Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Эффекты отсутствия и избытка витаминов А и Е на гемостаз порознь и в сочетании при воздействиях, вызывающих гиперкоагуляцию (экспериментальное исследование)
ВАК РФ 03.01.04, Биохимия
Автореферат диссертации по теме "Эффекты отсутствия и избытка витаминов А и Е на гемостаз порознь и в сочетании при воздействиях, вызывающих гиперкоагуляцию (экспериментальное исследование)"
На правах рукописи
ЩЕПЕТЕВА Ольга Константиновна
ЭФФЕКТЫ ОТСУТСТВИЯ И ИЗБЫТКА ВИТАМИНОВ А и Е НА ГЕМОСТАЗ ПОРОЗНЬ И В СОЧЕТАНИИ ПРИ ВОЗДЕЙСТВИЯХ, ВЫЗЫВАЮЩИХ ГИПЕРКОАГУЛЯЦИЮ
(экспериментальное исследование)
03.01.04 - биохимия
Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук
1 2 МАЙ 2011
Тюмень - 2011
4846169
Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Тюменская государственная медицинская академия Минздравсоцразвития России»
Научный руководитель:
доктор биологических наук Шаповалова Елена Михайловна
Официальные оппоненты:
доктор медицинских наук, профессор Галян Сергей Леонидович
ГОУ ВПО «Тюменская государственная медицинская академия Минздравсоцразвития России»
доктор медицинских наук, профессор Высокогорский Валерий Евгеньевич
ГОУ ВПО «Омская государственная медицинская академия Минздравсоцразвития России»
Ведущая организация:
ГОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия Минздравсоцразвития России»
Защита состоится ^Сц'&^Р 2011 года в часов на заседании
диссертационного совета Д 208.101.02 при ГОУ ВПО «Тюменская государственная медицинская академия Минздравсоцразвития России» по адресу: г. Тюмень, ул. Одесская, 54.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Тюменская государственная медицинская академия»
Автореферат разослан «^^ »
2011 г
Ученый секретарь диссертационного совета
Орлов С.А.
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Более полувека витамины используют не только в профилактике и лечении гиповитаминозов, но и в качестве соединений, контролирующих состояние обменных процессов, определяющих резистентность организма в широком смысле слова [Б.АЛавров 1957; О.А.Громова, Л.С.Намазова, 2003; П.Н. Шараев, 2004;
A.Opperhuizen е.а., 2005; C.Weiss е.а., 2005; A.K.Shirakawa, 2008; О. Erdeve, 2009]. Выявлена связь витаминов со свободно-радикальным окислением [В.П.Мищенко, 1981], поддерживающим проницаемость биомембран [Е.Б. Бур-лакова, 1997; Ю.А.Владимиров, 2005; A.Opperhuizen, 2008]). Их применяют в терапии патогенетически отличающихся болезненных состояний [М.И.Смирнов, 1974; А .А. Колесов, 1987; Ю.А.Овчинников, 1987;-И.П.Баранов и др., 2003;
B.СЛрочкин, 2004; Е.Л.Грякалова, 2005; Э.Н.Согрин, 2005; O.Lidegaard, 1995; A. Hoffer, 2010], в том числе и протекающих с нарушениями гемостаза.
Установлены позитивные эффекты некоторых витаминов при заболеваниях с явлениями оксидативного стресса. В этом плане особое внимание уделено вита-минам-антиоксидантам [В.П.Мищенко, 1981; СЛ.Галян, 1993; А.Ш.Бышевский и др., 2003; П.Я.Шаповалова и. др., 2008; М.Р. Iqbal е.а., 2005; A.Mahmood, е.а., 2005; Y.Nadir е.а., 2007]. Вместе с тем, при изучении связи вигамины-гемостаз редко учитывают исходный уровень обеспеченности витаминами организма подопытных, и лишь изредка используют пищевые рационы, сбалансированные по нутриентам, в том числе и по витаминам [Г.В.Андреенко и др., 1958, 1969; А.Ш.Бышевский и др., 2006, 2009; Е.М.Шаповалова и др., 2008; MJ.Cooper е.а., 2006; К. Groenbaek е.а., 2006]. Лишь в последние годы начали изучать влияние витаминов не только на отдельные про- и антикоагулянты, но и на группы маркеров, отражающих наклонность к кровоточивости или к тромбофилии. Изучение непрерывного внутрисосудистого свертывания крови (НВСК) при авитаминозах и избытке витаминов выявило связь между скоростью НВСК и интенсивностью липидпероксидации (ЛПО) [Е.А.Винокурова, 2003, 2006; А.Ш. Бышев-ский и др., 2005; В.П.Мищенко и др., 2005].
Утвердился взгляд, в согласии с которым НВСК, медленно протекающее в физиологических условиях, ускоряясь, может перерасти в диссеминированное внутрисосудистое свертывание крови [Д.М.Зубаиров и др., 1989; З.С.Баркаган, 1989; Д.М.Зубаиров, 2000; И.Н.Бокарев, 2000, 2002]. Показано также, что сдвиги НВСК, оцениваемые по уровню ряда маркеров, позволяют выявить наклонность к внутрисосудистому тромбообразованию - следствию усиленного тромбиноге-неза [З.С.Баркаган, А.П.Момот, 1998; И.Н.Бокарев, 2002; M.Lomtadze е.а., 2005; H.W. Park е.а., 2005; H.Bernhard е.а., 2009; O.Segers е.а., 2010].
Установлено и следующее: 1) в терапии заболеваний с нарушениями гемостаза чаще других используют витамины А, Е, В5, В12 и С, дефицит или избыток которых по степени влияния на толерантность к тромбину располагаются в следующем порядке: А > Е > Вп > С > В5 [Е.М.Шаповалова и др., 2008; А.Ш.Бышевский и др., 2009]; 2) влияние витаминов-антиоксидантов на способность организма реагировать на гипертромбинемию и их влияние на интенсивность НВСК, как величину, обратную толерантности к тромбину (ТкТР), освещена в единичных работах [А.ШБышевский и др., 2003, 2005; Е.М.Шаповалова
и др., 2008; A.Sh. Byshevsky е.а., 2008], а экспериментальные данные о НВСК и ТкТР при гипертромбинемии - лишь в двух публикациях [СЛ.Галян, 1993, В.Г. Соловьев, 1997)], хотя гипертромбинемия - непременная составляющая наклонности к тромбофилии [Д.М.Зубаиров, 2000]; 3) эффекты витаминов-антиоксидантов на ТкТР (по частоте гибели животных при введении тромбина) [А.Ш.Бышевский, 1978] и единственное исследование, в котором оценивалась толерантность к тромбину при введении сочетаний витаминов А, Е, В5, В12 и С [А.Ш.Бышевский и др., 2009], выявили, что витамины А и Е заметнее остальных влияют на это свойство организма.
Этими данными обоснована необходимость и перспективность продолжения исследований с тем, чтобы экспериментально оценить способность сочетания витаминов А и Е (их отсутствия и избытка) на липидпероксидацию и гемостаз и получить сведения, которые могли бы использоваться в лечении состояний, протекающих с гипертромбинемией, т.е. с риском тромбообразования.
Цель исследования
Изучить экспериментально закономерности изменения интегральных показателей состояния гемостаза (непрерывного внутрисосудистого свертывания и толерантности к тромбину), липидпероксидации и антиоксидантного потенциала тромбоцитов в отсутствии и при избытке витаминов А и Е порознь и в сочетаниях.
Задачи исследования
1. Количественно оценить изменения интенсивности липидпероксидации, антиоксидантного потенциала тромбоцитов, плазменного уровня маркеров непрерывного внутрисосудистого свертывания крови, фибринолиза и толерантности к тромбину в отсутствии и при избытке витамин А.
2. Количественно оценить все перечисленные в п. 1 величины в отсутствии и при избытке витамин Е.
3. Количественно оценить все те же величины при одновременном отсутствии и избытке витаминов А и Е.
4. Все те же показатели изучить в условиях провоцируемой гиперкоагуляции при длительном содержании подопытных животных на рационе без витамина А или Е и без обоих витаминов, а также при их избытке в рационе питания.
5. Изучить зависимость изменения тех же показателей от степени создаваемой гиперкоагуляции (дозированное введение тканевого тромбопластина - ф. III свертывания крови).
6. Провести статистический и графический анализ полученных данных для установления характера взаимосвязей между состоянием липидпероксидации, непрерывного внутрисосудистого свертывание крови, фибринолиза и толерантностью к тромбину при всех изученных экспериментальных ситуациях.
Дизайн экспериментов
Оценить состояние ЛПО, АОП, уровня маркеров НВСК, фибринолиза и толерантности к тромбину при исключении из рациона крыс ретинола или токоферола и обоих витаминов одновременно, а также при их избытке; установить зависимость оцениваемых величин от степени провоцируемой гиперкоагуляции в тех же условиях (подопытные животные - нелинейные крысы-самцы с массой тела - 148±10,3г) в серии экспериментов:_
1. Крысы содержатся на А-авитаминном рационе.__
2. Крысы содержатся на Е-авитаминном рационе._
3. На рационе, из которого исключены ретинол и токоферол._
4. На рационе с избытком ретинола и токоферола при изменении соотношений между дозами витаминов А и Е (в пользу ретинола и в пользу токоферола)._
5. Содержание крыс на А-авитаминном, Е-авитаминном и А+Е-авитаминном рационах, включающих тироксин._
6. Содержание крыс на включающем тироксин рационе с избытком ретинола, токоферола порознь или обоих витаминов одновременно._
7. Содержание на А-авитаминном или Е-авитаминном рационе, или на рационе с избытком витаминов и последующим введением тканевого тромбопластина (определять спустя 15 мин всех оцениваемые величины)._
Научная новизна. 1. Впервые установлено, что исключение ретинола или токоферола из рациона питания, сбалансированного по остальным микро- и мак-ронутриентам, вызывает нарастающее ускорение перекисного окисления липи-дов и снижение антиоксидантного потенциала тромбоцитов, рост их высвобождающей способности и плазменного уровня маркеров непрерывного внутрисо-судистого свертывания крови, угнетение фибринолиза и падение толерантности к тромбину. 2. Впервые показано, что при содержании животных на рационе, в котором отсутствуют и ретинол и токоферол, сдвиги липидпероксидации в тромбоцитах и сдвиги в гемостазе, наблюдающиеся при исключении из питания одного из этих витаминов, усиливаются в форме неполной суммации. 3. Установлено, что введение со сбалансированным рационом питания ретинола и токоферола (порознь и одновременно, в дозах, эквивалентных лечебным) сопровождается замедлением липидпероксидации и повышением антиоксидантного потенциала тромбоцитов, уменьшением их способности к высвобождению факторов Рз и а также снижением уровня маркеров непрерывного внутрисосуди-стого свертывания крови, активацией фибринолиза и ростом толерантности к тромбину. 4. Изменяя соотношения между дозами витаминов А и Е при одновременном введении, впервые установили, что вклад токоферола во влиянии на интенсивность перекисного окисления липидов в тромбоцитах, непрерывного внутрисосудистого свертывания крови и толерантность к тромбину выше, чем вклад ретинола. 5. Установлено, что отсутствие в питании ретинола и токоферола, особенно обоих одновременно, усиливает влияние на непрерывное внутрисо-судистое свертывание крови и на толерантность к тромбину воздействий, сопровождающихся гиперкоагулемией, вызываемой ускоренным тромбиногенезом, и показано, что избыток этих витаминов в рационе, повышает способность организма адекватно реагировать на гиперкоагулемию. 6. Подтверждено в неисполь-
зовавшихся ранее экспериментальных ситуациях, с помощью графического и математического анализа всех полученных данных, что сдвиги липидпероксида-ции и высвобождающей способности тромбоцитов предшествуют изменениям в гемостазе, и, следовательно, эффекты токоферола и ретинола на гемостаз реализуются через их влияние на перекисное окисление липидов в тромбоцитах.
ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНЕСЕННЫЕ НА ЗАЩИТУ:
1. Отсутствие в рационе животных витамина А или Е ведет к ускорению ли-пидпероксидации и снижению антиоксидантного потенциала тромбоцитов, к их активации, проявляющейся усиленным высвобождением фф. Р3 и Р4, что ускоряет непрерывное внутрисосудистое свертывание крови, снижает ф.ХПа-зависимый фибринолиз и способность организма адекватно реагировать на ги-пертромбинемию. 2. Избыточное содержание в рационе витамина А или Е в количествах, адекватных лечебным дозам, вызывает дозазависимые сдвиги в противоположном направлении - торможение липидпероксидации, рост антиоксидантного потенциала и снижение выброса фф. Р3 и Р4, сопровождающиеся замедлением внутрисосудистого свертывания крови, активацией фибринолиза и повышением толерантности к тромбину. 3. Эффекты отсутствия или избытка в рационе витамина А или Е на тромбоциты, на интенсивность непрерывного внутрисосудистого свертывания крови и фибринолиз суммируются не полностью, что свидетельствует о реализации эффектов через изменение интенсивности перекисного окисления липидов. 4. При изменении соотношения в рационе между избытком ретинола и токоферола в комбинации их эффекты на липидпе-роксидацию и гемостаз выше, если в рационе доля токоферола преобладает над долей ретинола, и это можно объяснить свойством токоферола замедлять окислительные превращения ретинола. 5. В отсутствии ретинола и токоферола в рационе воздействия, ускоряющие тромбиногенез и провоцирующие гиперкоагуляцию, вызывают более выраженную наклонность к тромбофилии, чем при полноценном питании, а избыток витаминов в питании ослабляет этот эффект.
Практическая ценность работы
В процессе исследований в соавторстве с сотрудниками кафедр биологической химии и гигиены с основами экологии разработаны и внедрены для использования в лечебных учреждениях г. Тюмень (Многопрофильный медицинский центр филиала ОАО «Запсибгазпром», ЗАО медицинский центр «Малыш», ГЛПУ ТО «Областная больница №11» (РП Голышманово) методические рекомендации «Влияние дефицита и избытка токоферола на интенсивность внутрисосудистого свертывания крови и толерантность к тромбину» (оформлены акты). Результаты исследований опубликованы в 11 печатных работах, используются в обучении студентов и клинических ординаторов (при чтении курсов лекций «Биологическая химия», «Гигиена с основами экологии» и «Акушерство и гинекология»).
Апробация и публикации
Основные положения диссертации доложены на Российской конференции объединения биохимиков Урала, Поволжья и Западной Сибири, Южно-
Уральского научного центра РАМН, посвященной 80-летию со дня рождения Р.И. Лифшица и приуроченной к 65-летию ЧелГМА «Актуальные проблемы теоретической и прикладной биохимии» (Челябинск, 2009), на заседании Тюменского регионального отделения РАЕ (2009, 2010), на совместном заседании кафедр биохимии, физиологии и общей гигиены с курсом экологии ТюмГМА (2010). По материалам диссертации имеется 11 публикаций: 6 из них - в журналах, рекомендованных ВАК для публикаций диссертационных материалов, 3 - в материалах Российских конференций с международным участием и 2 главы в монографии.
Объем н структура работы. Диссертация изложена на 120 стр. машинописи, включает «Введение», «Обзор литературы», разделы «Материалы и методы исследований», «Результаты исследований» «Обсуждение результатов и заключение», «Выводы» и список литературы (248, из них 105 зарубежных).
МЕТОДЫ И МАТЕРИАЛЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Опыты выполнены на нелинейных белых крысах-самцах (354 особи, масса тела 148±10,3 г) - животных с легко обнажаемой яремной веной, из которой в шприц со стабилизатором можно за 0,5 мин взять 35-40 мл/кг крови, не нарушая требований гемостазиологии [З.С.Баркаган, 1998]. Для этих животных разработан институтом питания АМН СССР пищевой рацион, содержащий углеводы, белок, липиды, витамины, витаминоподобные вещества и минералы в соответствии с суточной потребностью [О.Я.Курцинь, 1952; Б.А.Лавров, Е.Л.Терентьева, 1963], Рацион содержит маисовый крахмал, казеин, растительное масло, набор витаминов, солевую смесь и дополнительно [Б.А.Лавров, ЕЛ.Терентьева, 1963] цианокобаламин, фолиевую кислоту, инозит и викасол. Установлено, что этот рацион превосходит стандарты Дональдсона, установленные для смешанных рационов [А.Ш.Бышевский, 1978; Е.М.Шаповалова, 2008; P.W.Hawk, 1923; P/W. Hawk],
Витамины и витаминоиды вносили так, чтобы в суточной порции рациона (100 г/кг массы тела) их количество равнялось суточной потребности крыс [О.Я. Курцинь, 1952; И.В.Зверева и др., 2008; P.W.Hawk, B.L.Ozer, 1954].
Определяли в плазме крови уровень маркеров НВСК, отражающих его интенсивность [З.С.Баркаган, 1998; И.Н.Бокарев, 2002; Р.Г.Алборов, 2006; I.Haszon е.а., 2003; М. Levi и др., 2004]: 1. Продукты деградации фибрина (ПДФ) [А.Ш.Бышевский и др., 1991] - маркеры НВСК и активации фибринолиза [Т.А. Рудницкая, 2003; H.Wada е.а., 2003], 2. Растворимые комплексы мономерного фибрина (РКМФ) - их уровень увеличен при росте коагулоактивности крови [В.Ю.Широков, 2009] - определяли по описанию [А.П.Момот и др., 1999]; 3. Уровень D-димеров - маркеры фибринообразования и компенсаторного фибринолиза [Е.Г.Соболева и др. 2003; Н.М.Воробьева и др., 2009; de Moerloose е.а.., 2003] - с помощью набора «D-dimer test", Roche), выражая результат в мкг/мл эквивалентов фибриногена; 4. Уровень ф. Р3 в плазме - по разнице между АВР нормальной и бестромбоцитной плазмы, и активность ф. Р4 [В.П.Балуда и др., 1980] (оба фактора - косвенные маркеры ВТФ [А.С.Шитикова, 2000]); 5. Концентрацию в плазме тромбиносаждаемого фибриногена (снижение при гипер-
коагуляции - признак активации НВСК [H.Wada е.а., 2003]) - по описанию [А.Ш. Бышевский, В. Мохнатое, 1969]. б.Ф.ХПа-зависимый фибринолиз определяли, как описано [З.С.Баркаган, А.П.Момот, 1998]. 7. АВР и АЧТВ - по Г.Н. Детин-киной и др. [1984].
Толерантность к тромбину определяли по описанию к патенту [А.Ш. Бышевский и др., 2003], расценивая показатель как индикатор суммарного состояния систем, обеспечивающих ответ организма на гипертромбинемию. Метод апробирован в ряде экспериментальных и клинических ситуаций [А.И.Бродер, 2004; Р.Г.Алборов и др., 2005, 2009; Н.Н.Зороастрова, 2006; Е.А.Матейкович, 2006; С.В.Миневцев, 2006; Э.В.Багумян и др., 2007; А.В.Шидин, 2007; И.В.Зверева, 2008; Е.В.Забара, 2009; Е.М.Шаповалова, 2010]. Расчёт проводили по формуле, включающей плазменную концентрацию фибриногена (в %) у интактных крыс (исходная концентрация), и у крыс через 30 мин после внутривенной инъекции тромбина: D = {1- [(Ск - Со): Ск]} х 100, где D - остаточная концентрация осаждаемого тромбином фибриногена в плазме; Ск - его концентрация в плазме крыс, которым тромбин не вводили и воздействиям не подвергали (исходный уровень), Со (остаточная концентрация) - концентрация у крыс, которым ввели тромбин на фоне изучающегося воздействия или без него.
Значение Со у крыс, которым тромбин ввели без предварительных воздействий, принимается за толерантность к тромбину, равную 100%, затем устанавливается степень изменения толерантности (также в %) при изучаемом воздействии: Х% = (Do/Dk)' 100, где X - толерантность к тромбину, %), Do - остаточная концентрация фибриногена (в %) у группы, подвергавшейся изучаемому воздействию, Dk - его остаточная концентрация (в %) у крыс, не подвергавшихся этому воздействию (контроль). Полученные результаты специфичны, так как фибриноген - это основной субстрат тромбина в свертывании крови [Б.А.Кудряшов, 1975; Д.М.Зубаиров, 2000; L.M.Maurer е.а., 2010; N.Papageorgiou е.а., 2010], и ещё потому, что степень снижения фибриногенемии при введении тромбина зависит от всех систем, обеспечивающих выживание при его экзогенном избытке [Д.М.Зубаиров, 2000; M.H.Davidson е.а., 2009; M.Terzic-Avdagic, 2009].
Интенсивность липидпероксидации (ЛПО) в тромбоцитах и их антиокси-дантный потенциал (АОП) оценивали по уровню диеновых конъюгат (ДК) и продуктов реагирующих с тиобарбитуровой кислотой (ТБК), по длительности периода индукции (ПИ), и скорости индуцированного окисления (СО). Тромбоциты выделяли и отмывали, как принято [А.Б.Самаль и др., 1990]. Липиды из них экстрагировали смесью гептан-изопропиловый спирт (1:1). Содержание ДК оценивали по оптической плотности (А. = 232 нм) гептановой фазы, содержание ТБК - флуорометрически (флуориметр «Биан 130») [В.Н.Ушкалова, 1987]. Кинетические величины прямого окисления липидов кислородом (инициатор - ди-нитрилазобисизомаслянная кислота) определяли в экстрактах. ПИ выражали временем поглощения пробой 25 мм3 02, а СО - углом наклона линейного участка кинетической кривой. Схемы опытов: характеристика подопытных групп, длительность опытов, время отбора проб и число п приводятся в таблицах.
Анализировали данные с помощью медико-биологической программы Biostat 4.03 [С.А.Гланц, 1998], использовали вариационную статистику для малых рядов наблюдений, вычисляли среднюю арифметическую (М), среднюю ошибку
средней арифметической (m) и среднеквадратическое отклонение (а), достоверность отличий (t) и степень вероятности (р).
При анализе интенсивных показателей использовали альтернативное варьирование, рассчитывая те же показатели. Взаимосвязи переменных анализировали методом ранговой корреляции Спирмена. Различия считали достоверными при степени вероятности < 0.05. Графический анализ данных проводили в системе Microsoft Graf (приложение MS Word 2000), корректность аппроксимации, оценивали по величине коэффициентов аппроксимации (R2).
Для оценки типа кооперации эффектов двух витаминов, вводимых одновременно, результаты вносили в уравнение М.Диксона-Э.Уэбба [1966], которое может отличаться знаком (=, < или >), соединяющим его левую и правую части: I. ¡112= (»1 + ¡2) " (¡1 * ¡2); И- ¡1>2 < (¡1 + ¡2) " (1, * ¡2); HI. iW> (l, + ¡2) - (¡1 * ¡2),
где ii - парциальный эффект ретинола, i2 - парциальный эффект токоферола, ¡12 ~ эффект одновременного введения двух факторов (i - это частное от деления показателя, отражающего эффект в виде интенсивного числа в опыте, на такой же показатель в контроле, вычтенный из единицы). Результат, соответствующий уравнению I, - признак суммации, II - антагонизма и III - синергизма.
В исследованиях использованы: 1. Тромбин и фибриноген бычий («Технология-стандарт», Барнаул), 2. Тромбопластин (кадаверный лиофильно высушенный (той же фирмы), 3. Каолин (легкая фракция той же фирмы), 4. Набор «D-dimer test" («Roche»), 5. Изопропанол - ч. (дополнительная очистка - перегонка), 6. Хлорбензол - ч. (то же), 7. Бутанол - х. ч., 8. Кальция хлорид х.ч., 9. Буфер Михаэлиса «Технология-стандарт», 10. Ретинола ацетат ампульный (Sigma), 11. Токоферола ацетат (Slovakofarma J.S.C.), 12. Ь-тироксин-Na («Berlin-Chemi»), 13. Казеин пищевой коммерческий, 14. Крахмал маисовый, 15. Масло подсолнечное рафинированное, 16. Солевая смесь Осборна-Менделя (реагенты категории х.ч.)
РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
Сдвиги ЛПО и АОП тромбоцитов, НВСК, фибринолиза и ТкТР при отсутствии и избытке в рационе ретинола, токоферола и обоих витаминов.
Опыты длились 8 недель (чтобы развился выраженный авитаминоз) [А.О.Натансон, 1961; М.И.Смирнов, 1974; А.Ш.Бышевский и др., 2009]. По данным табл. 1, у крыс, не получавших ретинол, прогрессивно ускорялся ЛПО (рост уровня ДК и ТБК), а АОП падал (ПИ уменьшился, возросла СО). Такие же сдвиги возникли и у крыс, не получавших токоферола (рост уровня ДК и ТБК, укорочение ПИ, рост СО). Заметной разницы между эффектами обоих рационов не выявлено.
Уровень в плазме фф. Р3 и Р4 рос при А-авитаминозе, фибриногенемия снизилась лишь через 8 недель. Прогрессивно рос и уровень маркеров НВСК (ПДФ, РКМФ и D-димеров). Активность фибринолиза достоверно упала к концу опытов, ТкТР снизилась за 4 недели, уменьшаясь и позднее. Изменились все показатели и у крыс, неполучавших токоферола, не отличаясь существенно по направлению и степени. При отсутствии обоих витаминов все эффекты значительнее, чем в отсутствии одного из них.
Таблица I.
ЛПО, АОП и показатели состояния гемостаза у крыс, рацион которых не содержал ретннола или токоферола и обоих витаминов одновременно
Показатели Интактный контроль Рацион без ретинола Рацион без токоферола Рацион без ретинола и токоферола
ДК, А/мгЛП 0.053±0.004 0.057±0.004# 0.066+0.002*# 0.074+0.002*# 0.083Ю.002*# 0.05810.004« 0.071Ю.004*# 0.079Ю.003*# 0.085.005*л # 0.06310.002* 0.081 ±0.006* 0.09710.001* 0.1121004*
ТБК, ед./мг ЛП 0.78±0,05 0.80+0.04 0.94Ю.06*# 0.95Ю.02*# .18±0.004* 0М±0Ш 0.97Ю.05*# 0.99Ю.05*# 0.8810.03* 0.9910.02* 1.1610.08* 1.3210.11*
ПИ, мин/мл 46.0+1.3 46.411.7# 44.0±1.4# 35.211.2*# 28.311,0*# 45.411.3# 40.011.3*# 32.111.4*# 25.211.4*л 40.011.0* 32.011.0* 26.411.1* 22.111.6*
со, мм3/мл/мин 0.77±0.04 0.73±0.06 0.85+0.05* 0.96±0.03*# 0.97±0.004*# 0.7610.06# 0.Ш0.04Ч 0.9910.05*# 2.20Ю.04*Л# 0.84Ю.04 0.9210.04* 1.2710.07* 2.3210.09*
Ф. Рз,% 87.9±1.1 87.7±1.4 92.1±1.2 97.5±1.0* 10011.4* 86.4+1.5 89.711.3 98.711.2* 99.811.4* 88.711.3 90.711.6 т±\.б*ч 11717.311.9*Л#
ф. Рч, с 3.1±0.01 3.210.04 3.5Ю.06 3.8Ю.01* 4.4+0.02* З.ЗЮ.04 З.ЗЮ.07 4.6Ю.05*А 5.4Ю.06*Л 3.310.02 3.410.04 4.4Ю.03* 5.2Ю.02*#
ФГ, г/л 2.2±0.03 2.0Ю.07 2.2Ю.10 2.1Ю.07 1.4+0.03* 2.0Ю.09 2.110.06 1.8Ю.10 1.510.06* 2.210.08 2.210.07 1.9Ю.09
ПДФ, мг% 15.3Ю.7 15.011.0 15.711.2 19.110,9* 22.511.2* 15.6+1.5 17.0±1.9*А 21.911.0*л 26.111.1*л 15.311.2 17.311.6*# 21.911.2* 28.911.1,л#
РКМФ, мкг/мл 23.8±1.0 22.411.3 24.8Ю.8 27.9Ю.9* 32.7Ю.7* 25.011.3 25.9Ю.8 33.4Ю.9*Л 38.1Ю.7*Л 24.911.4 25.6Ю.9 37.811.5,л# 41.910.9*л#
И-димеры, мкг/мл 0.21 ±0.007 0.1910.011 0.19Ю.013 0.23Ю.009* 0.26Ю.010* 0.2110.010 0.2210.011 0.30Ю.009*Л 0.3410.0112*л 0.2110.012 0.2310.011 1.2710.009*^ 1.43Ю.010*Л
Ф.ХНа-зависимый фибринолиз, мин 8.2±0.03 8.210.02 9.010.08 8.410.06 9.0+0.09 8.3Ю.03 8.4Ю.08 14.1Ю.07*Л 16.9Ю.07*Л 8.310.07 8.6+0.10 16.710.3*^ ЮМОЯ*^
ТкТР, % 100+2.0 90.6±1.7 83.4±1.5* 77.8±1.3* 64.2±1.5* 93.2±1.8 81.8±1.2* 73.6±1.0* 69.1±1.6*л 92.9±1.5 80.0±1,1л* 72.0±1,4*л 76.1±1.0*л#
Примечания: во всех случаях п = 5, строки 1-я, 2-я, 3-я и 4-я - через 2,4, 6 и 8 недель; * достоверное отличие от контроля, А - от крыс с А-авитаминным питанием, # - с А- и Е-авитаминным питанием.
Изменения ЛПО, АОП тромбоцитов и НВСК при избытке в рационе ретинола или токоферола и одновременно обоих витаминов. Как видно из данных табл. 2, при нагрузке ретинолом или токоферолом ЛПО замедляется, а АОП растет с увеличением дозы и заметнее при введении обоих витаминов.
Таблица 2.
Лнпидпероксидация п антиоксидантныП потенциал у крыс, рацион которых содержал избыток ретинола или токоферола и обоих витаминов одновременно
Показатели Интактный Рацион с избытком ретинола (1 -я строка), токоферола (2-я стро-
контроль ка) и обоих витаминов одновременно (3-я строка):
трёхкратным шестикратным двенадцати кратным
ДК, 0.04910.004* 0.040+0.005**' 0.012+0.002*Г
А/мгЛП 0.051+0.003 0.047+0.002* 0.031+0.004*# 0.008+0.001 *#А
0.04110.005* 0.027Ю.005*# 0.006Ю.001*Г
ТБК, ед./мг ЛП 0.6310.03* 0.3 9Ю.09* 0.29+0.04 *л
0.70±0,03 0.5410.04* 0.30+0.07*# 0.2110.02*#л
0.4310.02* 0.24+0.04*# 0.13±0.04*#л
ПИ, 52.211.2* 60.111.4* 65.811.1 *#А
мин/мл 45.2+1.1 63.011.0* 69.1+1.4*# 74.011.2*#А
71.111.0* 74.8+1.4* 87.2+1.2*#л
со, 0.6910.04* 0.5710.06* 0.48Ю.06*#Л
мм'/мл/мин 0.7510.03 0.57+0.004* 0.4810.03 *# 0.37+0.02*#л
0.5010.05* 0.33+0.02*# 0.31+0.02*#А
82.811.2* 81.5+1.7* 74.9±1.5*#
ф. р,,% 87.Ш.2 79.111.1* 72.911.6*/? 69.811.4*Г
70.5+1.0* 66.0+1.0*# 58,111.6*#А
ф. Рд, с 2.710.04* 2.8+0.06* 3.110.02*#л
2.510.02* 2.3+0.03*# 2.6+0.03*#А
3.2Ю.03 2.110.01* 1.6±0.05*# 1.3+0.01*#А
2.010.01 2.1+0.08 2.2+0.08
ФГ, г/л 2.3Ю.02 1.9+0.02 2.110.06 2.210.07
2,110.02 2.4+0.10 2.710.02*
ПДФ, мг% 14.1+1.2* 13.211.0* 13.111.4*#А
15.7±0.5 12.5+1.0* 12.0+1.4*# 11.0+1.6*#А
9.910,9* 9.1+1.0*# 8.611.2*#Л
21.011.4* 20.0+1.4* 20.1+1.4*#
РКМФ, мкг/мл 23.5±1.1 20.010.6* 18.2+0.9*# 17.1+0.9*#А
17.910.8* 13.9+0.7*# 11.811.5*#А
О-димеры, 0.1910.012* 0.1710.012* 0.18+0.010*#
мкг/мл 0.22Ю.005 0.17+0.016* 0.1410.010*# 0.11+0.08*#л
0.1410.004* 0.11±0.003*# 0.0710.005*#А
Ф.ХИа- 7.3+0.03* 7.1Ю.06* 6.1+0.05
ависимый фиб- 8.0Ю.03 7.010.02* 6,410.05 5.410.11*#А
ринолиз, мин 6.5+0.04* 5.3+0.03*# 4,0+0.2 *#А
ТкТР, % 110±1.7* 113±1.8* 124±1.7*#А
100±2.1 119±1.2* 129±1.7*# 136±2.1*#А
ВШ.З* 159±2,9*# 167±2,4*#А
Примечания: во всех группах и на всех этапах опытов п = 5. * - достоверное отличие от контроля, и - достоверное отличие у крыс с избытком токоферола относительно крыс с избытком ретинола (при равных дозах),л - с избытком ретинола+токоферола; число п - 5 на каждом этапе.
Уровень фф. Р3 и Р4, ПДФ, РКМФ и О-димеров падает, ускоряется фибрино-лиз и растет ТкТР (везде р < 0,05), и значительнее при увеличении доз, или вве-
дении витаминов одновременно. Стабильца фибриногенемия: тенденция к росту при избытке токоферола, а при избытке обоих витаминов - рост концентрации фибриногена (р < 0,05). Так как показатели ЛПО, АОП и маркеров НВСК изменялись однонаправлено, далее приводим только уровень ДК (показатель ЛПО), ПИ (показатель АОП) и уровень РКМФ (показатель НВСК), фибринолиза и ТкТР, что позволит в объеме автореферата документировать и обсудить результаты всех проведенных исследований.
Сдвиги ЛПО, АОП, НВСК, фибринолиза и ТкТР при избытке в рационе и ретинола и токоферола в разных соотношениях. Эффекты ряда соединений, в их числе витаминов, зависят не только от дозы каждого из них, но и от соотношения между дозами [Я.Б.Максимович, 1949; А.В.Яозз е.а., 2009]. Поэтому мы провели опыты с разными соотношениями ретинол/токоферол (1:1, 2:1, 4:1) и токоферол/ретинол (1:1, 2:1, 4:1), отбирая пробы через 8 недель. Анализируя влияние на ЛПО, АОП и гемостаз соотношений ретинол/токоферол и токоферол/ретинол, приводим различия между степенью их отклонения (в %) от интактного контроля (табл. 3): в верхних строках против названия показателя степень его сдвига от контроля (в %) при соотношениях ретинол/токоферол 1:1,2: 1 и 4:1, в нижней строке те же показатели при таких же соотношениях токоферол/ретинол.
Видно, что со снижением доли токоферола при его введении с ретинолом эффект ослабляется. Так, при соотношении ретинол/токоферол 2:1 степень ограничение прироста уровня ДК достоверно ниже, чем при соотношении 1:1, и ещё ниже - при соотношении ретинол/токоферол 4:1. Изменяются с уменьшением доли токоферола в рационе показатели АОП и РКМФ. Фибринолиз же ускорился, и повысилась ТкТР.
Таблица 3.
Сдвиги (в % к интактному контролю) ЛПО, АОП и тромбоцитов, РКМФ, фибрино-
лиза н ТкТР при 12-тикрятном избытке РТ и ТФ одновременно в соотношениях РТ/ТФ, равных 1:1, 2:1 и 4:1 (верхняя строка) или ТФ/РТ в тех же соотношениях _(нижняя строка)_
Показатели Интактный контроль В верхней строке соотношения ретинол/токоферол в пользу ретинола, в нижней - в пользу токоферола
1:1 2:1 4:1
ДК, А/мг ЛП -42* -44* -28* -35* -11*л -24*#л
ПИ, мин/мл 77* 82* 31*# 54*# 16*#л 47*#л
ПДФ, мг% 100% -47* -47* -13* -25 *# -7* -7*#л
РКМФ, мкг/мл -48* -48* -24* -49* -15*л -38 *#
Фибринолиз, мин 49* 51* 36* 27*# 14*л 17*#
ТкТР, % 59* 60* 54* 56 *П 33*л 45*#л
Обозначения: как в табл. 1. * - достоверное отличие от контроля, # - то же у крыс с избытком РТ над ТФ (или наоборот) в соотношении 2:1 относительно соотношения 1:1, л • при соотношении, равном 4:1, в сравнении с соотношением 2:1.
При соотношении ретинол/токоферол 2:1 влияние на ЛПО, АОП и НВСК достоверно ниже, чем при соотношении 1:1, и ещё ниже - у крыс, получавших ретинол и токоферол в соотношении 4:1 (р <0,05), то же относится к сдвигам фибринолиза и ТкТР - т.е. со снижением доли ретинола или токоферола в комбинации, воздействие на ЛПО и гемостаз убывает, что заметнее при снижении доли токоферола.
Графический анализ показал, что тренды, отражающие динамику ПИ, НВСК и ТкТР, пересекают ось X (ось категорий) под углом близким к 45° - признак значительного снижения эффекта двух витаминов при снижении доли токоферола. Близки между собой и значения Я2 всех трендов (от 0.83 до 0.96), как и углы наклона их к оси X (45,4±2,1°). При уменьшении доли ретинола в рационе углы наклона трендов к оси X достоверно ниже - 30,9°±1.4 (р < 0,05).
Следовательно, с убылью доли ретинола в рационе при сохранении дозы токоферола влияние комбинации на все показатели снижается меньше, чем при убыли доли токоферола. Преобладание эффекта токоферола перед ретинолом во влиянии на ЛПО и гемостаз может быть обусловлено его способностью защищать ретинол от окисления [М.И.Смирнов, 1974; А.Ш.Бышевский, 1978; И.П. Баранов и др., 2003].
Влияние А- н Е-авитаминного рационов, рациона без витаминов А и Е, влияние их избытка на степень сдвигов в ЛПО и в гемостазе при гиперкоагуляции, вызываемой тироксином или ф. III. Гиперкоагуляции сопутствует или предшествует ускоренный тромбиногенез, что, стимулируя появление активной протромбиназы, через положительную обратную связь ускоряет тромбиногенез и ведет к гипертромбинемии [Л.П. Папаян, 2003; А-БЬ. Ву5ЬеУБку е.а., 2008]. Тромбинемия - облигатное условие ускоренной фибринации, чем бы она не была вызвана [Д.М.Зубаиров, 2000; O.Segers е.а., 2010]. Поэтому мы изучили влияние А- и Е- авитаминнных рационов и избытка этих витаминов на сдвиги в гемостазе при воздействии тироксина или ф. III - агентов, ускоряющих ЛПО и тромбиногенез [СЛ.Галян и др., 1993, 2005; Т.Бегснг е.а., 2009]. По данным табл. 4 введение тироксина в отсутствии ретинола или токоферола усугубляло сдвиги и ЛПО и гемостаза, особенно в отсутствии обоих витаминов.
Таблица 4.
Сдвиги (в % относительно контроля 1-го) ЛПО н гемостаза у крыс, получавших 8 недель тироксин (1,5 мг/кг с полноценным, А-авитаминным и Е-авитамннным рационом
Показатели Группа 1 (контроль 1-й) Группа 2 (кон-троль+Т4) Группа 3 (без ретинола) Группа 4 (без ретино-ла+Т4) Группа 5 (без токоферола) Группа 6 (без токофе-рола+Т.,)
ДК, А/мг ЛП 0,05510,00 6214,1* 65±4.2* 80±4.6«+ 45±2.5* 103±6.1«+
ПИ. мин/мл 51 1+1 7 -6+0 3* -45+7 1* -61+4 9*+ -Л5+4 9* -67+5 П*+
РКМФ, 22,1 ±2,0 32,3±2,1 33.7±1.1* 72.6±5.3«* 73.8±3.8* 50,3±4.1«*
Фиб-з, мин 8,4±0.08 11,2±0,4* 0,0 53.2±4.2»* 82.1±6.7* 58.5±4.2*+
ТкТР, % 100±3,1 -56,7±2,7* -35.1±1.8* -41.1±1.3*+ -46.1*1.1« -56.1±1.6«+
-:----1-г-----
Обозначения: как к табл. 2 и 3; * - достоверное отличие от группы 1-й (контроля),
группы 4-й в сравнении с 3-й, группы б-й и 7-й с 5-й.
Сохранялись в этих опытах зависимости, наблюдающиеся при А- или Е-авитаминном питании: отрицательная связь ЛПО и АОП (rs = -0,91), АОП и интенсивности НВСК (rs = -0,91), положительная связь между ЛПО и НВСК (rs = 0,86). Фактор III, катализируя взаимодействие компонентов протромбинового комплекса, ускоряет тромбиногенез [Д.М. Зубаиров, 2000; R.F.A.Zwaal е.а., 1997] его введение в кровоток повышает тромбинемию [А.Ш.Бышевский, Д.МЗубаиров, О.А.Терсенов, 1993; Д. М.Зубаиров, Л.Д.Зубаирова, 2009]. Оцени. вая АВР и АЧТВ при введении взвеси ф. III в разных разведениях, мы нашли линейную зависимость гиперкоагуляции от количества ф. III (рис. 1). Это следует из значений R2, близких к единице для трендов АВР и АЧТВ. Следовательно, корректность изучения зависимости ЛПО-гемостаз от гиперкоагуляции, вызываемой на фоне А- и Е-авитаминного, А- и Е-авитаминного рационов, оправдана. Результаты исследования приведены в табл. 5 (степень сдвигов всех показателей в процентах от их величин у контрольных крыс).
60 50 40 30 20 10 0 -10
Рис. 1. Зависимость гиперкоагуляцин (по АВР и АЧТВ) от концентрации взвеси ф. III. Обозначения: цифры на диаграмме - укорочение АВР н АЧТВ в % относительно эффекта цельной взвеси.
На рис. 2 графики зависимости степени отклонения ЛПО от степени ги-перкоагулемии (по АВР). На рис. 2А видно, что АВР сокращается при введении ф. III контрольным крысам - развивается гинеркоагулемия при А-авитаминном, и сильнее - при Е-авитаминном, особенно при А- и Е-авитаминном рационе. Рост гиперкоагулемии линейно зависит от количества ф. III (R2 = 0,89 - 0,93): при его уменьшении степень укорочения нииже. Рост гиперкоагулемии приводит к ускорению ЛПО пропорционально количеству введенного ф. III. Зависимость между сдвигами АВР и ЛПО тесная отрицательная: rs равны -0,92, -0,94, -0,89 и -0,90 соответственно при введении ф. III на фоне полноценного, А-авитаминного и Е-авитаминного рациона и рациона без витаминов А и Е. Углы наклона трендов к оси X уменьшаются со снижением количества ф. III.
' 'АВР, с ВИИИАЧТВ, с Пинейныи (АВР, cj - — Линейный {АЧТВ, с) |
Цельная Разв. 1:1 Разв. 1:3 Разв. 1:5 Разв. 1:7 Разв. Разв.
1:11 1:15
Таблица 5.
Сдвиги (в % к контролю, округлены) АВР, АЧТВ, ЛПО, АОП н гемостаза через 15 mihi после введения взвеси ф. III разных разведении (т.е. концентраций) крысам, содержавшимся 8 недель па полноценном рационе (контроль), рационе без ретинола или токоферола н одновременно обоих витаминов
Показатели и их Полноценный Рацион без ре- Рацион без то- Рацион без рети-
значения у ин- рацион (кон- тинола коферола нола и токоферола
тактных крыс троль)
АВР, с 54* 59*+ 74* + 76 *+
75,9±1,7 46* 50* + 58* + 71* +
35* 42* + 54* + 59* +
22* 27* + 47* + 51* +
АЧТВ, с 53* 60* + 54 *+ 66 * +
45,3±1,5* 29* 35* + 45* + 61 * +
18* 22* + 40* + 49 * +
9* 15* 22* + 29 * +
ДК, А/мгЛП 30* 36* + 51* + 70* +
0.05310.002 23* 26 + 43* + 60* +
011 22* + 38*+ 41 * +
6* 9* + 13* + 26* +
ПИ, мин/мл 39* 45* + 52* + 53 * +
51,1±1,2 31* 35* + 41* + 31 * +
12* 17* + 20* + 22 * +
4 8* + 10* + 12 * +
РКМФ, мкг/мл 25* 33* + 6* + 56 * +
23.8±1.0 9* 12* + 37* + 45 * +
7* 9* + 16* * 34 * +
5 8* + 12* + 22 * +
Ф.Х11а-зави- 39* 42* + 48* + 50* +
симый фибри- 30* 40* + 40* + 37 * +
нолиз, мин 17* 31* + 39* + 34 *-
8.2±0.03 10* 14* + 38* + 39 * +
ТкТР, % 52* 59* + 65* + 68 * +
100±2.0 41* . 48* + 54* + 58 * +
25* 29* + 30* + 34 * +
15* 23* + 20* + 27 *+ |
Обозначения: как к табл. 2; строки 1-я, 2-я, 3-я и 4-я сверху вниз - разведения взвеси
ф. III 1:1:, 1:3, 1:5 и 1:7 соответственно; знаки * достоверное отличие от контроля,
знак + от группы с полноценным питанием.
На рис. 2Б видно, что скорость НВСК (по РКМФ) тем выше, чем выше кон-
центрация введенной взвеси ф. III. Сдвиги АВР и НВСК в зависимости от гипер-
коагуляции ассоциированы тесно положительно (rs = 0,88, 0,90, 0,86 и 0,89 при
полноценном, А-авитаминном или Е-авитаминном рационе и рационе А- и Е-
авитаминном соответственно). Ускорение фибринолиза (рис. 2В) при введении
концентрированной взвеси ф. III максимально, ниже - при введении разбавлен-
ной взвеси, заметнее при А-авитаминном, ещё заметнее при Е-авитаминном и
наиболее значимо при А-, Е-авитаминном питании.
Разе. Разв. Разе. Раза. 1:1 1:3 1:5 1:7 Рацион: полноценный
Разв. Разв. Разв. Разв. 1:1 1:3 1:5 1:7 А-авитаминный
1:1 1:3 1:5 1:7 Е-авитаминный
Разв. Разв. 1:1 1:3 1:5 1:7 А- и Е-авитаминный
в
Г
*ч* К' Ч" К- <• <• К- К-
& & & & ¿у j>* <#>'
4& <рг <f£r ^ч? ^ ^У
Рацион: полноценный А-авитаминный Е-авитаминный Л- и Е-авитаминный
Рис. 2. Степень сдвигов (в % от контроля) ЛПО (по ДК), НВСК (по РКМФ), фибрн-нолнза н ТкТР на 15-й мнн после введении ф. III в убывающих концентрациях.
Снижение ТкТР (рис. 2Г) также ассоциировано с гиперкоагулемией: чем она значительнее, тем более снижена ТкТР). Следовательно, связь АВР-ТкТР -отрицательна и достаточно тесна (rs = 0,89). На первый взгляд графики сдвигов АРВ и ТкТР противоречат сказанному (на рис. 2Г оба показателя меняются в одном направлении). Снижение ТкТР (рис. 2Г) также ассоциировано с гиперкоагулемией: чем она значительнее, тем более снижена ТкТР). Следовательно, связь АВР-ТкТР - отрицательна и достаточно тесна (rs = 0,89). На первый взгляд графики сдвигов АРВ и ТкТР противоречат сказанному (на рис. 2Г оба показателя меняются в одном направлении).
Однако укорочение АВР - признак гиперкоагуляции, а уменьшение ТкТР -признак снижения реакции на тромбинемию, вызываемой введением ф. III. Гиперкоагуляция, спровоцированная введением ф. III, т.е. тромбинемией, сопровождается ускорением ЛПО, снижением АОП тромбоцитов, ускорением НВСК, активацией фибринолиза в эуглобулиновой фракции плазмы, которая, как известно [Я.В. Велик, ЕЛ. Ходорова, 1957] не содержит антиплазминов.
Зависимо от степени гиперкоагулемии падает толерантность к тромбину. Величина всех сдвигов ассоциирована с концентрацией вводимой взвеси ф. III, то есть, с интенсивностью тромбинемии. При отсутствии в питании ретинола сдвиги значительнее, несколько более они выражены при Е-авитаминном питании и существенно увеличены при питании рационом, не содержащим витаминов А и Е.
Изучая те же сдвиги, вызываемые введением ф. III крысам, предварительно получавшим избыток ретинола, токоферола и обоих одновременно (в дозах, эквивалентных лечебным), мы нашли (рис. 3) следующее: 1) ускорение ЛПО, угнетение АОП, ускорение НВСК, активацию фибринолиза и снижение ТкТР, вызываемые ф. III, ограничиваются избытком ретинола при увеличении доз; 2) ещё эффективнее ограничиваются эти сдвиги на фоне избытка токоферола, и особенно эффективно - на фоне избытка ретинола и токоферола.
Таким образом, при гиперкоагулемии избыток ретинола, особенно в сочетании с токоферолом, сдерживает ускорение ЛПО, уменьшение АОП и ТкТР, т.е. ограничивает все сдвиги, вызываемые введением ф. III. Эти утверждения документирует рис. 4, где видна линейная зависимость степени ограничения сдвигов, вызванных ф. III, от ведения ретинола, токоферола и обоих одновременно при всех испытанных дозах ф. III. Видно и то, что ограничительный эффект токоферола выше, и ещё выше ограничительный эффект введения ретинола с токоферолом (значения R2, неприведенные на рисунке, везде выше 0,90). И в этой группе опытов зависимость общей свертываемости крови (по АВР) и ЛПО (по уровню ДК), а также зависимость общей свертывающей активности крови и НВСК (по уровню РКМФ) ассоциированы положительно - значения г, в пределах от 0,79 до 0,89 при всех испытанных дозах витаминов.
Рис. 3. Сдвиги АВР, ДК и РКМФ (в % от контроля) через 15 мин после введения ф. III у крыс, получавших избыток ретинола (РТ), токоферола (ТФ) н обоих витаминов одновременно (РТ+ТФ) в - 3-х, 6-ти н 12-тнкратных дозах.
На рис, 4 сопоставлены сдвиги общей свертываемости крови (АВР), скорости ЛПО в тромбоцитах с активностью фибринолиза и ТкТР при введении ф. III на фоне возрастающих доз ретинола, токоферола и обоих одновременно. Здесь видно, что степени активации фибринолиза и снижения ТкТР при введении ф. III ограничиваются ретинолом, токоферолом и одновременно обоими витаминами пропорционально их дозам. Таким образом, обогащение рациона витаминами А и Е порознь и в сочетании ограничивает вызываемое гиперкоагулемией ускорение ЛПО, снижение АОП, усиление НВСК и угнетение фибринолиза, и, что важнее, - сохраняет и повышает способность организма адекватно реагировать на тромбиногенез.
□ АВР
Дозы: 3-хкратные
Рис. 4. Сдвиги АВР, уровня ДК, фибринолиза и ТкТР (в % против контроля) через 15 мин после введения ф. III крысам, получавшим избыток ретинола (РТ) или токоферола (ТФ) н обоих витаминов одновременно (РТ+ТФ) в 3-х, 6-ти н 12-тнкратных дозах.
Заключая обсуждение полученных нами данных, выделим основное. Отсутствие в рационе питания ретинола, токоферола и обоих одновременно сопровождается активацией ЛПО, проявляющейся ростом уровня липидпероксидов и снижением АОП в тромбоцитах - клетках, во многом определяющих состояние гемостаза. К признакам ускорения ЛПО присоединяется усиленное высвобождение фф. Р3 и Р4. и одновременно с этим в плазме растет содержание маркеров НВСК (РКМФ, ПДФ и D-димеров), а начиная с 6-й недели замедляется фибри-нолиз и падает ТкТР. Эффекты А- и Е-авитаминного рационов на ЛПО и гемостаз отчасти адитивны в отсутствии обоих витаминов, особенно заметна сумма-ция эффектов в отношении ТкТР. В целом совокупность сдвигов при А-, и Е-авитаминном питании можно расценивать как развитие наклонности к тромбо-филии.
Избыток ретинола или токоферола в рационе в дозах, эквивалентных лечебным, ведет к дозазависимому замедлению ЛПО в тромбоцитах. Дозазависимы и противоположны по направлению гемостатические сдвиги, вызываемые избытком витаминов. Суммация эффектов ретинола и токоферола на ЛПО и гемостаз характеризуется как неполная. Сравнение эффектов на ЛПО А- и Е-авитаминных рационах с влиянием их избытка, взаимосвязь ЛПО-гемостаз при многих патологиях, при введении различных про- и антиоксидантов [Е.А.Винокурова, 2003; Е.М.Шаповалова и др., 2008; ПЛ.Шаповалов и др., 2005; M.Lomtadze е.а., 2005; T.Tunali е.а., 2005; A.Vignini е.а., 2008] позволяют утверждать, что воздействие и ретинола и токоферола на гемостаз обусловлено их влиянием на интенсивность свободно-радикального окисления (его составляющую - ЛПО). Без специального исследования нельзя исключить влияния ретинола и токоферола за счёт их витаминных свойств, может быть, за счёт их способности изменять активность протеаз сыворотки крови, а, следовательно, и изменять белковый спектр плазмы.
Эффекты одновременного введения избытка ретинола и токоферола на ЛПО и гемостаз - результат неполной суммации их действия при введении порознь. С уменьшением доли токоферола в комбинации с ретинолом суммарный эффект ослабляется меньше, чем при уменьшении доли ретинола. Видимо, при одновременном использовании витаминов А и Е в терапии состояний с наклонностью к тромбофилии, целесообразно, чтобы доля токоферола в комбинации превосходила долю ретинола. Возможно, преобладание токоферола над ретинолом в эффекте на ЛПО и гемостаз обусловлено его свойством ограничивать окисле-| ние ретинола. Гиперкоагулемия, вызванная тромбинемией, сопровождается ускорением ЛПО, снижением АОП, ускорением НВСК и активацией фибринолиза. Сдвиги АВР и ЛПО ассоциированы тесно отрицательно при введении ф. III на фоне полноценного, А-авитаминного или Е-авитаминного рациона и рациона без обоих витаминов. Углы наклона трендов к оси X уменьшаются со снижением количества инъецированного ф. III. Динамика сдвигов общей свертываемости крови, скорости НВСК и ТкТР в зависимости от гиперкоагуляции ассоциированы положительно. Следовательно, связь АВР-ТкТР отрицательна. Итак, обогащение рациона животных ретинолом или токоферолом и особенно обоими витаминами одновременно способствует сохранению и даже повышению способности организма реагировать на ускорение тромбиногенеза, ведущего к тромбине-мии и гиперкоагуляции.
выводы
1. Исключение ретинола из рациона питания, сбалансированного по остальным нутриентам, вызывает прогрессирующее во времени ускорение липидпе-роксидации и снижение антиоксидантного потенциала тромбоцитов, рост их высвобождающей способности, плазменного уровня маркеров непрерывного внут-рисосудистого свертывания крови, угнетение фибринолиза и снижение толерантности к тромбину.
2. Исключение токоферола из рациона питания вызывает такие же по направленности и интенсивности сдвиги, как А-авитаминное питание.
3. Одновременное исключение токоферола и ретинола из рациона питания, сбалансированного по остальным нутриентам, вызывает сдвиги такие же по направленности, но более выраженные и быстрее развивающиеся.
4. Избыток в сбалансированном рационе ретинола и токоферола (порознь и одновременно) вызывает дозазависимые сдвиги противоположной направленности - замедление липидпероксидации и рост антиоксидантного потенциала тромбоцитов, снижение их высвобождающей способности и плазменного уровня маркеров непрерывного внутрисосудистого свертывания крови, активацию фибринолиза и повышение толерантности к тромбину.
5. Снижение доли ретинола при одновременном введении с рационом эквивалента лечебных доз ретинола и токоферола (12-кратных относительно суточной потребности) отражается на степени сдвигов липидпероксидации и гемостаза меньше, чем снижение доли токоферола.
6. Отсутствие ретинола и токоферола в рационе питания и особенно обоих одновременно усиливает сдвиги липидпероксидации и гемостаза, возникающие в ответ на гиперкоагулемию, вызываемую факторами, усиливающими тромби-ногенез; избыток этих витаминов в питании, напротив, ограничивает сдвиги.
7. Сдвиги липидпероксидации и высвобождающей способности тромбоцитов предшествуют сдвигам в гемостазе во всех изученных нами экспериментальных ситуациях.
8. По результатам ранговой корреляции при всех изученных нами ситуациях сдвиги интенсивности липидпероксидации и антиоксидантного потенциала ассоциированы тесно отрицательно (г5 > -0,90), липидпероксидации и уровня маркеров непрерывного внутрисосудистого свертывания крови - тесно положительно (г5 > 0,88), сдвиги высвобождающей способности тромбоцитов и липидпероксидации - тесно положительно (г5 > 0,88), сдвиги фибринолиза и толерантности к тромбину - положительно (г5 > 0,68), сдвиги липидпероксидации и толерантности к тромбину - отрицательно (г5 > -0,78).
СПИСОК РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Витамины А, Е, С, В5 и В12, гемостаз и перекисное окисление липидов / JI.A. Васильев, М.Г.Галушко, О.К.Щепетева и др. / Глава в монографии «Влияние важнейших витаминов-антиоксидантов на непрерывное внутрисосудистое свертывание толерантность к тромбину». М.: «Медицинская книга». - 2009. - С. 8-13
2. Интегральные показатели состояния гемостаза в зависимости от обеспеченности организма витаминами-антиоксидантами / Л.А.Васильев, М.Г.Галушко, О.К.Щепетева и др.// Глава в монографии «Влияние важнейших витаминов-антиоксидантов на непрерывное внутрисосудистое свертывание толерантность к тромбину». М.: «Медицинская книга». - 2009. - С. 38-45
3. * Влияние разных доз витамина С на толерантность к тромбину у несинте-зирующих его животных / А.Ш.Бышевский, Р.Г.Алборов, О.К.Щепетева и др. // Медицинская наука и образование Урала. - 2009. - №2.- 2(58), том 10. — С. 55-56.
4. * Маркеры непрерывного внутрисосудистого свертывания крови и толерантность к тромбину при гипертромбинемии// Р.Г.Алборов, Л.А.Васильев, О.К.Щепетева и др.// Медицинская наука и образование Урала - 2009. - № 2(58).-т. 10. - С.49-51.
5. * Гемостаз при гипертиреозе и тиреотоксикозе (обзор) / М.Г.Галушко, Р.Г.Алборов, O.K. Щепетева и др. // Медицинская наука и образование Урала. -2009.-№2(58). -С. 147-150.
6. * Витамин С (аскорбиновая кислота) и гемостаз (обзор) /Р.Г.Алборов, Л.А.Васильев, O.K. Щепетева и др. // Медицинская наука и образование Урала. -2009.-2(58).-C.I43-146.
7. Непрерывное внутрисосудистое свертывание крови и липидпероксидация в тромбоцитах// А.Ш.Бышевский, С.Л.Галян, О.К.Щепетева и др.// «Актуальные проблемы теоретической и прикладной биохимии». Российская конф., посвященная 80-летию со для рождения Р.И. Лифшица, Челябинск. 5-8 октября 2009 г. С. 16-19.
8. Толерантность к тромбину и уровень маркеров непрерывного внутрисосудистого свертывания крови в плазме// А.Ш.Бышевский, СЛ.Галян, О.К.Щепетева и др. // «Актуальные проблемы теоретической и прикладной биохимии» Российская конф., посвященная 80-летию со дня рождения Р.И. Лифшица, Челябинск. 5-8 октября 2009 г. С. 103-107.
9. *Витамины с антноксидшпными свойствами и гемостаз / А.Ш.Бышевский, Л.Х.Васильев В.В.Кондаков, O.K.,Щепетева и др. // Вестник Уральской медицинской академической науки. - 2009. - №2. - С. 109-110.
10.* Зависимость эффекта аскорбата от дозы / А.Ш.Бышевский, Л.А.Васильев, О.К.Щепетева и др. // Медицинская наука и образование Урала. - 2010. - №1(61).-С.62-66.
11.* Влияние рационов без ретинола, токоферола и обоих одновременно на сдвиги липидпероксидации, вызываемые тироксинемией / П.Я.Шаповалов, О.К.Щепетева // Медицинская наука и образование Урала. - 2010.-№2.-С.82-84.
* - публикации в журналах рекомендованных ВАК РФ
Используемые сокращения
АВР Активированное время рекальцификации
АОП Антиоксидантный потенциал
АЧТВ Активированное частичное тромбопластиновое время
да Диеновые конъюгаты
лпо Липидпероксидация (перекисное окисление липидов)
нвск Непрерывное внутрисосудистое свертывание крови
ТБК Вещества, взаимодействующие с тиобарбитуровой кислотой
ТкТР Толерантность к тромбину
РКМФ Растворимые комплексы мономерного фибрина
ТФ Токоферол
ПДФ Продукты деградации фибрина
пи Период индукции
РТ Ретинол
со Скорость индуцированного окисления
ф. (фф.) Фактор (факторы)
Щепетева Ольга Константиновна
ЭФФЕКТЫ ОТСУТСТВИЯ И ИЗБЫТКА ВИТАМИНОВ А И Е НА ГЕМОСТАЗ ПОРОЗНЬ И В СОЧЕТАНИИ ПРИ ВОЗДЕЙСТВИЯХ, ВЫЗЫВАЮЩИХ ГИПЕРКОАГУЛЯЦИЮ
(экспериментальное исследование)
03.04.01 - биохимия
Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук
Подписано в печать 11.04.2011 Формат 60x84/16. Печ. л. 1,0. Печать ризограф. Тираж 100. Зак. № 279.
Типография ООО «Печатник», лицензия ПД № 17-0027 Тюмень, ул. Республики, 148 корп. 1/2. Тел. (3452) 20-51-13, тел./факс (3452) 32-13-86
Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Щепетева, Ольга Константиновна
Введение.
1. ЗАВИСИМОСТЬ ГЕМОСТАЗА И ПЕРЕКИСНОГО ОКИСЛЕНИЯ ЛИПИДОВ ОТ РЕТИНОЛА И ТОКОФЕРОЛА обзор литературы).
1.1. Витамин А (ретинол).
1.2. Витамин Е (токоферол).19'
1.3. О сочетанном влиянии ретинола и токоферола на гемостаз
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.
3.1. Изменения у крыс липидпероксидации и антиоксидантного потенциала тромбоцитов, интенсивности непрерывного внутри-сосудистого свертывания крови и фибринолиза при отсутствии в рационе питания ретинола или токоферола и одновременно обоих витамнов.
3.2. Изменения у крыс липидпероксидации, антиоксидантного потенциала тромбоцитов, интенсивности непрерывного внутрисо-судистого свертывания крови при избытке в пищевом рационе ретинола или токоферола и одновременно обоих.
3.3. Сдвиги липидпероксидации, антиоксидантного потенциала тромбоцитов, интенсивности непрерывного внутрисосудистого свертывания крови и фибринолиза при избытке в пищев ом рационе одновременно ретинола и токоферола, и при изменении соотношения между их дозами.
3.3.1. Сдвиги ЛПО, АОП в тромбоцитах, интенсивности НВСК и фибринолиза у крыс при избытке в пищевом рационе ретинола и токоферола при изменении соотношений между ними в сторону ретинола.
3.3.2. Сдвиги у крыс ЛПО, АОП тромбоцитов, интенсивности НВСК и фибринолиза при избытке в пищевом рационе ретинола и токоферола, и при изменении соотношения в сторону токоферола.
3.4. Влияние А- или, Е-авитаминного рационов и рациона, не содержащего обоих витаминов на степень сдвигов в перекисном окислении липидов и гемостазе при гиперкоагуляции, вызываемой введением тироксина.
3.5. Влияние А- или Е-авитаминного рационов и рациона, не содержащего обоих витаминов, на сдвиги перекисного окислении липидов и гемостаза в зависимости от степени гиперкоагуляции, вызываемой введением тканевого тромбопластина.
3.6. Изменения липидпероксидации, антиоксидантного потенциала тромбоцитов, интенсивности непрерывного внутрисосудистого свертывания крови, вызываемые введением тканевого тромбопластина крысам, получавшим рацион с избытком ретинола или токоферола и одновременно обоих витаминов.
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ И ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
Введение Диссертация по биологии, на тему "Эффекты отсутствия и избытка витаминов А и Е на гемостаз порознь и в сочетании при воздействиях, вызывающих гиперкоагуляцию (экспериментальное исследование)"
Актуальность планируемого исследования определена рядом положений, основанных на результатах изучения' публикаций медико-биологического профиля, посвященных возможной' роли ретинола и токоферола, как факторов, дефицит или избыток которых вызывает гемокоагуляционные сдвиги.
С начала второй половины XX века витамины рассматривают не только как нутриенты, дефицит которых ведет к развитию специфических расстройств, но и как соединения, выполняющие важные регуляторные функции. К этому времени было установлено, что многие процессы в живом (иммунобиологическая защита, гематопоэз, репаративная и нервно-эндокринные функции, кровообращение, пищеварения и другие) зависят от обеспеченности организма витаминами [Б.А.Лавров, 1957; А.О.Натансон, 1961;
B.В.Ефремов, 1964; М.К.Абдурахманов, 1971; М.И.Смирнов, 1974; А.Ш.Бы-шевский, В.Н.Кожевников, 1991; О.А.Громова, Л.С.Намазова, 2003; П.Н. Ша-раев, 2004; J.K.Campbell е.а., 2004; A.Opperhuizen е.а., 2005; C.Weiss е.а., 2005; A.K.Shirakawa, 2008; A. Hoffer, 2010]. Взгляд на витамины как средства профилактики и лечения гиповитаминозов сменился представлением о них как о соединениях, контролирующих за счет не связанных с коферментной функцией свойств состояние обменных процессов, которые определяют резистентность организма в широком смысле слова [Б.А.Лавров 1957; О.А.Громова, Л.С.Намазова, 2003; П.Н. Шараев, 2004; J.K.Campbell е.а., 2004;
C.Weiss е.а., 2005; A.K.Shirakawa, 2008; О. Erdeve, 2009].
Не так давно выявлена связь витаминов со свободно-радикальным окислением [В.П.Мищенко, 1981], поддерживающим проницаемость биомембран на физиологическом уровне [Ю.А.Владимиров, 1987, 1998, 2005; Е.Б.Бур-лакова, 1997; A.Opperhuizen, 2008]). В связи с этим область применения витаминов в практической медицине вышла за пределы профилактики или лечения гиповитаминозов - их начали широко использовать в терапии разнообразных состояний [М.И.Смирнов, 1974; A.A. Колесов, 1987; Л.А. Марченко,
1987; Ю.А.Овчинников, 1987; А.Ш.Бышевский, В.Н.Кожевников, 1991; 5
И.П.Баранов и др., 2003; О.А.Громова, Л.С.Намазова, 2003; В.С.Ярочкин, 2004; Е.Л.Грякалова, 2005 а; Э.Н.Согрин, 2005; О.Глс^аагс!, 1995].
К заболеваниям, в лечении которых использовали и используют витамины, относятся и те, которые протекают с нарушениями в системе гемостаза.
Установлена эффективность применения некоторых витаминов при обменных нарушениях с признаками гипероксидации. В этой связи особое внимание было обращено на витамины-антиоксиданты [В.П.Мищенко, 1981; С.Л.Галян, 1993; А.Ш.Бышевский и др., 2003; В.П.Мищенко и др., 2005; П.Я.Шаповалова и. др., 2008; М.Р. 1яЬа1 е.а., 2005; А.МаЬтооё, е.а., 2005; УЛ^аШг е.а., 2007].
Вместе с тем, в экспериментах, направленных на изучение зависимости между витаминами и гемостазом, далеко не всегда учитывают исходный уровень обеспеченности витаминами организма подопытных животных и лишь в части работ используют пищевые рационы, сбалансированные по содержанию нутриентов, в том числе витаминов [Г.В.Андреенко, Н.П.Сытина, 1958, 1960; Г.В.Андреенко, Л.В.Лютова, 1969; А.Ш.Бышевский и др., 2006, 2009; Е.М.Шаповалова и др., 2008; МЛ.Соорег е.а., 2006; К. ОгоепЬаек е.а., 2006].
В последние годы обращено внимание на влияние витаминов не только на отдельные факторы свертывания крови, но и на маркеры состояния гемостаза, интегрально отражающие наклонность к кровоточивости или тромбо-филии. Исследования интенсивности непрерывного внутрисосудистого свертывания крови (НВСК) при авитаминозах и избыточном введении витаминов обнаружило ассоциацию между уровнем маркеров НВСК и интенсивностью липидпероксидации (ЛПО) [Е.А.Винокурова, 2003, 2006; А.Ш.Бышевский и др., 2003, 2005; В.П.Мищенко и др., 2005].
Подтвердился взгляд, согласно которому непрерывно протекающее в физиологических условиях внутрисосудистое свертывание крови, ускоряясь, может перерасти в диссеминированное внутрисосудистое свертывание крови
ДВС) [Д.М.Зубаиров и др., 1989; Д.М.Зубаиров, 2000; И.Н.Бокарев, 2000а, б, в, 2002]. Установлено, что сдвиги НВСК, оцениваемые по уровню его марке6 ров, позволяют выявить наклонность к внутрисосудистому тромбообразова-нию - следствию усиленного тромбиногенеза [З.С.Баркаган, 1998; З.С.Баркаган, А.П.Момот, 1998; И.Н.Бокарев, 2000- а, б, в; 2002; А.Ш.Бышевский и др., 2005; МХоп^аёге е.а., 2005; НЖРагк е.а., 2005; Н.ВегпЬагс! е.а., 2009; 0.8е§егэ е.а., 2010].
Установлено также и следующее:
- в лечении заболеваний, протекающих со сдвигами в гемостазе, чаще других используют витамины А, Е, В5, В12 и С, дефицит или избыток которых по степени влияния на толерантность к тромбину распололагаются так: А > Е > В12 > С > В5 [Е.М.Шаповалова и др., 2008; А.Ш.Бышевский и др., 2009];
- эффекты витаминов-антиоксидантов на способность организма отвечать на гипертромбинемию (на толерантность к тромбину) представлены малым числом работ, как и сведения об их влиянии на интенсивность .НВСК -величину, обратную толерантности к тромбину [Р.Г.Алборов и др., 2005; А.Ш.Бышевский и др., 2003, 2005; Е.М.Шаповалова и др., 2008; А-ЭЬ. Ву-БЬеУБку е.а., 2007, 2008 а, б]. Данные, характеризующие изменения НВСК и I толерантности к тромбину при гипертромбинемии, представлены лишь двумя работами [С.ЛГалян, 1993, В.Г.Соловьев, 1997)], и это при том, чтоги-пертромбинемия, независимо от вызвавших её причин, является обязательным условием развития наклонности к тромбообразованию [Д.М.Зубаиров, 2000];
- эффекты сочетаний витаминов-антиоксидантов на толерантность к тромбину, определявшуюся по частоте гибели животных при экзогенной тромбинемии [А.Ш;Бышевский, 1978] и одно исследование, в котором-оценена толерантность к тромбину при введении всех возможных сочетаний, витаминов А, Е, В5, В12 и С [А.Ш.Бышевский и др., 2009], выявили, что витамины А и Е интенсивнее других влияют на это свойство организма.
Всё сказанное обосновало необходимость и перспективность продолжения исследований с тем, чтобы экспериментально охарактеризовать способ7 ность сочетания витаминов А и Е (их отсутствия и избытка) на липидперок-сидацию и гемостаз и получить сведения, которые могли бы использоваться в практической медицине при лечении состояний, протекающих с гипер-тромбинемией, т.е. с риском тромбообразования.
Цель исследования
Изучить в опытах на животных закономерности изменения интегральных показателей состояния гемостаза {непрерывного внутрисосудистого свертывания и толерантности к тромбину), липидпероксидации и антиок-сидантного потенциала тромбоцитов в отсутствии или избытке витаминов А и Е порознь и в сочетании.
Предполагалось, что анализ влияния на гемостаз отсутствия и избытка витаминов А и Е и их сочетаний, широко используемых в медицинской практике, позволит уточнить представления о характере и механизмах их действия на систему свертывания крови в условиях физиологической нормы и при гипертромбинемии.
Задачи исследования
1. Количественно оценить изменения интенсивности липидпероксидации, антиоксидантного потенциала тромбоцитов, плазменного уровня маркеров непрерывного внутрисосудистого свертывания крови, фибринолиза и толерантности к тромбину в отсутствии и при избытке витамин А
2. Количественно оценить все перечисленные в п. 1 величины в отсутствии и при избытке витамин Е.
3. Количественно оценить все те же величины при одновременном, отсутствии и избытке витаминов А и Е.
4. Все те же показатели изучить в условиях провоцируемой гиперкоагуляции при длительном содержании подопытных животных на рационе без витамина А или витамина Е, и рациона без обоих витаминов, а также при их избытке в рационе питания.
5. Изучить зависимость изменения-тех же показателей от степени создаваемой гиперкоагуляции (дозированным введением тканевого тромбопласти8 на - ф. III свертывания крови).
6. Провести статистический и- графический анализ полученных данных для установления, характера взаимосвязей между состоянием липидперокси-дации, непрерывного внутрисосудистого свертывание крови, фибринолиза и-толерантностью к тромбину при всех изученных экспериментальных ситуациях.
Дизайн экспериментов
Оценить состояние ЛПО, АОП, уровня маркеров НВСК, фибринолиза и толерантности к тромбину при исключении из рациона крыс ретинола или.токоферола и обоих витаминов одновременно, а также при их избытке; установить зависимость оцениваемых величин от степени провоцируемой гиперкоагуляции в тех же условиях (подопытные животные - нелинейные крысы-самцы с массой тела - 148±10,3 г) в серии экспериментов:
1. Крысы содержатся на А-авитаминном рационе.
2. Крысы содержатся на Е-авитаминном рационе.
3. На рационе, из которого исключены ретинол и токоферол.
4. На рационе с избытком ретинола и токоферола при изменении соотношений между дозами витаминов А и Е (в пользу ретинола и в пользу токоферола).
5. Содержание крыс на А-авитаминном, Е-авитаминном и А+Е-авитаминном рационах, включающих тироксин.
6. Содержание крыс на включающем тироксин рационе с избытком ретинол а* токоферола порознь или обоих витаминов одновременно.
7. Содержание на А-авитаминном или Е-авитаминном рационе, или на рационе с избытком витаминов и последующим введением тканевого тромбо-пластина (определять спустя 15 мин всех оцениваемые величины).
Научная новизна
1. Впервые установлено, что исключение ретинола или токоферола из рациона питания, сбалансированного по остальным микро- и макронутриентам, вызывает нарастающее ускорение перекисного окисления липидов и снижение антиоксидантного потенциала тромбоцитов, рост их высвобождающей способности и плазменного уровня маркеров непрерывного внутрисосуди-стого свертывания крови, угнетение фибринолиза и снижение толерантности к тромбину.
2. Впервые показано, что при содержании животных на рационе, в котором отсутствуют и ретинол и токоферол, сдвиги липидпероксидации в тромбоцитах и гемокоагуляционные сдвиги, наблюдающиеся при исключении из питания одного из этих витаминов, усиливаются по типу неполной сумма-ции.
3. Установлено, что введение в составе сбалансированного рациона питания ретинола и токоферола (порознь и одновременно, в дозах, эквивалентных лечебным) сопровождается замедлением перекисного окисления липидов и повышением антиоксидантного потенциала тромбоцитов; уменьшением их способности высвобождать факторы свертывания РЗ и Р4, а также снижением уровня маркеров непрерывного внутрисосудистого свертывания крови, активацией фибринолиза и ростом'толерантности к тромбину.
4. Измененяя соотношения между дозами витаминов А и Е при их одновременном введении впервые установили, что вклад токоферола во влиянии на интенсивность перекисного окисления липидов в тромбоцитах, непрерывное внутрисосудистое свертывание крови и толерантность к тромбину выше, чем вклад ретинола.
5. Установлено, что отсутствие в питании ретинола и токоферола, особенно обоих одновременно, усиливает влияние на непрерывное внутрисосудистое свертывание крови и на толерантность к тромбину воздействий, сопровождающихся гиперкоагулемией, вызываемой ускоренным тромбиногенезом, и показано, что избыток этих витаминов в рационе, повышает способность организма адекватно реагировать на гиперкоагулемию.
6. Подтверждено использованием не применявшихся ранее экспериментальных ситуаций, а также с помощью графического и математического анализа полученных данных, что сдвиги липидпероксидации и высвобождающей способности тромбоцитов предшествуют изменениям в гемостазе, и, следовательно, эффекты токоферола и ретинола на гемостаз реализуются через их влияние на перекисное окисление липидов в тромбоцитах.
Практическая ценность работы
В ходе исследований в соавторстве с сотрудниками кафедр биологической химии, гигиены с основами экологии внедрены для использования в лечебных учреждениях г. Тюмени (Многопрофильный медицинский центр филиала ОАО «Запсибгазпром», ЗАО медицинский центр «Малыш», ГЛПУ ТО «Областная больница №11» (РП Голышманово)) методические рекомендации «Влияние дефицита и избытка токоферола на интенсивность внутрисосуди-стого свертывания крови и толерантность к тромбину», оформленные актами.
Основные положения, вынесенные на защиту
1. Отсутствие в рационе животных ретинола или- токоферола ведет к нарастающему ускорению липидпероксидации, снижению антиоксидантного потенциала тромбоцитов и росту их коагулоактивности, проявляющейся ускоренным высвобождением факторов Рз и Р4, вследствие чего ускоряется непрерывное внутрисосудистое свертывание крови, угнетается- ф.ХПа-зави-симый фибринолиз и снижается способность организма адекватно реагировать на гипертромбинемию и воздействия вызывающие её.
2. Избыточное обогащение рациона ретинолом или токоферолом в количествах, адекватных увеличивающимся лечебным дозам и пропорционально их величине, вызывает противоположно направленные сдвиги - торможение липидпероксидации, рост антиоксидантного потенциала и снижение выброса факторов Р3 и Р4, что сопровождается замедлением непрерывного внутрисо
11 судистого свертывания крови, активацией фибринолиза и повышением толерантности к гипертромбинемии.
3. Влияние отсутствия или избытка в рационе ретинола' или токоферола на тромбоциты, на интенсивность непрерывного внутрисосудистого свертывания крови и фибринолиз суммируется не полностью, что является признаком реализации эффектов их через изменение интенсивности перекисного окисления липидов (его активации при отсутствии и угнетении - при избытке).
4. Изменение соотношения в рационе между избыточными количествами ретинола и токоферола, вводимых одновременно, выраженность эффектов на липидпероксидацию и гемостаз выше, если в рационе доля токоферола преобладает над долей ретинола, что предположительно можно связывать со свойством токоферола ограничивать окислительные превращения ретинола.
5. При отсутствии ретинола и токоферола в рационе воздействия, ускоряющие тромбиногенез, провоцируя гиперкоагуляцию, вызывают более выраженную наклонность к тромбофилии, чем при полноценном питании, избыток витаминов А или Е в рационе ослабляет этот эффект.
Апробация и публикация
Основные положения диссертации доложены на Российской конференции объединения биохимиков Урала, Поволжья» и Западной Сибири, ЮжноУральского научного центра РАМН, посвященной 80-летию со дня рождения Р.И. Лифшица и приуроченной к 65-летию ЧелГМА «Актуальные проблемы теоретической и прикладной биохимии» (Челябинск, 2009), на заседании Тюменского регионального отделения РАЕ (2009, 2010), на совместном заседании кафедр биохимии, физиологии и общей гигиены с курсом экологии ТюмГМА (2010).
Результаты исследований опубликованы в 11 печатных работах, используются в обучении студентов и клинических ординаторов при чтении курсов лекций «Биологическая химия», «Гигиена с основами экологии» и «Акушерство и гинекология».
Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Щепетева, Ольга Константиновна
Выводы 7, 8 и тот факт, что отсутствие ретинола или токоферола влияет на липидпероксидацию и гемостаз в направлении, противоположном влиянию на них избытка этих витаминов, позволяет утверждать с высокой долей вероятности, что эффекты ретинола и токоферола в значительной степени реализуются за счет их антиоксидантных свойств. Это утверждение опирается также на экспериментальные и клинические данные об эффективности применения антиоксидантов, в том числе и витаминов с антиоксидантными свойствами, в качестве неспецифических средств ограничения гемостазиоло-гических нарушений [С.Л. Галян, 1993; Н.Б. Баклаева, 2005; Е.А.Винокурова, 2006; В.А.Полякова и др., 1994а; В.П.Мищенко и др., 2005; Е.М.Шаповалова и др., 2008; А.8Ь.В1з11еУ8ку е.а., 2004; Ь. 1дюта1а е.а., 2007].
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ И ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Как сообщалось в единственном известном нам экспериментальном исследовании, опубликованном в период завершения нашей работы (ноябрь-декабрь 2009 г), эффекты сочетания витаминов А и Е на толерантность к тромбину отчасти суммируются [Е.М.Шаповалова и др., 2009].
В небольшом числе публикаций было показано, что отсутствие, дефицит или избыток ретинола или токоферола, модифицирует липидпероксидацию в тромбоцитах, т.е. в клетках, которые синтезируют или депонируют некоторые факторы, которые вызывают гиперкоагулемию, и снижают способность организма реагировать на тромбин и вообще на воздействия, ускоряющие образование тромбина [Л.П. Папаян, 2003; Н.Н.Зороастрова, 2006; Y.Wu., 2009; E.Quezada е.а., 2010] и факторы, сдерживающие тромбиногенез или действие свободного тромбина [Б.И.Кузник и др., 1998, Б.И;Кузник, 2001» А.С.Шитикова, 2000; E.Pretorius, 2010].
Данные о широком использовании ретинола и токоферола порознь и одновременно, в том числе и в составе поливитаминных комплексов [Б.А.Лавров, 1957; Н.Б.Луцюк, 1961; А.О.Натансон, 1961; В.В. Ефремов,. 1964; О.А.Громова Л.С.Намазова, 2003; A.Desai е.,а, 2008; М. Fava е.а., 2009] послужили указанием на целесообразность предпринимаемого нами экспериментального исследования, планируя которое, мы намечали изучать связь между гемостазом и обеспеченностью организма ретинолом, токоферолом и их комбинацией. В частности, намечалось оценить состояние гемостаза* не только при А- и Е-гиповитаминозе, но и при дефиците в питании одновременно обоих витаминов, что встречается при многих заболеваниях [П.Н. Ша-раев, 2004; А.Ш.Бышевский, и др., 2006; A.Vignini е.а., 2008; M.L.Cheng е.а., 2009] - к их числу относятся поражения сердечно-сосудистой системы и другие виды патологий с наклонностью к тромбофилии и, реже, к кровоточивости [В.К.Бауман и др., 1991; З.С. Баркаган, 1996; О.Ф. Мысник, 2001; Н. Dam, 1944; M.L.Cheng е.а., 2009].
Множество противоречивых данных, полученных экспериментаторами и клиницистами не позволили в обзорных и монографических работах сформулировать однозначное представление о целесообразности; использования* в . лечении таких состояний витамины А и Е.
Нам представлялось, что экспериментально можно получить данные, .которые явятся основанием для рекомендаций, очерчивающих группы заболеваний, в лечении которых целесообразно изучать влияние на состояние гемостаза применения витаминов А и Е в клинике порознь или совместно; Мы предполагали, что по крайней; мере, такие данные позволят назвать группы состояний, при которых клиницистам целесообразно изучать влияние дефицита и нагрузок витаминами А и Е на гемостаз.
Всё это и явилось основанием для проведения планируемого нами исследования с учетом следующих особенностей:
1. Использовать только экспериментально апробированные рационы питания, с помощью которых можно создавать «моноавитаминные» и «биави-таминные» пищевые рационы,,или вводить избыток витаминов, соотносимый ссуточной потребностью животных. В этом случае мы исходили из того, что соотношение дозы витамина с суточной потребностью позволяет на. основе сведений^ об -использующихся в с клинике лечебных дозах, испытывать экспериментально эквиваленты лечебных доз.
2. Из большого' числа факторов свертывания крови оценивать группу тех, которые позволяют судить об интенсивности непрерывного внутрисосу-дистого свертывания крови и о способности организма адекватно отвечать на гипертромбинемию, так как тромбин, являясь ключевым ферментом биохимического компонента свертывания крови, в качестве основной функции катализирует инициальную стадию образования фибрина, т.е. собственно свертывания- крови. Намечено было определять и фибринолитическую активность, от уровня которой зависит и толерантность к тромбину [Б.А.Кудря-шов, 1975; А.8Н. ВузНеувку е.а., 20086], а также уровень маркеров НВСК
Г.В.Андреенко, Л.В.Лютова, 1969; А.Ш.Бышевскии и др;, 1990];
62
Первоначально мы- нашли, что при содержании животных на А-авита-минном, Е-авитаминном рационе и рационе без обоих витаминов, при увеличении. длительности экспериментов ускоряется липидпероксидация и падает антиоксидантный потенциал в этих клетках (табл. 2).
При графическом анализе степени сдвигов (использовано альтернативное варьирование и установление достоверности аппроксимации), выявилось, что изменения липидпероксидации и антиоксидантного потенциала тромбоцитов (рис. 2, где представлены ДК и ПИ как показатели липидпероксидации и антиоксидантного потенциала соответственно) изменяются во времени практически линейно. Об этом свидетельствуют значения коэффициентов о аппроксимации (Л ) - для всех линейных трендов на рис. 2 коэффициенты близки к единице. ДК в пи
Без Без Без
РТ ТФ РТ и
ТФ
Рисунок 2. Сдвиги'в тромбоцитах уровня диеновых конъюгат (ДК) и периода индукции (ПИ) у крыс, содержавшихся на рационе без ретинола (РТ) или токоферола (ТФ) и обоих витаминов одновременно. Столбцы слева направо - пробы взяты через 2, 4, 6 и 8 недель от начала опытов (для всех трёх групп).
Характер взаимосвязи переменных (уровня ДК - показателя интенсивности липидпероксидации и величин ПИ, характеризующих антиоксидантный потенциал), оцененный методом ранговой корреляции Спирмена, свидетельствует о тесной отрицательной связи между ними - значения rs близки к -0.9 в экспериментах с А-авитаминным, Е-авитаминным рационом и рационом, не содержащим обоих витаминов одновременно.
Близкими к величине -0,9 значения rs оказались и при оценке взаимосвязи между переменными, характеризующими уровень ТБК-продуктов и скорость индуцированного окисления (СО), хотя величины коэффициентов аппроксимации (R ) при их графическом анализе были близки к -0,8, что свидетельствует о менее выраженной линейности сдвигов.
Заметной количественной разницы между влиянием А-авитаминного и Е-авитаминного рационов не выявлено, как и при оценке абсолютных значений (табл. 2) — есть лишь тенденция к преобладанию сдвигов в отсутствии токоферола над сдвигами, найденными в отсутствии ретинола,
При одновременном исключении из рациона обоих витаминов прирост уровня липидпероксидов (ДК, ТБК), скорости индуцированного окисления (СО) и укорочение периода индукции (ПИ) выражены в достоверно большей мере, чем при моноавитаминном питании (величины р, установленные при альтернативном варьировании, меньше 0,05).
Следовательно, эффекты отсутствия в рационе витаминов А и Е на пере-кисное окисление липидов кооперируются. Расчеты по М.Диксону и Э.Уэббу [1966], что уже отмечено выше, свидетельствуют о неполной суммации. Неполнота суммация обусловлена, видимо, тем, что оба исследуемых витамина ведут себя как антиоксиданты, объектом действия которых являются в данном случае одни и те же клетки - тромбоциты.
Один из процессов, интенсивно протекающих в тромбоцитах - это трансформация арахидоновой и других ненасыщенных жирных кислот по липоок-сигеназному или циклооксигеназному путям, включающим образование перекисей [J.J.F. Belch, 1992]. Накопление липоперекисей ведет к деформации мембранного липопротеидного комплекса, и к изменению активности мем
64 бранно-связанных ферментов [Е.Б.Бурлакова, 1975]. Антиоксиданты снижают активность энзимов, атакующих сфингомиэлин и фосфатидилхолин, способствуя их сохранению в мембранах [В.П.Мищенко и др., 1981]. Обогащение антиоксидантами повышает вязкость билипидного слоя и снижает тромбинактивирующую способность тромбоцитов. Интенсификация липид-пероксидации и снижение уровня антиоксидантной защиты в тромбоцитах, напротив, ускоряет инкорпорацию арахидоната в клетки и повышает их активность [А.А.Кубатиев и др., 1981, 1993].
Можно допускать, что обеднение организма такими облигатными антиоксидантами как ретинол и-токоферол вызывает сходный эффект, способствуя накоплению избытка липоперекисей. Нельзя исключить, что. эффекты отсутствия двух видов молекул (ретинола и токоферола), воздействующих на одни и те же процессы, в частности, процессы трансформации арахидоновой кислоты и её производных, в силу общих субстратов; состояние которых они поддерживают в физиологических пределах, ограничивают возможность полной суммации (возможно, конкуренция за субстраты).
На рис. 3 (по данным табл. 3) представлены результаты анализа сдвигов непрерывного внутрисосудистого свертывания крови (по степени сдвигов плазменного уровня РКМФ), фибринолиза и толерантности к тромбину.
Обращает на себя внимание то, что приросту содержания- в тромбоцитах липидпероксидов, скорости индуцированного окисления и укорочения периода индукции при отсутствии в рационе ретинола, токоферола и особенно обоих витаминов одновременно (см. рис. 2) соответствует рост уровня РКМФ, т.е. ускорение непрерывного внутрисосудистого свертывания крови (рис. 3). Одновременно наблюдается угнетение фибринолиза и снижение толерантности к тромбину. В отсутствии обоих витаминов в рационе эти сдвиги заметнее, как заметнее были у этой группы животных сдвиги перекисного окисления липидов в тромбоцитах.
Важно, что сдвиги гемостатических показателей возникают позже, чем сдвиги липидпероксидации. Так, через 2 недели при А-авитаминном и Е-ави
65 таминном рационе, и при сочетанном А- и Е-авитаминном питании они от., л сутствуют. Поэтому динамика сдвигов во времени, не линейна — величины Я представленных на рис.-3 линейных трендов во всех случаях далеки от единицы. РКМФ ШФиб-з ВТкТР
Без; Без Без:
РТ ТФ РТи
ТФ
Рисунок 3: Сдвиги=уровня РКМФ, фибринолиза (Фиб-з)) и толерантности к.тромбину (ТкТР) у крыс, содержавшихся; на рационе без ретинола (РТ) или токоферола (ТФ) и обоих витаминов одновременно. Столбцы,слева направо - пробы взяты через 2, 4, 6 и 8 недель от начала опытов (для всех трёх групп)
Обращает на себя внимание и то, что приросту содержания в тромбоцитах липидпероксидов, увеличению скорости индуцированного окисления и укорочению периода индукции прт отсутствии в, рационе ретинола, токоферола и особенно обоих витаминов одновременно (рис. 2 и рис. 3) соответствует рост уровня РКМФ, т.е. ускорение непрерывного внутрисосудистого свертывания крови. Одновременно наблюдается угнетение фибринолиза и снижение толерантности к тромбину. Причем, в отсутствии обоих витаминов в рационе эти сдвиги заметнее, как заметнее были у этой группы животных сдвиги перекисного окисления липидов в тромбоцитах.
66
Особенно важно, что сдвиги гемостатических показателей возникают позже, чем сдвиги липидпероксидации (через 2 недели при А-авитаминном и Е-авитаминном рационе, и при сочетанном А- и Е-авитаминном питании они отсутствуют). Поэтому динамика сдвигов :во времени.не линейна - величины R линейных трендов на рис. 3 далеки во всех случаях от единицы.
В целом же А- или Е-авитаминное питание сопровождается ускорением HBGK, замедлением фибринолиза и существенным снижением толерантности к тромбину.
Более позднее появление гемостатических сдвигов в сравнении со сдвигами липидпероксидации в тромбоцитах согласуется с рядом экспериментальных и» клинических наблюдений, согласно которым при воздействиях, ускоряющих перекисное окисление липидов в тромбоцитах, сдвиги в этих клетках предшествует сдвигам' в коагуляционном (биохимическом), компоненте гемостаза [Ю.А.Рудзевич и др., 2003; В.П.Мищенко и др., 2005; Г.А.Сул-карнаева и др., 2006; Ю.А.Рудзевич и др., 2006; М.Г. Галушко и др., 2009].
Более того, анализ литературы, посвященной роли тромбоцитов в гемостазе, и;, в частности в условиях; оксидативного стресса; позволяет утверждать, что активация, тромбоцитов в разных экспериментальных и клинических ситуациях предшествует сдвигам в биохимическом компоненте гемостаза [Д.М. Зубаиров и др., 1989; А.С.Шитикова , 2000; Е.А.Вйнокурова, 2003; Л.П. Па-паян, 2003; J.J.F. Beich, 1992; M.P.Gawaz, 2001; P.Blair е.а., 2009].
Обращает на себя внимание и то, что сдвиги (ранговая корреляция« по Опирмену) липидпероксидации положительно ассоциированы с изменениями; плазменного уровня маркеров НВСК - для сопоставляемых пар РКМФ-ДК, РКМФ-ТБК, РКМФ-СО значения rs равны соответственно 0,93, 0,89 и 0,86.
Период индукции (ПИ) ассоциирован с теми же величинами (ПИ-РКМФ, ПИ-ПДФ, ПИ-О-димеры) отрицательно - значения rs составляют -079, -0,87 и -0¿79 - соответственно, что согласуется с отрицательной ассоциацией динамики липидпероксидации с антиоксидантным потенциалом тромбоцитов;
Наряду с гемокоагуляционными сдвигами выявляется; и замедление ли
67 зиса фибрина в эуглобулиновой фракции плазмы, а также снижение толерантности к тромбину. Уменьшение этих двух величин не обнаруживает сколько-нибудь тесной связи с остальными изменениями. Значения г5 при сопоставлении динамики фибринолиза и толерантности к тромбину с каждой из вышеописанных величин не превышают 0.25-0,34, хотя, судя по графикам рисунка 3, они отрицательно связаны с уровнем РКМФ, т.е. с непрерывным внутрисосудистым свертыванием крови.
Отрицательная зависимость между НВСК и фибринолизом, а также и с толерантностью к тромбину представляется логичной: есть достаточно данных, согласно которым замедление фибринолиза [К.Г.Урбанюк, 1962; Г.В.Андреенко, Л.В.Лютова, 1969], как и активация тромбоцитов [А.Ш.Бы-шевский, 1967; З.С. Баркаган, 1998; Д.М.Зубаиров, 2000; В.П.Мищенко и др. 2005; 0.8е§егэ е.а., 2010], могут служить факторами, предрасполагающими к тромбофилии.
Эффекты отсутствия токоферола в составе рациона практически идентичны, хотя и проявляются- несколько сильнее, будучи в отдельных случаях достоверно более заметными. Эффекты же исключения из рациона одновременно и ретинола и токоферола на все изучавшиеся нами показатели существенно выше каждого из них в отдельности, однако'не могут рассматриваться как потенцирующие, а лишь как не полностью суммирующиеся.
В итоге можно констатировать, что отсутствие в рационе ретинола или токоферола ускоряет (в нарастающей во времени степени) в тромбоцитах процессы перекисного окисления липидов, контролируемые по содержанию в них первичных и вторичных липидпероксидов, снижая параллельно анти-оксидантный потенциал, контролируемый по периоду индукции и скорости индуцированного окисления.
С небольшим отставанием (примерно на две-три недели), наряду со сдвигами липидпероксидации, в плазме прогрессивно растет уровень фф. Рз и
Р4, что свидетельствует об активации тромбоцитов. Одновременно и также прогрессивно растет и уровень остальных маркеров внутрисосудистого свер
68 тывания крови (РКМФ, ПДФ и Б-димеров), что указывает на ускорение этого непрерывного физиологического процесса в отсутствии витамина А, Е и особенно при отсутствии обоих одновременно.
Снижение фибриногенемии наиболее корректно объяснить при явных признаках активации непрерывного внутрисосудистого свертывания тем, что скорость этого процесса, выйдя за пределы физиологической нормы, приводит к ускоренному потреблению фибриногена в процессе фибринации.
Не исключено, однако, что обеднение организма ретинолом, токоферолом и обоими одновременно сопровождается и замедлением синтеза фибриногена - мы упоминали в «Обзоре» об участии этих витаминов в протеиноге-незе [М.И.Смирнов, 1974; А.Ш.Бышевский, 1978; П.Н.Шараев, 2004].
Растет в плазме также содержание и таких маркеров непрерывного внутрисосудистого свертывания крови как ПДФ, РКМФ и Б-димеров, что обнаруживается через 6 и становится особенно выраженным через 8 недель.
Активность фибринолиза, напротив, обнаруживает тенденцию к снижению (увеличивается^ время лизиса) к концу опыта (через 8 недель), не подтверждаемую статистически, но достаточно заметную - лизис замедлен в этот период на 9,7% (р > 0.05).
Толерантность к тромбину (ТкТР) достоверно падает уже за 4 недели, и это прогрессирует в более поздние сроки.
Аналогично изменяются все обсуждаемые показатели и у крыс, содержавшихся на рационе без токоферола - у них изменения всех показателей идентичны по направлению и мало отличаются по степени выраженности.
При отсутствии в питании ретинола и токоферола эффекты на гемостаз частично слагаются и степень сдвигов всех показателей при А- и Е-ави-таминном рационе питания более значительна, чем при отсутствии в питании одного из этих витаминов.
Всё вышесказанное подтверждается экспериментами с избыточным введением ретинола или токоферола. На рис. 4 приведена динамика изменений тех же величин, представленных в виде степени сдвигов (в % относительно
69 контроля). Как и ранее, при графическом анализе о липидпероксидации и ан-тиоксидантном потенциале судили по значениям ДК и ПИ соответственно, о НВСК - по уровню РКМФ.
100 -1
142+0,93
В2+0,92
-100 -J
1*2+0,86 . ч ч
Рисунок 4. Сдвиги уровня ДК, ПИ, РКМФ, фибринолиза (Фиб-з)) и толерантности к тромбину (ТкТР) у крыс, получавших избыток ретинола (РТ) или токоферола (ТФ) и обоих витаминов одновременно (РТ+ТФ). Знаки 3, 6 и 12 - соответственно трёх-, шести- и двенадцатикратный избыток витамина.
Здесь видно, что при всех изучавшихся дозах введение ретинола или токоферола замедляло липидпероксидацию (снижение в тромбоцитах уровня диеновых конъюгат и удлинение периода индукции - ДК и ПИ соответственно) и непрерывное внутрисосудистое свертывание крови (снижение уровня РКМФ): Одновременно ускорялся фибринолиз, и повышалась-толерантность к тромбину. Причем, все эти эффекты тем заметнее, чем выше доза витаминов, особенно при введении обоих витаминов одновременно.
Видна здесь и зависимость эффекта от дозы, которая близка к линейной -величины коэффициентов аппроксимации (К2) для всех показателей ниже единицы в малой мере (особенно показатели состояния липидпероксидации и антиоксидантного потенциала).
В совокупности все выявленные изменения свидетельствует, что ретинол и токоферол в дозах, превышающих суточную потребность, при ежедневном поступлении с рационом, замедляют липидпероксидацию и способствуют увеличению антиоксидантного потенциала тромбоцитов, а это сопровождается замедлением НВСК, ускорением фибринолиза и повышением толерантности к тромбину.
При избытке витаминов А или Е, а также обоих одновременно выявлено наличие тесной отрицательной связи между липидпероксидацией и антиок-сидантным потенциалом тромбоцитов: значения г8 при анализе таких переменных, как уровень ДК, ТБК, ПИ и СО лежат в пределах от -0,81 до -0,92 в экспериментах с введением витамина А, витамина Е или обоих одновременно.
Отрицательная* связь найдена и между уровнем липидпероксидов с одной стороны, активностью фибринолиза и толерантностью к тромбину - с, другой. И это относится к поздним срокам наблюдения (после 6-й и 8-й недели опытов, когда при отсутствии витаминов показатели заметно изменяются). Значения величины г5 здесь составляют от -0,79 до -0,89.
Таким образом, исключение из сбалансированного рациона питания ретинола или токоферола повышает интенсивность липидпероксидации и снижает антиоксидантный потенциал тромбоцитов, ускоряет с некоторым отставанием во времени НВСК, активность фибринолиза и толерантность к тромбину.
При нагрузке ретинолом или токоферолом в дозах, эквивалентных лечебным, в тромбоцитах скорость липидпероксидации падает, а их антиокси
71 дантный потенциал повышается, что сопровождается снижением интенсивности НВСК наряду с увеличением скорости фибринолиза и повышением толерантности к тромбину. При одновременном исключении ретинола и токоферола из рациона, а также при одновременном их введении в избытке, перечисленные сдвиги усиливаются.
Наблюдается при анализе абсолютных величин, полученных в опытах с исключением витаминов из питания и в опытах с их избытком, несколько более выраженный эффект токоферола. Это ещё заметнее при графическом анализе тех же данных.
Концентрация фибриногена в плазме крыс не изменялась при трёх- и шестикратном избытке в рационе ретинола или токоферола, однако тенденция к росту наблюдалась при избытке токоферола, достигая достоверной степени (прирост 17,4%, р < 0;05) при одновременном избытке обоих витаминов' Так как это происходило на фоне ускоренного фибринолиза, что сопровождается и фибриногенолизом, мы связываем прирост уровня фибриногена с ускорением его синтеза. Известно, что витамины А и Е стимулируют синтез белков [А.О.Натансон, 1961; Б.А.Лавров, 1963; И.П.Баранов и др., 2003].
Здесь следует упомянуть, что не все исследователи прошлых лет соглашались с тем, что плазмин способен лизировать фибриноген. Однако позднее было установлено, что, несмотря'на противодействие циркулирующих анти-плазминов, это возможно, хотя и фибриногенолиз протекает медленнее, чем лизис фибрина [Я.В.Белик, Е.Л Ходорова, 1966]. В связи с этим, даже с учетом ускоренных потерь фибриногена из-за фибриногенолиза, можно предполагать, что наблюдавшийся рост фибриногенемии является следствием заметного ускорения синтеза этого белка избытком витаминов А и Е, обеспечивающего в условиях опыта преобладание скорости его синтеза над распадом.
Диаметральная противоположность эффектов, наблюдаемых в отсутствии или при избытке в рационе обоих витаминов (в пределах, характеризующихся определявшимися нами показателями), позволяет утверждать сле
72 дующее.
Витамины А и Е влияют на НВСК опосредовано, изменяя перекисное окисление липидов в тромбоцитах (активация при отсутствии и угнетение при избытке). О том же свидетельствует и то, что сдвиги липидпероксидации в тромбоцитах во времени несколько предшествуют гемостатическим сдвигам (изменениям интенсивности НВСК, особенно активности фибринолиза и толерантности к тромбину) как при А- или Е-авитаминном питании, так и при питании рационом, содержащим их избыток.
В связи с тем, что эффекты витаминов (как и многих других соединений) нередко зависят не только от дозы каждого из них, но и от соотношения между дозами [Я.Б.Максимович, 1949; B.Melichar е.а., 2009; A.B.Ross е.а., 2009], мы в дальнейших экспериментах изменяли соотношения между дозами витамина А и Е в пользу ретинола или токоферола. Напомним, что для обоих витаминов использована доза; превышающая суточную потребность-в 12 раз (12-кратная доза). В одной из серий соотношения доз ретинол/токоферол составляли 1:1, 2:1 и 4:1, в другой серии соотношения были обратными -токоферол к ретинолу как 1:1, 2:1 и 4:1.
Для- анализа влияния" на липидпероксидацию и гемостаз соотношений ретинол/токоферол и токоферол/ретинол (их влияние в абсолютных величинах приведены в таблицах 6-9) используем различия между их интенсивными значениями, т.е. степенью отклонения в. % от интактного контроля, представленной в тех же таблицах).
Ниже, в табл. 16, мы объединили все результаты этих экспериментов, приводя в верхних строках против каждого показатели степень сдвига (в %) от контроля при соотношениях ретинол/токоферол 1:1, 2: 1 и>4:1. В нижней строке те же показатели при таких же соотношениях токоферол/ретинол (в сторону токоферола).
С уменьшением доли токоферола при его введении вместе с токоферолом эффект ослабляется.-Например: при соотношении ретинол/токоферол.
2:1 степень ограничение прироста уровня липидпероксидов достоверно ниже,
73 чем при соотношении 1:1, и ещё ниже - при соотношении ретинол/токоферол 4:1. Меняются с уменьшением доли токоферола в рационе и показатели АОП: чем ниже доля токоферола в рационе, тем меньше изменен период индукции и скорость окисления - р < 0,05. Содержание в плазме фф. Р3 и Р4 у крыс, получавших ретинол и токоферол в в соотношении 1:1, снизилось значительно. Снизился и плазменные уровни ПДФ, РКМФ и Б-димеров. Фибри-нолиз же ускорился, и повысилась толерантность к тромбину.
Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Щепетева, Ольга Константиновна, Тюмень
1. Абдурахманов М.К. Обмен витаминов Вь В2, В6, Вп, С, А, Б при нормальной и осложненной гипохромной анемии: Автореф. дис. . д.м.н. Душанбе, 1971. - 26 с.
2. Алборов Р.Г. Роль клеток крови в связи между толерантностью к тромбину, содержанием в кровотоке продуктов взаимодействия тромбин-фибриноген и липидпероксидацией: Автореф. дисс. . д.м.н. Тюмень, 2006. 42 с.
3. Алборов Р.Г. Зависимость между антиоксидантными свойствами витаминов и их влиянием на толерантность к тромбину /Р.Г.Алборов, С.Л.Галян, С.В.Миневцев и др. // Медицинская наука и образование Урала. 2005. - №3. — С.64-66.
4. Алборов Р.Г. Маркеры непрерывного внутрисосудистого свертывания крови и толерантность к тромбину при гипетромбинемии / Р.Г.Алборов, Л.А.Васильев, В.В.Кондаков и др. // Медицинская наука и образование Урала. 2009. -№2. - 58. - С.49-51.
5. Алборов Р.Г.Влияние левоноргестрела на постоянное внутрисосудистое свертывание крови, модифицируемое введением антиоксидантов / Р.Г.Алборов // Материалы международного научного симпозиума «Югра-гемо».Х.-Мансийск: РАМН, ЮУНЦ РАМН, 2004. С.61-63.
6. Андреенко Г.В. Влияние витаминов С, Р, В12, К и фолиевой кислоты на тромбопластическую активность морских свинок / Г.В.Андреенко, Н.П.Сытина// Бюлл. эксп. биол. и мед. 1960. - №10. - С. 46-47.
7. Андреенко Г.В. Изменение тромбопластической активности крови у крыс под влиянием больших доз аскорбиновой кислоты / Г.В.Андреенко, Н.П.Сытина // Научн. докл. высшей школы. Биол. науки. 1958. - №1. - С.109-113.
8. Андреенко Г.В. Значение аскорбиновой кислоты в сохранении функции противосвертывающей системы крови /Г.В.Андреенко, Л.В.Лютова // В кн. Система свертывания крови и фибринолиз. Киев, 1969. С. 8-9.
9. Ю.Баклаева Н.Б. Перекисное окисление липидов при операциях на матке: Автореф. дисс. .канд. мед. наук. Тюмень, 2005. -23 с .
10. П.Балуда В.П. Лабораторные методы исследования системы гемостаза / В.П.Балуда, З.С.Баркаган, Е.Д.Гольдберг и др. Томск, 1980. 310 с.
11. Балуда В.П. Физиология системы гемостаза / В.П.Балуда, М.В.Балуда, И.И.Деянов, И.К.Тлепшуков. М., 1995. 243 с.
12. Баранов И.П. Биохимия витаминов /И.П.Баранов, Ю.А.Старых ИВ.Уш-канова и др. Сургут: СурГУ, 2003. 73 с.
13. Баркаган З.С. Геморрагические заболевания и синдромы / З.С.Баркаган М.: Медицина, 1988. 528 с.
14. Баркаган З.С. Основные методы лабораторной диагностики нарушений системы гемостаза / З.С.Баркаган, А.П.Момот. Барнаул, 1998: -С.83-84.
15. Баркаган З.С. Введение в клиническую гемостазиологию / З.С. Баркаган. М.:Ньюдиамед-АО, 1998.-45 с.
16. Бауман В.К. Взаимодействие витаминов А и Б при гипердозах / В.К.Бауман, М.Ю.Валиниеце, Н.И.Берзинь // Тез. Всесоюзной конф; «Клиническая'витаминология». М.: Минздрав СССР, АМН СССР, Институт питания АМН СССР. 1991. -С.50-50.
17. Белик Я.В., Ходорова Е.Л. Биохимия свертывания крови. Киев: АН УССР, 1957.-172 с.I
18. Березовский В.М. Химия витаминов. -М.: Пищепромиздат. -1959. -599 с.
19. Бокарев И.Н. Атеротромбоз — проблема современности / «Тромбозы, геморрагии, ДВС-синдром. Проблемы* лечения / И.Н.Бокарев. М., 2000 а. — С. 47-52.
20. Бокарев И.Н. Атеротромбоз проблема современности / И.Н.Бокарев.
21. Тромбоз, гемостаз и,реология. 20006. — С. 6-7.97
22. Бокарев И.Н. Тромбозы, предтромботические состояния, тромбофилии и гиперкоагуляция / И.Н.Бокарев. Тромбозы, геморрагии, ДВС-синдром. Проблемы лечения, 2000 в. С. 39-43.
23. Бокарев И.Н. Дифференциальная диагностика и лечение внутренних болезней. Кровоточивость, или геморрагический синдром. Дифференциальная диагностика / И.Н.Бокарев. М., 2002. 75 с.
24. Бременер С.М. Витамины. / С.М.Бременер. М.: Медицина, 1966. 420 с.
25. Бурлакова Е.Б. Свободно-радикальное окисления липидов в норме и патологии. М., 1976. 181с.
26. Бурлакова Е.Б. Биоантиоксиданты: новые идеи и повторение пройденного / Е.Б.Бурлакова // Междун. симп. «Биоантиоксидант» Тюмень, 1997. — С.3-4.
27. Бурула П.И. Действие каротина и подсолнечного масла на время свертывания крови /П.И.Бурула // Научн. труды Кубанского мед. института. 1960. -18(31).-С. 112-115.
28. Бышевский А.Ш. Свертываемость крови при совместном введении витамина А>и тиреоидина в эксперименте / А.Ш.Бышевский, Н.Б.Луцюк // Матер. 2-й научн. конф. Запорожского фарм. ин-та. — 1962 а. С.33-34.
29. Бышевский А.Ш. Влияние витаминов-антиоксидантов на антиагрегант-ный эффект ацетилсалициловой кислоты / А.Ш.Бышевский,С.Л.Галян, И.А.Дементьева и др. // Укр. Биохим. журнал. 1997. - 69. - №2. - С.96-101.
30. Бышевский А.Ш. Гемостазиологические сдвиги при миоме матки и ее оперативном лечении / А.Ш. Бышевский, Е.А. Винокурова, H.H. Яскевич, A.B. М.: «Медицинская книга», 2006. С. 12-16.
31. Бышевский А.Ш., Мухачева И.А., Шафер В.М. Способ определения содержания продуктов деградации фибрина. № 1659855, регистрация 1.03. 1991, публикация Бюлл. № 24, 30.06. 1991.
32. Бышевский А.Ш. Влияние витамина А, никотиновой кислоты, витаминов В12 и Е на толерантность крыс к тромбину / А.Ш.Бышевский // Тез. докл.1.й конф. Украинского фармакологического Общества.- 1965. С.64.98
33. Бышевский А.Ш. Влияние витаминов А, РР, В.2 и Е на лизис эйглобули-нов и антитромбиновую активность / А.Ш.Бышевский // Матер, юбилейной конф. ЗГМИ. Киев. 1967. С.13-13.1
34. Бышевский А.Ш. Метод определения антиплазмина в сыворотке крови / А.Ш.Бышевский, В. Мохнатов // Система свертывания крови и фибринолиза. Киев: Здоровья, 1969. - С. 220-221.
35. Бышевский А.Ш. Влияние витаминов на свертывание крови /А.Ш.Бышевский // Казанский мед. журнал. 1977. - №6. - С.82-85.
36. Бышевский А.Ш. Витамины и гемокоагуляция / А.Ш.Бышевский // Свердловск: Средне-Уральское книжное издательство. 1978. - 124 с
37. Бышевский А.Ш. Биохимические -компоненты свертывания крови / А.Ш.Бышевский, О.А.Терсенов, С.Л.Галян и др. Свердловск: Средне-Уральское книжное изд-во. 1990. - 211 с.
38. Бышевский А.Ш., Кожевников В.Н. Витамины и здоровье женщины / А.Ш.Бышевский, В.Н.Кожевников. Красноярск: КГУ., 1991. 192 с.
39. Бышевский А.Ш. Способ определения толерантности животных к тромбину / А.Ш.Бышевский, Л.В.Михайлова, Р.Г.Алборов и др. // Патент № 2219546, приоритет от 04.05.2000, зарегистрирован в Госреестре изобретений РФ 20.12.2003.
40. Бышевский А.Ш. Влияние витаминов А, Е, С, Р, вводимых порознь и одновременно, на внутрисосудистое свертывание крови / А.Ш.Бышевский, С.Л.Галян, Е.М.Шаповалова и др. // Современные наукоёмкие технологии. -2007.- 1.-С. 24-24.
41. Бышевский А.Ш. Влияние сочетаний витаминов-антиоксидантов на толерантность к тромбину /А.Ш. Бышевский, Е.М. Шаповалова // Вестник Южно-Уральского государственного университета 2009 б. - 27 (160). -С.77-80.
42. Бышевский А.Ш. Коррекция гемостатических сдвигов в акушерстве, хирургии и эндокринологии антиоксидантами /А.Ш.Бышевский, С.Л.Галян
43. Р.Г.Алборов и др. // Матер. Международного симпозиума «Молекулярные99механизмы регуляции функции клетки». Тюмень. - 2005. - С.249-253.
44. Бышевский А.Ш. Зависимость взаимодействия тромбин-фибриноген от активности тромбоцитов /А.Ш.Бышевский, С.Л.Галян, Н.Н.Зороастрова, С.В.Миневцев // Медицинская наука и образование Урала. 2005. - №3. -С.71-72.
45. Бышевский А.Ш. Связь гемостаза с перекисным окислением липидов / А.Ш.Бышевский, М.К.Умутбаева, Р.Г.Алборов. М.: Медицинская книга, 2003. 95 с.
46. Бышевский А.Ш. О роли щитовидной железы в регуляции гемостаза /А.Ш.Бышевский, С.Л.Галян, Г.АП.Сулкарнаева, П.Я.Шаповалов. Москва: Медицинская книга, 2006. -95 с.
47. Вадзюк С.Н. Влияние конвафлавина на перекисное окисление липидов в сердце при экспериментальном тиреотоксикозе / С.Н.Вадзюк // Эксперим. и клиническая фармакология. 1992. - 55. - №1. - С.34-35
48. Ван Чий. Изменения уровня протромбина и фибриногена в крови у больных атеросклерозом и гипертонической болезнью при лечении их аскорбиновой кислотой, холином и препаратами йода: Автореф. дисс. . к.м.н. М, 1959. -23 с.
49. Вержиковская Н.В. Изменения функции щитовидной железы под влиянием витамина А / Н.В.Вержиковская // Тезисы докладов на 13-й научн. Сессии института питания АМН СССР. М, 1959. -С. 114-115.
50. Винокурова Е.А. Гемостаз и перекисное окисление липидов при операциях на матке / Е.А.Винокурова // Успехи современного естествознания. -2003.-№10.-С. 56.
51. Винокурова Е.А. Гемостаз при оперативных вмешательствах в гинекологической практике / Е.А.Винокурова. М.: Медицина, 2006.- 91 с.
52. Владимиров Ю.А. Свободно-радикальное окисление липидов и физические свойства липидного слоя биологических мембран / Ю.А Владимиров // Биофизика. 1987. - №5. - С. 830-844.
53. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы и антиоксиданты // Вестник100
54. РАМН. 1998. - №7. - С. 43-51.
55. Владимиров Ю.А. Образование свободных радикалов металлофер-ментами и апоптоз / Ю.А.Владимиров / Матер. Междун. Симпозиума «Молекулярные механизмы регуляции функции клетки. Тюмень, 2005. С. 15.
56. Галиева А.Т. Патогенетическое значение оксида азота при геморрагической лихорадке с почечным синдромом: Автореф. дисс. . к.м.н. Уфа, 2004. - 22 с.
57. Галян С.Л. Предупреждение и ограничение витаминами-антиоксидан-тами нарушений гемостаза, вызываемых тромбинемией: Автореф. дисс. . докт. мед. наук. Челябинск, 1993. 44 с.
58. Галян С.Л. Роль клеток крови в липидпероксидации /С.Л.Галян, А.Ш.Бышевский, Р.Г.Алборов и др. // В сб. «Новая идеология в единстве фундаментальной науки и клинической медицины» Самара, 2005. С. 3801 384.
59. Громова О.А.Намазова JI.C. М.: Союз педиатров России. 2003. - 56 с.
60. Детинкина Г.Н., Дынкина И.М., Тюрин Ж.Н., Шумабатина Л.Ф. Предложения по унификации методов исследования системы гемостаза // Лаб. дело.- 1984 а. -№3. С. 140-143.
61. Детинкина Г.Н., Дынкина И.М., Тюрин Ж.Н., Шумабатина Л.Ф. Предложения по унификации методов исследования системы гемостаза // Лаб. дело.- 1984 б. №4. - С. 225-232.
62. Диксон М. Ферменты /М.Диксон, Э.Уэбб. М.: Мир, 1966. 816 с
63. Иваненко Е.М. Биохимия витаминов. Киев: высшая школа, 1970. — 210 с.
64. Колесов А.А. Профилактика тромбоэмболических осложнений у больных со злокачественными новообразованиями гениталий до и после операции: Дис. канд. мед. наук. М., 1987. - 173 с.
65. Колотилова А.И., Глушанков Е.П. Витамины (химия, биохимия и физиологическая роль) / А.И.Колотилова Е.П. Глушанков. Ленинград: Ленинградский университет. 1976. 247 с.
66. Кубатиев А.А. Эндогенные простагландины в динамике индуцированной агрегации тромбоцитов / А.А.Кубатиев, С.В.Андреев. Актуальные проблемы гемостазиологии. М.: Наука, 1981. - С. 150-152.
67. Кубатиев А.А. Термоиндуцированные структурные перестройки мембран тромбоцитов под действием индуктора и ингибитора агрегации / А.А.Кубатиев, Т.С.Руденко, Т.И.Черниховская и др.//Бюлл эксперим. биологии и мед., 1993.-№115 (1).-С. 15-17.
68. Кудряшов Б.А. Липопротеинлипаза как гуморальный агент противосвер-тывающей системы организма / Б.А.Кудряшов, Г.Г.Базазьян // J.Atherosclerosis. 1963 б. - 3. - 3. - С. 195-205.
69. Кудряшов Б.А. Биологические проблемы регуляции жидкого состояния крови /Б.А.Кудряшов. М.: Медицина, 1975. 488 с.
70. Кудряшов Б.А. Липопротеинлипаза и её свойства как компонента проти-восвертывающей системы ' / Б.А.Кудряшов, Г.Г.Базазьян, Л.Л.Бонфито // Вопр. мед. химии. 1963 а. - №5. - С. 533-535.
71. Кузник Б.И. Иммуногенез, гемостаз и неспецифическая резистентность организма / Б.И. Кузник, И.В.Васильев, Н.Н.Цыбиков. М.: Медицина, 1989. -320 с.
72. Кузник Б.И. Цитомедины / Б.И. Кузник, В.Г.Морозов, В.Х.Хавинсон. С.-Петербург: Наука, 1998. 310 с.
73. Кузник Б.И. Физиология и патология системы крови / Б.И. Кузник //1031. Чита: Поиск, 2001. 486 с.
74. Курцинь О.Я. Инструкция по приготовлению основной диеты для крыс / О.Я.Курцинь. Институт питания АМН ССР. М, 1952". - 5 с.
75. Лавров Б.А. Роль витаминного фактора в установлении реактивных способностей организма / Б.А.Лавров. Современные вопросы медицинской науки.-М. 1957. - С. 26-27
76. Лавров Б.А. Содержание лимонной кислоты в крови у крыс при длительной даче больших доз витамина Д / Б.А.Лавров, Е.Л.Терентьева // Вопросы питания. 1963. -№3. - С. 68-72.
77. Лукомский П.Е.Терапевтическое применение некоторых витаминов у больных коронарным атеросклерозом / П.Е.Лукомский / Материалы 4-й научн. Сессии НИИвитаминологии. М. - 1961. - С.99-100.
78. Лукомский П.Е.Лечение больных атеросклерозом некоторыми витаминами / П.Е.Лукомский / Труды 7-го съезда терапевтов УССР. — Киев, 1962. -С. 505-511.
79. Луцюк Н.Б. Влияние рационов с различным содержанием витамина А на уровень йода в щитовидной железе крыс при введении 6-метилтиоурацила /Н.Б.Луцюк // Вопросы питания: 1961. - №5. С. 40-45
80. Максимович Я.Б. О неспецифической активности никотиновой кислоты: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Львов, 1949. - 22 с.
81. Марзоев А.И. Перекисное окисление липидов сыворотки крови кроликов с различным тиреоидным состоянием / А.И.Марзоев, Г.И.Клебанов, М.П.Ше-рстнев, А.П.Андрющенко // Вопр. мед. химии. -1985. 31. — №2. - С. 14-17.
82. Марзоев А.И. Тиреоидные гормоны и активность фосфолипазы митохондрий печени / А.И.Марзоев, Андрющенко, Ю.А,Владимиров // Бюлл. эксперим. биол. и мед. 1983. - 96. -№12. - С.45-46.104
83. Марченко A.JI. Актуальные проблемы гемостаза в клинической практике / A.JI. Марченко // Актуальные проблемы гемостаза в клинической практике. -М., 1987.-137 с.
84. Мережинский М.Ф. Механизм действия и биологическая роль витаминов / М.Ф.Мережинский//Минск, 1959. 193 с.
85. Миронова К.А. Влияние витамина С и Р на некоторые факторы свертывания крови и резистентность сосудистой стенки при ревматических поражениях сердечно-сосудистой системы / К.А.Миронова / В кн. Ревматизм. -Одесса, 1961. С. 270-272.
86. Мищенко В.П. Перекисное окисление липидов, антиоксиданты и свертываемость крови / В.П.Мищенко // Актуальные проблемы гемостазиологии. М.: Наука, 1981. - С. 153-157.
87. Мищенко В.П. Перекисное окисление липидов, антиоксиданты и гемостаз /В.П.Мищенко, И.В.Мищенко, О.И.Цебржинский // Полтава: АСМИ (Украина). 2005. - 159 с.
88. ЮО.Момот А.П. Методика и клиническое значение паракоагуляционного105фенантролинового теста / А.П.Момот, В.А.Елыкомов, З.С.Баркаган // Клин, лабор. Диагностика. 1999. - №4. - С. 17-20- 4. - С. 17-20.
89. Мысник О.Ф. Гемостаз и перекисное окисление липидов у больных с тяжелой формой ДТЗ / О.Ф. Мысник // Матер, научн. конф. «Актуальные проблемы теоретической и прикладной медицины». Ижевск, 2001. - С. 125-127.
90. Мысник О.Ф.Зависимость гемостатических сдвигов при разных тирео-идных состояниях от интенсивности процессов перекисного окисления липидов: Автореф. дисс. . к.б.н. Тюмень. - 20016. - 22 с
91. Никитин Ю.И. Влияние витамина Е на липоиды и свертываемость крови у больных атеросклерозом /Ю.И. Никитин // Вопросы питания. 1962 а. -6. — С. 22-26.
92. Никитин Ю.И. Патология кровообращения и дыхания / Ю.И. Никитин // Кемерово, 1962 б.-т. 1.-С. 130-134.
93. Овчинников Ю.А. Биоорганическая химия / Ю.А.Овчинников // М.:Просвещение, 1987. 815 с.
94. Юб.Папаян Л.П. Современное представление о механизме регуляции свертывания крови / Л.П. Папаян // Тромбоз, гемостаз и реология. 2003. - №2 (14).-С. 7-11.
95. Перепеч Н.Б. Ангиопротекция в лечении больных с ишемической болезнью сердца / Н.Б. Перепеч // Дисфункция эндотелия. Причины, механизмы, фармакологическая коррекция. — С.-Петербург. 2003. - С.39-54
96. Полякова В.А. Гемокоагуляционные сдвиги у больных фибромиомой матки и их коррекция комплексом витаминов А, Е, С, Р и РР / В.А.Полякова,, В.Н.Кожевников, Т.А.Фильгус и др. // Метод, рекомендации для врачей акушеров-гинекологов. — Тюмень, 1994 а. -11 с.
97. Полякова В.А. Патогенетическое обоснование применения антиокси-дантов для профилактики тромбогеморрагических нарушений при беременности, родах, в послеродовом и послеоперационном периодах: Автореф.дисс. докт. мед. наук. М., 1994. - 43 с.106
98. ПО.Пустыннйков // Глава в монографии: Гемостаз при оперативных вмешательствах в гинекологической практике. М. «Медицинская книга», 2006. -С. 12-16.
99. Пустынников А.В. Взаимодействие тромбин-фибриноген, толерантность к тромбину и липидпероксидация зависят от обеспеченности витамином Е / А.В.Пустынников, Е.М Шаповалова, М.К.Умутбаева // Современные наукоёмкие технологии. 2007.- 11. - С. 98-99.
100. Ругая А.Е. Влияние витамина Е на уровень общего холестерина и липо-протеинов крови у больных атеросклерозом / А.Е.Ругая // Сб. научн. работ 2-й Рижской горбольницы. Рига. 1962. - 2. - С. 131-133.
101. Рудницкая Т.А. Частота, значимость и коррекция гипергомоцистеине-мии при сахарном диабете 2 типа: Автореферат дисс. . к.м.н. Барнаул, 2003. -22 с.
102. Пб.Рысс С.М. Витамины (физиологическое действие, обмен, терапия). Ленинград: Медицинская литература. — 1963. — 376 с.
103. Согрин Э.Н. Гемостаз и липопероксидация при аденоме простаты / Э.Н.Согрин // В кн. Перспективы развития амбулаторно-поликлинической помощи в Тюмени. Тюмень: Академия, 2004. С.-48-49.
104. Согрин Э.Н. Продукты взаимодействия тромбин-фибриноген и пере-кисное окисление липидов при аденоме предстательной железы: Автореф. дисс. . канд. мед. наук. Тюмень, 2005. -22 с.
105. Соловьев В.Г. Роль тромбоцитов, эритроцитов и сосудистой стенки в регуляции тромбинемии: Автореф. дисс. д. м. н. Челябинск, 1997.- 44 с.
106. Сулкарнаева Г.А. Комплексный антиоксидант селмевит в коррекции нарушений свертывания крови при диффузном токсическом зобе / Г.А.Сул-карнаева // Аллергология и иммунология. 2004 а. - 5. - №3. - С. 505-506.
107. Сулкарнаева Г.А. Непрерывное внутрисосудистое свертывание крови и липопероксидация при некоторых нарушениях функции щитовидной железы / Г.А.Сулкарнаева // Успехи современного естествознания. 2004 б. - №6. -С. 76-76
108. Тоя-Колесникова М.К. Витамин А и каротин крови при сердечнососудистых заболеваниях: Автореф дисс. . канд. мед. наук. Львов, 1961.-24 с.
109. Умутбаева М.К. Связь липопероксидации с гемостазом / М.К.Умут-баева // Глава в кн. «Связь гемостаза с перекисным окислением липидов». М.: Медицинская книга, 2003. — С. 41-50.
110. Умутбаева M.K. О связи между постоянным внутрисосудистым свертыванием крови и липопероксидацией / М.К.Умутбаева // Успехи современного естествознания (М.). 2004. - 2. - С. 37.
111. Урбанюк К.Г. Свертываемость крови при атеросклерозе / К.Г.Урбанюк // Клин, медицина. -1961.-5. С.44-48.
112. Урбанюк К.Г. Никотиновая кислота в диагностике предтромботических состояний / К.Г.Урбанюк // Вопр. мед. химии. 1962. - №1. - 298-303.
113. Фатеев A.B. Влияние комбинации анестетиков на состояние липидпер-оксидации крови у больных ИБСС при оперативном лечении: Автореф. дис. . к.м.н. Тюмень, 2006. -22 с.
114. Чазов Е.И.Тромбозы и эмболии в клинике внутренних болезней / Е.И.Чазов. Москва-Варшава: Медицина, 1966. -263 с
115. Шаповалов П.Я. Связь между влиянием витаминов на гемостаз и их ан-тиоксидантной активностью / П.Я.Шаповалов, Г.А.Сулкарнаева С.В.Минев-цев и др. // Медицинская наука и образование Урала. 2005. 3. - С. 11-13.
116. Шаповалова Е.М., Шаповалов П.Я., Ткаленко И.А.и др. Влияние на ге-мокоагуляцию донатора метальных групп витамина Bi5 (пангамата) // в монографии «Витамины, внутрисосудистое свертывание крови и липидперок-сидация». Москва: Медицина, 2006. С.51-55.
117. Шаповалова Е.М. Витамины с антиоксидантными свойствами и гемостаз /Е.М.Шаповалова, А.Ш.Бышевский, Л.А.Васильев и др. // Вестник Уральской медицинской академической науки. 2009. - 2(25). - С. 109-1110.
118. Шаповалова Е. М. Механизмы гемостатических сдвигов при отсутствии, дефиците и избытке витаминов с антиоксидантными свойствами в рационе питания (экспериментальное исследование): Автореф. дисс. . докт. биол. наук. Челябинск, 2010. 47 с.
119. Шараев П.Н. Витамины и здоровье / П.Н. Шараев. Ижевск: «Экспертиза». 2004. - 108 с.
120. Широков В.Ю. Значение нарушений внутрисосудистого компонента микроциркуляции в патогенезе хронического генерализованного пародонтита у больных с патологией желудочно-кишечного тракта и в динамике лечения: Автореф. дис. . д. м. н. Саратов, 2009. 42 с.
121. Шитикова А.С. Тромбоцитарный гемостаз / А.С.Шитикова. Санкт-Петербург, 2000. 222 с.
122. Ярочкин B.C. Патогенез острой кровопотери в зависимости от объема и особенности ее л ечения /В. С .Яр очкин // Патофизиология крови. Экстремальные состояния. М.: Триада, 2004. - С.59-66.
123. Abiaka С. Serum micronutrient and micromineral concentrations and ratios in healthy Omani subjects / C. Abiaka, M.Al-Tobi, R. Joshi // Med. Princ. Pract. -2008. №17(4). - P. 334-339.
124. A1-Azemi M.K. / M.K.Al-Azemi; A.E.Omu, T.Fatinikun e.a. // Reprod. Biomed. Online. 2009. - №19(4). -P: 583-590
125. Antoniades E. Effects of antioxidant vitamins С and E on endothelial function and thrombosis/fibrinolysis system in smokers. / E. Antoniades, D.Tousoulis, C.Tentolouris e.a. // Thromb. Haemost. 2003. - №89(6). - P.990-995.
126. Antonio-Garcia M.T. Toxic effects of perinatal lead exposure on the brain ofrats: involvement of oxidative stress and the beneficial role of antioxidants /110
127. M.T.Antonio-Garcia, E.L.Masso-Gonzalez // Food. Chem. Toxicol.- 2008. № 46(6).-P. 2089-2095.
128. Baer S. The use of vitamin E heart disease / S.Baer, W.J. Heine // Am. J. med. Sci. 1945. - 215. - P. 543-547.
129. Bauer N. Reference intervals and method optimization for variables reflecting hypocoagulatory and hypercoagulatory states in dogs using the STA Compact automated analyzer/ N.Bauer, O.Eralp, A.Moritz // J. Vet. Diagn. Invest. 2009. -21(6).-P. 803-814.
130. Belch J.J.F. Platelets and oxygen free radical / J.J.F. Belch // Platelets. -1992.-3.-4.-P. 175-180.
131. Bernhard H. Calibrated automated throbin generation in paediatric patients with inflammatory bowel disease / H.Bernhard, A.Deutschmann, B.Leschnik e.a.// Hamostaseologie. 2009. - Suppl. 1. - S. 90-93.
132. Blinc A. Pharmacological prevention of atherothrombotic events in patients with peripheral arterial disease / A.Blinc, P.Poredos // Eur. J. Clin. Invest. 2007. -№ 37 (3). - P. 157-164.
133. Bottiglioni E. Influença esplicata, delle vitamiina E sullattivita epariniica del plasma in vivo; studio clinico / E.Bottiglioni, C. Facchini // Clin. Terap. 1956. -№10.-5. — P. 571-561.
134. Brandao R. Antioxidants and metallothionein levels in mercury-treated mice / R.Brandao, F.W.Santos, MiFarina e.a. // Cell. Biol. Toxicol. 2006. - 22. -№ 6. -P. 429-438.
135. Byshevsky A.S. The connection between lipid peroxidation and thrombin1111. A r Afibrinogen interaction / A.S.Byshevsky, A.Y.Rudzevich, A.V. Shidin e.a. / Euros pean J. of Natural History // 2007. -2. P.35-42.
136. Byshevsky A.Sh. Antioxidant complex selmevit in hemostasis correction at some uterine surgeries (report III) / A.SK.Byshevsky, S.L.Galyan, I.V.Zvereva e.a. // European J. of natural history. 2008a. 3. - P. 10-15.
137. Byshevsky A.Sh. Plazmatic level of thrombin-fibrinogen interaction markers is connected with lipid peroxidation in thrombocytes /A.Sh. Byshevsky, S.L.Galyan, I.V.Zvereva e.a. // European J. experimental education. — 20086. №3. - p. 22-27.
138. Campbell J.K,Tomato phytochemicals and prostate cancer risk / J.K Campbell, K. Canene-Adams, B.L.Lindshield e.a. // J. Nutr. 2004. - 134. - 12 (Suppl). - S. 3486S-3492.
139. Carcamo J.M. Vitamin C enters mitochondria via facilitative glucose transporter 1 (Glutl) and, confers mitochondrial protection against oxidative injury /J.M.Carcamo, D.W.Golde // FASEB J. 2005. - 19. - 12. - P: 1657.
140. Ghaurasia S.S. Protective effects of vitamin E against lead-induced deterioration of membrane associated type-I iodothyronine 5'-monodeiodinase (5'D-I) activity in male mice / S.S. Chaurasia, A.Kar // Toxicology. 1997. -124. - №3. - P. 203-209:
141. Cheng M:L. Effect of acute myocardial infarction on erythrocytic glutathione peroxidase 1* activity and plasma vitamin E levels / M.L.Cheng, C.M.Chen, H.Y.Ho e.a. / Am. J. Cardiol. 2009: - 15. - 103(4). - P.471-475.
142. Dabkowski E.R. Diabetic cardiomyopathy-associated dysfunction in spatially distinct mitochondrial subpopulations / D.E. Dabkowsk, C.L. Willi1121amson,V.C. Buko e.a. // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 2009. - 296(2). - S. 359-369.
143. Dam H. Uneffectivenes of vitamin E in preventing cholesterol deposition in aorta / H. Dam // J.Nutrition. 1944. - 28. - 289-285.
144. Demir T. Levothyroxine (LT4) suppression treatment for benign thyroid nodules alters coagulation / T.Demir, B.Akinci, A.Comlekci A. e.a. // Clin. Endocrinol. (Oxf). 2009. - 71(3). - P.446-450:
145. DeRose J J. Retinoic acid suppresses intimal'hyperplasia and prevents vessel remodeling following arterial injury / JJ.DeRose, J.Madigan, J.P.Umana e.a. // Cardiovasc. Surg. 1999. - 7(6). - P. 633-639;
146. Desai A. Development of atherosclerosis in Balb/c apolipoprotein E-deficient mice /A.Desai, Y.Zhao, J.S.Warren// Cardiovasc. Pathol. 2008. - 17(4). -P.233-140.
147. Erdeve O. A breast-fed newborn with megaloblastic anemia-treated with the vitamin B12 supplementation of the mother / O. Erdeve, S. Arsan, B.Atasay e.a. // J: Pediatr. Hematol. Oncol. 2009. - 31(10). -P.7 3-765.
148. Falanga A. All-trans-retinoic acid and bleeding/thrombosis / A.Falanga, M.Marchett, T.Barbui // Pathophysiol. Haemost. Thromb. — 2003. 33. - Suppl 1. -P.19-21.
149. Fava M. Folate in depression: efficacy, safety, differences in formulations,113and clinical issues / M.Fava, D.J.Mischoulon // Clin. Psychiatry. 2009. - 70. -Suppl.-5.-P. 12-17.
150. Fogelsang G. Effect of vitamin E in coronary heart disease / G.Fogelsang, Shute E.V. //Nature. 1946. - 157. - 3997. - P: 772-772.
151. Gawaz M.P. Blood Platelets / M.P.Gawaz. Stuttgart; New York: Time, 2001. -190 p.
152. Gidlof A.C., P.Ocaya, P.S.Olofsson PS e.a. // J. Vase. Res. 2006. 43(4). -P.392-398.
153. Haszon I. Platelet aggregation, blood viscosity and serum lipids in hypertensive and1 obese children / I.Haszon, F. Papp, J.Kovacs e.a. // Eur. J. Pediatr. 2003. - 162.-P, 385-390.
154. Hawk P.W. Practical Physiological Chemistry / P.W.Hawk // Pract. Physiol. Chem. Phyladelphia. - 1923. - P.953
155. Hoffer A. Nicotinamide and neutrophilia / A. Hoffer // Nat. Med. 2010. -16(1). P.23.
156. Hofstra J; J. Nebulized Anticoagulants Limit Pulmonary Coagulopathy, But Not Inflammation, in a Model of Experimental Lung Injury / J.J.Hofstra, A.P.Vlaar, A.D.Cornet e. a. // J Aerosol Med Pulm Drug Deliv. 2010.-P. 233.
157. Hooda S. Effects of supplemental vitamin E in diet of Japanesequail on male reproduction, fertility and hatchability / S.Hooda, P.K.Tyagi, P.K.Mohan J. e.a. // Br. Poult Sci. 2007. - 48 (1). - P.104-110.
158. M. Ishaq , K.A. Kazmi I I Nutr. Metab. Cardiovasc. Dis. 2005. - №15(2). - P. 100-108.
159. Kim J. Intakes of vitamin A, C, and E, and beta-carotene are associated with risk of cervical cancer: a case-control study in Korea / O.Kim, M.K.Kim, J.K.Lee e.a. //Nutr. Cancer. 2010. - 62(2). - P. 181-189.
160. Kimura H. A case of effective treatment with UFT/LV chemotherapy for para-aortic lymph node metastasis from colonic cancer 8 years after colectomy /H.Kimura, H.Takamura, K.Watanabe // Gan To Kagaku Ryoho. 2009.-36(11). -P.1919-1922':.
161. Kojima S. Regulation of tissue-associated fibrinolysis by retinoids: mechanism and consequence of retinoid-PA-TGF-beta system / S. Kojima // Seikagaku.— 1997. 69(2). -P; 104-108. •
162. Kommerel B. Uber die Verenderungen der Blutgerinnung nfch Gaben der Vitamin A, E, und^Be / BiKommerelvH:DiBerger^^//Klin; Wshr. 1960. - 30, - 3. -3. S. 134-137.
163. Lidegaard O. / Br. J.' Obstet. Gynecol. 1995. - 102. - P. 153 - 159.
164. Lomtadze M.e.a. Study of intravascular coagulation activation markers in patients with visccral leishmaniasis / M.Lomtadze, M.Khochava, I.Shalamberidze:e.a. II Georgian Med. News. 2005. (7-8). - P.47-50.115
165. Loscialpo D. Azzione della vitamina A sulla fibrinolysis emetica / < D.Loscialpo // Boll, soc. Ital. biol sperim. 1959. - 35. - P.310-312.
166. Luomala M. High plasma levels of CD40 are associated with low coenzyme ' Q andvitaminE content of low-density lipoprotein in healthy men / M. Luomala,
167. R.Laaksonen, T.Janatuinen- e.a. // Scand. J. Clin. Lab. Invest. 2007. - 67 (2). -P.l 15-122.
168. Macgraw J. Regulation des temps de saignement et de coaguletic / J. Mac-graw // Laval med. 1960 a. - 29. - 3. - P. 355-405.
169. Macgraw J. Regulation des temps de saignement et de coaguletic / J. Mac-graw // Laval med. 1960 b. - 29. - №3. - P. 524-552.
170. Mahmood A. Prevalence of hyperhomocysteinaemia, activated protein C resistance and prothrombin gene mutation in inflammatory bowel disease /A.Mah-mood, J. Needham, J. Prosser // Eur. J. Gastroenterol. Hepatol. 2005. - 17(7). - 73A- P. 9-44. %
171. Martin R. Placental calcium transporter (PMCA3) gene expression predicts intrauterine bone mineral accrual / Martin R. // Bone. 2006. - 6. - P:3-7.
172. Masunaga R. Alteration of platelet aggregation in patients with thyroid'disorders / R.Masunaga, A.Nagasaka, Nakai e.a. // Metabolism. 1997. - 46. -10. P. 1128-1131.
173. Maurer L.M. Emerging roles of fibronetin in thrombosis / L.M.Maurer, B.RTomasini-Johansson, D. F.Mosher // Thromb. Res. 2010. - Jan 28. Epub ahead of print.
174. Mazzetti G.M. Sullazione anticoagulante in vitro: delle a-tocoferolo / G.M. Mazzetti // Acta Vitam. (ital.). 1956. - 5. - P. 2.
175. Meurisse M. Evaluation of the ultracision ultrasonic dissector in thyroid surgery / M.Meurisse, T.Defechereux, S.Mawweja // Ann. Chir. 2000. - 125. - №5.116- Р.468-472.
176. Moriishi М. Peritoneal dialysis patients with high effluent fibrin degradation products/ M.Moriishi, H.Kawanishi, S.Tsuchiya // Adv. Perit. Dial. 2009. - №25. . -P.41-44.
177. Morishita E. Increased plasma levels of free tissue factor pathway inhibitor in patients with Graves disease / E.Morishita, T.Hashimito, H.Asakura e.a. // Thromb. Haemost. 1998. - 79. - 5. P. 919-923.
178. Nadir Y. Association of homocysteine, vitamin В12, folic acid, and MTHFR C677T in patients with a thrombotic event or recurrent fetal loss / Y.Nadir., R Hoffinan, B.Brenner// Ann. Hematol. 2007. - 86 (1). - P. 35-40.
179. Niewiarowski S. Krzepnencia krwi / Warschwa. 1957. - 157 s.
180. P.W.Hawk, B.L.Ozer (цитируется по А.Ш.Бышевский, 1978).
181. Papageorgiou N. Is fibrinogen a marker of inflammation in coronary artery disease? / N.Papageorgiou, D.Tousoulis, G.Siasos, G, C.Stefanadis // Hellenic. J. Cardiol. -2010. 51(1). -P.l-9.
182. Park H.W.Disseminated intravascular coagulation as a complication of ra-diofrequency catheter ablation of atrial fibrillation / H.W.Park, S.H.Cho; K.H.Kim e.a. //J. Cardiovasc Electrophysiol. -2005. 16(9). - P. 1011-1013.
183. Pasquali M.A. Vitamin A supplementation for different periods alters oxidative parameters in lungs of rats / M.A.Pasquali; D.P.Gelain, M.R. de Oliveira e.a.
184. J. Med. Food. -2009. 12(6). - P. 1375-1380.117219iPaul E.M. Blood coagulation in venous thrombosis / E.M.Paul, J.C.Paterson, J.A.Maclachlin// Canad. Med. Ass. J. 1954. -70. - 50. - P. 551-555.
185. Paul E.M. Blood coagulation in venous thrombosis / E.M.Paul, J.C.Paterson, J.A;Maclachlin // Cañad; Medí Ass. J; — 1954 6; -70; 50; — PI 556-557." '221 .Pickap & Selye (цитируется по Бышевскому А.Ш., 1978).
186. Pool I.C.E. The effect of hypervitaminosis A on blood coagulation / I.C.E.P00I // J. E.P. Physiol. 1958. 43. - 4. - P. 427-437.
187. Pretorius E. Influence of acceleration voltage on scanning electron microscopy of human blood platelets / E.Pretorius // Microsc. Res. Tech. 2010. - 19. -73(3).-P. 225-228.
188. Quezada E. Synthesis and Vasorelaxant and Platelet Antiaggregatory Activities of a New Series of 6-Halo-3-phenylcoumarins / E.Quezada, G.Delogu, C.Picciau e.a. // Molecules. 2010: - 12; - 15(1). - 270-279;
189. Ross A.Bi Adherence to a traditional lifestyle affects food and nutrient intake among modern Swedish Sami. / A.B.Ross, A.Johansson, V.Vavruch-Nilsson e.a. // Int. J; Circumpolar. Health. 2009. - 68(4). - P.372-385.
190. Sanderson N.A. Anemia management: a story of sleuthing / N.A.Sanderson // Nephrol. Nurs. J. 2009. 36(6). - P.663-666.
191. Scelton F; Antipurpuricactiom of alfa-tocoferol / F.S'celton, E.Shute, Hi G.Scinner// Sci. 1946; - 103. - P. 766-769.
192. Segers O; Thrombin generation as an intermediate phenotype for venous thrombosis / O.Segers, R. van Oerle, H.Cate e.a.// Thromb; Haemost. 2010. -№103(1).-P.l 14-122.
193. Shirakawa A.K. 1,25-dihydroxyvitamin D3 induces CCR10 expression- in terminally differentiating human B- cells / A.K. Shirakawa, D: Nagakubo, K.Hieshima e.a. K, Nakayama T, Jin Z, Yoshie e.a. // J. Immunol. 2008. - 1. -№180(5); -P. 2786-2795.
194. Shute E. Periferal thrombosis tressted with alfa-tocoferol / E.Shute, W.Shute //Am. J. of Surg. 1955.88. - P.75-77.231 .Stockley C.J. / The utility of routine D-dimer measurement in syncope /118
195. CJ.Stockley, M.J.Reed, D.E.Newby e.a. // Eur. J. Emerg. Med. 2009. - 16(5). -P.256-260.
196. Suk Danik J. Lipoprotein(a), hormone replacement therapy, and risk of future cardiovascular events /Suk Danik J, Rifai N, Buring JE, Ridker PM. // J. Am. Coll. Cardiol. 2008. - 8. - 52(2). -P. 124-131.
197. Suskind D.L. Nutritional deficiencies during normal growth / D.L.Suskind // Pediatr. Clin. North. Am. 2009. - 56(5). - P. 1035-1053.
198. Tanka-Salamon A. Proteolytic resistance conferred to fibrinogen by von Willebrand factor / A.Tanka-Salamon, K.Kolev, P.Machovich, E.Komorowicz // Thromb. Haemost. -2010. 1. - 103(2). -P.291-298.
199. Terzic-Avdagic M. Correlation of coronary disease in patients with diabetes mellitus type 2 / M.Terzic-Avdagic // Med. Arh. 2009. - 63(4). - P.191-193.
200. Tomoda J. Effect of tocoferol in bloodcogulation / J.Tomoda // Vitamins. — 1963. 27. - 6. - P.442-446 (РЖБ, 1964. - 7. - реферат № 7H171). 1 b
201. Tunali T. Melatonin reduces oxidative damage to skin and normalizes blood coagulation in a rat model of thermal injury / T.Tunali, G.Sener, A.Yarat, N.Emekl // Life Sci. 2005. - 28. - 76 (11). - P. 1259-1265.
202. Vavilova T.V. Evaluation of D-dimer in outpatients: clinical value and specific features / T.V.Vavilova, Ju.K.Vorob'eva, I.J.Krupotkina e.a. // Klin. Lab. Di-agn. 2009. - (11). - P.42-46.
203. Venditti P. Antioxidant-sensitive shortening of ventricular action potential in hyperthyroid rats is independent of lipid peroxidation / P.Venditti, T.De Leo, S.Di Meo // Mol. Cell. Endocrinol. 1998. - 142. -1.-2. P. 15-23.
204. Verma R.J. A study on toxicity of gasoline and GM-10 on liver of mice and it's amelioration by black tea extract /RJ.Verma, M.Dave, N.Mathuria // Acta. Pol. Pharm. -2008. -65(5). 601-605.
205. Vibo R. Acute phase proteins and oxidised low-density lipoprotein in association with ischemic stroke subtype, severity and outcome / R.Vibo, J.Korv, M.Roose e.a. // Free Radic. Res. 2007. - 41 (3). - P.282-287.
206. Von Kanel R. Sleep and biomarkers of atherosclerosis in elderly Alzheimer caregivers and controls / R. von Kanel, S. Ancoli- Israel, J.E. e. a. // Gerontology. -2010.-56(1).-P. 41-50.
207. Walingo M.K. Discriminant function analysis for tracing successful factors associated with livestock projects for nutrition improvement in western Kenya / M.K.Walingo // East. Afr. J. Public Health. 2009. - 6. - Suppl. (1). - P.30-36
208. Weiss C. Effects of supplementation with alpha-lipoic acid on exercise-induced activation of coagulation / C.Weiss, A.Bierhaus, P.P.Nawroth e.a. // Metabolism. 2005. - 54(6). - 8. - P.15-20.
209. Wu Y. Pyridoxine increases nitric oxide biosynthesis in human platelets. / Y.Wu., Y.Liu, Y.H. e.a. // Int. J. Vitam. Nutr. Res. 2009. - 79(2). - P.95-103.
210. Zierler K.L. / On the antithrombic and antiproteolytic activity of a-tokoferol / K.L. Zierler, D.Grob, J.L.Lilienthal // AmJ. Physiol. 1948, - 153. - 1. - P. 127132.
-
Щепетева, Ольга Константиновна
-
кандидата медицинских наук
-
Тюмень, 2011
-
ВАК 03.01.04
- Влияние витамонов A, E, C и P на липидпероксидацию, плазменное содержание маркеров взаимодействия тромбин-фибриноген и толерантность к тромбину (экспериментальное исследование)
- Влияние ниацина на вызываемые ацетилсалициловой кислотой сдвиги коагулоактивности тромбоцитов, непрерывного внутрисосудистого свертывания крови и толерантности к тромбину (экспериментальное исследован
- ВЛИЯНИЕ ДЕФИЦИТА И ИЗБЫТКА ТОКОФЕРОЛА НА ИНТЕНСИВНОСТЬ ВНУТРИСОСУДИСТОГО СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ И ТОЛЕРАНТНОСТЬ К ТРОМБИНУ (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)
- Механизмы гемостатических сдвигов при отсутствии, дефиците и избытке витаминов с антиоксидантными свойствами в рационе питания
- Роль тромбоцитов, эритроцитов и сосудистой стенки в регуляции тромбинемии при активации перекисного окисления липидов
