Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Влияние витамина Е на интенсивность взаимодействия тромбин-фибриноген, толерантность к тромбину и липидпероксидацию

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Влияние витамина Е на интенсивность взаимодействия тромбин-фибриноген, толерантность к тромбину и липидпероксидацию"

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ «ТЮМЕНСКАЯ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ ФЕДЕРАЛЬНОГО АГЕНСТВА ПО ЗДРАВООХРАНЕНИЮ И СОЦИАЛЬНОМУ

РАЗВИТИЮ»

На правах рукописи

ШИДИН Александр Владимирович

ВЛИЯНИЕ ВИТАМИНА Е НА ИНТЕНСИВНОСТЬ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ ТРОМБИН-ФИБРИНОГЕН, ТОЛЕРАНТНОСТЬ К ТРОМБИНУ И ЛИПИДПЕРОКСИДАЦИЮ

(экспериментальное исследование) 03.00 04 - биохимия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Научный руководитель: доктор медицинских наук

проф. П.Я.Шаповалов

04 ,

Тюмень-2007 003 159585

003159585

Работа выполнена в ГОСУДАРСТВЕННОМ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОМ УЧРЕЖДЕНИИ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ «ТЮМЕНСКАЯ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ ФЕДЕРАЛЬНОГО АГЕНСТВА ПО ЗДРАВООХРАНЕНИЮ И СОЦИАЛЬНОМУ РАЗВИТИЮ»

Научный руководитель доктор медицинских наук профессор Шаповалов Петр Яковлевич.

Официальные оппоненты

доктор медицинских наук профессор Соловьев Владимир Георгиевич доктор медицинских наук профессор Шевлюкова Татьяна Петровна

Ведущее учреждение: ГОУ ВПО «Башкортостанский государствен ныи медицинский университет Росздрава»

Защита состоится 27 октября 2007 г в 9 часов на заседании диссертационного Совета ДМ 212.274.07 при Тюменском государственном университете по адресу: г. Тюмень, ул. Пирогова. 3.

С диссертацией можно ознакомиться в читальном зале библиотеки Тюменского государственного университета

Автореферат разослан 007 г

Ученый секретарь

диссертационного совета

доктор биологических наук профессор

Общая характеристика работы

В ранних и сравнительно редких публикациях обычно рассматриваются изменения активности или содержания отдельных компонентов гемостаза при дефиците витаминов, при их введении с лечебной или экспериментальной целью Однако почти не изучались в связи с эффектом витаминов те показатели, которые позволяют оценивать систему гемостаза интегрально

Анализ литературы, касающейся связи витамина Е и гемостаза, свидетельствует, что в этом смысле и витамин Е не составляет исключения Его роль в гемостазе как антиоксиданта стала предметом исследований лишь в последние десятилетия Так, установлено, что обогащение организма витамином Б повышает атромбогенность эндотелия [Antomades Е е а, 2003], что антиоксидантная активность витамин^ Е усиливает эффекты других витаминов, в частности, витамина С, на отдельные про- и антикоагулянты [С В Миневцев, 2005,2006]

В разные годы в эксперименте и в клинике получены разрозненные факты, свидетельствующие в одних случаях о способности витамина Е повышать активность отдельных факторов свертывания крови, в других - действовать противоположным образом [Vogelsang А Е. е а, 1946; Scelton F., 1946, Zierler К L е а 1948, Baer S , Heme W J , 1948, Ochsner А , 1950; Wilson WL, Рапу E M, 1954; Mazzetti G M, 1956/Venditti Pea, 1998]

Изучение связи между уровнем витамина Е и содержанием некоторых про-коагулянтов в крови не выявило какой-либо существенной зависимости между ними [И И Котляров и др , 1961, Paul Е М е а , 1954] Не находили изменений общей свертываемости крови и при введении лечебных доз больным с атеросклерозом [Ю П Никитин, 1962, Paul ЕМ еа, 1954], а также при алиментарной гиперхолестеролемии [А Ш Бышевский, 1978, АШБышевский, В Н Кожевников, 1991] Не отражается нагрузка витамином Е и на числе тромбоцитов [Schwarz К, Wust 1, 1953] Установлено, что витамин Е в дозах, значительно превышающих обычное суточное поступление его с пищевым рационом, у детей 4-18 месяцев жизни активирует фибринолиз [Santangelo G, 1959] Активацию фибринолиза обнаруживали и в экспериментах, наряду с удлиненным временем свертывания цельной крови, времени рекальцификации и повышенной антитромбиновой активностью [Tomoda J, 1964] Эти данные мало информативны и из-за противоречивости и разрозненности не могут быть систематизированы

Невелик и объем данных, характеризующих влияние витамина Е на гемостаз в связи с состоянием перекисного окисления липидов, нет работ, в которых изучалась бы одновременно интенсивность непрерывного внутрисосудистого свертывания крови (НВСК) и толерантность к тромбину (Т к Тр) Даже выявив ан-тиоксидантные свойства какого-либо витамина, его способность ограничивать активацию отдельных прокоагулянтов, или повышать эффективность некоторых физиологических антикоагулянтов, нельзя утверждать, что исследуемый витамин окажется способным предотвращать или ослаблять наклонность к тромбо-филии или к кровоточивости

В то же время совсем недавно в небольшом числе исследований показано, что Т к Тр коррелирует со скоростью НВСК, повышение которой при активации

ЛПО реализуется через рост коагуляционной активности тромбоцитов [МК-

/

Умутбаева, 2003, 2005, РГ Алборов, 2003, Р Г Алборов и др , 2005] Это особенно ярко выявляется в экспериментальных ситуациях, которые сопровождаются оксидативным стрессом или, напротив, замедлением свободнорадикаль-ных процессов на уровне ЛПО

Собственно представление о НВСК, выдвинутое ранее [Д М Зубаиров, 1961, 1976; А.Ш Бышевский и др, 1978, 1990; Zwaal R F А е а, 1977, 1982], и фундаментально обоснованное путем анализа мировой литературы [Д М.Зубаиров, 2000], позволяет утверждать, что от изменения интенсивности взаимодействия тромбин-фибриноген (ВТФ) - процесса, скорость которого в кровотоке определяет интенсивность НВСК - в большой степени зависит наклонность к тромбозам или к гипокоагуляции [ЗСБаркаган, 1988, 1998, ДМ Зубаиров, 2000, И Н Бокарев, 2000 а, б, 2002, Haszon lea, 2003; Spronk Н М е а, 2003, Levi М и др, 2004] Это подтверждено изучением интенсивности НВСК в циркадных, сезонных ритмах и при экстремальных воздействиях различной природы [БИКузник, и др, 1976, ВПБалуда и др, 1978, А Ш Бышевский, В Н Кожевников, 1986]

Упомянутые сведения обосновали необходимость проведения представляемой работы

Цель исследования - изучить в эксперименте на животных влияние витамина Е на интенсивность липидпероксидации, антиоксидантный потенциал тромбоцитов, плазменное содержание маркеров взаимодействия тромбин-фибриноген и толерантность к тромбину с тем, чтобы оценить целесообразность его использования как средства, способного изменять интенсивность непрерывного вну-трисосудистого свертывания крови

Задачи, которые необходимо реализовать для достижения цели:

1 Изучить в опытах на животных влияние витамина Е в дозах, эквивалентных лечебным и кратно их превосходящих, на содержание в тромбоцитах первичных и вторичных липидпероксидов и антиоксидантный потенциал

2 Одновременно изучить плазменное содержание маркеров взаимодействия тромбин-фибриноген

3. Изучить изменения толерантности к тромбину при введении витамина Е в связи с изменениями липидпероксидации и антиоксидантного потенциала

4 Сопоставить степень изменений липидпероксидации и антиоксидантного потенциала со степенью изменений плазменного уровня маркеров ВТФ и толерантности к тромбину при введении витамина Е в возрастающих дозах в физиологических условиях и на фоне гипероксидации, вызываемой введением про-оксиданта

5 Изучить эффекты витамина Е на липидпероксидацию, антиоксидантный потенциал и толерантность к тромбину при его введении одновременно с витамином С в дозе, проявляющей антиоксидантный эффект, или с антиоксидантом димефосфоном (также в дозе, обладающей антиоксидантным эффектом примерно той же степени) Предполагалось, что при выполнении этой задачи могут быть полученные дополнительные данные, которые позволят судить о том, связаны ли эффекты витамина Е на гемостаз с его антиоксидантными свойствами

При ориентировочной оценке данных, полученных в опытах пунктов 1-4, возникла еще одна задача

6 Изучить влияние витамина Е на ф ХИа-зависимый фибринолиз

Научная новизна

1 Впервые установлено, что а-токоферол у здоровых животных, содержавшихся в физиологических условиях, ограничивает накопление липидпероксидов в тромбоцитах и повышает их антиоксидантный потенциал, показано, что это сопровождается снижением плазменного содержания маркеров взаимодействия тромбин-фибриноген (т е замедлением НВСК), а также увеличением толерантности к тромбину

2 Обнаружено, что высокие дозы токоферола устраняют или ограничивают вызываемый прооксидантом рост содержания в тромбоцитах липидпероксидов, снижение их антиоксидантного потенциала, увеличение плазменного уровня маркеров взаимодействия тромбин-фибриноген и снижение толерантности к тромбину

3 Охарактеризована дозазависимость влияния а-токоферола на липидперокси-дацию, интенсивность взаимодействия тромбин-фибриноген и толерантность к тромбину показано, что эта зависимость ограничена наличием предельной дозы токоферола, превышение которой уже не усиливает его влияния на липидперок-сидацжо в тромбоцитах и плазменный уровень маркеров ВТФ

4 Получены доказательства того, что введение токоферола инициирует снижение скорости взаимодействия тромбин-фибриноген (ВТФ) антиоксидантные свойства витамина, и это подтверждено детальной характеристикой динамики изменений липидпероксидации и антиоксидантного потенциала, интенсивности ВТФ и толерантности к тромбину при введении токоферола в физиологических условиях, на фоне гипероксидации или в паре с другими антиоксидантами

5 Установлено, что влияние токоферола в больших дозах на ф ХПа-зависимый фибринолиз (в эйглобулиновой фракции плазмы) не связано с его антиоксидант-ными свойствами

6 Показано, что эффекты комбинации витамина Е с витаминным или невитаминным антиоксидантом на липидпероксидацию, толерантность к тромбину и интенсивность ВТФ не полностью суммируются

Практическая значимость работы состоит 1) в том, что её результаты обращают внимание врача на возможность ограничивать обогащением организма витамином Е при наклонности к тромбообразованию ускоренное непрерывное внутрисосудистое свертывание крови, 2) в том, что полученные нами данные (наряду с известными из литературы) указывают на необходимость контролировать уровень маркеров ВТФ при назначении больших доз витамина Е или при длительной терапии осложнений атеросклероза витамином Е

На защиту вынесены следующие положения.

1 В физиологических условиях а-токоферол дозазависимо уменьшает интенсивность ЛПО, повышает АОП тромбоцитов, чему сопутствует снижение плазменного уровня маркеров взаимодействия тромбин-фибриноген и, как следствие, увеличивает способность организма адекватно реагировать на гипертром-бинемию

2 На фоне гипероксидации, вызванной введением проксиданта, способность токоферола ограничивать ускорение липидпероксидации и снижать антиоксидантный потенциал тромбоцитов выражена сильнее, как и способность ограни-

чивать прирост содержания маркеров ВТФ, усилена также способность токоферола ограничивать снижение толерантности к тромбину, вызываемое прокси-дантом

3 Изменения скорости взаимодействия тромбин-фибриноген при введении токоферола реализуются за счет его антиоксидантных свойств

4 Токоферол в больших дозах активирует ф ХПа-зависимый фибринолиз в отсутствии антиплазминов вне зависимости от его антиоксидантного эффекта, и это может служить причиной роста толерантности к тромбину при длительном введении витамина Е

5 Витамин Е в комбинации с витамином С или невитаминным антиокси-дантом димефосфоном повышает антиоксидантный эффект, снижает интенсивность ВТФ и повышает толерантность к тромбину, что проявляется в виде неполной суммации эффектов токоферола и второго антиоксиданта

Апробация и публикация.

Материалы работы доложены на: 1 Региональной конференции «Теория и методология современного научного исследования Тюменского региона» -Тюмень, 2003, 2 На 3-й Всероссийской научной конференции с международным участием «Клиническая гемостазиология и гемореология в сердечно-сосудистой хирургии» - Москва, 2006, 3 На региональной научно-практической конференции - Сургут, 2006, 4 На заседании Тюменского областного отделения Общества биохимиков (Тюмень, 2007) и регионального отделения Российской Академии Естествознания (Тюмень, 2007)

Результаты исследований опубликованы в материалах упомянутых конференций, в журнале «Современные наукоёмкие технологии» - Москва, 2007, в виде двух глав в монографии «Зависимость гемостаза от С-витаминной обеспеченности организма» Москва Медицинская книга - 2007 (С 7-13 и 40-61), а также в журнале «European J. of Natural History» - 2007 (всего 10 публикаций)

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена на нелинейных белых крысах (616 особей, 175±16 г или 200±17 г), для которых разработаны оптимальные рационы питания, установлена суточная потребность в витаминах изменения гемостаза при разнообразных воздействиях преимущественно изучали на этих животных, у них удобно брать пробы крови из яремной вены непосредственно в шприц со стабилизатором в количестве, достаточном для определения всех намеченных показателей (до 40 мл/кг массы тела), не нарушая при этом требований гемостазиологии [3 С Бар-каган, А.П Момот, 1998]. Учитывая сезонные сдвиги и зависимость гемостаза от метеофакторов [А Ш Бышевский, В Н Кожевников, 1986], в каждую серию опытов включали контрольную группу

Использован рацион института питания АМН СССР, витамины вводили ежедневно в суточной потребности [О Я Курцинь, 1952], внося их в суточную порцию рациона При раздаче пищевой смеси учитывали данные о фактическом ее потреблении - 100 г/кг массы тела [О Я Курцинь, 1952] Преимущества рациона относительно стандартов Дональдсона [Hawk Р W , Ozer В L, 1954] подтверждены многочисленными публикациями институтов питания АМН СССР (Москва) и УССР (Киев), кафедр биохимии Донецкого и Запорожского медицинских институтов, кафедр гигиены питания Киевского и Львовского меди-

цинских институтов (1958-1975 rr )

Пробы крови брали в шприц из обнаженной яремной вены у наркотизированных диэтиловым эфиром крыс (стабилизатор - 3,8% раствор цитрата натрия, 1 9) Рану закрывали кетгутовым швом

В плазме крови определяли содержание ряда маркеров ВТФ, что позволяло судить о его интенсивности: 1.Уровень продуктов деградации фибрина (ЦЦФ), которые являются маркерами ВТФ и компенсаторной активации фибринолиза, связанной с ускоренной фибринацией [Т.А.Рудницкая, 2003, Wada е а, 1996,2003] - модифицированным методом [А Ш Бышевский и др , 1991] 2 Уровень D-димеров (маркеров фибринообразования или компенсаторного фибринолиза [Е Г Соболева и др 2003, de Moerloose е а, 2003]) устанавливали путем латексной агглютинации с моноклональными к D-диме-рам антителами (набор «D-dimer test", Roche), выражая результат в мкг/мл эквивалентов фибриногена 3. Уровень РКМФ, растущий при повышении коагуляционной активности крови [С Т Ветриле и др 2003, Wada е а, 2003], определяли с помощью фенантролинового теста [А П Момот и др , 1999] 4. Уровень ф Р3 в плазме - по разнице показателей АВР плазмы до, и после освобождения ее от тромббцитов - по Rabmer & Groder, 1980] 5. Содержание ф Р4 в плазме - по действию прогретой и обедненной тромбоцитами плазмы (источник термостабильного ф Р4) на тромбин-гепариновое время свертывания субстратной плазмы (источник фибриногена и антитромбина III) [В П Балуда и др , 1980] Фф Р3 и Р4 - косвенные маркеры ВТФ, уровень которых в плазме пропорционален тромбинемии 6. Концентрацию в плазме фибриногена (ее снижение при других признаках ускоренного ВТФ, свидетельствует об активации НВСК) [Wada е а, 2003] определяли спектро-фотометрически [А Ш.Бышевский, В Мохнатов, 1969]. 7. Скорость ХПа-зависимого фибринолиза определяли по Г Ф Еремину и АНАрхипову, 1982, согласно описанию [3 С Баркаган, А П Момот, 1998]

Липидпероксидацию и антиоксидантный потенциал оценивали, определяя 1. Содержание первичных и вторичных липидпероксидов (соответственно ДК и ТБК-продуктов), 2. Период индукции (ПИ), 3. Скорость окисления (СО) [ВНУшкалова, 1987, 1997, СНЕльдецова, 1990] Интенсивность флуоресценции возбуждения устанавливали с помощью флуориметра «Биан 130» Для изменения скорости ЛПО и величины АОП вводили крысам ацетат свинца (проок-сидант) или димефосфон (антиоксидант)

Ацетат свинца вводили с рационом (50 мг на 1 кг массы тела) Эта доза активирует ЛПО и снижает АОП уже через 1 сут, не нарушая порфиринового обмена даже после длительного введения [А А Мкртумян, 1994, М К Умутбаева, 2005] Относительно небольшой эффект свинца обусловлен тем, что всасывается из кишечника лишь около 5% присутствующего в рационе ацетата свинца [Материалы ВОЗ Свинец, 1980] Димефосфон (1,1-диметил-З-оксибутирилфосфо-новая кислота) - антиоксидант, влияющий на эффект физиологических анти-оксидантов организма, не изменяя гемостаза [А М Мкртумян, 1994] В дозе 1г/кг он повышает у животных АОП [СНЕльдецова, 1990, МК.Умутбаева, 2003] Однократное введение этой дозы изменяет агрегацию тромбоцитов в малой степени, что позволяет выявлять эффект других антиоксидантов, в нашем - случае

витамина Е

Тромбоциты выделяли и отмывали согласно описанию [А Б Самаль и др, 1989]

Толерантность к тромбину устанавливали согласно описанию к патенту [А Ш Бышевский и др , 2003] Специфичность результатов при использовании этого способа обусловлена тем, что фибриноген - основной субстрат тромбина в процессах свертывания [Д М Зубаиров, 2000], и тем, что снижение уровня фибриногена, реагирующего на тромбин, при экзогенной гипертромбинемии, зависит от состояния всех систем, которые обеспечивают выживание организма при ускоренном тромбиногенезе [БАКудряшов, 1975, 3 С Баркаган, 1998, ВПБа-луда и др, 1995, Д М Зубаиров, 2000, А Ш Быщевский и др , 2004] Анализ результатов. Все количественные данные обрабатывали методом вариационной статистики для малых рядов наблюдений, вычисляя среднюю арифметическую (М), среднюю ошибку средней арифметической (т) и среднеквад-ратическое отклонение (о) Для оценки достоверности отличий вычисляли доверительный коэффициент Стьюдента (t) и величину вероятности (р) Сопоставляя интенсивные показатели, использовали альтернативное варьирование с определением тех же величин Различия считали достоверными при значениях р < 0 05 Оценивая результаты совместного действия двух факторов, устанавливали, имеет ли место суммация, синергизм или антагонизм известным математическим приемом [М Диксон, Э Уэбб, 1966] Графический анализ проводили в системе Microsoft Graf (приложение MS Word 97) с построением аппроксимационных графиков, корректность которых оценивали по величине коэффициентов аппроксимации (R2)

Схемы опытов приводятся при их описании Структура и объем диссертации Диссертация изложена на 119 страницах, содержит 15 таблиц и 13 рисунков, включает введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, их результаты, обсуждение и заключение, выводы с практическими рекомендациями и список литературы ( 224 публикации -143 отечественных и 81 зарубежная)

Результаты исследований Дозазависимость влияния токоферола на ЛПО. АОП. плазменный уровень маркеров ВТФ и толерантность к тромбину. Сформировали 5 групп крыс-самцов - контрольную и 4 подопытных Контрольная группа добавок к рациону не получала, крысы подопытных групп получали с рационом токоферол в дозах - 1 5, 3 0, 6 0 или 12 мг/кг массы тела Кровь в подопытных группах брали на 10-й, 20-й и 30-й дни, у контрольных крыс - на 15-й день от начала опыта

В табл 1 приведены результаты оценки ЛПО, АОП, ВТФ и толерантности к тромбину (Т к Тр ) в разные сроки Здесь видно, что содержание ДК и ТБК-про-дуктов к 10-му дню опыта снизилось пропорционально увеличению дозы токоферола На 20-й день степень снижения уровня липидпероксидов уже заметнее, хотя зависимость от дозы становится менее выразительной.

К концу наблюдений степень снижения уровня липидпероксидов выражена близкими величинами при всех использованных дозах токоферола (разница, имеющая место, невелика)

На 10-й день ПИ не отличается от контроля при наименьшей из испытанных

доз (р > 0 05), а при больших дозах наблюдается одинаковое удлинение ПИ от дозы 3 0 до дозы 12 0 мг/кг То же - на 20-й и 30-й дни опытов

Таблица 1 ЛПО, АОП в тромбоцитах и плазменное содержание маркеров ВТФ у крыс, получавших токоферол в дозе, эквивалентной лечебной (1 5 мг/кг), и в дозах, превышаю_щих лечебную в 2,4 и 8 раз (1-я строка - 10, 2-я - 20, 3-я - 30 дней)_

Показатели Крысы токоферол не получали (контроль), п-12 Животные (п - 6 на каждом этапе) получали токоферол (мг/кг массы тела) в дозах

1 5 30 60 12 0

ДК, А/мг ЛП 0 051±0 003 0 044±0 002* 0 034±0 002* 0 025±0 002* 0 038±0 003** 0 029±0 001** 0 021±0 001** 0 033+0 004** 0 022±0 002** 0 021±0 001** 0 020+0 003** 0 023±0 002** 0 022±0 003*+

ТБК, ед/мг ЛП 0 76±0 05 0 70+0 04* 0 62±0 04* 0 56±0 04* 0 65±0 06** 0 56±0 05** 0 51±0 04** 0 61±0 04** 0 53±0 05** 0 42±0 06* 0 55±0 05** 0 52±0 03** 0 42±0 04**

ПИ, мин/мл 45 7+1 4 46 8±1 7 54 8±1 2* 55 7±1 4* 47 9±2 1* 57 2±1 3** 59 9±1 9* 54 9±1 5* 56 1 5±1 8** 60 +1 7** 61 0±2 0** 59 9±1 6** 60 1±1 7**

СО, мм3/мл/мин 0 75±0 03 0 71+0 03 0 68+0 02** 0 63±0 03** 0 63±0 03** 0 62+0 03** 0 57±0 03** 0 57+0 03** 0 52±0 02** 0 53±0 03** 0 51+0 04** 0 49+0 03** 0 51±0 04**

Ф Р3,% 89 7±1 4 87 5±1 1 79 1+1 5* 72 2+1 1* 86 4±1 5 76 0±1 1** 67 0+1 1** 81 9±1 7** 73 1±1 4*' 67 2±1 7** 65 9±1 3** 67 2 3+1 4** 65 9+1 7**

Ф Р„ с 3 5±0 02 3 3±0 04 3 0±0 03* 2 6±0 02* 31±0 02* 2 8±0 01** 2 2±0 02** 2 3±0 02** 2 0±0 01** 1 9±0 01** 2 2±0 02** 2 1±0 01** 1 9±0 02**

ФГ г/л 2 2±0 03 2 1±0 08 1 9±0 12 1 9±0 08 2 0±0 07 2 2±0 09 2 1±0 09 2 4±0 09** 2 1±0 07 2 2±0 08 2 4±0 07** 2 5±0 07** 2 3±0 08

ПДФ, мг% 15 5±1 1 14 8±1 1 12 0+1 0* 10 2±1 1* 13 9±1 2 11 0±0 7* 8 9±0 8* 12 2±1 2** 10 7±0 6** 8 7±0 8** 10 2+1 1** 8 8±0 9** 8 6±0 4**

РКМФ, мкг/мл 23 9±0 § 21 1±1 1* 19 0±0 7* 17 3+0 7*" 19 0±0 7** 16 7±0 8** 15 2±0 6** 18 3±1 1** 15 1±0 7** 14 8±0 6** 14 6±0 8** 13 8±1 0** 13 4±0 5**

D-Д, мкг/мл 0 18±0 011 0 14±0 010* 0 11±0 030* 0 09+0 008* 0 12±0 005** 0 12+0 010* 0 10±0 011* 0 10±0 010** 0 11+0 013* 0 09±0 011* 011±0 011** 0 10+0 006** 011+0 005*

Обозначения ДК - диеновые конъюгаты, ЛП - липид, ТБК - продукты, реагирующие с тиобарбитуровой кислотой, ПИ - период индукции, СО - скорость окисления, Ф - фактор, ФГ - фибриноген, ПДФ - продукты деградации фибрина, РКМФ - растворимые комплексы мономерного фибрина, D-Д - D-димеры, знак * - достоверное отличие от контроля, + - от величины, найденной в тот же срок при дозе 1 5 мг/кг

Скорость окисления (СО) на 10-й день при наименьшей из доз также существенно не изменилась (р > 0 05) В диапазоне доз от 3 0 до 12 0 мг/кг степень снижения заметнее с увеличением дозы На 20-й день СО снижена пропорционально при дозах токоферола, равных 1 5, 3 0 и 6 0 мг/кг, увеличение дозы до 12 0 мг/кг не усугубило сдвига К 30-му дню СО снизилась при дозе 1 5 мг/кг, и еще заметнее - при дозе 3 0 мг/кг, дальнейшее увеличение дозы не изменило СО Содержание в плазме фф Р3 и Р4 уменьшилось при дозе в 1 5 мг/кг лишь к 20-му дню опыта и еще заметнее - 30-му дню При дозе 3 0 мг/кг снижение

уровня тромбоцитарных факторов выявилось уже на 10-й день опыта, и было значительнее, чем при дозе 1 5 мг/кг Ещё заметнее степень снижения стала на 20-й и 30-й дни

Концентрация фибриногена в плазме крови изменилась лишь у крыс, получавших 6 0 или 12 0 мг/кг Выявлено это было при дозе 6.0 мг/кг только на 10-й день, а при дозе 12 0 мг/кг - и на 10-й, и на 20-й дни опыта (степень прироста -9 1 % на 10-й день при обеих дозах, и 13 6% - на 20-й день при дозе токоферола 12 0 мг/кг Следовательно, рост фибриногенемии кратковременен (таким же он был и во всех последующих опытах) Содержание ПДФ при дозе 1 5 мг/кг достоверно упало лишь к 10-му дню, что усугубилось к 20-му, и стало заметнее - к 30-му дню При дозе в 3 0 мг/кг степень и сроки появления изменений уровня ПДФ практически такие же, как и при дозе 6 0 мг/кг Не намного заметнее снижение уровня ПДФ и при дозе 12 0 мг/кг

Уровень РКМФ при введении токоферола в дозе 1 5 мг/кг снижен уже на 10-й день, снижение усугубилось к 20-му и особенно - к 30-му дню Более заметен этот эффект при дозе в 3 0 мг/кг Направленность изменений была такой же и при дозах токоферола, равных 6 0 и 12 0 мг/кг, но степень их значительнее

Уровень Б-димеров упал к 10-му дню при введении всех испытываемых доз токоферола Наименьший эффект выявился при дозе 1 5 мг/кг, и возрос, причем, в одинаковой мере, при увеличении дозы в 2, 4 и 8 раз, не превзойдя, однако, эффекта, обусловленного дозой в 3 0 мг/кг к 30-му дню наблюдений

Таким образом, на фоне полноценного питания у животных, не подвергавшихся каким-либо дополнительным воздействиям, введение токоферола снижает интенсивность ЛПО, и повышает АОП в тромбоцитах Сопровождается замедление ЛПО достоверным, но небольшим снижением содержания маркеров ВТФ в плазме Отметим также, что сдвиги показателей ЛПО, АОП и ВТФ при увеличении дозы токоферола, выявляемые на 20-й день введения, при восьмикратном увеличении дозы достигаются уже к 10-му дню и практически не изменяются при увеличении срока наблюдений

Так как при введении токоферола в возрастающих дозах (1 5, 3 0 и 6 0 мг/кг) наблюдается дозазависимый прирост эффекта, в следующей серии опытов мы изучили в те же сроки и по той же схеме) дозазависимость влияния токоферола на толерантность к тромбину (табл 2)

Таблица 2 Толерантность к тромбину у крыс, получавших токоферол в дозе, эквивалентной лечебной, и в дозах, превышающих её в 2 и 4 раза (1-я строка - 10, 2-я - 20, 3-я -___30 дней)_

Показатель Толерантность к тромбину, % Крысы токоферол не получали (контроль), п -12 100±1 8 Животные получали токоферол (мг/кг массы тела) в дозах

1 5 (п - 7 на этапе) 30 (п - 7 на этапе) 60 (п - 7 на этапе)

109±2 0 115±2 1* 119±2 2* 119±2 1* 124±2 0*+" 132±2 2*+" 125±2 1** 128±2 2'* 131±2 А'*

Обозначения знак * - достоверное отличие от контроля, + - от величины, найденной в

тот же срок при дозе 1 5 мг/кг, " - от значения, найденного на 10-й день

Здесь видно, что токоферол в дозе 1 5 мг/кг не изменил толерантности к тромбину к 10-му дню, а к 20-му дню - повысил толерантность на 15%, к 30-му -

10

на 19% (изменения достоверны относительно контрольной величины) Изменения на 30-й день не отличаются от найденных на 20-й день (р > 0 05)

Дозазависимость влияния токоферола, вводимого одновременно с проокси-дантом (свинцом) на ЛПО и АОП в тромбоцитах, на плазменное содержание маркеров ВТФ и толерантность к тромбину. Антиоксиданты заметнее влияют на гемостаз на фоне ускоренной ЛПО [С ЛГалян, 1993, В Г.Соловьев, 1997, П Я Шаповалов, 2001] Поэтому, обнаружив сравнительно малую эффективность токоферола как антиоксиданта, мы провели опыты, отличающиеся от описанных выше тем, что наряду с токоферолом вводили уксуснокислый свинец Пробы брали на 10-й, 20-й и 30-й дни введения токоферола (1 5,3 0, 6.0 или 12 0 мг/кг) Одновременно с токоферолом ежеднено вводили с рационом уксуснокислый свинец (50 мг/кг массы тела) Сформировали две контрольные группы контроль I (крысы Дополнений к рациону не получали), и контроль II (крысы получали свинец) в! тромбоцитах оценивали ЛПО и АОП, в плазме - содержание маркеров ВТФ

Таблица 3 ЛПО и АОП в тромбоцитах, плазменное содержание маркеров ВТФ при

введении токоферола одновременно с ацетатом свинца (на 10-й, 20-й и 30-й дни опыта)

Показатели Контроль 1 (п-9) Контроль I! (крысы получалу ацетат свинца ! 50 мг/кг) Животные получали ацетат свинца (£ тела)в я 0 мг/кг) и токоферол (мг/кг массы озах

1 5 (п -7 на этапе) 30 (п -7 на этапе) 60 (п -7 на этапе) 120 <п -7 на этапе)

дк, А/мг ЛП 0 050±0 002 0 066± 0 003* 0 075± 0 004* 0 082± 0 003* 0 059±003*+ 0 055± 0 003+ 0 054±0 002+ 0 051±0 003+ 0 047±0 002+ 0 049±0 003+ 0 044±0 011+ 0 045±0 010*+ 0 041±0 009*+ 0 041±0 004*+ 0 043±0 003*+ 0 040±0 003*+

ТБК ед/мг ЛП 0 72±0 011 0 80±0 011* 0 87±0 005*+ 0 91±0 003*+ 0 79±0 05*+ 0 72±0 06+ 0 78±0 06+ 0 76±0 012+ 0 70±0 020+ 0 72±0 012+ 0 63±0 012*+ 0 65±007+ 0 62±0 012*+ 0 59±0 012*+ 0 61±0 012*+ 0 58±0 012*+

ПИ мин/мл 49 7±2 3 40 1±1 6* 34 2+1 4* 30 0±1 3* 43 4±1 1*+ 47 9±0 04+ 48 9±0 05+ 48 9±2 1 + 52±0 011 + 50 3±0 02+ 49 4±1 1 + 51 2±0 011 + 52 3±0 022+ 50 6±2 1*+ 51 2±0 011 + 52 3±0 022+

со, мм /мл/мин 0 71±0 04 0 90±0 06* 1 04±1 4* 1 12±1 3* 0 86±0 01*+ 0 84±1 4*+ 0 74±1 3* 0 74±0 01 + 0 70±1 4+ 0 74±1 3+ 0 72±0 03*+ 0 70±1 4+ 066±1 3*+ 0 65±0 05*+ 062±1 1*+ 0 60±1 3'+

Ф Рз,% 80 4+1 2 99 6± 1 1* 106±1 5* 116±1 9* 91 4+1 3*+ 93 4±1 1*+ 90 4±1 4*+ 85 6±1 2*+ 85 9±1 0*+ 81 4±1 3+ 81 9±1 3+ 83 9±1 7+ 80 3±1 8+ 80 1±1 2+ 82 2±1 3+ 83 0+1 1+

Ф Р4 с 3 1±0 01 4 8±0 03* 4 9+0 04* 5 1±0 04* 3 5±0 02*+ 3 7±0 03*+ 3 3±0 03+ 3 3±0 01+ 3 0±0 009+ 31+0 01+ 3 1±0 02+ 3 3±0 02+ 2 9±0 01+ 3 3 ±0 03+ 3 2±0 02+ 2 9±0 04+

ФГ, г/л 2 2±0 02 1 8±0 05* 1 7+0 03* 1 5+0 02* 2 1±0 02+ 2 3±0 02+ 2 0+0 02+ 2 2±0 05+ 2 2±0 03+ 2 3+0 02+ 2 2±0 06+ 2 2±0 07+ 2 3±0 07+ 2 2±0 08+ 2 3±0 04+ 20+0 06+

ПДФ, мг% 15 3+0 7 23 2±0 6* 24 9+0 6* 27 9±0 6* 18 4±1 1** 16 9±0 6* 16 8±0 4+ 17 2 ±1 1*+ 16 1±1 0+ 16 7±1 1+ 15 9±1 1+ 16 0±1 2+ 15 7 0±1 3+ 14 9±1 0+ 13 9±1 1 + 14 8±1 1 +

РКМФ, мкг/мл 24 5±1 1 33 6+1 2* 35 8±1 0* 39 9±1 2* 27 6±1 2*+ 26 3±1 5+ 24 1+1 0+ 24 9±1 3+ 25 7±1 2+ 24 9±1 0+ 24 9±1 1+ 25 0+1 2+ 23 9±1 2+ 23 9±1 0+ 24 3±1 0+ 25 2±1 0+

Р-Д мкг/мл 0 18±0 004 0 32±0 012* 0 34±0 010* 036±0 011* 0 26±0 012*+ 0 23±0 010*+ 0 21+0 014+ 0 22±0 008*+ 0 21±0 013+ 019±0 011 + 0 19±0 010+ 0 20±0 012+ 0 18±0 013+ 019±0 012+ 0 18±0 013+ 0 20±0 014+

Обозначения как к табл 1, знак * - достоверное отличие от контроля I, + - от контроля II

Из данных табл 3 видно, что свинец с ростом продолжительности введения

ускорял ЛПО и снижал АОП в тромбоцитах У животных, которые одновременно со свинцом получали токоферол (1 5 мг/кг), к 10-му дню содержание ДК и ТБК-продуктов превышало их уровень в контроле I, и в контроле II К 20-му дню содержание ДК и ТБК сравнялось со значениями в контроле I, но оставалось выше, чем в контроле II

Длительность ПИ при этой дозе токоферола была к 10-му дню опыта меньше, чем в контроле I, но больше, чем в контроле II На 20-й и 30-й дни длительность ПИ сравнялась со значением в контроле I, т е ПИ стал продолжительнее, чем в контроле II

Скорость окисления (СО) при дозе 1 5 мг/кг к 10-му и 20-му дням ниже, чем в контроле II, но выше, чем в контроле I, а к 30-му дню значение СО сравнялось со значением в контроле I, став заметно ниже, чем в контроле II

При увеличении дозы токоферола до 3 0 мг/кг уже на 10-й день опыта содержание ДК, ТБК и величина ПИ выровнялись со значениями в контроле I, и уменьшились относительно контроля II

При дозе токоферола в 6 0 мг/кг к 10-му дню все показатели сравнялись с величинами в контроле I, а к 20-му уже отличались от них уровень ДК, ТБК и СО оказались ниже, а ПИ удлинился относительно контроля I Не изменилась направленность сдвигов у крыс подопытной группы, получавшей токоферол в дозе 12 0 мг/кг, однако степень сдвигов при этой дозе была значительнее Содержание маркеров ВТФ при введении свинца нарастало с такой же динамикой, как и признаки ускорения ЛПО и снижения АОП Концентрация фибриногена сниженная на 10-й и 20-й дни опыта, восстанавливалась к концу наблюдений

Введение токоферола в дозе 1 5 мг/кг (одновременно со свинцом) ограничило все эти изменения уже к 10-му дню опыта, но не выровняло уровня маркеров ВТФ с исходным, хотя на 20-й и 30-й дни они (показатели) уже меньше отличались от исходных, чем на 10-й день (фф Р3 и Р4), или вообще не отличались от них (ПДФ, РКМФ и О-димеры)

Таким образом, ускорению ЛПО и снижению АОП в тромбоцитах сопутствует ускорение ВТФ Токоферол в наименьшей из испытанных доз эти изменения ограничил, как ограничил и сдвиги ЛПО и АОП, обеспечивая восстановление контрольных величин к концу наблюдений при продолжавшемся введении свинца. Токоферол в дозе 3 0 мг/кг уменьшил сдвиги уровня маркеров более заметно - уже на 10-й и 20-й дни уровень всех маркеров ВТФ был близок к исходному, а на 30-й день не отличался от него При введении токоферола в дозах 6 0 и 12 0 мг/кг уже на 10-й день все величины не отличались от найденных в контроле I - т е изменений фиксировано не было.

В целом, явления, связанные с активацией ЛПО и снижением АОП, вызываемые ацетатом свинца, устраняются токоферолом дозазависимо

Из данных табл 4 видно, что толерантность к тромбину уменьшалась по мере увеличение длительности введения свинца

Введение токоферола ограничивало спад толерантности к тромбину Так при дозе, равной 1 5 мг/кг, к 10-му дню снижение толерантности составило 50 2%, на 20-й и 30-й дни - 52 9 и на 58 0% (несущественное усугубление эффекта) При увеличении дозы токоферола до 3 0 мг/кг степень снижения толерантности уменьшилась заметнее - 10-й день на 46 8, 20-й - 32 2%, на 30-й только на

20 2% С увеличением дозы токоферола до 6 0 мг/кг ограничение сдвигов толерантности оказалось еще существеннее

При введении токоферола в дозе 12 0 мг/кг одновременно с введением свинца Т к Тр достоверно не изменялась Таким образом, прооксидант, активируя ЛПО и снижая АОП, повышает плазменное содержание маркеров ВТФ, т е ускоряет НВСК

Таблица 4 Толерантность к тромбину при введении токоферола одновременно с аце-

татом свинца на 10-й, 20-й и 30-й дни опыта

Показатель Контроль 1, (л-12) Контроль t! (крысы получали ацетат свинца, 50 мг/кг) Жив и 1 5 (п - 7 на этапе) отные получали а токоферол (мг/кг 30 (п - 7 на этапе) цетат свинца (50 иассы тела) в до 60 (п - 7 на этапе) мг/кг) ах 120 (п - 7 на этапе)

Толерантность к тромбину, % 100±2 0 33 9±1 0* 29 8±1 2* 23 6+0 9* 49 8±1 2*+ 47 1±1 3*+ 42 0±1 1*+ 63 2±1 5*+ 57 9±1 3*+ 79 8±1 1*+ 77 6±1 0*+ 67 8±1 1*+ 88 4±1 1*+ 96 3±3 6+ 95 2±4 1 + 98 3±3 4+

Обозначения * - достоверное отличие от контроля I, + - от контроля II

Введение токоферола одновременно с прооксидантом дозазависимо и в зависимости от длительности введения ограничивает ускорение ЛПО и угнетение АОП, а также сдвиги уровня маркеров ВТФ Ограничивая скорость НВСК, повышающуюся по мере введения прооксиданта, токоферол ограничивает степень снижения Т к Тр, а при максимальной из испытанных доз предупреждает её снижение

Влияние проксиданта на ЛПО и АОП в тромбоцитах, плазменный уровень маркеров ВТФ и Т к Тр на .Фоне предварительного обогащения организма токоферолом Предположив, что предварительное обогащение организма токоферолом также может изменять ответ на прооксидант, проверили это экспериментально, чтобы выяснить, зависит ли от предшествующего уровня обеспеченности организма витамином Е реакция, вызываемая прооксидантом

Оказалось (табл 5), что введение свинца на фоне рациона, содержащего витамин Е в дозе, эквивалентной лечебной (контроль II), заметно повысило скорость ЛПО и снизило АОП (вырос уровень ДК и ТБК, сократился ПИ и увеличилась СО) На фоне длившегося 10 дней обогащения рациона токоферолом (при всех испытанных дозах) изменений ЛПО и АОП после введения свинца не нашли (содержание ДК, ТБК, значение ПИ и СО были такими же, как и до введения свинца

Выше показано, что одновременное со свинцом введение токоферола только при его высоких дозах обеспечивало к этому сроку (10-й день) такой же результат, как в контроле I В данном эксперименте (табл. 5) на фоне предшествующего обогащения токоферолом эффект свинца не выявился - в группах, получавших токоферол,'в том числе и в наименьшей дозе (15 мг/кг), уровень всех определяемых нами маркеров ВТФ не изменился после введения прооксиданта Это дополнительно свидетельствует о зависимости ВТФ (следовательно, и НВСК) от состояния ЛПО в тромбоцитах

Представленные здесь же (табл 5) данные, которые характеризуют у подопытных животных состояние толерантности к тромбину, свидетельствуют о следующем Значительное снижение толерантности к тромбину, наблюдающееся после введения свинца крысам, не получавшим дополнительно токоферол, воспроизвелось как и в эксперименте, результаты которого приведены выше

(табл 4) Здесь же видно, что свинец на фоне предварительной нагрузки токоферолом вызвал хотя и небольшое, но достоверное снижение толерантности к тромбину только при наименьшей из доз (1 5 мг/кг).

Таблица 5 Состояние ЛПО, АОП в тромбоцитах и плазменное содержание маркеров ВТФ через 1 сут после введения свинца (50 мг/кг) на фоне предварительной нагрузки то-

коферолом, длившейся 10 дней (п - 7)

Показатели Контроль 1 (интактные крысы), л-12 Контроль II (крысам ввели ацетат свинца 50 мг/кг на фоне рациона не дополнявшегося токоферолом), л -12 Крысам ввели ацетат свинца (50 мг/кг) на фоне предварительной нагрузки токоферолом а течение 10 дней в ежедневных дозах (мг/кг массы тела)

1 5 <п- 7) 30 (л- 7) 60 (п- 7) 120 (п- 7)

ДК. А/мгЛП 048±0 001 0 070±0 003* 0 053±002*+ 0 049±0 002+ 0 04710 012+ 0 044±0 005+

ТБК ед/мг ЛП 0 70±0 09 0 81±0 011* 0 74±0 05*+ 0 73±0 013+ 0 68±0 012*+ 0 69±0 013+

ПИ, мин/мл 49 942 1 40 6±1 4* 48 8±1 1 + 48 8±2 1 + 49 7+1 1 + 48 8±2 2*+

30, ммЗ/мл/мин 0 73±0 03 0 93±0 07* 0 76±0 01*+ 0 75±0 01 + 0 71 ±0 03*+ 0 69±0 04+

> Рз,% 82 2±1 1 99 1± 1 2* 82 9±1 3+ 84 0±1 5+ 81 7±1 4+ 80 8±1 3+

> Р4 с 3 0±0 009 4 9±0 02* 3 2±0 008+ 3 2±0 03+ 3 3±0 03+ 3 1 ±0 02+

>Г, г/л 2 2±0 03 1 7±0 02* 2 0±0 04+ 21 ±0 06+ 2 3±0 07+ 2 2±0 07+

1ДФ, мг% 15 0±0 6 23 8±0 5* 15 8±0 7+ 160±1 1 + 16 0±1 3+ 15 7±1 1 +

>КМФ, мкг/мл 25 1±1 0 32 9±1 1* 24 8±1 1 + 24 7±1 2+ 24 3±1 2+ 24 6±1 1 +

>-Д, мкг/мл 0 20±0 004 0 34±0 010* 0 22±0 009+ 0 21±0 011 + 0 17±0 014+ 0 21±0 014+

'кТр, % 100±19 34 7±1 3* 91 7±1 4*+ 96 1±1 5+ 97 9±1 2+ 109±3 5+

Обозначения как к табл 1, знак * - достоверное отличие от контроля I, + - от контроля II

При введении токоферола в дозах 3.0 или 6 0 мг/кг наблюдалась лишь слабо выраженная тенденция к снижению Т к Тр, не подтверждаемая статистически (на 3 9 и 2 1% соответственно, р > 0 05) В случае предварительного введения наибольшей дозы токоферола (12 0 мг/кг) появилась даже слабо выраженная тенденция к повышению (на 9 0%)

Обнаружение тенденции, предположительно указывающей на возможность путем обогащения организма животного токоферолом предупредить снижение Т к Тр при экстремальном воздействии (введении свинца), побудило нас провести эксперименты с большей дозой токоферола Одновременно повторили опыт и с дозой, равной 12 0 мг/кг, увеличив продолжительность введения токоферола Схема опытов контроль I и контроль II такие же, как в предыдущем эксперименте, подопытные крысы получали с рационом токоферол (12 0 или 24 0 мг/кг, 30 дней) На 20-й и 30-й дни вводили свинец и через 1 сут оценивали Т к Тр (в контрольных группах эту пробу выполняли один раз)

Из данных табл 6 следует, что увеличение длительности введения токоферола до 20 дней (в дозе 12 0 мг/кг) сопровождается ростом Т к Тр в сравнении с тем, что наблюдали при введении токоферола в течение 10 дней (сравнить с табл 5) Вместе с тем, увеличение длительности введениея токоферола до 30 дней не повысило Т к Тр Увеличение дозы в 2 раза (до 24 0 мг/кг) к 20-му дню повысило Т к Тр в такой же степени, как и введение его в дозе 12 0 мг/кг Эта же доза токоферола (24 0 мг/кг) в течение 30 дней, напротив, снизила Т к Тр

Таблица 6 Толерантность к тромбину через 1 сут после введения свинца (50 мг/кг) на фоне предварительной нагрузки токоферолом (2 дней - 1-я строка, 30 дней - 2-я строка

Показа-ели Контроль 1 01-12) Контроль II ацетат свинца, (крысам ввели 50 мг/кг свинца на фоне рациона не дополнявшегося токоферолом, п -12 Крысам ввели ацета предвари-тельноС течение 20-30 дней днев 120 (п - 7 на этапе) т свинца (50 мг/кг) на фоне нагрузки токоферолом в (мг/кг массы тела) в еже-ных дозах 24 0 (п - 7 на этапе)

Толерантность к тромбину, % 100+1 8 35 3+1 6* 117±2 4*+ 115±1 2*+ 119±2 5*+ 90 3±1 8*+

Обозначения * - достоверное отличие от контроля I, + - от контроля II

Видимо, высокие дозы токоферола лишь в малой мере изменяют Т к Тр, модифицируемую прооксидантом, в том числе и при продолжительном введении Эти данные подтверждает обратную зависимость между уровнем маркеров ВТФ (их содержание не изменялось при введении прооксиданта на фоне токоферола), но ставит вопрос о том, не связано ли повышение Т к Тр со способностью токоферола активировать фибринолиз

Влияние токоферола на ф ХПа-зависимый Фибринолиз В этих опытах изучали влияние на фибринолиз в эйглобулиновой фракции плазмы токоферола^при всех ранее использованных дозах и нарастающей длительности введения Выполнены две серии экспериментов 1) изучили эффект на фибринолиз токоферола в возрастающих доза:*, 2) затем изучили влияние токоферола на сдвиги фибрино-лиза, вызываемые введением ацетата свинца

Схема 1-й первой группы экспериментов контроль - крысы получали рацион без дополнительного введения токоферола, крысы подопытных групп получали возрастающие дозы токоферола (6 0, 12 0 или 24 0 мг/кг), которые, судя по вышеприведенным данным, умеренно угнетают ЛПО, ВТФ и блокируют эффект прооксиданта (свинца). Пробы брали на 20-й и 30-й дни (через 1 сут после введения свинца), определяя ф ХИа-зависимый фибринолиз и Т к Тр В контроле определения также проводили на 20-й и 30-й дни (в отличие от предшествующих опытов) в связи высокой вариабельностью фибринолиза [Shanmukhappa К е а, 2006, Wahlberg Р. е.а., 2007]

Из данных табл 7 следует, что токоферол в дозе, превышающей суточную потребность в 4 раза (6 0 мг/кг), после 30 дней введения вызывает лишь тенденцию к ускорению фибринолиза (на 111% против контроля)

Принять во внимание эту тенденцию, можно, во-первых, потому, что индивидуальные колебания значений фибринолиза при использовании этого метода велики - у человека от 4 до 10 мин (М = 7 0), следовательно, отклонения от средней взвешенной величины составляет ±75% [3 С Баркаган, П А Момот, 1998], во-вторых, потому, что при большей дозе (12 0 мг/кг) уже на 20-й день ускорение фибринолиза на 17 2% оказалось достоверным Прирост скорости фибринолиза к 30-му дню при этой дозе составил уже 29.2% (величины 17,2 и 29 2, р < 0/05)

С увеличением дозы токоферола до 24 0 мг/кг фибринолиз к 20 дню исследований ускорился на 33 8%, что статистически не больше, чем на 20-й день (р > 0 05)

Таблица 7 ХНа-зависимый фибринолиз и Т к Тр у крыс, получавших токоферол в лозе, эквивалентной лечебной, а также в дозах, превышающих ее в 4, 8 и 16 раз

(1-я строка-20, 2-я -30 дней)

Показатель <рысы токоферол Животные получали токоферол

пополнительно не (мг/кг массы тела) в дозах

толучали

(контроль), п - 6 0 (п -7 на 12 0 (п - 7 на эта- 24 0 (п - 7 на эта-

12 на этапе этапе) пе) пе)

Ф ХПа-зависимый 8 1±0 03 8 0±0 04 6 7±0 04- 6 1±0 02*

фибринолиз, мин 8 9±0 04 7 2±0 06 6 3±0 02* 5 9±0 03*

Толерантность к 111+2 3 119±2 1* 125±2 1*

тромбину, % 100±2 6 (п - 24) 113±3 1 121+3 2* 128±2 2*

Обозначения знак * - достоверное отличие от контроля

Итак, достаточно длительное введение токоферола в больших дозах в небольшой степени активирует ф ХПа-зависимый фибринолиз в эйглобулиновой фракции плазмы, и это может явиться причиной роста толерантности к тромбину (табл 7), выявленной при длительном введении токоферола в дозах, заметно превышающих суточную потребность крыс

В табл 8 представлены данные о ф ХПа-зависимом фибринолизе и Т к Тр при введении токоферола (24 0 мг/кг, в течение 20 и 30 дней) животным через 1 сут после введения свинца

Таблица 8 Толерантность к тромбину через 1 сут после введения свинца (50 мг/кг) на фоне предварительной нагрузки токоферолом, длившейся 20 (1-я строка) или 30 (2-я стро-___ка)дней (п- 7)_

Показатели и Контроль I (п -12) Контроль II (крысам ввели 50 мг/кг ацетата свинца на фоне рациона, не дополнявшегося токоферолом (п - 7 на этапе) Крысам (п - 7 на этапе) ввели ацетат свинца (50 мг/кг) после предварительной нагрузки токоферолом в течение 20-30 дней ежедневная доза (мг/кг массы тела) 6 0 12 0 24 0

Ф ХИа-ависимый фибринолиз, мин 8 2±0 02 7 9±0 03 6 9±0 05* 6 6+0 02* 51+0 02*+ 6 1±0 02*+ 4 7±0 02*+ 4 1+0 01*+ 4 3±0 43*+ 4 5+0 38*+

Толерантность К тромбину, % 100±1 2, П - 24 32 6±1 2* 119±1 3*+ 121+1 4*+ 121±2 4*+ 130±1 9*+ 133+3 1*+ 141±3 4*+

Обозначения * - достоверное отличие от контроля I, + - от контроля II

Судя по данным табл 8, скорость фибринолиза после введения свинца на фоне рациона без добавок токоферола, повысилась (сократилось время лизиса) к 20-му дню - на 15 9, к 30-му - на 15 5 % На фоне предварительного введения токоферола (6 0 и 12 0 мг/кг) ускорение фибринолиза еще более заметное - на 37 1% и на 48 0% соответственно Примерно в той же мере ускорился фибринолиз у крыс, которым ввели ацетат свинца на фоне предварительного введения токоферол в дозе 24 0 мг/кг ежедневно - на 20-й и 30-й дни скорость лизиса сгустка возросла на 47 1 и на 43 0% (статистически не разнится с результатом при дозе токоферола в 12 0 мг/кг)

Следовательно, ускорение ЛПО (именно это происходит после введения свинца, как показано выше) сопровождается активацией ф ХПа-зависимого фибринолиза На фоне предварительной нагрузки токоферолом фибринолиз ускоряется еще значительнее

Видимо, ускорение фибринолиза избытком токоферола не связано с его ан-тиоксидантным эффектом - прооксидант ускоряет лизис фибрина, а на фоне предварительной нагрузки токоферолом ускорение фибринолиза становится еще заметнее

Влияние токоферола в комбинации с другими антиоксидантами на ЛПО, АОП, содержание маркеров ВТФ и толерантность к тромбину. Чтобы уточнить, связаны ли эффекты токоферола на гемостаз с его антиоксидантными свойствами или преимущественно с ними, мы изучили сдвиги ЛПО, АОП, ВТФ и Т к Тр при введении токоферола одновременно с другими антиоксидантами

- витамином С (препарат аскорбиновой кислоты - АК), которая заметно влияет на ЛПО и АОП, устраняет сдвиги в гемостазе в условиях гипероксидации [Э В Багумян и др, 2007]

- димефосфоном - синтетическим антиоксидантом, синергически влияющим на эффект физиологических антиоксидантов

В дозе 11 0 мг/кг АК умеренно угнетает ЛПО, повышает АОП и снижает уровень маркеров ВТФ [Э В Багумян 2007], в том числе и у крыс, синтезирующих витамин С [П Н Шараев, 2004] Димефосфон (1 г/кг) не устраняет полностью изменений, вызываемых С-авитаминозом ограничивает эффекты на гемостаз, реализуемые за счет активации ЛПО, но не обладает С-витаминной и вообще витаминной активностью [А Ш Бышевский и др , 2004, 2005]. ^

Используя эти антиоксиданты, мы хотели выяснить, как изменяется эффект витамина Е на ЛПО и гемостаз (суммируется, проявляет синергическое или антагонистическое действие) в присутствии других антиоксидантов Опыты провели по схеме 1) контроль - интактные крысы, 2) подопытные группы получали токоферол (15 мг/кг) Эффект этой дозы невелик, следовательно, позволяет выявить эффект других антиоксидантов. Крысам одной из подопытных групп вводили АК (110 мг/кг), другой - димефосфон (10 г/кг), третьей - вводили токофе-рол+АК, четвертой - токоферол+димефосфон в тех же дозах Судя по публикациям, можно было ожидать, что в названных дозах АК и димефосфон оказывают примерно одинаковое влияние на ЛПО [И А Дементьева, 1998, Р Г Алборов, 2000, И А Аптекарь* 2002] и уровень маркеров ВТФ [Е А Винокурова, 1999] Опыты длились 30 дней, пробы брали на 10-й, 20-й и 30-й дни

Как видно из данных табл 9, сдвиги, вызванные токоферолом (15 мг/кг), совпали с найденными нами ранее (табл. 1), подтверждая, что доза, эквивалентная лечебной дозе витамин Е, угнетает ЛПО, повышает АОП и снижает уровень маркеров ВТФ В такой же степени замедлилось ЛПО и повысился АОП, снизился уровень маркеров ВТФ при введении АК или димефосфона в испыты-вавшихся дозах Это подтвердило корректность эксперимента с попарным введением антиоксидайтов использованы дозы, изменяющие интенсивность пере-кисного окисления липидов в равной мере

Таблица 9 ЛПО и АОП в тромбоцитах, плазменное содержание маркеров ВТФ у крыс, получавших токоферол в дозе, эквивалентной лечебной, только АК или димефосфон, а

Показатели Контроль (крысы добавок не получали, п -11) Токоферол, 1 5 мг/кг (л-6) АК, 11 0 мг/кг (п-6) Срысы получали Димефосфон, 1 г/кг (п-6) Токоферол+АК (п-6) Токоферол +димефосфон (п-6)

ДК А/мг ЛГ) 0 051±0 003 0 042±0 001* 0 035±0 003* 0 024+0 002* 0 039±0 008* 0 033±0 004*" 0 027±0 0048" 0 038±0 003* 0 029±0 001*" 0 024±0 001 * 0 033±0 004*** 0 022+0 002**' 0 021±0 001**' 0 032±0 003**" 0 023±0 002**" 0 022±0 003*+"

1 0 71±0 03* | 0 68± 0 041* [ 0 55±0 06* ( 0 51±0 04*" | 0 48±0 05**»

ТБК, ед/мг ЯП 0 76+0 05 0 63±0 03* 0 53±0 05* 0 59±0 025*" 0 49±0 024*° 0 52±0 05*" 0 49±0 04*" 0 46+0 05**" 0 39±0 06** 0 44+0 03**# 0 37±0 04**#

ПИ, мин/мл 40 1±1 1 46 7±1 6* 54 6±1 1* 55 9±1 2* 44 8±1 2* 51 9±2 1*" 53 9 ±0 9*" 46 9±2 1* 57 2±1 3 52 4±1 9*" 54 9±1 5** 58 9 5±1 8**" 60 3±1 7*** 53 9±2 0**" 59 0±1 6**' 69 1+1 7**"

соа мм /мл/мин 0 61±0 02 0 53±0 04 0 50±0 01 ** 0 45±0 02** 0 54±0 04* 0 55±0 13* 0 53±0 17*" 0 55±0 03* 0 53±0 03*' 0 50±0 04*" 0 45±0 03*** 0 42±0 02**" 0 41 ±0 03**" 0 46±0 04*** 0 42±0 03**" 0 41±0 04**"

Ф Рз,% 89 3±1 2 86 9±1 2 78 8±1 4* 71 3±1 0* 84 0±1 1* 76 1±1 0** 68 3±1 2** 83 7+1 7** 74 7±1 5**" 67 7±1 7** 81 0±11*# 71 0±1 3*"# 63 1+1 1*"# 81 3±1 0*# 70 7±1 2*"# 62 7±1 2*"#

ФР.С 3 5±0 02 3 2±0 02* 2 9±0 03* 2 5±0 03* 3 0±0 01*+ 2 5±0 08*+ 2 2±0 01**" 2 4±0 02** 2 2±0 01** 2 1±0 01**" 2 5±0 008+# 2 1±0 08*+"# 1 7+0 01 *"# 2 3+0 007*+# 2 0±0 09*+"# 1 6±0 02*"#

ФГ, г/л 2 2±0 03 2 2±0 08 2 1±0 11 1 9±0 09 2 1±0 05 2 2±0 08 2 3±0 07 2 3+0 09 2 1±0 08 2 2±0 09 2 2±0 03 1 9±0 06 2 3±0 07 2 1±0 03 2 0±0 05 2 2±0 07

ПДФ, мг% 15 5±1 1 14 1+1 3* 12 1±1 0* 9 7±1 2* 13 4±1 1*+ 12 0±0 7* 8 9±0 5*+ 12 2±1 1** 11 4±0 2** 8 8±0 8** 11 5±1 0*+# 10 1±0 4*+#" 8 4±0 3*+#" 11 7±1 1*+# 9 9±0 3*+#" 8 2±0 4*+#"

РКМФ, мкг/мл 23 9±0 8 20 8±1 0* 19 1±0 6* 16 9±0 8* 19 0±0 6*+ 16 9±0 8** 15 1±0 7** 18 5±1 4** 15 7±0 8** 14 9±0 7** 18 0±0 3*# 14 7+0 5**' 13 3+0 5**" 17 8±0 4*# 14 9±0 6** * 12 9+0 6**"*

о-д, мкг/мл 018±0 011 0 14±0 009* 0 12±0 014* 0 08±0 009* 0 12±0 005** 0 11±0 009* 0 09±0 012* 0 11±0 010** 0 10±0 013* 0 10±0 012* 0 10±0 003*** 0 08±0 007*+"# 0 07±0 010*+"* 0 09±0 002**" 0 08±0 005*+"# 0 08+0 011*+*

ТкТр,% 100+1 3 109±2 0 112±2 5 121+2 0* 111±2 8 109±22 123±2 0* 109±23 114±2 1 129±2 0*" 122+1 9* 127±1 8*#" 146±2 1*+#" 128±2 1*** 131±2 4**# 149±2 3*+Г

Обозначения как к табл 1 знак * - достоверное отличие от контроля, + - от величины, найденной в тот же срок при введении только токоферола, " - от значения, найденного на 10-й день, # - от значения в колонках «вводили АК» или «вводили димефосфон»)

Выше мы показали (табл 2), что введение токоферола в дозе 1 5 мг/кг повышает толерантность к тромбину только к 30-му дню нагрузки Здесь это подтвердилось (табл 9) То же нашли и при введении только АК на 10-й и 20-й дни - тенденция к росту толерантности, а к 30-му дню статистически достоверное ее увеличение То же - у крыс, которым вводили только димефосфон

При введении в рацион комбинации токоферол+АК или токоферол+димефосфон толерантность к тромбину повышалась уже к 10-му дню, заметнее - к 20-му и ещё заметнее - к 30-му дню В конечном счете, витамин Е с витаминным или невитаминным антиксидантом, обеспечивая более высокий противоокисли-тельный эффект, замедляет НВСК, контролируемое по содержанию в плазме маркеров ВТФ, и повышает толерантность к тромбину

В целом комбинирование токоферола с другим антиоксидантом, обеспечивая более высокий антиоксидантный эффект, снижает интенсивность ВТФ и повышает толерантность к тромбину в большей мере, чем при раздельном введении этих антиоксидантов Чтобы объективно оценить изменение характера эффектов при комбинировании токоферола с АК или с димефосфоном провели математическую обработку данных, которая позволяет дифференцировать в действии двух факторов (в нашем случае - двух ингибиторов ЛПО и гемостаза) синергизм, антагонизм или суммацию С этой целью использовали уравнение [М Диксон, Э Уэбб, 1966], результаты которого после подстановки полученных в эксперименте значений

могут отличаться по знаку, соединяющему левую и правую части, приобретая следующий вид

I. аи2= («1 + а2> - (а] х а2)

И. а 1,2 < (а1 + а2)-(а,ха2) III. ац>(а1 + а!)-(а1ха2),

где

- а! - парциальный эффект токоферола (одного антиоксиданта - в нашем случае токоферола),

- а2 - парциальный эффект второго антиоксиданта (в нашем случае - аскорбиновой кислоты или димефосфона),

- а 1,2 - парциальный эффект лвух антиоксидантов, вводимых одновременно

Значение величины а устанавливается делением показателя степени изменения в опыте на тот же показатель в контроле и вычитанием частного из единицы Результат, соответствующий уравнению I, - признак суммации,^уравнению II - признак антагонизма и уравнению III - признак синергизма

Выполнив расчеты, мы получили такие результаты

- для значений ДК, ТБК, ПИ и СО выявилась суммация эффектов токоферола и АК, токоферола и димефосфона,

- для значений ф Р3 и ф Р4 ПДФ, РКМФ и Б-димеров - также суммация

В обеих группах показателей арифметическая сумма, характеризующая сдвиги при введении токоферола и токоферола+АК или токоферола+димефосфон, ниже алгебраической

Для показателя Т к Тр результаты принципиально такие же, однако, степень отличия арифметической суммы анализируемых величин от их алгебраической суммы выше, чем для всех других показателей Следовательно, влияние токоферола и АК, а также токоферола и димефосфона на состояние ЛПО и на уровень маркеров ВТФ суммируется лишь отчасти - экспериментальный суммарный эффект ниже арифметической суммы эффектов двух антиоксидантов, испытанных порознь, примерно на 30-35% Экспериментальный эффект двух пар антиоксидантов на Т к Тр ниже арифметической суммы результатов, полученных при их раздельном введении, примерно на 50-70%

В обоих случаях слово «примерно» означает, что степень суммации при оценке эффектов ЛПО, АОП и маркеров ВТФ в случае введения токоферола+АК или токоферола+димефосфона при разных дозах и разной продолжительности введения' антиоксидантов отличалась от арифметической суммы в пределах от 32 до 45% При оценке влияния пар токоферол+АК и токофе-рол+димефосфон розница между экспериментальным эффектом и алгебраической суммой их эффектов при раздельном введении отличия достигали 48-70% (р < 0 05 по результатам альтернативного варьирования)

Отметим, что сходные данные получены при изучении эффектов других про-оксидантов или антиоксидантов (тирозина, половых стероидов, селмевита, ком-пливита, комбинации витаминов А, Е, С и Р, комбинаций, включающих эти витамины), вводимых совместно или порознь на ЛПО, на коагулоактивность тромбоцитов, показатели общей свертывающей активности крови и отдельные про-коагулянты плазмы [ААВакулин, 1988, ИВРальченко, 1998, РГАлборов и

др , 2000, Е А Матейкович, 2004, Murugesan Pea, 2005]

Анализ данных литературы о связи с гемостазом витамина Е, выявил, что его введение вызывает противоположно направленные изменения отдельных про- и антикоагулянтов Обычно оценивали мало информативные показатели - время кровотечения, протромбиновое время, реже - фибринолиз Не изучена дозазави-симость эффекта витамина Е на гемостаз, хотя имеются косвенные свидетельства ее существования [Wolf R е а, 1998, Zahn, 2003]

Системное исследование роли витамина Е в функционировании гемостаза (в экспериментах и в клинике), в том числе и в связи с ЛПО, не проводилось Лишь недавно опубликованы единичные наблюдения за влиянием витамина Е на интегральные показатели состояния гемостаза - НВСК и Т к Тр [ГА Сул-карнаева и др , 2006, А В Багумян и др, 2007] Известно, что Т к Тр коррелирует со скоростью НВСК [МК Умутбаева, 2003, 2005, Р Г Алборов и др , 2005], а сдвиги НВСК, как это показано [Э А Шабанов, 1999, И H Бокарев, 2000, 2002, M К Умутбаева, 2005], определяют наклонность к гипер- или гипокоагуляции, особенно в ситуациях, сопровождающихся гипероксидацией

Результаты немногочисленных и противоречивых наблюдений за влиянием витамина Е на свертываемость крови и фибринолиз при атеросклеротических изменениях у человека и животных [Ю П Никитин, 1962, Paul Е M е а, 1954 б], и результаты эпидемиологических обследований, в которых оценивали зависимость гемостаза от обеспеченности витамином Е при атеросклерозе [Vijver L Р е а, 1997, Vibo R, 2007, Bhnc А е а, 2007] не согласуются между собой

То, что в эксперименте, и в клинике получены данные, свидетельствующие в одних случаях о способности витамина Е повышать уровень или активность отдельных факторов свертывания крови, в других - влиять противоположным образом, обосновали проведение исследований, цель которых экспериментально изучить влияние витамина Е в зависимости от дозы на интенсивность ЛПО, АОП, плазменное содержание маркеров ВТФ и Т к Тр.

Мы предполагали, что полученные в экспериментах данные позволять судить о целесообразности примененния токоферола для направленного воздействия на интенсивность НВСК, или, по крайней мере, обосновать необходимость продолжения экспериментальных и клинических исследований в этом направлении

Экспериментальное изучение и анализ эффектов на ЛПО, АОП, ВТФ и Т к Тр токоферола (в зависимости от дозы, от одновременного или последующего введения прооксиданта на фоне предварительного повышения обеспеченности организма витамином Е, в комбинациях с другим витаминным и невитаминным антиоксидантов), позволило прийти к следующему

Полученные нами данные позволяют считать, что антиоксидантные свойства витамина Е обусловливают его влияние на содержание в плазме крови маркеров ВТФ, следовательно, витамин Е является одним из факторов, определяющих интенсивность НВСК в условиях физиологической нормы Об этом свидетельствует сходство изменений ЛПО и АОП с одной стороны, и интенсивности ВТФ - с другой при введении токоферола О том же свидетельствует возможность имитировать эффекты токоферола на гемостаз введением таких доз другого ан-

тиоксиданта витаминной природы (АК) или невитаминного антиоксиданта ди-мефосфона, которые оказывают равное по силе влияние на ЛПО и АОП, ограничивая одновременно и изменения ВТФ Об этом же свидетельствует и то, что прооксидант, активируя ЛПО и снижая АОП, повышает в плазме содержание маркеров ВТФ, одновременное введение токоферола ограничивает эти сдвиги, а в больших дозах прёдупреждает их появление, особенно в случае предварительного повышения обеспеченности организма витамином Б

Влияние витамина Е на ЛПО и АОП дозазависимо до известного предела при значительном превышении содержания токоферола в суточной порции рациона против дозы, эквивалентной лечебной, прирост антиоксидантного эффекта замедляется, и при дальнейшем увеличении его содержания в рационе не сопровождается более приростом антиоксидантного действия Особенность антиоксидантного эффекта витамина Е выражается еще и в том, что дозазависимость более четко проявляется в его влиянии на АОП и менее выражена относительно скорости ЛПО Наличие дозазависимости подтверждается еще и тем, что при длительном введении токоферола в дозах 3 0, 6 0 и 12.0 мг/кг максимальные сдвиги ЛПО и АОП наступают быстрее, чем при введении меньшей дозы Это говорит о существовании предельной степени обогащения организма токоферолом, превышение которой не усиливает более эффекта витамина Е на Л1КГи АОП и на интенсивность НВСК Более того, выявляются и признаки, указывающие на вероятность развития противоположного эффекта на гемостаз -снижение прироста Т к Тр при чрезмерно высокой дозе или при длительном введении достаточно больших доз токоферола

Позитивное влияние токоферола на Т к Тр выражено в большей мере, чем его влияние на интенсивность НВСК - изменения ВТФ и Т к Тр не согласуются между собой (преобладают позитивные изменения Т к Тр, особенно в случаях, когда ЛПО усиливается введением прооксиданта на фоне предварительного введения токоферола или одновременного их введения) Так как Т к Тр зависит в высокой степени от состояния фибринолитических процессов [Б А Кудряшов, 1975, Т М Калишевская и др , 1992], мы выясняли, не связано ли это несоответствие с активацией фибринолиза, тем более, что ускорение фибринолиза под влиянием витамина Е описывали и ранее Оказалось, что достаточно продолжительное введение больших доз токоферола в небольшой степени активирует ф ХПа-зависимый фибринолиз в эйглобулиновой фракции плазме, и это можно было предположительно считать причиной роста толерантности к тромбину, выявляемой при длительном введении токоферола в дозах, заметно превышающих суточную потребность крыс. Так как ускорение фибринолиза при введении избытка витамина Е не коррелирует с его антиоксидантным эффектом (прооксидант ускорял лизис фибрина, а предварительное введение токоферола ускоряло фибринолиз еще заметнее), можно предполагать, что причиной преобладания прироста Т к Тр при введении токоферола над ограничивающим влиянием токоферола на ВТФ, является способность витамина Е активировать ХПа-зависи-мый фибринолиз как компонент противосвертывающей защиты, т е защиты от избыточно образующегося тромбина (в используемой нами пробе - на экзогенный тромбин)

Комбинирование витамина Е с витаминным и невитаминным антиоксидан-

том, обеспечивая более высокий противоокислительный эффект, снижает интенсивность НВСК, контролируемого по содержанию в плазме маркеров ВТФ, и повышает Т к Тр Характер прироста этих эффектов при комбинации токоферола с АК или с димефосфоном - неполная суммация

В целом устранение изменений ЛПО и АОП, вызываемых введением проок-сиданта (свинца) с одновременным введением токоферола, зависит от его дозы и длительности введения

Снижение Т к Тр при введении прооксиданта достаточно выражено и пропорционально длительности его введения При одновременном введении прооксиданта и токоферола эффект свинца ослабляется пропорционально дозе витамина Е С увеличением длительности введения при всех исследованных дозах токоферола Т к Тр повышается пропорционально дозе и длительности введения Между изменениями Т к Тр и изменениями содержания маркеров ВТФ, а, следовательно, и интенсивностью ЛПО, существует обратная зависимость, выявляемая при введении токоферола на фоне физиологической нормы, и более выраженная на фоне ускоренной ЛПО введением прооксиданта Можно также утверждать, что способность токоферола поддерживать Т к Тр, обнаруженную при введении витамина Е в условиях физиологической нормы (т е при интенсивности ЛПО, свойственной крысам, не подвергавшимся воздействиям), значительно ярче проявляется на фоне гипероксидации

Механизмы, определяющие возможность снижения Т к Тр при значительном превышении дозы витамина Е, эквивалентной лечебной, нуждаются в специальном исследовании, особенно в связи с данными, хотя и единичными, о способности токоферола активировать гемостаз и усугублять течение атеросклеро-тических изменений

ВЫВОДЫ

1 a-Токоферол m vivo в физиологических условиях снижает интенсивность накопления липидпероксидов в тромбоцитах и повышает их антиокси-дантный потенциал, что сопровождается снижением плазменного содержания маркеров взаимодействия тромбин-фибриноген и увеличением толерантности животных к тромбину

2, Эффект прооксиданта (свинца), который ускоряет накопление в тромбоцитах крыс липидпероксидов, снижает их антиоксидантный потенциал, повышает содержание в плазме маркеров взаимодействия тромбин-фибриноген и снижает толерантность к тромбину, ограничивается, а при высоких дозах токоферола устраняется при одновременном, и особенно предварительном введении а-токоферола

3 Дозазависимость влияния а-токоферола на липидпероксидацию, на интенсивность взаимодействия тромбин-фибриноген и толерантность к тромбину имеет пределы - со значительным увеличением дозы прирост эффекта ослабляется, существует и предельная доза, превышение которой не сопровождается усилением влияния токоферола на липидпероксидацию в тромбоцитах и на плазменный уровень маркеров ВТФ

4 Инициатором изменений скорости взаимодействия тромбин-фибриноген (ВТФ) при введении токоферола являются его антиоксидантные свойства, на что указывает одинаковая динамика изменений липидпероксидации и ан-

тиоксидантного потенциала с одной стороны, интенсивности ВТФ и толерантности к тромбину - с другой при дополнительном введении токоферола в физиологических условиях и на фоне гипероксидации

5 Рост толерантности к тромбину, сопровождающий торможение липид-пероксидации и рост антиоксидантного потенциала, а также замедление ВТФ при введении токоферола, свидетельствует, что витамин Е снижает скорость тромбиногенеза и повышает способность организма реагировать на избыток тромбина,

6 Введение токоферола в больших дозах активирует ф.ХПа-зависимый фибринолиз в эйглобулиновой фракции плазме вне связи с его антиокси-дантным эффектом, и (предположительно) может служить причиной роста толерантности к тромбину при длительном введении витамина Е в больших количествах

7 Введение комбинаций витамина Е с витаминным или невитаминным антиоксидантом, повышает антиоксидантный эффект, снижает интенсивность ВТФ и повышает толерантность к тромбину в виде неполной суммации эффектов.

Практические рекомендации

1 В связи с данными литературы, среди которых есть сообщения о позитивном влиянии терапии витамином Е на состояние гемостаза при атероскле-ротических процессах, в других - указания на отсутствие эффекта, или на нежелательные сдвиги, и с учетом установленной нами возможности обрат-ног эффекта при значительном увеличении дозы, следует избегать использования больших доз токоферола или его длительного применения без контроля за уровнем маркеров взаимодействия тромбин-фибриноген

2 Целесообразно комбинировать витамин Е с умеренными дозами витамина С при использовании как антиоксиданта для коррекции гемостатиче-ских сдвигов, обусловленных оксидативным стрессом

3 Следует продолжить изучение влияния витамина Е на гемостаз в клинике, сопровождая витаминотерапию определением плазменного содержания маркеров непрерывного внутрисосудистого свертывания крови

Печатные работы по теме диссертации

1 Рудзевич А Ю Влияние половых стероидов ( этинилэстрадиола и левоноргестре-ла) на взаимодействие тромбин-фибриноген в кровотоке / А Ю Рудзевич, Е М Шаповалова А.В.Шидин и др // Сб «Теория и методология современного научного исследования Тюменского региона -Тюмень ТОГИРРО -2003 - С 121-122

2 Сулкарнаева Г А Гемостатические сдвиги при разных тиреоидных состояниях в зависимости от интенсивности процессов перекисного окисления липидов / Г А Сулкарнаева, А Ю Рудзевич А.В.Шидин и др // Сб «Теория и методология современного научного исследования Тюменского региона - Тюмень ТОГИРРО -2003 - С 119-120

3 Бышевский А Ш Соотношение между толерантностью к тромбину и плазменным содержанием маркеров взаимодействия тромбин-фибриноген /А Ш Бышевский, С Л Галян А В Шидин и др // Материалы 3-й Всероссийской научной

конференции с международным участием «Клиническая гемостазиология и гемо-реология в сердечно-сосудистой хирургии» М Росздрав, РАМН, научный центр сердечно-сосудистой хирургии им АН Бакулев -2006 - С 41-42

4 Сулкарнаева Г А Толерантность к тромбину при гипо- , гипертиреозе и тиреотоксикозе /Г А Сулкарнаева, Е М Шаповалова В.А.Шидин и др // Сб материалов 2-й региональной научно-практической конференции - Сургут Комитет по природопользованию и экологии -2006 - С 147-151

5 Шидин А.В. Влияние цианкобаламина на внутрисосудистое свертывание крови и толерантность к тромбину /А.В.Щидин, Э В Багумян Н Современные наукоёмкие технологии - 2007 - 1 С 29

6 Бышевский А Ш Биологическое значение витамина С /А Ш Бышевский, С Л Га-лян А.В.Шидин и др // В кн «Зависимость гемостаза от С-витаминной обеспеченности организма М Медицинская книга - 2007 -7-13

7 Багумян Э В Влияние аскорбиновой кислоты на липидпероксидацию /Э В Ба-гумян, А Ю Рудзевич А.В.Шидин и др // В кн «Зависимость гемостаза от С-витаминной обеспеченности организма М Медицинская книга -2007 -40-61

В Бышевский АШ Связь между внутрисосудистым взаимодействием тромбин-фибриноген и толерантностью к тромбину /А Ш Бышевский, А А Вакулин А.В.Шидин, идр //Вестник гематологии - 2007.-т III -2 - С 67-68

9 Бышевский А Ш Тканевой фактор, его место в свертывании крови (обзор литературы) /А Ш Бышевский, С Л Галян А.В.Шидин и др //Медицинская наука и образование Урала - 2007 4 - С 78-80

10 Byshevsky A S. The connection between lipid peroxidation and thrombin-fibrinogen interaction /AS Byshevsky, A Y Rudzevich A.V. Shidin e a / European J. of Natural History//2007 -2 -P 35-42

Используемые сокращения

АВР_Активированное время рекальцификации

АЧТВ Активированное частичное тромбопластиновое время

ВТФ Взаимодействие тромбин-фибриноген

две Диссеминированное внутрисосудистое свертывание крови

дк Диеновые конъюгаты

лпнп Липопропеиды низкой плотности

лпо Липидпероксидация

нвек Непрерывное внутрисосудистое свертывание крови

ПДФ Продукты деградации фибрина (фибриногена)

пи Период индукции

РКМФ Растворимые комплексы мономерного фибрина

СО Скорость окисления

ТБК Продукты, реагирующие с тиобарбитуровой кислотой

ТкТр Толерантность к тромбину

ф (фф.) Фактор, факторы

ФАТ Фактор активирующий тромбоциты

D-Д D-димеры

Шидин Александр Владимирович

Влияние витамина е на интенсивность взаимодействия

тромбин-фибриноген, толерантность к тромбину и липидпероксидацию

(экспериментальное исследование) 03 00 04 - биохимия

Автореферат на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Подписано в печать 31 августа 2007 г Тираж 100 экз Отпечатано в издательском центре «Академия» Лицензия ИД № 05351 от 10 07 2001 г Тюмень, ул Одесская, 50