Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Эффективность методов вакцинации против ньюкаслской болезни в промышленном птицеводстве

ВАК РФ 06.02.02, Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов

Автореферат диссертации по теме "Эффективность методов вакцинации против ньюкаслской болезни в промышленном птицеводстве"

На правах рукописи

Брит Владислав Иванович

ЭФФЕКТИВНОСТЬ МЕТОДОВ ВАКЦИНАЦИИ ПРОТИВ НЬЮКАСЛСКОЙ БОЛЕЗНИ В ПРОМЫШЛЕННОМ ПТИЦЕВОДСТВЕ

06.02.02 Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

1 з МАЙ 2015

Работа выполнена в Государственном научном учреждении «Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии Российской академии сельскохозяйственных наук» (ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии)

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор

Кушнир Анатолий Тимофеевич

Официальные оппоненты: Бурдейный Василий Владимирович - доктор

ветеринарных наук, профессор, ФГБОУ ВПО "Костромская государственная сельскохозяйственная академия", профессор кафедры эпизоотологии, паразитологии и микробиологии.

Виткова Ольга Николаевна - кандидат ветеринарных наук, ФГБУ «Центральная научно-методическая ветеринарная

лаборатория», заместитель директора.

Ведущая организация - Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина» г. Москва.

Защита диссертации состоится 16 июня 2015 года в 12 часов на заседании совета по защите докторских и кандидатских диссертаций Д 220.015.01 при ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ») по адресу: г. Владимир, мкр. Юрьевец, ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных».

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке и на сайте www.arriah.ru ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (г. Владимир).

Автореферат разослан 16 апреля 2015 г.

Учёный секретарь совета по защите докторских и кандидатских диссертаций Д 220.015.01, кандидат биологических наук

Жбанова Татьяна Валентиновна

1 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ 1.1 Актуальность темы исследования. Ньюкаслская болезнь (псевдочума птиц) - высококонтагиозная болезнь, в основном, кур и индеек. Вирус ньюкаслской болезни (НБ) вызывает развитие инфекции у 241 вида из 27 отрядов птиц НБ протекает в виде эпизоотий, энзоотий и скрытого вирусоносительства. Вирус НБ вызывает поражение центральной нервной системы, респираторного и желудочно-кишечного трактов. При острой форме летальность может достигать 100 %, яйценоскость снижается на 45 % - 60 %. НБ зарегистрирована на всех континентах, наносит громадный экономический ущерб и относится к особо опасным болезням [11, 12]. Специфическая защита против НБ основана на применении ряда вакцинных препаратов. Активная иммунизация птиц против НБ различными вакцинными штаммами и методами применения в настоящее время является одним из наиболее распространённых способов профилактики [2, 4, 6, 7, 8, 15, 16]. В России ежегодно прививают сотни миллионов голов птиц путём парэнтерального введения вакцин: окулярно, назально, внутримышечно, в перепонку крыла. Эти методы трудоёмки, дороги и в ряде случаев недостаточно эффективны. Всё большее применение находят методы массовой иммунизации: оральный, аэрозольный, спрей метод. Изучение методов специфической профилактики НБ обусловлено необходимостью снижения затрат на осуществление вакцинации, оценкой эффективности вакцин при иммунизации новых кроссов высокопродуктивных птиц. Возможность и эффективность массовой иммунизации птиц против различных заболеваний доказана многими исследователями. Широкие эксперименты проведены по изучению эффективности вакцинации птиц групповыми методами при НБ, показана целесообразность и перспективность их применения [5, 10, 13]. Практическое использование групповых методов вакцинации сопровождается поствакцинальными осложнениями или недостаточной иммунологической эффективностью вакцин. В связи с изложенным, изучение эффективности иммунизации против НБ птиц кросса

КОББ 500 оральным, окулярным и спрей методами в условиях современной птицефабрики является актуальным.

1.2 Степень разработанности проблемы. Работами отечественных и зарубежных исследователей показана возможность и эффективность массовых методов вакцинации птиц против ряда инфекционных заболеваний и, в том числе, против НБ, инфекционного ларинготрахеита, оспы и других заболеваний. Существенный вклад в изучение проблемы профилактики НБ групповыми методами внесены исследованиями И.М. Бондаренко, H.A. Лагуткиным, Ф.С. Кудрявцевым и многими другими [3, 6, 7, 8]. Применяемые методы разработаны относительно профилактики НБ у птиц яичного и мясного направлений продуктивности, но они не учитывают меняющуюся ситуацию по замене старых кроссов на новые, более высокопродуктивные, иммунологическая реактивность которых часто не изучена. В связи с тем, что в литературе мы не встретили сведений о иммунопрофилактике НБ кур мясного направления продуктивности кросса КОББ 500, представляет интерес изучение иммунореактивности данного высокопродуктивного кросса.

1.3 Цель и задачи исследований. Целью данной работы является изучение эффективности различных методов вакцинации кур мясного направления продуктивности КОББ 500 против НБ в условиях промышленного птицеводства. Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи: оценить по уровню поствакцинальных антител и протективной эффективности вакцины из штамма Ла-Сота при оральном, окулярном и спрей методах применения для профилактики ньюкаслской болезни у цыплят-бройлеров кросса КОББ 500; изучить влияние вакцины из штамма Ла-Сота при различных методах применения на сохранность поголовья и его продуктивность; дать сравнительную оценку экономической эффективности профилактики ньюкаслской болезни вакциной из штамма Ла-Сота при различных методах введения цыплятам-бройлерам кросса КОББ 500.

1.4 Научная новизна результатов исследований. Впервые изучена сравнительная иммунологическая эффективность вакцины из штамма Ла-Сота

при иммунизации птиц мясной породы кросса КОББ 500 против НБ оральным, окулярным и спрей методами; дана серологическая оценка уровня поствакцинального иммунитета и экономическая эффективность методов вакцинации по трудозатратам.

1.5 Теоретическая и практическая значимость работы. В поствакцинальный период после оральной, окулярной и спрей вакцинации у нового высокопродуктивного кросса КОББ 500, выраженной клинической реакции на введение вакцины не установлено; не отмечено влияния вакцинации на плановые показатели продуктивности; усовершенствованная схема вакцинации против НБ позволяет повысить эффективность профилактической иммунизации.

1.6 Степень достоверности и апробация работы. Статистический анализ результатов исследований проводили согласно рекомендаций Г.Ф. Лакина [9], с пакетом прикладных программ 5Ш£гайс версия 2.1 или М8Ехе1. Научные положения, выводы и практические предложения диссертационной работы аргументированно отражают содержание диссертации. Основные результаты исследований, выполненных по теме диссертации, представлены, заслушаны и обсуждены на заседаниях учёного совета ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии в 2011-2014 гг.; на Международной научно-практической конференции, посвящённой 55-летию ВНИИВВиМ "Актуальные вопросы контроля инфекционных болезней животных" 13 ноября 2013 г.

1.7 Соответствие диссертации паспорту научной специальности. Согласно формуле специальности 06.02.02 «Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология», охватывающей исследования в области науки, изучающей эпизоотологические закономерности возникновения, распространения инфекционных болезней и иммунологию сельскохозяйственных животных; разрабатывающей методы профилактики и ликвидации этих болезней; принципы противоэпизоотической и профилактической работы; общие и специальные мероприятия по борьбе, профилактике и ликвидации инфекционных болезней животных; активную

специфическую профилактику инфекционных болезней; противоинфек-ционный иммунитет и иммунологический анализ в эпизоотологии, результаты научного исследования соответствуют пунктам 4, 7, 8, 9 и 14 паспорта специальности.

1.8 Публикации по теме диссертации. По теме диссертации опубликовано 4 научные работы, в том числе 3 в журналах «Ветеринария» и «Ветеринарный врач», рекомендованных ВАК Минобрнауки России.

1.9 Структура и объём диссертации. Диссертация написана на 106 страницах компьютерного текста и содержит разделы: общая характеристика работы, обзор литературы, собственные исследования, результаты исследований, обсуждение, выводы, практические предложения, список использованной литературы, приложения; иллюстрирована 6 рисунками и 17 таблицами, обзор литературы составлен на основе анализа 251 источника, в том числе 147 иностранных авторов.

1.10 Основные положения, выносимые на защиту.

Вакцина из штамма Ла-Сота при профилактике ньюкаслской болезни у цыплят-бройлеров кросса КОББ 500 эффективна при оральном, окулярном и спрей методах применения.

Усовершенствованная схема вакцинации цыплят-бройлеров кросса КОББ 500 против ньюкаслской болезни обеспечивает повышение эффективности профилактической иммунизации.

1.11 Личный вклад автора в выполнение работы. Диссертационная работа выполнена автором самостоятельно. Отдельные этапы экспериментальных работ выполнены с сотрудниками лаборатории Биотехнологии ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии.

2 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Материалы

2.1.1 Вакцины. В работе использовали вакцину против НБ из штамма «Ла-Сота» сухую производства ОАО «Покровский завод биопрепаратов» с

содержанием во флаконе 3000 назальных доз (серия № 11 изготовлена 06.2011г.; серия № 33 изготовлена 04.2013г.) с биологической активностью 8,5 lg ЭИД5о/см3, а также вакцину из штамма Ла-Сота, изготовленную во ВНИИВВиМ, серия № 8-13 изготовлена 10.2013г., с биологической активностью 9,0 lg ЭИД50/СМ3.

2.1.2 Вирус. Для контрольного заражения вакцинированных кур использовали эпизоотический вирус НБ штамм Т-53, полученный из музея штаммов ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии, с биологической активностью 8,5 lg ЭЛДзо/с«3

2.1.3 Птицы. Цыплята-бройлеры кросса КОББ 500, характеризующиеся более высокой продуктивностью и меньшим сроком откорма.

2.1.4 Куриные эмбрионы. Куриные эмбрионы в возрасте 9 дней, полученные из яиц категории СПФ (свободных от патогенной микрофлоры), не имеющих антител к вирусу НБ.

2.1.5 Сыворотки. В работе использовали сыворотку крови от непривитых и привитых против НБ птиц.

2.1.6 Растворы и реактивы. Питьевая вода чистая, свободная от ионов железа и хлора, комнатной температуры; физиологический раствор рН 7,2-7,4; дистиллированная вода; 3%-й раствор перекиси водорода; 5%-й раствор йода; 1%-я суспензия куриных эритроцитов; спирт-ректификат; парафин; спирт-эфир; пенициллин; стрептомицин; глицерин чда; флюоресцеин натрия (уранин).

2.1.7 Приборы и инструменты. Пробирки Уленгута; штатив; шприцы; предметные стёкла; пробойник; планшеты плексигласовые с лунками; холодильник бытовой; термостат; пипетки глазные; спреер марки «Глория» с ручным приводом Prima 5 Тур 42Е (Германия), создающий монодисперсные частицы диаметром 100 — 200 мкм; генератор аэрозолей САГ - 2М.

2.1.8 Стабилизаторы. Сухое обезжиренное молоко; глицерин.

2.2 Методы

2.2.1 Титрование вакцины. Титрование вакцины проводили на 9 — 10 суточных куриных эмбрионах по общепринятой методике [2, 12, 14]. Активность вируса рассчитывали по методу Рида и Менча.

2.2.2 Постановка реакции агглютинации эритроцитов. Реакцию агглютинации проводили макро и микро - методами в пластиковых планшетах с круглодонными или коническими лунками. Титром гемагглютинирующей активности считали наибольшее разведение вируса, дающее чётко выраженную агглютинацию эритроцитов в виде «зонтика».

2.2.3 Постановка реакции задержки гемагглютинации эритроцитов. Реакцию задержки (торможения) гемагглютинации (РЗГА, РТГА) ставили в микромодификации по Sever J.L. с 1 % суспензией куриных эритроцитов в планшетах для микротитрования с U и V-образными лунками.

2.2.4 Определение напряженности иммунитета. Напряженность иммунитета оценивали по уровню специфических антител в сыворотках крови вакцинированной птицы и по результатам их контрольного заражения. В возрасте 1,3, 7, 11 и 13 дней перед вакцинацией от 25-30 цыплят каждого опытного корпуса отбирали кровь для исследования на наличие специфических антител к вирусу БН. После вакцинации пробы крови для определения специфических поствакцинальных антител отбирали в возрасте 20, 28 и 38 дней, т.е. через 7, 14 и 24 дня после вакцинации.

2.2.5 Оральная вакцинация. Для проведения вакцинации использовали живую вирусвакцину против НБ из штамма Ла-Сота производства Покровского завода биопрепаратов с биологической активностью 8,5 ^ЭИД50/смз. Цыплят вакцинировали орально с питьевой водой из расчёта 10 назальных доз на голову (1 назальная доза в 1 см3 воды). Расход рабочего разведения составлял 10 см3/голову. Реакцию цыплят на оральную вакцинацию оценивали по проявлению поствакцинальных осложнений, сохранности поголовья и привесам. Иммунологическую эффективность вакцинации оценивали по уровню поствакцинальных антител. Экономические показатели рассчитывали по затратам на проведение вакцинации.

2.2.6 Окулярная вакцинация. Для иммунизации бройлеров окулярным методом использовали сухую живую вирусвакцину из штамма Ла-Сота Покровского завода биопрепаратов с биологической активностью 8,5 lg ЭИД

50/см3 из расчёта 1 назальная доза на голову. Реакцию цыплят на вакцинацию оценивали по наличию клинических признаков заболевания, гибели, привесам. Иммунологическую эффективность вакцины оценивали по уровню поствакцинальных антител. Экономические показатели рассчитывали по затратам на проведение вакцинации.

2.2.7 Вакцинация спрей методом (крупнокапельным распылением). Для иммунизации бройлеров спрей методом использовали сухую живую вирусвакцину из штамма Ла-Сота, Покровского завода биопрепаратов с биологической активностью 8,5 1ц ЭИД 50/см3. Расход вакцины составил 1 назальная доза на голову. Вакцину растворяли в чистой охлажденной до комнатной температуры воде, свободной от ионов железа и хлора, из расчета 1000 назальных доз на один литр воды. Показателем правильно проведенной вакцинации являлось равномерное увлажнение оперения птиц. Реакцию цыплят на вакцинацию оценивали по клиническим признакам заболевания, гибели, привесам. Иммунологическую эффективность вакцинации оценивали по уровню поствакцинальных антител. Экономические показатели рассчитывали по затратам на проведение вакцинации.

2.2.8 Определение расчётной дозы вакцины против ньюкаслской болезни при применении спрей методом. Эксперименты проводили в помещении площадью 20 м2 и объёмом 80 м3 путём распыления вакцины согласно методике аэрозольной вакцинации и спрей метода. Вакцину для аэрозольного применения использовали в рабочем разведении на 10 %-м растворе глицерина с добавлением в качестве метки флюоресцеина натрия. Распыление вакцины осуществляли генератором аэрозолей САГ- 2М. Вакцину для спрей метода готовили на дистиллированной воде из расчёта 2 назальных дозы в одном миллилитре с добавлением в качестве метки флюоресцеина натрия и 5 % сухого обезжиренного молока в качестве защитной среды. Экспозиция в обоих случаях составляла 60 минут. Пробы аэрозолей из воздуха отбирали контрольными приборами концентрации (КПК-1) со скоростью 0,2 и 5 л/мин в течение первых двух минут после распыления вакцины и в

дальнейшем через каждые 20 минут в течение 60 минут. Для оценки количества аэрозоля, осевшего на поверхность пола и поверхность оперения цыплят, на полу помещения размещали с разным наклоном подложки стандартной бумаги площадью 10 см2, которые снимали для анализа через каждые 2 минуты в течение первых 20 минут экспозиции и затем через каждые 5 минут до конца экспозиции. Через каждые 4 минуты на одну минуту включали вентилятор для возбуждения потоков воздуха, имитирующих движение птиц. В процессе распыления из факела распыляемого материала отбирали пробы для определения размера частиц.

2.2.9 Статистическая обработка результатов исследований. Статистическую обработку данных проводили общепринятыми методами [9].

3 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1 Характеристика ОАО «Птицефабрика Верхневолжская», Тверской области. Птицефабрика функционирует с 1976 года, работает по замкнутому циклу производства; производственная мощность 18 тыс. тонн мяса в год; выращивается птица кросса КОББ 500; комплектование ремонтного молодняка проводится 4 раза в год поголовьем из Нидерландов и Германии. За сутки производится 55000 яиц. Среднемесячное поголовье составляет 1 млн. 400 тыс. голов. Срок выращивания птицы — 39 дней, сохранность — 93%, среднесуточный привес - 55 грамм. Птицефабрика благополучна по острым инфекционным заболеваниям. Из незаразных заболеваний встречается нефрит, гепатит, пневмония, отек легких, энтерит. Данные заболевания не имеют массового распространения и возникают в основном из-за причин, связанных с нарушением технологии выращивания цыплят - бройлеров. Схема лечебно-профилактических обработок ремонтного молодняка, родительского стада, представленная в табл. 1, предусматривает применение 10 вакцинных и ряда химиотерапевтических препаратов, используемых для витаминотерапии и в качестве противомикробных средств.

Таблица 1 - Схема лечебно-профилактических обработок ремонтного _молодняка, родительского стада_

Возраст Заболевание Вакцина метод Противомикробная

, дней и витаминотерапия

2 НБ Nobilis ND С2 спрей 2-5 Кенфлокс

6 кокцидиоз Рагасох выпойка

7-8 PEO Nobilis REO 1133 подкожно 7-15 Гидрорексвитал

12 НБ Nobilis ND Clone 30 спрей

15 ИБК Nobilis IB 4/91 спрей

16 ИББ Nobilis Gumboro выпойка 20-24 Пкльмотил АС

228 E

26 ИББ Nobilis Gumboro выпойка 27-28 Гидрорексвитал

228 E

27 ИБК+НБ NobilisMA5+ спрей

ND Clone 30

2В Микоплазмоз MG-bac подкожно 30-37 АСД №2

32 ИЛТ Poulvac ILT выпойка

35 РЕО+ИнАн Nobilis REO 1133+ Внутримы- 38-40 Флорой

Nobilis CAV P4 шечно

41 Пневмовирус Merial Nemovac Спрей 41-45 Гидрорексвитал

43-45 Сальмонеллез Nobilis SalenvacT Внутримы- 46-53 Сид-2000

шечно

55 ИБК Nobilis IB 4/91 спрей 54-55 Гидрорексвитал

60 Микоплазмоз MG-bac подкожно 56-58 тилозин тарграт

69 ИБК+НБ NobilisMA5+ спрей 59-60 Гидрорексвитал

ND Clone 30 61-75 СИД-2000

83 Пневмовирус Nobilis RTV 8544 спрей 80-82 Флорон

85-87 РЕО+Сальмонелл NobilisREO(inac)+ Внутримы- 83-87 Гидрорексвитал

ез Nobilis Salenvac T шечно

98-100 ИЛТ+ССЯ+ Poulvac ILT+IB+ Окулярно + 88-124 СИД-2000

НБ+ИБК Nobilis EDS+ND внутримыш

105 Энцефаломиелит Avipro AE выпойка 124-128 Флорон

130-150 СИД-2000

110 ИБК Nobilis IB 4/91 спрей 152-154 Пульмотил АС

120- Пневмовирус+ Nobilis RT+Provac Внутримы- 158-160 Флорон

122 РЕО+ИБК+ 4 TM шечно 164 Пиперазин адипинат

ИББ+НБ 206-212 Интровнт А

225-227 СИД-2000

270- ИБК мульти + Nobilis IB multi+ Внутримы- 231-233 Флорон

273 НБ +ССЯ-76; ND+EDS; шечно 235 Пиперазин адипинат

PEO (инак) Nobilis REO(inac) 260-262 СИД-2000

264 Пиперазин адипинат

3.2 Определение титров вакцинных препаратов. Перед проведением экспериментов приобретённые на Покровском заводе биопрепаратов и во ВНИИВВиМ вакцины были проверены на биологическую активность с целью уточнения титра, который мог измениться в процессе транспортировки и хранения после изготовления. Результаты титрований представлены в табл. 2.

Таблица 2 - Результаты титрования вакцины на куриных эмбрионах

№ серии Дата изготовления Биологическая активность, ^ЭИД5о/Смз

11 06.2011 8,5

33 04.2013 8,5

8-13 10.2013 9,0

Данные табл. 2 свидетельствуют о том, что использованная в опытах вакцина по биологической активности соответствовала паспортным данным изготовителя. Эти результаты учитывали при приготовлении рабочих разведений вакцины при оральном, окулярном и спрей методах применения.

3.3 Оценка эффективности орального, окулярного и спрей методов вакцинации цыплят - бройлеров кросса КОББ 500 против НБ

3.3.1 Определение уровня материнских антител до вакцинации. Результаты исследования сывороток крови цыплят на наличие специфических антител к НБ исследовали в возрасте 1, 3, 7, 11, 13 дней (табл. 3).

Таблица 3 - Результаты исследований проб сывороток крови __п=5

Возраст, дни Кол-во проб, всего Количество проб с содержанием специфических антител % защиты Средний титр, 1о£2

1-2 1о§2 3 4 5 6 'ОЙ2 7 8 1о§2 9 1о§2

1 180 15 57 78 15 15 100 4,76

3 165 42 48 51 15 9 100 6,4

7 180 30 42 63 27 18 83,4 3,45

11 180 63 51 39 12 15 65 2,55

13 115 54 14 17 12 10 5 3 53 2,75

Приведенные в табл. 3 данные свидетельствуют о наличии пассивного

иммунитета к НБ у цыплят до 7-дневного возраста, а начиная с 11-дневного возраста пассивный иммунитет у большинства поголовья находится ниже 80 %, что по действующим документам по профилактике НБ требует проведения соответствующей вакцинации. В наставлении по применению вакцины против НБ из штамма Ла-Сота указано, что минимальный защитный уровень титров антител должен быть от 3 1о§2 и выше, в производственных условиях принято считать защитный титр с 4 и выше.

3.3.2 Оценка эффективности вакцинации оральным методом. В

опытах по оценке эффективности вакцинации против НБ оральным методом использовано 215 523 голов цыплят - бройлеров. Вакцину применяли согласно наставлению из расчёта 10 назальных доз на голову, однократно, в возрасте птицы 14 дней. Результаты исследований представлены в табл. 4, 5 и 6.

Таблица 4 - Результаты исследований проб сывороток крови

п=5

Возраст, дни Исследовано проб, всего Количество проб сывороток с содержанием специфических антител % защиты Средний титр,

1-2 1оа 3 10Й2 4 5 6 1082 7 10{?2 8 10Й2 9 1082

20 90 3 6 24 24 27 6 _* - 96,67 4,87

28 60 - - 6 6 18 21 9 - 100 6,35

38 324 18 51 39 90 63 48 12 3 94,4 4,84

Примечание: *- отсутствие.

Из данных табл. 4 видно, что через 7, 14 и 24 дня после вакцинации уровень защитных антител обнаруживается у 96,7; 100 и 94,4% вакцинированных на уровне 4,87; 6,35 и 4,84 ^2 , соответственно. Через 14 дней после вакцинации оральным методом прирост антител составил 3,6 1о§2.. Для контроля заражали 10 голов привитых бройлеров в возрасте 30 дней (через 16 дней после вакцинации). Результаты представлены в табл. 5.

Таблица 5 - Результаты биологической пробы

п=10

Метод вакцинации Количество проб сывороток крови с содержанием специфических антител у заражаемых бройлеров Биопроба выж./ зараж.

1-2 3 4 1о& 5 1082 6 1082 7 8 1оЯ2 9 1о8г

орально - 2 3 2 2 1 - - 10/10

контроль (невакцннир.) - - - - - - - - 0/5

Примечание: для контрольного заражения использовали вирус вирулентного штамма «Т-53» в дозе 5,0 1яЛД50/го,п путем внутримышечных инъекций в бедро с последующим наблюдением за зараженной птицей в течение 10 дней.

Данные табл. 5 свидетельствуют о том, что после контрольного заражения все цыплята выжили. Средний уровень специфических антител перед заражением составил 4,7 1о§2. Производственные показатели в табл.6. Таблица 6 - Производственные показатели

Сохранность, % Среднесуточный привес, г Живой вес головы, г Падеж % Получено мяса с 1 м2, кг

93,15 ±0,8 (95,0)* 55,10±1,0 (57,0) 2038±26,0 (2100) 7,1±0,8 (5,0) 36,58±0,5 (37,8)

Примечание: * цифры в скобках - нормативные данные.

Данные табл. 6 свидетельствуют о высоком уровне производственных показателей. Причинами падежа являлись энтериты, гепатиты, нефриты. Специфических антител и вируса НБ от павших цыплят не выделяли. Видимых клинических признаков реакций и изменений физиологического состояния птиц после оральной вакцинации не наблюдали. В процессе проведения оральной вакцинации в одном цехе задействованы ветеринарный санитар и птичница в течение 2,5 часов. Трудоемкость составляла 5 чел/час.; расходы на оплату труда 480 руб.; расходы на приобретение вакцины 10 500 руб.

3.3.3 Оценка эффективности окулярного метода вакцинации. В опытах по оценке эффективности окулярного метода вакцинации птицы мясного направления использовано 122 322 голов цыплят - бройлеров. Вакцину применяли согласно действующему наставлению из расчёта 1 назальная доза на голову, возраст птицы 14 дней. Результаты представлены в табл. 7, 8 и 9.

Из данных табл. 7 следует, что после вакцинации через 14 дней уровень защитных антител обнаруживается у 96,5 % вакцинированных на уровне 5,46 1о§2, сероконверсия составила 2,71 \og2.

Таблица 7 - Результаты исследований проб сывороток крови

п=7

Возраст, ДНИ Исследовано проб, всего Количество проб сывороток с содержанием специфических антител % защиты Средний титр, 10&2

1-2 3 4 5 6 1(^2 7 8 1о& 9

20 147 3 21 33 36 36 18 98 4,96

28 174 6 39 57 30 21 12 9 96,5 5,46

38 117 3 15 24 24 27 21 3 100 6,12

Через 24 дня после вакцинации окулярным методом уровень защитных антител обнаруживается у 100 %, сероконверсия составила 3,37 1о§2. (табл. 8).

Таблица 8 - Результаты биологической пробы

Метод вакцинации Количество проб сывороток крови с содержанием специфических антител у заражаемых бройлеров Биопроба выж./ зараж.

1-2 1о§2 3 4 1(^2 5 1082 6 10Й2 7 8 9 1(^2

окулярно - - 2 2 3 2 1 - 10/10

контроль (невакцинир.) - - - - - - - - 0/5

Примечание: для контрольного заражения использовали вирус вирулентного штамма «Т-53» в дозе 5,0 ^ЛД5о/10л путем внутримышечных инъекций в бедро с последующим наблюдением за зараженной птицей в течение 10 дней.

Данные табл. 8 свидетельствуют о том, что после контрольного заражения все вакцинированные окулярным методом цыплята оказались устойчивыми к инфицированию эпизоотическим вирусом. Средний уровень специфических антител перед заражением составил 5,8 ^2.

Таблица 9 - Производственные показатели

п=4

Сохранность, % Среднесуточный привес, г Живой вес головы, г Падеж % Получено мяса с 1 м2,кг

92,00±0,7 (95,0)* 55,43±1,0 (57,0) 2056±38 (2100) 8,0±0,8 (5,0) 37,04±0,5 (37,8)

Примечание: * цифры в скобках - нормативные данные.

Данные табл. 9 свидетельствуют о том, что производственные показатели

после окулярной вакцинации близки к нормативным данным. Причинами падежа являлись энтериты, гепатиты, нефриты. Клиническая реакция на введение вакцины окулярным методом отмечена с 3 по 10 сутки в виде вялости, снижения поедаемости корма, иногда одышки. В процессе проведения окулярной вакцинации в цехе задействованы четыре ветеринарных санитара, птичница, слесарь в течение 5 часов. Трудоемкость 30 чел/час.; расходы на оплату труда 1920 руб.; расходы на приобретение вакцины 1050 руб.

3.3.4 Оценка эффективности спрей метода вакцинации. В опытах использовали 113162 голов цыплят - бройлеров. Результаты исследований представлены в табл. 10,11 и 12.

Таблица 10 - Результаты исследований проб сывороток крови

п=7

Возраст, дни Исследовано проб, всего Количество проб сывороток с содержанием специфических антител % защиты Средний титр, log2

1-2 log2 3 log2 4 log2 5 log2 6 log2 7 log2 8 10g2 9 log2

20 150 3 - 6 6 27 30 78 98 7,98

28 120 3 - - 15 33 24 30 15 97,5 6,80

38 171 15 6 21 33 51 21 15 9 91,2 5,51

Примечание: * - отсутствие.

Из данных табл. 10 следует, что через 14 дней после вакцинации уровень защитных антител обнаруживается у 97,5 % вакцинированных 6,801og2, сероконверсия составила 4,05 log2. Через 24 дня после вакцинации у 91,2 % вакцинированных на уровне 5,51 log2, сероконверсия составила 2,76 log2. Результаты контрольного заражения цыплят, вакцинированных спрей методом, представлены в табл. 11.

Таблица 11 - Результаты биологической пробы

п=10

Метод вакцинации Количество проб сывороток крови с содержанием специфических антител у заражаемых бройлеров Биопроба выж./ зараж.

1-2 log2 3 log2 4 log2 5 log2 6 log2 7 log2 8 log2 9 log2

спрей - - 3 1 3 1 1 1 10/10

контроль (невакцинир.) - - - - - - - - 0/5

Примечание: для контрольного заражения использовали вирус вирулентного штамма «Т-53» в дозе 5,0 1§ЛД5о/ГОл. путем внутримышечных инъекций в бедро с последующим наблюдением за зараженной птицей в течение 10 дней.

Данные табл. 11 свидетельствуют о том, что после контрольного заражения все цыплята, вакцинированные спрей методом оказались устойчивыми к инфицированию эпизоотическим вирусом. Средний уровень специфических антител перед заражением составил 6,8 Производственные показатели по вакцинированному спрей методом поголовью даны в табл. 12.

Таблица 12 - Производственные показатели цыплят, вакцинированных спрей

методом

__п=4

Сохранность, % Среднесуточный Привес, г Живой вес Головы, г Падеж % Получено мяса с 1 м2, кг

91,65±0,7 59,63±1,0 2086 ±48 6,8±0,8 39,00±0,5

1 (95,0)* 1 (57,0) | (2100) [ (5,0) | (37,8) |

Примечание: * цифры в скобках - нормативные данные.

Приведенные в табл. 12 результаты свидетельствуют о том, что производственные показатели близки к нормативным для данного кросса. При проведении спрей вакцинации в цехе была задействована бригада из 3-х ветеринарных санитаров в течении 2,5 ч. Трудоёмкость 7,5 чел/час; расходы на оплату труда - 480 рублей; расходы на приобретение вакцины 1050 рублей.

Испытанные методы вакцинации выраженного воздействия на привесы поголовья не оказывали, птица развивалась в соответствии с характерными для кросса КОББ 500 физиологическими нормами. Сравнительные результаты, полученные при вакцинации против НБ в условиях ОАО «Птицефабрика Верхневолжская», Тверской области, представлены в табл. 13.

Таблица 13 - Показатели, характеризующие иммунологическую и

экономическую эс )фективность орального, окулярного и сп эей метода

Методы вакцинации Средние титры антител, 1о8г. вГ о О. <и а X о а о & й О .2 Клиническая поствакцинальная реакция Расход вакцины, назальных доз на одну голову Привес, гр. Живой вес одной головы, гр. Сохранность, % Падеж, %

оральный 5,26 (4,70)* 3,60 Нет 10 55,10 2038 93,15 6,85

окулярный 5,81 (6,13) 2,71 Да 1 55,43 2056 92,0 8,0

спрей 6,76 (5,46) 4,05 Нет 1 59,63 2086 91,65 8,35

Примечание: * в скобках указаны титры антител перед убоем ( 38 дн.)

Из приведенных данных видно, что при оральной вакцинации уровень специфических антител сыворотки крови и сероконверсия находятся на низком уровне при самом высоком расходе вакцины. Более высокий уровень специфических антител и сероконверсии наблюдается при вакцинации спрей методом. Окулярный метод занимает среднее положение, однако характеризуется более выраженным иммунным ответом, который подтверждается повышением титров антител к 38 дню, в то время как после

орального и спрей методов иммунизации имеет место существенное снижение уровня защитных антител.

Из данных табл. 13 также следует, что: при оральном методе вакцинации получены более высокие показатели сохранности птицы (93,15 %), более низкие показатели живой массы (2038 гр.), получено 1898 гр. живой массы птицы на одну посаженную голову; при окулярном методе вакцинации получены средние показатели сохранности птицы (92,0 %), средние показатели живой массы (2056 гр.), и 1891 гр. живой массы птицы на одну посаженную голову; при спрей методе вакцинации получены самая низкая сохранность птицы (91,65 %), высокие показатели живой массы (2086 гр.) и получено 1912 гр. живой массы птицы на одну посаженную голову. Анализ результатов исследований при вакцинации бройлеров против НБ с использованием спрей метода показал, что слабая ответная реакция на введенную назальную дозу вакцины обусловлена не только пониженной иммунореактивностью бройлеров кросса КОББ 500, но и недостаточной дозой вакцины.

3.4 Результаты определения расчётной дозы вакцины против ньюкаслской болезни при спрей методе применения. При воспроизведении методики аэрозольной иммунизации было установлено, что концентрация аэрозоля в первые 20 минут после распыления составила 0,34 мг/л, а к концу экспозиции-0,028 мг/л (среднее значение концентрации за 60 минут составило 0,151 мг/л). При воспроизведении методики спрей вакцинации в первые 20 минут концентрация вакцины в воздухе составила 0,064 мг/л, а к концу экспозиции-0,004 мг/л. Изменение концентрации создаваемых аэрозолей вакцины при двух методах распыления во времени представлено на рис. 1.

С Аэрозольный С «Спрей»

Рисунок 1 - Изменение концентрации создаваемых аэрозолей вакцины при аэрозольном и спрей методах распыления Примечание: 1.концентрация аэрозоля в воздухе (мг/л); 2.концентрация осадка на поверхности пола (мг/см2); 3.концентрация осадка на поверхности тела птицы (мг/см2).

Количество вакцины, осевшее на поверхности пола и тела птиц в расчёте на 1см2 поверхности и расчётные дозы вакцины при аэрозольном и спрей методах вакцинации, представлены в табл. 14.

Таблица 14 - Расчётные дозы вакцины, попадающие в организм птиц различными путями при аэрозольном и спрей методах применения

Метод Концентра- Концентра- Концентра-

распыле ция ция вакцины ция вакцины Дозы вакцины, ЭИД50

ния вакцины в на на о

воздухе, мг/л поверхности тела цыплёнка, мг/см2 поверхности пола помещения, мг/см2 Аэрозольн Назально Окулярно Орально

аэро- 0,454 0,110 0,101 1335 104,4 130,4 9132,4

зольно

спрей 0,084 0,617 0,680 208,3 595,2 744 52080

Примечание: - при аэрозольной иммунизации назальная доза является составной частью ингаляционной и существенной самостоятельной роли не играет.

Для расчётов условно приняли, что исходная биологическая активность вакцины равна 109 ЭИД50/смз (при аэрозольной иммунизации активность в расчёте на мг составляет 2372 ЭИДзо, а при спрей методе - 2000 ЭИД5о), масса цыплёнка - 100 гр., величина минутной легочной вентиляции-0,062 л/мин, экспозиция - 60 минут. Площадь поверхности ноздри цыплёнка принята равной 0,2см2; площадь поверхности глаза цыплёнка принята равной 0,25 см2; оральная

доза рассчитана при условии склёвывания 1/10 части вакцины, осевшей на тело птицы.

Данные табл. 14 и рис. 1 свидетельствуют о том, что при спрей методе применения вакцины её концентрация в воздухе в 5-7 раз ниже, чем при аэрозольной иммунизации. На поверхность тела птицы при спрей методе оседает в 5-7 раз больше вакцины, чем при аэрозольной иммунизации, при этом в обоих случаях имеет место увеличение количества осевшей на пол вакцины, что можно объяснить стряхиванием осадка вакцины с тела птиц на пол в результате движений вакцинированного поголовья. Если принять во внимание тот факт, что оптимальная доза вакцины из штамма Ла-Сота при аэрозольном применении составляет 800 - 1200 ЭИД50, при назальном и окулярном методах -106ЭИД5о и при оральном - 107ЭИД5о, задаваемые дозы вакцины при спрей методе применения в 5-7 раз ниже оптимальной аэрозольной, в тысячу и более раз ниже оптимальной назальной, окулярной и оральной доз. В связи с недостаточными дозами вакцины при всех путях проникновения антигена во время вакцинации спрей методом имеет место формирование непродолжительного по времени и низкого по напряженности поствакцинального иммунитета.

Следует предположить, что положительный эффект в основном обеспечен за счёт аэрозольного пути проникновения вакцины в количествах несколько больших, чем показывают расчёты, так как в расчётах не принимали во внимание вторичные аэрозоли. Положительный эффект применения вакцины против НБ в ОАО «Птицефабрика Верхневолжская» подтверждён на вакцинированном поголовье в количестве более 100 тысяч, где получили несколько лучшие экономические показатели по сравнению с окулярным и оральным методами вакцинации, где были заданы дозы в соответствии с действующим наставлением, которые вызвали заметную иммунологическую реакцию. В данном случае спрей метод оказался ближе к контролю (невакцинированным) и поэтому показатели экономической эффективности в поствакцинальный период несколько лучше, чем при других методах вакцинации. В иммунологическом плане вакцина при крупнокапельном распылении не обеспечивает надёжной защиты поголовья от возникновения заболевания, а спрей метод «прижился» на птицеводческих предприятиях благодаря высокому уровню ветеринарно-санитарной защищённости

технологий выращивания птиц. Существенным недостатком спрей метода вакцинации является необходимость постоянного присутствия людей в процессе распыления вакцины, что при недостаточной индивидуальной защищённости может отрицательно сказаться на безопасности обслуживающего персонала, у которого могут развиваться различного рода аллергические реакции и сопутствующие им заболевания.

3.5 Схема вакцинации цыплят - бройлеров в ОАО «Птицефабрика Верхневолжская». Действует следующая схема вакцинации цыплят-бройлеров: в суточном возрасте вакцинируют против инфекционного бронхита и НБ, спрей методом; в возрасте 10 дней вакцинируют против ИББ (штамм Винтерфилд), методом выпойки; в возрасте 14 дней ревакцинируют против НБ, спрей методом; в возрасте 21 день ревакцинируют против инфекционного бронхита, спрей методом. Проведенный анализ уровня материнских антител у цыплят суточного возраста позволил рекомендовать отмену вакцинации против НБ в суточном возрасте. Схема на рис. 2.

1 10 14 21 38

I III

ПБК ИББ НБ ЦБК

Рисунок 2 - Рекомендуемая схема вакцинации цыплят — бройлеров

По этой схеме цыплят — бройлеров в суточном возрасте вакцинируют

против инфекционного бронхита, спрей методом; в возрасте 10 дней вакцинируют против ИББ, методом выпойки; в возрасте 14 дней вакцинируют против НБ спрей методом; в возрасте 21 день ревакцинируют против инфекционного бронхита, спрей методом. В настоящее время эта схема вошла в разработанные методические рекомендации по совершенствованию противоэпизоотических мероприятий при профилактике и борьбе с НБ в ОАО «Птицефабрика Верхневолжская», Тверской области, утвержденные 6 февраля 2015 года заместителем начальника Главного управления государственной инспекции по ветеринарии Тверской области Н.М. Щагиной.

4 ВЫВОДЫ

4.1 Изучена эффективность вакцины из штамма Ла-Сота при оральном, окулярном и спрей методах вакцинации цыплят - бройлеров кросса КОББ 500 в условиях ОАО «Птицефабрика Верхневолжская», Тверской области. Через 1424 дня после прививки оральным методом иммунитет формируется у 94,4-100

% вакцинированных бройлеров и имеет тенденцию к снижению; после иммунизации окулярным методом иммунитет формируется у 96,5 - 100 % вакцинированных бройлеров и имеет тенденцию к увеличению; после вакцинации спрей методом иммунитет формируется у 91,2 - 98 % и имеет тенденцию к снижению.

4.2 Установлена недостаточная иммунореактивность организма бройлеров кросса КОББ 500 на применяемую вакцину против НБ из штамма Ла-Сота при оральном, окулярном и спрей методах применения. Титры поствакцинальных антител после оральной вакцинации имеют большой разброс в пределах 3-8 ^2 (1:8-1:256); после окулярной вакцинации - 4-9 ^2 (1:161:512) и после спрей метода — 0-9 log2 (0-1:512). При контрольном заражении все вакцинированные цыплята выжили.

4.3 Вакцина из штамма Ла-Сота при оральном, окулярном и спрей методах применения в рекомендованных наставлением по применению дозах не вызывает поствакцинальных осложнений, повышенного отхода после вакцинации у цыплят - бройлеров кросса КОББ 500. Сохранность поголовья составила от 91,65 % до 93,15 %, а живая масса птицы колебалась в пределах от 2038 до 2086 гг.

4.4 На основе анализа уровня материнских антител к вирусу НБ в период с суточного до 13-суточного возраста первую вакцинацию против ньюкаслской болезни целесообразно проводить с возраста 11-13 дней, так как к этому времени наличие антител наблюдается у 53-65 %, а вакцинацию в суточном возрасте проводить нецелесообразно.

4.5 По экономической эффективности наименее затратным является спрей метод вакцинации, где на вакцинацию 30 000 голов цыплят бройлеров потрачено 1530 рублей. Наиболее затратным является оральный метод, где затраты на вакцинацию 30 000 голов цыплят бройлеров составили 10 980 рублей. Затраты на проведение окулярного метода вакцинации 30 000 голов цыплят бройлеров составили 2 970 рублей.

5 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Для практического применения разработаны методические рекомендации «Специфическая профилактика ньюкаслской болезни в ОАО "Птицефабрика Верхневолжская", Тверской области», которые рассмотрены и утверждены 6 февраля 2015 года заместителем начальника Главного управления

«Государственная инспекция по ветеринарии» Тверской области Н.М. Щагиной.

6 СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Аленко, В.М. Вакцинация цыплят аэрозольным методом против псевдочумы птиц вакциной из штамма В1 / В.М. Аленко, И.А. Бражников // Сб. тр. ВНИИ болезней птиц.-Л.,1971.-№7/18.-С.103-105.

2. Бакулин, В.А. Болезни птиц / В.А. Бакулин,- СПб., 2006,- С.148-162.

3. Богданов, В.Г. Об этиологии и профилактике осложнений при аэрозольной вакцинации птиц против псевдочумы / В.Г. Богданов,- Сб. тр. ВНИИ болезней птиц.-Л.,1969.-№6/17. -С.49-53.

4. Бондаренко, И.М. Сравнительная оценка эффективности вакцинных штаммов и методов, применяемых для активной иммунизации птиц против ньюкаслской болезни: автореф. дис. канд. биол. наук / Бондаренко И.М.Покров, 1971.-26 с.

5. Бондаренко, И.М. Профилактика болезней животных аэрозолями вакцин / В .И. Бурцев, H.A. Лагуткин,- М: .Колос, 1975.- 272 с.

6. Бондаренко, И.М. Аэрозольная вакцинация птиц против ньюкаслской болезни. Сообщение 2. Иммунологическая эффективность аэрозольного и интраназального методов вакцинации. Болезни птиц / И.М. Бондаренко, В.И. Бурцев, В.В. Чернышев, А.Т. Кушнир // Сб. трудов ВНИИПБП.-Л.,-1973.-

Вып.9(20).- С. 21-27.

7. Кудрявцев, Ф.С. Влияние метода вакцинации на напряженность иммунитета у цыплят к псевдочуме/ Ф.С. Кудрявцев, З.Я. Чистова, В.Н. Сюрин // Ветеринария.-1966. -№ 1.-С.39-41.

8. Лагуткин,H.A. Эффективность аэрозольной и оральной вакцинации против псевдочумы птиц / H.A. Лагуткин, В.В. Чернышев, И.М. Бондаренко // Птицеводство,- 1971.-№11.-С.45-46.

9. Лакин, Г.Ф. Биометрия / Г.Ф. Лакин,- М.: Высшая школа, 1990.-352 с.

10. Об эффективности назального, орального и ингаляционного методов вакцинации птиц против псевдочумы/ В.И. Бурцев, И.М. Бондаренко, В.В. Чернышев, H.A. Лагуткин, А.Т. Кушнир // Тезисы докладов на Всесоюзном совещании.-Ку йбышев, 1973 .-С.48-50.

11. Селиванов, A.B. Групповая профилактика инфекционных болезней животных/ A.B. Селиванов.-М:- Колос, 1966.-С. 250

12. Сюрий, В.Н. Вирусные болезни животных / В.Н. Сюрин, А.Я. Самуйленко, Б.В. Соловьёв, Н.В. ФоминаМ:. ВНИТИБП, 1998.-С.214-233.

13. Яковлева, Н.Д. Стоимость и стратегия профилактики болезней при производстве бройлеров на птицефабрике / Н.Д. Яковлева, Н.В. Кожемяка // Ветеринария.-2006.-№ 10.-С. 15-16.

14. Chakrabarti, S. Detection and isolation of exotic Newcastle disease virus from field-collected flies / S. Chakrabarti, D.J. King, C. Afonso // J. Med. Entomol -2007 -v.44.-№5.-P.840-844.

15. Chansiriporchai, N. Efficacy of live B, or Ulster 2 С Newcastle disease vaccines simultane ously vaccinated with inactivated oil adjuvant vaccine for protection of Newcastle disease virus in broiler chickens / N. Chansiriporchai, I. Sasipreeajan // ActaVet.Scand.-2006.-v.48.-№l .-P.2.

16. Manual of Diagnostic Test and Vaccines for Terrestrial Animals O.I.E. // 6-th Edition,Paris.-2008.

7 СПИСОК НАУЧНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ

ДИССЕРТАЦИИ

1. Брит, В.И. Эффективность вакцинации мясной породы кур кросса КОББ 500 против ньюкаслской болезни окулярным методом / В.И. Брит, А.Т. Кушнир И Актуальные вопросы контроля инфекционных болезней животных. Материалы Международной научно-практической конференции, посвященной 55-летию ВНИИВВиМ -13 ноября 2013г.- С. 66-70;

2. Кушнир, А.Т. Оральная вакцинация бройлеров КОББ 500 против ньюкаслской болезни / А.Т. Кушнир, В.И. Брит // Ветеринария.-2013.-№9,-С.28-30;

3. Брит, В.И. Эффективность вакцинации бройлеров против ньюкаслской болезни окулярным методом / В.И. Брит, А.Т. Кушнир // Ветеринарный врач,-2014.-№1.-С.25-28;

4. Кушнир, А.Т. Вакцинация бройлеров кросса КОББ 500 против ньюкаслской болезни методом спрей / А.Т. Кушнир, В.И. Брит // Ветеринария,-2014.-№4.-С. 11-14.

8 СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ЭИД50 - эмбриональная инфицирующая доза, обеспечивающая заражение 50 %

взятых в опыт куриных эмбрионов

ИБК - инфекционный бронхит кур

САГ - струйный аэрозольный генератор

ЭЛД - эмбриональная летальная доза

Подписано в печать 08.04.2015г.

Формат 60*90 1/16. Усл. печ. л.1 Отпечатано на полиграфической базе ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» Тираж 80 экз.