Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

ДНК-полиморфизм генов аполипопротеина В и липазы липопротеинов в связи с ишемической болезнью сердца и уровнем липидов плазмы крови

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "ДНК-полиморфизм генов аполипопротеина В и липазы липопротеинов в связи с ишемической болезнью сердца и уровнем липидов плазмы крови"

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК МЕДИКО-ГЕНЕТИЧЕСКИЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР

на правах рукописи УДК 675.1?

СТЕПАНОВ Вадим Анатольевич

.ДНК-ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНОВ АПОЛИПОПРСТЕИНА В И ЛИПАЗЫ ЛИПОПРОТШЮВ В СВЯЗИ С Ш1ЕМИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНЬЮ СЕРДЦА И УРОВНШ ЛИПИДОВ ПЛАЗМЫ КРОВИ

(03.00.15 - Генетикг)

АВТОРЕФЕРАТ Диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

ОД

Москва - 1995

Работа выполнена в лаборатории молекулярной генетики НИИ медицинской генетики и в отделении ИБС НИИ кардиологии Томского научного центра РАМН

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ: член-корреспондент РАМН,

профессор

В.П.Пузырев '

НАУЧНЫЙ КОНСУЛЬТАНТ: академик РАМН,

профессор Р.С.Карпов

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ: доктор биологических наук,

профессор В.А.Спицын

кандидат биологических наук П.А.Слонимский

ВЕДУЩЕЕ УЧРЕЖДЕНИЕ:. Всероссийский кардиологический научный центр С121522, Москва, 3-я Черепковская ул., 15а)

Защита диссертации состоится " ^ " 199 р~ года в

___час. мин. на заседании специализированного Совета

(Л001.16.01) Медико-генетического научного центра РАМН (115478, Москва, ул. Москворечье, 1).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Медико-генетического научного центра РАМН.

Автореферат разослан " О4 199 года.

Ученый секретарь - *

специализированного Совета доктор биологических наук, • рофессср Л.Ф.Курило

ОБШАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблем. Ишемическая болезнь сердца в различных ее клинических проявлениях, в том числе атеросклероз коронарный артерий, является одной из наиболее распространенных форм хронической патологии человека и играет ведущую роль в структуре заболеваемости и смертности населения в современных популяциях (Чазов. 1985, Пузырен, 1991, Карпов и соавт. 1992, Assmann, 1993). Атеросклероз представляет собой комплексное метаболическое нарушение., клинически и этиологически гетерогенное, детерминируемое большой совокупностью средовых и генетических факторов. Данные многочисленных эпидемиологических, семейных и близнецовых исследований свидетельствуют о значительном вкладе наследственности в этиологию и патогенез этого заболевания (Дзизинский и Uy-зырев. 1977, Berg, 1983). Исходя из процессов патогенеза атеросклероза и представлений о патологической анатомии генома человеку, в качестве возможных составляющих генетической компоненты заболевания можно рассматривать весьма широкий набор генетических факторов - кандидатных генов, включающий гены, контролирующие синтез, транспорт и превращения липвдов и дипопротеиновых частиц; гены белков сосудистой стенки; компонентов системы свертывания крови; факторов пролиферации iслеток; белков, контролирующих поддержание артериального давления и многие другие (Galten, 1989, McKuslck, 1994).

Хорошо известно, что уровень липидов плазмы крови, в частности концентрация общего холестерина и холестерина в составе ШИП, является одним из основных факторов риска ИБС (Кошечкин, 1980). Это определяет тот факт, что из всего широкого спектра вероятных кандидатных генов наибольшим вниканием исследователей пользуются именно гены, продукты которых участвуют в процессах метаболизма липопротеинов - гены структурных белков липопротеииов (апобелков). ферментов, конвертирующих лилопротеины. рецепторов липопротеиновых частиц и транспортных белков. Многие из этих генов локализованы и секвенированы, что сделало их доступными для широких популяционных и медико-генетических исследований и породило лавинообразный поток информации о генетическлх ма~кегах атеросклероза в различных популяциях (Breslow, 1988).

Исследования, направленные на выявления ассоциированных с мультифакториаяьной болезнью маркера имеют своей идеальной целью

раннюю идентификацию лиц с высоким риском развития заболевания. В случае ИБС важность раннего выявления потенциальных больных подчеркивается наличием полезных, и эффективных мер первичной профилактики. К одной из стратегических целей генетики атеросклероза, наряду с вскрытием генетических механизмов, вовлеченных в экспресс™ заболевания, является выделение из популяции группы носителей генетических вариантов, предрасполагающих к проявлению ранних форм заболевания. Поскольку в экспрессию мультифакториашюй болезни, каковой является ИБС, вовлечено множество комплексных факторов, на ранних стадиях продвижения к зтой цели одним из самых плодотворных является подход, основанный на выявлении генетических маркеров, ассоциированных с заболеванием и /или с изменчивостью факторов риска на популящ'онном уровне. Современные достижения молекулярной генетики, прежде всего, развитие технологии рекомбинантных ДНК и метода полимеразной цепной реакции, позволяют использовать в качестве таких маркеров непосредственно изменения в последовательности ДНК кяндидатных генов, в частности, полиморфизм длин рестрикциониых фрагментов (ПДРФ).

Широкая распространенность ИБС в самых различных популяциях, характеризующихся специфическим "генетическим фоном", и разнообразием условий как климато-географической, так и социальной среды предполагает различия в наборе генов, вовлеченных в экспрессию болезни в различных этнических группах и популяциях и, соответственно, различия в спектре связанных с болезнью генетических маркеров, степени выраженности и направленности ассоциаций, что подтверждается многочисленными современными исследованиями (Fish er, 1989)., Эпидемиологические данные показывают, что проблема ИБС весьма остро стоит и для населения Сибири (Пузырев, 1991, Цымбадак, 109-1). Однако, специальные исследования, посвященные кандидатам генам, их связи с проявлением болезни и изменчивостью факторов.риска, прежде всего липидов крови, проведенные в России, в том числе, и на сибирских популяциях, единичны (Ковалев, 1990, Sloninsky et al., 1994, Котлярова и соавт., 1994).

Таким образом, работа, выполненная в рамках поиска популяци-онных 'ассоциаций'.генетических-маркеров в области генов метаболизма липопротеинов с атеросклерозом и уровнем липидов плазмы крови на сибирскс-'! популяши, представляется весьма актуальной.

Из обширного списка кандидатных генетических локусов нами было выбраю два гена - аполипопротеина В (АЛОВ) и ^лшазы липопротеинов . (ЛПЛ). которые играют ключевую роль в метаболизме липоп-

ротеинов и для которых, по данным исследований, проведенных на популяциях Западной Европы и США (Berg ,1994), показаны наиболее выраженные ассоциации с атеросклерозом и иоказателями липид-ного обмена.

Цель и задачи исследования. Целью работы- было изучить взаимосвязь полиморфных ДНК-маркеров в области генов АРОВ и ЛИЛ с коронарным атеросклерозом и изменчивостью уровней липидов плазмы крови у населения города Томска.

Д."я достижения этой ''ели были поставлены следующие задачи;

1. Списать полиморфизм длин рестрикционных фрагментов по сайтач Xbal, EcoRi и Mspl гена АРОВ и по сайту Pvuü гена ЛИЛ в популяции Томска.

2. Провести анализ неравновесия по сцеплению полиморфных сайтов гена АЛОВ.

3. Изучить ассоциативные связи ДНК-маркеров генов АРОВ и ЛПЛ с ишемической болезнью сердца.

4. Выявить взаимосвязь количественных показателей липидяого обмена (уровень общего холестерина, триглицеридов и холестерина в составе различных субклассов липопротегаюв) с ИДРФ-мзркерами.

5. Количественно оценить вклад изменчивости генетических факторов в фенотипическую изменчивость уровней липидов плазмы крови.

Научная новизна работы. Впервые у населения России описан полиморфизм гена ЛПЛ, частоты ПДРФ локуса АРОВ определены впервые для популяций Сибири. Получены данные о взаимосвязи генетического полиморфизма [сандедатных локусоъ с коронарным атросклерозом и уровнем липидов плазмы крови. Данная работа является одним из первых систематических исследований, направленных ка поиск ассоциаций ДНК-маркеров в области генов метаболизма липопротеинов с ИБС, проведенных на популяциях России. Полученные результаты дополняют общемировую мозаику исследований генетических локусов, патогенетически значимых для сердечно-сосудистых заболеваний и могут Сыть основой дальнейших работ по выявлению генетических факторов предрасположенности к ИБС у населения Сибири и использоваться для последующ« обобщений в области генетики сердечно-сосудистых заболеваний.

Практичеасан зна'.имость работы. Данные по полиморф/ 1му каи-дидатных генов ИБС могут быть использованы для исследований, нал-

равленных на выявление "групп риска" сердечно-сосудистых заболеваний. Результаты работы представляют интерес с точки зрения выявления генетической гетерогенности факторов, вовлеченных в детерминации ИБС и могут использоваться для сравньгельных популяци-онно-генегических исследований. Данные по популяционному полиморфизму генов АРОВ и ЛИЛ включены в базу данных "Genome Data Base" международной программы "Human Genome" (Балтимор, США).

Апробация работы. Материалы диссертации докладывались и обсуждались на II итоговой конференции НИИ медицинской генетики ТНЦ РАМН (Томск, 1992), Ассамблее кардиологов СНГ (Томск, 19fe3), на XVI Всемирном кардиологическом конгрессе и XII конгрессе Европейского Общества Кардиологов (Берлин, 1994).

Публикации. По теле диссертации опубликовано 14 печатных работ.

Структура и объем работы. Диссертационная работа состоит кз введения, обзора литературы, описани: материалов и методов, результатов исследования и обсуждения, общего заключения, выводов и списка литературы. Работа изложена на 134 страницах машинописного текста, содержи? 23 таблицы и 7 рисунков. Список литературы включает 246 работ, в том числе 218 публикаций на иностранных яз1.%а"..

Положения, выдвигаемые на защиту.

1. ДНК-полюторфизм локусов АРОВ и ЛПЛ у населения Томска по своим характеристикам (частоты аллелей, уровень гетерозиготнооти, информативность) близок к полиморфизму, наблюдаемому в европеоидных популяциях различных географических регионов.

2. Полиморфные рестрикционные сайты 3'-концевой области гена алолипопротеина В представляют собой единую высокоинформативную систему генетических маркеров.

3. Аллель М+ и генотипа М+М+ по Mspl-полиморфизму гена АРОВ у населения Томска ассоциирован с ИБС, что свидетельствует о возможном участиг генетических вариантов, маркируемых этим ПДРФ в генетической составлявшей этиопатогенеза ИБС. Однако, степень риска, связанная с носительством этого маркера, невысока.

. Есо?>1-полиморфизм гена АРОЕ ассоциирован с уровнем триг-лтцеридов у больных ИБС. Вклад генетических вариаций, связаны* с EcoRl-сайтом APG8 в изменчивость патогенетически значимых для ИБС количественных пр^наков составил 2.7% для уровня холестерина и 7 для уровня триглицеркдов в плазме крови. Вклад генетической

вариабельности по остальным исследованным сайтам генов АРОВ и ЛПЛ в определение лкпидного спектра плазмы крови незначителен.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Структура » объем материала.Данные, представленные в работе, получены с использованием трех выборок населения г, Томска: выборки доноров станиии переливания крови , группы больных .ИБС и контрольной выборки здорозчх (свободных от клинических проявлений ИБС) лиц.

Выборку доноров, которая в дальнейшем условно именуется по-пуляционной, составили 99 человек (49 мужчин и 50 женщин) в возрасте от 17 до 53 лет.

В группу больных включены 94 неродственных пациента отделения же клиник НИИ кардиологии ТНЦ СО РАМН с диагнозом "ИБС, сте-нозирувдий атеросклероз коронарных артерий". Наличие стенозир>:о-щего процесса в коронарных артериях у всех больных было подтверждено ангиографическиы обследованием, проведенным в рентгенографическом отделении клиник НИИ кардиологии (руководитель отделения -к.м.н. А.Ю.Федоров).

Контрольную группу составили 119 неродственных мужчин, соответствующих больным по возрасту (43±7 года). Члены контрольной группы были отобраны на основании возраста и диагноза "здоров"' из обширной выборки, испольэованной в эпидемиологическом исследовании ИБО в г.Томе:.е, проводимом в КИИ медицинской генетики ТНЦ РАМН. Отсутствие ИБС диагностировалось на оснозе данных электрокардиографии.

Типирование полиморфизма ДНК. ДНК выделяли из лимфоцитов периферической крови методом лизиса тритоном Х-100 (Kunkel et al.. 1977> или экстракции с использованием перхлората натрия (.Jones et al. ,1989)

Участки генов АРОВ и ЛПЛ, содержащие полиморфные рестрикци-онные сайты амплифицировали методом полимеразной цепной реакции.

ПЦР проводили на автоматическом термоциклере "Биотерм" в 50 мкл реакционной смеси, содержащей 0.01-0.03 o.e. казг,~ого из пары праймеров, 0.2 мМ каждоп из четырех дезоксинукдеизидтркфоефатсв, 2.5 единиц» ДНК-полимъразы Taq ("Ферментзс". Вильнюс лп "Вис-пол", Москва), 5 мкл 10-кратного'инкубационного буфера, рекомен-

дуемого производителем фермента, и О.i-l ыкг образца ДНК.

Амплификацию фрагментов гена АРОВ проводили в следующем ре-î:u: денатурация при 94°С в течение 1', отжиг праймеров и элонгация при 58°С в течение 2'. Участок гена мл ачгш.фицкрогзли в следующем реяиме: денатурация при 94°С, 1'; отаиг призеров при 62°С, 2* и элоигащи при 72°С в течение 2'.

Продукты акшгификаций i адролизовали сшгвегствующими рест-рикциопаыми нуклеазами в условиях, рекомендуемых производителем фермента ("Феркентас" и "Биопол"). Фрагменты рестрикции разделяли электрофорезом в 47. подиакриламидиом или 2% агароэном гелях и окрашивали бромистым зтидием. Рестрикцию, разделение и окраску проводили в соответствии о общепринятыми методами.

Номенклатура аллелей. По каждому из полиморфных лркусов идентифицировали 2 аллеля: отсутствие (-) и наличие сайта рестрикции (+). Аллели обозначали следующих образом: Xbal-ЦДРФ - Х- и Хн-, ЕсоЯ1-ЦЦР5> - Е- и Е+, Mspl-ПДРФ - Ы- к М+, Руч2-ПДР£ - р и Р*.

Определение липидного профиля плазмы крови. Забор крови для' анализа дипидов проводили в утренние часы натощак. Определение уровня липидов'у Сольных проводилось стандартными методами при их первичном поступлении в клинику до использования препаратов, по-шййхзщих чсонцентрацио липадов.

Статистическая обработка результатов. Для проверки соответствия распределения аллелей и генотыюв равновесию Харди-Вайнберга применяли критерий к.2.

Частоты гаплотипов и пара«метр неравновесия по сцеплению D между парами лаяишрфных локусов были оценены по методу наибольшего правдоподобия, предложенному Хилл (1974).

Информативность ДНК-полиморфизма оценивалась с помощью показателя PIC (информационное содержание полиморфизма), предложенного -Ботстейнои (1980).

Наличие■:■ ассоциаций генетических маркеров с'заболеванием тестировали по. оазнице часто* генотипоа, аллелей и гаплотипов по критерию тг (Жаво.эесгл'?, 1992) a такие с использованием коэффициента относительного рлска для носителей различных генотипов по Вульфу (Woolf, 195Б).

Гипотезу о соответствии распределения количественных признаков в выборке нормальному проверяли при ломощи критерия Колмого-

- g -

рова-Смирнова.

Сравнение средних значений количественного признака у носителей различных генетических вариантов проводили методом однофак-торного дисперсионного анализа. Для парных сравнений использовали t-критерий Стьюдента.

В»слад генетических вариаций s изменчивость количественных признаков оценивани по методу, предложенному Сингом и Давиньоном (1985) . Усредненный эффект каждого аллеля (at, где i^l,2) по четырем полиморфным сайтам в контрольной группе и у больных был оценен слрдугаощм образом;

Й1 = (fu^il + l/2*f42*n12) / f - Я <Х2 = (f22'fi22 + !/2*fl2*»il2) / f " Д. где fi - частота i-го аллеля, fu - частота генотипа ij, ожидае-кая для популяции, находящейся в оавковесии. Харди-Вайнберга, -среднее знгиение количественного призншса у носителей генотипа ij, ¡t - среднее значение приана;рз во Есей выборке.

Дисперсию уровня липвдов, определяем/» генотипическиш различиями вычисляли по Boerwinkle et al. (1987).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

ДНК- полиморфизм локусов АРОЗ и ЛИЛ в популяции горела Томска. Распределение генотипов и частоты аллелей по четырем полиморфным сайтам в популяциокной выборке представлен в таблице 1. Здесь же приводятся оценки соответствия частот генотипов разновесно Хапди-Вайноерга. В п^пулнцконней выборке ни по одному из ло-¡сусов отклонение от равновесия не выявлены.

Частоты ПДРФ-аллчлей, наблюдаемые з популяции Томска. находятся в пределах вариаций, характерных для болылинства изучении; еврояеогдных популяций.

APOB-Xbal. т1з четырех рассматриваемых ПДРФ-сайтов этот наиболее хорозо изучен. В описанных в литературе популгциях Европы и у белых америкагчеп США частоты аллеля Х- очень близки, варьируя от минимальной (0.43) у датчан до максимальной (0.£3) у итальянцев (Tybjaerg-Hansen et al., 1991, Сосогга et al., 196,'). У индийцев частота этого аллеля значительно клзе (0.75) (Rendes, 1992), и достигает максимума у моихидовдов (0.95 у японцев (Abu-

Таблица 1.

Распределение генотипов и частоты аллелей ПДТО-сайтов генов АРОВ и ШЛ в пояуляциопной выборке

APOB-Xbal APOB-Xbal APOB-Mspl APOB-EcoRl 0 jm-Pvu2

N 93 86' 96 98

Генотипы

27 1 7 29

-/+ 49 8 25 49

+/+ 17 77 64 20 '

Аллели

- 0.554 0.058 о.яоз 0.546

+ 0.446 0.942 0.797 0.454

s.e. 0.036 0.018 0.029 0.036

X2* 0.007 1.85 3.672 0.007

Р >0.05 >0.05 >0.05 >0,05'

Примечание. * оценка соответствия распределения генотипов равновесию Хардн-Вайнберга

ratanl et al.,1938). В исследованной нами выборке русских из и пуляции Томска частота Х- составила * 0.55. Частоты аллел Xbal-ВДРФ в нашей выборке идентичны таковым у русского населен Санкт-Петербурга (Шевцов и соавт.,1994) и не имеют значимых ра личий от распределения аллелей во всех описанных ранее популяци европеоидов, исключая население индийского субконтинента.

APOB-htspl. В популяциях мира частота Mspl-ЦДРФ варьирует полного мономорфизма у монголое (Самбуугийн и соовт., 1992) 19Х у русских Санкт-Петербурга (Шевцов и соавт.,1994). У насел ния Томска аллель М- встречался с частотой 0 Об, чао достовер ниже, чем в Санкт-Петербурге и в выборке русских, представляют в основном кшше регионы России (Петрищев и соавт. ,1992), но зн чимо не отличается от других европеоидных популяций. -

APOB-EcoRl. У европеоидов частота алделя Е- варьирует 0.11 у итальянцев, испанцев и индийцев до 0.19 у шведов (Ва1ал eta al.,1690, Peackock et al., 1992). В популяции Томска часто

аллеля Е- составила 0.20. Это значение близко.к частоте наблюдаемой у русских Санкт-Петербурга и в других популяциях Европы.

mJl-Pvu2. Из всех рассматриваемых локусов этот наименее изучен в отношении генетического полиморфизма. По данным литературы прослеживается градиент распределения частот аллеля Р- от наименьшей среди монголоидов, средней у европеоидов до максимальной ° у негроидных жителей Вест-Индии (Chamberlain et al..1989). Полученная нами частота Р- у населения Томска максимальна среди всех описанных европеоидных попу-шций.

В таблице 2 представлены значения наблюдаемой гетерозигот-ности по зсем четырем ПДРФ-маркерам и показатели информационного содержания полиморфизма (PIC). У населения Томска средняя гетеро-аиготность по ПДРФ-сайтам АРОВ и ЛЕЯ составила 0.345, что близко к аналогичным показателям для других изученных европеоидных популяций, а также к значениям гетерозиготности по ПДР5-маркерам для генов алобелков по данным базы данных международной программы "Геном человека" (GDB) и сводки по картированным генам человека (Н6М). По показателю PIC, позволяющему оценить информационную полезность генетического маркера для анализа генома человека. Mspl-й EcoRi-ВДР® гена АРОВ оказались слабоинформативными маркерами (PIC соответственно 0.10 и 0.27), a Xbal-полиморфизм АРОВ и Руи2-ЩРФ ЛПЛ - умеренно информативными (PIC по 0.37 для кавдого маркера). Анализ гаплотипов показал, что при совместном рассмотрении ПДРФ-маркеры АРОВ достигают высокого уровня информативности (Р1С=и.59).

Таблица 2.

Наблюдаемая гетерозиготность (Н) и информационное содержание полиморфизма (PIC) ЦЦРФ генов АРОВ и ЛПЛ

APOB-Xbàl APOB-Mspl APOB-EcoRl ЛПЛ-Руи2

H 0.527 0.093 0.260 0.500

PIC 0.372 0.103 0.271 О 373

Резюмируя представленные в дачном разделе результаты, мохно

- Í2 -

заключить, что ДНК-полиморфизм в локусах АРОВ и ЛПЛ у населения Томска близок по своим характеристикам к таковому в европеоидных популяциях различных географических регионов и представляет собой потенциально информативную систему для клинических и эпидемиоло-. гических исследований.

Анализ частот гаплотипов и оценка неравновесия по сцеплению в докусе ачолипопротеига В. Состояние равновесия / неравно-зесия по сцеплению «ежду полиморфными сайтами определенного генетического яокуса является важным фактором, который следует принимать вэ внимание при анализе ассоциаций ДНК-маркеров с клиническими состояниями. В общем, исходя ив теоретических положений, для 1ЩРЗ>-.ыаркероБ, находящихся в области, охватывающей лишь несколько килобаз, следует оашдать высоксЛ степени неравновесия по сцеплению. .

Три изучаемых полтюрфныя рестрикционгах сайта АРОВ расположены в 3'-концевом участке гена в непосредственной близости друг от друга в последовательности Xbal (зкзон 26) - f.fcpl (экзон 26) ~ , EcoRl (экзон 29). Расстояние мезду сайтами Xbal и Mspl составляет с:юло 3.3 да, расстояние между сайтами },lspl и EcoRl - около 2.4 Кб, и, соответственно, расстояние между Xbal- и EcoRl-сайтами -около 5.7 Кб.

. В табдзде 3 ■ приведены частоты гаплотипов по парам Щ№-ло-. кусов гена АРОВ, а такке статистические показатели неравновесия по сцеплению мезду парами локусов. Зо всех трех вгслюченкых в исследование выборках было зафиксировано неравновесие но сцеплении ыевду сайтами Xbal- и EcoRl-ЩРФ. В попудяциошюй выборке параметр неравновесия В* был равен 0.047 (р<0.025), что составило 40.8£ от максимально возможного при данных частотах аллелей значения. В грулие больных соответствующие показатели 0.039 (р<0.05) и 49.32, i3 контрольной группе - 0.037 (р<0.01) и 74.0%.

Показатель нс-равновесия по сцепленио между Xbal- и Mspl-ПДРФ оказался достоверные только в контрольной выборке и при о?ъедине-нии всего материала. Для лары сайтов Mspl и EcoRl параметр неравновесия недостоверен во всех трех группах к в объединенном гзте-, риале. .

Если в отношении Xbal- и. ЕсоК1-ПДР£ представленные даннш свидетельствуют о .неслучайной ассоциации генетических вариантов

Таблица 3.

Частоты двухлокусных гаплотипов АРОВ и статистики неравновесия по сцеплению

ВыЗорка Число Дпах

хр. Частоты гашютипов D* ИЛИ D" X2 Р

C^riin (X)

Х-Е- Х-Е> Х+Е- Х+Е+

Популяц. 186 .164 .390 .046 ,400 .046 .115 40.8 5.09 <,025

Больше 182 .119 .419 .028 .433 .039 .079 49.3 4.49 <.005

Контроль 230 .087 .409 .013 .491 .037 .050 74.0 7.15 <.001

Ьсего 598 .121 .406 .028 .445 .042 .078 53.8 17.02 <.001

М-Х- Í.Í-X+ МтХ- .М+Х+ -

Популяц. . 170 ,046 .013 .495 .446 .014 .031 45.1 1.24 NS

Вольные Í84 ,011 .028 ,532 .4Р9 -.010 -.017 58.8 1,03 NS

Кон .роль 236 .007 .089 .484 .409 -.044 -.052 84.6 10.04 <.001

Всего 590 .018 .053 .504 .425 -.019 -.034 55.9 С.48 <•025

М-Е- М-Е+ ШЕ- M+E-í

Популяц. 17С .014 .049 .191 ,744 . .002 .051 3.1 0.02 NS

Больные 186 .013 .024 .132 .826 .012 .озе- 33.8 2.66 NS

Контроль 235 ,000 .105 .106 .788 -.011 -.011 100.0 1.66 NS

Всего 592 .011 .063 .138 . 78Ь -.0001 -.011 1.3 0.00 11S

Примечание. NS -1 показатель статистически недостоверел.

двух локусов, то для пар Xbal-Mspl и Mspl-EcoRl неравновесие по сцеплению в популяционной выборке не выявлено. На нал взгляд, причины, не позволившие показать неразновеске по сце-лент для сайта Mspl, заключаются в очень низкой частоте этого ГЩРФ и в относительно небольшом объеме выборки.

При объединенном анализе всех трех выборок наблюдается ста-

хисткчески значимоенеравновесие по сцеплению между Xbal- и Mspl-ЦДР® (D*=-0.019, р<0.02а). Объединение всего материала по паре Mspl/EcoRl не позволяет опровергнуть гипотезу о равновесии по сцеплению между этими маркерами.

Во включенном в исследование материале непосредственно онаблюдались 7 из 8 возможных трехлокусных гаплотлпов. Гаилотип Х+М-Е- не выявлен ни в одной иэ трех выборок. Кроме того, в контрольной груше не встречался гаплотип Х-М-Е-, а у больных - гап-лотзшы Х-М-Е+ н X-»f-E~.

Информатчвность гаплотипов была оценена с помощью показателя PIC, Полученное значение PIC для трехлокусных га:лотилов сравнившим с максимально возможны:; значением (PICmax). рассчитанном при допущении о случайном комбинировании аллелей трех 1ЩРФ. Для гаплотипов Xbai/EcoRl PIC составил 0.464, для пары Xbal/Mspl -0.454, для комбинации Mspl/EcoRl - 0.364. Информативность галло-типов оказалась аначительно выше информативности ПД№-маркеров, рассматриваемых отдельно. Еще более информативны гаплотипы при вовлечении всех трех лаку сов. pic гаплотипов Х/М/Е составил 0.689, что соответствует 01.5% максимально возможного значения (PICrax * 0.645). ,

Подводя итог расмотрешцл.. в этом разделе данным, можно заключить , что для исследовашых ГЩРФ-сайтов гена АРОВ (по крайней мере, в парах Xbal/EcoRl и Xbal/Mspl) наблюдается неслучайная ассоциация аллелей (неравновесие по сцеплению), обусловленная либо их'тесным, физическим сцеплением, либо действием микроэволвционных факторов, что дает осковашы рассматривать 3*-концевой участок гена АРОВ как единую систему генетических маркеров. Характеристики вариабельности, нравновесия по сцеплению и информативности ПДРФ-сайтов АРОВ свидетельствуют об их потенциальной полезности для анализа генома и исследований, направленных на поиск ассоциаций ДНК-маркеров с предрасположенностью к атеросклерозу и нарушениям липидного обмена.

Ассоциации ПДРф-маркеров геноь АРОВ и ЛГО1 с ишемической болезнью сердца.

В таблице 4 представлены частоты генетических вариантов изучаемых ПДРФ (генотипов, аллелей, гаплотипов) у больных и в контрольной гоуппе ч статистические оценки разницы частот. Из че-

Таблица 4.

Частоты генетических маркеров у больных и в контрольной группе

Частота Разность

Больные Контроль частот. х2

(N=94) (N=122) (%)

АР0В-ХЬа1

Х- 0.538 0.496 4.2 0.730

Х-Х- 0.272 0.263 0.9 0.021

Х-Х+ 0.533 0..466 6.7 0.928

Х+Х+ 0.196 0.271 -7.5 1.603 АР08-Мзр1

М- 0.037 0.102 -6.5 6.570**

м-м- о.ои о.ооа о.з 0.051

М-М+ 0.053 0.189 -13.4 8.693***

М+М+ 0.935 0.803 13.3 7.841***

АРОВ-ЕсоИ

Е- 0.150 0.105 4.5 1.936

Е-Е- 0.032 0.025 0.7 0.094

Е-Е+ 0.237 0.160 7.7 1.981

Е+Е+ 0.731 0.815 -8.4 2.133 ЛШ1-Руи2

Р- 0.441 0.5",7 -7.6 2.415

Р-Р- 0.161 0.277 -11.6 4.014*

Р-Р+ 0.559 0.479 8.0 1.337

Р4Р+ 0.280 0.244 3.6 0.351 АР0В-ХЬа1/ЕсоИ

Х-Е- 0.119 0.087 3.1 1.144

Х-Е+ 0.419 0.409 1.0 ' 0.041

Х+Е- 0.029 0.013 1.6 1.322

Х+Е+ 0.433 0.491 5.8 1.374 АР0В-ХЬа1/Мзр1

М-Х+ 0.028 0.099 -7.1 8.235*"*

М+Х- 0.532 0.484 4.8 0.953

М+Х+ ' 0.429 0.409 2.0 0.170 АР0В-Мбр1/ЕсоК1 '

М-Е+ 0.024 0.105 -8.2 10.764***

М+Е- 0.132 0.106 2.6 0.678

М+Е+ 0.325 0.788 3.7 0.905 АР0В-ХЬа1/Мзр1/ЕсоГй

Х-М+Е- 0.080 0.053 1.7 0.4^8

Х-М+Е+ 0.480 0.432 4.8 0.945

Х+М+Е+ 0.427 0.437 -1.0 0.041

Примечание. *р<0.05; "^<0.025; ***рч0.01

тырех исследованных маркеров лишь аллели Mspl-ВДРФ обнаруживают значимую ассоциацию с ИБС. У больных достоверно чаще пс сравнены) с контрольной группой встречался аллель М+ (р<0.П5). Анализ распределения генотипов также выявил более высокую частоту го?/озигот М+М+ среди больных и достоверно более высокую долю носителей ал-леля М- (гомозиготы М-М- н гетерозиготы) в контрольной группе. Частоты аллелей и генотипов )Ьа1- и EcoRl-ПДРФ в этих двух выборках статистически достоверно не различались, хотя больные и характеризовались псзышенной частотой аллелк Е-. Что катается Pvu2-IffiPS гена ЛИЛ, то между больными и контролем выявлены значимые различия в частоте генотипа Р-Р-, который достоверно чаще встречался у здоговых лиц, хотя различия в частоте аллеля Р- m достигали высокого уровня вначиюсти.

Анализ ас зоциаций с использованием коэффициента относительного риска по Вульфу .'(таблица 5) также подтвердил возможную связь генетической изменчивости, маркируемся Kispî- и Pvu2-IffiP^ с наследственной предрасположенность» к ИБС. Коэффициент Вульфа для генотипа М+Ш- против М-Ы- и гетерозигот состази 3.5 (р<0.01) к 4.6 для ШМ- при сравнение только с частотой гетерозигот. Оценка относительного риска для носителей ..генотипа Р-Р- Pvu2-ïïBP© JRJl оказалась равной 0.5 (р<0.05).

Сравнение частот парных гаплотипоя (таблица 4) выявило достоверно более низкую встречаемость среди больных гаплотшов >.ЬХ+ и M-F+ по сравнению с контрольной группой. В свете этого факта следовало ожидать более высокую долю трехлокусного гаплотипа Х+М-Е+ в контроле. Действительно, в контрольной выборке этот гал-лотип встречался 11 раз, тогда как в группе больных непосредственно выявлена лишь одна хромосома Х+М-Е-к Однако, вследствие малого числа носителей данного гаплотипа статистическую оценку сравнения получить не удалось. Распределение других двух- к трехло-кусных гаплотипов у больных и в контроле не имело достоверных различий.

Хорошо известно, . что ИБС является возраст-зависимым заболеванием. Многочисленные исследования свидетельствуют о значительно более высокой роли наследственных факторов в этиологии и патогенезе болезни при раннем проявлении. В связи с этим представляла интерес оценка частот генетических маркеров в различных возрастных г; уппах болышх. . Следует отметить, что среди клиницистов не

существует единогласия по поводу возрастных критериев ранних ферм болезни. В различных источниках в качестве возрастной границы для отнесения болезни к состоянию с ранней формой проявления указывается возраст от 45 до 55 лет. Ш оценивали частоты НДР&-аллелей в трех возрастных группах: дс 45 лет включительно;' до 50 лет включительно и свыше 50 лет (средний возраст больных в нааей выборке составил 47 ±7 лет). В таблице 6 представлено распределение ДНК-маризров в различных возрастных группах болышх и его сразке-ние с частотами аллелей в контрольной группе. С понижением возраста проявления болезни отмечалась явная тенденция к повышения частоты аллеля Х-: у больных до 45 лет этот аллель псгречался на 12.5Z чаде по сравнению с контролем, у Сояыж до 60 лёт: - на ÎGZ чаще, тогда как в общей выборке- больных превышена® частоты составило лишь 5%. Одна.'со, вследствие малочисленности выборок указанные различья не били статистически достоверными. В отношении лру-гих изученных ДДР$-сайтов тенденций к возрастной динамике частот генетических маркеров не прослеживается.

В целом, представленные дачные свидетельствуют о возмокаол роли структурных изменений гена АРОВ, маркируемых исследованными полиморфными сайтами,- в процессах этиопатогенеза. îffiC у населенна Томска. В качестве наиболее вероятного механизма, поддержкзаще-го найденные ассоциации можно постулировать неравнопёсие но. сцеплению мечду. ДНК-маркерами'3'-концевой области гена АРОВ и неиден-тифицированшии патогенетически значимы?® сайташ s пределах .этого ке ло!суса.

Взаимосвязь ДНК-полиморфизма АРОВ и ДПД с уровнем липидоэ плазмы крози.

Для выявления взаимосвязи ШРФ-маркеров -с -уровнем липидов мы . использовали несколько подходов. iirawaa стандартные методы дисперсионного анализа и оценки различий средних значений .признака у носителей различных генетических.вариантов, а такзка .метод сценки' эффекта отдельных' аллелей -- на уровень количеств«чшых яризязков, ' предлокспнкй Сингсм и др. (Slng et al. 1S85, ISS?).

При статистической обработке'данных ми не объединяли материал контрольной выбор!«? и группы больных, хотя х'ежду ними и ке наблюдаюсь достоверных отличий в-средних концентрациях' яявдов. Причиной этому являются многочисленные литературные данные, лодт-

. Таблица б.

Коэффициенты Бульфа для сравнений распределения генотипов

Сравнение Распределение X хг

Больные Контроль

АР0В-ХЬа1

Х-Х- : Х+Х+ 25 2 18 31 32 1.437 0.835

Х-Х- : Х-Х+ 25 \ 49 31 : 55 0.905 0.089

Х-Х+ : Х+Х+ 49 18 55 32 1.584 1.686

Х-Х* : Х+Х+ 74 ; 18 86 * 32 1.530 1.624

Х+Х* : Х-Х- 67 * 25 87 31 0.955 0.021

АР0В-Шр1 8.748й**

ШШ : М-М+ . 88 ; 5 88 2 23 4.600

М-М* : ШШ- 6 ; 8Я 24 98 0.278 7.112***

АРСЗ-ЕсоШ.

Е-Е- : Е+Е+ 3 63 3 ; 97 1.426 0.182

Е-Е- : Е-£+ 3 : 22 3 19 0.864 0.028

Е-Е* : Е+Е+ 22 ; 68 19 97 1.652 2.045

Е-Е* : Е+Е+ 25 [ 68 22 97 2.134 2.133

Е+Еа : Е-Е- 3 ; 00 3 * 116 1.289 0.094

ЛШ1-РУЦ2

Р-Р- : Р+Р* 15 * 26 33 { 29 0.507 2.715

Р-Р- : Р-Р+ 15 • 52 33 5 . 57 0.498 3.629

Р-Р+ : Р+Р+ 52 : 26 57 : 29 1.017 0.003

Р-Ра : р+р+ 67 * 26 90 29 0.501 3.930*

Р+Рл : р-р- 78 : 15 86 : 33 1.204 0.349

Примечание. "р<0.05; **р:0.025; ***р<0.С1

Таблица 6.

Частоты аллелей в различных возрастных группах

Контроль Больные

<45 лет. <50 лет >50 лет

Частота Част, кг Част. х£ Част, г.

Д{?0В-ХЬа1 .

X- 0.4П6 0.621 3.306 0.596 2.777 0.478 0.084

Х+ 0.504 0.378 0.404 0.522

АР0В-Мз*.1

м- 0.102 0.044 2.198 0.041 3.362 0.033 4.094*

№ .0.898 0.956 0.959 0.957

АРОВ-ЕсоИ

Е- 0.105 0.162 1.655 0.153 1.525 0.148 1.153

Ё+ 0.895 0.828 0.847 0.852

ЛЦЛ-Руи2

"Н- 0.517 0.412 2.333 0.459 0.934 0.420 2.419

0.483 0.588 0.541 0.580

Примечание. *р<0.05; Число хромосом: контроль - 244, больные дс 46,лет - 68, больные до 50 лет - 98, больные старше 5С лет - 90.

верядазщнеся и в наших выборках, о различиях в степени выраженности и направленности ассоциаций генетических маркеров с количественными показателями липидного обмена 5 группах больных и здоровых индивидов из одной популяции.

У больных мы анализировали уровни ОХС и.ТГ, в контрольной группе - ОХС, ТГ и концентрацию ХС в составе различных подклассов 3 лнпопротеинов. Измеренные значения концентрации липидов были предварительно скорректированы методом линейной регрессии по индексу массы тела, что выразилось в некотором сокращении дисперсии всех лишушых параметров.

Перед оценкой эффектов генетического полиморфизма на концентрацию липидов мы проанализировали внутреннюю взаимосвязь показателей липидного обмена. В исследованных выборках наблюдались типичные корреляции уровней липидов. Концентрация ОХС позитивно коррелировала с уровнем ХС-ЛПНП (г=0.93, р<0.001), отрицательная корреляция ОХС и ТГ не была значимой. Концентрация ХС-ЛПВП имела статистически достоверную отрицательную корреляцию с уровнем .ХС-ЛПОНП и ТГ (г=-0.25 и г=-0.2б соответственно, р<0.01). Корреляции внутри различных генотипических гаассов млели аналогичную направленность, хотя и не всегда достигали достаточно высокого уровня значимости.

Для Xbal-ПДРФ, по данным однофакторного дисперсионного анализа, не зафиксировано ассоциаций с изменчивостью уровней липидов как в контрольной.группе, так и среди больных ИБС. В то же время, гомозиготы Х+Х+ з выборке больных тлели более высокую среднюю концентрацию ОХС (243.8 мг/дл) по сравнению с гетерозиготами и гомозиготами Х-Х- (234.4 мг/дл, р<0.02). В контрольной группе наблюдалась аналогичная тенденция, которая однако не достигала уровня статистической достоверности. Другие липидные показатели у носителей различных генотипов по Xbal-ПДРФ не имели достоверные различий.

Дисперсионный анализ концентрации липидов в различных гено-типических классах EcoRl-ВДРФ выявил достоверные различия между ними по концентрации ТГ в группе больных (р-0.01). Наиболее высокая концентрация ТГ выявлена у гомозигот £-Е- 167.4 мг/длj, наименьшая - у гомозигот Е+Е+ (104.1 мг/дл), а ге?орозиготы имели промежуточный уровень этого показателя. Попарное сравнение выявило достоверность различий средних концентраций ТГ между всеми

тремя генотипическими классами (р<0.01). В контрольной группе наблюдался абсолютно противоположный, хотя и менее выраженный эффект: гомозиготы Е+Е+ имели более высокий уровень ТГ по сравнение с носителями аллеля Е (р=0.09 по данным дисперсионного анализа и р<0.01 при сравнении по t-критерию). Гомозиготы Е+Е+ также характеризовались более высокой концентрацией ХС-ЛПОКП.

Межиндивидуальные генотипические различия по Ntepl-ПДРФ, по данным дисперсионного анал1!за, не оказывают существенного влияния на изменчивость уровней липидов плазмы крови. В контрольной группе при попарном сравнении средних концентраций для гетерозигот М-М+ выявлены более низкие концентрации ОХС и ХС-ЛПНЛ и более высокая концентрация ХС-ЛПВП (р<0.01) по сравнению с носителями генотипа

Руц2-яолиморфизм гена липазы липопротеш.ов не демонстрирует связи с уровнем ОХС и холестерина в составе липопротеиновых частиц различной плотности. Однако, в исследованной популяции он, вероятно,' может иметь определенный эффект на концентрацию ТГ. Среди больных носители аллеля Р+ характеризовались повышенным уоогнем ТГ по сравнению с гомозигота),;и Р-Р-, а у членов контрольной группы с генотипом Р-Р+ средняя концентрация ТГ (127.4 mi/д..) достоверно превышала такову» у гомозигот Р+Р+ (111.8 мг/дл).

Количественно вклад генетического полиморфизма в изменчивость липадных параметров можно оценить по доле гештиличе :кой дисперсии от общей фенотипической дисперсии признака (б^/бьоь2. таблица 23). Доля дисперсии, определяемой генетически..! вариациями по данному лок^лу в оби;ей внутригрупповой дисперсии, оцененная по Сингу С57, 211], для Mspl-ЦДРФ гена АРОВ и для Pvu2-полиморфизма гена ЛШ1 практически не отличима от нуля, для Xbal-ЦЦРЭ варьировала от О (СХС у больных) до 1.72 (ХС-ЛПВП), для EcoRl-IW^ - от О до 7.6?. (ТГ у больных). Эти оценки находятся в хорошем соответствии с аналогичными показателями для кандидатных генов, встречаюпмися в литературе (Hansen et al., 1994, SJng et al,1985).

Рассмотренные в этом разделе данные касались вариаций липид-ньх параметров, обусловленных генотипическими различиям*'. Феноти-пическио различия между носителями разных генотипов предполагает, естественно, что аллели' данного локуса имеют различный эффект в отношении фенотипа. Оценить средний эффект аллелей на изменчи-

;ть концентрации липидов позволяет метод, предложений Сингом и ишьоном (1385). В таблице 7 показаны усредненные эффекты алле-5 (а) каткого из четырех ГЩРЗ в терминах отклонения от средне-Зорочного значения признака.

У членов контрольной группы наблюдалась тенденция к повшпе-з урошга охс и хс-ЛПВП и понижению уровня ТГ, связанному с но-

Таблица 7.

Усреднений зффега1 агяелей ВДВЭ («) на концентрацию липидов плазш крови (мг/дл)

АР0В-ХЬа1 АР0В-ЕСОК1 АРС8-Мзр1 ' ДПЛ-РУи2

X- Х+ Е- Е+ М- М+ Р- Р+

1 Б -1.83 2.58 7.23 -0.75е 15.74 0.02а -0.01 -0.84

К -5.67 5.97 0.77 0.37 --8.64 1.13й 1.75 -1.73

Б 3.39 -4.26 13.96 -3.09е 14.08 -б.87а -3.99 2.29

К 2.50 -4.31 -13.09 3.89е -8.91 0.92 -1.15 1.26

-ЛПВЛ К -0.78 1.09 0.55 -0.02 1.79 -0.25ь 0.15 -0.14

-НИ К -5.27 5.86 6.70 -0.40 -12.68 1.50ь 1,49 -1.64

-лпсш К 0.47 -0.88 -3.19 0.64е -1.80 0.15а -0.27 -0.53

ш<ечанке. _.Б - больные, К - контрольная группа. <0.05; ьр<0.005; ср<0.001.

тельствсм аллеля Х+ ХЬа1-ПДР8 гона ДРОВ. Эффект аллелей на уро-нь ХС-ЛПНП и ХС-ЖЮ'.И был очень незначителен. Для больных ха-ктерна аналогичная направленность аллельних эффектов этого сай-

Аллель Е+ ЕсоИ-полиморфизма практически не оказывал влияние I отклонение уровня липидов. от средних конценграций, как у боль-к, так и в контрольной группе. В то яе время аллель Е- связан с гашенным уровне!:! ХС-ЯПНП и поникенвой концентрацией ТГ в ионт->льной группе.. У больных наблюдался противоположный эффект: по-шеяие уровня ТГ и ОХС для аллеля Е-.

Псхогхая ситуация характерна й для МэрЫЩРБ, частый аллель яорого (М+) практически не оказывал влияние на отклонение от

средних значений по причине его очень высокой частоты, тогда как эффекты аллеля М- имели противоположную направленность в группе баяьных и в контроле .

Эффект аллелей Pvu2-сайта ЛПЛ очень мал, не считая некоторого отклонения от средней концентрации ТГ в группе больных, о

В целом, как и следовало ожидать, тенденции, отмеченные для аллельных эффектов, имеют хорошее сходство с закономерностями, прослеживаемыми на уровне генотипов. Рассмотренные ч этом разделе результаты позволяют говорить об относительно небольшом, но статистически достоверном вкладе исследованных генетических вариаций АРОВ (или генетических веэиаций, ассоциированных с исследованными маркерами) в изменчивость концентраций липидов плазмы крови у населения Томска, в особенности среди бсльных ИБС. Полиморфизм по EcoRl-сайту демонстрирует четкую ассоциацию с уровнем триглицери-дов, оказывая воздействие и на р«д других показателей. Тенденции к различиям в уровнях липидов, в большей или меньшей степени, отмечены и для двух других полиморфных маркеров этого локуса. Генетический полиморфизм по Руи2-сгйту в локусе липазы липопротеянов не является значимым маркером в отношении липидиого спектра.

вшож

1. ДНК-полиморфизм локусов АРОВ и Ж" у населения Томска по своим характеристикам (частоты аллелей, уровень гетерозиготности, информативность) близок к полиморфизму, наблюдаемому в европеоидных популяциях различных географических регионов. Частота редких аллелей составили: 0.446 (аллель Х- Xbal-ПДРФ АРОВ), 0.058 (аллель М+ Mspl-ПДРФ АРОВ), 0.203 (аллель Е+ LcoRl-ГГЦРФ АРОВ), 0.454 (аллель Р+ Pvu2- ЩР» ЛПЛ).

2. Между парами полиморфных сайтов АРОВ Xbal/ EcoRl и-Xbal/Mspl наблюдается гесное неравновесие по сцеплению, что позволяет рассматривать ДНК-полиморфизм этого локуса как единую систему генетических маркеров,

3. Xbai-ПДРФ АРОВ и Руи2-ПДРФ ЖШ являются умеренно информативными (PIC по 0.37), a EcoRl- и Mspl-ПДРФ АРОВ - слабоинформативными (PIC» 0.22 и 0.12 соответственно) молекулярно-генетическими к дркерами для популяции г. Томска. Трехлокусные ПДРФ-гапло-

типы АРОВ могут рассматриваться в качестве высокоинформативного (PIC = 0.59) маркера.

4. Среди больных ИБС наблюдается повышенная частота аллеля М+ и генотипа М+М+ Mspl-полиморфизма, а также достоверно реже встречаются галлотиш1 М-Х+ и М-Е+ АРОВ и генотип Р-Р- ЛИЛ, что свидетельствует о возможном участии генетических вариантов, маркируемых этими ПДРФ в генетической составляющей зтиопатогенеза ИБС. Однако, степень риска, связанная с носительством этих генетических вариантов, невысока.

5. EcoRl-полиморфизм гена АРОВ ассоциирован с уровнем триглицеридов у больных ИБС. Выявлен также статистически значимый эффект аллелей EcoRl- и Mspl-ЩРФ на уровень холестерина в составе различных подклассов липоиротеинов как у больных, так и в контрольной группе.

6. Вклтд генетических вариаций, маркируемых EcoRl-сайтом АРОВ в изменчивость патогенетически значимых для. ИБС количественных признаков составил 2.7Z для уровня холестерина и 7.67. для уровня триглицеридов в плазме крови. Вклад Xbal-полиморфизма в вариабельность различных липидных показателей варьировал от О до 1.77,, Mspl-ПДРФ - от 0 до 0.57.. Pvu2-полиморфизм гена ЛПЛ в популяции г. Томска не является значимым маркером в отношении параметров метаболизма липидов.

Список работ, опубликовавнных по теме диссертации

1. Степанов В.А., ЛемзаС.В., Пузырев В.П. Генетика нарушений метаболизма лиг.опротеинов. Томск: ТГУ. 1992. 141 С.

2. Степанов В.А., Лемза C.B. Рестрикционны'й полиморфизм гена АРОВ в популяции Томска // Генетика человека и патология. Материалы II итоговой конференции. Томск, 1992. С. 39-40.

3. Степанов В.А., Лемза C.B. XbaI-ПДРФ гила АРОВ в попульции Томска // Материалы VI съезда ВОГиС (Шнек, 23-27 ноября 1992 г). Минск, 1992. С. 133-134.

4. Степанов В.А., Лемза C.B.. Пузырев В.П. PvuII рестрикцион-ный полиморфизм гена липопротеинлипги.ы // Генетика. 1993. Т. 29. N 6. С. 1050-1052.

5. Степанов В. А., Карпов P.C., Федоров. А.Ю., Пузырев В.П. Мо-лекулярно-генетические маркеры подверженности к ишемической болезни сердца // Вторичная профилактика и восстановительная терапия в

кардиологии. Тезисы докладов ассамблеи кардиологов СНГ ( Томск, 14-15 октября 1993). Томск. 1993. С. 71-72.

6. Stepanov V.A., Lemza S.V. PvuJI restriction fragment length polymorphism at the lipoprotein lipase gene in Russians from West Siberia // Human Heredity. 1993. V. 43. Мб. P. 388°390.

7. Степанов В. A., Пузырев В.II. Молекулярно-генотические подходы к формированию групп с повышенным риском развития ИБС // Материалы конференции "Актуальные вопросы профилактикл неинфекционных заболеваний" (Москва, 14-16 декабря 1993). Москва, 1993. Т.1. С. 83.

8. Stepanov V.A., Puzyrev V.P. A study of apolipoprotein В gene polymorphism in a Russian population // Human Biology. 1994. V. 66. N. 3. P. 527-531.

9. Степаноз В.А.. Пуэырев В.П. Полиморфизм ДНК в области кандидата« генов атеросклероза//Первый (третий) Российский съезд медицинских генетиков. Тезисы докладов. Москва, 1994. С. 54.

10. Stepanov V.A., Puzyrev V.P. DMA polymorphisms of the apolipoprotein В gene in patients with premature coronary artery disease // Eur. Heart J. 1994. V. 15. Abstract Supplement. P. 420.

11. Степанов В. A., ЛемзаС.В., Пузырев В.П. ДНК-полиморфизм генов АРОВ и ЛИЛ у больных ИБС. Материалы конференции "Геном человека-^!". Мос:'.ва, 1904. С. 95.

12. Одинокова О.Н., Степанов В.А. Молекулярно-генетическое изучение наследственных болезней в Сибири •// Генетика. 1994, Т. 30. Приложение. Материалы 1-гс съезда ВОГиС (Саратов, ¿0-25 декабря 1994 г.). С. 112.

13. Степанов В.А., Пузырев В.П., Лемза С.В., Карпов Р.С., .Федоров А. КЗ. Взаимосвязь структурных вариантов генг. аполипопротеина В с щемической болезнью сердца и уровнем липидов плазмы крови // Генетика. 1995. Т. 31. N3. С. 405-409.

14. Степанов В.А., Пуэырев В.П. Молекулярно-генетические маркеры ишемкческай болезни сердца // Бюллетень Томского научного це-'.тра РАМН. 1935. Вып. i