Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Эффективность использования высокопродуктивных коров с различным физиологическим статусом в качестве доноров эмбрионов

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Эффективность использования высокопродуктивных коров с различным физиологическим статусом в качестве доноров эмбрионов"

/ /у/"

ф I

на правей: рукописи

Ерин Сергей Николаевич

Эффективность использования высокопродуктивных коров с различным физиологическим статусом в качестве доноров

эмбрионов.

03.00.13. - Физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

□0346217Т

Дубровицы, Московская область 2009 г.

003462177

Работа выполнена в отделе биологии воспроизводства и трансплантации эмбрионов сельскохозяйственных животных имени академика В.К. Милованова. Государственного научного учреждения «Всероссийский научно-исследовательский институт животноводства Российской академии сельскохозяйственных наук»

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор

Сергеев Николай Иванович

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Клинский Юрий Дмитриевич;

доктор биологических наук, профессо Ерохин Анатолий Сергееви

Ведущее учреждение:

ФГОУ Российская академия менеджмента в животноводстве.

м

Защита диссертации состоится «//» ^¿¿¿¿/¡^ 2009 года в 10 часов, на заседании Совета по защите докторских и'кандидатских диссертаций Д 006.013.01 при ГНУ Всероссийском научно-исследовательском институте животноводства Россельхозакдемии.

Адрес института: 142132, Московская область, Подольский район, п. Дубровицы, ГНУ ВНИИЖ РАСХН. Факс: 8(4967>65-11-01.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института. Автореферат разослан <н (/» « » 2009 года.

Ученый секретарь Со: Д 006.013.01

Yiee^^Xl. Губанова

1. Общая характеристика работы.

Актуальность работы. Современные методы селекции, генетики и воспроизводства являются научным фундаментом повышения продуктивности и ачественного усовершенствования продукции животноводства.

Стратегия управления воспроизводством крупного рогатого скота преду-матривает разработку системы с использованием новых методов разведения, овышения их генетического потенциала с постоянным поддержанием необхо-имой численности. Новые подходы к ускорению генетического прогресса, со-тветствующие требованиям селекции на мировом уровне, могут быть осущест--лены с применением метода трансплантации эмбрионов.

В настоящее время в племенных хозяйствах Российской Федерации созданы консолидированные популяции крупного рогатого скота новых типов со средней продуктивностью свыше 6 тыс. кг молока. Несмотря на селекционные достижения, поголовье скота в племенных хозяйствах сократилось до 5,3-7% вместо необходимого уровня 10-15%.

Низкие темпы воспроизводства привели к огромному дефициту племенного молодняка, который восполняется за счёт закупок импортного скота, но без учёта селекционных программ, условий содержания и кормления завезённых животных не привели к желаемым результатам. Возникла острая потребность изыскания резервов поставки на внутренний рынок отечественной племенной продукции, адаптированной к местным условиям различных регионов страны.

В такой ситуации одной из актуальных проблем является разработка научно обоснованной системы расширенного воспроизводства с применением метода трансплантации эмбрионов при максимальном использовании генетических ресурсов племенных хозяйств. Актуальность возобновления работы по трансплантации эмбрионов в племенных хозяйствах возрастает и вследствие сложившегося эпизоотического состояния скотоводства в мире.

Поэтому актуальным является дальнейшее изучение возможности широкого использования выдающихся коров в качестве разовых доноров эмбрионов, повышения их эмбриопродуктивности и нормализации репродуктивной функции при дальнейшем использовании коров в воспроизводительном цикле стада. Эти разработки позволят определить оптимальные варианты технологии воспроизводства стада в племенных хозяйствах для интенсификации племенного животноводства России.

Цель и задачи исследований. Повышение эффективности использования высокопродуктивных коров в качестве разовых доноров эмбрионов в племенных хозяйствах без снижения дальнейшей воспроизводительной функции.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

1. Определить влияние физиологического состояния репродуктивной системы у коров в послеродовой период на реакцию суперовуляции и эмбриопро-дуктивность.

2.Выявить влияние высокоочищенного фолликулостимулирующего гормона на реакцию суперовуляции и качество эмбрионов у высокопродуктивных коров-доноров.

3. Установить влияние различных доз и схем введения препарата ФСГ-СУПЕР на реакцию суперовуляции.

4. Изучить влияние уровня суперовуляции на качество и приживляемость эмбрионов.

Научная новизна. Определены потенциальные возможности использования коров в качестве разовых доноров-эмбрионов в высокопродуктивных стадах на протяжении сервис-периода. Установлено положительное влияние высоко-очищенного фолликулостимулирующего гормона на развитие доминантных фолликулов, овуляцию и эмбриопродуктивность животных. Повышение содержания лютеинизирующего гормона в препаратах ФСГ способствует лютеиниза-ции доминантных фолликулов без овуляции при суперовуляции. Стимуляция первого пула фолликулов на 3-ий и 4-ый дни полового цикла перед гормональной обработкой коров на суперовуляцию, которая увеличивает число доминантных фолликулов, повышает эмбриопродуктивность доноров и выживаемость эмбрионов.

Практическая значимость. Повышение эффективности метода трансплантации эмбрионов в племенных хозяйствах при использовании высокопродуктивных коров в качестве одноразовых доноров эмбрионов на протяжение сервис-периода.

Апробация работы. Результаты исследований были доложены на международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы биологии воспроизводства животных» (Дубровицы, 2007г.), международной научно-практической конференции «Современные методы репродукции сельскохозяйственных животных: становление и перспективы развития» (Харьков, 2008 г).

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 114 страницах печатного текста и состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты и обсуждение, выводы, практические предложения, список литературы и приложения. Работа содержит 20 таблиц и 19 рисунков, 2 приложения. Список литературы включает 147 источников, в том числе 52 на иностранных языках.

Публикации результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 4 научных работы, в т.ч. одна статья в журнале, рекомендованном бюллетенем ВАК.

Основные положения, выносимые на защиту:

- Отбор и результаты использования коров при разном физиологическом состоянии для гормональной стимуляции на реакцию суперовуляции и получение эмбрионов.

- Возможность использования коров селекционного ядра в качестве разовых доноров эмбрионов на протяжении сервис периода.

- Использование высокоочищенного фолликулостимулирующего гормона для стимуляции суперовуляции и повышения эмбриопродуктивности коров доноров эмбрионов.

2. Материал и методы исследований.

Опыты были проведены в отделе биологии воспроизводства и трансплантации эмбрионов сельскохозяйственных животных имени академика В.К.Милованова ГНУ ВНИИЖ РАСХН и в племенных хозяйствах ГУПП «ТОЛМОЧЕВО» Нижегородской области, ОПХ «ЩАПОВО», «ДУБРОВИЦЫ» Подольского района Московской области, в период с 1997 по 2000 год, с 2007г. по 2008г. по схеме, представленной на рис. 1

Рис. 1 Схема исследований

Объектом исследований являлись коровы и тёлки черно-пёстрой породы (п=241). Коровы от 4-х до 7-ми летнего возраста с продуктивностью от 6000 до 9000 кг молока за 305 дней лактации при суточном удое 24 - 41кг молока во

время обработок и извлечений эмбрионов. Тёлки, отбираемые в реципиенты, были от 16 до 18 месячного возраста с массой тела от 380 до 420кг. Содержание коров было привязное, тёлок - беспривязное. Кормление животных осуществляли по нормам ВИЖа. Основными критериями отбора коров в доноры эмбрионов были селекционные признаки (продуктивность, происхождение, экстерьерные признаки) и физиологическое состояние. Причинами выбраковки коров при отборе в доноры эмбрионов по физиологическому состоянию были: нарушение обмена веществ, ламиниты, маститы, воспалительные заболевания половых путей, нарушения функции яичников (гипофункция и кисты). Окончательными критериями отбора коров для гормональных обработок на суперовуляцию являлись нормальное состояние половых путей и наличие в яичниках желтых тел или фолликулов.

Все коровы, отобранные по этим признакам в доноры эмбрионов, были распределены по группам в зависимости от физиологического состояния: «здоровые» - через 60-90 дней после отела, не имевшие послеотельных осложнений; «проблемные» - животные клинически здоровые без признаков заболеваний половой системы, но имеющие в анамнезе 3 и более неплодотворных осеменений с интервалом после отела более 90 дней; коровы, имевшие послеродовые осложнения, но после лечения на момент обследования при отборе признанные здоровыми. При наличии жёлтого тела в яичниках проводили синхронизацию охоты простагландинами F 2а. После проявления охоты, на 10-12 дни полового цикла, проводили гормональную обработку препаратами фолликулостимулирующего гормона для вызывания реакции суперовуляции. Использовали препараты фолликулостимулирующего гормона разной степени очистки в дозах 60, 50, 40 единиц по стандарту Арморо: FSG-p и ФСГ-СУПЕР, отличающиеся по содержанию ФСГ и ЛГ. Гормональную обработку проводили по двум схемам: первая - по инструкции к препарату с 4-х дневной обработкой двукратно в день; вторая - с дополнительным применением микродоз в количестве 2,5-3 ЕД Арморо ФСГ на 3-ий и 4-ый дни полового цикла для стимуляции первого пула фолликулов перед началом обработок на суперовуляцию.

Для изучения влияния высокоочищенного фолликулостимулирующего гормона на реакцию суперовуляции и эмбриопродуктивность коров, в опыте использовали препарат фолликулостимулирующего гормона высокой степени очистки с соотношением ФСГ: ЛГ > 1000 отечественного производства ФСГ-СУПЕР (г. Боровск) в дозах 60, 50 и 40 единиц по стандарту Арморо в качестве контроля препарат FSG-p фирмы Schering в дозе 50 мг. Для стимуляции охоты инъецировали простагландин PGF 2а, используя фирменный препарат «эстро-фан» чехословацкого производства. При выявлении охоты, коров осеменяли ректоцервикальным способом замороженной в соломинках спермой двумя дозами при общем количестве сперматозоидов в дозе - не менее 30 млн. Осеменяли двукратно с интервалом 12 часов.

Извлечение эмбрионов проводили на 7-й день цикла нехирургическим методом согласно "Инструкции по трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота»(1987). Непосредственно перед извлечением эмбрионов определяли уро-

вень реакции суперовуляции методом ректального пальпирования яичников путем подсчета желтых тел и неовулировавших фолликулов. Для уточнения результатов развития и овуляции доминантных фолликулов при суперовуляции после извлечения эмбрионов был проведён контрольный убой животных для проведения морфологического исследования яичников. Определяли наличие желтых тел, неовулировавших и лютеинизирующих доминантных фолликулов и фолликулярных кист. Фолликулярными кистами считали неовулирующие доминантные фолликулы диаметром более 20мм. Животных с реакцией более 3-х овуляций относили к положительно реагирующим реакцией полиовуляции на гормональную стимуляцию. Коров, от которых получали 3 и более качественных эмбриона считали донорами эмбрионов.

Морфологическую оценку эмбрионов проводили визуально под микроскопом при увеличении в 100 раз, по 5-ти бальной шкале, по методике, разработанной в ВИЖе отделом трансплантации (1987). Оплодотворяемость яйцеклеток определяли по соотношению числа эмбрионов к общему числу извлечённых эмбрионов, яйцеклеток, оболочек. Извлечённые пустые прозрачные оболочки относили к повреждённым яйцеклеткам. Эмбриональную выживаемость определяли по соотношению числа нормальных эмбрионов к общему числу всех извлечённых эмбрионов.

Качество эмбрионов в зависимости от уровня реакции суперовуляции также учитывали по приживляемости их при пересадках реципиентам.

Исследования реципиентов на стельность после пересадок проводили через 75-90 дней методом ректальной пальпации.

3. Собственные исследования.

3.1 Влияние физиологического состояния органов репродуктивной системы коров на реакцию суперовуляцией и эмбриопродуктивность.

Важным звеном в технологии трансплантации эмбрионов в скотоводстве является отбор коров в доноры эмбрионов и повышение их эмбриопродуктивно-сти. Результаты отбора коров, выделенных под обработки на суперовуляцию по селекционным признакам показали, что пригодными для обработок, отвечающих условиям отбора для гормональной стимуляции суперовуляции, в хозяйствах было от 45 до 63% животных. Основными причинами выбраковки коров при отборе в доноры эмбрионов были: нарушение обмена веществ и функции яичников, воспалительные заболевания половых путей. Для исследования влияния физиологического состояния репродуктивных органов на реакцию суперовуляции и эмбриопродуктивность были отобраны 35 коров и распределены по группам согласно методике

Полученные результаты исследования о влиянии состояния половой системы на реакцию суперовуляцией представлены в таблице 1.

Таблица 1

Влияние состояния половой системы на реакцию суперовуляции коров.

Группы животных Число обработанных животных, п Отреагировали реакцией суперовуляции Степень реакции суперовуляции, (число жёлтых тел на донора) IV 1Лгв

п "Ма

Здоровые 16 15 94±5,9' 12,0 3-24

Проблемные 9 8 89±10,42 7 3-17

3 послеродовыми эсложнениями 10 3 30±14,51*2 3 3-6

Итого 35 26 74±7,4 9,4 3-11

'р>0,999; 2р>0,995

Как видно из данных таблицы 1, здоровые и «проблемные» коровы реагировали на гормональные обработки реакцией суперовуляции на одном уровне. У коров с послеродовыми осложнениями суперовуляция была установлена только у 30%.

Несмотря на отсутствие разницы у здоровых и «проблемных» коров, уровень реакции и эмбриопродуктивность значительно различалась. В группе здоровых коров 94% отвечали на гормональные обработки полиовуляцией, из них от 80% получены эмбрионы при среднем уровне реакции 12 желтых тел на животное. Истинными донорами, от которых получено от 3-х и более качественных эмбрионов, были 30% коров. На донора извлечено, в среднем, по 6 качественных эмбрионов.

В группе «проблемных» животных суперовуляцией отреагировали 89% коров, при среднем уровне реакции 7 желтых тел. Эмбрионы были получены у 78% коров с суперовуляцией, в среднем, по 2,4 качественных эмбриона. Истинными донорами были 15% коров, т.е. в два раза меньше, по сравнению с группой здоровых.

У коров, имевших нарушения репродуктивной функции в послеродовой период и положительно отреагировавших на обработку гонадотропином, в среднем, на реагировавшую корову было 3 жёлтых тела, но эмбрионы при извлечении отсутствовали.

Морфологическое изучение яичников здоровых коров при контрольном убое показало, что овулировавших доминантных фолликулов, в среднем, больше на 25% по сравнению с результатами подсчёта методом ректальной пальпации; неовулировавших фолликулов и кист обнаружено не было.

В группе «проблемных» коров по сравнению со здоровыми при одинаковом уровне развивающихся доминантных фолликулов в 20% случаев наблюдали отсутствие овуляции, из них 30% лютеинизировали без овуляции, причём большинство лютеинизированных фолликулов превращались в лютеиновые кисты с содержанием жидкости от 2-х до 3-х мл. Овулирующие доминантные фолликулы превращались в фолликулярные кисты или атрезировали, хотя при исследовании яичников методом ректальной пальпации неовулировавшие фолликулы и фолликулярные кисты в большинстве случаев выявлены не были.

У коров с послеотельными осложнениями при низком уровне реакции суперовуляции большинство доминантных фолликулов лютеонизировали без овуляции или превращались в фолликулярные кисты. Это явилось, по-видимому, одной из причин отсутствия эмбрионов при извлечении.

Для определения причин снижения эмбриопродуктивности коров нами были изучены оплодотворяемость ооцитов и ранняя выживаемость эмбрионов (табл. 2)

Таблица 2

Влияние состояние половой системы коров - доноров на оплодотворяемость

и выживаемость эмбрионов.

Группа Извлечено эмбрионов и ово-цигов всего №нихэмбрионов п йсюдшворяемость яйцеклеток, %Их Выживаемость эмбрисеов, %4о

Здорсюыз 91 54 74+6,0*

«Проблемные» 46 18 39±7,21 Ш8£

2 посяестелызыми ос-южнешями 8 0 0 0

ТрХ),95; 2рХ),999

Данные таблицы 2 показывают, что у здоровых животных оплодотворяемость яйцеклеток и выживаемость эмбрионов выше на статистически достоверную разницу по сравнению с другими группами.

Отсутствие эмбрионов у коров с послеродовыми осложнениями, возможно, связано с нарушением овогенеза при стимулированном фолликулогенезе и неполном восстановлении структур половых путей после лечения.

Для решения вопроса возможности разового использования коров в качестве доноров эмбрионов было изучено влияние гормональных обработок на дальнейшую воспроизводительную функцию коров-доноров в зависимости от их физиологического состояния до извлечения эмбрионов (табл.3)

Таблица 3

Продолжительность сервис - периода у коров, использованных в качестве разовых доноров эмбрионов, в зависимости от их физиологического

состояния до извлечения эмбрионов.

Групш животных Сроки от счета до извлечения эмбри> новдвей Сроки от извлечен® до ооемеаения дней Стали стельными после 1-го осеменения %+п Отелились °/о±П Сервис перио; В среднем дней

ЗФровыг 75 (60-90) 24 (12-71) 5Ш28 100 126 (72-184)

Проблемные 158 (95435) 68 (56-213) 41±17,3 50Ы7,7 241 (154-312)

Смете родовыми эсжжвешшми 82 (78-97) 36 (27-126) 44±28£ 67±27Д 191 (121-256)

При использовании здоровых коров в качестве разовых доноров эмбрионов, гормональные обработки и процедура извлечения эмбрионов не оказывали от-

рицательного влияния на дальнейшую функцию яичников и матки, необходимых для успешной оплодотворяемости и выживаемости эмбрионов в последующих циклах.

Удлинение сервис периода происходило, в основном, из-за сроков, необходимых для подготовки к гормональной стимуляции яичников и извлечению эмбрионов.

В группе здоровых животных после первого осеменения стельными стали 56% коров. Сервис- период составил в среднем 126 дней с вариациями от 72 до 184 дней. Ни одна корова этой группы не была выбракована по нарушению воспроизводительной функции.

В группе «проблемных» животных стельными стали 50% при среднем сервис-периоде 241 день с вариациями от 154 до 312 дней. После извлечения эмбрионов основным диагнозом снижения воспроизводительной функции и выбраковки коров были фолликулярные кисты. В результате снижения молочной продуктивности и нецелесообразности их дальнейшего использования 50% животных выбраковали.

Аналогичную картину наблюдали и у коров с послеродовыми осложнениями.

Таким образом, донорами могут быть животные, не имеющие послеотель-ных осложнений и проблем воспроизводительной функции. Использование здоровых животных в качестве доноров эмбрионов даёт возможность от 30% коров селекционного ядра получать, в среднем 6 эмбрионов на корову- донора на протяжении сервис-периода с сохранением их дальнейшей воспроизводительной функции.

3.2 Влияние высокоочищенного фолликулостимулирующего гормона на реакцию суперовуляции у коров и эмбриопродуктивность

доноров.

Получение стабильных результатов при гормональных обработках на суперовуляцию у коров зависит не только от физиологического состояния репродуктивной системы, но и от используемых гормональных препаратов. Результаты применения препаратов ФСГ-СУПЕР и ББО-р представлены в табл.4.

Таблица 4

Влияние высокоочищенного препарата на реакцию суперовуляции и эмбриопродуктивность коров.

Препараты Число животных Из них реагировали суперовуляцией, Уровень реакции (число ж.т.на донора) Извлечено эмбрионов и гамет на донора Из них качественных эмбрионов на донора

п % п Нт

ФСГ р БсЬегй^ (ФСГ:ЛГ5:1) 15 !2 80±10,3 10,6±1,7 3-22 9,2±1,1 4,6±0,2'

ФСГ-СУПЕР (ФСГ:ЛГ> 1000) 13 12 92±7,5 11,8±1,6 3-24 8,1±1,2 5,7±0Д'

'р>0,999

Животных обрабатывали ФСГ-СУПЕР в общей суммарной дозе 50 ед. Ар-моро ББв-р в дозе 50 мг по классической схеме обработки. Как видно из данных таблицы 4, использование высокоочищенного препарата ФСГ-СУПЕР было более эффективным, по сравнению с наиболее используемым в практике трансплантации препаратом американского производства ББО-р

Под воздействием ФСГ-Супер на 12% увеличилось число коров, ответивших на обработки реакцией суперовуляции, уровень реакции суперовуляции вырос-на 1,2 жёлтых тела в среднем, а число качественных эмбрионов оказалось выше на 1,1 эмбриона на донора при статистически достоверной разнице, несмотря на большее число извлеченных эмбрионов и яйцеклеток при использовании РБв-р.

При использовании высокоочищенного ФСГ оплодотворяемость яйцеклеток и выживаемость эмбрионов была выше на 27% и 8,7%,соответственно, по сравнению с присутствием в препарате большего количества ЛГ. При применении ФСГ-СУПЕР для стимуляции полиовуляции было установлено уменьшение числа неовулировавших доминантных фолликулов и образования фолликулярных кист. Таким образом, снижение количества ЛГ в препарате способствует увеличению качественных эмбрионов за счёт повышения оплодотворяемости яйцеклеток и выживаемости эмбрионов. Это подтвердилось при использовании препарата ФСГ-СУПЕР при разной степени очистки (табл.5).

Таблица 5

Влияние степени очистки препарата на уровень реакции суперовуляции.

Степень очистки препарата Число обработанных коров п Реагировало % Число жёлтых тел Извлечено эмбрионов на донора Извлечено качественных на донора Оплодотворяемость % Выживаемость эмбрионов %

п Нш

1 ФСГ> 1000 5 83±16,7 14,4 3-32 10,9±ЗД1 6,5±1,22 71±11,2 77±10,9

2 ФСГ< 200 8 86±12,3 9,4 3-22 4,8±0,91 2,4±0,22 78±6,3 60±6,9

[р>0,9; 2р>0,99

При использованиЬ препаратов ФСГ-СУПЕР с различным содержанием ЛГ, при одинаковом числе животных, отреагировавших суперовуляцией на гормональные обработки, число овулировавших фолликулов, в среднем, на корову было 14,4, а с увеличением концентрации ЛГ- 9,4. Результат извлечения также был различным - 10,9 яйцеклеток и эмбрионов в первой группе и 4,8 - во второй на положительного по извлечению животного. За счёт повышения числа овулировавших фолликулов и эмбриональной выживаемости в первой группе было получено 6,5 качественных эмбрионов на донора, против 2,4 - во второй при статистически достоверной разнице. При морфологическом изучении яичников с использованием препарата ФСГ с уменьшением соотношения ФСГ к ЛГ установлено, что основной причиной уменьшения количества эмбрионов у коров

была лютеинизация доминантных фолликулов без овуляции. По-видимому, ранняя лютеинизация доминантных фолликулов связана с избыточным содержанием ЛГ в препарате.

3.3 Влияние стимуляции первого пула фолликулов перед стимуляцией на суперовуляцию и результаты извлечения эмбрионов.

Для увеличения количества доминантных фолликулов при полиовуляции была проведена стимуляция первого пула фолликулов перед гормональной обработкой на суперовуляцию (табл. 6). Из представленных данных таблицы 6 видно, что стимуляция первого пула фолликулов не изменила число животных, ответивших на гормональную стимуляцию, но увеличила рост, развитие и овуляцию доминантных фолликулов в сравнении использованием препарата в дозе 50 ед. Арморо согласно инструкции.

Таблица 6

Результат реакции суперовуляции при стимуляции первого пула фолликулов.

Группы опыта Количалво живспньк (п) Огеешпиреакдай Средняя реакция яичников (чюожт. нажиюг-дао) Цт & них положительных ю извлечению эмбрионов

п п %Й1

П смгафо-лимулвдей 12 И Д5 3-35 10 9ШЗ

Контроль 19 18 9545/) 16,5 3-33 15 83±8,6

Исследованиями оплодотворяемости и выживаемости эмбрионов у коров с полиовуляцией при стимуляции фолликулов первого пула при спонтанном фол-ликулогенезе установлено снижение оплодотворяемости ооцитов на 19% на достоверно статистическую величину при одинаковой выживаемости эмбрионов по сравнению с животными контрольной группы (табл. 7).

Таблица 7

Оплодотворяемость яйцеклеток и выживаемость эмбрионов у доноров при стимуляции первого пула фолликулов.

Группы опыта, Когаиестао обработанных животных Ззвпечеяоэмбрионов и яйцеклеток, воего Оплэдяворяемсхль ооищов,(%±п) Выживаемость (%Ь1) Чиагсо каиесгеенных эмбрионов на донорап

п Ет

рпмулявягврвого пула фолликулов 12 42 3-14 67*6,6* 86153 8,0

Поинлр^киии «псиьзования трепарага 19 24 85173' 6,0

1Р>0,9

Несмотря на снижение оплодотворяемости качественных эмбрионов, было получено на истинного донора, в среднем, на 2 эмбриона больше по сравнению с

применением препарата по инструкции. Получение большего количества качественных эмбрионов, по-видимому, связано с дополнительной овуляцией фолликулов первого пула. Снижение оплодотворяемости ооцитов (статистически достоверно), по-видимому, происходило за счёт увеличения овуляции доминантных фолликулов первого пула на стадии атрезии и старения яйцеклеток в этих фолликулах

зАвлияние дозы гонадотропина ФСГ - Супер на вариабельность реакции суперовуляции и качество извлекаемых эмбрионов.

Влияние доз ФСГ-СУПЕР на реакцию суперовуляции представлены в таблице 8.

Таблица 8

Влияние разных доз ФСГ-СУПЕР на реакцию суперовуляции и количество

эмбрионов на донора.

Показатели Дозы ФСГ-СУПЕР в единицах Арморо

60 50 40

п % и % п %

Обработано коров 11 100 18 100 10 100

Из них реагир овало полиовуляцией 10 91±8,6 17 94±5,5' 7 №14,0'

Из положительных по извлечению эмбрионов 7 70±4,62 15 86±8,12 6 82±12,1

Получено ощшяцийнадаюра п 16 19 11

1пп 3-34 3-38 3-22

34 овуляции 1 10 1 6 -

5-8овуляций 3 30 3 18 3 50

9-12 овуляций 3 30 6 35 2 33

13>овушиий 3 30 7 41 1 17

Эмбрионов на донора 1,0 6 7.5

''2р>0,9

Как видно из данных таблицы 8, ответ животных суперовуляцией на введение ФСГ-СУПЕР был на одном уровне при использовании доз 60 и 50 единиц Арморо и снижался при уменьшении дозы до 40. Число коров, положительных по извлечению эмбрионов, уменьшалось при увеличении дозы ФСГ-СУПЕР до 60 ед.арм за счёт увеличения числа неовулируовавших фолликулов и превращении их в фолликулярные кисты.

Влияние качества эмбрионов в зависимости от уровня суперовуляции было изучено по анализу результатов собственных и проведённых в центре трансплантации ВИЖа эмбриопересадок при использовании замороженных эмбрионов. Результаты анализа представлены в таблице 9.

Наибольшее число эмбрионов от числа овулировавших фолликулов получено при средней реакции суперовуляции от 5 до 10 жёлтых тел на донора. При увеличении уровня овуляции от 10 и выше жёлтых тел количество качественных эмбрионов снижалось в процентном отношении к количеству жёлтых тел. Количество эмбрионов отличного и хорошего качества было наименьшим у животных при овуляции более 16 доминантных фолликулов на статистически достоверную величину. Количество дегенерированных эмбрионов во всех группах было на одном уровне табл. 9.

Таблица 9

Влияние уровня суперовуляции на качество эмбрионов и их прижив-

ляемость.

Показатели Низкая 3-4жёпшхтел Средаяя 5-8)кё.тпьктея Вькокая 9-12 жйдшх тел Эченьвькокая 1 Зийжвкыхтеп

Прогда эмбрионов сггчисла шу-лящй%£п 70£ШД 93,013,5 55ДЬ5,4 62,ОЦ5

Отличного и хорогаего %±п 57,(ЫО^1 5012,7 ЗШ^

Удовлетюртельного %+п 35,ОЫО$ 15,5434 30,0±23 36,Ш,7

Р Дегенерированных %+п 6Д±3,8 13, 9,0±0,8

Неоплодспвсришъи яйцеклеток %+п - 17^13 7,0±1,4 17,

П{имвпяетш>эмбрюн®%±п 43,(ЬД0 34Д±5Д 28,0±4Д*

'р>0,9; 2р>0,999; Зр>0,8

Самая высокая приживляемость эмбрионов была получена при средней и низкой реакциях полиовуляции: 43 и 42%, соответственно. Это можно объяснить одинаковым количеством эмбрионов отличного и хорошего качества, оплодотворяемость которых всегда выше по сравнению с использованием эмбрионов удовлетворительного качества. Уменьшение количества эмбрионов отличного и хорошего качества у доноров с высоким уровнем суперовуляции приводит к снижению приживляемости эмбрионов.

4. Выводы.

1. Разовыми донорами на протяжении сервис-периода могут быть коровы селекционного ядра, не имеющие нарушения обмена веществ, послеотельных осложнений и проблем воспроизводительной функции. Использование здоровых животных в качестве доноров эмбрионов даёт возможность от 30% коров получать, в среднем 6 эмбрионов на корову с сохранением их дальнейшей воспроизводительной функции.

2. В группе «проблемных» коров по сравнению со здоровыми при одинаковом числе развивающихся доминантных фолликулов, у 20% фолликулов отсутствовала овуляция, из них 30% лютеинизировали и превращались в лютеиновые кисты, другие преобразовывались в фолликулярные кисты или атрезировали. У коров с послеотельными осложнениями при низком уровне реакции

суперовуляции большинство доминантных фолликулов лютеонизировали без овуляции или превращались в фолликулярные кисты.

3. Использование «проблемных» и коров при выздоровлении после отельных осложнений в качестве доноров эмбрионов нецелесообразно. Донорами из «проблемных» коров могут быть только 15% со средней эмбриопродуктивно-стью 2,4 эмбриона при сохранении у 50% из них воспроизводительной функции.

4. Применение высокоочшценного препарата ФСГ-СУПЕР было более эффективным по сравнению с препаратом американского производства FSG-p. Снижение содержания ЛР по отношению к ФСГ в препарате способствует увеличению числа коров, с суперовуляцией на 12%; числа овуляций на 1,2 жёлтых тела; оплодотворяемость яйцеклеток на 27% и выживаемости эмбрионов на 8,7%.

5. Стимуляция первого пула фолликулов перед гормональной обработкой ФСГ-СУПЕР на полиовуляцию увеличивает рост, развитие и овуляцию доминантных фолликулов. В опыте получено на донора на 2 качественных эмбриона больше, по сравнению с использованием препарата без микростимуляции в дозе 50 ед. Арморо (8 против 6).

6. Оптимальной дозой ФСГ-СУПЕР является 50 ед. Арморо. При применении этой дозы 94% коров реагируют суперовуляцией. Из них положительными по извлечению стали 86 %. Получено 6 качественных эмбрионов на донора. При увеличении дозы ФСГ-СУПЕР до 60 ед. Арм число коров, положительных по извлечению эмбрионов, уменьшалось вследствие увеличения числа неовулируо-вавших фолликулов и превращения их в фолликулярные кисты. При уменьшении дозы ФСГ-СУПЕР до 40 единиц уменьшалось число коров с суперовуляцией при одинаковом числе пригодных к пересадкам эмбрионов на донора (7,5 эмбриона).

7. Наибольшее количество эмбрионов было получено при средней реакции от 5 до 10 овуляций на донора. При увеличении числа овуляции от 10 и выше число качественных эмбрионов и их приживляемость снижалась (с 42% до 28).

5. Практические предложения

Для эффективного воспроизводства высокопродуктивных коров селекционного ядра необходимо использовать в качестве доноров эмбрионов только здоровых животных.

Для гормонального вызывания суперовуляции использовать высокоочи-щенные фолликулостимулирующие препараты с соотношением ФСГ: ЛГ>1000 в дозе 50 единиц Арморо со стимуляцией первого пула фолликулов перед обработками на суперовуляцию.

Список опубликованных работ по теме диссертации:

1.Ерин?С.Н. Влияние физиологического состояния органов воспроизводительной системы на реакцию суперовуляции и на эмбриопродуктивность коров./ Ерин С.Н., Мармышев А.Н., Решетникова Н.М.//Науково-техшчний билютень 96. Харшв-2008. -С.154-158.

2. Решетникова,Н.М. Коррекция воспроизводительной функции коров при высокой молочной продуктивности./Решетникова Н.М., Титова В.А., Порошина

Е.С., Комбарова Н.А., Ерин С .Н.//Науково-техшчний билютень 96. Харйв-2008. -С.347-349.

3. Ерин^С.Н. Влияние гонадотропина высокой степени очистки (ФСГ-СУПЕР) на суперовуляцию при использовании коров мясного направле-ния./Материалы международной практической конференции. "Актуальные проблемы воспроизводства животных." Дубровицы-Быково -2007.-С. 270-274.

4. Ерин,С.Н. Влияние ФСГ-СУПЕР на фолликулогенез у коров -доноров герефордской породы./ Ерин С.Н., Сергеев Н.И., Лебедев В.И., Гавриков А., Малиновский А.М.//Молочное и мясное скотоводство. №6.2000г. -С. 22-23.

Зак. № УНир.ЮО экз. 0.5 У.П.Л. Тип. ФГУП "НИИ НПО "Луч" г. Подольск, Моск.обл., 2009г.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Ерин, Сергей Николаевич

Введение

1 Обзор литературы

1.1 Актуальность вопроса интенсификации воспроизводства стада.

1.2 Отбор коров - доноров эмбрионов.

1.3 Фолликулогенез у крупного рогатого скота.

1.4 Реакция суперовуляции у крупного рогатого скота.

1.5 Основные факторы, влияющие на реакцию суперовуляции.

1.6 Стимуляция и синхронизация половых циклов.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Эффективность использования высокопродуктивных коров с различным физиологическим статусом в качестве доноров эмбрионов"

Диссертация является итогом научно - исследовательских работ по возможности использования в качестве доноров высокопродуктивных коров в течение сервис-периода.

Актуальность работы.

Выдающимся достижением зоотехнической науки середины XX века было широкое внедрение искусственного осеменения млекопитающих с использованием замороженной спермы (40). Впоследствии этот метод позволил наиболее эффективно использовать выдающихся быков-производителей при выполнении селекционных программ в скотоводстве (10, 38, 66, 72, 93).

В последние десятилетия прошедшего века, наряду с искусственным осеменением, в мировой практике разведения крупного рогатого скота стали применять трансплантацию эмбрионов как один из перспективных методов интенсификации племенной работы путем ускоренного размножения наиболее ценных животных по материнской линии (8, 63, 76). С середины 80-х годов интенсивно создавались пункты трансплантации, но внедрение метода, несмотря на кажущуюся простоту и заманчивость рекламируемых результатов, было сопряжено со многими трудностями.

Во-первых, повсеместное использование импортных производителей и отсутствие спроса на быков отечественной селекции, а также массовые закупки импортного скота явились причиной невостребованности использования метода трансплантации в селекционных программах по дальнейшему развитию отечественного скотоводства.

Во-вторых, результаты эмбриопересадок в производственных условиях не могли удовлетворить практиков. Если в научно-производственных опытах приживляемость эмбрионов составляла 50-65%, то на практике результаты были гораздо ниже. (72).

Увеличение спроса на эмбрионы крупного рогатого скота отечественной селекции сегодня предполагает эффективное использование генофонда племенных заводов, то есть использование выдающихся животных в качестве доноров эмбрионов и накопление банков эмбрионов. Однако использование выдающихся животных отечественной селекции в племенных хозяйствах сегодня в программах трансплантации эмбрионов и создание банков эмбрионов незначительно. Вследствие этого система МОЭТ (множественная овуляция и эмбриопересадки), которая широко и с большим успехом применяется в селекционных программах всего мира, в нашей стране распространения не получила. С самого начала внедрение метода трансплантации эмбрионов, как за рубежом, так и в нашей стране было ориентировано на создание крупных центров и пунктов по трансплантации эмбрионов с собственными донорскими стадами коров, направленное на их многоразовое использование. Однако существующие методы и средства для вызывания суперовуляции у коров-доноров сегодня не позволяют долгосрочное их использование ввиду малой продуктивной жизни и, как следствие, потери при выбраковке по экономическим причинам.

Результаты работы центров и пунктов показали, что многоразовое использование доноров имеет как позитивные, так и негативные стороны (72). Одной из существенных причин низкой эффективности эмбриопродуктивности доноров является непредсказуемость ответа организма на гонадотропные гормоны реакцией суперовуляции - одного из важнейших звеньев технологии трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота. При многоразовом использовании коров в качестве доноров возможен индивидуальный подход к обработкам гормональными средствами для повышения эффективности результатов трансплантации. Основанием для многоразового использования коров-доноров является получение не менее 3-х качественных эмбрионов при реакции суперовуляции. Эти результаты в дальнейшем гарантируют положительную реакцию суперовуляции и получение качественных эмбрионов не менее чем у 80 % отобранных коров в доноры эмбрионов (56).

Однако практика многоразового использования коров в качестве доноров показала, что большинство животных реагируют на гормональные обработки без снижения количества и качества эмбрионов не более 3-5-ти раз. Далее доноров эмбрионов необходимо снова вводить в нормальный воспроизводственный цикл, но на практике, вследствие снижения молочной продуктивности, их выбраковывают по причине экономического характера (62).

Кроме того, использование в качестве доноров ограниченного поголовья коров ведёт к сужению и обеднению генофонда. Это явилось причиной децентрализации донорских стад и поисков путей более широкого использования элитного поголовья племенных хозяйств в качестве доноров эмбрионов, но уже без вывода доноров из воспроизводительного цикла стада.

Исходя из выше изложенного, научные исследования, направленные на решение проблем, связанных с отбором и подготовкой коров к гормональной стимуляции для повышения их эмбриопродуктивности, изучение факторов, оказывающих влияние на процессы фолликулогенеза, способы регулирования функций яичников для повышения эмбриопродуктивности, являются актуальными.

Цель и задачи исследований.

Цель: повышение эффективности использования высокопродуктивных коров в качестве разовых доноров эмбрионов в племенных хозяйствах без снижения дальнейшей воспроизводительной функции.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

1. Определить влияние физиологического состояния репродуктивной системы у коров в послеродовой период на реакцию суперовуляции и эмбриопродуктивность.

2. Выявить влияние степени очистки фолликулостимулирующего гормона на реакцию суперовуляции и качество эмбрионов у высокопродуктивных коров-доноров.

3. Установить влияние различных доз и схем введения препарата ФСГ-СУПЕР на реакцию суперовуляции.

4. Изучить влияние уровня суперовуляции на качество и приживляемость эмбрионов.

Научная новизна:

Определены возможности использования коров в качестве разовых доноров эмбрионов в высокопродуктивных стадах на протяжении сервис-периода. Установлено положительное влияние высокоочищенного фолликулостимулирующего гормона на развитие доминантных фолликулов, овуляцию и эмбриопродуктивность животных. Повышение содержания лютеинизирующего гормона в препаратах ФСГ при обработке на суперовуляцию способствует лютеинизации доминантных фолликулов без овуляции. Стимуляция первого пула фолликулов перед гормональной обработкой коров на суперовуляцию увеличивает число доминантных фолликулов, выживаемость эмбрионов и повышает эмбриопродуктивность доноров.

Практическая значимость.

Повышение эффективности метода трансплантации эмбрионов в племенных хозяйствах при использовании высокопродуктивных коров в качестве одноразовых доноров эмбрионов в течении сервис-периода.

Апробация работы.

Результаты исследований были доложены на: международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы биологии воспроизводства животных» (2007г.), международной научно-практической конференции «Современные методы репродукции сельскохозяйственных животных: становление и перспективы развития» (2008 г). 8

Основные положения, выносимые на защиту.

- Результаты использования коров при разном физиологическом состоянии для гормональной стимуляции на реакцию суперовуляции и получение эмбрионов.

- Возможность использования коров селекционного ядра в качестве разовых доноров эмбрионов на протяжении сервис - периода.

Использование высокоочищенного фолликулостимулирующего гормона для стимуляции суперовуляции и повышения эмбриопродуктивности коров доноров эмбрионов.

Структура и объем работы.

Диссертация изложена на 114 страницах, состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты и обсуждение, выводы, практические предложения, список литературы и приложения. Работа содержит 20 таблиц и 19 рисунков, 2 приложения. Список литературы включает 147 источников, в том числе 52 на иностранных языках.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Ерин, Сергей Николаевич

6. Выводы.

1. Разовыми донорами на протяжении сервис-периода могут быть коровы селекционного ядра, не имеющие нарушения обмена веществ, послеотельных осложнений и проблем воспроизводительной функции. Использование здоровых животных в качестве доноров эмбрионов даёт возможность от 30% коров получать, в среднем 6 эмбрионов на корову с сохранением их дальнейшей воспроизводительной функции.

2. В группе «проблемных» коров по сравнению со здоровыми при одинаковом числе развивающихся доминантных фолликулов, у 20% фолликулов отсутствовала овуляция, из них 30% лютеинизировали и превращались в лютеиновые кисты, другие преобразовывались в фолликулярные кисты или атрезировали. У коров с послеотельными осложнениями при низком уровне реакции суперовуляции почти большинство доминантных фолликулов лютеонизировали без овуляции или превращались в фолликулярные кисты.

3. Использование «проблемных» и коров при выздоровлении после отельных осложнений в качестве доноров эмбрионов не целесообразно. Донорами из «проблемных» коров могут быть только 15% со средней эмбриопродуктивностью 2,4 эмбриона при сохранении у 50% из них воспроизводительной функции.

4. Применение высокоочищенного препарата ФСГ-СУПЕР было более эффективным по сравнению с препаратом американского производства FSG -р. Снижение содержания ЛГ по отношению к ФСГ в препарате способствует увеличению числа коров, с суперовуляцией на 12%; числа овуляций на 1,2 жёлтых тела; оплодотворяемость яйцеклеток на 27% и выживаемости эмбрионов на 8,7%.

5. Стимуляция первого пула фолликулов перед гормональной обработкой ФСГ-СУПЕР на полиовуляцию увеличивает рост, развитие и овуляцию доминантных фолликулов. В опыте получено на донора на 2 качественных эмбриона больше по сравнению с использованием препарата без микростимуляции в дозе 50 ед. Арморо (8 против 6).

6. Оптимальной дозой ФСГ-СУПЕР является 50 ед. Арморо. При применении этой дозы 94% коров реагируют суперовуляцией. Из них положительными по извлечению стали 86 %. Получено 6 качественных эмбрионов на донора. При увеличении дозы ФСГ-СУПЕР до 60 ед. Арморо число коров, положительных по извлечению эмбрионов, уменьшалось вследствие увеличения числа неовулируовавших фолликулов и превращения их в фолликулярные кисты. При уменьшении дозы ФСГ-СУПЕР до 40 единиц уменьшалось число коров с суперовуляцией при одинаковом числе пригодных к пересадкам эмбрионов на донора (7,5 эмбриона).

7. Наибольшее количество эмбрионов было получено при средней реакции от 5 до 10 овуляций на донора. При увеличении числа овуляции от 10 и выше число качественных эмбрионов и их приживляемость снижалась (с 42% до 28).

7. Практические предложения:

Для эффективного воспроизводства высокопродуктивных коров селекционного ядра необходимо использовать в качестве доноров эмбрионов только здоровых животных.

Для гормонального вызывания суперовуляции использовать высокоочищенные фолликулостимулирующие препараты с соотношением ФСГ: ЛГ>1000 в дозе 50 единиц Арморо со стимуляцией первого пула фолликулов перед обработками на суперовуляцию.

5. Заключение.

Из числа выделенных для обработок животных, отвечающих условиям отбора для гормональной стимуляции суперовуляции, в хозяйствах отбирали от 45 до 63% коров. Основными причинами выбраковки коров при отборе в доноры были: нарушение обмена веществ, заболевания половых путей, нарушения функции яичников.

94-76 % коров реагировали развитием доминантных фолликулов на введение фолликулостимулирующего гормона. Коровы здоровые и "проблемные" реагировали реакцией суперовуляции на одном уровне: 94 и 89%, соответственно. Среди животных, имевших в анамнезе диагноз «послеотельные осложнения», суперовуляция была установлена только у 30%. При этом в этой группе у большинства коров в яичниках при реакции на гонадотропин наблюдали фолликулярные кисты. Несмотря на одинаковое число здоровых и проблемных коров с положительной реакцией суперовуляции, уровень реакции был разным. У здоровых коров при суперовуляции было выявлено, в среднем, 12 желтых тел на животное, а у проблемных - 7. У коров, имевших нарушения репродуктивной функции в послеродовой период и положительно отреагировавших на обработку гонадотропином, был низкий уровень реакции суперовуляции. В среднем, на реагировавшую корову было получено по 3 овулировавших фолликула.

Исследования яичников здоровых животных при контрольном убое показали, что визуально было выявлено больше на 25 - 30% овулировавших фолликулов по сравнению с методом ректальной пальпации. У "проблемных" коров при одинаковом уровне развивающихся доминантных фолликулов со здоровыми животными было выявлено, что до 20% доминантных фолликулов подверглась лютеинизации без овуляции, хотя при ректальных исследованиях яичников неовулировавшие фолликулы и фолликулярные кисты в большинстве случаев выявлены не были.

При исследовании яичников от животных с послеотельными осложнениями выявлено, что доминантные фолликулы и при низком уровне ответа на гонадотропины в большинстве случаев лютеонировались без овуляции или превращались в фолликулярные кисты. Это является, по-видимому, одной из причин отсутствия эмбрионов при извлечении у животных с положительной реакцией на гонадотропин.

В группе здоровых коров реакцией суперовуляции отреагировали 94% коров из 16. В среднем, на корову было обнаружено по 12 желтых тел. Качественные эмбрионы были получены от 12 коров из 15 положительно отреагировавших реакцией суперовуляции на гонадотропины. На каждого донора было получено по 6-8 качественных эмбрионов. Истинными донорами (от которых было получено 3 и более эмбрионов) группе здоровых стали 30% коров от числа реагировавших.

Из группы "проблемных" животных на стимуляцию яичников отреагировали суперовуляцией 8 коров (89%>) от выделенных при среднем уровне реакции 7 желтых тел. Качественные эмбрионы при положительной реакции были извлечены у 7-ми коров, на животное было извлечено по 2,4 качественных эмбриона. У животных с послеотельными осложнениями после лечения эмбрионы отсутствовали. Снижение оплодотворяемости яйцеклеток и эмбриональной выживаемости происходило на статистически достоверную величину у проблемных коров по сравнению со здоровыми животными. В группе коров с послеотельными осложнениями не было получено ни одного качественного эмбриона вследствие отсутствия оплодотворяемости яйцеклеток.

Использование высокоочищенного препарата ФСГ - СУПЕР было более эффективным по сравнению с наиболее используемым в практике трансплантации гонадотропным препаратом американского производства FSG-p. Под воздействием ФСГ-СУПЕР увеличилось число коров, ответивших на обработки реакцией суперовуляции, на 12%. При применении препарата ФСГ-СУПЕР увеличился уровень реакции суперовуляции на 1,2 жёлтых тела, в среднем, на животное или на 11% при практически одинаковой вариабельности от Здо 22 в контроле и от Здо 24 овулировавших доминантных фолликулов, соответственно.

Выход качественных эмбрионов оказался выше на 1,1 эмбриона (24%) на донора при использовании ФСГ-СУПЕР при статистически достоверной разнице, не смотря на большее число извлеченных эмбрионов и яйцеклеток при использовании FSG-p.

Анализ оплодотворяемости ооцитов и выживаемости эмбрионов при гормональной стимуляции на суперовуляцию показал,что оплодотворяемость при использовании гонадотропина ФСГ-СУПЕР была выше на 27% по сравнению с FSG - р, а выживаемость эмбрионов - на 8,7%. При применении ФСГ-СУПЕР было установлено в яичниках при реакции полиовуляции уменьшение числа неовулировавших доминантных фолликулов и образования фолликулярных кист. Таким образом, увеличение качественных эмбрионов в опытной группе, в основном, происходило за счёт повышения оплодотворяемости яйцеклеток и выживаемости эмбрионов.

Использование препарата ФСГ-СУПЕР по схеме при микростимуляции первого пула фолликулов увеличило средний уровень реакции суперовуляции до 17,5 жёлтых тел и результативность извлечений, в сравнении со схемой согласно инструкции при использовании препарата в суммарной дозе 50 ед.Арморо.

В результате на истинного донора было получено, в среднем, на 2 эмбриона больше при статистически достоверной разнице. Факторами получения большего числа качественных эмбрионов были увеличение роста и развития доминантных фолликулов и их овуляции, а также повышение выживаемости эмбрионов.

При этом, снижение оплодотворяемости ооцитов (статистически достоверно), по-видимому, происходило за счёт увеличения овуляции доминантных фолликулов первого пула и перезревания преовуляторных яйцеклеток. У животных, обработанных по инструкции в дозе 50ед. Арморо

ФСГ-СУПЕР, оплодотворяемость ооцитов была выше на 18% по сравнению с первой группой (статистически достоверно) при одинаковой выживаемости эмбрионов. В среднем, на донора было получено 6 качественных эмбрионов. Уменьшение выхода качественных эмбрионов на статистически достоверную величину по сравнению с донорами второй группы в результате снижения овуляций доминантных фолликулов.

Таким образом, при первичных обработках коров на суперовуляцию с применением препарата ФСГ-СУПЕР овуляция стимулированных доминантных фолликулов была на одном уровне и составила от 83 до 95%. Эмбрионы и гаметы были получены у 70% животных при применении дозы ФСГ-Супер 60 ед. Арморо; при стимуляции первого пула фолликулов с дозой 50 ед. Арморо - у 91%; при использовании дозы 50 ед. Арморо согласно инструкции - 83%. Разница по числу животных с положительными результатами при извлечении гамет и эмбрионов составила от 13 до 21%. Повторное использование ранее реагировавших коров в качестве доноров, но при более низкой дозе ФСГ-СУПЕР наблюдали снижение числа животных реагирующих на гонадотропин суперовуляцией, но результат по извлечению пригодных к пересадкам эмбрионов был на уровне 7,5 эмбрионов на донора.

На основании наших исследований можно говорить, что одной из причин несоответствия результатов извлечения эмбрионов и результата подсчёта жёлтых тел при реакции суперовуляции является невозможность точного подсчета числа неовулировавших фолликулов и желтых тел. Объяснение этому дает морфологическое исследование яичников после убоя и подсчете реакции визуальным методом. Основной причиной является локализация желтых тел и неовулировавших фолликулов, наличие в реакции фолликулов, подвергшихся лютеонизации без овуляции. При ректальном исследовании не были определены методом пальпации жёлтые тела и неовулировавшие доминантные фолликулы, расположенные глубоко в строме яичника (рис 15, приложение 2), локализующиеся рядом друг с другом. Так, при визуальном исследовании яичников реагировавшего животного суперовуляцией, было определено дополнительно около 30% желтых тел и неовулировавших фолликулов (рисунки 9-14). Также затруднительно оказалось определение в реакции количество фолликулов, подвергшихся лютеонизации без овуляции. Ввиду чего количественная оценка реакции суперовуляции (определение количества неовулировавших фолликулов, кист и желтых тел) методом ректальной пальпации не может приниматься как окончательный метод оценки и только позволяет определить уровень реакции от 0-3, слабая 3-9, хорошая 10-15 и отличная 16 и более овуляций на животное и её отсутствие.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Ерин, Сергей Николаевич, п. Дубровицы Московской обл.

1. Абрамов Т.К. «Обеспеченность организма коров витамином А в зависимости от физиологического состояния и сезона года»//Проблемы патологии и обмена веществ в современном животноводстве. Воронеж, -1981.С-С.32-34.

2. Алмарданов А. «Факторы влияющие на уровень суперовуляции, качество и приживляемости эмбрионов крупного рогатого скота».//Достижение науки и техники АПК. Агропромиздат.-1990 №7.-С. 29-31.

3. Афанасьев И.Н., Антане В.В., «Полиовуляция и результаты оплодотворения высокопродуктивных коров-доноров»//труды ЛСХА.-1987.-вып 235. -С.70-76.

4. Баевский Ю.Б., Леонов Б.В., Лукин В.А. «Гормональная регуляция раннего эмбриогенеза млекопитающих»//Успехи современной биологии.-1973.-Т.73. вып.2.-С.265-277.

5. Беляков С.Г., Горячев B.C., Лельков А.Д. Влияние содержания витамина А на воспроизводительную функцию и уровень гонадотропинов в крови коров//Бюлл. ВНИИФБиП.-1976.-С.35-40.

6. Биотехника воспроизводства стада на крупных фермах и комплексах//Клинский Ю.Д., ШейкинВ.Н., Куксова Р.И. и др. //Животноводство.-1984.-№9.-С.27-29.

7. Бозо Ш. Молочные типы коров будущего//Междуна-родный сельскохозяйственный журнал.-1984.-№3.-С.70-75.

8. Бугров А.Д., Ткачева И.В., Погорелов А.С. «Значение генетических и паратипических факторов при получении эмбриопродуктивности от коров доноров»//материалы международной научной практической конференции №96. Харьков-2008г. -С 160.

9. Бугров А.Д., Хмельков В.Н., Шеремета В.И. «Способ длительного хранения растворов ФСГ»//материалы международной научной практической конференции №96. Харьков-2008г. -С. 190.

10. Виноградов В.Н. «Проблемы трансплантации в молочном скотоводстве»//ВНИИЖ. Материалы международной научно-практической конференции. Дубровицы-2007. -С.40.

11. Воронцова М., Тарадайник Т., Дронин А. «Опыты трансплантации эмбрионов»//Молочное и мясное скотоводство.-1988.-№3.-С. 19-20.

12. Гавриков А., Алексеенко А., Маслеев Ц., «Суперовуляторная реакция у коров на экзогенные гонадотропины»//Молочное и мясное скотоводство.-1991 №6. -С.-25-24.

13. Гавриков A.M., Маслев Ц.И. «Сезонное проявление воспроизводительных способностей коров доноров мясных пород»//Билл. Науч. Работ №114 Дубровицы-1990. -С. 60-62.

14. Горбунов В.И., Субботин А.Д. «Эффективность воспроизведения коров в связи с действием витамина А»//Вестник с/х науки.-1975.-№ 11.-С.З 8-41.

15. Дедов 10., Чомаев А. «Сравнительное действие простагландинов F-1L и F-2L на синхронизацию охоты у коров»//Молочное и мясное скотоводство.-1988 .-№3 .-С.27-28.

16. Деменцева Т.Н. «Взаимосвязь состояния эндометрия матки с эмбриопродуктивностью у доноров» //ВНИИплем. Сборник трудов -1992г. -С-29.

17. Дубанов А.В. «Влияние интервала от отела до первой гормональной обработки на эмбриопродуктивность коров»//материалы международной научной практической конференции №96. Харьков-2008г.

18. Ельчанинов В.В., Коновалов Н.Г, Куксова Р.И. и др. «Эффективность применения аналогов простагландина F-2L при разном функциональном состоянии яичников у коров и телок»//Биотехнологические методы в селекции. Сб. тр. ВНИИплем.-М., 1990.-С.87-95.

19. Ефремова М.Н., Калинский Г.Е., «Результаты вызывания суперовуляции у мясных пород коров-доноров казахской породы»// Бил.науч.трудов ВИЖ. Вып №104. Дубровицы. 1991.-С. 60.

20. Завадовский М.М. Теория и практика гормонального метода стимуляции многоплодия сельскохозяйственных животных.-М.: Россельхозиздат, 1963.-С.-258.

21. Завертяев Б.П. «Биотехнология в воспроизводстве и селеции крупного рогатого скота»-Л.: Агропромиздат.-1989.-С.69-86.

22. Инструкция по трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота //Госагропром СССР, Москва, 1997.-С-5

23. Калиевская Г. «О продуктивном долголетии коров»//Молочное и мясное скотоводство.№6. 2000 год.-С19-21.

24. Кениг И., КайзерХ., Клинский Ю.Д. Применение гормонов для интенсификации воспроизводства животных//Между-народный сельскохозяйственный журнал.-1984.-№3.-С.83-88.

25. Клинский Ю.Д. «Проблемы эндокринологии воспроизводства сельскохозяйственных животных»//Проблемы эндокринологии. Тез. докл.1975.-С.59-63.

26. Клинский Ю.Д., Алексеенко А.Н Использование простагландинов для регуляции воспроизводительной функции овец. //Животноводство.-1980.-№4.-С.54-57.

27. Клинский Ю.Д., Куксова Р.И., Дедов Ю.М. «Влияние различных простагландинов группы Ф2а на изменение уровня прогестерона в крови коров и телок»//Тез. докл. Всес. нучн-техн. конф. Дубровицы, 1991.-М., 1991.-С.12-13.

28. Кононов Г.А., Буянов А.А., Смышляев И.В. «Роль гонадотропина и эстрогенов в регуляции полового цикла у коров»//Акушерство, гинекология, искусственное осеменение и болезни молочной железы у с/х животных. -Л.,1976.-С.21-22.

29. Кошевой В.П. А-витаминная недостаточность и нарушение репродуктивной функции коров//Вюн. с.-г. науки.-1983.-№12.-С.32-34.

30. Кыса И.С., Семенов Б.Я. «Слагаемые воспроизводства крупного рогатого скота»// Брестское госплемобьеденение. Брест, 1997. -С.38.

31. Мадисон В.В «Пересадка эмбрионов в услових хозяйств»//Достижение науки и техники АПК.-1987.№5.-С.45-47.

32. Мадисон В.В., Мадисон JI.B. «Подбор коров по возрасту и породе трансплантация эмбрионов КРС»// Труды Бел. НИИЖ. Жодино. -1989. С.44-45.

33. Мадисон В.В., Мадисон JI.B. «Трансплантация эмбрионов в практике разведения молочного скота»// Москва. В.О. Агропромиздат. 1988.

34. Мадисон B.J1. «Опыт повышения эффективности нехирургической пересадки эмбрионов крупного рогатого скота»//Биотехнологические методы в селекции. Сб. тр. ВНИИплем.-М., 1990.-С.40-43.

35. Мадисон В. Л., Гавриков A.M. «Эффективность использования высокопродуктивных коров в качестве доноров эмбрионов»//Бюлл. научн. работ.-Дубровицы, 1885.-Вып.77.-С.7-9.

36. Малиновская. В.А., Кувшинова B.C., Ситниченко Н.В. «Получение эмбрионов от коров доноров в племенных хозяйствах» //Биотехнологические методы в селекции. Сб.тр.ВНИИплем.-М.,1990.С.43-48.

37. Малиновский А.М, Решетникова Н.М., Мороз Т.А. «Способ определения жизнеспособности эмбрионов»/Патент на изобретение N 215557, Приоритет от 19.11.1999.

38. Малиновский А.М «Технологические аспекты криоконсервирования эмбрионов крупного рогатого скота» »//ВНИИЖ. Материалы международной научно-практической конференции. Дубровицы-2007. -С.-109.

39. Мадисон JI.B., Мадисон В.В. «Полиовуляция у коров -доноров — поиск продолжается»// материалы международной научной практической конференции №96. Харьков-2008г.

40. Милованов В.К., Соколовская И.И. «Причины эмбриональной смертности и новые возможности улучшения воспроизводства стада»// Животноводство1976.-№6.-С.75-83.

41. Милованов В.К. Биологические и зоотехнгические аспекты проблемы оплодотворяемости и плодовитости сельскохозяйственных животных//Животноводство.-1967.-№4.-С.62-70.94

42. Мингазов Т.А. Воспроизводительная функция коров в связи с сезонными изменениями обеспеченности в каротине//Тр. СевНИИЖ.-1978.-Т.4.-С.87-89.

43. Мороз Т.А., Блохин С.М. «Изучения влияния экзогенных и эндогенных факторов на выживаемость эмбрионов у коров-доноров»// Биотехнологические методы в селекции. Сб. тр. ВНИИплем.-1990.-С48-53.

44. Мороз Т.А., Малиновский A.M., Блохин С.М. «Эмбриопродуктивность доноров костромской породы при использовании различных препаратов ФСГ»//Биотехнологические методы в селекции. Сб. тр. ВНИИплем.-М., 1990.-С.53-57.

45. Мюйрсепп И., Хинт Р., «Причины низкого количества и качества эмбрионов при суперовуляции»// транспл. эмбр. круп. рог. скота тезисы докладов симпозиума. Тарту-23 октября 1986 года. Таллин -1986. -С. 20-31.

46. Мюйрсепп И.Я. «Гибель эмбрионов коров»//Профилактика незаразных болезней у коров. Таллинн, 1968. -С. 120-121.

47. Мышкин Н.Ф. Акушерство и гинекология сельскохозяйственных животных.-М., 1943.-С.372.

48. Мюйрсепп И.Я., Каллас А.Г. «Воспроизводительная способность коров и телок, использованных в целях трансплантации эмбрионов»//Профилактика незаразных болезней у коров.-Таллин, 1988.-С.117-118.

49. Овчинников А.В. «Уровень полиовуляции у коров-доноров в зависимости от размера яичников и состояния желтого тела»//Эндокрионология и трансплантация зародышей с/х животных. Сб. научн. тр. ВИЖ.-1983/84.-Т.44.-С.74-79.

50. Овчинников А.В., Смыслова В.И. «Уровень суперовуляции и качество эмбрионов при применении ФСГ-П, ГСЖК маротропина, фоллигона»// Трансплантация эмбрионов в молочном скотоводстве и овцеводстве. Дубровицы.-1985. С.16-18.

51. Павлов В.А. Рациональные сроки осеменения коров. Воспроизводительная способность коров с рекордной молочной продуктивностью//Физиология воспроизводства крупного рогатого скота.-1984.-С. 155-167.

52. Падучева A.JT. «Гормональная регуляция эндокринной системы. Половые циклы Коров»// Гормональные препараты в животноводстве. -М.-Р. 1979-С.40-93.

53. Передера К.Б. «Суперовуляция и получение эмбрионов от разных пород крупного рогатого скота»// Научно-технический билютень НИИ животноводства. Лесостепи и Полесья УССР. 1982.-№35.-С. 56-59.

54. Полянцев Н.И., Калашник Б.А. «Созревание и атрезия фолликулов, желтые тела»//Физиологические основы управления процессами размножения,-Персияновка, 1982.-С.2.

55. Применение метода трансплантации эмбрионов в практике животноводства//Сергеев Н.И., Мальцева И.В., Сукачева Л.П., Ибрагимов Ю.Ю.//Сб.тр. "Биотехнология воспроизводства и биотехнологические методы разведения с/х животных".-М., 1989.-С.84-91.

56. Пивняк Г.А. Научные основы воспроизводства крупного рогатого скота и эффективность использования маточного поголовья в условиях Московской области//Перспективы развития животноводства .-М., 1979.-С.94-104.

57. Прокофьев М.И. «Эндокринная регуляция полового цикла у основных видов сельскохозяйственных животных» // Регуляция размножения с/х животных.-Л.: Наука, 1983.-С.65-64.

58. Петской П.Г. Эмбриональные парабиозы и многоплодие сельскохозяйственных животных//Работы по эмбриологии с/х животных.-Изд. АН СССР, 1955.-С.194

59. Решетникова Н.М. «Фолликулогенез при гормональных регуляциях и различных формах нарушений функции»// Биотехнология воспроизводства и биотехнологические методы разведения с/х животных// Сборник трудов. Москва-1989. -С.43.

60. Решетникова Н.М. «Транспалнтация эмбрионов как аналитический метод воспроизводства стада» //ВНИИплем. Сборник трудов -1992г. С-4.

61. Решетникова Н.М. Проблемы внедрения метода трансплантации эмбрионов в практику племенных хозяйств. // «Биотехнологические методы в селекции» (Сборник трудов) М.-1990. -С.3-8

62. Решетникова Н.М// Применение метода трансплантации эмбрионов в воспроизводстве стада крупного рогатого скота в племенных хозяйствах. «Биология воспроизведения и биотехнологические методы разведения, М.1992. -С. 91-98.

63. Решетникова Н.М., Ситниченко Н.В., Олейник Е.И., Шуменец М.Ф., Одноразовое использование коров в качестве доноров эмбрионов //Зоотехния, 1995, №5. -С. 6-7.

64. Решетникова Н.М., Рябых В.П., Кувшинова B.C., Кордюков А.П. Взаимосвязь реакции суперовуляции у коров с гормональным уровнем. //Сб. трудов «Биология воспроизведения и биотехнологические методы разведения, М.1992. -С.25-32.

65. Решетникова Н.М., Ситниченко Н.В. «Способ отбора коров в доноры эмбрионов» \\ Патент N 2026038, 1994.

66. Рябых В.П., Логинов А.Г. «Фолликулогенез в яичниках коров в период вызывания суперовуляции»//ВНИИЖ. Материалы международной научно-практической конференции. Дубровицы-2007. -С. 157.

67. Самоделкин А.Г. «Герефорды агрофирмы «Толмочево», экологическая биотехнология их содержания и воспроизводства»//М.: «Идеал». 1998.-С.45.

68. Светлов П.Г. «Значение повреждений эмбриона на ранних стадиях развития в патогенезе внутриутробных заболеваний»//М.: Медгиз, 1959.-180. -С. 121.

69. Свитоюс А., Вашкас Г. Основные препараты, применяемые для вызывания суперовуляции у коров-доноров//Тез. докл. Всес.научн-техн. конф. Дубровицы, 1991г.-М., 1991.-С.89-89.

70. Сергеев Н.И «Трансплантация эмбрионов крупного рогатого скота -настоящее и будущее»//ВНИИЖ. Материалы международной научно-практической конференции. Дубровицы-2007. -С.424.

71. Сергеев Н.И «Факторы влияющие на суперовул'яторный ответ у коров»// Состояние и перспективы развития биотехнологии в животноводстве//Тезисы докладов. Львов. 1988 год.-С.79-80.

72. Сергеев Н.И., Лебедев В.И., Ибрагимов 10., Алмарданов А., «Применение гипофизарных препаратов при трансплантации эмбрионов» //Зоотехния. 1990.-№7.-С.69-72.

73. Сергеев Н.И., Некрасов А.А., Смыслова Н.И. Технология пересадки эмбрионов крупного рогатого скота//Животноводство.-1986.-№1.-С.45-47.

74. Сергеев Н.И., Решетникова Н.М., Абилов А.И., Малиновский A.M., Титова В.А., Гуденко Н.Д. «Руководство по трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота»//ВНИИ РОССЕЛЬХОЗАКАДЕМИЯ (ВИЖ). ДУБРОВИЦЫ-2008.

75. Сергеев Н.И., Сукачева Л.П. «Факторы, влияющие на эффективность нехирургической пересадки эмбрионов крупного рогатого скота»//Биотехнологические методы в селекции. Сб. тр. ВНИИплем.-М., 1990.-С.35-40.

76. Смолянинов Б.В «Индукция множественной овуляции у коров при трансплантации эмбрионов».// С.Х.биология.-1990. -№2. -С. 53-64.

77. Смыслова Н.И. «Результаты суперовуляции у коров доноров в зависимости от исходного гормонального фона»//Тез. докл. симп. Тарту, 1986 г.-Таллин, 1986.-С.13-14.

78. Советкин С.В., Прокофьев Е.С., Назарова Е.А., и др. «Стимуляция суперовуляции у коров доноров» //Зоотехния. -1989. № 4.-С. 64-65.

79. Соколовская И.И. «О рациональных сроках осеменения коров»//Животноводство.-1968.-№1.-С.67-74.

80. Сосновская Н.Г. Взаимосвязь воспроизводительных способностей коров с их возрастом и уровнем молочной продуктивности//Тр. Кишиневского с/х института.-1975.-Т. 143 .-С. 141 -144.

81. Степанов Г.С., Лебедев А.Г., Давыдов В.У. «Участие простагландина Ф-2а в механизмах нейроэндокринной регуляции тропной функции гипофиза у крупного рогатого скота»//Ш Всес. конф. по нейроэндокринологии: Тез. докл., Харьков, 1988. -С-208.

82. Студенцов А.П. Ветеринарное акушерство и гинекология.-СХГ,-1953.-404

83. Тараненко А.Г. Регуляция лактационной функции//Жи-вотноводство.-1985.-№6.-С.48-49.

84. Хантер Р.Х.Ф. «Физиология и технология воспроизводства домашних животных».-М.: Колос, 1984.-С.320.

85. Хэммонд Дж. О питании плода сельскохозяйственных животных//Сельское хозяйство за рубежом.-1965.-№2.-С.128-130.

86. Хилькевич С.Н., Овчинников А.В. «Суперовуляция у коров-доноров в зависимости от гормонального профиля перед обработкой»//Молочное и мясное скотоводство.-1986.-№2.-С.47-49.

87. Хилькевич С.Н., Ширяев В.М., Алибаев P.M. «Влияние возраста коров на эффективность гормональной обработки и приживляемость эмбрионов»//Бюлл. научн. тр. ВИЖ.-1991.-Вып.104.-С.36-38.

88. Чомаев A.M., Клинский Ю.Д. «Роль и значение эндокриналогии в воспроизводительной функции сельскохозяйственных животных»//ВНИИЖ. Материалы международной научно-практической конференции. Дубровицы-2007.-С.87.

89. Чомаев A.M., Носов А.В. «Эффективность терапии гинекологических болезней у высокопродуктивных коров эстрофаном в комплексе с другими препаратами. //Биотехнология размножения сельскохозяйственных животных»// Выпуск 95. Дубровицы -1989. -С.14.

90. Эрнст Л.К., Сергеев Н.И. «Трансплантация эмбрионов и сельскохозяйственных животных»//М.: Агропромиздат, 1989.-С139.

91. Решетникова Н.М., Мороз Т. А. «Гормональная стимуляция фолликулогенеза у крупного рогатого скота»//ВНИИЖ. Материалы международной научно-практической конференции. Дубровицы-2007. — С.296

92. Шейкин В.Н. «Фолликулогенез в яичниках коров в различные фазы полового цикла»//Биотехнология размножения сельскохозяйственных животных. Выпуск 95. Дубровицы -1989. -С.18.

93. Arends M.L., Morris R.G., Wyllie А.Н. Apoptosis. The role of the endonuclease//Am. J. Pathol.-I990.-Vol.l36.-P.593-608.

94. Barr J.S., Huffman L. Emryo transfer , economic implications for the dairy industry//3-d world congress on genetics applied to livestock production, 1986.-P. 179-184.186

95. Basu S. Maternal recognation of pregnancy.-Uppsala, 1984.-142 p.

96. Betteridge K.J., Takahashi K. «Embryo transfer in farm animals»//Anim. Husbandry.-1986.-Vol. 40, №12.-P.1379-1381.

97. Comparison of the once daily and twice daily FSG injections for superovulating beef cattle// Looney C.R., Boutte B.W., Arehbald L.F., Godke R.A.// Theryogenology.- 1981.15.P 13-22

98. Crass Y., Haser E.R. The influence of early age mastectomy and unilateral ovariectomy on reproductive performance of the bovine//J. Anim. Sci.-1981.-V.53, Ч.-Р.171-176.

99. Dalla Porta M.A., Humblot P. «Effect of embrio removel and embryonic extracts or PGE2 in fusion luteal function in the bovine»//Theriogenology.-1983.-Vol.19, №1.-P. 122-125.

100. Denis В., Fromageot D. Abord zootechniqe de Г infertility chez les bovine latiers//J. Rec. Med. Veter.-1978.-Vol. 154, Ч2.-Р.983-991.

101. Donaldson L.E. «Estimation of superovulation response in donor cows»//Veter. Rec.-1985.-Vol.117, N2.-P.33-34.

102. Donaldson L.E. «LH and FSH profiles at superovulation and embryo production in the cow»//Theriogenology.-1985.-Vol.23.-P.441-447.

103. Donaldson L.E. «The development and marketing of estrus synchronisation in cattle in Austria using prostaglan-dins»//Theriogenology.- 1980.-№14.-P.391-401.

104. Donaldson L.E., Ward D.N. "Effect of buteinnizing hormone and embryo production in superovulation cows."//Veterinary Record. -1986.-Vol.l 19.-P 625-626.

105. Donaldson L.E., Hensel W., Van Vleek L.D "Luteotropic or luteinizing hormone and nature of oxytocin-induced luteal inhi-bition in cattle"// J.Dairy Sci.-1965.-№45.-P.-331-338.

106. Donkin E. «Reproductive activity in dairy cows post partum»//Zimbabwey Agr. Res.-l980.-V. 18, №2.-P.71-93.

107. Effect of heat stress on follicular development during the estrus cycle in lactating dairy cattle/Wolfenson D., Thatcher W.W., Badrige I. et al//Biol. Reprod.-1995.-Vol.52.-P.l 106-1113. 216.

108. Endocrine control of energy metabolism in the cow: Comparison of the levels of hormones (prolactin, growth hormone, thyrotoxine and insulin) and metabolites in the plasma of high and low yielding dairy cattle at various stages of lactation/

109. J.C. Hart, J.A. Bine, S.V. Morant, J.L. Ridley//! Endocrinol.-1978.-Vol.77.-P.333-345.

110. Endocrineprofiles and embrio quality in the PMSG- Pg 21 treated cow// A.M. Jensen, T. Greve, A Madej, L.-Edgvist.// Theryogenology-1982.-V.l 8.-N 1. -p.33-44.

111. Fitzhugh H.A. Potential genetic impact of embryo transfer//Emerging technology and management for ruminants.-1985.-№2.-P. 100-107.

112. Garveric H.A., Smith M.F. Mechanisms associated with subnormal luteal function//.!. Anim. Sci.-1986.-Vol.62.-P.92-105.

113. George E. Seidel, Jr and Sarah Moore Seidel'Training manual for embryo transfer in cattle"//by Animal Reproduction Laboratory,Colorado State University,Fort Collins, CO 80523, USA/

114. Ginther O.J., Knopf L., Kastelic J.P. Temporal associations among ovarian events in cattle during oestrus cycles with two and three follicular waves//J. Reprod. Fertil.-1989.-Vol.87.-P.223-231.

115. Greve T.,Callesen H., Hyttel P. "Plasma progesterona profiles and embrio quality in syperovulated dairu cows"// Theryogenology-1984.-V.21.-n 1.-F.236.

116. Guise M.B., Gwazdauscas F.C. Profile of uterine proteine in flushing and progesterone in plasma of normal and repeat breeding dairy cattle//J. Dairy Sci.-1987.-Vol.70, Ч2.-Р.2635-2641.

117. Gyaw U.P., Pope G.S. Post-partum ovarian function in dairy cows as revarian by concentrations of oestradiol L-17(3 and progesterone indifated milky/Brit. Veter.-1996.-Vol. 146, 3 .-P. 194-200.

118. Hansel W., Echtemkamp S.E. Control of ovarian function in domestic animals//Amer. Zool.-l 972.-P.225-230.

119. Hansel W., Snook R.B. Pituitary ovarian relationships in the cow//J. Dairy Sci.-1970.-V.53, 7.-P.945-961.

120. Hansen L.V. Does high production affect reproduction// Hoard's Dairy man.-1982.-V.127, 23.-P.1535.

121. Hirshfield A.N. Development of follicles in the mamma-lian ovary//Int. Rev. Cytol.-1991.-Vol.124.-P.43-l 11.

122. Hsueh A.J.W., Billig H., Tsafriri A. Ovarian follicle atresia: hormonally controlled apoptotic process//Endocr. Rev.-1994.-Vol. 15.-P.707-724.

123. Hughes F.M., Gorospe W.C. Bichemical identification of apoptosis (programmed cell death) in granulosa cells evidence for potential mechanism underlying follicular atresia//Endocrinology.-1991 .-Vol. 129.-P.2415-2422.

124. Humbolt P. Proteines specifique de la gestation chez les ruminants//Reprod., Nutr., Develop.-1988.-Vol.28, 6.-P.1753-1761

125. Hyttel P., Greve Т., Callasen H. Cortical granule dynamics in cattle ova//Theriogenology.-1988.-Vol.39, 2.-P.32-40

126. Lafrans M., Goff A.K. Control of bovine uterine prosta-glandin F-2a release in vitro//Biol. of Reprod.-1990.-Vol.42, 2.-P.288-293.

127. Newcomb R., Chistie W., Rowson L.E.A. Foetal survival rate after surgical transfer of two bovine embryos//Reprod. Fert.-1980.-Vol.69.-P.31-36.

128. O'Farrell K.J., Hartigan P.J. Superovulation and non-surgical egg recovery from normal and repeat breeder dairy cows//Irish. Veter. J.-1989.-Vol.42,4-5.-P.53-55.

129. Oxytocin-stimulated release of prostaglandin F-2a from ovine endometrium in vitro: correlation with estrous cycle and oxyticin-receptor binding/J.S. Roberts, J.A. Mc Cracken, J.E. Gava-gan, M.S. Soloff//Endocrinology.-1976.-Vol.99.-P. 1107.

130. Oxenreider S.L., Wagner W.C. Effect of lactation and energy intake on postpartum ovarian activity in the cow//J. Anim. Sci.-1971.-V.33, 3.-P.1026-1031.

131. Pierson R.A., Ginther O.J. Follicular populations during the estrus cycle in heifers. 3. Time of selection of the ovulatory follicle//Anim. Reprod. Sci.-1988.-Vol.16, 2.-P.94-95.

132. Prostaglandin secretion by perfused bovine endometrium: secretion towards the myometrial and luminal sides at day 17 post-estrus as altered by pregnancy//Prostaglandins.-1988.-Vol.35.-P.343-357.

133. Review of prostaglandin F-2cc for ovulation control in cows and mares/ W.D. Oxender, R.A. Noden, F.M. Louis, H.D. Hafs// Am. J. Vet. Res.-1974.-Vol.35, №7.-P.997-1001.

134. Ricardo R.N.F., Velasques C. "Utilided del transplante de embriones para la selection de vacas // Veter. Mexicana.-1985.-№3.,-P.166-167.

135. Richards J.A. Hormonal control of ovarian follicular development. A 1978 perspective//Rec. Prog. Hormone Res.-1979.-V.35.-P.343-373.

136. Rieger D., Roberge S., Coy D.H., Rawlings N.C. "Effects of an LH RH antagonist on gonadotrophin and oestradiol secretion, follicular development, oestrus and ovulation in Holstein heifers"//J. Reprod. Fertil-1989.-V.86, Nl.-P .157164.

137. Roche L.F.,Boland M.P. Turnover of dominant follicles in cattle of different reproductive states//Theriogenology.-1991 .-Vol.35,1 .-P.81 -89.

138. Schaeffer, L.R. "Effects of embryo transfer in beef cattle on genetic evaluation methodology'V/Journal of animal science. Oct 1989. v. 67

139. Seguin B.E., Morrow D.A., Louis F.M. «Luteolisis, luteo-stasis and the effect of prostaglandin F2u in cows after endometrical irritation»//Amer. J. Vet. Res.-1974.-V.35, №1.-P.57-61.

140. Seguin B.E., Morrow D.A., Louis F.M. Luteolisis, luteo-stasis and the effect of prostaglandin F2« in cows after endometrical irritation//Amer. J. Vet. Res.-1974.-V.35, 4.-P.57-61.

141. Seidel G.E. "Applications of transfer and related technologies to cattle'V/J.Dairy Sc.-1984.-V. 67.- №1 l.-P. 2786-2796.

142. Shelton, J.N. "Embryo manipulation in research and animal production'V/Australian journal of biological sciences. 1988. v. 41.

143. Sirois J., Fortune J.E. Ovarian follicular dynamics during the estrous cycle in heifers monitored by real-time ultrasono-graphy//Biol. Reprod.-1988.-V.39, 2.-P.308-317

144. Spicer L.J., Echternkamp S.E. Ovarian follicular growth, function and turnover in cattle: A review//J. Anim. Sci.-1986.-Vol.62.-P.428-451

145. Wenkoff M., Crowe-Swords P.R. The management of pro-staglandin-controlled breeding programs in beef cattle a five year study//Can. Vet. J.-1983.-Vol.24.-P.50.

146. Wetterman R.P., Hafs H.D. Pituitary and gonadal hormo-nes associated with fertile and non-fertile inseminations. Synchro-nized and controlled estrus// J. Anim. Sci.-1972.-V.35.-P.716-721