Эффективность современных дезинфицирующих средств против спор возбудителя сибирской язвы

Елизаров, Василий Владимирович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Эффективность современных дезинфицирующих средств против спор возбудителя сибирской язвы
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Эффективность современных дезинфицирующих средств против спор возбудителя сибирской язвы"

! 003484111

На правах рукописи

ЕЛИЗАРОВ ВАСИЛИИ ВЛАДИМИРОВИЧ

ЭФФЕКТИВНОСТЬ СОВРЕМЕННЫХ ДЕЗИНФИЦИРУЮЩИХ СРЕДСТВ ПРОТИВ СПОР ВОЗБУДИТЕЛЯ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ

03.00.07 - микробиология

2 6 НОЯ 2009

Автореферат

диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук

Волгоград - 2009

Работа выполнена в ФГУЗ «Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

Научный руководитель: кандидат медицинских наук, старший

научный сотрудник Андрус Валерий Николаевич

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Ефременко Виталий Иванович

Ведущая организация

доктор медицинских'наук, доцент Бойко Андрей Виталиевич

Филиал ФГУ «48 Центральный научно-исследовательский институт - Центр военно-технических проблем биологической защиты Минобороны России»

Защита состоится «15»декабря 2009 г. в 13 часов на заседании диссертационного совета Д 208.078.01 по защите докторских и кандидатских диссертаций при ФГУЗ «Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. (410005, г. Саратов, ул. Университетская, 46.)

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ФГУЗ РосНИПЧИ «Микроб»..

Автореферат разослан «14» ноября 2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук, старший научный сотрудник

А.А. Слудский

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. На территории Российской Федерации, а также в странах ближнего и дальнего зарубежья находится значительное количество неблагополучных по сибирской язве регионов (Маринин Л.И. с соавт., 1999, Черкасский Б.Л., 1999). По данным отчётов ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии по Волгоградской области» в 33 районах официально зарегистрировано 1271 сибиреязвенное захоронение при спорадическом заболевании людей (в период с 1973 по 2005. гг. зарегистрировано 32 случая).

Особое внимание возбудитель сибирской язвы как потенциальный агент биологического оружия привлек к себе после проведения в 2001 г. серии биотеррористических актов в США (Inglesby Т. О. et al., 2002).

Споры данного микроорганизма являются наиболее устойчивыми к воздействию различных факторов внешней среды и химических средств, что диктует необходимость проведения дезинфекционных мероприятий с использованием высокоэффективных спороцидных композиций (Веткина И.Ф. с соавт., 2005, Rüssel A.D., 2001, Men anos J .J., 2001, Рекомендации АСПРЭ, 1996). В их состав входят преимущественно агрессивные компоненты (хлор, формальдегид, атомарный кислород и др.). Некоторые из них взрывоопасны, токсичны, химически активны и могут провоцировать внештатные ситуации, что затрудняет проведение дезинфекции помещений, оборудования и инвентаря в присутствии людей и животных (СП 1.3.128503).

В последнее время в дезинфекционной практике появился целый ряд новых антимикробных композиций (преимущественно четвертично-аммониевых средств с добавками глутарового альдегида, спиртов, надуксусной кислоты и др.), обладающих спороцидной активностью. Доступность, низкая токсичность, относительная экологическая безопасность и дешевизна делают экономически целесообразным их широкое практическое использование в эпидемических очагах.

Анализ сотен разрешённых к применению в Российской Федерации отечественных и зарубежных дезинфицирующих средств показал, что только 20 препаратов (преимущественно альдегиды, хлор- и кислородсодержащие соединения) могут применяться как дезинфектанты высокого уровня или химические стериллянты (Дезинфицирующие средства: Справочник., 2007)

Это частично обусловлено тем, что их оценка в лабораторных условиях крайне затруднена. В действующих нормативных документах (Единые инструктивно-методические указания 02.И.85, 1985, Инструкция N739-68M. 1968) не определены конкретные тест-штаммы возбудителя сибирской язвы,

которые могут быть использованы в этих целях. Основными критериями отбора была оценка устойчивости спор исследуемых бацилл к действию текучего пара (100° С) и стандартных тестовых химических соединений (фенол, хлорамин, водорода перекись медицинская).

Направленный поиск позволил определить тест-штаммы В. амкгаск (27, 81/1, 44/1СО), обладающие наиболее высокой устойчивостью к действию перечисленных факторов, и использовать их при изучении спороцидной эффективности дезинфицирующих средств. Другие штаммы В. апАгаш, являющиеся дефектными по плазмидному составу (В. апЛгаси! СТИ, Бауюя, 55 ВНИИВВиМ и изогенные штаммы), наряду с модельными штаммами (В. зиЫНгз, В. сегет, В. 1Ытп&е1т$, В. ¡¿еагоЛегторкПиз) отличались более низким уровнем устойчивости к некоторым из перечисленных выше факторов.

Нами впервые проведена оценка влияния на спороцидную активность различных концентраций ряда новых четвертично-аммониевых (ЧАС), кислород- и хлорсодержащих соединений, изменения температуры и белковой нагрузки рабочих растворов, а также представлены режимы обеззараживания ими различных объектов, контаминированных спорами возбудителя сибирской язвы.

Методами электронной микроскопии продемонстрированы происходящие при этом изменения морфологических структур спор возбудителя сибирской язвы, указывающие на проявление спороцидной активности исследованных дезинфицирующих средств.

Цель работы: анализ эффективности дезинфицирующих композиций на основе четвертично-аммониевых, хлорсодержащих и кислородсодержащих соединений при обеззараживании различных объектов (поверхностей в помещениях, санитарно - технического оборудования, белья со следами белковых загрязнений, посуды лабораторной и с остатками пищи, а также изделий медицинского назначения из стекла, резины, пластика и металла), контаминированных спорами возбудителя сибирской язвы в лечебно-профилактических учреждениях и специализированных бактериологических лабораториях.

Задачи исследования: • отобрать для последующих исследований тест-штаммы В. аЫЬгаыз, наиболее устойчивые к действию тестовых химических соединений (фенол, хлорамин, водорода перекись медицинская) и текучему пару для оценки спороцидной активности новых дезинфицирующих средств в отношении спор возбудителя сибирской язвы;

• оценить влияние некоторых факторов (белковой нагрузки, температуры рабочих растворов, концентрации препарата и времени экспозиции) на изменение спороцидной активности композиций на основе четвертично-аммониевых, хлор- и кислородсодержащих дезинфицирующих средств;

• показать методами электронной микроскопии морфологические изменения структур спор возбудителя сибирской язвы, возникающие при воздействии исследуемых композиций;

• провести сравнительный анализ эффективности обеззараживания современными спороцидными дезинфицирующими средствами объектов (поверхностей в помещениях, санитарно-технического оборудования, белья, посуды и изделий медицинского назначения), контаминированных спорами возбудителя сибирской язвы, и представить перечень наиболее перспективных из них;

• провести оценку стоимости спороцидных рабочих растворов исследованных дезинфицирующих средств для предварительного заключения об экономической целесообразности их применения;

• принять участие в разработке разделов инструктивно-методических документов по обеззараживанию исследованными дезинфицирующими средствами различных объектов, контаминированных спорами возбудителя сибирской язвы.

Научная новизна.

1. Выявлена более высокая устойчивость спор вирулентных штаммов В. апЛгаск 81/1, 27, 44/1 СО к действию ряда тестовых химических соединений (хлорамин, фенол и водорода перекись медицинская) и текучего пара (при 100° С) по сравнению со спорами вакцинных штаммов В. апЛгаш 55 «ВНИИВВиМ» и СТИ-1, а также изогенных штаммов 81/1 и 44/1 СО с различным набором собственных плазмид. Бациллы В. зиЫШз, В. сегеиз, В. Липп&етгз, В. з1еаго1ЪегторЫ1ш были менее устойчивыми по некоторым позициям по сравнению со спорами вирулентных штаммов возбудителя сибирской язвы. В связи с этим предложено использование в качестве тест-микроорганизмов в опытах по оценке спороцидной активности дезинфицирующих средств спор В. апОггасхэ 81/1, 27 и 44/1СО.

2. Показана зависимость спороцидной активности исследованных химических дезинфицирующих средств от их концентрации, температуры рабочих растворов, времени воздействия, а также наличия белковых примесей и вида обрабатываемого объекта (поверхности, санитарно-техническое оборудование, белье, посуда, ИМН).

3. Впервые установлена спороцидная активность исследованных композиционных средств из класса четвертично-аммониевых соединений (19 препаратов), кислородсодержащих (6 препаратов) и хлорсодержащих средств (7 препаратов) и представлены оптимальные режимы обеззараживания ими различных объектов, контаминированных спорами возбудителя сибирской язвы. Рекомендованы:

- для обработки поверхностей и санитарно-технического оборудования: хлорсодержащие («ДСГК», «Хлорапин», «Люмакс-Хлор», «Люмакс-Хлор Лайт») и кислородсодержащие («Водорода перекись медицинская», «Дезинбак супер») средства;

- для обработки белья: композиции на основе ЧАС («Лайна-Мед», «Лизафин», «Ника-Дез», «Рик-Д», «Дезкон» и др.);

- для обработки ветоши: хлорсодержащие («ДСГК», «Хлорапин»), кислородсодержащие («Водорода перекись медицинская», «Дезинбак супер») и композиции на основе ЧАС («Лайна-Мед», «Лизафин», «Ника-Дез», «Рик-Д», «Дезкон» и др.);

- для обработки посуды: кислородсодержащие («Водорода перекись медицинская», «Дезинбак супер»), композиции на основе ЧАС («Лайна-Мед», «Лизафин», «Ника-Дез», «Рик-Д», «Дезкон» и др.) и хлорсодержащие средства («ДСГК», «Хлорапин»);

- для обработки изделий медицинского назначения: композиции на основе ЧАС («Лайна-Мед», «Лизафин», «Ника-септ», «Рик-Д», «Дезкон», «Лизоформин 3000» и др.), кислородсодержащие («Водорода перекись медицинская», «Дезинбак супер»), хлорсодержащие средства («ДСГК», «Хлорапин»)

4.Проведен сравнительный анализ стоимости спороцидных рабочих растворов исследованных дезинфицирующих средств в зависимости от вида обрабатываемых объектов и способа обеззараживания.

5.На основе изменений тонких морфологических структур спор возбудителя сибирской язвы показана возможность использования методов электронной микроскопии в оценке спороцидной активности дезинфицирующих средств.

Практическая значимость.

1. Определены тест-штаммы В. аыкгааэ (81/1, 44/1СО и 27), которые рекомендованы для использования в лабораторных условиях при оценке спороцидной активности дезинфицирующих средств.

2. Вакцинные штаммы возбудителя сибирской язвы (В. агйкгасЬ 55 ВНИИВиМ и СТИ-1) рекомендованы для предварительной оценки устойчивости спор данного микроорганизма.

3. Результаты исследований могут быть использованы при выработке оптимальной тактики проведения дезинфекционных мероприятий в очагах сибиреязвенной инфекции, возникших как в результате эпизоотии, так и при биотеррористических атаках.

4. Разработаны режимы обеззараживания 32 дезинфицирующими средствами различных объектов, контаминированных спорами возбудителя сибирской язвы.

5. Представленные материалы по разделу обеззараживания при сибирской язве вошли в состав документов утвержденных на федеральном уровне:

• «Инструкция, №7/3 по применению средства «Хлорапин» (ЗАО «Петроспирт», Россия) в лечебно-профилактических учре.ждениях для дезинфекции», утв. Генеральным директором ЗАО «Петроспирт» В.В. Рябовым 06 февраля 2006 г., Москва, 2006;

• «Инструкция №1/06 по применению средства «ДЕЗИНБАК-У» для целей дезинфекции и стерилизации изделий медицинского назначения в лечебно-профилактических учреждениях (ЗАО «Торговый дом «Оргхим»», Россия) », утв. Генеральным директором ЗАО «Торговый дом «Оргхим»» Н.В. Ходовым 11 апреля 2006 г., Москва, 2006;

• «Инструкция по применению дезинфицирующего средства «Дезкон» ООО «ДЕЗКОН», утв. Генеральным директором ООО «ДЕЗКОН» Н.Ю. Сорокиным 17 августа 2006 г. - Россия, 2006, и др.,

всего 12 инструкций.

6. Материалы диссертационной работы используются в ФГУЗ «Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт» Роспотребнадзора при проведении занятий на курсах первичной специализации врачей, биологов по диагностике особо опасных инфекций, специфической индикации ООИ, санитарной охране территории и противоэпидемической защите населения.

Апробация работы.

Роспотребнадзора (22-23 мая 2008 г.); на ежегодных научных институтских и межлабораторных конференциях ФГУЗ «Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт» Роспотребнадзора, Волгоград (2001-2007 гг.).

Публикации: Материалы диссертации изложены в 10 печатных работах, в т. ч. 5 из них в изданиях, рекомендованных ВАК); вошли в состав 3-х завершённых государственных НИР и 16 хоздоговорных НИР, а также использованы при составлении 12 инструктивно-методических документов по применению в качестве дезинфицирующих средств в ЛПУ и при ликвидации в очагах сибиреязвенной инфекции.

Объем и структура диссертации.

Работа изложена на 143 страницах машинописи, иллюстрирована 35 таблицами и 24 рисунками, состоит из введения, обзора литературы и 5 глав собственных исследований, заключения, выводов, списка использованных источников, включающего 163 работы: 91 отечественных и 72 иностранных авторов.

Положения, выносимые на защиту.

1. В качестве тест-штаммов при оценке эффективности новых спороцидных дезинфицирующих средств предлагается использовать В. ап!кгас1.ч 81/1, 27 и 44/1СО, тогда как вакцинные штаммы В. апАгаси СТИ - 1 и 55 ВНИИВВиМ могут быть рекомендованы на предварительных этапах исследования.

2. Повышение спороцидной активности исследованных композиций на основе ЧАС, хлор- и кислородсодержащих соединений происходило при увеличении их концентрации, времени экспозиции, температуры рабочих растворов, а снижение - при наличии белковых примесей.

3. Отработаны и внедрены в практику режимы обеззараживания ряда объектов, контаминированных спорами возбудителя сибирской язвы для 32 дезинфицирующих средств («Септодор», «Септодор-форте», «Бриллиант», «Новодез-Форте», «Лизоформин 3000», «Лизафин», «РИК-Д», «Гамма - Д», «Ника-септ», «Велтаб», «Велтогран», «Велтолен», «Диабак», «Бромосепт-50», «Лайна-Мед», «Дезэффект», «Эффект-форте», «Ника-Дез», «Дезкон», «ПФК-1», «ПФК-А», «ПФК-М», «Дезинбак супер», «Дезинбак-У», «Люмакс-Стерил», «Люмакс-Хлор Лайт», «Люмакс-Хлор», «Ди-Хлор», «Хлорапин», «ДСГК», «Жавель-Клейд», «Пресепт»),

4. Представлены сравнительные данные по стоимости спороцидных рабочих растворов исследованных дезинфицирующих средств в зависимости от класса препарата и вида обрабатываемого объекта.

5. Использование электронно-микроскопического метода при изучении изменений морфологической структуры спор возбудителя сибирской язвы позволяет выявлять механизмы и глубину воздействия дезинфицирующих средств, объективно оценивать их спороцидную активность.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Настоящая работа выполнена в рамках плановых НИР ФГУЗ «Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт» Роспотребнадзора «Эффективность современных дезинфицирующих средств при обеззараживании различных объектов, загрязнённых спорами возбудителя сибирской язвы.» (№ гос. регистрации 01.20.0 407959), и «Изучение антимикробной активности и отработка режимов дезинфекции препаратом Лизоформин 3000 при особо опасных инфекциях» (№ гос. регистрации 01.20.02 06195).

В работе использованы 16 отчётов по хоздоговорным НИР, материалы которых вошли в состав инструкций по применению данных препаратов.

В опытах использованы культуры В. anthracis 81/1, 44/1СО и 27, (как дикие так изогенные варианты), вакцинные штаммы СТИ-1и В. anthracis 55 «ВНИИВВиМ», В. anthracis Davies "S" Bacillus subtilis RAS , В. cereus АТСС 6464, В. thuringiensis var.gallería 696 TetR, В. thuringiensis var. thuringiensis Pasteur, В. stearothermophilus BKMB-718, полученные в коллекционном центре ФГУЗ «Волгоград НИПЧИ» Роспотребнадзора.

Спороцидную активность исследованных дезинфицирующих средств проверяли согласно "Инструкции по определению бактерицидной активности новых дезинфицирующих средств" № 739-68 (М., 1968) и "Единых инструктивно-методических указаний по изучению и отбору новых средств дезинфекции и стерилизации, безопасных для применения в практике" (М, 1985), адаптировав методику для особо опасных инфекций и используя стабилизированную споровую взвесь бацилл.

Спороцидная активность препаратов изучена методом «батистовых тестов» путем их контаминации споровой суспензией В. anthracis концентрацией 2x109 м.к./мл из расчета 0,5 мл на 1 тест. В дальнейшем тесты помещали в раствор дезинфицирующего средства и делали высевы в интервале от 5 до 60 мин, определяя время гибели на них спор.

Определены режимы обеззараживания исследуемыми дезинфицирующими средствами различных объектов (поверхности, санитарно-техническое оборудование, белье, посуда и изделия медицинского назначения), контаминированных спорами возбудителя сибирской язвы.

В качестве тест-поверхностей применяли кафель, керамику, линолеум, стекло, окрашенное и неокрашенное дерево, железо, при обеззараживании посуды использовали фаянсовые тарелки, стаканы, ложки; изделий медицинского назначения - стаканчики из пластика и стекла, резиновые и

силиконовые трубки и хирургического инструментария (зажимы, пинцеты, ножницы, стоматологические зеркала, боры, экстракторы).

Для органического загрязнения контаминированных спорами поверхностей, санитарно-технического оборудования, белья, хирургического инструментария и изделий медицинского назначения добавляли 40 % инактивированную лошадиную сыворотку, а для посуды с остатками пищи брали 3 % манную кашу.

На тест-поверхности размерами 100 см2 наносили 0,5 мл суспензии стационарной споровой культуры в концентрации 2х109 м.к./мл. Затем объекты орошали растворами дезинфицирующего средства из расчета 500 мл/м2. Эффективность разрабатываемых режимов обеззараживания проверяли в интервалах 60-120 мин., затем делали смывы увлажненными стерильными марлевыми тампонами с нейтрализатором с последующим высевом в объеме 0,2 мл на плотные питательные среды.

Посуду погружали на 2 мин. в споровую суспензию концентрацией 2х109 м.к./мл, затем переносили в раствор дезинфектанта на время экспозиции, нейтрализовали и делали контрольные смывы.

При изучении режимов обеззараживания белья использовали батистовые тесты, загрязненные исходной споровой суспензией микроорганизмов, которые помещали в различных точках стопки белья (внизу, середине, наверху), белье погружали на время экспозиции в дезинфицирующий раствор, затем в нейтрализатор и делали высевы с тестов.

Окончательный учет результатов роста споровых форм микроорганизмов проводили через 120 час инкубации при 37° С.

Для нейтрализации использовали 1,0 % раствор сульфанола или «универсальный» нейтрализатор, включающий в свой состав твин-80, лецитин, цистеин, тиосульфат натрия. В контроле дезинфицирующее средство заменяли стерильной водопроводной водой.

Биологические пробы ставили на белых мышах путем внутрибрюшинного введения им подвергнутого нейтрализации смыва с исследованных объектов в объеме 0,1 мл. Павших животных вскрывали и делали бактериологический высев. Отрицательные результаты при постановке биопробы являлись показателем спороцидности препарата.

Эффективными считались данные, полученные после обобщения не менее 3-х опытов с обеспечением 100 % гибели спор тест-микроорганизмов.

Использованные для исследования препараты имели сроки хранения от 1 до 5 лет, а их рабочие растворы до 7-14 сут.

По параметрам острой токсичности при введении в желудок исследованные препараты относятся к 3 классу умеренно-опасных веществ, а

в насыщающих концентрациях при ингаляции - 4 классу малоопасных соединений.

Все изученные средства имеют в России свидетельства о государственной регистрации и утвержденные на федеральном уровне методические рекомендации или инструкции по их применению для дезинфекции в здравоохранении, пищевой промышленности и в быту.

В здравоохранении они используются для медицинской дезинфекции поверхностей в помещениях, жесткой мебели, санитарно-технического оборудования, белья, посуды, медицинского инструментария при инфекциях бактериальной, вирусной и грибковой природы, многие из них применяются для мытья и предстерилизационной очистки изделий медицинского назначения (включая эндоскопическую технику).

Все полученные данные обрабатывали методом параметрической статистики с применением дисперсионного анализа и критерия Стьюдента -Фишера (Гланц С., 1998.) Компьютерную обработку результатов исследований проводили с использованием программы MS Office Excel ХР.

Результаты и обсуждение

Для изучения устойчивости бацилл использовали штаммы В. anthracis 81/1, 44/1СО и 27, содержащие плазмиды рХОГ и рХ02+, выделенные из объектов внешней среды или больных животных и отличающиеся по данному признаку от вакцинных штаммов СТИ - 1 (рХ01+, рХ02") и В. anthracis 55 «ВНИИВВиМ» (рХ01+, рХ02~); В. anthracis Davies "S"-атоксигенного, капсульного штамма (рХОГ, рХ02+); изогенных штаммов В. anthracis 81/1 и 44/1 СО (как бесплазмидных, так и R (рХОГ, рХ02") вариантов), а так же модельных бацилл Bacillus siibtilis RAS, В. cereus АТСС 6464, В. thuringiensis var.gallería 696, В. thuringiensis var. thuringiensis pasteur.

Рис. 1 демонстрирует показатели их устойчивости к растворам тестовых дезинфицирующих средств (водорода перекиси медицинской, хлорамина) и текучему пару при 100° С

Рис. 1. Устойчивость спор различных штаммов возбудителя сибирской язвы и модельных бацилл к перекиси водорода, хлорамину и текучему пару

Показано, что гибель спор стационарной тест-культуры, полученной путём двукратного прогревания при 60° С с 15 мин интервалом, взвеси возбудителя сибирской язвы (штаммы В. апЖгаая 81/1, 27, 44/1 СО и СТИ 1 в концентрации 2><109 спор/мл) наступала после 55 мин воздействия 6,0 % раствора водорода перекиси медицинской. Они обладали 11-12 ч

устойчивостью к 10,0 % раствору хлорамина и 3 ч - к текучему пару, тогда как 10,0 % растворы фенола не инактивировали их за 10 ч.

По сравнению с вирулентными штаммами (В. амЬгасЬ 81/1, 44/1СО и 27) вакцинные штаммы возбудителя сибирской язвы (В. аЫЪгас'к СТИ - 1 и 55 «ВНИИВВиМ»), а также модельные штаммы бацилл {В. зиЫПЬ, В. сегет, В. гЫтп&етО) характеризовались более низкой или сравнимой по отдельным показателям устойчивостью к воздействию перечисленных выше факторов.

Это позволяет рекомендовать использование в лабораторных условиях в качестве споровых тестовых микроорганизмов для оценки спороцидной активности новых дезинфицирующих средств штаммы В. аШИгааз 81/1, 44/1СО и 27, тогда как предварительные исследования (по соображениям биологической безопасности) могут быть выполнены на вакцинных штаммах В. апЛгасгя СТИ - 1 или 55 «ВНИИВВиМ».

Выяснено, что наличие белковых примесей снижает, а повышение концентрации средств, температуры рабочих растворов и времени экспозиции увеличивает спороцидную активность всех исследованных классов дезинфицирующих средств (хлорсодержащих, кислородсодержащих и композиций на основе ЧАС). При этом наиболее высокая активность средств отмечается при температуре+55±2 °С.

Для решения основной цели диссертационного исследования взято 5 кислородсодержащих («ПФК-1», «ПФК-А», «ПФК-М», «Дезинбак-супер», «Водорода перекись медицинская»), 9 хлорсодержащих («Пресепт», «Жавель-Клейд», «Ди-Хлор», «ДСГК», «Люмакс-Хлор Лайт», «Люмакс-Хлор», российский и китайский «Хлорамин Б») и 16 средств на основе ЧАС: («Новодез-Форте», «Бриллиант», «Лизоформин 3000», «Лизафин», «Септодор-Форте», «Ника-Септ», «Велтаб», «Велтолен», «Диабак», «Бромосепт-50», «Лайна-Мед», «Рик-Д», «Ника-Дез», «Дезкон», «Эффект-Форте»), Последняя группа весьма обширна и содержит не химически чистые соединения, а композиции ЧАС с другими активными действующими веществами (глутаровый альдегид, глиоксаль, различные спирты и др.) или разлйчными функциональными добавками (третичные соли аминов, красители, отдушки и т.д.). В связи с этим исследованная нами группа композиций на основе ЧАС для оптимизации процесса их сравнения разбита на 2 большие подгруппы: ЧАС с глутаровым альдегидом (ГА) и ЧАС с другими (помимо ГА) функциональными добавками. Эта терминология отражена во всех последующих материалах.

Рис. 2. Эффективность композиций на основе ЧАС при обеззараживании поверхностей, санитарно-технического оборудования и изделий медицинского назначения, контаминированных спорами возбудителя сибирской язвы

Представлены режимы обеззараживания изученными классами дезинфицирующих средств поверхностей в помещениях, санитарно-технического оборудования и различных объектов (белья, посуды и изделий медицинского назначения), содержащих споры возбудителя сибирской язвы.

Выявлено, что среди композиций ЧАС с ГА («Септодор-Форте», «Новодез-Форте», «Бриллиант», «Лизафин», ««Лизоформин 3000») при обеззараживании поверхностей и санитарно-технического оборудования наиболее активными оказались «Новодез-Форте» и «Септодор-Форте», проявляющие спороцидную активность в 10,0 % концентрации (по препарату) при 120 мин экспозиции. Все остальные композиции на основе ЧАС («Ника-септ», «Велтаб», «Велтогран», «Велтолен», «Диабак», «Бромосепт-50», «Лайна-Мед», «Дезэффект», «РИК-Д», «Эффект-Форте», «Ника-Дез», «Септодор») даже в более высоких концентрациях не оказывали спороцидного действия. (Рис. 2)

концентрация^ ш Инструменты

Рис. 3. Эффективность композиций на основе ЧАС при обеззараживании изделий медицинского назначения и белья, контаминированных спорами возбудителя сибирской язвы

При обеззараживании изделий медицинского назначения наиболее высокую спороцидную активность (2,0 % - 90 мин) показали «Лизафин», «Лизоформин 3000», «Новодез-Форте» (средства на основе ЧАС с ГА). Другие композиции на основе ЧАС («Ника-дез», «Бромосепт-50», «Лайна-Мед», «Велтаб», «Велтогран») оказались активными в концентрациях 2,0 -3,0 % и экспозиции 120 мин (Рис.3). Близкие к ним режимы наблюдались при обеззараживании посуды. На содержащем споры сибирской язвы белье высокой спороцидной эффективностью обладали композиции ЧАС с ГА («Лизоформин 3000», «Лизафин», «Бриллиант», «Септодор-Форте»), проявляющие дезинфицирующую активность в 2,0-10,0 % концентрации при 120 мин экспозиции. Режимы обеззараживания при использовании композиций на основе ЧАС без ГА колебались в широких пределах из-за неоднородности входящих в их состав компонентов. Наиболее активными оказались дезсредства «Лайна-Мед» (2,0 %), «Велтогран» (2,5 %), «Бромосепт-50» (2,5 %).

Рис. 4. Эффективность хлорсодержащих средств при обеззараживании поверхностей, санитарно-технического оборудования и изделий медицинского назначения, контаминированных спорами возбудителя сибирской язвы

Хлорсодержащие соединения («Пресепт», «Жавель-Клейд», «Ди-Хлор», «ДСГК», «Люмакс-Хлор Лайт», «Люмакс-Хпор», «Хлорапин») вызывали гибель спор возбудителя сибирской язвы на контаминированных поверхностях и санитарно-техническом оборудовании в 2,0-3,0 % (по АХ) концентрациях, являясь наиболее эффективными для этих объектов спороцидными средствами (Рис. 4). Препараты этого класса проявляли подобное действие при обеззараживании белья, посуды и изделий медицинского назначения только в 5,0-6,0 % (по АХ) концентрациях, за исключением композиционного средства «Хлорапин», эффективного в 2,0 % (по АХ) концентрации при экспозициях 90 - 120 мин. (Рис. 5)

Рис. 5. Эффективность хлорсодержащих средств при обеззараживании посуды и белья, контаминированных спорами возбудителя сибирской язвы

Группа кислородсодержащих соединений («ПФК-1», «ПФК-А», «ПФК-М», «Дезинбак супер») обладала на поверхностях, санитарно-техническом оборудовании и белье более низкой спороцидной активностью, чем 6,0 % раствор водорода перекиси медицинской с моющими средствами. Наиболее активным на этих же объектах оказался препарат «Дезинбак супер» в 2,0 % концентрации (Рис. 6).

Рис. 6. Эффективность кислородосодержащих средств при обеззараживании поверхностей, санитарно-технического оборудования и изделий медицинского назначения, контаминированных спорами возбудителя сибирской язвы

Режимы использования кислородсодержащих соединений («ПФК-М», «ПФК-А», «ПФК-1») для обработки посуды и медицинского инструментария были аналогичны таковым при применении 5,0 % и 8,0 % растворов водорода перекиси медицинской (Рис. 7)

Рис. 7. Эффективность кислородсодержащих средств при обеззараживании посуды и изделий медицинского назначения, контаминированных спорами возбудителя сибирской язвы

Для обоснования экономической целесообразности использования исследованных дезинфицирующих средств проведен анализ стоимости их спороцидных рабочих концентраций. Показатели стоимости концентратов исследованных классов соединений взяты на основании данных коммерческой фирмы БИНГО Гранд (по состоянию на 2007-2008г.г.)

Стоимость 1 л рабочего раствора средств, используемых при деконтаминации от спор возбудителя сибирской язвы поверхностей и санитарно-технического оборудования (Рис. 8), колебалась от 3,2 до 420,0 руб. Наиболее дешевыми оказались давно апробированные в дезинфекционной практике хлорсодержащие средства - «хлорамина Б» (1,7-6,8 руб/л) и «ДСГК» (2,0 - 3,0 руб/л). Сопоставимым по стоимости было использование для этих целей водорода перекиси медицинской, тогда как большинство композиций на основе ЧАС обладали низкой спороцидной эффективностью, токсичностью входящих в их состав добавок и высокой стоимостью рабочих растворов.

Рис. 8. Сравнительная стоимость спороцидных рабочих концентраций средств, используемых для обработки поверхностей и санитарно-технического оборудования, контаминированных спорами возбудителя сибирской язвы

Стоимость 1 литра спороцидных рабочих растворов для обработки белья, посуды и медицинского инструментария отличалась друг от друга незначительно, хотя при этом некоторые композиции ЧАС, с учетом их минимального разрушающего воздействия на обеззараживаемые объекты, были привлекательнее хлор- и кислородсодержащих средств.

используемых для обработки изделий медицинского назначения, контаминированных спорами возбудителя сибирской язвы

Наименее затратными при проведении обеззараживания методом погружения были «Лайна - мед», «Дезкон», «Рик-Д», «Лизафин», «Ника-септ», «Лизоформин 3000», «Дезинбак -Супер», «Водорода перекись медицинская», «Хлорапин», «ДСГК», «Хлорамин». (Рис. 9)

Представленные данные по сравнению стоимости спороцидных рабочих концентраций исследованных средств позволяют потребителям более целенаправленно ориентироваться в экономической целесообразности их выбора при решении вопросов по обеззараживанию различных объектов, контаминированных спорами возбудителя сибирской язвы.

Методами электронной микроскопии показано, что при действии хлор- и кислородсодержащих соединений отмечается преимущественно повреждение белков споры, выражающееся в их денатурации, деструкции и последующей инактивации нуклеиновых кислот, чем они отличаются от ЧАС, проявляющих в основном активность в отношении мембран и оболочек споры, приводящих к «раздеванию» последней, набуханию и осмотическому лизису. Различные добавки (например, ГА, АХ и др.) к композициям на основе ЧАС могут сделать деструкцию спор необратимой.

Таким образом, подтверждается концепция о перспективности использования в качестве спороцидов многокомпонентых дезинфекционных средств с широким спектром антимикробного действия, что может быть использовано для оценки их эффективности за счёт различных композиционных добавок.

Эти данные позволяют использовать метод электронной микроскопии для отбора среди многокомпонентных дезинфицирующих средств композиций, обладающих высокой спороцидной активностью, а также прогнозировать возможный механизм их действия в отношении спор возбудителя сибирской язвы.

ВЫВОДЫ

1. Впервые в ходе экспериментальных исследований показано, что споры вирулентных штаммов В. апЛгат (81/1, 27, 44/1СО) по сравнению с вакцинными (В. апЛгат СТИ-1 и 55 ВНИИВВиМ) и модельными штаммами других бацилл (В. яиЫШз, В. сегеш, В. 1)\ипп£{ет1$, В. я1еагоЛегторкИш) являются более устойчивыми к действию стандартных тестовых химических соединений (хлорамин, фенол, водорода перекись медицинская) и текучему пару (при 100°С). Данные штаммы должны быть использованы в качестве тестовых при контроле спороцидной активности дезсредств.

2. Разработан алгоритм изучения в лабораторных условиях

спороцидной активности дезсредств, включающих 2 этапа:

1) предварительный - с использованием штаммов В. апЛгаси> СГИ-1 и

55 ВНИИВВиМ,

2) окончательный - с использованием одного из вирулентных штаммов

В. апЛгасй 81/1 44/1 СО и 27

3. Повышение концентрации рабочих растворов исследованных классов дезинфицирующих средств (композиций на основе ЧАС, кислород-и хлорсодержащих препаратов) и температуры с 18° С до 55° С увеличивает, а добавление белковых примесей (в виде 40 % НЛС) - снижает их спороцидную активность.

4. Удовлетворительная спороцидная активность выявлена у 32 дезинфицирующих композиций, относящихся к четвертично-аммониевым соединениям (19), кислород- (6) и хлорсодержащим (7) средствам.

5. Разработаны эффективные режимы обеззараживания исследованными дезинфицирующими средствами различных объектов, контаминированных спорами возбудителя сибирской язвы, которые позволяют рекомендовать:

- для поверхностей, санитарно-технического оборудования и посуды -хлор и кислородсодержащие средства;

- белья - композиции на основе ЧАС;

- изделий медицинского назначения - композиции на основе ЧАС и кислородсодержащие средства;

- ветоши - все классы исследованных препаратов.

6. Показано значительное колебание стоимости спороцидных рабочих концентраций исследованных дезинфицирующих средств в зависимости от класса соединений и вида обрабатываемого объекта.

7. Методами электронной микроскопии подтверждена спороцидная эффективность рабочих концентраций изученных классов дезинфицирующих средств и продемонстрировано изменение морфологических структур спор возбудителя сибирской язвы.

Список научных работ, опубликованных по теме диссертации

1. Иванова Е.Б., Курилов В.Я., Андрус В.Н., Елизаров В.В. Изменение тонких морфологических структур кишечной палочки, золотистого стафилококка и вакцинного штамма СТИ возбудителя сибирской язвы при действии дезинфицирующих средств «Велтосепт» и «Велтолен» (ЗАО «BEJ1T», Оренбург) // Современные технологии в диагностике особо опасных болезней: Матер. 4-й межгосуд. науч.-практ. конф. государств -участников. СНГ. - Саратов, 2003. - С.73 - 74.

2. Бочарова JI.M., Андрус В.Н., Варыханова Т.Г., Елизаров В.В., Крючкова Т.П Изучение антимикробной активности и отработка режимов дезинфекции препаратом «Лизоформин 3000» при особо опасных инфекциях // Методические документы и отчеты по санитарно-эпидемиологической охране территории РФ (реферативный сборник) -Саратов, 2003,- С. 25-26.

3. Елизаров В.В., Елизарова А.И., Андрус В.Н., Попов С.Ф. Вскрытие некоторых механизмов действия дезинфицирующих средств на микробные клетки // Медико-биологические и психолого-педагогические аспекты адаптации и социализации человека: Матер. 3-й Всерос. науч.-практ. конф. -Волгоград: Волгоградское научное издательство, 2004. - С. 306 - 308.

4. Елизаров В.В., Андрус В.Н., Липницкий A.B., Спиридонов В.А. Методические рекомендации по режимам обеззараживания четвертично-аммонийньши, хлорсодержащими и пероксидными препаратами различных объектов, зараженных возбудителями сибирской язвы // Методические документы и отчеты по санитарно-эпидемиологической охране территории РФ (реферативный сборник) - Саратов, 2006. - С. 11.

5. Андрус В.Н., Елизаров В.В., Спиридонов В.А. Сравнительная стоимость спороцидных рабочих концентраций некоторых композиций на основе ЧАС, кислород- и хлорсодержащих дезинфицирующих средств // Актуальные вопросы теории и практики дезинфектологии: Матер. Всерос. науч.-практ. конф., посвящ. 75-летию Научно-исследовательского института дезинфектологии Роспотребнадзора. - Москва: ИТПК ИТАР-ТАСС,2008. - Т.1. - С. 79-82.

6. Елизаров В.В., Андрус В.Н., Спиридонов В.А. Эффективность некоторых композиций на основе ЧАС при обеззараживании объектов, загрязненных спорами возбудителя сибирской язвы // Актуальные вопросы теории и практики дезинфектологии: Матер. Всерос. науч.-практ. конф., посвящ. 75-летию Научно-исследовательского института дезинфектологии Роспотребнадзора. - Москва: ИТПК ИТАР-ТАСС, 2008. - Т1.-С.108-111.

7. Андрус В.Н., Елизаров В.В., Спиридонов В.А. Оценка стоимости рабочих растворов средств, используемых для обеззараживания объектов, контаминированных спорами возбудителя сибирской язвы // Вестник Российской военно-медицинской академии. - Санкт-Петербург, 2008. -Т.1, № 2 (22) - С. 172- 173.

8. Буянов В.В., Никольская В.П., Андрус В.Н., Елизаров В.В. Разработка композиционных составов на основе пероксосольватов и оценка их эффективности в отношении особо опасных инфекций // Вестник РАМН. - 2007. - № 12. - С.34 - 37.

9. Елизаров В.В., Андрус В.Н., Спиридонов В.А. Эффективность некоторых композиций На основе ЧАС при обеззараживании объектов, загрязненных спорами возбудителя сибирской язвы // Дезинфекционное дело. - 2008. -№4.-С. 65-67.

10.Андрус В.Н., Елизаров В.В., Спиридонов В.А. Сравнительная стоимость спороцидных рабочих концентраций некоторых композиций на основе ЧАС, кислород- и хлорсодержащих дезинфицирующих средств // Дезинфекционное дело. - 2008. - № 4. - С.52 - 56.

ЕЛИЗАРОВ ВАСИЛИЙ ВЛАДИМИРОВИЧ ЭФФЕКТИВНОСТЬ СОВРЕМЕННЫХ ДЕЗИНФИЦИРУЮЩИХ СРЕДСТВ ПРОТИВ СПОР ВОЗБУДИТЕЛЯ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ

Автореферат

диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук

Формат 60x84 1/16. Печать офсетная. Бумага офсетная № 65. Гарнитура «Тайме». Тираж 100 экз. Заказ № 2356

Отпечатано в ООО «Бланк» Лиц. №3550 400131, г. Волгоград, ул. Скосырева, 2а

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Елизаров, Василий Владимирович

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. Обзор литературы

1.1 Характеристика и устойчивость спор возбудителя сибирской язвы 17 и других бацилл к действию различных факторов

1.2 Современные дезинфицирующие средства, используемые для 21 обеззараживания спор возбудителя сибирской язвы

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Глава 2. Материалы и методы исследования

2.1 Штаммы использованных в работе бацилл, материалы.

2.2 Изучаемые дезинфицирующие средства

2.3 Методы оценки спороцидной активности дезинфицирующих пре- 49 паратов

Глава 3. Сравнительная устойчивость штаммов возбудителя сибирской яз- 56 вы и других бацилл к некоторым физическим факторам и химическим соединениям

3.1 Сравнительная устойчивость спор различных штаммов возбудите- 56 ля сибирской язвы и других бацилл к тест - дезинфицирующим средствам и текучему пару

3.2 Влияние концентраций различных классов исследуемых дезинфи- 65 цирующих средств, экспозиции, температуры и белковой нагрузки рабочих растворов на устойчивость спор возбудителя сибирской язвы

Глава 4. Разработка режимов и сравнительная эффективность обеззаражи- 68 вания исследованными дезинфицирующими средствами различных объектов, контаминированных спорами возбудителя сибирской язвы

4.1 Разработка режимов обеззараживания различных поверхностей и 68 санитарно-технического оборудования

4.2 Разработка режимов обеззараживания белья («чистого» и с ос- 74 татками белковых загрязнений)

4.3 Разработка режимов обеззараживания посуды

4.4 Разработка режимов обеззараживания изделий медицинского на- 92 значения

Глава 5. Сравнительная стоимость спороцидных рабочих концентраций ис- 97 следованных композиций на основе ЧАС, кислород и хлорсодер-жащих дезинфицирующих средств.

Глава 6. Изменение тонких морфологических структур спор возбудителя 104 сибирской язвы как показатель спороцидной активности исследованных дезинфицирующихсредств

Введение Диссертация по биологии, на тему "Эффективность современных дезинфицирующих средств против спор возбудителя сибирской язвы"

Актуальность проблемы.

Для проведения адекватных дезинфекционных мероприятий необходимо использование современных высокоэффективных дезинфицирующих средств, приводящих к быстрой гибели возбудителей на контаминированных объектах. Споровые формы микроорганизмов являются наиболее устойчивыми к воздействию различных факторов внешней среды и химическим средствам, что затрудняет их элиминацию с различных объектов. В настоящее время в состав спороцидных дезинфицирующих средств входят преимущественно агрессивные компоненты (хлор, формальдегид, атомарный кислород и др.). Некоторые из них взрывоопасны, многие токсичны, химически активны и могут провоцировать различные внештатные ситуации, что затрудняет проведение дезинфекции помещений, оборудования и инвентаря в присутствии людей и животных. Растворы этих веществ, в силу своей активности, портят поверхности обрабатываемых объектов (коррозия, обесцвечивание пигментов лака, краски и изменение структур органических полимеров).

Идеальные спороцидные средства, по данным многих авторов [76, 120], должны обладать следующими свойствами:

• иметь высокую эффективность в отношении всех форм микроорганизмов;

• быть нетоксичными для человека и животных;

• не раздражать кожные покровы и слизистые оболочки;

• не обладать взрывоопасностью и горючестью;

• не иметь неприятного запаха;

• не коррозировать металлы;

• не повреждать лаки, краски или полимерные материалы;

• обладать высокой растворимостью и устойчивостью водных растворов, длительно сохраняя стабильность состава;

• сохранять активность в присутствии органических примесей и жёсткой воды;

• быть относительно дешёвыми;

• обладать моющими свойствами.

Такое дезинфицирующее средство, позволяющее проводить соответствующие мероприятия в присутствии животных и людей, не разработано, но его важность для практического здравоохранения и ветеринарии трудно переоценить [80, 135]. Следует отметить, что в последнее время в дезинфекционной практике появился целый ряд новых антимикробных композиций преимущественно четвер-тично-аммониевых средств (ЧАС) с добавками глутарового альдегида, спиртов, надуксусной кислоты, метасиликата натрия и др. компонентов, обладающих спо-роцидной активностью. Эти средства доступны, имеют низкую токсичностью, характеризуются относительной экологической безопасностью и дешевизной, что делает экономически целесообразным их широкое практическое использование в эпидемических очагах.

Важной проблемой для дезинфекции стали споровые микроорганизмы в т. ч. возбудитель сибирской язвы.

Сибирская язва - зоонозная антропургическая бактериальная инфекционная болезнь с контактным механизмом передачи возбудителя. Заболевание характеризуется преимущественным поражением кожных покровов, но встречается и в генерализованной форме. Относится к группе особо опасных инфекций. Резервуаром возбудителя служит почва, где происходят основные фазы персистенции бацилл. Причиной периодического неблагополучия по сибирской язве определенных мест и территорий является свойство сибиреязвенного микроба образовывать высокоустойчивые к неблагоприятным факторам внешней среды и длительно выживающие в ней споры.

На территории Российской федерации, а также в странах ближнего и дальнего зарубежья находится значительное количество неблагополучных по данному заболеванию регионов [49, 87]. Например, в Волгоградской области, по данным ежегодных отчётов ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии по Волгоградской' области», официально зарегистрировано 43 «активных» сибиреязвенных захоронения, расположенных на территории 19 районов. Всего в 33 районах области имеется 1271 захоронение, контаминированное возбудителем сибирской язвы, каждое из которых является потенциальным почвенным очагом данной инфекции.

Заболеваемость людей носит спорадический характер и в период с 1973 по 2005гг. в Волгоградской области было зарегистрировано 32 случая (от 1 до 4 человек в год).

Особое внимание привлек к себе возбудитель сибирской язвы после проведения в 2001 г. серии биотеррористических актов в США, повлекших заболевание и гибель людей, вызвавших необходимость реализации развёрнутого комплекса организационных и противоэпидемических мероприятий, направленных на локализацию и последующую ликвидацию возникших очагов инфекции [93].

В соответствии с санитарно-эпидемиологическими правилами [4, 5] при обеззараживании различных объектов, контаминированных спорами возбудителя сибирской язвы, рекомендуется использовать следующие средства: двутретьоснов-ную соль гипохлорита кальция (ДТС ГК), двухосновную соль гипохлорита кальция (ДСГК), нейтральный гипохлорит кальция (НТК), гипохлорит кальция технический (ГКТ), хлорную известь, хлорамин Б (или ХБ), перекись водорода (ПВ), едкий натр, формальдегид, дезоксон-1 или дезоксон-4. Но эти дезинфектанты эффективны в высоких концентрациях, токсичны и представляют определённую экологическую опасность.

Анализ 290 разрешённых к применению в Российской Федерации отечественных и зарубежных дезинфицирующих средств показал, что 149 из них обладают фунгицидным действием, 105 — туберкулоцидной активностью, 91 - рекомендованы при ВИЧ-инфекции и гепатитах и только 20 препаратов (отдельные альдегиды, хлорсодержащие и кислородсодержащие соединения) могут применяться как спороциды [16, 66].

Апробация спороцидных дезинфицирующих композиций крайне затруднена в связи с тем, что в действующих нормативных документах по проведению лабораторных испытаний подобных средств [17, 25, 44] не определены тест-штаммы возбудителя сибирской язвы. При выборе последних руководствовались приведёнными выше инструкциями, предусматривающими оценку устойчивости спор бацилл к действию физического фактора (текучий пар 100°С) и стандартных тестовых химических соединений (фенол, хлорамин, водорода перекись медицинская).

Направленный поиск позволил определить тест-штаммы В. anthracis (27, 81/1, 44/1 СО), обладающие наиболее высокой устойчивостью к действию вышеуказанных факторов, и использовать их при изучении спороцидной эффективности новых дезинфицирующих средств. Другие штаммы В. anthracis, являющиеся дефектными по плазмидному составу (В. anthracis СТИ, Davies, 55 ВНИИВВиМ и изогенные штаммы), наряду с модельными штаммами (В. subtilis, В. cereus, В. thu-ringiensis, В. stearothermophilus) отличались более низким уровнем устойчивости к некоторым из перечисленных выше факторов.

В данном исследовании впервые проведена оценка влияния на спороцидную активность различных концентраций новых хлорсодержащих, четвертично-аммониевых и кислородсодержащих соединений, изменения температуры и белковой нагрузки их рабочих растворов, а также представлены режимы обеззараживания ими различных объектов, контаминированных спорами сибирской язвы.

Методами электронной микроскопии продемонстрирована спороцидная активность исследованных дезинфицирующих средств и происходящие при этом изменения морфологических структур спор возбудителя сибирской язвы [53, 82].

ЦЕЛЬ РАБОТЫ: анализ эффективности дезинфицирующих композиций на основе четвертично-аммониевых, хлорсодержащих и кислородсодержащих соединений при обеззараживании различных объектов (поверхностей в помещениях, санитарно — технического оборудования, белья со следами белковых загрязнений, посуды лабораторной и с остатками пищи, а также изделий медицинского назначения из стекла, резины, пластика и металла), контаминированных спорами возбудителя сибирской язвы в лечебно-профилактических учреждениях и специализированных бактериологических лабораториях.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ:

• отобрать для последующих исследований тест-штаммы В. anthracis, наиболее устойчивые к действию тестовых химических соединений (фенол, хлорамин, перекись водорода) и текучему пару для оценки спороцидной активности новых дезинфицирующих средств в отношении спор возбудителя сибирской язвы;

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ:

1. Выявлена более высокая устойчивость спор вирулентных штаммов В. anthracis 81/1, 27, 44/1 СО к действию ряда тестовых химических соединений (хлорамин, фенол и водорода перекись медицинская) и текучего пара (при 100° С) по сравнению со спорами вакцинных штаммов В. anthracis 55 «ВНИИВВиМ» и СТИ-1, а также изогенных штаммов 81/1 и 44/1СО с различным набором собственных плазмид. Бациллы В. subtilis, В. cereus, В. thuringiensis, В. stearo-thermophilus были менее устойчивыми по некоторым позициям по сравнению со спорами вирулентных штаммов возбудителя сибирской язвы. В связи с этим предложено использование в качестве тест-микроорганизмов в опытах по оценке спороцидной активности дезинфицирующих средств спор В. anthracis 81/1, 27 и 44/1 СО.

2. Показана зависимость спороцидной активности исследованных химических д*> . зинфицирующих средств от их концентрации, температуры рабочих растворов, времени воздействия, а также наличия белковых примесей и вида обрабатываемого объекта (поверхности, санитарно-техническое оборудование, белье, посуда, ИМН).

Рекомендованы:

- для обработки поверхностей и санитарно-технического оборудования: хлор-содержащие («ДСГК», «Хлорапин», «Люмакс-Хлор», «Люмакс-Хлор Лайт») и кислородсодержащие («Водорода перекись медицинская», «Дезинбак супер») средства;

- для обработки белья: композиции на основе ЧАС («Лайна-Мед», «Лизафин», «Ника-Дез», «Рик-Д», «Дезкон» и др.);

- для обработки изделий медицинского назначения: композиции на основе ЧАС («Лайна-Мед», «Лизафин», «Ника-септ», «Рик-Д», «Дезкон», «Лизо-формин 3000» и др.), кислородсодержащие («Водорода перекись медицинская», «Дезинбак супер»), хлорсодержащие средства («ДСГК», «Хлорапин»)

ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ.

1. Определены тест-штаммы В. anthracis (81/1, 44/1 СО и 27), которые рекомендованы для использования в лабораторных условиях при оценке спороцидной активности дезинфицирующих средств.

2. Вакцинные штаммы возбудителя сибирской язвы {В. anthracis 55 ВНИИВиМ и СТИ-1) рекомендованы для предварительной оценки устойчивости спор данного микроорганизма.

3. Результаты исследований могут быть использованы при выработке оптимальной тактики проведения дезинфекционных мероприятий в очагах сибиреязвенной инфекции, возникших как в результате эпизоотий, так и при биотеррористических атаках.

4. Разработаны режимы обеззараживания дезинфицирующими средствами («Сеп-тодор», «Септодор-форте», «Бриллиант», «Новодез-Форте», «Лизоформин 3000», «Лизафин», «РИК-Д», «Гамма-Д», «Ника-септ», «Велтаб», «Велтогран», «Велтолен», «Диабак», «Бромосепт-50», «Лайна-Мед», «Дезэффект», «Эффект-форте», «Ника-Дез», «Дезкон», «ПФК-1», «ПФК-А», «ПФК-М», «Дезинбак супер», «Дезинбак V», «Люмакс-Стерил», «Люмакс-Хлор Лайт», «Люмакс-Хлор», «Ди-Хлор», «Хлорапин», «ДСГК», «Жавель-Клейд», «Пресепт») различных объектов, контаминированных спорами возбудителя сибирской язвы.

5. Представленные материалы по разделу обеззараживания при сибирской язве вошли в состав документов, утвержденных на федеральном уровне:

• «Инструкция №010-02 - И по применению дезинфицирующего средства «Велтолен» (производства ЗАО «ВЕЛТ», Россия) для дезинфекции воздуха и поверхностей способом распыления и орошения», утв. Генеральным директором ЗАО «ВЕЛТ», к.м.н. Е.Б. Ивановой 31 марта 2003 г., Москва, 2003.-7 с.

• «Инструкция №010-03 - И по применению дезинфицирующего средства «Велтолен» (производства ЗАО «ВЕЛТ», Россия) для целей дезинфекции и предстерилизационной очистки», утв. Генеральным директором ЗАО «ВЕЛТ», к.м.н. Е.Б. Ивановой 31 марта 2003 г., Москва, 2003. - 19 с.

• «Инструкция по применению дезинфицирующего средства «Двухосновная соль гипохлорита кальция (ДСГК)» ЗАО «Каустик», Россия», утв. Руководителем Департамента Госсанэпиднадзора Минздрава России С.И.Ивановым, Москва, 2003 - 25 с.

• «Инструкция №5/8-03 - Д по применению дезинфицирующего средства «Лайна — мед» (производства ООО «Хемилайн», Россия)», утв. Генеральным директором ООО «Хемилайн» Н.А. Шувариной 12 августа 2003 г., Москва, 2003.-22 с.

• «Инструкция по применению средства дезинфицирующего с моющим эффектом «Ника-септ» ООО НПФ «Геникс», Россия для целей дезинфекции и предстерилизационной очистки», утв. Генеральным директором ООО НПФ "Геникс" Г.С.Никитиным 8 августа 2003 г., Москва, 2004. - 23 с. «Инструкция, по применению средства «Бриллиант» для дезинфекции, совмещенной с предстерилизационной очисткой и стерилизацией изделий медицинского назначения», утв. Генеральным директором ООО Центр профилактики «Гигиена-Мед» Д.П. Бухариным 20 декабря 2004 г., Москва, 2004.- 16 с.

Инструкция №2 по применению средства «ПФК-М» (ФГУП «ГосНИИ БП», Москва) для обеззараживания объектов внешней среды, белья, посуды, изделий медицинского назначения и санитарно-технического оборудования, загрязненных возбудителями чумы, холеры и сибирской язвы», утв. Генеральным директором ООО ФГУП «ГосНИИ БП» д.т.н. В.Н. Злобиным 10 июня 2005 г., Москва, 2005. - 15 с.

Инструкция, №Д-01А/05 по применению дезинфицирующего средства «ДИАБАК» производства ООО «ИНТЕРСЕН - плюс» для целей дезинфекции и предстерилизационной очистки», утв. Генеральным директором ООО Центр профилактики «ИНТЕРСЕН - плюс» Д.А. Куршиным 12 апреля 2005 г., Москва, 2005. — 15 с.

Инструкция №15-2005 по применению средства «ДЕЗИНБАК супер» для целей дезинфекции и предстерилизационной очистки (ЗАО «Торговый дом «Оргхим»», Россия)», утв. Генеральным директором ЗАО «Торговый дом «Оргхим»» Н.В. Ходовым 12 сентября 2005 г., Москва, 2005. - 19 с. «Инструкция, №7/3 по применению средства «Хлорапин» (ЗАО «Петрос-пирт», Россия) в лечебно-профилактических учереждениях для дезинфекции», утв. Генеральным директором ЗАО «Петроспирт» В.В. Рябовым 06 февраля 2006 г., Москва, 2006. - 23 с.

Инструкция №1/06 по применению средства «ДЕЗИНБАК-V» для целей дезинфекции и стерилизации изделий медицинского назначения в лечебно-профилактических учреждениях (ЗАО «Торговый дом «Оргхим»», Россия) утв. Генеральным директором ЗАО «Торговый дом «Оргхим»» Н.В. Ходовым 11 апреля 2006 г., Москва, 2006. - 19 с.

• «Инструкция по применению дезинфицирующего средства «Дезкон» ООО «ДЕЗКОН», утв. Генеральным директором ООО «ДЕЗКОН» Н.Ю. Сорокиным 17 августа 2006 г. — Россия, 2006. — 19 с. 6. Материалы диссертационной работы используются в ФГУЗ «Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт» Роспотребнадзора при проведении занятий на курсах первичной специализации врачей, биологов по диагностике особо опасных инфекций, специфической индикации ООИ, санитарной охране территории и противоэпидемической защите населения.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ:

Материалы диссертационной работы доложены на 14 съезде национальной организации дезинфекционистов (6-8 октября 2004 г. Ростов-на-Дону) и 6-й межгосударственной научной-практической конференции государств СНГ 13-14 сентября 2005 г., на конференции «Актуальные вопросы теории и практики дезин-фектологии», посвященной 75-летию ФГУН «Научно-исследовательский институт дезинфектологии» Роспотребнадзора (22-23 мая 2008 г.); на ежегодных научных институтских и межлабораторных конференциях ФГУЗ «Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт» Роспотребнадзора, Волгоград (2001-2007 гг.).

ПУБЛИКАЦИИ: Материалы диссертации изложены в 10 печатных работах, в т. ч. 5 из них в изданиях, рекомендованных ВАК; вошли в состав 3-х завершённых государственных НИР и 16 хоздоговорных НИР, а также использованы при составлении 12 инструктивно-методических документов по применению в качестве дезинфицирующих средств в ЛПУ и при ликвидации в очагах сибиреязвенной инфекции.

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:

1. В качестве тест-штаммов при оценке эффективности новых спороцидных дезинфицирующих средств предлагается использовать В. anthracis 81/1, 27 и 44/1 СО, тогда как вакцинные штаммы В. anthracis СТИ - 1 и 55 ВНИИВВиМ могут быть рекомендованы на предварительных этапах исследования.

3. Отработаны и внедрены в практику режимы обеззараживания ряда объектов, контаминированных спорами возбудителя сибирской язвы для 32 дезинфицирующих средств («Септодор», «Септодор-форте», «Бриллиант», «Новодез-Форте», «Лизоформин 3000», «Лизафин», «РИК-Д», «Гамма - Д», «Ника-септ», «Велтаб», «Велтогран», «Велтолен», «Диабак», «Бромосепт-50», «Лайна-Мед», «Дезэффект», «Эффект-форте», «Ника-Дез», «Дезкон», «ПФК-1», «ПФК-А», «ПФК-М», «Дезинбак супер», «Дезинбак-V», «Люмакс-Стерил», «Люмакс-Хлор Лайт», «Люмакс-Хлор», «Ди-Хлор», «Хлорапин», «ДСГК», «Жавель-Клейд», «Пресепт»).

ОБЪЁМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ:

Работа изложена на 143 стр. машинописи, иллюстрирована 35 таблицами и

24 рисунками, состоит из введения, обзора литературы и 5 глав собственных исследований, заключения, выводов, списка использованных источников, включающего 163 работы: 91 отечественных и 72 иностранных авторов.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Елизаров, Василий Владимирович

Выводы

1. Впервые в ходе экспериментальных исследований показано, что споры вирулентных штаммов В. anthracis (81/1, 27, 44/1СО) по сравнению с вакцинными (В. anthracis СТИ-1 и 55 ВНИИВВиМ) и модельными штаммами других бацилл (В. subtilis, В. cereus, В. thuringiensis, В. stearothermophilus) являются более устойчивыми к действию стандартных тестовых химических соединений (хлорамин, фенол, водорода перекись медицинская) и текучему пару (при 100°С). Данные штаммы должны быть использованы в качестве тестовых при контроле спороцидной активности дезсредств.

2. Разработан алгоритм изучения в лабораторных условиях спороцидной активности дезсредств, включающих 2 этапа:

1) предварительный — с использованием штаммов В. anthracis СТИ-1 и 55

ВНИИВВиМ,

2) окончательный - с использованием одного из вирулентных штаммов В. anthracis 81/1, 44/1 СО и 27

3. Повышение концентрации рабочих растворов исследованных классов дезинфицирующих средств (композиций на основе ЧАС, кислород- и хлорсодержащих препаратов) и температуры с 18° С до 55° С увеличивает, а добавление белковых примесей (в виде 40 % HJIC) - снижает их спороцидную активность.

- для поверхностей, санитарно-технического оборудования и посуды -хлор и кислородсодержащие средства;

- белья — композиции на основе ЧАС;

- изделий медицинского назначения — композиции на основе ЧАС и кислородсодержащие средства;

- ветоши — все классы исследованных препаратов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Высокая устойчивость спор возбудителя сибирской язвы в объектах внешней среды является крупной проблемой при их обеззараживании. Она стоит не только перед здравоохранением, но и перед ветеринарной службой в связи с тем, что поиск заболевшего или погибшего от сибиреязвенной инфекции животного нередко начинается после того, как в стационаре контактировавшим с ним людям поставлен диагноз «сибирская язва», проведена дезинфекция и начато лечение. Причиной этого чаще всего является наличие на территории России, в том числе и в Волгоградской области, а также в странах ближнего и дальнего зарубежья большого количества стационарно неблагополучных пунктов (СНП) или сибиреязвенных захоронений животных.

Особую актуальность возбудитель сибирской язвы приобрел после проведения в 2001 г. серии биотеррористических актов в США, повлекших заболевание и гибель людей, вызвавших необходимость реализации развёрнутого комплекса организационных и противоэпидемических мероприятий, направленных на локализацию и последующую ликвидацию возникших очагов сибиреязвенной инфекции

3].

Актуальность проблемы расширения перечня эффективных дезинфицирующих средств для ликвидации очагов особо опасных инфекций или последствий использования патогенов в качестве агентов БО отмечалась приказом №794 от 15.12.2005г. «Основные направления деятельности федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека» в, материалах многих Всеросийских научно-практических конференций (например: «Актуальные вопросы теории и практики дезинфектологии», посвященной 75-летию ФГУН «Научно-исследовательский институт дезинфектологии» Роспотребнадзо-ра, состоявшейся 22-23 мая 2008г в г.Москва), и другими нормативными документами.

В последнее время появилась концепция о перспективности разработок многофункциональных дезинфицирующих средств с широким спектром антимикробного действия, крайне необходимых в случае биологической опасности или биотерроризма с использованием микст-микроорганизмов. Требования к таким дезинфицирующим средствам достаточно жесткие. Они должны обладать антимикробной (в том числе против возбудителей особо опасных инфекций), противовирусной и фунгицидной активностью в низких рабочих концентрациях, не коррозировать обрабатываемые поверхности, не обесцвечивать ткани, хорошо растворяться в воде, не обладать неприятным запахом, характеризоваться относительной дешевизной эффективных рабочих растворов, иметь длительные сроки хранения, не обладать токсичностью и быть экологически безопасными для окружающей среды. В настоящее время перечень официально разрешённых к применению в России средств приближается к 500 препаратам, ряд из которых обладают активностью в отношении споровых форм микроорганизмов. К сожалению, их количество крайне ограничено, что указывает на необходимость более интенсивных разработок и совершенствования методов оценки спороцидной активности новых дезинфицирующих средств. В настоящее время показано, что такой активностью обладают преимущественно хлор- и кислородсодержащие средства, а также композиции на основе ЧАС, содержащие различные композиционные добавки. Последняя группа средств весьма обширна и взята нами за основу в связи с тем, что во всех утвержденных инструктивно-методических документах представлено их фирменное название, а в составе дается указание на наличие ЧАС в качестве основного действующего вещества с различными функциональными добавками. Среди них могут быть соединения, являющиеся самостоятельными активными действующими веществами (глутаровый альдегид, глиоксаль, ПМГМ, метасиликат натрия, различные спирты) или вспомогательные «функциональные добавки», усиливающие действие всей исследуемой композиции (третичные соли аминов, красители, отдушки и т.д.) и иногда просто имеющие определение как добавки или отдушки. В связи с этим группа композиции на основе ЧАС нами разбита на 2 большие подгруппы: ЧАС с глутаровым альдегидом и ЧАС с другими (помимо ГА) функциональными добавками. Эта терминология отражена во всех представленных нами материалах. При этом учитывалось, что использование композиций ЧАС с ГА (по сравнению с составом ЧАС + другие функциональные добавки) требовало обязательного использования не только «универсального нейтрализатора», но и дополнительного введения в его состав химических веществ, вызывающих нейтрализацию альдегидов.

По данным иностранных исследователей, например, фирмы STERIS (2005г), при характеристике бацилл в порядке убывания их устойчивости к действию химических дезинфицирующих средств приводит следующую последовательность: Bacillus stearothermophilus, Bacillus pumillus, Bacillus subtilis, Bacillus cereus, Bacillus circulans, Clostridium sporogenes, Clostridium botulinum, Clostridium tetani. В России в действующих в настоящее время инструкциях по оценке эффективности новых дезинфицирующих средств [17, 25] отсутствуют конкретные указания на тест-штаммы споровых форм микроорганизмов, которы могут быть использованы для этих целей. Ссылки на антракоид (1968г.) [25] неубедительны, а данный вид отсутствует в указателе Берджи. В связи с этим, для проведения адекватных испытаний новых дезинфицирующих средств появилась необходимость провести оценку чувствительности спор возбудителя сибирской язвы, из которых были отобраны типичные представители (В. anthracis 81/1, 44/1СО, 27, а так же вакцинные штаммы СТИ — 1 и 55 «ВНИИВВиМ», изогенные штаммы 81/1 и 44/1 СО Rh TR и гетерогенные «модельные» бациллы (Bacillus subtilis, Bacillus cereus, Bacillus thuringiensis, B. stearotermophilus)) к действию текучего пара, растворам водорода перекиси медицинской, фенола и хлорамина.

В результате проведенных исследований, показано, что гибель спор возбудителя сибирской язвы (штаммы Bacillus anthracis 81/1, 27 и СТИ - 1 в концентрации 2x109 спор/мл) наступала после 55 мин воздействия 6,0 % раствора водорода перекиси медицинской. Они обладали в течение 11-12 ч устойчивостью к 10,0 % раствору хлорамина и 3 ч - к текучему пару, а 10,0 % растворы фенола не инактивировали их за 10 ч.

По сравнению с вирулентными штаммами (В. anthracis 81/1 и 27) возбудителя сибирской язвы вакцинные штаммы (В. anthracis СТИ — 1 и 55 J

У///// AT «

J J' У водорода перекись мсдицгтская

6% текучий пар 100 С хлорамин 10 % / у /

Рис. 18. Устойчивость спор различных штаммов возбудителя сибирской язвы и модельных бацилл к водорода перекиси медицинской, хлорамину и текучему пару

ВНИИВВиМ»), а также модельные штаммы бацилл (В. subtilis, В. cereus, В. thu-ringiensis) характеризовались более низкой или сравнимой по отдельным показателям устойчивостью к воздействию перечисленных выше факторов (рис. 18).

Это позволяет рекомендовать использование в лабораторных условиях для оценки спороцидной активности новых дезинфицирующих средств в качестве тест-штаммов В. anthracis 81/1 и 27 или любой другой штамм, соответствующий по устойчивости вышеперечисленным штаммам. В то же время по соображениям биологической безопасности предварительные исследования могут быть выполнены на вакцинных штаммах В. anthracis СТИ - 1 или 55 «ВНИИВВиМ» с постановкой контрольных опытов на штамме В. anthracis 81/1, проявляющем наиболее типичные биологические свойства. Необходимость работы с патогенными штаммами так же регламентирована указанием на необходимость постановки контрольных опытов по режимам обеззараживания объектов, контаминированных возбудителями ООИ, на вирулентных штаммах данных микроорганизмов [44].

В исследованиях использовали стационарную споровую культуру, полученную путём двукратного прогревания при 60° С с 20 мин интервалом взвеси (общее время воздействия не более 60 мин). По данным отечественной и зарубежной литературы многими исследователями использована методика воздействия температурного шока [66], вызывающего гибель вегетативных клеток в суспензии бацилл с сохранением их споровых форм, что даёт возможность отсекать вегетативные формы и неполноценые споры, хотя и снижая количество КОЕ по сравнению с нативной культурой.

Для решения основной цели диссертационного исследования взято 16 средств на основе ЧАС: («Новодез-Форте», «Бриллиант», «Лизоформин 3000», «Лизафин», «Септодор-Форте», «Ника-Септ», «Велтаб», «Велтолен», «Диабак», «Бромосепт-50», «Лайна-Мед», «Рик-Д», «Ника-Дез», «Дезкон», «Эффект-Форте»); 5 кислородсодержащих («ПФК-1», «ПФК-А», «ПФК-М», «Дезинбак супер», «Водорода перекись медицинская») и 9 хлорсодержащих («Пресепт», «Жа-вель-Клейд», «Ди-Хлор», «ДСГК», «Люмакс-Хлор Лайт», «Люмакс-Хлор», российский и китайский «Хлорамин Б») препаратов.

Все изученные средства имеют в России свидетельства о государственной регистрации и утвержденные Госсанэпиднадзором МЗ РФ методические рекомендации по применению этих препаратов для целей дезинфекции в здравоохранении, ветеринарии, пищевой промышленности, коммунальном хозяйстве и в быту.

Перечисленные средства в здравоохранении используются для медицинской дезинфекции поверхностей в помещениях, жесткой мебели, санитарно-технического оборудования, белья, посуды, медицинского инструментария при инфекциях бактериальной, вирусной и грибковой природы, а также многие из них используются для мытья и предстерилизационной очистки изделий медицинского назначения (включая эндоскопическую технику).

В результате проведённых исследований нами представлены режимы обеззараживания изученными классами дезинфицирующих средств поверхностей и различных объектов (белья, посуды и изделий медицинского назначения), контамини-рованных спорами возбудителя сибирской язвы.

Выявлено, что среди композиций ЧАС с глутаровым альдегидом («Септо-дор-Форте», «Новодез-Форте», «Бриллиант», «Лизафин», «Лизоформии 3000») при обеззараживании поверхностей наиболее активными оказались «Новодез-Форте» и «Септодор-Форте», проявляющие спороцидную активность в 10,0 % концентрации (по препарату) при 120 мин экспозиции (рис. 19). Но они обладали при этом повышенной сорбционной активностью ГА на обрабатываемых объектах.

Рис. 19. Эффективность композиций на основе ЧАС при обеззараживании поверхностей, санитарно-технического оборудования и изделий медицинского назначения, контаминированных спорами возбудителя сибирской язвы

Это их свойство, а также более высокая токсичность и экологическая опасность средств на основе ЧАС с ГА, в значительной степени снижало привлекательность их использования на данных объектах. Все остальные композиции на основе ЧАС («Ника-септ», «Велтаб», «Велтогран», «Велтолен», «Диабак», «Бро-мосепт-50», «Лайна-Мед», «Дезэффект», «РИК-Д», «Эффект-Форте», «Ника-Дез», «Септодор») даже при более высоких концентрациях (по препарату) не оказывали спороцидного действия. Группа окислителей («ПФК-1», «ПФК-А», «ПФК-М», «Дезинбак супер») обладала на поверхностях более низкой спороцидной активностью, чем 6,0 % раствор перекиси водорода с моющими средствами (рис. 20).

Рис. 20. Эффективность кислородосодержащих средств при обеззараживании поверхностей, санитарно-технического оборудования и изделий медицинского назначения, контаминированных спорами возбудителя сибирской язвы

Хлорсодержащие соединения («Пресепт», «Жавель-Клейд», «Ди-Хлор», «ДСГК», «Люмакс-Хлор Лайт», «Люмакс-Хлор», «Хлорапин») убивали споры возбудителя сибирской язвы на контаминированных поверхностях в 2,0-3,0 % концентрациях (по АХ), являясь наиболее эффективными для этих объектов спо-роцидными средствами (рис. 21). С учётом высокой спороцидной активности, низкой себестоимости и доступности применения данный класс соединений наиболее предпочтителен для обеззараживания поверхностей, загрязнённых спорами возбудителя сибирской язвы.

При обеззараживании белья высокой спороцидной эффективностью обладали композиций ЧАС с ГА («Лизоформин 3000», Лизафин, «Бриллиант», «Сеп-тодор-Форте»), проявляющие дезинфицирующую активность в 2,0-10,0 % концентрации при 120 мин экспозиции. Режимы обеззараживания при использовании композиций на основе ЧАС без ГА колебались в широких пределах из-за неоднородности компонентов, входящих в состав исследуемых композиций.

Рис. 21. Эффективность хлорсодержащих средств при обеззараживании поверх ноетей, санитарно-технического оборудования и изделий медицинского назначе ния, контаминированных спорами возбудителя сибирской язвы концентрация^ за

Инструменты бельё

15 у

Л /Л х? о? / £ У ^ J* J& Ж & У

Г Ж V f # S ✓ /

Рис. 22. Эффективность композиций на основе ЧАС при обеззараживании изделий медицинского назначения и белья, контаминированных спорами возбудителя сибирской язвы

Наиболее активными оказались дезсредства «Лайна-Мед» (2,0 %), «Велтаб» (2,5 %), «Бромосепт-50» (2,5 %) (рис. 22). Хлорсодержащие препараты проявляли спо-роцидный эффект при обеззараживании белья только в 5,0-6,0 % концентрациях (по АХ), за исключением композиционного препарата «Хлорамин», эффективного в 2,0 % концентрации (по АХ). Среди кислородсодержащих соединений на этих же объектах наиболее активным оказался препарат «Дезинбак супер» (2,0 %) (рис. 23). концентрация,%в посуда

ХлорЛэйт» «Хлорапин»

Рис. 23. Эффективность хлорсодержащих средств при обеззараживании посуды и белья, контаминированных спорами возбудителя сибирской язвы

При обеззараживании посуды и изделий медицинского назначения наиболее высокую спороцидную активность (2,0 % - 90 мин) показали «Лизафин», «Ли-зоформин 3000», «Новодез-Форте» (средства на основе ЧАС с ГА). Другие препараты на основе ЧАС («Ника-дез», «Бромосепт-50», «Лайна-Мед», «Велтаб», «Вел-тогран») оказались активными в концентрациях 2,0-3,0 % и экспозиции 120 мин. Хлорсодержащие средства на данных объектах обладали спороцидной активностью в концентрациях 5,0 % и более (по АХ) при экспозициях 90 - 120 мин (рис. 23). Режимы использования кислородсодержащих соединений («ПФК-М», «ПФК-А», «ПФК-1») для обработки посуды и медицинского инструментария были аналогичны таковым при применении 5,0 % и 8,0 % растворов перекиси водорода (рис. 24).

Рис. 24. Эффективность кислородсодержащих средств при обеззараживании посуды и белья, контаминированных спорами возбудителя сибирской язвы

Помимо других факторов (низкой токсичности, экологической безопасности, отсутствия повреждающего действия на обрабатываемые объекты и др.) крайне важна оценка стоимости рабочих растворов препаратов, обладающих спороцидной активностью.

Исходя из эффективных спороцидных концентраций рабочих растворов 32 иследованых композиций на основе ЧАС, кислород и хлорсодержащих средств, и стоимости концентратов исследованных классов соединений взяты на основании данных БИНГО Гранд (по состоянию на 2007 - 08 г.), проведён расчёт стоимости 1 л спороцидного рабочего раствора полученного из исследованных средств при обеззараживании контаминированных спорами возбудителя сибирской язвы поверхностей, санитарно-технического оборудования, белья, посуды и изделий медицинского назначения.

Полученные сводные данные по стоимости спороцидных растворов исследованных классов дезинфицирующих средств представлены в главе 5

Содержание активного хлора в исследованных хлорсодержащих растворах составляло 1,0-6,0 %, что отражало стоимость 1 л используемого спороцидного рабочего раствора - от 1,7 до 198,0 рублей. При этом для обработки различных поверхностей были необходимы более высокие концентрации средств «Пресепт», I I

ДСГК», «Хлорапин» и «Хлорамин Б» (Россия) (при уровне затрат от 6,8 до 198 руб), тогда как спороцидные концентрации остальных средств оценены в пределах 45,0-1,7 руб/л. Самая низкая цена 1 л спороцидного раствора отмечена для старых, давно апробированных в дезинфекционной практике дезинфицирующих средств -«Хлорамина Б» (1,7-6,8 руб/л) и «ДСГК» (2,0-3,0 руб/л).

Три пероксисольвата («ПФК-1», «ПФК-А» и «ПФК-М») обладают спороцидной активностью при обеззараживании всех исследованных объектов в весьма высоких 5-15 % (по ДВ- перекиси водорода) концентрациях (при стоимости 1 л спо-роцидных рабочих растворов от 80 до 144 руб, тогда как при использовании средства «Дезинбак супер» методом погружения или замачивания она составляла 7,0 руб, а при аэрозолькой обработке поверхностей - 28,0 руб). В сравнительном плане наиболее приемлемым является использование широко распространёного в дезинфекционной практике средства - «Водорода перекиси медицинской», являющейся в 6 % (по ДВ) концентрации активным спороцидом (при стоимости 1 л используемого рабочего раствора 8 руб).

Стоимость 1 л спороцидного рабочего раствора 16 композиций на основе ЧАС значительно варьировала в зависимости от многообразия входящих в их состав дополнительных компонентов, составляя для наиболее перспективных средств («Дезкон», «Лайна-мед», «Лизоформин 3000») от 2,5 до 7,11 руб/л по сравнению с 280,0-420,0 руб/л («Септодор-форте», «Новодез-форте») менее эффективных .спороцидных средств. При этом спороцидная активность при обеззараживании поверхностей, загрязненных спорами возбудителя сибирской язвы, выявлена только у 6 из исследованных композиций. Ограничения из-за токсичности добавок, высокой цены и трудности режимов для использования делает их применение на поверхностях практически невозможным.

Представленные данные позволяют более целенаправленно ориентироваться в экономической целесообразности выбора спороцидных дезинфицирующих средств, предназначенных для обеззараживания различных объектов, загрязненных спорами возбудителя сибирской язвы.

Выяснено, что наличие белковых примесей снижает, а повышение температуры рабочих растворов увеличивает спороцидную активность всех исследованных классов дезинфицирующих средств (хлорсодержащих, кислородсодержащих и композиций на основе ЧАС). При этом наиболее высокая активность средств отмечается при температуре + 55±2°С.

Методами электронной микроскопии показано, что при действии хлор- и кислородсодержащих соединений отмечается преимущественно повреждение белков споры, выражающееся в их денатурации, деструкции и в последующем инактивации нуклеиновых кислот, чем они отличаются от ЧАС, проявляющих в основном активность в отношении мембран и оболочек споры, приводящих к «раздеванию» последней, набуханию и осмотическому лизису. Различные добавки к композициям на основе ЧАС могут сделать деструкцию клеток необратимой даже при условии снижения концентрации высокотоксичных компонентов (например, ГА, АХ ионы Ag и др).

Таким образом, проведённое электронно-микроскопическое исследование подтверждает концепцию о перспективности использования в качестве спороци-дов многосоставных дезинфекционных средств с широким спектром антимикробного действия. Сам же метод показал перспективность его возможного использования для оценки влияния на спороцидную активность композционных препаратов различных входящих в их состав добавок.

Результаты исследований по изучению спороцидной активности дезинфицирующих средств позволяют расширить «Перечень дезинфекционных средств против микроорганизмов 1-2 групп патогенности», содержащийся в СП 1.3.128503, и рекомендовать испытанные 19 композиций на основе ЧАС: («Септодор», «Септодор-форте», «Бриллиант», «Новодез - Форте», «Лизоформин 3000», «Ли-зафин», «РИК-Д», «Гамма-Д», «Ника-септ», «Велтаб», «Велтогран», «Велтолен», «Диабак», «Бромосепт-50», «Лайна-Мед», «Дезэффект», «Эффект-форте», «Ника-Дез», «Дезкон»); 6 кислородсодержащих («ПФК-1», «ПФК-А», «ПФК-М», «Дезинбак супер», «Дезинбак V», «Люмакс-Стерил») и 7 хлорсодержащих («Люмакс-Хлор Лайт», «Люмакс-Хлор», «Ди-Хлор», «Хлорапин», «ДСГК», «Жавель

Клейд», «Пресепт») для обеззараживания различных объектов внешней среды (поверхности, белье, посуда, изделия медицинского назначения) в очагах особо опасных инфекций при сибиреязвенной инфекции.

Разработанные режимы обеззараживания препаратами различных объектов внешней среды, загрязненных возбудителем сибирской язвы вошли в утвержденные на федеральном уровне инсруктивно-методические документы, регламентирующие правомочность их использования в дезинфекционной практике.

126

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Елизаров, Василий Владимирович, Саратов

1. Активация перекиси водорода, создание твердых препаратов/ Лурик Б.Б., Обухова Н.В., Абрамова И.М., и др. // Современные методы и средства дезинфекции и стерилизации. — М. — 1989. С. 23 - 27.

2. Арефьева Л.И., Малевич Л.А., Федорова Л.С. Бактерицидная активность некоторых зарубежных препаратов // Основные направления дезинфекционного дела.- М. 1987. - С. 9 - 12.

3. Ашмарин И.Г., Воробьев А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. Л.'.Медицина. - 1962. — 232 с.

4. Безопасность работы с микроорганизмами I II групп патогенности (опасности) СП 1.2.011-94. - Госсанэпиднадзор России - М. - 1994. - 151 с.

5. Безопасность работы с микроорганизмами I II групп патогенности СП 1.3.1285-03. - Госсанэпиднадзор России. -М. — 2003. - 67 с.

6. Белова В.И., Волков Ю.П. Основные направления исследования в разработке дезинфицирующих средств // Научные основы дезинфекции и стерилизации: Сб. науч. тр. -М.- 1991. -С. 13-18.

7. Бинго Гранд Электронный ресурс. ресурс доступа: http://www.infodez.ru

8. Бургасов П.Н., Рожков Г.И. Сибиреязвенная инфекция. — М.:Медицина. — 1984.-201 с.

9. Вашков В.И. Антимикробные средства и методы дезинфекции при инфекционных заболеваниях. — М.:Медицина 1977. - 280 с.

10. Ю.Вашков В.И. Руководство по дезинфекции, дезинсекции и дератизации. М. - 1952.-654 с.

11. Вашков В.И. Средства и методы стерилизации, применяемые в медицине. -М., Медицина. 1974. - 368 с.

12. Гарин Н. С. Сибирская язва — В кн.: Вопросы противобактериологической защиты. / Сибирская язва. М.: Медгиз - 1960. - С. 128 —131.

13. Гигиенические требования к учреждениям, организациям, предприятиям и лицам, занимающимся дезинфекционной деятельностью / Санитарные правила СП 3.5.675-97. М. - 1998. -36 с.

14. Гланц С. Медико-биологическая статистика. Пер. с англ. М.: Практика. -1998.-459 с.

15. Дезинфицирующие средства, разрешенные для применения в Российской Федерации. // Справочник. — М. —1996. — вып. 1, ч. 1. — 152с.

16. Дезинфицирующие средства: Справочник. М.: Торговая компания «БИНГО ГРАНД».-2007.-336 с.

17. Единые инструктивно-методические указания 02.И.85 по изучению и отбору новых средств дезинфекции, стерилизации, безопасных для применения в практике: Утв. Министерством здравоохр. СССР. М. - 1985. - 21 с.

18. Изучение антимикробной активности и отработка режимов дезинфекции препаратом лизоформин-3000 при особо опасных инфекциях // отчет по НИР. -Волгоград,. -2003. -44 с.

19. Инструкция N739-68 по определению бактерицидных свойств новых дезинфицирующих средств: // Утв. зам. нач. Главного сан. эпид. управления Министерства здравоохранения СССР. — 1968. — 14 с.

20. Инструкция о мероприятиях против сибирской язвы / Утв. Министерством сельского хозяйства СССР 28 февраля 1953 г. -М., 1953 — 13 с.

21. Инструкция по использованию перекиси водорода с моющими средствами для целей дезинфекции // Утв. Начальником Главного сан.-эпид управления МЗ СССР Павловым А.В. № 858-70 от 29 августа 1970 г. М. - 1970 - 6 с.

22. О.Козловская JI.А., Бабенков Е.Д. и др. О роли коллоидно- химических явлений в процессе обеззараживания воды // Изв. АН СССР. Сер. биол. — 1980. — №3,-С.467-469.

23. Коротич А.С., Погребняк Л.И. Сибирская язва / Киев: «Урожай», 1976. -160с.

24. Методические рекомендации №28-156/6 по применению средства дезоксон-1 для целей дезинфекции и стерилизации // Утв. Зам. нач. ГУ карантинных инфекций МЗ СССР Имамалиевым О.Г. 24.12.80 г. -М. 1980. - 9 с.

25. Методические рекомендации по оценке иммунотоксических свойств фармакологических веществ. М. - 1987. — С. 7 - 14.

26. Методические указания № 11-114/3323-1 по применению дезоксон-4 для целей дезинфекции и стерилизации // Утв. Нач. Управления ГКСЭН РФ. Че-бураевым В.И 29.06.92 г. М. - 1992. - 13 с.

27. Методические указания № 1516-17 по применению грилена для целей дезинфекции // Утв. Нач. ГЭУ МЗ СССР Наркевичем М.И. от 3.07.89 г. М. -1989.-10 с.

28. Методические указания № МУ 75-113 по применению средства «Тепсихлор-70 А» (фирма «ПХФ Петтенс-Химия», Франция ) для дезинфекции при сибирской язве // Утв. Начальником Департамента Госсанэпиднадзора России Монисовым А.А. 30.05.1997 г. 14 с.

29. Методические указания №1359-75 по применению хлорамина для целей дезинфекции // Утв. Начальником Главного санитарно-эпидемиологического управления МЗ СССР В.Е. Ковшило 21 октября 1975 г. М. - 1975. - 8 с.

30. Методические указания №1360-75 по применению хлорной извести для целей дезинфекции // Утв. Начальником Главного санитарно-эпидемиологического управления МЗ СССР Ковшило В.Е., 21 октября 1975. -М.-1975.-6 с.

31. Методические указания №15-6/17 по применению ДСГК для целей дезинфекции // Утв. Начальником Главного санитарно-эпидемиологичес кого управления МЗ СССР М.И. Наркевичем 23 июля 1991г. М. - 1991. - 12 с.

32. Методические указания №28-6/23 по применению нейтрального гипохлори-та кальция для целей дезинфекции // Утв. Начальником Главного управления карантинных инфекций МЗ СССР Наркевичем М.И. 10 ноября 1988г. М. -1988.-11 с.

33. Методические указания по применению дезинфицирующего средства «ДЕЗЭФЕКТ» (ЗАО «Центр дезинфекции», Россия) // Утв. Руководителем Департамента госсаэпиднадзора Минздрава России Ивановым С.И. №113/277-09 от 20 августа 2001 г. М. - 2001. - 22 с.

34. Методические указания по применению средства Лизоформин 3000 (фирма Лизоформ, Германия) для целей дезинфекции. М. -1994. — 11 с.

35. Методы испытаний дезинфекционных средств для оценки их безопасности и эффективности. / Утв. Главным государственным санитарным врачом РФ Г.Г. Онищенко. М. - 1998. - С. 26.

36. Механизмы бактерицидного действия перекиси водорода. / Самойленко И.И., Васильева Е.И., Павлова И.Б., Туманян М.А. // Журн. мед. эпидемиологии и иммунобиологии. — 1983. — С. 30 — 32.

37. Микробиологическая диагностика сибирской язвы / Маринин Л.И., Онищен-ко Г.Г., Степанов А.В. и др. // М.: ВУНМЦ МЗ РФ. 1999. - 224 с.

38. Никитенко А.Г. Очищающий и бактерицидный эффект смесей алкилтриме-тиламмоний хлорида с неионогенными ПАВ. // Масло-жир. промышл. — М. — 1977.-№3.-С. 20-24.

39. Обеззараживание объектов при кишечных и капельных инфекциях бактериальной и вирусной этиологии перспективными средствами: // отчет по НИР ВНИИДиС: Крученок Т.Б. М. - 1985. - 59 с.

40. Обеззараживание препаратом "Септодор форте" объектов внешней среды, белья и посуды, контаминированных возбудителями чумы, холеры, туляремии, сапа, мелиоидоза и сибирской язвы // отчет по НИР ВолгНИПЧИ. — Волгоград, - 2000. - 6 с.

41. Оргхим»», Россия)», утв. Генеральным директором ЗАО «Торговый дом «Оргхим»» Ходовым Н.В. 12 сентября 2005 г. М. - 2005. - 19 с.

42. Обеззараживание средством «Люмакс Стерил» (ООО «Технодез», Россия) изделий медицинского назначения из различных материалов, загрязненных спорами возбудителя сибирской язвы» //отчет по НИР, ВолгНИПЧИ - Волгоград, 2004. - 7 с.

43. Определение антимикробной активности и отработка режимов дезинфекции препаратами Бромосепт и Велтолен при особо опасных инфекциях // отчет по НИР ВолгНИПЧИ. Волгоград, 2000. - 36 с.

44. Основные направления исследований в области создания дезинфицирующих препаратов / Белова В.И.,. Арефьева Л.И., Лиманов В.В. и др. // Актуальн. пробл. совершенствования дезинфекционных и стерилизационных мероприятий.-М. 1990.-Ч. 2.-С. 137-141.

45. Особенности механизма воздействия перекисного дезинфектанта ПВК-2 на микробные клетки и споры / Герасимов В.Н., Голобов Е.А., Бабич И.В. с со-авт. //Дезинфекционное дело. 1998. — №1. — С. 12-19.

46. ОСТ 42-21-2-85 "Стерилизация и дезинфекция изделий медицинского назначения. Методы, средства и режимы". М. — 1985. — С. 12.

47. Патоморфогенез сибирской язвы / Литусов Н.В., Васильев Н.Т., Васильев П.Г. и др.// Под ред. акад. РАМН Бургасова П.М. М.: Медицина, 2002. - С 6.

48. Перечень дезинфекционных средств, разрешенных Министерством здравоохранения РФ для применения на территории России (с 1995 по 1999 г.г.). -М. 2000. - 4 с.

49. Пероксольваты в дезинфектологии / Буянов В.В., Никольская В.П., Пудов О.Б. и др. — Черноголовка, 2000. 135 с.

50. Плетнев М.Ю. Косметико-гигиенические моющие средства. М.,1990.-С.142 - 158.

51. Поиск новых дезинфектантов среди катионных ПАВ и других соединений, разработка композиций на их основе // Отчет о НИР ВНИИДиС: Крученок Т.Б.-М.- 1983.-87 с.

52. Практическое пособие для подготовки врачей-бактериологов и эпидемиологов по вопросам противодействия биотерроризму / Онищенко Г.Г., Федоров Ю.М., Жилина Н.Л. и др. Волгоград: Нижневолжское книжное из-во, 2004. -233 с.

53. Приказ Госкомсанэпиднадзора РФ N 74 от 04.07.94 г. «О реализации основных направлений развития дезинфекционного дела». М., 1994. - 3 с.

54. Прокопенко Ю.И. Некоторые подходы к установлению дифференцированных требований к дезинфекции. // Науч. основы дезинфекц. и стерилиз.: Сб. науч. тр.-М.- 1991.-С. 19-21.

55. Пхакадзе Т.Я. Антисептические и дезинфицирующие средства в профилактике нозокомиальных инфекций / «КМАХ» 2002. — Том 4, № 1. - 6с.

56. Рекомендации АСПРЭ по выбору и применению дезинфицирующих средств- APIC // American Journal of Infection Control. 1996. - V.24. - С. 313 - 342.

57. Сборник важнейших официальных материалов по вопросам дезинфекции, стерилизации, дезинсекции и дератизации // Под редакцией академика РАМН М.Г. Шандала) (в 5 томах). М., 1994.

58. Сибирская язва / Бургасов П.Н., Черкасский Б.Л., Марчук Л.М., с соавторами. -М.: «Медицина», 1970. 158с.

59. Сибирская язва //Руководство по микробиологии, клинике и эпидемиологии инфекционных болезней. М.:Медицина, 1966. - Т.7. - С.295 - 326.

60. Современный подход к выбору дезинфицирующих средств в системе профилактики внутрибольничных инфекций (ВБИ) / Веткина И.Ф., Комарин-ская Л.В., Ильин И.Ю., Соловьева М.В. // "ФАРМиндекс Практик". - 2005.- вып.7. С.13 — 20.

61. Соколова Н.Ф. Влажная дезинфекция поверхностей, инфицированных спорами сибиреязвенной палочки. // Дисс. канд. наук. -М., 1951.

62. Сорокин В.М., Меринова JI.K. Изучение тонких морфологических изменений возбудителей мелиоидоза и чумы при воздействии дезинфектантов: // отчет по НИР (заключительный) Волгоград НИПЧИ. — Волгоград, 1978. — 48 с.

63. Тентов Г.А., Горовенко А.А. Современные средства дезинфекции // Военно -медицинский журнал. — 1995. -N 6.- С. 44 51.

64. Химическая энциклопедия / Ред. кол.: Кнунянц H.JL и др. М.: Советская энциклопедия. 1988. - Т. 1. - 623с.

65. Черкасский Б.Л. Закономерности территориального распространения и проявления активности стационарно неблагополучных по сибирской язве пунктов //Эпидемиология и инфекционные болезни. 1999. -№ 2.-С.10-14.

66. Шахбанов А.А. Ультраструктура Вас. anthracis, Вас. cereus. // Журн. мед. эпидемиологии и иммунобиологии. — 1975. — №6. — 12с.

67. Шестопалов Н.В. Задачи дезинфекции, дезинсекции и дератизации в обеспечении санитарно-эпидемиологического благополучия человека // Доклад на XIV съезде Национальной организации дезинфекционистов (6-8 октября 2004). Ростов-на-Дону. - 2004.

68. Anionactiv und Kationactiv Inside enthalten de Wasch und Reinigungeasmitle / Belling H., Hauminn H., Stein W. // Patent FRG № 2416745. 83.1975,99707. -1975.

69. Anthrax as a biological weapon / Inglesby Т., O.Toole Т., Henderson D. et al. // JAMA. 2002. - V.287. - P.2236 - 2252.

70. Bacterial spore resistance / Setlow P., Storz G.and Hengge-Aronis R. // American Society for Microbiology, Washington. 1999. - P. 217-230.

71. Baldry M. G. C., Fraser J. A. L. Disinfection with peroxygens / Crit. Rep. Appl. Chem. 1988. - V.22. - P.91 - 116.

72. Bayliss С. E., Waites W. M., King N. R. Resistance and structure of spores of Bacillus subtilis II J. Appl. Bacteriol. 1981. - V.50. - P.379 - 390.

73. Bayliss C.D., Waites W.M. The combinated effect hydrogen peroxide and ultraviolet irradiation on bacterial spores. // J. Appl. Bacteriol. 1979. - V.47. — P.263 -269.

74. Billota Y.I., Waye I. D. Hydrogen peroxide enteritis: the «snow white» sign. /Gastroentest Endosc. 1989. - V. 35 - P.428 - 430.

75. Block S.S. Peroxygen compounds. // Disinfection, sterilization, and preservation, 4th ed. Lea & Febiger, Philadelphia, Pa. 1991. - P. 167-181.

76. Patent USA N 4.073.888. Chlorine dioxide and quaternaiy ammonium salts as sterilizing agents. // 424/661, A01N 009/02 -1978.

77. Chopra L. Bacterial resistance to disinfectants, antiseptics and toxic metal ions // Soc. Appl. Bacteriol. Tech. 1991. - V.27. - P.45 - 64.

78. Cortezzo D.E., Setlow P. Analysis of factors that influence the sensitivity of spores of Bacillus subtilis to DNA damaging chemicals //J. Appl. Mycrobiol. -2004. V. 02. - P.495 - 499.

79. Crow S. Peracetic acid sterilization: a timeli development for a busy healthcare Industry. // Infect. Control Hosp. Epidemiol. 1992. - V. 13 - P. 11 - 113.

80. Devinsky F., Lacko J. // Tenside Detergent. 1985. - V.227, N1. - P. 10 - 15.

81. Devinsky, J.L. Disinfection and the control of nosocomial infection // Tenside Deterg. 1985. - V .227, N 1. - P. 10 - 15.

82. Dychdala G.R. In Disinfection, Sterilisation and Preservation 2nd Edn // Td. Seymour Block, Lea & FFebiger, Philadelphia. 1968. - P. 178 - 179.

83. Dychdala, G.R. Chlorine and chlorine compounds // Disinfection, sterilization, and preservation, 4th ed. Lea & Febiger, Philadelphia. -1991.-P. 131-151

84. Foster S. J. The role and regulation of cell wall structural dynamics during differentiation of endoscope-forming bacteria // J. Appl. Bacteriol. Symp. Suppl. -1994.-V. 76. P.25 —39.

85. Howard, D. College APIC guideline for selection and use of disinfectants // Am. J. Infect. Control. Aug., 1996. - V.24, N.4. - P. 313 - 342.

86. Inactivation of Bacillus anthracis spores / Whitney E.A., Beatty M.E., Taylor T.N. et all. // Emergion Infect. Diseases. June, 2003. - V.9, N 6. - P. 623-627.

87. Sagripanty Jose-Luis, Bonifacino A. Effect of salts and serum on sporicidal activity of liquid disinfectants. / J. AO AC Int. 1997. - V.6. - P. 1198 - 1207.

88. Killing of bacillus spores by aqueous dissolved oxygen, ascorbic acid, and copper ions. / Cross J.B., Currier R.P., Torraco D.J. et al. // Appl. Environ Microbiol. Apr., 2003. - V.69 (4). - P.2245 - 2252.

89. Killing of spores of Bacillus subtilis by peroxinitrate appears to be caused by membrane damage. / Genest P.C., Setlow В., Melly E. et al. // Microbiology. -2002. V.148. - P. 307 - 314.

90. Lensing, H. H., Oei. H. L. Study of the efficiency of disinfectants against an-trax spores. / Tijdschr. Diergeneeskd. 1984. - V. 109 - P.557 - 563.

91. Lim A.K., Disinfection and the control of nosocomial infection // Med. J. Malaysia. 1995. - V.50, N.4 - P.289 - 290.

92. Malchesky P. S. Peracetic acid and its application to medical instrument sterilization / Artif. Organs, 1993.-V. 17-P. 147-152

93. McDonnel G., Russel A.D. Antiseptics and Disinfectants: Activity, Action, and Resistance // Clinical Microbiol. Reviews. Jan., 1999. - V.12, N.l - P. 147-179.

94. Merianos J.J. Surface-Active Agents / Disinfection, sterilization and preservation // Block S.S. (Ed.). New-York: Lippincott Williams&Wilkins. 2001. -P.283 -321.

95. Meshanisms of resistance to antimicrobial agents. / Quintiliany R., Courvalin P., Murray P.R., et al. // Manual of clinical microbiology. USA: American Society of Microbiology. - 1995. - P. 1308 - 1326.

96. Mizak L, Meirzejewski J. Gamma radiation resistance of Bacillus anthracis spores // Med Dosw Mikrobiol. 2003. - V. 55(4) - P. 315 - 323.

97. Molecular sieving by dormant spore structures / Gerhardt P., Scherrer R., et al. // American Society for Microbiology, Washington, D.C. 1972. - P.68-74.

98. Murrell W. G. The biochemistry of the bacterial endospore. // Adv. Microb. Physiol. 1967.-V.I.-P. 133 -251.

99. Nicholson, W. L., Setlow P. Dramatic increase in the negative superhelicity of plasmid DNA in the forespore compartment of sporulating cells of Bacillus subtilis. II J. Bacteriol. 1990. - V. 172. - P. 7 - 14.

100. Patent USA N 4,518,585. Hydrogen peroxide disinfecting and sterilizing compositions / Green D.F., Urban V.L. // 05. 1985.

101. Patent USA N 4,518,585. Hydrogen peroxide disinfecting and sterilizing composition / Donald F. // 21. 05. 1985.

102. Patent USA N 4,937,072. In situ sporocidal disinfectant / Kessler J.H. // 26.06 1990.

103. Patent USA N 5362647. Compositions and methods for destroying hydrogen peroxide /Cook G.N. //08.11.94.

104. Patent USA N 6028104. Use of peroxygen compounds in the control of hairy wart disease. / Schidt et al. // 2000.

105. Resistance of spores / Roberts, T. A., Hitchins A. D., Gould G. W. et all, // The Bacterial Spore. Academic Press, New York, N.Y. 1969. - P. 611- 670.

106. Riesenman P. J., Nicholson W. L. Role of the spore coat layers in Bacillus sub-tilis resistance to hydrogen peroxide, artificial UV-C, UV-B, and solar radiation // Appl. Environ. Microbiol. 2000. - V. 66. - P. 620 - 626.

107. Russel A.D. Principles of Antimicrobial activity and resistance / Part II: Fundamental Principles of Activity // Disinfection, sterilization and preservation / Block S.S. (Ed.). New-York: Lippincott Williams&Wilkins. 2001. - P. 31 - 57.

108. Russell A. D. Bacterial spores and chemical sporicidal agents. /Clin. Microbiol. Rev. 1990. -V.3. - P. 99 - 119.

109. Russell A. D. Effect of liquid phase antibacterial agents/ The destruction of bacterial spores //Academic Press, Ltd., London, England. 1992. — P. 169 - 231.

110. Russell A. D. Microbial cell walls and resistance of bacteria to antibiotics and biocides / J. Infect. Dis. 1993. - V. 168. - P. 1339 - 1340.

111. Russell A. D. Plasmids and bacterial resistance to biocides // J. Appl. Microbiol. 1997 - V.82. - P. 155 - 165.

112. Rutala W.A. Disinfection and Sterilisation of patient care items. // Infect. Control Hosp.Epidemiol. - 1996. - V.17, N 6. - P. 377-384.

113. Rutala W.A., Weber D.J. Infection control: the role of disinfection and sterilization. //J. Hosp. Infect. 1999. -P.43 -55.

114. Rutala W.A., Weber D.J. Guideline for Disinfection and Sterilization in Healthcaie Facilities. // Infect. Control Practices Advisory Commitee. 2008. 158 P

115. Rutalla W.A., Weber D.J. New disinfection and sterilization methods // Emerging Infect. Dis. 2001. — N2. - P. 348-353.

116. Rutalla W.A., Weber D.J. Importance of lumen flow in liquid chemical sterilization. // Am. J. Infect. Emerging Infect. Dis. Control 1999. - P. 458 - 459.

117. Sagripanti J. L., Bonifacino A. Comparative sporicidal effects of liquid chemical agents //Appl. Environ. Microbiol. 1996. - V.62. - P.545 - 551.

118. Saltan, M. R. J. Lytik agents, cell permeability and monolayer penetrability // J. Gen. Physiol. -1968. P. 252 - 277.

119. Setlow В., Setlow C. A., Setlow P. Killing bacterial spores by organic hydroperoxides // J. Ind. Microbiol. 1997. - V. 18. - P. 384 - 388.

120. Setlow В., Setlow P. Small, acid-soluble proteins bound to DNA protect Bacillus subtilis spores from killing by dry heat. // Appl. Environ. Microbiol. 1995. -V. 61.-P. 2787-2790.

121. Setlow P. DNA in dormant spores of Bacillus species is in an A-like conformation // Molec. Microbiol. 1992. - V. 6. - P. 563 - 567.

122. Setlow P. Mechanisms for the prevention of damage to DNA in spores of Bacillus species. II Annu. Rev. Microbiol. 1995. - V. 49. - P. 29 - 54.

123. Setlow P. Mechanisms which contribute to the long-term survival of spores of Bacillus species. //J. Appl. Bacteriol. 1994. - V. 76. - P. 49 - 60.

124. Setlow P. Small acid-soluble, spore proteins of Bacillus species: structure, synthesis, genetics, function and degradation // Annu. Rev. Microbiol. 1988. — V.42.-P. 319-338.f

125. Shaker L. A., Russell A. D., Furr J. R. Aspects of the action of chlorhexidine on bacterial spores // Int. J. Pharm. 1986. V.34. - P.51-56.

126. Significant factors in the disinfection and sterilization of flexible endoscopes. / Vesley D, Norlien K.G. Nelson B. et all. // Am J. Infect. Control. -1992. V. 20 -P. 291 -300.

127. Some characteristics of dipicolinic acid-less mutant spores of Bacillus cereus, Bacillus megaterium and Bacillus subtilis /Zytkovic Т. H., Halvorson H. O., Hanson R., et al. // American Society for Microbiology, Washington, D.C. — 1972 P. 49 - 52.

128. Spore thermoresistance mechanisms / P. Gerhardt R. E., Marquis I., Smith R. A. et al. // Regulation of procaryotic development. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 1989. - P. 43 - 63.

129. Stanleu P.M. Efficacy of peroxygen compounds against glutaraldehyde -resistant mycobacteria // J. Infect. Control. Aug, 1999. - P. 339.

130. The bacterial spore: Mechanisms of resistance and dormancy / Gould G. Hurst W. A. // Academic Press, London, U.K. 1983. - V.2. - P. 397 - 444.

131. The efficacy of chemical agents in cleaning and disinfection programs / Penna T.C.S., Mazolla P.G., Martins A.M.S., et al.// AMC Infectiosus Diseases, Sept, 2001. -Nl, V.16. -P.1471 - 1479.

132. Trueman J.R., Hugo W.B. Inhibition and destruction of the microbial cell // Ed., New York and London: Academic Press. 1971. - P. 132 - 183.

133. Wahlen J., Jacobs P.A. Activation of hydrogen peroxide through hydrogen-bonding interaction with acidic alcohols: epoxidation of alkenes in phenol // Org. Lett. 2003. - V. 5 (10). - P. 1 111 - 1800.

134. Wardle M.D., Renninger G.M. Bactericidal effect of hydrogen peroxide on spacecraft isolates.//Appl. Microbiol. 1975. - V. 30.-P. 710 - 711.

135. William A. Rutala APIC Guideline for selection and use of disinfectans // Am. J. Infect. Control. 1996. - P. 313 - 342.

Информация о работе

Елизаров, Василий Владимирович
кандидата медицинских наук
Саратов, 2009
ВАК 03.00.07

Диссертация

Эффективность современных дезинфицирующих средств против спор возбудителя сибирской язвы - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы