Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Влияние ниацина на непрерывное внутрисосудистое свертывание крови (НВСК) и толерантность к тромбину (экспериментальное исследование)

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Влияние ниацина на непрерывное внутрисосудистое свертывание крови (НВСК) и толерантность к тромбину (экспериментальное исследование)"

На правах рукописи

Забара Евгений Васильевич

ВЛИЯНИЕ НИАЦИНА НА НЕПРЕРЫВНОЕ ВНУТРИСОСУДИСТОЕ СВЕРТЫВАНИЕ КРОВИ И ТОЛЕРАНТНОСТЬ К ТРОМБИНУ (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)

03.00.04 - биохимия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

^ио-ч-ьи г37

Тюмень - 2008

003460737

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Тюменская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Шаповалов Петр Яковлевич

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Соловьёв Владимир Георгиевич, БУ ВПО ХМАО-Югры «Ханты-Мансийский государственный медицинский институт»

доктор медицинских наук, профессор Высокогорский Валерий Евгеньевич, ГОУ ВПО «Омская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Ведущее учреждение: ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Защита состоится « » « » 2009 г в часов на заседании

диссертационного совета Д 208.101.02. при ГОУ ВПО «Тюменская государственная медицинская академия Росздрава» адресу: 625023 г. Тюмень, ул. Одесская, 54

С диссертацией можно ознакомиться в читальном зале библиотеки ГОУ ВПО «Тюменская государственная медицинская академия Росздрава»

Автореферат разослан__2008 г

Ученый секретарь диссертационного совета

Орлов С.А.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы. Витамин В5 (витамин РР, никотинамид, ниацин, никотиновая кислота) и его препараты с момента обнаружения витаминных свойств широко распространены в медицинской практике, прежде всего как радикальное средство от пеллагры. Используется ниацин (НЦ) в лечении заболеваний сердечнососудистой системы, в коррекции нарушений, вызванных заболеваниями центральной и периферической нервной системы, системы пищеварения, в терапии атеросклероза и его осложнений (Л.А.Цейтлин, 1987; П.Н.Шараев, 2004; В.П.Мищенко и др., 2005; S.Fazio, 2008; S.M. Y.S.AIi е.а., 2008; R.B. Goldberg е.а., 2008).

Влияет НЦ и на свертывание крови, однако соответствующие сведения противоречивы, и не отвечают на вопрос: следует ли использовать никотиновую кислоту (НК) для снижения опасности тромбозов, или же она способствует их возникновению.

Роль коферментных форм НЦ в окислительно-восстановительных реакциях, в энергообеспечения, обменные сдвиги при дефиците, свидетельствует, что её введение может изменять состояние гемостаза. Косвенно это подтверждает роль НЦ в обмене липидов, нарушения которого протекают с гемостатическими сдвигами (А.Ш.Бышевский, 1978; Г.Ф.Еремин и др., 1982). Подтверждается это влиянием НЦ на функции нервной и сердечно-сосудистой систем, фармакодинамическим эффектом на сосуды - важный компонент гемостаза (М.И.Смирнов, 1974; Y.SAIi е.а., 2008). Отмечена способности НЦ активировать фибринолиз. Неоднозначны сведения о сдвигах общей свертываемости крови под влиянием НЦ, нет данных о его влиянии на скорость непрерывного внутрисосудистого свертывания крови (НВСК). Ограничены изучением «тромбопластической» активности тромбоцитов (ТЦ) и изменением их числа при избытке или дефиците НЦ (Г.В.Андреенко, Л.А.Мигалина, 1969), хотя ТЦ существенно определяют темпы НВСК (А.С.Шитикова, 2000; M.P.Gawaz, 2001), которое в свою очередь формирует наклонность к тромбофилии или кровоточивости (И.Н.Бокарев, 2000; M.P.Gawaz е.а., 2001; Alborov, 2004). И это притом, что имеется, единственная, публикация, указывающая на угнетение НК противосвертывающей реакции, оцениваемой по гибели животных при экзогенной гипертромбинемии. Мало изучены эффекты длительного введения НК, хотя и показано, что фибринолитический ответ на повторную инъекцию ослабляется (А.Ш.Бышевский, 1966, 1978) И, главное, неизвестно, ослабляет или усиливает введение витамина В5 или его дефицит наклонность к тромбогенезу или, напротив, ограничивает его скорость, следовательно, и скорость взаимодействия тромбин-фибриноген (ВТФ). Вместе с тем, интенсивность ВТФ отражает степень напряжения в системе гемостаза (А.П. Момот, 1990; З.С.Баркаган, 1998; Д.М.Зубаиров, 2000; Haszon е.а., 2003; Spronk, 2003); сдвиги скорости ВТФ указывают на наклонность к тромбо- или гемофилии ([Д.М Зубаиров и др., 1989; З.С.Баркаган, 1998; И.Н.Бокарев, 2002; А.Ш.Бышевский и др., 2006; Haszon е.а., 2003; Levi М., 2004).

Нередко оценку биохимического компонента гемостаза не сопровождает контроль за тромбоцитами (И.Е.Попова, 1999; W.J.Chen, S.L. Yeh, 2003) - клетками, весьма зависимыми от скорости липидпероксидации (ЛПО) (И.А.Карпова, 2002; N.I.GromnatkiT, I.N.Medvedev, 2003; A.R.Gear, D. Camerini, 2003). Распространенность синдрома гипероксидации (С.Л.Галян, 2002; В.А.Садова и др., 2008; I.N.Pasechriik е.а., 2001; J.J.Manson е.а., 2003) требует выяснить зависит ли скорость ВТФ от ЛПО и антиоксидантного потенциала (АОП). Всё сказанное нуждается в экспериментальном изучении связи между интенсивностью НВСК - процесса, чье ускорение может инициировать диссеминированное внутрисосудистое свертывания крови (ДВС) (А.Ш.Бышевский и др., 2006; И.В.Зверева и др., 2008; H.Wada е.а., 2003) - и обеспеченностью НЦ. Необходимо также, наряду с оценкой коагулоактивности ТЦ, изучить в них состояние ЛПО и АОП.

Цель работы. Изучить интенсивность НВСК, толерантность организма к тромбину (ТкТР), коагуляционную активность тромбоцитов, ЛПО и АОП в них в зависимости от содержания в рационе НЦ с тем, чтобы оценить его влияние на «готовность» организма к ускоренному тромбинообразованию, и выяснить, не связан ли эффект НЦ с его про- или антиоксидантными свойствами.

Задачи: 1. Изучить уровень маркеров ВТФ, коагулоактивность ТЦ (КАТ), состояние ЛПО и АОП в них и ТкТР, после 1, 2, 5 и 15 дней содержания крыс на сбалансированном рационе без витамина В5; 2. То же изучить при введении с рационом НЦ в количествах, превышающих суточную потребность в 2, 4, 8 и 16 раз; 3. Повторить действия пункта 1 и 2, используя атерогенный рацион, отбирая пробы крови через 15, 30, 45 и 60 дней от начала опыта; 4. Определять уровень ВТФ, КАТ, ТкТР, состояние ЛПО и АОП при содержании крыс на сбалансированном рационе без НЦ и с его увеличенной дозой, добавляя в рацион прооксидант или антиоксидант, определив дозу НЦ и сроки отбора проб по результатам, полученным в опытах пунктов 1 и 2. 5. Изучить динамику изменения общей свертываемости крови, фибринолиза и ТкТР после внутривенных введений разных доз витамина В5.

Научная новизна. Впервые установлено, что у крыс, получающих рацион питания, сбалансированный по макро- и микронутриентам, отсутствие в его составе витамина В5 сопровождается к концу 2-й недели снижением общей коагулоактивности ТЦ (ОКАТ), ослаблением скорости высвобождения фф. Р3 и Р4, замедлением ВТФ в кровотоке, угнетением фибринолиза в эуглобулиновой фракции плазмы крови и уменьшением ТкТР. Показано, что включение в состав сбалансированного рациона НК в 2-кратном в сравнении с суточной потребностью количестве предупреждает все перечисленные изменения, а НК в количествах, превышающих потребность в 4, 8 или 16 раз повышает КАТ, содержание в плазме маркеров ВТФ, дозазависимо активирует фибринолиз и повышает ТкТР.

Впервые установлено, что эффекты В5-авитаминного питания, включающего атерогенные компоненты, на все перечисленные изменения гемостаза остаются такими же. Выявлено отсутствие связи между сдвигами интенсивности ЛПО и АОП с одной стороны и гемостатическими сдвигами с другой при содержании животных на рационе без НЦ и рационе с его избытком; показано, что включение в рацион про- или антиоксиданта не изменяет эффектов НК на гемостаз. Впервые изучена дозазависимость эффектов НК на фибринолиз и ТкТР и установлена тесная положительная связь между их изменениями при оральном и внутривенном путях введения.

Практическая ценность работы. Подтверждено (с помощью разнообразных экспериментальных ситуаций) представление о тесной положительной связи между плазменным уровнем маркеров ВТФ и ТкТР, т.е., получено свидетельство возможности использовать в клинике доступные методы определения маркеров ВТФ у больных с нарушениями гемостаза для выявления наклонности к тромбозу или тромбофилии. Показано, что внутривенное введение НК вызывает кратковременную гиперкоагуляцию, сменяющуюся гипокоагулемией, и это сопровождается активацией фибринолиза, интенсивность которого пропорциональна ТкТР. Видимо, можно использовать НК как неспецифический антикоагулянт (фибринолитик), вводя её одновременно или вскоре после гепарина. Данные о зависимости интенсивности фибринолиза и ТкТР от дефицита или избытка витамина В5 обращают внимание практикующих врачей на необходимость учитывать обеспеченность организма пациента этим витамином при заболеваниях, протекающих с наклонностью к тромбогеморрагиям. Полученные нами данные использованы при подготовке сотрудниками кафедрами биологической химии и гигиены с основами экологии ТГМА книги «Антиоксиданты в коррекции гемокоагуляционных сдвигов» (М.: Медицинская книга. 2004. 79 е.).

Дизайн эксперимента

В условиях полноценного питания и питания рационом без витамина В5 определить у крыс интенсивность НВСК, толерантность организма к тромбину, коагуляционную активность тромбоцитов, ЛПО и АОП в них при содержании ниацина в количествах, превышающих суточную потребность крыс, а также при отсутствии ниацина в рационе (полноценном и атерогенном)_____

Группа 1-я: после 1, 2, 5 и 15 дней содержания крыс на сбалансированном рационе без НК и с НК в дозах 0.5,1.0,2.0 и 4 мг/кг массы тела_

Группа 2-я: после 15, 30 и 60 дней содержания крыс на атерогенном рационе питания с разными количествами НК, выбранными по результатам опытов 1-й группы_

Группа 3-я: повторение опытов 1-й группы, с количеством ниацина, оказавшимся наиболее эффективными (по результатам опытов 1-й группы), вводя их на фоне рациона, содержащего антиоксидант димефосфон_

Группа 4-я: повторение опытов 1-й группы с количествами НК, оказавшимся наиболее эффективными (по результатам опытов 1-й группы), вводя их на фоне рациона, содержащего прооксидант (ацетат свинца) или антиоксидант (димефосфон) _

Группа 5-я: изучить динамику сдвигов общей свертываемости крови, фибринолиза и толерантности к тромбину после внутривенного введения нейтрализованных растворов НК_______

Положения, выносимые на защиту:

1. Отсутствие в рационе витамина В5 ведет к снижению коагулоактивности тромбоцитов и замедлению взаимодействия между тромбином и фибриногеном в кровотоке, при одновременном снижении ТкТР и замедлении фибринолиза.

2. Избыток в питании витамина В5, адекватный лечебным дозам, приводит при обычном и атерогенном питании к росту коагулоактивности тромбоцитов, ускорению ВТФ, что сопровождается активацией фибринолиза и увеличением ТкТР.

3. Эффекты НК на гемостаз не сопряжены с её способностью изменять ЛПО и АОП тромбоцитов - они реализуются через свойство НК активировать фибринолиз, который находится в тесной положительной связи с толерантностью к тромбину.

Апробация и публикация. Результаты работы доложены на научной конференции регионального отделения РАЕ (Тюмень, 2007), на заседании Тюменского Областного отделения ВБО (2008), на трех электронных конференциях РАЕ (2007-2008), на III научной международной конференции (Варадеро, Куба, 2008, март), III научной международной конференции (М., 20Ó8), на совместном заседании кафедр биохимии и гигиены с основами экологии ТГМА (2008) и опубликованы в медико-биологических журналах (4 статьи) и в материалах международных научных конференций (4).

Структура и объем диссертации. Работа изложена на 113 страницах, содержит 9 таблиц и 11 рисунков, включает введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты собственных исследований, обсуждение и выводы, а также список литературы (239 публикаций -127 отечественных и 112 зарубежных).

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Выбор животных. В опытах использованы взрослые нелинейные белые крысы-самцы (625 особей, масса тела 175+15 г) с тем, чтобы исключить эффекты фазы роста. Для крыс разработан и неоднократно испытан сбалансированный пищевой рацион, содержащий белки, липиды, углеводы, витамины и минералы в количествах, соответствующих их суточной потребности. Большая часть работ, в которых изучали гемостаз при разных воздействиях, выполнена на крысах, у которых легко обнажается яремная вена, из которой можно взять - 35-40 мл/кг массы тела непосредственно в шприц со стабилизатором за 1/2 мин), соблюдая правила гемостазиологии (З.С.Баркаган, 1998). Существование сезонных ритмов в гемостазе, его зависимость от метеофакторов (В.П.Балуда и др., 1978; В.А.Исабаева, 1983) потребовало включения во все серии опытов контрольной группы. Рацион. Содержали крыс на сбалансированном пищевом рационе Института питания АМН СССР, включающем крахмал, казеин, растительное масло и микронутриенты (Б.А.Лавров, Е.Л.Терентьева, 1963). Микронутриенты вводили в рацион так, чтобы его суточная порция содержала количество, равное суточной потребности крыс: А -200, D -40 ME, Е -1.5 мг, В1 -200, В2 -250, В6 -200, В12 -1 мкг, инозит - 15 мг, викасол - 60 мкг, 0.5 мг пантотенат кальция -1500, витамин РР - 250 мкг, холин - 50 мг на кг массы тела/сут. Витамины и солевую смесь смешивали с остальными компонентами (казеин, масло, крахмал), приготовляя кашицу по описанию (А.Ш.Бышевский, 1966; P.W.Hawk, B.L.Ozer, 1954). Порцию готового рациона в кормушки в соответствии с данным о фактическом потреблении -100 г/кг массы тела - (БА.Лавров, Е.Л.Терентьева, 1963; А.Ш.Бышевский, 1967). Этот рацион (по стандартам Дональдсона) лучше, чем рацион из обычных продуктов, что подтверждено публикациями Института питания АМН СССР (М.) и Института питания УССР (Киев), НИИ витаминологии СССР (Москва) и другими. Как атерогенный использовали тот же рацион, добавляя в него холестерол (1.17 г/кг) и 6-метилтиоурацил (6-МТУ, 1.75 г/кг) - тиреостатик, который, нарушая липидный обмен (Ю.М.Лопухин и др., 1983; A.Nicoll е.а., 1981). Приемы и методы. Пробы крови брали в шприц с 3,8% раствором цитрата натрия (1:9) из обнаженной овальным разрезом яремной вены у наркотизированной диэтиловым эфиром крысы, фиксированной на препаровочном столике, рану закрывали 2-3 кетгутовыми швами. Отделяли плазму центрифугированием и определяли в ней содержание маркеров ВТФ. Рост уровня всех или большей части маркеров отражает ускорение, а снижение их уровня -замедление НВСК (Р.Г.Алборов, 2006; А.В.Шидин и др., 2007; H.M.Spronk е.а., 2003). Мы контролировали уровень маркеров, выбор которых определен и доступностью методов неспециализированным лабораториям лечебных учреждений: 1. Содержание ПДФ, отражающее активацию фибринолиза, активирующегося при ускорении НВСК (Т.А.Рудницкая, 2003; H.Wada е.а., 2003), определяли по описанию (А.Ш.Бышевский и др., 1991); 2. Уровень РКМФ, увеличивающийся с повышением коагуляционной активности крови (С.Т.Ветриле и др. 2003; H.Wada е.а., 2003), определяли фенантролиновым тестом в его количественном варианте (А.П.Момот и др., 1999); З.Уровень D-димеров - маркеров фибринообразования или компенсаторного фибринолиза (Е.Г.Соболева и др. 2003; de P.Moerloose е.а., 2003) - оценивали латексной агглютинацией с моноклональными антителами (набор «D-dimer test", Roche), выражая в мкг/мл эквивалентов фибриногена; 4. Содержание ф. РЗ определяли по разнице между АВР нормальной и бестромбоцитной плазмы (метод Rabiner & Grader в описании В.П.Балуда и др., 1980); 5. Уровень ф. Р4 в плазме оценивали по действию прогретой и обедненной тромбоцитами плазмы (источник термостабильного ф. Р4) на тромбин-гепариновое время свертывания субстратной плазмы (источник фибриногена и антитромбина III). Степень укорочения времени свертывания - мера активности ф. Р4 (В.П.Балуда и др., 1980) (отметим, что фф. РЗ и Р4 - косвенные маркеры ВТФ: их уровень в плазме пропорционален тромбинемии,

ускоряющей реакцию высвобождения (А.С.Шитикова, 2000; M.P.Gawaz, 2001); 6. Уровень в плазме ФГ, осаждаемого тромбином, оценивали на спектрофотометре (А.Ш.Бышевский, В.Мохнатое, 1969). Снижение ФГ при других признаках ускорения ВТФ, указывает на интенсификацию НВСК (H.Wada е.а., 2003). В связи с тем, что ТЦ являются инициаторами ускорения НВСК, в части опытов определяли их ОКАТ, оценивая способность ТЦ изменять АВР (А.Ш.Бышевский и др., 1996). Реакцию высвобождения оценивали по уровню фф. РЗ и Р4 в плазме после АДФ-агрегации в описании (В.П.Балуда, 1980). В одной из серий опытов определяли АВР как показатель общей свертываемости крови (Г.Н.Детинкина и др., 1984).

Толерантность к тромбину (ТкТР) устанавливали по описанию (А.Ш.Бышевский и др., 2003). Способ апробирован в небольшом числе исследований (Р.Г.Алборов, 2006; С.В.Миневцев, 2006; А.В.Шидин, 2007), и поэтому приводим ниже его описание. Раствор тромбина в 0.14 М ÑaCI (активность - 24с по времени свертывания 0.2% раствора фибриногена) вводят в v.jugularis крысы, фиксированной на станке (1 мл/кг массы). Пробы берут через 30 мин, стабилизируя 3.8% раствором трехзамещенного цитрата натрия. Отделяют плазму и определяют содержание ФГ, осаждаемого тромбином. Расчет по формуле: D = {1- [(Ск - Со): Ск]} х 100, где D - концентрация ФГ (после инъекции тромбина контрольным крысам); Ск -концентрация ФГ у крыс, которым тромбин не вводили и каким-либо воздействиям не подвергали (исходный уровень); Со - концентрация ФГ у крыс, которым ввели тромбин на фоне изучаемого воздействия или без него (остаточная концентрация). Значение остаточной концентрации у крыс, которым тромбин ввели без предварительных воздействий, принимали за ТкТР, равную 100%, и устанавливали степень изменения толерантности (в %) при изучаемом воздействии по формуле Х% = (Do/Dk)x100, где X -толерантность к тромбину (%), Do - остаточная концентрация ФГ (%) у группы, подвергавшейся изучаемому воздействию, Dk - остаточная концентрация ФГ(%) у крыс, не подвергавшихся изучаемому воздействию (контрольная группа). Результат специфичен, так как ФГ является основным субстратом тромбина в процессах свертывания (З.С.Баркаган, 1998), так как снижение уровня ФГ, осаждаемого тромбином, введенным извне, зависит от состояния всех систем, обеспечивающих выживание животного при ускоренном тромбиногенезе (Д.М.Зубаиров, 2000). Учитывая возможные сдвиги фибринолиза при введении НЦ оценивали у крыс фибринолиз по времени лизиса эйглобулинов из бедной ТЦ плазмы, обработанной каолином (З.С.Баркаган, А.П.Момот, 1998).

Перекисное окисление липидов в ТЦ (ЛПО и АОП) контролировали, устанавливая: 1. Содержание диеновых конъюгат (ДК); 2. Содержание продуктов, взаимодействующих с тиобарбитуровой кислотой (ТБК); 3. Период индукции (ПИ); 4. Скорость окисления (СО). Липиды экстрагировали 100-кратным избытком смеси гептан-изопропиловый спирт (1:1 по объему) из отмытых ТЦ (А.Б.Самаль и др., 1990). Содержание ДК устанавливали по оптической плотности (Я. = 232 нм) гептановой фазы. Содержание ТБК определяли в экстракте флуорометрически [В.Н.Ушкалова, 1993, 1997] по интенсивности флуоресценции возбуждения (флуориметр «Биан 130»), Кинетические величины прямого окисления липидов молекулярным 02 в присутствии динитрилазобисизомаслянной кислоты (инициатор свободнорадикального окисления) также определяли в экстрактах. Размерность ПИ - время, затраченное на поглощение исследуемой пробой 25 мм3 02), СО выражали углом наклона линейного участка кинетической кривой (В.Н.Ушкалова, 1997).

Для создания гипероксидативного фона вводили с рационом прооксидант (ацетат свинца, 50 мг/кг массы тела). В этой дозе ацетат свинца, ускоряя ЛПО, снижает АОП уже через 1сут, не нарушая обмена порфиринов при длительном введении (И.А.Мухачева и др., 1992), так как всасывание из кишечника составляет не более 5% от количества в рационе ацетата свинца (Материалы ВОЗ: Свинец, 1980).

Эксперименты с введением прооксиданта предприняты потому, что он ускоряет у крыс ЛПО и снижает АОП, изменяя агрегацию ТЦ в такой степени, которая позволяет выявлять эффекты на кровяные пластинки других испытуемых анти- или прооксидантов, вводимых одновременно (М.К.Умутбаева, 2005) В части опытов использовали не влияющий на гемостаз антиоксидант димефосфон (1,1-диметил-З-оксибутирилфосфоновая кислота) - синергист присутствующих в организме антиоксидантов (С.Л.Галян, 1993; В.Г.Соловьев, 1997). Димефосфон (ДМ) в дозе 1 г/кг вызывает у животных анти оксида нтный эффект и изменяет агрегацию ТЦ в степени, позволяющей выявить эффект других антиоксидантов (М.К.Умутбаева, 2005). В части опытов определяли в крови суммарное содержание холестерола (свободный и связанный), применяя ультрамикрометод G.S. Duboff е.а. согласно описанию (А.В.Каракашов, Е.П.Вичов, 1968). Схемы отдельных опытов описаны в соответствующих подразделах - они определялись решаемыми в конкретном случае задачами.

Математический анализ экспериментальных данных, выраженных числами, проводили с помощью программы Biostat 4.03 методом вариационной статистики для малых рядов наблюдений. Вычисляли среднюю арифметическую (М), её среднюю ошибку (т) и среднеквадратическое отклонение (о). Достоверность отличий оценивали, вычисляли доверительный коэффициент Стьюдента (t) и степень вероятности (р). Альтернативное варьирование использовали (рассчитывая те же статистические показатели) при анализе интенсивных величин. Взаимосвязи переменных анализировали методом ранговой корреляции Спирмена (rs). Достоверными считали различия при степени вероятности <0.05. Графический анализ проводили в системе Microsoft Graf с построением аппроксимационных графиков, оцениваемых по величине коэффициентов аппроксимации (R2).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Уровень маркеров ВТФ, КАТ, фибринолиз, ТкТР, ЛПО и АОП при содержании крыс на сбалансированном рационе без НЦ и с его избытком. Сформированы контрольная и 5 подопытных групп. Контроль получал рацион с НЦ согласно потребности (0.25 мг/кг/сут). Крысы одной из подопытных групп НЦ не получали (В5-авитаминная группа), крысы остальных групп получали рацион с НЦ в количестве, превышающем потребность (0.5, 1.0, 2.0 и 4.0 мг/кг/сут). Число наблюдений (п) приводится в таблицах. Пробы брали через 1, 2, 5 и 15 дней от начала опыта, определяя ТкТР в те же дни. По данным табл. 1 в отсутствии в рационе НЦ лишь на 15 сут выявили признаки ускорения ВТФ (прирост маркеров ВТФ и снижение фибриногенемии), ускорение ЛПО (рост уровня ДК и ТБК) и угнетение АОП в ТЦ (укорочение ПИ и рост СО). Видимо, отсутствие НЦ в сбалансированном рационе к концу 2-й недели приводит к ускорению НВСК, проявляющемуся ростом уровня его маркеров в плазме на фоне ускорения ЛПО, снижения АОП и замедления фибринолиза.

Введение НК в количестве 0.5 мг/кг/сут исключило все сдвиги, возникающие в её отсутствии, что позволяет связывать изменения с отсутствием витамина В5. Введение 1.0 мг/кг к 15-му дню повысило уровень всех маркеров ВТФ. В этот же срок упал уровень в ТЦ ДК и ТБК, снизилась СО и удлинился ПИ, т.е. замедлилось ЛПО и вырос АОП. При количестве НЦ в 2.0 мг/кг сдвиги сходны с найденными при меньшей дозе, были заметнее и появлялись быстрее. Такие же сдвиги найдены при введении 4.0 мг/кг НЦ, они выявляются раньше и сильнее. При отсутствии НК в рационе фибринолиз замедлен, нормализуясь при дозе 0.5 мг/кг, и ускоряется во все сроки наблюдений с увеличением количества НК. Отсутствие НЦ в рационе ведет к снижению ТкТР в виде тенденции и четко выраженным снижением на 15-й день (р <0.03)( табл. 2).

Таблица 1. КАТ, уровень маркеров ВТФ в плазме, ф.ХИа-зависимый фибринолиз, ЛПО и АОП в ТЦ крыс, не получавших НЦ (В5-авитаминная группа) и получавших его в

количествах, превышающих потребность (1-я строка - 1-й, 2-я - 2-й, 3-я - 5-й, 4-я -_15-й день от начала опытов)_

Показат ели Контро ль Крысы (п = 5 в каждой группе) получали НК (мг/кг массы тела) из расчета:

п = 10 0.0 0.5 1.0 2.0 4.0

ф. Рз,% 89.1±1.2 88.2±1.1 86.9±1.7 86.1±1.4 80.1±1.1* 87.8±1.4 88.0±1.7 87.8±1.4 88.8±1.5 89.0±1.7 91.4±1.9 94.6±2.6 97.6+1.7** 91.3±1.7 91.8+1.9" 96.7±1.7** 99.9±1.9** 96.7±1.2*' 97.9.3±1.6** 117±2.3** 123±4.1*+

ф. Р4, с 3.6±0.03 3.3±0.07 3.4±0.06 3.2±0.03 2.8±0.03* 3.5±0.06 3.6±0.05 3.8+0.06 3.6±0.04 3.5±0.08 3.8+0.07 4.2±0.06 4.5±0.03*+ 3.6±0.02* 3.9±0.01*' 4.5±0.03** 4.8±0.02*+ 3.9±0.03** 4.1 ±0.03** 4.4±0.03** 6.1. ±0.05"

ОКАТ, % 91,3 92.1 ±1.9 91.0±1.7 88.4±1.3 96.0±1.2* 92.5±1.3 92.0±1.5 89.7±1.8 93.0±1.9 94.7±1.5 99.0±4.5 99.9±2.7 114±3.9*+ 94.9±1.7 110±4.6*+ 121±6.7*+ 96±3.8*+ 90.2±1.4 115±4.7*+ 126±6.3*+ 86.9±3.8*

ФГ, г/л 2.1±0.02 2.0±0.06 1.9±0.10 1.7±0.04 1.5±0.03* 2.1±0.08 2.0±0.11 2.2±0.09 2.3±0.10 2.2 ±0.08 2.3±0.07 2.1±0.08 1.7±0.09+ 2.2±0.05 2.3±0.07 1.7±0.08* 1.5±0.08*+ 2.2±0.05 2.4±0.07* 1.4+0.06*+ 1.2+0.05**

ПДФ, мг% 15.1±1.0 14.8±1.1 14.8±1.2 14.5±1.1 12.1±1.0* 14.7±1.2 14.3±1.2 14.7±0.8 14.9±0.7 13.9±1.8 14.8±0.8 16.5±0.9 17.4±0.6*+ 15.4±1.2 15.9±0.5* 18.1±0.5** 18.8±0.7*+ 15.4±1.2 15.9±0.5* 18.6±0.5** 19.3±0.8*+

РКМФ, мкг/мл 24.0±0.7 22.9±1.3 23.4±0.9* 23.9±0.8 20.1 ±0.5*' 23.8±0.9 23.7±0.7 24.0±0.6 24.5±0.9 J 24.1±1.2 24.3±0.8 25.2±0.7 27.7±0.9** 24.6±0.9 25.3±1.1* 27.3±0.8** 28.6±0.9*+ 25.1±1.3 26.4±1.0" 27.8±0.9** 29.7±1.0*+

□-Д, мкг/мл 0.19±0.0 10 0.19±0.010 0.18±0.019 0.18±0.009* 0.13±0.005* 0.17±0.015 0.18±0.011 0.20±0.012 0.19Ю.017 0.20±0.011 0.21±0.015 0.23±0.012 0.25±0.009*+ 0.21±0.011 0.22±009* 0.26±0.007*+ 0.27±0.009*+ 0.20±0.012 0.24±010" 0.27±0.009*+ 0.29±0.011*+

Фибрин олиз, мин 8.0±0.04 8.2±0.05 8.3±0.03 9.9±0.07* 11.4±0.03* 8.3±0.05 8.2±0.06 8.3±0.07 7.9±0.09 8.1±0.08 7.8±0.09 6.6±0.08* 5.7±0.07*+ 7.0±0.06"+ 6.7±0.04*+ 5.9±0.09*+ 4.8±0.06*+ 6.8±0.07*+ 6.3±0.05*+ 5.4±0.10*+ 4.1 ±0.09*+

ДК, А/мг ЯП 0.054±0. 004 0.055±0.004 0.057±0.006 0.059±0.007 0.064±0.002* 0.057±0.004 0.056±0.004 0.051 ±0.005 0.056±0.003 0.051±0.008 0.051±0.003 0.049±0.002* 0.44±0.003** 0.053±0.009 0.060±0.004 0.041+0.003** 0.42±0.005** 0.056±0.011 0.062±0.014 0.047±0.005** 0.49±0.004**

ТБК, ед/мг ЯП 0.78±0.0 5 0.76±0.02 0.81 ±0.05 0.83±0.06 0.88±0.04* 0.76±0.08 0.76±0.06 0.76±0.09 0.79±0.08 0.74±0.08 0.72±0.09 0.70±0.09*+ 0.68±0.07*+ 0.77±0.08 0.72±0.04*+ 0.60+0.06*+ 0.55±0.08*+ 0.76±0.09 0.75±0.05+ 0.58±0.06*+ 0.59±0.09*+

ПИ, мин/мл 46.1±1.1 46.8±1.9 46.1±1.5 44.6±1.6 37.0±1.1* 46.0±2.1 47.4±1.3 47.0±0.05 46.0±1.3 46.4±2.3 47.6±1.7 49.8±0.05+ 56.0±1.6*+ 51.0±2.4 55.3±1.6*+ 61.3±1.9*+ 62.5±1.7*+ 51.2±2.1 55.9±1.4*+ 63.5+1.8*+ 66.2±1.8*+

со, ммЗ/мл/ мин 0.70±0.0 2 0.70±0.06 0.73±0.07 0.75±0.06 0.80.±0.04* 0.68±0.04 0.66±0.07 0.73±0.06 0.75±0.07 0.68±0.03 0.64±0.11 0.62±0.09+ 0.55±0.07*+ 0.67±0.08 0.69±0.06*+ 0.78+0.09*+ 0.49±0.07*+ 0.69±0.09 0.72+0.07*+ 0.83±0.11*+ 0.45±0.07*+

Обозначение: * - достоверное отличие от того же срока во 2-й колонке, знак + - в 3-й колонке.

Таблица 2. ТкТР у крыс, получавших НЦ в дозе, равной суточной потребности, у неполучавших НЦ, и получавших его в количествах, превышающих потребность в 2, 4, _ 8 и 16 раз (1-я строка -1, 2-я - 2, 3-я - 5 и 4-я 15 дней)_

Показат ель Контроль Крысы (п = 5 в каждой группе) получали НК (мг/кг массы тела) из расчета:

п = 10 0.0 0.5 1.0 2.0 4.0

ТкТР,% 100±1.8 96.8±1.7 98.9±1.9 94.3±2.2 74.3±1.7* 99.311.2 105±3.4 102±2.4 11312.0* 106+2.2 105±3.1 112+2.4* 12512.3* 109±3.2 106+3.4 123±2.9* 136±2.4* 110+3.7 112±3.4* 129+3.1* 146±2.7*

Обозначения: здесь и далее * - достоверное отличие от контроля; + - от В5-авитаминных крыс.

Уровень маркеров ВТФ, КАТ, ЛПО и АОП, фибринолиз и ТкТР при содержании крыс на сбалансированном рационе с атерогенными компонентами без НК и с её избытком. В этой серии сформированы 1 контрольная и 5 подопытных групп. Каждая подопытная группа разделена на 2 подгруппы: одна не получала атерогенных компонентов, другая получала. Контроль получал не содержащий 6-МТУ и холестерола рацион, включающий НК в суточной потребности (0.25 мг/кг). Подопытные группы получали с рационом 6-МТУ(1.75 г/кг) и холестерол (1.17 г/кг). Одна из них НК не получали (В5-авитаминная группа), крысы остальных групп получали НК в количестве, превышающем потребность в 2, 4, 8 и 16 раз (0.5, 1.0, 2.0 и 4.0 мг/кг/сут соответственно). Пробы брали на 15, 30 и 60 дни от начала опыта. Из данных табл. 3 следует, что у крыс, не получавших НК с обычным рационом ослабляется реакции высвобождения ТЦ (нарастающее снижение уровня фф. Рз и Р4). То же и в той же степени найдено при атерогенном рационе. ОКАТ и уровень ФГ снижается при В5-авитаминном питании одинаково при атерогенном и обычном рационе. Сходна динамика снижения уровня маркеров ВТФ. Активность фибринолиза уменьшается (удлиняется время лизиса) достоверно заметнее у крыс, получающих атерогенный рацион.

Таблица 3. Показатели крови крыс, получавших атерогенный рацион без НЦ и с НЦ в количествах, превышающих потребность. Строки 1-я, 2-я и 3-я - соответственно 15, 30 и 60 дни в подгруппах, не получавших атерогенных добавок, на сером фоне -

Показа Контро пь Крысы (п- 5 на каждом этапе) получали НК (мг/кг массы тела, п ■ 5) из расчета:

п= 10 0.0 0.5 1.0 2.0 4.0

80.4±1.3* 87.611.5 90..0±1.7 99.711.9*+ 97.211.2**

76.8±1.5* 88.4±1.6 91.411.7 10311.8** 97.8.311.6**

67.1±1.3* 87.9±1.5 93.712.8 11212.1*' 11412.6**

Ф- 89.3+1. 81.1 ±1.3' 848±1.6 90 1*1.7, 109±2 5'* 114x4.7'+

Р),% 4 7 5,4*1.4* ё8.7±1.5 87 4±1,7\ 119±249** 123±44*+

65.0*1.5* 98 7±1.6" 94.5±1,1** Ч27±2 9** 123:4.9*+

2.710.06* 3.410.07 3.510.04 3.810.02" 3.910.05'*

2.4±0.06* 3.510.06 3.7Ю.08 4.110.03** 4.010.03**

2.1 ±0.02* 3.710.03 Л 1+П по 4.510.04** 4.210.04**

ф. Р4. с 3.6Ю.0 ¡г ш 04* 3 6¿0 04 3.5±0.03 4.220.03'* Ь.О.лО.ОА''

3 23±О02* 3.9*003' 38М05 ■4.7*0.04*+ 5.3 ¿0.06''

■20*004* 4 0*0 04*+ 4 3*003 4 91.0 04*+ 53.±0.07'*

82.8+1.7* 91.111.4 94.011.6 96.911.2*+ 10411.7

79.0±1.4* 89.411.5 97.114.4 11214.3*+ 12214.9*+

68.5±1.4* 89 8+1 6 98.212.8 12315.4*+ 126+6,0*+

ОКАТ, 91,3+4. 83 0*1 1 93.0±1.й 94±3.7 98.5±3.79+ 116*3.0*+

% 0 80 0±1 4 98 1*1 7 + 99.9±3.9* 110±4.1*+ 118*3.6'

659 17 89 8*2 1 / 131+7.8*+ 129*3.5*

ФГ, г/л 2.1±0 .02 1.4±0.06* 1.3Ю.11* 1.0Ю.04* 1.510.02' 1.210.01* 0:9±0.01* 2.110.08 2.0±0.10 2.110.08 2.310.11 1.710.06*+ 1.610.08'+ 2.110.03 2.210.05 2.010.06 1.910.09 1.610,09"* 1-510.09*+ 2.210.04 2.110.07 1.510.07*+ 1.810.07'+ 1.510.04*+ 1,310.04** 2.210.03 2.310.05 1.410.04*+ 1.410.03*' 1.2Ю.03** 1.210.04**

ПДФ, мг% 15.1+ 1.0 11.711.1* 10.6±1.0" 9.5И.1* шшг, 10.SJ.1J' 9.7±0.8' 14.811.3 14.511.0 14.910.8 Ж9Ш9 17:вЖ09*+. 18.7*0.07'* 13.810.7 14.910.9 16.010.9 17.110.6'+ 16.3Ю.6** УЭЯЮ.бЧ, 15.311.1 16.9Ю.5" 18.410.6** 18.110.6'* \19M10. .&+ 21.510.8"* 15.5+1.3 15.710.7* 18.810.6** 17.810.7'* 20.7M.7i* 21.2:31098*+

РКМФ, мкг/мл 24.0± 0.7 20.411.1* 18.8±0.8* 18.1 ±0.8* гать-. '19:210.6*. '18.7*0.4' 23.910.7 24.210.9 24.310.6 24.810.9 26.810.6'+ 28.8+0.8*+ 24.111.0 24.510.9 25.710.09 2&Ш8, $7.910.9'* •28.810.8** 25.210.8 25.511.1 + 26.810.7** 28.910.9*+ 29910.9'* 31.611.4'* 26.711.5*+ 29.611.2** 30.310.7** 28.011.4'* 30.711.2*+ 30.911.3*+

о-д, мкг/мл 0.19+ 0.010 0.14±0.010* 0.12±0.009* 0.11 ±0.007* &?ЗлШ>2* 0.1210.003' олШодг 0.1810.014 0.1810.011 0.1910.013 02010.016 0.2410.010'* 0.28±0.014*+6 0.2010.012 0.2210.019 0.2110.013 0.2210.013 0.2510.002'* 027±0.009"+ 0.2710.012*+ 0.311011" 0.36Ю.009*+ О.ЗЗЮ.ОЮ** 0.3710.012*+ 0.3910.011*+ 0.2910.012*+ 0.31Ю11** 0.3310.008*+ 0.3010.010'* 0.34Ю.011*+ 0.3410.012*+

Фибрино ЛИЗ, мин 8.0Ю .04 11.5±0.06* 11.9±0.04* 13.210.06* 11.4±о:оз' 13.1 ±0.04' 14.4i0.03' 8.410.06 8.310.07 8.110.05 7.910.08 9.910.05'+ ШШ:09Ч 8.610.08 8.310.09 6.2Ю.07* 7.1 Ю.05 0.6Ю.О4** 5.010.03*+ 7.1Ю.05*+ 6.810.03*+ 5.710.06*+ 5.310.04'* '4.910.03*+ 4-210.03'* 6.610.04*+ 6.210.03*+ 5.1±0.11*+ 4.210.05'* 5.210.09*+ 5.0*0.07'+

ДК, А/мг лп 0.054 ±0.00 4 0.06610.007* 0.073±0.006* 0 08110.010* 0.0в4х0.002' 0.069Ю 005* 0.082.Ю.006' 0.05810.005 0.05610.003 0.05510.006 0.05710003 0.059Ю.004 0.0641.003*+ 0.05110.007 0.04810.004 0.04910.002* 0.4910.006 0.5310.004 ' М6М.003} 0.04310.005*+ 0.03910.004*+ О.ОЗЗЮ.ООЗ** ОЖМООЗ** ,0.4730.006'* 0.3610.004** 0.036+0.012 003110.010 0.02810.008** о.з9±о:оо 6** 0.3610.004'* 0.32*0.003*'

ТБК, ед/мг ЛП 0.78± 0.05 0.81±0.02 0.85±0.05* 0.8910.05* 0.8810.04' 0.92Ю:03' 0.9810.04' 0.75Ю.07 0.7610.05 0.7610.09 0.7910.0В 0.8310.08'* 0.9010.09'+ 0.7510.09 0.7510.08 0.7110.03*+ 0.7810.07 '0.8310.04'* '0.8910,06*+ 0.6710.06*+ 0.6210.05** 0.5610.04** 0МЮ.08" 0.6210.08** 0.6810.04'* 0.5510.07:+ 0.52Ю.04** 0.48Ю.02** 0.59Ю.08'' 0.5910.08'* 0.5410.07'*

ПИ, мин/мл 46.1± 1.1 46.411.9 41.0±1.0* 36.6+1.4* 45 011 0 37 1±1 0 * 36 2±1 0 46.112.2 47.811.4 46.710.03 46.51112 49.0±1.2'+ 51.4+1.3** 46.312.1 44.711.9 49.210.09 46.3±1$ 54.011.6'* 51.011.6** 51.512.4*+ 55.811.4*' 62.211.7** 50.1 ±1.6** 48.511.4** 57,&1Ь8** 54.211.0*+ 52.5И.З** 57.9+1.8** 52.211.33"* 48.211:6** 46.211.8**

9°' мм /мл/м ин 0.70+ 0.02 0.7210.05 0.7510.08 0.83Ю.06* ожю:с4'л р.взгющ* 0.88.10:01'* 0.6910.05 0.6810.07 0.72Ю.07 0.7310.05 0.7610.02'* 0 8210.04'+ 0.69+0.07 0.66Ю.13 0.65Ю.12 0.7410.0$ 0.8110.07** ШШРШ 0.6410.07 0.6910.05** 0.6510.07** 0.69Ю.07*'1 0.72.10.07^ 0.8010.07'* 0.59±0.09*+ 0.5110.09** 0.47Ю.11** 0.4510.07-*: р:85К).07"* 089.i0.07**

Холесте рол, г/л 83.2± 5.0 89.014.9 86.114.9 87.914.1* 89.9±2:3 93.312:4' 10114.3'* 89.012.5 88.411.3 84.911.8 '89.ШЗ 93.312.4 10511.0'+ 87.311.1 89.211.3 81.811.4 88.712.5 92.312.1. 97.511.0'* 81.312.1 82.414.1 84.212.6 88.712.5 '87:312:2'+ 9Т.511-.0"* 80.912.1* 83.213.1+ 83.0.212.0+ 91.812.0'+ 90.414.1' 92.212.7'*

В равной мере у крыс, получающих и не получающих атерогенный рацион, ускоряется ЛПО (прирост ДК, ТБК) и снижается АОП (укорочение ПИ и рост СО). Холестеролемия слабо повышена через 60 дней при обычном, и заметнее, при атерогенном рационе. В целом, при В5-авитаминном питании снижается КАТ и «высвобождающая» активность ТЦ, уровень маркеров ВТФ, замедляется фибринолиз.

ускоряется ЛПО и падает АОП. Уровень ф. I также падает вне связи с его ускоренным потреблением (есть признаки замедления НВСК). Холестеролемия не изменяется. Атерогенные добавки к рациону без НЦ не меняют существенно характера сдвигов в гемостазе, но усиливают его гиперхолестеролемический эффект. При введении с рационом НК в количестве, 2-кратно превышающем потребность, отклонения от контроля не возникают (как и в предыдущей серии опытов - табл. 1). При введении той же дозы НК на фоне атерогенного рациона наблюдается: 1) на 30-й и 60-й дни высвобождение фф. Рз и Р4 при атерогенном питании выше контрольного, как и ОКАТ; 2) увеличивается скорость ВТФ (растет уровень маркеров с 30 дня наблюдений; 3) активность фибринолиза в условиях атерогенного питания замедляется в меньшей мере, чем при питании без атерогенных компонентов; 4) ослабляются сдвиги скорости ЛПО и угнетения АОП при питании Вв-авитаминным рационом; 5) степень прироста холестеролемии не изменяется. Видимо, эффекты НК на гемостаз зависят от сдвигов в обмене холестерола, хотя исследуемая доза НК на холестеролемию в изученные сроки не влияет.

При введении НК в 4-кратном против потребности количестве ещё заметнее ускорилось высвобождение фф. Рз, Р4, повысилась ОКАТ и скорость ВТФ (степень прироста невелика, но касается всех исследованных маркеров ВТФ). Все это заметнее на фоне атерогенного питания. Кроме того, существенно ускорился фибринолиз, особенно при атерогенном питания. Видимых изменений ЛПО и АОП НК в этой дозе не вызывала. Уровень холестеролемии был немного ниже лишь к концу наблюдений. При введении в рацион НК в 8-кратном избытке все сдвиги усилились, особенно КАТ, уровень О-димеров и фибринолиз. Холестеролемия оставалась такой же, как и при 4-кратном избытке. При 16-кратном избытке сдвиги уровня фф. Р3, Р4 и ОКАТ, уровня маркеров ВТФ прежние при обычном и атерогенном рационе, замедлился фибринолиз, особенно при атерогенном рационе, но появились признаки замедления ЛПО, снизился АОП, холестеролемия оставалась такой же, как и при меньших дозах НК.

Итак, на фоне атерогенного питания эффекты НК на ЛПО и на гемостаз неодинаковы, с увеличением количества НК в обычном и атерогенном рационе нет прямой зависимости между дозой НК и эффектами на гемостаз, ЛПО и АОП. Данные табл. 4 указывают, что отсутствие НК в рационе снижает ТкТР уже на 5-й и особенно на 15-й дни. При атерогенном рационе этот эффект более выражен. Введение 2-кратного количества НЦ вызывает наклонность к росту ТкТР, выявляемую через 1, 5 и 15 сут. На фоне атерогенного рациона, снижающего ТкТР, выявляется способность НЦ в этой дозе ограничивать угнетение ТкТР. Ещё заметнее действуют 4-. 8- и 16-кратные дозы НК, особенно на фоне атерогенных добавок.

Таблица 4. ТкТР у крыс, получавших НК с атерогенным и обычным рационом в дозе, равной потребности, у неполучавших НК, и получавших её в количествах, выше потребности в 2,4, 8 и 16 раз (1-я строка -1, 2-я - 2, 3-я - 5 и 4-я 15 дней). На сером

фоне - результаты, полученные при атерогенном питании

Показа тель Контроль Крысы (п = 5 на каждом этапе) получали НК (мг/кг массы тела) из расчета:

п = 10 0.0 0.5 1.0 2.0 4.0

96.1±1.9 99.3±4.2+ 106±2.2+ 111±2.4*+ 118±3.5*+

ТкТР,% 100±1.8 71.0±1.3* 106+3.7+ 105±3.1 + 116±3.1*+ 127±3.1*+

54.9±1.8* 107+5.4+ 111±2.3* 125±2.7*+ 136+3.4*+

94.8±1.7 95.3±2.4 91.0±2.2' 110±2 4'+ 111+2.4'+

$в.3±1.8* ■47,111.2* 68.3±2.0'+ 41.2±ЯГ+- 95.9.±2.3+ 89.8±2.3'+ 116±2.8'+ 11.1 ±2.7'+ 124±2Л'+ 117±2.6'+

Обозначения: * - достоверное отличие от контроля, + - от В5-авитаминных крыс.

Влияние прооксиданта свинца на эффекты, вызываемые у крыс отсутствием НК и её избытком (КАТ, уровень маркеров ВТФ в плазме, ф.ХИа-зависимый фибринолиз, ЛПО и АОП, ТкТР. В литературе отмечена прямая зависимость между скоростью ЛПО в ТЦ и уровнем маркеров ВТФ в плазме, и обратная - между АОП и уровнем плазменных маркеров ВТФ (А.Ш.Бышевский и др., 2006; A.B.Пустынников и др., 2007). В наших опытах эта зависимость слабо выражена. Поэтому мы не можем говорить о том, что активация ТЦ, инициирующая ускорение ВТФ - следствие ускорения ЛПО и снижения АОП, хотя эта возможность не исключена, так как НК обладает слабо выраженной антиоксидантной активностью. В случае, когда какой-либо эффект связан с антиоксидантными свойствами испытуемого вещества, он ослабляется одновременным введением прооксиданта (Э.В.Багумян и др., 2007; R.G. Alborov, 2004).

Схема опытов: контроль - крысы с обычным рационом получают НК (0.25г/кг); три подопытные группы (одна не получает НК, две получают НК - 1.0 или 4.0 мг/кг), каждая из них разделена на 2 подгруппы, из которых одна получает с рационом ацетат свинца (50 мг/кг/сут). В этой дозе ацетат свинца не вызывает за 15-20 дней сдвигов в порфириновом обмене, но несколько ускоряет ЛПО и снижает АОП. Степень изменения ЛПО и АОП не высока, что позволяет выявить эффект одновременно вводимого про- или антиоксиданта (А.Ш.Бышевский и др., 2006). Отбор проб крови провели как и в опытах без прооксиданта - через 1, 2, 5 и 15 дней. Изменения в группах (табл. 5), не получавших ацетата свинца, повторяют сдвиги, из 1-й серии опытов в отсутствии НК в рационе (табл. 1).

Таблица 5. Влияние свинца на показатели крови у крыс, не получавших НК и получавших её в количествах, превышающих потребность (1-я строка - 1-й, 2-я - 2-й,

3-я - 5-й, 4-я - 15-й день). Курсив на сером фоне - получали свинец

Показатели Контроль Крысы (п - 5 на каждом этапе) получали НК (мг/кг):

0.0 1.0 4 0

88.5±1.2 892+1.6 96.7+1.4"

В7.4±1.3 91.5+1.5 97.8±1.7**

86.9±1.5 92.4±2.7 131+2.5**

81.8И.4* 99.0±2.3* 140±2.6"

ф. Рз,% 89.1 ±1.2 88 3±1-6 Ж5±1.9 94.9+4.2'*

871±1. i 92Zt1:9 10Щ-1*+

931x1.14, 112±1.9*' 137i4.3'*

Э 9 4±1,1\ 123.t2.7'i 139 ±4.6*+

3.5±0.03 3.4±0.09 4.0±0.04*'

3.6Ю.07 3.7±0.08 4.2±0.04**

З.ЗЮ.05 4.010.07 4.3±0.02"

2.7Ю.04* 4.6±0.04*+ 5.2+0.05'*

ф. Р4. с 3.6±0.03 3.3t0.08 3.610.08 3.7Л0.04 4.3*0.03?

з.г±о.оа 4,2±OÖ1

,4.5±0.07. 4.310.05'

14Ш.03\ 6.9M.0S'. 6.1.±0.04*'

92.3±1.7 94.811.6 90.0±1.5

92.411.8 93.213.7 117±4.4*+

88.3±1.5 97.9±3.7 125±4.8*+

83.811.1* 11614.0*+ 86.1±3.5"

ОКАТ, % 91,3 919±1 7 94.1 ±1.3 91.4±1.5

912±1 9 95.0±3.9 118±4.1'+

69 в±13 99М2Л 128J.6.2'*

9i 1±1 0* 126±3.7'+ 135/3.9'

2.0±0.05 2.1±0.07 2.1 ±0.04

2.2Ю.11 2.2±0.10 2.3±0.04

1.6±0.05 2.2±0.06 1.3±0.02*+

1.4 ±0.06* 1.4±0.07' 1.110.05**

ФГ, г/л 2.1+0.02 ZOiO.OS 1.9±0.10 ;гш.06 2.110.04

1.9М10 '2.2±0.03

1.6*004' 1.7Ж02* И5±<0.03*+

Г1:4MW, ! t6±o:oii 1.2i0 03*'

14.6±1.3 14.9±1.8 15.0±1.3

14.911.4 14.7Ю.9 15.3+0.6

14.7±1.3 15.310.9 18.8±0.4*+

11.9±1.1* 18.710.7'+ 19.8±0.7*+

ПДФ, мг% 15.1+1.0 |Т4,Ш:3 14.711.6 15.211.1

14.8*1.4 14.91.0.5 ,15:610.6

13.9±11 16.410.8 18.8+0.7*+

14.010.7 20.610.8*+ 19.910.6*+

22.9±1.2 24.3±1.3 25.3+1.1

23.2Ю.8 24.0Ю.9 26.710.7++

23.7±0.8 25.010.6 27.9±0.5*+

РКМФ, 20.1Ю.4" 27.910.9*+ 29.9 ±1.1*+

мкг/мл 24.0±0.7 23.1Ы7 24.511.0 25.411.2

23.3409 24.710.9 27.Ш.0++

23.0±0.7 24:910.7 28.610.8''+

21.110.5*" 29.8+0.9*+ 29.4.-1.1*+

0.18±0.011 0 21+0.010 0.21±0 010

0.1710.021 0.2210.011 0.25Ю11++

и-д, 0.19+0011* 0.2310.013 0.2810.011*+

мкг/мл 0.12±0.006* 0.26±0.010*+ 0.30±0.010*+

0.19Ю.010 0.1910.011 0.2010.012 0.2310.012

0.19Ю.010 0.2110.012 0.22Ю10++

0.1810.011 0.2240.014 0.28+0.008*+

0.1710.004* 030+0.009*+ 0.3010.010*+

8.1 ±0.04 8.010.07 6.710.08*+

8.2Ю.04 7.9+0.08 6.410.04*+

10.110.07 6.510.09* 5.310.04*+

Фибринол 11.6±0.04* 5.6±0.05*+ 4.0±0.03*+

из, мин 8.0±0.04 8.210.04 8.110.06 6.810.05*+

8.4Ю.05 7.91010 6.210.03*+

В.Э±0.0б 7.510.08* 5.410.10*+

11.310.02* 5.9±0. 01*+ 4.110.09*+

0.055+0.003 0.05510.005 0.055±0.005

ДК, А/мг 0.054±0.00 0.054+0.007 0.054±0.009 0.05410.005

ЛП 4 0.055±0.006 0.05410.007 0.055±0.003

0.075±0.003* 0.074+0.004* 0.043±0.004*

0.05510.003 0.05310.006 0.05310.003

0.057Ю.005 0.05610.004 0.05510.005

0.05610.008 0.0601.0.011 0.О581О.ОО8

0.063Ю.006* 0.07910.006* 0.06710.009*+

Обозначения: * - достоверное отличие от соответствующего срока во 2-й колонке, знак + - то же относительно 3-й колонки

Мы убедились в неслучайном характере ранее найденного (табл. 1), и получили данные для сравнения эффектов НК на фоне прооксиданта. Прооксидант в рационе без НК активировал ТЦ, ускорил ВТФ и ППО, снизил АОП. Не изменилась лишь активность фибринолиза. Введение НК в 4-кратном количестве увеличило на фоне прооксиданта уровень КАТ, и усилило прирост уровня маркеров ВТФ. Активность фибринолиза относительно крыс, не получавших,прооксиданта, не изменилась. Введение 16-кратного избытка НК с прооксидантом усилило в ещё большей степени КАТ (заметнее прирост фф. Рз и Р4 в плазме), но к концу наблюдений привело к снижению ОКАТ.

Отсутствие НК в рационе (табл. 2) сопровождается снижением ТкТР. Из данных табл. 6 видно, что введение с рационом без НК прооксиданта ещё сильнее снизило ТкТР уже после двух дней опыта и далее. Введение 4-кратного количества НК без прооксиданта на 5-й день проявилось ростом ТкТР, и значительнее - на 15-й день. То же количество НК со свинцом ограничило снижение ТкТР. Введение 16-кратного количества НК без свинца сопровождалось существенным ростом ТкТР (к 15-му дню на 48%), а со свинцом ограничило прирост ТкТР с 1-го по 5-й дни. На 15-й день ТкТР возвратилась к исходному значению.

Таблица 6. Влияние свинца на ТкТР у крыс, не получавших НК (В5-авитаминная группа) и получавших НК в количествах, превышающих потребность. (1-я строка - 12-я - 2-й, 3-я - 5-й, 4-я - 15-й дни опытов). Обычный шрифт - крысы не получали

Показатели Контроль Крысы (п - 5 на каждом этапе) получали НК (мг/кг):

0.0 1.0 4.0

96.0±1.6 103±2.1 110±3.7

98.8±1.7 106±3.4 109±3.5

ТкТР,% 100±1.9 94.0±2.5 114±2.3* 126±3.0*

73.8±1.5* 127±2.1* 148+2.1*

94.5Ц.6 97;0±2.4 10212-7'+

76.9+1.7* 95.212.4 111*2.5*+

56.811.4* 67.3*2:6*+ 119+2:6*+

48.3Л.4* 58.8±2.3*+ 103+2.6+

Влияние ДФ на эффекты, вызываемые у крыс отсутствием НК и её избытком.

В этой серии опытов вместо свинца с рационом вводили ДМ (1 г/кг): контроль - крысы получают НЦ с рационом (0.25 мг/кг/сут); три подопытные группы - одна не получает НК, две получают (1.0 или 4.0 мг/кг/сут); каждая подопытная группа разделена на 2 подгруппы, из них одна получает с рационом ДМ, другая не получает. Результаты эксперимента (табл. 7) таковы: 1) отсутствие НК в рационе одинаково снизило уровень фф. Рз, Р4, ОКАТ и маркеров ВТФ и замедлило фибринолиз на фоне ДМ и без него; 2) содержание ДК и ТБК в ТЦ в отсутствии НК в рационе повысилось к 15-му дню, введение ДМ ограничило это изменение; ограничилась при введении ДМ и степень укорочения ПИ, и степень увеличения СО, наблюдавшиеся при отсутствии в рационе НК. ДФ в отсутствии НК проявил противоокислительный эффект, но не влиял на сдвиги КАТ и скорости ВТФ, вызываемые отсутствием НК в рационе. Введение НК в 4-кратном количестве без ДМ не только устранило снижение уровня фф. Рз, Р4 и ОКАТ (15-й день), но восстановило эти величины до контрольных значений.

Вместо снижения уровня маркеров ВТФ, наблюдающегося при питании без НК, произошел рост их уровня на 15-й день в степени, не зависящей от присутствия в рационе антиоксиданта. Ускорения фибринолиза, вызванное 4-кратной дозой НК, было одинаковым на фоне ДФ и без него. Угнетающее влияние ДФ на ЛПО в этом случае проявилось снижением уровня липидпероксидов к 15-му дню в большей степени при введении 4-кратной дозы НК одновременно с ДФ. Заметнее у этой группы удлинился ПИ и уменьшилась СО при введении 4-кратной дозы НК одновременно с ДФ. Следовательно, избыток НК влиял на КАТ и интенсивность ВТФ на фоне антиоксиданта независимо от его эффекта на скорость ЛПО и величину АОП. Эффекты НК на ТкТР в присутствии ДФ и без него представлены в табл. 8. Здесь видно, что: 1) при отсутствии НК на фоне ДФ или без ДФ снижение ТкТР обнаружилось лишь на 15-й день опыта; 2) при введении 4-кратной дозы НК с рационом без ДФ ТкТР увеличивалась уже на 5-й день и заметнее - на 15-й; при введении НК 4-кратной дозе рационом, содержащим ДФ, ТкТР выросла к концу наблюдений в той же мере. З.При введении 16-кратной дозы НК на фоне ДФ и без него ТкТР увеличивалась быстрее, заметнее, но независимо от наличия или отсутствия ДФ

Таблица 7. Влияние ДМ на КАТ, уровень маркеров ВТФ в плазме, ф.ХМа-зависимый фибринолиз, ЛПО и АОП у крыс, не получавших НЦ (В5-авитаминная группа) и получавших его в количествах, превышающих суточную потребность (1-я строка - 1-й, 2-я - 2-й, 3-я - 5-й, 4-я - 15-й день от начала опытов). Обычный шрифт -

крысы не получали ДМ, на сером фоне - получали ДМ

Показатели Контроль НК - Крысы (п - 5 на каждом этапе) получали НК (мг/кг):

0.25 мг/кг

0.0 1.0 4.0

88.7±1.4 89.411 8 97.111.2**

88.0±1.5 90.1 ±16 98.9+1.6 *'

87.8±1.4 91.412.3 131±2.6**

80 111 1 * 102+2.9* 139+2.7**

ф. Рз,% 89.7±1.5 88 7±1 4 90.Н1.5 94.3±1,3'+

87 8±1 7 91.7±1.8 101 ¿4.1*+

86 9±1 3 10422.0* 1351:4.4"+

79 8±2 3" 10512.6" 14114.2*+

3.4Ю.07 3.5Ю.07 4.8±0.04*'

3.5Ю.08 3.6±0.07 4.5±0.06*'

3.5±0.06 3.9±0.09 46±0.03**

2.5±0.03* 4.5±0.04*+ 5.3+0.04**

Ф Р<. с 3.6Ю.04 •ЗШ07 Э. №,08 4.510.02**

341008 3.7x0.04 4410.02"*

У5±0й5 ЗЛО.03 4.3Ш04".

2 6Ю06 4.610:0 5* 5.1.10.06'*

91.2±1.6 94.211.8 90.611.8

92.0±1.5 93.4±3.6 11914.6*+

89.5±1.6 96.9±3.8 128±4.9*+

84.6±1.1* 117+4.0*+ 85.8±3.5*

ОКАТ, % 90,9 Э1 3±1 в 94.611.3 91.711.7

917 19 94.9±3.4 12214.6"+

92 6±1 7 100±5.9 132±6.4'+

85 011 0* 11813.0'* 86.3+3.7'

2.1 ±0.04 2.0±0.08 2010.03

2.2±0.09 2.1±0.07 2.2±0.05

1.5±0.05* 2.2±0.09 1.410.02*+

1.3+0.04* 1.3±0.05* 1.210.05**

ФГ, г/л 2.2±0.03 2 НО 05 2.010.05 2.0+0.04

2 ОМ 07 t8iO.11 2.1 ±0.03

^ 6Ю03 1.910.02* '1:5+0.05'+

Т 4±0 03 К4&0Р 1.310.04'*

14.6±1.2 14.7+1.9 15.0±1.5

14.5±1.0 14.9±0.8 14.7±0.9

1 Ч СиН А 14.9+0.9 19.1±0.3**

11.8±1.0* 18.0±0.8*+ 19.9±0.5*+

ПДФ, мг% 15.1±1.0 14 2±1 í Г4.Ы1.4 15:81.1.1

14 вН 7 14 3±0.6 15.2+0.7

13 6±11 ■15.4±0.5 19.Ш9*'

120*0 7 19.310.8'+ 20.610.7*+

22.8±1.0 24.2И.1 25.1±1.0

22.5Ю.9 23.810.8 26.0±0.7"

21.210.7. 24.3±0.6 27.6±0.4**

РКМФ, 19.8±0.6* 28.2Ю.9** 30.1 ±1.0*+

мкг/мл 24.0±0.7 22'3±1.6 24М1.1 25.311.1

>226+0 8 24.ЗАО.7 27.010.9 **

219М8 24.500.8 28.Ш.4**

20.0*03' 29.0Ю 9'* 29.611.2"+

0.1710.012 0.2110.008 0.2110.008

0.17±0.011 0.2110.009 0.241009**

й-Д, мкг/мл 0.16±0.008* 0.2310.011 0.27±0.007*+

0.12±0.004* 0.27±0.011*+ 0.3110.008*+

0.19±0.010 р.1в£0.011 0.2Ш010 0.22±0.013

Ь 1710.010 0.20М.011 0.231008

'0:16ШШ" 0.2Ш.010 0.29x0.007'+

0,1310.005* 0.28*0.007'+ 0.3010.011'+

Фибринолиз, мин 8.0Ю.04 8.010.03 8.1±0,05 9.110.03 11.4t0.06* 8.1*0.04 8.210.03 В.7Ю.05 12.1i0.07" 8.110.05 8.3+0.07 6.410.08* 5.410.09*+ 8:2+0,07 7.8Ю.И 7.210.08* 5.6+0,04*+ 6.6Ю.05*+ 6.310.02*+ 5.010.03*+ 4.110.02*+ 6.7±0.06*+ 6:110.05*+ 5.210.10*+ 4.2X0.07*+

ДК, А/мгЛП 0.054±0.004 0.056Ю.004 0.053Ю.007 0.055±0.006 0.078Ю.009* 0.057*0.004 0.052Ю1005 0.05510.009 0.066±0.005' 0.05510.008 0.05610.009 0.053Ю.006 0.07810.007* 0,052*0.008 0.055±0.003 0.0$9±0,010 0.04710.003*+ 0.05310.004 0.05610.003 0.05510.007 0.04110.003* 0.054±0.005 0.055Ю.007 0.05210.007 0.047*0.006*+

ТБК, ед/мг ЛП 0.78±0.05 0.76+0.03 08110.05 0.82Ю.08 0.91 ±0.06* 0.77±0.005 0.78*0.001 - 0.77±0.006 0.88И) 005* 0.7410.07 0.7510.09 0.7310.09*+ 0.6510.04*+ 0.73Ш09 0.7510.05 0,7310.09*+ 0.6910.05*+ 0.7510.05 0.7510.08 0.6810.04*+ 0.5810.07*+ 0.74Ю.07 0.7310.08 0.7210.03*+ 0.56*0.05*+

ПИ, мин/мл 46.1±1.1 46.0±1.2 45.9±1.1 46.011.9 36.711.0* 46.3±1.8 46.4И.8 45.8*1.4 3996*1.0* 46.112.1 46.4И.1 47.5+0.8 54.611.0*+ 46.1± 1.8 46.5±1;4 49. ОМ 8 59.81146*+ 51.012.5 54.711.1*+ 64.811.3*+ 68.411.9*+ 5 0:912.1 55.811.4'+ 65.111.9'+ 63.911:5*+

СО, ммЗ/мл/мин 0.70±0.02 0.71Ю.04 0.7010.07 0.72Ю.03 0.87.Ю.08* 0.72+0.09 0.71 ¿0.03 0.75Ю.11 0.79. ±0.03* 0.6510.09 0.68+0.07 0.6710.08 0.56Ю.07*+ 0.66Ю.04 0.6510.07 0.6910.09 0.44±0.09*+ 0.6610.08 0.7110.08 0.7510.10 0.46+0.055"+ 0.6510.06 0.7210.09 0.75Ю.10 0.4810.06*+

Таблица 8. Влияние ДМ на толерантность к тромбину у крыс, не получавших НК (В5-авитаминная группа) и получавших её в количествах, превышающих суточную потребность (1-я строка - 1-й, 2-я - 2-й, 3-я - 5-й, 4-я - 15-й день от начала опытов),

курсив на сером фоне - получали ДМ

Показатель Контроль Крысы (п - 5 на каждом этапе)получали НК (мг/кг):

0.0 1.0 4.0

96.811.3 10012.5 10913.8

97.911.8 10113.1 10713.6

ТкТР,% 10012.1 95.3±2.6 117±2.4* 128±3.1*

73.211.7* 130+2.5* 15013.9*

94,7 ±1.7 99.4±2,6 105±2.5+

96.311.8 95.9+2.5 110±2.9+

96.0±1.9 116±2.6*+ 129±2.6'* 152±2.8'+

75.111.6*. 13212.7"

Это подтверждает, что эффект НК на ТкТР не связан со сдвигами ЛПО и АОП, как это было показано и в опытах с введением НК на фоне прооксиданта. При визуальном анализе приведенных выше данных складывается впечатление, что у крыс, не получавших НК или получавших её высокие дозы, наиболее четко выражена зависимость между изменениями интенсивности фибринолиза и ТкТР. Поэтому, и в связи с данными о неодинаковом влиянии на гемостаз внутривенного и орального

введения НК, а также с данными о фазности изменений гемостаза после внутривенного введения НК (М.Г.Шершевский, 1963; Г.В.Андреенко, Л.А.Мигалина, 1969; С.М. Chesney е.а.. 2000; M.Miller е.а. 2008). мы провели эксперимент для оценки связи фибринолиз-ТкТР в разные сроки после введения нейтрализованной НК в яремную вену.

Динамика изменений фибринолиза и ТкТР после внутривенного введения НК.

Схема эксперимента: 1) крысам контрольной группы вводили в яремную вену слева по 0.2 мл/100 г массы тела 0.14 М раствор NaCI, с рН 7.25 (титрование раствором бикарбоната натрия); 2) подопытным крысам вводили раствор НК, нейтрализованный раствором бикарбоната натрия до рН 7.25 (концентрация НК была такой, чтобы во вводимой порции - 2 мл на/кг - содержалась испытуемая доза НК - 0.5,1,0,4.0 или 8.0 мг/кг, что выше потребности соответственно в 2, 4, 8 и 16 раз (примерно так превышают суточную потребность лечебные дозы НК у человека). Пробы брали через 5, 15, 30 и 60 мин после инъекции. Периодичность отбора обоснована тем, что при внутривенном введении эффект НК краткосрочен - до 1 ч и менее (S.Tavintharan е.а., 2007). Определяли, кроме фибринолиза и ТкТР активированное время рекапьцификации (для оценки общей свертываемости крови).

Установлено следующее (табл. 9): 1. Введение растворителя не изменяло АВР и фибринолиза, а значение ТкТР в контроле всегда принимали за 100-процентное, как предусматривает способ определения; 2. После введения НК (0.5 мг/кг) через 5 мин АВР сокращалось, что было менее заметно через 15 мин, и через 30 и 60 мин АВР возвращалось к контрольной величине; 3. Фибринолиз ускорился к 15-й мин, заметнее - к 30-й мин и сравнялся с контролем через 1 ч„ ТкТР оказалась повышенной через 15 мин, а через 30 чуть уменьшалась, оставалась выше контроля, и нормализовалась к концу наблюдений; 4. После введения НК в дозе 1.0 мг/кг АВР оказалось через 15 мин более укороченным, чем при меньшей дозе, оставаясь короче контроля и через 30 мин, но стало длиннее контрольного через 1 ч.; 5. Фибринолиз существенно ускорился уже на 5-й минуте, еще значительнее - на 15-й и особенно на 30-й мин, и был равным контролю через 1 ч.; 6. ТкТР увеличивалась в те же сроки, что и при меньшей дозе НК степень, но заметнее, и через 1 ч сравнялась с контролем; 7. При введении НК в дозе 2.0 мг/кг АВР было укорочено на 5-й и 15-й минутах, меньше отличалось от контроля на 30-й мин, а через 1 ч удлинилось против контроля; 8.Фибринолиз ускорен на 5-й и 15-й мин заметнее, чем при дозе НК в 1.0 мг/кг, на 30-й мин несколько замедлился и через 1 ч стал равным контролю; 9. ТкТР на всех этапах оказалась выше, чем при дозе в 1.0 мг/кг, степень превышения уменьшилась к 1 ч после введения НК; 10. При введении НК в дозе 4.0 мг/кг укорочение АВР было максимальным (в сравнении с другими дозами) на 5-й мин, а далее стало удлиняться и через 1 ч оказалось существенно продолжительнее, чем в контроле; 11. Скорость фибринолиза при этой дозе была значительнее, чем при меньших на 5-й, 15-й и 30-й мин, а к 1 ч сравнялась с контролем; 12. ТкТР при этой дозе НК также возросла заметнее, чем при других дозах в первые 30 мин, а через 1 ч упала ниже контроля почти на 15%. В целом эффекты внутривенного введения НК свидетельствуют, что общая свертываемость крови тотчас после инъекции возрастает, затем постепенно снижается, а, начиная с дозы в 1.0 мг/кг, через 1 ч падает ниже контрольной. Параллельно активируется фибринолиз и растет ТкТР, увеличение которой также через 1 ч сменяется снижением против значения в условиях нормы.

Таблица Э. А8Р, фибринолиз и ТкТР у крыс через 5, 15, 30 и 60 мин (сверху вниз

соответственно) после внутривенного введения НК

Показа тели Контроль- (ввели растворите ль, 2 мл/кг) Крысам (п = 5 на всех этапах) вводили в яремную вену НК в дозах (мг/кг):

п = 5 0.5 1.0 2.0 4.0

АВР, с 65,1±1,4 65,5±1,2 64,9+1,2 65,7±1,6 58,7±1,1* 60,1±1,0* 64,7+1,1 66,7±1,3 54,2±1,2* 55,1+1,1* 59,8±1,0* 68,9±0,7* 48,1+0,6* 46,2±0,4* 57,9±0,7* 71,0+0,6* 39,3+0,4* 49,6+0,5* 59,7±0,3* 75,4±0,6*

Фибр и нолиз, мин 8.1+0.03 8.0+0.05 7.8±0.04 7.9±0.05 7.4+0.04 6.1±0.05* 5.310.02* 8.1±0.07 6.5±0.02* 5.8+0.04* 4.7+0.03* 7.8±0.05 '6.0+0.04* 5.3+0.06* 5.0+0.03* 8.4+0.04 5.0±0.06* 4.6±0.03* 4.2±0.03* 8.8+0.02*

ТкТР, % 100±2.1 109+2.7 123±3.1* 112+2.1* 98.7±2.5 113±2.6* 127±3.0* 119+2.3* 93.7±2.9 139±3.4* 148±3.6* 129±2.6* 91.2+2.8* 149+4.1* 157±4.0* 139±3.5* 85.4±3.1*

Примечание: * - достоверное отличие от контроля.

Таким образом, при Bs-авитаминном питании снижены КАТ и НВСК, избыток витамина В5 ускоряет НВСК через активирующее влияние НК на КАТ. Это согласуется с представлением о причинной связи коагулоактивность тромбоцитов-ускорение ВТФ (Р.Г.Алборов, 2006; Э.В.Багумян, 2007). Отсутствует при исключении НЦ из рациона и его избытке зависимость между сдвигами ЛПО и уровнем маркеров ВТФ, выявляющаяся обычно при введении антиоксидантов и других воздействиях (С.Л.Галян, 1999; R.G. Alborov, 2004). Фибринолиз замедляется при В5-авитаминном питании, чему сопутствуют уменьшение КАТ и замедление ВТФ; введение НК нормализует, а в больших дозах ускоряет то и другое. На рис. 1 видно, что скорость фибринолиза В5-авитаминном рационе НК одинакова с контрольной и растет с повышением дозы НК, параллельно растет и ТкТР, снижающаяся в отсутствии НК в рационе. Усредненные кривые обеих величин характеризуются высоким коэффициентом аппроксимации - R2 близки к единице. Видимо, рост ТкТР при введении НК обусловлен активацией фибринолиза, как элемента противосвертывающего механизма (Abe Y. е.а., 2008; J.Noble е.а., 2008).

Рис. 1. Изменения (в % к контролю) скорости фибринолиза (Фиб-лиз) и ТкТР у крыс на 15-й день потребления рациона без НК и с разными количествами НК (суточные дозы НК в мг/кг под рисунком слева направо); -.-. линейный тренд Фибр-лиз; -- линейный тренд ТкТР.

Разнятся ли эффекты НК на фоне обычного и атерогенного рациона? На рис. 2 видно, что отсутствие НК в обычном и атерогенном рационе снижает КАТ и замедляет ВТФ в равной степени, одинаково в обоих случаях ускорялась ЛПО и снижался АОП. Холестеринемия на 60-й день опыта, естественно, выше при атерогенном питании. Динамика угнетения фибринолиза примерно одинакова и линейна при обычном и

атерогенном рационе. Коэффициенты аппроксимации графиков, особенно, графика фибринолиза при атерогенным питани (АР), близки к единице (высокая достовернось интерполяции). Спад активности фибринолиза опережает прирост уровня холестерола, следовательно, не зависит от холестеролемии. Вместе с тем, на фоне гиперхолестеролемии избыток НК активирует фибринолиз и ТкТР слабее, чем при обычном питании. Изучая сдвиги коагулоактивности ТЦ и уровня маркеров ВТФ. Мы не нашли их четкой зависимости от изменений ЛПО и АОП, и чтобы уточнить так ли это, экспериментировали, вводя НК (в количествах, вызывавших заметные сдвиги всех показателей - 0.0, 2.0 и 4.0 мг/кг), одновременном с прооксидантом или антиоксидантом. Оказалось, что сдвиги определявшихся показателей несогласованны, хотя росту некоторых из них сопутствует рост или снижение других.

I-1 ОР(ФБ-з) ОР(ТкТР) Е532ЭАР(ФБ-з) ЕШ53Э АР(ТкТР) Линейный (АР(ФБ-з)) Г-1АР(ХЛ) Линейный (ОР(ФБ-з)) "......Линейный (АР(ХЛ))

Линейный (ОР(ХЛ))

28

Рис. 2. Изменения (в %) скорости фибринолиза, ТкТР и холестеролемии у крыс при потреблении несодержащего НК обычного (ОР) или атерогенного рациона

(АР). 1

Графическое усреднение данных для оценки зависимости характера сдвигов отдельных показателей между собой также не дало положительного результата, т.к. ' значения Я2 линейного, логарифмического, полиномиального и «линейной фильтрации» трендов были чрезвычайно низки - меньше или около 0.30 (рис. 2). Однако пара «фибринолиз-ТкТР» - исключение. На рис. 3 видно, что оба компонента пары изменяются практически линейно (Я2 - близки к единице для обеих величин), а, связь (метод ранговой корреляции Спирмена), указывает на тесную положительную зависимость (г5 = 0.86). Исследуя по той же схеме эффекты отсутствия и избытка НК на фоне рациона с антиоксидантом ДФ, мы нашли, что сдвиги КАТ и скорости ВТФ при отсутствии НК в рационе, имеют одинаковую направленность и размеры на фоне антиоксиданта и без него (табл. 7), хотя на фоне ДМ скорость ЛПО снижается и не меняется АОП. Следовательно, и в этом случае не получены данные, указывающие на связь эффекта, вызванного дефицитом НК, с КАТ и скоростью ВТФ. И это в ещё раз 1 подтвердило, что отсутствие НК влияет на гемостаз вне связи с её антиоксидантной активностью. Четырехкратная доза НК без ДМ увеличивает уровень фф. Рз, Р4, ОКАТ и маркеров ВТФ вместо снижения, наблюдающегося при рационе без НК. ДМ не сказался на степени сдвигов. Не зависела при этой дозы НК и активация фибринолиза ' - он одинаков с ДМ и без него. Те же сдвиги при введении 16-кратного количества НК усилились, но и они не зависели от наличия ДМ, как и сдвиги ТкТР, вызванные В5-авитаминным рационом или избытком НК. Следовательно, В5-авитаминоз и избыток НК влияют на активность ТЦ, на ВТФ и ТкТР в равной мере на фоне антиоксиданта и без него, хотя его введение изменяет и ЛПО и АОП.

Чтобы подтвердить (или исключить) зависимость между фибринолизом и ТкТР детальнее рассмотрели данные, касающиеся этих показателей. На рис. 3 видно, что

связь между ходом усредненных кривых, отражающих сдвиги фибринолиза и ТкТР, столь же тесна, как и в ситуации, представленной на рисунках 1 и 2. Следовательно, связь в паре «фибринолиз-ТкТР» воспроизводится в опытах без НК, с разными дозами НК при питании обычным рационом и рационом с ДМ.

Рис. 3. Изменения (в % к контролю) скорости фибринолиза (фиб-з) и ТкТР у крыс на 15-й день потребления рациона без НК и с разными количествами НК (суточные дозы НК в мг/кг под рисунком) на фоне ДМ.

Вполне вероятно, что угнетение фибринолиза при исключении НК из рациона, а также активация фибринолиза, вызываемая избытком НК в рационе, служат причиной сдвигов, изменяющих ТкТР. Так как фибринолиз меняется в ответ на введение НК, и известна зависимость эффекта НК от пути введения (M.Miller е.а. 2008), мы изучили связь фибринолиз-ТкТР и после внутривенного введения нейтрализованной НК, контролируя общую свертываемость крови (по АВР) в связи с предположением о «вторичности» реакции фибринолиза на НК. Использованные дозы НК эквивалентны лечебным для человека (S.A.Raghavan е.а., 2008). Периодичность отбора проб обоснована экспериментальными свидетельствами о кратковременности эффекта НК I (1 ч и менее) при внутривенном введении (Г.В.Андреенко, Л.А.Мигалина, 1979; S.Tavintharan е.а., 2007). Мы нашли, что внутривенное введение НК вызывает уже через 5 мин рост общей свертываемости крови пропорционально дозе. Такая очередность событий позволяет снижение общей свертываемости крови рассматривать как следствие компенсаторной противосвертывающей реакции, и это согласуется с представлением о характере функционирования противосвертывающего механизма (А.А.Базазьян, 1982; Q.Hetland е.а., 2002). Графический анализ изменений общей свертываемости крови (АВР) и активности фибринолиза (рис. 4) выявил, что через 5 мин после внутривенной инъекции НК растет общая свертываемость крови и активность фибринолиза пропорционально дозе НК, что активация обоихпроцессов вскоре сменяется их снижением, заметным уже через 15 мин и усиливающимся через 30 мин (при всех дозах НК); через 60 мин после инъекции тот оба показатели

через 5 мин через 15 мин через 30 мин через 60 мин

Рис. 4. Изменения общей свертываемости крови и фибринолиза (в % к контролю) при внутривенном введении НК в дозах от 0.5 до 4.0 мг/кг.

становятся ниже их значения в контроле._

I ~АВР — Фибр-з |

л- 38

\

=»26 \ tc 23- Иг \

_ 10 = 1t \ / -О ~ 16 \ / ... - в -« -в\

0.5 1.0 2.0 4.0 0.5 1.0 2.0 4.0 0.5 1.0 2.0 4.0 0.5 1.0 2.0 4.0

Следовательно, НК вскоре после введения в вену вызывает гиперкоагуляцию, сменяющуюся гипокоагуляцией, и активацию фибринолиза, сменяющуюся угнетением. Взаимосвязь между общей свертываемостью и фибринолизом (рис. 5) при внутривенном введении НК положительная, хотя и недостаточно тесная (коэфф. корреляции - 0.76), не высоки и коэффициенты достоверности экстраполяции (0.7692 и 0.6859).

Однако динамика сдвигов в целом сходна: дозазависимый рост через 5 и 15 мин после инъекции, и дозазависимое снижение (ниже исходных значений) к 60-й мин. Графики демонстрируют, что общая свертываемость растет на старте чуть заметнее фибринолиза (5-я мин), который продолжает расти и тогда, когда падает общая свертываемость; в меньшей мере и позднее фибринолиз затормаживается, когда общая свертываемость уже стала ниже исходной. Эти факты - аргумент в пользу предположения о том, что фибринолиз активируется вторично (ответ на гиперкоагуляцию).

ЙЖ-АВР ВгЯЭФибр-з

~ Полиномиальный {АВР)___■ Полиномиальный (Фибр-з)

ЗВ38 34 40 3 32 т I в 16-

.тодй^й,:' ¡.т-ГТ """7

0.5 1.0 го 4.0 0.5 1.0 го 4.0 о.б 1.о го 4.о 0.5 1.0 2.0

через 5 мин через 15 мин через 30 мин через 60 мин

Рис. 5. Взаимосвязь изменений общей свертываемости и фибринолиза после внутривенного введения НК.

Это же косвенно подтверждает накопление в плазме ПДФ и О-димеров в поздние сроки после орального введения высоких доз НК (табл. 2, 4, 6, 8). На рис. 6 видно, что при внутривенном введении НК: кривая зависимости изменений ТкТР от дозы НК почти сливается с кривой дозазависимости эффекта НК на фибринолиз. Следовательно, и в этой ситуации введение избытка НК с обычным или атерогенным рационом, одновременно с про- или антиоксидантом) обнаруживает взаимосвязь изменений ТкТР с изменениями фибринолиза.

Рис. 6. Изменения ТкТР после внутривенного введения НК.

Уровень в плазме ФГ- единственного субстрата фибринообразования можно рассматривать или как маркер ускорения ВТФ (если фибриногенемия заметно снижается с одновременным ростом уровня других маркеров ВТФ или заметном ускорении фибринолиза), или как один из белков плазмы крови, синтезирующийся гепатоцитами (в этом случае его сдвиги могут указывать на изменения скорости синтеза белков в печеночных клетках). При В5-авитаминном питании уровень ФГ в I плазме заметно снижался к 15-му дню, особенно при атерогенном рационе: к концу | опыта на 28 % в первом, и на 57 % во втором случае. Нет оснований объяснять гипофибриногенемию ускоренным потреблением ФГ, вызванным В5-авитаминозом так как отсутствуют признаки активации ВТФ. Нельзя связывать её и с ускорением фибринолиза, активность которого, в этом случае снижена. Более вероятно, что гипофибриногенемия - результат замедления протеиногенеза в связи с отсутствием одного из витаминов, контролирующих этот процесс (при дефиците НЦ ограничивается протеиногенез в печени (A.R. Tall. 2008; K.Tanq. 2008). Подкрепляет предположение и то, что 2-кратная против потребности доза НК предупреждающая гемостатические сдвиги, исключила и развитие гипофибриногенемии. Введение в обычный и атерогенный рацион НК в количествах, превышающих потребность в 4, 8 и 16 раз, также сопровождалось гипофибриногенемией, скорость появления и степень которой были пропорциональны дозе НК (рис. 7 и 8).

14

и и и " 11 -ч и

U И

-19 U ■•Id U -28

1.0 2.0 4.0 1.0 2.0 4.Q 1.0 2.0 4.0 1.0 2.0 Ло

через 1 день через 2 дня через 5 дней через 15 дней

Рис. 7. Изменения содержания ФГ (в % к контролю) при введении с обычным рационом НК (1.0, 2.0 или 4.0 мг/кг - на оси категорий) через 1, 2, 5 и 15 дней от начала опыта.

б л 0

5 -I 'П '

18 LI -

пг

.■>л

-аа

1.0 2.0 4.0 1.0 2.0 ""Ч.о -зэ ^ 1.0 2.0 ^П.О

через 15 дней через 30 дней через 60 дней

Рис. 8. Изменения содержания ФГ (в % к контролю) при введении с атерогенным рационом НК (1.0, 2.0 или 4.0 мг/кг - на оси категорий) через 1, 2, 5 и 15 дней от начала опыта.

Сопоставляя темп роста КАТ и степени ускорения ВТФ со сдвигами гипофибриногенемии (опыты с высокими дозами НК) можно видеть, что чем заметнее увеличиваются два первых признака, тем значительнее гипофибриногенемия (в опытах с обычным и атерогенным рационом - в последнем случае активация ТК и скорость ВТФ заметнее, как и гипофибриногенемия). Поэтому, гипофибриногенемию при введении высоких доз НК можно считать дополнительным признаком ускоренного НВСК. Оговоримся, однако, что степень ускорения НВСК при введении высоких доз НК

нельзя считать существенно выходящей за те физиологические пределы, когда можно констатировать переход НВСК в ДВС крови. О сохранении физиологического характера процесса ВТФ свидетельствует и высокая ТкТР, наблюдающаяся после введения НК. Видимо, возможность развития ДВС-синдрома при избыточном введении НК сдерживается тем, что его избыток поддерживает фибринолиз в активном состоянии.

ВЫВОДЫ

1. При отсутствии витамина В5 в рационе крыс, сбалансированном по макро-и микронутриентам, снижается коагулоактивность тромбоцитов (общая коагуляционная активность, уровень в плазме фф. Р3, Р4,), замедляются ВТФ (падает содержание ПДФ, РКМФ, О-димеров) и фибринолиз, уменьшается толерантность к тромбину на фоне ускорения липидпероксидации и снижения антиоксидантного потенциала.

2. Отсутствие витамина В5 в атерогенном рационе вызывает такие же по направлению и степени сдвиги, как и при питании рационом без атерогенных добавок.

3. Присутствие в рационе НК в количестве, превышающем суточную потребность крыс в 2 раза, предупреждает изменения гемостаза и липидпероксидации, возникающие при В5-авитаминном питании и нормализует толерантность к тромбину.

4. Избыток в рационе НК, превышающий суточную потребность в 4, 8 и 16 раз, повышает коагулоактивность тромбоцитов, ускоряет ВТФ и фибринолиз, повышает толерантность к тромбину, замедляет ЛПО и увеличивает АОП.

5. Присутствие прооксиданта в В5-авитаминном рационе повышает коагулоактивность тромбоцитов, ускоряет ВТФ, липидпероксидацию и снижает антиоксидантный потенциал, не ограничивая снижения фибринолиза и толерантности к тромбину, вызываемого отсутствием ниацина.

6. Присутствие антиоксиданта в В5-авитаминном рационе оказывает противоокислительное действие, но не влияет на степень изменения коагулоактивности тромбоцитов, скорости ВТФ, фибринолиза и толерантности к тромбину.

7. Внутривенное введение нейтрализованной НК вызывает тотчас после инъекции пропорциональную дозе кратковременную гиперкоагуляцию, активацию фибринолиза и рост толерантности к тромбину, сменяющиеся через 1 ч слабо выраженными противоположно направленными сдвигами.

8. Во всех испытанных экспериментальных ситуациях выявляется прямая зависимость между коагулоактивностью тромбоцитов и интенсивностью ВТФ, но отсутствует зависимость между этими величинами и скоростью липидпероксидации.

9. Тесная прямая зависимость существует между скоростью фибринолиза в эйгпобулиновой фракции плазмы крови и толерантностью животных к тромбину - видимо, активация фибринолиза и является причиной роста толерантности к тромбину.

Публикации по теме диссертации

1. 'Связь кобаламина с гемостазом /И.В.Зверева, А.Ш.Бышевский, Е.В.Забара и др.// Медицинская наука и образование Урала. - 2007. - 6(50).- С.9-12

2. Эффект кобаламина на гемостаз при холестеринемии/А.Ш.Бышевский, И.В.Зверева, Е.В.Забара и др.//Химический анализ, заочная электронная конференция, 15-20/XII, 2007 г.

3. Неспецифическая коррекция изменений гемостаза при заболеваниях, протекающих с гиперкоагуляцией / А.Ш.Бышевский, С.Л.Галян, Е.В.Забара и др. // Фундаментальные исследования. - 2008. -2. - С.29-30.

4. 'Витамин РР: влияние на гемостаз /П.Я.Шаповалов, Е.В.Забара, И.В.Зверева и др. И Медицинская наука и образование Урала. - 2008. - 3 (53). - С. 189-192.

5. 'Маркеры взаимодействия тромбин-фибриноген, коагулоактивность тромбоцитов, фибринолиз, толерантность к тромбину и состояние ЛПО при содержании крыс на сбалансированном рационе без витамина В5 и с его избытком /А.Ш.Бышевский, С.Л.Галян, М.В.Забара и др. // Медицинская наука и образование Урала. - 2008. - 4 (54). - С.32-35.

6. Plazmatic level of thrombin-fibrinogen interaction markers is connected with lipid peroxidation in thrombocytes /A.Sh. Byshevsky, S.L.Galyan, M.A.Zabara, I.V.Zvereva e.a. // European J. of natural history. - 2008. - 3. - P.. 62-64 (short reports).

7. Antioxidant complex selmevit in hemostasis correction at some uterine surgeries (report III) / A.Sh. Byshevsky, S.L.Galyan, M.A.Zabara e.a. // European J. of natural history. -2008.-3.-P. 10-15.

8. Plazmatic level of thrombin-fibrinogen interaction markers is connected with lipid peroxidation in thrombocytes /A.Sh. Byshevsky, S.L.Galyan, MAZabara, I.V.Zvereva e.a. // European J. experimental education. - 2008. - 3. - p. 22-27.

9 Липидпероксидация, антиоксидантный потенциал и непрерывное внутрисосудистое свертывание крови /А.Ш.Бышевский, Е.В.Забара, И.В.Зверева и др.// Заочные электронные конференции РАЕ. - Фундаментальные исследования, заочная электронная конференция, 15-20 января 2008 г.

* (отмечены статьи, опубликованные в журнале, входящем в перечень, рекомендованный ВАК для публикаций научных работ)

Использованные сокращения

АВР Активированное время рекалыдификации

А оптическая плотность

АК Аскорбиновая кислота

АОП антиоксидантный потенциал

ВТФ взаимодействие тромбин-фибриноген

D-Д D-димеры

ДК диеновые конъюгаты

ДМ Димефосфон

ЛП липиды

ЛПО липидпероксидация

ЛПВП липопротеиды высокой плотности

ЛПНП липопротеиды низкой плотности

КАТ коагулоактивность тромбоцитов

НВСК непрерывное внутрисосудистое свертывание крови

НК никотиновая кислота

НЦ ниацин

ПДФ продукты деградации фибрина

ПИ период индукции

РФМК растворимые фибринмономерные комплексы

ОКАТ Обшая коап/ляционная активность тромбоцитов

СО скорость окисления

ТБК ТБК-продукты (продукты, реагирующие с

тиобарбитуровой кислотой)

ТкТР Толерантность к тромбину

ФГ Фибриноген

Забара Евгений Васильевич

ВЛИЯНИЕ НИАЦИНА НА НЕПРЕРЫВНОЕ ВНУТРИСОСУДИСТОЕ СВЕРТЫВАНИЕ КРОВИ И ТОЛЕРАНТНОСТЬ К ТРОМБИНУ (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)

03.00.04 - биохимия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Подписано в печать 29.12.08 г. Усл.п.л. 1,0. Бумага писчая. Тираж 100 экз. Заказ 159. Отпечатано в ОАО НИИПлесдрев. Лицензия № 17-0007.

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Забара, Евгений Васильевич

1. ВВЕДЕНИЕ

2. СВЯЗЬ ВИТАМИНА В5 С ГЕМОСТАЗОМ (обзор литературы)

2.1.Общие сведения о витамине В5.

2.2. Влияние ниацина на свертывание крови

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

4. РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

4.1. Уровень маркеров ВТФ, коагулоактивность тромбоцитов, фибринолиз, толерантность к тромбину, состояние ЛПО при содержании крыс на сбалансированном рационе без ниацина и с его избытком

4.2. Уровень маркеров ВТФ, коагулоактивность тромбоцитов, состояние ЛПО и АОП в них, фибринолиз и толерантность к тромбину, при содержании крыс на сбалансированном рационе, включающем атерогенные компоненты без никотиновой кислоты и с её избытком

4.3. Влияние прооксиданта свинца на эффекты, вызываемые у крыс отсутствием НК и её избытком (коагулоактивность ТЦ, плазменный уровень маркеров ВТФ, ф.ХПа-зависимый фибринолиз, ЛПО и АОП тромбоцитов, толерантность к тромбину) gj

4.4. Влияние антиоксиданта димефосфона на эффекты, вызываемые у крыс отсутствием НК и её избытком (коагулоактивность ТЦ, плазменный уровень маркеров ВТФ, ф.ХПа-зависимый фибринолиз, ЛПО и АОП тромбоцитов, толерант- 57 ность к тромбину)

4.5.Динамика изменений фибринолиза и толерантности к тромбину внутривенного введения НК

5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

6. ВЫВОДЫ 87 Литература

Введение Диссертация по биологии, на тему "Влияние ниацина на непрерывное внутрисосудистое свертывание крови (НВСК) и толерантность к тромбину (экспериментальное исследование)"

Витамин В5 (витамин РР, никотинамид, ниацин, никотиновая кислота) и его препараты с момента обнаружения витаминных свойств (1937 г) быстро приобрели широкое распространение в медицинской практике, прежде всего, естественно, как радикальное средство от пеллагры, благодаря чему это заболевание, достаточно распространенное в прошлом, практически исчезло (исключая особые условия питания). Используются различные препараты витамина В5 в лечении заболеваний сердечнососудистой системы (в терапии декомпенсированных пороков сердца, при стенокардии, коронарной недостаточности), в коррекции нарушений, связанных с заболеваниями центральной и периферической нервной системы, пищеварительного тракта, секреторную активность желез которого определяет никотиновая кислота. Участвует никотиновая кислота в поддержании уровня сахара крови, в обмене железа, используется при лечении ате-росклеротических изменений и связанных с ними осложнений [В.В.Ефремов, 1949; Б.А.Лавров , 1951; К.Г.Урбанюк, 1961а; И.Л.Герасимова, 1962; М.Г.Шершевский, 1963; С.М.Бременер, 1966; Г.Х.Довгялло и др., 1967; З.А.Эристави, 1968; Ю.М.Лопухин и др, 1983; Л.А.Цейтлин , 1987; П.Н.Шараев, 2004; В.П.Мищенко и др., 2005; S.M. Y.S.Ali е.а., 2008; S.Rapoport, 1965; S.Fazio, 2008; R.B. Goldberg, TA.Jacobson, 2008].

Оказывает ниацин и влияние на процессы свертывания крови. Как видно будет при знакомстве с обзором данных литературы, касающихся этой проблемы, публикации достаточно многочисленны, однако их содержание противоречиво в оценке важного вопроса - следует ли использовать никотиновую кислоту как средство снижения опасности тромбозов, или же она способствует активации свертывания.

Несомненно, участие ниацина в виде коферментных форм во многих метаболических реакциях окислительно-восстановительного характера, в энергообеспечения.

Выраженные метаболические нарушения при его недостаточности, широкое, и нередко не опирающееся на результаты систематизированных исследований, использование никотиновой кислоты в терапевтических целях, указывают на то, что её введение изменяет состояние гемостаза. Косвенно это подтверждается участием ниацина в обмене липидов, нарушения которого протекают с гемостатическими изменениями [Б.А.Лавров, 1951; А.Ш.Бышевский, 1978; Г.Ф.Еремин, А.Г.Архипов, 1982]. Подтверждается это влиянием ниацина на состояние и функции нервной и сердечно-сосудистой систем [М.Г.Шершевский, 1963; А.Ш.Бышевский, и др., 2006 б], его фармакодинамическим эффектом на состояние сосудистого русла - важного компонента системы гемостаза [Н.Я.Павлова , 1951; К.Г.Урбанюк, 1961 а, б; М.И.Смирнов (редактор), 1974; K.Shibata, K.Mu-rata, 1986; Y.S.Ali e.a., 2008 ].

Имеются данные, свидетельствующие о способности ниацина активировать фибринолиз в цельной плазме и в её эйглобулиновой фракции, свободной от антиплазминов. Противоречивы, однако, сведения об изменениях общей свертываемости крови и отсутствуют данные о влиянии ниацина на интенсивность непрерывного внутрисосудистого свертывания крови (НВСК).

Ограничены изучением «тромбопластической» активности тромбоцитов и изменением их числа в ответ на введение ниацина данные о коагу-ляционной активности этих клеток при избытке или дефиците ниацина [Г.В.Андреенко, Л.А.Мигалина, 1969]. Вместе с тем, тромбоциты в значительной мере определяют интенсивность НВСК [А.С.Шитикова , 2000; M.P.Gawaz, 2001], которое в свою очередь, определяет наклонность к тромбофилии или кровоточивости [Р.Г.Алборов, 2003; А.В.Пустынников и др., 2007а, б; R.G. M.P.Gawaz, I.Ott, 1996; M.P.Gawaz, 2001; Alborov, 2004]. И это при том, что имеется, хотя и единственная, публикация, в которой отмечается снижение интенсивности противосвертывающей реакции, оцениваемой по частоте выживания экспериментальных животных при экзогенной гипетромбинемии. Мало изучены эффекты длительного введения никотиновой кислоты, хотя и показано, что это приводит к ослаблению фибринолитического ответа на повторную инъекцию [[А.Ш.Бы-шевский, 1966]. Главное, неясным остается состояние непрерывно осуществляющегося с малой интенсивностью внутрисосудистого свертывания крови в условиях физиологической нормы. Неизвестно, ослабляет или усиливает дополнительное введение препаратов витамина В5 или его дефицит наклонность к тромбообразованию или, напротив, ограничивает скорость тромбиногенеза, следовательно, и скорость взаимодействия тромбин-фибриноген (ВТФ). Вместе с тем, интенсивность взаимодействия тромбин-фибриноген является индикатором степени напряжения многокомпонентной системы гемостаза [Д.М.Зубаиров, 2000; А.П. Момот, 1990;

A.Ш.Бышевский и др., 1990; А.И.Грицюк и др., 1994; З.С.Баркаган, 1998;;

B.П.Скипетров и др., 1999; В.Ф.Киричук и др., 2002; Haszon е.а., 2003; Spronk, 2003]. Изменения скорости ВТФ указывают на наклонность к тромбозам или к гипокоагуляции [З.С.Баркаган, 1998; Д.М Зубаиров и др., 1989; И.Н.Бокарев, 2002; Haszon е.а., 2003; Levi М., 2004; Spronk , 2003], и это особенно четко показано при изучении интенсивности НВСК в зависимости от времени суток и времени года [Б.И.Кузник, и др., 1976; А.Ш.Бышевский и др.„ В.Н.Кожевников, 1986].

К сожалению, нередко оценку биохимического компонента гемостаза не сопровождает контроль за тромбоцитами [И.Е.Попова, 1999; Ю.И.Ци-рук, 1998; W.J.Chen, S.L. Yeh, 2003]. Вместе с тем, тромбоциты - клетки, весьма зависимые от интенивности липидпероксидации (ЛПО) [В.В.Юдин, 2002; И.А.Карпова, 2002; N.I.GromnatskiT, I.N.Medvedev, 2003;

A.R.Gear, D. Camerini, 2003].

Высокая частота синдрома гипероксидации [Е.Б.Бурлакова, 1997;

B.З.Ланкин, 1997; С.Л.Галян и др., 2002; В.А.Садова и др., 2007 а, б; В.А.Садова, 2008 а, б; I.N.Pasechnik е.а., 2001; J.J.Manson, D.A. Isenberg, 2003] требует выяснить зависит ли интенсивность ВТФ от скорости ЛПО и величины антиокчсидантного потенциала (АОП). Важно и охарактеризовать эту зависимость.

Сказанное выше обусловливает целесообразность изучения в экспериментальных ситуациях интенсивности непрерывно протекающего внут-рисосудистого свертывания крови - процесса, чрезмерное ускорение которого может инициировать диссеминированное внутрисосудистое свертывания крови [И.Н.Бокарев, 2002; Э. А.Шабанов, 2000; А.Ш.Бышевский и др., 2006а, б; И.В.Зверева и др., 2008; R.F.A.Zwaal, 1992; H.Wada е.а., 2003]. Необходимо наряду с оценкой коагулоактивности тромбоцитов и состояния в них процессов липидпероксидации и антиоксидантного потенциала.

Цель работы

Изучить интенсивность непрерывного внутрисосудистого свертывания крови, толерантность организма к тромбину, коагуляционную активность тромбоцитов, ЛПО и АОП в них в зависимости от содержания в рационе ниацина с тем, чтобы оценить его влияние на «готовность» организма к ускоренному тромбинообразованию, и выяснить, не связан ли эффект витамина Р5 с его про- или антиоксидантными свойствами.

Задачи:

1. Изучить уровень маркеров ВТФ, коагулоактивность тромбоцитов, толерантность к тромбину, состояние ЛПО и АОП после 1, 2, 5 и 15 дней содержания крыс на сбалансированном рационе без витамина Р5;

2. То же изучить при введении с рационом витамина Р5 в количествах, превышающих суточную потребность в 2, 4, 8 и 16 раз;

3. Повторить действия пункта 1 и 2, используя атерогенный рацион питания, отбирая пробы крови через 15, 30, 45 и 60 дней от начала опыта;

4. Определять уровень ВТФ, коагулоактивность тромбоцитов, толерантность к тромбину, состояние ЛПО и АОП при содержании крыс на сбалансированном рационе без витамина Р5 и с его увеличенной дозой, добавляя в рацион прооксидант или антиоксидант. Дозу витамина Р5 и сроки отбора проб определить по результатам, полученным в опытах пунктов 1 и 2.

5. Изучить динамику изменения общей свертываемости крови, фибрино-лиза и толерантности к тромбину после внутривенных введений разных доз витамина Р5.

Дизайн экспериментов

Научная новизна

Впервые установлено, что у крыс, получающих рацион питания, сбалансированный по макро- и микронутриентам, отсутствие в его составе витамина В5 сопровождается к концу второй недели снижением общей коагуляционной активности, ослаблением интенсивности высвобождения факторов Р3 и Р4, замедлением взаимодействия тромбин-фибриноген в кровотоке, замедлением лизиса фибрина в эйглобулиновой фракции плазмы крови и уменьшением толерантности к тромбину.

Показано, что включение в состав такого рациона никотиновой кислоты в двукратном в сравнении с суточной потребностью количестве предупреждает все перечисленные изменения, а никотиновая кислота в количествах, превышающих суточную потребность в 4, 8 или 16 раз повышает коагуляционную активность тромбоцитов, содержание в плазме маркеров взаимодействия тромбин-фибриноген, дозазависимо активирует фибринолиз и повышает толерантность к тромбину также пропорционально дозе.

Впервые установлено, что эффекты В5-авитаминного питания, включающего атерогенные компоненты, на все перечисленные выше изменения гемостаза остаются такими же.

Впервые выявлено отсутствие связи между сдвигами интенсивности липидпероксидации и антиоксидантного потенциала с одной стороны и гемостатическими сдвигами с другой при содержании животных на рационе без витамина В5 и рационе с его избытком, а также то, что включение в рацион прооксиданта или антиоксиданта не изменяет эффектов никотиновой кислоты на гемостаз.

Впервые изучена дозазависимость эффектов никотиновой кислоты на фибринолиз и толерантность к тромбину и установлена тесная положительная связь между их изменениями при оральном и внутривенном путях введения.

Практическая ценность работы

1. Подтверждено в разнообразных экспериментальных ситуациях недавно сформулированное представление о тесной положительной связи между плазменным уровнем маркеров взаимодействия тромбин-фибриноген и толерантностью к тромбину, что подтверждает возможность использовать в клинике доступные методы определения маркеров взаимодействия тромбин-фибриноген у больных с нарушениями гемостаза для выявления наклонности к тромбозу или тромбофилии.

2. Показано, что внутривенное введение никотиновой кислоты сопровождается кратковременной гиперкоагуляцией, вскоре сменяющейся гипокоагулемией, и это сопровождается активацией фибринолиза, интенсивность которого пропорциональна толерантности к тромбину. Видимо можно использовать никотиновую кислоту как неспецифический антикоагулянт или фибринолитик, вводя её одновременно или вскоре после гепарина.

4. Данные о зависимости интенсивности фибринолиза и толерантности к тромбину от дефицита или избытка витамина В5 обращают внимание практикующих врачей на необходимость учитывать обеспеченность организма пациента витамином В5 при заболеваниях, протекающих с наклонностью к тромбогеморрагиям.

2. Полученные нами данные использованы при подготовке кафедрами биологической химии и гигиены с основами экологии ТГМА книги «Антиок-сиданты в коррекции гемокоагуляционных сдвигов» (М.: Медицинская книга. - 2004. - 79 е.).

Положения, выносимые на защиту

1. Отсутствие в рационе витамина В5 ведет к снижению коагулоак-тивности тромбоцитов и замедлению процесса взаимодействия между тромбином и фибриногеном в кровотоке, при одновременном снижении толерантности к тромбину и замедлении фибринолиза.

2.Избыток в питании витамина В5, адекватный лечебным дозам, используемым в лечебной практике, приводит при обычном и атерогенном питании к росту коагулоактивности тромбоцитов, ускорению взаимодействия тромбин-фибриноген, сопровождающимися, однако, активацией фибринолиза и увеличением толерантности к тромбину.

3. Эффекты никотиновой кислоты на гемостаз не сопряжены с его способностью изменять липидпероксидацию и антиоксидантный потенциал тромбоцитов - они реализуются через свойство НК активировать фибринолиз, который находится в тесной положительной связи с толерантностью к тромбину.

Апробация и публикация

Результаты работы доложены на научной конференции регионального отделения РАЕ (Тюмень, 2007), на заседании Тюменского Областного отделения ВБО (2008), на электронных конференциях РАЕ (20072008), на III научной международной конференции в Варадеро (Куба, 2008, март), III научной международной конференции (Москва, 2008, май), на совместном заседании кафедр биохимии и гигиены с основами экологии ТГМА (2008) и опубликованы в медико-биологических журналах (4 статьи) и в материалах международных научных конференций (4 публикации).

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Забара, Евгений Васильевич

6. выводы

1. При отсутствии витамина В5 в рационе крыс, сбалансированном по макро- и микронутриентам, снижается коагулоактивность тромбоцитов (их общая коагуляционная активность и плазменный уровень фф. Р3, Р4,), замедляются взаимодействие тромбин-фибриноген (падает содержание ПДФ, РКМФ, D-димеров) и фибринолиз, уменьшается толерантность к тромбину на фоне ускорения липидпероксидации и снижения антиоксидантного потенциала.

2. Отсутствие витамина В5 в атерогенном рационе вызывает такие же по направленности и степепи сдвиги, как и при питании рационом без атероген-ных компонентов.

3. Наличие в рациоие никотиновой кислоты в количестве, превышающем суточную потребность крыс в 2 раза, предупреждает изменения гемостаза и липидпероксидации, возникающие при В5-авитаминном питании и нормализует толерантность к тромбину.

4. Избыток в рационе никотиновой кислоты, превышающий суточную потребность в 4, 8 и 16 раз, повышает коагулоактивность тромбоцитов, ускоряет ВТФ и фибринолиз, повышает толерантность к тромбину, замедляет ли-пидпероксидацию и увеличивает антиоксидантный потенциал.

5. Присутствие прооксиданта в В5-авитаминном рационе повышает коагулоактивность тромбоцитов, ускоряет ВТФ, липидпероксидацию и снижает антиоксидантный потенциал, не ограничивая снижения фибринолиза и толерантности к тромбину, вызываемого отсутствием ниацина.

6. Присутствие антиоксиданта в В5-авитаминном рационе оказывает про-тивоокислительное действие (замедление ЛПО и рост АОП), но не влияет на степень изменения коагулоактивности тромбоцитов, скорости ВТФ, фибринолиза и толерантности к тромбину.

7. Внутривенное введение нейтрализованной никотиновой кислоты тотчас после инъекции вызывает пропорциональную дозе кратковременную гиперкоагуляцию, активацию фибринолиза и рост толерантности к тромбину, сменяющиеся через 1 ч слабо выраженными противоположно направленными сдвигами.

8. Во всех испытанных экспериментальных ситуациях выявляется прямая зависимость между коагулоактивностью тромбоцитов и интенсивностью ВТФ, но отсутствует зависимость между этими величинами и скоростью ли-пидпероксидации.

9. Тесная прямая зависимость существует между скоростью фибринолиза в эйглобулиновой фракции плазмы крови и толерантностью животных к тромбину - видимо, активация фибринолиза и является причиной роста толерантности к тромбину.

В отличие от ряда витаминов с заметно выраженными антиоксидантны-ми свойствами, никотиновая кислота реализует влияние на толерантность к тромбину не за счет ограничения интенсивности липидпероксидации и связанной с этим способности замедлять непрерывное внутрисосудистое свертывание крови, а за счет активации фибринолиза, ускоряющегося в ответ на вызываемую никотиновой кислотой гиперкоагуляцию, котрая проявляется ростом общей свертываемости крови и ускорением взаимодействия тромбин-фибриноген (при высоких дозах НК).

Представляет интерес изучение эффектов одновременного введения НК с витаминами, обладающими выраженной антиоксидантной активностью, так как в этом случае можно ожидать сильное противосвертывающее действие за счет ограничения скорости ВТФ и за счет активации фибринолиза (НК).

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Забара, Евгений Васильевич, Тюмень

1. Аветиеьян Г.В. О влиянии никотиновой кислоты на свертываемость крови в эксперименте / Г.В.Аветиеьян, В.А.Ацеховская, Л.И.Шурай // Здравоохр. Казахстана. - 1963. - 7. - С. 23-26

2. Абрашитова Г.А. Влияние делипина и никотиновой кислоты на состояние свертывающей и антисвертывающей систем крови при силикозе / Г.А.Абрашитова // Здравоохранение Казахстана. 1966. - 7. - С.23-27

3. Алборов Р.Г. Зависимость толерантности к тромбину от взаимодействия тромбин-фибриноген / Р.Г.Алборов //Аллергология и иммунология. -2004. т. 5.-3.-С. 500-501

4. Алборов Р.Г. Роль клеток крови в связи между толерантностью к тромбину, содержанием в кровотоке продуктов взаимодействия тромбин-фибриноген и липидпероксидацией: Автореф. диссертации, д.м.н. Тюмень. 2006. 42 с.

5. Андреенко Г.В. Механизм действия никотиновой кислоты на фибрино-литическую активность крови /Г.В.Андреенко, Л.А.Мигалина // Система свертывания крови. Киев: Здоровья. - 1969. - С.9-10

6. Андреенко Г.В. Фибринолиз (биохимия, физиология, патология) / Г.В.Ан-дреенко //М.: МГУ. 1979. - 351 с.

7. Балуда В.П. Суточный ритм колебаний показателей свертывающей системы крови у здоровых лиц / В.П.Балуда, В.А.Исабаева, И.А.Пономарева, А.С.Адамчик // Фрунзе: Илим. 1978. - 197 с.

8. Балуда В.П. Физиология системы гемостаза / В.П.Балуда, М.В.Балуда, И.И.Деянов, И.К.Тлепшуков М. 1995. - 243 с.

9. Багумян Э.В. Влияние аскорбиновой кислоты на липидпероксидацию /Э.В.Багумян, А.Ю.Рудзевич, А.В.Шидин и др. //В кн. «Зависимость гемостаза от С-витаминной обеспеченности организма. М.: Медицинская книга. 2007. - 40-61с.

10. Базазьян Г.Г. Диетический фактор, атеросклероз и система свертывания крови / Г.Г.Базазьян // М.:Медицина. 1982. - 270 с.

11. Баркаган З.С., Основные методы лабораторной диагностики нарушений гемостаза / З.С.Баркаган, А.П.Момот //Барнаул: Алтайский Государственный медицинский университет. 1998. - 127 с.

12. Баркаган З.С. Введение в клиническую гемостазиологию / З.С. Баркаган // М. :Ньюдиамед-АО. 1998. - 45 с.

13. Баркаган З.С. Гипергомоцистеинемия как самостоятельный фактор риска поражения и тромбирования кровеносных сосудов / З.С.Баркаган, Г.И.Костюченко, Е.Ф.Котовщикова // Патология кровообращения и кардиохирургия. 2002. - 1. - С.65-71

14. Бокарев И.Н. Атеротромбоз проблема современности // «Тромбозы, геморрагии, ДВС-синдром. Проблемы лечения / И.Н.Бокарев // М. — 2000. - С. 47-52

15. Бокарев И.Н. Дифференциальная диагностика и лечение внутренних болезней. Кровоточивость, или геморрагический синдром. Дифференциальная диагностика / И.Н.Бокарев // М. 2002 - 75 с.

16. Бременер С.М. Витамины и их клиническое применение /С.М.Бременер //М.: Медицина. 1966. - 419 с.

17. Бурлакова Е.Б. Биоантиоксиданты: новые идеи и повторение пройденного / Е.Б. Бурлакова // Междун.симп. «Биоантиоксидант» Тюмень. -1997.-С.З-4

18. Бышевский А.Ш. Состояние противосвертывающей системы крови белых крыс при введении витамина А и никотиновой кислоты на фоне обычного питания и в условиях экспериментальной гиперхолестерине-мии /А.Ш.Бышевский // Матер. 15 научн. сессии института питания

19. АМН СССР. М.: - 1964. - 1. - С.13

20. Бышевский А.Ш. Фибринолиз у белых крыс под влиянием никотиновой кислоты / А.Ш.Бышевский // Врач. дело. 1963 б. - 9. - С. 13-16

21. Бышевский А.Ш. Влияние витамина А, никотиновой кислоты, витаминов В12 и Е на толерантность крыс к тромбину / А.Ш.Бышевский // Тез докл. 1 конф. Украинского фармакол. Общества. Тернополь. -1966.-С. 27

22. Бышевский А.Ш. Скорость лизиса эйглобулина крови белых крыс в зависимости от пола, возраста и времени года /А.Ш.Бышевский // Матер. 2-й научно-практич. конф. ЗФИ. Запорожье. - 1963а. - С. 23

23. Бышевский А.Ш. Влияние некоторых витаминов на уровень гуморальных агентов и функциональную активность физиологической про-тивосвертывающей системы: Автореф. дисс. д.м.н. Львов. - 1966. - 22 с.

24. Бышевский А.Ш. Механизмы, предупреждающие внутрисосудистое свертывание крови / А.Ш.Бышевский // В кн. Вопросы санологии. -Львов. 1967. - С. 167-173

25. Бышевский А.Ш. Витамины и гемокоагуляция /А.Ш.Бышевский // Свердловск: Средне-Уральское книжное издательство. 1978. - 124 с

26. Бышевский А.Ш. Биохимические компоненты свертывания крови /

27. A.Ш.Бышевский, О.А.Терсенов, С.Л.Галян и др. // Свердловск: Средне-Уральское книжное изд-во. 1990. - 211 с.

28. Бышевский А.Ш. Витамины и здоровье женщины / А.Ш.Бышевский,

29. B.Н.Кожевников III Красноярск: Издательство Красноярского университета. 1991. - 192

30. Бышевский А.Ш. О роли щитовидной железы в регуляции гемоста- за /А.Ш.Бышевский, С.Л.Галян, Г.А.Сулкарнаева, П.Я.Шаповалов // М.: Медицинская книга. 2006 а. - 95 с.

31. Бышевский А.Ш. Витамины, внутрисосудистое свертывание крови и липидпероксидация /А.Ш.Бышевский, С.Л.Галян, П.Я.Шаповалов // М.:1. Медицина. 2006 6.- 105 с.

32. Бышевский А.Ш. Патент № 2061953 на «Способ количественного определения общей коагуляционной активности тромбоцитов» / А.Ш.Бышевский, В.Г.Соловьев, И.В Селиванова // Публикация в Бюлл. № 16. -10. 06. 1996.

33. Бышевский А.Ш.Способ определения толерантности животных к тромбину / А.Ш.Бышевский, Л.В.Михайлова, П.Я.Шаповалов и др. // Патент № 2219546, зарегистрирован в Госреестре изобретений РФ 20.12.2003

34. Бышевский А.Ш. Неперывное внутрисосудистое свертывание крови и липопероксидация / А.Ш.Бышевский, М.К.Умутбаева, Р.Г.Апборов // Гематол. и трансфузиол. 2004. № 5. С. 39-43

35. Вайнтрауб И.Б. Влияние никотиновой кислоты на артериальной давление /И.Б.Вайнтрауб // Клин. мед. 1948. - 26. - 4. - С. 64-72

36. Витамины и минеральные вещества / под ред. М.И.Смирнова // М.: Медицина. 1974. - 496 с.

37. Власов К.Ф. Влияние никотиновой кислоты на кровообращение / К.Ф.Власов // Терап. Архив. 1948а. - 4. -Р.40-51

38. Власов К.Ф. Влияние никотиновой кислоты на кровообращшение /К.Ф.Власов // Клин. мед. 19486. - 26. - 4. - С.40-51

39. Галян С.Л. Постоянное внутрисосудистое свертывание крови и липопероксидация у больных со средней степенью тяжести диффузного токсического зоба / С.Л.Галян, Р.Г.Алборов, И.А.Аптекарь и др. // Научн. вестник ТГМА. 2002. - 1. - С. 84-85

40. Герасимова И.Л. Влияние никотиновой кислоты на свертываемость крови у больных атеросклерозом и у здоровых / И.Л.Герасимова // В кн.

41. Патология кровообращения. Кемерово. - 1962а. - 29. - С. 127-129

42. Герасимова И.Л. Влияние никотиновой кислоты на свертывание крови человека, содержание в ней гепарина и фактора просветления у больных атеросклерозом / И.Л.Герасимова // Кардиология. 1963. 1. - С. 6164

43. Грицюк А.И. Практическая гемостазиология / А.И.Грицюк, Е.Н.Амосова, И.А.Грицюк // Киев: Здоровья. 1994. - 256 с.

44. Гутина М.А. Реакция сосудов уха кролика на никотиновую кислоту при болевом спазме /М.А.Гутина // Фармакол. и токсикол. 1964. - 10. -С.65-69

45. Детинкина Г.Н. Предложения по унификации методов исследования системы гемостаза / Г.Н.Детинкина, И.М.Дынкина, Ж.Н.Торик и др. // Лаб. дело. 1984а. - 4. - С. 225-232.

46. Детинкина Г.Н. Предложения по унификации методов исследования системы гемостаза / Г.Н.Детинкина, И.М.Дынкина, Ж.Н.Торик и др. // Лаб. дело 19846. - 5. - С. 269-276.

47. Довгялло Г.Х. Эффекты никотиновой кислоты на свертываемость при атеросклерозе / Г.Х.Довгялло, И.С.Гулько, А.А.Кокош // Тр. Ill съезда терапевтов БССР. Минск. - 1967. - С. 66

48. Ельдецова С.Н. Гемокоагуляционные сдвиги и активность свободно-радикальных процессов в плазме, эритроцитах при экстремальных воз-дейстиях в эксперименте: Автореф. дисс. . к. биол. н. Челябинск, 1990.-22 с.

49. Еремин Г.Ф. Об изменениях Хагеман-зависимого фибринолиза при некоторых нарушениях агрегатного состояния крови / Г.Ф.Еремин, А.Г.Архипов // В кн. Система регуляции агрегатного состояния крови внорме и патологии. М. - 1982. - С. 129-132

50. Ефремов В.В. Витамины и их значение для человека / В.В.Ефремов // М.: Медгиз. 1949.- 132 с.

51. Зубаиров Д.М. Биохимия свертывания крови. М.: Медицина, 1978.- 176 с.

52. Зубаиров Д.М. Молекулярные основы свертывания крови и тромбооб-разования / Д.М. Зубаиров // Казань:ФЭН АНТ. 2000. - 367 с

53. Зверева И.В.Связь кобаламина с гемостазом / И.В.Зверева, А.Ш.Бы-шевский, М.К.Умутбаева и др. // Медицинская наука и образование Урала. 2008. - 6/50. - С. 9-12.

54. Исабаева В.А., Система свертывания крови в адаптации к природной гипоксии / В.А.Исабаева//Л.: Наука. 1983. - 151 с.

55. Калмыков П.Е. Современные представления о главных составных частях пищи / П.Е.Калмыков, М.Н.Логаткин // Л.: Медицина. 1974. - 239 с.

56. Каракашов А.В. Микрометоды в клинической лаборатории / А.В.Кара-кашов, Е.П.Вичов // София: Медицина и физкультура. 1968. - С.209-210

57. Карпова И.А. Коррекция витаминами-антиоксидантами гемокоагуля-ционных сдвигов при постабортной реабилитации / И.А. Карпова // Матер. Междунар. конф. «Медицина и охрана здоровья». Тюмень. - 2002.-С. 23

58. Киселева Л.Н. Изменения свертывающей и протиивосвертывающей систем крови под влиянием никотиновой кислоты / Л.Н.Киселева, Г.К.Романенко // Тез. докл. к научной сессии по фибринолизу. Л. 1965.- С.14-14

59. Киричук В.Ф. Тромбоциты в реакциях системы гемостаза на КВЧчвоздействия / В.Ф.Киричук, М.Ф.Волин М.Ф., А.П.Креницкий и др. // Саратов, 2002. 189 с.

60. Климова М.С. Влияние никотиновой кислоты на число тромбоцитов /М.С.Климова // Труды Саратовского медицинского института. Саратов. - 1947.-6.-С.37-38

61. Климов А.Н. Advances in Phisiologigal Sciences / А.Н.Климов // Perga-mon Press and Academiai Kiado: Budapest. 1981. - P. 267-277

62. Колотилова А.И. Витамины (химия, биохимия и физиологическая роль) /А.И.Колотилова, Е.П.Глушанков // Л.: Изд-во Ленинградского университета. 1976. - 247с.

63. Кудряшов Б.А. Биологические проблемы регуляции жидкого состояния крови и ее свертывания / Б.А Кудряшов // М. - 1975. - 488 с.

64. Кузник Б.И. Некоторые вопросы регуляции свертывания крови / Б.И.Кузник, Т.В.Савельева, С.В.Куликова и др. // Физиология человека.- 1976. №2.-С. 857-858.

65. Курцинь О.Я. Инструкция по приготовлению основной диеты для крыс / О.Я.Курцинь // Институт питания АМН ССР. М. - 1952. - 5 с.

66. Лавров Б.А. Реактивность организма и витамины /Б.А.Лавров // В кн. Современные вопросы медицинской науки. М. - 1951. - С. 98-106

67. Лавров Б.А. Содержание лимонной кислоты в крови у крыс при длительной даче больших доз витамина Д / Б.А.Лавров, Е.Л.Терентьева // Вопр. питания. 1963. - 3. - С. 68-72.

68. Ланкин В.З. механизмы нарушения ферментативной функции процессов СРО липидов в биомембранах при атерогенезе /В.З. Ланкин // Междун. симп. «Биоантиоксидант» Тюмень. - 1997. - С.51-53

69. Левашин В.В. О действии никотиновой кислоты на сердечнососудистую систему кролика / В.В.Левашин // Фарм. и токсикол. 1954. - 17. -2,- С. 16-19

70. Лопухин Ю.М. Холестериноз /Ю.М.Лопухин, А.И.Арчаков, Ю.А.Владимиров, Э.М.Коган // М.: Медицина. 1983. 352 с.

71. Луцюк Н.Б. Влияние витамина А на щитовидную железу /Н.Б.Луцюк // Матер. 4-й научн. сессии НИИвитаминологии. М. - 1961 а. - С. 42-43

72. Луцюк Н.Б. Влияние рационов с различным содержанием витамина А на уровень йода в щитовидной железе при введении 6-мутилтиоурацила /Н.Б.Луцюк // Вопр. питания. 1961 б. - 5. - С.40-45

73. Максимович Я.Б. О неспецифической активности никотиновой кислоты: Автореф. дисс. . к. м. н. Львов. - 1949. - 22 с.

74. Малкин З.И. О фармамакодинамическом и терапевтическом действии никотиновой кислоты / З.И.Малкин, С.И.Щербатенко, Л.А.Лушникова // Тер. архив. 1948. . - 20. . - 6. - С. 62-74

75. Махмудбекова Э.Ш. Результаты лечения коронарной недостаточности витаминами В6, В12 и никотиновой кислотой / Э.Ш.Махмудбекова // Матер. 2-й научной сессии Азербайджанского института эксперим. и клинич. Медицины. АМН СССР. Баку. 1964. - С. 94-95

76. Мецлер Д. Биохимия / Д.Мецлер // М.: Мир. 1980. - т. И. С 606

77. Мищенко В.П. Перекисное окисление липидов, антиоксиданты и свертываемость крови / В.П.Мищенко // Актуальные проблемы гемостазио-логии. М.: Наука. - 1981. - С. 153-157.

78. Мищенко В.П. Перекисное окисление липидов, антиоксиданты и гемостаз / В.П.Мищенко, И.В.Мищенко, О.И.Цебржинский // Полтава: АС-СМИ. 2005. - 159 с.

79. Мухачева И.А. Изменения гемокоагуляции и содержания протопорфи-рина у животных, получавших витамины при экспериментальной интоксикации / И.А.Мухачева, Е.Л.Рудзевич, А.М.Мкртумян // Обмен веществ в норме и патологии. Тюмень. - 1992. - С.64-64.

80. Нестеров B.C. Лечение никотиновой кислотой коронарной болезни и бронхиальной астмы / В.С.Нестеров // Клин. мед. 1948. - 26. - 4. -С.72-74

81. Ойвин И.А. О роли фибрина в механизме сосудистой проницаемости / И.А.Ойвин, Р.И.Ойвин, В.П.Балуда // Бюлл. Эксперим. биол. И мед. -1962.- 10.-С. 45-47

82. Павлова Н.Я. Влияние никотиновой кислоты смеси её с адреналином на аппарат кровообращения / Н.Я.Павлова // Фармакол. и токсикол. -1951. 5. - С.41-43

83. Попова И.Е. Коагуляционный гемостаз и перекисное окисление липи-дов при диффузном токсическом зобе, влияние комплексного антиокси-данта: автореф. дис. к.м.н. Уфа. - 1999 - 20 с

84. Пустынников А.В. Витамин А: влияние на интенсивность взаимодействия тромбин-фибриноген, толерантность к тромбину и ф.ХП-зависимый фибринолиз / А.В Пустынников // Медицинская наука и образование Урала. 20076. - 4. - С.8.

85. Ральченко И.В. Изменения липидного спектра плазмы у пациентов с ИЗСД и диабетической нефропатией / И.В.Ральченко, Е.В.Платонов, Н.В.Грачева // Матер, конф. биохимиков Поволжья, Урала и Западной

86. Сибири «Актуальные проблемы теоретической и прикладной биохимии» Ижевск. - 2001. - С. 89-90

87. Садова В.А. Адаптационное значение системы ПОЛ-АОС в остром периоде черепно-мозговой травмы и роль межполушарной асимметрии / В.А.Садова // Вестник Южно-Уральского государственного университета. 2008а. - в. 14. - 4 (104). - С.66-67

88. Садова В.А.Нарушение процессов липидной ппероксидации как аспект нейрохимических особенностей межполушарной ассиметрии в остром периоде ЧМТ / В.А.Садова, Д.Б.Сумная, Г.Н.Бельская и др. // Невро-логиический вестник. 2007 б. - 39. - 1. - С.224-226

89. Цирук Ю.И. Коррекция витаминами-антиоксидантами гемокоагуляци-онных нарушений у беременных с гестозом: Автореф. дис. . к. м. н. -Омск. 1998.- 20 с.

90. Шабанов Э. А. Влияние этинилэстрадиола и левоноргестрела на интенсивность внутрисосудистого свертывания крови и коагуляционную активность тромбоцитов: Автореф. дисс. . к.м.н. Пермь, 2000. 21 с.

91. Садова В.А.Состояние процессов липидной пероксидации и цитокино-вый ответ в остром периоде черепно-мозговой травмы при право- и ле-вополушарных повреждениях головного мозга.- Авторе, дисс. . к.м.н. -Челябинск. 2008 б. - 23 с.

92. Селиванова И.В. Роль тромбоцитов и эритроцитов в активации пере-кисного окисления липидов тромбином: Автореф. дисс. . к.м.н. Челябинск. 1994. - 24 с.

93. Скипетров В.П. Коагуляционно-литическая система тканей и тромбоге-моррагический синдром в хирургии / В.П.Скипетров, А.П.Власов, С.П.

94. Голышенков // Саранск. 1999. - 229 с.

95. Сойбель Б.И. Влияние никотиновой кислоты на течение гипертонической болезни у больных с нарушениями венечного кровообращения / Б.И.Сойбель//Матер, научн. сессии ВНИИВ. М. - 1967. - С.158-159

96. Сойбель Б.И. Применение никотиновой кислоты при лечении больных коронарным атеросклерозом с нарушением венечного кровообращения / Б.И.Сойбель // Матер. 15 научн. сессии Института питания АМН СССР. -М. 1964,- 1. - С.25

97. Сойбель Б.И.Значение никотиновой кислоты для борьбы с преждевременным старением организма и лечения атеросклероза с нарушениями венечного кровообращения / Б.И.Сойбель // Вопросы геронтологии и гериатрии. Л. -1962. С.215-22

98. ЮО.Соломко Г.И. Состояние обеспеченности организма пожилых людей никотиновой кислотой / Г.И.Соломко // Современные вопросы геронтологии и гериартрии (матер. 1-й Закавказкой наун. Конф.). Тбилиси. -1965. - С.131-133

99. УГурова Р.Д. Клинико-лабораторные данные об алиментарной дистрофии и терапевтическим действии никотиновой кислоты: Автореф. дисс. д.м.н. Ленинград. - 1947. - 311 с.

100. Умутбаева М.К. Перекисное окисление липидов и антиоксидантный потенциал тромбоцитов как факторы, определяющие интенсивность взаимодействия тромбин-фибриноген: Автореф. дисс. . докт. биол. наук. Тюмень. - 2005. - 45 с.

101. ЮЗ.Урбанюк К.Г. Свертываемость крови при атеросклерозе / К.Г.Урбанюк // Клин. мед. 1961а. - 5. - С.44-48

102. Ю4.Урбанюк К.Г. Антисвертывающая система при гипертонической болезни / К.Г.Урбанюк // Клин. мед. 19616. - Клин. мед. - 1961 б. - 10. -С.135-140

103. Урбанюк К.Г. Никотиновая кислота в диагностике предтромботиче-ских состояний /К.Г.Урбанюк // Вопр. мед.химии. 1962. - 1. - С.298

104. Юб.Ушкалова В.Н. Контроль перекисного окисления липидов / В.Н. Уш-калова, Н.В. Иоанидис, Г.Д. Кадочникова и др. Новосибирск: Изд-во Новосиб. ун-та. - 1993. - 182 с.

105. Ушкалова В.Н. Свободнорадикальное окисление липидов в эксперименте и клинике. Изд-во ТГУ. - Тюмень. - 1997. - (ред. В.Н.Ушкалова). - С. 5-21.

106. Хаес С.И. О механизме действия никотиновой кислоты / С.И.Хаес // Вопр. питания. 1956. - 14. - 2. С. 13-16

107. Цейтлин JI.A. Никотинамидные коферменты / Л.А.Цейтлин // Успехи биологической химии. М.: Наука. - 1987. - т. VIII. - С. 249-277

108. Черкес Л.А. Влияние никотиновой кислоты на свертываемость крови / Л.А.Черкес, Г.А.Шегун // Рефераты научно-исследовательских работ за 1946 г. М.: АМН СССР. - 1947. - С. 17-18

109. Шараев П.Н. Витамины и здоровье /П.Н.Шараев // Ижевск: «Экспертиза». 2004. 108 с.

110. Шершевский М.Г. Влияние никотиновой кислоты на фибринолити-ческую активность при атерокслерозе / М.Г.Шершевский // Кардиол. -1963. 1. - С.64-67.

111. Шидин А.В. Влияние цианкобаламина на внутрисосудистое свертывание крови и толерантность к тромбину /А.В.Шидин, Э.В.Багумян // Современные наукоёмкие технологии. 2007. - 1. С. 29

112. Эристави З.А. О тромбообразовании у родильниц с пороками сердца и профилактика тромбозов никотиновой кислотой / З.А.Эристави // Кардиология. 1968. - 3. - С. 54-57

113. Эффендиев Ф.А. Изменения факторов свертывающей системы крови и фибринолитической активности при лейкозах / Ф.А. Эффендиев, М.М.Абдулаев, Е.Б.Бахшиева // Проблемы гемотологии и переливания крови. 1961. - 10. - С. 19-22

114. Юдин В.В. Влияние антеовина на гемостаз у женщин при угнетении ПОЛ / В.В.Юдин // Научн. вестник ТГМА. 2002. - 5. - С. 80-81

115. Юдицкая В.И. Влияние никотиновой кислоты на свертывание крови человека / В.И. Юдицкая // Здравоохранение Белоруссии. 1957. — 3. — С. 48-48

116. Ярошевский А.Я. Свертывающая и антисвертывающая система крови и воздействия на неё при нарушении венечного кровообращения / А.Я.Ярошевский, Е.К.Жаворонкова// Тер. Архив. 1964. - 1. - С. 36-42

117. Alberts В. Molekular Biology of the Cells / B.Alberts, B.Dennis, J.Lewis e.a. //N.-London: Garland Publishing, Inc. 1990. -1. II. - P.431

118. Abe Y. A case of hematomyelia caused by coagulation—fibrinolysis abnormality accompanied with colon cancer and its metastasis /Y.Abe Y, Y.Hazama Y, T. Hanaoka e.a. // Rinsho Shinkeigaku. 2008. - 48(4). -P.263-266.

119. Alborov R.G. Blood cells in realization of communication between lipoper-oxidation and constant intravascular coagulation of the blood / R.G. Alborov

120. International congress on thrombosis, haemostasis, vascular pathology: St.Peterburg. 2004. - P. 5

121. АП Y.S. Targeting cardiovascular risk in patients with diabetes: management of dyslipidemia / Y.S.Ali, M.F.Linton, S.Fazio // Curr. Opin. Endocrinol. Diabetes. Obes. 2008. -15(2). - P.142-146.

122. Allman-Farinelli M.A. Diet and aging: bearing on thrombosis and hemosta-sis / M.A.Allman-Farinelli, B.Dawson // Semin. Thromb. Hemost. 2005. -31(1).-111-117

123. Alvaro L.C., Neurological disorders in the narrative works of Benito Perez Galdos /L.C.Alvaro, A.Martm del Burgo // Neurologia. 2007. - 22(5). -P.292-300

124. Amery A. Enhancing blood fibrinilytic activity by niacin compound. III.Study of the activation mechanism / A.Amery, J.Vermilen, M.Verstraete // Scand. J. Haematol. 1966. - 3. - 1. - P.76-84

125. Bani D Relaxin depresses platelet aggregation: in vitro studies on isolated human and rabbit platelets / D.Bani, M.Bigazzi, E.Masiin9 e.a. // Lab. Invest. 1955.- 73.- 5.-P. 709-716

126. Bermejo L.M.The influence of fruit and vegetable intake on the nutritional status and plasma homocysteine levels of institutionalised elderly people / L.M.Bermejo, A.Aparicio, P. e.a. // Public. Health. Nutr. 2007. - 10(3). -P.266-272.

127. Berns J.S. Niacin and Related Compounds for Treating Hyperphosphatemia in Dialysis Patients /J.S.Berns // Semin. Dial. 2008. - 18 Epub ahead of print.

128. Borowicz K.K. Biological role of carbon monoxide in nervous system function / K.K.Borowicz // Postempy Hig. Med. Dosw. 1996. - 50. - 1. - S. 8194

129. Cannon C.P. Combination therapy in the management of mixed dyslipidae-mia / C.P.Cannon // J. Intern. Med. 2008. - 263(4). - P.353-365.

130. Cannon C.P. Combination therapy in the management of mixed dyslipidaemia / C.P. Cannon // J. Intern. Med. 2008. - 263. - 4. - P.353-365.

131. Chekalina S.I. Use of nicotinic acid and midocalm for correcting blood coagulation in patients with radiation edema of the extremities S.I.Chekalina, L.I.Guseva, M.S.Bardyechev // Med. Radiol. (Mosk). 1985. - 30(8). - P. 2830.

132. Chen W.J. Effects of fish oil in parenteral nutrition / W.J.Chen, S.L. Yeh // Nutrition. 2003. - 19. - P. 275-279

133. Copley A.L. On the antithrombogenic action of low molecular weight heparins and of chondroitins А, В and С / A.L.Copley, , R.G. King , S. Chien // Biorheology, 1983 6. 20. - P. 697-704

134. Creeke P.I.Whole blood NAD and NADP concentrations are not depressed in subjects with clinical pellagra / P.I.Creeke, F.Dibari, E.Cheung e.a. // J. Nutr. 2007. - 137(9). - P. 2013-2017.

135. Dagly S. An introduction to metabolic pathways / S. Dagly, D.E.Nicolson // Oxford and Edinburg: Blackwell Scientific publication. 1970. - 310 p.

136. Darvay A. Isoniazid induced pellagra despite pyridoxine supplementation / A.Darvay, T.Basarab, J.M.McGregor, R.Russell-Jones / Clin. Exp. Dermatol. 1999 24(3). -P.167-169

137. De Moerloose P. Should neurologists measure D-dimer concentrations? / De P.Moerloose, F. Boehlen // Lancet Neurol. 2003. - 2. - P. 77

138. Egashira Y. Dietary protein level and dietary interaction affect quinolinic acid concentration in rats / Y.Egashira, M.Sato, K.Saito, H.Sanada / Int. J. Vitam. Nutr. Res. 2007. - 77(2). - P. 142-148.

139. Egashira Y. Tryptophan-niacin metabolism in rat with puromycin amino-nucleoside-induced nephrosis / Y.Egashira, S.Nagaki, H.Sanada // Int J. Vitam. Nutr. Res. 2006. - 76(1). - P.28-33.

140. Fazio S. Management of mixed dyslipidemia in patients with or at risk for cardiovascular disease: A role for combination fibrate therapy / S.Fazio // Clin. Ther. -2008. 30(2). - P.294-306.

141. Feig J.E. Atheroprotective effects of HDL: beyond reverse cholesterol transport / J.E.Feig, R.Shamir, E.A.Fisher // Curr. Drug. Targets. 2008. -9(3). - P. 196-203.

142. Ferguson E.L. Can optimal combinations of local foods achieve the nutrient density of the F100 catch-up diet for severe malnutrition? / E.L.Ferguson A.Briend, N.Darmon // J. Pediatr. Gastroenterol. Nutr. 2008. - 46(4). - P. 447-452.

143. Fletcher A.P. Abnormal plasminogen-plasmin system activity in pacients with hepatic cirrosis: Its cause and consequences / A.P. Fletcher, O.Bied-erman, D.Moor e.a. // J.Clin. Invest. 1964. - 43. - 4. - P.681-695

144. Fukuwatari T. Effect of nicotinamide administration on the tryptophan-nicotinamide pathway in humans / T.Fukuwatari, K.Shibata //Int J Vitam. Nutr. Res. 2007. - 77(4). - P.255-262

145. Fukuwatari T. Shibata K. Effect of nicotinamide administration on the tryptophan-nicotinamide pathway in humans / T.Fukuwatari, K.Shibata // Int. J. Vitam. Nutr. Res. -2007 77(4). P.255-262.

146. Gawaz M.P. Agglutination of izolated platelet membranes / M.P.Gawaz, I.Ott // Arterioscl. Thromb. Vase. Biol. 1996. - 16. - P. 621-627.

147. Gawaz M.P. Blood Platelets / M.P.Gawaz // Stuttg.; New York: Time.2001.- 190 p.

148. Gear A.R. Platelet chemokines and chemokine receptors: linking hemosta-sis, inflammation, and host defense / A.R.Gear, D. Camerini // Microcirculation. 2003. - 10. - P. 335-350

149. Goldberg R.B. Effects of niacin on glucose control in patients with dyslipi-demia / RB Goldberg, TA.Jacobson // Mayo Clin. Proc. 2008. - 83(4). -P.470-478.

150. Gromnatskii N.I. Non-pharmacological correction of impaired platelet he-mostasis in hypertensive patients with metabolic syndrome / N.I.Grom-natskii, I.N.Medvedev // Klin. Med. (Mosk). 2003. - 81. - P. 31-34

151. Guyton J.R. Niacin in cardiovascular prevention: mechanisms, efficacy, and safety / J.R. Guyton // Curr. Opin. Lipidol. 2007. -18(4). - P.415-420

152. Haszon I. Platelet aggregation, blood viscosity and serum lipids in hypertensive and obese children / I.Haszon, F.Papp, J.Kovacs e.a. // Eur. J. Pediatr. -2003,- 162.-P, 385-390.

153. Hawk P.W. Practical Physiological Chemistry / P.B.Hawk, B.L.Ozer // Pract. Physiol. Chem., N-Y. 1954. - P. 1044

154. Hawk P.W. Practical Physiological Chemistry / P.W.Hawk // Pract. Physiol. Chem. Philadelphia. - 1923. - P.953

155. Hecht H.S. Relation of aggressiveness of lipid-lowering treatment to changes in calcified plaque burden by electron beam tomography / H.S.Hecht, S.M.Harman // Am. J. Cardiol. 2003. - 1. - 92(3). - P.334-336

156. Hetland Q. Characteristics and prognostic impact of plasma fibrin monomer (soluble fibrin) in patients with coronary artery disease /Q.Hetland, A.Knudsen, K.Dickstein, D.W.Nilsen // Blood Coagul. Fibrinolysis. 2002. - 13. - P.301-308

157. Imchof P. Uber die Activirung der Fibrinolyse durch Vereichung von Nicottinsoure / P.Imchof, M.Imchof, H.Lauener // Schweiz. Med. Wochen-schr. 1959.-28. - S.7235-738

158. Jelesoff N.E. Effectiveness and tolerability of adding ezetimibe to niacin-based regimens for treatment of primary hyperlipidemia / N.E.Jelesoff, C.M.Ballantyne, A.M.Xydakis e.a. // Endocr Pract. 2006. - 12(2). - P.159-164

159. Jia H. High doses of nicotinamide prevent oxidative mitochondrial dysfunction in a cellular model and improve motor deficit in a Drosophila model of Parkinson's disease / H.Jia, X.Li H.Gao e.a. // J. Neurosci. Res. 2008. - 1-(Epub ahead of print)

160. Kaczmarski M. The influence of exogenous antioxidants and physical exercise on some parameters associated with production and removal of free radicals / M.Kaczmarski, J.Wojcicki, L.Samochowiec e.a. // Pharmazie 1999. -54(4). - P.303-306.

161. Kerttula T. Theophylline infusion modulates prostaglandin and leukotriene production in man / T.Kerttula, S.Kaukinen, E.Seppala e.a. // Prostaglandins Leukot. Essent. Fatty Acids. 1997. - 57(6). - P.555-560

162. Knoop R.H. Kontrasting effects of unmodifiend and timerelease forms of niacin on lipoproteins in hiperlipidemic subjects: clues to mechanism of action of niacin / R.H.Knoop, I. Ginsberg, I.Alberts e.a. // Metabolism. -11985. -34.- 17.-P. 642-65

163. Kolovou G.D. Effect of baseline levels on response of high-density lipoprotein cholesterol to hypolipidemic treatment /G.D.Kolovou, D.C.Daskalova, I.I.Petropoulos e.a. // Am. J. Cardiol. 2003. - 1. - 92(11). - P.1339-1342

164. Kurata M. Different roles of endothelium-derived substances on inhibiting plapelet aggregation in whole blood / M.Kurata, K.Tanaka, M.Usami // GEN. Pharmacol. 1997. - 28. - 5. - P. 671-673

165. Kuvin J.T. Effects of extended-release niacin on lipoprotein particle size, distribution, and inflammatory markers in patients with coronary artery disease / J.T.Kuvin, D.MDave, K.A. e.a. // Am. J. Cardiol. 2006 - 15. - 98(6). -P.743-745

166. Levi M. New treatment strategies for disseminated intravascular coagulation based on current understanding of the pathophysiology / M.Levi, E. de Jonge, N. van der Poll // Ann. Med. 2004. - 36. -1. - P.41-49

167. M.Ghazi-Khansari Decreasing the oxidant stress from paraquat in isolated perfused rat lung using captopril and niacin / M.Ghazi-Khansari, G.Nasiri, M.Honarjoo // Arch Toxicol. 2005. - 79(6). - P.341-345.

168. Mandic M.L. Intake of vitamins among clinically healthy adults from continental Croatia estimated by 24-h recall / M.L.Mandic, L.Primorac,

169. D.Kenjeric e.a. // Int. J. Food Sci .Nutr. -2007. 5. - P. 1-8

170. Manson J.J. Antiphospholipid syndrome / J.J.Manson, D.A. Isenberg // Int. J. Biochem. Cell. Biol., 2003. 35. - P. 1015-1020.

171. Miller M. Impact of lowering triglycerides on raising HDL-C in hyper-triglyceridemic and non-hypertriglyceridemic subjects /M.Miller, P.Langen-berg, S.Havas // Int. J. Cardiol. 2007. - 10. -119(2). - P. 192-195.

172. Miller M. Relative atherogenicity and predictive value of non-high-density lipoprotein cholesterol for coronary heart disease / M.Miller, H.N.Ginsberg,

173. E.J.Schaefer // Am. J. Cardiol. -2008. 1. - 101(7). - P.1003-1008.181 .Morgan J.M. Effects of extended-release niacin on lipoprotein subclass distribution // J.M.Morgan, D.M.Capuzzi, R.I.Baksh e.a. // Am. J. Cardiol. -2003,- 15.-91(12). -P.1432-1436

174. Nicola P. Modifications de L»Intensive du saignement sous L»influence de substances sur la coagulztion la fibrinilyse et les capillaries / P.Nicola, G.Frandoli // Hemostase 1962. - 2.- 2. - P. 139-147

175. Nicoll A. Atherosclerosis / A.Nicoll, R.Duffield, B.Lervis // Pergamon Press and Academiai Kiado: Budapest. 1981. - 39. - P.229-242

176. Nicola P. Modifications de L'intensite du saignement sous Linfluence de substances actives sur la coagulation la fibrinolyse et les capillaries / P.Nicola, G. Frandoli // Hemostase. 1962.- 2. - 2. - p. 139-147

177. Paolini J.F. Effects of laropiprant on nicotinic acid-induced flushing in patients with dyslipidemia / J.F.Paolini, Y.B.Mitchel, R.Reyes // Am. J. Cardiol. 2008. - 1. - 101(5). - P.625-630.

178. Pasechnik I.N. Role of oxidative stress as a component of critical states in the genesis of hemostatic disorders / I.N. Pasechnik, Iu.M. Azizov, E.V. Nikushkin e.a. // Anesteziol. Reanimatol. 2001. - May-Jun. - P.41-43

179. Perricone N.V. Blood pressure lowering effects of niacin-bound chro-mium(III) (NBC) in sucrose-fed rats: Renin-angiotensin system /N.V.Perricone, D.Bagchi, B.Echard, H.G.Preuss // J. Inorg. Biochem.-2008. 23 Epub ahead of print.

180. Premkumar V.G. Co-enzyme Q10, riboflavin and niacin supplementation on alteration of DNA repair enzyme and DNA methylation in breast cancer patients undergoing tamoxifen therapy // V.G.Premkumar, S. P.Yuvaraj e.a. //

181. Br. J. Nutr. 2008. - 1.- 1-4 Epub ahead of print.

182. Raghavan S.A. Role of ascorbic acid in the modulation of inhibition of platelet aggregation by polymorphonuclear leukocytes / S.A.Raghavan, P.Sharma, M.Dikshit//Thromb Res. -2003. 1. - 110. -2-3. - P. 117-126.

183. Raghavan VA. First-line therapies for lowering triglyceride levels / VA.Raghavan // Am. Fam. Physician. 2008. - 15. - 77(4). - P. 416 418.

184. Ranga G.S. Effect of aspirin on lipoprotein (a) in patients with ischemic stroke / C.S.Ranga, O.P.Kalra e.a. // J. Stroke Cerebrovasc. Dis. 2007. -16(5).-P.220-224

185. Rapoport S.M. Medizinische Biochemie /S.M. Rapoport // Berlin: Volk und Gesundheit. 1965. - 990 s

186. Saareks V. Nicotinic acid and pyridoxine modulate arachidonic acid metabolism in vitro and ex vivo in man / V.Saareks, I.Mucha, E.Sievi, A.Riutta // Pharmacol Toxicol. 1999. - 84(6). - P.274-280.

187. Saareks V.Opposite effects of nicotinic acid and pyridoxine on systemic prostacyclin, thromboxane and leukotriene production in man / V.Saareks, P.Ylitalo, I.Mucha, A.Riutta // Pharmacol. Toxicol. 2002. - 90(6). - P.338-342

188. Sailer S. Uber Thrombolyseversuche an Kaninchen mit einer kombinierten Nicotinsoure-Heparinhandlung / S.Sailer, O.Eber // Klin. Wochenschr. -1960. 38. - S. 548-551.

189. Sawyer W.D. Studies on the trhombolytic activity of human plasma / W.D.Sawyer, A.P.Fletcher N. Alkjaersig, S. Sherry // J.Clin.ilnvestig. -1960. -39. -2. -P.426-434

190. Sen S. Niacin and coagulability of blood / S.Sen. and S.Sen // Ind. J. Med Rev. 1956. -44.-P. 67-69

191. Shara M. Long-term safety evaluation of a novel oxygen-coordinated nia-cin-bound chromium (III) complex / M.Shara, A.E.Kincaid, A.L.Limpach e.a. // J Inorg Biochem. 2007. - 101(7). - P. 1059-1069.

192. Shara M. Long-term safety evaluation of a novel oxygen-coordinated nia-cin-bound chromium (III) complex / M.Shara, A.E.Kincaid, A.L.Limpach e.a. // J. Inorg. Biochem. 2007. - 101(7. - P. 1059-1069.

193. Shepherd J. Dyslipidaemia in diabetic patients: time for a rethink / J.Shepherd // Diabetes. Obes. Metab. 2007. - 9(5). - P.609-616.

194. Shibata K. Blood NAD as an index of niacin nutrition / K.Shibata, K.Murata //Nutr. Intern. 1986. -2.-3. -P. 177-181

195. Simon J.A. Vitamin С and cardiovascular disease: a review / J.A.Simon // J Am Coll. Nutr. 1992.- 11.-2. - P.107-125.

196. Sprecher D. Raising high-density lipoprotein cholesterol with niacin and fi-brates: a comparative review / D.L. Sprecher // Am. J. Cardiol. 2000. - 21. - 86(12A). - 46L-50L

197. Spronk H.M. The blood coagulation system as a molecular machine / H.M.Spronk, J.W.Govers-Riemslag, H. ten Cate // Bioessays. 2003. - 25. -12. -P. 1220-1228

198. Swies J. Release of disaggregatory prostanoids into circulation by nicotinic alcohol, nicotinic acid and nicotinamide / J. Swies, L.Dabrowski // Pol. J. Pharmacol. Pharm. 1984. - 36(6). - P.653-657.

199. Szirmai E. Einzelhalten der fibrinolyse / E.Szirmai // «Nucl. Energy». -1962. Sept. - XIII-XIV

200. Tall A.R.Cholesterol efflux pathways and other potential mechanisms involved in the athero-protective effect of high density lipoproteins / A.R. Tall // J. Intern. Med. 2008. - 263. - 3. - P.256-273.

201. Tang K. Niacin deficiency causes oxidative stress in rat bone marrow cells but not through decreased NADPH or glutathione status / K.Tang, H.Sham, E.Hui, J.B.Kirkland // J. Nutr. Biochem. 2008. - Apr 22 Epub ahead of print.

202. Tavares M.M. Insufficient voluntary intake of nutrients and energy in hospitalized patients / M.M.Tavares, L.Matos, T.F.Amaral // Nutr. Hosp. 2007.- 22(5). -P.584-589.

203. Tavintharan S. Niacin affects cell adhesion molecules and plasminogen activator inhibitor-1 in HepG2 cells / S.Tavintharan, M.Sivakumar, S.C.Lim // Clin. Chim. Acta. 2007. - 376(1-2). - P.41-44.

204. Thankachan P. An analysis of the etiology of anemia and iron deficiency in young women of low socioeconomic status in Bangalore, India / P.Thankachan, S.Muthayya, Walczyk e.a. // Food. Nutr. Bull. 2008. - 28(3).- P.328-336.

205. Thorn S.L. The guinea-pig is a poor animal model for studies of niacin deficiency and presents challenges in any study using purified diets /S.L.Thorn, G.S.Young // Br. J. Nutr.- 2007. 98(1). - P.78-85

206. Tlepshukov I.K. Effect of heparin on the vascular thrombocytic link of the hemostatic system and pathogenetic correction of ensuing disorders / I.K.Tlepshukov // Biull. Eksp. Biol. Med. 1986. - 102(11). - P.544-545

207. Tudorani G. Actinea vitaminei PP asupra coagularii / G.Tudorani, M.Niculescu, Pavelescu e.a. // Studii si sercetarri stiintifica 1960. - 1. -S.77-82

208. Udut V.V.The duration of the action of a single dose of aspirin, kurantil and nicotinic acid during pregnancy complicated by EPH gestosis / V.V.Udut, G.T.Kairov, E.V.Borodulina, L.M.V'iugova // Eksp. Klin. Farmakol. -1999.- 62(3). P.37-39

209. Vanwolleghem T. Ultra-rapid cardiotoxicity of the hepatitis С virus protease inhibitor BILN 2061 in the urokinase-type plasminogen activator mouse / T.Vanwolleghem, P.Meuleman, L.Libbrecht e.a. // Gastroenterology. 2007. -133(4).-P.l 144-1155.

210. Varella Morandi Junqueira-Franco M. Intestinal permeability and oxidative stress in patients with alcoholic pellagra / M.Varella Morandi Junqueira-Franco, L.Ernesto Troncon, P.Garcia Chiarello e.a. // Clin.Nutr. . 2006.25(6). P.977-983.

211. Vats P. Changes in vitamin status of Indian Antarctic expeditioners during a one-month stay in Austral Summer / P.Vats, S.N.Singh, V.K.Singh e.a. // Wilderness. Environ. Med. 2007. - Winter. - 18(4). - P.258-263

212. Wada H. Increastd plasma solubilit fibrinin patients with dissiminated iin-ravascular coagulation / H.Wada, Y.Wakita, T.Nakase e.a. // Am. J. Hema-tol., 1996. 51.-P. 255-260.

213. Wada H. The diagnosis and treatment of the DIC-syndrome / H.Wada, C.Esteban, H.Gabbaza e.a. // Тромбоз, гемостаз и реология. 2003. - 1. С. 16-22.

214. Weiner М. Occurance of fibrinolytic activity following administration of nicotinic acid / M.Weiner, W. Redisch, I.M. Steele // Proc. Soc. Exptl. Biol. A. Med. 1958. - 98. - 4. - P. 788-757

215. Wilson W.L. The activation of plasminogen by nicotinic acid in vivo / W.L.Wilson, G.Fostiropulos // Proceed. 7-th congr. Europ. Soc. Haematol.: Basel-N.-Y. 1960. - P. 916-919

216. Wilson W.L. The activation the plasminogen bey nicotinic acid in vivo / W.L.Wilson, G.Fostiropoulos // Proced 4th Congr. Soc. Eurrop. Hematol./ -Basel-N.Y. 1960. - 5. - P. 916-919

217. Yakugaku Z. Pharmacological bases of coffee nutrients for diabetes / Z.Yakugaku // Prevention. 2007. - 127(11). - P. 1825-1836

218. Yener S.J. Plasminogen activator inhibitor-1 and thrombin activatable fibrinolysis inhibitor levels in non-alcoholic steatohepatitis / S.J.Yener, M.Akarsu, T.Demir e.a. // Endocrinol. Invest. 2007. - 30(10). - P.810 - 819