Эффекты синергизма в совместном действии -токоферола и ферментативных антиоксидантов при окислении модельных гетерогенных липидных систем in vitro в присутствии биологически активных олигопептидов

Болдырева, Юлия Викторовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Эффекты синергизма в совместном действии -токоферола и ферментативных антиоксидантов при окислении модельных гетерогенных липидных систем in vitro в присутствии биологически активных олигопептидов
ВАК РФ 03.01.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Эффекты синергизма в совместном действии -токоферола и ферментативных антиоксидантов при окислении модельных гетерогенных липидных систем in vitro в присутствии биологически активных олигопептидов"

На правах рукописи

БОЛДЫРЕВА

ЮЛИЯ ВИКТОРОВНА

ЭФФЕКТЫ СИНЕРГИЗМА В СОВМЕСТНОМ ДЕЙСТВИИ а-ТОКОФЕРОЛА И ФЕРМЕНТАТИВНЫХ АНТИОКСИДАНТОВ ПРИ ОКИСЛЕНИИ МОДЕЛЬНЫХ ГЕТЕРОГЕННЫХ ЛИПИДНЫХ СИСТЕМ IN VITRO В ПРИСУТСТВИИ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ОЛИГОПЕПТИДОВ

03.01.04 - биохимия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

1 8 НОЯ 2010

Тюмень-2010

004613245

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении Высшего профессионального образования Тюменской государственной медицинской академии Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию

Научный руководитель: Официальные оппоненты:

доктор химических наук, профессор Сторожок Надежда Михайловна

доктор медицинских наук Алборов Робинзон Григорьевич

ГОУ ВПО «Тюменская медицинская академия» Росздрава

доктор медицинских наук, профессор Камилов Феликс Хусаинович ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» Росздрава

Ведущая организация: Институт биохимической физики

им. Н.Н. Эмануэля РАН

Защита состоится 26 ноября 2010 г. в_часов на заседании

диссертационного совета Д 208.101.02 при Государственном образовательном учреждении Высшего профессионального образования Тюменской государственной медицинской академии Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию по адресу: 625023, г. Тюмень, ул. Одесская, 54.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО Тюменской государственной медицинской академии Росздрава.

Автореферат разослан «¿¿410 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

С. А. Орлов

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В последнее десятилетие отмечается повышенный интерес к изучению широкого круга индивидуальных олигопептидов, эффективных в качестве органоспецифических биорегуляторов; адаптогенов, нейропро-текторов, соединений, проявляющих гормональную активность, выраженное антимикробное действие [Ашмарин И.П. и др., 2007; Морозов В.Г. и др., 2008; Липкин В.М., Сурина Е.А., Сторожева З.И., 2009; Хавинсон В.Х., Арутюнян А.В, Козина Л.С., 2009]. Считают, что регуляторные пептиды (РП) отвечают за первичное реагирование организма, запуск систем защиты в ответ на действие факторов внешней и внутренней среды [Арутюнян A.B. и др., 2007; Лысенко A.B., Финоченко Т.А., Шейчова Р.Г., 2008 Nuttal S.L., Martin U., Hutchin T., 2006]. Показано, что нарушение пептидной регуляции на стадии биосинтеза РП и переноса информационно значимых молекул между клетками ведет к снижению устойчивости организма, способствует развитию патологий и ускоренному старению организма [Рыжак Г.А., Коновалова С.С., 2004; Морозов В.Г., Хавинсон В.Х., 2008; Lysenko A.V., Morgul R.G., Sheykhova Т.А., 2007]. Концепция пептидной биорегуляции получила в последние годы признание в качестве перспективного направления современной медицины [Арутюнян A.B., Козина Л.С., 2007; Морозов В.Г., Хавинсон В.Х., 2008; Temer A.J. et al., 2007].

Механизм действия эндогенных олигопептидов в настоящее время недостаточно изучен. Считают, что регуляторные олигопептиды изменяют функциональную активность генома, воздействуют на процессы транскрипции м-РНК, кодирующих синтез специфических клеточных белков и пептидов, регулирующих гомеостаз клетки [Войтон Е.В., Ряжак Г.А., 2004; Козина Л.С., Лысенко A.B., 2007]. Существует мнение об участии пептидов в регуляции апоптоза патологически измененных клеток [Стволинский С.Л., Лесняк В.В. и др., 2007; Морозов В.Г., Хавинсон В.Х., 2008; PapaS. et al., 2006].

Известна гипотеза об антиоксидантной активности (АОА) эндогенных пептидов, трактующая их эффекты в рамках теории свободнорадикального окисления [Арутюнян A.B., Козина Л.С. и др., 2006; Козина, 2009]. Так, карнозин и эпиталон проявляли антирадикальную активность в реакции со стабильными радикалами 1,1-дифенил-2-пикрил-гидразина [Козина Л.С., Стволинский С.Л., Федотова Т.Н., 2008], но ряд других пептидов, напротив, ускоряли окисление. Установлена способность карнозина и анзерина тушить синглентный кислород [Егоров С.Ю., Ку-релла Е.Г., Болдырев A.A., Красновский A.A., 1992]. Известна роль глутатиона в процессе окисления ненасыщенных липидов [Кулинский В.И., Колесниченко Л.С.1990, Зенков Н.К., Ланкин В.З., Меньицикова Е.Б., 2001]. Антиоксидантное (АО) действие ряда олигопептидов констатировано при изучении кинетики тушения хе-милюминесценции, накопления продуктов в моделях Ре2+-индуцированного окисления [Рожкова Е.А., Евстигнеева Р.П. и др., 1996; Котельников А.И., Сырцова Л.А. Санина H.A., 2009] или [Комаров Ф.И., 1996; Козина Л.С., Хавинсон В.Х., 1996; Хавинсон В.Х., Арутюнян A.B., 2008], при отсутствии в системе катионов металлов переменной валентности, выполняющих роль инициаторов, действие пептидов на процесс окисления не изучалось. Методом ЭПР показано, что при радиационном облучении, из пептидов и белков генеририруются свободные радикалы [Каюмов Л.П., Львов K.M., Пулатова М.К., 1972, Прайор У., 1979], которые в дальнейшем повреждают структуру ДНК [Карп О.Э., Гудков C.B., Брусков В.И., 2010]. Показано, что при введении мышам олигопептиды усиливают синтез АО ферментов (катала-зы и супероксиддисмутазы) [Хавинсон В.Х., Арутюнян A.B., Козина U.C., 2007], что может рассматриваться также в качестве механизма ответа на фактор, повышающий интенсивность свободнорадикальных процессов.

Таким образом, результаты изучения влияния пептидов на процесс окисления немногочисленны и противоречивы. Отсутствуют данные о характере взаимодействия пептидов с природными ингибиторами окисления, влиянии ферментативных АО (каталазы, пероксидазы) на кинетику окисления систем, включающих олигопептиды различного строения.

Цель исследования изучить действие ряда индивидуальных биологически активных олигопептидов, моделирование кинетических эффектов ингибирования композиций, дополнительно включающих низкомолекулярные ингибиторы природного происхождения (а-токоферол, Р-каротин) и ферментативные АО (каталазу, пероксидазу хрена) в процессе инициированного окисления гетерогенных липид-ных систем in vitro.

Задачи исследования:

1. Изучить кинетику инициированного окисления (в присутствии Fe5+ или азо-соединений) гетерогенной системы, включающей модельный субстрат (мети-лолеат, МО), олигопептиды разного химического строения (глицилглицилгли-цина (Gly-Gly-Gly), карнозина ((З-Ala-L-His), глутатиона (y-Glu-Cys-Gly), вилона (Lys-Glu), везугена (Lys-Glu-Asp), пинеалона (Glu-Asp-Arg), хонлутена (Glu-Asp-Gly), овагена (Glu-Asp-Leu), кристагена (Glu-Asp-Pro), карталакса (Ala-Glu-Asp), элиталона (Ala-Glu-Asp-Gly)) и ПАВ (додецилсульфат натрия) (ДЦС-Na).

2. Выявить особенности концентрационных зависимостей действия исследуемых пептидов в процессе окисления гетерогенных липидных систем.

3. Изучить возможность образования нитроксильных радикалов в процессе окисления пептидов (методом ЭПР и методом спиновых ловушек).

4. Изучить особенности кинетики накопления гидропероксидов (ГП), расходования р-К в присутствии и в отсутствии пептидов в системе окисления.

5. Исследовать кинетику действия индивидуальных природных АО а-токоферола (а-ТФ) и p-каротина (Р-К) в присутствии коротких пептидов и аскорбиновой кислоты (АК).

6. Изучить кинетику окисления гетерогенных липидных систем, включающих олигопептиды, АО ферменты (каталазу и пероксидазу хрена (ПХ)), а также их смеси с а-ТФ.

Новизна исследования. В работе впервые в системе in vitro при различных способах инициирования исследованы АО свойства ряда индивидуальных олигопептидов: глицилглицилглицина (Gly-Gly-Gly), карнозина (P-Ala-L-His), глутатиона (y-Glu-Cys-Gly), вилона (Lys-Glu), везугена (Lys-Glu-Asp), пинеалона (Glu-Asp-Arg), хонлутена (Glu-Asp-Gly), овагена (Glu-Asp-Leu), кристагена (Glu-Asp-Pro), эпитало-на (Ala-Glu-Asp-Gly), карталакса (Ala-Glu-Asp).

Доказано, что большинство исследуемых веществ тормозят Fe2+-индуцированный процесс окисления и существенно ускоряют АИБН-инициированное окисление. Установлена возможность связывания индивидуальными олигопептидами солей железа в ферри-форме (Fe2*), что снижает скорость инициирования и скорость окисления липидов в целом.

При отсутствии в системе металлов переменной валентности пептиды играют роль инициаторов процесса окисления, служат дополнительными источниками свободных радикалов. Исключение составляют пептиды, имеющие в своей структуре гетероциклический фрагмент (остаток имидазола или пролина) (карнозин, кристаген), либо SH-группу (глутатион).

Показано, что в присутствии пептидов значительно увеличивается скорость накопления ГП - первичных продуктов окисления липидов, возрастает скорость расходования АО, в частности, р-К.

Установлено, что пептиды разного химического строения проявляют эффект антагонизма в композициях с природными АО (а-ТФ и р-К), уменьшая их ингиби-рующее действие в смеси до 80%.

АК в системе с пептидами и биоАО способствует повышению стабильности системы, но не более чем на 20%, при высоких концентрациях.

Показано, что АО ферменты (каталаза и ПХ) позволяют преодолеть инициирующее действие пептидов и существенно повысить окислительную устойчивость системы. При этом ПХ более чем в 2 раза эффективнее каталазы, ферменты обеспечивают увеличение периодов индукции в 3,0 и 7,0 раз, соответственно при сравнимых массовых долях 4,3*10~3% (1,720*10'7 моль/л каталазы и 0,975*10 моль/л ПХ). Показано, что ингибирующее действие ферментов прямо пропорционально их количеству в системе окисления.

Доказано, что бинарные композиции АО ферментов (каталазы, ПХ) и а-ТФ эффективно стабилизируют in vitro процесс свободнорадикального окисления ли-пидных систем, дополнительно включающих пептиды. Между периодами торможения окисления и количеством а-ТФ и ферментов существует прямая корреляционная связь.

Впервые показано, что в процессе окисления пептиды не образуют нитро-ксильных радикалов, продукты окисления пептидов не взаимодействуют с водорастворимыми модельными маркерами нитроксильных радикалов.

Практическая значимость. Предложены способы стабилизации окисления гетерогенных липидных систем, включающих олигопептиды, за счет дополнительного введения АК, АО ферментов (каталазы, ПХ) и их синергических смесей с а-ТФ. Практическое использование методических подходов, изложенных в диссертации, может обеспечить длительное сохранение биологической ценности и окислительной устойчивости нутрицевтиков, фармацевтических и косметических средств, включающих липиды и олигопептиды.

Внедрение результатов исследования. Результаты работы использованы в элективном курсе для студентов 1 и 2 курса лечебного и педиатрического факультетов на кафедрах общей и биоорганической химии и биологической химии.

Апробация работы. Результаты доложены на Всероссийской конференции «Актуальные проблемы теоретической, экспериментальной, клинической медицины и фармации», Тюмень, 2008, 2009, 2010 гг.; Всероссийской конференции «Окисление, окислительный стресс и антиоксиданты», М., 2008 г.; Крымской конференции «Окислительный стресс и свободнорадикальные патологии», Судак, 2008, 2009 гг.; Международной конференции «Современные проблемы химической физики», Ереван, 2008г.; научно-практической конференции «Фармация и общественное здоровье», Екатеринбург, 2009 г.; 75-й студенческой конференции КрГМА, Краснодар, 2009г.; XVII международной конференции «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии». - Гурзуф, 2009 г.; IV Национальном конгрессе терапевтов Урала, Тюмень, 2009 г.; XXVII Всероссийской школе-симпозиуме молодых ученых по химической кинетике. - М., 2009 г.; конференции «Химия под знаком «сигма»: исследования, инновации, технологии». -Омск, 2010 г.; VIII Международной конференции «Биоантиоксидант» - М., 2010 г.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 150 страницах компьютерного текста, состоит из; введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных экспериментов, обсуждения результатов, выводов, списка литературы и приложения. Список литературы включает 305 источников, из них 177 отечественных и 128 зарубежных. Работа иллюстрирована 31 рисунком и 15 таблицами.

Публикации. По теме исследования опубликовано 17 печатных работ.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1. Кинетика окисления модельных липидных систем, инициированых солью Мора (Fe21"), либо за счет термического разложения азосоединений, в присутствии индивидуальных олигопептидов: глицилглицилглицина (Gly-Gly-Gly), кар-нозина ((3-A!a-L-H¡s), глутатиона (y-Glu-Cys-Gly), вилона (Lys-Glu), везугена (Lys-Glu-Asp), пинеалона (Glu-Asp-Arg), хонлутена (Glu-Asp-Gly), овагена (Glu-Asp-Leu), кристагена (Glu-Asp-Pro), карталакса (Ala-Glu-Asp), эпиталона (Ala-Glu-Asp-Gly).

2. Механизм действия олигопептидов при окислении липидов. Результаты изучения кинетики накопления ГП, расходования биоАО ((3-К) в присутствии и в отсутствии пептидов в системе окисления. Исследование методом ЭПР и методом спиновых ловушек возможности образования нитроксильных радикалов в процессе окисления пептидов.

3. Кинетика совместного АО действия природных АО (а-ТФ и р-К) в присутствии коротких пептидов. Изучение эффектов синергизма а-ТФ с АК в присутствии олигопептидов.

4. Кинетика окисления гетерогенных липидных систем, включающих олигопеп-тиды и АО ферменты (каталазу и ПХ).

5. Кинетика брутто-ингибрующего действия смесей а-ТФ и АО ферментов (ка-талазы, ПХ) при окислении липидных систем, содержащих олигопептиды.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

В работе использованы метод ЭПР-спеетроскопии, метод спиновых ловушек, УФ-спектроскопии, термохемилюминесценции, манометрический метод поглощения кислорода, метод обратного йодометрического титрования.

Олигопептиды (вилон (Lys-Glu), везуген (Lys-Glu-Asp), пинеалон (Glu-Asp-Arg), хонлутен (Glu-Asp-Gly), оваген (Glu-Asp-Leu), кристаген (Glu-Asp-Pro), эпита-лон (Ala-Glu-Asp-Gly), карталакс (Ala-Glu-Asp) синтезированы в Санкт-Петербургском Институте биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН. Использовали модельные пептиды: глицилглицилглицин (Gly-Gly), карнозин (p-Ala-L-His) «Serva», (Германия), глутатион фирмы «Reanal» (Венгрия). Применяли дибунол, а-ТФ фирмы «Serva» (Германия), Э-К, аскорбиновую кислоту (АК) НПО «Витамины», ферменты (каталазу и ПХ) фирмы «Sigma». Использовали метилолеат (МО), (Acras Organics, USA), дважды перегнанный под вакуумом при остаточном давлении 5 мм.рт.ст. Использовали соль Мора «Сибтехнология» и азобисизобутиронитрил («Serva», Германия), очищенный перекристаллизацией из безводных этанола, ацетона и бензола, хлорбензол, очищенный методом простой перегонки.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Изучали процесс окисления модельного субстрата (метилового эфира олеиновой кислоты, МО) в присутствии индивидуальных биологически активных ди-, три- и тетрапептидов (см. формулы, рис.1).

Эксперименты проводили при температуре 60°С и 40°С, в водно-эмульсионной среде в присутствии ПАВ. Окисление инициировали солью Мора либо за счет термического разложения азосоединений (азобисизобутиронитрила) (АИБН).

В первом случае инициирование процесса осуществляется за счет радикального разрушения пероксидов в присутствии Fe2+ (реакция Фентона):

ROO H + Fe2*-» Fe3+ + RO* + OH"

h2n-(ch2)4-ch-со-nh—сн— (сн2)2— соон

I 1

nh2 соон

Вилон (Lys-Glu, I) (лизилглутаминовая кислота) h2n (сн2)4 ÇH CO NH ÇH CO NH сн сн2 соон

fJH (СН2)2—соон соон

Везу ген (Lys-Glu-Asp, II) (лизилглутаминиласпарагиновая кислота) h2n (сн2)2-сн-со-nh—сн-ch2-co—nh—с-nh-(сн2)3

nh2 iooh l íh—nh,

соон

Пинеалон (Glu-Asp-Arg, III) (глутаминиласпарагиниларгинин) hooc—(ch2)2-сн-co-nh-сн-сн2—со-nh-(сн2)2—соон

1н2 i°oh

Хонлутен (Glu-Asp-Gly, IV) (глутаминиласпарагинилглицин) HOOC—(CH2)2—CH—CO—NH—сн—СН2-СО-NH—сн—(СН2)2—(СНз)2

1jh2 ¿ooh looh

Оваген (Glu-Asp-Leu, V) (глутаминиласпарагиниллейцин) HOOC-(СН2)2-СН—СО—NH-СН-СН2—СО—jü

I I f^r-COOH

nh2 ¿оон i-1

Кристаген (Glu-Asp-Pro, VI) (глутаминиласпарагинилпролин) h2n—сн—СО—nh—сн—(сн2)2—со— nh-сн—сн2-со-nh—сн2

1н3 looH ¿ooh looH Эпиталон (Ala-Glu-Asp-Gly, VII) (аланилглутаминиласпарагинилглицин) h2n—çh-со-nh-çh-(ch2)2-со-nh-ch-ch2-cooh

ch3 cooh ioOH

Карталакс (Ala-Glu-Asp, VIII) (аланилглутаминиласпарагиновая кислота)

h2n-(ch2)2-co-nh-ch—cooh

H2Ç-CO-NH-CH2-CO-NH-CH2-COOH |

-CH,

NH,

/ГТ

HN^N

Глицилглицилглицин (Gly-Gly-Gly, IX) Карнозин (ß-аланилгистидин, X) HOOC—CH-(CH2)2-CO-NH-CH-CO-NH—CH2—COOH

Hjll H21-SH

ГnymamuoH (у-глутамилцистеинилглицин, XI)

Рис.1. Формулы исследуемых олигапептидов

Во втором - свободные радикалы генерируются за счет термического разложения инициатора. Образующиеся радикалы (г*) вымениваются на пероксильные радикалы R02*, ведущие процесс окисления. Исследовали окисление гетерогенных систем, дополнительно включающих воду и анионный ПАВ - додецилсульфат натрия (ДДС). Присутствие ДДС обеспечивало формирование мицелл 1 типа («масло-вода»), С участием ДДС происходил массоперенос пептидов через границу раздела фаз из водной в органическую среду. Липофильный анион ДДС связывался с аминогруппами пептидов (существующих в виде цвиттер-иона) и в форме ионной пары (ДДС-пептид) осуществлял межфазный перенос пептидов в среду, в которой был локализован субстрат окисления. Экстракционный механизм действия анионного ПАВ обеспечивал совместную локализацию субстрата окисления (МО) и пептидов. Известно, что образование ионных пар является механизмом обеспечения пространственной организации ряда природных супрамолекулярных структур (ферментов, белков цитоскелета, липопротеидов и нуклеопротеидов) [Овчинников Л.П., 2006], лежит в основе трансдермального переноса (пенетрации) пептидов во внутренние слои кожи [Megwa S.A., Gross S.E., Benson H.A., Roberts M.S., 2005], используется как принцип ион-парной высокоэффективной жидкостной хроматографии белков и пептидов [Шатц В.Д., Сахартова О.В.,1988, Сумина Е.Г., Штыков С.Н., Тюрина Н.В., 2003].

Известно, что кинетика процессов массопереноса определяется режимом перемешивания. Состояние квазиравновесия достигалось за счет интенсивного перемешивания при помощи магнитной мешалки (1000 об/мин).

В условиях окисления по Фентону в присутствии пептидов был констатирован эффект торможение процесса окисления. Периоды индукции возрастали (рис.2), а скорость окисления снижалась прямо пропорционально количеству пептидов в системе (рис.3).

1, мин

Рис.2. Кинетические кривые поглощение кислорода МО (1); МО+везуген (2). Смо=0,685 моль/л, Свеэугена=2,5х10*4 МОЛЬ/Л, Ссоли Мора=3,0х1 О"4 МОЛЬ/Л, Т—ЗЗЗК

Было установлено, что наблюдаемые эффекты брутто-ингибирования процесса Ре2+-индуцированного окисления, связаны с возможностью химического связывания пептидами катионов-инициаторов. Так, вне зависимости от концентрации соли Мора скорость окисления уменьшается с ростом концентрации пептидов (рис.4).

Свезугена, Ю4 МОПЬ/Л

10,00 9,00 -8,00 -7,00 -6,00 -5,00 -4,00 -3,00 -2,00 -1,00 -0,00

1,25 2,50 3,75 5,00 6,25 7,00 10,00

С (везугена), 104 моль/л

Рис.3. Зависимость величины периодов индукции (а) и скоростей окисления (\Л/02 мах. (светлые столбцы) и \ЛГОг нач. (темные столбцы) (б) от концентрации везугена в системе окисления. Условия окисления соответствуют как на рис. 2.

ю-

т---1------I-'-1-■-1---1-•

12 3 4 5 6

С (соли Мора), 103 моль/л

Рис.4. Зависимость скорости поглощения кислорода субстратом от концентрации соли Мора в системе окисления: 1-МО (контроль); 2-смесь МО+бхЮ"4 моль/л глу-татиона. Условия окисления соответствуют как на рис.2.

Таким образом, пептиды не проявляют прямого АО действия, а влияют на Ре+2-индуцированный процесс окисления опосредованно. Олигопептиды связывают катионы железа в ферри-форме, участвующие в генерировании свободных радикалов (рис.5), и уменьшают таким образом скорость инициирования и скорость окисления в целом.

НС Iе

уСН2

Рис.5. Комплексное соединение - продукт взаимодействия глицилглицина с катионами Ре

При изучении в присутствии пептидов АИБН-инициированного окисления МО, при котором в системе отсутствовали катионы металлов переменной валентности, для большинства исследуемых веществ было констатировано снижение значений периодов индукции, увеличение скорости процесса (табл. 1).

Следует отметить, что незначительное торможение окисления наблюдали для глутатиона и карнозина во всем диапазоне изученных концентраций (рис.6 а). В области низких концентраций указанных пептидов (до 1,25*10"* моль/л) происходило линейное увеличение периодов индукции, при дальнейшем росте их концентрации эффекты ингибирования практически не изменялись, но всегда превы-

Рис.6. Относительное изменение величины периодов индукции от концентрации пептидов: а - карнозин, глутатион; б - оваген, хонлутен, кристаген (1), вилон, везу-ген, пинеалон, карталакс, эпиталон (2). Условия окисления соответствуют как на рис.2

В структуре пептидов, которые можно было отнести к слабым ингибиторам окисления (глутатион, карнозин), присутствовала меркаптогруппа или гетероциклический фрагмент (остаток имидазола). Известно, что НБ-группа, например, в структуре глутатиона, обеспечивает разрушение пероксидов с образованием молекулярных продуктов (спиртов), которые не участвуют в дальнейшем в свободно-радикальном процессе [Зенков Н.К., Ланкин В.З., Меньшикова Е.Б., 2001].

Для пептидов второй группы — вилон, везуген, пинеалон, карталакс, эпиталон — характер концентрационной зависимости по форме был аналогичен кривой для карнозина и глутатиона (рис.6 б), однако значения периодов индукции всегда

были существенно ниже, чем в контроле. Во всем диапазоне концентраций пептиды 2 группы выступали в роли инициаторов окисления.

Пептиды третьей группы — оваген, хонлутен, кристаген — при низких концентрациях (до 2.5Х10"4 моль/л) - ускоряли процесс, что приводило к более низким, чем у контроля периодам индукции, а при более высоких концентрациях - тормозили окисление (рис.6 б).

Таблица 1

Кинетические параметры окисления МО в присутствии пептидов Смо=0,685 моль/л, Саибн=Зх10"3 моль/л, ш (ДДС-Ма)=5%, Т=ЗЗЗК

Спептида, 1.25x104 М т, мин \Л/02, ХЮ' моль/лхсек

\Л/02 нач \ЛГО2 тах

МО (контроль) 24 4,6 5,7

вилон 17 6,0 11,4

везуген 16 6,2 11,3

пинеалон 18 5,9 11,3

хонлутен 18 5,7 6,4

оваген 17 5,6 6,5

кристаген 18 5,6 6,5

карталакс 18 6,0 11,3

эпиталон 20 5,9 11,3

Необходимо отметить, что в независимом исследовании [Козина Л.С., Ство-линский С.Л., Федотова Т.Н. и др., 2008] спектрофотометрическим методом было изучено взаимодействие пептидов со стабильным радикалом 1,1-дифенил-2-пикрилгидразином. Авторами установлена антирадикальная и АОА карнозина, эпиталона. При этом вилон, везуген, пинеалон, напротив, инициировали процесс. Таким образом, для 4 пептидов результаты настоящей работы и данные независимого исследования совпадают. Исключение составляет эпиталон, для которого в упомянутой выше работе было констатировано инициирующее действие

Зависимость скорости окисления от концентрации изучаемых пептидов приведена на рис.7. Констатировано увеличение скорости процесса (от 10 до 25%).

0,00 2,50 5,00 7,50 10,00 12,50

С (пептида), 104моль/л

Рис.7. Зависимость максимальной скорости окисления МО от концентрации пептидов. 1 - оваген, хонлутен, кристаген; 2 - глутатион, карнозин; 3 - вилон, везуген, пинеалон, карталакс, эпиталон. Условия окисления соответствуют как на рис.2.

Можно видеть, что на концентрационных кривых обнаруживаются максимумы, положение которых для разных пептидов, условно объединенных в одну группу, проявляется в области относительно низких или высоких концентраций (рис.7).

Анализ зависимостей величины периодов индукции (рис.6) и скорости окисления (рис.7) показывает, что в области низких концентраций эти показатели изменяются симбатно, что нетипично для классических ингибиторов. Разнонаправ-ленность этих параметров отмечается лишь для пептидов 3 группы в области высоких концентраций.

Таким образом, результаты показывают, что, за исключением карнозина и глутатиона, все пептиды ускоряют процесс окисления. Полагаем, что дополнительное инициирование окисления в присутствии пептидов может быть связано с возможностью с гемолитического разрушения ГП и (или) отрывом свободными радикалами атома водорода в а-положении к пептидной группе, приводящим к образованию из пептидов радикала нового сорта. Ранее была показана возможность образования радикальных продуктов под действием ионизирующей радиации на примере монокристаллов аминокислот и дипептидов методом ЭПР [Каюмов Л.П., Пулатова М.К., Кривенко В.Г., 1972; Прайор У., 1979]. Можно полагать, что в условиях наших экспериментов радикалы ЯОг* взаимодействуют с пептидом за счет атома водорода в а-положении, проявляющим С-Н-кислотность, с образованием нового достаточно активного радикала. В работе [Цымбал И.Н., 2004] на примере ряда дипептидных производных бетулоновой кислоты показано, что при замещении атома водорода в а-положении бензольным кольцом (что исключает образование новых радикалов) ингибирующее действие соединений в сравнении с родо-начальной структурой бетулина увеличивается на 70%.

Вопрос о механизме действия олигопептидов в процессах окисления остается дискуссионным. Методом термохемилюминесценции (ХЛ) было показано, что пептиды не проявляют антирадикальной активности, не взаимодействуют с перок-сильными радикалами, ведущими окисление. При окислении МО с пептидами не зафиксировано спектров, характерных для нитроксильных радикалов, не установлено изменений в характере спектров известных модельных спиновых ловушек двух типов (фенилбутилнитрон (РВ1Ч, а-фенил-1М-трет-бутил-нитрон) и триметил-пирролиноксид (ТМРО, 5,5-диметил-1-пирролин-М-оксида), обычно возникающих при образовании в системе стабильных радикалов. Полученные данные свидетельствуют о том, что в исследуемых системах присутствовали лишь короткожи-вущие (преимущественно пероксильные) радикалы. Таким образом, гипотеза о возможном образовании стабильных нитроксильных радикалов при окислении пептидов не нашла экспериментального подтверждения.

Данные об инициирующем действии пептидов, полученные при изучении кинетики поглощения кислорода, могли быть подтверждены при исследовании кинетики накопления ГП. Результаты приведены на (рис. 8). Пептиды вводили в предварительно окисленный субстрат. Показано, что пептиды разрушают ГП, но в дальнейшем их уровень увеличивается практически вдвое. Эти данные могут быть объяснены в предположении, что пептиды разрушают ГП с образованием двух активных радикалов. Таким образом, пептиды могут способствовать вторичному инициированию процесса окисления.

О 60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 660 720 780 840 900 960

t, МИН

Рис.8. Кинетические кривые разрушения гидропероксидов при аутоокислении МО в гетерогенной среде (1), смеси МО + 7,5x1o"4 моль/л везугена (2); Т=295К Стрелка обозначает момент введения пептида.

В работе исследовали кинетику расходования р-К спектрофотометрическим методом. Показано, что с пептидами скорость расходования (3-К выше практически в 7,0 раз (рис.9), что можно объяснить инициирующим действием пептидов.

О 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

t, мин

Рис.9. Кинетика расходования (3-каротина при окислении: 1- МО+ДДС-Na (контроль); 2 - МО+ ДДС-№+пептиды. CnerrrWa=const=7,5>«10"4 моль/л. Условия окисления соответствуют как на рис.2.

Таким образом, данные разных независимых методов позволяют однозначно судить об активирующем влиянии пептидов на процесс окисления липидов. Увеличение скорости поглощения кислорода, ускоренное расходование АО связано с образованием из пептидов в процессе окисления нового сорта активных радикалов, способных продолжать цепи окисления.

Приведенные выше результаты показывают, что для систем in vitro, включающих биологически активные пептиды, целесообразна превентивная стабилизация окисления, ограничивающая возможность ускоренного развития процесса. В связи с этим был проведен поиск способов ингибирования окисления липидных субстратов в присутствии пептидов.

Классически проблемы стабилизации процесса окисления решаются применением природных или синтетических АО либо их смесей с синергистами. В настоящей работе изучены перспективы ингибирования процесса окисления модельных липидов, дополнительно включающих олигопептиды, с помощью индивидуальных природных АО: а-ТФ и р-К, а также их смесей с известным синергистом -АК.

Было показано, что индивидуальный а-ТФ в концентрации б.ОхЮ"4 моль/л более чем в 20 раз увеличивает величину тинд, в присутствии дипептида вилона

эффективность действия АО существенно уменьшается (до 80%) (табл. 2). Аналогичные данные получены для р-К (табл. 2). Результаты свидетельствуют о проявлении эффектов антагонизма в совместном действии АО и пептидов. Обращает внимание, что эффект антагонизма одноименных пептидов с различными АО (а-ТФ или Р-К) сравним (табл. 2). Не выявлено взаимосвязи между величиной антагонизма и строением пептидов. Действие смесей указанных АО с ди-, три- и тетра-пептидами неизменно уступало эффективности индивидуального АО и количественно было сравнимо между собой (табл. 2).

Таблица 2

Кинетические параметры окисления МО со смесями а-ТФ, Р-К и пептидов. С„.тф=сопз1=5х10"4 моль/л, Ср.к=соп31=3,8*10'5 моль/л, Спептида=сопз1=7,5х10"4 моль/л Смо=0,685 моль/л, Сдибн =3*10-3 моль/л, ы (ДДС-№)=5%, Т=ЗЗЗК

Состав смеси Тсмеси, МИН Эффект совместного действия, мин

Дт= Тсмеси" Тао, МИН Дт/тдо, *Ю0, %

Тмо = 24 мин; тМо+пеп™д = 20 мин

а-ТФ+МО 450 _ —

а-ТФ+вилон 106 -344 -76,5

а-ТФ+везуген 114 -336 -75,0

а-ТФ+эпиталон 100 -350 -78,0

а-ТФ+карталакс 75 -375 -83,0

а-ТФ+оваген 105 -345 -77,0

Р-каротин+МО 75 _ —

Р-каротин+вилон 22 -53 -71,0

Р-каротин+везуген 18 -57 -76,0

р-каротин+эпиталон 15 -60 -80,0

Р-каротин+карталакс 18 -57 -76,0

Р-каротин+оваген 20 -55 73,0

Показано, что между величиной эффекта антагонизма и концентрацией оли-гопептидов существует прямая корреляционная связь (табл. 3), с ростом количества а-ТФ эффект, напротив, пропорционально уменьшается.

Приведенные выше результаты необходимо учитывать при решении задач обеспечения длительного хранения лекарственных и косметических средств ли-пидной природы, включающих олигопептиды разного химического строения.

В работе изучили возможность повышения окислительной устойчивости субстрата за счет дополнительного введения в систему с АО синергиста окисления, например, АК, которая может регенерировать АО по ходу процесса окисления. Известно, что в случае а-ТФ АК как синергист восстанавливает токофероксильные радикалы до фенольной формы [N¡1« Е., 1987], чрезвычайно активно обрывающей цепи окисления в реакции с ИОг* [Кухтина Е.Н., Храпова Н.Г., Бурлакова Е.Б., 1983]. Показано, что в смеси с АК эффективность а-ТФ существенно увеличивается (в 1,8 раза). Добавки олигопептидов вне зависимости от их химического строения уменьшают периоды индукции смеси, (в 6-7 раз), подавляя, таким образом, действие синергической композиции АО и АК. Проигрыш в величине периодов индукции достигает более 80%.

При исследовании влияния различных концентраций АК на окисление МО с добавками постоянных концентраций а-ТФ и пептидов была показана линейная зависимость (рис.10), при этом прирост периодов индукции даже при высоких концентрациях АК, на порядок превосходящих концентрацию а-ТФ, не превышал 20%.

Таблица 3

Кинетические параметры окисления МО при совместном действии смеси а-ТФ и вилона. Са.тФ=Соп81=5,0х10"4 моль/л Смо=0,685 моль/л, Саибн=3*1 О"3 моль/л, ш (ДДС-Ыа)=5%, Т=ЗЗЗК

Свилона, *104 МОЛЬ/Л Тсмеси, МИН J Эффект совместного действия

Дт = Темеси ~ ТдО, МИН | Дх/хдО, х100, %

tMO+a-ТФ = 460 МИН

1,25 255 -205 -44,5

2,50 226 -234 -51,0

3,75 204 -256 -56,0

5,00 174 -286 -62,0

6,25 142 -318 -69,0

7,50 118 -342 -74,5

10,0 76 -384 -83,5

1.3 1,2 -

1,1 -1,0

0 2 4 6 8

Саскорбиновой кислоты,* Ю моль/л

Рис.10. Относительное изменение величины периодов индукции от концентрации аскорбиновой кислоты в смесях с постоянными концентрациями а-ТФ и пептида СЭпиталоиа=7,5'<10"4моль/л, Са.тФ=5,0х10"4моль/л. Условия окисления соответствуют как на рис.2.

Очевидно, что за счет введения синергиста - АК не удается полностью нивелировать инициирующее действие пептидов и достичь высоких периодов индукции, обеспечиваемых индивидуальным а-ТФ.

В работе была исследована эффективность действия веществ, способных разрушать ГП и Н2О2 без образования свободных радикалов. Также были изучены кинетические эффекты совместного АО действия а-ТФ с соединениями, взаимодействующими с ROOH (ГП) - первичными молекулярными продуктами окисления. Результаты указанных экспериментов приведены ниже.

Известно, что в организме действуют ряд ферментов, разрушающие перок-сиды и ГП без образования свободных радикалов. Каталазу, глутатионпероксида-зу, трансферазу, обеспечивающие гетеролитический путь разрушения гп с образованием молекулярных продуктов, относят к АО ферментам [Зенков Н.К., Ланкин В.З., Меньшикова Е.Б., 2001; Дубинина Е.Е., 2006].

В настоящей работе в модели in vitro при 40°С было исследовано действие двух ферментов: каталазы и пх как порознь, так и в композиции с природным АО -а-ТФ. Ферменты использовали в концентрациях (1,3-13,0)*10"3%, что соответствовало (0,5*1 0"9-0,5хЮ"6) моль/л и (3,0х10"1°-3,0х10'9) моль/л для каталазы и пх,

соответственно. Было показано, что каждый из ферментов подавляет инициирующее действие пептидов, существенно увеличивая значения периодов индукции, снижая скорость процесса (табл. 4). При сравнимой массовой доле скорость окисления в присутствии каталазы и ПХ может уменьшаться более чем в 3,0 и 4,0 раза, соответственно (табл. 4). При этом ПХ в 2,0 раза более эффективна, чем каталаза. Этот факт объясняется тем, что каталаза взаимодействует избирательно лишь с Н2О2, а ПХ способна разрушать пероксиды и ГП разной природы.

Таблица 4

Влияние каталазы и пероксидазы на процесс окисления МО Ш«,т»лмы=1.25х10"4%, Шпх=1,15х10"4%, СПептИЯа=10,0х10"4 моль/л, Смо=0,685 моль/л, Сдибн =Зх10-3 моль/л, ы(ДДС-№)=5%, Т=313К

Состав композиции ^/о2тах,х10' МОЛЬ/Л*СеК

без фермента с ферментом

МО 2,07

МО+каталаза 0,62

МО+везуген (эпиталон, оваген) 2,60

МО +везуген (эпиталон, оваген) +каталаза 1,50

МО+ПХ 0,50

МО+везуген (эпиталон, оваген)+ПХ 0,90

Показано, что АО действие ферментов проявляется при всех концентрациях в области (0,13-1,30)х10'2 % (рис. 11). ПХ неизменно более эффективна, чем каталаза. Эффект ингибирования каталазой и ПХ при сравнимой массовой доле ферментов с (1,3)*10'2 % достигает 500% и 600% соответственно.

Инициирующее действие пептидов нивелировалось уже при низких концентрациях ферментов: каталазы 5,2*10"8 моль/л и ПХ 2,9><10"10 моль/л.

400

350 ,

з: 300 -

5 250;

V-" 200 :

150 -

100 :

50 :

о ^—,—,—,—,—,—,—,—,—,—I

0,0 2,5 5,0 7,5 10,0 _ 12,5 . „4

Свеэугена, х 10 моль/л

Рис.11. Изменение величины периодов индукции в совместном действии смеси ферментов и везугена в зависимости от его концентрации в смеси: катала-за+везуген (1); ПХ+везуген (2). шМталазы=Шпх=сопз1=4,ЗЗх10'3%, (1,72x10'7) моль/л. Смо=0,685 моль/л, Саибн=Зх10"3 моль/л, ш(ДДС-№)=5%, Т=313К

2000

1500

х s

1000

500

0,0

10,0

20,0

30,0

40,0

Са-ТФ, *105 МОЛЬ/Л

Рис.12. Изменение величины периодов индукции от концентрации а-ТФ в смеси везуген+ПХ (1), везуген+каталаза (2), МО+а-ТФ (3), МО+а-ТФ+везуген (4). СввзУгена= сопз}=10,0х10"4моль/л. и)гаТал2зы=cons=4,33><10"3% (1,72x10'7) моль/л, wnx=const =1,ЗОхЮ'3% (2,95x10"8) моль/л. Условия окисления соответствуют как на рис.11.

Результаты настоящей работы показывают, что ферменты in vitro чрезвычайно эффективно стабилизируют процесс свободнорадикального окисления липи-дов, протекающий в системе, дополнительно включающей олигопептиды. Известно, что вещества - разрушители пероксидов являются высокоэффективными си-нергистами ингибиторов окисления [Карпухина Г.В., Эмануэль Н.М., 1983; Сторожок Н.М., 2006; Просенко А.Е., 2010]. В связи с этим в работе было исследовано воздействие на процесс окисления МО с пептидами смеси фенольного биоАО -а-ТФ+АО фермент (рис.12). Из рис.12 видно, что зависимость величины периодов индукции от концентрации а-ТФ носит линейный характер как в отсутствие (рис.12, кривая 3), так и в присутствии пептидов (рис.12, кривая 4), и, дополнительно, ферментов (рис.12, кривые 1, 2). Из рис. 12 следует, что совместное действие АО фе-нольной природы и фермента в десятки раз более эффективно, чем индивидуального а-ТФ. Очевидно, что ингибирующее действие композиции обусловлено эффектом синергизма между а-ТФ и АО ферментом. В качестве синергиста действие ПХ более значимо, чем каталазы.

Таким образом, исследованные нами синергические композиции превосходят эффективность индивидуальных АО. Установлено, что совместные кинетические эффекты ингибирования ферментов, контролирующих уровень пероксидов, и биоАО, существенно (в десятки раз) превосходит их аддитивное действие. Можно полагать, что в системе in vitro нами реконструирована природная система, которая и в условиях организма, регулирует интенсивность процессов свободнорадикального окисления, являясь важнейшим фактором обеспечения стабильности липидного бислоя биологических мембран и целостности клетки в целом.

В работе показана перспективность использования синергических смесей а-ТФ с ферментами АО типа действия, в частности, ПХ, для стабилизации in vitro окисления гетерогенных липидных систем, содержащих олигопептиды.

выводы

1. Установлено, что изучаемые олигопептиды: карнозин (p-Ala-L-His), глутатион (y-Glu-Cys-Gly), глицилглицилглицин (Gly-Gly-Gly), вилон (Lys-Glu), везуген (Lys-Glu-Asp), пинеалон (Glu-Asp-Arg), хонлутен (Glu-Asp-Gly), оваген (Glu-Asp-Leu), кристаген (Glu-Asp-Pro), карталакс (Ala-Glu-Asp), эпиталон (Ala-Glu-Asp-Gly) эффективно тормозят Ре+2-индуцированный процесс за счет образования комплексов с катионами-инициаторами.

2. Пептиды (I-VIII), за исключением глутатиона и карнозина ускоряют окисление липидов, инициированное свободными радикалами, образующимися при термическом разрушении азосоединений. В присутствии пептидов в 2,0-2,5 раза возрастает скорость поглощения кислорода и уровень ГП, в 7,0 раз ускоряется расходование антиоксиданта р-К.

3. Показано, что в процессе окисления пептиды не образуют нитроксильных радикалов, продукты их превращения не взаимодействуют с модельными маркерами нитроксильных радикалов (фенилбутилнитрон (PBN, а-фенил-N-TpeT-бутил-нитрон) и триметилпирролиноксид (ТМРО, 5,5-диметил-1-пирролин-1\1-оксида). Олигопептиды не проявляют антирадикальной активности, не взаимодействуют с пероксильными радикалами

4. Доказано, что олигопептиды разного химического строения проявляют эффект антагонизма при совместном действии с природными АО (а-ТФ и р-К), уменьшая их аддитивный эффект до 80%. Величина эффекта антагонизма прямо пропорциональна количеству пептидов и обратно пропорциональна концентрации а-ТФ. Синергист окисления - АК может повысить стабильность системы, но не более чем на 20% при высоких концентрациях.

5. Установлено, что in vitro ферменты (каталаза и ПХ в концентрации 4,3><10"3%) в системах с пептидами могут увеличивать эффективность ингибирования процесса окисления в 3,0 и 7,0 раз, соответственно.

6. Доказано, что эффекты синергизма в совместном действии а-ТФ и ферментов (каталазы или ПХ) определяют окислительную устойчивость системы в целом. Совместное действие композиции полностью подавляет инициирующее влияние олигопептидов. Величина эффекта синергизма прямо пропорциональна количеству а-ТФ и фермента в системе окисления, в 6-10 раз превышает аддитивное действие компонентов смеси.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Болдырева Ю.В., Сакулин Н.В., Галушко М.Г. Общие закономерности окисления лилидов в присутствие биологически активных пептидов / Материалы 42-й Всероссийской конференции «Актуальные проблемы теоретической, экспериментальной, клинической медицины и фармации». - Тюмень, 2008. - С. 135136.

2. Болдырева Ю.В., Цымбал И.Н., Сакулин Н.В., Галушко М.Г. Являются ли пептиды антиоксидантами? Взаимосвязь кинетики окисления липидов и строения пептидов / Материалы 42-й Всероссийской конференции «Актуальные проблемы теоретической, экспериментальной, клинической медицины и фармации». - Тюмень, 2008. - С. 130.

3. Болдырева Ю.В., Сторожок Н.М. О роли пептидов в перекисном окислении липидов / Материалы Всероссийской конференции и III школы по проблеме «Окисление, окислительный стресс и а нти оксид анты». - М., 2008. - С. 154156.

4. Болдырева Ю.В., Цымбал И.Н., Сторожок Н.М. Являются ли пептиды антиоксидантами? / Материалы 4-ой Крымской конференции «Окислительный стресс и свободнорадикальные патологии». - Судак, Крым, 2008. - С. 10-12.

5. Болдырева Ю.В., Сторожок Н.М., Цымбал И.Н., Арутюнян A.B. Особенности ингибированного окисления липидов в присутствии низкомолекулярных пептидов различного химического строения / Материалы международной конференции «Современные проблемы химической физики. - Ереван, 2008. - С. 2930.

6. Сторожок Н.М., Болдырева Ю.В. Влияние низкомолекулярных пептидов на процесс ингибированного антиоксидантами окисления модельных субстратов / Материалы XX симпозиума «Современная химическая физика». - Туапсе, 2000. - С. 97-98.

7. Болдырева Ю.В., Сторожок Н.М., Цымбал И.Н. Роль пептидных биорегуляторов в процессе окисления модельных субстратов // Медицинская наука и образование Урала. - Тюмень, 2009. - С. 60-63.

8. Болдырева Ю.В., Сторожок Н.М. Совместное антиоксидантное действие биологически активных пептидов с а-токоферолом и ß-каротином / Материалы конференции «Фармация и общественное здоровье». - Екатеринбург, 2009. -С. 16-19.

9. Болдырева Ю.В., Юсуфова С.З. Сочетанное антиоксидантное действие пептидов с пероксидазами и природными ингибиторами окисления / Материалы студенческой научно-практической конференции. - Краснодар, 2009. - С. 2021

10. Болдырева Ю.В., Сторожок Н.М. Перспективы стабилизации окисления систем с биологически активными пептидами / Материалы XVII международной конференции «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии». - Гурзуф, 2009. - С. 252-253.

11. Болдырева Ю.В., Сторожок Н.М. К вопросу о механизме действия пептидов в процессе окисления in vivo и in vitro / Материалы 43-й Всероссийской научной конференции «Актуальные проблемы теоретической, экспериментальной, клинической медицины и фармации». - Тюмень, 2009. - С. 161-162.

12. Болдырева Ю.В., Сторожок Н.М. Роль пептидов в процессе свободноради-кального окисления / Материалы 5-ой Крымской конференции «Окислительный стресс и свободнорадикальные патологии». - Судак, Крым, 2009. - С. 2425.

13. Болдырева Ю.В., Сторожок Н.М. Особенности влияния олигопептидов на процессы пероксидного окисления липидов / Материалы конгресса терапевтов «Урал-2009, Актуальные вопросы диагностики и лечения наиболее распространенных заболеваний внутренних органов». - Тюмень, 2009. - С. 31-32.

14. Болдырева Ю.В., Сторожок Н.М. Характер влияния олигопептидов на процессы пероксидного окисления липидов / Материалы XXVII Всероссийской школы-симпозиума молодых ученых по химической кинетике. - М., 2009. - С. 9-11.

15. Болдырева Ю.В., Сторожок Н.М. Участие олигопептидов в процессе перекис-ного окисления липидов / Материалы Всероссийской конференции «Химия под знаком "сигма" исследования, инновации, технологии». - Омск, 2010. - С. 2728.

16. Болдырева Ю.В., Фахретдинов В.В. К механизму действия олигопептидов в процессах окисления in vitro / Материалы 44-й Всероссийской научной конференции «Актуальные проблемы теоретической, экспериментальной, клинической медицины и фармации». - Тюмень, 2010. - С. 130.

17. Сторожок Н.М., Болдырева Ю.В., Галян С.Л., Сакулин Н.В. Антиоксидантные ферменты плюс биоантиоксиданты. Перспективы стабилизации окисления систем с биологически активными олигопептидами / Материалы VIII Международной конференции «Биоантиоксидант». - М., 2010. - С. 447-449.

* - входят в список ВАК, рекомендованный для публикации основных результатов диссертации

СОКРАЩЕНИЯ И УСЛОВНЫЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ

а-ТФ - а-токоферол

со. - р-каротин

АИБН - азобисизобутиронитрил

АК - аскорбиновая кислота

АО - антиоксидант, антиоксидантный

АОА - антиоксидантная активность

ДДС-№ - додецилсульфат натрия

МО - метиловый эфир олеиновой кислоты (метилолеат)

ПХ - пероксидаза хрена

РП - регуляторные пептиды

хл - хемилгаминесценция, хемилюминесцентный

ЭПР - электроно-парамагнитный резонанс

ДЛЯ ЗАМЕТОК

БОЛДЫРЕВА Юлия Викторовна

03.01.04 - биохимия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Подписано в печать 20.10.2010 Формат 60*84/16. Печ. л. 1,0. Печать ризограф. Тираж 100. Зак. №395

Типография ООО «Печатник», лицензия ПД № 17-0027 Тюмень, ул. Республики, 148 корп. Тел. (3452) 20-51-13, тел./факс (3452) 32-13-86

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Болдырева, Юлия Викторовна

Список сокращений Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Биологическое действие пептидов

1.2. Механизмы инициирования процессов свободнорадикального окисления липидов. Активные формы кислорода

1.3. Ферментативные антиоксидантные системы организма

1.4. Система низкомолекулярных ингибиторов окисления - природных антиоксидантов

1.5. Современные представления о механизме процесса свободнорадикального окисления in vitro

1.6. Современные представления об эффектах синергизма и антагонизма в совместном действии антиоксидантов

1.7. Современные представления о синергической активности аскорбиновой кислоты

Глава 2. Материалы и методы

Глава 3. Результаты собственных исследований

3.1. Исследование антиоксидантной активности индивидуальных олиго-пептидов

3.2. К механизму действия олигопептидов

3.3. Изучение совместного антиоксидантного действия а-ТФ, р-каротина и антиоксидантных ферментов с биологически активными олигопепти-дами

Обсуждение результатов Выводы

Введение Диссертация по биологии, на тему "Эффекты синергизма в совместном действии -токоферола и ферментативных антиоксидантов при окислении модельных гетерогенных липидных систем in vitro в присутствии биологически активных олигопептидов"

Актуальность проблемы. В последнее десятилетие отмечается повышенный интерес к изучению широкого крута индивидуальных олигопепти-дов, эффективных в качестве органоспецифических биорегуляторов; адапто-генов, нейропротекторов, соединений, проявляющих гормональную активность, выраженное антимикробное действие [16,95,104,158]. Считают, что регуляторные пептиды (РП) отвечают за первичное реагирование организма, запуск систем защиты в ответ на действие факторов внешней и внутренней среды [10,99,283]. Показано, что нарушение пептидной регуляции на стадии биосинтеза РП и переноса информационно значимых молекул между клетками ведет к снижению устойчивости организма, способствует развитию патологий и ускоренному старению организма [127,275]. Концепция пептидной биорегуляции получила в последние годы признание в качестве перспективного направления современной медицины [107,157,274].

Механизм действия эндогенных олигопептидов в настоящее время недостаточно изучен. Считают, что регуляторные олигопептиды изменяют функциональную активность генома, воздействуют на процессы транскрипции м-РНК, кодирующих синтез специфических клеточных белков и пептидов, регулирующих гомеостаз клетки [37,80]. Существует мнение об участии пептидов в регуляции апоптоза патологически измененных клеток [73,101,105,287].

Известна гипотеза об антиоксидантной активности (АОА) эндогенных пептидов, трактующая их эффекты в рамках теории свободнорадикального окисления [13,77]. Так, карнозин и эпиталон проявляли антирадикальную активность в реакции со стабильными радикалами 1,1-дифенил-2-пикрил-гидразина [82], но ряд других пептидов, напротив, ускоряли окисление. Установлена способность карнозина и анзерина тушить синглентный кислород [23,24]. Известна роль глутатиона в процессе окисления ненасыщенных ли-пидов [60]. Антиоксидантное (АО) действие ряда олигопептидов констатировано при изучении кинетики тушения хемилюминесценции, накопления продуктов в моделж Ре2+-индуци^ [87,124] или [84,147,152], при отсутствии в системе катионов металлов переменной валентности, выполняющих роль инициаторов, действие пептидов на процесс окисления не изучалось. Методом ЭПР показано, что при радиационном облучении, из пептидов и белков генеририруются свободные радикалы [118], которые в дальнейшем повреждают структуру ДНК [65]. Показано, что при введении мышам олигопептиды усиливают синтез АО ферментов (каталазы и суперок-сиддисмутазы) [148], что может рассматриваться также в качестве механизма ответа на фактор, повышающий интенсивность свободнорадикальных процессов.

Цель исследования изучить действие ряда индивидуальных биологически активных олигопептидов, моделирование кинетических эффектов инги-бирования композиций, дополнительно включающих низкомолекулярные ингибиторы природного происхождения (а-токоферол, |3-каротин) и ферментативные антиоксиданты (каталазу, пероксидазу хрена) в процессе инициированного окисления гетерогенных липидных систем in vitro.

Задачи исследования:

1. Изучить кинетику инициированного окисления (в присутствии Fe2+ или азосоединений) гетерогенной системы, включающей модельный субстрат (метилолеат, МО), олигопептиды разного химического строения (гли-цилглицилглицина (Gly-Gly-Gly), карнозина (P-Ala-L-His), глутатиона (y-Glu-Cys-Gly), вилона (Lys-Glu), везугена (Lys-Glu-Asp), пинеалона (Glu-Asp-Arg), хонлутена (Glu-Asp-Gly), овагена (Glu-Asp-Leu), кристагена (Glu-Asp-Pro), карталакса (Ala-Glu-Asp), эпиталона (Ala-Glu-Asp-Gly)) и ПАВ (додецил-сульфат натрия) (ДДС-Na).

4. Изучить особенности кинетики накопления гидропероксидов, расходования р-К в присутствии и в отсутствии пептидов в системе окисления.

5. Исследовать кинетику действия индивидуальных природных АО а-токоферола (а-ТФ) и Р-каротина ((3-К) в присутствии коротких пептидов и аскорбиновой кислоты (АК).

Научная новизна результатов исследования. В работе впервые в системе in vitro при различных способах инициирования исследованы АО свойства ряда индивидуальных олигопептидов: глицилглицилглицина (Gly-Gly-Gly), карнозина ф-Ala-L-His), глутатиона (y-Glu-Cys-Gly), вилона (Lys-Glu), везугена (Lys-Glu-Asp), пинеалона (Glu-Asp-Arg), хонлутена (Glu-Asp-Gly), овагена (Glu-Asp-Leu), кристагена (Glu-Asp-Pro), эпиталона (Ala-Glu-Asp-Gly), карталакса (Ala-Glu-Asp). sy I

Доказано, что большинство исследуемых веществ тормозят Fe -индуцированный процесс окисления и существенно ускоряют АИБН— инициированное окисление. Установлена возможность связывания индивидуальными олигопептидами солей железа в ферри-форме (Fe2+), что снижает скорость инициирования и скорость окисления липидов в целом.

Показано, что в присутствии пептидов значительно увеличивается скорость накопления гидропероксидов - первичных продуктов окисления липи-дов, возрастает скорость расходования АО, в частности, р-К.

Установлено, что пептиды разного химического строения проявляют эффект антагонизма в композициях с природными АО (а-ТФ и Р-К), уменьшая их ингибирующее действие в смеси до 80%.

Показано, что АО ферменты (каталаза и ПХ) позволяют преодолеть инициирующее действие пептидов и существенно повысить окислительную устойчивость системы. При этом пероксидаза хрена более чем в 2 раза эффективнее каталазы, ферменты обеспечивают увеличение периодов индукции в 3,0 и 7,0 раз, соответственно при сравнимых массовых долях 4,3><10"3% (1,720x10"7 моль/л каталазы и 0,975^10"9 моль/л ПХ). Показано, что ингибирующее действие ферментов прямо пропорционально их количеству в системе окисления.

Доказано, что бинарные композиции АО ферментов (каталазы, ПХ) и а-ТФ эффективно стабилизируют in vitro процесс свободнорадикального окисления липидных систем, дополнительно включающих пептиды. Между периодами торможения окисления и количеством а-ТФ и ферментов существует прямая корреляционная связь.

Впервые показано, что в процессе окисления пептиды не образуют нит-роксильных радикалов, продукты окисления пептидов не взаимодействуют с водорастворимыми модельными маркерами нитроксильных радикалов.

Научно-практическая значимость работы. Результаты работы необходимо учитывать в технологии производства нутрицевтиков, фармацевтических и косметических средств, дополнительно включающих олигопептиды, с целью обеспечения длительного сохранения биологической ценности и повышения окислительной устойчивости продукции. Предложены способы стабилизации окисления гетерогенных липидных систем, включающих оли-гопептиды, за счет дополнительного введения синергиста окисления (АК), АО ферментов (каталазы, ПХ) и смесей АО ферментов и а-ТФ.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Кинетика окисления модельных липидных систем, инициированых солью Мора (Fe ), либо за счет термического разложения азосоединений, в присутствии индивидуальных олигопептидов: глицилглицилглицина (Gly-Gly-Gly), карнозина (P-Ala-L-His), глутатиона (y-Glu-Cys-Gly), вилона (Lys-Glu), везугена (Lys-Glu-Asp), пинеалона (Glu-Asp-Arg), хонлутена (Glu-Asp-Gly), овагена (Glu-Asp-Leu), кристагена (Glu-Asp-Pro), карталакса (Ala-Glu-Asp), эпиталона (Ala-Glu-Asp-Gly).

2. Механизм действия олигопептидов при окислении липидов. Результаты изучения кинетики накопления гидропероксидов, расходования биоАО (р-К) в присутствии и в отсутствии пептидов в системе окисления. Исследование методом ЭПР и методом спиновых ловушек возможности образования нитроксильных радикалов в процессе окисления пептидов.

3. Кинетика совместного АО действия природных АО (а-ТФ и Р-К) в присутствии коротких пептидов. Изучение эффектов синергизма а-ТФ с АК в присутствии олигопептидов.

4. Кинетика окисления гетерогенных липидных систем, включающих олигопептиды и АО ферменты (каталазу и ПХ). "

5. Кинетика брутто-ингибруюхцего действия смесей а-ТФ и АО ферментов (каталазы, ПХ) при окислении липидных систем, содержащих олигопептиды.

Апробация работы: Материалы диссертационной работы докладывались на Всероссийской научной конференции с международным участием студентов и молодых ученых «Актуальные проблемы теоретической, экспериментальной, клинической медицины и фармации», Тюмень, 2008, 2009, 2010 гг.; Всероссийской конференции молодых ученых «Окисление, окислительный стресс и антиоксиданты», Москва, 2008 г.; Крымской конференции «Окислительный стресс и свободнорадикальные патологии», Судак, 2008, 2009 гг.; Международной конференции «Современные проблемы химической физики», Ереван, 2008г.; Студенческой научно-практической конференции «Фармация и общественное здоровье», Екатеринбург, 2009 г.; 75-й студенческой научно-практической конференции КрГМА, Краснодар, 2009г.; XVII международной конференции «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии». — Гурзуф, 2009 г.; IV Национальном конгрессе терапевтов Урала, Тюмень, 2009 г.; XXVII Всероссийской школе-симпозиуме молодых ученых по химической кинетике. - Москва, 2009 г.; конференции «Химия под знаком «сигма»: исследования, инновации, технологии». - Омск, 2010 г.; VIII Международной конференции «Биоанти-оксидант» - Москва, 2010 г.

Внедрение результатов исследования. Результаты исследования внедрены в элективном курсе для студентов 1 и 2 курса лечебного и педиатрического факультетов.

Публикации: Основной фактический материал и выводы диссертации опубликованы в 17 работах (1 журнальная статья и 16 тезисов докладов).

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 150 страницах компьютерного текста, состоит из: введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных экспериментов, обсуждения результатов, выводов, списка литературы и приложения. Список литературы включает 305 источников, из них 177 отечественных и 128 зарубежных. Работа иллюстрирована 31 рисунком и 15 таблицами.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Болдырева, Юлия Викторовна

выводы

1. Установлено, что изучаемые олигопептиды: карнозин ((3-Ala-L-His), глутатион (y-Glu-Cys-Gly), глицилглицилглицин (Gly-Gly-Gly), вилон (Lys: Glu), везуген (Lys-Glu-Asp), пинеалон (Glu-Asp-Arg), хонлутен (Glu-Asp-Gly), оваген (Glu-Asp-Leu), кристаген (Glu-Asp-Pro), карталакс (Ala-Glu-Asp), эпи-талон (Ala-Glu-Asp-Gly) эффективно тормозят Ре+2-индуцированный процесс за счет образования комплексов с катионами-инициаторами.

2. Пептиды (I-VIII), за исключением глутатиона и карнозина ускоряют окисление липидов, инициированное свободными радикалами, образующимися при термическом разрушении азосоёдинений. В присутствии пептидов в 2,0-2,5 раза возрастает скорость поглощения кислорода и уровень гидропе-роксидов, в 7,0 раз ускоряется расходование антиоксиданта Р-каротина.

3. Показано, что в процессе окисления пептиды не образуют нитро-ксильных радикалов, продукты их превращения не взаимодействуют с модельными маркерами нитроксильных радикалов (фенилбутилнитрон (PBN, а-фенил-КИрет-бутил-нитрон) и триметилпирролиноксид (ТМРО, 5,5-диметил-1-пирролин-М-оксида). Олигопептиды не проявляют антирадикальной активности, не взаимодействуют с пероксильными радикалами

4. Доказано, что олигопептиды разного химического строения проявляют эффект антагонизма при совместном действии с природными АО (а-токоферолом и Р-каротином), уменьшая их аддитивный эффект до 80%. Величина эффекта антагонизма прямо пропорциональна количеству пептидов и обратно пропорциональна концентрации а-токоферола. Синергист окисления - аскорбиновая кислота может повысить стабильности системы, но не более чем на 20% при высоких концентрациях.

5. Установлено, что in vitro ферменты (каталаза и пероксидаза хрена в концентрации 4,3x10' %) в системах с пептидами могут увеличивать эффективность ингибирования процесса окисления в 3,0 и 7,0 раз, соответственно.

6. Доказано, что эффекты синергизма в совместном действии а-ТФ и ферментов (каталазы или пероксидазы хрена) определяют окислительную устойчивость системы в целом. Совместное действие композиции полностью подавляет инициирующее влияние олигопептидов. Величина эффекта синергизма прямо пропорциональна количеству а-ТФ и фермента в системе окисления, в 6-10 раз превышает аддитивное действие компонентов смеси.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Болдырева, Юлия Викторовна, Тюмень

1. Абрамова Ж.И., Оксенгендлер Г.И. Человек и противоокислительные вещества. Л.: «Наука», 1985. — 232с.

2. Аллазов С.Р. Регуляторные пептиды в урологии. // Урология, 2001. -№5. С.47-54

3. Анисимов В.Н. Молекулярные и физиологические механизмы старения. СПБ.: «Наука», 2003. - 430с.

4. Анисимов В.Н. Средства профилактики преждевременного старения (геропротекторы) // Успехи геронтологии, 2000. №4. - С.75-90.

5. Анисимов В.Н., Мыльников C.B., Опарина Т.И., Хавинсон В.Х. Влияние мелатонина и эпиталамина на продолжительность жизни и перекис-ное окисление липидов у Drosophila melanogaster // Докл. РАН, 1997. Т.352. -№5. - С. 704-707.

6. Анисимов C.B., Хавинсон В.Х., Анисимов В.Н. Влияние мелатонина и тетрапептида на экспрессию генов в головном мозге мышей // Бюлл. экс-пер. биол. и мед, 2004. Т. 138. - №11. - С. 570-576.

7. Антоновский В.Л., Хурсан С. Л. Физическая химия органических пероксидов. М.: Академкнига, 2003. - С. 390.

8. Аристархова С.А., Бурлакова Е.Б., Кухтина E.H. К механизму различной биологической активности а- и ß-токоферолов // Вопр. питания, 1974. -№5. С.34-37.

9. Арутюнян A.B. Окислительная модификация белков и старение // В сб.: «Проблемы геронтологии и гериатрии». Сыктывкар, 2006. - С. 68.

10. Арутюнян A.B., Козина Л.С. Антиоксидантное действие коротких пептидов при старении и экстремальных воздействиях / Материалы «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии». Гурзуф, 2007. - С. 409-411.

11. Арутюнян A.B., Козина Л.С. Влияние геропротекторных пептидов на свободнорадикальные процессы / Материалы «Окислительный стресс и свободнорадикальные патологии». Судак, 2008. - С. 7-8.

12. Арутюнян A.B., Козина JI.C., Арутюнов В.А. Нейропротекторное действие пептидных биорегуляторов при гипоксии / Материалы «Нейрохимические механизмы формирования адаптивных и патологических состояний мозга». СПб.: «Лира», 2008. - С. 11-12.

13. Арутюнян A.B., Козина Л.С., Лесняк В.В. Окислительная модификация белков и старение / Материалы «Проблемы геронтологии и гериатрии». Сыктывкар, 2006. - С. 68.

14. Арутюнян A.B., Козина Л.С., Харитонова Т.В. Антиоксидантные свойства геропротекторных пептидов эпифиза / Материалы «Проблемы старения и долголетия». Киев, 2005. - Т. 14. - С. 71-72.

15. Ашмарин И.П. Регуляторные пептиды для медицины. М.: «Наука», 2007. - 173 с.

16. Балаболкин М.И., Клебанова Е.М., Креминская В.М. Дифференциальная диагностика и лечение эндокринных заболеваний. М.: «Медицина», 2009. - 700с.

17. Барабой В.А., Брехман И.И., Голоткин В.Г. и др. Перекисное окисление и стресс. — СПб: «Наука», 1992. 258с.

18. Барсель В.А, Корочкин И.М., Архипова Г.В. Коррекция некоторых биохимических нарушений липидного обмена у больных атеросклерозом с помощью антиоксиданта дибунола // Изв. АН СССР. Сер. биол, 1998. № 1. -С. 75-85.

19. Бертц Дж., Болтон Дж. Теория и практические приложения метода ЭПР. Перевод с англ. к.х.н., Г. Гольдфельда / Под ред. Л.А. Блюменфель-да. М., «Мир», 1975. - 548с.

20. Болдырев A.A. Карнозин биологическая роль и клиническое применение // Биохимия, 1992. — Т.57. - С. 1302-1310.

21. Болдырев A.A. Карнозин и защита тканей от окислительного стресса. М.: «Медицина», 1999. - 450с.

22. Болдырев A.A. Карнозин. Биологическое значение и возможности применения в медицине. — М.: «Изд-во МГУ», 2007. С. 320.

23. Болдырев A.A., Гнездицкий В.В., Максимова М.Ю. Карнозин: эндогенный физиологический корректор активности антиоксидантной системы организма // Успехи физиологических наук, 2007. Т.38. - №3. - С. 5771.

24. Бурлакова Е.Б. Биоантиоксиданты и синтетические ингибиторы радикальных реакций // Успехи химии, 1975. Т.44. - № 10. - С.874-886.

25. Бурлакова Е.Б., Крашаков С.А., Храпова Н.Г. Роль токоферолов в пероксидном окислении липидов биомембран // Биологические мембраны, 1998. — Т.15. — №2. С.137-167.

26. Бурлакова Е.Б., Алесенко A.B., Молочкина A.M. — Биоантиоксиданты в лучевом поражении и злокачественном росте. М.: «Наука», 1975. -214с.

27. Бурлакова Е.Б., Буробина С.А., Храпова Н.Г. Хемилюминесцент-ный метод изучения природных антиоксидантов в липидах // Биофизика, 1971.-Т. 16. —№1. — С. 39-43.

28. Бурлакова Е.Б., Губарева А.Е., Архипова Г.В. Модуляция пере-кисного окисления липидов биогенными аминами в модельных системах // Вопр. мед. химии, 1992. №2. - С. 17-20.

29. Бурлакова Е.Б., Крашаков С.А., Храпова Н.Г. Кинетические особенности токоферолов как антиоксидантов // Химическая физика, 1995. -Т. 14. -№10. — С.230-280.

30. Бурлакова Е.Б., Кухтина E.H., Ольховская И.П. Изучение антирадикальной активности аналогов и гомологов токоферола методом хемилю-минесценции // Биофизика, 1979. Т.24. - С.975-979.

31. Бурлакова Е.Б., Храпова Н.Г. Связь физико-химических характеристик ингибиторов радикальных процессов с их строением // В кн.: Теория и практика жидкофазного окисления. — М.: «Наука», 1974. — С. 244-248.

32. Вилков JI.B., Пентин Ю.А. Физические методы исследования в химии. Структурные методы и оптическая спектроскопия. — М.: «Академкнига», 2007. - 340с.

33. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы в биологических системах // Соровский образовательный журнал, 2000. Т.6. - №12. - С. 13-20.

34. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы и антиоксиданты // Вестник РАМН, 1998.-Т.7. — С. 43-51.

35. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. -М.: «Наука», 1972. 250с.

36. Войтон Е.В., Рыжак Г.А. Рациональное использование пептидных биорегуляторов в косметологии // Рациональное использование лекарств. -Пермь, 2004.-С.221.

37. Володарский Л.Б., Григорьев И.А., Диканов С.А. ИмидазолиноIвые нитроксильные радикалы. — Новосибирск, «Наука», 1988. — 216с.

38. Голиков А.П., Берестов A.A., Полумисков В.Б. Опыт применения антиоксиданта дибунола у больных острым инфарктом миокарда // Биоанти-оксидант, 1983. -Т.1. С. 97-99.

39. Гомазков O.A. Функциональная биохимия регуляторных пептидов. М.: «Наука», 1992. 160с.

40. Гуреева Н.В. Кинетика и механизм действия природных и синтетических антиоксидантов различного химического строения и перспективы усиления их эффективности в композиции с а-токоферолом: Автореф. дис. . канд. хим. наук. Тюмень, 2002. - 26с.

41. Даниличев В.Ф., Максимов И.Б. Травмы и заболевания глаз: применение ферментов и пептидных биорегуляторов. — Минск, 1994. 110с.

42. Дарюхина E.H. Кинетические эффекты совместного ингибирую-щего действия а-токоферола с природными соединениями изопреноидногостроения и фосфолипидами / Автореф. дис. . канд. хим. наук. Тюмень, 2004. - 25с.

43. Дарюхина E.H., Гуреева Н.В., Сторожок Н.М: Совместное действие тиразола-С и а-токоферола / Материалы «Биоантиоксидант». — М., 1998. -С. 35.

44. Дедов И.И., Мальченко Г.А., Фадеев В.В. Эндокринология. М.: «Медицина», 2009. - 456с.

45. Денисов Е.Т. Константы скорости гомолитических жидкофазных реакций. М.: «Наука», 1997. - 171с.

46. Денисов Е.Т. Области реализации различных механизмов инги-бированного фенолами окисления углеводородов // Химическая физика, 1983.-С. 229-238.

47. Денисов Е.Т. Элементарные реакции ингибиторов окисления // Успехи химии, 1973. Т.42. - №3. - С. 361-390.

48. Денисов Е.Т., Косарев В.Т. Расчет предэкспонентов некоторых элементарных реакций окисления // Журнал физическая химия, 1964. Т.38. -№12.-С. 2875-2881.

49. Денисов Е.Т., Майзус З.К. Цепные реакции окисления углеводородов в жидкой фазе — М.: «Наука», 1966. 375с.

50. Дубинина Е.Е. Продукты метаболизма кислорода в функциональной активности клеток (жизнь и смерть, созидание и разрешение). -СПб.: «Медицинская пресса», 2006. — 400с.

51. Душкин М.И., Зенков Н.К, Меныцикова Е.Б. Влияние ингибиторов цитохрома Р-450 на окислительный метаболизм липопротеинов низкой плотности макрофагами // Вопр. мед. химии, 1996. — Т.42. Вып. Г. - С.23-30.

52. Дьяконов М.М. Отечественные биорегуляторы цитамины входят в повседневную врачебную практику // Terra Medicina, 2000. №3. - С. 18-19.

53. Евсюкова Е.В., Федосеев Г.Б., Хавинсон В.Х. Эпиталамин и эпифамин препараты патогенетической терапии аспириновой бронхиальной астмы // Ученые записки СПбГМУ им. акад. И.П.Павлова, 2001. Т.8. -№1. - С. 86-91.

54. Ерин А.Н., Горбунов Н.В., Скрыпин В.И. Взаимодействие а-токоферола со свободными жирными кислотами. Механизм стабилизации микровязкости липидного бислоя // Биол. науки, 1987. №1. — С. 10-16.

55. Журавлёв А.И., Пантюшенко В.Т. Свободнорадикальная биология. М.: «Московская ветеринарная академия», 1989. - 60с.

56. Зайратьянц О.В., Морозов В.Г., Москвичева И.В. Выявление им-муномоделирующих полипептидов в клетках тимуса человека иммунофлюо-рисцентным методом // Бюлл. экспер. биол. и мед., 1987. Т. 103. - С. 327330.

57. Замятин A.A. Общие функциональные особенности эндогенных регуляторных олигопептидов // Физиол. журн., 1992. Т. 78. - № 9. - С. 3951.

58. Захарова H.A. Антирадикальные свойства природных фенолов и их синтетических аналогов // Автореф. дис. . кан. хим. наук. М., 1972. -25с.

59. Зенков Н.К., Ланкин В.З., Меныцикова Е.Б. Окислительный стресс: Биохимический и патофизиологический аспекты. М.: «Наука / Интерпериодика», 2001. - 343с.

60. Зенков Н.К., Меныцикова Е.Б. Окислительная модификация ли-попротеинов низкой плотности // Успехи соврем, биол, 1996. Т. 116. - Вып. 6. - С.729-748.

61. Зубарев В.Е. Метод спиновых ловушек. Применение в химии, биологии и медицине. М., «Наука», 1984. - 158с.

62. Капухин О.Н., Шляпинтох В.Я., Золотова Н.В. Хемилюминес-ценция в реакциях ингибированного окисления и активность ингибиторов // Изв. АН СССР. Сер. хим., 1963. №10. - С.1718-1793.

63. Капухина Г.В., Эмануэль Н.М. Классификация синергических смесей антиоксидантов и механизма синергизма // Докл. АН СССР, 1984. -Т.276.-№5.-С. 1163-1167.

64. Карп О.Э., Гудков C.B., Брусков В.И. Повреждения ДНК in vitro под воздействием долгоживущих радикалов белка и их нейтрализация природными биоантиоксидантами // ДАН, 2007. Т.413. - №2. - С. 237-264.

65. Ковалева C.B., Исаева И.В., Пихтарь A.B. Пептидные препараты // Вопр. биол. мед. и фармацев. химии, 2003. №3. — С. 5-12.

66. Козина JI.C. Антиоксидантное действие пептидных препаратов эпифиза и мелатонина // Вест. Санкт-Петербургской государственной медицинской академии им. И.И. Мечникова, 2007. Т.8. - №1 - С. 140-143.

67. Козина JT.C. Влияние биологически активных тетрапептидов на свободнорадикальные процессы // Бюлл. экспер. биол. и мед., 2007. Т. 143. -№6. - С. 690-692.

68. Козина JI.C. Исследование антигипоксических свойств коротких пептидов // Успехи геронтологии, 2008. Т.21. - № 1. - С. 61-67.

69. Козина JI.C., Арутюнян A.B. Влияние вилона и эпиталона на процессы свободнорадикального окисления при старении у мышей линии СВА / Материалы «Общество, государство и медицина для пожилых». М., 2006.-С. 53.

70. Козина JI.C., Арутюнян A.B. Возрастные изменения перекисного окисления белков эритроцитов и плазмы крови // Клин, геронтология, 2006. -Т.10. №9- С. 76.

71. Козина JI.C., Арутюнян A.B. Роль пептидов эпифиза в регуляции свободнорадикальных процессов при старении // Клин, геронтология, 2006. -Т.10. -№9. — С. 78.

72. Козина Л.С., Арутюнян A.B., Стволинский С.Л. Антиоксидантные и мембранопротекторные свойства коротких пептидов в экспериментах in vitro / Материалы конференции, посвященной памяти Э.С. Пушковой. -СПб., 2007.-С. 177.

73. Козина Л.С., Арутюнян A.B., Стволинский С.Л. Оценка биологической активности регуляторных пептидов в модельных экспериментах in vitro // Успехи геронтологии, 2008. Т.21. -№1. - С. 68-73.

74. Козина Л.С., Кочкина Е.Г., Наливаева H.H. Влияние пептидов вилон и эпиталон на уровень экспрессии неприлизина и инсулин-деградирующего фермента в клетках нейробластомы человека в норме и при гипоксии // Нейрохимия, 2008. Т.25. - №1-2. - С. 82-85.

75. Козина Л.С., Лесняк В.В. Возрастная динамика показателей свободно-радикальных процессов и антиоксидантной системы / Материалы «Актуальные проблемы геронтологии и гериатрии». СПб.: «МАЛО», 2006. - С. 288-289.

76. Козина Л.С., Лысенко A.B. Антигипоксические эффекты коротких пептидов / Материалы «Эколого-физиологические проблемы адаптации». -М., 2007.-С. 235-236.

77. Козина Л.С., Стволинский СЛ., Арутюнян A.B. Изучение прямого антиоксидантного действия коротких пептидов / Материалы «Белки и пептиды». Пущино, 2007. - С. 121-122.

78. Козина Л.С., Стволинский СЛ., Федорова Т.Н. Изучение антиоксидантных и мембранопротекторных свойств коротких пептидов в модельных экспериментах // Вопр. биол. мед. и фармацевт, химии, 2008. № 2. — С. 129-136.

79. Козина JI.C., Харитонова Т.В. Влияние интенсивности окислительных процессов в организме на продолжительность жизни / Материалы «Актуальные проблемы геронтологии и гериатрии». СПб, 2007. - С. 272278.

80. Комаров Ф.И. Применение пептидных биорегуляторов в клинической медицине / Материалы «Геронтологические аспекты пептидной регуляции функций организма». СПб., 1996. — С. 48.

81. Конь И .Я., Горгошидзе Л.Ш., Васильева О.Н. Витамин А и пере-кисное окисление липидов: влияние недостаточности ретинола // Биохимия, 1986. — Т.51. №1. - С. 70-76.

82. Кузник Б.И., Морозов В.Г., Хавинсон В.Х. Цитомедины и их роль в регуляции физиологических функций // Успехи совр. биологии, 1995. — Т. 115. -№3. С. 353-367.

83. Кузник Б.И., Морозов В.Г., Хавинсон В.Х. Цитомедины: 25-летний опыт экспериментальных и клинческих исследований. — СПб.: «Наука», 1998.-310с.

84. Кухтина E.H. Особенности действия природных антиокислителей в системах in vivo и in vitro и их роль в регуляции процессов перекисногоокисления липидов: Автореф. дис. . канд. хим. наук. — М.: «Медицина», 1982.-25с.

85. Кухтина E.H., Храпова Н.Г., Бурлакова Е.Б. Особенности антиокислительного действия токоферолов как природных антиоксидантов // Докл. АН СССР, 1983. Т.272. - №3. - С. 729-732.

86. Ланкин В.З., Вихерт A.M., Косых Б.А. Ферментативная детокси-кация супероксидного анион-радикала и липопероксидов в интиме и медии аорты при атеросклерозе // Бюлл. экспер. биол. и мед., 1982. — № 9. С. 4850.

87. Ланкин В.З., Тихазе А.К., Коновалова Г.Г. Концентрационная инверсия антиоксидантного и прооксидантного действия ß-каротина в тканях in vivo // Бюлл. экспер биол. и мед., 1999. Т. 128. -№29. - С. 314-316.

88. Липкин В.М., Сурина Е.А., Сторожева З.И. Нейропротекторное действие гексапептида HLDF-6 (TGENHR) / Вестник новых медицинских технологий. Тула, 2009. - T.XYI. - №1. - С.267-268.

89. Луконькин И.Н. Эффекты синергизма в совместном антиокси-дантном действии а-токоферола с производными пантоевой кислоты и L-карнитином: Автореф. дис . канд.хим.наук. Тюмень, 2000. - 24с.

90. Лысенко A.B., Арутюнян A.B., Козина Л.С. Пептидная регуляция адаптации организма к стрессорным воздействиям. СПб.: «ВМедА», 2005. -207с.

91. Лысенко A.B., Козина Л.С. Применение эпиталона для коррекции метаболических и функциональных нарушений при физической нагрузке у спортсменов / Материалы «Человек и лекарство». М., 2007. - С. 400.

92. Лысенко A.B., Финоченко Т.А., Шейхова Р.Г. Оценка безопасности использования нанопрепаратов пептидной природы // Вестник Российской Военно-медицинской академии, 2008. №3 (23). — Часть II. — С. 486

93. Меныцикова Е.Б., Зенков Н.К., Ланкин В.З. Окислительный стресс: Патологические состояния и заболевания — Новосибирск: «APTA», 2008.-284с.

94. Милютина Ю.П., Козина Л.С., Арутюнян A.B. Влияние пептидных препаратов эпифиза на пролиферативные процессы в органотипической культуре преоптической области гипоталамуса // Успехи геронтологии, 2007.- Т.20. №4. - С. 61-63.

95. Морозов В.Г., Хавинсон В.Х. Пептидные биорегуляторы (25-летний опыт экспериментального и клинического изучения). СПб.: «Наука», 1996. - 74с.

96. Морозов В.Г., Хавинсон В.Х. Достижения и перспективы в области биорегуляции и геронтологии / Материалы «Геронтологические аспекты пептидной регуляции функций организма». СПб., 1996. - С. 7-9.

97. Морозов В.Г., Хавинсон В.Х. Новый класс биологических регуляторов многоклеточных систем — цитомедины // Успехи соврем, биол., 2007.- Т.96, вып. 3(6). С. 339-352.

98. Морозов В.Г., Хавинсон В.Х. Пептидные биорегуляторы в профилактике и лечении возрастной патологии // Успехи геронтологии, 1997. -№1. С. 74-79.

99. Морозов В.Г., Хавинсон В.Х. Роль клеточных медиаторов (цито-мединов) в регуляции генетической активности // Докл. РАН, 1995. №4. -С. 581-587.

100. Морозов В.Г., Хавинсон В.Х., Малинин В.В. Пептидные тимо-миметики. СПБ., 2000. - 158с.

101. Нейфах Е.А., Ермачкова Е.В., Стромилова Л.И. Мобилизация и интенсивная утилизация бластомами витамина Е // Материалы «Биоантиок-сидант». Черноголовка, 1999. — С. 67-68.

102. Осипов А.Н., Азизова O.A., Владимиров Ю.А. Активные формы кислорода и их роль в организме // Успехи биол. химии. — М.: «Наука», 1990. -Т.31.- С. 181-209.

103. Пармон В.Н., Кокорин А.И., Жидомиров Г.М. Стабильные бира-дикалы. -М.: «Наука», 1980. 239с.

104. Пентин Ю.А., Вилков Л.В. Физические методы исследования в химии. -М., «Мир», 2003. 120с.

105. Перевозкина М.Г. Кинетика и механизм ингибирующего действия производных фенозана, салициловой кислоты и их синергических смесей с а-токоферолом и фосфолипидами: Автореф. дис. . канд. хим. наук. Тюмень, 2003. — 25с.

106. Петрусевич Ю.М. Антиокислительные свойства фенолов растительного и животного происхождения // Биоантиокислители. М.: «Наука», 1975.-С. 247-251.

107. Пирожков С.И., Сафарова Г.Л. Тенденции старения населения России и Украины: демографические аспекты // Успехи геронтологии, 2008. -Вып. 7.-С. 14-21.

108. Попов А., Янишлиева Н. Автоокисление и стабильност на липи-дите. София: «Болгарската академия на науките», 1976. - 253с.

109. Прайор У. Свободные радикалы в биологии. М.: «Мир», 1979. -Т.1.-С. 279-283.

110. Проссер Л., Браун Ф. Сравнительная физиология животных/Под ред. Г.Д. Смирнова. -М.: «Мир», 1967. 766с.

111. Разумовский С.Д., Заиков Г.Е. Озон и его реакции с органическими соединениями. — М.: «Наука», 1974. 323с.

112. Рогинский В.А. Фенольные антиоксиданты: реакционная способность и эффективность. М.: «Наука», 1988. - 247с.

113. Розанцев Э.Р., Шолле В.Д. Свободные радикалы. М.: «Мир», 1979.-245с.

114. Рубайло В Л., Маслов С. А. Жидкофазное окислении непредельных соединений. М.: «Химия», 1989. - 224с.

115. Рыжак Г.А., Коновалова С.С. Цитогены. СПб.: «Прайм-Еврознак», 2004. - 140с.

116. Сальников М.И., Барсель В.А., Архипова Г.В. Влияние антиокси-данта дибунола на состав и интенсивность перекисного окисления липидов крови больных ишемической болезнью сердца // Докл. РАН, 1994. Т. 278. -С. 745-751.

117. Свердлова О.В. Электронные спектры в органической химии. -Л.: «Химия», 2008. 330с.

118. Семенов H.H. О некоторых проблемах химической кинетики и реакционной способности. М.: «Наука», 1913. - 238с.

119. Синицкая Н.С., Хавинсон В.Х. Роль пептидов в свободноради-кальном окислении и старении организма // Успехи соврем, биологии, 2002. -Т. 122.-№6. С. 557-568.

120. Скулачев В.П. Феноптоз: запрограммированная смерть организма //Биохимия, 1999. Т. 64. -№12. -С. 1679-1688.

121. Смахтин М.Ю., Конопля А.И., Швейнов И.А. Применение пептида 01у-Н1з-Ьуз в условиях хронического токсического поражения печени // Вестник новых медицинских технологий, 2003. Т.10. - №1/2. - С. 37-38.

122. Сторожок Н.М. Межмолекулярные взаимодействия компонентов природных липидов в процессе окисления: Автореф. дис. . док. хим. наук. -М., 1996.-50с.

123. Сторожок Н.М., Друлле А .Я., Логин Я.Я. Антиоксидантная активность природных и синтетических хинонов // Вопр. мед. химии, 1995. — Т.41. -№1. С. 21-24.

124. Сторожок Н.М., Крысин А.П., Гуреева Н.В. Антиоксидантное действие новых аналогов пробукола и их композиций с а-токоферолом // Вопр. мед. химии, 2001. -Т.47. -№5. С. 517-525.

125. Сторожок Н.М., Кутузова И.В. Исследование проявлений антагонизма в совместном антиоксидантном действии (3-каротина и витамина А с а-токоферолом // Хим. фарм. журнал, 1995. №12. - С. 37-41.

126. Сторожок Н.М., Пирогов О.Н., Крашаков Н.Г. Кинетика и константы скорости реакции феноксильных радикалов а-токоферола и хромана С с ненасыщенными жирными кислотами и фосфолипидами // Кинетика и катализ, 1995.-Т.36.-№6.-С. 818-824.

127. Сторожок Н.М., Храпова Н.Г., Бурлакова Е.Б. Исследование межмолекулярных взаимодействий компонентов природных липидов в процессе окисления // Хим. кинетика, 1995. Т.Н. - №11. - С. 29-46.

128. Тарусов Б.Н. Основы биологического действия радиоактивных излучений. — М.: «Медгиз», 1954. 130с.

129. Терней А. Современная органическая химия: Пер. с анг. М.: «Мир», 1981.-312 с.

130. Уайт А., Хендлер Ф., Смит Э. Основы биохимии: Пер. с англ. — М.: «Мир», 1981.-535с.

131. Хавинсон В.Х. Пептидная регуляция старения // Вестн. Рос. акад. мед. наук, 2001. -№ 12. С. 16-20.

132. Хавинсон В.Х., Анисимов В.Н. Пептидные биорегуляторы и старение. СПб.: «Наука», 2003. - 233с.

133. Хавинсон В.Х., Баринов В.А., Арутюнян A.B. Свободноради-кальное окисление и старение. СПб.: «Наука», 2003. - 194с.

134. Хавинсон В.Х., Бондарев Н.Э., Бутюгов A.A. Пептид способствует преодолению лимита деления клеток человека // Бюлл. экспер. биол. и мед., 2004. Т.137. - №5. - С. 573-577.

135. Хавинсон В.Х., Королькова Т.Н., Рыжак Г.А. Перспективы применения пептидных биорегуляторов в геронтокосметологии // Вестник дерматологии и венерологии, 2005. — №4. С. 56-59.

136. Хавинсон В.Х., Лежава Т.А., Монаселидзе Дж. Г. Влияние пептида ливагена на активацию хроматина в лимфоцитах лиц старческого возраста // Бюлл. эксперим. биол. и мед., 2002. Т.134. - №10. - С. 451-455.

137. Хавинсон В.Х., Малинин B.B. Механизмы геропротекторного действия пептидов // Бюлл. эксперим. биол. и мед., 2002. — Т. 133. №3. - С. 4-10.

138. Хавинсон В.Х., Малинин В.В., Чалисова Н.И. Тканеспецифиче-ское действие пептидов в культуре тканей крыс разного возраста // Успехи геронтологии, 2002. Т.9. - С. 95-100.

139. Хавинсон В.Х., Морозов В.Г. Достижения и перспективы в профилактике возрастной патологии // Вестник Санкт-Петербургского отделения РАЕН, 1998. — Т.2. — С. 138-144.

140. Хавинсон В.Х., Морозов В.Г. Пептиды эпифиза и тимуса в регуляции старения. СПб., «Эксмо»,2001. - 210с.

141. Хавинсон В.Х., Мыльников C.B. Увеличение продолжительности жизни Drosophila melanogaster при воздействии пептида эпифиза // Докл. РАН, 2000. Т. 373. - № 5. - С. 707-709.

142. Хавинсон В.Х., Мыльников C.B., Опарина Т.И. и др. Влияние пептидов на генерацию активных форм кислорода в субклеточных фракциях Drosophila Melanogaster // Бюлл. экспер. биол. и мед., 2004. — Т. 132. №7. -С. 84-87.

143. Хавинсон В.Х., Соловьев А.Ю., Шатаева JI.K. Молекулярный механизм взаимодействия олигопептидов и двойной спирали ДНК // Бюлл. экспер. биол. и мед., 2006. Т. 141. - №4. - С. 443-447.

144. Хавинсон В.Х., Трофимова C.B. Применение пептидных биорегуляторов в офтальмологии // Вестник офтальмологии, 1999. Т. 115. - №5. -С. 42-44.

145. Храпова Н.Г. Кинетические особенности действия токоферолов как антиоксидантов // Биофизика, 1977. — Т.22. — №3. — С. 442-463.

146. Цымбал И.Н. Закономерности антиоксидантного действия природных и синтетических тритерпеноидов ряда лупана и b-амирина: Автореф. дис. канд. хим. наук. Тюмень, 2004. — 25с.

147. Черкашин В.А. Эффективность коррекции функций сердечнососудистой системы в пожилом и старческом возрасте пептидными биорегуляторами // Клин, геронтология, 2002. №5. - С. 32-33.

148. Чудинова В.В., Захарова Е.И., Алексеев С.М. Изучение взаимодействия а-токоферола с фосфолипидами, жирными кислотами и их оксиге-нированными производными методом Р31-ЯМР-спектроскопии // Биоорган, химия, 1993. Т. 19. - №2. - С. 243-249.

149. Чудинова В.В., Захарова Е.И., Алексеев С.М. Образование комплекса между а-токоферолом и гидропероксидами жирных кислот в гомогенных растворах // Докл. АН, 1992. Т.322. - №4. - С. 773-776.

150. Шамовский И.Л., Яровская И.Ю. Исследование структуры комплекса молекул токоферола и арахидоновой кислоты методом теоретического конформационного анализа // Биол. мембраны, 1990. Т.7. - №5. - С. 556560.

151. Шатц В.Д., Сахартова О.В. Высокоэффективная жидкостная хроматография. М., 1988. - 390с.

152. Шишкина Л.Н., Алексеенко A.B., Пальмина Н.П. Антиокислительная активность липидов и радиочувствительность // Радиобиология, 1976. Т.16. - №1. - С.39-43.

153. Эмануэль Н.М. Химическая и биологическая кинетика // Успехи химии, 1981. -Т.50. —№10. -С. 1721-1809.

154. Эмануэль Н.М., Галл Д. Окисление этилбензола (модельная реакция). -М.: «Наука», 1984. 376с.

155. Эмануэль Н.М., Денисов Е.Т., Майзус З.К. Цепные реакции окисления углеводородов в жидкой фазе. М.: «Наука», 1965. — 375с.

156. Эмануэль Н.М., Заиков Г.Е., Майзус З.К. Роль среды в радикально-цепных реакциях окисления органических соединений. М.: «Наука», 1973.-279с.

157. Эмануэль Н.М., Кузьмина М.Г. Экспериментальные методы химической кинетики. М.: «Изд-во МГУ», 1985. - 384с.

158. Янишлиева Н.Т., Скибида H.JL, Майзус З.К. О скорости и механизме зарождения цепей при окислении метиловых эфиров олеиновой, лино-левой, линоленовой кислот // Изв. отд. хим. наука Болгар. АН, 1971. Т.4. -№1. - С. 1-10.

159. Abdalla D.S.P., Campa A., Monteiro Н.Р. Low density lipoprotein oxidation by stimulated neutrophils and ferritin // Atherosclerosis, 1997. Vol. 97. -P. 149-159.

160. Al-Ramadi B.K., Meissler J.J., Huang D., Eisenstein Т.К. Immunosuppression induced by nitric oxide and its inhibition by interleukin-4 // Eur. J. Immunol, 1997. Vol. 22. - P.2249-2254.

161. Ambrosio G., Villari B., Chiariello M. Calcium antagonists and experimental myocardial ischemia/reperfiision injury // J. Cardiovasc. Pharmacol,1997. Vol. 20, Suppl. 7. - P. S26-S29.

162. Ambrosio G., Zweier J.L., Ouilio C. et al. Evidence that mitochondrial respiration is a source of potentially toxic oxygen free radicals in intact rabbit hearts subjected to ischemia and reflow // J. Biol. Chem., 1998. Vol. 268. - P. 18532-18541.

163. Ameisen J.C. The origin of programmed cell death // Science, 1996. -Vol.272.-P. 1278-1279.

164. Ames B.N., Shigenaga M.K., Hagen M.H. Oxidants, antioxidants and the degenerative diseases of aging // Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1998. Vol. 90. -№17.-P. 1915-1922.

165. Anisimov V.N., Khavinson V.Kh. Pineal peptide preparation Epitha-lamin increases the lifespan of fruit flies, mice and rats // Mech. Ageing Dev.,1998.-P. 123-132.

166. Araujo J.A., Romano E.L., Brito B.E. et al. Iron overload augments the development of atherosclerotic lesions in rabbits // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol., 2005.-Vol. 15.-P. 1172-1180.

167. Arutjunyan A.V. Geroprotective peptides of the pineal gland and anti-oxidative defence system // 4th Bologna International Meeting "Affective, behavioral and cognitive disorders in the elderly-ABCDE". — Bologna, Italy, 2006. -P.68.

168. Barclay L.R., Vingvist M.R. Membrane peroxidation: inhibiting effects of water-soluble antioxidants on phospholipids of different charce tipes // Free Radical Biologi et Medicine, 1994. Vol. 16. - №6. - P. 779-788.

169. Beauvais P., Michel L., Dubertret L. The nitric oxide donors, azide and hydroxylamine, inhibit the programmed cell death of cytokine-deprived human eosinophils // FEBS Lett., 2005. Vol. 361. - P.229-232.

170. Becker L.B., Van den Hoek T.L., Shao Z.H. et al. Generation of superoxide in cardiomyocytes during ischemia before reperfusion // Amer. J. Physiol., 2007. Vol. 277. - P. 2240-2246.

171. Blom M., Tool A.T.J., Roos D., Verhoeven A.J. Priming of human eosinophils by plateletactivating factor enhances the number of cells able to bind and'respond to opsonized particles // J. Immunol., 1997. — Vol.149. P. 36723677.

172. Blomqvist H., Wickerts C.J., Andreen M. et al. Enhanced pneumonia resolution by inhalation of nitric oxide // Acta Anaesthesiol. Scand., 1998. Vol. 37.-P. 110-114.

173. Briehl M.M., Cotgreave I.A, Powis G. Downregulation of the antioxidant defense during glucocorticoid-mediated apoptosis // Cell Death and Differentiation, 2005. Vol. 2. - P.41-46.

174. Broun S., Vonbruchhausen P. Vitamin E or probucol as donors for oxidation of human low-density lipoprotein by peroxidases/H202 // Pharmacology, 1994.-Vol.49.-P. 325-335.

175. Bulkley G.B. Evaluating oxidant or antioxidant status: an editorial comment// Shock, 1994. Vol.1. -P.313-314.

176. Burlacova E.B., Krashakov S.A., Khrapova N.G. The role of tocoferols in biomembrane lipid peroxidation // Membr. Cell Biol., 1998. Vol.12. — №2.-P. 173-211.

177. Burton G.W., Foster D.O., Perly B. et al. Biological antioxidants // Phill. Trans. Roy. Soc. London, 1985. - Vol.311. -№1152. - P. 567-578.

178. Burton G.W., Pade V.L., Gabe E.J. Antioxidant activity of vitamin E and related phenols. Importance of stereoelectronics factors // J. Am. Chem. Soc., 1980. Vol.102. -№26. - P. 7791-7792.

179. Bourre J.M., Bonneil M., Clement M. et al. Function of dietary polyunsaturated fatty acids in the nervous system // Prostaglandins, Leukotrienes and Essential Fatty Acids, 1998. Vol.48. -P.5-15.

180. Cadenas S., Barja G. Resveratrol, melatonin, vitamin E, and PBN protect against renal oxidative DNA damage induced by the kidney carcinogen KBr03 //Free Radical Biologi et Medicine, 2007. Vol. 26. -№11-12. - P. 1531-1537.

181. Cadenas E. Mechanisms of oxygen activation and reactive oxygen species detoxification // In: Oxidative Stess and Antioxidant Defenses in Biology (Ahmad S., ed). -New York etc. Chapmen et HaH., 2005. - P.l-61.

182. Chait A., Brazg R.L., Tribble D.L. Susceptibility of small, dense, low-density lipoproteins to oxidative modification in subjects with the atherogenic lipoprotein phenotype, pattern B // Amer. J. Med., 1998. Vol.94. - P.350-356.

183. Chakraborti S., Gurtner G.H., Michael J.R. Oxidant-mediated activation of phospholipase A2 in pulmonary endothelium // Amer. J. Physiol., 1989. -Vol. 257.-P. L430-L437.

184. Chalisova N.I. Modulatory effect of amino acids on the liver tissue culture of young and old rats // Abstr. «Healthy and active ageing for all Europeans». Adv. in Gerontology, 2007. - Vol. 20. - № 3 - P. 25.

185. Chanez P., Dent G., Yukawa T. Generation of oxygen free radicals from blood eosinophils from asthma patients after stimulation with PAP of phorbol esters // Eur. Respir. Dis., 1990. Vol.3. - P. 1002-1007.

186. Chan W. Cellular interactions of vitamin E, cytokines and growth factors // Nutr. Res., 1996. Vol.16. - P. 427-434.

187. Clement M.V., Stamenkovic I. Superoxide anion is a natural inhibitor of Fas-mediated cell death. // EMBO J., 1996. Vol.15. - P.216-225.

188. Corbett J.A., McDaniel M.L. Intraislet release of interleukin 1 inhibits p-cell function by inducing P-cell expression of inducible nitric oxide synthase // J. Exp. Med., 2005. Vol. 181. - P.559-568.

189. Crane F.L. Biochemical functions ofcoenzyme QI0 // J. AM. Coll. Nutr., 2001. Vol.20. - №6. -P.591-598.

190. Cunha F.Q., Moncada S., Liew F.Y. Interleukin (IL-10) inhibits the induction of nitric oxide synthase by interferon-y in murine macrophages // Bio-chem. andBiophys. Res. Commun., 1997. Vol.186. - P. 1155-1159.

191. Cutler R. Human longevity and aging: possible role of reactive oxygen species//Ann. N.Y. Acad.Sci., 1991.-Vol.621.-P. 1-28.

192. Cooney R.V., Harwood P.J., Franke A.A. et al. Products of y-tocopherol reaction with N02 and their formation in rat insulinoma cells // Free Radical Biol. Med., 2005. Vol.19. - P. 259-269.

193. Darley-Usmar V.M., Hogg N., Oleary V.J. The simultaneous generation of superoxide and nitric oxide can initiate lipid peroxidation in human low density lipoprotein // Free Radical Res. Common., 1997. Vol.17. - P. 9-20.

194. Daugherty A., Dunn J.L., Rateri D.L. Myeloperoxidase, a catalyst for lipoprotein oxidation, is expressed in human atherosclerotic lesions // J. Clin. Invest., 1994. - Vol.94. - P.437-444.

195. Dianzani C., Parrini M., Ferrara C; Fantozzi R. Effect of 4-hydroxynonenal on superoxide anion production from primed human neutrophils // Cell Biochem. and Fanction, 1996. Vol.14. - P. 193-200.

196. Dogm-Abbasoglu S., Taner-Toptani S., Ugurnal B. Lipid peroxidation and antioxidant enzymes in liver and brains of aged rats // Mech. Ageing Dev., 1997. Vol.98. - C.177-180.

197. Dougherty T.J., Marcus S.L. Photodynamic therapy // Eur. J. Cancer, 1997. Vol.28A . - P.1734-1742.

198. Femandes A.C., Pilipe P. M., Manso C.P. pH Dependence of lipid peroxidation and albumin oxidative modification: possible implications to the pH paradox // Redox Port., 2005. Vol. 1. - P. 139-144.

199. Finlay B.B., Hancock R.E. Can innate immunity be enhanced to treat microbial infections? // Nat. Rev. Microbiol., 2004. Vol.2. - P. 497-504.

200. Flomerfelt F.A., Briehl M.M., Dowd D.R. Elevated glutathione S-transferase gene expression is an early event during steroid-induced lymphocyte apoptosis//J. Cell. Physiol., 1998. Vol.154. - P. 573-581.

201. Floyd R.A. Role of oxygen free radicals in carcinogenesis and brain ischemia//Faseb J., 1990. Vol.4. -P.2587-2597.

202. Folcik V.A., Cathcart M.K. Assessment of 5-lipoxygenase involvement in human monocytemediated LDL oxidation // J. Lipid Res., 1998. Vol.34. -P. 69-79.

203. Frei B. Ascorbic acid protects lipids in human plasma and low-density lipoprotein against oxidative damage // Amer. J. Clin. Nutr., 1991. Vol.54. - P. S1113-S1118.

204. Fryer M.J. The mechanism of apoptosis, cell membrane lipid peroxidation and a novel in vivo function for antioxidant vitamin E (a-tocopherol) // Redox Report., 2005.-Vol.1.-P. 159-161.

205. Ginsburg I., Varani J. Interaction of viable group A streptococci and hydrogen peroxide killing of vascular endothelial cells // Free Radical Biol, and Med., 1998. Vol.14. - P. 495-500.

206. Goton N., Niki E. Rates of interactions of superoxide with vitamin E, vitamin C and related compounds as measured by chemiluminescense // Biochem. andBiophys. Acta, 1997. Vol.1115. - P. 201-207.

207. Graham A., Wood J.L., Oleary V.J. Human (THP-1) macrophages oxidize LDL by a thiol-dependent mechanism // Free Radical Res., 1994. Vol.21. -P. 295-308.

208. Graziewicz M., Wink D.A., Laval F. Nitric oxide inhibits DNA ligase activity: potential mechanisms for NO-mediated DNA damage // Carcinogenesis, 1996.-Vol.17.-P. 2501-2505.

209. Graziewicz M., Wink D.A., Laval P. Nitric oxide inhibits DNA ligase activity: potential mechanisms for NO-mediated DNA damage // Carcinogenesis, 1996. Vol.17. - P. 2501-2505.

210. Gregory C.D., Dive C., Henderson S. et al. Activation of Epstein-Barr virus latent genes protects human B cells from death by apoptosis // Nature, 1991. -Vol.349.-P. 612-614.

211. Grootveld M., Halliwell B. Measurement of allantoin and uric acid in human body fluids //Biochem. J., 1987.- Vol.243.-P. 803-808.

212. Gram C.M., Gallagher K.P., Kirsh M.M. Absence of detectable xanthine oxidase in human myocardium // J. Mol. And Cell. Cardiol., 1989. Vol.21. -P. 263-267.

213. Gupta B.L., Azam M., Baquer N.Z. Changes in erythrocyte glutathione peroxidase and glutathione reductase in alloxan diabetes // Biochem. Int., 1990.-Vol.21.-P. 725-731.

214. Hans-Anton, Peter Vajkoczy, Michael D. Do vitamin E supplements in diets for laboratory animals jeopardize findings in animal modeles of disease // Free Radical Biology and Medicine, 2007. Vol.26. - №3-4. - P. 472-481.

215. Harada R.N., Lirnm W., Piette L.H. Failure of mannitol to reduce myocardial infarct size in the baboon // Cardiovasc. Res., 1997. Vol.26. - P. 893896.

216. Harel S., Salan M.A., Kanner J. Iron release from metmyoglobin, methaemoglobin and cytochrome c by a system generating hydrogen peroxide // Free Radical Res. Commun., 1988.-Vol.5.-P. 11-19.

217. Harman D. Free-radical theory of aging: invreasing the functional life span // Ann. N.Y. Acad. Sci., 1994. Vol.717. - P. 50-78.

218. Hazell L.J., Vandenberg J.J.M., Stocker R. Oxidation of low-density lipoprotein by hypochlorite causes aggregation that is mediated by modification of lysine residues rather than lipid oxidation // Biochem. J., 1994. Vol.302. - P. 297-304.

219. Hodis H.N., Mack W.J., Labree L. et al. Serial coronary angiographic evidence that antioxidant vitamin intake reduces progression of coronary artery atherosclerosis // JAMA, 2005. Vol.273. - P. 1849-1854.

220. Jacob M., Plane P., Bruckdorfer K.R. Native and oxidized low-density lipoproteins have different inhibitory effects on endotelium-derived relaxing factor in the rabbit aorta // Brit. J. Pharmacol., 1990. Vol.100. - P. 21-26.

221. Jeroudi M.O., Triana F.J., Bharat S.P. Effect of superoxide dismutase and catalase, given separately, on myocardial "stunning" // Amer. J. Physiol., 1990. Vol.253. - P. H889-H901.

222. Jessup W., Rankin S.M., De Whalley C.V. a-Tocopherol consumption during low-density lipoprotein oxidation // Biochem. J., 1990. Vol.265. - P. 399405.

223. Jugdutt B.I. Role of nitrates after acute myocardial infarction // Amer. J. Cardiol., 1997. Vol.70. - P.82-87.

224. Kaneko M., Suzuki H., Masuda H. Effects of oxygen free radicals on Ca2+ binding to cardiac troponin // JaP. Circ. J., 1997. Vol.56, Suppl.5. - P. 1288-1290.

225. Kasahara Y., Iwai K, Yachie A. Involvement of reactive oxygen intermediates in spontaneous and CD95 (fas/APO-l)-mediated apoptosis of neutrophils//Blood, 1997. Vol.89.-P. 1748-1753.

226. Kashfi K., Rimarachin J.A., Weksler B.B. Differential induction of glutathione S-transferase in rat aorta versus liver //Biochem. Pharmacol., 1994. -Vol.47.-P. 1903-1907.

227. Kasiske B.L., Keane W.F. Role of lipid peroxidation in the inhibition of mononuclear cell proliferation by normal lipoproteins // J. Lipid Res., 1991. -Vol.32.-P. 775-781.

228. Katsura Y. Tsuru S., Noritake M. et al. Effects of macrophage colony-stimulating factor on the activities of the murine monocytes and peritoneal macrophages in vivo // Natural Immunity, 1997. Vol.l 1. - P. 167-176.

229. Katsura M., Forster L.A., Ferns O.A. Oxidative modification of low-density lipoprotein by human polymorphonuclear leucocytes to a form recognizedby the lipoproxein scavenger pathway // Biocim. et biophys. Acta, 1994. — Vol.1213.-P. 231-237.

230. Kaul N., Devaraj S., Jialal L. a-Tocopherol and atherosclerosis // Exp. Biol. Med., 2001. Vol.226. - №21. - P. 5-12.

231. Keaney J.F., Simon D.I., Freedman J.E. Vitamin E and vascular homeostasis: implications for atherosclerosis // FASEB J., 2007. Vol .13. - №29. — P. 965-975.

232. Kesaniemi Y.A. Mechanisms of low density lipoprotein lowering by hypolipidemic agents // Ann. Med., 1991. Vol.23. - P. 195-198.

233. Kharazmi A, Nielsen H., Rechitzer C. Interleukin-6 primes human neutrophils and monocyte oxidative burst response // Immunol. Lett., 1989. -Vol.21.-P. 177-184.

234. Khavinson V.Kh. Geroprotective peptides of the pineal gland and antioxidative protection system // J. Gerontology, 2005. P. 106.

235. Khavinson V.Kh. Peptides and ageing // Neuroendocrinol. Lett., 2002. -Vol.23.-144p.

236. Kilboum R.G., Belloni P. Endothelial cell production of nitrogen oxides in response to interferon in combination with tumor necrosis factor, inter-leukin-1, or endotoxin // J. Natl. Cancer Inst., 1990. Vol.82. - P. 772-776.

237. Kimura H., Minakami H., Kimura S. Release of superoxide radicals by mouse macrophages stimulated by oxidative modification of glycated low density lipoproteins // Atherosclerosis, 2005. Vol.118. - P. 1-8.

238. Kita T., Nagano Y., Yokode M. Probucol prevents the progression of atherosclerosis in Watanabe heritable hyperlipidemic rabbit an animal model for familial hypercholesterolemia // Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 1987. Vol.84. - P. 5928- 5931.

239. Kozina L.S. Antioxidant properties of geroprotective of the pineal gland // Arch. Gerontol. Geriatr. Suppl., 2007. P. 213-216.

240. Kozina L.S. Age dependent changes in lipid metabolism and thrombocytes intravascular aggregation in cardiovascular pathology development // Abstr. «Healthy and active ageing for all Europeans». — Adv. in Gerontology, 2007. Vol.20. - № 3. - P. 46.

241. Kelley J.L., Suenram C.A., Rozek M.M. Influence of hypercholesterolemia and cholesterol accumulation on rabbit carrageenan granuloma macrophage activation// Arner. J. Pathol., 1988. Vol.131. -P. 539-546.

242. Livrea M.A., Tesoriere L., Bongiorno A. Contribution of vitamin A to the oxidation resistance of human low density lipoproteins // Free Rad. Biol, et Med., 2005. Vol.18. - №3. - P.401-409.

243. Lovaas E. Free radical generation and coupled thiol oxidation by lac-toperoxidase/SCN-/H202 // Free Radical Biol, and Med., 1992. Vol.13. - P. 187195.

244. Mellors A., Tappel A.L. The inhibition of mitochonndrial peroxidation by ubiquinone and ubiquinol // J.Biol.Chem., 1966. Vol.241. - P.4353-4356.

245. Miura T., Muraoka S., Ogiso T. Inhibition of hydroxyl radical induced protein damages by trolox // Biochem. and mol. biol. inst., 1998. - Vol.31. — №1. - P. 124-134.

246. Nerin K., Suzanza Taha. Ulrich moser and angelo azzi effect of vitamine E and Probucol on dietary cholesterol-induced atherosclerosis in rabbits //Free Radical Biology et Medicine, 1998. Vol.24. - №22. - P. 226-233.

247. Niki E. Interaction of ascorbic acid and a-tocopherol // Ann. NY Acad. Sci., 1987.-Vol. 48.-№l.-P. 186-199.

248. Nuttall S.L., Martin U., Hutchin T. Increased oxidative stress in ageing and age-related diseases // Age and Ageing., 2006. — Vol.27. P. 34.

249. Onat D., Boscoboinik D., Azzi A. et al. Effect of a-tocoferol and sili-bin dihemisuccinate on the proliferation of human skin fibroblasts // Biotechnol. Appl. Biochem., 2007. Vol.29. - P. 213-215.

250. Pacifici R.E., Davies K.J.A. Protein, lipid and DNA repair system in oxidative stress: free radical theory of aging revisited // Gerontology, 1996. -Vol.37.-P.166-180.

251. Palozza P., Krinsky N.I. Antioxidant effects of carotenoids in vivo and in vitro — an overview // Methods in Enzymology, 1997. Vol.213. - P. 403 -420.

252. Papa S., Skulachev V.P. Reactive oxygen species, mitochondria, apoptosis and aging//Molec. Cell. Biochem., 2006. Vol.174. - P. 305-319.

253. Pincheira J., Navarrete M.H. Effect of vitamin E on chromosomal aberrations in lymphocytes from patients with Down's syndrome // Clin Genet., 2007.- Vol.55. -№3.- P. 192-197.

254. Ramadi B.K., Meissler J.J., Huang D. Immunosuppression induced by nitric oxide and its inhibition by interleukin-4 // Eur. J. Immunol., 1997. Vol.22.- P.2249-2254.

255. Saran M., Michel C., Bors W. Reaction of NO with 02. Implications for the action of endothelium-derived relaxing factor (EDRF) // Free Radical Res. Commun., 1990. Vol.10. -P.221-226.

256. Shamovski I.L., Varovskaya I.Y. Computer molecular simulation of tocoferol two phospholipid complexes // J. Chin Phys., 1991. Vol.88. - P. 26752680.

257. Shamovski I.L., Varovskaya I.Y., Khrapova N.G. Influence of fatti acid composition on the structure and stability of fatti acid comtlexes wich vitamin E//J. Molec. Struct., 1997.-Vol.253.-P. 149-159.

258. Terao J., Yamaushi R., Marakami H. Inhibitory effects of a-tocopherol and p-carotene on singlet oxygen-initiated photoxidation on methylli-noleate and soybean oil // J. Food Proc. Presery, 1980. Vol.4. - P. 79-93.

259. The effect of regulatory peptides on aging intensity in rats with different anxiety level /A.V. Lysenko, E.V. Morgul, R.G. Sheykhova // Abstr. «Healthy and active ageing for all Europeans». Adv. in Gerontology, 2007. -Vol.20. -№3.- P. 53.

260. Upadhyay R., Gupta S., Kanungo M.S. Trans-acting factors that interact with the proximal promoter sequences of ovalbumin gene are tissue-specific and age-related // Mol. Cell Biochem., 1999. Vol.201. - №1-2. - P. 65-72.

261. Walsh C. Where will new antibiotics come from? // Nat. Rev. Microbiol., 2003. Vol. 1. - P. 65-70.

262. Wang H.K. The therapeutic potential of flavonoids // Exp. Opin. Invest. Drugs, 2000. Vol.9. - P. 2103-2119.

263. Wang X., Takahashi H., Hatta I. An X-ray direction study of the effect of a-tocoferol on the structure and phase behaviour of bilayers of dimyristoylphos-phatidylethanolamine // Biochimica et Biophysica Acta, 2007. Vol.1418. - P. 335-343.

264. Xu X.C., Howard T., Mohanakumar T. Tissue-specific peptides influence human t-cell repertoire to porcine xenoantigens // Transplantation, 2001. -Vol.72.-№7.-P. 1205-1212.

265. Zhou Y.C., Zheng R.L. Phenolic compounds and analog as superoxide anion scavengers and antioxidants // Biochem. Pharmacol., — 1991. Vol.42. - P. 1177-1179.

Информация о работе

Болдырева, Юлия Викторовна
кандидата медицинских наук
Тюмень, 2010
ВАК 03.01.04

Диссертация

Эффекты синергизма в совместном действии -токоферола и ферментативных антиоксидантов при окислении модельных гетерогенных липидных систем in vitro в присутствии биологически активных олигопептидов - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы