, напротив, стимулировала деление его клеток. К дозе 60 мг/кг штамм оказался малочувствительным: процент торможения в этом случае был равен 20 по сравнению с 82 у исходного штамма. Лишь к дозе СО мг/кг, введенной через 24 часа после перевивки, опухоль оставалась чувствительной, процент торможения был довольно высок - 75, хотя тоже ниже, чем у исходного штамма.

Можно считать, что плача нк/Ьу , прошедший 20 пассажей при постоянном введении НШ, стал устойчив к этому препарату. Однако устойчивость его была относительной, т.к. проявлялась только при дозах 40 и 60 мг/кг. К дозе же 80 мг/кг этот вариант еще оставался чувствительным.

При изучении цитогенетических характеристик этого варианта штамма нк/Ьу мы установили, что среди популяции делящихся клеток этого варианта подавляющее большинство составляли мета-фазы с набором хромосом 2з. Это позволило сделать вывод о том, что устойчивость полученного варианта .штамма НК/Ьу к НММ связа-

на с отбором из исходной популяции чувствительного к НММ штамма клеток с набором хромосом 2в, вероятно, более резистентных к препарату, чем клетки с набором хромосом в. Можно было предположить, что такая устойчивость обусловлена амплификацией какого-то гена или генов.

Продолжая исследования в этом направлении, мы сравнили чувствительность к НШ двух опухолевых штаммов Эрлиха, до этого не соприкасавшихся с мутагеном, но различающихся по плоид-ности. Использовали гипердиплоидный вариант асцитного штамма Эрлиха, пассируемый в Институте химической физики АН СССР, и Тетраплоидный вариант асцитного штамма Эрлиха, любезно предоставленный нам сотрудниками Института генетики и цитологии АН БССР.

Мы изучили кинетические закономерности развития обоих вариантов штамма Эрлиха и получили уравнения кинетических кривых, описывающих рост числа опухолевых клеток, соответственно, у мышей с околодиплоидным и околотетраплоидным вариантами:

Нд = 1,50'ГО7"^'56 (I) и Ит = 1182.107.1;1'61 (П) Оценка значимости различий показала, что различия между соответствующими кинетическими константами статистически незначи-ыы. Вероятно, рост числа клеток околотетрадлоидного штамма происходит с той же (или близкой) относительной скоростью, что и рост количества клеток околодиплоидного штамма Эрлиха.

На основании описания процесса опухолевого роста степенной зависимостью мы вычислили эффективное время удвоения числа опухолевых клеток при развитии обоих вариантов штамма Эрлиха. Оказалось, что эффективное время удвоения общего числа опухолевых клеток околотетраплоидного варианта штамма Эрлиха на

всем протяжении его развития близко к таковому у клеток околодиплоидного варианта. Полученные из расчетов значения эффективного времени удвоения мы сравнили с данными авторадиографического определения тех же параметров, полученных нами в специальной серии опытов. Для клеток с околодиплоидными числами хромосом общая продолжительность митотического цикла составляла 32 часа, а для околотетраплоидных была несколько большей -35 часов, скорее всего за счет увеличения продолжительности С1. Данные изучения кинетических закономерностей развития перевиваемых опухолевых штаммов хорошо согласуются с данными авторадиографических исследований и свидетельствует о том, что, во-первых, по мере развития штамма в бргасноЁ полости животного-реципиента происходит постепенное увеличение продолжительности времени генерации за 10 суток на целый порядок и, во-вторых, величина времени генерации не зависит от плоидности клеток. Последнее в диссертации объясняется с точки зрения полирепли-конной модели хромосом.

Об активности НШ в отношении околодиплоидного и около-тетраплоидного вариантов штамма Эрлиха судили по проценту торможения роста опухолей (1-я серия опытов) и на основании изменения кинетических параметров (2-я серия опытов). В результате регрессионного анализа были получены соответствующие уравнения кинетических кривых: Ир = 0,018-10^'(Ш) и Ид = = 0,С05-Ю7-43'33 (1У).

При сравнении линий регрессии и кинетических кривых, описывающих опухолевый-рост у контрольных групп мышей (I и П) и групп, леченных препаратом (Ш и 1У), видно, что НШ обнаруживает высокую противоопухолевую активность как в отношении около-

диплоидного (1У), так и в отношении околотетраплоидного (И) вариантов штамма Эрлиха.

Данные наших сравнительных исследований чувствительности к НШ околодиплоидного и околотетраплоидного вариантов штаммов Эрлиха' свидетельствуют об их примерно одинаковой чувствительности к этому препарату. Но мы считаем, что эти данные не противоречат высказанному выше предположению о большей устойчивости к НШ клеток с набором хромосом 2в по сравнению с набором в. Противоречия в результатах опытов на штаммах ик/Ьу и Эрлиха, кажущиеся и связаны с тем, что в околотетраплоидном штамме Эрлиха из Института цитологии и генетики АН БССР удвоены не все хромосомы, имеющиеся в околодиплоидном штамме из Института химической физики АН СССР. Сделан вывод о том, что подобные сравнительные исследования чувствительности к химическим мутагенам клеток с различной плоидностью нужно выполнять на двух субпопуляциях, имеющихся внутри одной полиморфной популяции клеток опухолевого штамма.

3.3.2. Разрштая_в_реакп2и_на неблагоприятные йакторы внешней среда клеток_с_разнш набором матерных 2сромосом_из здной популядш ои2холевшс_клеток.

3.3.2.1. Раа7щтая_в_реак1щи_клеток с ^азлташм набором маркершпс хромосом_на имуунололгаеские^^то^^ левого_штам.:а. Продолжая исследование значения хромосошой характеристики опухолевых клеток перевиваемого штамма для успешного их выживания в неблагоприятных условиях, мы проанализировали влияние на полиморфную популяцию опухолевых клеток организма животных-опухоленосителей с разным генотипом по системе антигенов гистосовыестимости Н-2. С этой целью мы изучали цито-

генетические характеристики клеток перевиваемого асцитного штамма нк/Ьу при пассировании его в брюшной полости мышей различных линий, различающихся по аллелям лонуса тканевой совместимости. Особый интерес представило изучение изменений этих характеристик при перенивке штамма мк/Ьу с белых беспородных мышей на мышей линии ваьв, обладающих локусом Н-2й.

В то время, как среди делящихся клеток штамма ш/Ьу, развивающегося в брюшной полости белых беспородных мышей, преобладали мета^азы с маркерной хромосомой А (они составляли 88$), то после перевивки штамма на мышей линии ваьв селективным преимуществом стали обладать клетки с маркером Д. Соотношение других маркерных хромосом сохранялось примерно одинаковым вне зависимости от генотипа животного-реципиента.

Цитогенетическое изучение штамма нк/Ьу на протяжении его шестого пассажа на мышах линии ВА1В показало, что хромосомная характеристика опухоли к этому времени несколько стабилизировалась. Наибольшее количество метафаз содержало наборы с около-диплоидныш числами хромосом. Хромосомные числа околодаплоидных метафаз варьировали от 39 до 47. Модальная линия клеток была четко выражена: ее составляли ыетафазы с 43 хромосомами. Мета-фазы с 43 хромосомами и маркерной хромосомой Д были преобладающими на протяжении всего ростового цикла опухоли. Величина модального класса клеток несколько варьировала, увеличиваясь к 8-10-м суткам до 41$ от всех кетафаз и постепенно снижаясь до 26$ в последутацие сроки. Частота метафаз с наборами хромосом 2з также изменялась в процессе развития штамма. Наивысшей (26$) она была на 4-е сутки.

На основании проведенных исследований был сделан вывод

о том, что клетки с различным набором маркерных хромосом (на примере хромосом А и Д в штамме кк/Ьу ) по-разному реагируют нер иммунологические защитные силы животного-реципиента, которому прививают данный опухолевый штамм.

Возможные механизмы этих процессов подробно обсуждаются в диссертации..

3.3.2.2. Ра^личда_в_реакщш_кле20к с £аз_нт,1_набором_мар-ке£ннх_х£омосом на_п]392ук'га Ю1еточного_м£таботазма;_ При изучении цитогенетических характеристик перевиваемого опухолевого штамма Эрлиха-ИХФ мы обратили особое внимание на две линии клеток: с 44 хромосомами и набором маркеров А^+В+2С и с 45 хромосомами и набором маркеров А+В+С. Частота ыетафаз, принадлежащих клеткам этих двух линий, не оставалась постоянной на протяжении одного пассажа. Так, при пассировании штамма в бршной полости беспородных белых мышей метафазы с 44 хромосомами и маркером Л^ встречались на 5-е сутки с частотой 14%, а на 10-е сутки -с частотой 84%. Кривые изменения частоты метафаз с 45 хромосомами и маркером А носили зеркальный характер. Из этого был сделан вывод об изменении селективной ценности клеток, принадлежащих к этим двум линиям, на протяжении одного пассажа. Селективная ценность клеток с определенным набором хромосом как по количеству, так и по соотношению маркерных хромосом изменяется в зависимости от частоты этих клеток в популяции. Был сделан вывод о том, что эти две линии клеток различаются по интенсивности выработки одного или нескольких ферментов, а, следовательно, эти линии различаются и по потребностям в некоторых субстратах, необходимых для их полноценного развития, и выделяют несколько отличные продукты метаболизма. Учитывая это, можно было ожидать,

•что в процессе развития опухоли клетки с 45 хромосомами и маркером А потребляют из асцитической жидкости какие-то вещества, необходимые для развития клеток этой линии в большей мере, чем для клеток линии с 44 хромосомами и маркером Ар или выделяют метаболиты, тормозящие развитие этой же линии клеток. Мы поставили специальные опыты с целью сдвинуть соотношение метафаз с маркерами А и А^ искусственными внешними воздействиями.

В первой серии опытов мышам со штаммом Эрлиха-ИХФ с 3-х по 5-е сутки развития штамма вводили внутрибршинно по 3 раза в сутки низко-, средне- и высокомолекулярную фракции бесклеточной асцистической жидкости, полученной от мышей со штаммом Эр-лиха-ИХФ на 10-е сутки его развития. Такие воздействия привели к существенному изменению цитогенетических характеристик опухолевого штамма. Уже на 5-е сутки частота метафаз с маркером AJ увеличивалась до 47$ при 14% в контроле.

Во второй серии опытов проанализировали влияние на клетки этих двух сублиний энергетических субстратов клеточного деления - глюкозы и янтарной кислоты (сукцината натрия). Эти вещества вводили внутрибрюшинно (по 1,0 мл Ю^-ного раствора глюкозы или 1,0 мл 1^-ного раствора сукцината натрия в изотоническом растворе) через каждые 12 часов с 3-х по 7-е сутки после прививки асцитного штамма Эряиха-ИХФ. Контрольные животные получали равное количество изотонического (0,9#) раствора хлористого натрия. Введение глюкозы приводило к резким сдвигам состава клеточной популяции. В отличие от контрольных у животных, получивших глюкозу, уже на 5-е сутки развития опухоли (на 2-е сутки после начала введения глюкозы) число метафаз с 44 хромосомами и маркером ^J возрастало до 5С%, а на 7-е сутки - почти до ЮС£.

Соответственно снижалось число метафаз с 45 хромосомами и маркером А. На 7-е сутки развития штамма (на 4-е сутки после начала введения глюкозы) практически все метасТазы содержали по 44 хромосомы с маркером А| и такая картина сохранялась до момента гибели животного. Подобное влияние на структуру популяции делящихся клеток штамма Эрлиха-ИХФ оказывало и введение животным сукцината натрия.

В тех случаях, когда мышам с опухолью Эрлиха-ИХФ с 3-х по

6-е сутки развития штамма внутрибрюшинно вводили глюкозу, а на

7-е сутки штамм перевивали, то такой штамм с первых до последних суток его развития содержал лишь метафазы с 44 хромосомами и маркером А. Даже в третьем пассаже такие клетки сохраняли свои преимущества до 3-х суток развития штамма. Возник как бы новый субвариант штамма с необычной хромосомной характеристикой. Кинетика развития такого субварианта сохранялась неизменной,

но продолжительность жизни животных была несколько выше (14 суток .против 12 у животных с обычным штаммом Эрлиха-ИХФ).

3.3.2.3. £азд2^_в^реалдщи_клеток с ш^тгл_набо^юм_мар-ке£ншс_Х£омосом на_м£тагены. В диссертации приведены данные о воздействии на популяцию опухолевых клеток штамма Эрлиха-ИХФ двух противоопухолевых препаратов - дибунола и НИМ. Последний известен как активный мутаген.

Изменения цптогенетических характеристик популяции клеток перевиваемого опухолевого штамма Эрлиха4КФ изучали после однократного и многократного введения дибунола. Однократное, за 3 часа до прививки опухолевого штамма, введение 30 от/кг дибунола изменяло картину соотношения метафаз с маркером .А и метафаз с маркером Ар Так, если количество метафаз с маркером А при раз-

витии штамма без внешних воздействий до 8-10-х суток составляло ЬЪ% среди делящихся клеток, то после предварительного введения дибунола число таких метафаз резко уменьшалось после 6-х суток, достигая к 8-м суткам лишь 205?. Соответственно в те же сроки, т.е. значительно раньше, чем в контроле,происходило увеличение числа метафаз с маркером Ар Следовательно, однократное введение 30 мг/кг дибунола мышам за 3 часа до прививки им опухолевого штамма Эрлиха-ШФ приводило к избирательному подавлению размножения субпопуляции клеток с маркером А и усиленному размножению субпопуляции клеток с маркером Ар

Б диссертации приведены данные исследований изменений хромосомных характеристик данного опухолевого штамма и при друтих способах введения дибунола, которые также свидетельствуют о неодинаковой реакции на такие введения разных субпопуляций клеток.

В опытах с КЯЛ использовали введения этого мутагена как внутривенные, так и внутрибршные. Последние предполагают непосредственный контакт препарата с опухолевыми клетками, чего не происходит при первом способе введения.

В течение первых 3 суток после введения препарата количество клеток с перестроенными хромосомами было одинаковым как при внутрибрюшинном, так и при внутривенном введении НШ. Но на 4-е сутки после внутрибрюашшого введения препарата число метафаз с поврежденными хромосомами в два раза превышало таковое после внутривенного введения, т.е. контакт клеток с ШМ вызывал более стойкие нарушения хромосом. Повреждения хромосом в опухолевых клетках были представлены транслокациями и делециями хроматид-ного типа. Но кинетика изменений во времени частот этих двух типов перестроек хромосом была различной. В течение первых 24

часов 80£ перестроек составляли делеции, число которых затем быстро снижалось до 205?. Количество же транслокаций в опухолевых клетках постепенно возрастало с 2-5$ до 80$ к концу третьих суток.

При внутрибрюшинном введении НШ мышам со штаммом Эрлиха-ПХФ выяснилось, что наиболее часто аберрации хромосом встречались в клетках с 45 хромосомами и маркером А. Такие метасТазы составляли 70$? среди всех метафаз с аберрациями хромосом. Подобная картина наблюдалась и при внутривенном введении препарата. Из этого, казалось бы, можно было сделать вывод о преимущественном поражении НШ клеток с 45 хромосомами и маркером А. Но при исследовании этого показателя в кинетике развития опухолевого процесса мы обнаружили, что в более поздние сроки среди поврежденных клеток большинство составляли метафазы с 44 хромосомами и маркером Ар Анализ кривых изменения частот метафаз с перестройками хромосом во времени после однократного введения НШ свидетельствует о наличии двух пиков - на 4 и 18 часов при внутрибрюшинном введении препарата и на 12 и 54 часа при внутривенном введении. При анализе наборов маркерных хромосом в эти сроки выяснилось, что эти подъемы связаны с разными субпопуляциями клеток. Из этого можно сделать вывод, что НШ поражает оба типа клеток, но клетки с 45 хромосомами и маркером А поражаются в перцую очередь.

Сходные данные о различной чувствительности к химическим соединениям разных сублиний одной опухоли были получены наш на шташе асцитной опухоли 1-5178 при действии противоопухолевого антибиотика брунеомицина. Мышам с.опухолью х-5178 вводили брунеоыицин внутрибршлинно в постепенно возрастающих от пассажа

к пассажу дозах, что приводило к формированию устойчивости штамма к данному антибиотику. После 30-го пассажа, когда была достигнута достаточная устойчивость штамма опухоли к брунеомици-ну, модальное число хромосом в метафазах этого штамма уменьшилось с 43 до 42, т.е. произошла смена стволовой линии, что явилось результатом отбора более устойчивой субпопуляции клеток.

4. Физиологическое состояние организма и частота мутаций. Судьба мутагена в организме, а следовательно, и частота мутаций во многом определяется активностью ферментных систем организма. При одинаковом наследственно обусловленном уровне ферментов степень их активности может существенно колебаться в зависимости от физиологического состояния организма. Отсюда можно ожидать, что физиологическое состояние организма может сказываться на частоте мутации.

4.1. Влияние, заболеваний на_п]хщессн репарации ДНК. В диссертации приведены данные о влиянии на процессы репарации ДНК неспецкфических воспалительных заболеваний легких (острая и хроническая пневмония, хронический бронхит), острого инфаркта миокарда и рассеянного склероза. В этих исследованиях мы ставили своей целью изучить влияние названных заболеваний на способность лимфоцитов периферической крови к эксцизионной репарации ДНК. Способность лимфоцитов к репарации ДНК рассчитывали по удельной радиоактивности ДНК УФ-облученных клеток к удельной радиоактивности ДНК контрольных клеток, т.е. по соотношению величины индуцированного УФ-облучением и спонтанного репаративно-го синтеза или по соотношению общей радиоактивности кислотоне-растворимой фракции опытной и контрольной культур лимфоцитов. Активность зксщзионной репарации оценивали по величине УФ-ин-дуцированного репаративного синтеза.

При неспецифических заболеваниях легких до начала лечения наблюдали снижение средней величины способности лимфоцитов к репарации ДНК и активности эксцизионной репарации. Доля лиц о низкой способностью лимфоцитов к репарации ДНК была в 14 раз выше у бальных, чем в группе здоровых доноров. Средние показатели способности лимфоцитов периферической крови к репарации ДНК при острой пневмонии (4,1^0,7) и хронических заболеваниях легких (3,5±р,9) статистически не отличались от показателей здоровых доноров (4,9+0,4). Но процент лиц с низкой способностью к репарации ДНК среди бальных неспедафическими заболеваниями легких был в 14 раз выше, чем среди здоровых.

У больных о острым инфарктом миокарда обнаружили 5-кратное повышение спонтанного репаративного синтеза ДНК,-что свидетельствовало о наличии значительных повреждений в ДНК ¡слеток. Изменения спонтанного репаративного синтеза практически не зависели от клинических особенностей заболевания. Тенденция к нормализации этого показателя наблюдалась на 2-3 неделе заболевания. Однако на протяжении всего исследования спонтанный репарационный синтез в лимфоцитах больных примерно в 2 раза превышал норму. Одновременно обнаружили глубокое снижение способности лимфоцитов к репарации ДНК. Снижение было более глубоким у больных острым инфарктом миокарда, осложненным пневмонией, отеком легких или перикардитом, а также у больных, в анамнезе которых был предынфарктный период. В течение 50 суток после острого инфаркта миокарда имела место сложная динамика восстановления способности лимфоцитов к репарации ДНК: начало нормализации отмечалось у отдельных больных на 17-18-е сутки, однако при .осложнении инфаркта миокарда сердечной недостаточностью по малому кругу или перикардитом наблюдали новое снижение способности лимфоцитов

к репарации ДНК, продолжавшееся вплоть до выписки из больницы на 40-50-е сутки. Низкий уровень этого показателя обнаружили также у 3 из 4 больных с постинфарктным кардиосклерозом.

Больные с рассеянным склерозом были представлены очень гетерогенной группой с различной длительностью и тяжестью заболевания, частотой и длительностью ремиссии. Многие из больных ранее получали гормональную терапию, а в момент обследования -витамины и обменную терапию, направленную на стабилизацию мембран и улучшение обмена веществ (церебролизин, эссенциале, ме-тионин, теоникол, глутаминовую и никотиновую кислоты). Способность лимфоцитов к репарации ДНК варьировала у этих больных от 0,7 до 7,0 единиц и была низкой примерно у половины обследованных. Активность эксцизионной репарации не отличалась от уровня нормы.

. Полученные нами данные свидетельствуют о том, что при ряде заболеваний, не носящих наследственной природы, возникает снижение способности лимфоцитов периферической крови человека к репарации ДНК, эквивалентное наблюдаемому при наиболее тяжелых фермах пигментной ксеродермы - известного наследственного заболевания с дефектностью системы эксцизионной репарации пиримида-новых дилеров. Это снижение способности клеток к репарации ДНК не затрагивает генного аппарата, а проявляется на фенотипичес-ком уровне. Поэтому в процессе выздоровления больных наблюдается возвращение способности лимфоцитов к репарации ДНК к нормальному уровню. Это подтверждает предположение о влиянии на способность клеток к репарации ДНК физиологического состояния организма. Воспалительные изменения в тканях сопровождаются нарушением ряда биохимических процессов, в том числе и снижением спо-

собности клеток к репарации ДНК. В результате этого в клетках должен возрастать уровень мутабельности. Подтверждением предположения о возрастании мутабельности клеток в ходе развития воспалительных процессов служат и приведенные в диссертации данные об исследованиях частоты сестринских хроматидных обменов (СХО) при неспецифических заболеваниях легких.

В лимфоцитах больных неспецифическими заболеваниями легких обнаружили значительное увеличение частоты СХО по сравнению со здоровыми лицами (Р<0,01). Частота СХО в лимфоцитах здоровых лвдей изменялась в пределах 1-Г7 СХО на клетку, в лимфоцитах больных - в пределах 1-22 СХО на клетку. Возрастание частоты СХО у больных шло за счет увеличения числа клеток, несущих повышенное число обменов.

Применение антибиотиков для лечения больных неспецифическими заболеваниями легких, по нашим данным, приводит, с одной стороны, к еще более выраженному угнетению процессов.репарации ДНК, а, с другой - к существенному увеличению частоты СХО. Можно думать, что антибиотики, являясь слабыми мутагенами для клеток здорового организма, в условиях патологического процесса усиливают свое мутагенное действие в силу повышенной мутабельности лимфоцитов в очаге воспаления.

Приведенные выше данные о влиянии ряда широко распространенных заболеваний на процессы репарации ДНК и частоту СХО позволяют поставить вопрос о выделении лиц с такими заболеваниями в группу риска в условиях с повышенным содержанием мутагенов в окрузанцей среде. Следует учитывать также, что применение антибиотиков, не всегда оправданное с медицинской .точки зрения, всегда приводит к снижению способности клеток к репарации ДНК

и, следовательно, к возрастанию частоты мутирования этих клеток при той ке концентрации мутагенов в окружающей среде.

4.2. £азжтая_в_реакц2и_на 1^тагенниез)шсто£н_нормальтк и опрсолевшс_клеток. Б диссертации выдвинуто предположение о функционально-структурных особенностях хромосом опухолевых клеток и как следствие этих особенностей рассматриваются характер разрушения центромерных связей и образование полиплоидных клеток в нормальных и опухолевых клетках, а также характер структурных перестроек хромосом в нормальных и опухолевых клетках. Для изучения последнего вопроса исследовали действие НШ на хромосомы клеток костного мозга мышей, у которых этот штамм развивался.

После однократного внутривенного введения НШ среди опухолевых клеток происходило накопление метафаз с различными типами повреждения хромосом. Наибольшее число клеток с поврежденными хромосомами (до 4С$) наблвдали через 54 часа после введения НШ. Половину от общего числа клеток с перестройками хромосом составляли метафазы с транслокаодями. После введения НШ происходило постепенное увеличение числа транслокаций на клетку. В клетках костного мозга основным типом аберрации хромосом были истинные разрывы или делеции, число которых в отдельные сроки исследования достигало 60/2. Транслокации в клетках костного мозга почти не встречались пли были единичными.

То обстоятельство, что на частоту мутаций оказывают влияние не только генетические факторы, а и физиологическое состояние организма, открывает возможности направленного изменения мутабельности.

4.3. Напрамешые_Езм£нешм_1^абельн£сти. На основании

предложенной схемы этапов мутагенеза в диссертации рассматриваются узловые моменты мутагенеза, воздействие на которые позволяет модифицировать мутагенный эффект химических соединений. Особое внимание было уделено явлению преададтации клеток к мутагенам. Т.к. все найденные нами в литературе исследования ограничивались изучением преадаптации к мутагенам культур клеток in vitro или растительных клеток, мы предприняли такие исследования на уровне in vivo. В качестве химического мутагена использовали НШ. Изучали ее действие на клетки перевиваемого асцитного штамма Эрлиха-ИХФ, развивашцегося в брюшной полости мышей, и на клетки костного мозга мышей. В первом случае анализировали частоту аберраций хромосом (в основном, транслокаций), а во втором -микроядер. Использовали две дозы НШ - 10 и 100 мг/кг. Между дозами был промеяуток в 2 часа. Животных разбили на 4 группы по 6 мышей в каждой. Одна группа животных была контрольной. Мышам второй и четвертой груш внутрибршинно вводили по 10 ыг/кг НШ, мышам третьей группы - по 100 мг/кг НШ. Через 2 часа мышам четвертой группы повторно вводили НШ, на этот раз в дозе 100 да/кг. Через сутки всем животным ввели внутрибршинно по 0,2 мл 0,03^-ного раствора колхицина и еще через 2 часа мышей забивали, а из асцитической жидкости готовили препараты. На каждую точку анализировали по 50 метафаз. В метафазах клеток штамма Эрлиха-ИХФ у контрольных животных практически не было транслокаций. Доза 10 мг/кг НШ незначительно увеличивала частоту метафаз с перестройками хромосом, в то время как при дозе 100 мг/кг число таких метафаз было высоким (выше 60%). Введение за 2 часа до основной дозы ICO мг/кг НШ в дозе 10 мг/кг оказывало защитное действие, существенно снижая частоту метафаз с транслокациямз

(примерно в два раза). Опыт поставили в двух повторностях с разницей в 4 месяца и получили сходные результаты.

В другом варианте опытов изучали возможность преадаптации к мутагенному действию НШ клеток костного мозга мышей. Опыты ставили по той же схеме, но животным не прививали опухолевый штамм и препараты готовили из костного мозга и анализировали в них частоту микроядер. Дозы ШМ в этом случае были 8 нт/гач СО мг/кг и 8+80 от/кг. Предварительное введение животным НШ в низкой дозе приводило к снижению частоты микроядер в клетках костного мозга.

Заключение. Рассмотренный в диссертации полиморфизм популяций по чувствительности к химическим мутагенам создает возможность проявления экогенетических закономерностей мутагенеза и открывает перспективы их практического использования. Экоге-нетические закономерности мутагенеза свидетельствуют о том, что тлеются все теоретические и экспериментальные обоснования для проведения профессионального отбора рабочих на предприятия с повышенным уровнем мутагенов. С учетом веществ, тлеющихся в производственном цикле конкретного предприятия, можно представить практические рекомендации по необходимости анализа активности определенных ферментных систем у кандидатов в рабочие на данном предприятии. Безусловно, проведение такого профилактического мероприятия ни сколько не зшленяет усилий по исключению мутагенов из производственного цикла и разработке технологий, полностью исключающих контакт людей с такими соединения™. Лица, составляющие группу риска в результате низкой активности систем репарации ДНК, не долены допускаться на предприятия, на которых возможен контакт с иутагенаш.

Второй, не менее ваяний практический вывод, который вытекает из рассмотренных материалов, состоит в том, что уровень мут&ций, возникащих у данного индивидуума под влиянием конкретного мутагена, зависит не только от его генотипа, а и от физиологического состояния. Так, например, у человека, находящегося в продромальном состоянии неспецифического легочного заболевания, резко возрастает вероятность возникновения мутаций при воздействии той же концентрации мутагенных веществ из-за существенного снижения активности его систем репарации ДНК.

Большое место в профилактических мероприятиях на соответствующих предприятиях должны занять антимутагенные препараты, которые могут существенно снижать частоту мутаций при том же уровне мутагенов в окружающей среде. Ванным обстоятельством в этой связи является то, что многие антимутагенные вещества содержатся в растениях, которые в различном виде могут употребляться в пшцу. На этой основе возможна разработка специальных диет, способствующих снижению уровня мутаций.

В связи с имеющимися данными о возможности адаптации к мутагенному воздействию химических соединений не лишен актуальности и вопрос о специальной подготовке к работе в среде с повышенным содержанием мутагенов лиц, входящих в особые подразделения, например, те, которым предстоит работа в очаге аварии с целью ликвидации ее последствий. Конечно, этот вопрос в настоящее время может быть поставлен только теоретически. Для его постановки в практическом плане требуются еще тщательные и широкие экспериментальные исследования. Но, как представляется, этот путь перспективен и проведение таких исследований должно быть поставлено на повестку дня.

выводы

1. Показано, что патогенетическая характеристика перевиваемых асцитных штаммов опухолей мышей не остается постоянной на протяжении одного пассажа. Поэтому для того, чтобы получить полную картину цитогенетических особенностей того или другого опухолевого штамма, ее надо исследовать многократно на протяжении одного пассажа.

Изучены кинетические закономерности изменения цитогенетических характеристик четырех перевиваемых асцитных штаммов опухолей мышей - штамма ¿-5178 , Эрлиха-ИХФ, ЛК/Ьу и С-37.

2. Установлено, что увеличение частоты околодиплоидных клеток среди в целом околотетраплоидных клеток изученных штаммов перевиваемых асцитных опухолей мышей связано с системами иммунологической защиты животного-реципиента на вновь привитый ему опухолевый штамм.

Показано, что околотетраллоидные клетки, имеющиеся среди в целом околодиплоидного клеточного сообщества изученных опухолевых штаммов, более устойчивы к действию нитрозометилмочевины, чем последние. Отмечено, что такая зависимость характерна только для околотетраплоидных клеток, возникающих из соответствующих околодиплоидных клеток, тлеющихся в той же популяции опухолевых клеток. Отдельно же взятые околодиплоидный и околотетра-плоидный штаммы Эрлиха не различались существенно по чувствительности к нитрозоыетилмочевине.

Под влиянием хронического введение нитрозометилмочевины получили штамм лк/Ьу , устойчивый к нитрозометилмочевпне. Этот шташ оказался полностью околотетраплоидным. Но при дальнейшем пассировании его без нитрозоыетилмочевины он вновь возвратился к околодиплоидному состоянию.

3. Показано, что клеточные линии, отличающиеся по набору маркерных хромосом, поочередно становятся модальными на протяжении одного пассажа опухолевого штамма. Воздействие на шташ Эрлиха-ПХФ экзогенной глюкозой приводило к изменению времени смени стволовых линий. Под влиянием хронического введения глюкозы удалось получить штамм Эрлиха-ИХФ, полностью состоящий из одного типа клеток. Но прекращение воздействия глюкозой приводило к возвращению штамма к исходному полиморфному состоянию.

В процессе развития устойчивости к противоопухолевым антибиотикам (брунеомицину и рубомицину) штамма ь-5178 наблюдали существенное преобладание клеток с определенным числом хромосом.

При перевивках штамма ик/Ьу с беспородных белых мышей на мышей линии ваьв наблюдали существенное увеличение числа клеток с маркерной хромосомой Д. После нескольких пассажей на мышах этой линии клетки с хромосомой Д становились преобладающими. При возвращении этого штамма на беспородных животных опять преобладающими становились клетки с маркером А. Эти данные трактуются как свидетельство различной чувствительности клеток с маркером А или Д к факторам иммунологической защиты со стороны организма животного-реципиента.

4. Полученные данные свидетельствуют о том, что имеющиеся среди полиморфной популяции опухолевых клеток клетки с разными патогенетическими характеристиками по-разному реагируют на однотипные внешние воздействия. Это позволяет использовать перевиваемые асцитные штаммы опухолей мышей в качестве модели для изучения экогенетических аспектов мутагенеза.

5. Различия в реакции на мутагены разных клеток определяются не только их генетическими характеристиками, а и сГункщональ-

нил состоянием. Так, пол влиянием нитрозометилмочевины в клетках опухолевого штамма Срлиха-ИХФ возникают преимущественно транслокации, в то время как в клетках костного мозга животного-реципиента - делеции. Это свидетельствует о том, что в реакции на однотипный мутаген нормальных и опухолевых клеток тлеются не только количественные, но и качественные отличия, определяемые функционально-структурными особенностями хромосом в разных типах клеток. Проанализированы также различия между этими двумя типами клеток по легкости разрушения центромерных связей между сестринскими хроматинами и по образованию тетраплоидных вариантов клеток.

6. При определении способности лимфоцитов периферической крови практически здоровых людей к репарации ДНК обнаружили, что у части из них эта способность существенно снижена. Такие лица составили группу риска при нахождении в среде с повышенным содержанием мутагенов.

Ряд широко распространенных заболеваний (неспецифические заболевания легких, инфаркт миокарда) приводит к снижению способности лимфоцитов периферической крови больных к репарации ДНК. Применение антибиотиков для лечения этих больных еще больше снижает эту их способность. Следовательно, лица, страдаидие названными заболеваниями, а также получанцие антибиотики, более подвержены воздействию мутагенов.

7. Низкие дозы мутагенов (на порядок меньшие, чем основная доза), введенные за несколько часов перед основной дозой,

существенно снижают частоту аберраций хромосом как в клетках опухолевого шта:.^.?а Эрлиха-ПХО, та!'» и в клетках костного мозга. Это свидетельствует о том, что явление преадалтацпи к мутагенам

тлеет мосто не только в культурах клеток, что описано в литературе, но и на уровне организма животного.

'' 8. Анализ литературы по мутагенезу позволил выделить основные этапы судьбы мутагена в организме. Приложение этой схемы мутагенеза к антимутагенному действию химических соединений дало возможность предложить новую классификацию антимутагенов: I. Десыутагены. 2. Биоантимутагены. 2.1. Мембранные антимутагены. 2.2. Метаболические антимутагены. 2.3. Антимутагены, связывающие активные радикалы. 2.4. Репарационные антиыутагены.

9. Лица, которым предстоит работа в условиях повышенного содержания мутагенов, должны быть тестированы по способности их лимфоцитов репарировать повреждения ДНК. Люди, составляющие группу риска, не должны допускаться к таким работам. Особое внимание должно уделяться заболевающим лицам и лицам, получающим антибиотики.

Эффективным способом снижения частоты мутаций у лиц, работающих в условиях мутагенного загрязнения среды, могут стать антимутагенные препараты и антиыутагенные диеты.

Выяснение различий в реакции разных субпопуляций опухолевых клеток на один мутаген может быть положено в основу разработки принципов поисков объективных критериев комбинированной химиотерапии злокачественных опухолей.

СПИСОК ОСНОНШХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАНИИ! ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

.1. Маркерные хромосомы в кариотипе клеток асцитной опухоли UK/Ly// Доклады АН СССР. - 1967. - 174, J& I. - 210-212 (совм. с Никольской Т.А.).

2. Selective processes in the population of tumor cells of as-cite strain HK/ly. Proceedings of the XII International Congress of Genetics, Tokyo, 1968, v. I, p. 202 (with Evseenko L. S., Gorkova S.N.).

3. Лекции по курсу генетики. M.: Просвещение, 1968.

4. Цитогенетика опухолевого роста. Сб. "Актуальные вопросы современной онкологии". М., 1968, МГУ, вып. I, I02-II0.

5. Электронно-микроскопическое, цитогенетическое, радиоавтографическое исследование клеток линии, полученной из асцитного лимфатического лейкоза мышей. Сб. "Культура тканей в онкологии". М., 1568, с. 9S-I06 (совм. с Никольской Т.А., Лпп-чиной Л.П., Аксютиной М.С.).

6. Штамм асцитной опухоли NK/Ьу, устойчивый к нитрозометилмо-чевине// Доклады АН СССР. - 1968. - IC3, S3. - 730-732 (совм. с Горьковой С.Н., Евсеенко JT.C.).

7. Новая линия клеток лимфатического лейкоза// Цитология. -1969. - II, JS 4. - 486-492 (совм. с Никольской Т.А., Ллпчи-ной Л.П., Аксютиной М.С.).

8. Seleotive processes in the population of tumor cells of ascite strain NK/Ly and development resistence towards chemi-oterapeutic preparations.X International Cancer Congress, Housten, USA, 1970, p. 341-342 (with Evseenko L.S., Gorkova S.N.).

9. О диплохромосомах при эндоредупликации// Цитология. - 1970.

- 12, & 12. - 1574-1578 (совм. с Фоминой ГЛ.'Л., Никольской Т.А.).

10. Существует ли штамм нк/1$г ?// Цитология. - 1972. - 14, КЗ. - 401-402.

11. Ростовый цикл асцитного гиперщиплондного штамма Срлиха по данным цитогенетического анализа. Сб. "Биология репродукции клеток", труды 2 МОЛПЛН. I."., 1972, 121-130 (совм. с Тошной U.M., Горьковой С.Н.).

12. Цитогенетические механизмы взаимодействия опухоли с организмом. Сб. "Опухоль и организм", Институт проблем онкологии, Киев, 1973, с. 251 (совм. с Ыиненковой Е.А., Фоминой 1.5.М., Горьковой С.Н., Евсеенко Л.С.).

13. Отбор, зависящий от частоты признака в популяции Kai: одна

из форм связей в сложной вероятной системе. Сб. "Экспериментальное и математическое моделирования искусственных и природных экосистем", Красноярск, 1973, 107-108 (совм. с Фоминой U.U., .Миненковой Е.А., Евсеенко Л.С.).

14. К вопросу о применимости терлинов общей генетики в работах, посвященных цптогенетике опухолевого роста// Цитология и генетика. - 1973. - 7, Jé 5. - 445-449.

15. A new approach to the different polyploidizing mechanisms of of normal and tumor flnlmnl cells // Genetics.- 1973« - 74,

H 2, part 2. - p. 10 (With Arsenieva U.A.).

16. Еще раз о межхроматцдных обменах// Цитология. - 1974. - 16, й 7. - 908-911 (совм. с Фоминой !,!.!,!.).

17. Отбор, зависящий от частоты признаков в популяции клеток перевиваемых асцитных-штаммов мышей// Доклады АН СССР. - Е74.

- 214, S3.- 694-697 (совм. с Фоминой Ü.M. .Ниненковой Е.А.).

1С. Кинетическая характеристика роста асцитного штамма опухоли L-5178 // Цитология. - 1975. - 17, № 2. - 188-133 (сода, с Фоминой ТЛ.ТЛ., ¡Юшенковой Е.А., Евсеенко Л.С.).

19. Цитогенетическая характеристика роста асцитного штамма L-5178 мышей// Цитология. - 1975. - 17, И 2. - 188-193 (совм. с Фоминой XX, Штенковой Е.А., Евсеенко Л.С.).

20. О цитогенетдческих подходах к анализу кинетических закономерностей роста перевиваемой асцитной опухоли L-5178 мышей. Сб. "Актуальные вопросы современной онкологии". МГУ. !.1., вып. 4, 1975, I82-I9I (совм. с Фоминой М.Х, Гйшенковой Е.А., Евсеенко I.C., Эмануэлем Н.Х).

21. О цитогенетических подходах к анализу кинетических закономерностей роста перевиваемого асцитного рака Зрлиха глышей. Сб. "Актуальные вопросы современной онкологии", МГУ. !,!., 1975, вып. 4, с. I82-I9I (совм. с Фоминой XX, Миненко-вой Е.А., Евсеенко Л.С., Эмануэлем Н.М.).

22. Сравнительное кинетическое изучение околодиплоидных и около-тетраплопдных вариантов перевиваеглнх асцитннх штаммов// Известия АН СССР, серия биологии. - 1975. - ß I. - 123-139 (сонл. с .'.Ьшенковой Е.А., Горьковой С.Н., Фоминой ХМ., Евсеенко Л.С.).

23. Цитогенетический анализ субштамм'ов опухоли 1-5178, устойчивых к'противоопухолевым антибиотикам брунеомицину и рубо-

i,гадину. Сб. "Противоопухолевые антибиотики". Советско-итальянский симпозиум. М., 1975, 26-27 тоня, с. 283-299 (сонл. с Юшенковой Е.А., Фоминой ','.1,!., Авербух Л.А., Евсеенко Л.С.).

24. On the cytogenetic criteria of rational tumor chemoterapy. In: "Chemoterapy". New-York - London, 1976, v. 8, p. 1-3 (with Gorkova S.U., Minenkova E.A., Ponina U.U., Evseenko L.S.).

25. О онтогенетических подходах к анализу кинетических характеристик роста перевиваемых штаммов опухолей мышей// Известия АН СССР, серия биологии. - IS77. - К 2. - 273-260 (сош. с Шненковой Е.А., Фоминой М.;,!., Евсеенко Л.С. ).

26. функццонально-структурные изменения хромосом на протяжении митотического цикла. В кн. "Хромоеомологня". Итога науки и техники ВИНИТИ. Общая генетика. Том 2. I.î., 1977, с. 5-58.

27. Ыезсхроматидные обмены. В кн.: "Хромосомология". Итоги науки и техники ВИНИТИ. Общая генетика. Том 2. , 1977,

с. 59-90.

23. Селективные процессы в популяции опухолевых клеток аецптно-го штамма Эрлиха мышей. Сб. "Третий съезд Всесоюзного общества генетиков и селекционеров пл. Н.И.Вавилова. Тезисы докладов", 1977. Л., II (2), с. 215 (сош. с Соминой МЛ!.).

29. Полиморфизм популяций опухолевых клеток и селективные процессы. I. Субпопулявди опухолевых клеток асцитного штамма орлиха// Цитология. - 1978. - 20, ä 5. - 562-569 (сош.

с Фоминой М.М., Юшенковой Е.А., Евсеенко Л.С.).

30. Полиморфизм популяций опухолевых клеток и селективные процессы. II. Изменение соотношения численностей двух субпопуляций опухолевых клеток асцитного штамма срлиха-ИХФ ¡лысей при действии бесклеточной асцптической жидкости и ее фракций// Цитология. - 1978. - 20, Уг 12. - I40I-I4C6 (сов;.:.

с Фокиной , Глненковоп Е.А., Евсеенко Л.С.).

31. Популяционнке подходы к изучению устойчивости опухолей к химиотерапии. В кп.: Итоги науки и техники ВИНИТИ. Генетика человека. Т. 3. П., 1978, 193-218.

32. Функционально-морфологические особенности хромосом опухолевых клеток. Тезисы докладов НУ Международного генетического конгресса, часть П. а., Наука, 1978, 460.

33. Предисловие. В кн.: "Биологические системы репарации ДНК

у эугариотов". Итоги науки и техники ВИНИТИ. Общая генетика. Т. 4. ГЛ., 1978 , 5-6 (совм. с Мазуриком В.К.).

34. Полиморфизм популяций опухолевых клеток и селективные процессы. И. Изменение соотношения субпопуляций опухолевых клеток асцитного штамма Эрлиха-ИХФ под влиянием глюкозы

и сукцината натрия// Цитология. - 1979. - 21, № В. - 952-95Б (совм. с Фоминой М.М., Миненковой Е.А., Ланкиным В.З., Евсеенко Л.С.).

35. Полиморфизм популяций опухолевых клеток и селективные процессы. 1У. Влияние дибунола и нитрозомочевины на изменчивость опухолевых клеток асцитного штамма Эрлиха-ИХФ// Цитология. - 1979. - 21, И 9. - 1081-1СВ6 (совм. с Миненковой Е.А., Фоминой М.М., Евсеенко Л.С.).

36. Перспективность популяционного подхода к изучению проблем лекарственной резистентности опухолей. Всесоюзный симпозиум "Генетические процессы в популяциях опухолевых клеток". Л., 1980, 3 (совм. с Миненковой Е.А.).

37. 0 возможности направленного отбора в гетерогенной популяции опухолевых клеток асцитного штамма Эрлиха мышей. Всесоюзный симпозиум "Генетические процессы в популяциях опухолевых клеток". Л., 198С, 4 (совм. с Фоминой М.1Л., Миненковой Е.А., Евсеенко Л.С.).

38. Характер повреждений хромосом в нормальных и опухолевых клетках мышей под влиянием нитрозометилмочевины// Экспериментальная онкология. - 1980. - 2, й 4. - 74-77 (сош.

с Фоминой М.М., Миненковой Е.А., Евсеенко Л.С.).

39. Предисловие. В кн.: "Экологическая генетика человека". Итоги науки и техники ВЖТГИ. Генетика человека. Т. 6. 1982, Ь-14 (совм. с Федоровым В.,".;.).

40. Экогенетические аспекты мутагенеза. В кн.: "Итоги науки и техники ВИНИТИ. Генетика человека. Т. 6". 1982, 72-09.

41. Система репарации ДНК при неспецифических заболеваниях легких// Терапевтический архив. - 1985. - 57,& 7. - 114—116. (совм. с Сильвестровым В.П., Москалевой Е.Ю., Илюшиной H.A., Марциновским В.Ю., Ильиным A.B., Карауловым A.B.).

42. Способность лимфоцитов периферической крови здоровых доноров к репарации ДНК// Терапевтический архив. - 1985. - 57, & 7. - 116-118 (совм. с Москалевой Е.Ю.Илюшиной H.A., Захаровым В.Н., Федоровым А.Н., Карауловым A.B.).

43. Ускоренные методы прогнозирования мутагенных и бластомоген-ных свойств химических соединений. Итоги науки и техники ВИНИТИ. Токсикология. Т. 14. 1986 (совм. с Абилевым С.К.).

44. Участие процессов репарации ДНК в изменении частоты сестринских хроматидных обменов в лимфоцитах периферической крови при воспалительных заболеваниях// Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 1986. - 107, 12. - 743-745 (совм. с Умновой Н.В., Москалевой Е.Ю.).

45. Активность эксцизионной репарации ДНК и повревдения ДНК

в лимфоцитах периферической крови у здоровых лкдей при некоторых заболеваниях и их лечении. М., Наука, У Всесоюзный биохимический съезд, Тезисы стендовых сообщений. Т. 2, 287 (совм. с Москалевой Е.Ю., Умновой Н.В.).

46. Фарыакогенетика. Большая медицинская энциклопедия. Изд. Ш. Советская энциклопедия. М., 1986, т. 26, с. 195-196.

47. Предисловие. В кн.: "Химический мутагенез". Итоги науки и техники ВИНИТИ. Общая генетика. Т. 9. М., 1986, 3-4.