Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Дикорастущие растения флоры Юга России как источник ценных фитокомпонентов с противомикробными и биорегуляторными свойствами

ВАК РФ 03.02.01, Ботаника

Автореферат диссертации по теме "Дикорастущие растения флоры Юга России как источник ценных фитокомпонентов с противомикробными и биорегуляторными свойствами"

Па правах рукописи

Сухенко Людмила Тимофеевна

ДИКОРАСТУЩИЕ РАСТЕНИЯ ФЛОРЫ ЮГА РОССИИ

КАК ИСТОЧНИК ЦЕННЫХ ФИТОКОМПОНЕНТОВ С ПРОТИВОМИКРОБНЫМИ И БИОРЕГУЛЯТОРНЫМИ СВОЙСТВАМИ

Специальности: 03.02.01 - ботаника 03.01.06 - биотехнология (в том числе бионанотехнологии)

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

1 і і I Г Ц^І

Астрахань-2012

005018634

Работа выполнена на кафедре биотехнологии и биоэкологии Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Астраханский государственный университет»

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Шахмедова Галина Сафяровна

доктор биологических наук, профессор Дзержинская Ирина Станиславовна

доктор биологических наук, доцент Фельдман Бронислав Владимирович

Ведущая организация:

Учреяедение Российской академии наук Институт физиологически активных веществ РАН

Защита диссертации состоится «27» 04 2012 г. в 10.00 часов на заседании Диссертационного совета Д 212.009.10 при Астраханском государственном университете по адресу: 414000, Астрахань, пл. Шаумяна, 1, Естественный институт АГУ.

Тел./факс: (8512)51-82-64 E-mail: sovetei@rambler.ru

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Астраханский государственный университет»

Автореферат разослан «¿3» ОЗ) 2012 г.

-Федотова А.В.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Одним их важнейших направлений современной биологической науки является использование биообъектов или их молекул в промышленном производстве полезных для человека и животных веществ, а так же в производстве лечебно-профилактических и диагностических препаратов из природных натуральных, в том числе растительных компонентов (Тихонов, 2008).

В последние десятилетия заметно возрос интерес к проблеме поддержания и восстановления микроэкологического статуса человека. Для этих целей все шире используют натуральные безопасные растительные фитопрепараты. Повышенное внимание к фитопрепаратам вызвано ростом контингента лиц, страдающих от применения химических антибиотиков и требующих коррекции состояния организма с помощью фитопрепаратов (Никитина, 2009; Виссарионов, 2008). Актуальность использования лекарственных растений неизмеримо возросла в последние десятилетия, что обусловлено множеством терапевтических неудач при использовании химических антибиотиков и терапевтических препаратов, по данным ВОЗ 2,5-5% госпитализированных составляют больные с лекарственными осложнениями (Нестерова, 2008; Виноградова, 1999).

Астраханская область обладает уникальным природно-ландшафтным положением и климатическими особенностями, определяющими особое экологическое состояние окружающей среды. Экологические особенности региона связаны с повышенным уровнем инсоляции, крайне низкой влажностью воздуха, засушливыми глинисто-песчанными почвенными ландшафтами Приволжских песков среди многочисленной сети рукавов, протоков, ильменей Волго-Ахтубинской поймы и дельты Волги в целом (Щучкина, 1996; Пилигенко, 1996,2003; Бармин, 2001; Чуйков, 2000).

В силу сложившихся природно-экологических условий здесь успешно уживаются как пустынно-песчанные, так и тропические представители флоры. Таким образом, на территории Астраханской области создана уникальная природно-ландшафтная обстановка с неоценимым разнообразием видов и представителей флористического состава. Все эти природно-экологические особенности региона могут создавать условия для формирования у дикорастущей флоры повышенных концентраций биологически активных веществ, обладающих и противомикробной активностью (Муравьева, 2002; Пилипенко, 1996). Поэтому, актуальным является изучение биологического разнообразия растительности, особенно лекарственных видов и других, уникальных по свойствам и биологическим характеристикам дикорастущих растених Приволжского и Прикаспийского региона и биотехнология их использования для пищевой, косметической, фармацевтической промышленности (Абрамова, 1988; Бабоша, 2008; Казаринова, 2000; Корсун, 1998; Кошгоян, 1981; Демченко, 2006; Вичканова, 1983,2000; Виссарионов» 2008; Будаева, 2005; Баронец, 2001; Ягодка, 1991;Чиков, 1977; Муравье, 1976;Лахтан, 1988).

Эффективность растительных препаратов определяется совокупностью и биологической активностью многих лекарственных растений и свойств химических веществ, входящих в их состав (Бондаренко, 2003; Шендеров, 2005; Феклисова, 2007). Специалисты в области фитотерапии пытаются повысить биологическую активность растительных терапевтических средств за счет разработки комплексных препаратов на основе специально подобранных растительных композиций. Успешно применяются сочетания компонентов противомикробного или иного действия для комплексной химиотерапии, а также при добавлении фитокомпонентов в продукты лечебной косметологии, в качестве физиологически активных пищевых добавок и препаратов (Вичканова, 2007; Taxa и др., 2009; Шакирова, 2007). Группа специалистов в области разработки проти-вомикробных растительных препаратов считают, что актуальность создания оригинальных антимикробных средств нехимической «иной» природы с новыми растительными свойствами природных компонентов и другим механизмом действия не вызывают сомнений (Van Damme, 1988; Pan, 2002; Вичканова, 2009). В связи с этим в последние годы осуществляется новый виток приобщения косметологии, медицины и фармакологии к средствам растительного происхождения.

Цель работы Обоснование ботанической и биотехнологической роли дикорастущих растений флоры Юга России как источника ценных фитокомпонентов с проти-вомикробными, иммунопротективными, дерматопротекгивными и другими биорегуля-торными свойствами.

Основные задачи работы.

1. Обосновать концепцию сравнительного анализа высокой противомикробной активности веществ растений природного комплекса Юга России, в том числе Северного Прикаспия и юго-востока Восточно-Европейской равнины, Прикаспийской низменности (Астраханской области).

2. Охарактеризовать особенности распространения и запасов некоторых отобранных наиболее перспективных дикорастущих лекарственных растений на территории Астраханской области.

3. Провести скрининг противомикробной активности дикорастущих растений Астраханского региона с целью отбора наиболее перспективных для биотехнологии получения из них фитопрепаратов.

4. Оценить особенности отбора и сохранения растительного лекарственного сырья, экстрагировашя наиболее активных противомикробных биологически активных веществ, исследования химического состава и свойств фитокомпонентов отобранных растений. Разработать требования к сырью (включая вопросы его предварительной обработки).

5. Отработать оригинальные методики экстрагирования противомикробных компонентов растений. Обосновать теоретические и прикладные вопросы использования дикорастущих лекарственных растений региона в перспективных практических направлениях современной биотехнологии.

6. Осуществить комплексные исследования технологий извлечения ценных фитокомпонентов и противомикробной активности растительного сырья с целью создания препаратов для профилактики некоторых инфекционных процессов.

7. Определить влияние растительных биокомпонентов на формирование и функционирование ряда микробных сообществ: сапрофитных, некоторых патогенных, условно-патогенных микроорганизмов в окружающей среде и в экспериментальных условиях (регулирование микробиоценоза кишечника, регулирование водной микрофлоры).

8. Обосновать биотехнологию выделения лектиновых белков из растений и осуществить исследование лекгинсодержащих компонентов в растительных экстрактах с использованием синтетических лекгинсвязываюших углеводных бактериальных гаптенов как одного из механизмов растительной защиты от патогенов.

9. Разработать из экспериментально выделенных фитокомпонентов, содержащих растительные (фитолсктиновые) фракции, фитопрепараты для профилактики инфекционных процессов с противотуберкулезной, противолепрозной, противостафилококко-вой и другой степенью активности.

10. Обосновать биотехнологию выделения ценных фитокомпонентов для получения натуральной биотехнологической продукции в качестве пищевых добавок, фитос-редств для профилактики и комплексной фитотерапии, косметических лечебных фитопрепаратов, фитонаборов для очистки воды.

11. Провести испытание фитопрепаратов и фитонаборов с целью подтверждения их биоактивных свойств: антимикобактериальных, иммунопротективных, адгезивных, дерматопротективных, пребиотических и других свойств.

Основные положения, сыносимые на защиту

1. Природно-экологические особенности региона способствуют значительному формированию противомикробных компонентов в дикорастущих растениях. Обоснованы распространение и запасы некоторых лекарственных и дикорастущих растений с выраженными противомикробными и биорегуляторными свойствами в Астраханской области, входящей в природный комплекс Северного Прикаспия и Юга России (Юго-Востока европейской равнины в пределах Прикаспийской низменности).

2. Особенности локального распространиия многих дикорастущих растений региона, высокие уровни ценных биологически активных веществ и результаты скрининга противомикробных свойств позволили провести отбор наиболее значимых растении региона для биотехнологии получения ценной фитопродукции.

3. Обнаруженные в растениях региона природные растительные белковые компоненты (фитапектины) обладают иммунобиологическими свойствами, неоценимыми в получении фигокомпонентов для иммунопрофилактики и прогивоинфекциоппой терапии.

4. По механизмам действия противотуберкулезной, противоле проз пой и другой ripo-тивомикробной активности in vitro и in vivo экстрагируемые компоненты GlycyrThiza glabra (L.), Achillea micrantha M.B., Helichrysum arenarium (L.) Moench являются наиболее ценными из изученных дикорастущих растений региона.

5. Раскрыты механизмы прагивомикробной самозащиты дикорастущих растений с участием лектинсодержащих комплексов в условиях природной среды, что можег явиться одним из факторов иммунитета растений.

6. Разработана технология получения и предложены способы использования ценных фитокомпонентов для дальнейших научно-теоретических исследований и применения их в биотехнологии создания противомикробных фитопрепаратов с биорегуля-торными свойствами.

Научная новизна. Проведена оценка запасов ценного растительного сырья и распространения перспективных для биотехнологии дикорастущих растении региона с проти-вомикробными и биорегуляторными свойствами.

Впервые разработана концепция сравнительного анализа антимикробной активности дикорастущих растений Юго-Востока европейской част России с целью создания технологии получения ценных фитопрепаратов с антибактериальной и иммуиопро-тективной направленностью.

Предложены пути выделения ценных природных растительных белковых компонентов (лектинов) растений, показаны иммунобиологические свойства данных фито-лектинов и возможности их использования в иммунопрофилактике и противоинфекцн-онной терапии.

Впервые разработана оригинальная технология выделения и создан препарат из корня солодки голой с противотуберкулезной (патент № 2362577 or 18.05.2007, № госрегистрации ЗО.АЦ02.009.У.000001.06.10 от 30.06.2010 г) и прогиволенрозпой (патент № 241111 от 29.07.2009) активностью.

На базе уникального биотехнологического процесса разрабо тана рецептура и технология получения новых поликомпонентных субстанций для лечебной косметики и получена серия фитобальзамов для регенерации кожи (патент №2369377 от 29.07.2008, ТУ 9197-006-38989935-08).

Совместно с НИИ по изучению лепры (Астрахань) разработаны рецептуры и методы клиничесюго применения фитопрепаратов на основе корпя солодки голой, соцветий тысячелистника мелкоцветкового и цмина песчаного для комплексного лечения лепры, ее профилактики и снижения риска заболевания лепрой (патент №241111 от 29.072009).

Получены результаты по усилению иммупопротективпой активности перитоне-альных макрофагов (их миелопероксидазной активности) при лечении микобактерио-зов (туберкулеза и лепры) фитопрепаратами.

Изучены и предложены новые варианты выделения растительных лектинов и их активность в отношении некоторых условно-патогенных и патогенных бактерий.

Представлены возможные пути применения растительных поликомнопенгов и монофитопрепаратов для применения в практике восстановления кишечных микробиоценозов (фитобиотики) и лектинов для выведения углеводсодержшцих токсинов и наркотических веществ и их метаболитов из организма больных.

Выделены биоактивные растительные субстанции из корня солодки голой для апробации и первичных испытаний в клинической практике поликомпонентных фитопрепаратов при ряде вирусных инфекций и туберкулеза.

Разработаны оригинальные рецептуры новых, натуральных фитопрепаратов для разработки лечебной косметики, создания пищевых добавок, фигобиотиков, консервантов и регуляторов вкуса, фарм-фито-препаратов, для дополнительной фитотерапии при некоторых инфекционных процессах, препаратов для микробиологической очистки воды.

Теоретическая значимость работы. Обобщены теоретические направления изучения аспектов формирования биологически активных веществ противомикробного действия у растений региона в природе и агрокомплексах.

Проведен скрининговый анализ противомикробной активности ряда ценных растений изучаемого региона.

Разработаны научные основы применения стандартных фитокомпонентов для изучения механизмов их антибиотической и иммуннорегуляторной активности на молекулярном, клеточном и организменном уровне.

Изложены аспекты влияния биотических факторов на формирование сообществ патогенных, условно-патогенных микроорганизмов в окружающей среде.

Изложены теоретические проблемы изучения аспектов формирования биологически активных веществ с противомикробным действием у растений Юго-Восточного региона европейской части России. Изучены природно-экологические особенности формирования противомикробных компонентов в растениях и запасы в природном комплексе региона. Исследованы и предложены биотехнологические особенности выделения и извлечения из растений противомикробных компонентов различного состава Представлены результаты исследования in vitro и in vivo противотуберкулезной, проти-волепрозной и другой противомикробной активности экстрагируемых компонентов некоторых растений.

В работе раскрываются научные основы применения стандартных фитокомпонентов для дальнейшего использования противомикробных фитопрепаратов в производстве пищевых, медицинских, ветеринарных и парфюмерно-косметических биопрепаратов. Охарактеризованы основные противомикробные, антимикобактериальные, имму-нопротективные, гиппо- и антиаллергенные компоненты растений Астраханской области. Оценены запасы лекарственного сырья в Астраханском регионе, доступные и оригинальные способы экстрагарования. Определены ареалы распространения и места возможных сборов растений с ценными свойствами, что делает Астраханскую область вполне достойным регионом с лекарственным растительным потенциалом.

Практическая значимость работы. Изучены и охарактеризованы запасы растительного сырья некоторых лекарственных растений Астраханской области.

Определены наиболее значимые растения региона для биотехнологии создания оригинальных фитопрепаратов.

Исследованы и предложены биотехнологические схемы выделения и извлечения из растеши противомикробных компонентов различного состава.

Исследованы и разработаны требования к сушке, сохранению и извлечению биологически активных компонентов с противомикробными, иммунопротективными, адаптогенными свойствами.

Представлены основные пути использования растений и их противомикробных веществ в биотехнологии создания физиологически активных компонентов для профилактики инфекционных процессов, в качестве консервирующих добавок к пище, добавок в косметической продукции, препаратов для санигарно-экологической очистки воды.

Выявлены механизмы накопления растениями высоких концентраций биологически активных веществ, в том числе антимикробных. Определены методы извлечения этих веществ оригинальными несложными способами, что позволило получить образцы фитопрепаратов с высоким антимикобактериальным, противостафилококковым и иммунонрогсктивным эффектом.

Разработана научно обоснованная стратегия использования дикорастущих растений региона, выделения и изучения ценных растительных компонентов и разработки новых технологий получения оригинальных фитопрепаратов для оздоровления окружающей среды и организма человека.

Отработаны оригинальные методики экстрагирования противомикробных фракций, созданы новые формы фитопрепаратов и фитобальзамов на основе компонентов противомикробных веществ, выделенных из лекарственных растении Астраханского региона.

Подготовлены для выпуска коммерческие формы фитопрепаратов с антибактериальной активностью: фитокапли «ГЛИЦИРФИТ» и фитобальзамы для регенерации кожи «ИНСОФИТ».

Внедрение результатов работы в практику. Доказана эффективность разработанных фитокомпозиций путем проведенных клинических испытаний противотуберкулезной и противолепрозной активности препарата « Экстракт солодки «ГЛИЦИРФИТ" в НИИ по изучению лепры г. Астрахань и на кафедре туберкулеза Астраханской государственной медицинской академии (АГМА) г. Астрахань.

Проведены испытания и получены отзывы специалистов на косметический фитопрепарат «фитобальзам для регенерации кожи «ИНСОФИТ».

Предложен методический подход для создания фитокомпозиций в практике косметологии, фитотерапии и фитопрофилактики и пищевых добавок.

Полученные результаты позволяют обосновать перспективност ь создания на основе дикорастущих растений с лекарственными свойствами новых лекарственных форм с антимикобактериальной и иммунопротективной активностью для больных лепрой и туберкулезом.

Созданы композиции фитолектиновых фракций экстрактов растений для применения в качестве фитобиотиков и адсорбентов углсводсодержащих наркотических метаболитов и токсинов. ;

По результатам комплексных опытно-промышленных исследовании разработана и утверждена нормативная документация для организации производства препарата «Экстракт солэдки «ГЛИЦИРФИТ» и серии фитобальзамов «ИНСОФИТ».

Разработаны и утверждены технологические условия (ТУ) и технический регламент на ряд биопрепаратов из растений с антимикробными свойствами, осуществлены госрегистрации, получены санитарные разрешения для производства.

Создано предприятие по научно-практическому изучению и применению растительных противомикробных компонентов и предприятие по сбору и созданию активных фармацевтических субстанций из корня солодки и других перспективных растений Астраханской области.

Апробация работы. Основные результаты диссер тации доложены и обсуждены на российских и международных конференциях, симпозиумах, сьездах и конгрессах: ежегодных научных всероссийских и международных конференциях Астраханского государственного университета (АГУ) (Астрахань, 1991-1999 2000-2010 гг.), ежегодных международных конференциях «Эколого-биологичсские проблемы Волжского региона и Северного Прикаспия» (Астрахань 2000-2010 гг); Всесоюзная конференция «Астраханский край: История и современность» (Астрахань, 1997); Всесоюзная научная конференция «Азотосодержащие гетероциклы, синтез, свойства, применения» (Астрахань, 2000); Международная научная конференция «Биотехнология на рубеже двух тысячелетий» (Саранск, 2001); Всесоюзная конференция «Проблемы строительства, инженерного обеспечения и экологии городов» (Пенза, 2001); VII международная конференция «Математика. Компьютер. Образование» 31 января- 5 февраля (Пущипо, 2001); Международная конференция «Фитопатогенные бактерии, фитонцидология. Ал-лелопатия» (Киев, 2005); Международная конференция «Аллелопатия. Фитонцидология» (Киев, 2006); Международная конференция «Биоресурсы биотехнолопш, экологического безопасного развития регионов Юга России» (Сочи, 2007); 1-й международной

конференции по изменениям среды Каспийского региона 24-25 августа (Балбосар, Иран, 2008); 15-м Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство». (Москва, 2008); Международной научно-практической конференции, посвященной 60-летию института по изучению лепры и 85-летию противолепрозной службы России (Астрахань, 2008); Международном конгрессе по биотехнологии (Москва, 2008); Международной научно-практической конференции «Биотехнология. Вода и пищевые продукты 11-13 марга (Москва, 2008); Международной конференции с элементами научной школы для молодежи «Экокультура и фитобиотехнологии улучшения качества жизни на Каспии» 7-10 декабря (Астрахань, 2010); выставке Каспийского инновационного форума 8-9 февраля (Астрахань, АГУ, 2009); Каспийском инновационном форуме «Инновации для бизнеса» 22-23 апреля (Астрахань, АГТУ, 2010); на 5 съезде биотехнологов России им. Ю.А. Овчинникова 14-16 октября (Москва, 2008), в научно-практическом семинаре с международным участием «Настоящее и будущее биотехнологии в решении проблем экологии, медицины, сельского, лесного хозяйства и промышленности» 18-20 мая (Ульяновск, 2011) в Российско-японском центре (Москва, 2011), 4-м международном конгрессе европейских микробиологов в Женеве «4th Congressof European Microbiologists» (Швейцария) 26 - 30 июня (2011), VII международной научной практической конференции «Новината за напрсднали паука-2011» 04-06 сентября (София, 2011); VII научной конференции «Efektivni nastroje modernich Ved - 2011» 27апреля-05 мая (Прага, 2011).

Публикации. Опубликовано 140 печатных работ, в том числе по теме диссертации 90, из них 19 статей в ведущих рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК РФ для опубликования результатов диссертационных работ, 6 в зарубежной печати, 4 патента, монография в соавторстве.

Объем и структура диссертации. Работа состоит из введения, материалов и методик, 13 глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы из 572 источников, в том числе: 329 отечественных работ и 243 зарубежных. Диссертация изложена на 362 страницах основного текста, содержит 162 рисунка и 86 таблиц.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Объектами исследований являлись растения, обладающие по информационным данным противовоспалительными, восстанавливающими, противомикробными свойствами. Известно, что многие лекарственные растения содержат химические вещества, обладающие противомикробной активностью (флавоноиды, терпеноиды, эфирные масла, спирты, смолы, дубильные вещества, фенольные соединения, фитонциды, аллицин, рафанин, хамазулен и многие другие), многие из которых проявляют избирательную противомикробную индивидуальную активность, но и в комплексе формируют бактерицидное действие (Вичкапова, 2001). В связи с этим в последнее время актуальным оказалось исследование лекарственных свойств многих растений дикорастущей флоры с противомикробными, иммупомодулирующими и иммуногенными свойствами, имеющих в составе не только известные науке активные вещества с антибактериальным действием, но и некоторые белковые соединения (лекгины), которые являются аналогами антител животных и человека.

Материалы, методы и объем проведенных исследований

Среди конспекта флоры дельты Волги многие авторы перечисляют некоторые виды изучаемых родов растений с известными из литературы противовоспалительными и антибактериальными свойствами (Пилипенко, 2003). Для отработки скрининга и других исследований использовались сборы растений sem. Asraceae Dumort, Рог. Asterales: Тысячелистник тонколистпый (Achillea leptophylla Bieb.), тысячелистник мелкоцветковый (Achillea micrantha Willd.), тысячелистник обыкновенный (Achillea millefolium L.), цикорий обыкновенный (Cichorium intybus L.), цмин песчаный (Heiichrysum arenariwn (L.)Moench), Ромашка аптечная (Matricaria chamomilla L), Календула лекарственная (Calendula officinalis L)\ семейства бобовых (Fabaceae): Софора японская (Sophorae

japonicae) (соцветия и плоды), Робиния псевдоакация (Robinia pseudoacada L.) (соцветия и плоды), Солодка голая (Glycyrrhiza glabra) (плоды и листья), Солодка ежовая (Glycyrrhiza echinata L.) (плоды, соцветия и листья), Донник лекарственный (Melilotus officinalis (L.)Pall.) (соцветия, листья), Клевер луговой (Trifolium pretense L.) (соцветия), Гледичия обыкновенная (Gleditsia triacanthos) (плоды); семейства липовых (Tiliaceaej: Липа мелколистная (Tiliacordata Mill) (соцветия и плоды);семейства ивовых (Salicaceae Mirb.): тополь черный (Populus nigra. L.) (почки, кора). Использовали штаммы тесг-культур из коллекции клинических штаммов условно-патогенных микроорганизмов: Pseudomonas aeruginosa PMFK -В 30, Bacillus subtilis (IPH), Staphylococcus aureus PMFK- В 30, Escherichia coli MG 1655, предоставленных московским научно-практическим центром борьбы с туберкулезом департамента здравоохранения г. Москвы. Штаммы тест-культур из коллекции музейных культур Роспотребнадзора АО РФ: Pseudomonas aeruginosa 1315, Escherichia со!ИЗ\4 Staphylococcus aureus 27, Staphylococcus epidermidis 537. Штаммы из Всероссийской Коллекции Промышленных микроорганизмов ФГУП ГосНИИГенетика, Москва: Escherichia coli СК ВКПМ В-191, Staphylococcus aureus subsp. aureus ЗА ВКПМ В-1899, Bacillus subtilis ВКПМ В-1919, (модифицированный). Штаммы культур микобактерий Mycobacterium lufu-культивируемого штамма, Mycobacterium leprae, выделенных от больного лепрой лепроматозного типа и пассированных трехкратно на экспериментальных животных, музейный штамм Mycobacterium tuberculosa H37RV из музея НИИ по изучению лепры. Для изучения кишечного микробиоценоза использовали: пребиотик «Лактусан», пробиотик «Колибактерин», приобретенные в аптечной сети, фитопрепарат - «экстракт солодки «ГЛИЦИРФИТ». Использованы коллекции бактерий Областной бактериологической лаборатории (Астрахань): штамм Esherichia coli М-17, штамм бифидобакгерии Bifidobacterium bifidum ps., дрожжеподобные грибы рода Candida albicans 885/653, патогенный гемолитический стафилококк Staphylococcus haemolyticus 8. В эксперименте использовали 520 мышей линии СВА сопоставимых по массе и условиям содержания, 150 крыс линии ВИСТАР. Животных содержали в соответствии с правилами Европейской конвенции (Страсбург 1986). Испытания препаратов проводили согласно руководству ВОЗ (Geneva 1987). Использованы синтетические лектинузнающие углеводные гаптены Lec-ПАА, Gal-ПАА, Bdi-ПАА, Btri- ПАА, предоставленные ИБХ им ММ. Шемякина и Ю.А. Овчинникова.

Используемые методы: Ботанические: Учет запасов сырья проводился методом закладки пробных площадей (Крылова, Шретер, 1971; Миркин, 1974). Запас рассчитывали по величине нижнего предела урожайности (Методика определения урожайности, 1986, Крогулевич, 2000). Проводили морфометрические исследования экземпляров растений (Абрамова, 2001). Были выбраны следующие методы сушки для изучения оптимальной сушки каждого вида растительного сырья (Бузук, 1991). Этапы жизненного цикла и возрастного состояния, характеристика роста надземной части растения, морфология корневой системы определялись по методикам Корчагина (1960), Шалыт (1960), Красильникова (I960), Левина (1966), Серебрякова (1952,1964), Левиной (1960, 1981, 1987). Микробиологические: Противомикробные исследования проведены известными доступными методами: метод дисков или прямой диффузии в агаровую среду -метод ДЗЗР, метод подавления роста колоний на питательной среде живых колониеоб-разующих микробных клеток (метод КОЕ), бактерицидную активность эфирных масел определяли методом серийных разведений в 0,5 мл питательного бульона, (Струкова 2003). Животных заражали интраплангарно согласно модели лепры Шепарда (Shepard, 1960). Метод выращивания микобактерий на жидкой питательной среде Школьнико-вой. Метод определения микрофлоры воздуха свободным оседанием-метод Р. Коха (Методики клин. лаб. иссл., 2009).0крашивали микобакгерии по методу Циля-Нильсена. Количество М. leprae в лапках мышей подсчитывали методом Shepard и McRae (1968). Биотехнологические: методы извлечения активных компонентов и химических веществ растений (Пономарев, 1976), методы выделения лектиновых компо-

нентов растений (Тихомирова, 2003), методы исследования лектиновых соединений с использованием синтезированных углеводных лектинузнающих гаптенов (Карпунина, 1999), технологии производства фитопрепаратов из растений, изучение пребиотических свойств фитопрепаратов. Биохимические, фармацевтические: Способом мацерации проводились экстрагирования биологически активных компонентов, содержащихся в различных группах растений. Сравнение экстрактов растений с химическими соединениями противомикробной направленности из ряда оксидиазолов и карбаматов (Сухен-ко, 2003). Контролем был раствор этилового спирта 40% и некоторые традиционные антибиотики. Исследование адсорбционной и адгезивной способности приготовленных буферных экстрактов проводили методом анализа токсинов в тонкослойной хроматографии (Еремин и др., 1993). Иммунологические : Определение лектинов в экстрактах проводили в агаровом геле по методу Оухтерлоне, метод определения активности пе-ритонеальных макрофагов (Методические рекомендации, 1975) и фагоцитов (Маслов, 1998), метод определения миелопероксидазной активности макрофагов и уровня активности миелопероксидазы (Шатров и др., 1985). Персистенцию в цитоплазме микобак-терий лепры и туберкулеза (Маслов 1998). Статистическую обработку результатов всех исследований проводили с использованием компьютерных программ Excel 2000 (Microsoft Inc., 1999), Statistica for Windows, v. 5.0 (Stat Soft Inc., 1995), рассчитывая среднюю арифметическую, доверительные интервалы, стандартное отклонение. Достоверность различий между средними величинами оценивали с использованием t-критерия Стьюдента (Р<0,05).

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ Представлены сравнительные результаты оценки противомикробного действия ряда растений, взятых на территории Астраханской области (АО), Волго-Ахтубинской поймы и других регионов Юга России в отношении некоторых условно-патогенных тест-микроорганизмов. Выбраны наиболее предпочтительные растения по выразительной избирательной противомикробной активности и локальной распространенности для биотехнологии и создания препаратов с целью оздоровления окружающей среды и организма человека и животных.

Изучение противомикробной активности растений АО. Сравнительные бактерицидные характеристики растений АО и их скрининг.

Результаты скрининга противомикробной активности растительных экстрактивных компонентов в отношении тест-микроорганизмов были проведены в многочисленных исследованиях на культурах музейных штаммов Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Pseudomonas aeruginosa, Escherihia colt, представлены в диаграммах, (рисунки 1,2,3,4).

активность растений npoivfô S. aureus

Atriplex tatarica трава Glycyrrhizaechinata лист Glycyrrhiza echinata пл Bidens tripartita лист Tanacetum vulgare cou Matricaria chamomilla cou Helichr/sumarenarium соц Achillea riTicranta cou Achillea millefolium трао

Гентамицин

s ДЗЗР под воздействием экстрактов растений Рис. 1. Активность ряда растений в ДЗЗР (мм) против Staphylococcus aureus Обнаруженные достоверные мониторинговые показатели ингибиции возможно выявили приоритеты противостафилококковой активности после антибиотика гента-

мицина растений Achillea micranta, Heiichrysum arenarium, Artemisia lerchiana, Calendula officinalis, Achillea millefolium, Glycyrrhiza glabra (рис. 1). Активность против Pseudomonas aeruginosa (рис. 2).

активность растений против Pseudomonas aeruginosa

Glycyrrhiza glabra соц Molilotus officinalis соц Tanacetum vulgare лист Kochia prosirata трава Helichrysum arenarium трав Achillea millefolium лист Генталлицин

,9.5

10.4

_2Д

3.8

15.6

iL.

■ ДЗЗР Pseudomonas aerueinosa пол воздействием экстоактов оастений

Рис. 2. Активность ряда растений в ДЗЗР (мм) против Pseudomonas aeruginosa

Как видно, чувствительность Pseudomonas aeruginosa носит выраженный скрининго вый характер в отношении ряда растений как дикорастущих Achillea micranta, Helichrysum arenarium, Artemisia lerchiana, так и отчасти известных лекарственных культивируемых аптечных форм, таких как Calendula officinalis, Achillea millefolium (рис. 2).

Активность растений против Escherihia coli помещены на рис. 3. активность растений npoine Е. coli

Robinia pseudoacacia пл П v ^ 3

Robmia pseudoacacicou | Q g ^

Melilotus officinalis соц 1 " " ^ Kochia prostata трава i; ........^2.4 ,-

Helichrysum arenarium... j ........ ....... 1Q.V"3 g

Acbillia micranta лист Jj ~ - 10

Achillea millefolium соц | ■ ' —10 _

■ ДЗЗР под действием экстрактов растений

Рис. 3. Активность ряда растений в ДЗЗР (мм) против Escherihia coli При изучении влияния сравниваемых экстрактов на рост штаммов кишечной палочки (рис. 3) были обнаружены результаты ингибиции бактерий в виде диаметров задержки роста культуры (ДЗЗР мм) экстрактами растений не менеее, чем действие антибиотика, среди про-тивомикробных свойств группы изучаемых растений наиболее выделялись тысячелистник обыкновенный Achillea millefolium, солодка ежовая, тысячелистник мелкоцветковый Achillea micranta, и бессмертник песчаный Helichrysum arenarium.

активность растений против St. epidermidis Atriplex tatarica

Achillea millefolium

Achillea micranta

Рис. 4. Активность ряда растений в ДЗЗР (мм) против Staphylococcus epidermidis

Helichrysum arenarium цефатоксим

цефалотин левомицетин

afl33PSt.epid.

На диаграмме показана динамика скрининговых результатов высоко эффективного антибиотика левомицетина и растений Achillea micranta, Helichrysum aremrium, не уступающих синтетическим антибиотическим веществам (рис. 4).

Некоторые перспективные растения были подвергнуты сравнительным дополнительным противомикробным исследованиям, которые подтвердили избирательность противомикробного действия.

сравнительная противомикробная активность некоторых растений

Artemisia lerchiana Achillia leptophyila Achillia micranta

■ Esc. coli

■ St. aureus

0 10 20 30 40 50

ДЗЗР под влиянием растений

Рис. 5. Сравнительная противомикробная активность ряда растений в ДЗЗР (мм) против Staphylococcus aureus и Escherihia coli Как видно (рис. 5), более выражена активность всех растений против стафилококка, особенно тысячелистника межоцветкового Achillea micranta и артемизии Artemisia lerchiam, не уступая антибиотику гентамицину, хотя против кишечной палочки так же активны тысячелистник, артемизия и антибиотик.

Многочисленные противомикробные исследования позволили провести скрининг воздействия некоторых экстрактивных веществ растений в сравнении с антибиотиками и синтезированными в АГУ химическими карбаматами и оксидиазолами, обладающими широким спектром противомикробной активности, представленные на рисунке 6.

Гентамицин 21а 16а 7а №4 №2

Гентамицин Artemisia lerchiana Achillia leptophyila Achillia micranta

■ экстр. 70% cn.

■ 1:10

шО,111111111

сравнительная противостафилококкоеая активность (ДЗЗР) Рис. 6. Сравнительная противомикробная активность ряда растений, оксидиазолов и карбаматов в ДЗЗР (мм) против Staphylococcus aureus.

На данной диаграмме (рис. 6) показана довольно выраженная положительная акшвность против Staphylococcus aureus оксидиазола -20а, карбамага-1, Artemisia lerchiana, однако наиболее высокая активность наблюдается у экстракта Achillea micranta, затем антибиотика гента-мицина, при этом титрование активных веществ экстрактов не всегда снижают эту активность (МЕ/мг).

Были отработаны дозы активности экстрактов растений рода Achillea, а так же нескольких других представителей сем. Asteraceae -^х>дов Helichrysum, Artemisia, а так же Glycyrrhiza glabra. Эти растения использовали для сравнения активности с противомикроб-ными синтетическими соединениями структуры 1, 2, 4 - оксидиазолов и некоторых карба-

матов с отработанными предварительно активными дозами. Отобранные растения исследовали методом КОЕ в отношении Staphylococcus aureus (рис. 7).

Развитие колоний S.aureus под влиянием концентраций растений (КОЕ).

Рис. 7. Сравнительные минимальные активные концентрации (МИК- минимальные ин-гибирующие концентрации) отобранныхрасгений в отношении Staphylococcus aureus в

методе КОЕ.

В данных исследованиях (рис. 7) показаны сравнительные результаты минимальных активных концентраций растительных экстрактов, способных подавлять микробные клетки в суспензиях стафилококка в сравнении с развитием Staphylococcus aureus без воздействия. Как видно, наибольшее влияние оказывают растительные экстракты в концентрации 1:1 с суспензией, а присутствие экстрактов растений в питательной среде полностью подавляют этот цггамм S. aureus.

В исследованиях стабильности действия активных компонентов экстрактов на микроорганизмы было обнаружено пролонгированное ингибирующее влияние (рис. 8,9).

12 3 4 5 время, дни

время, дни

Примечание: ряд1 - Achillea micranta, ряд 2 - Helichrysum aremrium, ряд 3 - Matricaria

chamomilla., ряд 4- Calendula officinalis, ряд 5 - гентамщин.

Рис. 8. Активность против S. aureus Рис. 9. Активность против Е. coli

Как видно на диаграммах (рис.8, рис.9), ингибирующая активность некоторых растений не уступает активности традиционного антибиотика, причем акшвноегь Achillea micranta, Helichrysum arenarium не падает в течение времени наблюдения, что может быть одним из факторов отсутствия у микроорганизмов лекарственной устойчивости к растительным противомик-робным соединениям.

Эфирные масла растений являются сложными смесями различных органических соединений, среди которых основную группу составляют вещества с изопреновой структурой. Присутствуют монотерпены, сесквитерпены, реже - ароматические и алифатические соединения, иногда терпены и их производные. Изучены минимальные ингибирующие концентрации эфирных масел изучаемых растений в отношении тест-микроорганизмов (таблица 1).

Таблица 1. Показатели МИК (минимальных ингибирующих концентраций) эфирных масел против тест-микроорганизмов В. subtüis, Е. coli. S. aureus._

Эфирные масла Влияние эфирных масел растений в разных дозах мкл/мл на рост и дыхание культуры бактерий

В. subtilis 1 Е. coli S aureus

10 5 is 1,25 0,63 031 10,0 5,0 2,5 105 0,63 031 10,0 5,0 2,5 1Д5 0,63 031

Robinia oseudoacacia + + + ± ± ± + + * • - + - - - ± -

Sophora japónica + ± ± ± ± ± +

Lophantus anisatus + + + - - + - * - - - + + + + + -

Artemisia lerchiana + + + + - + - - - - + + + + - -

Artemisia austriaca + 't- - - - + + ± - - + -

Helichrysum renarium + + + - • - - + ± - - - -

Achillea micranta + + + + * - - + + + + - -

Примечание:«^» - рост и признаки дыхания культуры отсутствуют, «±» - очень слабый рост и дыхаие, «-»- активный рост и дыхание культуры (обесцвечивание метиле-новой сини и потребление глюкозы)

В результате изучения противомикробных свойств и определения активной антибактериальной дозы (МИК) исследуемых экстрактов и эфирных масел (таблица 1) обнаружены очень разнообразные ингибируюшие свойства и минимальные ингибирующие концентрации. Однако, в целом, можно констатировать более выраженное действие всех эфирных масел в отношении исследуемых пггаммов Staphylococcus aureus, чем Escherichia coli и Bacillus subtilis.

й связи с проведением скрининговых испытаний иигибирующей активности экстрактов и химических компонентов ряда растений дикорастущей флоры региона в сравнении с культивируемыми растениями, химическими противомикробными веществами и антибиотиками возникла необходимость выделить перспективные растения для изучения распространения и запасов дикорастущих растений с уникальными свойствами данного региона. Среди предпочтительных по противомикробным свойствам и распространению среди изучаемых видов оказались:, Цмин песчаный (Helichrysum arenarium (L.) Moench), Тысячелистник мелкоцветковый (Achillea micrantha M.B.) сем. Asteraceae, а так же Солодка голая (Glycyrrhiia glabra) сем. Fabaceae. Кроме того, в некоторых случаях предпочтительными растениями оказывались Robinia pseudoacacia, Sophora japónica сем. Fabaceae, Populus nigra сем. Salicaceae Mirb. В результате многочисленных исследований было обнаружено, что среди многих растений Астраханского региона и Юга России наиболее характерными противомикробными свойствами обладают некоторые растения естественных фитоценозов, довольно широко распространенные в экологически благополучных районах Астраханской области. К числу значимых, как отмечалось выше, в результате скрининга противомихробных свойств целого ряда изучаемых растений Астраханской области и Волго-Ахтубинской поймы в целом для биотехнологии получения фитопрепаратов были отнесены Солодка голая (Glycyrrhiza glabra), частично Солодка ежовая (Glycyrrhiza echinaíd) сем. Fabaceae, Цмин песчаный (Helichrysum arenarium (L.) Moench), Тысячелистник мелкоцветковый (Achillea micrantha M.B.) сем. Asteraceae.

Изучение распространения и запасов некоторых лекарственных растений с противомикробными свойствами в Астраханской области и Юга России.

Учитывая вышеизложенное, т.е. оценку особенностей и характеристику накопления прошвомикробных лекарственных веществ растениями дикорастущей ({поры Астраханской области и выбора наиболее приоритетных растений, возникла необходимость изучения распространения и запасов дикорастущих растений с уникальным! свойствами данного региона. Среди изучаемых видов: Солодка галая (Gfycyrrhta glabra) сем. Fabaceae, Цмин песчаный (Helichysum arenarium (L)Moench), Тысячелистник мелкоцветковый (Achillea micrantha MB.) сем. Asteraceae.

По данным Пилипенко В. Н. с соавторами растительность Бэровских бугров и лугов представлена классом Glycyrrhizeteaglabrae с ассоц., а так же классом Artemisielea lerchianae (Пилипенко, 2003). Класс Glycyrrhizetea glabrae объединяет растительные сообщества, представленные по склонам, грифам и шлейфам Бэровских бугров с аллювиальными наносами. Они могут затапливаться раз в 10 лет на срок не более месяца в мае-июне. Авторы считают, что диагностическим ядро.« класса является группа ксеро-фитных, по большей части многолетних видов, из которых наиболее характерным является фрсатофит Glycyrrhisa glabra L. (Пилипенко, 2003). В фитоценозах лугов высокого уровня доминируют семейства Fabaceae, Роасеае, а в сообществе достаточно полно представлены виды сем. Asteraceae. По данным Пилипенко, прирост надземной массы лугов высокого уровня происходит за счет Glycyrrhisa ¿¡abra L. и Glycyrrhisa echinata L., которые являются макробиотиками. А видовое разнообразие и выживх-моегь сложноцветных обусловлено продуцированием огромного количества мелких семян, способных прорастать при минимальной влажности и заделке в почву. Тысячелистник мелкоцветковый относится к роду Achillea семейства Астровые (Сложноцветные) - Asteraceae Dumort. По данным Лактионова А.П. встречается несколько видов рода Achillea семейства Астровые (Сложноцветные) - Asteraceae Dumort. (Compositeu Giseke). Achillea micranla Willd.- тысячелистник мелкоцветковый (Лактионов, 2009). Achillea micranla -это многолетнее травянистое растение, с шерстистым опушением, с дважды перисто-рассеченными листьями, с цветками в корзинках серо- или золотисто-желтыми щитковидными соцветиями, гу сто расположенными, мелкими корзинками (24 мм) (Пилипенко, автореф. докт. диссерт., 2003). В тех же источниках на территории Прикаспийских (Астраханских песков) и других территориях описай Цмин песчаный (Helichrysum arenarium (L.) Moench) семейства Астровы; (Сложноцветные), Asteraceae Dumort. (Compositea Giseke) и другие виды Helichrysum. Поиски мест произрастают тысячелистника мелкоцветкового и цмина песчаного проводились в недрах крупного массива бугристо-грядовых песков, расположенного в юго-западной части Астраханской области, которые западным своим крылом вклшшваюгея на территорию Калмыкии - Приволжские (Астраханские) пески, площадь которых около 600 кв. км., что составляет седьмую часть Teppirropim Астраханской области. Рекогносцировочное обследование показало места произрастшшя тысячелистника мелкоцаеткового и цмина песчаного на территории Приволжских песков, простирающихся в Приволжском и Наримановском районах (рис. 10).

I^Pl

100

50

□ Achillea micunthj

Qllclichriiuin aienanum

Общий сухой вое Бос точили пороча •K.flÉíiuulivxoH есс Злиа>ии чороно

Рис. 10. Запасы и распространение Helichrysum arenarium и Achillea micranta

Как видно га диаграммы (рис. 10) белее продуктивным по запасам исследуемого лекарст-ваиюго сырья (соцветий) является ААШеа писгапЛа - тысячелистник мелкоцвегковый (5,73±0,4п\г), превышающий запаси НеИЛгуБит агепагшт - имина песча1юго пота» в два раза (1,8 рай) - 3,И±0,06 г/м1. Учшывая обшириую плоишь массива паков 600 тыс. га можно с уверенностью сказать, что с сырьевыми запасами выше указанных растений проблем ж предвидится.

Экспедиционные поиски мест произрастания солодки голой проводились в пойменных участках рек Ахгуба, Бахгемир, Прямая Болда и Кривая Болда и далее в пойменных лугах реки Болда и ерика Сенной и многих других местах Приволжского и Володарского района (рис. 11).

г*.

J

"ТЧ

А - Володарский р-н

Приволжсиш р-н

Рис. 11. Места исследования запасов и распространения солодки голой Володарском (А) и Приволжском (Б) районах, •...-j-участки произрастания солодки голой, изображенные розовыми полосками с указанием места обследования - гд (масштаб: 5мм-1000м), КУ - населенный пункт на карте. Устаноатение мест произрастания солодки голой в Приволжском, Икрянинском и Володарском районах показало, что она произрастает заро&лями в виде лет, курпш различной формы в пойме рек и береговой части водоемов.

Запас сырья солодки голой (Glycyrrhiza glabra) определялся на пробных пло-щадках(1кв. м) и отображен на рисунке 12.

■ - 10000

■ О

О .

с* корни И КОрНСОИЩі

побсіи

Икрі0минский район Приволжский район кілодарский район

Рис. 12. Запасы подземного и надземного сырья Как видно на диаграмме (рис. 12) запасы сырья подземных частей солодки голой превышают в Володарском районе, затем Приволжский район, наименьшие запасы наблюдались в Икрянинсюм районе исследования. В пойменной части Астраханской области солодка имеет такое распространение, что практически сырьевые запасы ее являются неограниченными.

Изучение морфометрических характеристик различных надземных и подземных органов солодки голой дати обнадеживаюшіс результаты (рис. 13).

от

* Зі

* У ,

X У

Ж

У У

□ ИкринииСкий район

□ Приоолжский район

О Володарский район

Рис. 13. Морфометрические характеристики солодки голой.

На диаграмме (рис. 13) показано, то) наибольшая сред няя высота растений на участках имела параметры от 139 ± 5,2см в Приволжском районе, хотя отдельные имели высоту до 200 см. Средняя высота растений солодки голой Икрянинского района несколько уступала (102 ± 9,02см), чю связано с засолениями участков почвы и наступлением галофитных растений. Диаметр корня и корневища отражают показатели запасов сырья. Среднее число побегов на кв. м. характеризует обилие данных растений на обширных площадях произрастания всей Волго-Ахтубинской поймы и поймы других многочисленных рукавов протоков. Морфометрические показатели подземной фитомассы солодки голой превышали в Володарском районе в 2-3 раза показатели Приволжского и Икрянинского районов, а запасы ее оказались не ограниченными (Ноздрачев, Сухенко, 2009). Сырье, подготовленное для хранения должно пройти предварительный контроль в соответствие с ГФ и ГОСТом, в связи с этим проведены исследования методов сушки, сохранности и экстрагирования сырья из надземных и подземных частей растений, отобранных в результате скрининга и исследования запасов для биотехнологии фитопрепаратов.

Подбор методов сушки, измельчения и сохранения ценного растительного лекарственного сырья.

Существуют принятые в стране единые ГОСТы для лекарственного растительного сырья в общем и специальные для индивидуальных случаев. Исходя из морфолого-анатомического строения сырья, его химического состава, степени стабильности действующих веществ, избирается тот или иной метод сушки.

Были выбраны следующие методы сушки для изучения оптимальной сушки каждого вида растительного сырья: воздушно-солнечная сушка, воздушно-теневая сушка, тепловая сушка в сушильном шкафу, влажная сушка В работе были использованы методы измельчения растительного сырья: дробление, измельчение, растирание и другие. Результаты сравнительного исследования сушки побегов и стеблей показали, чю наиболее оппшальной дтя них являете! воздушно-теневая сушка сырья для надземных органов исследуемых растений.

В результате следующих исследований были получены сравнительные показатели способов сушки подземного сырья солодки голой в исследуемых районах (Сухенко и др., 2009). Оказалось, что тепловая сушка в специальных сушильных камерах за определенный период времени удаляет меньше влага, чем воздушно-солнечная, что подтверждает мнение многих авторов (Обухов, 1963; Муравьева, 1991) о возможности высушивания корней и корневищ солодки голой воздушно-солнечным методом на открытых площадках Таким образом, наилучшими методами сушки в наших исследованиях оказались воздушно-солнечная и воздушно-теневая сушки (рис.14).

І ( Ц я*Т,

Сырой пес р

Шщ

умой в<т. Сырой пос Сухой вгч: Сы|Мой <

Овоздушно-

Рис. 14. Подбор методов сушки отобранного растительного сырья.

В результате (рис. 14), наилучшим способом сушки надземных органов оказалась воздушно-теневая, а измельченных подземных частей воздушно-солнечная сушка, так как была обнаружено оптимальная потеря клеточной влаги (14-17 %). Таким образом, технология воздушно-солнечной сушки и вентиляционного хранения корней и корневищ оказались наиболее приемлемыми дм сохранности подземного сырья солодки голой.

Подбор технологий экстрагирования растительных веществ с проговомикроб-ными и дерматопротективными свойствами и получения фитокомпонентов.

Перспективным направлением в технологии получения фитопрепаратов как в России, так и за рубежом, является разработка стандартизованных фитопрепаратов, производство которых может быть организовано в промышленных масштабах. При изготовлении водных извлечений и получения экстрактов-концентратов экстрагируемых из растений веществ можно пользоваться концентрированными растворами экстраген-тов (Муравьева, 1999). Существующие классические техники, используемые для выделения нутрицевтиков из растений, в которые включают экстракцию Соксклета, гидро-ксилирование и мацерацию с водноспиртовой смесью или горячим жиром. Другой метод экстракции заключается в обработке ультразвуком в ультразвуковых ваннах, волны которого позволяют экстрагенту диффундировать через клеточные стенки в связи с воздействием УЗ, в результате чего клетка разрывается в течение более короткого периода (Chemat, 2004; Ли и др., 2004; Vinatoru, Paniwnyk, & Mason 2001;Vinatoru 1999). Существуют известные коэффициенты водопоглощения лекарственного растительного сырья, которые для корней солодки соответствует -1,7; листьев шалфея-3,3; травы по-лыни-2,1; цветков ромаппси-3,4. Воспользовавшись рекомендациями Пономарева В.Д. о том, что время заполнения капилляров и клеток жидкостью увеличивается т.к. заполнению мешает воздух в капиллярах и клетках растительной ткани. Для вытеснения воздуха и улучшения процесса заполнения капилляров повышали давление жидкости за счет перемешивания и дополнительное разрушение клеточных стенок в поле СВЧ для перераспределения извлекаемых растительных веществ в суховоздушном растительном материале, согласно рекомендациям (Пономарев, 1976; Кравченко и др., 1976). Скорость проникновения экстрагента в сырье резко возрастало. Прежде чем изучать качество экстрагирования проводили оценку качества сырья. Для процесса экстрагирования из указанных выше свойств имеют значение содержание экстрактивных веществ, влажность и размер частиц, учитывали эти исходные данные при расчете процесса экстрагирования. В работе была использована методика равновесного распределения экстрактивных веществ в сырье. Время наступления равновесия определяли экспериментально, отфильтровывали часть вытяжки из фильтрата, отбирали 25 мл вытяжки, помещали в бюкс, выпаривали и затем высушивали при температуре 100 °С, затем охлаждали в эксикаторе и взвешивали. Проводили расчет определения сухого остатка. Исследуемыми жидкостями для экстракции сохранения БАВ растений были выбраны вещества маслянистой, спиртовой и буферной консистенции. Такими жидкостями были выбраны масла с различной вязкостью (вазелиновое масло, оливковое масло); глицерин (10%) - органический трехатомный спирт (компонент основных мембранных липидов); этиловый спирт (96% и 40%) - основной растворитель и фиксатор' диметилсульфоксид (10% ДМСО) - органический растворитель; 0,01М Na+, Mg2", Са фосфатный буфер - наиболее физиологичный минеральный компонент клеточного сока с рН-6,8; а так же применялось экстрагирование дистиллированной водой при комнатной температуре или кипячении и при помощи водяного пара (Хазза и др. 2003). Исследуемым экстрактан-том заливали приготовленное и высушенное растительной сырье в соотношение 1:5 в темные склянки, смесь постоянно перемешивали при температуре 20°С в течение 10 дней для экстракции биологически активных веществ. Целью этой экстракции было выделение белков, способных образовывать комплексы с солями кальция и магния (предположительно белков-лекгинов). На рисунке 15 показаны наиболее предпочтительные методы и компоненты экстракции.

Я I

§3

a

JUL

=cCL CLtS „cdu

^ ^

Рис. 15 А, Б. Выбор методов экстрагирования и эксграктанта по впитывающей способности сырья

Оказалось, что наибольшей впитывающей способностью (рис. 15 А, Б) обладают 96% спирт (96%, 40%), а также 0,01M Na+, Mg2+, Са2+ фосфатный буфер, а наименьшей впитывающей способностью обладает вазелиновое масло и глицерин. Наименьшей гигроскопичностью из маслянистых веществ (растворителей) обладает ДМСО. В данных исследованиях было обнаружено, что непрерывное перемешивание и обработка ультразвуком повышает возможности извлечения флавоноидных и терпеноидных композиций из растительного сырья. Многоразовый отжим сырья и повторное экстрагирование в разных экстрагентах, его кратковременная экспозиция в СВЧ-поле обеспечивает перераспределение извлекаемых веществ в объеме частиц растительного материала и увеличивает выход при последующем экстрагировании на 10-14%. Гидродинамический режим при экстрагировании растительного сырья влияет на величину выхода БАВ и скорость процесса только на начальной стадии, после которой гидродинамика среды не оказывает заметного влияния на процесс. Можно предположить, что интенсивность воздействия на обрабатываемую систему сырье - экстрагент, определяет толщину прорабатываемого слоя частиц сырья, т.е. толщину слоя, в котором молекулярная диффузия заменяется конвективным массопереносом вещества при движении экстрагента по капиллярам, так как величина кажущегося равновесия определяла эффективность способа экстрагирования (Муравьев и др., 1974; Пономарев, 1976; Абиев 2000). Далее были изучены химический состав и влияние на микрофлору окружающей среды некоторых экстрактов отобранных приоритетных растений.

Изучение химического состава и противомикробной активности растительных соединений и их компонентов в отношении микроорганизмов окружающей среды и человека.

Для изучения противомикробной активности компонентов растительносытья лекарственных растений бьио проведено исследование химического состава некоторых экстрагируемых компонентов, корней и корневищ Glycyrrhiza glabra L., соцветий Achillea micrantha W., соцветий Helichrysum arenarium L. В результате проведения исследований химических веществ и их компонентов, содержащихся в экстрактах из растений Астраханского региона были обнаружены ранее описанные и оригинальные композиции химических веществ. Исследовали водноспирговые экстракты из корней и корневищ Glycyrrhiza glabra L., буферные экстракты из корней и корневищ Glycyrrhiza glabra L., водноспирговые экстракты из соцветий Achillea micrantha W., водноспирговые экстракты из соцветий Helichrysum arenarium L. Результаты тонкослойно-хроматографического анализа (ТСХА) жидких экстрактов G. glabra, A. micrantha, Н. arenarium.

Хроматомасс-спектрометрический анализ экстракта из корней и корневищ Glycyrrhiza glabra выявил наличие следующих соединений: пик 1,2,3 соответствовал Щ^'-дибензоилоксигегггадиамиду C21H22N2O6);

Глюкопиранозиду (ОНібОб);

ОН

Кроме того, в экстракте из соцветий Achillea micrantha обнаружен паренгенин, из корня Glycyrrhiza glabra идентифицирован нарингенин, а в экстракте из соцветий Helichrysum arenarium L. и корня Glycyrrhiza glabra - 4',7-диоксифлавонон. Экстракты 1 и 2 были выделены из корня солодки голой при различных методах экстрагирования.

На основании хроматомассспектрометрического анализа в экстракте Glycyrrhiza glabra выявлены Н^Ы'-дибензоилоксигептадиамид и этил-ЫЭ-Глюкопиранозид, образце 2 буферных экстрактов из солодки голой Glycyrrhiza glabra выявлены этил-a-D-Глкжопиранозид, дополнительно кофеин. Во всех водноспиртовых извлечениях (экстрактах) солодки голой обнаружены флавоноиды (4',7-диоксифлавонон и другие), гли-козиды и даже кофеин в буферном экстракте корня солодки голой. В экстрактах корня солодки и тысячелистника мелкоцветкового, кроме известных в литературе химических компонентов, обнаружены вещества, относящиеся к классу нарингенин (буферный экстракт корня солодки) и паренгенин (экстракт тысячелистника мелкоцветкового). Кроме того, в экстрактах корня солодки обнаружены К,№-дибензоилоксигелтадиамид, этил-а-D-глюкопиранозид, а так же кофеин (в известной литературе до сих пор не описан). В том числе спектрохроматическими методами исследован химический состав эфирных масел и наиболее активных растений. Так в результате исследования составе эфирных масел растений были обнаружены: Амилвинилкарбинол, (3-мирцен, Лимонен, Линалол, 1-октенилацетат, Ховякол, Кариофиллен, Гермакрены и другие соединения.

В результате повторного тонкого масспектрохромэтографического анализа (исследования проведены в С-ПГУ) экстрактов в тысячелистнике мелкоцвеїковом Achillea micrantha были обнаружены: Нехапопе; Benzene; Ethyl - Benzene; ІД-dimethyl- (o-Xylene); 2,2,3,3-Tetramthyi-l-dl-Azirdine; l^-Dioxolan-4-one; 2-(l,l-dimetylethyl)-5-methylene-(s)-decane; 2Д4-Trimethyl-Naphthalene; Decahydro-l,5-Dimethyl; Manool; Hexanedioic acid; bis(2-ethylhexyl) ester, Squalene; Di-(2-ethylhexyl) phthalate и многие другие соединения. Многие соединения напоминают разновидность флавоноидов, когда при замещении в хромоне атома водорода в а-положении на фенильную группу образуется 2-фенил-(а)-бешо-у-гшрон или флавон, который состоит ив 2 ароматических остаїков А и В и трехуглеродного звена (пропановый скелет).

В результате масспеюрохроматографирования (исследования проведены в С-ПГУ) экстрактов цмина песчаного Helichrysum arenarium были обнаружены: Benzene;

Ethyl-benzene;, 1,3,5-trimethyl; 4-Cyclohexadiene; l-MethyM-(l-methylethyl)-l,7,7-trimethy[bicycIo[2.2.1]heptane-2,5-dione; Manool; Squalene и многие другие соединения. В результате изучения химического состава экстрактов цмина песчаного, основное количество химических нюкомолекулярных веществ имеет бензольное кольцо или фенольные соединения флавоновых групп с гидроксильными группами в разных положениях.

Состав некоторых соединений экстрактов тополя черного Populus nigra, обнаруженных хроматографическим анализом (исследования проведены в С-ПГУ) были следующими: Benzene; 1,4-Dimethyl-Benzene; 1,2,3-Trimethyl-Benzofuran; 2,3-dihydro; Phenylethyl Alcohol; 2-Propen-l-one; l-(2,6-dihydroxy-4-methoxyphenyl)-3-phenyl-(E)-(CAS) - соединения флавоноидного строения; 4H-l-Benzopyran-4-one; 2,3-dihydro-5,7-dihydroxy-2-phenyl4S)-HapHreHHH, а так же множество соединений флавановд-ного и терпеноидного строения. Многие выделенные соединения соответствуют по своим характеристикам, расположению фенояьных колец и расположению гидроксильных и ке-тонных груш соединениям класса флавонов, флавонолов и их изомеров, кагехинов. Соединения, относящиеся к флавоноидам, проявляют Р-вигаминную акгавность, и обладают рядом полезных свойств, стимулируют активность ферментов, содействуют выведению из организма потенциально токсических или канцерогенных веществ, тормозят пролиферацию раковых клеток и запускают апогпга. Предохраняют от нарушений регулирования нормального клеточного цикла (Зефиров, 2007; Бачурин, 2008).

Результаты влияния обнаруженных бактерицидных веществ экстрактов изучаемых лекарственных растений на микрофлору окружающей среды представлены в таблице 2.

Таблица 2. Влияние бактерицидных веществ некоторых растений на микрофлору воздуха и воды._

объекты влияние экстрактов на микрофлору (Хып)

воздуха воды

Контроль МПА (колоний м/о на поверхности среды) 26,4±0,9 25,6*0,5

МПА с экстрактом A. micrantha 11,4±0,3 19,6±0,3

МПА с экстрактом G. glabra 5,1±0,09 2,6±0,3

МПА с экстрактом Н. arenarium 9,4±0,15 19,0±0,8

МПАс экстрактом P. nigra 0,9±0,1 0,3±0,01

Результаты влияния бактерицидных веществ экстрактов лекарственных растений на микрофлору окружающей среды показали подавление развития микрофлоры воздуха в присутствии экстрактов соцветий тысячелистника мелкоцветкового в 5 раз, соцветий цмина песчаного в 3 раза, тополя черного в 20 раз до полного отсутствия колоний на среде (бактерицидное влияние). Подавление микрофлоры воды в присутствии экстрактов растений выражено еще в более активной форме экстрактом солодки и тополя.

Биотехнология выделения лектинсодержащих компонентов исследуемых растений и изучение их антибактериальной и иммунологической активности.

Выделение и определение лектиновых белков.

По мнению некоторых авторов, лекгины (от лат. legere - собирать) - это белки и гликопротеины, обладающие способностью высокоспецифично связывать остатки углеводов на поверхности клеток, обладающие свойством специфично и обратимо связывать углеводы или их остатки в биополимерах (в гликопротеинах), широко распространены в живой природе (Шакирова и др. 2007). По биологическому происхождению растительные лекгины могут классифицироваться: АРА - лектин из семени арбуза; CJA -лекгин из кроталярии; LCA - лектин из чечевицы; LTA - лекшн из лотоса; РИА - лектин из фасоли; NA - лектин из зеленого ореха; PSA - лектин из семени гороха; RCA -лектин из клещевины; SBA - лектин из бобов солодки; STA - лектин из клубней картофеля; WGA - лектин из зародыша пшеницы; UEA - лектин из семян улекса.

В данной работе для выделения и исследования лекпшов были использованы растительные экстракты растений: Солодка ежовая (плоды); Солодка голая (плоды); Робиния псевдоокация (соцветия); Донник лекарственный (соцветия); Робиния псевдоокация (пло-

ды); Солодка голая (корень); Солодка ежовая (корень); Софора японская (соцветия). Для проведения качественной реакции преципитации в геле и обнаружения лектиноподобных белков в экстрактах растений семейства Бобовых применяли синтезированные лектиисвязы-вающие углеводы, для «узнавания» лектинов в экстрактах. Лектинсвязывающие углеводы были синтезированы и любезно предоставлены лабораторией углеводов Института биоорганической химии им. академиков М. М. Шемякина и Ю. А. Овчинникова (ИБХ РАН). Исследования проводили в 3% агаре по схеме. Оценку качественной реакции преципитации в агаровом геле между лектинсвязывающими углеводами и белками лектинами экстрактов растений проводили визуальным способом. Реакцию проводили по схеме: в центр лунки углеводные гаптены: A) Lee- РАА; Б) Gal-PAA; В) Btri- РАА; Г) Bdi-PAA, а по кругу экстракты плодов растений семейства Бобовых: 1- Робиния псевдоакация (буферный экстракт); 2) Софора японская (буферный экстракт); 3) Солодка голая (буферный экстракт); 4) Солодка голая (водноспиртовый экстракт); 5) Солодка ежовая (водноспиртовый экстракт); 6) Робиния псевдоакация (водноспиртовый экстракт). Наблюдения за образованием преципитатов в виде «линии» или «облака» проводили через 24 - 48 - 72 часа, в течение 13 суток. Результаты

Рис. 16. А, Б, В. Результаты реакций иммунодиффузии с углеводными гаптеиами

Рис. 16 А. Реакция иммунодиффузии между лектинузнакмцими углеводами ЬесПАА и Gal-ПАА и водноспиртовыми экстрактами растений (в верхней части) и буферными экстрактами (в нижней части) растений: I) Hdichrysum arenarium (соцветия), 2) Achillea micrantha (соцветия), 3) Glycyrrhiza glabra (корень), 4) Glycyrrhiza glabra (листья), 5) Glycyrrhiza glabra (плоды), 6) Glycyrrhiza glabra (соцветия). Как видно, и водноспиртовые экстракты образуют связывание с гаптенами, а особенно выраженные преципитационные комплексы между буферными экстрактами солодки голой и гаптенами Lec-ПАА и Gal-ПАА.

Рис. 16 Б. Результаты обнаружения лектинов в экстрактах растений методом лек-тин-углеводного взаимодействия в агаре с лектинсвязывающими углеводами: А) Lec-ПАА, Б) Gal-ПАА, В) Btri-PAA, Г) Bdi-PAA и экстрактами растений, содержащих лек-тиновые белки: 1) ромашка аптечная (буферный), 2) календула лекарственная (буферный), 3) тысячелистник мелкоцветковый (буферный), 4) бессмертник песчаный (буферный), 5) ромашка аптечная (водноспиртовый), 6) календула лекарственная (водноспиртовый). В результатах, представленных на рис. 16 Б. видны линии взаимодействия Lec-ПАА с буферными экстрактами ромашки, календулы, тысячелистника, бессмертника; взаимодействия Gal-ПАА с буферными экстрактами бессмертника, ромашки, календулы, водноспиртовые экстракты не образовывали четких линий взаимодействия. Этот факт можно объяснить накоплением в соцветиях данных растений незначительного количества лектиноподобных белков, которые экстрагируются буферным экстрагектом и для которых лектинсвязывающие гаптены Lec-ПАА, Gal-ПАА, Btri-PAA и Bdi-PAA являются антигенами.

Рис. 16 В. Результаты обнаружения лектинов в экстрактах растений методом лектин-углеводного взаимодействия лектинсвязывающими углеводами: А) Lec-ПАА, Б) Gal-ПАА, В) Btri-PAA, Г) Bdi-PAA и буферными экстрактами плодов растений семейства Fabaceae: 1) Робиния псевдоакация (буферный), 2) Софора японская (буферный), 3) Солодка голая (буферный), 4) Солодка ежовая (буферный), 5) Солодка ежовая (водноспиртовый), 6) Робиния псевдоакация (водноспиртовый). В результате было обнаружено, что между буферными экстрактами софоры японской, солодки голой и углеводами Lee - ПАА, Gal-ПАА и Bdi - РАА об-

разовались четкие линии преципитации и сохранялись до последнего дня наблюдений. Эти преципитаты применили для выделения лектиновых комплексов в дальнейших исследованиях.

Таким образом, эти данные подтверждают обоснование возможности экстрагирования лектинсодержащих компонентов растений (особенно семейства Бобовых) специальными буферными растворами с содержанием солей магния и кальция, которые по литературным данным и нашим исследованиям входят в состав комплексных лектиновых образований. Были проведены экстрагирования лектин-углеводных комплексов в преципитатах, а затем их фракционирование лектинсвязывающими углеводными галтенами, специфичными к данным растительным лектинам. Таким образом, были выделены чистые лектиновые фракции из преципитатов для дальнейших исследований их активности.

Далее целесообразным оказалось изучение иммунобиологических свойств этих экстрагируемых лектиновых фракций растений в биологических и химических комплементарных взаимодействий с лектинсвязывающими синтетическими гаптенами Lec-ПАА, Gal-ПАА, Btri-PAA и Bdi-PAA, имитирующими бактериальные антигены.

Возможно, как считают Лахтин (1987, 1989) и Бовин (2008), растительные лекти-ны являются сложными белками, вернее металлосодержащими гликопротеидами, обладающими противомикробной, противовирусной и иммуностимулирующей активностью. В основе биологической активности лектинов лежит феномен обратимого взаимодействия их с углеводами, которые определяют процесс узнавания макромолекул и клеток, а так же влияют на транспортную функцию мембран клетки. По мнению Корсун, лектины, способные узнавать и избирательно связывать разнообразные углеводы, помогают растениям бороться с патогенными бактериями, грибами и вирусами. Кроме того, они регулируют взаимоотношения с симбиотическими бактериями (Корсун и др., 1998,2000,2004).

Результаты исследования иммунобиологических свойств растительных экстрактов и лектинсвязывающих углеводов.

Результаты обнаружения лектинов в экстрактах растений в реакции преципитации в агаре с участием лектин-связывающих углеводов: А) Lec-ПАА, Б) Gal-ПАА, В) Btri - РАА, Г) Bdi-PAA; экстракты растений: 1) тысячелистник мелкоцветковый, 2) бессмертник песчаный, 3) солодка голая, 4) робиния псевдоакация; I) сыворотка 0(1); II) сыворотка А (2) в рисунке 17.

Рис. 17. Результаты подтверждения лектинового связывания с синтетическими детерминантами бактерий

Известно, что синтезированные лектинсвязывающие углеводы Lec-ПАА, Gal-ПАА, Btri-PAA и Bdi-PAA являются имитацией эпитопов липополи-сахаридных антигенов следующих бактерий: Staphylococcus aureus, Proteus mlgaris, Escherihia coli (О II), Escherihia coli (0 8), Pseudomonas aeruginosa. Shigella sonnei. Salmonella serogroup A (Sug: 3,6 -dideoxy - D- ribo - hexosi - paralose), В (Sug: 3.6 - dideo.xy - D - xylo -hexose -abegiiose), D (Sug; 3,6 - dideoxy - D - arabino - hexose - tyvelose). Эти антигены обладают свойствами связывать лектины бактериальные, лектины животных, а также растительные лектины в реакциях преципитации (Галанина и др. 1992) и участвуют в твердофазном иммуноферментном анализе с лектинсвязывающими конъюгатами. Поскольку в кровяном русле здоровых людей могут циркулировать антитела, несущие химическую «память» о встрече с антигенами этих бактерий, наряду с предполагаемыми белками лектинами в экстрактах, специфичными к этим же бактериальным детерминантам, были внесены сыворотки здоровых людей (рис. 17).

Как видно (рис. 17), обнаружено тройное кольцо преципитата между сывороткой II и углеводами Gal-ПАА, что объясняется наличием антител в сыворотке против этих детерминант микробных антигенов. Одна линия наблюдалась между экстрактом тысячелистника мелкоцветкового, бессмертника песчаного, экстрактом солодки голой, робинии псевдоакации и углеводными гаптенами. Этот факт можно объяснить наличием

в экстрактах данных растений лектиноподобных белков (фиголектинов), для которых синтетические лектинсвязывающие гагггены являются антигенами.

Таким образом, результаты иммунобиологических исследований констатируют обнаружение лектинов в растительных экстрактах, реагирующих с лектинузнающими гаптенами Lec-ПАА, Gal-ПАА, Btri-PAA и Btri-PAA (антигенные детерминанты некоторых условно-патогенных бактерий). Эти экстракты обладают довольно активной способностью против ппаммов S. aureus и меньшей активностью против Е. coli. В данных реакциях (in vitro) лек-тины растений выполняют роль рецепторов, реагирующих на специфические углеводы клеточных оболочек условно-патогенных микроорганизмов, как считает Бабоша, что некоторые растительные лектины, присутствующие в клетках в небольших количествах, выполняют функции рецепторов. Таким образом, лектин может бьпь рецептором, в этом случае лиган-дом - распознаваемым веществом, является углевод (Бабоша, 2008). Обнаружены также антигенные свойства некоторых экстрактов в отношении сывороточных антител, что позволяет предположить взаимодействие лекгановых комплексов с иммуноглобулинами. Как уже отмечалось, лектины растений могут выполнять функции «иммунологического» характера, то есть служат для защиты от разнообразных патогенов, в том числе бактерий и грибов. Некоторые лектины сами по себе проявляют фунгицидную и инсектицидную активность, другие для этого кооперируются с ферментами (например, хитиназами) (Лахтин 1985, 1986, 1989).

Усиление активности лектиновых компонентов растений с участием лектин-связывающих углеводных гаптенов.

В дальнейших исследованиях предполагалось, что, если лектины растений свяжутся с комплементарными лекгинсвязывающими углеводами, их бактерицидная активность уменьшится. Однако, как оказалось, результаты констатировали некоторое увеличение диаметров зон задержки роста исследуемых микроорганизмов вокруг лунок со смесью экстрактов с углеводными гаптенами, имитирующими детерминанты антигенов этих микроорганизмов. Это позволяет предполагать, что в данных экстрактах содержатся лекгиноподобньге вещества, специфичные к данным углеводам, а углеводы - Gal-ПАА и Lec-ПАА связываются с белками экстрактов, образуя комплексы и усиливают протеиновое действие экстрактов, конкурируя с антигенами исследуемых штаммов микроорганизмов (рис. 18).

• дззр

экстрактов

■ экстра Lec-паа

« экстр.+Galß-паа

Рис. 18. Изменение противомикробной активности комплексов экстрактов растений с углеводными гаптенами в ДЗЗР (мм) в отношении S. aureus, E.coli, P. aeruginosa Известно так же, что к лектинам относятся белки неиммуноглобулиновой природа, способные к специфическому узнаванию и «обратимому» связыванию с углеводами гликоконьюгатов и полисахаридами многих бактериальных и клеточных рецепторов без нарушения ковалентной структуры связываемых углеводов. Возможно, это объясняет наибольшее повышение противомикробной активности в отношении комплекса лектинов солодки голой с углеводом Lec-ПАА и углеводом Gal-ПАА Staphylococcus aureus (рис. 18), а так же повышение противостафилококковой активности робинии псевдоакация и тысячелистника мелкоцветкового, увеличение активности в отношении Pseudomonas aeruginosa солодки толой и робинии псевдоакация, а в отношении Escherichia coli солодки голой, тысячелистника мелкоцветкового и бессмертника пес-

чаного (рис. 18). Противомикробная активность уменьшилась только у комплекса экстракта бессмертника песчаного с углеводом Lec-ПАА против Staphylococcus aureus, у смеси экстракта робинии псевдоакации с Lec-ПАА против Pseudomonas aeruginosa и у смеси робинии псевдоакации с Gal-ПАА против Pseudomonas aeruginosa. Это объясняет мнение некоторых авторов, что лекгиновые белки многофункциональные молекулы. В частности, они безошибочно «узнают» азотфиксирующие бактерий и активно участвуют в формировании и регуляции симбиотических взаимоотношений с ними. Семенов считает, что многие белки содержат не один, а несколько функциональных «доменов» или активных центров (Семенов, 2004).

Объемная химическая структура одного из лектинов (рис. 19), где видно, что углеводные молекулы располагаются в центре гетеромера, а белки связаны с этими углеводными молекулами в ядре комплексного соединения, а другой конец белков имеет свободные концы, способные к связыванию посторонних углеводов.

Рис. 19. Схема взаимодействия лектина с молекулой углевода (по Шакировой, 2007). На одном конце белковой молекулы (рис. 19) как видно, может находиться «лекгиновьгй» домен, служащий для узнавания и связывания определенного углевода, а на другом - какой-нибудь иной домен, выполняющий другую функцию, поэтому лекгины могут не просто прикрепляться к бактерии, но и определенным образом воздействовать на нее (Шакирова и др., 2007).

Наши исследования подтверждают не только содержание лектиновых белков в изученных экстрактах, но и способность их формировать комплексы со специфическими углеводами, где углевод содержится в центре лектинового комплекса, а свободные аминокислоты показывают способность к химическому связыванию углеводных гапте-нов соответствующих бактерий. Более того, лектины некоторых растений показали способность формировать комплексы с углеводами синтетических гаптенов и при этом усиливать противомикробное действие в отношении исследуемых бактерий, что проявляется увеличением диаметров зон задержки роста микроорганизмов на питательной среде. Этот феномен объясняет возможность формирования в природе гибридных лектинов и возможность комплексного связывания лектинами разных групп углеводсо-держащих антигенов бактерий и рецепторов других клеток (Шакирова, Безрукова,

2007). Лекгины, по мнению Бабоша, выполняют у растений ту же функцию, что и им-муноглобулиновые белки у животных, однако иммуноглобулины распознают чужеродные вещества или бактерий чаще по их белкам, а лектины - по углеводам (Бабоша,

2008). Поэтому, «иммунологические» функции лектинов заключаются в том, что лектины растений подавляют рост паразитических грибов, распознавая молекулы хитина и других углеводов в стенках грибных клеток (Peumans, Stinissen and Garlier, 1983). Лектины можно использовать для экспериментального изучения разнообразных углеводов и их комплексов с другими молекулами (гликопротеидов) и сопоставлять с другим большим классом «распознающих» белков - иммуноглобулинов, распространенных в организме животных и человека (Шакирова, Безрукова, 2007). Проведенные исследования позволили применить некоторые лектинсодержащие экстракты растений дая дальнейших исследований и разработки биотехнологии применения некоторых экстрактов и их компонентов из растений Юга Европейской части России (Прикаспийского региона) для создания продукции пищевого, лечебного и косметического назначения и препаратов для микробиологической очистки питьевой воды.

Изучение сорбционных и адгезивных свойств лекгинсодержащих экстрактов некоторых растений и возможности применения их в клинической практике.

Многие вещества растений кроме пользы для организма человека могут приносить вред здоровью, даже являться токсинами. Широко известны наркотические растительные

вещества, которые имеют не только широкое лекарственное значение (в качестве обезболивания и др.), но и применяются наркоманами для вызывания эйфории, расслабления и наркотического опьянения. К ним относится целый рад веществ наркотического ряда, которые при передозировке вызывают токсическое отравление (Еремин и др., 1993).

В данной работе сначала было проведено исследование обнаружения лектинопо-добных белков в изучаемых растениях. В процессе проведения предварительных исследований было обнаружено, что между углеводами и буферными экстрактами плодов Софоры японской и корня Солодки голой образовались линии преципитации. Исследование адсорбционной и адгезивной способности приготовленных буферных экстрактов проводили методом анализа токсинов в тонкослойной хроматографии. Для этого были вырезаны преципитаты, очищены и экстрагированы лектиновые белки с помощью колоночной хроматографии. Материалом для исследования адгезии нативных организ-менных углеводов служили образцы мочи пациентов отделения острых отравлений с отравлениями различными лекарственными препаратами: 1) димедролом (А); 2) кодеином (Б); 3) морфином и метаболитами опия (В).

-у югяюч*. : У "

I I I ! ' I

•а

1 23 4 567 12345678 12345678 А Б В

Рис. 20 А, Б, В. 1) биопроба мочи пациента с отравлением или передозировкой; 2) биопроба + экстракт соцветий робинии псевдоакации (лекгины); 3) биопроба + экстракт плодов солодки (лекгины); 4) биопроба + экстракт соцветий тысячелистника мелкоцветного (лектины); 5) биопроба + экстракт соцветий софоры японской (лекгины); 6) биопроба + экстракт плодов софоры японской (лектины); 7) метчик (стандарт).

Рис. 20 А - биопроба мочи пациента с отравлением димедролом.

Как видно на рисунке 20А хроматографических отпечатков (пятен) наличия димедрола в пробах мочи 2, 3, 5, 6 больного А не обнаружено. Однако, в пробе мочи номер 4 обнаружено слабое пятно остатков димедрола. Это является показателем того, что остатки димедрола в этой пробе мочи присутствуют в связи со слабыми адгезивными свойствами соцветий тысячелистника мелкоцветного. Экстракты плодов солодки голой, соцветий и плодов софоры японской, робинии псевдоакации полностью связывают димедрол в моче. Это подтверждает наличие адгезивных свойств и возможность лектинов этих экстрактов связывать и осаждать димедрол, что может произойти и в организме больного при отравлении димедролом. Следующий опыт проводили с образцами мочи пациентов с передозировкой наркотиков, алкалоидами опия, кодеином.

Рис. 20 Б. - биопроба мочи пациента с передозировкой кодеина.

Под номером 1 (рис. 20 Б) пятно метчика стандартного раствора кодеина, под номером 8 пятно с содержанием кодеина в пробе мочи больного. Как видно на рисунке хроматографических пятен под номерами 2,3,4,5, 6 на наличие кодеина почти не обнаружено, однако отсутствуют все пятна на уровне плодов солодки голой. Это значит, что экстракт плодов солодки голой осаждает кодеин в полной степени.

Рис. 20 В. - биопроба мочи пациента с морфином и метаболитами.

Под номером 1 (рис. 20 В) пятна метчика - (сверху вниз): стандартный раствор морфина и метаболитов опия, под номером 8 пятна с содержанием алкалоидов опия и углеводов морфина, обнаруженных в пробе мочи больного Д. Под номерами 2,3,4,5, 6 расположены пробы смесей пробы мочи больного Д с экстрактами. Как видно на рисунке 21В хроматографических пятен на наличие морфина и метаболитов не обнаружено. Это свидетельствует об осаждении морфина и углеводных метаболитов лектина-

ми солодки голой, софоры японской и робинии псевдоакации. Отсутствие пятен свидетельствует об отсутствии метаболитов опия, который связался с экстрактом солодки. Это значит, что экстракты могут осаждать морфин и метаболиты опия. По нашему мнению, лектины бобовых - солодки, софоры, псевдоакации могут связываться с токсическими веществами и наркотиками, содержащими углеводы, образовывать комплексы с этими токсинами и выводить их из организма человека Поэтому в дальнейших исследованиях может подтвердиться терапевтический эффект экстрактов этих растений. Таким образом, буферные pao тигельные экстракты солодки голой, софоры японской, содержащие лекгиновые белки (фиго-лекшны) и способные в иммунологических реакциях in vitro связываться с углеводными коньюгатами, проявляют так же и адгезивные свойства Впервые обнаружено свойство растительных фиголекгинов известных лекарственных растений участвовать в иммунологических и токсикологических реакциях, что можно использовать в качестве дополнительного лечения тяжелых случаев отравления токсическими гликокомпонентными наркотическими веществами (Еремин и др., 1993; Сухенко, 2008).

Изучение и разработка технологии улучшения санитарно-экологического состояния воды в связи с прогивомикробной активностью растений

Астраханский регион характеризуется обилием водоемов и расположением населенных пунктов в супераквальном ланшафте. Город Астрахань рассечен сложной гидрографической сетью, которая включает в себя систему водотоков с естественным зарегулированным стоком. Среди них особое место отводится р. Кутум, Каналу им. 1 Мая (Сухенко и др., 2001). По мнению многих исследователей (Ничога, 1982; Тылес 1982), одной из задач эпи-демиолого-экологического анализа является установление роли водного фактора в распространении кишечных инфекций на конкретной территории, анализ мест обитания, анализ сезонной динамики микрофлоры водоемов и разработка новых способов устранения эпидемических ситуаций (Покровский, 1982). Исследования применения растительных компонентов и экстрактов для саншарно-экологической очистки водоемов дали оптимистические результаты.

Как видно (рис. 21 А, Б, В), по мере увеличения концентрации фигокомпонентов экстрактивных веществ растений в речной воде подавляется микрофлора в десятки и сотни раз, что свидетельствует о достоверном и показательном влиянии химических компонентов растений на микробиоценозы водных биосистем, наиболее активным в данных исследованиях оказался экстракт солодки голой, цмина песчаного и затем тысячелистника мелкоцветкового.

Л

Разведение экстракта

Разведение экстракта

Разведение экстракта

А Б В

Примечание: разведения вода/экстракт 1-100/1, 2- 50/1, 3 -10/1, 4 - 5/1. Рис. 21 А, Б, В. Результаты подавления микрофлоры воды р. Кугум по мере увеличения концентрации экстагируемых химических компонентов растений в речной воде, рис. 21 A -Glycyrrhiza glabra (корня); рис. 21Б -Achillea micrantha (соцветий); рис. 21 В - Heiichrysum arenarium (соцветий).

Для сравнения представлены данные влияния на микрофлору воды других растений (рис. 22).

Степень развитая

юдньк микроорганизмов Канала 1-ого Мая

под влиянием Alaithusaltisama

Степень развитая

юдньк микроорганизмов Канапа1-огоМая под влиянием Robiniapseudacaaa

Степень развития

водных микроорганизмов Канала 1-ого Мая под влиянием 3>рЬога]арогаса

Степень развития

водных микроорганизмов Канала 1-ого Меи под BTTMHHMeM&lixäbaL ■

А Б В Г

Рис. 22 А, Б, В, Г. Степень подавления микрофлоры воды экстрактивными компонентами сравнительных растительных веществ древесных растений прибрежных посадок

Как видно (рис. 22 А, Б, В, Г) наибольшим подавляющим эффектом обладают экстракты соцветий (сережки) ивы белой и соцветий робинии псевдоакации, почти 40% подавляющего эффекта в отношении микрофлоры воды. На основе ингибирующего эффекта растительных экстрактов, у которых доказан механизм подавления как патогенной, так и сапрофитирующей микрофлоры воды была разработана биотехнология доочисгки водопроводной, технической воды и сточных вод от микрофлоры, которая сохраняется после механической очистки. Были созданы мини-наборы для ступенчатой очистки вод, например для очистки от стафилококков и кишечной микрофлоры экстрактами тысячелистника и бессмертника, от микобактериальных загрязнений экстрактами солодки голой, для подавления обшего микробного числа (ОМЧ) экстрактами со-форы японской, робинии псевдоакации или айланта высочайшего (Сухенко, 2008). Известно также, что многие компоненты лекарственных растений и растений пищевого назначения обладают не только активностью против условно - патогенных микробов, в том числе питьевой воды, но и способны улучшать ее качество. Получены обнадеживающие результаты улучшения качества и санитарного состояния питьевой воды в районах Астраханской области с водоподачей без очистных сооружений, а также доочисгки водопроводной воды в городских водопроводах для предотвращения распространения возбудителей желудочно-кишечных инфекций, передающихся водным путем.

Исследования влияния экстрактов различных растений и растительных препаратов на микобакгерии иггамма Mycobacterium tuberculosis H37RV

Данные исследования проведены с целью сравнения влияния некоторых экстрактивных компонентов на один из патогенных возбудителей хронических инфекций - возбудителя туберкулеза на музейном штамме Mycobacterium tuberculosis H37R.V. Это вызвано тем, что в настоящее время фтизиатрия испытывает трудности, связанные с особенностями современного туберкулеза, резким повышением распространенности инфекции, высоким удельным весом деструктивных процессов с массивным бакгериовыделением, недостатком специфической химиотерапии, нарастанием резистентности возбудителя к традиционным противотуберкулезным препаратам (Васильев, Гришко, 1996).

о о

концентрации экстракта мкт/мл

контроль

■ плоды

солодки юл.

- _ • кор. солодки

г ~ ЮЛ.

■ стеб. СОЛОДКИ

*■ юл.

■ соцв. СОЛОДКИ

І? юл.

о

т пармелия

Г".

п

цмин песчан

ь тысячсл.мелк

оцв.

Рис. 23. Противотуберкулезная активность экстрактов растший в отношении штамма Mycobacterium tuberculosis HnRv.

Как видно (рис. 23) подавление штамма Mycobacterium tuberculosis Hj?Rv экстрактами и препаратами из них было очень разнообразным Так. минимальная ингибирую-щая концентрация (МИК) подавления развития колоний туберкулезной палочки цмином песчаным 0,33 мкг/мл, далее колонии активно развиваются, лишайник пармелия подавляет развитие колоний только в концентрации 3,0 мкг/мл, а тысячелистник мелкоцветковый очень слабо подавляет развитие колоний туберкулезной палочки Экстрактивные вещества солодки голой, ее соцветий, листьев, стебля и корня подавляли развитие колоний штамма Mycobacterium tuberculosis (HijRv) в минимальных дозах

0,078 мкг/мл,

ры был подавлат полностью.

Ш Я

А Б В

Рве. 24 А, Б, В. Развитие колоний штамма Mycobacterium tuberculosis H37Rv под влиянием экстрактов растений (рис. 24 А и 24 Б) и в контроле (24 В).

На рисунках 24 А и 24 Б показано отсутствие колоний микобактерий туберкулеза во всех 6 пробирках под влиянием экстрактов корня и плодов солодки голой, а в 3 последующих контрольных пробирках видны бежевые колонии на бледно-зеленой среде Левенш гейна-Иенсона. На рисунке 24 В. начиная со второй пробирки, виден бежевый налет микобактерий на зеленой среде, то есть действие экстракта пармелии блуждающей обнаруживается только в дозе 3.0 мкг/мл.

Таким образом, исследования минимальных ингибирующих концентраций показали, что наиболее высокий ингибируюший эффект зарегистрирован у экстрактов всех частей солодки, особенно из корня солодки по сравнению с экстрактами растений, взятых для сравнения. Результаты научных проработок показали полное или почти полное подавление метаболизма микобактерий штамма Mycobacterium tuberculosis Hj?Rv под воздействием некоторых растительных препаратов, содержащих активные противомикробные вещества Получен патент, позволяющий утверждать терапевтическую противотуберкулезную активность препаратов солодки голой (патент № 2362577 «Экстракт солодки голой, обладающий противотуберкулезной активностью»).

Создание и отработка технолошн получения фнтокоипонентов в фитопрепарата «экстракт солодки «ГЛИЦИРФИТ» и фит композиции препарата «фитока-пдн «ГЛИЦИРФИТ».

Солодка упоминается еще в рецептах восточной медицины чаще, чем какое-либо другое растение, даже женьшень. Технология разработки фитопродукции на основе корпя солодки голой Gfycirrhyza glabra -пищевой добавки «экстракт солодки «ГЛИЦИРФИТ» состояла в следующем. Способ получения экстракта солодки голой осуществляли методом водноспиртовой экстракции подаеиных (корня и корневищ) или наземных (соцветий) частей солодки голой Glycyrrhiza glabra. Сначала измельченное растительное сырье, соответствующее ГОСТу помешали в экстрактор, предварительно обработав ультразвуком в ультразвуковом дезинтеграторе или СВЧ камере. Экстрагирование проводили различныли экстрагентами (сначала 40% раствором этилового спирта, затем 0,0Ш Na*, Mg^, Саг+-буфером, затем эту же порцию растительного сырья заливали дистиллированной водой) в темном месте при постоянном перемешивании в течение 7 дней при комнатной температуре (20-22°С). Затем использованное сырье отжимали, а жидкий экстракт разливати в темные флаконы. Флаконы в открытом виде помещали в стерилизатор для испарения экстрагентов и концентрации экстракта в течение 15 минут 3-х кратным нагреванием до 85 С, чем достигалось концентрирование антибактериалышх (противотуберкулезных), иммунопротективных. адаптогенных веществ в экстракте и удаление остатков экстрагента Технология создания препарата из фитокомпозиции «фитокапли «ГЛИЦИРФИТ» состояла в получении препарага на основе экстрагирования из отобранных растений Астраханского региона Gfycirrhyza glabra (корня, плодов, соцветий) Achillea micranta (соцветий и травы). Helichrysum агепапит (соцветий и травы). Препараты готовили простой ступенчатой экстракцией. Препарат «экстракт солодки ((ГЛИЦИРФИТ» состоит из жидкого густого экстракта Glycyrrhiza, представляет собой темно-коричневую жидкость с характерным запахом и сладким вкусом, имеет иммунопротективые, противомикробные, противоаллергенные свойства, а «фитокапли «ГЛИЦИРФИТ» состоит из жидких экстрактов растений Glycyrrhiza, Helichrysum, Achillea с характерным запахом и вкусом._

Сбор корня солодки и сушка подготовка компонентов к эстрагированию

Экстракт солодки «ГЛИЦИРФИТ», обладающий противотуберкулезным действием [патент Л» 2382577. 200S)

Рис. 25 Технология получения пищевой добавки «экстракт солодки «ГЛИЦИРФИТ» на основе корня Glycyrrhiza glabra и препарата фитокапли

«ГЛИЦИРФИТ» из растительной смеси. Применение экстракта солодки голой возможно так же в качестве средства обладающего выраженным противотуберкулезным действием (патент № 2362577,2009).

Изучение влияния растительных антибактериальных препаратов на функциональную активность перитонеальных макрофагов мышей на экспериментальных животных (/л vivo), зараженных Mycobacterium leprae и Mycobacterium tuberculosis.

Воздействие препаратов «ГЛИЦИРФИТ» из корня солодки, соцветий тысячелистника и бессмертника на М. tuberculosis.

Изучены изменения морфологических признаков клеток микобактерий М. tuberculosis под влиянием компонентов водноспиртовых и буферных экстрактов да соцветий Helichrysum arenarium L, Achillea micrantha W., и корня Glycyrrhiza glabra. Контролем служили клетей микобактерий без воздействия (контроль) (Рис. 26) и под воздействием экстрактов (рис. 27,28).

t * ' >?

■Щ¿v/

"" V

А Б

Рис 26 А. - М.tuberculosis IIpRv без воздействия. Окраска по Цилю-Нильсену (увел. * 1600). Б. - М. tuberculosis HnRv без воздействия (увел, х 70000).

у .

Рис. 27 A M.tuberculosis HnRv под воздействием соцветий Achillea micrantha (увел* 1600). Б. М. tuberculosis H37RV под воздействием соцветий Helichrysum arenarium (увел х 1600).

i

-i

Рис. 28 А. М tuberculosis HnRv под воздействием корня Glycyrrhca glabra (увел, х 1600). Б. M.tuberculosis HjjRv под воздействием корня Glycyrrhiza glabra (увел. > 70000).

На рисунках 28 А и Б видны конструктивные изменения морфологии и структуры клеток микобактерий под влиянием экстракта из солодки голой по сравнению с кон-

тролем (рис. 26 А, Б) и с действием тысячелистника мелкоцветкового (рис. 27 А) и цмина песчаного (рис. 27 Б). После воздействия на клетки М. tuberculosis HnRv компонентов экстракта корня Glycyrrhiza glabra обнаружено большое количество клеток со значительными изменениями структуры, отсутствия или истончения микрокапсулы до полного разрушения М. tuberculosis.

Таким образом, исследования показали, что наиболее высокий ингибирующий эффект зарегистрирован у экстракта из корня солодки Glycyrrhiza glabra по сравнению с экстрактами растений, взятых для сравнения (Achillea micrantha, Heiichrysum arenarium).

Применение препаратов «ГЛИЦИРФИТ» в качестве иммунопротекгивных средств и для комплексной противотуберкулезной фитотерапии (in vivo в эксперименте).

Оценка функционального состояния фагоцитов мышей, зараженных внутрибрю-шинно Mycobacterium tuberculosis Hi?Rv под действием биологически активных веществ растений, проводилась в специализированных клиниках и научно-исследовательских учреждениях. Животных заражали внутривенно суспензией культуры микобактерий туберкулеза (МБТ) Mycobacterium tuberculosis Нз7Яу- Лечение животных препаратами «ГЛИЦИРФИТ» начинали через 10 дней после заражения. Для определения поглотительной способности перитонеальных макрофагов (ПМ) учитывали фагоцитарный показатель (ФП- % фагоцитирующих перитонеальных макрофагов к общему числу клеток), фагоцитарное число (ФЧ - среднее количество микобактерий, поглощенных одной фагоцигной клеткой).

i 3

И 1

S> о

II! Ii III III III ill

IМБТ+ экстракт

IМБТ

■ контрольные мыши 1,88

сутки

Рис. 29. Показатель уровня миелопероксидазной активности перитонеальных макрофагов мышей, зараженных микобактериями туберкулеза H^Rv (МТБ) и леченых препаратом «экстракт солодки «ГЛИЦИРФИТ» На рисунке 29 видно, что уровень основного макрофагального фермента - миело-пероксидазы превышен у мышей, зараженных микобактериями туберкулеза и получающих препарат корня солодки (МТБ+ экстракт) по сравнению с незараженными мышами (контрольными) и мышами, зараженными туберкулезом. Таким образом, биологически активные растительные вещества препарата «экстракт солодки «ГЛИЦИРФИТ» достоверно повышают в динамике функциональную активность перитонеальных макрофагов (по показателям поглотительной способности и повышению активности фермента миелопероксидазы, входящей в состав одной из основных бактерицидных систем фагоцитов - миелопероксидазной системы). Эти данные подтверждают противотуберкулезный эффект препаратов корня солодки не только в культуре, но и на иммунологическом уровне стимулируя звено клеточного иммунитета у экспериментально зараженных животных. У больных туберкулезом легких отмечается дефект функциональной активности моноцитов периферической крови, выраженный снижением их поглотительной способности (Шатров и др., 1985). В результате улучшения деятельности фагоцитов у экспериментальных животных под влиянием растительных компонентов препарата «экстракт солодки «ГЛИЦИРФИТ» обнаружено повышение функциональной активности перитонеальных макрофагов (фагоцитарных клеток) за счет выраженной ферментативной миелопероксидазной активности под влиянием компонентов фитопрепарата «экстракта корня солодки «ГЛИЦИРФИТ» и других химических компонентов Glycyrrhiza glabra.

Применение препаратов «ГЛИЦИРФИТ» для комплексной противолепроз-ной фототерапии.

В дальнейшем были проведены исследования противомикобактериальной активности экстрагируемых растительных компонентов Glycyrrhiza glabra, Heiichrysum arenarium и Achillea micrantha в препарате «фитокалли «ГЛИЦИРФИТ» для лечения экспериментальной лепры, вызванной Mycobacterium leprae, в комплекспе с основными противолепрозными средствами.Экспериментальными исследованиями ранее было показано, что клетки Mycobacterium tuberculosis и Mycobacterium leprae под воздействием биологически активных веществ растений подвергаются изменениям, фрагментации, разрушению капсулы и структурным изменениям и разрушению внутриклеточных структур (Назарова, Сухенко, Маслов, 2008). В данных исследованиях оказалось, что вещества экстрактов могут влиять на инфекционный процесс так же через фагоцитарную активность иммуннокомпетентных клеток, стимулируя клеточный иммунитет. В результате изучения влияния биологически активных веществ растений на процесс размножения клеток М. leprae в месте инокуляции (таблица 3) оказалось, что после 3-х месяцев лечения экспериментальных животных фитосбором обнаружено значительное подавление роста М. leprae в подушечках лап мышей по отношению к контролю (в 15 раз). Комбинированная терапия фитосбором «фигокапли «ГЛИЦИРФИТ» + рифампи-цин (РФП) приводила к еще более значительному подавлению роста М. leprae в подушечках лап мышей по сравнению с контрольными животными (в 17,8 раз), и с животными, принимающими РФП (в 2,2 раза).

Таблица 3. Динамика размножения М. leprae при различных сроках лечения растительным сбором и РФП (Х±ш).____

Показатель Период наблюдения (мес) Лечение фитосбором Лечение фитосбором+ РФП Лечение РФП Контроль без лечения

Число М. leprae 3 16,7х 10б±9,8* 8,5*106±6, * 9,4*106±4,4* 1,1х10'±1,1

6 l,lxl0b±3,9* 0,3х10"±17,9* 0,6х10ь±33,1* 1,2*ЮУ±2,7

9 1,1х104±31,2* 0,3х104±38,9* 0,5*104±15,6* 15,1*10^,3

Примечание: *-р<0,05; **-р<0,01 по сравнению с контролем

Динамика размножения М. leprae в подушечках лапок мышей отражает резкое достоверное снижение микобактерий под воздействием фитокапель «ГЛИЦИРФИТ», состоящих из фитосбора и к еще большему эффекту после комплексного применения фитосбора с рифампицином РФП, что говорит в пользу комплексной фшо-химио-терапии при тяжелых хронических инфекциях.

Таблица 4. Уровень активности миелопероксидазы (МП) при различных сроках лечения растительными препаратами и РФП (Хіт) мышей, зараженных М. leprae_

Показатель Период наблюдения (месЛ Лечение препаратом ГЛИПИРФИТ Лечение фитосбором +РФП Лечение РФП Контроль без лечения

Уровень МП (у.ед.) 3 2,4б±0,01* 2,35±0,04* 2,26±0,02* 2,07±0,05

6 2,49±0,02* 2,4&£0,06* 2,23±0,03* 1,83±0,02

9 2,50±0,01* 2,49±0,01** 2,12±0,02* 1,58±0,08

Примечание: *-р<0,05; **-р<0,01 по сравнению с контролем

Как видно, повышение уровня миелопероксидазы достоверно больше не только при комплексной терапии, но и при лечении животных только препаратом ГЛИЦИРФИТ (рис. 30).

В мое

—Лечение фитосбором —Лечение РФП

б мое 9*лес

■ 1 ■ Лечение фитосбором • РФГ) *—— Контроль (без лечении)

Рис. 30. Уровень миелопероксидазы у животных, зараженых М. leprae при различных сроках лечения растительным сбором и рифампицином.

Как видно, и здесь уровень миелопероксидазы (МП) повышается при комплексном лечении в сравнении с контрольными животными и леченными только рифампицином РФП. Эш исследования еще pas показали, что на всех этапах лечения препаратом «экстракт солодки «ГЛИЦИРФИТ», фитосбором «фитокапли «ГЛИЦИРФИТ» и в комплексе их с рифампицином (РФП) выявлено статистически достоверное повышение активности внутриклеточной миелопероксидазы по сравнению с контролем и монотерапией рифампицином РФП и показано достаточное положительное влияние на уровень нейгрофильных гранулощлов крови мышей.

Применение фитопрепарата «экстракт солодки «ГЛИЦИРФИТ» в качестве фитобиотика.

Микробиоценоз кишечника является чрезвычайно чуткой, лабильной и динамичной системой, который характеризует состояние организма. Проведено исследование применения созданного фитопрепарата на основе экстрактов корня солодки голой в качестве пребиотического действия на группе белых крыс линии ВИСТАР. Изучено влияние на экологическое равновесие биотопа кишечника крыс фитопрепарата «экстракт солодки «ГЛИЦИРФИТ» го Glycirrhyza glabra, пробиотика «Колибактерин» и пребиотика «Лакгусан». Изучено влияние этих препаратов на развитие кишечной микрофлоры в эксперименте, сделан сравнительный анализ состояния микрофлоры кишечника крыс под влиянием фитопрепарата «ГЛИЦИРФИТ», пробиотика «Колибактерин» и пребиотика «Лактусан».

Таблица 5. Сравнительные результаты микробиологического анализа кишечника крыс до и после введения пробиотика «Колибактерин», пребиотика «Лакгусан», фито-

Микроорганизы Группа животных, получающих препараты (число колоний в КОЕ/г)

Контроль Колибактерин Лактусдн ГЛИЦИРФИТ

Esherichia coli 10,8x10 ±0,48* 10,0x10 ±0,05* Ю.вхІОУДОІ* 10,8x10 ±0,05*

Bifidobacterium bifldum 10,7X10^0,2* 10,8xl0J±0,01* Ю,1ХЮ4±0,5** 10,9ХЮ4±0,7**

Staphylococcus 10,7ХЮ2±0,15* 10,бх103±0,1** 10,6х10"±0,01* 0

Staphylococcus haemolyticus 10,6*108±0,10* 10,5х 105±0,15* Ю,5*Ю4±0,01* 0

Candida 10,бх102±0,08* 10,5*10^0,01* 10,4хЮ3±0,07* 10,4х103±0,02*

Пргшечание: *-р<0,05; ** -р<0,01 по сравнению с контролем Оказалось, что у крыс контрольной группы (таблица 5) видовой состав микрофлоры был представлен традиционно кишечной палочкой, бифидобактериями, дрож-жеподобными грибами рода Candida, стафилококками, а особенно Staphylococcus haemolyticus - патогенным гемолитическим стафилококком. В терапевтической практике наличие гемолитического стафилококка, большого количества грибов рода Candida и сравнительно небольшого количества представителей нормальной микрофлоры (кишечной палочки и бифидобакгерий) свидетельствовали о подавлении сапрофитных эндогенных анаэробных бактерий, развитии нетипичной патогенной микрофлоры, которая отрицательно воздействует на микробиоценоз кишечника. У группы экспериментальных крыс, которым вводили пробиотик «Колибактерин», характерно значительное превышение содержания кишечной палочки, которая обладает антагони-

стической активностью в отношении патогенных и условно-патогенных микроорганизмов, некоторое увеличение представителей бифидобактерий. У группы крыс, которым вводили пребиотик «Лактусан» характерно значительное увеличение содержания бифидобактерий Bifidobacterium bifidum, некоторое увеличение содержания кишечной палочки, угнетение стафилококка (в том числе гемолитического), грибов рода Candida, что обусловлено воздействием на микробиоценоз кишечника лакгулозы. В группе животных, которым вводили фитопрепарат «экстракт солодки «ГЛИЦИРФИТ» видовой состав микрофлоры был представлен высоким содержанием кишечной палочки, бифидобактерий, некоторым подавлением роста дрожжеподобных грибов рода Candida. Характерно, что стафилококков (в том числе гемолитических) не обнаружено вообще. Обнаружено отсутствие представителей условно-патогенной и патогенной микрофлоры - стафилококков, в том числе Staphylococcus haemolyticus, уменьшение количества грибов рода Candida - представителей условнопагогенной микрофлоры, увеличение количества представителей нормальной микрофлоры - бифидобактерий и кишечной палочки. Этим показано свойство избирательного воздействия препаратов солодки на условно-патогенную и патогенную микрофлору организма, при этом обладая высокими адагггационными и иммунокоррелирующими свойствами, тотальное противостафило-кокковое действие фитопрепарата «ГЛИЦИРФИТ», особенно по отношению к стафилококку гемолитическому. На основании проведенных исследований и испытания фитопрепарата оказалось, что для восполнения кишечного микробиоценоза и борьбы со стафилококковой кишечной инфекцией (поддержанием оптимального состояния микробиоценоза кишечника) наилучшим образом подходит фитобиотик - препарат «экстракт солодки «ГЛИЦИРФИТ», сертифицированный как добавка к пище (Свидетельство Госрегистрации № ЗО.АЦ.02.009.У.000001.06.10 от 30.06.2010г.).

Применение экстрактов растений и их фитокомпонентов в создании и отработке технологии фэтобальзама для регенерации кожи «ИНСОФИТ».

В создании и исследовании косметического фитобальзама использованы экстракты растений и фитокомпоненты, полученные оригинальными способами из некоторых лекарственных растений Прикаспийского региона юго-востока Европейской части России (Астраханской области) Glycirrhyza glabra (корня, плодов, соцветий) Achillea micranta (соцвеггий и травы), Helichrysum arenarium (соцветий и травы, Populus nigra, Ailanthus altissima, Robiniapseudacacia, Sophora japonica и других растений с высоким содержанием биологически активных компонентов с противомикробными, антиокси-дантными, дерматопротективными свойствами. Эти и другие компоненты применялись в процессе разработки и изготовления лечебных фитокомпозиций, фитокапель, фето-бальзамов и добавок для косметических средств (мыла, косметических моющих средств, скрабов, тоников, кремов, лечебных гелей и мазей, косметических лечебных бальзамов). Созданы косметические лечебные фитобальзамы для регенерации кожи, характеризующиеся не только оригинальным натуральным составом, но и высоким дер-мэгопротекгорным и защитным действием для любой кожи: «Фитобальзамы для регенерации кожи «ИНСОФИТ»: фигобальзам «ИНСОФИТ» для ног; фигобальзам «ИНСОФИТ» дня рук; фигобальзам «ИНСОФИТ» универсальный; фигобальзам «ИНСОФИТ» профессиональный. Для создания фитобальзама д тя регенерации кожи использовали экстрагируемые вещества изучаемых растений (солодки голой - корни, соцветия, листья, плоды; соцветий цмина песчаного; соцветий и листьев тысячелистника мелкоцветкового), экстракты лепестков роз, соцветий робинии псевдоакации, ромашки лекарственной. На эти фитобальзамы оформлены ТУ, получен патент № 2369377,2008 «Фигобальзам для регенерации кожи «ИНСОФИТ».

Биотехнология создания мининаборов для поэтапной очистки питьевой и природной воды.

Получено подтверждение о том, что многие компоненты лекарственных растений и растений обладают не только активностью против условно - патогенных микробов, в том числе растворимых в питьевой воде, но и способны улучшать качество питьевой

воды. Была разработана технология поэтапной очистки питьевой воды сначала растворами аналита и каталита, (Сухенко, 2008), затем добавлением микродоз экстрагируемых компонентов лекарственных растений (почки тополя, соцветия белой акации, соцветия цикория, тысячелистника, бессмертника, солодки голой, соплодия шелковицы и других растений), выделяемых оригинальным способом. Получены обнадеживающе результаты улучшения качества н санитарного состояния питьевой воды в районах Астраханской области без очистных сооружений, а также доочистки водопроводной воды для предотврапения распространения возбудителей желудочно-кишечных инфекций, передающихся водным путем и удаления хлорсодержащих соединений.

Выводы

1. В результате многолетних исследований и скрининга противомикробной активности дикорастущих растений региона Астраханской области в сравнении с некоторыми аптечными формами растительного лекарственного сырья были обнаружены феномены избирательности антибактериальных свойств растительных компонентов в отношении условно-патогенных микроорганизмов, сапрофитных форм микроорганизмов окружающей среды и возбудителей некоторых хронических мнкобактериозов. Обнаружена высокая противомикробная активность растений флоры дельтовой части Волги и Волго-Ахтубинской поймы Астраханской облает Повышение активности дикорастущих растений природного комплекса Юга России (Астраханской области) заключается в накоплении повышенных концентраций протавомикробных веществ и их комплексов в ответ на распространение микроорганизмов патогенной и условно-патогенной микрофлоры.

2. Главным фактором накопления БАВ, в том числе веществ различного состава с противо-микробными и бнорегуляторными свойствами, является высокий уровень инсоляции, среднегодовых температур (особенно во время вегетации большинства изучаемых растений), почвенные особенности региона. Основой дня формирования противомикробного барьера является эвдемичностъ региона по таким заболеваниям, как туберкуле], лепра, клещевые риккетсиозы и вирусные этиологии. Определены особенности проявления механизмов растительной иммунной защиты от основных видов эвдемичных мнкобактериозов.

3. Охарактеризованы запасы и распространение некоторых наиболее перспективных для биотехнологии дикорастущих лекарственных растений региона, обладающего наиболее характерными особенностями природно-климатического комплекса территории Юга России. Отработаны требования к сбору, сохранению и контролю ценного растительного лекарственного сырья. Определены запасы растительного сырья некоторых дикорастущих лекарственных растений Астраханского и прилегающего регионов, которые достаточно распространенны в массивах Приволжских (Астраханских) песках: Цмин песчаный (Helichrysum агепатшт (L) Moench), Тысячелистник мел ко цветковый (Achillea rmcranlha MB.) сем. Asteraceae. Распространение Солодки голой Gfycyrrhiza glabra L. сем. Fabaceae является доминантным в некоторых изучаемых участках, что согласуется с мнением других авторов, запасы которой в некоторых районах дельты Волги и региона в целом неограниченны.

4. Отработаны оригинальные методики экстрагирования противомикробных фракций, перспективные методы обработки и сохранения растительного сырья, изучен химический состав экстрагированных веществ, активность против микрофлоры окружающей среды основных химических компонентов отобранных растений. Созданы новые формы фитопрепаратов на основе компонентов противомикробных веществ, выделяемых из лекарственных растений Астраханского региона. Обоснованы вопросы использования фитокомпонентов лекарственных растений региона для разработки активных препаратов в комплексной терапии и перспективных направлениях современной биотехнологии.

5. Раскрыты механизмы противомикробного действия растительных веществ, извлекаемых из растений региона различными разработанными методами выделения, таких как флавоноиды, терпеноиды, сесквнтерпеноиды и др., некоторые гликозвды и их соединения, эфирные масла, фитонциды, лектииовые компоненты - фитолекгины (в комплексе с гликопептидами). Обнаружены и обоснованы механизмы воздействия растительных лек-тинов на бактериальную клетку, разрушение и лизис надклеточных компонентов, а также инактивация фитолектинами бактерий путем связывания с антигенными детерми-

«антами бактериальных клеток in vitro в культуре клеток бактерий и in vivo на экпери-ментальных животных.

6. На основе предложенной технологии экстрагирования получены высокоактивные лекгано-вые фитокомпоненты, которые были использованы в изучении антибактериальных фитопрепаратов растений с противомнкробным и нммунопротсктивным дсйсшисм. Определено влияние растительных биокомлонаггов на формирование и функционирование ряда микробных сообществ, сапрофитных, патогенных, условно - патогенных микроорганизмов в окружающей среде и в экспериментальных условиях.

7. Проведены испытания разработанных фитопрепаратов из солодки (Gfycyrrhiza glabra) и других изучаемых растений (Achillea micrantha, Heiichrysum arenarium). В результате заражения М. leprae и М. tuberculosis H¡-,Rv, стимулированных фитопрепаратами животных, отмечено достоверное повышение по сравнению с контролем функциональной активности перито-неальных макрофагов - миелопероксидазной системы (основной механизм иммунной защиты). Ряд положительных свойств, которыми обладают фитопрепараты, в том числе экстракт солодки «ГЛИЦИРФИТ», позволяют рекомендовать их в комплексной терапии туберкулеза и лепры. Полученные данные свидетельствуют о перспективности применения экстракта из корня солодки голой в комплексном лечении лепры с учетом дозы и длительности назначения препарата

8. Препарат из солодки «ГЛИЦИРФИТ» показал положительные результаты при апробации его в качестве фитобиотика. Показана возможность применения его наряду с про-биотиками в регулированию микробиоценоза кишечника, а в исследованиях влияния фитокомпонентов на сапрофитную и условно-патогенную микрофлору воды все экстракты растений способны к зколого-гигиеническому регулированию водной микрофлоры и улучшению качества питьевой воды.

9. Лектины и лектиноподобные белковые комплексы некоторых растений семейства Fabaceae оказались эффективными в связывании (адгезии) некоторых углеводсодержа-щих препаратов и наркотических метаболитов в эксперименте (в моче больных с передозировкой). Представлены и обоснованы механизмы противомнкробной, адгезивной, им-муногенной, адаптивной способности созданных растительных препаратов.

10. Разработаны фитокомпоиенты для производства продуктов пищевого назначения (экстракт солодки «ГЛИЦИРФИТ» как консервирующая добавка к пише), для комплексной терапии некоторых микобакгериозов в практике создания фармакологических форм противотуберкулезных, противолепрозных, противовирусных препаратов (фитокапли «ГЛ И ЦИ РФИТ»), фотонаборов для микробной очистки воды, лечебно-косметических фитобальзамов оригинального состава и других косметических средств.

11 Обоснованы положения повышенных уровней антимикробных веществ дикорастущих растений флоры Юга России и региона в связи с природными эколого-клнматическимн особенностями и использование биологически активных компонентов некоторых дикорастущих растений в биотехнологии создания противомнкробных фитокомпонентов с биорегуляторнымн свойствами для производства перспективной фитопродукции и дальнейших научно-теоретических исследований в этой области.

12.Коммерческие формы фитопрепаратов с антибактериальной активностью могут быть внедрены в практику некоторых специализированных лечебных учреждений и косметологиче-ских клиник. Проведено обоснование ботанической н биотехиологической роли дикорастущих растений флоры Юга России как источника ценных фитокомпонентов с противомикробнымн, иммунопротективными, дерматопротсктивными и другими бнорегуляторными свойствами. Список основных работ, опубликованных по теме диссертации

1. Сухенко Л.Т. Диагностические тест-системы на основе иммуноферментного метода при лепре. /Сухенко Л.Т., Дячина М.Н., Ющенко A.A., Ермолин Г.А. //ЖМЭИ, Москва, 1985, №1. - С. 64-68.

2. Сухенко Л.Т. Синтез и протнвомикробная активность некоторых акрил-N-(нитрофенил) карбаматов /A.B. Великородов, Л.Т. Сухенко //Хим. фармацевтам. Журнал. 2001. N 4. -С.24-25.

3. SukhenUoL.T. Synthesis and antimicobactcrial activity of «-substituted 3-aryl-5-nitromethyl-1,2,4-oxadiazoles /A.G. Tyrkov, LT. Sukhenko //Pharm. Chcm. J. 2002. VoL 36. № 1. -P. 14-15.

4. Сухенко JI.T. Синтез и изучение антимикробной активности ш -замещенных 3-арил-5-нитрометил-1,2,4-оксадиазолов /А. Г. Тырков, Л. Т. Сухенко //Хим. фармацевтам. журнал. 2002. - Т. 36, вып. 1. - С 14-15.

5. Сухенко Л.Т. Современное состояние акваресурсов Астраханской области и Северного Каспия /Л.Т. Сухенко, М.В. Лозовская, В.Г. Головин //Видовое разнообразие и динамика развития природных и производственных комплексов Нижней Волги (монография). В 2-х томах. Т. 1 Водная мелиорация, акваресурсы, экология, экономика и социальные отношения //Сост. и ред.: A.A. Жилкин, В.П. Зволинский, H.A. Черных. М.: Изд-во «Современные тетради», 2003.-С 176-212.

6. Сухенко Л.Т. Синтез и антимикробные свойства 3,5-дизамещенных изоксазолинов и изоксазолов, содержащих карбамэтные группы /Великородов A.B., Сухенко Л.Т. //Химико-фармацевтический журнал, 2003. N1.-C.24-26

7. Сухенко Л.Т. Синтез и антимикробная активность замещенных гидразонов нитро 1,2,4-оксадиазол-5-карбальдегида /Тырков А.Г., Сухенко Л.Т. //Хим. фарм. журнал. 2004. Т.38. вып.7. -C.30-3Z

8. Sukhenko LT. Synthesis and antimicrobacterial activity of substituted nitro-1,2,4-oxadiazole-5-carbaldehyde hydrazones /A.G. Tyrkov, LT. Sukhenko //Pharm. Chem. J. 2004. Vol. 38. № 7. -P. 376-378.

9. Сухенко Л. Т. Некоторые вопросы экологии внутренних водоемов г. Астрахани /Л. Т. Сухенко //Экологические системы и приборы: Москва 2005 N 9.-С.22-23 Ю.Сухеико Л.Т. Изучение биологически активных веществ некоторых растений в условиях Астраханского региона /Л. Т. Сухенко //Вестник Московского Государственного Областного Университета, Серия «Естественные науки», №2,2006. -С. 69-71.

П.Сухенко Л.Т. Влияние экстрактов некоторых растений Астраханской области на клетки микобактерий туберкулеза /Г.Н. Назарова, Л.Т. Сухенко, А.К. Маслов //Вестник новых медицинских технологий. - 2007. Т. XIV, №.4 - С. 44-45.

12. Сухенко Л.Т. Предпосылки использования экстракта из корня солодки голой (GLYCYRRHIZA GLABRA) в терапии лепры /Г. 11 Назарова, Л.Т. Сухенко, А.К. Маслов, CA. Лужнова //Вестник новых медицинских технологий : 2008. - Т. XV, N 2. - С 218-219.

13.Сухенко Л.Т. Влияние экстракта из корня солодки на функциональную активность перитонеальных макрофагов мышей, зараженных внутрибрюшинно микобакгериями туберкулеза /А.К. Маслов, Г.Н. Назарова, Л.Т. Сухенко //Вестник новых медицинских технологий: 2008. Том 15, N 4. -С. 212-213.

14.Изучение микробиологической активности экстракта из Сальвинии плавающей /Абд-Эльнаби Али-Эльдин Мохамед, Йосеф Абдул - Хафез Иссам, Л.Т. Сухенко, М.А. Егоров//Естественные науки. №1 (30), 2010. -С. 34-37.

15.Сухенко Л.Т. Разработка фитопреператов «ГЛИЦИРФИТ» с противомикробной активностью на основе растений астраханского региона /Л.Т. Сухенко //Естественные науки. №3 (32). 2010. -С. 145-149.

16.Сухенко Л.Т. Биологически активные вещества некоторых растений и механизмы их противомикробной активности /Л.Т Сухенко //Ж. Естественные науки. №3 (32). 2010. -С. 166-175.

17.Сухенко Л.Т. Антибактериальная активность эфирного масла н спиртовых экстрактов аира болотного (Acorus calamus) н верблюжьей колючки (Alhagi pseudalhagi) собранных в Астраханской области /11Й. Абдул-Хафез, М.А. Егоров и Л.Т. Сухенко //Вестник Алтайского государственного аграрного университета № 3 (77), 2011. -G 50-54.

18. Сухенко Л.Т. Перспективы выделения противомикробных биологически активных веществ из некоторых дикорастущих растений астраханской области /Л.Т.Сухенко //Вестник оренбургского государственного университета, № 4,2011. -C56-6Z

19.Сухенко Л.Т. Усиление активности перитонеальных макрофагов мышей, зараженных Mycobacterium tuberculosis H37Rv, леченных препаратом «ГЛИЦИРФИТ» из Glycyrrhiza glabra / Л.Т. Сухенко //Естественные науки. № 2 (35) 2011. -С. 172-174.

20.L.T. Sykhenko. Use of artificial antigens wits M. Leprae - PG L-l propertiess for the studies in leprosy /LT. Sykhenko international J. Leprosy, 1998, V. 57, Nl.-P. 23-26.

21.СухенкоЛ.Т. 3-Арил-5-нитрометил-1,2,4-оксадиазолы - новые эффективные агенты против стафилококков /Тырков А.Г., Сухенко Л.Т., Пащенко К.П. //Эколого-биологические проблемы Волжского региона и Северного Прикаспия. Материалы II Всероссийской научной конф. Астрахань. 1999. -С. 15-16.

22.Сухенко Л.Т. Сравнительная бактерицидная активность некоторых растений дикорастущей флоры Астраханской области /Сухенко Л.Т., Иванова Н.А., Великородов А.В., Ноздрачев В Я., Пилипенко В.Н. //Эколого-биологические проблемы Волжского региона и Северного Прикас-пия. Материалы III Всерос. научн. конф. АГПУ. Астрахань. 2000. -С. 207-208.

23.Сухенко Л.Т., Изучение антимикробных свойств некоторых растений Астраханской флоры //Ж. Естественные науки. 2001 №3.-.С.83-86.

24.Сухенко Л.Т. Некоторые вопросы экологии внутренних водоемов г. Астрахани / Сухенко Л.Т., Пучков М.Ю. //Сб. Проблемы строительства, инженерного обеспечения и экологии городов. 4.1, Пенза, 2001.-С. 41-43.

25.Velicorodov A.V., Tyrkov A.G., Suhenko L.T. Studing of antimicrobic activity of Some azoles. Ж. Естественные науки. 2002. №5. - C.99-101.

26.Сухенко Л.Т. Сравнение бактерицидных свойств некоторых растений Астраханского регио-на/Л.Т. Сухенко //Сб. статей Фитопатогенные бактерии. Фитонцидология. Аллелопатия, Киев, 2005, С. 88-89.

27. Сухенко Л.Т. Изучение механизмов противомикробной активности растений Астраханской флоры /Л.Т. Сухенко, Г.Н. Назарова, Н.В. Бовин//Ж. Естественные науки -№4(13). 2005. - С. 13-24.

28.Сухенко Л.Т. Аллелопатические признаки лектиноподобных белков растений Астраханского региона /Л.Т.Сухенко, Г.Н.Назарова, А.В.Ковалева //Алелопатія та счасна біологія: Материалы. междунар. науч. конф, Киев. 2006. -С. 131-138.

29.Сухенко Л.Т. Разработка фитопрепаратов «ГЛИЦИРФИТ» с противотуберкулезной активностью /Л.Т. Сухенко, М.А. Егоров, В.Я. Ноздрачев, Г.Н. Назарова, А.В. Ковалева //Биоресурсы, биотехнологии, экологическое развитие регионов юга России: Материалы докл. Междунар. конф. Сочи. 2007,-С. 71-75.

30. Сухенко Л.Т. Сырьевые запасы некоторых лекарственных растений Прикаспийского региона Астраханской области /В.Я. Ноздрачев, Л.Т. Сухенко //Мат. 1й межд. конф. по изменениям среды Каспийского региона, Балбосар, Иран, 24-25 августа 2008,- С. 21-25.

31.Сухенко Л.Т. Распространение и запасы сырья некоторых лекарственных растений Астраханского региона /Сухенко Л.Т., Ноздрачев В.Я., Блинников В.В., Морикова З.В., Астафьева О.В. //Маг. межд. конф. «Биоресурсы биотехнологии, экологического безопасного развития регионов Юга России». Сочи. 2000.- С. 71-75.

32.Сухенко Л.Т. Возможности применения препаратов из растений в комплексном лечении лепры /Г.Н.Назарова, А.К.Маслов, С.А.Лужнова, Л.Т.Сухенко //Материалы Междунар. науч-практ. конф., посвященной 60-летию института и 85-летию противолепрозной службы России. Астрахань, 2008.-С. 136-140.

33.Сухенко Л.Т. Антимикробная активность замещенных 5-динитрометил-З-фенил (метил)-1,2,4оксадиазолов/Гырков А.Г., Сухенко Л.Т., Шевцова И.А //Материалы Всероссийской научной конференции «Фундаментальные и прикладные проблемы современной химии и материаловедения». Махачкаїв. 2008. -С. 40-42.

34.Сухенко Л.Т. Биотехнология поэтапной очистки питьевой воды в условиях Астраханской области /Сухенко Л.Т., Егоров М.А., Морикова З.В., Блинников В.В., Астафьева О.В. //Биотехнология. Вода и пищевые продукты, 2008, Москва -С.290-291.

35.Сухенко Л. Т. Биотехнология очистки питьевой воды в условиях Астраханской области /Сухенко Л.Т. Материалы 10 Международной науч. конф. посвящ. 450-летию Астрахана Эколого-биологические проблемы Бассейна Каспийского моря и водоемов внутреннего стока Евразии, Астрахань 25-30 апреля 2008 - С.382-384.

36.Сухенко Л.Т. Развитие морфологических характеристик и химического состава растений в экологических условиях Астраханской области /Л.Т. Сухенко, Э.Г. Даулова. //Мат. научной конференции «Биотехнологические процессы в народном хозяйстве». Астрахань, 15-16 апреля 2008. - С. 88-90

37. Сухенко Л.Т. Перспективы микробиологической очистки питьевой воды в условиях Астраханской области /Сухенко Л.Т. //ВОДА. Химия и экология. 2008. Ж2.-С. 4446

38.L.T. Sukhenko. The Biotechnology of Phased Drinking Water Purification in the Conditions of Astrakhan Région /L.T. Sukhenko //In: Biotechnology, Biodégradation, Water and Foodstuffs. 2009,-P. 143-145.

39.Сухенко Л.Т. Биологически активные вещества некоторых растений и механизмы противомикробной активности /Сухенко Л.Т. //Ж. Биологические исследования. Астрахань, 2009, №1 (1).-С. 13-17.

40. Сухенко Л.Т., Егоров М.А., Ноздрачев В.Я., Блинников В.В., Назарова Г.Н., Сухенко О.В. Изучение противомикробных свойств растений Астраханской области и создание компонентов препаратов на их основе. Заключительный научн.-теха отчет по НИОКР, рег.№0120, 0710615, ИК №0220.0 900055, код ВНТИЦ194000 047 0309,15.01.2009.84 с. (депоиир.).

41.Сухенко Л.Т. Антибактериальные свойства эфирных масел и экстрактов некоторых растений Астраханской области /И.Й. Абдул-Хафиз, М.А. Егоров и Л.Т. Сухенко //Экокультура и фитобиотехнологии улучшения качества жизни на Каспии. Маг. межд. конф. с элементами научной школы для молодежи, Астрахань, издательский дом «Астраханский университет», 7-10 декабря2010.-С. 316-318.

42. Сухенко Л.Т. Фитотехиология применения растительных экстрактов для санитарно-экологической очистки воды /О.В. Астрафьева, Л.Т. Сухенко. //Экокультура и фитобиотехнологии улучшения качества жизни на Каспии. Мат. межд. конф. с элементами научной школы для молодежи, Астрахань, издательский дом «Астраханский университет, 7-10 декабря 2010,-С. 321-323.

43. Sukhenko L.T. 4th Congress of European Microbiologists « Activity increase of peritoneal macrophages in mice infected with M.tuberculosis H37Rv, treated with preparation from Glycyrrhiza glabra root» /Sukhenko LT., Egorov M.A. //Geneva, Switzerland, June 26-30,2011,251 p.

44.Sukhenko Lyudmila. The Aktivity Increase of the Peritoneal Macrophages of the Mise, infected with M. tuberculosis H37Rv, treated with the preparation "GLYCYRFIT" from Glycyrrhiza glabra /Sukhenko Lyudmila. //Efektivni nastroje modernich Ved -2011, Praha, Publishing House "Education and Science" s.r.o, 2011,- P. 53-56.

45. Sukhenko L. The Aktivity Increase of the Peritoneal Macrophages of the Mise, infected with M. tuberculosis H37Rv, treated with the preparation "GLYCYRFIT' from Glycyrrhiza glabra /Sukhenko L. //Материал VII Международной научно-практической конференции «Новината занапреднали наука - 2011» 17-25 май, 2011, том 20, София «БялГРАД-БГ» СЮД 2011.-С. 14-17.

46.Сухенко Л.Т. Биотехнология создания новых противомикробных фитопрепаратов для пищевых, косметических и экологических целей /Сухенко Л.Т. //Настоящее и будущее биотехнологии в решении проблем экологии, медицины, сельского, лесного хозяйства и промышленности. Сб. науч. трудов науч.-практич. семинара, УГУ, Ульяновск, 2011. -С. 162-166.

47. Сухенко Л.Т. Фнтобальзам «ИНСОФИТ» для регенерации кожи. /Сухенко Л.Т. (RU), Касаткина HB. (RU), Егоров М.А. (RU), Сухенко O.B. (RU) //Патент на изобретение № 2369377 or

29.07.2008. Российская Федерация. Заявка №2008130975 от 29.07.2008, опубликовано 2009. Зарегистрировано в Государственном реестре изобретений Российской Федерации 10.10.2009. Заявитель и патентообладатель: Сухенко Людмила Тимофеевна (RU).

48.Сухенко Л.Т. Экстракт солодки голой, обладающий противотуберкулезной активностью. /Сухенко Л.Т. (RU), Назарова Г.Н. (RU), Урляпова II.Г. (RU) //Пат. № 2362577 от 18.05.2007, Российская Федерация МПК А61К36/00. Заявка №2007118573 от 18.05.2007. Бюлл. Открытия. Изобретения, 2009. Зарегистрировано в Государственном реестре изобретений Российской Федерации 27.07.2009. Заявители и правообладатели: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Астраханский государственный университет» (АГУ) (RU), Общество с ограниченной ответственностью Научно-производственное предприятие «ГЛИЦИР-ФИТ» (RU).

49.Сухенко Л.Т. Способ получения экстракта, обладающего противолепрозной активностью /Сухенко Л.Т. (RU), Назарова Г.Н. (RU), Маслов А.К. (RU) //Пат №241111 от

29.07.2009. Заявка № 2009128324 от 21.07.2009. Зарегистрировано в Государственном реестре изобретений РФ 27.01.2011. Патентообладатель: Федеральное государственное учреждение «Научно-исследовательский институт по изучению лепры» Федерального агенст-ва по здравоохранению и соцразвигию (KU).

50.Сухенко Л.Т. Способ получения искусственных антигенов /Бовин Н.В., Байрамова Н.Э., Сухенко Л.Т., Ющенко A.A. //Пат. Xsl 6142202 (СССР). Опубликовано в ж. Открытия, изобретения. 1990, №46, с. 256. Патентообладатель Институт биоорганической химии РАН (ИБХ РАН) (RU).

Заказ № 2528. Тираж 100 экз. Уч.-изд.-л. 3,1. Усл.-печ. л. 2,9.

Издательский дом «Астраханский университет» 414056, г.Астрахань, ул. Татищева, 20 Тел. (8512) 48-53-47 (отдел маркетинга), 48-53-45 (магазин), 48-53-44, факс: (8512) 48-53-46. E-mail: asupress@yandex.ru

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Сухенко, Людмила Тимофеевна

ВВЕДЕНИЕ.

Обоснование исследования и применения растений и растительных компонентов.

Причины изменчивости химического состава лекарственных растений.

ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

1.СКРИНИНГ ПРОТИВОМИКРОБНОЙ АКТИВНОСТИ РАСТЕНИЙ ЮГА РОССИИ.

1.2. Сравнительные исследования противомикробной активности экстрактов растений и синтетических соединений - карбамидов и оксидазолов.

1.3. Исследования противомикробной активности растительных экстрактов методом КОЕ.

1.4. Исследование противомикробной активности эфирных компонентов растений.

2.ИЗУЧЕНИЕ РАСПРОСТРАНЕНИЯ И ЗАПАСОВ НЕКОТОРЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ РАСТЕНИЙ С ПРОТИВОМИКРОБНЫМИ СВОЙСТВАМИ В АСТРАХАНСКОЙ ОБЛАСТИ И ЮГА РОССИИ.

2.1. Исследование запасов и распространения ценного растительного материала в природных объектах Астраханской области.

2.2. Исследования продуктивности ценного лекарственного растительного сырья и стандартизация собранного материала.

3.ПОДБОР МЕТОДОВ СУШКИ, ИЗМЕЛЬЧЕНИЯ И СОХРАНЕНИЯ

ЦЕННОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ.

3.1.Разработка методов и специальных условий воздушно-теневой сушки, технологий измельчения растительного материала.

4.ПОДБОР ТЕХНОЛОГИЙ ЭКСТРАГИРОВАНИЯ РАЗЛИЧНЫХ СОЧЕТАНИЙ РАСТИТЕЛЬНЫХ ВЕЩЕСТВ ИССЛЕДУЕМЫХ РАСТЕНИЙ

4.1. Исследование методов и средств экстрагирования ценного растительного материала для выделения биологически активных веществ и стандартизации фито массы.

5. ИЗУЧЕНИЕ ХИМИЧЕСКОГО СОСТАВА И ПРОТИВОМИКРОБНОЙ АКТИВНОСТИ МИКРООРГАНИЗМОВ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ И ЧЕЛОВЕКА.

5.1. Изучение химического состава компонентов растительных жидких и масляных экстрактов.

5.2. Изучение сравнительной биологической противомикробной активности растительных экстрактов и препаратов на их основе.

6. БИОТЕХНОЛОГИЯ ВЫДЕЛЕНИЯ ЛЕКТИНСОДЕРЖАЩИХ КОМПОНЕНТОВ ИССЛЕДУЕМЫХ РАСТЕНИЙ И ИЗУЧЕНИЕ ИХ АНТИБАКТЕРИАЛЬНОЙ И ИММУНОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ.

6.1. Результаты исследований противомикробных свойств буферных экстрактов в отношении Staphylococcus aureus.

6.2. Результаты исследований противомикробных свойств буферных экстрактов в отношении Esherichia coli.

6.3. Сравнительная противомикробная активность буферных экстрактов некоторых растений семейства Asteraceae, семейства Fabaceae, семейства Tiliaceao, семейства Salicaceae против Staphylococcus aureus.

6.4. Обнаружение лектиноподобных веществ некоторых растений с использованием бактериальных углеводов.

6.5. Результаты исследования иммунобиологических свойств. растительных экстрактов и лектинсвязывающих углеводов.

7. ИЗУЧЕНИЕ СОРБЦИОННЫХ И АДГЕЗИВНЫХ СВОЙСТВ ЭКСТРАКТОВ НЕКОТОРЫХ РАСТЕНИЙ И ВОЗМОЖНОСТИ ПРИМЕНЕНИЯ ИХ В КЛИНИЧЕСКОЙ ПРАКТИКЕ.

8. ИЗУЧЕНИЕ И РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ УЛУЧШЕНИЯ САНИТАРНО-ЭКОЛОГИЧЕСКОГО СОСТОЯНИЯ ВОДЫ В СВЯЗИ С ПРОТИВОМИКРОБНОЙ АКТИВНОСТЬЮ РАСТЕНИЙ.

8.1. Особенности эколого-географического положения Астраханской области

8.2. Экологическое состояние водоемов города Астрахани.

8.3.Особенности участия водного фактора в распространении инфекции и саморегулировании водоемов.

8.4. Применение растений и растительных компонентов для санитарно-экологической очистки водоемов.

9. ИССЛЕДОВАНИЯ АКТИВНОСТИ ЭКСТРАГИРОВАННЫХ ВЕЩЕСТВ РАСТЕНИЙ И РАСТИТЕЛЬНЫХ ПРЕПАРАТОВ ПРОТИВ МИКОБАКТЕРИИ.

10. СОЗДАНИЕ И ОТРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ ФИТОКОМПОНЕНТОВ И ФИТОПРЕПАРАТА «ЭКСТРАКТ СОЛОДКИ «ГЛИЦИРФИТ» И

ФИТКОМПОЗИЦИИ ПРЕПАРАТА «ФИТОКАПЛИ «ГЛИЦИРФИТ».

11.ИЗУЧЕНИЕ АКТИВНОСТИ БАВ РАСТИТЕЛЬНЫХ ПРЕПАРАТОВ НА ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ЖИВОТНЫХ (IN VIVO), ЗАРАЖЕННЫХ ЛЕПРОЙ (MYCOBACTERIUM LEPRAE) И ТУБЕРКУЛЕЗОМ (MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS).

11.1.Влияние экстрактивных компонентов растений на морфологию клеток микобактерий M.tuberculosis.

11.2.Применение растительных экстрактов и препаратов(т vivo в эксперименте) в качестве противотуберкулезных и иммунотропных средств для лечения микобактериозов.

11.3. Применение препаратов из растений для комплексной противолепрозной фитотерапии.

12. Применение фитопрепарата экстракт солодки «ГЛИЦИРФИТ» в качестве фитобиотика.

13. ПРИМЕНЕИЕ РАСТЕНИЙ И ИХ КОМПОНЕНТОВ В СОЗДАНИИ И ОТРАБОТКЕ ТЕХНОЛОГИИ ФИТОБАЛЬЗАМА ДЛЯ РЕГЕНЕРАЦИИ КОЖИ «ИНСОФИТ» И ФИТОНАБОРА ДЛЯ ОЧИСТКИ ВОДЫ.

13.1. Технология создания и состав серии лечебных косметических фитобальзамов «ИНСОФИТ» на основе липидных и экстракционных компонентов растений.

13.2. Биотехнология создания набора для поэтапной очистки воды.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Дикорастущие растения флоры Юга России как источник ценных фитокомпонентов с противомикробными и биорегуляторными свойствами"

Актуальность. Одним их важнейших направлений современной биологической науки является использование биообъектов или их молекул в промышленном производстве полезных для человека и животных веществ, а так же в производстве лечебно-профилактических и диагностических препаратов из природных натуральных, в том числе растительных компонентов (Тихонов, 2008).

В последние десятилетия заметно возрос интерес к проблеме поддержания и восстановления микроэкологического статуса человека. Для этих целей все шире используют натуральные безопасные растительные фитопрепараты. Повышенное внимание к фитопрепаратам вызвано ростом контингента лиц, страдающих от применения химических антибиотиков и требующих коррекции состояния организма с помощью фитопрепаратов (Никитина, 2009; Виссарионов, 2008). Актуальность использования лекарственных растений неизмеримо возросла в последние десятилетия, что обусловлено множеством терапевтических неудач при использовании химических антибиотиков и терапевтических препаратов, по данным ВОЗ 2,55% госпитализированных составляют больные с лекарственными осложнениями (Нестерова, 2008; Виноградова, 1999).

Астраханская область обладает уникальным природно-ландшафтным положением и климатическими особенностями, определяющими особое экологическое состояние окружающей среды. Экологические особенности региона связаны с повышенным уровнем инсоляции, крайне низкой влажностью воздуха, засушливыми глинисто-песчанными почвенными ландшафтами Приволжских песков среди многочисленной сети рукавов, протоков, ильменей Волго-Ахтубинской поймы и дельты Волги в целом (Щучкина, 1996; Пилипенко, 1996, 2003; Бармин, 2001; Чуйков, 2000).

В силу сложившихся природно-экологических условий здесь успешно уживаются как пустынно-песчанные, так и тропические представители флоры. Таким образом, на территории Астраханской области создана уникальная природно-ландшафтная обстановка с неоценимым разнообразием видов и представителей флористического состава. Все эти природно-экологические особенности региона могут создавать условия для формирования у дикорастущей флоры повышенных концентраций биологически активных веществ, обладающих и противомикробной активностью (Муравьева, 2002; Пилипенко, 1996). Поэтому, актуальным является изучение биологического разнообразия растительности, особенно лекарственных видов и других, уникальных по свойствам и биологическим характеристикам дикорастущих растених Приволжского и Прикаспийского региона и биотехнология их использования для пищевой, косметической, фармацевтической промышленности (Абрамова, 1988; Бабоша, 2008; Казаринова, 2000; Корсун, 1998; Коштоян, 1981; Демченко, 2006; Вичканова, 1983, 2000; Виссарионов, 2008; Будаева, 2005; Баронец, 2001; Ягодка, 1991; Чиков, 1977; Муравьев, 1976; Лахтин, 1988).

Эффективность растительных препаратов определяется совокупностью и биологической активностью многих лекарственных растений и свойств химических веществ, входящих в их состав (Бондаренко, 2003; Шендеров, 2005; Феклисова, 2007). Специалисты в области фитотерапии пытаются повысить биологическую активность растительных терапевтических средств за счет разработки комплексных препаратов на основе специально подобранных растительных композиций. Успешно применяются сочетания компонентов противомикробного или иного действия для комплексной химиотерапии, а также при добавлении фитокомпонентов в продукты лечебной косметологии, в качестве физиологически активных пищевых добавок и препаратов (Вичканова, 2007; Taxa и др., 2009; Шакирова, 2007). Группа специалистов в области разработки противомикробных растительных препаратов считают, что актуальность создания оригинальных антимикробных средств нехимической «иной» природы с новыми растительными свойствами природных компонентов и другим механизмом действия не вызывают сомнений (Van Damme, 1988; Pan, 2002; Вичканова, 2009). В связи с этим в последние годы осуществляется новый виток приобщения косметологии, медицины и фармакологии к средствам растительного происхождения.

Актуальность использования лекарственных растений неизмеримо возросла в последние десятилетия. Это обусловлено тем, что и сегодня мы являемся свидетелями терапевтических неудач и ятрогенных осложнений. Достаточно упомянуть о «талидомидовой трагедии» и появлении новой нозологической формы, получившей название «лекарственная болезнь». По данным ВОЗ из числа госпитализированных больных 2,5—5% составляют больные с лекарственными осложнениями. В то же время в связи с возросшей продолжительностью жизни людей увеличивается число лиц с сочетанной патологией, требующей одновременного назначения ряда лекарственных средств. Фармакологический эффект может существенно изменяться при совместном применении лекарственных средств. Конечный результат совместного действия веществ может проявляться в форме синергизма или антагонизма. Нередки случаи, когда вещества не влияют друг на друга. Это обстоятельство следует учитывать особенно у лиц пожилого и старческого возраста. При рациональном сочетании лекарственных растений терапевтические возможности расширяются (автор.). Не вывывает сомнений целесообразность применения лекарственных растений при первичной профилактике ряда заболеваний, поддерживающей постоянной или курсовой терапии при их вторичной профилактике. Преимуществом лекарственных растений является их малая токсичность и возможность длительного применения без существенных побочных явлений, широкие терапевтические возможности. Однако не следует противопоставлять препараты, созданные на основе химического синтеза, средствам растительного происхождения. Для медицинской практики одинаково важны как те, так и другие. Каждый лечебный препарат независимо от способа его получения занимает свое место в лечебном процессе, имеет свой характер фармакологического действия, специфику терапевтической эффективности, оптимальный диапазон показаний к применению. Например, антибиотики, гормональные препараты и психотропные средства незаменимы при интенсивной терапии, и, напротив, при функциональных расстройствах, легких формах патологии для проведения поддерживающей терапии следует отдать предпочтение лекарственным растениям. Использование фитотерапии остается актуальным для практической медицины. Требуется современная научная трактовка традиционных подходов к лечению лекарственными растениями с учетом этиологических, патогенетических принципов и определение их места в комплексном лечении. Необходимо иметь полные сведения по фармакологической активности лекарственных растений в зависимости от содержания в них биологически активных веществ, а также рекомендации по их применению в лечении заболеваний, лечебно-профилактические рекомендации по использованию лекарственных растений должны быть систематизированы по нозологическому принципу. Важным является внедрение новых форм применения пищевых растений для профилактики и лечения ряда патологических состояний, а также для повышения терапевтической эффективности специфического лечения, включение в состав лечебных сборов растений, официально разрешенныех к применению в медицинской практике.

В последнее десятилетие заметно возрос интерес к проблеме поддержания и восстановления микроэкологического статуса человека. Для этих целей все шире используются натуральные растительные препеараты, их компоненты и активная субстанция для фармакологических и терапевтических целей в сочетании с химиотерапией и антибиотикотерапией, а иногда в качестве бактериотерапевтических препаратов - фитобиотиков. В последнее время широко представленно внимание к фитопрепаратам, фитокосметике и потребеление растений в качестве физиологически активных добавок к пище. Кроме того, некоторые авторы предлагают растительные компоненты в качестве препаратов для коррекции аутофлоры в различных биотопах организма человека и животных для поддержания здоровья макроорганизма. (Воробьев, 2004; Грачева, 2004; Глушанова, 2005; Бондаренко,2007; Шевелева, 2007; Шендеров, 2009).

Эффективность фитопрепаратов определяется совокупностью биологических свойств химических веществ растений и компонентов, входящих в их состав (Бондаренко, 2003; Шендеров, 2005; Феклисова, 2007). (Минушкин, 1998; Онищенко, 2002; Шендеров, 2005; Новокшенов, 2007). Разработчики растительных препаратов и растительной косметики пытаются повысить биологическую активность продукции за счет разработки активных, полезных для организма свойств, растительных компонентов, как для самого растения, так и для человеческого организма и разработать на их основе комплексные препараты из специально подобранных композиций, сочетания компонентов натурального растительного и искусственного происхождения. (Ардатская, 2002; Алешкин, 2003; Бархатова, 2003; Шендеров, 2005; Амерханова, 2009).

Одним из разделов применения народной медицины в быту и в области здоровья человека является использование различных компонентов (в различном сочетании) и целых растения, для лечения заболеваний изменение экологического статуса окружающей среды, а также декоративно прикладное применение растений в жизни человека. Издревле люди разных национальностей разных вероисповеданий разных концессий проживающих на разных территориях применяли окружающие их растения в быту для лечения и в ритуальной и хозяйственной деятельности. С развитием медицинской и фармацевтической химии очень многие препараты определенной направленности были заменены на синтетические и успешно применялись в традиционной медицине. Однако, через некоторое количество десятков лет специалисты стали обнаруживать массу побочных вреднейших побочных проявлений влияния химических препаратов, на органы и ткани человека вызывающих их отравление, токсические действия развития новообразований, изменение физиологических функций.

При использовании растений в лечебных целях бывает непонятно иногда их положительное действие на больной организм. В этом нет ничего противоречивого, так как в одном и том же растении содержатся различные классы химических соединений: флавоноиды, дубильные вещества, витамины, органические, фенолкарбоновые и другие органические кислоты, а также белковые вещества, которые являются составной частью протоплазмы всех живых клеток

В связи с этим последние годы осуществляется новый виток приобщения косметологии, медицины и фармакологии к средствам растительного происхождения. Эта направленность разработчиков к использованию многих растительных компонентов и их композиций в косметологии привела к развитию нового направления - лечению кожных проблем косметическими средствами с участием растительных веществ, это новое направление получило название косметицевтика (космецевтика).

Астраханская область обладает уникальным природно-ландшафтным положением и климатическими особенностями, создающими особое экологическое состояние окружающей среды. Астраханская область расположена в дельтовой равнине самой крупной реки Северного полушария -Волги, а точнее так называемой Волго-Ахтубинской поймы и разделена гидрографической сетью мелких проток, рукавов, ериков, ильменей, озер, лиманов и других водоемов. Через Астраханскую область проходят Приволжские пески, удаляясь в Калмыкию и Казахстан. Через всю Астраханскую область с Востока на Запад проходят грядой Бэровские бугры со своим уникальным природным комплексом.

Экологические особенности региона связанны с повышенным уровнем инсоляции, крайне низкой влажностью воздуха, засушливыми глинисто-песчанными почвенными ландшафтами Приволжских песков среди многочисленной сети рукавов, протоков, ильменей Волго-Ахтубинской поймы и дельты Волги в целом. Все эти природно-экологические условия региона создают условия для формирования у дикорастущей флоры повышенных концентраций биологически-активных веществу обладающих так же и противомикробной активностью. В силу сложившихся природно-экологических условий здесь успешно уживаются как пустынно-песчанные, так и тропические представители флоры. Таким образом, на территории Астраханской области создана уникальная природно-ландшафтная обстановка с неоценимым разнообразием видов и представителей флористического состава.

Однако, сложившаяся на юге России в последние годы практика пастбещепользования является нерациональной и пагубной для природной среды, в том числе для растений лекарственного или хозяйственного назначения. Поэтому изучение биологического разнообразия, включая лекарственные виды и уникальные по свойствам и биологическим характеристикам дикорастущие растения Приволжского и Прикаспийского региона, биотехнология их использования для пищевой, косметологической, фармацевтической промышленности, а так же проблема сохранения дикорастущих видов с высоким накоплением активных компонентов в природной среде остается крайне актуальной.

Обоснование исследования и применения растений и растительных компонентов

Одной из проблем применения растений в народной медицине в быту и для здоровья человека является использование различных компонентов в сочетаниях, частей и целых растений для лечения различных заболеваний. С развитием медицинской и фармацевтической химии многие натуральные препараты со сложностями хранения и неустойчивым действием были заменены на синтетические и успешно применялись в традиционной медицине. Однако, через некоторое время специалисты стали обнаруживать массу побочных влияний химических препаратов на органы и ткани человека, вызывающих токсическое действие, аллергизацию организма, развитие новообразований, изменение физиологических функций (Лавренов и др., 2006).

В связи с этим, в последние несколько десятилетий осуществляются новые поиски безопасных для организма экологичных натуральных (растительного, животного, бактериального или нанопроисхождения) препаратов. Вследствии ряда причин в медицине, биотехнологии, фармакологии, косметологии и разработке пищевых добавок возник новый виток использования растений в производстве средств растительного происхождения. Направленность разработчиков на использование многих растительных компонентов и их композиций в косметологии привела к развитию нового направления для лечения кожных проблем косметическими средствами с растительнми активными веществами, это новое направление получило название косметицевтика (космецевтика). Поэтому, в наше время важнейшей задачей науки и практики является изучение флоры с целью широкого использования в народном хозяйстве, пищевой промышленности, косметологии и медицине (Соколов и др., 1998).

Известно, что биологически активные вещества растительного происхождения обладают множеством полезных качеств, как для самого растения, так и для организма человека. В связи с этим, в последнее время очень широко распространяются перспективы применения препаратов натурального растительного происхождения в качестве биологически активных добавок и других препаратов в практике медицинской, пищевой, фармацевтической, косметологической промышленности. Для этого выделяются разнообразные химические вещества из разных растений. К лекарственным растениям, изучаемым в таких исследованиях, относятся и растения Астраханского региона, проявляющие в многочисленных исследованиях противомикробную активность за счет содержания в них некоторых химических биологически активных веществ. Поиск лекарственных средств из растительного сырья в последние годы особенно привлекает исследователей. Растительные препараты обладают рядом положительных свойств. Это и высокая эффективность при низкой токсичности, комплексное гармонизирующее влияние на организм, широкий спектр действия при относительной дешевизне (Сухенко, 2011).

В последние десятилетия прошлого столетия ознаменовались развитием инфекционных заболеваний в мире и крупными достижениями в области лечения заболеваний, вызываемых различными инфекционными агентам. К числу таких достижений относятся создание антибиотиков и синтетических химических средств, воздействующих на патогенный возбудитель. Однако постоянное и широкое применение антибиотиков и химических терапевтических средств приводит к ряду последствий и осложнений в организме после их применения. К таким осложнениям относятся возникновение аллергических реакций от применения большинства антибиотиков и, как следствие, аллергизация населения, особенно детей. Часто специалистами обнаруживается наличие серьезных побочных токсических влияний на системы и органы. Серьезные проблемы вызывает развитие лекарственной резистентности микроорганизмов к известным синтетическим антимикробным средствам, в связи с уменьшением нормального состава автомикрофлоры и увеличением спектра патогенной микрофлоры, возникшей из условно-патогенных микроорганизмов. Последствия после применения химических антибиотиков часто приводят к возникновению новых инфекционных процессов, дисбактериозов, бактерионосительства и выделения патогенного возбудителя в окружающую среду (Максютина, 1985). Поэтому разработка оригинальных антимикробных средств иной природы; с новыми свойствами и другим механизмом действия являются наиболее перспективным направлением.

В связи с этим, в последнее время актуальным оказалось исследование лекарственных свойств многих растений дикорастущей флоры с противомикробными, иммуномодулирующими и иммуногенными свойствами, известные науке активные вещества с антибактериальным действием, и некоторые белковые соединения (лектины), которые являются аналогами антител животных и человека (Сухенко и др., 2009).

Причины изменчивости химического состава лекарственных растений

Образование и накопление в лекарственных растениях фармакологически активных веществ являются динамическим процессом, изменяющимся в онтогенезе растения, а также зависящим от многочисленных факторов внешней среды. В ходе онтогенеза растение проходит фазы вегетативного развития, цветения и плодоношения. Онтогенез, естественно, сопровождается характерными изменениями обмена веществ, причем изменения в обмене белков и углеводов, липидов (а также ферментов и их коферментов -витаминов) влекут за собой изменения и в динамике образования продуктов вторичного синтеза (алкалоиды, гликозиды, терпены, фенольные соединения и др.). К признакам онтогенетического характера нужно отнести, прежде всего, специфичность качественного образования определенных групп фармакологически активных веществ в систематических подразделениях растений (виды, роды, семейства, классы). Общеизвестно, что имеются группы растений, в которых накапливаются преимущественно эфирные масла, в других алкалоиды и т. п. Образование одного и того же химического вещества в родственных растениях возможно лишь в силу того, что у филогенетически близких видов существуют одни и те же ферменты, вызывающие образование сходных веществ, иначе говоря, сходность в протекающем процессе обмена веществ. Другой онтогенетической особенностью является неравномерность распределения и локализации биологически активных веществ по органам и тканям растения, например, алкалоиды в хинном дереве накапливаются в коре, а в древесине их почти нет, в наперстянке сердечные гликозиды накапливаются преимущественно в листьях, а эфирное масло у зонтичных локализуется в плодах и др. Более того, качественный состав фармакологически активных веществ может быть различным у одного и того же растения. Так, например, в подземных органах солодки образуется глицирризиновая кислота, а в надземных частях ее нет или мало, там содержатся другие тритерпеновые соединения (Муравьева и др., 2002).

Таким образом, наблюдается родовое накопление биохимических, а так же и физиологических признаков, которые передаются растениям одного вида или рода и является помимо морфологического сходства, основой родственных связей в родовой или более крупной систематической единице. Известны виды лекарственных растений, не отличающиеся по морфологическим признакам, но резко отличаются по качественныму составу суммы действующих веществ (например, суммы алкалоидов), их называют хеморасы, признаки которых передаются по наследству (Блинова и др., 1990).

Отмечено, что растущие рядом особи одного и того же вида могут значительно отличаться по количеству образующихся в них действующих веществ. Это свойство является наследственным, и потомство этих особей будет также отличаться высоким (или низким) содержанием действующих веществ даже в случае переноса их в другие климатические зоны.

Динамика образования действующих веществ также подчиняется онтогенетическим закономерностям. На выход действующих веществ влияют возраст растений, времена и месяцы года, а для эфирно-масличных растений -даже различные часы дня. На содержание действующих веществ существеннейшее влияние оказывает фаза развития растения. От фазы развития растения зависит не только количественный, но и качественный состав действующих веществ, например эфирное масло кориандра, состав которого в период молочной спелости плодов отличается от состава в период их полной зрелости, или количество ментола (свободного и связанного) в эфирном масле перечной мяты непрерывно увеличивается в период ее цветения.

Спектр химической изменчивости еще больше изменяется у лекарственных растений под влиянием факторов внешней среды. Многие авторы выделяют фактор питания лекарственных растений и значения почвы как источника питательных веществ и как физической среды с определенным механическим составом, прогреваемостью, с определенной наличностью воды, газов и микрофлоры, а самое главное по наблюдениям многих авторов,растения являясь живыми организмами реагируют на изменения внешней среды (на экологию воздуха, почвы, на окружающий микробный состав, в том числе патогенных микроорганизмов, синтезом и выделением специфических защитных химических веществ. Например, инсектицидная далматская ромашка (Pyrethram cinerariifolium Trev.) на родине в Далмации успешно растет на солнечных склонах с каменистой почвой. Большинство ксерофитных ароматических растений предпочитает сухие каменистые почвы, например, чабрец, лаванда и др. Нитратолюбивые растения, такие как крапива (Urtica dioica L.), пастушья сумка (Capsella bursa pastoris Medic.) и др. растут на удобренных почвах. На солонцах и солонцеватых почвах большие массивы образуют многие виды полыни {Artemisia maritime Keller, и др.), донника и других растений (Муравьева и др., 2002).

Химизм лекарственных растений изменяется также в зависимости от светового режима. У светолюбивых растений солнечных открытых мест солнечный свет стимулирует образование действующих веществ (многие эфирномасличные растения), у тенелюбивых растений затемненность обязательное условие не только для развития самого растения, но и для накопления действующих веществ (некоторые алкалоидные растения). На химизм лекарственных растений влияют количество солнечных дней, определенные часы дня, сила освещения и другие условия световой обстановки, в том числе и в связи с атмосферными изменениями, то есть чем больше за время вегетации светового, солнечного времени, тем больше концентрация накопленных биологически активных веществ

Тепло так же является одним из важнейших факторов в жизни лекарственных растений, так как главным образом от тепловой и световой энергии зависит накопление в них действующих веществ. От количества тепла зависят состав флоры данной географической зоны, а также продолжительность вегетации, количество урожая и накопление действующих веществ. Каждое растение имеет свой предельный минимум тепла (сумму температур), который позволяет ему полно и законченно завершить свой жизненный цикл. Вопросы теплового режима лежат в основе лекарственного растениеводства. Так, например, считают, что для большинства субтропических культур в Западном Закавказье требуется сумма тепла не менее 4000°С для всего вегетационного периода. Значение тепла для лекарственных растений подмечены и в условиях их естественного произрастания, например, осенний зимовник (Colchicum autumnale L.) может зацвести в октябре, при достаточном количестве тепла; либо цветение оттянется на весенний период. Местоположение и рельеф влияют на количество тепла, больше солнцабольше тепла, на южных и юго-западных склонах в горах Западного Кавказа в крестовнике накапливается больше алкалоидов, чем на северных и северовосточных склонах (Блинова и др., 1990, Васильева и др., 1998, Муравьева, 1990, Новиков, 2004).

Для формирования ценных лекарственных компонентов у растений той или иной географической зоны, кроме тепла и света, большую роль играет вода, она придает определенный характер почвенному субстрату и обусловливает состав и характер травянистого покрова местности. Количество осадков и коэффициент влажности окружающей среды накладывают определенный отпечаток на количество и состав действующих веществ. Для ксерофитов (сухолюбов) вреден излишек влажности, для гидрофитов (влаголюбов), наоборот, вредны засушливые условия; мезофиты наиболее приспособлены к колебаниям влажности, в них изменение химизма зависит уже от других причин. На примере Valeriana pahistris Кг. — болотной валерианы видно, что корневища этого вида валерианы, собранные с неосушенного болота, содержали меньше эфирного масла, чем собранные с осушенного болота (1,9 и 2,2% соответственно), но зато в масле последних было больше свободной и связанной валериановой кислоты (0,217 и 0,192% соответственно). Одни и те же растения в местностях с высокой и низкой влажностью накапливают одни и те же активные вещества в большей концентрации на единицу сырой массы (Задорожный и др. 1992, Лавренев и др., 2006).

Таким образом, на химизм лекарственных растений влияет комплекс экологических условий в их взаимной связи и обусловленности, связанных с особенностями географической обстановки, такими как широта и долгота места, его экспозиция, высота над уровнем моря, близость водных бассейнов и так далее. С изменением географической обстановки изменяется весь комплекс взаимно связанных факторов - смена тепла и холода, интенсивность солнечного света, доступность ультрафиолетовых лучей и т.д. Так, в растениях южных широт накапливается обычно больше действующих веществ.

На количество действующих веществ оказывает определенное влияние и перемена географической долготы. В большинстве случаев восточные районы Европейского материка дают большие выходы эфирного масла. Подмечено, что у масличных растений количество жирных кислот и йодное число масел растут от берегов океана в глубину материка. Восточный, более континентальный, климат сказывается и на солодке: среднеазиатский солодковый корень значительно богаче глицирризиновой кислотой, чем испанская или итальянская солодка (Муравьева и др.,2002).

Влияние высоты над уровнем моря также заметно влияет на динамику накопления действующих веществ в лекарственных растениях. Различные эфироносы по-разному реагируют на повышение высоты над уровнем моря: у лаванды, например, наблюдается понижение, а у розы, наоборот, повышение содержания эфирного масла (и улучшение качества!) на плантациях, заложенных более высоко в горах. Оптимальная высота произрастания для промышленных видов крестовника 1600-2000 м над уровнем моря. Здесь они образют заросли на огромных площадях и в них накапливается максимальное количество алкалоидов (Муравьева, 1978).

Таким образом, факторов, влияющих на изменение свойств лекарственных растений, очень много. Так, например, на химизм лекарственных растений могут влиять приемы, к которым прибегает человек с целью достижения желаемых изменений в действующих веществах (повреждения, надрезы, вершкование, обрезка и т. п.), определенные изменения в химизме лекарственных растений могут происходить и на отдельных стадиях заготовительного процесса.

В формировании лекарственных растений Астраханского региона и их качество, кроме тепла и света, громадную роль играет вода, которая придает определенный характер почвенному субстрату и тем самым обусловливает состав и характер травянистого покрова местности. Количество осадков и коэффициент влажности окружающей среды одновременно накладывают определенный отпечаток на количество и состав действующих веществ. Известно, что химизм лекарственных растений изменяется в зависимости от светового режима (Пилипенко и др., 1997; Русакова, 1998). Тепло также является одним из важнейших факторов в жизни лекарственных растений. От количества тепловой и световой энергии зависит состав флоры данной географической зоны, а также продолжительность вегетации, накопление в них действующих веществ. Каждое растение имеет свой предельный минимум тепла (сумму температур), который позволяет ему полно и законченно завершить свой жизненный цикл. Вопросы теплового режима лежат в основе лекарственного растениеводства (считается, что для большинства субтропических культур требуется сумма тепла не менее 4000°С для всего вегетационного периода). Таким образом, на химизм лекарственных растений влияет комплекс экологических условий в их взаимной связи и обусловленности, который связан также с особенностями географической обстановки, такими как широта и долгота места, его экспозиция (высота над уровнем моря, близость водных бассейнов и т. д.), количество осадков, солнечных и тепловых факторов во время вегетации. С изменением географической обстановки изменяется весь комплекс взаимно связанных факторов: смена тепла и холода, интенсивность солнечного света, доступность ультрафиолетовых лучей и т.д. Таким образом, можно отметить, что в растениях южных широт накапливается обычно больше действующих веществ (Лавренов и др.,2006; Задорожный и др., 1992; Юдина и др., 1998). Природно-экологические факторы региона, по мнению авторов, создают условия для формирования у дикорастущей флоры повышенных концентраций биологически-активных веществ, обладающих также и противомикробной активностью.

Своеобразное расположение Астраханского региона на Юго - Востоке европейской части России, на границе моря и полупустыни, при впадении величайшей реки Волги в Каспийское море, сформировало специфические природные характеристики Астраханской области. Регион обладает уникальным природно-ландшафтным положением и климатическими особенностями, создающими особое экологическое состояние окружающей среды. Экологические особенности региона связанны с повышенным уровнем инсоляции, крайне низкой влажностью воздуха, засушливыми глинисто-песчанными почвенными ландшафтами Приволжских песков и Бэровских бугров среди многочисленной сети рукавов, протоков, ильменей Волго-Ахтубинской поймы и дельты Волги в целом.

Климатические условия Астраханской области на северо-западе и юго-востоке заметно отличаются друг от друга. Летние температуры и испаряемость на юго-востоке выше, чем на северо-западе, а осадков намного меньше. В дельте Волги и Волго-Ахтубинской пойме много грунтовых вод, питаемых Волгой и ее протоками. Разнообразен и почвенный покров. В связи с этими различиями в природных условиях растительность данного региона отличается заметной неоднородностью. В силу сложившихся природно-экологических условий здесь успешно уживаются как пустынно-песчанные, так и тропические представители флоры. Для ксерофитов (сухолюбов) Приволжских песков и Бэровских бугров территории Астраханской области вреден излишек влажности. Для гигрофитов (влаголюбов) прибрежных зон наоборот, вредны засушливые условия. Мезофиты заливных и пересыхающих лугов Астраханского региона наиболее приспособлены к колебаниям влажности, в них изменение химизма и накопление действующих веществ зависит уже от причин сохранения недостающей влаги в почве и самих. Все эти природно-экологические условия региона создают условия для формирования у дикорастущей флоры повышенных концентраций биологически-активных веществ, обладающих так же и противомикробной активностью (Щучкина, 1996). Среди дикорастущей флоры Астраханского региона отмечено более 100 видов растений, обладающих лекарственными свойствами, содержащих разнообразие химических веществ, в том числе биологически активные вещества, обладающие противомикробной активностью и фитонцидными свойствами. В качестве противомикробных веществ применяются известные химические вещества флавоноидного состава, эфирные масла, дубильные вещества терпены и терпеноиды, фитонциды, спирты, смолы и другие. Известные лекарственные растения содержат многие химические вещества, обладающие противомикробной активностью (флавоноиды, эфирные масла, спирты, смолы, дубильные вещества, аллицин, рафанин, хамазулен и многие другие). В связи с этим, в последнее время актуальным оказалось исследование лекарственных свойств многих растений дикорастущей флоры с противомикробными, иммуномодулирующими и иммуногенными свойствами, имеющих в составе не только известные науке активные вещества с антибактериальным действием, но и некоторые белковые соединения (лектины), которые являются аналогами антител животных и человека (Сухенко и др.,2007).

В силу сложившихся природно-экологических условий здесь успешно уживаются как пустынные, так и тропические представители флоры. Таким образом на территории Астраханской области создана уникальная природно-ландшафтная обстановка с неоценимым разнообразием видов и представителей флористического состава (Ушаков и др., 1996).

Астраханская область богата растительностью, однако видовой состав флоры не богат. Современная растительность Прикаспия сложилась примерно в последние 15-16 тысяч лет. За это время в жестких условиях существования (недостаток увлажнения, засоление почвы) смогли закрепить лишь 750 - 800 видов мировой флоры. Но сочетание этих видов, взаимопроникновение северных бореальных и пустынных ирано - туранских создаёт уникальное растительное сообщество. В пределах России не встретишь другого места, где при перепаде высот относительно 1,5 - 2,0 метра представлены ассоциации от прибрежноводных до растений пустынь. По некоторым данным на территории Волго-Ахтубинской поймы и дельты реки волги выявлено около 500 видов растений, относящихся к 12-ти семействам. Наиболее богатыми видами семейства сложноцветных, злаковых, маревых, бобовых, крестоцветных.

Кроме того, выделяют наследственные признаки накопления тех или иных активных веществ растениями в зависимости от их происхождения или онтогенеза. К признакам онтогенетического характера нужно отнести, по мнению ученых фармакологов, специфичность качественного образования определенных групп фармакологически активных веществ в систематических подразделениях растений (виды, роды, семейства, классы), что связано со сходностью в протекающем процессе обмена веществ. Известно, что растущие рядом особи одного и того же вида могут значительно отличаться по количеству образующихся в них действующих веществ. Это свойство является наследственным, и потомство этих особей будет также отличаться высоким (или низким) содержанием действующих веществ даже в случае переноса их в другие климатические зоны.

Еще больший спектр химической изменчивости наблюдается у лекарственных растений под влиянием факторов внешней среды.

В европейской части России пустынная растительность, как зональный тип отличена только на Юго-востоке в пределах Прикаспийской низменности. В пустынных местообитаниях ведущее место принадлежит сложноцветным, злаковым, маревым, что указывает на связь и взаимопроникновение видов пустынных и поемных местообитаниях. (Пилипенко, 1996). Во флоре Астраханской области отмечено некоторыми авторами более 100 видов, обладающих лекарственными свойствами. Чем ближе к югу произрастают лекарственные растения, тем выше содержание лекарственных веществ, тем более сильное влияние они оказывают на организм человека. Около трети лекарственных растений Астраханской области ядовиты. Известно, что в малых дозах ядовитые вещества оказывают лечебное воздействие, а виды, содержащие эти вещества, одновременно являются лекарственными растениями. Лекарственное растительное сырьё - это правильно выпущенные, реже свежесобранные лекарственные растения (или их части), используемые для приготовления лекарственных средств (Муравьева, 1991).

Большинство лекарственных растений Астраханской области дикорастущие виды. Некоторые из них выращиваются в культуре. С начала XVII века в России стали закладываться «аптекарские огороды». В культуру вводились, прежде всего, такие лекарственные растения, сбор которых в природных местообитаниях был почему-то затруднён или невозможен. В 40е годы 18 века аптекарский огород был заложен в Астрахани. Известно, что в Астраханском аптекарском огороде росли айва, акация (робиния), абрикосы, шелковица (тутовник), мята, розмарин, ромашка, шалфей, «медоносные травы», имелась химическая лаборатория, теплицы, оранжереи, парники (Щучкина, 1996).

Многие виды растений, входящих в группу лекарственных, явились очень редкими. Заготовки таких растений были невозможны и недопустимы (Пилипенко и др., 1997). К таким видам относились чабрец, ландыш майский, лотос орехоносный, аир болотный и многие другие. Возможны заготовки многолетних лекарственных растений, необходимо только оставить несколько экземпляров в местах сбора для семенного возобновления, таких как череда, горец водноперечный и др. Кроме того, можно собирать многолетние травы, благополучие популяции которых не вызывают сомнений. К таким видам относится алтей лекарственный, солодка голая, пырей ползучий, одуванчик лекарственный, бессмертник песчаный, ежевика сизая, лох узколистный и некоторые другие (Пилипенко и др., 1997г.).

В связи с уникальностью экологических факторов, формирующих биологически активные вещества у растений дикорастущей флоры Волго-Ахтубинской поймы и дельты реки Волги, накопление БАБ возрастает. Особенностью лекарственных растений этого региона является (по мнению ученых) тот факт, что чем ближе к югу произрастают растения, тем выше содержание действующих лекарственных веществ, тем более сильное влияние они оказывают на организм человека, животных или условно- патогенных микробов. По мнению многих специалистов, растений как живой организм реагирует накоплением специфических защитных факторов и химических веществ не только на изменение экологических и природных факторов среды, но и на инфекционно-эндемическую ситуацию в регионе. Уникальность Астраханского региона заключается в наборе всех этих благоприятных факторов для накопления дикорастущими растениями полного набора активных веществ, что, несомненно, является определяющим фактором в создании оригинальных биопрепаратов со значительно более высокой антибактериальной активностью, по сравнению с известными свойствами подобных растений.

В настоящее время из 100 тысяч лекарственных средств, применяемых в мировой медицинской практике, лечебные препараты из растений составляют свыше 30%. В нашей стране из общего количества лекарственных средств препараты из растений составляют около 40%, при этом для лечения ряда заболеваний (например, сердечно-сосудистых) многие растительные средства являются незаменимыми, например, только растения являются важнейшим источником сердечных гликозидов. (Муравьева, 1978).

В связи с этим в последнее время актуальными оказалось исследование лекарственных свойств многих растений дикорастущей флоры с противомикробными, иммуномодулирующими и иммуногенными свойствами, имеющих в составе не только известные науке активные вещества с антибактериальным действием, но и некоторые белковые соединения (лектины), которые являются аналогами антител животных и человека (Сухенко, 1999).

Учитывая вышеизложенное, т.е. особенности накопления лекарственных веществ растениями дикорастущей флоры Астраханской области, проблема изучение состава и активности подземной и надземной фитомассы лекарственных растений разработка препаратов из растений местного происхождения является на сегодняшний день особо актуальной.

Лекарственные растения являются составляющей частью флоры, а флора - это совокупность таксонов растений, обитающих на определенной территории в пределах конкретного растительного сообщества или биоценоза (Блинова, Борисова, 1990), поэтому развитие сообществ растений с определенными свойствами всегда находится в сочетании всех факторов, определяющих данный конкретный фитоценоз. Сочетание флористического состава определенной территории, несомненно связано с его природно-экологическими факторами и зависит от целого комплекса факторов природного и антропогенного характера.

Астраханская область обладает уникальным природно-ландшафтным положением и климатическими особенностями, создающими особое экологическое состояние окружающей среды. Экологические особенности региона связанны с повышенным уровнем инсоляции, крайне низкой влажностью воздуха, засушливыми глинисто-песчанными почвенными ландшафтами Приволжских песков среди многочисленной сети рукавов, протоков, ильменей Волго-Ахтубинской поймы и дельты Волги в целом.

Все эти природно-экологические условия региона, как описано выше, создают условия для формирования у дикорастущей флоры повышенных концентраций биологически активных веществ, обладающих так же и противомикробной активностью. В силу сложившихся природно-экологических условий здесь успешно уживаются как пустынно-песчанные, так и тропические представители флоры. Таким образом, на территории Астраханской области создана уникальная природно-ландшафтная обстановка с неоценимым разнообразием видов и представителей флористического состава (Ушаков и др., 1996). В связи с уникальностью экологических факторов, формирующих биологически активные вещества у растений дикорастущей флоры Волго-Ахтубинской поймы и дельты реки Волги, накопление их возрастает. Особенностью лекарственных растений этого региона является (по мнению ученых) тот факт, что чем ближе к югу произрастают растения, тем выше содержание действующих лекарственных веществ, тем более сильное влияние они оказывают на организм человека, животных или условно-патогенных микробов. Известно, что химизм лекарственных растений изменяется в зависимости от светового режима (Пилипенко, 1997, Русакова, 1998). Тепло также является одним из важнейших факторов в жизни лекарственных растений Астраханского региона. От количества тепловой и световой энергии зависит состав флоры данной географической зоны, а также продолжительность вегетации, накопление в них действующих веществ. Каждое растение имеет свой предельный минимум тепла (сумму температур), который позволяет ему полно и законченно завершить свой жизненный цикл. Вопросы теплового режима лежат в основе лекарственного растениеводства. Считается, что для большинства субтропических культур требуется сумма тепла не менее 4000°С для всего вегетационного периода.

Описано, что кроме тепла и света, громадную роль играет вода, которая придает определенный характер почвенному субстрату и тем самым обусловливает состав и характер травянистого покрова местности. Количество осадков и коэффициент влажности окружающей среды одновременно накладывают определенный отпечаток на количество и состав действующих веществ. Дня ксерофитов (сухолюбов) Приволжских песков и Бэровских бугров территории Астраханской области вреден излишек влажности. Для гигрофитов (влаголюбов) прибрежных зон наоборот, вредны засушливые условия. Мезофиты заливных и пересыхающих лугов Астраханского региона наиболее приспособлены к колебаниям влажности, в них изменение химизма и накопление действующих веществ зависит уже от причин сохранения недостающей влаги в почве и самих растениях (Бармин, 1997,2001).

Таким образом, на химизм лекарственных растений влияет комплекс экологических условий в их взаимной связи и обусловленности, который связан также с особенностями географической обстановки, такими как широта и долгота места, его экспозиция (высота над уровнем моря, близость водных бассейнов и т. д.), количество осадков, солнечных и тепловых факторов во время вегетации. С изменением географической обстановки изменяется весь комплекс взаимно связанных факторов: смена тепла и холода, интенсивность солнечного света, доступность ультрафиолетовых лучей и т.д. Можно отметить, что в растениях южных широт накапливается обычно больше действующих веществ (Станков, Талиев,1947, Лавренов, 2006, Муравьева, 2002).

Природно-экологические факторы региона создают условия для формирования у дикорастущей флоры повышенных концентраций биологически-активных веществ, обладающих также и противомикробной активностью. В силу сложившихся природно-экологических условий здесь успешно уживаются как пустынные, так и тропические представители флоры. Таким образом на территории Астраханской области создана уникальная природно-ландшафтная обстановка с неоценимым разнообразием видов и представителей флористического состава (Щучкина, 1996, Сухенко, 1999).

Уникальность Астраханского региона заключается в наборе всех благоприятных факторов для накопления дикорастущими растениями полного набора активных веществ, что, несомненно, является определяющим фактором в создании оригинальных биопрепаратов со значительно более высокой антибактериальной активностью, по сравнению с известными свойствами подобных растений. Экстракты из ряда растений Астраханского региона обладают достаточно активными противомикробными свойствами против патогенных для человека микроорганизмов. Наши предыдущие исследования показали, что экстракты корня солодки голой обладают выраженным антибактериальным действием (Назарова и др., 2008, Сухенко и др., 2005).

Как уже сказано, среди дикорастущей флоры Астраханского региона отмечено более 100 видов растений, обладающих лекарственными свойствами, в том числе противомикробной активностью. В качестве противомикробных применяются известные химические вещества флавоноидного состава, эфирные масла, дубильные вещества терпены и терпеноиды, фитонциды, спирты, смолы и другие (Пилипенко, Теплый, 1997).

Известно, что многие лекарственные растения содержат химические вещества, обладающие противомикробной активностью (флавоноиды, терпеноиды, эфирные масла, спирты, смолы, дубильные вещества, фенольные соединения, фитонциды, аллицин, рафанин, хамазулен и другие), многие из которых проявляют избирательную противомикробную индивидуальную активность, но и в комплексе формируют бактерицидное действие (Вичканова, 2001). В связи с этим в последнее время проводятся многочисленные исследования лекарственных свойств многих растений дикорастущей флоры с противомикробными, иммуномодулирующими и иммуногенными свойствами, имеющих в составе не только известные науке активные вещества с антибактериальным действием, но и некоторые другие соединения (лектины), которые так же являются в комплексе необходимыми растениям в обеспечении противомикробной защиты и сохранения гомеостаза и тем самым участие в оздоровлении окружающей среды (организма человека в том числе).

Цель работы. Основной целью работы является обоснование ботанической и биотехнологической роли дикорастущих растений природного комплекса Юга России как источника ценных фитокомпонентов с противомикробными, иммунопротективными, дерматопротективными и другими биорегуляторными свойствами и создание фитокомпонентов для пищевой и косметической продукции, препаратов для очистки окружающей среды.

Задачи работы:

1. Обосновать положение о высокой противомикробной активности веществ растений природного комплекса Юга России, в том числе Северного Прикаспия и юго-востока Восточно-Европейской равнины, Прикаспийской низменности (Астраханской области).

2. Охарактеризовать особенности распространения и запасов некоторых отобранных наиболее перспективных дикорастущих лекарственных растений на территории Астраханской области.

3. Провести скрининг противомикробной активности дикорастущих растений Астраханского региона с целью отбора наиболее перспективных для биотехнологии получения из них фитопрепаратов.

4. Оценить особенности отбора и сохранения растительного лекарственного сырья, экстрагирования наиболее активных противомикробных биологически активных веществ, исследования химического состава и свойств фитокомпонентов отобранных растений. Разработать требования к сырью (включая вопросы его предварительной обработки).

5. Отработать оригинальные методики экстрагирования противомикробных компонентов растений. Обосновать теоретические и прикладные вопросы использования дикорастущих лекарственных растений региона в перспективных практических направлениях современной биотехнологии.

6. Осуществить комплексные исследования технологий извлечения ценных фитокомпонентов и противомикробной активности растительного сырья с целью создания препаратов для профилактики некоторых инфекционных процессов.

7. Определить влияние растительных биокомпонентов на формирование и функционирование ряда микробных сообществ: сапрофитных, некоторых патогенных, условно-патогенных микроорганизмов в окружающей среде и в экспериментальных условиях (регулирование микробиоценоза кишечника, регулирование водной микрофлоры).

8. Обосновать биотехнологию выделения лектиновых белков из растений и осуществить исследование лектинсодержащих компонентов в растительных экстрактах с использованием синтетических лектинсвязывающих углеводных бактериальных гаптенов как одного из механизмов растительной защиты от патогенов.

9. Разработать из экспериментально выделенных фитокомпонентов, содержащих растительные (фитолектиновые) фракции, фитопрепараты для профилактики инфекционных процессов с противотуберкулезной, противолепрозной, противостафилококковой и другой степенью активности.

10. Обосновать биотехнологию выделения ценных фитокомпонентов для получения натуральной биотехнологической продукции в качестве пищевых добавок, фитосредств для профилактики и комплексной фитотерапии, косметических лечебных фитопрепаратов, фитонаборов для очистки воды.

11. Провести испытание фитопрепаратов и фитонаборов с целью подтверждения их биоактивных свойств: антимикобактериальных, иммунопротективных, адгезивных, дерматопротективных, пребиотических и других свойств.

Научная новизна. Проведена оценка запасов ценного растительного сырья и распространения перспективных для биотехнологии дикорастущих растений региона с противомикробными и биорегуляторными свойствами.

Впервые разработана концепция сравнительного анализа антимикробной активности дикорастущих растений Юго-Востока европейской части России с целью создания технологии получения ценных фитопрепаратов с антибактериальной и иммунопротективной направленностью.

Предложены пути выделения ценных природных растительных белковых компонентов (лектинов) растений, показаны иммунобиологические свойства данных фитолектинов и возможности их использования в иммунопрофилактике и противоинфекционной терапии.

Впервые разработана оригинальная технология выделения и создан препарат из корня солодки голой с противотуберкулезной (патент № 2362577 от 18.05.2007 (приложение 10), № госрегистрации 30.АЦ.02.009.У.000001.06.10 от 30.06.2010 г)(приложение 1) и противолепрозной (патент № 241111 от 29.07.2009) (приложение 19) активностью.

На базе уникального биотехнологического процесса разработана рецептура и технология получения новых поликомпонентных субстанций для лечебной косметики и получена серия фитобальзамов для регенерации кожи (патент №2369377 от 29.07.2008, ТУ 9197-006-38989935-08).

Совместно с НИИ по изучению лепры (Астрахань) разработаны рецептуры и методы клинического применения фитопрепаратов на основе корня солодки голой, соцветий тысячелистника мелкоцветкового и цмина песчаного для комплексного лечения лепры, ее профилактики и снижения риска заболевания лепрой (патент №241111 от 29.07.2009) (приложение 12).

Получены результаты по усилению иммунопротективной активности перитонеальных макрофагов (их миелопероксидазной активности) при лечении микобактериозов (туберкулеза и лепры) фитопрепаратами.

Изучены и предложены новые варианты выделения растительных лектинов и их активность в отношении некоторых условно-патогенных и патогенных бактерий.

Представлены возможные пути применения растительных поликомпонентов и монофитопрепаратов для применения в практике восстановления кишечных микробиоценозов (фитобиотики) и лектинов для выведения углеводсодержащих токсинов и наркотических веществ и их метаболитов из организма больных.

Выделены биоактивные растительные субстанции из корня солодки голой для апробации и первичных испытаний в клинической практике поликомпонентных фитопрепаратов при ряде хронических инфекций и туберкулеза (приложение 7-8).

Разработаны оригинальные рецептуры новых, натуральных фитопрепаратов для разработки лечебной косметики, создания пищевых добавок, фитобиотиков, консервантов и регуляторов вкуса, фарм-фито-препаратов, для дополнительной фитотерапии при некоторых инфекционных процессах, препаратов для микробиологической очистки воды.

Теоретическая значимость работы. Обобщены теоретические направления изучения аспектов формирования биологически активных веществ противомикробного действия у растений региона в природе и агрокомплексах.

Проведен скрининговый анализ противомикробной активности ряда ценных растений изучаемого региона.

Разработаны научные основы применения стандартных фитокомпонентов для изучения механизмов их антибиотической и иммуннорегуляторной активности на молекулярном, клеточном и организменном уровне.

Изложены аспекты влияния биотических факторов на формирование сообществ патогенных, условно-патогенных микроорганизмов в окружающей среде.

Изложены теоретические проблемы изучения аспектов формирования биологически активных веществ с противомикробным действием у растений Юго-Восточного региона европейской части России. Изучены природно-экологические особенности формирования противомикробных компонентов в растениях и запасы в природном комплексе региона. Исследованы и предложены биотехнологические особенности выделения и извлечения из растений противомикробных компонентов различного состава. Представлены результаты исследования in vitro и in vivo противотуберкулезной, противолепрозной и другой противомикробной активности экстрагируемых компонентов некоторых растений.

В работе раскрываются научные основы применения стандартных фитокомпонентов для дальнейшего использования противомикробных фитопрепаратов в производстве пищевых, медицинских, ветеринарных и парфюмерно-косметических биопрепаратов. Охарактеризованы основные противомикробные, антимикобактериальные, иммунопротективные, гиппо- и антиаллергенные компоненты растений Астраханской области. Оценены запасы лекарственного сырья в Астраханском регионе, доступные и оригинальные способы экстрагирования. Определены ареалы распространения и места возможных сборов растений с ценными свойствами, что делает Астраханскую область вполне достойным регионом с лекарственным растительным потенциалом.

Практическая значимость работы. Изучены и охарактеризованы запасы растительного сырья некоторых лекарственных растений Астраханской области.

Определены наиболее значимые растения региона для биотехнологии создания оригинальных фитопрепаратов.

Исследованы и предложены биотехнологические схемы выделения и извлечения из растений противомикробных компонентов различного состава.

Исследованы и разработаны требования к сушке, сохранению и извлечению биологически активных компонентов с противомикробными, иммунопротективными, адаптогенными свойствами.

Представлены основные пути использования растений и их противомикробных веществ в биотехнологии создания физиологически активных компонентов для профилактики инфекционных процессов, в качестве консервирующих добавок к пище, добавок в косметической продукции, препаратов для санитарно-экологической очистки воды.

Выявлены механизмы накопления растениями высоких концентраций биологически активных веществ, в том числе антимикробных. Определены методы извлечения этих веществ оригинальными несложными способами, что позволило получить образцы фитопрепаратов с высоким антимикобактериальным, противостафилококковым и иммунопротективным эффектом.

Разработана научно обоснованная стратегия использования дикорастущих растений региона, выделения и изучения ценных растительных компонентов и разработки новых технологий получения оригинальных фитопрепаратов для оздоровления окружающей среды и организма человека.

Отработаны оригинальные методики экстрагирования противомикробных фракций, созданы новые формы фитопрепаратов и фитобальзамов на основе компонентов противомикробных веществ, выделенных из лекарственных растений Астраханского региона.

Подготовлены для выпуска коммерческие формы фитопрепаратов с антибактериальной активностью: фитокапли «ГЛИЦИРФИТ» (приложение 6) и фитобальзамы для регенерации кожи «ИНСОФИТ» (приложение 14).

Апробация работы. Основные результаты диссертации доложены и обсуждены на российских и международных конференциях, симпозиумах, съездах и конгрессах: ежегодных научных всероссийских и международных конференциях Астраханского государственного университета (АТУ)

Астрахань, 1991-1999, 2000-2010 гг.), ежегодных международных конференциях «Эколого-биологические проблемы Волжского региона и Северного Прикаспия» (Астрахань 2000-20 Югг); «Астраханский край: История и современность» (Астрахань, 1997); «Азотосодержащие гетероциклы, синтез, свойства, применения» (Астрахань, 2000); «Биотехнология на рубеже двух тысячелетий» (Саранск, 2001); «Проблемы строительства, инженерного обеспечения и экологии городов» (Пенза, 2001); «Математика. Компьютер. Образование» 31 января- 5 февраля (Пущино, 2001); «Фитопатогенные бактерии, фитонцидология. Аллелопатия» (Киев, 2005); «Аллелопатия. Фитонцидология» (Киев,2006); «Биоресурсы биотехнологии, экологического безопасного развития регионов Юга России» (Сочи, 2007); 1-й международной конференции по изменениям среды Каспийского региона 24-25 августа (Балбосар, Иран, 2008); «Человек и лекарство». (Москва, 2008);. Международной научно-практической конференции, посвященной 60-летию института по изучению лепры и 85-летию противолепрозной службы России (Астрахань, 2008); Международном конгрессе по биотехнологии (Москва, 2008, 2012); «Биотехнология. Вода и пищевые продукты 11-13 марта (Москва, 2008); «Экокультура и фитобиотехнологии улучшения качества жизни на Каспии» 7-10 декабря (Астрахань, 2010); Каспийского инновационного форума 8-9 февраля (Астрахань, АГУ, 2009); Каспийском инновационном форуме «Инновации для бизнеса» 22-23 апреля (Астрахань, АГТУ, 2010); на 5.съезде биотехнологов России им. Ю.А. Овчинникова 14-16 октября (Москва, 2008), «Настоящее и будущее биотехнологии в решении проблем экологии, медицины, сельского, лесного хозяйства и промышленности» 18-20 мая (Ульяновск, 2011) в Российско-японском центре (Москва, 2011), 4-м международном конгрессе европейских микробиологов в Женеве (Швейцария) 26 - 30 июня (2011), VII международной научной практической конференции 04-06 сентября (София, 2011); VII научной конференции 27апреля-05 мая

Прага, 2011).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 90 работ, из них 20 в ведущих рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК РФ для публикации результатов диссертационных работ, 6 - в зарубежной печати, 4 патента, монография в соавторстве.

Декларация личного участия автора. Провеление лабоарторных, полевых исследований, анализ и обощение результатов, представленных в диссертации проведены лично соискателем. В совместных публикациях вклад соискателя 70 - 90%.

Объем и структура диссертации. Диссертация содержит 362 страницы основного текста и 19 приложений, 162 рисунка и 86 таблиц, список литературы из 572 источников, в том числе 329 отечественных и 243 зарубежных.

Положения, выносимые на защиту. Природно-экологические особенности региона способствуют значительному формированию противомикробных компонентов в дикорастущих растениях. Обоснованы распространение и запасы некоторых лекарственных и дикорастущих растений с выраженными противомикробными и биорегуляторными свойствами в Астраханской области, входящей в природный комплекс Северного Прикаспия и Юга России (Юго-Востока европейской равнины в пределах Прикаспийской низменности).

Особенности локального распространения многих дикорастущих растений региона, высокие уровни ценных биологически активных веществ и результаты скрининга противомикробных свойств позволили провести отбор наиболее значимых растений региона для биотехнологии получения ценной фитопродукции.

Обнаруженные в растениях региона природные растительные белковые компоненты (фитолектины) обладают иммунобиологическими свойствами, неоценимыми в получении фитокомпонентов для иммунопрофилактики и противоинфекционной терапии.

По механизмам действия противотуберкулезной, противолепрозной и другой противомикробной активности in vitro и in vivo экстрагируемые компоненты Glycyrrhiza glabra (L.), Achillea micrantha M.B., Heiichrysum arenarium (L.) Moench являются наиболее ценными из изученных дикорастущих растений региона.

Раскрыты механизмы противомикробной самозащиты дикорастущих растений с участием лектинсодержащих комплексов в условиях природной среды, что может явиться одним из факторов иммунитета растений.

Разработана технология получения и предложены способы использования ценных фитокомпонентов для дальнейших научно-теоретических исследований и применения их в биотехнологии создания противомикробных фитопрепаратов с биорегуляторными свойствами.

Благодарности. Считаю своим долгом выразить искреннюю глубокую благодарность: Градовой Н.Б., Бовину Н.В., Курашеву Е.А., Егорову М.А., Мягковой М.А., Ноздрачеву В.Я., Пилипенко В.Н., Тыркову А.Г., Великородову A.B., оказывающим разнообразную помощь в исследованиях и выполнении диссертационной работы.

ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Объектами исследований являлись растения, обладающие по информационным данным противовоспалительными, восстанавливающими, противомикробными свойствами. Среди конспекта флоры дельты Волги и Волго-Ахтубинской поймы многие авторы перечисляют некоторые виды изучаемых родов растений с известными из литературы противовоспалительными и антибактериальными свойствами (Пилипенко, 2003). Поэтому, для отработки скрининга и других исследований использовали сборы растений sem.Asteraceae Dumort, por. Asterales, sem. Fabaceae, sem. Tiliaceae, sem. Salicaceae. Из перечисленных семейств растений, а так же других растений Прикаспийского региона Юга России (Астраханской области) Glycirrhyza glabra (корни, плоды, соцветия, листья) Achillea micranta (соцветия и трава), Heiichrysum arenarium (соцветия и трава), Nelumbo nucífera (caspica) (лепестки и плоды), Populus nigra (почки, сережки), Ailanthus altissima (соцветия, плоды), Robinia pseudacacia (соцветия, плоды), Sophora japónica (соцветия, плоды), Calendula officinalis (трава, соцветия), Artemisia lerchiana (трава, соцветия), Salvia officinalis (соцветия, листья), Tanacetum vulgare (трава, соцветия), Bidens tripartita (соцветия, листья,), Kochia prostrate (трава, соцветия,), Cannabis ruderalis (трава, листья,), Atriplex tatarica (трава), Descurainia Sophia (трава), Elytrigia repens (трава), Cynodon dactylon (трава), а также лишайника пармелии блуждающей - Parmelia vagans (таллом) были выделены экстракты растений и фитокомпоненты, которые исследовали в отношении тест-микроорганизмов.

Для изучения противомикробной активности эфирных масел были взяты следующие растения региона Юга России (Астраханского региона) - Thymus kirgisorum, Melissa officinalis, Lophantus anisatus, Mentha arvensis, Robinia pseudoacacia, Sophora japónica, Artemisia lerchiana, Artemisia austriaca, Heiichrysum arenarium, Achillea micrantha, Glycyrrhiza glabra. В качестве контроля степени подавления дыхательных функций микроорганизмов использовали антибиотики (гентамицин, левомицетин, фурагин, рифампицин).

Кроме того, использовали растения sem. Asraceae Dumort, Por. Asterales: тысячелистник тонколистный (Achillea leptophylla Bieb.), тысячелистник мелкоцветковый {Achillea micrantha Willd.), тысячелистник обыкновенный {Achillea millefolium L.), цикорий обыкновенный {Cichorium intybus L.), цмин песчаный {Heiichrysum arenarium (L.)Moench), ромашка аптечная {Matricaria chamomilla L), календула лекарственная {Calendula officinalis L.); семейства бобовых (Fabaceae): софора японская (Sophorae japonicae) (соцветия и плоды), робиния псевдоакация {Robinia pseudoacacia L.) (соцветия и плоды), солодка голая {Glycyrrhiza glabra) (плоды и листья), солодка ежовая {Glycyrrhiza echinata L.) (плоды, соцветия и листья), донник лекарственный {Melilotus officinalis (L.)Pall.) (соцветия, листья), клевер луговой {Trifolium pretense L.) (соцветия), гледичия обыкновенная {Gleditsia triacanthos) (плоды); семейства липовых {Tiliaceae): липа мелколистная {Tilia cordata Mill) (соцветия и плоды);семейства ивовых {Salicaceae Mirb.): тополь черный {Populus nigra. L.) (почки, кора) другие растения.

Контролем в проводимых исследованиях служили растворы этилового спирта медицинского в концентрациях 40%, 70%, 96%.

Все результаты представлены в статистических значениях за вычетом противомикробных показателей спиртового раствора.

Использовали питательные агары, жидкие питательные среды, среды для выделения кишечных микроценозов, среды для определения водной и воздушной микрофлоры: ЭНДО, Плоскирева, желточный агар, кровяной агар, среда Чапека, МПА, MC А, МПБ. Использовали лектинсвязывающие углеводы для обнаружения и выделения растительных лектинов: Lec-PAA, Gal-PAA, Btri-РАА и Bdi-PAA, которые способны имитировать эпитопы липополисахаридных антигенов некоторых бактерий ( Staphylococcus aureus, Proteus vulgaris, Escherihia coli (О 11), Escherihia coli (0 8), Pseudomonas aeruginosa, Shigella sonnei, Salmonella serogroup A (Sug: 3,6 -dideoxy - D- ribo -hexosi - paratose), В (Sug: 3,6 - dideoxy - D - xylo - hexose -abegiiose), D (Sug; 3,6 -dideoxy - D - arabino - hexose - tyvelose), Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium lufu, Mycobacterium leprae и др.), предоставленные ИБХ им М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова.

Использовали штаммы тест-культур из коллекции клинических штаммов условно-патогенных микроорганизмов: Pseudomonas aeruginosa PMFK -В 30, Bacillus subtilis (IPH), Staphylococcus aureus PMFK- В 30, Escherichia coli MG 1655, предоставленных московским научно-практическим центром борьбы с туберкулезом департамента здравоохранения г. Москвы.

Штаммы тест-культур из коллекции музейных культур Роспотребнадзора АО РФ: Pseudomonas aeruginosa 1315, Escherichia coli 1314 Staphylococcus aureus 27, Staphylococcus epidermidis 537. Штаммы из Всероссийской Коллекции Промышленных микроорганизмов ФГУП ГосНИИГенетика, Москва: Escherichia coli CK ВКПМ В-191, Staphylococcus aureus subsp. aureus ЗА ВКПМ В-1899, Bacillus subtilis ВКПМ B-1919, (модифицированный). Штаммы культур микобактерий Mycobacterium lufu - культивируемого штамма, Mycobacterium leprae, выделенных от больного лепрой лепроматозного типа и пассированных трехкратно на экспериментальных животных, музейный штамм Mycobacterium tuberculosis Hi7Rv из музея НИИ по изучению лепры.

Для изучения кишечного микробиоценоза использовали: пребиотик «Лактусан», пробиотик «Колибактерин», приобретенные в аптечной сети, фитопрепарат - «экстракт солодки «ГЛИЦИРФИТ». Использованы коллекции бактерий Областной бактериологической лаборатории (Астрахань): штамм Esherichia coli М-17, штамм бифидобактерии Bifidobacterium bifidum ps., дрожжеподобные грибы рода Candida albicans 885/653, патогенный гемолитический стафилококк Staphylococcus haemolyticus 8.

В эксперименте использовали 520 мышей линии СВА (самки), сопоставимых по массе и условиям содержания, 150 крыс (самок) линии ВИСТАР. Все манипуляции с животных проводили в соответствии с правилами Европейской конвенции (Страсбург 1986). Испытания препаратов проводили согласно руководству ВОЗ (Geneva 1987). Противомикобактериальное действие растительных препаратов «ГЛИЦИРФИТ» и растительного сбора исследовали в отношении микобактерий - Mycobacterium tuberculosis Н37 Rv (in vitro), Mycobacterium lufu-Ю в культуре {in vitro), Mycobacterium leprae A-36 в лапках мышей (in vivo).

Используемые методы: Ботанические: учет запасов сырья проводили методом закладки пробных площадей (Крылова, Шретер, 1971; Миркин, 1974). Запас рассчитывали по величине нижнего предела урожайности (Методика определения урожайности, 1986, Крогулевич, 2000). Проводили морфометрические исследования экземпляров растений (Абрамова, 2001). Проведено изучение методов сушки для отбора оптимальной сушки каждого вида растительного сырья (Бузук, 1991). Этапы жизненного цикла и возрастного состояния, характеристика роста надземной части растения, морфология корневой системы определяли по методикам Корчагина (1960), Шалыт (1960), Красильникова (1960), Левина (1966), Серебрякова (1952, 1964), Левиной (1960, 1981, 1987).

Микробиологические: противомикробные исследования проведены известными доступными методами: метод дисков или прямой диффузии в агаровую среду - метод ДЗЗР, метод подавления роста колоний на питательной среде живых колониеобразующих микробных клеток (метод КОЕ), бактерицидную активность эфирных масел определяли методом серийных разведений в 0,5 мл питательного бульона (Струкова 2003). Животных заражали интраплантарно, согласно модели лепры Шепарда (Shepard, 1960). Для выращивания микобактерий на жидкой питательной среде использовали среду Школьниковой, твёрдую питательную среду Левенштейна - Иенсона.

Микрофлора воздуха исследовалась методом свободного оседания - метод Р. Коха (Методики клин. лаб. иссл., 2009).0крашивали микобактерии по методу Циля-Нильсена. Количество M. leprae в лапках мышей подсчитывали методом Shepard и McRae (1968).

Биотехнологические : методы извлечения активных компонентов и химических веществ растений (Пономарев, 1976), методы выделения лектиновых компонентов растений (Тихомирова, 2003), методы исследования лектиновых соединений с использованием синтезированных углеводных лектинузнающих гаптенов (Карпунина, 1999), технологии производства фитопрепаратов из растений, изучение пребиотических свойств фитопрепаратов.

Биохимические : способом мацерации проводили экстрагирование биологически активных компонентов, содержащихся в различных группах растений. Применяли метод сравнительного анализа экстрактов растений с химическими соединениями противомикробной направленности из ряда оксидиазолов и карбаматов (Сухенко, 2003). Исследование адсорбционной и адгезивной способности приготовленных буферных экстрактов проводили методом анализа токсинов в тонкослойной хроматографии (Еремин и др., 1993).

Иммунологические : Определение лектинов в экстрактах проводили в агаровом геле по методу Оухтерлоне. Использовали метод определения активности перитонеальных макрофагов (Методические рекомендации, 1975) и фагоцитов (Маслов, 1998), метод определения уровня активности миелопероксидазы (Шатров и др., 1985), персистенцию в цитоплазме микобактерий лепры и туберкулеза (Маслов 1998).

Все результаты обработаны статистически с использованием компьютерных программ Excel 2000 (Microsoft Inc., 1999), Statistica for Windows, v. 5.0 (Stat Soft Inc., 1995).

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Заключение Диссертация по теме "Ботаника", Сухенко, Людмила Тимофеевна

выводы

1. В результате многолетних исследований и скрининга противомикробной активности дикорастущих растений региона Астраханской области в сравнении с некоторыми аптечными формами растительного лекарственного сырья были обнаружены феномены избирательности антибактериальных свойств растительных компонентов в отношении условно-патогенных микроорганизмов, сапрофитных форм микроорганизмов окружающей среды и возбудителей некоторых хронических микобактериозов. Обнаружена высокая противомикробная активность растений флоры дельтовой части Волги и Волго-Ахтубинской поймы Астраханской области. Повышение активности дикорастущих растений природного комплекса Юга России (Астраханской области) заключается в накоплении повышенных концентраций противомикробных веществ и их комплексов в ответ на распространение микроорганизмов патогенной и условно-патогенной микрофлоры.

2. Главным фактором накопления БАВ, в том числе веществ различного состава с противомикробными и биорегуляторными свойствами, является высокий уровень инсоляции, среднегодовых температур (особенно во время вегетации большинства изучаемых растений), почвенные особенности региона. Основой для формирования противомикробного барьера является эндемичность региона по таким заболеваниям, как туберкулез, лепра, клещевые риккетсиозы и вирусные этиологии. Определены особенности проявления механизмов растительной иммунной защиты от основных видов эндемичных микобактериозов.

3. Охарактеризованы запасы и распространение некоторых наиболее перспективных для биотехнологии дикорастущих лекарственных растений региона, обладающего наиболее характерными особенностями природно-климатического комплекса территории Юга России. Отработаны требования к сбору, сохранению и контролю ценного растительного лекарственного сырья.

Определены запасы растительного сырья некоторых дикорастущих лекарственных растений Астраханского и прилегающего регионов, которые достаточно распространенны в массивах Приволжских (Астраханских) песках: Цмин песчаный (Helichrysum arenarium (L.) Moench), Тысячелистник мелкоцветковый {Achillea micrantha M.B.) сем. Asteraceae. Распространение Солодки голой Glycyrrhiza glabra L. сем. Fabaceae является доминантным в некоторых изучаемых участках, что согласуется с мнением других авторов, запасы которой в районах дельты Волги и региона в целом неограниченны.

4. Отработаны оригинальные методики экстрагирования противомикробных фракций, перспективные методы обработки и сохранения растительного сырья, изучен химический состав экстрагированных веществ, активность против микрофлоры окружающей среды основных химических компонентов отобранных растений. Созданы новые формы фитопрепаратов на основе компонентов противомикробных веществ, выделяемых из лекарственных растений Астраханского региона. Обоснованы вопросы использования фитокомпонентов лекарственных растений региона для разработки активных препаратов в комплексной терапии и перспективных направлениях современной биотехнологии.

5. Раскрыты механизмы противомикробного действия растительных веществ, извлекаемых из растений региона различными разработанными методами выделения, таких как флавоноиды, терпеноиды, сесквитерпеноиды и др., некоторые гликозиды и их соединения, эфирные масла, фитонциды, лектиновые компоненты - фитолектины (в комплексе с гликопептидами). Обнаружены и обоснованы механизмы воздействия растительных лектинов на бактериальную клетку, разрушение и лизис надклеточных компонентов, а также инактивация фитолектинами бактерий путем связывания с антигенными детерминантами бактериальных клеток in vitro в культуре клеток бактерий и in vivo на экпериментальных животных.

6. На основе предложенной технологии экстрагирования получены высокоактивные лектиновые фитокомпоненты, которые были использованы в изучении антибактериальных фитопрепаратов растений с противомикробным и иммунопротективным действием. Определено влияние растительных биокомпонентов на формирование и функционирование ряда микробных сообществ, сапрофитных, патогенных, условно - патогенных микроорганизмов в окружающей среде и в экспериментальных условиях.

7. Проведены испытания разработанных фитопрепаратов из солодки (Glycyrrhiza glabra) и других изучаемых растений (Achillea micrantha, Helichrysum arenarium). В результате заражения М. leprae и М. tuberculosis H37Rv, стимулированных фитопрепаратами животных, отмечено достоверное повышение по сравнению с контролем функциональной активности перитонеальных макрофагов - миелопероксидазной системы (основной механизм иммунной защиты). Ряд положительных свойств, которыми обладают фитопрепараты, в том числе экстракт солодки «ГЛИЦИРФИТ», позволяют рекомендовать их в комплексной терапии туберкулеза и лепры. Полученные данные свидетельствуют о перспективности корня солодки голой в комплексном лечении лепры с учетом дозы и длительности назначения препарата.

8. Препарат из солодки «ГЛИЦИРФИТ» показал положительные результаты при апробации его в качестве фитобиотика. Показана возможность применения его наряду с пробиотиками в регулированию микробиоценоза кишечника, а в исследованиях влияния фитокомпонентов на сапрофитную и условно-патогенную микрофлору воды все экстракты растений способны к эколого-гигиеническому регулированию водной микрофлоры и улучшению качества питьевой воды.

9. Лектины и лектиноподобные белковые комплексы некоторых растений семейства Fabaceae оказались эффективными в связывании (адгезии) некоторых углеводсодержащих препаратов и наркотических метаболитов в эксперименте (в моче больных с передозировкой). Представлены и обоснованы механизмы противомикробной, адгезивной, иммуногенной, адаптивной способности созданных растительных препаратов.

10. Разработаны фитокомпоненты для производства продуктов пищевого назначения (экстракт солодки «ГЛИЦИРФИТ» как консервирующая добавка к пище), для комплексной терапии некоторых микобактериозов в практике создания фармакологических форм противотуберкулезных, противолепрозных, противовирусных препаратов (фитокапли «ГЛИЦИРФИТ»), фитонаборов для микробной очистки воды, лечебно-косметических фитобальзамов оригинального состава и других косметических средств.

11. Обоснованы положения повышенных уровней антимикробных веществ дикорастущих растений флоры Юга России и региона в связи с природными эколого-климатическими особенностями для использования дикорастущих растений в биотехнологии создания противомикробных фитокомпонентов с биорегуляторными свойствами для производства перспективной фитопродукции и дальнейших научно-теоретических исследований в этой области.

12. Коммерческие формы фитопрепаратов с антибактериальной активностью внедрены в практику некоторых специализированных лечебных учреждений и косметологических клиник. Проведено обоснование ботанической и биотехнологической роли дикорастущих растений флоры Юга России .

310

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Сухенко, Людмила Тимофеевна, Астрахань

1. Авакян, A.A. Атлас анатомии бактерий, патогенных для человека и животных / A.A. Авакян, Л.Н. Кац, И.Б.Павлова. М.: Медицина, 1972.-183

2. Акопов, И. Э. Важнейшие отечественные лекарственные растения и их применение /И. Э. Акопов. Ташкент: Медицина, 1990. - 444 с.

3. Алиханян, С.И. Селекция промышленных микроорганизмов /С.И. Алиханян. М.: Наука, 1968; - 359с.

4. Большая медицинская энциклопедия. М.: Сов. энциклопедия, 1985. - Т.24, Изд.З. - С. 228-228.

5. Ботанико-фармакологический словарь: справ, пособие / К.Ф. Блинова, Н.А.Борисова, Г.Б.Гортинский и др. / под. ред. К.Ф. Блиновой, Г.П. Яковлева. М.: Высшая школа, 1990. - 270 с.

6. Быховцев, С.Л. Энциклопедия комнатных растений / С.Л. Быховцев. Мн.: Харвест, 2000. - 528 с.

7. Винник, Л.А. Туберкулез и лепра: две тени прошлого? /Л.А.Винник. Астрахань: Изд-во АГМА, 1997. - 128 с.

8. Виноградова, Т.А., Гажеев Б.Н. Практическая фитотерапия. М.; СПб.- 1988.

9. Вичканова, С.А., Колхир В.К., Крутикова Н.М., Адгина В.В., Фатеева Т.В., Сокольская Т.А. Сангвиритрин представитель нового поколения препаратов антимикробного действия / В кн.: Труды ВИЛАР «Химия, Технология, медицина - М., 2000. - С.300-309.

10. Воробьёв, A.A., Основы микробиологии и иммунологии. М.: Мастерство, 2001. - С. 198-199.

11. Галанина, O.E. Биоорганическая химия. М., Том 18. №3. - 1992.

12. Гаммерман, А.Ф. Дикорастущие лекарственные растения СССР /А.Ф. Гаммерман, И.И.Гром. М.: Медицина, 1976. - 288 с.

13. Гаммерман, А.Ф. Лекарственные растения. /А.Ф. Гаммерман. М.: Высшая школа. - 1990. - 453с.

14. Георгиевский, В.П. Биологически активные вещества лекарственных растений /В.П. Георгиевский, Н.Ф. Комисаренко, С.Е. Дмитрук. Новосибирск, 1990. - 345 с.

15. Герхард, С. Методы общей бактериологии, М.: Мир, том1-3, 1984. -С. 28-31.

16. Головкин, Б.Н. Биологически активные вещества растительного происхождения /Б.Н. Головкин, Р.Н. Руденская, И.А. Трофимова, А.И.Шретер. -М.: Наука, 2001.-Т. 1.-216 с.

17. Гринкевич, Н.И. Лекарственные растения / И.Н. Гринкевич. М.: Высшая школа, 1991. - С. 15-21.

18. Губергриц, А. Я., Н. И. Соломченко. Лекарственные растения Донбасса. —Донецк: Донбасс, 1966.

19. Гуленкова, М.А. Ботаника с основами экологии / М.А. Гуленкова, Кудрявов Л.В., Козлова В.Н.- М.: Просвещение, 1979. 320 с.

20. Гусев, М.В., Минеева Л.А. Микробиология.-М.: МГУ, 1992. С.448

21. Двораковский, М.С. Экология растений / М.С. Двораковский. М.: Высшая школа, 1983. - 462 с.

22. Задорожный, А.Н., Кошкин А.Г., Справочник по лекарственным растениям, М.: Экология, 1992. С. 128-143.

23. Игнатов, В.В. Углеводузнающие белки-лектины /В.В. Игнатов //Белки и ферменты. М., 1999. - С. 132-136.

24. Иммунологические методы /под. ред. Г.Фримеля. М.: Медицина, 1987.-342 с.

25. Каграманов, А.И. Возбудитель туберкулеза /А.И. Каграманов. -М.: Медгиз, 1955. С. 34-40.

26. Кадаев, Г.Н. Гаммерман Л.Ф. Лекарственные растения. М.:1. Планета, 1992.-С. 5-7.

27. Карпович, В.Н., Беспалова Е.И. Фармакогнозия. М., Медицина. 1976.-448 с.

28. Ковалева, Н.Г. Лечение растениями /Н.Г. Ковалева. М.: Медицина, 1972. - 56с.

29. Кругляк, Л.Г. Таблицы здоровья. Целебные свойства лекарственных растений М.: Квиана, 1997. -С. 3-6, С. 18-25.

30. Крылова, И.Л., Капорова В.И. Составление расчетных таблиц для оценки урожайности лекарственных растений по проективному покрытию. Растительные ресурсы, том 28, 1992. С.141-156.

31. Кудпай, Д.Г. Эписомы и инфекционная наследственность бактерий /Д.Г. Кудпай. М.: Медицина, 1969. - 224 с.

32. Кузнецова, М.В. Физиология растений / М.В. Кузнецова. М.: Высшая школа, 2006. - 673 с.

33. Культиасов, И.М. Экология растений / И.М. Культиасов М.: Изд-во Моск. ун-та, 1992. - 384 с.

34. Кутас, E.H. Эколого-биологические особенности жизнедеятельности растений /E.H. Кутас. Минск: Наука и техника, 1998. - С. 34-62.

35. Лабинская, A.C. Микробиология с техникой микробиологических исследований /A.C. Лабинская. М.: Медицина, 1987. - С. 480.

36. Лабораторные исследования в клинике / Под ред. В.В.Меньшикова.- М.,1987. -375 с.

37. Лавренов, В.К., Современная энциклопедия лекарственных растений / В.К. Лавренов, Г.В. Лавренова. С-П.: Эксмо, 2006. 271с.

38. Лакин, Г.Ф. Биометрия М.: Высшая школа, 1990. - С. 323.

39. Лахтин, В. М. Биотехнология, 1985, №5. -с. 11-27; Gold Е., Balding P., Receptor-specific proteins: plant and animal lectins, N.Y., 1975; Brown J., Hunt

40. R., «Internal. Rev. Cytol.», 1978, v. 52, p. 277-349.

41. Лекарственное растительное сырье. Фармакогнозия: Учеб. пособие/ Под ред. Г.П. Яковлева и К.Ф. Блиновой-СПб.: СпецЛит, 2004. 765 с.

42. Летняя полевая практика по геоботанике. Практическое руководство /Под ред. В.С.Ипатова. Л., Изд-во Ленингр. Ун-та, 1983, 175 с.

43. Максютина Н.П., Комисаренко Н. Ф., Прокопенко А. П. и др. Растительные лекарственные средства, Киев. 1985 - 354 с.

44. Методика определения запасов лекарственных растений, М.: 1986.215 с.

45. Методы исследований в иммунологии /под ред. И. Лефковитса, М.: 1981.- 322 с.

46. Мишин, В.Ю., Чуканов В.И., Григорьев Ю.Г. Побочное действие противотуберкулезных препаратов при стандартных и индивидуальных режимах химиотерапии. М., 2004.

47. Мишустин, E.H., Шильникова В.К. Биологическая фиксация атмосферного азота. М.: Наука, 1968.-370 с.

48. Мишустин, E.H., Шильникова В.К. Клубеньковые бактерии и инокуляционный процесс. М.: Наука, 1973. -288 С.

49. Муравьев, И.А. Основные направления и результаты работы Пятигорского фарм. ин-та в области изучения солодки СССР (1943-1963) // Вопросы изуч. и иссл. солодки в СССР. 1966. - С. 18-112.

50. Муравьев, И.А. Солодковый корень Ставропольского края, перспективы его применения //Мед. Промыш. СССР. -1951. №5. - С. 20-23.

51. Муравьев, И.А. Экстракция вальцеванием корней солодки голой // Фармация. 1975. - .24. - №6. - С. 20-22.

52. Муравьев, И.А., Маняк В.А. Зависимость условий ремацераци солодкового корня от способа его измельчения. В кн.: Актуальные вопросы фармации. Вып. 2. Ставрополь, 1974.-е. 235-240.

53. Муравьев, И.А., Марьясис Е.Д., Красова Т.Г., Чеботарев В.В., Старокожко JI.E. и др. О кортикоподобном действии линиментов, приготовленных наоснове некоторых препаратов корня солодки голой // Фармокол. итоксикол. 1983. - № 1. - С. 59-62.

54. Муравьев, И.А., Пономарев В.Д. Современное состояние исследованияглицирризиновой и глицирретиновой кислот и их производных //Вопросы изучения и использования солодки в СССР. M.,-JI.: Наука,1960. - С. 15-18.

55. Муравьев, И.А., Старокожко Л.Е., Колесникова О.П. и др. Изучение иммуномодулирующих свойств препаратов глицирама и густого экстракта солодкового корня // Хим.-фарм. журн. 1992. - №9-10. - С. 39-42.

56. Муравьева, Д. А. Фармакогнозия / Д. А. Муравьева. М.: Медицина, 1991. - С.3-560.

57. Муравьева, Д.А., Самылина И.А., Яковлев Т.П. Фармакогнозия 4-е изд.- М.: Медицина - 2002.- 627 с.

58. Нейштадт, М.И. Определитель растений средней полосы европейской части СССР / М.И. Нейштадт. М.: Просвещение, 1973. - С. 466475.

59. Новиков, B.C. Популярный атлас-определитель. Дикорастущие растения. -М.,2004 416с.

60. Носов, A.M. Лекарственные растения / A.M. Носов. М.: ЭКСМО-Пресс, 2001.-С. 332-339.

61. Нугманова, М.Л., Калитина Н.Ф. Случай контактного дерматита, вызванного солодкой //Вестник дерматологии и венерологии. М.-.Медицина,1979.-№ 11.-С. 62-64.

62. Обухов, А.Н. Лекарственные растительные препараты / А.Н. Обухов. Краснодарское книжное издательство, 1983. - С. 16-33.

63. Пастушенков, Л.В. и др. Лекарственные растения Л., 1990, 383 с.

64. Пастушенков, Л.В., Пастушенков А.Л., Пастушенков В.Л. Лекарственные растения: Использование в народной медицине и быту. Методическое пособие. СПб.: ДЕАН, 1998, 84 с.

65. Перевозченко, И. И. Лекарственные растения в современной медицине. Киев: Знание, 1990. -48 С. (Сер. «Природа человек здоровье»,№5).

66. Петров, Р.В. Иммунология М.: Медицина 1982.

67. Пилипенко, В.Н. Лекарственные растения Астраханской области / В.Н. Пилипенко, Д.Л. Теплый и др. Астрахань: Изд-во АГПУ, 1997, - 120с.

68. Пилипенко, В.Н. Современная флора дельты Волги / В.Н. Пилипенко, А.Л. Сальников, С.Н. Перевалов. Астрахань: Изд-во АГПУ, 2002. - 138с.

69. Пилипенко, В.Н., Пилипенко Т.А. Редкие и исчезающие виды растений Астраханской области / Ученые записки, 111, Естественные науки, Астрахань.-1996.-С.53-57.

70. Плаксина Т.И. Конспект флоры Волго-Уральского региона. Самара: Изд. «Самарский университет», 2001.-338с.

71. Пономарев В.Д. Экстрагирование лекарственного сырья. М.: Медицина, 1976, -202 с.

72. Растительные лекарственные средства /Н.П. Максютина, Н.Ф. Комисаренко, А.П. Прокопенко и др. /под. ред. Н.П. Максютиной. Киев.: Здоров я, 1995.-280 с.

73. Руководство к практическим занятиям по фармакогнозии: учеб. пособие /под. ред. И.А.Самылиной, А.А.Сорокиной. М.: ООО «Медицинское информационное агентство», 2007. - 672 с.

74. Сбойчаков, В.Б. Микробиология с основами эпидемиологии и методами микробиологических исследований: учебник для средних мед. учеб. заведений / В.Б.Сбойчаков. СПб.: СпецЛит, 2007. - 592 с.

75. Семенов, A.M. Микробно-растительные взаимодействия /А.М.Семенов //Экология микроорганизмов; под ред. Нетрусова А.И. М.: Академия. - 2004. - С. 145-164.

76. Соколов, С.Я. Справочник по лекарственным растениям /С.Я. Соколов, И.П. Замотаев М.: Медицина, 1990. - 464 с.

77. Справочник по клиническим лабораторным методам исследования /под. ред. Е. А. Кост. -М.: Медицина, 1975. 383с.

78. Справочник по микробиологическими и вирусологическим методам исследования /под.ред. М.О.Биргера. -М.: Медицина, 1973. -456с.

79. Станков, С.С. Определитель высших растений Европейской части СССР /С.С. Станков, В.И. Талиев. Л., 1948. - 1150 с.

80. Сухенко, Л.Т. Лабораторно-практические занятия по микробиологии с основами вирусологии. Астрахань: Изд-во АГПУ, 1-2часть, 1999.-16с.

81. Татура, Ю.В. Уход за кожей лица и тела: Тонкости, хитрости и секреты. — Серия книг «Ваше здоровье» М.: Бук-пресс.2006. -384 с.

82. Ушаков, Н.М. Природа и история Астраханского края /Н.М. Ушаков, В.П. Щучкина, Е.Г. Тимофеева, В.П Пилипенко и др. Астрахань: АГПУ, 1996.-364 с.

83. Финеан, Дж. Мембраны и их функции в клетке / Дж. Финеан, Р. Колмен, Р. Митчелл. М.: Мир. - 1977. - 199 с.

84. Черкес Ф.К., Богоявлинская Л.Б., Вельская И.А. Микробиология -М.: Медицина, 1986.

85. Чиков, П.С. Наука и лекарственные растения /П.С. Чиков, М.И.Павлов. М.: Знание, 1977. - 88 с.

86. Чуб, В.В. Комнатные растения / В.В. Чуб, К.Д. Делена. М.: ЭКСМО-Пресс, 2000. - 336с.

87. Чуйков, Ю.С. Экология и природопользование в Астраханской области / Ю.С. Чуйков, Л.Ю. Чуйкова. Астрахань: Изд-во Нижневолжского экоцентра, 2008. - 372 с.

88. Шлегель, Г.Г. История микробиологии.- М.: Едиториал УРСС, 2002. С.304.

89. Ягодка, В. С. Лекарственные растения в дерматологии и косметологии. К.: Наукова думка, 1991. - 272 с.

90. Яковлев, Г.Н. Ботаника / Г.Н.Яковлев, В.А. Челомбитько СПб.: СпецЛит, 2001. - С. 543-556.

91. Яковлев, Г.П. Бобовые земного шара. Л.: Наука, 1991. 144 С.

92. Браславский, В. Б., Куркин В. А., Жданов И. П. Антимикробнаяактивность экстрактов и эфирных масел почек некоторых видов Populus L. Растительные ресурсы, Вып. 2. -Том 27. 1991. - С. 77-81.

93. Браславский, В. Б., Куркин В. А., Запесочная Г. Г., Безрукова Н. А. Количественное определение суммы флавоноидов и гидроксикоричных кислот в почках некоторых видов Populus L. Растительные ресурсы, Вып. 3, 1991. -Том 27.-С. 130-134.

94. Зайцев, Г.П. Применение Сангвинарина у больных с гнойными ранами и трофическими язвами. /Лекарственные растения Т. 14. // Фармакология и химиотерапия М - Колос,- 1971- С. 261-262.

95. Линевич, Л. И.Успехи биологической химии М., 1979. -Т. 20. С.71.94.

96. Определитель бактерий Берджи /под. ред. Дж. Хоулта и др.. 9-е изд. в 2 т. - М.: Мир, 1997. - Т.2. - С. 541, 606-607.

97. Бабоша В. Лектииы и проблема распознавания фитопатогенов растением-хозяином . Том 69, 2008. № 5, сентябрь-октябрь. С. 379-396.

98. СОСТАВНЫЕ ЧАСТИ ДОКУМЕНТОВ

99. Абдрашитова Н.Ф., Фархутдинов P.P., Загиддулин М.З., Хамилов

100. Ф.Х. Сравнительный анализ влияния антибиотиков на свободнорадикальное окисление in vitro // Бюл. экспер. биол. 1988. - №3. - С. 297-299.

101. Абд-Эльнаби Али-Эльдин Мохамед, Иосеф Абдул- Хафез Иссам, Сухенко Л.Т., Егоров М.А. Изучение микробиологической активности экстракта из Сальвинии плавающей. Естественные науки. - №1 (30).- 2010.— С.34-37.

102. Абрамова, Л.М., Баширова P.M., Муртазина Ф.К., Усманов И.Ю. Характеристика ценопопуляций Glycyrriza Korshinskyi Grig, на Юго-Востоке республики Башкортостан. Растительные ресурсы, Том 37 Вып. 2 - 2001- С. 24-29.

103. Авдошенко, К.Е. Современный подход к восстановительному лечению пациентов после пластических операций на лице. // Русский Медицинский Журнал, РМЖ. 2008.- № 251684. - 1684 с.

104. Адекенеов, С. М., Куприянов А. Н., Турмухамбетов А. Ж., Бейсембаева А. М. Возрастная динамика содержания сесквитерпеновыхлактонов у Achillea Nobilis L. Растительные ресурсы, вып. 3. 1991. - С. 59-66.

105. Аравийская, Е.Р. Возрастные изменения в дерме: новые сведения и пути коррекции с помощью средств для ежедневного ухода //Copyright РМЖ (Русский Медицинский Журнал) 2008. № 231568. - 574 с.

106. Бабоша, В. Лектины и проблема распознавания фитопатогенов растением-хозяином //Журнал общей биологии, Том 69, 2008. № 5, сентябрь-октябрь. - С. 379-396.

107. Бадалян, С.М., Топчян A.B. Исследование природных противогрибковых средств растительного происхождения // Успехи медицинской микологии. М 2003. - С. 88-90.

108. Баймиев, Ал.Х., Чемерис A.B., Баймиев Ан.Х., Вахитов В.А. Углеводсвязывающие пептиды лектинов бобовых растений в связи с их различной хозяйской специфичностью при образовании симбиоза с клубеньковыми бактериями // Генетика, 2001. -№ 37 р. 215-222.

109. Барер, Г.М., Лемецкая Т.И. Сангвиритрин в лечении некоторых заболеваний слизистой оболочки полости рта. / Тез. докл. VII Рос. Нац.конгр. «Человек и лекарство».- М.,2000 368 с.

110. Бармин, А.Н. О мониторинге растительности в дельте р. Волги / А.Н. Бармин // Эколого-биологические проблемы Волжского региона и Северного Прикаспия. Астрахань:Тез.докл.,1996., ч.2 С. 17.

111. Баронец, Н. Г., Адлова Г. П., Мельникова В. А. Влияние экстрактов лекарственных растений на рост микроорганизмов //Журнал микробиология, 2001.-№5.-С. 71-72.

112. Баханова, Е.М., Николаев С.М. Применение фитобактериального средства, полученного на основе экстракта из побегов Pentaphylloides fruticosa (L.) О. Schwarz, при экспериментальном дисбактериозе. Растительные ресурсы Т.39,вып. 1,-2003.-С. 102-107.

113. Бахов, Н.И., Александрова Л.З., Титов В.Н. // Лаб. дело 1988.- №6.-С. 3-12.

114. Башиева С.С., Мамедова Ш.Р., Морфобиологическая характеристика Grindelia integrifolia Willd., выращиваемой на апшеронском п-ове и содержание эфирного масла в ней.//Растительные ресурсы, 1991, вып 3. -С.-78-81

115. Баширова, P.M., Муртазина Ф.К., Усманов И.Ю. //Растительные ресурсы. 2001. - Т. 37, вып. 2. - С. 24-29.

116. Бондаренко, И.Г. Оптимизация оценки активности миелопероксидазы в нейтрофилах крови /И.Г.Бондаренко //Лабораторное дело. 1986. -№5. - С.313-314.

117. Буданцев, А.Л. О некоторых терминах, связанных с биологической продуктивностью / А.Л. Буданцев // Растительные ресурсы. 2007 - Том 43, вып. 4.-С. 119-124.

118. Бузук Т.Н. Влияние температуры сушки на компонентный состав и количественное содержание алкалоидов в сырье некоторых видов лекарственных растений. /Т.Н. Бузук //Растительные ресурсы, 1991.-вып.З.-С. 100—108.

119. Быков, A.C., Вичканова С.А., Селезнев A.C., Фатеева Т.В., Пашков Е.П. Электронно-микроскопическое изучение действия Сангвиритрина на микроорганизмы в опытах in vitro //Антибиотики 1983 .-№6. - С.421-424.

120. Быков, В.А., Вичканова С.А., Глызин В.И., Климахин Г.И. Эффективность применения и перспектива разработок лекарственных препаратов на основе Сангвиритрина //III Рос. Нац. Конгр. «Человек и лекарство». Тез. докл.- М., 1996 - С. 12.

121. Быкова, О.П. Слизевые клетки листа некоторых представителей Alcea L. /О.П.Быкова, О.В. Яковлева //Растительные ресурсы. 1991. - Т. 27, Вып. 2. - С. 82-89.

122. Васильева, О.Н., Рубцова JI.H., Плюшкин С.А. Сравнительный анализ терморадиационного и конвективного способов сушки лекарственного растительного сырья // Растительные ресурсы, 1998 Т.34, Вып.4. С. 81-83.

123. Васильева, Е.С. Современные аспекты ведения пациентов с угревой болезнью //Русский Медицинский Журнал, РМЖ. 2008. - № 1394.

124. Васильева, Е.С. Угревая болезнь: клинико-иммуно-микробиологические аспекты //Русский Медицинский Журнал, РМЖ. 2008. -№ 572.

125. Васильева, Е.С., Савостьянова О.В. Состояние микроэкологии кишечника у больных угревой болезнью //Русский Медицинский Журнал, РМЖ, 2008.- №251684.- 1398 с.

126. Великородов, A.B., Сухенко J1.T. Синтез и антимикробные свойства 3-5-дизамещенных изоксазолинов и карбаматных групп //Химико-фармацевтический журнал Астрахань,2003. -№1. С. 24-27.

127. Великородов, A.B., Сухенко Л.Т.Синтез и противомикробная активность некоторых С-нитро-акрил-1Ч-акрилкарбоматов Химико- фарм.жур. -Т.35. -Вып. 4. 2001. - С. 24-25.

128. Виссарионов, В.А., Виссарионова И.В. Утверждение специальностей «пластическая хирургия» и «косметология» как фактор повышения качества услуг специалистов эстетической медицины. Copyright РМЖ (Русский Медицинский Журнал) 2008. № 231568.

129. Вичканова, С.А., Адгина В.В., Рубинчик М.А. Фунгистистатическая активность высших растений // Антифунгальные свойства высших растений. Новосибирск, 1969.

130. Вичканова, С.А., Горюнова JI.B. Поиски противовирусных препаратов из высших растений // Тр. 1-го Всесоюзного съезда фармацевтов. М., 1970. -С.545-550.

131. Вичканова, С.А., Рубинчик М.А. Антимикробная активность эфирных масел // Тр. Всесоюз. науч. фармацевт, конф. по изучению и использованию лекарств, растит, ресурсов СССР. Д., 1964. С.218-222.

132. Вичканова, С.А., Толкачев О.Н., Мартынова Р.Г., Арзамасцев Е.В. Сангвиритрин новый лекарственный растительный препарат антимикробного действия. // Химико-фармацевтический журнал - 1982.-Т.16 (12).- С. 107-112.

133. Вичканова, С.А. Данные клинического исследования антимикробного растительного препарата сангиритрин //Российский медицинский журнал, РМЖ (независимое издание для практикующих врачей (ВИЛАР) М. http://www.rmj.articles 1193.htm, 7s.

134. Вичканова, С.А., Габриэлян Н.И., Чубарова Д.В., Крутикова Н.М. Применение Санвиритрина для профилактики раневой инфекции у кардиохирургических больных. / Тезисы докл. VIIIPoc. Нац. Конгр. «Человек и лекарство» -М.,2001. С.221.

135. Галанина, О.Е. Специфичность лектина из Butea Frondosa /О.Е. Галанина и др.. //Биоорганическая химия. 1992. - Т. 18, №3. - С.

136. Горбачева, Л. А., Дударева Н. А., Салганик Р. И. Молекулярные механизмы устойчивости растений к патогенам. Успехи современной биологии. Т. 111 вып. 1, 1991 г.-С. 122-133.

137. Горбачева, Л.А. Молекулярные механизмы устойчивости растений к патогенам /Л.А.Горбачева, Н.А. Дударева, Р.И.Салганик //Успехи современной биологии. 1991.-Т.111,Вып.1.-С. 122-132.

138. Громова, Н.А. Минина С.А., Филиппин Н.А. Зубнова Н.К. Исследование экстракции из растительного сырья в экстракторе-прессе (макет №2). Химико-фарм. Журнал, 1974. №11. - С. 56.

139. Давыдов, В. С., Никитина Г. К., Бандюкова В. А. Флавоноиды надземной части Scutellaria polyodon juz. Растительные ресурсы, вып. 2, 1991. -С. 50-58.

140. Демченко, Ю.Т., Смирнова А.А. и др. Противовоспалительнаяактивность извлечений, полученных методом двухфазной экстракции трех видов лекарственного растительного сырья //Растительные ресурсы. 2006. -Т. 42.- Вып. 4.-С. 61-70.

141. Дрынов, Г.И., Иванюшина O.K., Дьякова Ф.Н. Профилактика и терапия респираторных инфекций при проведении курса специфической иммунотерапии //Лечащий врач. -2001-№3- С.45^17.

142. Дрынов, Г.И., Иванюшина O.K., Дьякова Ф.Н. Результаты лечения детей с хроническим тонзиллитом препаратом Тонзилгон Н //Детский доктор-2001 -№1. С.67-69.

143. Ефремова, А. П., Лукьянов О. Л., Зайко Л. Н., Семенюк Н. В. Запасы сырья дикорастущих лекарственных растений в междуречьи Лабы и Урупа (Краснодарский край). Растительные ресурсы. -Том 30. -Вып. 1-2, 1994. С. 65-72.

144. Жигульцова, Т.И., Паркаева Л.В., Ильина Е.Э., Виссарионов В.А. Опыт применения 5% крема «Эмла» в практике дерматокосметологов. Русский Медицинский Журнал» РМЖ. 2008. № 251.

145. Иртуганова, O.A. Использование М. LUFU для первичного отбора противолепрозных препаратов /O.A. Иртуганова, Н.Г. Урляпова //Актуальные вопросы лепрологии. Астрахань: Изд-во НИИ по изучению лепры, - 1984. -С.147-150.

146. Иртуганова, O.A. Современные возможности микобактериологической лаборатории /O.A. Иртуганова //Клиническая лабораторная диагностика. 2006. - №1. - С. 21-35.

147. Исаева, Е.В., Ложкина Г.А., Литовка Ю.А., Рязанова Т.В. Биологическая активность экстрактов и эфирных масел почек тополя бальзамического Красноярского края. Химия растительного сырья, 1, 2008. -С.67-73.

148. Исаева, Е.В., Ложкина Г.А., Рязанова Т.В., Вялков А.И., Домрачев Д.В., Ткачев, A.B. Хромато-масс-спектрическое исследование летучих компонентов вегетативной части тополя бальзамического. Химиярастительного сырья, 1 2008. - С.63-67.

149. Карпунина, JI.B. Значение углевод-белкового узнавания и роль лектинов при формировании различного рода азотофиксирующих систем // Успехи современной биологии, 2002, том 122. № 6. - С. 548-556.

150. Карпунина, JI.B., Савенкова H.H., Вишневецкая О.В., Машкина А.Б., Никитина В.Е. // Микробиология. 1996. Т.65.- №4. С.512.

151. Карташова, Г. С., Керашева С. И., Романова Г. В., Антибактериальная активность сухого экстракта из надземной части Agrimonia Pilosa Ledeb. Растительные ресурсы, Вып. 3. 1998. - С. 100-102.

152. Карташова, Г.С. Антибактериальная активность сухого экстракта из надземной части Agrimonia pilosa Ledeb /Г.С. Карташова, С.И.Керашева, Г.В.Романова //Растительные ресурсы. 1998. - Т. 34, Вып. 3. - С. 100-102.

153. Касатикова, P.E. Лечение Сангвинарином кольпитов и эрозий шейки матки / Лекарственные растения Т. 14. // Фармакология и химиотерапия - М., «Колос» - 1971- С. 262-264.

154. Каухова, И.Е. Особенности экстрагирования биологически активных веществ двухфазной системой экстрагентов при комплексной переработке лекарственного растительного сырья//Растительные ресурсы. -2006.-Т. 42,- вып. 1.- С. 82-91;

155. Кац, Л.Н. Субмикроскопическая организация микобактерий туберкулеза /Л.Н.Кац, С.А. Гулевская, Л.П.Зубок, М.Н.Немсадзе //Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 1972. - №4. - С.33-37.

156. Коваленко, Л.П., Шипаева Е.В., Кольченко И.И. Иммунокорригирующие свойства фитопрепарата Тонзилгон H / «Русский Медицинский Журнал» РМЖ. 2008 г. -№ 251684. 1684.

157. Коновалова, O.A. Биологически активные вещества Valeriana officinalis L. s.l. /О.А.Коновалова, H.T. Конон, К.С.Рыбалко //Растительные ресурсы. 1991. - Т. 27, Вып. 2. - С. 54-58.

158. Королев, Н.П. Функции лектинов в клетках /Н.П. Королев //Общие проблемы физико-химической биологии. М.: ВИНИТИ. - 1984. - Т.1. - С. 217-133.

159. Корсун, В.Ф., Римша В.М., Бореко Е. И.,Никулина Е.В. Растительные лектины новые аспекты фитофармакологии инфекционно-воспалительных процессов // Матер, конф. «Патофизиология и современная терапия» -М,2000. -С. 102 - 104.

160. Корсун, В.Ф., Римша В.М., Бореко Е.И. Противовирусные свойстварастительных лектинов// Тез. докл. Пятого Росс, съезда врачей-инфекционистов. М., 1998. -С.265-266.

161. Крогулевич, P.E. К методике отбора растений на солеустойчивость / P.E. Круглевич // физиология и биохимия культурных растений. Т. 22, №6-С. 602-607.

162. Крогулевич, P.E. Продуктивность и содержание белка в листьях Glycyrrhiza uralensis Fisch. В вегетационном опыте /P.E. Крогулевич //Растительные ресурсы. 2000 - Т. 36, вып.2. - С. 117-119.

163. Крылова И.Л., Капорова В.И. Составление расчетных таблиц для оценки урожайности лекарственных растений по проективному покрытию. //Растительные ресурсы. Т.28.,вып.3,1992.-С.141—156.

164. Кунельская, В.Я. О применении Сангвинарина при грибковых заболеваниях уха. // Ж, Ушных, носовых и горловых болезней 1969. - №5 - С. 101-103.

165. Кунельская, В.Я. Применение препарата Сангвинарина при лечении хронических средних и наружных отитов /Лекарственные растения,-Т. 14. // Фармакология и химиотерапия М.: Колос - 1971 - С. 266-269.

166. Казаринова, Н. В., Ткаченко К. Г. Лекарственные растения в лечении разных форм туберкулеза (обзор русскоязычной литературы)//Растительные ресурсы, Т. 36, вып. 1, 2000. С. 92-106.

167. Казаринова, Н.В. Лекарственные растения в лечении разных форм туберкулеза /Н.В.Казаринова, К.Г.Ткаченко //Растительные ресурсы. 2000. -Т. 36, Вып.1. - С. 92-106.

168. Лабораторно-практические занятия по микробиологии с основами вирусологии /Методические рекомендации. 2 часть. Сост. Л.Т.Сухенко, Астрахань, 1999.

169. Лахтин, В.М. Биотехнология лектинов // Биотехнология. 1989. -Т.5 -№6. с.676-686.

170. Лахтин, В.М. Лектины в исследовании белков и углеводов. // Итоги науки и техники. Сер. Биотехнология. Т. 2 / Под ред. A.A. Клёсова. М.: ВИНИТИ, 1987.-290 с.

171. Лахтин, В.М. // Биотехнология. 1989. - Т. 5. - № 1. - С. 113 -116.

172. Лахтин, В.М. // Биотехнология . 1986. - Т. 2. - № 6. - С. 66 - 79.

173. Лахтин, В.М. // Микробиологический журнал. 1989. - Т. 51. - № 3. - С. 69 - 74.

174. Лахтин, В.М. Биотехнология лектинов /В.М. Лахтин //Биотехнология. 1989. - Т. 5, № 6. - С. 676-686.

175. Лахтин, В.М. Лектины в исследовании белков и углеводов /В.М.Лахтин //Итоги науки и техники. Сер. Биотехнология. М.: ВИНИТИ -1987.-Т. 2.-С. 290-290.

176. Ламрини, Мохаммед, Куркин В.А., Мизина П.Г., Беляева М.В., Арутюнов Ю.И., Онучак Л.А. Флавоноиды и терпеноиды цветков лаванды колосковой. Химия растительного сырья, 1, 2008. С.77-81.

177. Лемецкая, Т.И., Пожогина А.Г., Руднева В.Е. Изучение терапевтической активности Ссангвинарина при заболеваниях слизистой оболочки полости рта. /Лекарственные растения.- Т. 14. // Фармакология и химиотерапия М - Колос - 1971.-С.269-272.

178. Лобанова, A.A., Дадочкин В.М., Виноградов А.К., Першин Н.С. Масло из листьев HIPPOPHAE RHAMNOIDES L. /Растительные ресурсы, вып. 4. 1991.-С. 47-52.

179. Лобанова, A.A., Сысолятин C.B., Махова Е.А., Будаева В.В. Биологически активные добавки к пище из плодово-ягодных жомов и шротов. Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья. Мат.всеросс. семинара, Барнаул, 2002 С. 186-188.

180. Лубсандоржиева, П.Б., Ажунова Т.А., Цыбанов К.Ц. Получение экстракта сухого из 4-компонентного сбора и содержание в нем биологически активных веществ. Химия растительного сырья, 1, 2008. С.107-110.

181. Луцик, М. Д., Панасюк Е. Н., Луцик А. Д., Лектины, Львов, 1981; Королев Н. П., в сб.: Итоги науки и техники, сер. Общие проблемы физико-химической биологии, т. 1, М., 1984.

182. Максимов, О.Б. Биологически активные вещества Maackia amurensis Rupr et Maxim /О.Б.Максимов, Н.И.Кулеш, П.Г.Горовой

183. Растительные ресурсы. 1992. - Т.28, Вып. 3. - С. 100-102.

184. Маслов, А.К., Хиврина С.А. Перспективы лечения лепры путем комплексирования рифампицина с йодидом и корнем хрена // Проблемы туберкулеза и болезней легких. 2007. - №4. - С.25-27.

185. Маслов, А.К. Роль пероксидазы в патогенезе заболеваний и реализация ее фармакологической активности на примере экспериментальной лепры /А.К.Маслов // Вестник новых медицинских технологий. 2007. - Т. XIV, Вьш.4. - С. 161-164.

186. Маслов, А.К. Электронно-иммунохимическое выявление микобактериальных антигенов в гранулемах больных лепрой /А.К.Маслов, М.Н.Дячина // Ж микробиол. 1996. - №1. - С. 84-87.

187. Масная, Н.В., Чурин A.A., Борсук О.С., Шерстобоев Е.Ю. Механизмы иммунотропного действия препаратов природного происхождения. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины 2008 г., Приложение 2, -С. 37-44.

188. Маянский, А.Н. Туберкулез (микробиологические и иммунопатогенетические аспекты) /А.Н. Маянский //Иммунология. 2001. -№2.-С. 53-63.

189. Меньшиков, Д.Д. Ультраструктура микобактерий туберкулеза, чувствительных и устойчивых к антибактериальным препаратам /Д.Д.Меньшиков и др.. //Пробл. туберкулеза. 1971. - №5. - С. 64-69.

190. Методика определения запасов лекарственных растений. М., 1986.

191. Мустафаева, С. Д., Особенности онтогенеза Achillea Biebersteinii Afán b A. Nobilis L. в Азербайджане. Растительные ресурсы, вып. 2, 1991. С. 44-50.

192. Н.В. Бовин,А.Б. Тузиков,А.А. Чинарев. Олигоглицины: материал с неограниченными возможностями для нанотехнологий .//Российские нанотехнологии.2008.Т.5-6.С.98-111.

193. Наврузшоев, Д. Продуктивность полынных сообществ Западного Памира в связи с проблемой улучшения пастбищ (Таджикистан). Растительные ресурсы. -Том 31. -Вып. 4, 1995. С.26-33.

194. Нагурская, Е.В., Л.Г.Зайцева, Н.В. Кобец, И.В.Киреева, Л.М. Алимбарова, И.И. Самойленко, И.Ф. Баринский //Бюллетень экспериментальной биологии и медицины 2008. Том 145. -№ 2. - С.196.

195. Назарова, Г.Н., Маслов А.К., Сухенко Л.Т., Лужнова С.А. Предпосылки использования экстракта из корня солодки голой (GLYCYRRHIZA GLABRA) в терапии лепры // Вестн.новых мед. технологий. -2008. -Т.15, № 2. С. 218-219.

196. Назарова, Г.Н., Сухенко Л.Т., Маслов А.К. Влияние экстрактов некоторых растений Астраханской области на клетки микобактерий туберкулеза //Вестн. новых мед. технологий. 2007. - Т. 24, № 4. - С. 44-45.

197. Назарова, Г.Н., Сухенко Л.Т., Маслов А.К., Лужнова С.А. Предпосылки использования экстракта из корня солодки голой (Glycyrrhiza glabra) в терапии лепры //Вестник новых медицинских технологий. 2008. - Т.1. XV, №.2. -С.218-219

198. Назарова, Г.Н., Сухенко J1.T., Маслов А.К.Возможности использования экстракта из корней солодки голой в терапии лепры 15 Рос. Национ. Конгресс «Человек и лекарство». Сб. мат. Конгресса (тезисы докладов), Москва, 2008. С. 672.

199. Никитина, И.В. Клинические особенности дерматомикозов. Косметология. /Copyright "РМЖ (Русский Медицинский Журнал)" 2009. -№ 171058.-411 с.

200. Никитина, С.С. Некоторые данные о механизме противовоспалительного эффекта глицирризиновой и глицирретиновой кислот, выделенных из солодки гладкой // Фармакол. и токсикол. 1966. - №7. - С. 6770.

201. Новикова, Н.И., Сафронова В.И., Павлова Е.А. О характере взаимодействия клубеньковых бактерий козлятника Rhizobium galegae с бобовыми растениями // С.-Х. биология. 1992. -№ 5. С. 105-110.

202. Ноздрачев, В.Я., Видовой состав и состояние парков города Астрахани /Ученые записки, 111, Естественные науки, Астрахань- 1996. -С.48-52).

203. Ноздрачев, В .Я., Сухенко JI.T. Сырьевые запасы некоторых лекарственных растений Прикаспийского региона Астраханской области Мат. 1-й межд. Конф. по изменениям среды Каспийского региона, 24-25 августа 2008, Балбосар, Иран. С. 21-25.

204. Палагина, М.В., Биологическая активность экстракта из корня Glicyrrhiza uralensis Fisch в коррекции состояния легких /М.В. Палагина, М.А. Хасина //Растительные ресурсы. 1998. - Вып. 1. - С. 8186.

205. Панова, О.С., Колмакова Е.Ф., Гурочкина Л.П. Современные способы коррекции возрастных дефектов кожи с применением средств с направленным, пролонгированным действием. «Русский Медицинский Журнал» РМЖ. 27 января 2011.- Том 19. № 1074.

206. Пилипенко, В.Н. Динамика растительности луговых сообществдельты Волги в условиях зарегулированное™ стока / В.Н. Пилипенко, В.В. Свиридов // Итоговая научная конференция АГУ. Тез. докл., 2003- С.34.

207. Пилипенко, В.Н. Лекарственные растения Нижнего Поволжья / Пилипенко В.Н., Каюков Ф.В. Пилипенко Т. АЛ Материалы доклада итоговой научной конференции. 1993. - С 60.

208. Поляков, А.Е. Прямой нитратредуктазный метод определения лекарственной чувствительности Mycobacterium tuberculosis /А.Е.Поляков, И.К.Мазурова //Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. -2007. №5. - С.94-96.

209. Правдивцева, O.E., Куркин В.А. Исследования по обоснованию новых подходов к стандартизации сырья и препаратов зверобоя продырявленного. Химия растительного сырья, 1, 2008. С.81-87.

210. Приступа, Е.А., Хакимова Д.Р. Совершенствование анализа и технологии настоев и отваров, содержащих флавоноиды. // Фармация, 1990, №3. С. 70.

211. Русакова, Е.Г. Анализ экологической структуры флоры дельты Волги// Эколого-биологические проблемы Волжского региона и Северного Прикаспия. Тез. Докл. 1998. С.99-100.

212. Сабоиев, С.С., Мастоншоева Х.С. Запасы сырья Glycyrriza uralensis Fisch. G.glabra L. в горном Бадахшане. Растительные ресурсы,вып. 2, том 27, 1991, С.18-23.

213. Сенцов М. Ф., Браславский В. Б., Куркин В. А., Запесочная Г. Г. Исследование химического состава почек Populus Laurifolia Ledeb. Растительные ресурсы, вып. 1-2, 1996.-С. 100-105.

214. Сенцов М.Ф., Браславский В.Б., Куркин В.А., Запесочная Г.Г. Исследование химического состава почек Populus L, Растительные ресурсы, вып. 1-2, 1996-С. 101-105.

215. Симкин, Б. Е. Лакрица- корень среднеазиатских джунглей // Химия и жизнь, 1977, № 12. С. 84-86.

216. Синицын, М.В. Глутоксим в хирургическом лечении больных туберкулезом легких /М.В.Синицын, И.В. Богадельникова // Проб, туберкулеза и болезней легких. 2007. - № 5. - С. 17-20.

217. Синицын, М.В. Тиопоэтины в комплексном лечении туберкулеза /М.В.Синицын, И.В. Богадельникова, Г.Б.Соколова //Проб. Туберкулеза и болезней легких. 2007. - № 4. - С. 21-25.

218. Слысь, Т.Ю. Лектин свеклы как специфический регулятор роста пыльцевых трубок при межвидовой гибридизации. Рукопись деп. ВНИИТЭИ агропром 30.01.1987 ВНИТИ сахарной свеклы Госагропром СССР № 75/5 ВС-87.

219. Смирнова, Г.И. Опыт применения Синупрета и Тонзилгона Н для профилактики и лечения острых респираторных заболеваний у часто болеющих детей //Детский доктор.-2001.-№1- С. 25-29.

220. Сухенко, Л.Т Сравнение бактерицидных свойств некоторых растений Астраханского региона Сб. статей Фитопатогенные бактерии, фитонцидология. Аллелопатия, Киев, 2005. С. 88-89.

221. Сухенко, Л.Т Экологические проблемы взаимодействия микрофлоры в условиях Астраханской области / Астраханский край: История и современность. Матер, всесоюз. конф. Астрахань, 1997 С.87-89.

222. Сухенко, Л.Т. Биологически активные вещества некоторых растений и механизмы противомикробной активности // Биологические исследования. 2009, №1 (1). С. 13-17.

223. Сухенко, JI.T. Биологически активные вещества некоторых растений и механизмы их противомикробной активности. Естественные науки. №3 (32). 2010.-С. 166-175.

224. Сухенко, JI.T. и др. Разработка фитопрепаратов «ГЛИЦИР-ФИТ» с противотуберкулезной активностью. //Биоресурсы, биотехнологии, экологическое развитие регионов юга России: Материалы докл. междунар. конф. -Сочи, 2007. С. 71-75.

225. Сухенко, Л.Т. Иванова H.A. Противомикробная активность азотосодержащих компонентов некоторых растений Астраханской области Азотосодержащие гетероциклы, синтез, свойства, применения: сборник научных трудов АГПУ, Астрахань, 2000.

226. Сухенко, Л.Т. Изучение антимикробных свойств некоторых растений астраханской флоры / Сухенко Л.Т.// Естественные науки. 2001. -№3. - С. 83-87.

227. Сухенко, Л.Т. Изучение биологически активных веществ некоторых растений в условиях Астраханского региона Вестник Московского Государственного Областного Университета, Серия «Естественные науки», №2, 2006.-С. 69-71.

228. Сухенко, Л.Т. Изучение экологических проблем взаимодействия микрофлоры водоемов в условиях Астраханской области / Информатика, образование, экология и здоровье человека; тезисы V Международной конференции, Астрахань, 2000. С. 207-209.

229. Сухенко, Л.Т. Изучение экологических проблем взаимодействия микрофлоры в условиях Астраханской области. Computer Science Education Ecology & Health, Abstracts, Astrakhan, September 15-20,2000r.

230. Сухенко, Л.Т. Коваленко И.Б Решение экологических проблем взаимодействия микрофлоры в условиях г. Астрахани / Тезисы VII международ, конф. Математика. Компьютер. Образования, Пущино, 31 января-5 февраля, 2001.-С. 327.

231. Сухенко, Л.Т. Назарова Г.Н., Бовин Н.В. Изучение механизмов противомикробной активности растений астраханской флоры. Естественные науки. №4 (13), 2005.- С.13-24.

232. Сухенко, Л.Т. Некоторые вопросы экологии внутренних водоемов г. Астрахани/ Жур. Экологические системы и приборы, №9, 2005, Москва. С. 22-24.

233. Сухенко, Л.Т. Перспективы микробиологической очистки питьевойводы в условиях Астраханской области ВОДА. Химия и экология. 2008, №2. -С. 44-46.

234. Сухенко, JI.T. Разработка фитопреператов «ГЛИЦИРФИТ» с противомикробной активностью на основе растений астраханского региона. Естественные науки. №3 (32). 2010. С.145-149.

235. Сухенко, JI.T. Синтез и противомикробная активность некоторых С- нитроакрил -N-арилкарбонатов. Химико-фармацевтический журнал Т.35. -Вып. 4-2001.-С. 24-25.

236. Сухенко, Л.Т., Егоров М.А., Морикова З.В., Блинников В.В., Астафьева О.В. Биотехнология поэтапной очистки питьевой воды в условиях Астраханской области Биотехнология. Вода и пищевые продукты, 2008, Москва, с.290.

237. Сухенко Л.Т., Егоров М.А., Морикова З.В., Блинников В.В., Астафьева О.В. Биотехнология поэтапной очистки питьевой воды в условиях Астраханской области/ Биотехнология. Вода и пищевые продукты, 2008, Москва. С.290

238. Сухенко, Л.Т., Егоров М.А., Морикова З.В., Блинников В.В., Астафьева О.В.Биотехнология поэтапной очистки питьевой воды в условиях Астраханской области / Биотехнология. Вода и пищевые продукты, 2008, Москва. С.290

239. Сухенко, JI.T., Иванова H.A. .Изучение сравнительных противомикробных свойств некоторых растительных экстрактов и химических соединений Тезисы докл. Итог, научн. конференции АГПУ (27 апреля 2001 г.) Астрахань, 2001.-С. 19.

240. Сухенко, Л.Т., Макарова A.B., Замятина О.С. Некоторые вопросы экологии внутренних водоемов города Астрахани/ Эколого-биологические проблемы бассейна Каспийского моря (15-16 октября) Астрахань, 2003. -С.269-271

241. Сухенко, Л.Т., Назарова Г.Н., Бовин Н.В. Изучение механизмов противомикробной активности растений Астраханской флоры //Естественные науки. 2005. - № 4(13). - С. 13-24.

242. Сухенко, Л.Т., Назарова Г.Н., Ковалева A.A. Аллелопатические признаки лектиноподобных белков растений Астраханского региона Аллелопатия. Мат. межд. конф., Киев,2006. С. 131-138.

243. Сухенко, Л.Т., Ноздрачев В.Я., Пилипенко В.Н. Изучение антимикробных свойств некоторых растений Астраханской флоры Эколого-биологические проблемы бассейна Каспийского моря/ мат. Межд. Научн. Конф., 2003, Астрахань. С.83-87.

244. Сухенко, Л.Т., Пучков М.Ю. Некоторые вопросы экологии внутренних водоемов г. Астрахани/ Сб. Проблемы строительства, инженерного обеспечения и экологии городов. 4.1, Пенза, 2001. С. 41-43

245. Сухенко, Л.Т., Пучков М.Ю., Некоторые вопросы экологии внутренних водоемов г. Астрахани/ Сб. Проблемы строительства, инженерного обеспечения и экологии городов. 4.1, Пенза, 2001. С. 41-43

246. Сухенко, Л.Т., Ноздрачев В.Я., ПилипенкоВ.Н., Попова Ю.Н., Исназарова Д.Ж., Жулина Ю.Н.Сравнительное изучение антимикробных свойств растений Астраханской флоры Тезисы докладов итоговой научной конференции АГПУ, 1999.

247. Сухенко, Л.Т., Коваленко И.Б Решение экологических проблем взаимодействия микрофлоры в условиях г. Астрахани/ Тезисы VII международ, конф.: Математика. Компьютер. Образования, Пущино, 31 января- 5 февраля, 2001-С. 327

248. Сухенко, Л.Т. Аллелопатические признаки лектиноподобных белков растений Астраханского региона /Л.Т.Сухенко, Г.Н.Назарова, А.В.Ковалева //Алелопатш та счасна бюлопя: Материалы. Междунар. науч. конф.-Киев, 2006.-С. 131-135.

249. Сухенко, Л.Т. Изучение механизмов противомикробной активности растений Астраханской флоры /Л.Т.Сухенко, Г.Н.Назарова, Н.В.Бовин

250. Естественные науки. 2005. - № 4(13). - С. 13-24

251. Сухенко, Л.Т. Сравнительная бактериальная активность некоторых растений дикорастущей флоры Астраханской области /Л.Т. Сухенкои др.. //Материалы III Всерос. науч. конф. Астрахань: Изд-во АГПУ, 2000. - С. 7679.

252. Сухенко, Л.Т. Эколого-микробиологические исследования бактерицидных свойств некоторых растений Астраханской флоры /Л.Т. Сухенко, Г.Н. Генатуллина, Н.В. Бовин, М.В. Белякова //Материалы VI Всерос. науч. конф. Астрахань: Изд-во АГУ, 2003. - С. 153-156.

253. Сухенко, Л.Т., Ноздрачев В.Я., Пилипенко В.Н. Изучение антимикробных свойств некоторых растений Астраханской флоры // Журнал Естественные науки №3, Астрахань, 2001, с. 83-86.

254. Сухинина, Т.В., Петриченко В.М., Бабиян Л.К. и др. Технология получения водных извлечений из травы очанки // Фармация. 2006. - № 5. - С. 30-32.

255. Taxa, T.B. 1062. К вопросу о сухой и чувствительной коже . Косметология. Copyright "РМЖ (Русский Медицинский Журнал)", 2009. № 171058.

256. Taxa, Т.В., Нажмутдинова Д.К. Использование антимикотических препаратов в лечении отрубевидного лишая. Косметология. Copyright "РМЖ (Русский Медицинский Журнал)", 2009, № 171058.

257. Тепкеева, И.И., Моисеева Е.В., Чаадаева A.B., Жаворонкова Е.В., Кесслер Ю.В., Семушина С.Г., Демушкин В.П /Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.2008. Том 145. - № 4. - С - 446-449.

258. Тереньнтьева, C.B., Краснов Е.А. Кумарины и флавоноиды надземной части Carduus crispus L. С. Nutans L. Растительные ресурсы -Т.39.-Вып. 1.-2003.- С. 55-64.

259. Тихомирова, Е.И. Лектин вакцинного штамма Yersinia pestis EV и изучение его иммунобиологических свойств /Е.И.Тихомирова, С.П. Заднова, О.А.Волох, Л.В. Карпунина, A.A. Щербаков //Микробиология. 2003 - №1- С. 51-55.

260. Ткаченко, К.Г. Эфирные масла из плодов видов Heracleum L., выращенных в Ленинградской области /К.Г.Ткаченко //Растительные ресурсы.- 1987. Т. 23, Вып. 3. - С. 429-435.

261. Триль, В.М., Гранкина В.П. Фитоценотические особенности и запасы сырья Glycyrrhiza uralensis Fisch. В Новосибирской области //Раст. Ресурсы. 1986. -Т. 22. -Вып. 4. С. 492-497.

262. Тырков, А.Г., Сухенко Л.Т.Синтез и изучение антимикробной активности 3- замещенных 3-арил-5-нитрометил-1,2,4-оксадиазолов Химико-фарм.жур., 2002, Т. 37. Вып. 1. - С. 14-15.

263. Убайдуллаев, A.M., Ташпулатова Ф.К. Фитотерапия в комплексной терапии туберкулеза легких // Пробл. туберкулеза и болезней легких. 2008. -№ 5. - С. 3-6.

264. Устюжанин, А. А., Коновалов Д. А., Шреттер А. И., Коновалова О.

265. A., Рыбалко К. С. Содержание хамазуленов L.S.L. в Европейской части СССР. Растительные ресурсы. Вып.З. - 1987. - С.424-435.

266. Устюжанин, A.A. Содержание хамазуленов в Achillea millefolium L. S.l. в Европейской части СССР /A.A. Устюжанин, Д.А.Коновалов, А.И.Шретер, О.А.Коновалова, К.С. Рыбалко //Растительные ресурсы. 1987. - Т. 23, Вып. 3.- С. 424^429.

267. Шакирова, Ф. М., Безрукова М. В. Современные представления о предполагаемых функциях лектинов растений //Журнал общей биологии. Том 68, 2007. № 2, Март-Апрель. С.109-125.

268. Феденко, B.C., Винниченко А.Н., Шенкаренко И.В., Сыроватко

269. B.А. Спектрофометрическое определение концентрации балка в растворах. Биологические науки , №4 -1989. -С. 108-112

270. Федосеева, Л.М. Расчет эффективности процесса экстракции бурых листьев бадана толстолистного //Химия растительного сырья. 2000. -№1. -С. 117-119.

271. Ханина, М. А., Серых Е. А., Березовская Т. П., Хан В. А. Сесквитерпеноиды эфирного масла Artemisia Jacutica Drob. Растительные ресурсы, вып. 3. -1991. С. 90-91.

272. Цембалару, Г.Г. Электронно-микроскопическое исследование изменений морфологической структуры микобактерий туберкулеза, возникающих под влиянием антибактериальной терапии/Г.Г. Цембалару //Проб, туберкулеза. 1967. -№ 1. - 61-66.

273. Шакирова, Ф. М., Сахабутдинова А. Р. Сигнальная регуляция устойчивости растений к патогенам. Успехи современной биологии, Том 123— №> 6 -2003 С. 563-572.

274. Шапошников, А. А., Хорошевский А. Ю. Изофлавоноиды растений семейства бобовых и их биологическое действие. Успехи современной биологии, Том 123. -№ 1- 2003. - С76-81.

275. Шатров, В.А., Кузнецова Л.В., Беляновская Т.И. Оценка функционального состояния моноцитов периферической крови у больных туберкулезом легких // Ж. микробиол. 1985. - №5. - С. 76-78.

276. Шаяхметов, И.Ф. Роль лектина пшеницы и абсцизовой кислоты в регенерации растений. Успехи современной биологии, 2004. Том 124. - № 6. -С. 602-611.

277. Шрам, Н.И., Бабиян Л.К., Петриченко В.М. Экспериментальное обоснование

278. Юдина, В. Ф., Дьячкова Т. Ю., Бразовская Т. И., Максимова Т. А. Восстановление ценопопуляций Comarum Palustre L. после заготовки надземной части. Растительные ресурсы. Вып. 3. 1998. - С. 51-55.

279. Юдина, В.Ф. Восстановление ценопопуляций Comarum palustre L. после заготовки надземной части /В.Ф. Юдина, Т.Ю. Дьячкова, Т.И.Бразовская, Т.А. Максимова //Растительные ресурсы. 1998. - Вып.З. - С. 51-55.

280. Юдина, В.Ф., ДьячковаТ.Ю., БразовскаяТ.И., МаксимоваТ.А. Восстановление ценопопуляций Comarum palustre L. после заготовкинадземной части //Растительные ресурсы. Вып.З. -1998. С.51-55.

281. Юцковская, Я.А., Тарасенкова М.С., Маслова Е.В. /Домашний уход за проблемной кожей с использованием препарата VICHY NORMADERM «Увлажняющее корректирующее средство для проблемной кожи». 407 «Русского Медицинского Журнала» РМЖ, 2011.- Том 19.

282. Юшин, М.Ю. Биохимическое и электронно- цитохимическое изучение ДОФА-оксидазной активности у M.lufu /М.Ю. Юшин, А.К. Маслов, В.А. Бочановский, М.Н. Михайлова //Тез. докл. итог. науч. конф. АГПУ -Астрахань: Изд-во АГПУ, 1997. С. 26-26.

283. Ярыгин, К.Н., Бурунова В.В., Ступин В.А., Смирнова Г.О., Мантурова Н.Е., Ставицкая Г.В. / Клеточные технологии в ревитализации кожи лица. Косметология. Copyright "РМЖ (Русский Медицинский Журнал)". -2009.-№ 171058.1. Диссертации

284. Адгина, В.В. Химиотерапевтическое изучение Сангвиритрина при некоторых экспериментальных микозах./ Дисс.канд.биол. наук М.-1974-134с.

285. Бортникова, В.В Сравнительная токсикологическая характеристика и новые фармакологические свойства антимикробных и противовирусных препаратов растительного происхождения //Автореф. дис. канд. биол.наук -Купавна, 1988.

286. Вичканова, С.А. Ингибиторы микроорганизмов вреди природных веществ растительного происхождения М., 1981. //Автореф.дисс.докт. М.,1981 -48с.

287. Корсун Е.В. Обоснование возможности применения растительных лектинов при некоторых вирусных инфекциях: Дисс. .канд. мед. наук. М., 2004.

288. Назарова Г.Н. Влияние биологически активных клеточных компонентов растений на структурные изменения бактериальных клеток: Автореф. дис. канд. биол. наук. Астрахань, 2009.

289. Резенькова О. В. Изучение влияния экстракта солодки голой напроцессы адаптации организма. Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук, Ставрополь 2003.

290. Ющенко, А.А. Материалы электронномикроскопического изучения микобактерий лепры человека и некоторых других микобактерий: автореф. дис. канд. мед. наук : защищена 14.05.70. утв. 17.07.70. /А.А.Ющенко. -М.:, 1970. -26 с.1. Патентные документы

291. А.с. №230387 Вичканова, С.А., Ростоцкий Б.К. с соавт. «Лекарственное средство».- (СССР) Изобретения-1968 - №34.

292. Патент № 2105352. Способ моделирования дефекта макрофагов/ Маслов А.К.// Открытия. Изобретения. 1998. - №5.

293. Пат. № 2008130975 от 2009.04.24. Сухенко Л.Т., Касаткина Н.В., Егоров М.А., Сухенко О.В. Фитобальзам «ИНСОФИТ» для регенерации кожи.

294. Пат.№ 11857313 Сухенко Л.Т., Назарова Г.Н., Урляпова Н.Г. Экстракты солодки голой, обладающий противотуберкулезной активностью инд А61К36/00 Открытия. Изобретения, 2009.1. ИНОСТРАННЫЕ ИСТОЧНИКИ

295. Baumann С., Rudiger Н., Strosberg A.D. A comparison of the two lectins from Vicia cracca IIFEBS Lett. 1979. V. 102. - P. 216-218.

296. Elgavish S., Shaanan B. Chemical characteristics of dimmer interfaces in the legume lectin family //Protein Science. 2001. V. 10. - P. 753-761.

297. Goldstein I., Hayes С, в сб.: Advances in carbohydrate chemistry and biochemistry, v. 35, N.Y., 1978, p. 127-340.

298. Komath S. S., Kavitha, M., Swamy, M. J. Organic and Biomolecular Chemistry, vol. 4. — 2006. — P. 973-988

299. L.T. Sukhenko. Immunogenetic Elisa Tects of Leorosy. International J.Leprosy: 1989r.

300. L.T. Sykhenko.Use of artificial antigens wits M.Leprae- PG L-l propertiess for the studies in leprosy. International J.Leprosy, 1998, V.57, N1.

301. Laboratory techniques for leprosy Geneva, 1987Nicolson G., Irimura Т., «Biology of the Cell», 1984, v. 51, p. 157-64. M. Д. Луцик. http ://courses. cm.utexas .edu

302. Nishiguchi M., Yoshida K., Sumizono Т., Tazaki K. Studies by sitedirected mutagenesis of the carbohydrate-binding properties of a bark lectin from

303. Robinia pseudoacacia II Febs Lett. 1997. V. 403. - P. 294-298.

304. Paniwnyk L, Beaufoy E, Lorimer JP, Mason TJ. The extraction of rutin from flower buds of Sophorajaponica. -UltrasonSonochem. 2001 Jul;8(3):299-301.

305. Peumans W.J., Barre A., Hao Q., Rouge P., van Damme, Els J.M. Higher Plants Developed Structurally Different Motifs to Recognize Foreign Glycans // Trends in Glycoscience and Glycotechnology. 2000. V. 12, № 64. - P. 83-101.

306. Peumans W.J., Barre A., Hao Q., Rouge P., van Damme, Els J.M. Higher Plants Developed Structurally Different Motifs to Recognize Foreign Glycans // Trends in Glycoscience and Glycotechnology. 2000. V. 12, № 64. - P. 83-101.

307. Peumans W.J., van Damme E.J.M. Lectins as Plant Defense Proteins // Plant Physiol. 1995.-V. 109.-15.

308. Peumans W.J., van Damme E.J.M. Lectins as Plant Defense Proteins // Plant Physiol. 1995,- V. 109. P. 347-352.

309. Pietta P, Mauri P. Analysis of flavonoids in medicinal plants. -Methods Enzymol. 2001;335:26-45.

310. Sharma V., Surolia A. Analyses of carbohydrate recognition by legume lectins: size 9 of the combining site loops and their primary specificity // J. Mol. Biol. 1997.-V. 267.-P. 433-445.

311. Sharon N. Lectin-carbohydrate complexes of plants and animals: an atomic view // Trends Biochem. Sei. 1993. V. 18. - P. 221-226.

312. Sharon N., Lis H. Legume lectins a large family of homologous proteins // Faseb J.- 1990.-V. 4.-P. 3198-3208.

313. Shepard C.C. // J. Exp. Med.- I960.- Vol. 112.- P. 445-454.

314. Shepard C.C., McRae D. // Int. J. Leprosy.- 1968.- Vol. 36.- P. 78-82.

315. Shepard C.C., McRae D.H. A method for counting acid-fast bacteria // Int. J. Lepr. 1968. - Vol. 36. - P. 78-82

316. Shu YY, Lai TL, Lin HS, Yang TC, Chang CP. Study of factors affecting on the extraction efficiency of polycyclic aromatic hydrocarbons from soils using open-vessel focused microwave-assisted extraction. -Chemosphere. 2003 Sep;52( 10): 1667-76.

317. Truchet G, Rosenberg C, Vasse J, Julliot JS, Camut S, Denarie J. Transfer of Rhizobium meliloti pSym genes into Agrobacterium tumefaciens: host-specific nodulation by atypical infection // J Bacteriol. 1984. V. 157, № 1. - P. 13442.

318. Александр Марков Лектины заменяют растениям иммунную систему (сайт http://courses.cm.utexas.edu)

319. Agradi Е., Vegeto Е., Sozzi A., Fico G.,Regondi S., Tome A. Traditional healthy Mediterranean diet: Estrogenic activity of plants used as food and flavoring agents. Phytother . 2006. Res 20: 670-75.

320. Al-Qarawi AA, Abdel-Rahman HA, Ali BH, El Mougy SA. Liquorice (Glycyrrhiza glabra) and the adrenal-kidney-pituitary ais in rats. Foof Chem Toxicol 2002.40: 1525-27.

321. Arias C, Buchwald-Werner S, Rull PS, Fabry B. Use of compositions comprising glycyrrhetinic acid and benzoyl peroxide for acne treatment. 2004. EP 1382341 A120040121.

322. Azimov MM, Zakirov UB, Radzhapova Sh D. Pharmacological study of the anti-inflammatory agent glyderinine. Farmkol Toksikol. 1988.51: 90-93.

323. Barry B.W. 2004 Breaching the skin's barrier to drugs. Nature Biotechnology -V.22.-p.165 -167.

324. Giacomoni P.U., Rein g 2001 Factors of skin ageing share common mechanisms. Biogerontology -v.2.-p.219-220.

325. Cartier A, Malo JL, Labrecque M. / Occupational astma due to liquorice roots. Allergy 2002. 57: 863/

326. Chin YW, Jung HA, Lin Y, Su BN, Castoro JA, Keller WJ, Pereira MA, kinghorn AD. Anti-oxidant constituents of the roots and stolons of licorice (Glycyrrhiza glabra). J.Agric Food Chem. 2007. 55:4691-97.

327. Crance JM, Scaramozzino N, Jouan A, Garin D. Interferon, ribavirin, 6-azauridine and glycyrrhizin:Antiviral compounds active againstpathogenic flaviviruses. Antiviral Res. 2003.58: 73-79.

328. Dehpour AR, Zolfaghari ME, Samadian T, Vahedi Y. The protective effect of liquorice components and their derivatives against gastric ulcer induced by aspirin in rats. J. Pharm Pharmacol. 1994.46: 148-49.

329. Denisova SB, Danilov VT, Yunusova SG, Davydova VA, Murinov YI, Zarudii FS. Isolation and biological activity of lipids from licorice (Glycyrrhiza glabra) roots. J. Pharm Chem. 2007. 41: 489-91.

330. Denisova SB, Galkin EG,Murinov YI. Isolation and GC-MS determination of flavonoids from Glycyrrhiza glabra root. Chem Nat Compouds. 2006. 42:285-89.

331. Dhingra D, Parle M. Kulkarni SK. Memory enhancing activity of Glycyrrhiza glabra in mice. Ethnopharmacol. 2004. 91:361-65.

332. Farese RV Jr. Biglieri EG, Shackleton CH, Irony I, Gomez-Fontes R. Licorice induced hypermineralocorticoidism. N Engl Jmed . 1991. 325: 1223-27.

333. Ishii Y, Fujii Y. 1982. Effekts of FM100, a fraction of licorice root, on serum gastrin concentration in rats and dogs. Jpn J Pharmacol 32:23-27.

334. Kim HK, Park Y, Kim HN, Choi BH, Jeong HG, Lee DG, Hahm KS.2002. Antimicrobial mechanism of beta-glycyrrhetinic acid isolated from licorice, Glycyrrhiza glabra. Biotechnol Lett 24: 1899-902.

335. Morteza-Semnani K. Saeedi M, Shahnavaz B 2003. Comparison of antioxidant activity of extract from roots of licorice (Glycyrrhiza glabra L.) to commercial antioxidant in 2% hydroquinone cream. J Cosmetic Sci 54: 551-58.

336. Naf R, Jaquier A. 2006 New lactones in liquorice (Glycyrrhiza glabra L.). Flavour Fragrance J 21:193-97.

337. Jerry W. King, Peoria, IL (US); Richard D. Grabiel, Decatur, IL (US). /Isjlation of Polyphenolic Compounds from Fruits or Vegetables Utilizing Sub-Critical Water Extraction. Patent № US 7,208,181 Bl, date jf Patent Apr. 24,2007.

338. Concha Real, Maria D. Alcala. And Jose M. Criado. / Preparation of Silica from Rice Husks. J. Am. Ceram. Soc., 79 8. 2012-16 (1996)

339. Science Publishers, Amsterdam, 2002, pp. 741.

340. K.R. Markham, /Techniques of flavonoid identification. Academic press, London, UK, 1982.

341. Kamaljit Vilkhu a,D, Raymond Mawson a, Lloyd Simons a, Darren Bates b /Applications and opportunities for ultrasound assisted extraction in the foodindustiy — A review. Innovative Food Science and Emerging Technologies 9 (2008) 161-169.

342. Somayeh Daneshvar Hosseini a, Feridoun Salak Asghari b, Hiroyuki Yoshida a,b,*/ Decomposition and decoloration of synthetic dyes using hot/liquid (subcritical) water. 44 (2010) 190 0 1908.

343. Slokar, Y.M., Marcechal, A.M.L.,/ Methods of decoloration of textile wastewaters. Dyes and Pigments 1998. 37 (4), 335-356.

344. Sun, J.H., Sun, S.P., Sun, J.Y, Sun, R.X., Qiao, L.P., Guo, H.Q.,Fan, M.H., /Degradation of azo dye acid black 1 using low concentration iron of Fenton process facilitated by ultrasonic irradiation. Ultrasonics Sonochemistry 2007., 14 (6), 761-766.

345. DIRECTIVE 98/44/EC OF THE EUROPEAN PARLIAMENT AND OF THE COUNCIL. Official Journal of the European Communities. 1998, L 213/13.

346. Fuzzati N, Griffini A., Pace R., Peterlongo F, Ruffilli T, The 38th Annual Meeting of American Society of Pharmacognosy, Iowa City, July 26-30, 1997.

347. Maffei Facino R., Carini M., Aldini G., Berti F., Rossoni G., Bombardelli E., Morazzoni P., Planta Medico. 62, 495 (1996).

348. Tanja, K., Yness, M.S., Alenka Majcen, L.M., Darinka, B.V.,/The use of experimental design for the evaluation of the influence of variables on the H202/UV treatment of model textile waste water. Dye and Pigments 58 (2), 2003, 171-178.

349. Yoshida, H., Kataoka, T., Maekawa, M., Nango, M., 1989. /Surface diffusion of direct dyes in porous cellulose membranes. Chemical Engineering Journal 41, B1-B9.

350. Yoshida, H., Kataoka, T., Nango, M., Ohta, S., Kuroki, N.,Maekawa, M., Transport of direct dye into cellulose membrane. 1986. Journal of Applied Polymer Science 32, 4185-4196.

351. Yoshida, H., Takemori, T.,./ Adsorption of direct dye on crosslinked chitosan fiber: reakthrough curve. Water Science and Technology 1997, 35 (7), 2937.

352. Yu, Y., Hildebrand, F.,. Phenanthrene degradation in subcritical water. Analytica Chimica Acta, 2006, 555, 364.

353. Giancarlo Cravotto a,*, Luisa Boffa a, Stefano Mantegna a, Patrizia Perego b, Milvio Avogadro b, Pedro Cintas c,* Improved extraction of vegetable oils under high-intensity ultrasound and/or microwaves. Ultrasonics Sonochemistiy 15 (2008)898-902.

354. Lijun Wang*and Curtis L. Weller/ Recent advances in extraction of nutraceuticals from plants. Trends in Food Science & Technology 17 (2006) 300312.

355. N. V. Bovin .Polyacrylamide-based Glycoconjugates as Tools for Studying Lectins, Antigens, and Glycosyltransferases in Glycobiology, Cytochemistry, and Histochemistry (Review) .Russian Journal of Bioorganic Chemistry, Vol. 22, No. 9, 1996, p. 547.

356. Al-Harahsheh, M., & Kingman, S. W. (2004). Microwave-assisted leaching—A review. Hydrometallurgy, 73, 189-203.

357. Andras, C. D., Simandi, B., Orsi, F., Lambrou, C., Missopolinou-Tatala, D., Panayiotou, C., et al. (2005). Supercritical carbon dioxide extraction of okra (Hibiscus esculentus L) seeds. Journal of the Science of Food and Agriculture, 85, 1415-1419.

358. Berna, A., Tarrega, A., Blasco, M., & Subirats, S. (2000). Supercritical C02 extraction of essential oil from orange peel: Effect of the height of the bed. Journal of Supercritical Fluids, 18, 227-237.

359. Bernardo-Gil, M. G., Grenha, J., Santos, J., & Cardoso, P. (2002). Supercritical fluid extraction and characterization of oil from hazelnut. European Journal of Lipid Science and Technology, 104,402-409.

360. Brachet, A., Christen, P., & Veuthey, J. L. (2002). Focused icrowave-assisted extraction of cocaine and benzoylecgonine from coca leaves. Phytochemical Analysis, 13, 162-169.

361. Brachet, A., Rudaz, S., Mateus, L., Christen, P., & Veuthey, J. (2001). Optimisation of accelerated solvent extraction of cocaine and benzoylecgonine from coca leaves. Journal of Separation Science, 24, 865-873.

362. Bruni, R., Guerrini, A., Scalia, S., Romagnoli, C., & Sacchetti, G.2002). Rapid techniques for the extraction of vitamin E isomers from Amaranthus caudatus seeds: Ultrasonic and supercritical fluid extraction. Phytochemical Analysis, 13,257-261.

363. Chemat, S., Lagha, A., AitAmar, H., Bartels, P. V., & Chemat, F. (2004). Comparison of conventional and ultrasound-assisted extraction of carvone and limonene from caraway seeds. Flavour and Fragrance Journal, 19, 188-195.

364. Coelho, J. A. P., Pereira, A. P., Mendes, R. L., & Palavra, A. M. F.2003). Supercritical carbon dioxide extraction of Foeniculum vulgare volatile oil. Flavour and Fragrance Journal, 18,316-319.

365. Cravotto, G., Binello, A., Merizzi, G., & Avogadro, M. (2004). Improving solvent-free extraction of policosanol from rice bran by high-intensityultrasound treatment. European Journal of Lipid Science and Technology, 106, 147— 151.

366. Csiktusnadi Kiss, G. A., Forgacs, E. F., Cserhati, T., Mota, T., Morais, H., & Ramos, A. (2000). Optimisation of the microwave-assisted extraction of pigments from paprika (Capsicum annuum L.) powders. Journal of Chromatography A, 889, 41-49.

367. Dean, J. R., & Liu, B. (2000). Supercritical fluid extraction of Chinese herbal medicines: Investigation of extraction kinetics. Phytochemical Analysis, 11,16.

368. El-Ghorab, A., Mansour, A. F, & El-massry, K. F. (2004). Effect of extraction methods on the chemical composition and antioxidant activity of Egyptian marjoram (Majorana hortensis Moench). Flavour and Fragrance Journal, 19, 54-61.

369. Eller, F. J., & King, J. W. (2000). Supercritical carbon dioxide extraction of cedarwood oil: A study of extraction parameters and oil characteristics. Phytochemical Analysis, 11, 226-231.

370. Ellington, E., Bastida, J., Viladomat, F., & Codina, C. (2003). Supercritical carbon dioxide extraction of colchicines and related alkaloids from seeds of Colchicum autumnale L. Phytochemical Analysis, 164, 169.

371. Ericsson, M., & Colmsjo, A. (2000). Dynamic microwave-assisted extraction. Journal of Chromatography A, 877, 141-151.

372. Eskilsson, C. S., Hartonen, K., Mathiasson, L., & Riekkola, M. L. (2004). Pressurized hot water extraction of insecticides from process dust— Comparison with supercritical fluid extraction. Journal of Separation Science, 27, 5964.

373. Ganzler, K., Salgo, A., & Valko, K. (1986). Microwave extraction. A novel sample preparation method for chromatography. Journal of Chromatography A, 371,299-306.

374. Giannuzzo, A. N., Boggetti, H. J., Nazareno, M. A., & Mishima, H. T. (2003). Supercritical fluid extraction of naringin from the peel of citrus paradise. Phytochemical Analysis, 14, 221-223.

375. Guo, Z., Jin, Q., Fan, G., Duan, Y., Qin, C., & Wen, M. (2001). Microwave-assisted extraction of effective constituents from a Chinese herbal medicine Radix puerariae. Analytica Chimica Acta, 436, 41-47.

376. Hamburger, M., Baumann, D., & Adler, S. (2004). Supercritical carbon dioxide extraction of selected medicinal plants—Effects of high pressure and added ethanol on yield of extracted substances. Phytochemical Analysis, 15,46-54.

377. Hanmoungjai, P., Pyle, L., & Niranjan, K. (2000). Extraction of rice bran oil using aqueous media. Journal of Chemical Technology and Biotechnology, 75, 348-352.

378. Hao, J. Y., Han, W., Huang, S. D., Xue, B. Y., & Deng, X. (2002). Microwave-assisted extraction of artemisinin from Artemisia annua L. Separation and Purification Technology, 28, 191- 196.

379. Hauthal, W. H. (2001). Advances with supercritical fluids review. Chemosphere, 43, 123-135.

380. Hui, L., Etsuzo, O., & Masao, I. (1994). Effects of ultrasound on the extraction of saponin from ginseng. Japanese Journal of Applied Physics, 33(5B), 3085-3087.

381. Hurren, D. (1999). Supercritical fluid extraction with C02. Filtration and Separation, 36, 25-27.

382. Kaufmann, B., & Christen, P. (2002). Recent extraction techniques for natural products: Microwave-assisted extraction and pressurized solvent extraction. Phytochemical Analysis, 13, 105-113.

383. Kaufmann, B., Christen, P., & Veuthey, J. L. (2001a). Parameters affecting microwave-assisted extraction of withanolides. Phytochemical Analysis, 12, 327-331.

384. Kaufmann, B., Christen, P., & Veuthey, J. L. (2001b). Study of factors influencing pressurized solvent extraction of polar steroids from plant material. Chromatographia, 54, 394-398.

385. Komath S. S., Kavitha, M., Swamy, M. J. Organic and Biomolecular Chemistry, vol. 4. — 2006. — P. 973-988

386. Kratchanova, M., Pavlova, E., & Panchev, I. (2004). The effect of microwave heating of fresh orange peels on the fruit tissue and quality of extracted pectin. Carbohydrate Polymers, 56, 181- 186.

387. Kwon, J. H., Belanger, J. M. R., Jocelyn Pare, J. R., & Yaylayan, V. A. (2003). Application of microwave-assisted process (MAP TM) to the fast extraction of Ginseng saponins. Food Research International, 36, 491^198.

388. Lang, Q., & Wai, C. M. (2001). Supercritical fluid extraction in herbal and natural product studies—A practical review. Talanta, 53, 771-782.

389. Li, H., Pordesimo, L., & Weiss, J. (2004). High intensity ultrasoundassisted extraction of oil from soybeans. Food Research International, 37, 731-738.

390. Lorenzo, R. A., Vazquez, M. J., Carro, A. M., & Cela, R. (1999). Methylmercury extraction from aquatic sediments. Trends in Analytical Chemistry, 18,410-416.

391. Luengthanaphol, S., Mongkholkhajornsilp, D., Douglas, S., Douglas, P. L., Pengsopa, L., & Pongamphai, S. (2004). Extraction of antioxidants from sweet Thai tamarind seed coat—Preliminary experiments. Journal of Food Engineering, 63, 247-252.

392. Luque de Castro, M. D., & Garcia-Ayuso, L. E. (1998). Soxhlet extraction of solid materials: An outdated technique with a promising innovative future. Analytica Chimica Acta, 369, 1-10.

393. Luque-Garcia, J. L., & Luque de Castro, M. D. (2003). Ultrasound: A powerful tool for leaching. Trends in Analytical Chemistry, 22, 41-47.

394. Mamidipally, P. K., & Liu, S. X. (2004). First approach on rice bran oil extraction using limonene. European Journal of Lipid Science and Technology, 106, 122-125.

395. Marr, R., & Gamse, T. (2000). Use of supercritical fluids for different processes including new developments—A review. Chemical Engineering and Processing, 39, 19-28.

396. L. Wang, C.L. Weller / Trends in Food Science & Technology 17 (2006) 300-312 311.

397. Mason, T. J., Paniwnyk, L., & Lorimer, J. P. (1996). The uses of ultrasound in food technology. Ultrasonics Sonochemistry, 3, 253-260.

398. Meireles, A., & Angela, M. (2003). Supercritical extraction from solid: Process design data (2001-2003). Current Opinion in Solid State and Materials Science, 7, 321-330.

399. Melecchi, M. I. S., Martinez, M. M., Abad, F. C., Zini, P. P., Filho, I. N., & Caramao, E. B. (2002). Chemical composition of Hibiscus tiliaceus L. flowers: A study of extraction methods. Journal of Separation Science, 25, 86-90.

400. Modey, W. K., Mulholland, D. A., & Raynor, M. W. (1996). Analytical supercritical fluid extraction of natural products. Phytochemical Analysis, 7, 1-15.

401. Pan, X., Liu, H., Jia, G., & Shu, Y. Y. (2000). Microwave-assisted extraction of glycyrrhizic acid from licorice root. Biochemical Engineering Journal, 5, 173-177.

402. Pan, X., Niu, G., & Liu, H. (2002). Comparison of microwaveassisted extraction and conventional extraction techniques for he extraction of tanshinones from Salvia miltiorrhiza bunge. Biochemical Engineering Journal, 12, 71-77.

403. Pan, X., Niu, G., & Liu, H. (2003). Microwave-assisted extraction of tea polyphenols and tea caffeine from green tea leaves. Chemical Engineering and Processing, 42, 129-133.

404. Poiana, M., Fresa, R., & Mincione, B. (1999). Supercritical carbon dioxide extraction of bergamot peels. Extraction kinetics of oil and its components. Flavour and Fragrance Journal, 14, 358- 366.

405. Poiana, M., Sicari, V., & Mincione, B. (1998). Supercritical carbon dioxide (SC-C02) extraction of grape finit flavedo. Flavour and Fragrance Journal, 13, 125-130.

406. Richter, B. E., Jones, B. A., Ezzell, J. L., Porter, N. L., Avdalovic, N., & Pohl, C. (1996). Accelerated solvent extraction: A technology for sample preparation. Analytical Chemistry, 68, 1033-1039.

407. Romdhane, M., Gourdon, C., & Casamatta, G. (1995). Local investigation of some ultrasonic devices by means of a thermal sensor. Ultrasonics, 33, 221-227.

408. Roy, B. C., Goto, M., Kodama, A., & Hirose, T. (1996). Supercritical C02 extraction of essential oils and cuticular waxes from peppermint leaves. Journal of Chemical Technology and Biotechnology, 67, 21-26.

409. Salisova, M., Toma, S., & Mason, T. J. (1997). Comparison of conventional and ultrasonically assisted extractions of pharmaceutically active compounds from Salvia officinalis. Ultrasonics Sonochemistry, 4, 131-134.

410. Sass-Kiss, A., Simandi, B., Gao, Y., Boross, F., & Vamos-Falusi, Z. (1998). Study on the pilot-scale extraction of onion oleoresin using supercritical C02. Journal of the Science of Food and Agriculture, 76, 320-326.

411. Schinor, E. C., Salvador, M. J., Turatti, I. C. C., Zucchi, O. L. A. D., & Dias, D. A. (2004). Comparison of classical and ultrasoundassisted extractions of steroids and triterpenoids from three Chresta spp. Ultrasonics Sonochemistry, 11, 415—421.

412. Sharma, A., & Gupta, M. N. (2004), Oil extraction from almond, apricot and rice bran by three-phase partitioning after ultrasonication. European Journal of Lipid Science and Technology, 106, 183-186.

413. Shu, Y. Y., Ko, M. Y., & Chang, Y. S. (2003). Microwave-assisted extraction of ginsenosides from ginseng root. Microchemical Journal, 74, 131-139.

414. Sihvonen, M., Jarvenpaa, E., Hietaniemi, V., & Huopalahti, R. (1999). Advances in supercritical carbon dioxide technologies. Trends in Food Science and Technology, 10, 217-222.

415. Smith, R. M. (2002). Extractions with superheated water. Journal of Chromatography A, 975, 31—46.

416. Spar Eskilsson, S., & Bjorklund, E. (2000). Analytical-scale microwave-assisted extraction. Journal of Chromatography A, 902, 227-250.

417. Spar Eskilsson, S., Bjorklund, E., Mathiasson, L., Karlsson, L., & Torstensson, A. (1999). Microwave-assisted extraction of felodipine tablets. Journal of Chromatography A, 840, 59-70.

418. Szentmihalyi, K., Vinkler, P., Lakatos, B., Illes, V., & Then, M. (2002). Rose hip (Rosa canina L.) oil obtained from waste hip seeds by different extraction methods. Bioresource Technology, 82, 195-201.

419. Toma, M., Vinatoru, M., Paniwnyk, L., & Mason, T. J. (2001). Investigation of the effects of ultrasound on vegetal tissues during solvent extraction. Ultrasonics Sonochemistry, 8, 137-142.

420. Tomaniova, M., Hajslova, J., PavelkaJr, J., Kocourek, V., Holadova, K., & Klimova, I. (1998). Microwave-assisted solvent extraction— A new method for isolation of polynuclear aromatic hydrocarbons from plants. Journal of Chromatography A, 827, 21-29.

421. Turner, C., King, J. W., & Mathiasson, L. (2001). Supercritical fluid extraction and chromatography for fat-soluble vitamin analysis. Journal of Chromatography A, 936, 215-237.

422. Vilegas, J. H. Y., de Marchi, E, & Lancas, F. M. (1997). Extraction of low-polarity compounds (with emphasis on coumarin and kaurenoic acid) from Mikania glomerata ('Guaco') leaves. Phytochemical Analysis, 8, 266-270.

423. Vinatoru, M. (2001). An overview of the ultrasonically assisted extraction of bioactive principles from herbs. Ultrasonics Sonochemistry, 8, 303-313.

424. Vinatoru, M., Toma, M., & Mason, T. J. (1999). Ultrasound-assisted extraction of bioactive principles from plants and their constituents. Advances in Sonochemistry, 5, 209-247.

425. Vinatoru, M., Toma, M., Radu, O., Filip, P. I., Lazurca, D., & Mason, T. J. (1997). The use of ultrasound for the extraction of bioactive principles from plant materials. Ultrasonics Sonochemistry, 4, 135-139.

426. Williams, O. J., Raghavan, G. S. V., Orsat, V., & Dai, J. (2004). Microwave-assisted extraction of capsaicinoids from capsicum fruit. Journal of Food Biochemistry, 28, 113-122.

427. Wu, J., Lin, L., & Chau, F. (2001). Ultrasound-assisted extraction of ginseng saponins from ginseng roots and cultured ginseng cells. Ultrasonics Sonochemistry, 8, 347-352.

428. Zarnowski, R., & Suzuki, Y. (2004). Expedient Soxhlet extraction of resorcinolic lipids from wheat grains. Journal of Food Composition and Analysis, 17, 649-664.

429. Lijun Wang*and Curtis L. Weller /Recent advances in extraction of nutraceuticals from plants. Trends in Food Science & Technology 17 (2006) 300312.

430. Dr. Dennis J. Culver /Bio-Digestion of Rice Straw as an alternative to burning http://www.agro-k.eom/research/agronomy/91 -001 .htm 28/04/2006.

431. M.J. Lerma-GarcHa a, J.M. Herrero-MartHnez a, E.F. Simy-Alfonso a, Carla R.B. Mendoma b, G. Ramis-Ramos a,*Composition, industrial processing and applications of rice bran c-oryzanol Food Chemistry 115 (2009) 389-404.

432. Drozd J., Anuszewska E. The influence of plant raw materials, containing ellagic acid and selected antibiotics on immunological response in mice.// Acta Pol. Pharm-2005 Vol. 62, N 3.- P. 237-240.

433. Fritz W. R., Fintelmann V. //Herbal Medicine, Thieme Medical Publishers; 2 edition. -2000,-P. 40-46.

434. Kim H.M., Lee E.H., Shin T.Y. et al. Taraxacum officinale restores inhibition of nitric oxide production by cadmium in mouse peritoneal macrophages.// Immunopharmacol. Immunotoxicol-1998. -N2. -P. 283-297.

435. Luo Z. The use of Chinese traditional medicines to improve impaired immune functions in scald mice.// Zhonghua Zheng Xing Shao Shang Wai Ke Za Zhi.-1993.-Nl.-P. 56-58.

436. Monte F.H.M.; Santos Junior J.G.; Russi M . et al. Antinociceptive and anti-inflammatory properties of the hydroalcoholic extract of stems from Equisetum arvense L. in mice.//Pharmacological Research-2004, Vol. 49.-N 3. -P. 239-243.

437. Nahrstedt A, Vetter U, Hammerschmidt F.J. Composition of the Steam Distillation Product from the Leaves of Juglans regia.// Planta Med.-1981- Vol. 42-N8.-P. 313-332.

438. Nieman D.C., Henson D.A., Gross S.J., Quercetin reduces illness but not immune perturbations after intensive exercise.// Med. Sci.Sports Exerc-2007 Vol. 39.-N 9.-P. 1561-1569.

439. Nosal'ova G. Antitussive efficacy of the complex extract and the polysaccharide of marshmallow (Althaea officinalis L. var. Robusta).// Pharmazie-1992.-N47.-P. 224-226.

440. Karande P.,Jain A., Mitragotri S.2004 Discovery of transdermal penetration enhancers by high-throughput screening/ Nature Biotechnology -v.22. p. 192-197.

441. Barry B.W. 2004 Breaching the skin's barrier to drugs. Nature Biotechnology .-V.22.-p. 165-167.

442. Giacomoni P.U., Rein g 2001 Factors of skin ageing share common mechanisms. Biogerontology -v.2.-p.219-220.

443. Morgan T.M., Finnin B.C. 1999. Transdermal penetration enhancers: applications, limitations, and potentional. J of Pharmaceutical Sciences.-v.88.-p.955-958.

444. Austria R., Bettero A., Semenzato A. 1997.Stability of vitamin С derivatives in solution and topical formulations. J of Pharmaceutical Biomedical analysis.-v.-15.-p.795-801.

445. Pinnel S.R. 2003. Cutaneous photodamage , oxidative stress and topical antioxidant protection. J of American Academy of Dermatology-v.48.-p.l22-124.

446. Е.Д.Гольдберг, Т.Г.Разина, Е.П.Зуева, Е.Н.Амосова, С.Г.Крылова, В.Е.Гольдберг. //Растения в комплексной терапии опухолей . М.: Издательство РАМН, 2008.ISBN 978-5-7901-0100-7.

447. Albersheim, P. and Darvill, A. G. (1985) Oligosaccharins . Sci. Am ., 253,58-64.

448. Apostol , I., Heinstein , P. F. and Low , P. S. (1989) Rapid stimulation of an oxidative burst during elicitation of cultured plant cells. Role in defense and signal transduction. Plant Physiol., 90 , 109-116.

449. Goldstein , I. J. & Poretz , R.D. ( 1986) in The Lectins : Properties , Functions , and Applications in Biology and Medicine (Liener, I. E., Sharon , N. and Goldstein, I.J., Eds.) pp. 33 248 , Academic Press, New York.

450. Rudiger , H. ( 1988 ) in Advances in Lectin Research ( Franz , H., Ed.), Vol. 1, pp. 26-72, VEB Verlag, Berlin.

451. Van Driescche, E. ( 1988) in Advances in Lectin Research ( Franz , H., Ed.), Vol. 1, pp. 73- 134, VEB Verlag, Berlin.

452. Nsimba Lubaki, M. & Peumans , W. J. ( 1986) Plant Physiol. 80, 747n751.

453. Peumans , W. J., Nsimba Lubaki , M., Broekaert, W. F. & Van

454. Damme , E. J. M. ( 1986) in Molecular Biology of Seed Storage Proteins and Lectinsth

455. Shannon , L.M. and Chrispeels , M.J., Eds.), pp. 53- 63, Proceedings of the 9 annual symposium in plant physiology, UCR Riverside

456. Greenwood , J. S., Stinissen, H.M., Peumans , W.J.& Chrispeels , M.J. ( 1986) Planta 167, 275-278.

457. Van Damme , E.J.M.& Peumans, W.J. ( 1989) Planta 178, 10-18.

458. Van Damme, E.J.M. & Peumans, W.J.(1990) Planta 182, 605- 609.

459. Peumans, W.J., Nsimba-Lubaki, M., Peeters, B. & Broekaert, W.F. (1985) Planta 164, 75-82.

460. Shibuya, N., Goldstein , I.J., Broekaert, W.F., Nsimba- Lubaki, M., Peeters, B. & Peumans, W.J. (1987) J. Biol. Chem. 262, 1596 1601.

461. Nikitina Y.E., Bugaeva I.O.,Tikhomirova E.I., Bogomolova N.V. Zh. Mikrobiol (Moscow),2002,no. 1 ,P.37-42.

462. Wang, W.C. & Cummings , R.D. ( 1988) J. Biol. Chem. 263, 45764581.

463. Cammue, B.P., Peeters, B. & Peumans, W. J. ( 1986) Planta 169, 583588.

464. Peumans, W.J., Nsimba -Lubaki, M., Carlier, A.R. & Van Driessche, E. ( 1984) Planta 160, 222-228.

465. Endo, Y.(1989) in Advances in Lectin Research (Franz, H., Ed.), Vol.2, pp 60 73, VEB Verlag, Berlin.

466. Mirelman, D., Galun, E., Sharon, N.& Lotan, R. (1975) Nature 256, 414-416.

467. Mishkind, M., Raikhel, N. V., Palevitz , B.A. & Keegstra, K. (1982) J. Cell. Biol. 92, 753-764.

468. Schlumbaum, A., Mauch, F., Vogeli, U. & Boller, T. (1986) Nature 324, 365-367.

469. Broekaert, W.F., Van Parijs, J., Leyns, F., Joos, H. & Peumans, W.J. (1989) Science 245, 1100-1102.

470. Van Parijs, J., Broekaert, W.F., Goldstein, I.J. & Peumans, W.J. (1991) Planta 183, 258-262.

471. Janzen, D.H., Juster, H.B. & Liener, I.E. ( 1976) Science 192, 795-796.

472. Murdock, L.L., Huesing, J.E., Nielsen, S.S., Pratt, R.C. & Shade, R.E. ( 1990) Phytochemistry 29, 85-89.

473. Czapla, T.H. & Lang, B.A. (1991) J. Econ. Entomol. 83,2480-2485.

474. Pusztai, A., Clarke, E.M.W. & King, T.P. ( 1979) Proc. Nutr. Soc. 38, 115-120.

475. Pusztai, A., Ewen, S.W.B., Grant, G., Peumans, W.J., Van Damme, E.J.M., Rubio, L. & Bardocz, S. (1990) Digestion 46, 308-316.

476. Kaku, H., Peumans, W.J. & Goldstein, I.J. (1990) Arch. Biochem. Biophys. 277, 255-262.

477. Van Damme, E.J.M., Goldstein, I.J. & Peumans, W.J. ( 1991) Phytochemistry 30, 509 514.

478. Van Damme, E.J.M., Allen, A.K.& Peumans, W.J.(1987) FEBS Lett. 215, 140-144.

479. Van Damme , E.J.M., Allen, A.K. & Peumans, W.J. (1988) Physiol. Plant. 73, 52-57.

480. Peumans, W.J., De Ley, M.& Broekaert, W.F.(1984) FEBS Lett. 177, 99-103.

481. Peumans, W.J., Allen, A.K., Nsimba- Lubaki, M.& Chrispeels, M.J. (1987) Phytochemistry 26, 909-912.

482. Peumans, W.J., Allen, A.K.& Cammue, B.P. ( 1986) Plant Physiol. 82, 1036-1039.

483. Cammue, B., Peeters ,B. & Peumans, W.J. (1985) Biochem. J. 227, 949955.

484. Desai, N.N.& Allen, A.K. ( 1979) Anal. Biochem. 93, 88 90.

485. Nozdrachev V.J., Sukhenko L.T.The basic elements of medical plant of Caspian region (Astrakhan province). The 1st. International Conference ot the Caspian Rgion Environmental Changes 24-25 August 2008, University of Mazandaran, Babolsar, Iran.

486. Shepard C.C. // J. Exp. Med.- I960.- Vol. 112.- P. 445-454.Laboratoiy techniques for leprosy Geneva, 1987.Shepard C.C., McRae D. // Int. J. Leprosy.-1968.-Vol. 36.-P. 78-82.

487. Smid Ej. Gorris LGM. Natural antimicrobials for food preservation. In: Handbook of Food Preservation. New York: Mareel Dekker, 199,285-308.

488. Vaidya AB, Antarkar VDS. New drugs from medicinal plants. Opportunities and approaches. J Assoc Physicians India, 1994; 42: 221-28.

489. Conner DE Naturally occurring compounds. In: Davidson P. Branen AL (eds). Antimicrobials in Foods. New York: Mareel Dekker, Inc., 1993, 441-468.

490. Tumbas VT. HPLC analysis of phenolic acids in mountain germander ( Teucrium montanum L.) extracts. Acta Periodica Technologica, 2004: 35: 265-73.

491. Darvill, A. Oligosaccharins oligosaccharides that regulate growth, development and defense responses in plants /A. Darvill et al //Glycobiology. - 1992. -Vol.2, №3.-P. 181-198.

492. Kolbel, H., Untersuchungen am Mykobacterium tuberkulosis. V. Mitt uber die Vermechrung der Phosphatgranula /H. Kolbel //Zbl. Bakteriol., Parasitenkunde, Infektionskrankh. und Hyg. 1958. - Abt. I-Orig. - №6-7. - P. 486495.

493. Laboratory techniques for leprosy. Geneva: WHO, 1987. - 165p.

494. Lakhtin, V.M. Biotechnological aspects of lectins /V.M.Lakhtin, A.N.Bakh //Lectins: biology, biochemistry, and clinical biochemistry. 1990. - Vol. 7-P.417-425.

495. Mayer H. Bacterial lipopolysaccharides /H. Mayer, U. Ramadas Bhat, et al //Pure & Appl. Chem. 1989. - Vol. 61, №7. - P. 1271-1282.

496. Nikaido, H. Bacterial membranes and walls / H. Nikaido., L.Leive (ed.). Decker, New York, 1973. - 131 p.

497. Peumans, W.J. Speculations about a physiological role of some plant lectins / W.J. Peumans //Lectins. 1983. - Vol. III. - P. 583-592.

498. Peumans, W.J. The role of lectins in the defense of plants / W.J. Peumans, E.J.M. Van Damme //Lectins: biology, biochemistry, and clinical biochemistry. 1993. - Vol. 8 -P.82-91.

499. Peumans, W.J. Proposal for a novel system of nomenclature of plant lectins / W.J. Peumans, E.J.M. Van Damme //Lectins: biology, biochemistry, and clinical biochemistry. 1994. - Vol. 10 - P. 105-117.

500. Peumans, W.J. Recent advances in the purification and characterization of plant lectins and their introduction as tools /W.J. Peumans,

501. E.J.M. Van Damme //Lectins: biology, biochemistry, and clinical biochemistry. -1994.-Vol. 10-P.l 18-127.

502. Portaels, F. Study of unclassified dapsone sensitive mycobacteria isolated from the environment in Zaire /F. Portaels //Ann Soc Beige Med Trop. -1980.-№60.-P. 381-386.

503. Prabhakaran, K. Oxidation of 3,4. dihidroxyphenylalanine (DOPA) by Mycobacterium leprae / K. Prabhakaran // Int. J. Leprosy. - 1967. - Vol. 35, №1. - P. 42-51.

504. Prabhakaran, K. Failure to detect O-diphenoloxidase in cultivable mycobacteria obtained from feral armadillos / K. Prabhakaran, E.B. Harris, W.F. Kirchheimer //Lepr. Rev. 1980. - Vol. 51, №4. - P. 341-349.

505. Reynolds E.S. The use of lead citrate at hight pH as an electron-opaque stain in electron microscopy / E.S. Reynolds // J. Cell. Biol. 1963. - Vol.17., №1. -P. 208-211.

506. Shepard C.C. A method for counting acid-fast bacteria /C.C. Shepard, D.McRae // Int. J. leprosy. 1968. - Vol. 36. - P. 78-82.

507. Shepard C.C. The experimental disease that follows the injection of human leprosy bacilli into foot pads of mice // J. Exp. Med. 1960. - Vol.112. - P. 445-454.

508. L.T. Sukhenko The Biotechnology of Phased Drinking Water Purification in the Conditions of Astrakhan Region In: Biotechnology, Biodégradation, Water and Foodstuffs,2009, 143-145 S.

509. Nenad Vukovic, Tanja Milosevic, Slobodan Sukdolak and Slavica Solujic. Antimicrobial Activities of Essential Oil and Methanol Extract of teucrium montanum/ e CAM, 2007A4 (SI), c. 17-20