Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

ДНК-зависимые РНК-полимеразы микоплазм

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Бабичев, Владимир Васильевич

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

ГЛАВА I. ДНК-ЗАБИСИМЫЕ РНК-ПОЛИМЕРАШ ПРОКАРИОТ

1.1. Открытие ДНК-зависимых РНК-полимераз

1.2. Выделение и очистка препаратов РНК-полимераз

1.3. Физико-химические и молекулярно-биологические свойства РНК-полимераз прокариот

1.3.1. Гетерогенность структуры РНК-полимераз

1.3.2. Роль полипептидов РНК-полимераз в процессе транскрипции

1.3.3. Структурная гомология РНК-полимераз прокариот и эукариот.

1.3.4. Бактериальные РНК-полимеразы, модифицированные под влиянием бактериофагов

1.3.5. Разнообразие реакций, катализируемых РНК-полимера зами

1.4. Влияние различных факторов на активность РНК-полимераз.

ГЛАВА П. ОСНОВНЫЕ СВОЙСТВА ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ КЛАССА

MOLLICUTES

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

ГЛАВА Ш. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

3.1. Объекты исследования.

3.2. ^Культивирование микроорганизмов.

3.3. Определение активности РНК-полимераз

3.4. Получение и приготовление матриц

3.5. Выделение и очистка РНК-полимераз из мико-плазм

3.6. Электрофорез препаратов РНК-полимераз

3.7. Методы изучения влияния различных факторов на активность РНК-полимераз шкоплазм

ГЛАВА 1У.ШДЕЛЕНИЕ И ХРОМТОГРАФШЕСШЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

ДЕК-ЗАВИСИМЫХ РНК-ПОЛИМЕРАЗ МИКОПЛАШ . 50 4.1. Получение РНК-полимеразы из возбудителя бледно-зеленой карликовости зерновых Acholeplasma sp. 118.

4.2. Получение РНК-полимеразы из сапрофитной микоплазмы Acholeplasma laidlawii PG

4.3. Получение РНК-полимеразы из микоплазмы Mycoplasma mycoides var.capri PG 3» патогенной для животных

ГЛАВА У. СУЕЬБЩИНШНАЯ СТРУКТУРА ДНК-ЗАВИСИМЫХ РНК

ПОЛИМЕРАЗ МИКОШАШ.

ГЛАВА У1. ВЛИЯНИЕ РАЗЛИЧНЫХ ФАКТОРОВ НА АКТИВНОСТЬ

РНК-ПОЛИМЕРАЗ МИКОПЛАЗМ.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

ВЫВОДЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "ДНК-зависимые РНК-полимеразы микоплазм"

Транскрипция - первый этап в сложном механизме реализации генетической информации, закодированной в нукдеотидной последовательности ДНК. Передача этой информации осуществляется путем перевода ее в соответствующий тип РНК. При этом синтезируются РНК, которые принимают участие в процессе трансляции (рРНК, 5S и тРНК), информационные РНК (иРНК), играющие важную роль в синтезе различных белков и РНК-затравки, причастные к инициации процесса синтеза ДНК.

Синтез этих типов РНК на матрице ДНК у всех организмов осуществляется ДНК-зависимой РНК-полимеразой (РНК-полимеразой), называемой еще транскриптазой.

Свойства РНК-полимераз многих прокариотических организмов изучены достаточно хорошо. У представителей класса Moiiicutes эти ферменты не исследованы и не разработаны способы их выделения из клеток микоплазм. Тот факт, что РНК-полимеразы у мико-плазм до сих пор практически не изучались, объясняется трудностями получения необходимого количества клеток, а также чрезвычайной сложностью методов выделения этих ферментов, их концентрирования и сохранения активности. Детальное изучение свойств РНК-полимераз требует больших количеств биомассы клеток и ферментов высокой чистоты.

Учитывая возросший интерес к изучению микоплазм и их биологической роли, следует признать, что имеющихся данных явно недостаточно для полной характеристики этой важнейшей группы микроорганизмов. Изучение РНК-полимераз микоплазм позволит более глубоко понять особенности этого класса микроорганизмов, установить место в мире микробов и определить фундаментальные основы их биологической активности.

Результаты изучения ингибирующего действия U -аманитина на рост микоплазм - типичных представителей прокариот - послужили косвенным основанием для предположения о существовании у микоплазм иной, чем у других прокариот, РНК-полимеразной системы, а именно, d-аманитин чувствительной РНК-полимеразы /Скрипаль, 1977/. Одной из особенностей ферментативной системы прокариот является отсутствие о£-аманитин чувствительной ДНК-зависимой РНК-полимеразы, найденной у эукариот /xedinger et ai., 1970/. Предполагается, что наличие d -аманитин чувствительной РНК-по-лимеразы у микоплазм связано с их патогенными свойствами. Как известно, представители этой группы микроорганизмов являются возбудителями многих заболеваний человека, животных и растений. Таким образом, дальнейшее изучение этого воцроса может иметь существенное значение для выяснения механизма патогенности данных микроорганизмов. Выделение и изучение ДНК-зависимых РНК-полиме-раз микоплазм представляется актуальным как в теоретическом, так и в црактическом отношении. Препараты РНК-полимераз могут применяться в генно-инженерных исследованиях для синтеза РНК in vitro, для более детального изучения механизмов транскрипции и трансляции. Важным для установления гомологии РНК-полимераз эукариот и прокариот является выяснение их субъединичной структуры, что может послужить ключем к пониманию эволюции как ферментов, так и микроорганизмов.

Целью настоящей работы является сравнительное изучение ДНК-зависимых РНК-полимераз микоплазм, представляющих различные семейства класса Mollicutes, и отличающихся как местом обитания, так и биологической активностью.

В работе были поставлены следующие задачи:

I. Разработать метод выделения и очистки ДНК-зависимых РНК-полимераз из клеток микоплазм.

2. Провести сравнительное изучение физико-химических и мо-лекулярно-биологических свойств РНК-полимераз микоплазм.

3. Установить субъединичную структуру РНК-полимераз микоплазм, их молекулярную массу, степень сходства этих ферментов с РНК-полимеразами других прокариотических микроорганизмов.

В результате проведенных исследований впервые разработаны сравнительно быстрые методы выделения и очистки РНК-полимераз из микоплазм. Применение эффективной аффинной (гепарин-сефаро-за, зеленый А) и ионообменной (ДЭАЭ-целлюлоза, КМ-сефадекс) хроматографии позволило исключить длительную процедуру высокоскоростного центрифугирования. Новый метод обеспечивает получение удовлетворительных результатов, хорошую воспроизводимость. Он позволяет провести полную очистку РНК-полимераз из небольшого количества исходного материала (1,5-2,0 г) за 1-2 дня.

Впервые получены РНК-полимеразы из представителей семейства Acholeplasmataceae - сапрофита Acholeplasma laidlawii PG 8 и Acholeplasma sp. штамма 118, являющегося возбудителем бледно-зеленой карликовости зерновых, и семейства Mycopiasmataceae -патогенного для животных штамма Mycoplasma mycoides PG 5*

Из м.mycoides pg 5 и штамма 118 выделены две формы РНК-полимеразы, отличающиеся условиями элюирования с хроматографи-ческих колонок и субъединичной структурой. Две формы РНК-паяи-меразы штамма 118 отличаются еще и чувствительностью к с£-ама-нитину.

Структура РНК-полимераз микоплазм по основным субъединицам сходна с аналогичными ферментами других прокариот. Однако есть и специфические белки, играющие роль в цроцессе транскрипции и определяющие индивидуальность этих ферментов. РНК-полимеразы микоплазм по субъединичной структуре ближе всего к РНК-полимеразам грамположительных эубактерий, их бациллус-клостридиальной ветви.

Возможность получения РНК-полимераз микоплазм в достаточном количестве позволила детально изучить свойства и субъединичный состав ферментов. Определены оптимальные условия проявления максимальной активности РНК-полимераз микоплазм in vitro. Исследована зависимость транскрипции от матриц, ингибиторов и активаторов синтеза РНК.

Работа выполнена в отделе микоплазмологии Института микробиологии и вирусологии им.Д.К.Заболотного АН УССР под руководством кандидата биологических наук И.Г.Скрипаля.

Культивирование и наработка клеток микоплазм для выделения РНК-полимераз проводились совместно с Л.П.Малиновской, а выделение ДНК из микоплазм для использования их в качестве матриц для синтеза РНК in vitro выполнено совместно с кандидатом биологических наук Л.П.Панченко.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Бабичев, Владимир Васильевич

ВЫВОДЫ

1. Впервые выделены и изучены ДНК-зависимые РНК-полимера-зы у различных представителей класса Moiiicutes: патогенной ДЛЯ ЖИВОТНЫХ Mycoplasma mycoides var.capri PG 3» патогенной ДЛЯ растений Acholeplasma sp. ШТ.118 И сапрофитной Acholeplasma laidlawii PG 8.

2. Разработан эффективный и экономичный метод получения высокоочищенных препаратов РНК-полимераз из микоплазм, основанный на комбинированном применении ионообменной и аффинной хроматографии и учитывающий биологические свойства микоплазм, в т.ч. наличие у них мультиферментной нуклеазной системы.

3. У патогенных микоплазм ( M.mycoides PG 3 И Acholeplasma sp. шт.118) обнаружены две формы РНК-полимераз, различающихся меаду собой физико-химическими и молеиулярно-биологиче-СКИМИ свойствами. Сапрофитный штамм . Acholeplasma laidlawii PG8 содержит одну форму РНК-полимеразы.

4. РНК-полимеразы микоплазм проявляют максимальную активность при температуре 27+2°С, рН 8+0,5 и наличии в реагирующей среде денатурированных матриц (100 мкг/мл), марганца (12 мМ), полиаминов (10 мМ), глицерина (10 об,%), ионной силы сульфата аммония (40 мМ).

5. Субъединичный состав РНК-полимераз микоплазм, их способность осуществлять безматричный синтез РНК-подобных продуктов и чувствительность к рифамицину sv характеризуют эти ферменты как типичные для прокариот. Субъединицы с молекулярной массой 21000 и 58000 дальтон указывают на сходство РНК-полимераз с соответствующими ферментами грамположительных бактерий.

6. Уменьшение молекулярной массы субъединицы РНК-полимераз микоплазм от 155000 до 140000 дальтон коррелирует с появлением у ферментов чувствительности к об -аманитину и потерей чувствительности к рифамицину sv.

7. РНК-полимеразы микоплазм перспективны для применения в генно-инженерных работах, т.к. с высокой специфичностью транскрибируют нативные ДНК.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Бабичев, Владимир Васильевич, Киев

1. Алахов Ю.Б. Структура и свойства рибосомального фактора элонгации g. Автореф.дисс. . докт.хим.наук. - М., 1982. -43 с.

2. Бибилашвили Р.Ш., Савочкина JI.II. Комплексы РНК-полимеразы с ДНК. II. Получение комплексов, устойчивых к обработке ДНК-азой I. Мол.биол., 1973, 7, J& I, с.93-104.

3. Богданов А.А. Некоторые аспекты узнавания нуклеиновых кислот белками цри передаче генетической информации. В кн.: Нукяе-иново-белковое узнавание. - М.: ВИНИТИ, 1982, 17, с.5-55.

4. Вознесенский В.Л. Первичная обработка экспериментальных данных. Л.: Наука, 1969. - 82 с.

5. Денисова Л.Я., Загребельный С.Н., Пустошилова Н.М., Реферативный синтез поли(А) на олигонуклеотидных матрицах в системе РНК-полимеразы E.coli. Мол.биол., 1980, 14, № 6,с.1372-1377.

6. Зограф Ю.Н., Гинцбург А.Л., Зайцев Н.З. Фактор ро терминации и развитие четных фагов. Тезисы Х1У Мевдунар.генет.конгресса. - М., 1978, чЛ, с.5.

7. Иванов В.И. Структурно-химические аспекты функционирования РНК-полимеразы. В кн.: Структура и функции активных центров ферментов. - М.: Наука, 1974, с.167-182.

8. Каган Г.Я. Микоплазмология новая отрасль микробиологии. -Микробиол.журн., 1981, 43, №3, с.393-404.

9. Овчинников Ю.А., Липкин В.М., Модянов Н.Н., Чертов О.Ю., Смирнов Ю.В., Хохряков B.C., Шуваева Т.М. ДНК-зависимая РНК-полимераза E.coli. Полная аминокислотная последовательность о£-субъединицы. Ей оорган.химия, 1977, 3, № 2, с.283-286.

10. Панченко Л.П., Скрипаль И.Г., Закарашвили Т.Н. Метилированные основания в ДНК микоплазм, вызывающих курчавую мелколис-тность шелковицы. Микробиол.журн., 1983, 45, № 3, с.45-49.

11. Пешков М.А. Рецензия на кшиу В.Д.Тимакова и Г.Я.Каган "Семейство i,iycoplasmataceae и L -формы бактерий". Микробиология, 1969, 38, & 4, с.737-740.

12. Прангишвили Д.А. Молекулярная биология архебактерий. Мол. биол., 1983, 17, в.2, с.234-248.

13. Скрипаль 1.Г. До удосконалення систематики класу Moliicutes та про заснування в порядку Mycopiasmataies ново! родини

14. Spiroplasmataceae fam.nova. Мгкробгол.журн., 1974, 36,4, с.462-467.

15. Скрипаль И.Г. Влияние ингибиторов транскрипции на рост микоплазм И Agrobacterium tumefaciens 8628. Микробиол.журн., 1977, 39, № I, с.98-103.

16. Скрипаль И.Г. Микоплазмы и Agrobacterium tumefaciens: молекулярные аспекты биологии и патогенности. В кн.: Вирусные болезни сельскохозяйственных культур. - М.: Колос, 1980,о.104-Х14.

17. С1фипаль И.Г. Лигандная хроматография ДНК-зависимых РНК-полимераз как удобный способ их очистки и концентрации. Молекулярная биология. - К.: Наукова думка, 1984, в.37, с. 3344.

18. Скрипаль И.Г., Малиновская Л.П. Стеринзависимость фитопато-генных микоплазм. Микробиол.журн., 1983, 45, Л 5, с.66-70.

19. Скрипаль И.Г., Малиновская Л.П. Среда СМ ИМВ-72 для культивирования фитопатогенных микоплазм. Микробиол.журн., 1984, 46» & 2, с.71-75.

20. С1фипаль И.Г., Оншценко А.Н., Малиновская Л.П., Карпов А.В. Микоплазмы как этиологический фактор заболевания пшеницы бледно-зеленой карликовостью. Тр. 1У съезда микробиологов Украины. - К.: Наукова думка, 1975, с.149-150.

21. Спирин А.С. Спектрофотометрическое определение суммарного количества нуклеиновых кислот. Биохимия, 1958, 23, $ 5, с.656-662.

22. Стент Г., Кэлиндар Р. Молекулярная генетика. М.: Мир, 1981. - 646 с.

23. Столяров И.В., Лиходед B.C., Паскевич И.Ф. ДНК-зависимая РНК-полимера за эукариотов. Успехи соврем, биол., Х976, 81, в.З, с.323-340.

24. Тимаков В.Д., Каган Г.Я. ъ -формы бактерий и семейство муcoplasmataceae в патологии. М.: Медицина, 1973. - 392 с.

25. Хесин Р.Б., Горленко S.M., Шемякин М.Ф., Басс И.А., Прозоров А.А. Связь между синтезом белка и регуляцией образования мРНК в E.coii клетках в процессе роста Т2 фага. Биохимия, 1963, 28, Jfe 6, с.1070-1086.

26. Хорст А. Молекулярные основы патогенеза болезней. М.: Медицина, 1982. - 456 с.

27. Чертов О.Ю., Обухов А.Н., Липкин В.М. РНК-полимераза ри-фамицин. Молекулярная модель ингибирования. - Биоорган.химия, 1983, 9, № 5, с.633-640.

28. Abracham К.A. Studies on DKA-dependent RNA polymerase from E.coii. I. Mechanism of poliamine induced stimulation of enzyme activity. Eur.J.Biochem., 1968, 5, N 1, p. 143-146.

29. Bautz E.K.F. Bacteriophage-induced DNA-dependent RNA-polyme-rase. In: REA. polymerase. - N.Y.: Cold Spring Harbor Lab., 1976, p.273-284.

30. Bautz E.K.F., Dunn J.J. DNA-dependent RHA-polymerase from phage T4-infocted E.coii: an enzyme missing a factor required for transcription of T4 DM. Biochem.Biophys.Res.Com., 1969, 34, N 2, p.230-237.

31. Bautz E.K.I'1., Dunn J.J. DKA-cellulose chromatography of proteins. In: Procedures in nucleic acid research. - H.Y.: Harper and Row, 1971, 2, p.743-764*

32. Berg I)., Chamberlin M. Physical studies on RIJA polymerase from E.coli. Biochemistry, 1970, 9» N 26, p.5055-5064»

33. Boxer L.M., Corn D. Structural and enzymological characterization of the homogenous deoxyribonucleiс acid polymerase from Mycoplasma orale. Biochemistry, 1979, 18, H 21,p.4742-4749.

34. Burgess R.R. Purification and physical properties of RNA polymerase E.coli. In: HUA polymerase. - И.-Y.s Cold Spring Harbor Lab., 1976, p.69-100.

35. Burgess R.R., Jendrisak J.J. A procedure for the rapid, large-scale purification of E.coli DNA-dependent КНЛ polymerase involving Polymin P precipitation and DNA-cellulose chromatography. Biochemistry, 1975, 14, N 21, p.4634-4638.

36. Burgess R., Travers A.A., Dunn J.J., Bautz E.K.F. Factor stimulating transcription by RNA polymerase. Nature, 1969, 221, N 5175, p.43-46.

37. Calva E., Burgess R.R. Characterization of a p -dependent termination site within the cro gene of bacteriophage Л . -J.Biol.Chem., 1980, 225, N 22, p.11017-1Ю22.

38. Chamberlin M.J. Bacterial DNA-dependent RNA polymerase. -In: Trie enzyme. N.-Y.: Acad.Press, 1974a,10, p.333-35S.

39. Chamberlin M. The selectivity of transcription. Ann.Rev. Biochem., 1974b, 43, N 6, p.721-775.

40. Chao L., Speyer J.F. A new form of RNA polymerase isolated from E.coli. Biochem. and Biophys.Res.Communs, 1973, 51, N 2, p.399-405.

41. Cleland V/.V/. Dithiothreitol, a new protective reagent for SH groups. Biochemistry, 1964, 3, M 4, p.480-482.

42. Cochet-Meilchac M., Chambon P. Animal Dl-IA-dependent RMA polymerases. II. Mechanism of the inhibition of R1A polymerases

43. В by amatoxins. Biochim. et biophys. acta, 1974, 353, N 2, p.160-184

44. D'Alessio M., Spindler S.R., Paule M.R. DMA-dependent ША polymerase 11" from Acanthamoeba castellanii. J .Biol.Chem., 1979, 254, N 10, p.4085-4091

45. Dunn J.J., Bautz P. A., Bautz E.K.P. Different template speci— ficites of phage T3 and T7 RNA polymerases. llature New Biol., 1970, 230, N 1, p.94-96.

46. J.Syst.Bac teriol., 1967, 17, N 3, р-2б7-2б9.

47. Edward D.G., Preundt E.A. Amended nomenclature for a classification of strains related to M.laidlawii. J.Gen.Microbiol-, 1970, 62, N 1, p.1-2.

48. Eigen M., Gardiner W., Schuster P., Winkler-Oswatitsch R. The origin of genetic information. Scientific American,1. April 1981, p.88-118.

49. Erlich H., baffler Т., Gallant J. ppCpp formation in E.coli treated with rifampicin. J.Biol.Chem., 1971» 246, H 19» p.6121-6123

50. Fischbein W.W. Quantitative densitometry of 1-50 g protein in acrylamide gel slabs with coomasie blue. Analyt.Bio-chem., 1972, 46, I 1, p.388-401.

51. Fukuda R., Iwakura Y., Ishichama A. Heterogeneity of RM polymerase in E.coli. I. A new holoenzyme containing a new Sigma factor. J.Mol.Biol., 1974, 83, К 1, p.353-367»

52. Furth J.J., Hurwitz J., Anders M. The role of deoxyribonucleic acid in ribonucleic acid in ribonucleic acid synthesis.

53. J.Biol.Chem., 1962, 237, H 8, р.2б11-2б19.77* Geiduschek E.P., Uakamoto Т., Weiss S.B. The enzymatic synthesis of RM: complementary interaction with ША. Proc.

54. Katl.Acad.Sci., USA, 1961, 47, W 5, p.1405-1409.

55. Goldberg A.R., Hurwitz J. Studies on termination of in vitro 1ША synthesis by rho factor. J.Biol.Chem., 1972, 247, И 17, p.5637-5645.

56. Greenleaf A.L., Borsett L.M., Jimachello P.E., Coulter D.E. oC-Amanitin-resistent D.melanogaster with an altered 1ША polymerase II. Cell., 1979, 18, N 2, p.613-622.

57. Griffith J.P. Immediate visualization of protein in dodecyl sulfate-polyacrylamide gels by prestaining with remasol dyes. Ann.biochem., 1972, 46, N 2, p.402-412.

58. Gross C., Engback E«, Flammang Т., Burgess R. Rapid microme-thod for the purification of E.coli RNA polymerase and the preparation of bacterial extracts active in RNA synthesis. -J.Bacteriol., 1976, 128, N 1, p.382-389.

59. Grunberg-Manago M., Ochoa S. Enzymatic synthesis and breakdown of polynucleotides: polynucleotide phosphorilase. J. Amer.Chem.So с., 1955, 77, N 11, p.3165-3166.

60. Huang R.C., Haheshwari N., Bonner J. Enzymatic synthesis of RHA. Biochem. and Biophys. Res.Communs, 1960, 3, N 6,p.689-694.

61. Humphries P., McConnell D.J., Gordon R.L. A procedure for the rapid purification of E.coli DMA-dependent RNA polymerase. Biochem.J., 1973, 133, N 1, P-201-203

62. Iverius P.H. Coupling of glycosaminoglyconat to agarose beads (sepharose 4B). Biochem.J., 1971, 124, N 4, p.677-684

63. Iv/akura Y., F'ukuda R., Ishihama A. Heterogenecity of RNA polymerase in E.coli. II. Polyaaenylate-polyuridylate synthesis by holoenzyme II. J.Mol.Biol., 1974, 83, N 3, P-369-378.

64. Kato J., Anfinsen C.B. Purification of synthetic ribonuclea-se, Б-peptide derivatives by specific complex formation on column of ribonuclease S-protein bound to agarose. J.Biol.

65. Chem., 1969, 244, M 21, p.5849-5855

66. Kegami M.J., Freenkel-Conrat M. Characterization of RNA-de-pendent RMA polymerase of tobacco leaves. J.Biol.Chem., 1979, 254, И 1, p.149-154.

67. Kedinger C., Gniazdowski M., Mandel J.L., Gissinger Jr.p., Chambon P. di -Amanitin: a specific inhibitor of one of two DMA-dependent RNA polymerase activities from calf tymus. -Biochem. and Biophys.Res.Communs, 1970, 38, N 1, p.165-171.

68. Khesin R.B., Bogdanova E.S., Goldfarb A.D., Zograff Yu.l\f. Competition for the DUA template between НИA polymerase molecules from normal and phage-infected E.coii. Mol.Gen. Genet., 1972, 119, N 2, p.299-317.

69. Kirby K.S. A new method for the isolation of ribonucleic acids from mammalian tissues. J.Biochem., 1956, 64, И 3» p.405-411

70. Klieneberger E. The natural occurrence of pleuropneumonia-like organism, its apparent symbiosis with Streptob.moniliformis and other bacteria. J.path.Bact., 1935, 40, И 1,p.93-98.

71. Kornberg А. RNA priming of DNA replication. In: RNA polymerase. - N.-Y.: Gold Spring Harbor Lab., 1976, p.331-351*

72. Krakow J.S., Rhodes G., Jovin T.M• Catalytic mechanism and inhibitors. In: RNA polymerase. - N.-Y.: Cold Spring Harbor Lab., 1976, p.127-157

73. Krasnow M.A., Cozzarelli N.R. Catenation of DNA rings by topoisomerases. Mechanism of control by spermidine. J. Biol.Chem., 1982, 257, W 5, p.2687-2693»

74. Kumar B.V., McMillian R.A., Medoff G-, Gatwein LI., Kobaya-= shi G. Comparison of the ribonucleic acid polymerase from both phases of Histoplasma capsulatum. Biochemistry,1980, 19, N 6, p.1080-1087'.

75. Laemli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage 14• Nature, 1970,227, N 5259, p.680-685

76. Lill U.J., Behrendt E.M., Hartmann G.R. Hibridization in vitro of subunits of the DNA-dependent RNA polymerase from. E.coli and Micrococcus luteus. Eur.J.Biochem., 1975a, 52, N 3, p.411-420.

77. Lill H.R., llartman G.R. Digestion with matrix-bound proteases as a possible probe for the topography of the DNA-dependent RNA polymerase from E.coli. Eur.J.Biochem., 1975, 54, N 1, p.45-53

78. Lindell T.J., Weinberg P., Morris P.M., Roeder 11.G., Gutter W.J. Specific inhibition of nuclear RNA polymerase II by cL -amanitin. Science, 1970, 170, N 3956, p.447-449.

79. Louis B.G., Pitt P.S. Halobacterium cutirubrum RNA polymerase: subunit composition and salt-dependent template specificity. PEBS Letters, 1971, 14, 11, p.143-149

80. Lowe P.A., Malcolm A.D.B. The renaturation of subunits and subunit fragments of E.coli RNA polymerase. Biochem.Soc. Trans., 1975, 3, N 4, p.652-656.

81. Maitra U. Induction of a new RMA polymerase in E.coli infected with bacteriophage T3. Biochem. and Biophys.Res. Gommuns, 1971, 43, W 2, p.443-450.

82. Maitra U., Hurwitz J. The role of ША in RKA synthesis. IX. Nucleoside triphosphate termini in RNA polymerase products.-Proc.Natl.Acad.Sci., USA, 1965, 54, N 4, p.815-817.

83. Mandel J.L., Chambon P. Purification of R1A polymerase В activity from rat liver. PEBS Letters, 1971, 15, N 2, p-175-180.

84. Maniloff J., Magrum L., ZablenL.B., V/oese C.R. Phylogene-tic relationships of mycoplasmas as determinated by 16-S ribosomal RMA characterisation. Zentr.Bacteriol. Parazi-ten. Infection. Hygiene, Abt.I. Origin, Reihe A, 1978, 241, N 2, p. 171-172.

85. Margolis J., Kenrick K.G. Electrophoresis in polyacrylamide concentration gradient. Biochem. and Biophys. Res.Communs., 1967, 27, К 1, p.68-73

86. Marmur J. A procedure for the isolation of DNA from microorganism. J.Mol.Biol., 1961, 3, К 1, p.208-218.

87. Meisenberger 0., Heuman 11-, Pilz J. Small-angle X-ray study of DNA-dependent RNA polymerase holoenzyme from Escherichia coli. PEBS Letters, 1981, 123, N 1, p.22-24•

88. Miller I.A., Serio G.P., Howard R.A. Subunit localizations of zinc (II) in DNA-dependent RNA polymerases from Escherichia coli B. Biochim. et biophys. acta, 1979, 579, N 2, p.291-297.

89. Morgan A.R., Wells R.D. Specificity of the three-stranded complex formation between double-stranded DNA and single-stranded RNA containing repeating nucleotide sequences. -J.Mol.Biol., 1968, 37, N 1, p.63-80.

90. Musielski H., Mann W., Lane R., Michel S. Influence of di-metylsulfoxide on transcription by bacteriophage T3-induced RNA polymerase. Z.Allg.Mikrobiol., 1981, 21, N 6,p.447-456.

91. NathK., Hurwitz J- Covalent attachment of ribonucleotides at 3'-hydroxy1 ends of DNA catalysed by DNA-dependent RNA-polymerase of E.coli. J.Biol.Chem., 1974, 249, N 8,p.2605-2615

92. Hocard M., Roux E. Le microbe de la peripneumonie. Ann. de l'institut Pasteur, 1898, 12, N 3, p.240-262.

93. Nusslein C., Heyden B. Chromatography of RNA polymerase from E.coli on single stranded DHA-agarose column. Biochem. and Biophys.Res.Communs, 1972, 47, N 1, p.282-289.

94. Palm P., Heil A., Boyd D., Grampp В., Zillig W. The recon-stitution of E.coli DNA-dependent RNA polymerase from itsisolated subunits. Eur.J.Biochem., 1975, 53, W 1, p.283-291.

95. Uucl.Acids Res., 1980, 8, N 6, p.1383-1390. 137» Razin Б., Tully J. Cholesterol requirement of mycoplasmas.

96. J.Bacterid., 1970, 102, H 2, p.306-310. 138. Reich E., Goldberg J.H. Progr. Nucl. Acid Res. Mol. Biol.,1964, 3, p.183-242. 139- Richardson J.P. The binding of RM polymerase to DMA. J.

97. Mol.Biol., 1966a, 21, N 1, p.83-113. 140. Richardson J.P. Some physical properties of RM polymerase.

98. Proc.Watl.Acad.Sci., USA, 1966b, 55, И 6, р.1б1б-1б23. 141» Richhrdson J.P. RM polymerase and the control of RHA synthesis. Progr.Hucl.Acid.Res.Mol.Biol., 1969, 9, p.75-98.

99. Riva S., Silvestri L.G. Rifamycins: a general view. Ann. Rev.Microbiol., 1972, 26, p.199-224.

100. Roberts J.Yi. Termination factor for RM polymerase. Nature, 1969, 224, ll 5224, p.1168-1174.

101. Roberts J.',/. Transcription termination and its control in

102. E.coli. In: RNA polymerase. - W.-Y.: Cold Spring Harbor Lab., 1976, p.247-272.

103. Roeder R.G., Multiple forms of deoxyribonucleic acid-dependent ribonucleic acid polymerase in Xenopus laevis. J.Biol.Chem., 1974, 249, N 1, p.241-248.

104. Roeder R.G., Rutter W.J. Multiple forms of DMA-dependent RNA polymerase in eucaryotic organisms. Nature, 1969, 224, N 5216, p.234-237.

105. Roeder E.G., Rutter W.J. Specific nuclear and nucleaplasmic RM-polymerases. Proc.Natl.Acad.Sci., USA, 1970, 65, N 3> p.675-682.

106. Roganti F.S., Rosental A.L. DNAases of Acholeplasma spp. -J.Bacteriol., 1983, 155., N 2, p.802-805

107. Sajdel E., Jacob S. Mechanism of early effect of hydrocarti-sone on the transcriptional process: stimulation of the activities of purified rat liver nucleolar RNA polymerases. -Biochem. and Biophys.Res.Communs, 1971, 45, И 3, p-707-715

108. Sarker P.K., Goldman В., Moscona A.A. Involvement of poly-A in selective gene expression: supression of enzyme induction in neural retina by inhibitors of poly-A synthesis. -Biochem. and Biophys.Res.Communs, 1973, 50, N 2, p.308-315.

109. Schafer R., Zillig W. The effects of ionic strength on termination of transcription of DNAs from bacteriophages T4, T5 and T7 by DNA-dependent RNA polymerases from E-coli. -Eur.J.Biochem., 1973, 33, N 2, p.215-226.

110. Scheit K.H., Stutz A. The affinity of E-coli RNA polymerase to matrix bound rifampicin. PEBS Letters, 1975, 50, N 1, p.25-27.

111. Schwartz L.В., Roeder R.G. Purification and subunit stricture of deoxyribonucleic acid-dependent ribonucleic acid polymerase I from the mouse myeloma, MOPS 315• J.Biol.Chem., 1974, 249, N 18, p.5898-5903

112. Scrutton M.G., V/u G.W., Goldthwait D.A. The presence and possible role of zinc in RNA polymerase obtained from Escherichia coli. Proc.Natl.Acad.Sci., USA, 1971, 68, И 4, p.2497-2501.

113. Sebestka K., Horska K. Inhibition of DNA-dependent RNA polymerase by the exotoxin of Bacillus thuringiensis var.gele-chiae. Biochim. et biophys. acta, 1968, 169, N 1, p.281284.

114. Seifert W., Rabussay D., Zillig \1. On the chemical nature of alteration and modification of DNA-dependent RNA polymerase of E.coli after T4 infection. FEBS Letters, 1971, 16, N 2, p.175-182.

115. Shigesaaa K., Imai M. Function of transcription termination factor J> in a model transcription system using synthetic DNA as template. Biochemistry, 1982, 21, N 23, p.5849-5856.

116. Shih T.Y., Young H.A., Parks 17.P., Scolnide E.M. In vitro transcription of moloncy Leukemia virus genes in infected cell nuclei and chromatin: elongation of chromatin associated RNA by E.coli RNA polymerase. Biochemistry, 1977, 16, N 9, p.1795-1801.

117. Sklar V/.E.I'. , Schwartz L.B., Roeder R.G. Distince molecular structure of class I, II and III DITA-dependent RNA-polyme-rases. Proc.Matl.Acad.Sci., USA, 1975, 72, N 1, p.348-352.

118. Skripal I.G. DNA-dependent RlIA-polymerases of prokaryotes and their possible roles in malignant diseases. Proc. 2nd Gonf.Intern.Organ, for Mycoplasm., - Zbl. Bact.Hyg.,

119. Abt., Orig. A 241, 1978a, p.189-191

120. Skripal I.G. Genes expression of microorganisms in infected host cells. Proc. 3nd Intern.Gongr. Plant Pathol., 1978b, p.175-176.

121. Smith P.P. The biology of mycoplasmas. 1T.-Y. and L.: Acad.Press, 1971» - 257 p«

122. Spiegelman S., Haruna J., Holland J.В., Beandreau C., Mills D.R. The synthesis of a self-propagating and infections nucleic acid with a purified enzyme. Proc.IJatl.Acad.Sci., USA, 1965, 54, N 3, p.919-927

123. Spindler S.R., Duester G.L., D'Alessio J.M., Paule M.R.

124. A rapid and facile procedure for the preparation of RUA polymerase I from Acanthamoeba castellanii. J.Biol.Chem., 1978a, 253, N 13, p.4669-4675

125. Spindler S.R., D'Alessio J.M., Duester G.L., Paule M.R. DMA-dependent RITA polymerase III from. Acanthamoeba castellanii. J.Biol.Chem., 1978b, 253, И 17, p.6242-6248.

126. Stackebrandt E., Woese C.R. The evolution of procaryotes. -In: Molecular and cellular aspects of microbiol evolution. -M.-Y., L.: Cambridge Un. Press, 1981, p.1-31.

127. Steck T.L., Caicuts M.J., Wilson R.G. The influence of divalent cations on the activity of the ribonucleic acid polymerase of Micrococcus lysodeicticus. J.Biol.Chem., 1968, 243, IT 10, p.2769-2778.

128. Stender Yi., Stutz Л.А., Scheit K.H. The modification of DMA-dependent RMA-polymerase from E.coli by an alkylating derivative of rifamicyn SV. Eur.J.Biochem., 1975» 56»1. W 1, p.129-136.

129. Stembach H., Engelhardt R., Lezius A.G. Rapid isolation of highly active RNA polymerase from Escherichia coli and its subunits by matrix bound heparin. Eur.J.Biochem., 1975, 60, N 1, p.51-55

130. Stevens A. An inhibitor of host sigrna-stimulated core enzyme activity that purifies with DIJA-dependent RNA polymerase of E.coli following T4 phage infection. Biochem. and

131. Biophys.Res.Communs, 1973, 54, N 2, p.488-493*

132. Tashiro P., Hirai 11., Ueno Y. Inhibitory effects of carcinogenic mycotoxins on deoxyribonucleic acid-dependent ribonucleic acid polymerase and ribonuclease H. Appl.Environ.Microbiol., 1979, 38, N 2, p.191-196.

133. Travers A.A. Positive control of transcription by a bacteriophage. IJature, 1970, 225, N 5237, p.1009-1012.

134. Travers A. On the nature of DMA promotor conformations. The effect of glycerol and dimetylsulfoxya. Eur.J.Biochem.,1974, 47, И 3, p.435-441

135. Ueno G., Nakajima M., Sakai K., Ishii K., Sato N., Shimada N. Comparative toxicology of trichothec micotoxins: inhibition of protein synthesis in animal cells. J.Biochem., 1973, 74» 15 2» P-285-296.

136. Wallace D., Horowitz H.J. Genom size ana evolution. Chro-mosoma (Berl), 1973, 40, H 1, p.121-126.

137. Walter G., Zillig V/., Palm P., Fuchs E. Initiation of DNA-dependent RNA synthesis and the effect of heparin on RNA polymerase. Eur.J.Biochem., 1967, 3, N 1, p.194-201.

138. Weaver R.F., Blatti S.P., Rutter W.J. Molecular structures of 1ЯМА-dependent RNA polymerases (II) from calf thymus and rat liver. Proc.Natl.Acad.Sci., USA, 1971, 68, N 12,p.2994-2999.

139. Weber K., Osborn M. The reliability of molecular weight determinations by dociecyl sulphate-poly aery lamide gel electrophoresis. J.Biol.Chem., 1969, 244, N 16, p.4406-4412.

140. Wehrli E., Staehelin M. Action of the rifamycins. Bact.

141. Rev., 1971, 35, N 3, p.290-309

142. Weiss S.B., Gladstone L. A mammalian system for the incorporation of cytidine triphosphate into RNA. J.Amer.Chem. Soc., 1959, 81, N 15, p.4118-4119.

143. Williams D. Use of polylysine for adsorption of nucleic acids and enzymes to electron microscope specimen films. -Proc.Natl.Acad.Sci., USA, 1977, 74, N 6, p.2311-2355

144. Woese C.R., Manilofi" J., Zablin L.B. Phylogenetic analysis of the mycoplasmas. Proc.Natl.Acad.Sci., USA, 1980, 77, N 1, p.494-498.

145. Wolfrom M.L., Montgomery R., Karabinos J.V., Rathgeb P. The structure of heparin. J.Amer.Chem.Soc., 1950, 72, N 16, P-5796-5797

146. Yarbrough L.R., Hurwitz J. The isolation of subunits of DNA-dependent RNA-pоlymerase of E-coli. J.Biol.Chem., 1974,249, И 17, p.5400-5404

147. Zechel К. Transcription in vitro: Untersuchungen zur Binding una Initiation von RNA-polymerase und DNA. Ph.D.Thesis Universitat F.unchen, W.Germany, 1971. - 73 S.

148. Zillig V/., Zechel K., Halbwachs H. A new method of large scale preparation of highly purified DNA-dependent RNA polymerase from E.coli. Hoppe-Seyler's Z. Physiol. Chem., 1970b, Bd.351, N 2, S.221-225