Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Фармако-токсикологическое обоснование применения новых дезинфектантов в системе санитарно-профилактических мероприятий при инфекциях животных

ВАК РФ 06.02.03, Звероводство и охотоведение

Автореферат диссертации по теме "Фармако-токсикологическое обоснование применения новых дезинфектантов в системе санитарно-профилактических мероприятий при инфекциях животных"

На укописи

СУББОТИНА ОКСАНА ГРИГОРЬЕВНА

ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПРИМЕНЕНИЯ НОВЫХ ДЕЗИНФЕКТАНТОВ В СИСТЕМЕ САНИТАРНО - ПРОФИЛАКТИЧЕСКИХ МЕРОПРИЯТИЙ ПРИ ИНФЕКЦИЯХ ЖИВОТНЫХ

06.02.03 - ветеринарная фармакология с токсикологией

06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологней и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

5 ДЕК 2013

Воронеж - 2013

005542684

Работа выполнена в отделе мониторинга и прогнозирования инфекционных болезней ГНУ Уральского НИВИ Россельхозакадемии и на кафедре инфекционной и незаразной патологии ФГБОУ ВПО «Уральский государственный аграрный университет»

Научный руководитель доктор биологических наук,

профессор, академик Донник Ирина Михайловна

Официальные оппоненты: Аргунов Муаед Нурдннович

доктор ветеринарных наук, ФГБОУ

ВПО «Воронежский аграрный университет им.

Императора Петра I», профессор кафедры

терапии и фармакологии факультета

ветеринарной медицины и технологии

животноводства

Сашнина Лариса Юрьевна

кандидат ветеринарных наук, ГНУ

ВНИВИПФиТ РАСХН, ведущий научный

сотрудник отдела микробиологии, вирусологии

и иммунологии

Ведущая организация: ГНУ Всероссийский НИИ ветеринарной санитарии,

гигиены и экологии Россельхозакадемии, г. Москва

Защита состоится «26» декабря 2013 года в «_» часов на заседании

диссертационного совета Д 006.004.01 при ГНУ Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии Россельхозакадемии (ГНУ ВНИВИПФиТ РАСХН) по адресу: 394087, г. Воронеж, ул. Ломоносова, 114-6.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии Россельхозакадемии.

Автореферат размещен на официальном сайте ГНУ ВНИВИПФиТ Россельхозакадемии - http://www.nivipat.ru и официальном сайте ВАК РФ-http://vak2.ed.gov.ni

Автореферат разослан « 26» ноября 2013 г. / „

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат биологических наук, доцент Т.И. Ермакова

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В современных условиях ведения животноводства наблюдается тенденция к наращиванию поголовья животных, содержащихся на ограниченных площадях, что приводит к увеличению уровня заболеваемости различными инфекционными болезнями. На этом фоне у животных, и особенно у молодняка, в массовых масштабах проявляются инфекционные болезни, вызванные как патогенной, так и в большей степени условно - патогенной микрофлорой (Конопаткин A.A., Глушков A.A., 1991; Урбан В.П. и др., 1991; Бузлама B.C., Рецкий М.И., 2000).

При этом заболевания характеризуются большими экономическими потерями вследствие низкого уровня сохранности поголовья и прироста живой массы, резкого ухудшения качества продукции (Достоевский П.П., 1987; Джупина С.И., 1994; Прудников С.И., 1996; Паршин П.А., Шабунин C.B., 1999; Сулейманов С.М., 1999; Шахов А.Г., 2005; Рогачева Т.Е., 2007).

В комплексе противоэпизоотических мер на комплексах и специализированных фермах, наряду с оптимизацией условий содержания и кормления животных, важное значение имеют ветеринарно-санитарные мероприятия, направленные на предупреждение и ликвидацию инфекционных болезней животных, и создание благоприятных условий для эпизоотологического благополучия в целом (Донник И.М., Шкуратова И.А.,

Одним из главных этапов проведения мероприятий является дезинфекция, от качества которой зависит эффективность борьбы с инфекционным агентом (Нежданов А.Г., 2007; Шабунин C.B., 2009; Смирнов A.M., 2009)

К дезинфектантам предъявляются достаточно высокие требования: хорошая бактерицидная, вирулицидная и микоцидная активность; экономичность; степень устойчивости к органическим загрязнениям, небольшая экспозиция в пределах 1-2 часов, отсутствие раздражающего действия или запаха; простота в приготовлении, применении; безопасность для применения обслуживающего персонала и животных; экологичность; простота утилизации (Смирнов A.M., 2009; Дорожкин В.И., 2007; Антипов В.А., 2007). К сожалению, на сегодняшний день ни один из применяемых препаратов не обладает всеми перечисленными свойствами. Ассортимент доступных недорогих дезинфицирующих средств весьма ограничен, большинство из них обладают высокой токсичностью для животных и агрессивны по отношению к обрабатываемым объектам. В связи с этим, большую актуальность имеет поиск новых, недорогих, эффективных и вместе с тем безопасных дезинфицирующих средств и разработка методов их оптимального использования в ветеринарии.

Цель этой работы: дать фармако-токсикологическую оценку новых дезинфектантов для применения в системе санитарно-профилактических мероприятий при инфекционных болезнях животных.

Для реализации этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить эпизоотическую ситуацию по основным инфекциям в регионе

2007).

(на примере Свердловской области);

2. Изучить антимикробную активность новых дезинфицирующих препаратов на основе хлора («Део-хлор») и четвертичных аммонийных соединений («Део-стер» «Део-бактер», «Дезавид» и «Дезитол»);

3. Провести фармако-токсикологическую оценку препаратов «Део-хлор», «Део-стер», «Део-бактер», «Дезавид» и «Дезитол»;

4. Усовершенствовать систему санитарно-профилактических мероприятий при инфекционных болезнях животных с использованием новых дезинфицирующих препаратов.

Научная новизна

Впервые изучены бактерицидное, вирулицидное, токсическое и коррозионное действие препарата «Дезитол». В результате проведенных исследований впервые разработаны режимы и технологии применения новых препаратов («Део-хлор», «Део-стер», «Део-бактер», «Дезавид» и «Дезитол») для дезинфекции объектов ветеринарного надзора. Усовершенствована система санитарных мероприятий при инфекционных болезнях животных, способствующая снижению уровня заболеваемости и повышению сохранности животных. Изучена возможность эффективного использования дезинфицирующих препаратов для профилактики бактериальных (вызванных золотистым стафилоккоком и эшерихиями) и вирусных (панклейкопения кошек, герпесвирусная инфекция кошек, парвовирусный энтерит собак) инфекций у животных, содержащихся в питомниках и центрах реабилитации.

Практическая значимость и реализация результатов исследований

На основании проведенных исследований разработаны «Инструкция по применению дезинфицирующего средства «Део-хлор» в ветеринарии» (2013 г.), «Инструкция по применению дезинфицирующего средства «Део-бактер» в ветеринарии» (2013 г.), «Инструкция по применению дезинфицирующего средства «Део-стер» в ветеринарии» (2013 г.), утвержденные Департаментом ветеринарии Свердловской области.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1. Инфекционные заболевания сельскохозяйственных животных имеют ограниченное распространение в Свердловской области.

2. Новые современные дезинфицирующие средства («Део-хлор», «Део-стер», «Део-бактер», «Дезавид» и «Дезитол») обладают высокими бактерицидными, фунгицидными и вирулицидными действиями.

3. Система санитарных мероприятий с применением новых дезинфицирующих препаратов, способствует повышению эффективности противоэпизоотических мероприятий при профилактике инфекционных болезней животных, особенно при скученном их содержании в приютах и центрах временного содержания.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на Ученом совете ГНУ Уральского научно-исследовательского ветеринарного института Российской академии сельскохозяйственных наук (2010-2013 гг.), международной конференции «Современные проблемы диагностики, лечения и профилактики болезней животных и птиц» (Екатеринбург, 2010),

Всероссийской научно-практпческой конференции молодых ученных и специалистов «Инновационные решения актуальных проблем в АПК» (Екатеринбург, 2013); международной научно-практической конференции, посвященной ветеринарам ветеринарной науки «Обеспечение ветеринарного благополучия в животноводстве и птицеводстве» (Омск, 2013).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 5 печатных работ, из них 2 в издании, рекомендованном ВАК РФ (ж. «Аграрный вестник Урала»); 3 - инструкции по применению дезинфицирующих препаратов.

Личный вклад. Основной объем исследований проведен автором самостоятельно. Личный вклад составляет 75 %. Отдельные этапы проведения исследований выполнены при методической и консультационной помощи сотрудников отдела эпизоотического мониторинга и прогнозирования инфекционных болезней животных и отдела ветеринарной лабораторной диагностики ГНУ Уральского НИВИ Россельхозакадемии.

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, списка литературы. Материал изложен на 132 страницах машинописного текста, содержит 39 таблиц и 5 рисунков. Список литературы включает 154 источник, в том числе 26 зарубежный.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена в отделе мониторинга и прогнозирования инфекционных болезней ГНУ Уральского НИВИ Россельхозакадемии и на кафедре инфекционной и незаразной патологии ФГБОУ ВПО «Уральский государственный аграрный университет» в период 2010-2013 гг. в соответствии с Программой фундаментальных и приоритетных прикладных исследований по научному обеспечению агропромышленного комплекса Российской Федерации по темам «Разработка и внедрение эффективной системы оздоровительных мероприятий при смешанных острых респираторных болезнях крупного рогатого скота, обеспечивающей получение здорового молодняка, высокое качество биопродукции племпредприятий» (№ госрегистрации 01.2.00613099) и «Изучение эффективности новых средств для дезинфекции животноводческих помещений в сельскохозяйственных организациях молочного направления»

(№ госрегистрации 01201359406).

Определяли токсичность, бактерицидные, вирулицидные и микоцидные свойства следующих дезинфицирующих препаратов:

- «Део-хлор» представляет собой таблетки массой 3,4 г и гранулы со слабым запахом хлора, содержащих в качестве действующего вещества натриевую соль дихлоризоциануровой кислоты, а так же специальные функциональные добавки. Содержание активного хлора в средстве 44,5±5,5%. Производится в ООО «ДЕО» (г. Екатеринбург);

- «Део-бактер» представляет собой прозрачную бесцветную жидкость с запахом отдушки. Содержит в своем составе в качестве действующих веществ четвертичные аммонийные соединения в пересчете на

алкилдиметилбензиламмоний хлорид 18 %±1,5 % а так же функциональные и технологические компоненты и поверхностные активные вещества (ПАВ), стабилизирующие и антикоррозионные добавки и отдушки. Показатель активных водородных ионов (pH) средства 7,5±1,5. Средство не совместимо с мылами и анионными поверхностно-активными веществами; производится в ООО «ДЕО» (г. Екатеринбург);

- «Део-стер» представляет собой прозрачную жидкость светло желтого цвета. В качестве действующих веществ содержит глутаровый альдегид - 10,7

и алкилдиметилбензиламмоний- 26,75 %, а так же функциональные добавки неионогенные ПАВ, ингибиторы коррозии, красители и воду; pH 1,0%-ного раствора средства 7,0±1,0; производится в ООО «ДЕО» (г. Екатеринбург);

- «Дезавид» представляет собой прозрачную жидкость от бесцветного до желтого цвета. Допускается в процессе хранения выпадение незначительного осадка. Содержит в своем составе в качестве действующих веществ полигексаметиленгуанидин гидрохлорид 9% и алкилдиметилбензиламмоний хлорид 1%, а также функциональные компоненты и воду. pH 1% водного раствора средства 6,0±1,0 производится в ООО «Адекватные технологии» (г. Москва);

- «Дезитол» — средство на основе нанокомпозитных материалов производится в ООО «УРАЛНАНОТЕХ», (г. Екатеринбург).

В исследованиях использованы клинически здоровые белые мыши массой 18-25 г; крысы - 300-350 г; морские свинки - 350-400 г, крупный рогатый скот уральского типа черно-пестрого скота; собаки и кошки «Центра реабилитации животных» ФГБОУ ВПО «УрГАУ».

Оценку токсичности рабочих растворов дезинфицирующих средств проводили согласно «Методам лабораторных исследований и испытаний дезинфекционных средств для оценки их эффективности и безопасности» (2010), Москва.

Исследование бактерицидного, микоцидного и вирулицидного действия препаратов проводили согласно требованиям Р 4.2. 2643 - 10 «Методы лабораторных исследований и испытаний дезинфекционных средств для оценки их эффективности и безопасности».

Определение вирулицидного действия дезинфицирующих средств проводили на диплоидной линии клеток легкого эмбриона человека (A.C. № 3545014/28-13 от 27.01.83). Среда культивирования - смесь 1:1 сред Игла MEM и 199 с добавлением 10% СКРС (сыворотка крупного рогатого скота) и антибиотиков, в среду поддержания СКРС и антибиотики не добавляли. Доза посадки на пробирки - 200 тыс. кл./мл.

В работе использовали ДНК-содержащий аденовирус 6 типа (штамм Аденоид 6) - далее «аденовирус», Ad.6. Штамм Ad.6 получен из банка-музея ГБУ НИИ вирусологии РАМН им. Д.И.Ивановского. Аденовирус пассировали на клеточной культуре ЛЭЧ. Инфекционный титр Ad.6 - 5,01g ТЦД50/мл.

Определение бактерицидного действия дезинфицирующих средств проводили с использованием музейных бактериальных культур: Е. coli штамм

К-1257 - для оценки бактерицидной активности в отношении грамотрицательных бактерий, St.aureus штамм 906 - для оценки бактерицидной активности в отношении грамположительных бактерий. Рабочую суспензию тест-культур готовили в соответствии со стандартом мутности 1-Ю9 микробных тел в 1 мл (ФГУН «Государственный научно-исследовательский институт стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. JI.A. Тарасевича» Роспотребнадзора). Посев производили на M ПА, агар Чапека и на селективные питательные среды (среда Эндо, Энтерококк агар, Мальтоза-солевой агар, Кровяной агар).

Исследование на токсичность рабочих растворов дезинфицирующих средств проводили согласно «Методам лабораторных исследований и испытаний дезинфекционных средств для оценки их эффективности и безопасности» (2010, Москва) и в соответствии с «Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (2005, Москва).

Оценку коррозионной активности испытуемых препаратов проводили в соответствии с «Методикой определения и оценки коррозионной активности моющих и дезинфицирующих средств» (1974, Москва) и ГОСТа 9.908-85 «Металлические сплавы. Методы определения показателей коррозии и коррозионной стойкости».

Контроль качества дезинфекции проводили в соответствии с «Методическими указаниями по контролю качества ветеринарной дезинфекции объектов животноводства» (Правила проведения дезинфекции и дезинвазии объектов государственного ветеринарного надзора, приложение № 3).

Эпизоотологический мониторинг проведен на основании ретроспективного анализа показателей по основным болезням крупного рогатого скота, по данным ветеринарной отчетности 1-ВЕТ, 1А-ВЕТза период 2010-2012 гг.

Полученные результаты обработаны методами вариационной статистики (по Г.Ф. Лакину, 1968) с помощью стандартной программы Microsoft Excel, с определением критерия достоверности по Стьюденту.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Эпизоотическая ситуация по основным инфекциям на примере Свердловской области

Анализ эпизоотической ситуации, проведенный на основании данных годовой отчетности Департамента ветеринарии Правительства Свердловской области за 2010-2012 годы, свидетельствует об эпизоотическом благополучии региона по хроническим инфекционным заболеваниям — лейкозу (с 2012 г.), бруцеллезу (с 1996 г.) и туберкулезу(с 2005 г.).

В области с 2002 года внедрена комплексная программа по оздоровлению хозяйств от смешанных острых респираторных заболеваний крупного рогатого скота (Краснопёрое В.А., Хаматов М.Ф., Петрова О.Г., 1991). Согласно этой программе ежегодно проводятся диагностические исследования и

разрабатываются для сельскохозяйственных организаций лечебно-профилактические мероприятия против острых респираторных вирусных инфекций (ОРВИ). Проведены диагностические исследования на ПГ-3, ИРТ и ВД-БС в 2011 году у 278 голов, в 2012 году 497. В период с 2011 и 2012 гг. неблагополучных пунктов по ОРВИ выделено не было. В результате внедрения программы (1999-2008 гг.) в настоящее время наблюдается стабильная ситуация по ОРВИ у крупного рогатого скота в племенных хозяйствах Свердловской области.

Основной причиной отхода молодняка в Свердловской области в виде технологического отхода, санитарного убоя и падежа является колибактериоз, сальмонеллез и пастереллез. В некоторых районах (Алапаевский, Ачитский, Красноуфимский) общий отход к обороту стада в 1,5-1,9 раза превышает средние значения по области.

По причине падежа доля отхода телят в Свердловской области с 2008 по 2012 год составила от 85,0 до 89,7 %, по причине заболеваний вынужденный убой составил 45,6-59,4 %, санитарный убой молодняка крупного рогатого скота составил 38,1-52,8.

Таблица 1 - Доля молодняка по технологическому отходу крупного рогатого скота (на сельскохозяйственных предприятиях Свердловской области)

Показатель Годы

2 008 2 009 20 10 20 11 2 012

Падеж молодняка, % от общего 8 5 8 5,2 87 ,8 85, 86 8 9,7

Вынужденный убой молодняка, % от общего 5 7,9 5 8,3 59 ,4 53, 84 4 5,6

Санитарный убой молодняка 4 4,2 5 2,8 40 ,4 38, 31 3 8,1

С 2008 года прослеживается тенденция к увеличению падежа молодняка от общего числа животных, и снижение вынужденного и санитарного убоя крупного рогатого скота, за счет не совершенства мероприятий по ликвидации бактериальных инфекций на территории хозяйств.

Анализ эпизоотической ситуации среди мелких домашних животных (собак и кошек), выявили повсеместное распространение парвовирусного энтерита среди собак и панклейкопении у кошек. Результаты обследования «Центра реабилитации животных» и приютов показали стойкое не благополучие по этим заболеваниям. Заболеваемость парвовирусным энтеритом собак среди щенков составила 100 %, смертность 73,4 %. У кошек смертность от панлейкопении составила 35%.

Основной причиной повышенной заболеваемости является скученное содержание животных, постоянное поступление нового поголовья и трудности проведения дезинфекции.

3.2. Оценка бактерицидной активности дезинфицирующих средств

3.2.1 Изучение бактерицидной активности дезннфицирующнх средств суспензионным методом

Были проведены исследования бактерицидной активности растворов дезинфицирующих средств («Део-хлор» - в концентрации 0,06 %; «Део-бактер» - 2,0%; «Део-стер» - 1,0%; «Дезавид» - 1,0%) суспензионным методом в лабораторных условиях с применением бактериальных тест-микроорганизмов: Echerichia coli К-1257, St. aureus - 906), с экспозицией 30 и 60 минут.

При проведении исследований было выяснено, что препараты «Део-бактер» 2%, «Део-стер» 1%, «Део-хлор» 0,06% обладают хорошими дезинфицирующими свойствами в отношении тест-культур Е. coli, St. aureus при экспозиции 30 минут, с сохранением бактерицидного действия через 60 минут. У препарата «Дезавид» 1% через 60 минут наблюдалось снижение бактерицидной активности в отношении Е. coli и St. aureus, что подтверждалось отсутствием роста микроорганизмов на питательных средах.

3.2.2 Бактерицидная эффективность дезинфицирующих средств на различных тест-объектах в лабораторных условиях

Оценку бактерицидной эффективности ДС в испытуемых концентрациях («Део-хлор» - 0,06 %; «Део-бактер» - 2 %; «Део-стер» - 1% ,«Дезавид» - 1% и «Дезитол») проводили на тест-объектах (нержавеющая сталь, дерево, кафельная плитка, пластик) с экспозицией 30 и 60 минут. В качестве тест-микроорганизмов использовали Е. coli К-1257 и St. aureus 906.

При проведении исследований было выяснено, что при применении препарата «Део-хлор» 0,06% на тест-объектах прекращался рост тест-культур St. aureus и E.coli при экспозиции 30 минут, а через 60 минут сохранялся стойкий бактерицидный эффект. Препараты «Део-стер» 1%, «Део-бактер» 2% оказали слабые дезинфицирующие свойства в отношении E.coli, но при этом хорошую бактерицидную активность в отношении St. aureus при экспозиции 60 минут. При обработке препаратом «Дезавид» 1% наблюдался рост колоний St. aureus и E.coli. При аэрозольном применении препарата «Дезитол» после экспозиции 30 минут рост тест-микроорганизмов не наблюдали, но через 60 минут появлялся рост колоний на тест-объекте (дерево).

3.2.3 Изучение бактерицидной активности дезинфицирующих средств в лабораторных условиях

Исследования бактерицидной активности ДС («Део-хлор» - 0,015%, 0,06%; «Део-бактер» - 0,2%, 2,0%; «Дезавид» - 1,0%, 3,0%; «Део-стер» - 0,1%, 1,0%) проводили в лабораторных • условиях на рабочих поверхностях ламинарных шкафов с экспозицией 5 и 15 минут. С помощью стерильных ватных палочек, с поверхности каждого ламинарного шкафа отбирали смывы с поверхностей, с последующим посевом на питательные среды.

При оценке результатов было выяснено, что при применении препарата

«Део-бактер» в концентрации 0,2 %, «Део-стер» 0,1 % с экспозицией 5 минут рост микроорганизмов не превышал более 3 колоний, в результате чего препараты получили оценку удовлетворительно. При исследовании остальных препаратов с различными экспозициями (5 и 15 минут) отсутствовали. Препараты «Део-бактер» в концентрации 2,0 %, «Део-стер» 1,0 %, так же «Део-хлор» в концентрации 0,015%, 0,06%, «Дезавид» 1,0 % и 3,0 % с экспозициями 5 минут и 15 минут оказались удовлетворительными по показателям бактерицидной активности, при проведении дезинфекции рабочих поверхностей в бактериологической лаборатории по контролю качества кормов и сырья.

Данные препараты могут успешно применяться в лабораториях микробиологического направления в качестве дезинфицирующего средства в указанных концентрациях.

3.2.4 Изучение бактерицидной и микоцидной активности дезинфицирующих средств в условиях помещений для содержания

животных

Бактерицидную и микоцидную активность дезинфицирующих средств определяли в условиях помещений для содержания животных в Государственном Екатеринбургском цирке. Методом распыления и орошения применяли препарат «Део-хлор» (0,015%, 0,06%) с экспозицией 15, 30 и 60 минут. «Део-бактером» (0,2%, 2,0%) и «Део-стером» (0,1%; 1,0%) обрабатывали помещения в отсутствии животных методом орошения с экспозицией 15, 30 и 60 минут. «Дезавид» 1% применяли методом орошения при экспозиции 30, 60 минут и 2 часа. После проведения дезинфекции отбирали смывы с разных поверхностей в 10x10 см (пол, потолок, стены) и в разных точках помещении выставляли чашки Петри с МПА и средой Чапека.

В результате проведенных исследований, было выяснено, что наибольшее бактерицидное и микоцидное действие (около 99,0%) оказывали препараты «Део-хлор» 0,06%, «Део-бактер» 2,0%, «Део-стер» 1,0%, «Дезавид» 1% (экспозиция 60 минут). Наибольшим фунгицидным действием обладал «Део-хлор» 0,06% (экспозиция 30 минут). Качество дезинфекции при применении всех испытуемых средств в условиях животноводческих помещений оказалось удовлетворительным.

3.2.5 Бактерицидное и фунгицидное действие нового для применения аэрозольного дезинфицирующего препарата «Дезнтол»

Исследования по бактерицидной и микоцидной активности аэрозольного препарата «Дезитол» в лабораторных помещениях ГНУ Уральского НИВИ Россельхозакадемии, в кабинете для приема животных в ветеринарной клинике и животноводческих помещениях Государственного Екатеринбургского цирка.

После проведения дезинфекции в лабораторных помещениях рост патогенной микрофлоры, плесневых и дрожжевых грибов не был зафиксирован. Качество проводимой дезинфекции признано

удовлетворительным. Пробы - смывов с поверхности, взятые через одну неделю после дезинфекции, на всех тест - объектах, показали отсутствие роста патогенных микрофлоры, плесневых и дрожжевых грибов, кроме проб, отобранных с пола, где была обнаружена кокковая микрофлора (Enterococcus spp.). На второй неделе и в дальнейшем наблюдали увеличение общей микробной обсемененности и появление роста плесневых и дрожжевых грибов.

При оценке качества дезинфекции в кабинете для приема животных исследованы пробы смывы с поверхности кушетки и ручки двери. Полученные результаты показали, что в первую неделю после проведения дезинфекции рост патогенной микрофлоры, плесневых и дрожжевых грибов не обнаруживали. Через две недели после проведения дезинфекции были отобраны пробы, в которых установлено увеличение общего микробного числа и изолирован St. aureus. На третьей неделе после проведенной дезинфекции было выявлено увеличение общего микробного числа бактерий в 7 раз, по сравнению с предыдущим.

При проведении исследований по качеству дезинфекции на территории животноводческого объекта было установлено, что после её проведения отсутствовал рост патогенной микрофлоры, плесневых и дрожжевых грибов, а спустя одну неделю после проведения дезинфекции были выделены грибы рода Pénicillium spp.

В результате проведенных исследований было установлено, что дезинфицирующее средство «Дезитол» обладает противомикробным и фунгицидным действием на условно-патогенную и патогенную микрофлору, плесневые и дрожжевые грибы до 7 суток.

3.3. Оценка вирулицндной активности дезинфицирующего средства

«Дез нто л»

При изучении вирулицидного действия препарата «Дезитол» в качестве тест-вируса использовали аденовирус в дозе 105 ТЦИД5о/сМ3, который наносили в количестве 0,5 см3 на покрытие, образованное «Дезитол». Для исследования использовали покрытие «Дезитол» через 2 часа после нанесения (высыхание покрытия), через 7, 15 и 21 сутки. Контакт вируссодержащей суспензии с покрытием проводили от 2 до 24 часов. После чего с поверхности брали смыв с использованием среды Игла MEM в количестве 0,5 см3 с последующим проведением титрования. Результаты определения вирулицндной активности пленочного покрытия препарата «Дезитол» представлены в таблице 2.

Критерием вирулицндной активности дезинфицирующих лакокрасочных покрытий является снижение количества вируса не менее, чем на 4,0 lg через 24 часа после нанесения его на поверхность. Таким образом, средство «Дезитол» при исследовании in vitro обладает вирулицндной активностью, по крайней мере, в течение 21 суток после нанесения на поверхность.

Таблица 2 - Определение вирулицидной активности пленочного покрытия препарата «Дезитол»_

Титр вируса в исследуемом материале, 1ёТЦИД50/см2 Время после нанесения покрытия «Дезитол»

2 ч 7 сут 15 сут 21 сут

Время контакта вируссодержащей суспензии с покрытием

0,5 ч 1 ч Зч 24 ч 1 ч 1 ч 1 ч 24 ч

Контроль вируса 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0

После контакта с поверхностью, обработанной препаратом «Дезитол» 3,5 0,5 0,5 0,5 1,5 1,5 1,5 1,0

Снижение титра вируса 1,5 4,5 4,5 4,5 3,5 3,5 3,5 4,0

3.4. Оценка токсичности дезинфицирующих средств 3.4.1 Оценка острой токсичности препарата «Дезитол» при однократном введении в желудок Определение острой токсичности дезинфицирующих средств проводили на белых мышах при однократном введении через тонкий зонд в желудок. Суспензию препарата вводили в объеме 1 см3 в дозах 15, 50, 150, 500, 1500 и 15000 мг/кг. Вводимый объем препарата в желудок для мышей составлял 1 мл. Таблица 3 - Результаты определения острой токсичности

Доза препарата, мг/кг Результаты

№ группы Пало, голов Выжило, голов

1 15000 4 0

2 1500 3 1

3 500 2 2

4 150 1 3

5 50 0 4

6 15 0 4

При патологоанатомическом вскрытии павших мышей наблюдали кровенаполнение печени и селезенки, кровоизлияния на слизистой оболочке кишечника.

Средне-смертельная доза (ЛД50) препарата при введении в желудок животным составила 723 мг /кг. Таким образом, препарат «Дезитол» в соответствии с ГОСТом 12.1.007-76 относится к III классу опасности.

3.4.2 Определение острой токсичности препарата «Дезнтол» при нанесении на неповрежденную кожу

Данные по определению острой токсичности препарата «Дезитол» при нанесении на кожу лабораторных мышей представлены в таблице 4. Таблица 4 - Результаты определения острой токсичности препарата

№ группы Доза Результаты

препарата Пало, голов Выжило, голов

1 20000 мг/кг 2 2

2 6000 мг/кг 1 3

3 2000 мг/кг 1 3

4 600 мг/кг 0 4

5 60 мг/кг 0 4

Согласно полученным данным, средне-смертельная доза (ЛД50) при нанесении на кожу составила 20000 мг/кг препарата. Исходя из этого можно сделать вывод, что препарат «Дезитол» согласно ГОСТу 12.1.007-76 относится к IV классу опасности вещества малоопасные.

3.4.3 Определение острой токсичности препаратов «Део-хлор», «Део-

стер», «Део-бактер», «Дезавид» и «Дезитол» при ингаляционном

воздействии

Определение острого ингаляционного воздействия препаратов проводили на белых мышах и крысах. Испытание препаратов «Део-хлор», Део-стер», «Део-бактер», «Дезавид» проводили на „белых крысах, «Дезитол» на белых мышах при однократной двухчасовой экспозиции. Для каждого препарата было сформировано по 2 группы мышей и крыс, по 4 головы в каждой. Первую группу помещали под эксикатор на 2 или 4 часа в зависимости от дезинфицирующего средства. Предварительно за сутки до проведения опыта на дно эксикатора помещали сосуд с рабочим раствором дезсредств. Вторая группа была контрольная, для опыта использовали воду в том же объеме.

Первоначально у животных опытной группы при испытании препарата «Дезитол» наблюдали учащение дыхания, возбуждение, учащение дефекации и мочеиспускания, в дальнейшем угнетение. Гибели животных в течение 14 суток не было. При оценке ингаляционной опасности рабочих растворов дезинфицирующих средств на белых крысах наблюдали признаки раздражающего действия на слизистые оболочки глаз в виде гиперемии («Део-хлор»), воздействия на дыхательную систему - учащенное дыхание, серозные истечения («Део-стер», «Део-бактер» и «Дезавид») и незначительное снижение активности животных (все средства).

Проведенные исследования показали, что дезинфицирующие средства в рабочих концентрациях при остром ингаляционном действии вызывают незначительные изменения интегральных показателей животных.

3.4.4 Оценка местно - раздражающего действия дезинфицирующих средств «Део-хлор», «Део-стер», «Део-бактер», «Дезавнд и «Дезнтол» при воздействии на кожу В результате проведенных исследований установлено, что растворы дезинфицирующих средств «Део-хлор», «Део-стер», «Део-бактер», «Дезавид» и «Дезитол» в рабочих концентрациях не вызывали негативного воздействия на депилированные участки кожи у морских свинок. В течение 7 дней со стороны кожного покрова не зарегистрировали видимых изменений (покраснения, повышения температуры, появления изъязвлений или отечности).

3.4.5 Оценка выраженности раздражающего действия при нанесенни на слизистую оболочку глаз дезинфицирующих средств «Део-хлор», «Део-

стер», «Део-бактер», «Дезавид и «Дезнтол» Испытания по изучению раздражающего действия на слизистую оболочку глаз дезинфицирующих препаратов («Део-хлор», «Део-стер», «Део-бактер», «Дезавид и «Дезитол») проводили на морских свинках. Были сформированы 6 групп (п=5). Каждый препарат наносили в рабочей концентрации - «Део-хлор» - 0,06 % по активному хлору, «Део-бактер» - 2 %, «Део-стер» и «Дезавид » - 1% и «Дезитол» - нативный. Для этого оттягивали угол века и в конъюнктивальный мешок вносили по 1-2 капли препаратов.

Контрольным животным вводили дистиллированную воду. Наблюдения за животными проводили в течение одного часа, в дальнейшем учитывали состояние животных ежедневно до исчезновения реакции. При этом наиболее выраженное поражение слизистых оболочек глаз наблюдали на вторые-третьи сутки после нанесения исследуемых образцов.

Для оценки полученных результатов применяли балльную систему, при этом при увеличении степени поражения общее количество баллов возрастало. В результате проведенных исследований было выяснено, что рабочие растворы дезинфицирующих средств, при нанесении на слизистые оболочки глаз животным проявляли слабо выраженное действие («Део-хлор», «Део-бактер» «Дезитол»), и выраженное действие («Део-стер»),

3.4.6 Подострая токсичность дезинфицирующего средства «Дезитол» Подострую токсичность дезинфицирующего средства проводили на

белых мышах при нанесении на кожу препарата в течение 14 дней. За сутки до проведения эксперимента животным депилировали участки на спине размером 2x2 см. Были сформированы 4 группы (п=10). Препарат наносили мышам первой группы 400 мг/кг (1/50 ЛД50), второй - 1000 мг/кг (1/20 ЛД50), третьей группе - 2000 мг/кг (1/10 ЛД5о), четвертая группа послужила контролем. Оценку токсического воздействия дезинфицирующего средства «Дезитол» проводили с учетом массы животного при взвешивании 1 раз в неделю и гематологическими показателями (забор крови проводили через 7 дней после ежедневного контакта и 10 дней после последнего контакта с дезинфицирующим средством).

При проведении исследований установлено, что многократное нанесение на кожу в дозе 400,1000 и 2000 мг/кг не вызывает изменений в состоянии

животных. У животных опытных групп за время проведения эксперимента и через 10 дней после окончания не наблюдали изменения при поедании корма, дыхании и двигательной активности.

Гематологические показатели у опытных животных в дозах 400 и 1000 мг/кг не отличались от контроля. При исследовании крови у третьей группы в дозе 2000 мг/кг «Дезитола» установили незначительное повышение лейкоцитов на 13,2 %. Через 10 дней после последнего контакта с дезинфицирующим средством количество эритроцитов, лейкоцитов и лейкограмма находились в пределах контрольной величины.

3.4.7. Субхроннческая токсичность при использовании аэрозольного

дезинфицирующего средства «Дезитол» Субхроническую токсичность проводили на 3-х группах белых мышей (п=10). Масса животных составила 19-21 г. Первой группе животных при аэрозольном распылении дезинфицирующего средства «Дезитол» через 1, 3 и 7 дней, второй группе распыление проводили через 1 и 3 сутки, третьей группе животных — распыляли водопроводную воду.

Токсическое воздействие препарата оценивали по клиническому состоянию животных и гематологическим показателям. Существенных изменений в клиническом статусе не наблюдали при многоразовом распылении препарата «Дезитол».

Увеличение активности АлАТ (на 9,7%), содержания АсАТ (на 5,3 %), мочевины (11,7 %) и креатинина (5,7 %) находились в целом в пределах физиологической нормы для лабораторных мышей по сравнению с референтными группами.

3.4.8. Определение коррозионной активности дезинфицирующих

средств

Определение коррозионной активности дезинфицирующих препаратов («Део-хлор», «Део-стер», «Део-бактер», «Дезавид и «Дезитол») проводили на марке стали СТ-3, оцинкованной стали, алюминии и нержавеющей стали. При проведении исследований было установлено, что испытуемые рабочие водные растворы опытных образцов дезинфицирующих средств оказывали слабое коррозионное действие, за исключением воздействия препарата «Део-хлор» на сталь (СТ-3), которое было выше по сравнению с эталоном (2% ЫаОН) на 83 %. Таким образом, исследованные дезинфицирующие средства могут применяться для ветеринарно-санитарной обработай станков, клеток, оборудования в животноводческих помещениях без значительного ущерба для обрабатываемых поверхностей.

3.4.9. Результаты исследования современных дезинфицирующих

средств на объектах ветеринарного надзора В течение 2010-2013 гг. в зимне-стойловый период обследовано 15 молочно-товарных ферм Свердловской области. Установлено, что на территории животноводческих ферм для профилактики инфекции в телятниках,

профилакториях, родильных отделениях и др. помещениях используют препараты на основе каустической соды, гашенной извести и растворов альдегидов и др. При этом препараты используют не регулярно: 1 раз в 2-3 месяца способом орошения, как правило, однократно без соблюдения экспозиции.

Среди телят диагностировали колибактериоз и сальмонеллез в виде спорадических вспышек 3-5 раз за зимне-стойловый период.

В результате бактериологических и микологических исследований установлено, что в смывах с кормушек, деревянных ограждений и клеток были высеяны бактерии группы кишечной палочки (БГКП), стафилококки, грибы рода Penicillum spp. и Aspergillus spp. (таблица 5).

Таблиц 5 - Характеристика микробного и фунгицидного действия на

объекты ветеринарного надзора

Вид возбудителя Телятники профилактории Родильные отделения МТФ Клетки ЦРЖ Кабинет для приема животных

Е. coli + + + -

St.aureus + + + -

Aspergillius spp. - - + +

Penicillum spp. + - + +

Проводили дезинфекцию методом орошения в концентрации «Део-хлор» 0,06 %, «Део-стер» 1 %, «Део-бактер» 2 %, при расчетной дозе 250 мл/м2 и времени обеззараживания 60 минут и «Дезитол» 1 % при расчетной дозе 150 мл/м2 и экспозиции 60 минут в отсутствии животных. Нейтрализацию действующих веществ на обработанных поверхностях обеспечивали с помощью нейтрализаторов (для хлорсодержащих - натрия тиосульфат в концентрации 0,3 % и водой для других дезинфектантов). После дезинфекции в пробах смывов Е. coli, St.aureus, Aspergillius spp. и Penicillum spp. не обнаружены

Существенной проблемой в настоящее время является разработка эффективной методики профилактических мероприятий при инфекционных заболеваниях в приютах и ЦРЖ в виду значительной скученности и движения животных (таблица 6 и 7).

Для профилактической дезинфекции в ветеринарных лечебницах и ветеринарных кабинетах, приютах для передержки животных, как правило, используются Септоксин, Экоцид и др. дезинфицирующие препараты или бытовые моющие средства (Золушка, Комет и т.д.), которые не оказывают бактерицидного, вирулицидного и микоцидного действия в должной мере.

При такой динамике поступления животных в пунктах передержки нельзя сохранять и поддерживать эпидемиологический режим традиционными методами с применением обычных дезинфицирующих средств.

Таблица 6 - Динамика поступления животных в пункт передержки на

примере одного месяца (ЦРЖ УрГАУ)

Декады Содержалось Поступило Пристроено

собаки кошки собаки кошки собак и кошки

1-10 сентября 32 32 4 11 6 6

11-20 сентября 27 26 • 3 6 2 4

21-30 сентября 31 26 , 8 9 7 4

31 сентября-6 октября 24 42 3 7 11 4

Итого 18 35 26 18

Таблица 7 — Заболеваемость животных парвовирусным энтеритом собак

(ЦРЖ, 2013 г июнь - сентябрь)

Количество голов Имелось Заболело Пало

Собаки 24 6

в т.ч. щенки И 11 8

Для обеспечения эпидемического режима была разработана система дезинфекции помещений для содержания животных. В связи со скученным содержанием собак и кошек использование системы «пусто - занято» не представлялось возможным. Поэтому акцент сделали на применение аэрозольного распыления методом холодного тумана в рабочих концентрациях препаратов «Део-хлор», «Део-стер», «Део-бактер», «Дезавид» в отсутствии животных с экспозицией 1 час. Далее проводили нейтрализацию действующих веществ на обработанных поверхностях при помощи нейтрализаторов (0,3% натрия тиосульфат для хлорсодержащих, водопроводная вода для остальных). До и после дезинфекции проводили отбор проб на качество дезинфекции бактериологическими и молекулярно-генитическими методами исследований До проведения дезинфекции методами микробиологии и ПЦР-диагностики были обнаружены бактерии (Е. coli, St. aureus) и возбудители парвовируса собак. После проведения дезинфекции в смывах через период 24,48 и 72 часа не были выявлены бактерии E.coli и St. aureus, а так же ДНК вируса, вызывающего парвовироз собак.

3.4.10 Экономическая эффективность при использовании дезинфицирующих средств нового поколения

При проведении дезинфекции на объектах ветеринарного надзора установлена экономическая эффективность от использования дезинфектантов нового поколения («Део-хлор» 0,06 %, «Део-стер» 1 %, «Део-бактер» 2 %, , «Дезитол» 1 % и «Дезитол»): на каждый затраченный 1 рубль можно получить 3,5 рубля экономии.

Выводы

1. В большинстве предприятий (объектов ветеринарного надзора) профилактика инфекционных заболеваний осуществляется с использованием монокомпонентных дезинфицирующих препаратов разработанных в 50-70 гг. XX века. Применение их не обеспечивает предупреждение и распространение возбудителей заболеваний.

2. Для профилактики инфекционных заболеваний предложены современные препараты, обладающие хорошей бактерицидной, вирулицидной и микоцидной активностью, обеспечивающие пролонгированное действие в течение 7 дней.

3. В изученном субъекте Российской Федерации (Свердловская область) эпизоотическая ситуация характеризуется устойчивым благополучием по хроническим инфекциям (бруцеллез, туберкулез, лейкоз) и ОРВИ на племенных и товарных фермах. Однако отмечается рост падежа молодняка крупного рогатого скота от колибактериоза, сальмонеллеза и пастереллеза. Среди мелких домашних животных особенно содержащихся в приютах и ЦРЖ распространен вирусный энтерит собак, заболеваемость среди молодняка составила 90-100 % и заболеваемость среди кошек -панклейкопения кошек 30-35%.

4. При изучении бактерицидной активности дезинфицирующих средств суспензионным методом было выяснено, что препараты «Део-бактер» 2%, «Део-стер» 1%, «Део-хлор» 0,06% обладают дезинфицирующими свойствами в отношении тест-культур Е. coli, St. aureus при экспозиции 30 минут, с сохранением бактерицидного действия через 60 минут. Препарат «Дезавид» 1% обладал бактерицидной активностью в отношении Е. coli и St. aureus при соблюдении экспозиции 60 минут.

5. При изучении бактерицидной эффективности дезинфицирующих средств на тест-объектах в лабораторных условиях было выяснено, что при применении препарата «Део-хлор» 0,06% и «Дезитол» на тест-объектах прекращался рост тест-культур St. aureus и E.coli при экспозиции 30 минут, а через 60 минут сохранялся стойкий бактерицидный эффект. Препараты «Део-стер» 1%, «Део-бактер» 2% оказывали хорошую бактерицидную активность в отношении St. aureus при экспозиции 60 минут.

6. При проведении дезинфекции рабочих поверхностей в бактериологической лаборатории препараты «Део-бактер» (2,0 %), «Део-стер» (1,0 %), «Део-хлор» (0,015%; 0,06%), «Дезавид» (1,0 %; 3,0 %) с экспозициями 5 и 15 минут показали удовлетворительную бактерицидную активность. При проведении дезинфекции в условиях помещений для содержания животных, наибольшее бактерицидное и микоцидное действие (около 99,0%) оказывали препараты «Део-хлор» 0,06%, «Део-бактер» 2,0%, «Део-стер» 1,0%, «Дезавид» 1% (экспозиция 60 минут). При исследовании аэрозольного препарата «Дезитол» в лабораторных помещениях, в кабинетах для приема животных в ветеринарной клинике и животноводческих помещениях для содержания животных было установлено что, данный препарат подавляет рост и развитие бактерий, плесневых и дрожжевых грибов с сохранением бактерицидной и

фунгицидной активности в течение 7 суток.

7. При проведении лабораторных исследований было выяснено, что препарат «Дезитол» обладает вирулицидной активностью в течение 21 суток в отношении аденовируса.

8. При оценке токсичности дезинфицирующих средств (ингаляционный способ, местно-раздражающее действие на кожу и слизистую глаза) установлено, что препараты «Дезитол» «Део-хлор», «Део-стер», «Део-бактер» и «Дезавид» негативного воздействия на лабораторных животных не оказывали, и были отнесены к малоопасным препаратам.

7. Дезинфицирующие средства оказывали слабое коррозионное действие и могут применяться для ветеринарно-санитарной обработки станков, клеток, оборудования в животноводческих помещениях без значительного ущерба для обрабатываемых поверхностей.

8. После проведения дезинфекции на молочно-товарных фермах Свердловской области испытуемыми современными дезинфицирующими средствами при бактериологическом анализе смывов с поверхностей помещений не были обнаружены патогенные микроорганизмы. При внедрении разработанной системы дезинфекции в ветеринарных лечебницах и ветеринарных кабинетах, приютах для передержки животных в смывах не были выявлены бактерии (Е. coli, St. aureus), а так же ДНК вируса вызывающего парвовироз собак и панлейкопению кошекв течение 24,48 и 72 часов.

9. Эффективность использования дезинфицирующих средств нового поколения выявило, что на 1 рубль затрат можно получить 3,5 рубля экономии.

Практические предложения

1. Для обеспечения стабильности эпизоотической ситуации препараты следует применять согласно разработанным инструкциям в концентрации «Део-хлор» 0,06% по активному хлору, «Део-стер» 1,0%, «Део-бактер»2,0% при расчетной дозе 100 мл/м2 при применении аэрозольного метода и 250 мл/м2 при орошении с экспозицией 60 минут; «Дезавид» 1 % с соблюдением времени обеззараживания 60 минут методом орошения при расчетной дозе 150 мл/м2; «Дезитол»..

2. Проводить ежеквартально оценку по качеству проведенной дезинфекции.

3. Ежеквартально осуществлять мониторинг эпизоотической ситуации по инфекционным заболеваниям животных, особенно при их скученном содержании в условиях приютов и пунктов передержки.

4. Основные научные положения работы и её практические результаты рекомендуется использовать в производственных условиях ветеринарными специалистами, а также в учебном процессе студентами, аспирантами и научными работниками ветеринарного профиля.

Список работ опубликованных по теме диссертации

1. Шилова E.H. Бактерицидная и микоцидная активность дезинфицирующих средств в условиях сельскохозяйственного производства и лаборатории/ Е.Н.Шилова, В.А. Мнхляев, О.Г. Субботина // Современные проблемы диагностики, лечения и профилактики болезней животных и птиц: Сб. науч трудов ведущих ученных России и Зарубежья. - Екатеринбург, 2010. С.275-277.

2. Кадочников Д.М. Исследование токсичности дезинфектантов на виварных животных/. Д.М. Кадочников, О.Г. Субботина // Инновационные решения актуальных проблем в АПК: материалы Всероссийской научно -практической конференции молодых ученных и специалистов. - Екатеринбург, 2013. с 93-96

3. Шилова E.H. Эффективность применения новых дезинфицирующих средств в ветеринарии/ E.H. Шилова, И.В. Вялых, Д.М. Кадочников,

О.Г. Субботина // Аграрный веЬтник Урала. - 2013. - № 8. - С 9-11

4 Шилова E.H. Токсическое действие новых дезинфицирующих средств на лабораторных животных/ E.H. Шилова, И.В. Вялых, О.Г. Субботина // Обеспечение ветеринарного благополучия в животноводстве и птицеводстве: материалы международной научно практической конференции, посвященной ветеринарам ветеринарной науки. - Омск, 2013. с 153-155.

5. Оценка коррозионной активности новых дезинфицирующих средств для использования в животноводстве/ Субботина О.Г, Вялых И.В./ Аграрный вестник Урала.-2013. -№ 10.-С 101-105

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ДС - дезинфицирующее средство

МПА - мясо-пептонный агар

ОМЧ - общее микробное число

«Аденовирус», Ad.6. -ДНК-содержащий аденовирус 6 типа (штамм Аденоид 6)

СУББОТИНА ОКСАНА ГРИГОРЬЕВНА

ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПРИМЕНЕНИЯ НОВЫХ ДЕЗИНФЕКТАНТОВ В СИСТЕМЕ САНИТАРНО - ПРОФИЛАКТИЧЕСКИХ МЕРОПРИЯТИЙ ПРИ ИНФЕКЦИЯХ ЖИВОТНЫХ

06.02.03 — ветеринарная фармакология с токсикологией

06.02.02 — ветеринарная микробиология, вирусология,

эпизоотология, микология с микотоксикологием II иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Подписано в печать 25.11.2013 Формат 60x84 1/16 Усл. печ.л. 1,0 Бумага для множительных аппаратов. Печать офсетная. Гарнитура Times New Roman. Объем 1 п.л. Заказ № 495/1 Тираж 100 экз.

Отпечатано в типографии ООО «Таймер» 620219, Екатеринбург, ул. Луначарского, 13

Текст научной работыДиссертация по сельскому хозяйству, кандидата ветеринарных наук, Субботина, Оксана Григорьевна, Екатеринбург

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК ГОСУДАРСТВЕННОЕ НАУЧНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ УРАЛЬСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ВЕТЕРИНАРНЫЙ ИНСТИТУТ

На правах рукописи

04201455341

СУББОТИНА ОКСАНА ГРИГОРЬЕВНА

ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПРИМЕНЕНИЯ НОВЫХ ДЕЗИНФЕКТАНТОВ В СИСТЕМЕ САНИТАРНО - ПРОФИЛАКТИЧЕСКИХ МЕРОПРИЯТИЙ ПРИ

ИНФЕКЦИЯХ ЖИВОТНЫХ

06.02.03 - ветеринарная фармакология с токсикологией 06.02.02 — ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Диссертация на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор, академик Донник И.М.

Екатеринбург - 2013

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВЕДЕНИЕ 5

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 9

1.1. Дезинфекция, как основной метод неспецифической профилактики 9 инфекционных болезней животных

1.2. Химические дезинфицирующие средства, механизм их 16 антимикробного действия и методы применения на объектах ветеринарного надзора

1.3. Механизм антимикробного действия дезинфицирующих средств и 20 контроль качества дезинфекции

1.4. Уровень распрастранености и этиология инфекционных болезней 24 животных

1.5 Неспецифическая профилактика факторных инфекций 28

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 29

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 51

3.1 Эпизоотическая ситуация по основным инфекциям на примере 51

Свердловской области

3.2. Оценка бактерицидной активности дезинфицирующих средств 54

3.2.1 Изучение бактерицидной активности дезинфицирующих средств 56 суспензионным методом

3.2.2 Бактерицидная эффективность дезинфицирующих средств на 61 различных тест-объектах в лабораторных условиях

3.2.3 Изучение бактерицидной активности дезинфицирующих средств в 63 лабораторных условиях

3.2.3 Изучение бактерицидной активности дезинфицирующих средств в 70 лабораторных условиях

3.2.4 Изучение бактерицидной и микоцидной активности 71 дезинфицирующих средств в условиях помещений для содержания животных

3.2.5 Бактерицидное и фунгицидное действие нового для применения 72

аэрозольного дезинфицирующего препарата «Дезитол»

3.3. Оценка вирулицидной активности дезинфицирующего средства 73 «Дезитол»

3.4. Оценка токсичности дезинфицирующих средств 81

3.4.1 Оценка острой токсичности препарата «Дезитол» при однократном 82 введении в желудок

3.4.2 Определение острой токсичности препарата «Дезитол» при 84 нанесении на неповрежденную кожу

3.4.2 Определение острой токсичности препарата «Дезитол» при 85

нанесении на неповрежденную кожу

3.4.4 Оценка местно - раздражающего действия дезинфицирующих 86 средств «Део-хлор», «Део-стер», «Део-бактер», «Дезавид и «Дезитол» при воздействии на кожу

3.4.5 Оценка выраженности раздражающего действия при нанесении на 87 слизистую оболочку глаз дезинфицирующих средств «Део-хлор», «Део-стер», «Део-бактер», «Дезавид и «Дезитол»

3.4.6 Подострая токсичность дезинфицирующего средства «Дезитол» 92

3.4.7. Субхроническая токсичность при использовании аэрозольного 92 дезинфицирующего средства «Дезитол»

3.4.8. Определение коррозионной активности дезинфицирующих средств 93

3.4.9. Результаты исследования современных дезинфицирующих средств 95 на объектах ветеринарного надзора

3.4.10 Экономическая эффективность при использовании 102

дезинфицирующих средств нового поколения

4. Обсуждение результатов 104

5. Выводы 112

6. Практические предложения. 114

7. Список литературы 116

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. В современных условиях ведения животноводства наблюдается тенденция к наращиванию поголовья животных, содержащихся на ограниченных площадях, что приводит к увеличению уровня заболеваемости различными инфекционными болезнями. На этом фоне у животных, и особенно у молодняка, в массовых масштабах проявляются инфекционные болезни, вызванные как патогенной, так и в большей степени условно - патогенной микрофлорой (Конопаткин A.A., Глушков A.A., 1991; Урбан В.П. и др., 1991; Бузлама B.C., Рецкий М.И., 2000).

При этом заболевания характеризуются большими экономическими потерями вследствие низкого уровня сохранности поголовья и прироста живой массы, резкого ухудшения качества продукции (Достоевский П.П., 1987; Джупина С.И., 1994; Прудников С.И., 1996; Паршин П.А., Шабунин C.B., 1999; Сулейманов С.М., 1999; Шахов А.Г., 2005; Рогачева Т.Е., 2007).

В комплексе противоэпизоотических мер на комплексах и специализированных фермах, наряду с оптимизацией условий содержания и кормления животных, важное значение имеют ветеринарно-санитарные мероприятия, направленные на предупреждение и ликвидацию инфекционных болезней животных, и создание благоприятных условий для эпизоотологического благополучия в целом (Донник И.М., Шкуратова И.А., 2007).

Одним из главных этапов проведения мероприятий является дезинфекция, от качества которой зависит эффективность борьбы с инфекционным агентом (Нежданов А.Г., 2007; Шабунин C.B., 2009; Смирнов A.M., 2009)

К дезинфектантам предъявляются достаточно высокие требования: хорошая бактерицидная, вирулицидная и микоцидная активность; экономичность; степень устойчивости к органическим загрязнениям, небольшая экспозиция в пределах 1-2 часов, отсутствие раздражающего

действия или запаха; простота в приготовлении, применении; безопасность для применения обслуживающего персонала и животных; экологичность; простота утилизации (Смирнов A.M., 2009; Дорожкин В.И., 2007; Антипов В.А., 2007). К сожалению, на сегодняшний день ни один из применяемых препаратов не обладает всеми перечисленными свойствами. Ассортимент доступных недорогих дезинфицирующих средств весьма ограничен, большинство из них обладают высокой токсичностью для животных и агрессивны по отношению к обрабатываемым объектам. В связи с этим, большую актуальность имеет поиск новых, недорогих, эффективных и вместе с тем безопасных дезинфицирующих средств и разработка методов их оптимального использования в ветеринарии.

Цель этой работы: дать фармако-токсикологическую оценку новых дезинфектантов для применения в системе санитарно-профилактических мероприятий при инфекционных болезнях животных.

Для реализации этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить эпизоотическую ситуацию по основным инфекциям в регионе (на примере Свердловской области);

2. Изучить антимикробную активность новых дезинфицирующих препаратов на основе хлора («Део-хлор») и четвертичных аммонийных соединений («Део-стер» «Део-бактер», «Дезавид» и «Дезитол»);

3. Провести фармако-токсикологическую оценку препаратов «Део-хлор», «Део-стер», «Део-бактер», «Дезавид» и «Дезитол»;

4. Усовершенствовать систему санитарно-профилактических мероприятий при инфекционных болезнях животных с использованием новых дезинфицирующих препаратов.

Научная новизна. Впервые изучены бактерицидное, вирулицидное, токсическое и коррозионное действие препарата «Дезитол». В результате проведенных исследований впервые разработаны режимы и технологии применения новых препаратов («Део-хлор», «Део-стер», «Део-бактер», «Дезавид» и «Дезитол») для дезинфекции объектов ветеринарного надзора.

Усовершенствована система санитарных мероприятий при инфекционных болезнях животных, способствующая снижению уровня заболеваемости и повышению сохранности животных. Изучена возможность эффективного использования дезинфицирующих препаратов для профилактики бактериальных (вызванных золотистым стафилоккоком и эшерихиями) и вирусных (панклейкопения кошек, герпесвирусная инфекция кошек, парвовирусный энтерит собак) инфекций у животных, содержащихся в питомниках и центрах реабилитации.

Практическая значимость и реализация результатов исследований

На основании проведенных исследований разработаны «Инструкция по применению дезинфицирующего средства «Део-хлор» в ветеринарии» (2013 г.), «Инструкция по применению дезинфицирующего средства «Део-бактер» в ветеринарии» (2013 г.), «Инструкция по применению дезинфицирующего средства «Део-стер» в ветеринарии» (2013 г.), утвержденные Департаментом ветеринарии Свердловской области.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1. Инфекционные заболевания сельскохозяйственных животных имеют ограниченное распространение в Свердловской области.

2. Новые современные дезинфицирующие средства («Део-хлор», «Део-стер», «Део-бактер», «Дезавид» и «Дезитол») обладают высокими бактерицидными, фунгицидными и вирулицидными действиями.

3. Система санитарных мероприятий с применением новых дезинфицирующих препаратов, способствует повышению эффективности противоэпизоотических мероприятий при профилактике инфекционных болезней животных, особенно при скученном их содержании в приютах и центрах временного содержания.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на Ученом совете ГНУ Уральского научно-исследовательского ветеринарного института Российской академии сельскохозяйственных наук (2010-2013 гг.), международной конференции «Современные проблемы диагностики,

лечения и профилактики болезней животных и птиц» (Екатеринбург, 2010), Всероссийской научно-практической конференции молодых ученных и специалистов «Инновационные решения актуальных проблем в АПК» (Екатеринбург, 2013); международной научно-практической конференции, посвященной ветеранам ветеринарной науки «Обеспечение ветеринарного благополучия в животноводстве и птицеводстве» (Омск, 2013).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 5 печатных работ, из них 2 в издании, рекомендованном ВАК РФ (ж. «Аграрный вестник Урала»); 3 - инструкции по применению дезинфицирующих препаратов.

Личный вклад. Основной объем исследований проведен автором самостоятельно. Личный вклад составляет 75 %. Отдельные этапы проведения исследований выполнены при методической и консультационной помощи сотрудников отдела эпизоотического мониторинга и прогнозирования инфекционных болезней животных и отдела ветеринарной лабораторной диагностики ГНУ Уральского НИВИ Россельхозакадемии.

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, списка литературы. Материал изложен на 132 страницах машинописного текста, содержит 39 таблиц и 5 рисунков. Список литературы включает 154 источник, в том числе 26 зарубежный.

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1Л. Дезинфекция, как основной метод неспецифической профилактики

инфекционных болезней животных

В современном понимании дезинфекция - это комплекс мероприятий направленных на удаление или уничтожение возбудителей заразных болезней на объектах окружающей среды с целью разрыва путей передачи возбудителей инфекционных заболеваний от источника инфекции к восприимчивому организму (Поляков A.A., 1975; Донник И.М., 2007; Ioannou.J., Hanion G.W., Denyer S.P., 2007; Смирнов A.M., Закомырдин A.A., Ваннер Н.Э., 2007).

Впервые роль дезинфекции в борьбе с заболеваниями продемонстрировал французский исследователь Гюйтон Морво в 1773 г. Он предложил окурить помещение газом для ликвидации эпидемии лихорадки. Газированием удалось ликвидировать эпидемию (McDonnell G., Russell A. D., 1999; Поляков A.A., 1975; Martin H., Le Potier M.F., Maris P., 2008).

Проведение ветеринарно-санитарных мероприятий для обеспечения благополучия по эпизоотической ситуации определяется рядом обстоятельств (Bjorland J., Sunde M., Waage S., 2001; Аржаков B.H., Ермакович М.М., Аржаков П.В., 2005; Братцев А.Ю., Аржаков П.В., 2010).

Во-первых, для некоторых инфекционных заболеваний не существует специально разработанных средств - вакцин (Н.И. Попов, В.В. Ивановцев, Г.Д. Волковский и др., 2005). Поэтому, борьба с такими заболеваниями не возможна с помощью иммунопрофилактики. Дезинфекция на данном этапе является основным методом неспецифической профилактики (Аржаков В.Н., Аржаков Н.В., 2003; Шахов А.Г, Рецкий М.И., Масьянов Ю.Н., 2005; Авакян С.С., Нересян С.Е., Васканян Г.Е., 2006).

Во-вторых, в определенных условиях необходимо время для развития иммунного ответа у животных, а возможности ждать нет. Следовательно, проведение дезинфекционных мероприятий является необходимой мерой при вакцинологически неуправляемых заболеваниях (Конопаткин A.A., Глушков

A.A., 1991; Джупина С. И, 1994, 2003; Макаров В.В. 2005; Бутко М. П., Тиганов В. С., Фролов В. С., 2006).

С целью неспецифической профилактики в борьбе с инфекционными заболеваниями животных широко используют дезинфекционные мероприятия. В настоящее время на рынке представлено большое количество препаратов российского и зарубежного производства из разных химических соединений и композиционных средств (Кадочников Д.М., Субботина О.Г., 2013). Перечень препаратов постоянно увеличивается (Поляков A.A., 1976; Hegna I.K., Clausen O.G., 1988; Малахов Ю.А., Душук Р.В., 2001; Мальцева Б.М., 2002; Шахов А.Г., Рецкий М.И., Масьянов Ю.Н., 2005 Шилова E.H., Исаев М.А., 2009).

Дезинфицирующие препараты, применяемые на объектах ветеринарного надзора должны отвечать следующим критериям:

- быстрое действие против широкого спектра вирусов, бактерий, грибов, спор (Вышелесский С.Н., 1954; Григанова Н.В., 1974);

- сохранение активности в течение длительного периода времени (Попов Н.И., Удавлиев Д.И., 1998);

- хорошо растворятся в воде или образовывать в ней стойкие эмульсии;

- низкая коррозионная активность (И.А. Дудницкий 1987; Смирнов A.M., Попов Н.И. , 2007; / Сайпуллаев М.С., Карпущенко К.А., Кабардиев С.Ш., 2012; Субботина О.Г., 2013);

- отсутствие неприятного запаха;

- низкая токсичность (безопасность для животных) (Аржаков В.Н., Борисов В.А., 2002; Иммиев Я.И., Абакарова Г.А., 2003; Алескеров З.А., 2009; Аракелова Н.Т., Троицкая Е.В., 2009; Шилова E.H., Вялых И.В., Субботина О.Г., 2013).

Объектами ветеринарно-санитарного надзора могут быть:

- помещения и территории ферм и агропромышленные предприятия;

- помещения и территории предприятий занимающихся переработкой животноводческой продукции;

- транспортные средства, используемые для перевозки животных, сырья, кормов и сельскохозяйственных продуктов (творог, молоко, кефир и

т.д.);

- инвентарь и предметы ухода за животными;

- одежда и обувь обслуживающего персонала;

- навоз, и другие средства, которые могут быть факторами передачи возбудителей болезней от больных животных или микробоносителей (Конопаткин A.A., Глушков A.A., 1991; Кабардиев С.Ш., Сайпуллаев М.С., Карпущенко К.А., 2012).

По назначению дезинфекция бывает профилактической и вынужденной. На сельскохозяйственных предприятиях, неблагополучных по инфекционным болезням проводят вынужденную дезинфекцию, которая подразделяется на текущую и заключительную (Кабардиев С.Ш., Амаев К.Г., Сайпуллаев М.С., и др. 2009). Текущую дезинфекцию проводят во время действия ограничений (карантин), а заключительную перед их снятием (Колычев Н.М., Ощепков В.Г., 2001; Смирнов A.M., Попов Н.И., 2005; Смирнов A.M., 2009; Кузмин В.А., Савинов А.Г., 2010).

О воздействии дезинфекционных мероприятий на эпизоотический процесс писали академики A.A. Поляков, B.C. Ярных, А.М.Смирнов и многие другие российские ученые. Развитие инфекции происходит при наличии замкнутых звеньев эпизоотической цепи, которая включает в себя источники инфекции (наличие патогенных или условно патогенных микроорганизмов в достаточном количестве и высоковирулентных), восприимчивые к заболеванию организмы и факторы передачи этих возбудителей от одного животного к другому.

Основоположник ветеринарной дезинфекции в России Поляков A.A. (1975) считал, что успех в борьбе с инфекционными заболеваниями может быть достигнут только в случае разрыва эпизоотической цепи.

Меры борьбы с инфекционными заболеваниями могут быть эффективными только в случае разрыва эпизоотологической цепи при

и

воздействии на отдельные звенья или всю цепь одновременно (Малахов Ю.А., Душук Р.В., 2001; Семина Л.К., Ворошилова Т.Г., 2003; Шахов А.Г., 2005). В первую очередь необходимо повышать общую резистентнность животных к воздействию возбудителя инфекции; во-вторых, уничтожение патогенных микроорганизмов во внешней среде с помощью дезинфекции; в-третьих, ликвидировать условия передачи возбудителя (Шахов А.Г. 2005).

Устойчивость организма к действию возбудителей инфекций повышается при соблюдении гигиенических, ветеринарно-санитарных условий, технологии содержания, кормления и ухода за животными (Семина Л.К., Ворошилова Т.Г., 2003; Шахов А.Г., 2005; Иммиев Я.И., Кабардиев С.Ш., АбакароваГ.А., 2005).

Но указанные мероприятия не дают возможности ликвидировать во внешней среде очаг инфекции и ее носителей, а также переносчиков возбудителей болезней (Аржаков В.Н. 2004; Аржаков П.В., Ермакович М.М. , Аржаков В.Н., 2005; Антипов В.А., Кузминова Е.В., Семененко М.П., 2007; Шабунин C.B., Кириллова Е.Э., Сулейманов Ç.M., и др. 2009).

Больные животные или микробоносители являются источниками инфекции, поэтому для купирования инфекционного процесса их необходимо по-возможности удалить из стада (C.J. Ioannou, G.W. Hanlon, S.P. Denyer 2007; Окладников H.H., Безденежных И.С., 1988; Носкова A.B., 2009). В качест�