Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Эффективность использования цианокобаламина для повышения резистентности объектов аквакультуры на разных этапах онтогенеза

ВАК РФ 03.00.10, Ихтиология

Автореферат диссертации по теме "Эффективность использования цианокобаламина для повышения резистентности объектов аквакультуры на разных этапах онтогенеза"

На правах рукописи

КОВАЛЕВА АНЖЕЛИКА ВЯЧИСЛАВОВНД

ЭФФЕКТИВНОСТЬ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ЦИАНОКОБАЛ АМИНА ДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ОБЪЕКТОВ АКВАКУЛЬТУРЫ НА РАЗНЫХ ЭТАПАХ ОНТОГЕНЕЗА

специальность 03.00.10-ихтиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Астрахань 2006

Работа выполнена в Астраханском государственном техническом университете

Научный руководитель:

доктор биологических наук Пономарева Елена Николаевна

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук Металлов Геннадий Федорович доктор биологических наук Крючков Виктор Николаевич

Ведущая организация: Институт Проблем Экологии и Эволюции имени А.Н. Северцова РАН

Защита диссертации состоится «__»_ 2006 г. в_

часов на заседании диссертационного совета К.307.001.01 при Астраханском государственном техническом университете по адресу: 414025, г^Астрахань, ул. Татищева, 16, АГТУ.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Астраханского государственного технического университета

Автореферат разослан «_»_2006 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета кандидат биологических наук

Мелякина Э.И.

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Одним то перспективных направлений повышения качества производителей и их потомства на рыбоводных предприятиях является использование биологически активных веществ как естественного, так и искусственного происхождения, обладающих токснкопротекгорпым и иммуномодулируюпщм действием на животные организмы, в частности на рыб на различных стадиях развития (Егоров, 1998). К таким веществам относятся витамины.

Некоторые витамины не синтезируются в организме или синтезируются в недостаточных количествах и должны поступать извне. Таким является цианокобаламин, шеи витамин В12. Его основное значение — в антианемическом действии, оказании влияния на процессы обмена веществ, он необходим для нормального пищеварения, синтеза белка, метаболизма углеводов и жиров, обеспечения нормального роста и развития организма. Ранее проводились опыты по его использованию для повышения жизнеспособности эмбрионов и молоди лососевых и карповых рыб, повышения их токсикорезнстентности (Глубоков, 1986, 1988; Духовенко, Сергеева, 1996).

Применение витамина Вц в качеств сильного биостимулятора позволит улучшить физиологические и рыбоводно-биологические показатели производителей рыб, повысить выживаемость и устойчивость потомства на ранних этапах онтогенеза.

Цель и задачи исследований. Целью данной работы явилась оценка действия цианокобаламина на репродуктивные качества производителей осетровых рыб в период нереста, его влияния на жизнестойкость потомства, а также на усиление криопротекторного действия при крио-консервации половых клеток различных видов рыб.

Поставленная даль определила следующие задачи:

- определить оптимальную корму введения циано кобаламина в виде инъекций самкам осетровых рыб в преднерестовый период;

- определить концентрации цианокобаламина для повышения жизнеспособности эмбрионов при обработке икры осетровых рыб;

• исследовать влияние цианокобаламина на резистентность осетровых рыб в период эмбрионального развития;

- оценить физиологическое состояние молоди осетровых рыб, полученной от икры, обработанной витамином;

- изучить влияние комплекса витаминов С, £ и Вц на производителей осетровых рыб разных биологических групп;

- оценить криопротекторный эффект при добавлении цианокоба-яамина в среды для криоконсервации половых клеток различных видов рыб.

Научная новизна. Впервые научно обоснована целесообразность и эффективность использования цианокобал амина для инъецирования осетровых рыб в преднерестовый период, повышения жизнеспособности икры осетровых при ее обработке, а также в качестве криопротектора в средах при криоконсервацин спермы различных видов рыб. Впервые определены нормы введения цианокобал амина в виде инъекций в период преднерестового содержания производителей русского осетра, севрюги и стерляди. Установлено, что введение витамина позволяет повысить процент созревания самок, оплодотворения икры, выход свободных эмбрионов. Впервые показано положительное влияние обработан икры цианокобал амином на резистентность личинок и молоди осетровых рыб.

Практическая значимость. Предложено использовать препарат цианокобал амина в рыбоводстве при инъецировании производителей во время подготовки к нересту. Даны рекомендации по обработке икры осетровых рыб с целью повышения выживаемости потомства на ранних этапах развития. Разработана методика использования цианокобаламина для усиления криопротекторного действия криосред при криоконсервацин половых клеток осетровых, карповых и окуневых рыб.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Нормы введения витамина Biz производителям осетровых рыб.

2. Методы обработки икры осетровых рыб цианокобаламином.

3 .Нормы введения В для усиления зфиопротекторного действия.

Апробация работы. Основные материалы диссертационной работы докладывались па пауч но-технической конференции профессорско-, преподавательского состава АГТУ, 2004; Международной научной конференции АГТУ-75,2005; Международном Семинаре «Современные технологии мониторинга я освоение природных ресурсов южных морей России», г. Ростов-на-Дону, 2005; Международной научно-практической конференции, посвященной 60-летию Московской рыбоводно- , мелиоративной опытной станции и 25-летию ее реорганизации в ГНУ ВНИИР, Москва, 2005; Международной научно-практической конференции «Повышение эффективности использования водных биологических ресурсов Мирового океана», Москва, 2005; Первой и второй научной конференции студентов и аспирантов базовых кафедр ЮНЦ РАН, Ростов-на-Дону, 2005; 200бгт. Международной научной конференции «Состояние и перспективы развития фермерского рыбоводства аридной зоны», г. Азов,2006.

Диссертационная работа выполнена в рамках Программы фундаментальных исследований ОНЗ РАН «Развитие технологий мониторинга, экосистемное моделирование и прогнозирование при изучении природных ресурсов в условиях аридного климата», темы управления «Севкас-прыбвод» «Разработка методов длительного хранения половых продуктов ценных видов осетровых рыб для дальнейшего применения с целью воспроизводства и формирования маточных стад на осетровых заводах Нижней Волги».

Публикации. По теме диссертации опубликовано 11 работ.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 132 страницах машинописного текста. Состоит из введения, пяти глав, заключения, выводов, практических рекомендаций, приложения. Список литературы содержит 242 источника, из них 50 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 13 рисунками и 35 таблицами.

ГЛАВА I. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

В главе проведен анализ литературных данных о влиянии различных биологически активных веществ на организм рыб. Исследованы биологические функции цианокобапамина, возможности его использования для улучшения физиологического состояния животных и человека. В результате выявлена целесообразность применения цианокобапамина в качестве сильного биологического стимулятора развития, повышающего жизнестойкость рыб на ранних стадиях онтогенеза, а также репродуктивные качества производителей рыб.

ГЛАВА IL МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Исследования выполняли в 2003 — 2006 г.г. на Волгоградском (Волгоградская область), Донском (Ростовская область), Бертюльском и Сергиевском (Астраханская область) осетровых рыбоводных заводах (ОРЗ), в Чаганском рыбопитомнике (Астраханская область), а также в лаборатории базовой кафедры Южного научного цешра Российской академии наук «Аквакультура и биологические ресурсы» (г. Астрахань).

В качестве объектов использовали различные виды осетровых рыб: русский осетр {Acipenser gueldenstaedtii Brandi), севрюга {Acipenser stellatus Pallas), стерлядь {Acipenser ruthenus Linnaeus) волжской и донской популяции, а также их икра, личинки и молодь. Материалом для научных работ по криоконсервации служила сперма осетровых, карповых и окуневых рыб. Схема проведения исследований представлена на рисунке 1.

Нормы введения медицинского препарата шанокобаламина определяли на основе анализа научной литературы о физиологическом со-

стоянии производителей и доз, принятых в медицине (Глубокое, 1988, 1993; Духовенко, Сергеева, 1996; Остроумова, 2001).

Рис. 1. Схема проведения исследований

В экспериментальных работах по определению оптимальных норм инъекций цианокобал амина производителям осетровых рыб допытывались следующие дозировки: 25; 50; 75; 100 мкг/кг массы тепа рыб. Инъецирование проводили в преднерестовый период за месяц до стимулирования созревания половых продуктов с интервалом 7 суток.

При подготовке осетровых рыб к нересту применяли комплекс витаминов С, Е и В12.

В работе использовали нормы аскорбиновой кислоты и а-токоферол-ацетата для производителей осетровых рыб, разработанные ранее (Сорокина, 2004).

Инъецирование комплексом витаминов (С, Б и В ц) самок русского осетра озимой расы проводили перед посадкой на зимовку (октябрь-ноябрь) и весной при подготовке к нересту трехкратно с недельным интервалом. Самцов русского осетра озимой расы кололи осенью и весной перед нерестом однократно. Производителей русского осетра яровой расы, а также производителей севрюги и стерляди инъецировали двукратно перед нерестом. В контроле производителей инъецировали витаминами С и Е. Витамин В,2 вводили на следующий день после введения витаминов Е и С.

Обработку икры русского осетра цианокобаламином проводили в период обескленвания в аппаратах АОИ в течение 45 минут. Испытывали следующие концентрации цианокобаламина: 0,5 мг/л, 1,0 мг/л и 1,5 мг/л.

Влияние цианокобаламина определяли на основании данных созревания производителей, процента оплодотворения икры, а также выживаемости эмбрионов, личинок и выхода молоди. Плодовитость самок определяли общепринятым способом (Правдин, 1966). Для определения процента оплодотворения икры брали пробы на стадии второго деления — 4 бластомера, стадия 5 (Детлаф, Гинзбург, 1981), Активность спермы определяли по 5-ти бальной шкале Г.М. Персова (1953).

Процесс эмбрионального развития осетровых рыб изучали по методике ТА. Детлаф, A.C. Гинзбург и О.И. Шмальгаузен (1981). Взвешивание и измерение молоди проводили по методике И.Ф. Правдина (1966).

Среднесуточную скорость роста рыб вычисляли по формуле сложных процентов (Castell, Tiews, 1979), коэффициент массонакопления по методике ВНИИПРХ (Резников и др., 1978; Кутшский и др., 1985). Гематологические показатели определяли согласно рекомендациям В.В. Лиманского с соавторами (1984).

Крноконсервацию осуществляли по методике Цветковой с соавторами (1997). Для модификации криопротекторного действия ДМСО в среды добавляли раствор цианокобаламина в концентрациях 0,5; 1,0 и 1,5 мг/л. В качестве контроля служили эякуляты, замороженные без витаминов. Хранение спермы осуществлялось в жидком азоте (—19б°С) в биологическом хранилище (ХБ 300), объемом 300 литров.

Анализ химического состава спермы, икры, личинок и молоди определяли общепринятыми методами (Щербина, 1983).

Экстракцию липидов выполняли по методу J. Polch et al (1957), разделение липидов на фракции — способом тонкослойной хроматографии. Количество (фосфолипиды, триглицериды и др. фракции) устанав-

ливалн на основе методики G. Rouser et al. (1966). Липиды подвергали прямой переэтрификации в абсолютном метаноле. Полярные метиловые эфиры высших жирных кислот разделяли на хроматографе «Hewlett-Packard» (Ахрем, Кузнецова, 1965), Данные обработаны статистически по Г.Ф. Лакнну(1990),

В процессе исследований выполнено 560 биохимических анали-юа тела, икры и спермы различных видов рыб, обработано около 130 гематологических проб, 200 проб икры, 750 проб спермы, проанализировано более 2000 экз. личинок, около 14000 экз. молоди, порядка 450 экз. производителе й.

ГЛАВА III. ПОВЫШЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ НЕРЕСТА ОСЕТРОВЫХ РЫБ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ЦИАНО К ОБ А Л A M ИIIА ПРИ ИСКУССТВЕННОМ ВОСПРОИЗВОДСТВЕ

При искусственном воспроизводстве качество и жизнестойкость личинок и молоди зависят не только от условий выращивания, но и от качества исходного материала (икры и спермы) которое определяется состоянием производителей (Соколова, Горюнова, 2000).

Необходимым условием получения жизнестойкого потомства является использование физиологически полноценных производителей и их подготовка к нересту при использовании витаминов.

В наших исследованиях важно было дать оценку действия цианокобал амина на физиологическое состояние производителей осетровых рыб и повышение их репродуктивных качеств.

3.1. Эффективность использования витамина Ви для подготовки производителей осетровых рыб к нересту в искусственных условиях

Поскольку кортикостерондные гормоны, а также нейролептики способствуют «вымыванию» цианокобаламина из организма, то при созревании ооцитов наблюдается снижение содержания этого витамина. В связи с этим введение самкам витамина Вп в период созревания является весьма целесообразным.

Экспериментальные работы по определению оптимальных норм ввода цианокобал амина производителям осетровых рыб показали, что происходит улучшение всех биологических и репродуктивных показателей инъецированных витамином рыб (табл. 1).

Результаты опытов показали, что наиболее эффективной нормой цианокобаламина следует считать 50 мкг/кг массы тела рыб. Введение такого количества препарата привело к 100 %-ному созреванию произво-

дителей, что на 40 % выше контроля. Увеличение дозы цианокобаламина до 100 мкг/кг не привело к изменению показателей. При этом процент оплодотворения икры во всех опытных вариантах был выше в среднем на 14,9 %, процент развивающейся икры - на 15,5 %, выход свободных эмбрионов — на 14,3 % в сравнении с контролем.

Таблица I

Показатели самок русского осетра при инъецировании цианокобаламииом

Показатели Варианты опытов Контроль

25 мкг/кг 50 мкг/кг 75 мкг/кг 100 мкг/кг

Средняя масса, кг 19,7±0,37 19,3±0,13** 20,7±0,17 19,0*0,25** 20,5±0,16

Средняя длина, см 130„4±1т9 128,0±2,] 135,0±1,5 128,8±1,9 134,&Ы,4

Созревание, % 80 100 100 80 60

Плодовитость, тыс, шт. 134,4±1,6 185,5±3,8*** 186,0*2,4*** 177,2±3,5*** 137,2±1,3

% оплодотворения 87,3 93,9 94,5 92,0 76,0

% развнгия(17 ст.) 82,0 «9,7 88,0 88,0 70,4

Выход эмбрионов, % 78.0 84.8 85,0 84,6 67,2

Примечание: различия достоверны при ** Р<0,01, *** Р<0,001

Установленная норма проверена в условиях производства на самках русского осетра. Показано, что количество ответивших на гипофизар-ную инъекцию рыб увеличилось на 10%, процент оплодотворения икры на 17%, в сравнении с контролем. Отмечено повышение в опытном варианте процента нормально развивающейся икры на стадии малой желточной пробки (17 ст.) на 18 %, на стадии вылупления эмбрионов из оболочек (36 ст.) - на 20% по сравнению с контролем.

Биохимический анализ икры, полученной от самок опытной группы, выявил более высокое содержание протеина (на 2,3 %) и липидов (на 1,1 %) в сравнении с контролем. Высокая концентрация липидов являлась свидетельством стабилизации их расхода в организме. Очевидно, в преднерестовый период содержания у самок в контроле происходили значительные траты липидиых веществ на генеративный синтез и поддержание жизненных функций.

Дальнейшие исследования были проведены на ослабленных производителях русского осетра разных биологических групп, У всех производителей в опыте были отмечены нарушения кожных покровов: потертости, кровоподтеки, сбитые «жучки». При дефиците производителей этих самок использовали в нерестовой кампании.

Через неделю после введения цианокобаламина улучшились репродуктивные показатели и состояние производителей (рис. 2).

В дальнейшем аналогичные результаты были получены на самках севрюги и стерляди. При этом шло увеличение процента созревания на 16%, процента оплодотворения икры- на 10%,

Ловимые

I яровые

спзрсмт

«ПЛ«ДПТВ*|КНЦ [ЩкННЙПЦВМЯ

кхры тСртФИЫ

Рис 2. Репродуктивные показатели самок русского осетра Таким образом, введение 50 мкг/кг цианокобаламивд самкам осетровых рыб в преднерестовый период перед проведением гипофизар-ных инъекций значительно повышает их рыбоводно-биологические показатели. Ведет к увеличению процента созревания самок на 10 — 40 %, оплодотворения икры на 10 — 17,9 % и выхода свободных эмбрионов на 20%.

3.2. Использование витамина Вцдля повышения резистентности осетровых рыб на ранних этапах онтогенеза В наших исследованиях необходимо было выявить влияние циа-нокобаламина на развивающуюся икру и личинок русского осетра.

При обработке икры русского осетра водным раствором витаминного препарата лучшие результаты были получены при введении 1,0 мг/л циаиокобал амина, был отмечен высокий выход свободных эмбрионов — 77%, в контроле-69,5% (табл. 2).

Таблица 2

Результаты обработки икры русского осетра цианокобал амином

Показатели Ва рианты

0,5 мг/л 1,0 мг/л 1,5 мг/л Контроль

Выход свободных эмбрионов, % 7! 77 76,5 69,5

Выживаемость предличинок, % 66 70 69 63,3

Отклонения в развитии, % 5 3 3 ■ 18

Обработка икры русского осетра цианокобадамшюм в концентрации 1,5 мг/л оказала положительный эффект, мало отличающийся от варианта обработке в концентрации 1,0 мг/л.

Обработка витамином В ц приводит не к материальной кумуляции препарата, а посредством воздействия на рецепторы вызывает в дальнейшем повышение эффективности его усвоения при поступлении в организм и интенсификацию биосинтеза. Следовательно, можно сделать вы-

и

под о триггерном типе действия циаиокобаламина в повышении жизнестойкости и токсикорезистентности рыб в ранние периоды онтогенеза.

Результаты, полученные в условиях осетровых заводов представлены на рисунке 3.

0,3 мт!л 1,0 МГЛя 1,5 рпУж КОЯСфАЯЪ

Э Волгоградский ОРЗ В Донской ОРЗ Рис. 3. Результаты инкубации икры, обработанной цианокобаламином

Биохимический анализ показал, что икра, обработанная витамином Вцв концентрации 1,0 мг/л, отличалась от контрольной группы более высоким содержанием протеина (на 5,7 %) и жира (на 3 %), что важно в период эмбрионального развития и в дальнейшем может оказать влияние на жизнестойкость эмбрионов.

Высокая смертность эмбрионов отмечалась в период прохождения критических стадий развития, однако в контрольном варианте она была выше, чем в опыте (рис. 4).

Наибольшая гибель эмбрионов отмечалась на стадиях: начало га* струляшш (12 - 13 стадии); конец гаструляции (18 - 19 стадии); образования зачатка сердца (28 стадия); вылупления (35 - 36 стадии). В опытном варианте выход свободных эмбрионов был высоким и составил 74,9 %, в контроле — 69,4 %.

В результате обработки икры цианокобаламином в период эмбрионального развития отмечено снижение процента нарушений в развитии в среднем на 8,1 % (табл. 3).

Анализ морфометрических показателей выявил некоторое преимущество предпичинок полученных от икры, обработанной витамином В12 в концентрации 1,0 мг/л. Предличинки опытной группы отличались большей массой (на 2,7 мг) и длиной (на 1,0 мм), имели высокие потенции к росту. В контрольном варианте получен значительный процент нарушений в развитии: у 5 % предпичинок обнаружено искривление позвоночника, у 7 % — недоразвитие передних отделов головы.

¡Щ^ - Общая выживаемость эмбрионов. Гибель накригических стадиях; ШЩ - Начало дробления 4 стадия; {ЦЦ - Начало гаструляияи 12-13 стадии; - Стадия малой желточноЯ пробки; Щ - Коиец гаструляоди начало

органогенеза 18-19 стадия; -Щ - Органогенез; |_| - Образование

аачатка сердца 28 стадия; ¡Щ| - Вылупление единичных экземпляров.

Рис. 4. Общая выживаемость и гибель эмбрионов на критических стадиях при обработке икры препаратом цианокобаламина, % 1-опыт, Н-контроль

Таблица 3

Нарушения в развитии эмбрионов, % _

Вид нарушений Опыт Контроль

Нарушения дробления, неправильная закладка борозды дробления 2,4±0,41** 4,1 ±0,33

Позднее закрытие бласгопора 1,0±0,30* 1,8±0,17

Недоразвитие передних отделов головы 2,5±0,25*** 5,8±0,49

Искривленное тело 3,0±0,62 5,3±0,54

Примечание: различия достоверны при » Р<0,05; ** Р<0,01; *** Р<0,001

В опытном варианте таких нарушений было значительно меньше - 5,5 %. Предличинки опытной группы своевременно переходили на смешанное питание, следствием чего явилась их высокая выживаемость - 58 %, в контроле - 80 %.

В опытной группе личинки отличались активным поведением, лучше потребляли комбикорм и опережали в росте личинок контрольной группы, имели высокие биохимические показатели состава тела: содержание протеина — 59,9 %, липидов 30 %, в контрольной группе этот показатель был ниже на 2,5%.

Лияндный статус рыб может характеризовать их способность преодолевать неблагоприятные условия, стрессы, действия низких температур, отсутствие достаточного количества пиши, влияние состава отдельных компонентов потребляемых кормов (Яржомбек и др., 1981; Ка-таскова и др., 1998).

При выращивании молоди русского осетра лучшие показатели роста и выживаемости были отмечены в опытном варианте. Масса молоди была выше на 14 %, чем в контроле. Гематологические показатели молоди в опыте были значительно выше: гемоглобин на 8%, гематокриг на 11%, эритроциты на 2%, что свидетельствует о лучшем физиологическом состоянии.

Таким образом, проведенный комплексный анализ биологических, биохимических и гематологических показателей свидетельствовал об эффективности обработки икры витамином Вц в период подготовки к инкубации.

ГЛАВА IV. РЕЗУЛЬТАТЫ ПРИМЕНЕНИЯ ЦИАНОКОБАЛАМИНА В КОМПЛЕКСЕ С ВИТАМИНАМИ СИЕ ДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ РЕПРОДУКТИВНОГО КАЧЕСТВА ПРОИЗВОДИТЕЛЕЙ ОСЕТРОВЫХ РЫБ

Резервирование производителей в бассейнах и прудах на рыбоводных предприятиях, в там числе продолжительное - для озимых форм, в условиях, постоянных стрессовых воздействий, вызывает нарушения в обмене веществ, приводит к дополнительным тратам биологически активных веществ.

Для улучшения физиологического состояния и повышения репродуктивных свойств производителей русского осетра была проведена подготовка их к нересту с использованием комплекса витаминных иньек-цийС.ЕиВп (рис.5).

Перед нерестом у самок русского осетра был исследован завершающий этап гаметогенеза. Установлено, что процесс завершения формирования гонад проходил нормально, без нарушений. По показателям поляризации ядра, размерам ооцитов, каких-либо отклонений в формировании репродуктивной функции не обнаружено.

От проинъецированных витаминами С, Е и В и озимых и яровых самок русского осетра получена доброкачественная икра с высоким процентом оплодотворения (84 - 86 %), что на 4% выше контроля (рис. 5).

* • озимая раса

опыт

* * озимая раса

КОИфОЛЬ

-Ж — яровая раса контроль

Оплодотворение акры, "Л

Развитие икры, % Выход эмбрионов, %

Рис 5. Показатели развития икры, полученной от производителей, инъецированных витаминами: опыт—комплекс витаминов С, Е иВ12, контроль - комплекс витаминов С и Е

Использование комплекса витаминов С и Е в контроле показало высокие результаты инкубации икры, полученной от производителей. Однако, дополнительное введение витамина В12 к ранее разработанному комплексу оказалось более эффективным. Инъекции цианокоб ал амина восполняли дефицит этого витамина у рыб, поскольку он не синтезируется организмом, а при созревании ооцитов идет снижение его содержания.

Рыбоводные показатели, как правило, коррелируют с физиологи* ческнм состоянием рыб, что подтверждается гематологическими показателями (Пономарева, 2003). Кобальт в составе цианокоб аламина оказывает влияние на процессы кроветворения: стимулирует образование красных кровяных телец и гемоглобина, а в отсутствие нлн при недостатке кобальта у определенных видов животных наступает анемия.

При введении комплекса витаминов показатели гемоглобина и эритроцитов в крови самок опытной труппы находились на высоком уровне — 90 г/л и 1,350 млн/мм1, соответственно.

Высокое содержание белка (4,1 г%) в сыворотке крови в пределах установленных норм явилось благоприятным признаком, т.к. значительные его потерн связаны со снижением жизнестойкости и могут сопровождаться гибелью рыб (ЛиманскиЙ, 1978; Яржомбекидр., 1986).

Биохимический анализ показал, что икра полученная от проинье-цированных витаминами самок отличалась белее высоким содержанием протеина (56,8%) и жира (29%).

Масса икринок зависит от величины накопления белка в икре рыб (Афонич и др., 1971; Остроумова, 2000). В икре, полученной от самок

русского осетра, в опытных группах этот показатель был выше (ср. масса икры озимых - 18,5 мг, яровых — 18,6 мг).

Проведение подготовки самцов яровой и озимой группы к нересту при использовании витаминов выявило повышение качества половых клеток.

При оценке спермы, полученной от самцов русского осетра подготовленных к нересту с использованием витаминов, ее качество соответствовало 5-ти баллам, в контроле 4-м баллам, время подвижности сперми-ев увеличилось на 20-50 сек. Повышение качества спермы объясняется действием цианокобаламина, который способствует увеличению потребления кислорода клетками.

Дальнейшие исследования были проведены с самками севрюги и стерляди. После проведения инъецирования витаминами С, Е и Ви икра была получена от 90 % самок. В контроле этот показатель был ниже иа 2,5 %. От 35,5 % самок опытной группы была получена доброкачественная икра, которая отличалась более высоким процентом оплодотворения — 90 %.

Таким образом, результаты проведенных экспериментов показали эффективность применения комплекса витаминов С, Б и В и для производителей осетровых рыб разных биологических групп.

ГЛАВА V. ЭФФЕКТИВНОСТЬ СОХРАНЕНИЯ ПОЛОВЫХ КЛЕТОК РЫБ ПРИ КРИОКОНСЕРВАЦИИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ

ВИТАМИНА В,3

Одним из направлений в области сохранения популяций исчезающих видов рыб является криоконсервйрование их половых продуктов. Для защиты клеток от криоповреждений наиболее важны оптимальный выбор криопротекторов и режимы самого охлаждения.

Нашей задачей было улучшить результат криоконсервации путем введения в криосреды цианокобаламина.

Перед началом работ по криоконсервации было проведено определение качества половых продуктов осетровых рыб. Для криоконсервации спермы русского осетра была отобрана сперма с активностью 5 баллов по шкале Г.М. Персова (1953), временем подвижного состояния спермиев 99 сек.

Результаты исследований показали, что выживаемость сперматозоидов русского осетра после разбавления криосредой Штайна и выдерживания в течение часа составила 80 %, процент спермиев с поступательным движением составил 63,1 % при подвижности 57,5 сек. В дефрости-рованной сперме все показатели снизились в 1,3 - 1,8 раза.

При использовании в качестве среды трие-НСМ>уфер активность разбавленной спермы снизилась на 16,7 %, спермиев с поступательным движением на 23,9 % к сравнении со средой Штайна. При дефростиро-вании выживаемость и активность спермиев снизилась в 1,7 — 2,7 раза. Результаты опытов подтвердили эффективность использования среда Штайна для криоконсервации спермы осетровых рыб.

5.2. Применение ниамокобаламнна на начальных этапах криоконсервации спермы рыб

В наших экспериментах дня смягчения осмотического стресса в клетках и предотвращения свободнорадикального окисления в криорас-твор (среда Штайна) вводили цианокобаламин в различной концентрации.

При добавлении цианокобаламина в среду при криоконсервации спермы лучшие показатели выживаемости спермиев отмечены в варианте с добавлением витамина в концентрациях 0,5 и 1,0мг/л (рис. б).

О выживаемость спермиев

В сперм ии с

поступательным движением

Рис. б. Показатели спермы русского осетра при криоконсервации Примечание: концентрация цианокобаламина 1 - 0,5 мг/л, 2 - 1,0 мг/л, 3 - 1,5 мг/л, контроль - среда без витамина.

При добавлении витамина Во в концентрации 0,5 мг/л в среду произошло увеличение выживаемости на 31,9 %, процента спермиев с поступательным движением — на 10,1 %, времени движения — на 50,8 сек. При концентрации 1,0 мг/л также произошло повышение всех показателей на 5 - 14 %.

При введении в криосреду витамина Ви в концентрации 1,5 мг/л происходит резкое снижение всех показателей спермы.

Таким образом, выявлена эффективность введения в криораствор цианокобаламина в концентрации 0,5 мг/л и 1,0 мг/л.

Для исследований по криоконсервацни половых клеток карповых рыб с добавлением в криосреду витамина Вц использовалась сперма белого и пестрого толстолобиков.

Результаты экспериментов показали увеличение активности спермы белого толстолобика при введении 1,0 мг/л витамина Вц по сравнению с контролем (рис, 7а). При этом выживаемость спермы была выше на 55 — 60 %, время движения — на 15 сек.

Трко§Ю1' Срча ШчЯма (

р выжквммосп сперынш

тпг 1 1 тип

11 т & в г 11

о»

) спгрмнм с аолу доггёлмнм движением

а) белый толстолобик

б) пестрый толстолобик

Рис 7. Результаты криоконсервацни спермы растительноядных рыб

Результаты криоконсервацни спермы пестрого толстолобика были лучше в варианте с применением цианокобаламияа (рис. 76). При этом выживаемость спермиев составила 40 %, время движения спермиев увеличилось на 12 сек.

Проведенные исследования по криоконсервацни 4-х балльной спермы окуня дали положительные результаты при использовании среды Штайна.

Введение витамина Вц в среду в концентрации 1 мг/л привело к увеличению показателей дефростированной спермы окуня. Так, выживаемость спермиев повысилась на 3 %, процент спермиев с поступатель-

ным движением - на 15 %, время движения - на 5 сек. В среде трис-НС1-буфер вся сперма погибла.

Таким образом, проведенные исследования свидетельствуют об улучшении результатов криоконсервации спермы осетровых, карповых и окуневых рыб при введении в крносреду Штайна витамина В^.

5.3. Применение цианокобаламина на этапах глубокого замораживания и хранения спермы осетровых рыб В механизмах холодовой адаптации особо важная роль отводится степени насыщенности жирных кислот: с увеличением числа двойных связей в жирнокислотиых хвостах липидов температура фазового перехода понижается, что позволяет мембране нормально функционировать в области пониженных температур (Остроумова, 2001). Сперма русского осетра, используемая для глубокого замораживания, содержала большое количество воды (94,1 %). На такое количество жидкой фазы требуется эквивалентное количество криозапщтного раствора. Замещение такого количества воды криозащитным раствором должно производится в течение одного часа. После размораживания необходимо добавление физиологически индифферентной среды.

Количество белка в сухом веществе спермы составляло 7$,2 %, такое количество белковых структур при охлаждении будет видоизменяться в связи с трансформацией. Количество липидов составило 9,7 '/о. Структура липидов меняется при замораживании, важны дальнейшие исследования жирнокислотного состава липидов.

Сперма исследованных рыб по составу общих липидов и фосфо-липидов оценивается как хорошая. Определение жирнокислотного состава фосфолипидов спермы осетровых перед криоконсервацией имеет большое значение, так как кислоты линолевого и линоленового ряда защищают клеточные мембраны от разрушения. ЖирнокислотныЙ состав фосфолипидов спермы русского осетра в наших исследования (сумма еаЗ -12,4±0,2; сумма ©б, 2,8±0,4;<вЗ/шб -4,4±0,2) свидетельствовал о хорошем качестве половых продуктов.

Таким образом, образцы спермы можно рекомендовать для глубокого замораживания и долгосрочного хранения.

Лучшие результаты по глубокому замораживанию спермы русского осетра получены в варианте с использованием среды Штайна с витамином В12 в концентрации 0,5 мг/л (рис. 8). Получен больший процент выживаемости спермиев после дефростирования, в сравнении средой трис-НС1-буфер (25 и 20 % соответственно), а также большее количество спермиев, с поступательным движением (60 и 45 % соответственно).

| Н Спермин с 1 £ поступательным 3 движением,%

Выживаемость спермиев, %

Рис. 8. Показатели дефроетировагаюй спермы русского осетра после глубокого замораживания

В среде трис-НС1-буфер с витамином В и наблюдали снижение активности (выживаемость — 10 %, спермиев с поступательным движением - 30 %). Полученные результаты объясняются содержанием в циано-кобал амине активного кобальта, который взаимодействует с составными частями раствора трис-НС1-буфера, образуя прочные соединения, вследствие чего не происходит криопротекториого эффекта.

После хранения образцов спермы русского осетра в течение месяца при температуре. - 196 "С в среде Штайна с добавлением витамина В и б концентрации 0,5 мг/л показатели активности не изменились, что указывало на возможность хранения спермы долгое время без негативных последствий.

Таким образом, для криоконсервации спермы исследованных рыб следует рекомендовать комбинацию среды Штайна с витамином В12-

В результате экспериментов по определению оптимальной дозы цианокобаламина, необходимой для повышения репродуктивных показателей самок, установлено, что лучшие рыбоводные показатели получены при введении 50 мкг/кг массы тела, при этом отмечено 100%-ное созревание производителей, что на 10 - 40 % выше показателя в контроле. Процент оплодотворения икры увеличился на 10 — 17,9 %.

Икра, полученная от самок, проиньецированных цианокобалами-ном, отличалась от контрольной более высоким содержанием протеина (на 2,3 %) и липидов (на 1,1 %), что в последствии будет способствовать лучшей обеспеченности эмбриона питательными веществами. Высокое содержание протеина и липидов в икре связано с тем, что цианокобала-мин входит в состав основных ферментов, катализирующих реакции бел-

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

кового, лгашдного и углеводного обмена, вместе с фолневой кислотой участвует в синтезе аминокислот.

Исследование в период инкубации показало, что процент оплодотворения икры на стадии четырех бластомеров и процент развивающейся икры (17 ст.) в опытном варианте был выше контроля на 17,9 % и 19,3 %, соответственно.

Проведение испытаний в производственных условиях, показало эффективность использования препарата цианокобаламина в период подготовки икры к инкубации. При исследовании различных норм витамина В и лучшие результаты получены при обработке икры цианокобаламином в концентрации 1,0 мг/л, при этом выход свободных эмбрионов составил 77 % - 85 % (соответственно на Волгоградском и Донском ОР.З), в контроле - 69,5 % - 67 %, кроме того в период эмбрионального развития отмечено снижение процента нарушений в развитии в среднем на 8,1 %

Дальнейшие наблюдения за развитием личинок и молоди русского осетра подтвердили положительное влияние витамина В и на рыб в разные периоды онтогенеза. Проведенный анализ полученных рыбовод-ио-биологических и физиолого-биохимических данных позволяет с достоверностью утверждать, что у опытной группы удалось повысить выживаемость личинок на 8 % при снижении отклонений в развитии в 2 раза. Молодь в опыте отличались хорошим физиологическим состоянием, о чем свидетельствует повышение содержания протеина на 2*5 %, липидов — на 1,4 %. Отмечено положительное влияние витамина В(2 на показатели крови молоди опытной группы, которые соответствовали состоянию здоровой рыбы.

Для более эффективной подготовки производителей осетровых рыб разных биологических групп была разработана схема инъецирования производителей осетровых рыб комплексом витаминов С, Е и В12. Использование витаминов С, Е и Вп позволяет улучшить физиологическое состояние функционально ослабленных производителей озимой расы русского осетра и ведет к увеличению процента оплодотворения икры на 4 %. Процент оплодотворения икры яровых самок составил 87 %, что на 2 % больше контроля. Гематологические показатели самок яро* вой и озимой расы, инъецированных комплексом витаминов, свидетельствовали о лучшем физиологическом состоянии, содержание белка в сыворотке крови на 4,1 г%, гемоглобина на 4 г/л, гематокрита на 0,05 л/л, количество эритроцитов на 0,022 млн/мм3 было выше, чем у контрольной группы самок.

Опенка влияния комплекса витаминов на самцов осетровых рыб показала, что введение витаминных инъекций улучшает качество спермы до 5-ти баллов, увеличивает время подвижности спермиев на 50 сек.

Применение данной схемы подготовки к нересту севрюги и стерляди показало, что процент оплодотворенной икры севрюги был на 3 % выше контроля, а количество самок, отдавших доброкачественную икру, в опытной группе увеличилось, икра, полученная от этой группы, имела высокий процент оплодотворения - 90 % (в контроле - 35 %).

Исследования по использованию цианокобаламина для методов криоконсерващш половых клеток рыб позволило рекомендовать его качестве модификатора криопротекторного действия ДМСО, а также для смятения осмотического стресса в клетках и предотвращения свободно-радикального окисления.

Введение цианокобаламина в крнораствор (среда Штзйна) в концентрации 0,5 мг/л повышало выживаемость спермиев осетровых рыб па 31,9 %, время движения спермиев - на 50,8 сек. Добавление витамина в трнс-НС Й5уфер не способствовало увеличению криопротекторного действия среды из-за взаимодействия кобальта в составе цианокобаламина с составными частями раствора с образованием прочных связей.

Активность спермы бедою толстолобика увеличивалась при введении 1,0 мг/л витамина В12 в сравнении с контролем. Выживаемость спермы была выше на 55 — 60 %, время движения — на 2 — 15 сек. Введение витамина В)г в среду при консервации спермы окуня в концентрации' 1 мг/л также привело к увеличению показателей дефростированной спермы.

ВЫВОДЫ

1. Установлено, что введение цианокобаламина в период преднерестового содержания улучшает рыбоводно-биологические показатели самок осетровых рыб. Норма введения витамина В1г составляет 50 мкг/кг массы тела, что способствует повышению созревания самок на 10 - 40 %

и увеличивает процент оплодотворения на 1$ %, выхода эмбрионов на 20 ' %. ■ ■

2. Выявлено, что оптимальной дозой препарата цианокобаламина для обработки икры осетровых рыб является I мг/л при длительности обработки 45 мин. Это позволяет снизить гибель эмбрионов на критических этапах развития на 5,4 %, количество уродливых эмбрионов н личинок — на 8,1 %, при повышении процента выхода свободных эмбрионов. Икра, обработанная витамином Вп, отличалась от контрольной группы более высоким содержанием протеина (на 5,7 %) и жира (на 3 %).

4. Определено, что молодь, полученная от икры, обработанной цианокобаламином, имела лучшие показатели роста и выживаемости, прирост массы тела на 14% выше, чем в контроле. Содержание белка в

теле молоди составило 67,7 % (на 2,7 % выше показателя в контроле), концентрация гемоглобина в крови — 74 г/л, что свидетельствовало о хорошем физиологическом состоянии.

5. Введение цианокобаламина в комплексе с витаминами С и Е производителям осетровых рыб повысило их репродуктивные качества при длительной резервации, что позволило увеличить процент оплодотворения икры русского осетра на 2 — 4 %, севрюги — на 3 %; стерляди — на 5 %, концентрацию спермы самцов (на 0,05 - 0,25 млнУмм') и продолжительность поступательного движения спермиев (на 20 — 50 сек), в сравнении с контрольной группой.

6. Показано, что введение цианокобаламина в концентрации 0,5 мг/л в криозапцггную среду на начальных этапах криоконсервации спермы русского осетра повышает выживаемость и время подвижного состояния спермиев на 31,9 % и 50,$ сек, соответственно. Концентрация 1 мг/л цианокобаламина в криосреде способствует увеличению выживаемости спермы белого толстолобика — на 55 окуня — на 3 %, времени движения спермиев — на 15 и 5 сек, соответственно: При глубокой заморозке спермы русского осетра и хранении в течение месяца выживаемость после размораживания составила 25 %; активность 3 балла; количество спермиев с поступательными движениями — 60 % при времени движения — 80 с.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для улучшения рыбово дно-биологических показателей и физиологического состояния производителей осетровых рыб, а также повышения выживаемости потомства рекомендуется проводить подготовку производителей к нересту с использованием препарата цианокобаламина при норме введения 50 мкг/кг массы тела.

2. С целью улучшения физиолого-биохимнческого состояния выращиваемой молоди осетровых рыб рекомендуется проводить обработку икры цианокобаламином перед закладкой на инкубацию в концентрации 1,0 мг/л и экспозиции 45 мин.

4. Для повышения физиологического состояния производителей осетровых рыб разных биологических групп при длительной резервации рекомендуется проводить подготовку к зимнему содержанию (осенью) и к нересту (весной) комплексом витаминов С, Е и В12.

5. С целью сохранения спермы рыб во время криоконсервации в среде Штайна рекомендуется добавлять цианокобаламин в концентрации

0.5 мг/л — для осетровых, 1,0 мг/л — для карповых, 1,0 мг/л — для окуневых.

По теме диссертации опубликованы следующие работы:

1. Храмова A.B., Сорокина М.Н., Чипннов В.Г. Эффективность обработки икры осетровых рыб медицинским препаратом цианокобала-мина (витамина В12). Вестник АГТУ. - 3(26)/2005, май-шонь. - Астрахань: АГТУ,2005.-С. 55-61.

2. Чипннов В.Г., Сырбулов Д.Н., Пономарев C.B., Чипинова Г.М., Храмова A.B. Повторное получение посадочного материала для целей искусственного воспроизводства от самок русского осетра в условиях осетрового рыбоводного завода. Вестник АГТУ. Спец. приложение. -5(28)/2005, сентябрь-октябрь. - Астрахань: АГТУ, 2005. - С. 74-77.

3. Пономарева E.H., Сырбулов Д.Н., Храмова A.B. Использование витаминов для повышения эффективности искусственного воспроизводства осетровых рыб. Аквакультура и интегрированные технологии: проблемы и возможности: Материалы международной научно-практической конференции, посвященной б 0-летию Московской рыбоводно-мелиоративяой опытной станции и 25-летию ее реорганизации в ТСГУ ВНИИР. Сборник научных докладов. Т. 2 - Москва, 11-13 апреля 2005 г. /ГНУ ВНИИ ирригационного рыбоводства — Москва, 2005.— С. 291-296.

4. Пономарева Б.Н., Пономарев C.B., Сорокина М.Н., Храмова A.B. Повышение резистентности осетровых рыб на ранних этапах онтогенеза при использовании витаминных препаратов. // Вестник Южного научного центра Российской академии наук. — М.: Наука. 2005. — Т. 1, вып.

1.-С. 41-44.

5. Букин В.Г., Храмова A.B., Богатырева М.М., Гаврилкин A.B. Использование витаминов прн криоконсервации спермы осетровых рыб // Современные технологии мониторинга и освоение природных ресурсов южных морей России. Тезисы докл. Межд. Семинара (г. Ростов-на-Дону, 15 - 17 июня 2005 г,). Ростов-на-Дону: изд-во ООО «ЦВВР», 2005. - С. 31-33.

6. Храмова A.B., Сырбулов Д.Н., Пузанков И.В. Использование цианокобаламина для повышения выживаемости осетровых рыб. — Первая ежегодная научная конференция студентов и аспирантов базовых кафедр Южного научного центра РАН. Материалы молодежной конференции (Ростов-на-Дону, 15—21 апреля 2005 г.). Ростов-на-Дону: Изд-во ЮНЦ РАН, 2005.-С. 337-339.

7. Пономарева E.H., Сорокина М.Н., Храмова A.B., Богатырева М.М. Использование биологически активных веществ витаминов при криоконсервации спермы осетровых рыб // Повышение эффективности

использования водных биологических ресурсов Мирового океана. Международная научно-практическая конференция: Материалы конференции. - М.: Изд-во ВНИРО, 2005. - С. 139-140.

8. Храмова A.B., Богатырева М.М., Болонина НЗ. Криопротек-торный эффект цианокобаламина при замораживании спермы осетровых рыбУ/ Вторая ежегодная научная конференция студентов и аспирантов базовых кафедр Южного научного центра РАН: Материалы молодежной конференции (Ростов-на-Дону, 5-26 апреля 2006 г.). Ростов-на-Дону: Изд-во ЮНЦ РАН, 2006. - С.44-45.

9. Матншов Г.Г., Матишов Д.Г., Пономарева E.H., Чипинов В.Г., Лужняк В.А., Ковалева A.B. Результаты выращивания донской стерляди в условиях замкнутой системы водообеспечения. — Состояние и перспективы развития фермерского рыбоводства аридной зоны: Тезисы докладов международной научной конференции (г. Азов, шонь 2006 г.) / Отв. Ред. Ак. Г.Г. Матишов. Ростов-на-Дону: Изд-во ЮНЦ РАН, 2006. - С. 7-9.

10. Чипинов В.Г., Коваленко М.В., Храмова A.B. Особенности выбора видов осетровых для выращивания в Y3B и опыт транспортировки молоди при высоких летних температурах.// Вестник АГТУ: Астрахань: Изд-во АГТУ, 2006. С. 59-63.

И. Пономарева E.H., Сорокина М.Н., Храмова A.B., Богатырева М.М., Гаврилкин A.B. Подбор криопротекторов и оптимизация режимов охлаждения спермы русского осетра при криоконсервации. - Вестник КБ ГУ. Биологические науки. Вып. 8 — Нальчик: Каб-Балк. ун-т, 2006. -С 66-69.

Типография АГТУ

414025 г. Астрахань, ул. Татищева 16

Заказ № 875 тираж 100 экземпляров

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Ковалева, Анжелика Вячиславовна

Введение.

Глава I. Литературный обзор.

1.1. Биологически активные вещества в индустриальной аквакультуре.

1.2. Использование витамина Bi2 (цианокобаламина) для улучшения физиологического состояния животных и рыб.

Глава II. Материал и методы исследований.

Глава III. Повышение эффективности нереста осетровых рыб с использованием цианокобаламина при искусственном воспроизводстве.

3.1. Эффективность использования витамина Bj2 для подготовки производителей осетровых рыб к нересту в искусственных условиях.

3.2. Использование витамина Bi2 для повышения резистентности осетровых рыб на ранних этапах онтогенеза.

Глава IV. Результаты применения цианокобаламина в комплексе с витаминами С и Е для повышения репродуктивного качества производителей осетровых рыб.

Глава V. Эффективность сохранения половых клеток рыб при криоконсервации с использованием витамина В12.

5.1. Оценка эффективности использования различных криорастворов при замораживании спермы рыб.

5.2. Применение цианокобаламина на начальных этапах криоконсервации спермы рыб.

5.3. Применение цианокобаламина на этапах глубокого замораживания и хранения спермы осетровых рыб.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Эффективность использования цианокобаламина для повышения резистентности объектов аквакультуры на разных этапах онтогенеза"

Актуальность проблемы. Интенсивное развитие промышленности и сельского хозяйства в прошлом столетии существенно увеличило экологический прессинг на растительные и животные организмы, что возможно характеризовать как «антропогенная катастрофа» (Карнаухов, 1994). Экологическое состояние водных ресурсов планеты близко к критическому или таковым уже является. Последнее относится также к Каспийскому и Азовскому бассейнам. Уникальные запасы ценных видов рыб находятся здесь под влиянием широкого спектра разносторонних воздействий (Иванов и др., 1995 а, б). Особенно в этом плане страдают осетровые рыбы, как наиболее ранимые, легко подверженные действию токсических веществ и мутагенных комплексов. Необходимо отметить, что на фоне общего антропогенного пресса действие токсических веществ занимает ведущее положение, снижая качество производителей и их половых продуктов, вызывая различные отклонения в развитии эмбрионов, личинок и молоди на разных стадиях онтогенеза (Баранникова, 1989, 1992; Vlasenko, 1996; Ходоревская и др., 1997).

Ресурсы морей и океанов не безграничны. Поэтому в последние десятилетия в мире активно развивается аквакультура, т.е. выращивание рыб и других гидробионтов в управляемых условиях (Остроумова, 2001).

Одним из перспективных направлений повышения качества производителей и их потомства на рыбоводных предприятиях является использование биологически активных веществ как естественного, так и искусственного происхождения, обладающих токсикопротекторным и иммуномодулирующим действием на животные организмы, в частности на рыб на различных стадиях развития (Егоров, 1997). В настоящее время применяется несколько групп веществ, повышающих жизнестойкость рыб. Существует метод повышения жизнестойкости лососевых рыб за счет выдерживания их оплодотворенной икры в нарастающих концентрациях хлорида натрия (Павлов,

1980). Другой способ основан на применении смеси антиоксидантов для сохранения в норме окислительно-восстановительного состояния живой ткани ослабленных особей (Чернышев, Тамбиев, 1980). К третьей группе биологически активных веществ можно отнести нейропептиды, повышающие жизнестойкость организма посредством воздействия на нервную систему (Способ стимуляции., 1987). Четвертая группа веществ включает витамины.

Витамины группы В определяют общее состояние здоровья. Если они поступают в достаточном количестве, то организм может жить без животных белков. Когда же их не хватает, остальные витамины теряют большую часть своего значения и действия.

Некоторые витамины не синтезируются в организме или синтезируются в недостаточных количествах и должны поступать извне. Таким витамином является цианокобаламин, или витамин В12. Его основное значение - в антианемическом действии, к тому же он оказывает влияние на процессы обмена веществ. Ранее проводились опыты по использованию цианокобаламина для повышения жизнеспособности эмбрионов и молоди лососевых и карповых рыб, повышения их токсикорезистентности (Глубоков, 1986, 1988; Духовенко, Сергеева, 1996). Его растворимость в воде упрощает приготовление растворов, которые в дальнейшем применяются для обработки икры.

Применение витаминных инъекций цианокобаламина в качестве сильного биологического стимулятора развития позволит улучшить физиологические и рыбоводно-биологические показатели производителей рыб и существенно повысить устойчивость их потомства к неблагоприятным факторам среды на ранних этапах онтогенеза.

Цель и задачи исследований. Целью данной работы явилась оценка действия цианокобаламина на репродуктивные качества производителей осетровых рыб в период нереста, его влияния на жизнестойкость потомства, а также на усиление криопротекторного действия при криоконсервации половых клеток различных видов рыб.

Поставленная цель определила следующие задачи:

- определить оптимальную норму введения цианокобаламина в виде инъекций самкам осетровых рыб в преднерестовый период; определить концентрации цианокобаламина для повышения жизнеспособности эмбрионов при обработке икры осетровых рыб;

- исследовать влияние цианокобаламина на резистентность осетровых рыб в период эмбрионального развития;

- оценить физиологическое состояние молоди осетровых рыб, полученной от икры, обработанной витамином;

- изучить влияние комплекса витаминов С, Е и В)2 на производителей осетровых рыб разных биологических групп;

- оценить криопротекторный эффект при добавлении цианокобаламина в среды для криоконсервации половых клеток различных видов рыб.

Научная новизна. Впервые научно обоснована целесообразность и эффективность использования цианокобаламина для инъецирования осетровых рыб в преднерестовый период, повышения жизнеспособности икры осетровых при ее обработке, а также в качестве криопротектора в средах при криоконсервации спермы различных видов рыб. В результате проведенных исследований впервые определены нормы введения цианокобаламина в виде инъекций в период преднерестового содержания производителей русского осетра, севрюги и стерляди. Установлено, что введение витамина позволяет повысить процент созревания самок, оплодотворения икры, выход свободных эмбрионов. Впервые показано положительное влияние обработки икры цианокобаламином на резистентность личинок и молоди осетровых рыб.

Практическая значимость. Предложено использовать препарат цианокобаламина в рыбоводстве при инъецировании производителей во время подготовки к нересту. Кроме того, даны рекомендации по обработке икры осетровых рыб с целью повышения выживаемости потомства на ранних этапах развития. Разработана методика использования цианокобаламина для усиления криопротекторного действия криосред при криоконсервации половых клеток осетровых, карповых и окуневых рыб.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Нормы введения витамина В!2 для производителей осетровых рыб.

2. Методы обработки икры осетровых рыб цианокобаламином.

3. Нормы введения В12 для усиления криопротекторного действия.

Апробация работы. Основные материалы диссертационной работы докладывались на научно-технической конференции профессорско-преподавательского состава АГТУ, 2004; Международной научной конференции АГТУ-75, 2005; Международном Семинаре «Современные технологии мониторинга и освоение природных ресурсов южных морей России», г. Ростов-на-Дону, 2005; Международной научно-практической конференции, посвященной 60-летию Московской рыбоводно-мелиоративной опытной станции и 25-летию ее реорганизации в ГНУ ВНИИР, Москва, 2005; Международной научно-практической конференции «Повышение эффективности использования водных биологических ресурсов Мирового океана», Москва, 2005; Первой научной конференции студентов и аспирантов базовых кафедр Южного научного центра РАН, Ростов-на-Дону, 2005; Второй ежегодной научной конференции студентов и аспирантов базовых кафедр Южного научного центра РАН, Ростов-на-Дону, 2006; Международной научной конференции «Состояние и перспективы развития фермерского рыбоводства аридной зоны», г. Азов, 2006.

Диссертационная работа выполнена в рамках Программы фундаментальных исследований ОНЗ РАН «Развитие технологий мониторинга, экосистемное моделирование и прогнозирование при изучении природных ресурсов в условиях аридного климата», темы управления «Севкаспрыбвод» «Разработка методов длительного хранения половых продуктов ценных видов осетровых рыб для дальнейшего применения с целью воспроизводства и формирования маточных стад на осетровых заводах Нижней Волги».

Публикации. По теме диссертации опубликовано 11 работ.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 132 страницах машинописного текста. Состоит из введения, пяти глав, заключения, выводов, практических рекомендаций, приложения. Список литературы содержит 242 источника, из них 50 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 13 рисунками и 35 таблицами.

Заключение Диссертация по теме "Ихтиология", Ковалева, Анжелика Вячиславовна

выводы

1. Установлено, что введение цианокобаламина в период преднерестового содержания улучшает рыбоводно-биологические показатели самок осетровых рыб. Норма введения витамина В12 составляет 50 мкг/кг массы тела, что способствует повышению созревания самок на 10 - 40 % и увеличивает процент оплодотворения на 18 %, выхода эмбрионов на 20 %.

2. Выявлено, что оптимальной дозой препарата цианокобаламина для обработки икры осетровых рыб является 1 мг/л при длительности обработки 45 мин. Это позволяет снизить гибель эмбрионов на критических этапах развития на 5,4 %, количество уродливых эмбрионов и личинок - на 8,1 %, при повышении процента выхода свободных эмбрионов. Икра, обработанная витамином В12, отличалась от контрольной группы более высоким содержанием протеина (на 5,7 %) и жира (на 3 %).

3. Определено, что молодь, полученная от икры, обработанной цианокобаламином, имела лучшие показатели роста и выживаемости, прирост массы тела на 14% выше, чем в контроле. Содержание белка в теле молоди составило 67,7 % (на 2,7 % выше показателя в контроле), концентрация гемоглобина в крови - 74 г/л, что свидетельствовало о хорошем физиологическом состоянии.

4. Введение цианокобаламина в комплексе с витаминами С и Е производителям осетровых рыб повысило их репродуктивные качества при длительной резервации, что позволило увеличить процент оплодотворения икры русского осетра на 2 - 4 %, севрюги - на 3 %; стерляди - на 5 %, концентрацию спермы самцов (на 0,05 - 0,25 млн./мм3) и продолжительность поступательного движения спермиев (на 20 - 50 сек), в сравнении с контрольной группой.

5. Показано, что введение цианокобаламина в концентрации 0,5 мг/л в криозащитную среду на начальных этапах криоконсервации спермы русского осетра повышает выживаемость и время подвижного состояния спермиев на 31,9 % и 50,8 сек, соответственно. Концентрация 1 мг/л цианокобаламина в криосреде способствует увеличению выживаемости спермы белого толстолобика - на 55 %, окуня - на 3 %, времени движения спермиев - на 15 и 5 сек, соответственно. При глубокой заморозке спермы русского осетра и хранении в течение месяца выживаемость после размораживания составила 25 %; активность 3 балла; количество спермиев с поступательными движениями -60 % при времени движения - 80 с.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для улучшения рыбоводно-биологических показателей и физиологического состояния производителей осетровых рыб, а также повышения выживаемости потомства рекомендуется проводить подготовку производителей к нересту с использованием препарата цианокобаламина при норме введения 50 мкг/кг массы тела.

2. С целью улучшения физиолого-биохимического состояния выращиваемой молоди осетровых рыб рекомендуется проводить обработку икры цианокобаламином перед закладкой на инкубацию в концентрации 1,0 мг/л и экспозиции 45 мин.

4. Для повышения физиологического состояния производителей осетровых рыб разных биологических групп при длительной резервации рекомендуется проводить подготовку к зимнему содержанию (октябрь-ноябрь) и к нересту (апрель) комплексом витаминов С, Е и В п.

5. С целью сохранения спермы рыб во время криоконсервации в среде Штайна рекомендуется добавлять цианокобаламин в концентрации 0,5 мг/л -для осетровых, 1,0 мг/л - для карповых, 1,0 мг/л - для окуневых.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Ковалева, Анжелика Вячиславовна, Астрахань

1. Абтахи Б. Возможности использования биологически активных веществ для защиты зародышей и личинок осетровых от токсических поражений // Тез. ХХХХ научн.-техн. конф. проф. преп. сост. АГТУ. -Астрахань, 1996. С. 84-85.'

2. Акимова Н.В., Рубан Г.И. Систематизация нарушений воспроизводства осетровых (Acipenseridae) при антропогенном воздействии // Тез. докл. I конгресса ихтиологов России, Астрахань, сент. 1997 г. М.: Изд-во ВНИРО, 1997.-С. 138.

3. Альметов Р.Х., Тихомиров A.M. Влияние искусственных кормов разного состава и биологически активных добавок на рост и поведенческие реакции молоди русского осетра // Тез. Межрег. конф. сов. «Каспий -настоящее и будущее». - Астрахань, 1995. - С. 151-152.

4. Ананьев В.И., Андреев А.А., Голованова Т.С. Опыт криоконсервации спермы белорыбицы и белуги // Рыбн. хоз-во. Сер. Аквакультура: Информпакет /ВНИЭРХ, 1998 а. Вып. 1. С. 25-32.

5. XXI века», Астрахань, 24 25 марта 1999: Тез. докл. - Астрахань, 1999. - С. 64 -67.

6. Андреев А.А. Криоконсервация спермы белорыбицы и белуги: Матер, рабоч. совещ. «Криоконсервация генетических ресурсов». Пущино, 1996.-С. 96-98.

7. Арешкина Л.Я. Витамин В12 в животном организме. М.: Высш. Школа, 1976.-146 с.

8. Афонский С.И. Биохимия животных. М: Высш. Школа, 1970. - 612с.

9. Ахрем А.Л., Кузнецова А И. Тонкослойная хроматография. М., 1965.- 175 с.

10. Багров A.M., Виноградов В.К. Осетровое хозяйство России: проблемы и перспективы // Ресурсосберегающие технологии в аквакультуре: Мат-лы докл. Международной конференции. Краснодар, 1999. - С. 12-13.

11. Багров A.M., Виноградов В.К., Мельченков Е.А. Аквакультура России: состояние и перспективы // Сб. мат-лов совещания «Воспроизводство рыбных запасов» в Ростове-на-Дону, 2000 а. С. 161-170.

12. Багров A.M., Цветкова Л.И., Докина О.Б., Пронина Н.Д., Миленко В.А. Криоконсервация спермы веслоноса // Вестник РАСН. 2000 б. № 4. - С. 44-47.

13. Баранникова И.А. Об основных направлениях осетрового хозяйства в СССР // Осетровое хозяйство водоёмов СССР: Краткие тез. научн. докл. к предстоящему Всес. Совещанию / ноябрь 1989 г./ Астрахань, 1989. - С. 2223.

14. Баранникова И.А. К проблеме сохранения осетровых каспийского бассейна // Биологические ресурсы Каспийского моря: Тез. докл. первой международной конф., сент. 1992 г. Астрахань, 1992. - С. 33-36.

15. Бергер В.Я. Влияние дибазола и витамина Bi2 на приспособление личинок сцифомедузы Aurelia aurita к понижению солености среды // Биология моря. 1977. - Т.5. - № I. - С. 48-54.

16. Березовский В.М. Химия витаминов. Изд. 2-е, перераб и доп. - М.: Пищ. пром-ть, 1973. - 632 с.

17. Биохимия мембран: Уч. пособие для биологических и медицинских специальностей вузов / Под ред. А.А. Болдырева. Кн.З. A.M. Белоус, Е.А. Гордиенко, Л.Ф. Розанов. Замораживание и криопротекция. М.: Высш. Школа, 1987.-80 с.

18. Бобрик А.О. Использование брассиностероидов в семеноводстве картофеля. IV конференция Брассиностероиды биорациональные, экологически безопасные регуляторы роста и продуктивности растений. Тез. докл. - Минск, 1995. - С. 23.

19. Бурцев И.А. Получение потомства от межродового гибрида белуги со стерлядью // Генетика, селекция и гибридизация рыб. М.: Наука, 1969. - с. 232-242.

20. Васильева JI.M. Биологические и технологические особенности товарной аквакультуры осетровых в условиях Нижнего Поволжья. Астрахань: Нова, 2000. - 190 с.

21. Вассель С.С. Оценка рыбоводного качества икры бестера. Научные подходы к решению проблем производства продуктов питания: Межвузовский сборник научных трудов. Ростов н/Д: Рост, ун-т, 2004. - С. 118-121.

22. Ващенко А.С., Дума В.В. Повышение эффективности кормления карпа под влиянием ростостимулирующих добавок. Сб. науч. тр. ВНИИПРХ. Вып. 49. Биологические основы рационального кормления рыбы. - М.: ВНИИПРХ, 1986.-с. 74-81.

23. Вепринцев Б.Н., Ротт Н.Н. Проблема сохранения генофонда. Сер. Консервация генетических ресурсов. Пущино: ИБК РАН. - 1984. - 48 с.

24. Вепринцев Б.Н., Пилиев С.А. Сохранить генофонд рыб и водных беспозвоночных // Рыбн. хоз-во. М., 1989. № 6. - С. 29-32.

25. Вийо А. и др. Интенсивное выращивание сибирского осетра (A.baeri) в бассейне // Aqua Revue. 1998. № 17. - С. 29-33.

26. Виноградов В.К., Ерохина Л.В. Применение кобальта при выращивании сеголеток карпа. Труды ВНИИПРХ. Вопросы прудового рыбоводства. - 1962, т. XI. - С. 18-26.

27. Витаминное питание сельскохозяйственных животных. М.: Агропромиздат, 1989.-71 с.

28. Витамины / Под ред. М.И. Смирнова. М.: Агропромиздат, 1974.264 с.

29. Витвицкая JI.B., Бикбулатова Л.С., Никоноров С.И. и др. Влияние синтетических нейропептидов на поведение и синтез РНК в мозге молоди севрюги // Доклады АН СССР, 1987. т. 297, №2. - С. 488-491.

30. Витвицкая JI.B., Егоров М.А. Антитерратогенный эффект биологически активных веществ и перспективы их применения в осетроводстве // Тез. докл. ХХХХ научн.-техн. конф. преп. сост. АГТУ. Астрахань, 1996. -С. 81-82.

31. Войнар А.И. Микроэлементы в живой природе. М.: Высшая школа, 1962.-94 с.

32. Воробьева Л.И. Пропионовокислые бактерии и образование витамина В12. М.: Изд-во Моск. ун-та, 1976. - 264 с.

33. Воробьева Л.И. Микробиологический синтез витаминов. М.: Изд-во МГУ, 1982.- 168 с.

34. Гаевый М.Д. Фармакотерапия с основами клинической фармакологии. Волгоград, 1996. - 452 с.

35. Георгиевский В.И. Минеральное питание сельскохозяйственной птицы. М.: Колос, 1970. - 328 с.

36. Глубоков А.И. Способ повышения жизнестойкости икры и личинок рыб // БИ, 1986. № 26. - Авт. свидет. № 1243667.

37. Глубоков А.И. Витамин В.2 как препарат для повышения жизнестойкости рыб в периоды раннего онтогенеза // Водная токсикология и оптимизация биопродукционных процессов в аквакультуре. М.: ВНИРО, 1988.-С. 130-138.

38. Глубоков А.И. Биологически активные вещества и факторы в аквакультуре: Сб. науч. тр. М.: ВНИРО, 1993. - 210 с.

39. Головина Н.А. Использование гематологических показателей для оценки физиологического состояния организма рыб: Мат-лы Первого Росс.-Амер. симп. «Аквакультура и здоровье». М., 1998. - С. 137-138.

40. Головина Н.А., Тромбицкий И.Д. Гематология прудовых рыб. -Кишинев: Штиинца, 1989. 156 с.

41. Голодец Г.Г. Лабораторный практикум по физиологии рыб / Под ред. Н.В. Пучкова. М.: Пищ. пром-ть, 1974. - 91 с.

42. Гутиева З.А., Шахмуразов М.М., Шестерин И.С. Изучение влияния биологически активных веществ на выживаемость молоди карпа // Вестник КБГУ. Сер. Биологические науки. Вып. 5. - Нальчик: Каб.-Балк. ун-т, 2002. -С. 36-38.

43. Детлаф Т.А., Гинзбург А.С. Зародышевое развитие осетровых рыб (севрюги, осетра и белуги) в связи с вопросами их разведения. М.: АН СССР, 1981.-216с.

44. Детлаф Т.А., Гинзбург А.С., Шмальгаузен О.И. Развитие осетровых рыб (Созревание яиц, оплодотворение, развитие зародышей и предличинок). -М.: Наука, 1981.-234 с.

45. Долгачева И.М., Александров А.А., Пышный Ю.Ю., Елисеева С.П.

46. Опыт применения тиаминовых ванн на ранних этапах развития лососевых рыб // Рыбное хозяйство. Инф. Пакет. Сер. Болезни гидробионтов в аквакультуре. -М.: 2000. №1.-С. 26-27.

47. Дудкин С.И. Механизмы поддержания жирнокислотного состава фосфолипидов в эмбриогенезе у русского осетра // 8 науч. конф. по экол. физиол. и биохим. рыб: Тез. докл. Всес. совещ., 19-21 дек. М.: ВНИИПРХ, 1985.-С. 30-31.

48. Дума В.В. Повышение эффективности выращивания товарной форели путем использования гормональных препаратов. Сб. науч. тр. Вопросы промышленного рыбоводства. - 1982. вып. 34. - М.: ВНИИПРХ. - С. 128-136.

49. Дума В.В. Повышение эффективности выращивания радужной форели путем использования гормональных препаратов: Автореф. дис. . канд. биол. наук. М., 1985.-24 с.

50. Дума В.В. Эффективность ростостимулирующих добавок в кормлении радужной форели. Сб. науч. тр. ВНИИПРХ. Вып. 49. Биологические основы рационального кормления рыбы. - М.: ВНИИПРХ, 1986. - С. 158-162.

51. Дюга Герман, Пенни К. Биоорганическая химия: Химические подходы к механизму действия ферментов / пер. с англ. Е.Ю. Крынецкого, B.JI. Друцы; Под ред. Ю.А. Овчинникова-М.: Мир, 1983.-512 с.

52. Егоров М.А. Антитерратогенное воздействие некоторых биологически активных веществ в условиях осетровых рыбоводных заводов // I конгресс ихтиологов России. Тезисы докладов. М.: Изд-во ВНИРО, 1997. - С. 310.

53. Егоров М.А. Организация криобанка генофонда ценной флоры и фауны юга России // Современные наукоемкие технологии. М., 2004. № 1. -С. 54-55.

54. Егоров М.А. О концепции деятельности Каспийского криобанка // Мат. VIII междунар. науч. конф., 11-12 октября 2005. Астрахань: Изд. дом «Астраханский университет», 2005. - С. 74-75.

55. Емелина Н.Г., Крылова B.C., Петрухова Е.А., Бромлей Н.В. Витамины в кормлении сельскохозяйственных животных и птиц. М.: Колос, 1970. - 310 с.

56. Желтоножко О.В. Криоконсервация и создание низкотемпературного банка спермы лососей Дальнего Востока // Автореф. дисс. .канд. биол. наук: 03.00.10. Лесные Поляны, Моск. обл. 1997. 24 с.

57. Иванов В.П. Биологические ресурсы Каспийского моря. -Астрахань, 2000.- 100 с.

58. Иванов В.П., Беляев В.Н., Власенко А.Д. Региональное распределение промысловых ресурсов Каспийского моря // Рыбное хозяйство-1995 а.№2 С. 18-21.

59. Иванов В.П., Власенко А.Д, Ходоревская Р.П. Пути сохранения осетровых // Рыбное хозяйство. 1995 б. № 2, - С.24-26.

60. Иванова Н.Н. Атлас клеток крови. М , 1982. - 260 с.

61. Инструкция по применению энкада (Епсаит). Утверждено фармакологическим комитетом 22 апреля 1992 г. вместо инструкции от 22 февраля 1989 г. Министерство здравоохранения РФ. 1992.

62. Камоликова Л.И., Кокоза А.А. Рыбоводно-биологические показатели качества производителей осетровых, используемых на ОРЗ Нижней Волги // Тез. докл. I конгресса ихтиологов России, Астрахань, сент. 1997 г. -М.: Изд-во ВНИРО, 1997. С. 424.

63. Канидьев А. Н., Гамыгин Е. А. Инструкция по кормлению рыб гранулированными кормами, выпускаемыми предприятиями Минрыбхоза СССР. М.: ВНИИПРХ, 1986. - 30 с.

64. Каранова М.В., Цветкова Л.И. Криопротективные свойства антифризных гликопротеинов при замораживании спермы рыб // Известия

65. Академии наук, сер. Биол. 1994. № 5. - С. 818-827.

66. Карнаухов В.Н. Проблемы и перспективы создания генетических криобанков для целей сохранения биоразнообразия // Криоконсервация генетических ресурсов в проблеме сохранения биоразнообразия. Биофизика живой клетки. Т. 6. - Изд.: Пущино, 1994. - С. 1-5.

67. Катасонов В.Я., Пилиев С.А., Копейка Е.Ф. Коллекционный банк криоконсервированной спермы рыб // Рыб. хоз-во. 1988. № 6. - С. 66-68.

68. Катасонов В.Я., Цветкова Л.И., Ананьев В.И. Генетическая коллекция спермы рыб // Рыбоводство и рыболовство. 1994 а. № 1. - С. 34.

69. Катасонов В.Я., Цветкова Л.И., Ананьев В.И. Формирование генетической коллекции спермы рыб в низкотемпературном банке // Рыбное хоз-во. Сер. Аквакультура: Информ. пакет / ВНИЭРХ. Консервация генетические ресурсов. М., 1994 б. Вып. I. - С. 14-16.

70. Клуша В.Е. Пептиды регуляторы функций мозга. - Рига: Знание, 1984.- 181 с.

71. Князева Л.М. Рекомендации по увеличению срока хранения гранулированных кормов для форели, путем опрыскивания ее водным раствором витамина С. Л.: ГосНИОРХ, 1979 а. - 12 с.

72. Князева Л.М. Влияние обогащения диеты витаминами Е и С на физиологические изменения в организме рыб при С-витаминной недостаточности: Тез. докл. Всесоюзн. конф. по экологической физиологии и биохимии рыб. Астрахань, 1979 б. - С. 171-172.

73. Кокоза А.А. Состояние искусственного воспроизводства осетровых в Волго-каспийском регионе и меры по его интенсификации: Автореф. дис. . д-ра биол. наук. М., 2002. 56 с.

74. Колотилова А.И., Глушанков Е.А. Витамины. Химия, биология, физиологическая роль. Л.: Ленинградский университет, 1976. - 247 с.

75. Коморкин Н.А. Эффективность введения витаминов Е и А в рацион сеголеток карпа при переводе их из режима высоких температур в режим зимовки в условиях индустриального тепловодного рыбоводства // Сб. науч.трудов ГосНИОРХ. 1993. Вып. 324. - С. 103-110.

76. Коморкин Н.А. Изменение содержания витаминов Е и А в печени сеголеток карпа под действием гипотермии. // Экол. физиология и биохимия рыб: Тез. докл. IX Всерос. конф. Ярославль, 2000. - С. 132-133.

77. Копейка Е.Ф. Инструкция по низкотемпературному консервированию спермы карпа. М.: ВНИИПРХ, 1986. - 11 с.

78. Копейка Е.Ф., Белоус A.M., Пушкарь Н.С. Криоконсервация спермы рыб // Криоконсервация клеточных суспензий. Киев: Наукова Думка, 1981. -С. 204-216.

79. Кривобок М.Н., Сторожук А.Я. Влияние размеров и возраста самок волжского осетра на вес и химический состав зрелых икринок // Вопр. ихтиологии. 1970. - Т. 10. Вып.6 - С. 1012-1017.

80. Кривобокова С.С. Дороти Кроуфот-Ходжкин // ЖВХО им. Д.И. Менделеева. 1975. № 6. - С. 686-687.

81. Купинский С.В., Баранов С.А., Резников В.Ф. Радужная форель -предварительные параметры стандартной модели массонакопления: Индустриальное рыбоводство в замкнутых системах. Сб. науч. тр. ВНИИПРХ. 1985. Вып. 46.-С. 109-115.

82. Лакин Г.Ф. Биометрия. М.: Высшая школа, 1990. - 293 с.

83. Лепилина И.Н. Нарушения в раннем онтогенезе осетровых: Тез. докл. V Всесоюз. конф. по раннему онтогенезу рыб, 1-3 окт., 1991 г., Астрахань. М., 1993. - С. 161-162.

84. Лиманский В.В. Некоторые физиологические показатели карпов и линей при садковом содержании. Сб. науч. трудов ВНИИПРХа, 1978. - Вып. 12.-С. 255-266.

85. Лиманский В.В., Яржомбек А.А., Бекина Е.Н., Андронников С.Б. Инструкция по физиолого-биохимическим анализам рыбы. М.: ВНИИПРХ, 1986.-52 с.

86. Лоу К. Все о витаминах (Пер. с англ.). М.: КРОН-ПРЕСС, 2000.457 с.

87. Макаров Э.В. Проблемы сохранения и восстановления популяций осетровых и перспективы развития осетроводства в Азовском бассейне; Автореф. дис. д-ра биол. наук. М., 2000. 69 с.

88. Маликова Е.М. К разработке метода ускоренного выращивания на рыбоводных заводах молоди лосося до покатной стадии. Рыбохоз. исслед. в бассейне Балт. моря. - Рига: Звайгзне, 1967. - Вып. 3. - С. 146-193.

89. Маляревская А.Я. Биохимические механизмы интоксикации гидробионтов // Экспериментальная токсикология. Рига: Зинатне, 1985. -Вып. 10.-С. 15-19.

90. Матусис А.А. Связанная форма аскорбиновой кислоты. Аскорбиген в тканях животных // Биол. эксперименты в биологии и медицине. 1945. - С. 66.

91. Машковский М.Д. Лекарственные средства. В двух томах. Т. 2. -Изд. 13-е. Харьков: Торсинг, 1998. - 592 с.

92. Минделл Э. Справочник по витаминам и минеральным веществам. -М.: Медицина и питание, 1997.-310 с.

93. Мирзоян А.В., Небесихина Н.А., Войнова Н.В., Чистяков В.А. Аскорбиновая кислота и лизин подавляют генотоксический эффект глубокой заморозки спермы русского осетра // Цитология. Т. 46, № 9. - Санкт-Петербург: Наука, 2004 б. - С. 821-822.

94. Морозкина Т.С. Питание для здоровья и во вред. Л.: Медицина,1991.- 176 с.

95. Мосолов В.В. Протеолитические ферменты. М.: Наука, 1971. - С. t 239-254,

96. Овчинников Ю.А. Биоорганическая химия. М.: Просвещение, 1987.-815 с.

97. Осетров B.C. Справочник по болезням рыб, М.: Наука, 1978. 275с.

98. Осетров B.C. Болезни рыб: Справочник/ Г.В. Васильков, Л.И. Грищенко, В.Г. Енашев и др.; Под ред. B.C. Осетрова. М.: Наука, 1989. - 236с.

99. Остроумова И.Н. Первые отечественные гранулированные корма . для форели // Рыбное хозяйство. 1973. № 5. - С. 25-27.

100. Остроумова И.Н. Выращивание личинок, сеголетков и двухлетков радужной форели на сухих гранулированных кормах // Тр. ГосНИОРХ. -1974. -Т.9.-С. 42-53.

101. Остроумова И.Н. Биологические основы кормления рыб. С-Пб., 2001.-272 с.

102. Павлов Д.А. Способ инкубации лососевых рыб // БИ, 1980. № I. -Авт. свидет. № 707555.

103. Перевозников М.А., Богданова Е.А. Тяжелые металлы вкпресноводных экосистемах. С-Пб.: Изд-во ГосНИОРХ, 1999. - 26 с.

104. Персов Г.М. Дозирование спермиев как способ управления оплодотворением яйцеклеток осетровых: Докл. АН СССР. 1953. - Т. 90, № 6.u -С. 1183-1185.

105. Подушка С.Б. Способ получения икры от самок осетровых рыб. Автор, свид. СССР № 1412035 1986.

106. Познанская А.А. Витамины. М.: Пищ. пром-ть, 1974. - 351 с.

107. Пономарев С.В., Гамыгин Е.А., Никоноров С.И., Пономарева Е.Н., Грозеску Ю.Н., Бахарева А.А. Технологии выращивания и кормления объектов аквакультуры юга России (справочное, учебное пособие). Астрахань: «Нова плюс», 2002. - 264 с.

108. Пономарев С.В., Пономарева Е.Н. Технологические основы разведения и кормления лососевых рыб в индустриальных условиях: Моногр. -Астрахань: Изд-во АГТУ, 2003. 187 с.

109. Пономарева Е.Н. Оптимизация методов выращивания объектовиндустриальной аквакультуры на ранних этапах онтогенеза. Автореф. дис. .докт. биол. наук. М., 2003.- 50 с.

110. Популярная библиотека химических элементов. М.: Наука, 1977.

111. Правдин П.Ф. Руководство по изучению рыб. М.: Пищ. пром-ть, 1966.-250 с.

112. Привольнев Т.И. Методы изучения развития рыб // Жизнь пресноводных вод. Л., 1959. - Т. 4, ч. 2. - С. 176 - 197.

113. Протопопов Г.А., Михкиева B.C., Шустов Ю.А., Шуров И.Л., Коренев О.Н. Средство для лечения некроза плавников рыб. Патент №2013949 от 15.06.94.-1994.

114. Раденко В.Н. Использование стойких к разрушению заменителей аскорбиновой кислоты в комбикормах для рыб // Рыбное хозяйство. Сер. Аквакультура. Инф. пакет Корма и кормление рыб М., 1997. - С. 11-14.

115. Распопов В.М. Оценка естественного воспроизводства русского осетра в Волге // Экология молоди и проблемы воспроизводства каспийских рыб: Сб. науч. тр. М.: ВНИРО, 2001. - С. 238-246.

116. Ребров В.Г., Громова О.А. Витамины и микроэлементы. М.: АЛЕВ-В, 2003.-538 с.

117. Резников В.Ф., Баранов С.А., Стариков Е.А., Толчинский Г.И. Стандартная модель массонакопления рыбы: Механизация и автоматизация рыбоводства и рыболовства во внутренних водоемах: Сб. научн. тр. ВНИИПРХ, 1978, вып. 22.-С. 182-196.

118. Романенко В.Д., Евтушенко Н.Ю., Желтов Ю.А. Методические рекомендации по применению и технологии обогащения искусственных гранулированных комбикормов для рыб витаминно-минеральными премиксами. Киев: Наукова думка, 1982. - 15 с.

119. Рясина Т.В., Коршунова Т.С., Кошалев В.Б. и др. Производные нуклеиновых кислот и устойчивость мозга к гипоксии при экспериментальном инсульте.// Человек и лекарство. Тез. Всеросс. симпоз. М., 1992.

120. Сапего В.И. Биологические стимуляторы роста и развития сельскохозяйственных животных. Минск, 1981.-С. 1-50.

121. Сеничкина И.Э. Сезонная динамика содержания аскорбиновой кислоты в органах русского осетра // Экологическая физиология и биохимия осетровых рыб: Мат. Межд. симп., Борок, май, 1997. Ярославль, 1997. - С. 113-114.

122. Сергеева Н.Т. Биохимия витаминов и минеральных элементов. -Калининград: Калининград, гос. техн. ун-т, 1998. 122 с.

123. Скляров В.Я и др. Справочник по кормлению рыб / Скляров В.Я., Гамыгин Е.А., Рыжков Л.П. М.: Легкая и пищевая пром-ть, 1984. - 120 с.

124. Скрипник Д.С. Влияние витаминов на рост и физиологическое состояние молоди осетровых рыб при промышленном выращивании. Автореф. дисс.канд. биол. наук. Краснодар: КУБГАУ, 1997.-23 с.

125. Скурихин И.М. Как правильно питаться. М.: Аспект Пресс, 1987. -421 с.

126. Смоляр В.И. Рациональное питание. JL: Медицина, 1991. - 258 с.

127. Соколовский В.В., Давлетов Э.Г. О механизме гемолитического действия тяжелых металлов // Цитология. 1974. Т. 16, № 5. - С. 648-650.

128. Сорвачев К.Ф. Основы биохимии питания рыб. М.: Легкая и пищ. пром-ть, 1982.-247 с.

129. Сорокина М.Н. Эффективность использования а-токоферола и аскорбиновой кислоты при подготовке самок осетровых рыб к нересту: Автореф. дисс. к-та биол. наук. Астрахань, 2004. 24 с.

130. Способ стимуляции физиологических процессов у рыб на ранних стадиях развития / И. А. Шеханова, Е.В. Микодина, Н.Г. Сторожу к, М.А. Седова, Е.Н. Широкова // БИ, 1987. № 4. - Авт. свидет. № 1286138.

131. Такэмацу Тэцуо. Биологические основы и практическое применение эпибрассинолида. М., 1988. - 4 с.

132. Терруан Т. Взаимодействие витаминов. Пер. с франц. К.Л. Повалоцкой. Под ред. и предисл. чл.-кор. АН СССР В.Н. Букина. М.: Мир, 1969.-372 с.

133. Титарев Е.Ф. Опыт применения витаминных добавок в кормах для двухлетков радужной форели // Тр. ВНИИПРХ: Новые формы и новые объекты рыбоводства. М., 1973. - С. 68-73.

134. Труфанов А.В. Биохимия витаминов и антивитаминов. М.: Колос,1972.-165 с.

135. Угарова Т.Ю. Семейное овощеводство на узких грядах. Самара: f 1994.-160 с.

136. Факторович К.А. Опыт оценки некоторых диет для лосося по данным гистологического анализа печени // Изв. ГосНИОРХ. 1961. - Т. 51. -С. 37-46.

137. Хилл Х.А.О. Неорганическая биохимия, пер. с англ. М.: Наука, 1978,т. 2.-С. 523-598.

138. Химическая энциклопедия. М.: Советская энциклопедия, 1988.663 с.

139. Хохлов А.С., Овчинников Ю.А. Химические регуляторы биологических процессов. М.: Знание, 1969. - С. 1-142.

140. Хрипач В.А., Лахвич Ф.А.,Жабинский В.Н. Брассиностероиды. -М.: Наука и техника, 1993. 287 с.

141. Цветкова Л.И. Создание низкотемпературнйо коллекции спермы рыб // Проблемы репродуктивной биологии в трудах профессора С.И. Кулаева и его последователей. М.: Изд-во Моск. ун-та, 1998. - С. 326-330.

142. Цветкова Л.И., Каранова М.В. Криопротективный эффект низкомолекулярных и высокомолекулярных антифризных гликопротеинов из крови трески Gadus morhua // Биофизика живой клетки. 1994. №6. - С. 77-80.

143. Цветкова Л.И., Титарева Л.Н., Кочетов А.А. О некоторых факторах, влияющих на криоустойчивость спермы карпа Cyprinus carpio // Вопр. ихтиологии, 1995. Т. 35, № 6. - С. 804 - 810.

144. Цветкова Л.И., Пронина Н.Д., Савушкина С.И., Докина О.Б. Использование метода низкотемпературной консервации спермы объектов аквакультуры // Рыб. хоз-во. Сер. Аквакультура: Информ. пакет ВНИЭРХ.

145. Современная аквакультура: проблемы образования и освоения новейших технологий. М., 1997 а. - Вып. I. - С. 77-79.

146. Цветкова Л.И., Савушкина С.И., Титарева Л.Н., Докина О.Б., Пронина Н.Д. Методическое пособие по криоконсервации спермы карпа, лососевых и осетровых видов рыб. М.: ВНИИПРХ, 1997 б. - 11 с.

147. Цирульская З.И., Люкшина В.Д. Включение в корма микроэлементов для улучшения роста рыб. Сб. науч. трудов ГосНИОРХ, 1981. Вып. 176.-С. 151-154.

148. Чаговец Р.В., Лахно Е.В., Халмурадов А.Г. Вопросы происхождения коферментных витаминов: Вопросы эволюционной сравнительной витаминологии. Киев, 1968. - С. 31.

149. Черногорцев А.П. Переработка мелкой рыбы на основе ферментированного сырья. -М.: Пищ. пром-ть, 1972. 151 с.

150. Чернышов В.И., Тамбиев А.Х. Способ повышения жизнестойкости оплодотворенной икры рыб // БИ, 1980. № 12. Авт. свидет. № 789062.

151. Шабалина А.А. Влияние хлористого кобальта на развитие и рост радужной форели (Salmo irideus Gib.). Изв. ГосНИОРХ, 1964. - Т. 58. - С. 139-149.

152. Шабалина А.А. Действие хлористого кобальта на физиологические показатели радужной форели (Salmo irideus Gib.). Вопр. ихтиологии, 1968 а, т. 8, вып. 5.-С. 931-938.

153. Шабалина А.А. К вопросу о применении хлористого кобальта в прудовом рыбоводстве. Рыбохоз. изучение внутр. водоемов, 1968 б, № 1. - С. 40-42.

154. Шевелуха B.C., Дегтярёв С.В., Артамонова Г.М. и др. Сельскохозяйственная биотехнология. -М.: Изд-во МСХА, 1995. 310 с.

155. Шестеренко А.Е., Стецюк Э.А. Освоение теплых вод энергетических объектов для интенсификации рыболовства. Киев: Наукова Думка, 1968.-С. 70-72.

156. Шестерин И.С., Ильин А.И. Методические указания по улучшению качества водной среды, повышению продуктивных качеств производителей и выживаемости молоди рыб. М.: ВНИИПР, 1999 б. - 11 с.

157. Шилов П.И., Яковлев Т.Н. Основы клинической витаминологии. -Л.: Медицина, 1974. 293 с.

158. Штайн Г. Криоконсервация гамет рыб // Проблемы криобиологии. -1991. №3.-С. 42-45.

159. Щербина М.А. Методические указания по физиологической оценке питательной ценности кормов для рыб. М.: ВНИИПРХ, 1983. - 83 с.

160. Юрченко Т.Н. Влияние криопротекторов на биологические системы. Киев: Наукова Думка, 1989. - 98 с.

161. Яржомбек А.А., Шмаков Н.Ф., Лиманский В.В., Бекина Е.Н. Временные рекомендации по определению физиологического состояния рыб по физиолого-биохимическим данным. М.: Агропромиздат, 1981. - 54 с.

162. Яржомбек А.А., Лиманский В.В., Щербина Т.В. Справочник по физиологии рыб. -М: Агропромиздат, 1986. 192 с.

163. Abeles R.H., Dolphin D. The vitamin Bj2 coenzyme: Acc. Chem. Res. 9. 1974.-114-120.

164. Agrawal N. K., Juneja G.J., Mahajan C. E.Protektive role of asorbik asid in fishes exposed to organochlorine pollution // Toxicology. 1978. - Vol.11, № 4. -P. 269-375.

165. Amcoff Patrik. The role of thiamine in Baltic salmon developing the M74-syndrome // Acta univ. agr. Sueciae. Vet. 2000. № 77. - P. 1-44.

166. Barrington E.T.W., Barron N., Piggins D.T. The influence of powder and thyroxine upon the growth of rainbow trout (Salmo gairdneri). Gen. Сотр. Endocrinol. - 1961. №1, P. 170-178.

167. Beckwith B.E., Sandman C.A. Behavioral influences of the neuropeptides ACTH and MSH: a methodological review // Neurosci. Biobehav. Rev., 1978.-Vol.2.- P.311-338.

168. Billard R. et al. Cryopreservation of rainbow trout sperm by deep freezing // Reprod. Nutr. Dev. 1980. - V. 20. - P. 1859-1868.

169. Billard R., Cosson J., Crim L.W., Suquet M. Sperm physiology and quality // Broodstock Management and egg and larval quality. N. Bromage and R.J. Roberts. Eds. Blackwell Science. 1995. - P. 25-52.

170. Billard R., Cosson J., Noveiri S.B., Pourkazemi M. Cryopreservation and short-term storage of sturgeon sperm, a review // Aquaculture. 2004. - V. 236. - p. 1-9.

171. Castell J.D., Tiews K. Report of the EIFAC, IUNS and ICES Working Group on the standartization of the methodology in fish nutrition research. Hamburg

172. Federal Republic of Germany), March 21-23, 1979 // EIFAC Tech. Pap. 1979. -P. 1-24.

173. Cowey C.B., Adron J.W., Joungson A The vitamin E requirement of rainbow trout (Salmo gairdneri) given diets containing polyunsaturated fatty acids derived from fiph oil // Aquaculture. 1983. - V. 30. № 1-4. - P. 85-93.

174. Donaldson E.M., Fagerlund U.H.M., Higgs D.A., Mc. Bride J.R. Hormonal enhancement of growth in fish. In Fish physiology, 1979 New York and London: Acad. Press. 1979. - P. 455-597.

175. Ecker Joseph R. BRI ghtening the Pathway to Steroid Hormone Signaling Events in Planns // Cell. Vol. 90, Septemer 5. - 1997. - P. 825-827.

176. Eirich K., Eirich N. Living Smart Guidelines. // Enterprise Concepts, a Consulting, research and Publishing Company. 1997. - P. 58-63.

177. Erdahl A.W., Erdahl D.A., Graham E.F. Some factors affecting the preservation of salmonid spermatozoa // Aquaculture. 1984. - V. 43. - P. 341-350.

178. Farrant L. General observation on cell preservation // Low-Temperature Preservation in Medicine and Biology. Eds. M. J. Ashwood-Smite and J. Farrant. Pitman, Bath. UK, 1980. - P. 1-19.

179. Folch et al J., Less M., Sloane-Stanley G. A simple method for the isolation and purification of total lipids from animal tissues // J.Biol. Chem. 1957. -V. 226.-P. 497-509.

180. Fredrich F. Spermakor ervierung bei Salmoniden // Z. Binnenfischerei DDR. 1984. - Bd. 31. № 1. - P. 24-31.

181. Friedrich W. Vitamin B12 und verwandte Corrinoide, Stuttg. 1975.184 p.

182. Halver J.E. Fish deseases and nutrition // Trans. Amer. Fisheries. Soc. -1954.-V. 83.-P. 254-261.

183. Halver J.E. The vitamin required for cultivated salmon // Сотр. Biochem. and Phisiol. 1982. - V. 73. -Nl. - P. 14-25.

184. Harvey B. Salmon gene banking. A conservation opportunity. A review and Analysis of Salmonid gene banks for DFO // MTI Biotech. Ltd. Internat. Fishes

185. Gene Bank. 1996. - P. 36-52.

186. Herbert V., Drivas G., Foscaldi R. et. al. Multivitamin/mineral food supplements containing vitamin B)2 may also contain analogues of vitamin Bj2. N Engl J Med, V. 299: 307. 1982. - P. 255-256.

187. Herbert V., Shaw S., Jayatilleke E., Kasdan T.S. Most free-radical injury is iron-related: it is promoted by, iron, hemin, holoferritin and vitamin C, and inhibited by desferoxamine and apoferritin // Stem Cells 12. 1994. - P. 289-303.

188. Higgs D.A., Fagerlund U.H.M., Eales J.G., Mc. Bride J.R. Application of thyroid and steroid hormoner are anabolic agents in fish culture. Сотр. Biochem. Physiol. - 1982. №1. - P. 143-176.

189. HogenkampH.P.C. Cobalamin.-N.Y., 1975 -P. 21-73.

190. Horace G.C., Takao Y.K. Gunter A. (eds.) Brassinosteroids: Chemistry, Bioactivity, and Applications. ACS symposium series, 474. - Washington, DC, 1991.-P. 139-144.

191. Hove E.L., Hardin J.O, Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 1977, 502. 1951. -P. 36-48.

192. Hung S.O., Cho C. Y., Slinger S.Y. Effect of oxidized fish oil DL-a-tocopherol acetate and ethoxyquin supplementation on the vitamin E nutrition of rainbow trout (Salmo gairdneri) fed practical diets // J. Nutr. 1981. - V. 111. - P. 648-657.

193. Jeffrey G.A. Nobel Prize Awarded to Crystallographer. Science, - V. 146.-1964.-P. 748-749.

194. Khripach V.A., Zhabinski V.A., Malevannaya N.N. Recent advances in Brassinosteroids study and application // The plant growth regulation sooitty of America. Atlanta, Georgia August 8-12. Atlanta, 1997. - P. 101-106.

195. Kling L.J.,Soares J.M. The effect of vitamin E and dietary linoleic acid on mercury toxity // Nat. Rep. Int. 1981. - Vol. 24, № 1. - P. 39-46.

196. Kondo H., Binder M.J., Kolhouse J.F. et al. Presence and formation of cobalamin analogues in vitamin-mineral pills. J Clin Invest 70. 1982. - P. 889-898.

197. Kurokura H. Nibon reito kuokai ronbunshu // Trans. Jap. Assoc. Rtfrig. -1994. №3.-P. 237-246.

198. Lahnsteiner F. et al. Determination of semen quality of the rainbow trout for cryopreservation by physiological and biochemical parameters // J. Applied Aquaculture in press. 1996. - P. 55-56.

199. Lam T.I. Applications of endocrinology to fish culture. Can. J. Fish and Aquat.science, 39. 1982. № l.-P. 111-137.

200. Lone K.P., Matty A.J. The effect of feeding methyltestosterone on the growth and body composition of common carp (Ciprinus carpio L.). Cten. And Сотр. Endocrinol., 1980,40. №4. - P. 409-424.

201. Lone K.P., Matty A.J. The effect of feeding androgenic hormones on the proteolitic activity of the alimentary canal of carp Ciprinus carpio L. J. Fish Biol. -1981,18, №3.-P. 353-358.

202. Lone K.P., Matty A.J. The effect of ethylestrenol on the growth, food conversion and tissue chemistry of the carp Ciprinus carpio L. Aquaculture. 1983. №1.-26.- P. 39-55.

203. Lovell R.T. Nutrition and feeding of fish. New-York: Auburn University, 1987.-253 p.

204. Maisse G. Cryopreservation of fish semen; A review // Troid et Aquaculture. Refrigeration and Aquaculture, Bordeaux, France. 1996. - P. 443-450.

205. Matthies H. The biochemical basis of learning and memory // Life Sci. -Vol. 3.-1974.-P. 208-218.

206. Moss R.L., Dudley C.A. The shallenge of studying the behavioral effects of neuropeptides // Handb. Psychopharmacol. 1984. - Vol. 18. - P. 347-354.

207. Nobel Prize Given for Vitamin Studies. Chem. Eng. News, 1964, November 9.-1964.-P. 54.

208. Pelissero С., Sumpter S.P. Steroids and «steroid-like» substances in fish diets // Aquaculture. 1992. 107. No 4 - P. 283-301.

209. Plotnikoff N. Pemoline: enhancement of maze performance in young rats // Behav. Biol. -Vol. 9. 1973. - P. 117-121.

210. Polge C. Freezing of spermatozoa. In: Low-Temperature Preservation in Medicine and Biology. M.J. Ashwood. Pitman Bath, U.K. - 1980. - P. 45-65.

211. Pratt J.M. Inorganic chemistry of vitamin Bi2. L.-N.Y., 1972. - 48 p.

212. Rana K. Cryopreservation of fish spermatozoa // Methods in Molecular Biology, vol. 38: Cryopreservation and Freeze Drying Protocols. Edited by: J.G. Day and M.R. McLallen. Humana Press, Tolowa, N.J. - 1995. - P. 151-165.

213. Rosenlung G. Erharingsbenovhos stamfish betydning for producsjonen av agg yngel. Norsk Fiskioppdr. - 1997. - № 8. - P. 30-33.

214. Rouser G., Siakotos, Fleisher S. Quantitative analysis of phosphorlipids by thin-layek chromotography and phosphorus anaiysis of sports // J. Lipids, 1966. -V. 1,- P. 85-86.

215. Vlasenko A.D. The Present Status and Conservation of Sturgeons (Acipenseridae) in the Caspian Basin. Proceedings of the International. Conference on Sturgeon Biodiversity and Conservation., New York 1994. 1996. - P. 18-23.

216. Watanabe Т., Kiron V., Satoh S. Trace minerals in fish nutrition. -Aquaculture, 1997.-V. 151, № 1 4.-P. 185-207.