Влияние ниацина на вызываемые ацетилсалициловой кислотой сдвиги коагулоактивности тромбоцитов, непрерывного внутрисосудистого свертывания крови и толерантности к тромбину (экспериментальное исследован

Самойлов, Максим Алексеевич

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Влияние ниацина на вызываемые ацетилсалициловой кислотой сдвиги коагулоактивности тромбоцитов, непрерывного внутрисосудистого свертывания крови и толерантности к тромбину (экспериментальное исследован
ВАК РФ 03.01.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Влияние ниацина на вызываемые ацетилсалициловой кислотой сдвиги коагулоактивности тромбоцитов, непрерывного внутрисосудистого свертывания крови и толерантности к тромбину (экспериментальное исследован"

На правах рукописи

005017455

Самойлов Максим Алексеевич

ВЛИЯНИЕ НИАЦИНА НА ВЫЗЫВАЕМЫЕ АЦЕТИЛСАЛИЦИЛОВОЙ

КИСЛОТОЙ СДВИГИ КОАГУЛОАКТИВНОСТИ ТРОМБОЦИТОВ, НЕПРЕРЫВНОГО ВНУТРИСОСУДИСТОГО СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ И ТОЛЕРАНТНОСТИ К ТРОМБИНУ (экспериментальное исследование)

03.01.04 -биохимия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

10".: ~ —>

Уфа - 2012

005017455

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Тюменская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития Российской Федерации

Научный руководитель

доктор биологических наук Шаповалова Елена Михайловна Официальные оппоненты

профессор кафедры обшей гигиены с экологией с курсом гигиенических дисциплин медико-профилактического факультета ГБОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздравсоцразвития России, доктор медицинских наук, профессор Шакиров Дамир Фаизович

Заведующий кафедрой биохимии ГБОУ ВПО «Омская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России, доктор медицинских наук, профессор Высокогорский Валерий Евгеньевич

Ведущая организация

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Московский государственный медико-стоматологический университет» Минздравсоцразвития Росии

Защита состоится «Ж>............. 2012 г в часов на заседании диссертационного совета Д 208.006.03 при Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионально образования «Башкирский государственный медицинский университет» Минздравсоцразвития Российской Федерации по адресу: г. Уфа, ул. Ленина, 3.

С авторефератом можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздравсоцразвития России г. Уфа, ул. Ленина, 3.

Автореферат разослан «. ¿4> мфш 2012 года

Ученый секретарь Диссертационного совета доктор медицинских наук, профессор

Мирсаева Г.Х.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Анализ публикаций касающихся влияния ниацина и аспирина на гемостаз, позволил выделить следующие основные положения, которые с нашей точки зрения характеризуют эти функционально разные соединения по их отношению к важной системе жизнеобеспечения свертывания крови.

Среди ряда причин, отягощающих распространенные заболевания, нередко приводящие к летальным исходам, ведущее место занимают тромбоэмболические осложнения [Б.И.Кузник и др., 1979; З.С.Баркаган, 1988; И.Н.Бокарев, 2002; D.Feng е. а.., 2000; M.R. Lassen е.а., 2010; S.M. Schellong е.а., 2010]. Ускоренный тромбино-генез или снижение толерантности к тромбину (ТкТР) - непременное условие реализации тромбоэмболий [Д.М.Зубаиров, 1976; К.М.Лакини др., 1981; А.Ш.Бышевский и др., 1990; В.П.Балуда и др.,1995; Б.И.Кузник и др., 2010; H.M.Spronk е.а., 2003; К .Talbot е.а., 2010; R.Cardigan е.а., 2011].

Доказано, что ТкТР зависит от важной биохимической составляющей гемостаза уровня антитромбинов и ингибиторов самосборки фибрина [А.Ш.Бышевский и др., 1987, 1990; Д.М.Зубаиров, 2000], от состояния тромбоцитов, являющихся одним из инициаторов свертывания и участником образования первичного тромба [А.Д.Макацария, 1997; И.А.Дементьева, 1998; С.А.Шитикова, 2000; М.К.Умубаева, 2004; Р.Г.Алборов, 2006; А.Ш.Бышевский и др., 2005; L.Green е.а., 2010].

Убедительно показано, что интенсивность непрерывного внутрисосудистого свертывания крови (НВСК), отражающая степень напряженности в гемостазе зависит от уровня в крови продуктов взаимодействия тромбин-фибриноген [Д.М.Зубаиров и др., 1989; А.Ш.Бышевский и др., 2003, 2006; И.Н.Бокарев, 2000, 2002; R.F.A.Zwaal, 1982; R.F.A.Zwaal е.а., 1992; М. Shara е.а., 2007; R.Cardigan е.а., 2011], и что сдвиги уровня этих продуктов определяют вероятность развития гипер- или гипокоагуляции [А.П.Момот, 1990; Т.А.Батрак, 1999; И.Н.Бокарев, 2000, 2002; М.К.Умутбаева, 2003, 2005; S.Lison е.а., 2011].

Существует зависимость между коагуляционной активностью тромбоцитов и скоростью липидпероксидации (ЛПО), что указывает на возможность изменять состояние гемостаза в организме дополнительным введением антиоксидантов [С.Л.Галян и др., 1997; Е.А.Бунакова и др., 1998; B.Engelmann е.а., 2010; S. Ji. е.а., 2011]. Показано, что витамины-антиоксиданты, назначаемые в дозах, превышающих потребность, сдерживают активацию тромбоцитов и тормозят НВСК при ги-пертромбинемии и увеличивают ТкТР [П.Я.Шаповалов и др. 1999; A.Sh.Bishevsky е.а., 2008, 2009; S.K. Dasea., 2010].

Установлено, что эффекты соединений, уменьшающих способность тромбоцитов к агрегации, при одновременном введении с антиоксидантами усиливаются. Следовательно, можно ожидать, что совместное применение антиагрегантов с антиоксидантами выявит как минимум, суммацию эффектов, позволяющую уменьшать дозу антиагрегантов.

Многие из антиагрегантов обладают заметными побочными эффектами [M.Camacho, L Vila, 2000; A.Ciccone е.а., 2000; P.G. Steg е.а., 2010; R. Gao, X.Li, 2010]. Показано, что из антиагрегантов ацетилсалициловая кислота (АСК) чаще

других используют в лечении заболеваний с наклонностью к тромбофилии или кровоточивости [Е.Л.Насонов и О.В.Лебедева, 1996; П.П. Филиппов, 1998; M.Homoncik е.а., 2000; C.Patrono, B.Rocca , 2008; Ruiz-G. Irastorza e.a., 2010: S.Mallonee e.a., 2010; S.R.Mehtaea., 2010]. ACK по длительности и широте использования занимает в медицинской практике первое место среди лекарственных препаратов этого типа [J.W.Suh е.а., 2011].

В совокупности эти сведения определили цель предпринятого нами исследования, и обусловили выбор объектов и алгоритм действий для её достижения. Цель исследования. Установить характер и механизм влияния ниацина и ацетилсалициловой кислоты, вводимых порознь и совместно, на коагулоактивность тромбоцитов, непрерывное внутрисосудистое свертывание крови, фибринолиз и толерантность к тромбину.

Задачи исследования

1. Охарактеризовать у крыс-самцов, получающих сбалансированный по нутриен-там рацион питания, эффекты АСК на общую коагуляционную активность тромбоцитов, их способность к агрегации и к реакции высвобождения, на непрерывное внутрисосудистое свертывание крови (НВСК) и толерантность к тромбину (ТкТР).

2. Изучить те же показатели при отсутствии ниацина в рационе и при его избытке в количествах, адекватных лечебным дозам.

3. Выявить, как влияет АСК в дозе Ш50 при избытке ниацина на коагулоактивность тромбоцитов, их способность к агрегации и реакции высвобождения, на НВСК, на ТкТР и фибринолиз.

4. Установить, как влияет АСК в дозе DI50 при избытке ниацина на те же свойства тромбоцитов, на НВСК, на ТкТР и фибринолиз у животных, подвергшихся воздействиям, инициирующим гипертромбинемию.

5. Изучить выживаемость животных при внутривенном введении тромбина в дозе DL50 при предварительном введении ниацина и АСК порознь и совместно.

6. Провести анализ корреляции между сдвигами коагуляционной оактивности тромбоцитов, их способности к агрегации и к реакции высвобождения, с одной стороны, и с ТкТР и фибринолитической активностью с другой.

Научная новизна. Впервые показано, что однократное введение АСК в дозе DI5q с рационом снижает общую коагулоактивность тромбоцитов, их способность к агрегации и высвобождению фф. Рз и Р4, что сопровождается замедлением непрерывного внутрисосудистого свертывания крови и повышением реакции на гипертромбинемию, т.е. повышает толерантность к тромбину. Впервые установлено, что избыточное введение с рационом ниацина в количествах, превышающих в 4, 8 и 16 раз суточную потребность (т.е. в дозах, адекватных лечебным), повышает коагулоактивность тромбоцитов, их способность к агрегации и высвобождению фф. Р3 и Р4, но, ускоряя одновременно фибринолиз, повышает толерантность к тромбину. Показано, что при обогащении рациона ниацином в дозах, адекватных лечебным, эффекты АСК на фибринолиз и ТкТР частично суммируются и это позволит снижать дозы АСК при его применении как антиагреганта. Впервые показано, что частота выживания при внутривенном введении тромбина в дозе DL50, повышается,

если животным предварительно введен АСК или они получали избыток ниацина; эффект ещё более выражен при введении аспирина на фоне избытка ниацина.

Практическая значимость. Полученные результаты позволяют рекомендовать при заболеваниях, протекающих с наклонностью к тромбофилии, обусловленной основным заболеванием, использовать АСК, предварительно обогащая организм ниацином (например, при заболеваниях сердечно-сосудистой системы, атероскле-ротических изменениях и их осложнениях); желательно контролировать у таких больных степень В5-витаминной обеспеченности организма.

Наличие тесной положительной ассоциации между уровнем всех изучавшихся нами маркеров НВСК (ПДФ, РКМФ и Э-димерами), одинаковая динамика сдвигов их плазменного уровня при воздействиях, изменяющих интенсивность НВСК, позволяют при отсутствии условий для определения всех перечисленных маркеров контролировать уровень одного из них, а именно Б-димеров.

Основные положения, вынесенные на защиту:

1. АСК, одним из оснований использовать который в практике, являются его анти-агрегантные свойства, угнетает агрегацию тромбоцитов, реакцию высвобождения прокоагулянтсв (фф.Р3 и Р4) и активирует фибринолиз в эуглобулиновой фракции плазмы, замедляя в связи с этим непрерывное внутрисосудистое свертывание крови и повышая толерантность к тромбину.

2. Ниацин в дозах, превосходящих суточную потребность в 4, 8 и 16 раз, повышает коагулоактивность тромбоцитов, усиливая их способность к агрегации и к высвобождению прокоагулянтов, что ведет к ускорению непрерывного внутрисосуди-стого свертывания крови, однако, активирующийся одновременно фибринолиз обусловливает рост толерантности к тромбину.

3. Введение АСК животным, рацион которых в течение десяти дней содержал ниацин в дозах, превосходящих суточную потребность в 4, 8 или 16 раз, ограничивает активацию тромбоцитов, активирует фибринолиз, что ведет к существенному повышению толерантности к тромбину, благодаря неполной суммации эффектов ниацина и антиагреганта.

4. Общая коагуляционная тромбоцитов, их спонтанная и АДФ-индуцируемая агрегация, реакция высвобождения, уровень ПДФ, РКМФ и Б-димеров сходно изменяются во времени и в зависимости от дозы АСК или ниацина (различия между углами наклона трендов к оси категорий недостоверна - р > 0,05), а сдвиги тесно положительно ассоциированы между собой (г8 колеблется в пределах 0,7-0,9); сдвиги ТкТР и скорости фибринолиза положительно ассоциированы между собой, и отрицательно ассоциированы с показателями коагулоактивности тромбоцитов и непрерывного внутрисосудистого свертывания (во всех сочетаниях по два коэффициент г5 варьирует от -0,7 до -0,9).

Внедрение в практику. Совместно с кафедрой биологической химии Челябинской ГМА, с сотрудниками кафедр биологической химии, гигиены с основами экологии ТюмГМА разработаны и внедрены для обучения студентов и для использования в лечебных учреждениях г. Тюмени (ГЛПУ ТО ОКБ № 1) и области (ГЛПУ ТО ОКБ №11 р.п. Голышманово) методические рекомендации, оформленные акта-

ми: «Влияние ингибиторов превращений арахидоновой кислоты на агрегацию и реакцию высвобождения тромбоцитов, на непрерывное внутрисосудистое свертывание крови и толерантность к тромбину».

Результаты, полученные при выполнении работы, используются в обучении студентов по курсам «Гигиена с основами экологии» и «Биохимия» ГБОУ ВПО ТГМА Минздравсоцразвития России.

Апробация. Основные положения диссертации доложены на научных конференциях региональных отделений Российской академии естествознания (Тюмень, 2009, 2011) и Всероссийского общества биохимиков и молекулярных биологов (Тюмень, 2011), на III международной научной конференциии в Варадеро (Куба, март, 2008), на III Международной научно-практической конференции «Адаптация биологических систем к естественным и экстремальным факторам среды» (Челябинск, 2010), на Всероссийской научно-практической конференции биохимиков и специалистов по лабораторной медицине «Медицинская биохимия и клиническая лабораторная диагностика в аспекте модернизации системы научных исследований» (Омск, 2011) на совместном заседании кафедр биохимии, гигиены с основами экологии, фармакогнозии, технологии лекарств с курсом ботаники, аналитической и органической химии с курсом токсикологии (Тюмень, 2012)

Личное участие автора. Проведение экспериментов, обработка и интерпретация экспериментальных данных, а также подготовка к публикации основных результатов исследования по диссертационной работе и их апробация выполнялись лично автором или при его непосредственном участи.

Связь с планами научно-исследовательских работ. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом НИР ГБОУ ВПО ТюмГМА Минздравсоцразвития России. Номер государственной регистрации 01.201031732.

Объем и структура работы. Диссертация, изложена на 120 страницах машинописного текста, содержатся 14 рисунков и 10 таблиц, состоит из введения, обзора литературы (144 российских и 142 зарубежных источников), главы, содержащей 5 подразделов, где изложены результаты собственных исследований, заключение и выводы.

Дизайн исследования Изучить влияние ниацина и аспирина (порознь и совместно) на коагуляционную активность тромбоцитов, НВСК, фибринолиз и ТкТР:

1. Охарактеризовать у крыс, получающих сбалансированный рацион, эффекты АСК на ОКАТ, способность тромбоцитов к агрегации и к реакции высвобождения, на НВСК и ТкТР.

2. Изучить те же показатели в отсутствии ниацина в рационе и его избытке в количествах, адекватных лечебным дозам.

3. Выявить влияние DI50 АСК при избытке ниацина в рационе на активность тромбоцитов, их способность к агрегации и реакции высвобождения, на НВСК, ТкТР и

фибринолиз.

4. То же, что в п. 3, у крыс при воздействиях, инициирующих гипертромбинемию.

5. Изучить зависимость частоты выживания животных при внутривенном введении БЬ50 тромбина от введения ниацина и АСК порознь и совместно.

6. Установить типы ассоциации между сдвигами коагулоактивности тромбоцитов их способности к агрегации и к реакции высвобождения с одной стороны, ТкТР и фибринолитической активностью с другой.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования. Опыты выполнены на беспородных белых крысах-самцах (364 особи, 148+14 г). Кровь для исследований брали из яремной вены у крыс, наркотизированных диэтиловым эфиром, следуя правилам гемо-стазиологии [В.П.Балуда и др., 1980]. В пробах крови определяли: общую коагу-ляционную активность тромбоцитов (ОКАТ) согласно описанию А.Ш.Бышевского и др., (1996); агрегационную способность тромбоцитов - на агрегометре "Биомак" (АДФ-индуцируемую агрегацию в конечной концентрации 0,01 АДФ мг/мл); спонтанную агрегацию (CA) определяли по описанию [В.П.Балуда и др., 1980]; реакцию высвобождения тромбоцитов по уровню в плазме фф. Р3 и Р4 [В.П.Балуда и др. 1980]; продукты деградации фибрина (ПДФ) маркеры НВСК [Т.А.Рудницкая 2003; H.Wada е.а„ 2003] по описанию [А.Ш.Бышевский и др., 1991]; уровень растворимых комплексов мономерного фибрина (РКМФ) - маркер НВСК [В.Ю.Широков, 2009; H.Wadaea., 2003] фенантролиноым тестом; уровень D-димеров маркер НВСК [Е.Г.Соболева и др. 2003; Н.М.Воробьева и др., 2009; de Moerloose, е.а, 2003]) устанавливали с помощью набора «D-dimer test" (Roche) [А.П.Момот и др., 1999]; толерантность к тромбину по описанию к патенту [А.Ш.Бышевский, 2003].

Тромбин вводили в обнаженную яремную вену (1,0 мл/кг, активность по времени свертывания 0,2% раствора фибриногена равнялась 17 с в опытах по оценке частоты выживания крыс, или 25 с - в опытах по оценке ТкТР).

Димефосфон, уксуснокислый свинец и аспирин крысам вводили с утренней порцией рациона, равномерно распределяя в ней добавки: крысы натощак получали 54 суточной порции рациона с добавками, а спустя 1 ч вносили в кормушку остальную часть суточной порции рациона.

Крыс сдержали на сбалансированном пищевом рационе, разработанном институтом питания АМН СССР [О.Я.Курцинь, 1952], содержащем белок, углеводы, липиды, солевую смесь и набор витаминов [Б.А.Лавров, Е.Л.Терентьева, 1963]. Витамины и витаминоиды вводили так, чтобы суточная порция рациона содержала их количество, равное суточной потребности крыс [Б.А.Лавров, Е.Л.Терентьева, 1963; P.W.Hawk, B.L.Ozer, 1954]. В кормушки готовую смесь вносили в количестве, равном её потреблению -100 г/кг массы тела [О.Я.Курцинь, 1952].

Статистическая обработка полученных результатов. Статобработку полученных данных выполняли с помощью медико-биологической программы Biostat 4.03 [С.А.Гланц, 1998], используя вариационную статистику для малых рядов на-

блюдений с вычислением (М, ш, ст, и р., 2); интенсивные показатели анализировали приемом альтернативного варьирования, рассчитывая те же показатели; 3)различия считали достоверными при значениях р < 0.05; 4) связи переменных устанавливали ранговой корреляцией по Спирмену; 4)графический анализ выполняли в системе Microsoft Graf (приложение MS Word 2003);

5) корректность аппроксимации оценивали коэффициентами R2,6) анализируя совместный эффект двух факторов, различали тип кооперации [М.Диксон и др., 1966], используя уравнение в котором соединять левую и правую части может знак =, < или >:

L «1>2= (il + ¡2) - («I X i2); п. ¡1,2 < (¡1 + ¡2) - (i, X ¡2)! Ш- ¡1,2 > (¡1 + >2> " (¡1 X ¡2),

где ii парциальный эффект одного, i2 - второго, 11,2 "одновременно обоих факторов. Значение i устанавливали, деля показатель, отражающий эффект в опыте, на тот же показатель в контроле, и вычитая частное из единицы. Результат, соответствующий уравнению I - суммация, уравнению II - антагонизм и III синергизм.

В работе использовали: бычий тромбин и фибриноген («Технология-стандарт», набор «D-dimer test" («Roche»), ацетат свинца х.ч., ацетилсалициловая кислота (Chinoin), димефосфон (Казань), СаС12 х.ч., буфер Михаэлиса («Технология-стандарт»), цианокобаламин ампульный - 200 мкг/мл («УфаВИТ»), токоферола ацетат (Slovakofarma J.S.C.), витамин С (Hemofarm D.D.), ниацин (ЗАО «УфаВИТ»), казеин и крахмал маисовый, солевая смесь Осборна-Менделя (реагенты категории х.ч.).

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ И ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Начали исследование с оценки у крыс общей коагуляционной активности (КА) тромбоцитов, их способности к спонтанной и АДФ-агрегации, к реакции высвобождения, интенсивности НВСК при содержании животных на сбалансированном рационе питания до и после введения аспирина в DI5o% (150 мг/кг - величина, установленная ранее [И.А.Дементьева, 1998; И.Р.Ральченко, 1998; Р.Г.Алборов, 2006]). Подтвердилось, что эта доза АСК снижает в наших экспериментах максимальную АДФ-агрегацию с 57,2+5,3 до 28,1+3,5 - на 50,9% при р < 0,02. Одновременно снижаются и все другие величины, характеризующие КА тромбоцитов, скорость НВСК. ТкТР же при этом растет.

Изучив затем эффекты возрастающих доз АСК (рис. 1), мы нашли следующее: ОКАТ, способность тромбоцитов к агрегации (CA, MA и tga), к высвобождению фф. Р3 и Р4 снижается, падает уровень маркеров НВСК и растет ТкТР с увеличенем 500 и 600 мг/кг не сопровождается достоверным изменением степени сдвигов. Об этом свидетельствует то, что углы наклона трендов с увеличением дозы от 150 до 400 мг/кг лежат в пределах от 42 до 48°, а разницы между углами наклона каждого показателя недостоверны (для всех сравниваемых пар > 0,05). Особенно сходна динамика маркеров НВСК ПДФ, РКМФ и D-димеров.

—♦—ОКАТ ---СА РЛА tg a ----Р-3

---Р-4 - «- ПДФ РИФ D-дим, — ТкТР

РКМФ^ D-ДИМ. g. Р-4 »В a I

- ш: ■ -fI

300

400

500

Р-3

. -jOKSST

600 мг/кг

Рисунок 1. Изменения (в % от контроля) коагудяционной активности тромбоцитов, интенсивности НВСК и ТкТР через 24 ч после введения увеличивающихся доз АСК

Ошибки средней арифметической (т) и среднеквадратическое отклонение (о) показателей уровня D-димеров оказались ниже, чем у других маркеров НВСК и это позволило в следующих экспериментах судить об интенсивности НВСК, ориентируясь на сдвиги уровня D-димеров. Важно, что и другие исследователи считают возможным по этому показателю судить о скорости НВСК [И.Н.Бокарев, 2002; А.В.Багумян и др. 2007; В.А.Полякова и др., 2008; De P.Moerloose, F. Boehlen, 2003; A.Sh.Bishevsky e.a., 2008; F.A.Andersonea., 2010].

Данные о зависимости степени сдвигов от интервала после введении АСК, показали, что её эффект ослабляется с увеличением времени между введением и отбором проб крови. Дозазависимость при этом сохранялась в интервалах от 150 до 400 мг/кг при отборе проб (через 48 ч), и от 150 до 300 мк/кг (через 72 ч). Это позволяет считать, что заметное повышение дозы АСК мало изменяют степень его влияния на активность тромбоцитов и на ТкТР через 48 и особенно через 72 ч после введения.

Эффекты ниацина и его отсутствия представлены в табл. 1 в виде сдвигов в % от контроля, что облегчает графический анализ. Заметнее влияет на степень сдвигов ОКАТ и ТкТР прирост дозы АСК от 150 до 400 мг/кг в промежутке между 24 и 48 часами после его введения.

Степень сдвигов АДФ-агрегации (МА) и tg а близки не только и при разных АСК, но и в разные сроки после введении, и это позволило нам ограничиться далее определением из двух показателей только величины МА, тем более что, в новых публикациях, мы нашли близкие по степени сдвиги МА и tg а и в других экспериментальных и клинических ситуациях [С.Л.Галян и др., 1997; Е.М.Шаповалова, 2010; R.Beigel e.a., 2011; D.C.Davidson e.a., 2011].

Видимо, и заметное повышение дозы при введении с рационом АСК мало изменяет его влияние на КА тромбоцитов, на НВСК спустя 48 и 72 ч. Поэтому далее мы отказались от оценки tg а, ПДФ и РКМФ.

Таблица 1- Степень сдвигов (представлена в % от контроля) коагуляционной активности тромбоцитов, плазменный уровень Б-димеров и ТкТР у крыс при В5-авитаминном питании и крыс, получавших никотиновую кислоту в дозах, превышающих суточную потребность

Тесты Контроль (0.25мг/кг) Крысы (п = 5 в каждой группе) получали НК (мг/кг массы тела) из расчета:

(п=10) 0.0 0.5 1.0 2.0 4.0

ОКАТ, 91,2 00 00 -1,1 2,2 3,8 8.2 2,2 3,5+ 0,0 25,3*+

% -4,3* -2,5 10,9* 21,0*+ 41,7*+

-13* -3,2 12,3*+ 39,5*+ 48,2*+

-2,3 2,3 -1,2 3,5 7,0

СА, % 8,5±0,5 -4,6 4,7 -3,5 7,0* 13,8*+

-4,7* -4,7 12,0* 9,9*+ 13,8*+

-10,5* -2,3 16.0* 16,1*+ 47,3*+

-3,1 -7,0 7,5 4,0 5,7

МА,% 56,9±5,1 -17,5 -1,7 -3,5 5,3*+ 10,5*+

-22,8* -3,7 15,7* 7,0*+ 19,7*+

-29,8* -0,9 19,3* 14,1*+ 35,1*+

-1,6 -2,2 0,0 0.0 7,7*+

ф.Рз.% 90.2±1.4 -7,7 -7,8* -1.8 -4,4 0,0 5.5+ 2.2+ 7.3*+ 8,9*+ 22,0*+

-11,1* -4,1 14,2*+ 10.5*+ 20,5*+

-2,7 -2,8 0,0 3.1 14,5+

3.5±0.04 0,0 2,7 0.6 11.4*+ 20,2*+

ф. Р4, с -2,9 2,8 22.8*+ 25,7*+ 28,6*+

-22,8* 8,5 31.4*+ 60,0*+ 77,1*+

Б-д, мкг/мл -5,0 0.8 0.0 10.0 8.5

0.20+0.010 5,0 -10* 0.9 0.03 0.2 0.3 15.0+ 25,0*+ 20.2++ 30,0*+

-30* 0.08 30,0*+ 26,0*+ 40,0*+

ТкТР, 100±3.4 -3,2 -1,5 2,0 0,0 -3,1 3,0 4,0 5,0 5,0 4,0

% -8,8* 3,0 11,1*+ 9,0*+ 27,0*+

-11,0* - 1,1 25,0*+ 34,0*+ 46,0*+ |

Обозначения: знак * - достоверное отличие от соответствующего срока во 2-й колонке; знак + - то же относительно 3-й колонки; строки в столбцах сверху вниз -1-й, 2-й, 5-й и 15-й дни от начала опытов.

На диаграммах рис. 2 А, Б и В видно, что ОКАТ, СА и АДФ-агрегация (МА) сильно ослаблены в отсутствии ниацина. Степень сдвигов растет с удлинением наблюдений. При добавлении в рацион ниацина в избытке, превышающем потребность в 2 или в 4 раза (0,5 или 1,0 мг/кг), изменений нет или они несущественны.

А (динамика ОКАТ) |

.........-.........=----.. ........................8р............... [гягк

91 ■¿п-

„ 11 12 1

п п 1 2 4 2 5 п Г"

, ,. п Г 1 п—Гг Г" -(

^ И '

О 0,5 1 2 4

мг/кг

Б (динамика СА)|

' ' ' 1 " .......................................".............. £

16 14 14 14

5 П 7

_ П 1 1 ' п П ^ П 1— !

- и -ы п -г- | |_| — I

_10______ -5 "г 1 -4

о 0,5 1 2 4

мг/кг

В (динамика максимальной АДФ-агрегации) |

16 19 . - 14 . 1„ 20 : !

г-. 1

I и и i „ „ .1 .1 —1- !

- • ......

О 0,5 1 2 4

мг/кг

Рисунок 2. Изменения ОКАТ (рис. 2А), спонтанной агрегации (рис. 2Б)и АДФ-агрегации МА (рис. 2В) в отсутствии ниацина и его избытке При 8-микратном и особенно 16-тикратном избытке ниацина (2,0 и 4,0 мг/кг) растет ОКАТ, ускоряется спонтанная и АДФ-индуцируемая агрегация.Таковы же сдвиги уровня фф.Р3, Р4 и О-димеров (рис. 3): снижение в отсутствии ниацина, нормализация при его наличии в дозе, 2-хкратной против потребности. При избытке ниацина в 8 и 1 б раз против потребности уровень О-димеров ещё выше.

□ ф.Р-3 ВФ.Р-4

-----1 77

............ • < о.....—--------------------р § б

23 27 ' А А 20 ,,29

0 3 3 « „0 .0 ^ : .3 " ,| 11 -

-■з * 4-2 ■» •» ■>

о 0,5 1 2 4

мг/кг

Рисунок 3. Изменения уровня фф. Р3 и Р4 в отсутствии ниацина и его избытке

-АО Т5~

-30

0,5

-45-

Т5—го-

-30

-зе-

мг/кг

Рисунок 4. Изменения уровня О-димеров в отсутствии ниацина и его избыткеДиаграммы рис. 5, свидетельствуют, что у крыс, неполучавших ниацина, ТкТР, ОКАТ и скорость НВСК снизились к 5-му и особенно к 15-у дням наблюдений.

гь

\Ь 5 .5 45

Рисунок 5. Изменения ТкТР в отсутствии ниацина и при его избытке

—34—

_21_

Й......-ж.

:о=о=

Ш-

0,5

мг/кг

Рисунок 6. Ограничение сдвигов ОКАТ, СА и МА АСК, введенным на 15-й день ежедневного потребления избытка НК (дозы - на оси категорий, снижение степени сдвигов в % относительно контрольных крыс).

Такова же динамика влияния АСК на СА (снижение с 19 до 9%) и на АДФ-агрегацию (с 16 до 5 %). Спад эффекта АСК зависит от дозы линейно: тренды, аппроксимирующие зависимость эффекта от дозы АСК, линейны, а коэффициенты Я2 для ОКАТ, СА и МА предельно близки к единице (всегда не ниже 0,92).

На рис. 7 видно, что влияние АСК на выход фф. Р3 и Р4 ослаблено у крыс, получавших ииацин, и степень ограничения этой способности тромбоцитов линейно зависит от дозы АСК (как и в опытах с определением ОКАТ и показателей агрега-ционных свойств тромбоцитов, коэффициенты Я2 трендов близки к единице).

Диаграммы рис. 8 свидетельствуют, что влияние АСК и на плазменный уровень О-димеров линейно ослабляется с увеличением дозы предварительно вводившейся никотиновой кислоты. Здесь же отражено увеличение ТкТР, наблюдающееся после введения АСК. Причем степень прироста ТкТР линейно зависит от уровня предварительного обогащения рациона животных никотиновой кислотой (коэффициент аппроксимации соответствующего тренда равен единице).

--------- —..... ---------- ф.Р-4; Ff » 0,99

—-—-I/" Л" ... 4 . — "-Р-3, R' - 0,98-

...... ...... ... ...... . __________________ ... . ____ ... . . . ______

1 2 4,0мг/кг

Рисунок 7. Ограничение сдвигов уровня фф. Р3 и Р4, вызываемых аспирином, введенным на 15-й лень ежедневного избыточного включения в рацион НК (дозы НК на оси категорий, степень сдвигов указана в процентах относительно крыс, получавших НК в соответствие с потребностью).

Здесь же (рис. 8) видно, что введение АСК ускоряет фибринолиз и что прирост его скорости линейно пропорционален дозам ниацина (И2 тренда равно 0,89).

f • I | кТР

-Linear (D-дим.) --Linear (ТкТР) — - - Linear (Фиб-пиз)

4,0мг/кг

Рисунок 8. Ограничение (в % относительно крыс, получавших НК в дозах, равных потребности) сдвигов уровня D-димеров, ТкТР и фибринолиза, вызываемых АСК, введенным на 15-й день избыточного потребления ниацина (дозы - на оси категорий).

Данные рисунков 6-8, будучи сопоставлены с данными рисунков 3-5, позволяют считать, что ниацин в дозах, адекватных лечебным, повышает ОКАТ, их способность к агрегации и к реакции высвобождения, интенсифицирует НВСК и одновременно ускоряет ф. ХПа-зависимый фибринолиз, и что это сопровождается повышением ТкТР.

АСК в дозе DI50 снижает ОКАТ, способность тромбоцитов к агрегации, к реакции высвобождения и замедляет НВСК. При введении АСК на фоне избытка в рационе ниацина, его эффекты витамина (активация тромбоцитов) сглаживаются, а способность ускорять фибринолиз и повышать ТкТР, напротив, возрастает.

При оценке корреляции между сдвигами изучавшихся величин, нашли, что изменения каждого из показателей КА тромбоцитов (ОКАТ, CA, МА, фф. Р3 и Р4), показателей НВСК (уровень ПДФ, РКМФ и D-димеров) при введении разных доз АСК или ниацина порознь и одновременно, а также их динамика во времени положительно ассоциирована при всех возможных сочетаниях по два (значения rs колеблются в пределах от 0,7 до 0,9). Сдвиги ТкТР и скорости фибринолиза также положительно ассоциированы между собой, но находятся в отрицательной корреляционной связи с показателями ОКАТ, показателями способности к агрегации и с показателями, характеризующими НВСК: во всех анализируемых сочетаниях по два значения rs варьируют от-0,7 до -0,9. Отметим, что аналогичные ассоциации между показателями коагулоактивности тромбоцитов, ТкТР и фибринолизом находили и ранее при нагрузке организма животных про- или антиоксидантами, про-

коагулянтами и при других воздействиях [А.В.Багумян и др., 2007; Р.Г.Алборов и др., 2009; C.M.Chesney е.а., 2000]. Важно, что АСК на фоне избытка ниацина ослабляет его активирующее влияние на КА тромбоцитов, а, ускоряя ф.ХПа-зависимый фибринолиз, усиливает способность ниацина повышать ТкТР. Это явление мы уточняли экспериментально, изучая влияние избытка ниацина на эффекты АСК у крыс с предварительно провоцируемой гипертромбинемией.

Опытами, где моделью гипертромбинемии служил травматический токсикоз, вызываемый удалением лигатуры, сдавливающей в течение 4 ч сосуды задней конечности, установлено, что через 1 ч после удаления лигатуры у контрольных крыс (рис. 9) развилась консумпционная гипофибриногенемия, т.е. ускорился тромбиногенез повысилась КА тромбоцитов, ускоряющих формирование активной протромбиназы по внутреннему и внешнему путям, следовательно и реакции ф.И -» ф. IIa [З.С.Баркаган, 1988; А.С.Шитикова, 2000; Л.П.Папаян, 2003; B.N. Gray, R.Miller е.а., 2009; B.Engelmann е.а., 2010].

На рис. 9 виден прирост ОКАТ, способности тромбоцитов к агрегации, к высвобождению фф. Рз и Р4. Одновременно снижается ТкТР и растет фибринолиз, ускорение которого - ответ на ускоренную фибринацию, что и ранее находили в сходных ситуациях [Б.И.Кузник, В.П.Скипетров, 1974; Б.А Кудряшов, 1975]. У крыс группы 2 видно, что избыток ниацина увеличил сдвиги всех оцениваемых величин значительнее, чем на фоне провоцируемой гипертромбинемии у крыс без избытка ниацина. Следовательно, эффект избытка ниацина в рационе усиливает влияние гипертромбинемии на тромбоцитарный компонент гемостаза и ассоциированное с ним НВСК. Вместе с тем, ТкТР повысилась, вероятнее всего за счет свойства ниацина ускорять фибринолиз его активность у этих крыс возросла с 37% до 47%, т.е. ~ в 1,4 раза. У группы 3-й (гипертромбинемия, избыток ниацина и введение АСК), активация тромбоцитов ниже, чем в группах 1 -й и 2-й, активность фибринолиза выше, а снижение ТкТР ограничено. Характер сдвигов согласуется с данными об однонаправленности эффектов ниацина и АСК на ТкТР, что связано с активацией фибринолиза.

Возможно, АСК влияет на плазмин через активаторы плазминогена ингибиторы активации плазминогена в эуглобулиновой фракции плазмы отсутствуют [Б.И. Кузник, 2010].

□ ОКАТ В CA США □ Р-3 0Р-4 GD-дим. ШФиб-ген GTkTP ШФиб-лиз

«о

и si а.

rrml ГР

¿J1- "Т 5-Ы?

гругтв 1 группа г-3* группа 3

Рисунок 9. Изменения (в % от контроля группы 1-й) изучавшихся тестов у крыс, получивших АСК за 24 ч до провокации гипертромбинемии, влияние на степень сдвигов 4-хкратного избытка НК (по 1,000 мг/кг в течение 10 дней). Группа 1 - гипертромбинемия без избытка НК; группа 2 - избыток НК без гипертромбинемии; группа 3 гипертромбинемия на фоне избытка НК и введен АСК

Таким образом, гипертромбинемия на фоне ежедневного введении 4-хкратной дозы НК, хотя и ведет к более выраженному потреблению фибриногена, снижает ТкТР в меньшей мере благодаря свойству ниацина ускорять фибринолиз. АСК на фоне избытка ниацина ограничивает снижение ТкТР, вызванное гипертромбинеми-ей, в меньшей мере, чем без избытка НК - это, видимо, результат частичной сумма-ции эффектов НК и АСК на фибринолиз.

В опытах с гипертромбинемией, спровоцированной повторной кровопотерей, ускоряющей тромбиногенез за счет усиленного образования активной протромби-назы [В.Г.Соловьев, 1997; И.А.Дементьева, 1998; Д.М.Зубаиров, 2000], получены такие же результаты: развились гипофибриногенемии потребления, активации тромбоцитов, ускорение НВСК, снижение ТкТР и активация фибринолиза. Такими же были сдвиги при кровопотере на фоне избытка ниацина, а также при введении АСК на фоне избытка ниацина. Графически результаты этого эксперимента идентичны показанным на рис. 9 (отличия лишь в степени сдвигов).

Оба приема провокации эндогенной гипертромбинемии выявили, что влияние ниацина и АСК на активность тромбоцитов и НВСК, на фибринолиз при ускоренном тромбиногенезе более выражены, чем у здоровых животных.

Учитывая сходство механизмов развития гипертромбинемии в этих ситуациях, мы использовали ещё отличающийся по механизму действия инициатор активации тромбоцитов введение прооксиданта свинца, который повышает коагулоактивность тромбоцитов и, следовательно, ускоряет НВСК [С.Л.Галян и др., 1997; Е.М.Шаповалова, 2010; M.Bilgi е.а., 2010]. Схема опыта была такой же, как и в рассмотренных выше экспериментах. Использована доза ацетата свинца (50 мг/кг), которая при ежедневном введении (10 - 12 дней) не нарушает порфиринового обмена, но повышает уровень липидпероксидов в тромбоцитах, что сопровождается ускорением агрегации и реакции высвобождения тромбоцитов [А.А.Мкртумян, 1994; Д.С.Марченко, 1998; И.А.Дементьева, 1998; И.В.Ральченко, 1998]. Результаты эксперимента (рис. 10) указывают на принципиальное сходство характера диаграмм с таковыми на рис. 9.

□ окат QCA DMA dp-3 0р-4 DD-дим. РФиб-ген dtktp ЭФиб-лиз

Группа 1 Группа 2 Группа 3

Рисунок 10. Изменения (в % от контроля) изучавшихся тестов у крыс, получивших ацетат свинца в течение 10 сут: группа I - свинец вводили на фоне сбалансированного рациона; группа 2 - крысы получали свинец на фоне избытка НК; группа 3 -на фоне свинца и избытка НК (за 24 ч до взятия проб введен АСК)

Сходство заключается в следующем: 1) в присутствие свинца (активатор тром-

боцитов), возникает гипофибриногенемия, растет ОКАТ и способность тромбоцитов к агрегации и к высвобождению, ускоряется НВСК и снижается ТкТР, 2) на фоне избытка ниацина все эти сдвиги усиливаются, сопровождаясь активацией фибринолиза и ограничением степени снижения ТкТР ограничивается (снижена в меньшей мере, чем при моделировании травматического токсикоза), 3) введение АСК животным, получавшим свинец при избытке ниацина, ограничивает сдвиги, обнаруженные у крыс 2-й группы, которым АСК не вводили.

Итак, введение АСК в этом эксперименте, как и в двух предшествующих, существенно ускорило фибринолиз (на 60% относительно интактных крыс и на 69 % относительно животных, которые получали свинец на фоне сбалансированного рациона без избытка ниацина) - все различия между степенью эффектов АСК у крыс 2-й и 3-й групп достоверны - р < 0.05.

В связи с этим можно заключить, что избыток ниацина, несмотря на его способность повышать коагулоактивность тромбоцитов и ускорять НВСК, способствует повышению толерантности к тромбину. Связано это, видимо, с ускоренным образованием плазмина, вклад которого в противосвертывающую защиту несомненен [А.И.Грицюк, 1969; Г.В.Андренко, 1979; Д.М.Зубаиров, 2000; J.Kashiwagi е.а., 2010].

Далее мы изучили влияние избытка ниацина на определявшиеся нами тесты при включении в рацион димефосфона - соединения, снижающего рост КА тромбоцитов, их агрегационной и высвобождающей способности, и скорость НВСК (димефосфон - синергист природных антиоксидантных энзимов [С.Н Ельдецова, 1990; В.Г.Соловьев, 1997; М.К.Умутбаева, 2004; Р.Г.Алборов, 2006]).

Диаграммы рис. 11 демонстрируют следующее: введение димефосфона (группа 1-я) снизило способность к агрегации и к высвобождению тромбоцитов (ОКАТ упала на 29, CA - на 24, АДФ-агрегация на 32%, замедлило выход фф. Р3 и Р4 на 41 и 37%), замедлило НВСК на 50%, не изменило фибриногенемии (прирост на 7% недостоверен, р > 0,05) и повысило ТкТР, как это находили при введении свинца ранее. [А.А.Вакулин, 1998; М.К.Умутбаева, 2004; Р.Г.Алборов, 2009]. Фибринолиз замедлился на 11% (видимо из-за ограничения консумпции фибриногена при торможении НВСК); 2) введение димефосфона и избытка ниацина (группа 2-я) ограничило сдвиги ОКАТ, АДФ-агрегации, исключило сдвиг CA, затормозило высвобождение фф. Рз и Р4, повысило прирост ТкТР и заметно активировало фибринолиз (все различия достоверны - р для сравниваемых показателей в группе 1-й со 2-й < 0,05, что видно по величинам полос погрешностей на рис. 10); 3) введение АСК крысам, получавшим 10 дней димефосфон и избыток ниацина (группа 3-я), сопровождалось ещё более выраженным ограничением ОКАТ и способности к агрегации и к реакции высвобождения, чем у крыс, неполучавших АСК на фоне димефосфона и ниацина (группа 2-я); особо значимо то, что у крыс группы 3-й заметно вырос

уровень фибриногена, повысились ТкТР и фибринолиз.

О ОКАТ ОСА ОМА DP-3 ШР-4 OD-дим. ОФиб-ген ОТкТР ЭФиб-лиз

Г руппа 1

Группа 2

Рисунок 11. Изменения изученных величин у крыс (в % от контроля), которые получали ди-мефосфон в течение 10 сут: группа 1 только димефосфон (со сбалансированным рационом); группа 2 димефосфон и избыток ниацина; группа 3 -димефосфон и избыток ниацина (за 24 ч до взятия проб введен АСК).

В целом влияние димефосфона (фактора, который благодаря антиоксидант-ным свойствам тормозит ЛПО и повышает антиоксидантный потенциал) выразилось сдвигами, противоположными по направленности тем, которые найдены при введении ниацина на фоне гипертромбинемии (сравнить диаграммы рис. 9 и 10 с рис. И).

Итак, эффекты АСК и ниацина по влиянию на ТкТР, реализуемые с наибольшей вероятностью через активацию фибринолиза, выявляются у животных в условиях физиологической нормы, но ещё заметнее у животных с экспериментальной гипер-или гипокоагуляциец.

Характер эффекта (синергический или аддитивный?), будучи оценен по Диксону и Уэббу, выразился формулой i„2 = (i, + i2> - (i, x i2). Следовательно, эффект ниацина и АСК на ТкТР является аддитивным. Суммация эффектов не является полной - фактически установленная степень влияния АСК и ниацина при совместном введении ниже, чем простая сумма их частных эффектов. Поэтому корректно обозначать совместный эффект АСК и ниацина как неполную или частичную сум-мацию.

Завершая эксперименты мы провели опыты, относящиеся по характеру к принятым в патофизиологии: изучили влияние возрастающего избытка ниацина и однократного введения АСК на частоту выживания животных при точно дозируемой тромбинемии. На рис. 12 и 13 представлены результаты этих экспериментов.

Диаграммы рисунка 12 отражают следующее: 1. С ростом дозы ниацина (опыт 1-й) от значения, равного суточной потребности (250 мкг/кг) до 4-кратной, частота выживания возросла на 44%, а с увеличением дозы до 8-микратной частота выживание увеличилось уже на 56% (р < 0,05); при увеличении дозы ниацина до 16-кратной к потребности прирост выживаемости не увеличился. Это согласуется с уже рассмотренными результатами экспериментов в отмеченном интервале прирост дозы ниацина не отражается существенно на величине ТкТР. 2. Введение АСК

животным, получавшим предварительно ниацин (опыт 2-й) усиливает влияние ниацина на частоту выживания - при 4-хкратной дозе частота выживания 80%, при 8-кратной - 87%, при 16-кратной частота выживания приближается к абсолютной -97%.

Опыт 1-й Опыт 2-й

Рисунок 12. Изменения частоты выживания крыс (в % к контролю - крысы получали рацион без добавок): опыт 1 крысы 3-х подгрупп 10 дней получали ниацин (1,000 2,000 или 4,000 мг/кг, что выше потребности в 4, 8 и в 16 раз); опыт 2 - крысы 3-х подгрупп получали 10 дней ниацин в тех же дозах; в последний день введен АСК (150мг/кг). На 11-е сут всем крысам ввели в вену тромбин и установили частоту выживания за 24 ч.

На диаграммах рис. 13 сравниваются влияние на выживание ниацина и АСК совместно в сравнении с влиянием АСК при его введении крысам, получавшим сба-лансированый рацион без избытка ниацина. Здесь видно (сопоставить с рис. 12), что АСК, как и ниацин, повышает частоту выживания крыс после введения им тромбина в дозе БЬ50. Однако рост частоты выживания ниже, чем после введения АСК крысам, получавшим избыток ниацина.

Введя данные о частоте выживания при введении АСК на фоне рациона без добавок, и данных, полученных при введении АСК крысам, получавшим избыток ниацина (4-, 8- или 16-кратный), в уравнение Диксона и Уэбба, во всех случаях нашли равенство левой и правой частей: (¡|,2 = (м + ¡2) - 0, х ¡2). Ещё раз уже в другой экспериментальной ситуации, подтвердилось, что эффекты АСК и ниацина на гемостаз (здесь на интегральный показатель состояния противосвертывающей системы - ТкТР) суммируются неполностью.

90 ■ 80 • 70 -60 ■ 50 ■ 40 ■ 30 -20 -10 ■ о -

47 й

□ 1000

3 2000

□ 4000мкг/кг

Рисунок 13. Изменения частоты выживания животных (в % к контролю, крысы в котором получали АСК с рационом без добавок); опыт 1-й - крысы, разделенные на 3 подгруппы, 10 дней получали ниацин в дозах 1,000, 2,000 или 4,000 мг/кг, что выше потребности в 4, 8 и в 16 раз; опыт 2 - крысы, разделенные на 3 подгруппы, получали 10 дней ниацин в тех же дозах; в последний день введен АСК (150мкг/кг). На 11-е сут всем крысам ввели в вену тромбин и установили частоту выживания за 24 ч.

Таким образом, АСК, вводимый с рационом, сбалансированным по всем нутри-ентам, снижает общую коагуактивность тромбоцитов, снижает их агрегационные свойства, оцениваемые по спонтанной и АДФ-индуцируемой агрегации, а также по начальной скорости АДФ-агрегации (tga). Одновременно с этим АСК ослабляет способность тромбоцитов к высвобождению фф. Р3 и Р4, вызывает снижение плазменного уровня маркеров взаимодействия тромбин-фибриноген (т.е. замедляет непрерывное внутрисосудистое свертывание крови), и повышает способность орга-™ХР) адеКВатН° РеагиР°вать на экзогенную гипертромбинемию (т.е. увеличивает

Степень всех найденных сдвигов, вызываемых АСК, линейно растет с увеличением его дозы в пределах от ISO до 400 мг/кг. О линейном характере зависимости эффекта от дозы АСК свидетельствуют значения коэффициентов аппроксимации (R ) трендов, характеризующих зависимость степени сдвигов от дозы (R2 для каждого оценивавшегося показателя не выходят за пределы от 0,94 до 0,98). Вместе с тем, увеличение дозы АСК (до 500 и 600 мг/кг) не ведет к достоверному усилению его влияния на изучавшиеся показатели состояния тромбоцитов, на НВСК и на ТкТР.

Динамика сдвигов всех показателей при разных дозах АСК предельно сходна: углы наклона трендов к оси категорий с увеличением дозы от 150 до 400 мг/кг колеблются от 42 до 48°, а эти малые различия между углами наклона трендов каждого показателя недостоверны - для всех сравниваемых пар тестов величины р > 0,05. Наиболее сходна динамика сдвига значений р в парах «сдвиги НВСК» и «изменения плазменного уровня ПДФ, РКМФ или D-димеров» (с каждым в отдельности).

Пределы сдвигов ошибки средней арифметической (ш) и среднеквадратическо-го отклонения (с) для величин, характеризующих изменения уровня D-димеров в разных ситуациях, меньше, чем для других маркеров НВСК. В связи с этим можно считать корректным суждение об интенсивности НВСК по уровню D-димеров, как это делали и другие исследователи [Н.М.Воробьева и др., 2009; de Moerloose F.Boehlen, 2003].

Всё вышесказанное относится к результатам, полученным через 24 ч после введения АСК. Через 48 и 72 ч даже значительное увеличение испытывавшихся доз АСК мало изменяет силу его влияния на общую коагуляционную активность тромбоцитов, их агрегационную и «высвобождающую» способность.

Содержание крыс на В5-авитаминном рационе снижает общую коагулоактив-ность тромбоцитов, их способность к агрегации и к реакции высвобождения, замедляет НВСК, не изменяя достоверно толерантности к тромбину.

Включение в рацион питания избытка ниацина, в количествах, адекватных лечебным дозам, сопровождается ростом общей КА тромбоцитов, повышением их агрегационной и высвобождающей способности, ускорением НВСК и ростом толерантности к тромбину.

Следовательно, избыток ниацина в дозах, адекватных лечебным, повышает КА тромбоцитов, являющихся, как установлено ранее [А.Ш.Бышевский и др., 1996; С.Л.Галян и др., 1997; Р.Г.Алборов, 2005; А.В.Багумян и др., 2007; Р.Г.Алборов и др., 2009; R.Beigel е.а., 2011], инициаторами ускорения непрерывного внутрисо-

судистого свертывания. Это обстоятельство не согласуется с данными об отрицательной ассоциации между НВСК и общей коагуляционной активностью тромбоцитов, описанной многими исследователями [И.В.Ральченко, 1998; П.Я.Шаповалов, Э.А.Шабанов, 1999; А.В.Багумян и др., 2007; Р.Г.Алборов и др., 2009; И.А.Дементьева, 1998; Р.Г.Алборов и др., 2009; C.M.Chesney е.а., 2000]. Наличие такой необычной ассоциации нашло объяснение в наших опытах, сопровождавшихся контролем состояния фибринолиза: его активность увеличивалась при введении АСК, избытка ниацина, и особенно обоих одновременно. Так, показано, что ниацин в дозах, адекватных лечебным, не только повышает коагулоактивность тромбоцитов, их способность к агрегации, к реакции высвобождения, к интенсификации НВСК, но и заметно ускоряет фибринолиз в эйглобулиновой фракции плазмы. Ускоряется лизис фибрина в эуглобулиновой фракции плазмы и при введении АСК (хотя и в небольшой степени). Фибринолиз же, являясь существенной составляющей противосвертывающей защиты организма [Б.А.Кудряшов, 1975; Г.С.Андреенко, 1979; А.Ш.Бышевский и др., 1990; Д.М.Зубаиров, 2000], активиру-ясь, не может не увеличивать толерантности к тромбину даже при высокой активности тромбоцитов. Это следует из данных, показавших, что на фоне воздействий, вызывающих рост общей свертывающей активности крови, ускорение фибринолиза может сопровождаться снижением частоты гибели животных (следовательно, повышением частоты выживания) после введения им токсических доз тромбина [Г.С.Андреенко, 1979; А.И.Ивашковский, 1986; Е.М.Шаповалова, 2010; BJ.Born е.а., 2011].

При введении АСК на фоне предварительного избыточного обогащения организма ниацином, его влияние на активность тромбоцитов сглаживается, а способность ускорять фибринолиз и повышать толерантность к тромбину, возрастает по типу неполной суммации эффектов.

АСК и ниацин (последний в разных дозах), вводимые порознь и совместно, вызывают изменения КА тромбоцитов. Динамика эффектов АСК и ниацина во времени и в зависимости от дозы при их введении порознь или совместно тесно положительно ассоциирована (при всех сочетаниях по два) показателей коагулоак-тивности (ОКАТ, CA, МА, фф. Р3 и Р4) и показателей НВСК (плазменный уровень ПДФ, РКМФ и D-димеров). Это следует из того, что значения г, для каждой пары колеблются в малых пределах (от 0,7 до 0,9).

Изменения толерантности к тромбину, как и изменения скорости фибринолиза также положительно ассоциированы между собой, однако, они отрицательно ассоциированы с показателями ОКАТ, показателями способности тромбоцитов к агрегации и с показателями, характеризующими НВСК: во всех анализируемых сочетаниях по два значения rs варьируют в пределах от 0,72 до 0,95.

АСК и ниацин способны повышать фибринолитическую активность в эйглобулиновой фракции плазмы и ТкТР, что особенно выразительно при введении АСК на фоне предварительного обогащения организма ниацином в дозах, адекватных лечебным. Причем, выявляется это у здоровых животных и у животных, подвергшихся, воздействиям, которые приводят к ускорению тромбиногенеза в степени,

приводящей к ускоренному потребление фибриногена.

Установленные факты обосновывают целесообразность и, более того, необходимость продолжать изучения эффектов АСК и ниацина, как средств направленного воздействия на гемостаз, которое реализуется через их влияние на тромбоци-тарный компонент, фибринолиз и опосредованно на толерантность к тромбину.

Исследования в этом направлении целесообразно продолжить в условиях эксперимента с использованием моделей, близких к реальным. Целью такого рода исследований должно быть составление или уточнение перечня патологических состояний, при которых эффекты совместного применения АСК и ниацина положительно изменяют толерантность к тромбину, т.е. способность организма адекватно реагировать на воздействия, провоцирующие ускорение тромбинобразования. Особенно важно продолжить наблюдения, которые позволят определить оптимальное соотношение доз АСК и ниацина, а также схемы их назначения при совместном введении на фоне разнообразных по механизму развития тромбофили-ческих состояний.

Не менее важно продолжить клинические наблюдения за эффективностью совместного использования АСК и ниацина как средств снижения частоты тромбо-геморрагических осложнений при заболеваниях, протекающих с наклонностью к тромбофилии.

ВЫВОДЫ

1. Введение ацетилсалициловой кислоты в дозе БЬ50 со сбалансированным по микро- и макронутриентам рационом питания снижает общую коагулоактивность тромбоцитов, их способность к агрегации, к реакции высвобождения и замедляет непрерывное внутрисосудистое свертывание крови, повышая толерантность к тромбину и ускоряя фибринолиз.

2. Дозазависимость эффектов АСК на общую коагуляционную активность тромбоцитов, их способность к агрегации и к реакции высвобождения, на непрерывное внутрисосудистое свертывание крови, толерантность к тромбину и фибринолиз выражена только через 24 ч после введения и малозаметна через 48 и 72 ч.

3. При содержании животных на рационе без ниацина снижается общая коагулоактивность тромбоцитов, их способность к агрегации и к реакции высвобождения, замедляется непрерывное внутрисосудистое свертывание крови, падает толерантность к тромбину и активность фибринолиза.

4. Избыток в рационе ниацина в дозах, превышающих суточную потребность в 4, 8 или 16 раз, повышает общую коагулоактивность тромбоцитов, их способность к агрегации и к реакции высвобождения, ускоряет непрерывное внутрисосудистое свертывание крови, ускоряет фибринолиз и повышает толерантность к тромбину.

5. Введение АСК на фоне питания рационом с избытком ниацина, активирующее влияние витамина на активность тромбоцитов компенсируется его свойством ускорять фибринолиз, и это обеспечивает рост толерантности к тромбину за счет суммации эффектов ниацина и АСК на фибринолиз.

6. На фоне предварительной нагрузки животных избытком ниацина в дозах, адекватных лечебным, ведение АСК ограничивает активирующее влияние ниаци-

на на коагулоактивность тромбоцитов, их способность к агрегации, к реакции высвобождения и к ускорению непрерывного внутрисосудистого свертывания крови, что обусловливает рост толерантности к тромбину; эта способность АСК ещё более выражена при его введении на фоне избытка ниацина на фоне гипертромбине-мии, вызванной травматическим токсикозом, повторной кровопотерей или введением прооксиданта.

7. Однократное введение АСК без избытка в рационе ниацина и на фоне предварительной нагрузки ниацином повышает частоту выживания животных при внутривенном введении им тромбина в дозе ВЬ50.

8. Характер сдвигов ОКАТ, СА, МА, фф. Р3, Р4, ПДФ, РКМФ и Э-димеров во времени и в зависимости от дозы АСК или ниацина сходен: разница между углами наклона трендов к оси категорий недостоверна (р>0,05); сдвиги тесно положительно ассоциированы между собой (г5 колеблется в пределах 0,7-0,9); сдвиги ТкТР и скорости фибринолиза положительно ассоциированы между собой, и отрицательно - с изменениями показателей состояния тромбоцитов и НВСК (во всех сочетаниях по 2 коэффициент г5 варьируют от 0,7 до 0,9).

Публикации по теме диссертации

1. Самойлов М.А., Влияние ингибиторов циклоксигеназы на агрегационные свойства тромбоцитов, непрерывное внутрисосудистое свертывание крови и толерантность к тромбину /соавт. Шаповалова Е.П., Ткаленко И.А.,Рудзевич А.Ю. и др.// Медицинская наука и образование Урала. - 2010. - 4 (64). - С.53-56.

2. Самойлов М.А., Роль тромбоцитов в реакции на гипертермию /соавт.Бышевский А.Ш., Карпова И.А., Рудзевич А.Ю., Ткаленко И.А. // Медицинская наука и образование Урала. - 2011. - 1(65).- С.59-61.

3. Самойлов М.А.,Влияние ниацина и АСК (порознь и одновременно) на частоту выживания животных при экзоген-ной тромбинемии /соавт. Ткаленко И.А. // Ме-едицинская наука и образование Урала. - 2011. - 2 (66). - С.95-97

4. Самойлов М.А., Влияние эстрогенов и гестагенов на коагуляционный и тромбо-цитарный гемостаз, непрерывное внутрисосудистое свертывание крови и толерантность к тромбину, их коррекция антиоксидантами /соавт. Бышевский А.Ш., Шаповалов П.Я., Ткаленко И.А. Карпова И.А. // Омский научный вестник. -2011.- 1 (104).-С. 105-109

5. Самойлов М.А., Гемостаз, перекисное окисление липидов и витамины. Адаптация биологических систем к естественным и экстремальным факторам среды /соавт. Бышевский А.Ш., Шаповалов П.Я., Галян С.Л., Ткаленко И.А., и др. // Матер. III международной научно-практической конф. - 2010. - Челябинск.: Челяб. гос.пед.университет.- С.40-43.

6. Самойлов М.А., Эффекты сочетания ниацин-АСК на коагулоактивность тромбоцитов, толерантность к тромбину и фибринолиз /соавт. Ткаленко И.А. // Матер. Всероссийской научно-практической конф. биохимиков и специалистов по лабораторной медицине: ОмскаяГМА . - 2011. - С.260-265.

7. Самойлов М.А., Влияние АСК на коагулоактивность тромбоцитов и толерантность к тромбину /Ткаленко И.А. // Матер. Всероссийской научно-практической конференции биохимиков и специалистов по лабораторной медицине: ОмскаяГМА. - 2011.- С.283-288.

Использованные сокращения

АСК Ацетилсалициловая кислота

ВТФ Взаимодействие тромбин-фибриноген

Б-Д Б-димеры

ЛПНП Липопротеиды низкой плотности

ЛПО Липидпероксидация

НВСК Непрерывное внутрисосудистое свертывание крови

НПВС Нестероидные противоспалительные средства

НК Никотиновая кислота

ПДФ Продукты деградации фибрина

РФМК Растворимые фибринмономерные комплексы

Ф. (фф.) фактор (факторы)

КА Коагуляционная активность

Самойлов Максим Алексеевич

ВЛИЯНИЕ НИАЦИНА НА ВЫЗЫВАЕМЫЕ АЦЕТИЛСАЛИЦИЛОВОЙ КИСЛОТОЙ СДВИГИ КОАГУЛОАКТИВНОСТИ ТРОМБОЦИТОВ, НЕПРЕРЫВНОГО ВНУТРИСОСУДИСТОГО СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ И ТОЛЕРАНТНОСТИ К ТРОМБИНУ (экспериментальное исследование)

03.01.04 -биохимия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Лицензия № 0177 от 10.06.96 г. Подписано к печати 18.04.2012 г. Отпечатано на ризографе с готового оригинал-макета, представленного автором. Формат 60x84 '/|6. Усл.-печ. л. 1,5 Уч.-изд. л. 1,5. Тираж 100 экз. Заказ № 20.

450000, г. Уфа, ул. Ленина, 3, ГБОУ ВПО БГМУ Минздравсоцразвития России

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Самойлов, Максим Алексеевич

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ (обзор литературы).

1.1. Влияние ниацина на свертывание крови.

1.2. Ацетилсалициловая кислота и гемостаз.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. Влияние АСК на коагулоактивность тромбоцитов, их способность к агрегации, к реакции высвобождения и толерантность к тромбину.

3.2. Влияние ниацина и его отсутствия на коагулоактивность тромбоцитов, на их агрегацию, реакцию высвобождения и толерантность к тромбину.

3.3. Влияние АСК (в условиях ежедневного введения избытка ниацина) на коагулоактивность тромбоцитов, их агрегацию, реакцию высвобождения, толерантность к тромбину и фибринолиз.

3.4. Влияние предварительного введения крысам избытка ниацина на сдвиги ОКАТ, способность к агрегации, к реакции высвобождения, интенсивность НВСК и толерантность к тромбину, вызываемые введением АСК у животных с провоцируемой гипертромбинемией.

3.5. Влияние избытка ниацина при одновременном введении димефосфона на ОКАТ, агрегацию и реакцию высвобождения тромбоцитов, на интенсивность НВСК и толерантность к тромбину.

3.6. Влияние возрастающего избытка ниацина и однократного введения АСК на частоту выживания животных при экзогенной дозированной тромбинемии.

4. ОБСУЖДЕНИЕ И ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

5. ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Влияние ниацина на вызываемые ацетилсалициловой кислотой сдвиги коагулоактивности тромбоцитов, непрерывного внутрисосудистого свертывания крови и толерантности к тромбину (экспериментальное исследован"

Актуальность проблемы. Анализ литературы последних десятилетий позволил следующим образом сгруппировать рассмотренные нами сведения, обосновывающие планируемое исследование:

- заметное, а возможно и ведущее, место среди причин, осложняющих течение многих заболеваний, и часто приводящих к летальным исходам, занимают тромбогеморрагии [Б.И.Кузник и др., 1974, 1979; Б.И.Кузник, 2010; З.С.Баркаган, 1998; De La Cruz е.а., 2000; D.Feng е. а., 2000; M.R. Lassen е.а., 2010];

- независимо от факторов, которые определяют наклонность к тромбофи-лии, её обязательной составляющей является ускоренный тромбиногенез или ослабление компенсаторной реакции, развивающейся в ответ на его ускорение [Б.А.Кудряшов, 1975; К.М.Лакин, 1998; Б.И.Кузник и др., 1989, 2010; В.П.Балуда и др.,1995; А.В.Аршинов и др., 1998; З.С. Баркаган, 1998; Д.М.Зубаиров, 2000; D.Feng е. а., 2000; H.M.Spronk е.а., 2003; К .Talbot е.а., 2010; M.R. Lassen е.а., 2010];

- толерантность к тромбину зависит от состояния коагуляционного (или биохимического) компонента системы гемостаза, а именно, особенно от уровня или активности соединений с антитромбиновыми свойствами [А.Ш.Бышевский и др., 1990; Д.М.Зубаиров, 2000] и от ингибиторов самосборки фибрина [А.Ш.Бышевский и др., 1987, 1990];

- выявлена зависимость ТкТР и от клеточного (главным образом от тром-боцитарного) компонента гемостаза [А.А.Вакулин, 1998; М.К.Умутбаева, 2003, 2004; А.Ш.Бышевский и др., 2005; Р.Г.Алборов, 2006; R.F.A.Zwaal е.а., 1977. R.F.A.Zwaal, 1982], тем более, что тромбоциты явлются одним из важнейших инициаторов гемокоагуляции, и непосредственным участником формирования так называемого первичного тромба [В.П.Балуда и др., 1995; А.Д.Макацария, 1997; С. А. Шитикова, 2000; А.Ш.Бышевский и др., 2005];

- утвердилось в последние годы представление о зависимости между содержанием продуктов взаимодействия тромбин-фибриноген (ВТФ) в кровотоке и интенсивностью непрерывного внутрисосудистого свертывания крови (НВСК), скорость которого отражает степень напряженности в системе гемостаза [Д.М.Зубаиров, 1976, 2000; Д.М.Зубаиров и др., 1989; А.Ш.Бышевский, 1984; А.Ш.Бышевский и др., 1996, 2003, 2006; И.Н.Бокарев, 2000 а, б, в, 2002; Zwaal, 1982; Zwaal е.а., 1977, 1992; М. Shara . е.а., 2007];

- доказано, что при экстремальных воздействиях сдвиги уровня маркеров внутрисосудистого свертывания крови, являющиеся одновременно и маркерами ВТФ, определяют наличие наклонности к гипер- или гипокоагуляции и позволяют судить о степени её выраженности [А.П.Момот, 1990; Т.А.Батрак, 1999; Э.А.Шабанов, 1999; И.Н.Бокарев, 2000 а, б, в, 2002; М.К.Умутбаева, 2003а, б, 2005];

- имеются четкие признаки двусторонней зависимости между состоянием гемостаза, в частности, между активностью тромбоцитов и интенсивностью липидпероксидации [С.Л.Галян и др., 1997; Ю.И.Бородин и др., 1998; Е.А.Бунакова и др., 1998; И.В.Ральченко, 1998; B.Engelmann е.а., 2010; S. Ji. е.а., 2011]. Это свидетельствует о принципиальной возможности направленного влияния на состояние гемостаза в организме дополнительным введением антиоксидантов.

Показано, что некоторые витамины-антиоксиданты в лечебных дозах и в дозах, адекватных лечебным (в эксперименте), ограничивают активацию тромбоцитов, уменьшая интенсивность НВСК при экспериментальной гипер-тромбинемии и способствует увеличению толерантности к тромбину [П.Я.Шаповалов и др. 1999; А.Ш.Бышевский и др., 2009; A.Sh.Bishevsky е.а., 2008 а. е., 2009; S.K. Das е.а., 2010]. Установлено, что эффекты соединений, уменьшающих способность тромбоцитов к агрегации, при одновременном введении с антиоксидантами усиливаются, и это позволяет надеяться, что применение так называемых антиагрегантов совместно с антиоксидантами выявит если не синергизм, то хотя бы суммацию эффектов. В этом случае появится возможность уменьшать дозу антиагрегантов. Это важно потому, что многие из них обладают достаточно выраженными побочными эффектами [М.Д.Машковский, 1998; M.Camacho, L Vila, 2000; A.Ciccone е.а., 2000; P.G. Steg е.а, 2010; R. Gao, X.Li, 2010].

Из антиагрегантов, применяющихся уже на протяжении многих десятилетий, судя по исследованиям разных лет, ацетилсалициловая кислота чаще других используется в лечении многих патологических состояний, протекающих воспалительными явлениями, болью, гипертермией, гипертромбине-мией, наклонностью к тромбозам или кровоточивости [Я.А.Сигидин и др, 1988; Е.Л.Насонов, О.В.Лебедева, 1996; П.П. Филиппов, 1998; M.Homoncik е.а, 2000; C.Patrono, B.Rocca , 2008; Ruiz-G. Irastorza е.а, 2010: S.Mallonee е.а, 2010; S.R.Mehta е.а, 2010]. В значительной степени именно это позволило Е.К.Алёхину [2008-2009] в недавнем обзоре, посвященном истории применения в лечебной практике АСК, сформулировать, как нам представлятся достаточно обоснованно, следующее:

С внедрением в лечебную практику новых H1IBC ныне используемые препараты, конечно, будут терять актуальность, но не АСК с его уникальной сферой применения. АСК уверенно шагает в XXI век, во второй век служения медицине, раскрывая всё новые грани своей биологической активности. Он заслуженно является лидером среди всех лекарственных препаратов. Ежегодно количество посвящённых АСКу публикаций в мире исчисляется тысячами. История АСК необычайно поучительна тем, как новые идеи и новые методические подходы позволяют получить весьма важные результаты при очень старом объекте исследования» [Е.К.Алёхин, 2008-2009].

Достаточно широко в клинике при многочисленных заболеваниях, в том числе и сопровождающихся нарушениями в системе гемостаза, используется и ниацин, обладающий, как и ряд других витаминов, антиоксидантными свойствами [К.Г.Урбанюк, 1961, 1962; S.I.Chekalinae.a, 1985; T.Fukuwatari е.а,

2007; J.F.Paolini, е.а, 2008].

Всё это определило избранное нами направление исследований, цель которых сформулирована ниже (выбор материалов и объектов исследований обосновывается нами в соответствующем разделе работы). Цель исследования. Установить характер и механизм влияния ниацина и ацетилсалициловой кислоты, вводимых порознь и совместно, на коагулоак-тивность тромбоцитов, непрерывное внутрисосудистое свертывание крови, фибринолиз и толерантность к тромбину.

Задачи исследования

1. Охарактеризовать у крыс-самцов, получающих сбалансированный по нут-риентам рацион питания, эффекты АСК на общую коагуляционную активность тромбоцитов, их способность к агрегации и к реакции высвобождения, на непрерывное внутрисосудистое свертывание крови (НВСК) и толерантность к тромбину (ТкТР).

3. Выявить, как влияет АСК в дозе DI50 при избытке ниацина на коагулоак-тивность тромбоцитов, их способность к агрегации и реакции высвобождения, на НВСК, на ТкТР и фибринолиз.

4. Установить, как влияет АСК в дозе DI50 при избытке ниацина на те же свойства тромбоцитов, на НВСК, ТкТР и фибринолиз у животных, подвергшихся воздействиям, инициирующим гипертромбинемию.

6. Провести анализ корреляции между сдвигами коагуляционной активности тромбоцитов, их способности к агрегации и к реакции высвобождения, с одной стороны, и с ТкТР и фибринолитической активностью с другой.

Дизайн экспериментов

Цель: изучить влияние ниацина и АСК (порознь и совместно) на коагуляционную активность тромбоцитов, НВСК, фибринолиз и ТкТР (подопытные животные - нелинейные крысы-самцы)

1. Охарактеризовать у крыс, получающих сбалансированный по нутриентам рацион питания, эффекты АСК на ОКАТ, способность тромбоцитов к агрегации и реакции высвобождения, на НВСК и ТкТР.

2. Изучить те же величины при отсутствии ниацина в рационе и при его избытке в количествах, адекватных средним и высоким лечебным дозам.

3. Выявить влияние АСК (DI50%) при избытке ниацина в рационе на активность тромбоцитов, их способность к агрегации и реакции высвобождения, на НВСК, толерантность к тромбину и фибринолиз.

4. Тоже, что в п. 3 у животных, подвергшихся воздействиям, инициирующим гипертромбинемию. 5. Изучить зависимость частоты выживания животных при внутривенном введении тромбина (ВЬ50%) от предварительного введения ниацина и АСК порознь и совместно. 6. Подвергнуть все полученные данные анализу, позволяющему установить характер ассоциации между сдвигами коагулоактивности тромбоцитов, сдвигами их способности к агрегации и к реакции высвобождения с одной стороны, толерантности к тромбину и фибринолитической активностью - с другой.

Научная новизна

1. Впервые установлено, что однократное введение АСК в DI50o/o со сбалан сированным рационом питания снижает общую коагулоактивность тромбоци тов, уменьшает их способность к агрегации и высвобождению прокоагулян тов (фф. Р3 и Р4), что сопровождается замедлением непрерывного внутрисосу дистого свертывания крови и повышением способности адекватно реагиро вать на гипертромбинемию, повышая толерантность к тромбину.

2. Впервые установлено, что избыточное введение с рационом ниацина количествах, превышающих в 4, 8 и 16 раз суточную потребность животных (т.е. в дозах, адекватных лечебным), повышает коагулоактивность тромбоцитов, их способность к агрегации и высвобождению прокоагулянтов фф. Р3 и Р4, но, ускоряя одновременно фибринолиз, повышает толерантность к тромбину.

3. Показано, что в случае предварительного обогащения рациона питания ниацином в адекватных лечебным дозам, эффекты АСК на фибринолиз и толерантность к тромбину частично суммируются и это позволяет снижать дозы АСК при его применении в качестве антиагреганта.

4. Впервые показано, что частота выживания при внутривенном введении тромбина в дозе, вызывающей гибель 50% животных - ВЬ50%, повышается, если животным предварительно введен АСК или они получали избыток ниа-цина; эффект особенно выражен при введении АСК на фоне избытка рациона ниацина.

Практическая значимость

Полученные результаты позволяют рекомендовать при заболеваниях, протекающих с тромбофилической наклонностью, обусловленной основным заболеванием, использовать АСК на фоне предварительного обогащения организма ниацином (например, при заболеваниях сердечно-сосудистой системы, при атеросклеротических изменениях и связанных с этим осложнениях), желательно также контролировать у таких больных степень В5-витаминной обеспеченности организма.

Данные о тесной положительной ассоциации между уровнем всех изучавшихся нами маркеров непрерывного внутрисосудистого свертывания крови (ПДФ, РКМФ и Б-димеров), и об одинаковой динамике сдвигов их плазменного уровня при разных воздействиях, изменяющих интенсивность непрерывного внутрисосудистого свертывания, позволяют при отсутствии условий для определения всей совокупности перечисленных маркеров контролировать уровень одного из них, а именно Б-димеров.

Основные положения, вынесенные на защиту

1. АСК, одним из оснований использовать который в практике являются его антиагрегантные свойства, угнетает агрегацию тромбоцитов, реакцию высвобождения прокоагулянтов (факторов Рз и Р4) и активирует фибринолиз в эуглобулиновой фракции плазмы, замедляя в связи с этим непрерывное внут-рисосудистое свертывание крови и повышая толерантность к тромбину.

2. Ниацин в дозах, превосходящих суточную потребность в 4, 8 и 16 раз, повышает коагулоактивность тромбоцитов, усиливая их способность к агрегации и к высвобождению прокоагулянтов, что ведет к ускорению непрерывного внутрисосудистого свертывания крови, однако, активирующийся одновременно фибринолиз обусловливает повышение толерантности к тромбину.

3. Введение АСК животным, рацион которых в течение десяти дней предварительно обогащался ниацином в дозах, превосходящих суточную потребность в 4, 8 или 16 раз, ограничивает активацию тромбоцитов, активирует фибринолиз, что ведет к существенному повышению фибринолиза и толерантности к тромбину благодаря неполной суммации эффектов ниацина и ан-тиагреганта на эти величины.

4. Сдвиги общей коагулоактивности тромбоцитов, спонтанной и АДФ-индуцируемой агрегации, реакции высвобождения, уровня ПДФ, РКМФ и Э-димеров во времени и зависимо от дозы АСК или ниацина сходны (разница между углами наклона трендов каждого из показателей к оси категорий недостоверны - р > 0,05), а сдвиги тесно положительно ассоциированы между собой (г8 колеблется в пределах 0,7-0,9); сдвиги ТкТР и скорости фибринолиза положительно ассоциированы между собой, и отрицательно ассоциированы с показателями коагулоактивности тромбоцитов и непрерывного внутри-сосудистого свертывания (во всех сочетаниях по два коэффициент г5 варьируют от -0,7 до -0,9).

Апробация и публикации Апробация. Основные материалы работы обсуждены на Всероссийских и международных конференциях: III Международной научно-практической конференции «Адаптация биологических систем к естественным и экстремальным факторам среды» - Челябинск. - 2010, на Всероссийской научно-практической конференции биохимиков и специалистов по лабораторной медицине «Медицинская биохимия и клиническая лабораторная диагностика в аспекте модернизации системы научных исследований» - Омск -2011. Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 статей, из них 5 в журналах рекомендованных ВАК РФ для размещения материалов кандидатских диссертаций, 3 - в других медико-биологических журналах.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

В этом разделе мы рассматриваем два соединения, совместные эффекты которых на гемостаз намечено изучать в соответствие с целью наших исследований - ниацина и АСК. Оба соединения широко используюся в медицинской практике, и оба нередко применяются в лечении и профилактике многих патологических состояний, важной особенностью которых являются сдвиги в системе гемостаза, которые сопровождаются тромбофилической наклонностью [З.С.Баркаган, 1988, 1998; В.П.Балуда и др., 1995; А.В.Аршинов и др., 1998; J.A.Pires, R.R.Grummer, 2007; N.V.Perricone е.а., 2008].

Витамин РР - абревиатура от «pellagra preventive» - имеет также и буквенное обозначение - витамин В5. Имеются и другие наименования - ниацин, антипеллагрический фактор (тривиальные), кислота никотиновая, никотина-мид (предложенные IUPAC). Мы будем использовать чаще самое краткое из них - ниацин, исключая случаи, в которых речь идет о конкретном препарате - никотиновой кислоте или её амиде.

Ниацин синтезируют многие растительные и животные организмы из триптофана [А.И.Колотилова и др., 1976; Т. Т. Fukuwatari, K.Shibata, 2007; S.L.Thorn, G.S.Young е.а., 2007]. Источники его в питании - преимущественно продукты животного происхождения. Из растительных продуктов ниацином особенно богаты бобовые растения. В зерновых он содержится в форме эфира ниацитина, неусваиваемого организмом, [П.Е.Калмыков, М.Н.Логаткин, 1974; Y.Egashira е.а., 2007].

Ниацин термоустойчив и при кулинарной обработке потери не превышают 15-20 % [М.И.Смирнов (ред.), 1974; П.Н.Шараев, 2004; М. Shara . е.а., 2007]. Алиментарная недостаточность (пеллагра) проявляется симптомоком-плексом, обусловленным отсутствием или дефицитом в питании ниацина и других витаминов группы В [H.Okamoto е.а., 2003]. Эндогенный гиповитаминоз возникает при рентгенооблучении, оперативных вмешательствах, термических ожогах, длительном приеме сульфаниламидов, хроническом колите, а также у больных с ограниченной резекцией желудка [П.Н.Шараев, 2004; Р.ТЬапкасЬап е.а, 2008].

По химической природе ниацин - Р-пиридинкарбоновая кислота, а амид никотиновой кислоты, обладающий антипеллагрическим действием, рассматривают как провитамин [Т.Рики\¥а1ап, К.8ЫЬа1а, 2007]. Известны три изо-формы пиридинкарбоновой кислоты (а, Р и у) - пиколиновая, никотиновая и изоникотиновая кислоты соответственно, Р-форма устойчивей и специфически активнее, следующий по антипеллагрической активности - амид никотиновой кислоты [А.П.Гаврилов и др, 1966].

Как и другие витамины, ниацин функционирует как компонент простети-ческой группы энзимов (т.е. как коэнзим). Перечень ферментов, содержащих в составе простетической группе ниацин, систематическое и рабочее их название, а также шифр по МКФ приведены в монографических работах [А.И.Колотилова, Е.П.Глушанков, 1976; 8. Dagly, Б.Е.Мсо^оп, 1970].

Множественность метаболических реакций, в которых участвует ниацин в коферментных формах, определяет его место в обменных процессах, и тяжесть поражений, связанных с его дефицитом [Р.Ь.Сгееке, е.а, 2007]. Этим же обусловлена и широта лечебного применения никотиновой кислоты. Продемонстрируем это единичными примерами. Участвует ниацин в ряде окислительно-восстановительных процессах во многих тканях [К.8ЫЬа1а, К.Мига1а, 1986; А.СИеп е.а, 2007; М.М.ТауагеБ, е.а. 2007], в метаболизме липидов [8.Рагю, 2008; J.E.Feig е.а, 2008; М.МШег е.а, 2008; УА.Р^Ьауап , 2008]. От обеспеченности ниацином зависит функционирование нервной и сердечно-сосудистой систем [Б.И.Сойбель, 1962; 1964, 1967; Г.И.Соломко, 1965; У.8.АП е.а. , 2008; У.О.Ргешкишаге.а, 2008]. Известны и фармакодинамические свойства НЦ [П.Н.Шараев, 2004; Ъ. Уаки^аки, 2007; Е.СагЬа11о-1апе е.а, 2007;

ОиуЬп, 2007].

Всё это априорно позволяет предполагать, что обеспеченность ниацином, как и его введение с лечебными целями небезразличны и для гемостаза, и это подтверждается пристальным вниманием исследователей к вопросу о влиянии ниацина на метаболизм здоровых и больных. Так, лишь за последние 5 лет более 3000 публикаций об этом представлены в Национальной библиотеке медицины и Национальном институте здоровья США (A service of the U.S. National Library of Medicine and the National Institutes of Health).

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Самойлов, Максим Алексеевич

5. ВЫВОДЫ

1. Введение ацетилсалициловой кислоты в дозе ВЬ50 со сбалансированным по микро- и макронутриентам рационом питания снижает общую коа-гулоактивность тромбоцитов, их способность к агрегации, к реакции высвобождения и замедляет непрерывное внутрисосудистое свертывание крови, повышая толерантность к тромбину и ускоряя фибринолиз.

6. На фоне предварительной нагрузки животных избытком ниацина в дозах, адекватных лечебным, ведение АСК ограничивает активирующее влияние ниацина на коагулоактивность тромбоцитов, их способность к агрегации, к реакции высвобождения и к ускорению непрерывного внутрисосуди-стого свертывания крови, что обусловливает рост толерантности к тромбину; эта способность АСК ещё более выражена при его введении на фоне избытка ниацина на фоне гипертромбннемни, вызванной травматическим токсикозом, повторной кровопотерей или введением прооксиданта.

8. Характер сдвигов ОКАТ, С А, МА, фф. Р3, Р4, ПДФ, РКМФ и В-димеров во времени и в зависимости от дозы АСК или ниацина сходен: разница между углами наклона трендов к оси категорий недостоверна (р>0,05); сдвиги тесно положительно ассоциированы между собой (г5 колеблется в пределах 0,7-0,9); сдвиги ТкТР и скорости фибринолиза положительно ассоциированы между собой, и отрицательно - с изменениями показателей состояния тромбоцитов и НВСК (во всех сочетаниях по 2 коэффициент г8 варьируют от 0,7 до 0,9).

4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ И ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Анализируя медико-биологические публикации от начала 40-х гг. прошлого столетия по настоящее время, касающиеся влияния ниацина и АСК на гемостаз, мы обратили внимание на ряд положений, которые с нашей точки зрения, характеризуют эти функционально различные соединения по их отношению к важной системе жизнеобеспечения, какой является система свертывания крови.

Прежде всего, обратило на себя внимание то, что среди многих причин, отягощающих распространенные заболевания, нередко приводящие к летальным исходам, ведущее место принадлежит тромбоэмболическим осложнениям [Б.И.Кузник и др., 1979; Б.И.Кузник, 2010; З.С.Баркаган, 1988; И.Н.Бо-карев, 2002; De La Cruz J.P. e.a., 2000; D.Feng е. а., 2000; M.R. Lassen e.a., 2010; S.M. Schellong e.a., 2010]. Оказалось, что ускоренный тромбиногенез или снижение толерантности к тромбину являются обязательными факторами, обусловливающими возможность реализации тромбоэмболических осложнений [Д.М.Зубаиров, 1976 и др., 1976; К.М.Лакин и др., 1981; А.Ш.Бы-шевский и др., 1990; В.П.Балуда и др.,1995; Д.М.Зубаиров, 2000; Б.И.Кузник и др., 2010; H.M.Spronk e.a., 2003; К .Talbot e.a., 2010; R.Cardigan e.a., 2011].

Доказано, что толерантность к тромбину зависит от важной биохимической составляющей гемостаза - от уровня антитромбинов и ингибиторов самосборки фибрина [А.Ш.Бышевский и др., 1987, 1990; Д.М.Зубаиров, 2000], а также от состояния тромбоцитов, являющихся одним из инициаторов свертывания и участником образования первичного тромба [А.Д.Мака-цария, 1997; И.А.Дементьева, 1998; С. А. Шитикова, 2000; М.К.Умутбаева, 2004; Р.Г.Алборов, 2006; А.Ш.Бышевский и др., 2005; L.Green e.a., 2010].

Убедительно показано, что интенсивность непрерывного внутрисосу-дистого свертывания крови (HB CK), характеризующая степень напряженности гемостаза зависит от содержания в крови продуктов взаимодействия тромбин-фибриноген [Д.М.Зубаиров и др., 1989; А.Ш.Бышевский и др., 2003,

2006; И.Н.Бокарев, 2000 а, б, в, 2002; R.F.A.Zwaal, 1982; R.F.A.Zwaal е.а., 1992; М. Shara . е.а., 2007; R.Cardigan е.а., 2011], и что сдвиги уровня этих продуктов определяют вероятность развития гипер- или гипокоагуляции [А.П.Момот, 1990; Т.А.Батрак, 1999; И.Н.Бокарев, 2000 а, б, в, 2002; М.К.Умутбаева, 2003а, б, 2005; S.Lison е.а., 2011].

Несомненно, имеется зависимость между коагулоактивностью тромбоцитов и скоростю перекисного окисления липидов, что указывает на возможность изменять состояние гемостаза в организме дополнительным введением антиоксидантов [С.Л.Галян и др., 1997; Е.А.Бунакова и др., 1998; B.Engelmann е.а., 2010; S. Ji. е.а., 2011]. Есть данные о том, что витамины со свойствами антиоксидантов в дозах, превышающих потребность, сдерживают активацию тромбоцитов и тормозят НВСК при гипертромбинемии и увеличивают толерантность к тромбину [П.Я.Шаповалов и др. 1999; A.Sh.Bi-shevsky е.а., 2008, 2009; S.K. Das е.а., 2010]. Установлено, что эффекты соединений, уменьшающих способность тромбоцитов к агрегации, при одновременном введении с антиоксидантами усиливаются, следовательно ожидаемо, что совместное использование антиагрегантов с антиоксидантами выявит как минимум, суммацию эффектов, что позволит уменьшать дозу антиагрегантов. Многие из них обладают заметными побочными эффектами [М.Д.Машковский, 1998; M.Camacho, L Vila, 2000; A.Ciccone е.а., 2000; P.G. Steg е.а., 2010; R. Gao, X.Li, 2010].

Оказалось, что из антиагрегантов АСК чаще других используют в лечении заболеваний с наклонностью к тромбофилии или кровоточивости [Е.Л.Насонов и О.В.Лебедева, 1996; П.П. Филиппов, 1998; M.Homoncik е.а., 2000; C.Patrono, B.Rocca , 2008; Ruiz-G. Irastorza е.а., 2010: S.Mallonee е.а., 2010; S.R.Mehta е.а., 2010]. АСК - как антиагрегант по длительности и широте его использования в медицинской практике занимает первое место среди всех лекарственных препаратов такого типа [Е.К.Алёхин, 2008-2009; J.W.Suh е.а., 2011].

Совокупность этих сведений определила цель исследования, предпринятого нами, и обусловила выбор объектов и алгоритм действий для её достижения (см. «Дизайн экспериментов»).

Начали своё исследование с оценки у крыс общей коагулоактивности тромбоцитов (ОКАТ), оценки их способности к спонтанной и АДФ-аг-регации, к реакции высвобождения, интенсивности непрерывного внутрисо-судистого свертывания крови (НВСК) при содержании на сбалансированном рационе питания до и после введения АСК в DI50o/o, величина которой заимствована нами из ранее выполненных и опубликованных работ [Р.Г.Алборов, 2006; И.А.Дементьева, 1998; И.Р.Ральченко, 1998;]. Оказалось, что эта доза АСК в наших экспериментах снижает величину максимальной агрегации, индуцированной АДФ, на величину, близкую к 50% - с 57,2±5,3 до 28,1±3,5, т.е. на 50,9% при р < 0,02. Одновременно снижаются значения всех других величин, характеризующих коагулоактивность тромбоцитов, скорость НВСК, а ТкТР повышается (табл. 1).

Изучив эффекты возрастающих доз АСК (рис. 2 по данным табл. 2), мы нашли:

1. общая коагулоактивность тромбоцитов (ОКАТ), их способность к агрегации (СА, MA, tga), к высвобождению прокоагулянтов (фф. Р3 и Р4) снижается, падает уровень маркеров НВСК и растет ТкТР с увеличением дозы антиагреганта;

2. степень прироста всех перечисленных сдвигов, вызываемых АСК, растет линейно при увеличении дозы от 150 до 400 мг/кг, о чем свидетельствует коэффициенты аппроксимации (R ) соответствующих трендов - их значения для каждого из исследованных показателей лежат в пределах от 0,94 до 0,98;

3. дальнейшее увеличение дозы АСК (до 500 и 600 мг/кг) не сопровождается достоверным изменением степени сдвигов, т.е. увеличением эффекта;

4. динамика сдвигов всех показателей с изменением дозы относительно контроля сходна - углы наклона трендов с увеличением дозы от 150 до 400 мг/кг лежат в пределах 42-48°, а разницы между углами наклона каждого показателя недостоверны (для всех сравниваемых пар р > 0,05). Особенно сходна динамика маркеров НВСК - ПДФ, РКМФ и D- димеров.

40 -I 30 20 10 -I ОКАТ---СА

---Р-4 - «- - ПДФ

МА РКМФ tg а D-дим.

- - - Р-3 □ ТкТР Ж та та та

TkTF^

--I--ч

ОКАТ

150

300

400

500

600 мг/кг

Рисунок 2. Изменения (в процентах от контрольных величин) коагулоактив-ности тромбоцитов, интенсивности непрерывного внутрисосудистого свертывания крови (НВСК) через 24 ч после введения увеличивающихся доз АСК

То, что ошибки средней арифметической (ш) и среднеквадратического отклонения (о) показателей уровня D-димеров оказались ниже, чем у других маркеров HB CK позволило нам в дальнейших экспериментах судить об интенсивности НВСК, ориентируясь на сдвиги уровня D-димеров. В принятии такого решения нас поддержало также то, что и другие исследователи считают возможным по величине этого показателя судить о скорости НВСК [И.Н.Бокарев, 2002; А.В.Багумян и др. 2007; В.А.Полякова и др., 2008; De P.Moerloose, F. Boehlen, 2003; A.Sh.Bishevsky e.a, 2008; F.A.Anderson e.a, 2010].

Данные той же табл. 2, где представлена также зависимость сдвигов от времени, прошедшего после введении АСК, позволяют заметить, что его эффект на все показатели ослабляется с увеличением интервала между введением антиагреганта и временем отбора проб для исследований. При этом сохраняется дозазависимость в интервале от 150 до 400 мг/кг при отборе проб через 48 ч, и в интервале от 150 до 300 мк/кг через 72 ч.

Найденное позволяет считать, что заметное повышение дозы АСК, вводимого с рационом, в малой мере изменяет степень его влияния на активность тромбоцитов через 48 и особенно через 72 ч после введения. Это же относится и его влиянию на ТкТР.

В большей мере сказывается на степень сдвигов коагулоактивности тромбоцитов и ТкТР увеличение дозы АСК со 150 до 400 мг/кг в промежутке между 24 и 48 часами после его введения.

Обратило на себя внимание и то, что степень изменения АДФ-индуци-руемой агрегации (МА) и её начальной скорости (tg а) относительно контроля близки не только при разных дозах АСК, но и в разные сроки его введения, что позволило ограничиться определением из этих показателей только максимальной АДФ-индуцируемой агрегации (МА), тем более что, анализируя новые публикации, мы обнаружили близкие по степени сдвиги МА и tg а в разных экспериментальных и клинических ситуациях [С.Л.Галян и др., 1997; А.А.Вакулин, 1998; А.В.Соловьева, 1999; А.Ш.Бышевский и др., 2008;

Е.М.Шаповалова, 2010; R.Beigel е.а., 2011; D.C.Davidson е.а., 2011]. Видимо, заметный рост дозы АСК при его введении с рационом мало изменяет его влияние на коагулоактивность тромбоцитов спустя 48 и 72 ч. Это же относится и к влиянию АСК на НВСК (уровень ПДФ, РКМФ и D-димеров меняется в одном направлении и в сходной степени). Поэтому далее мы отказались от оценки tg а, ПДФ и РКМФ.

Рассмотрим эффекты ниацина и его отсутствия, представив их в виде сдвигов в % от контроля (табл. 10), что облегчает их графический анализ.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Самойлов, Максим Алексеевич, Уфа

1. Абрашитова Г.А. Влияние делипина и никотиновой кислоты на состояние свертывающей и антисвертывающей систем крови при силикозе / Г.А.Абрашитова // Здравоохранение Казахстана. - 1966. - 7. - С.23-27.

2. Абелев Г.И. Воспаление / Г.И.Абелев // Соросовский Образовательный Журнал. 1996. - 10. - С. 28-32.

3. Алборов Р.Г. Витамин С (аскорбиновая кислота) и гемостаз / Р.Г.Ал-боров, Л.А.Васильев, В.В.Кондаков и др. // Медицинская наука и образование Урала. -2009. 2/58. - С. 143-146

4. Алборов Р.Г. Роль клеток крови в связи между толерантностью к тромбину, содержанием в кровотоке продуктов взаимодействия тромбин-фибриноген и липидпероксидацией: Автореф. дисс. . д.м.н. Тюмень. -2006. 42 с

6. Амосова Е. Н. Сахарный диабет и ишемическая болезнь сердца / Е. Н. Амосова // Журнал АМН Украины. 2000. - 6. - 3, с 508-517.

7. Андреенко Г.В. Механизм действия никотиновой кислоты на фибрино-литическую активность крови / Г.В.Андреенко, Л.А.Мигалина // Система свертывания крови. Киев: Здоровья. - 1969. - С.9-10

8. Андреенко Г.В. Фибринолиз (биохимия, физиология, патология) / Г.В.Андреенко // М.: МГУ. 1979. - 352 с

9. Аршинов A.B. Оценка состояния гемостаза у больных системными заболеваниями соединительной ткани на фоне пульс-терапии дексавеном / A.B.Аршинов, А.С.Полтырев, А.Г.Бородина // V Российский национ. конгресс «Человек и лекарство» М., 1998. С. 13.

10. П.Балуда В.П. Лабораторные методы исследования системы гемостаза / В.П.Балуда, З.С.Баркаган, Е.Д.Гольдберг и др. // Томск. - 1980. - 310 с.

11. Балуда В.П. Физиология системы гемостаза / В.П.Балуда, М.В.Балуда, И.И.Деянов, И.К.Тлепшуков // М. 1995. - 243 с.

12. Баркаган З.С. Введение в клиническую гемостазиологию / З.С. Баркаган // М.:Ньюдиамед-АО. 1998.-45 с.

13. И.Баркаган З.С. Геморрагические заболевания и синдромы / З.С.Баркаган М.: Медицина. 1988. - 528 с.

14. Баркаган З.С. Гипергомоцистеинемия как самостоятельный фактор риска поражения и тромбирования кровеносных сосудов / З.С.БаркАган, Г.И.Костюченко, Е.Ф.Котовщикова // Патология кровообращения и кардиохирургия. 2002. - 1. - С.65-71

15. Баркаган З.С. Диагностика и контролируемая терапия нарушений гемостаза /3-е изд.: Ньюдиамед. 2008. - 292 с.

16. Белик Я.В. Биохимия свертывания крови / Я.В.Белик, Е.Л.Ходорова // Киев: АН УССР. 1957. - 171 с

17. Бокарев И.Н. Дифференциальная диагностика и лечение внутренних болезней. Кровоточивость, или геморрагический синдром. Дифференциальная диагностика / И.Н.Бокарев // М. 2002. - 75 с.

18. Бокарев И.Н. Атеротромбоз проблема современности / И.Н.Бокарев // Тромбоз, гемостаз и реология. - 2000 а. - С. 6-7.

19. Бокарев И.Н. Атеротромбоз проблема современности // «Тромбозы, геморрагии, ДВС-синдром. Проблемы лечения / И.Н.Бокарев // М. - 2000 б.-С. 47-52

20. Бокарев И.Н. Тромбозы, предтромботические состояния, тромбофилии и гиперкоагуляция / И.Н.Бокарев // Тромбозы, геморрагии, ДВС-синдром. Проблемы лечения, 2000 в. С. 39-43

21. Бородин Ю.И. Зыков A.A., Головнев В.А. и др. Природные биофлаво-ноиды как средства для эндоэкологической санации // V Российский национальный конгресс «Человек и лекарство» М., 1998. С. 13-14

22. Бременер С.М. Витамины и их клиническое применение /С.М.Бременер // М.: Медицина. 1966. - 419 с

23. Бунакова Е.А., Аржанова Ш.А., Гамарник Е.А. Лечение гиповитаминоза у больных сахарным диабетом // V Российский национ. конгресс «Человек и лекарство» М., 1998. С. 34.

24. Бышевский А.Ш. Влияние витамина А, никотиновой кислоты, витаминов В12 и Е на толерантность крыс к тромбину / А.Ш.Бышевский // Тез докл. 1 конф. Украинского фармакол. Общества. Тернополь. - 1966а. -С. 27

25. Бышевский А.Ш. Влияние некоторых витаминов на уровень гуморальных агентов и функциональную активность физиологической противосвертывающей системы: Автореф. дисс. . д.м.н. Львов. - 19666. -22 с

26. Бышевский А.Ш. Регуляция коагуляционных превращений фибриногена / А.Ш.Бышевский, С.Л.Галян, П.И.Левен и др // Свердловск: Средне-Уральское книжное издательство. 1987. 205 с

27. Бышевский А.Ш. Биохимические компоненты свертывания крови / А.Ш.Бышевский, О.А.Терсенов, С.Л.Галян и др. // Свердловск: Средне-Уральское книжное изд-во. 1990. - 211 с

28. Бышевский А.Ш. Результаты и перспективы изучения гемостаза / А.Ш.Бышевский // Медико-биологический вестник им. Я.Д.Витебского, 1996 2 (6). - С. 20-21.

29. Бышевский А.Ш. «Способ определения содержания продуктов деградации фибрина» № 1659855, регистрация 1.03. 1991 г, публикация Бюлл.24, 30.06. 1991 (соавторы-И.А.Мухачева, В.М.Шафер)

30. Бышевский А.Ш. Витамины и здоровье женщины / А.Ш.Бышевский,

31. B.Н.Кожевников // Красноярск: Издательство Красноярского университета. 1991.- 192 с

32. Бышевский А.Ш. Тромбоциты (состав, функции, биомедицинское значение) /А.Ш.Бышевский, С.Л.Галян и др. // МАИ, Объединение биохимиков Урала, и Западной Сибири, ТГМА: Тюмень. 1996 - 250 с

33. Бышевский А.Ш. Механизм взаимосвязи между гемостазом и ПОЛ / А.Ш.Бышевский, И.А. Аптекарь, Е.А.Тетерина и др. // Материалы 1-й Всероссийской научн. конф. «Клиническая гемостазиология в сердечнососудистой хирургии». М., 2003. С. 16

34. Бышевский А.Ш. Способ определения толерантности животных к тромбину / А.Ш.Бышевский, Л.В.Михайлова, Р.Г.Алборов и др. // Патент № 2219546, приоритет от 04.05.2000, зарегистрирован в Госреестре изобретений РФ 20.12.2003а

35. Бышевский А.Ш. О роли щитовидной железы в регуляции гемостаза / А.Ш.Бышевский, С.Л.Галян, Г.А.Сулкарнаева и др. // Москва «Медицинская книга». 2005 а. - 80 с.

36. Бышевский А.Ш. Зависимость взаимодействия тромбин-фибриноген от активности тромбоцитов /А.Ш.Бышевский, С.Л.Галян, Н.Н.Зороастрова,

37. C.В.Миневцев // Медицинская наука и образование Урала. 20056. - 3. -С.71-72

38. Бышевский А.Ш. Витамины, внутрисосудистое свертывание крови и ли-пидпероксидация /А.Ш.Бышевский, С.Л.Галян, П.Я.Шаповалов // М.: Медицина. 2006. - 105 с

39. Бышевский А.Ш. Фибринолиз у белых крыс под влиянием никотиновой кислоты / А.Ш.Бышевский // Врач. дело. 1963 б. - 9. - С. 13-16

40. Бышевский А.Ш., Соловьев В.Г., Селиванова И.В. Патент № 2061953 на Способ количественного определения общей коагуляционной активности тромбоцитов». Публикация в Бюлл. № 16. 10. - 06. 1996а.

41. Бышевский А.Ш. Влияние разных доз витамина С на толерантность к тромбину у несинтезирующих его животных /А.Ш.Бышевский, Р.Г.Ал-боров, Е.М.Шаповалова и др. // Медицинская наука и образование Урала. 2009. - 2 (58). - С.55-56

42. Вакулин A.A. Роль эритроцитов и лейкоцитов в поддержании активности тромбоцитов в зависимости от состояния перекисного окисления ли-пидов: Автореф. дисс .докт. мед. наук. Челябинск. - 1998. - 42 с.

43. Витамины и минеральные вещества / под ред. М.И.Смирнова // М.: Медицина. 1974. - 496 с

44. Галян C.JI. Защитный эффект АСК на фоне введения витаминов-антиоксидантов / С.Л.Галян, А.А.Вакулин, И.А.Дементьева // Научный вестник ТГУ. Биология. 1997. - 2. - С. 50-52.

45. Герасимова И.Л. Влияние никотиновой кислоты на свертываемость крови у больных атеросклерозом и у здоровых / И.Л.Герасимова // В кн. Патология кровообращения. Кемерово. - 1962а. - 29. - С. 127-129

46. Герасимова И.Л. Влияние никотиновой кислоты на свертывание крови человека, содержание в ней гепарина и фактора просветления у больных атеросклерозом / И.Л.Герасимова // Кардиология. 1963. 1. - С. 61-64

47. Гланц С.А. Медикобиологическая статистика / С.А.Гланц // М.: Практика. 1998. - 112 с

48. Гутина М.А. Реакция сосудов уха кролика на никотиновую кислоту при болевом спазме /М.А.Гутина // Фармакол. и токсикол. 1964. - 10. - С.65-69

49. Грицюк А.И. Фибринолитическая система крови человека и методы её лабораторного исследования / А.И.Грицюк. Киев: «Здоровья». 1969. -169 с

50. Дементьева И.А. Влияние витаминов-антиоксидантов на антиагрегант-ную активность соединений, модифицирующих превращения в тромбоцитах арахидоновой кислоты: Автореф. .дисс. докт. мед. наук. Челябинск. - 1998.-41 с.

51. Диксон М. Ферменты /М.Диксон, Э.Уэбб // М.: Мир. 1966. - 816 с

52. Довгялло Г.Х. Эффекты никотиновой кислоты на свертываемость при атеросклерозе / Г.Х.Довгялло, И.С.Гулько, А.А.Кокош // Тр. III съезда терапевтов БССР. Минск. - 1967. - С. 66

53. Ельдецова С.Н. Гемокоагуляционные сдвиги и активность радикальных процессов в плазме и эритроцитах при экстремальных воздействиях в эксперименте: Автореф. дисс. . к. б. н. Челябинск. - 1990.-24 с

54. Ефремов В.В. Витамины и их значение для человека / В.В.Ефремов // М.: Медгиз. 1949.- 132 с

55. Сф1мов A.C. Д1абетичш макроанпопатй' / А.С.Сф1мов, О.С.Серпенко//

56. Зверева И.В.Связь кобаламина с гемостазом / И.В.Зверева, А.Ш.Бы-шевский, М.К.Умутбаева и др. // Медицинская наука и образование Урала. 2008. - 6/50. - С. 9-12. бЗ.Зубаиров Д.М. Теория непрерывного свертывания крови / Д.М.Зубаиров

57. Ивашковский А.И. Показатели свертыфвающей и фибринолитической активности тромбоцитов в остром периоде течения инфаркта миокарда: Автореферат дисс. . к.м.н. Киев, 1986. - 26 с

58. Калмыков П.Е. Современные представления о главных составных частях пищи / П.Е.Калмыков, М.Н.Логаткин // Л.: Медицина. 1974. - 239 с

59. Киселева Л.Н. Изменения свертываюшей и противосвертывающей систем крови под влиянием никотиновой кислоты / Л.Н.Киселева, Г.К.Романенко // Тез. докл. к научной сессии по фибринолизу. J1. 1965. - С.14-14

60. Климова М.С. Влияние никотиновой кислоты на число тромбоцитов /М.С.Климова // Труды Саратовского медицинского института. Саратов. - 1947. - 6. - С.37-38

61. Колотилова А.И. Витамины (химия, биохимия и физиологическая роль) /А.И.Колотилова, Е.П.Глушанков // JL: Изд-во Ленинградского университета. 1976. - 247с

62. Кошкин И.В. Совет врача. Артериальная гипотензия / И.В.Кошкин // Набережные Челны, 2005 18 - http://www.nabchelny.ru/zdravo/vashezdoro-ve/2005-02-1 l/arterialnaiagipotenziia

63. Кудряшов Б.А. Биологические проблемы регуляции жидкого состояния .крови и ее свертывания / Б.А Кудряшов // М. - 1975. - 488 с.

64. Кузник Б.И. Форменные элементы крови, сосудистая стенка, гемостаз и тромбоз / Б.И.Кузник, В.П.Скипетров // М.: Медицина. 1974. - 308 с.

65. Кузник Б.И., Малежик Л.П., Молчанова Н.Л. Прокоагулянтная и фибри-нолитическая активность ультраструктур интимы аорты в норме и при кровопотере // Пробл. гематол. и перелив, крови. 1979. - 23. - 6. - С. 4449.

66. Кузник Б.И. Клеточные и молекулярные механизмы регуляции системы гемостаза в норме и патологии / Б.И.Кузник // Чита: Экспресс-издательство. 2010.-827 с.

67. Курцинь О.Я. Инструкция по приготовлению основной диеты для крыс / О.Я.Курцинь // Институт питания АМН ССР. М. - 1952. - 5 с

68. Лавров Б.А. Содержание лимонной кислоты в крови у крыс при длительной даче больших доз витамина Д / Б.А.Лавров, Е.Л.Терентьева // Вопр. питания. 1963. - 3. - С. 68-72.

69. Лакин K.M. Проблемы фармакологического поиска ингибиторов агрегации тромбоцитов / K.M. Лакин // Кардиология, 1988. 28. - 10. - С. 120126.

70. Лакин K.M. Фармакологическая регуляция жидкого состояния крови / К.М.Лакин, В.П.Балуда // Актуальные проблемы гемостазиологии. М.: Наука, 1981.-С. 430-460.

71. Латфуллин И.А. Инфаркт миокарда / И.А. Латфуллин // Казань: Медицина, 1998.-216 с.

72. Липовецкий Б.М. Инфаркт, инсульт, внезапная смерть. Факторы риска, предвестники, профилактика /Б.М.Липовецкий // СПб.: Специальная литература, 1997. 191 с.

73. Лошкарева Л.С.Зависимость интенсивности непрерывного внутрисосу-дистого свертывания крови и толерантности к тромбину от гемокоагуля-ционной активности тромбоцитов: Автореф. дисс. . к.м.н. Челябинск. - 1999.-23 с

74. Макацария А.Д. Вопросы циркуляторной адаптации системы гемостаза при физиологической беременности и синдром диссеминированного внутрисосудистого свертывания / А.Д.Макацария, А.Л.Мищенко // Акуш. и гин. 1997.- 1.- С.38-41.

75. Максимович Я.Б. О неспецифической активности никотиновой кислоты: Автореф. дисс. . к. м. н. Львов. - 1949. - 22 с

76. Малкин З.И. О фармамакодинамическом и терапевтическом действии никотиновой кислоты / З.И.Малкин, С.И.Щербатенко, Л.А.Лушникова // Тер. архив. 1948. . - 20. . - 6. - С. 62-74

77. Марченко Д.С. Влияние АСК на тромбоцитарный и коагуляционный компоненты гемостаза в зависимости от интенсивности процессов ПОЛ в тромбоцитах: Автореф. дисс. . канд. мед наук. Уфа, 1998. - 23 с.

78. Машковский М.Д. Лекарственные средства. 13-е изд. Харьков: Тор-синг, 1998.Т.1, 2.

79. Метелица В.И. Справочник по клинической фармакологии сердечнососудистых лекарственных средств. М.: Медпрактика, 1996.- 784 с.

80. Мкртумян A.M. Влияние компливита на гемокоагуляционные сдвиги у крыс при воздействии свинца: Автореф. дисс. канд. мед. наук. Челябинск, 1994. 24 с.

81. Момот А.П. Разработка и клиническая апробация методов исследования производных фибриногена в плазме и сыворотке крови при ДВС-синдромах: Автореф. дисс. . канд. мед. наук / Новосибирск, 1990. 17 с.

82. Момот А.П. Методика и клиническое значение паракоагуляционного фенантролинового теста / А.П.Момот, В.А.Елыкомов, З.С.Баркаган Клин, лабор. диагностика. 1999. - 4. - С. 17-20- 4. - С. 17-20

83. Насонов Е.Л., Новости фармации и медицины / Е.Л.Насонов, О.В.Лебедева, 1996. № 1. С. 3-895.0йвин И.А. О роли фибрина в механизме сосудистой проницаемости / И.А.Ойвин, Р.И.Ойвин, В.П.Балуда // Бюлл. Эксперим. биол. И мед. -1962. 10.-С. 45-47

84. Пантелеев М.А. и др. Практическая коагулология / ред. А. И. Воробьев. -М.: Практическая медицина, 2011. — 192 с

85. Папаян Л.П. Современное представление о механизме регуляции свертывания крови / Л.П.Папаян // Тромбоз, гемостаз и реология. 2003. - 2 (14).-С. 7-11.

86. Полякова В.А. Опыт патогенетической коррекции нарушений гемокоа-гуляции при лапароскопических гинекологических операциях / В.А.Полякова, А.Ш.Бышевский, А.Ю.Рудзевич и др. // Акуш. и гинекол. 2008.- 4. - С.39-45

87. Пустынников А. В. Влияние ретинола на липидпероксидацию, антиок-сидантный потенциал тромбоцитов. Уровень маркеров взаимодействия тромбин-фибриноген в плазме и толерантность к тромбину: Автореф. дисс. . кандидата медицинских наук. Тюмень. - 2007. - 23 с

88. ЮО.Ральченко И.В. Роль тромбоцитов, эритроцитов и лейкоцитов в реализации связи между гемостазом и перекисным окислением липидов. Автореф. дисс. . докт. биол. наук. Уфа, 1998. - 43 с.

89. Ю1.Ральченко С.А. Влияние поливитаминных комплексов на развитие ДВС крови: Автореф. дисс . канд. мед. наук. Тюмень. - 1992. - 24 с

90. Руксин В.В. Тромбозы в кардиологической практике / В.В. Руксин // СПб.: Невский диалект, М.: Бином, 1998.- 126 с.

91. Сигидин Я.А. Лекарственная терапия воспалительного процесса / Я.А.Сигидин, Г.Я Шварц, А.П.Арзамасцев и др.// Медицина. 1988. -240 с.

92. Юб.Скипетров В.П. Состояние свертывающей и антисвертывающей системы при оварио-менструальном цикле / В.П.Скипетров, Л.Рейман, Г.Корешкова // Проблемы гематол. и переливания крови. 1964. 8. - С. 15-17.

93. Сойбель Б.И.Значение никотиновой кислоты для борьбы с преждевременным старением организма и лечения атеросклероза с нарушениями венечного кровообращения / Б.И.Сойбель // Вопросы геронтологии и гериатрии. Л. -1962. С.215-22

94. Сойбель Б.И. Применение никотиновой кислоты при лечении больных коронарным атеросклерозом с нарушением венечного кровообращения / Б.И.Сойбель // Матер. 15 научн. сессии Института питания АМН СССР. -М. 1964. - 1. -С.25

95. Сойбель Б.И. Влияние никотиновой кислоты на течение гипертонической болезни у больных с нарушениями венечного кровообращения / Б.И.Сойбель // Матер, научн. сессии ВНИИВ. М. - 1967. - С.158-159

96. Ю.Соловьев В.Г. К механизму защитного действия витаминов А, Е, С и Р при тромбинемии: Автореф. дисс. .канд. мед наук. Челябинск, 1991. -24 с.

97. Ш.Соловьев В.Г. Роль тромбоцитов, эритроцитов и сосудистой стенки в регуляции тромбинемии: Автореф. дисс. . д. м. н. Челябинск, 1997.- 44с

98. Соловьева А.В. Коррекция нарушений тромбоцитарного звена гемостаза витаминами-антиоксидантами и АСКом у беременных с поздним гес-тозом: Автореф. дисс. . канд. мед. наук. Уфа, 1999. - 23 с

99. ПЗ.Соломко Г.И. Состояние обеспеченности организма пожилых людей никотиновой кислотой / Г.И.Соломко // Современные вопросы геронтологии и гериартрии (матер. 1-й Закавказкой наун. Конф.). Тбилиси. -1965. -С.131-133

100. М.Сыркин А.Л. Инфаркт миокарда / А.Л Сыркин // М.: ООО Медицинское информационное агентство, 1998.- 398 с.

101. Турова Р.Д. Клинико-лабораторные данные об алиментарной дистрофии и терапевтическим действии никотиновой кислоты: Автореф. дисс. . д.м.н. Ленинград. - 1947. - 311 с

102. Умутбаева М.К. О связи между постоянным внутрисосудистым свертыванием крови и липопероксидацией / М.К.Умутбаева // Успехи современного естествознания (М.). 2004. - 2. - С. 37

103. Умутбаева М.К. Связь липопероксидации с гемостазом / М.К.Умутбаева // Глава в кн. «Связь гемостаза с перекисным окислением липи-дов». М.: Медицинская книга. 2003. - С. 41-50

104. Умутбаева М.К. Интенсивность постоянного внутрисосудистого свертывания крови при модификации процессов липопероксидации /М.К.Умутбаева // Научн. вестник ТГМА (специальный выпуск «Био-нтиоксиданты»), 2003 а. С.82-83

105. Умутбаева М.К. Перекисное окисления липидов и антиоксидантный потенциал тромбоцитов как факторы, определяющие интенсивность взаимодействия тромбин-фибриноген: Автореф. дисс. . докт. биол. наук. Тюмень. - 2005. - 45 с

106. Урбанюк К.Г. Свертываемость крови при атеросклерозе / К.Г.Урбанюк // Клин. мед. 1961а. - 5. - С.44-48

107. Урбанюк К.Г. Антисвертывающая система при гипертонической болезни / К.Г.Урбанюк // Клин. мед. 19616. - Клин. мед. - 1961 б. - 10. -С.135-140

108. Урбанюк К.Г. Никотиновая кислота в диагностике предтромботических состояний /К.Г.Урбанюк // Вопр. мед.химии. 1962. - 1. - С.298-303

109. Филиппов П.П. Как внешние сигналы передаются внутрь клетки / П.П. Филиппов // Соросовский Образовательный Журнал. 1998.- 3. - С. 2834.

110. Хаес С.И. О механизме действия никотиновой кислоты / С.И.Хаес // Вопр. питания. 1956. - 14. - 2. С. 13-16

111. Цобкалло Г.И. Влияние раздражения симпатического нерва на тканевые факторы свертывания крови / Г.И. Цобкалло // Бюлл. эксперим. биол. и мед. 1951.-8. ОС. 154-157

112. Черкес J1.A. Влияние никотиновой кислоты на свертываемость крови / Л.А.Черкес, Г.А.Черкес, А.Н.Бриль / Бюлл. зксперим. биол. и мед. 1942. -в. 5-6. - 11-12.-С. 50-53

113. Черкес Л.А. Влияние никотиновой кислоты на свертываемость крови / Л.А.Черкес, Г.А.Шегун // Рефераты научно-исследовательских работ за 1946 г. М.: АМН СССР. - 1947. - С.17-18

114. Шаповалов П.Я. Эффекты эстрогена и прогестина на изменения гемостаза, вызываемые антиоксидантами / П.Я.Шаповалов, Э.А.Шабанов // Научн. вестник ТГМА, 1999. 2. - С.93-94

115. Шараев П.Н. Витамины и здоровье /П.Н.Шараев // Ижевск: «Экспертиза». 2004. 108 с

116. Шаповалова Е.М. Механизмы гемостатических сдвигов при отсутствии, дефиците и избытке витаминов с антиоксидантными свойствами в рационе питания: Автореф. . дисс. докт. биол. наук. Челябинск. - 2010. 43 с

117. Шастин H.H. Внутренние болезни / Н.Н.Шастин, Б.И.Шулутко, Ф.В.Курдыбайло и др. // СПб.: Государственная типография № 4 г. Санкт-Петербурга, 1992.- 592 с.

118. Шершевский М.Г. Влияние никотиновой кислоты на фибринолити-ческую активность при атерокслерозе / М.Г.Шершевский // Кардиол. -1963.- 1.- С.64-67.

119. Шершевский М.Г. Влияние никотиновой кислоты на фибринолити-ческую активность при атеросклерозе / М.Г.Шершевский // Кардиол. -1963. 1. - С.64-67.

120. Шулутко Б.И. Внутренние болезни / Б.И.Шулутко, Ф.В.Курдыбайло, Н.Н.Шастин и др. // СПб.: Государственная типография № 4 г.Санкт-Петербурга, 1993.- 128 с.

121. Шулутко Б.И. Ишемическая болезнь сердца / Б.И.Шулутко, С.В.Макаренко // СПб.: Ренкор, 1998.- 122 с.

122. Эристави З.А. О тромбообразовании у родильниц с пороками сердца и профилактика тромбозов никотиновой кислотой / З.А.Эристави // Кардиология. 1968. - 3. - С. 54-57

123. Эффендиев Ф.А. Изменения факторов свертывающей системы крови и фибринолитической активности при лейкозах / Ф.А. Эффендиев, М.М.Абдулаев, Е.Б.Бахшиева // Проблемы гемотологии и переливания крови. 1961. - 10. - С. 19-22

124. Эффендиев Э.И. Влияние некоторых кортикостероидов на состояние свертывающей системы и фибринолитической активности крови при тромбоцитопеническом синдроме / Э.И.Эффендиев // Сб. научн. трудов

125. Abendschein D.R. A novel synthetic inhibitor of factor Xa decreases early reocclusion and improves 24-h patency after coronary fibrinolysis in dogs /

126. D.R.Abendschein, P.K.Baum // J. Pharmacol. Exp. Ther. 2001. - 296(2). -P. 567-572

127. AH Y.S. Targeting cardiovascular risk in patients with diabetes: management of dyslipidemia / Y.S.Ali, M.F.Linton, S.Fazio // Curr. Opin. Endocrinol. Diabetes. Obes. 2008. -15(2). - P. 142-146.

128. Amery A. Enhancing blood fibrinilytic activity by niacin compound. IILStudy of the activation mechanism / A.Amery, J.Vermilen, M.Verstraete // Scand. J. Haematol. 1966. - 3. - 1. - P.76-84

129. Anderson F.A. Improving Practices in US Hospitals to Prevent Venous Thromboembolism: lessons from ENDORSE / F.A.Anderson, S.Z.Goldhaber, V.F. e.a.//Am. J. Med.-2010. 123(12). - P.1099-1106.

130. Attisani M. Safety and effectiveness of low dosing of double antiplatelet therapy during long-term left ventricular support with the INCOR system

131. A.Attisani, P.Centofanti, La M. Torre e.a. // J.Artif. Organs. 2010. - 13(4). -P.202-206.

132. Bani D. Relaxin depresses platelet aggregation: in vitro studies on isolated human and rabbit platelets / D.Bani, M.Bigazzi, E.Masiin9 e.a. // Lab. Invest. 1955.- 73.- 5.-P. 709-716

133. Beigel R. Relation of aspirin failure to clinical outcome and to platelet response to aspirin in patients with acute myocardial infarction / R.Beigel, H.Hod, P.Fefer e.a., // Am. J. Cardiol. 2011. - 1. - 107(3). - P.339-342

134. Berns J.S. Niacin and Related Compounds for Treating Hyperphosphatemia in Dialysis Patients /J.S.Berns // Semin. Dial. 2008. - P. 18-18

135. Bishevsky A.Sh. Antioxidant complex selmevit in hemostasis correction at some uterine surgeries / A.Sh.Bishevsky, S.L.Galyan, E.M.Shapovalova e.a. / European J. of natural history. 2008a. - 3. - P. 10-15

136. Bishevsky A.Sh. The connection between lipid peroxidation and thrombin-fibrinogen interaction / A.Sh. Bishevsky, A.Y.Rudzevich E.M.Shapovalova e.a. // The fundamental researches. 2009. - 3. - P.4-6

137. Bjornsson T.D. / T.D. Bjornsson, D.E. Schneider, H. Jr.Berger // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1989. -250(1). - P. 154-161

138. Boniface K. Prostaglandin E2 regulates Thl7 cell differentiation and function through cyclic AMP and EP2/EP4. receptor signaling / K. Boniface, K.S.Bak-Jensen, Y.Li e.a., //J. Exp. Med. 2009. - 16. - 206(3). - P. 535-548.

139. Born B.J. / B.J.Born, E.C. Lowenberg, N.V. Hoeven, e.a. // J. Hypertens.2011. Mar 2. Epub ahead of print.

140. Brenner H. Low-dose aspirin use and performance of immunochemical fecal occult blood tests / H.Brenner, S.Tao, U.Haug //JAMA. 2010. - 8. -304(22).-P.2513-2520.

141. Camacho M. Transcellular formation of thromboxane A(2) in mixed incubations of endothelial cells and aspirin-treated platelets strongly depends on the prostaglandin I-synthase activity / M.Camacho, L. Vila // Thromb. Res.-2000.- 15. -99.-2. -P.155-164

142. Cannon C.P. Combination therapy in the management of mixed dyslipidae-mia / C.P. Cannon // J. Intern. Med. 2008. - 263. - 4. - P.353-365.

143. Carriero M.R. Resumption of gainful employment in aphasics: preliminary findings /M.R. Carriero, L.Faglia, L.A.Vignolo e.a. // Cortex. 1987. - 23(4). -P.667-672.

144. Cauchy E. A controlled trial of a prostacyclin and rt-PA in the treatment of severe frostbite / E.Cauchy, B.Cheguillaume, E.Chetaille // N. Engl. J. Med. -2011,- 13. -364(2). -P. 189-90

145. Chekalina S.I. Use of nicotinic acid and midocalm for correcting blood coagulation in patients with radiation edema of the extremities S.I.Chekalina, L.I.Guseva, M.S.Bardyechev // Med. Radiol. (Mosk). 1985. - 30(8). - P. 2830.

146. Ciccone A.Negative interaction of aspirin and streptokinase in acute ischemic stroke: further analysis of the Multicenter Acute Stroke Trial-Italy / A.Ci-ccone, C.Motto, E.Aritzu. e.a. // Cerebrovasc. Dis. 2000. - 10. -1. - P. 6164

147. Creeke P.I.Whole blood NAD and NADP concentrations are not depressed in subjects with clinical pellagra / P.I.Creeke, F.Dibari, E.Cheung e.a. // J. Nutr. 2007. - 137(9). - P. 2013-2017.

148. Dagly S. An introduction to metabolic pathways / S. Dagly, D.E.Nicolson // Oxford and Edinburg: Blackwell Scientific publication. 1970. - 310 p.

149. Das S.K., Protective effect of resveratrol and vitamin E against ethanol-induced oxidative damage in mice: biochemical and immunological basis / S.K. Das, S. Mukherjee, G. Gupta e.a., // Indian J. Biochem. Biophys. 2010. 47(1). - P.32-37.

150. Davidson D.C. Antiplatelet activity of valproic acid contributes to decreased soluble CD40 ligand production in HIV type 1-infected individuals / D.C.Davidson, M.P.Hirschman, S.L.Spinelli e.a. // J. Immunol. 2011. - 1. -186(1).-P.584-591

151. De La Cruz J.P. Effect of dipyridamole and aspirin on the platelet-neutrophil interaction via the nitric oxide pathway / De La Cruz J.P., E.Blanco, Sánchez de la Cuesta F.// Eur.J. Pharmacol. 2000. - 397. - 1. - P. 35-41

152. De Moerloose P. Should neurologists measure D-dimer concentrations? /De P.Moerloose, F. Boehlen // Lancet Neurol. 2003. - 2. - P. 77

153. Egashira Y. Tryptophan-niacin metabolism in rat with puromycin aminonucleoside-induced nephrosis / Y.Egashira, S.Nagaki, H.Sanada // Int J. Vitam. Nutr. Res. 2006. - 76(1). - P.28-33.

154. Engelmann B. Lipoproteins, platelets and atherothrombosis /B.Engelmann, M.K.Wiedmann // Biochim. Biophys. Acta. 2010. - 1801(6). - P.609-616.

155. Fazio S. Management of mixed dyslipidemia in patients with or at risk for cardiovascular disease: A role for combination fibrate therapy / S.Fazio // Clin. Ther. -2008. 30(2). - P.294-306.

156. Feig J.E. Atheroprotective effects of HDL: beyond reverse cholesterol transport / J.E.Feig, R.Shamir, E.A.Fisher // Curr. Drug. Targets. 2008. - 9(3). -P. 196-203.

157. Fukuwatari T. Effect of nicotinamide administration on the tryptophan-nicotinamide pathway in humans / T.Fukuwatari, K.Shibata // Int. J. Vitam. Nutr. Res. -2007 77(4). P.255-262.

158. Gao R. Risk assessment and aspirin use in Asian and Western populations / R. Gao, X.Li // Vase. Health. Risk. Manag. 2010. - 21. - 6. - P.943-956.

159. Gawaz M.P. Blood Platelets / M.P.Gawaz // Stuttg., New York: Time. -2001.- 190 p.

160. Gray B.H. The utility of the StarClose arterial closure device in patients with peripheral arterial disease /B.N. Gray, R.Miller, T.M. e.a. // Ann. Vase. Surg. -2009. -23(3).-P.341-344

161. Green L, The impact of elective knee/hip replacement surgery and thromboprophylaxis with rivaroxaban or dalteparin on thrombin generation / L.Green, A.S.Lawrie, S.Patel e.a. //Br. J. Haematol. -2010. 151(5). -P.469-476

162. Gross S.S. Tetrahydrobiopterin synthesis. An absolute requirement for cyto-kine-induced nitric oxide generation by vascular smooth muscle /S.S. Grosse. a. // J. Bio.l Chem. 1992. - -17 (1). - P.353-378.

163. Gryglewski R.J. Effects of all cis-5,8,11,14,17 eicosapentaenoic acid and PGH3 on platelet aggregation / R.J. Gryglewski, J.A. Salmon, F.B.Ubatuba e.a. // Prostaglandins. 1979. -18 (3). - P.453-478.

164. Guyton J.R. Niacin in cardiovascular prevention: mechanisms, efficacy, and safety / J.R. Guyton // Curr. Opin. Lipidol. 2007. -18(4). - P.415-420

165. Haszon I. Platelet aggregation, blood viscosity and serum lipids in hypertensive and obese children / I.Haszon, F.Papp, J.Kovacs e.a. // Eur. J. Pediatr. -2003.- 162.- P, 385-390.

166. Hawk P.W. Practical Physiological Chemistry / P.B.Hawk, B.L.Ozer // Pract. Physiol. Chem., N-Y. 1954. - P. 1044

167. Homoncik M. Monitoring of aspirin (ASA) pharmacodynamics with the platelet function analyzer PFA-100 / M.Homoncik, B.Jilma, N.Hergovich e.a. // Thromb. Haemost. 2000. - 83. - 2. - P. 316-321

168. Jelesoff N.E. Effectiveness and tolerability of adding ezetimibe to niacin-based regimens for treatment of primary hyperlipidemia / N.E.Jelesoff, C.M.Ballantyne, A.M.Xydakis e.a. // Endocr Pract. 2006. - 12(2). - P. 159164

169. Ji S. Detection of pulmonary embolism with 99mTc-labeled F(ab)2 fragment of anti-P-selectin monoclonal antibody in dogs / S. Ji., W. Fang, M. Zhu e.a. // Tohoku. J. Exp. Med. 2011. 223(1). - P. 9-15.

170. Karthikesan K. Antihyperlipidemic effect of chlorogenic acid and tetrahy-drocurcumin in rats subjected to diabetogenic agents / K. Karthikesan, L. Pari, V.P.Menon // Chem Biol Interact. 2010 Dec 5;188(3):643-50

171. Kashiwag J. Endovascular recanalization of acute intracranial vertebrobasilar artery occlusion using local fibrinolysis and additional balloon angioplasty / J.Kashiwagi, H.Kiyosue, Y.Hori e.a. // Neuroradiology. 2010. - 52(5). -P.361-370.

172. Kasprzak M, Pantoprazole may enhance antiplatelet effect of enteric-coated aspirin in patients with acute coronary syndrome / M. Kasprzak, M.Kozinski, L.Bielis e.a. // Cardiol J. 2009;16(6):535-544

173. Keber I. / L.Keber, M.Jereb, D.Keber // Thromb. Res. 1987. - 15. - 46(2). -P.205-212.

174. Kerttula T. Theophylline infusion modulates prostaglandin and leukotriene production in man / T.Kerttula, S.Kaukinen, E.Seppala e.a. // Prostaglandins Leukot. Essent. Fatty Acids. 1997. - 57(6). - P.555-560

175. Kolovou G.D. Effect of baseline levels on response of high-density lipoprotein cholesterol to hypolipidemic treatment /G.D.Kolovou, D.C.Daskalova, I.I.Petropoulos e.a. //Am. J. Cardiol. 2003. - 1. - 92(11). - P. 1339-1342

176. Lassen M.R. Apixaban versus enoxaparin for thromboprophylaxis after hip replacement / M.R. Lassen, A. Gallus, G.E. e.a. // N. Engl. J. Med. - 2010. -363(26).-P.2487-2498.

177. Levi M. New treatment strategies for disseminated intravascular coagulation based on current understanding of the pathophysiology / M.Levi, E. de Jonge, N. van der Poll // Ann. Med. 2004. - 36. -1. - P.41-49

178. Li J. Comparison of collagen versus adenosine diphosphate in detecting antiplatelet effect in patients with coronary artery disease /J. Li, Z. Jian, L.Huang e.a. // Biomed. Pharmacother. 2009. - 63(8). - P.608-612

179. Liesner R.J. Platelet disorders / R.J.Liesner, S.J.Machin // BMJ. 1997. -314.-P. 809-812.

180. Lison S. Enhanced thrombin generation after cardiopulmonary bypass surgery / S.Lison, W.Dietrich, S.Braun S e.a. // Anesth. Analg. 2011. - 112. -1. - P.37-45.

181. Mandic M.L. Intake of vitamins among clinically healthy adults from continental Croatia estimated by 24-h recall / M.L.Mandic, L.Primorac, D.Kenjeric e.a. // Int. J. Food Sci .Nutr. -2007. 5. - P. 1-8

182. Mehta S.R. / S.R.Mehta, J.P.Bassand, S.Chrolavicius e.a.// N. Engl. J. Med. -2010.-363(10).-P.930-942

183. Mende A. Measurement of the platelet retention rate in a column of collagen-coated beads is useful for the assessment of efficacy of antiplatelet therapy /A. Mende, J.E.Obata, K.Sano e.a. // Thromb. Res. 2009. - 123(6). -P.856-861.

184. Miller M. Relative atherogenicity and predictive value of non-high-density lipoprotein cholesterol for coronary heart disease / M.Miller, H.N.Ginsberg, E.J.Schaefer // Am. J. Cardiol. -2008. 1. - 101(7). - P.1003-1008.

185. Morgan J.M. Effects of extended-release niacin on lipoprotein subclass distribution // J.M.Morgan, D.M.Capuzzi, R.I.Baksh e.a. // Am. J. Cardiol. -2003.- 15.-91(12).-P.1432-1436

186. Morgner A. Esomeprazole: prevention and treatment of NSAID-induced symptoms and ulcers / A.Morgner, S.Miehlke, J.Labenz // Expert. Opin. Phar-macother. 2007. - 8(7). - P.975-988

187. Muir A.R. Assessment of aspirin resistance varies on a temporal basis in patients with ischaemic heart disease / A.R. Muir, M.F.McMullin, C.Patterson e.a. //. Heart. -2009. 95(15). -P.1225-1229

188. Padrini R. Dosing of clopidogrel and aspirin in acute coronary syndromes / R.Padrini, V. Pengo // N. Engl. J. Med. 2010. - 16. - 363(25). - P.2465-2466;

189. Paolini J.F. Effects of laropiprant on nicotinic acid-induced flushing in patients with dyslipidemia / J.F.Paolini, Y.B.Mitchel, R.Reyes // Am. J. Cardiol. -2008.- 1.- 101(5).-P.625-630.

190. Patrono C, Rocca B. Aspirin: promise and resistance in the new millennium /

191. C.Patrono, B.Rocca // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 2008. - 28(3). -S.25-32.

192. Perricone N.V. Blood pressure lowering effects of niacin-bound chromium (III) (NBC) in sucrose-fed rats: Renin-angiotensin system /N.V.Perricone,

193. D.Bagchi, B.Echard, H.G.Preuss // J. Inorg. Biochem.- 2008. 23 Epub ahead of print.

194. Pires J.A.The use of nicotinic acid to induce sustained low plasma nonesteri-fied fatty acids in feed-restricted Holstein cows / J.A.Pires, R.R.Grummer // J. Dairy. Sci. 2007. - 90(8). - P. 3725-3737.

195. Prasad K. C-reactive protein (CRP)-lowering agents / K. Prasad // Cardio-vasc. Drug Rev. 2006. - Spring. - 24(1). - P.33-50.

196. Premkumar Y.G. Co-enzyme Q10, riboflavin and niacin supplementation on alteration of DNA repair enzyme and DNA methylation in breast cancer patients undergoing tamoxifen therapy // V.G.Premkumar, S. P.Yuvaraj e.a. // Br. J. Nutr. 2008. - 1.- 1-4

197. Raghavan VA. First-line therapies for lowering triglyceride levels / VA.Rag-havan // Am. Fam. Physician. 2008. - 15. - 77(4). - P. 416 418.

198. Ranga G.S. Effect of aspirin on lipoprotein (a) in patients with ischemic stroke / C.S.Ranga, O.P.Kalra e.a. // J. Stroke Cerebrovasc. Dis. 2007. -16(5). -P.220-224

199. Rothberg M.B. Warfarin plus aspirin after myocardial infarction or the acute coronary syndrome: meta-analysis with estimates of risk and benefit / M.B.Rothberg, C. Celestin C, L.D.Fiore, E.Lawler // Ann. Intern. Med. -2005. 16. - 143(4). - P.241-250

200. Ruiz-Irastorza G. Antiphospholipid syndrome / Ruiz- G. Irastorza, M. Crowther, W. Branch e.a. //Lancet. -2010. 30. - 376(9751). -P.1498-1509

201. Saareks V. Nicotinic acid and pyridoxine modulate arachidonic acid metabolism in vitro and ex vivo in man / V.Saareks, I.Mucha, E.Sievi, A.Riutta // Pharmacol Toxicol. 1999. - 84(6). - P.274-280.

202. Sachs E. Dysfonction endotheliale et diabete / E.Sachs, P. Valensi// STV. -2000.-2.- 8. —P.500-509.

203. Sailer S. Über Thrombolyseversuche an Kaninchen mit einer kombinierten Nicotinsoure-Heparinhandlung / S.Sailer, O.Eber // Klin. Wochenschr. 1960. -38.-S. 548-551.

204. Saw J. The ELAPSE (Evaluation of Long-Term Clopidogrel Antiplatelet and Systemic Anti-Inflammatory Effects) study. /J.Saw, E.H.Madsen, S.Chan e.a. // J. Am. Coll. Cardiol. 2008. - 2. - 52(23). - P. 1826-1833.

205. Sawyer W.D. Studies on the trhombolytic activity of human plasma / W.D.Sawyer, A.P.Fletcher N. Alkjaersig, S. Sherry // J.Clin.ilnvestig. -1960. -39. 2. - P.426-434

206. Schäfer S.T. Venous air embolism induces both platelet dysfunction and thrombocytopenia / S.T. Schäfer, A.Neumann, J.Lindemann J e.a.// Acta Anaesthesiol. Scand. -2009. 53(6). -P.736-741.

207. Schneider D.J. Lack of early augmentation of platelet reactivity after coronary intervention in patients treated with bivalirudin / D.J.Schneider, B.E.Sobel // J. Thromb. Thrombolysis. 2009. - 28(1). - P.6-9.

208. Sen S. Niacin and coagulability of blood / S.Sen and S.Sen // Ind. J. Med Rev.- 1956.-44.-P. 67-69

209. Serebruany V. Correlation of inhibition of platelet aggregation after Clopidogrel with post discharge bleeding events: assessment by different bleeding classifications /V.Serebruany, S. Rao, M.A. Eur. Heart. J. 2010. - 31(2). -P.227-235

210. Shara M. Long-term safety evaluation of a novel oxygen-coordinated niacin-bound chromium (III) complex / M.Shara, A.E.Kincaid, A.L.Limpach e.a. // J Inorg Biochem. 2007. - 101(7). - P. 1059-1069.

211. Shibata K. Blood NAD as an index of niacin nutrition / K.Shibata, K.Murata //Nutr. Intern. 1986. - 2. - 3. - P. 177-181

212. Shimokawa T. 1992, Prostaglandin endoperoxide synthase / T.Shimokawa, W.L.Smit // J. of Biological Chemistry. 1992. - 267. - P. 12387-12392

213. Shimokawa T. Prostaglandin endoperoxide synthase. The aspirin acetylation region / T.Shimokawa, W.L.Smith // J. Biol. Chem. 1992. - 15. - 267(17). -P.12387-12392.

214. Sinzinger H. Cells of the vascular wall synthesize thromboxane / H. Sinzinger, W.Firbas // Wien Klin. Wochenschr. -1983. 11.- 95(21). - P. 758-760.

215. Smith W.L. Molecular basis for the inhibition of prostanoid biosynthesis by nonsteroidal anti-inflammatory agents / W.L.Smith, D.L.DeWitt. e.a. // Stroke. 1990. - 21(12 Suppl): IV. - P. 24-28.

216. Sostres C. Should prophylactic low-dose aspirin therapy be continued in peptic ulcer bleeding? / C.Sostres; A.Lanas // Drugs. 2011. - 1. - 71(1). - P. 110.

217. Sprecher D. Raising high-density lipoprotein cholesterol with niacin and fi-brates: a comparative review / D.L. Sprecher // Am. J. Cardiol. 2000. - 21. -86(12A). - 46L-50L

218. Spronk H.M. The blood coagulation system as a molecular machine / H.M.Spronk, J.W.Govers-Riemslag, H. ten Cate // Bioessays. 2003. - 25. -12.-P. 1220-1228

219. Swies J. Release of disaggregatory prostanoids into circulation by nicotinicalcohol, nicotinic acid and nicotinamide / J. Swies, L.Dabrowski // Pol. J. Pharmacol. Pharm. 1984. - 36(6). - P.653-657.

220. Tavintharan S. Niacin affects cell adhesion molecules and plasminogen activator inhibitor-1 in HepG2 cells / S.Tavintharan, M.Sivakumar, S.C.Lim // Clin. Chim. Acta. 2007. - 376(1-2). - P.41-44.

221. Tennyson I.S. Under standing type 2 diabetes mellitus and associated cardiovascular disease / I.S.Tennyson // Am.J.Mang.Gare. 2002. - 8. - 16. -Suppl.l. - P.450-459.

222. Thankachan P. An analysis of the etiology of anemia and iron deficiency in young women of low socioeconomic status in Bangalore, India / P.Thankachan, S.Muthayya, Walczyk e.a. // Food. Nutr. Bull. 2008. - 28(3). - P.328-336.

223. Thorn S.L. The guinea-pig is a poor animal model for studies of niacin deficiency and presents challenges in any study using purified diets /S.L.Thorn, G.S.Young // Br. J. Nutr.- 2007. 98(1). - P.78-85

224. Tlepshukov I.K. Effect of heparin on the vascular thrombocytic link of the hemostatic system and pathogenetic correction of ensuing disorders / I.K.Tlepshukov // Biull. Eksp. Biol. Med. 1986. - 102(11). - P.544-545

225. Tudorani G. Actinea vitaminei PP asupra coagularii / G.Tudorani, M.Niculescu, Pavelescu e.a. // Studii si sercetarri stiintifica 1960. - 1. - S.77-82

226. Tuszynski G.P. Thrombospondin promotes platelet aggregation / G.P.Tu-szynski, V.L.Rothman, A.Murphy e. a.// Blood. 1988. - 72. - 1. - P. 109-115.

227. Uderman H. Prostaglandins / H.Uderman, R.Zelaschi, T.Rach e. a. // 1982. -24.-21.-P. 237-239.

228. Udut V.V.The duration of the action of a single dose of aspirin, kurantil andnicotinic acid during pregnancy complicated by EPH gestosis / V.V.Udut, G.T.Kairov, E.V.Borodulina, L.M.V'iugova // Eksp. Klin. Farmakol. -1999. -62(3). P.37-39

229. Vaclavik J, Taborsky M. / J.Vaclavik, M.Taborsky / Eur. J. Intern. Med. -2011.-22(1).-P.26-31.

230. Vanwolleghem T. Ultra-rapid cardiotoxicity of the hepatitis С virus protease inhibitor BILN 2061 in the urokinase-type plasminogen activator mouse / T.Vanwolleghem, P.Meuleman, L.Libbrecht e.a. // Gastroenterology. 2007. -133(4).-P.l 144-1155.

231. Villanueva G.B. Acetylation of antithrombin III by aspirin / G.B.Villanueva, N.Allen// Semin. Thromb. Hemost. 1986. - 12(3). -P.213-215.

232. Wada H. The diagnosis and treatment of the DIC-syndrome / H.Wada, C.Esteban, H.Gabbaza e.a. // Тромбоз, гемостаз и реология. 2003. - 1. С. 16-22.

233. Wang Т. Aspirin attenuates cerebral ischemic injury in diabetic rats. /T.Wang, F.H.Fu, B.Han e.a. // Exp. Clin. Endocrinol. Diabetes. 2009 117(4).-P.181-185.

234. Wei J. M., Multicenter, phase III trial of hemocoagulase Agkistrodon: he-mostasis, coagulation, and safety in patients undergoing abdominal surgery / J.M.Wei, M.W.Zhu e.a.// Chin. Med. J. (Engl). 2010. - 5. - 123(5). -P.589-593.

235. Weiner M. Occurance of fibrinolytic activity following administration of nicotinic acid / M.Weiner, W. Redisch, I.M. Steele // Proc. Soc. Exptl. Biol. A. Med. 1958. - 98. - 4. - P. 788-757

236. Weiss H.J. Congenital disorders of platelet function / H.J. Weiss // Semin. Hematol. 1980. 17(4). - P.228-241.

237. Williams J.B. / J. B.Williams, E.R.Delong, E.D.Peterson e.a. // Jr for the Society of Thoracic Surgeons and the National Cardiac Database // Circulation.-2011. 123(1).-P.39-45./

238. Wilson W.L. The activation of plasminogen by nicotinic acid in vivo /

239. W.L.Wilson, G.Fostiropulos // Proceed. 7-th congr. Europ. Soc. Haematol.: Basel-N.-Y. 1960. - P. 916-919

240. Wizing P. Hematuria, hypoprothrombinemia and salicylate medication / P.Wizing // Acta Med. Scand. 1952. - 25. - 141(4). - P.256-261

241. Woods A.L Aspirin effect on platelet antiplasmins release.Thromb / A.I.Woods, M.A.Lazzari // Res. 1987. - 1. - 47(3). - P.269-277

242. Yakugaku Z. Pharmacological bases of coffee nutrients for diabetes / Z.Yakugaku // Prevention. 2007. - 127(11). - P. 1825-1836

243. Zwaal R .F.A. Platelet procoagulant activity and microvesickle formation. Its putative role in hemostasis and thrombosis / R.F.A.Zwaal // Biochym. Bio-phys. Acta.- 1992.-1188.- 1.-P. 1-8

244. Zwaal R.F.A. Blood, membranes and haemostasis / R.F.A.Zwaal // Haemo-stasis. 1982. -11.-P. 12-39.

245. Zwaal R.F.A. Membrane assymetry and bloodcoagulation / R.F.A.Zwaal, J.Comfurius, L.L.M.Deenen //Nature. 1977. - 269. - 5618. - P. 12-39.

Информация о работе

Самойлов, Максим Алексеевич
кандидата медицинских наук
Уфа, 2012
ВАК 03.01.04

Диссертация

Влияние ниацина на вызываемые ацетилсалициловой кислотой сдвиги коагулоактивности тромбоцитов, непрерывного внутрисосудистого свертывания крови и толерантности к тромбину (экспериментальное исследован - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы