Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Дифференциально-диагностические свойства и чувствительность к антибактериальным препаратам бактерий Pseudomonas aeruginosa

ВАК РФ 06.02.02, Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов

Автореферат диссертации по теме "Дифференциально-диагностические свойства и чувствительность к антибактериальным препаратам бактерий Pseudomonas aeruginosa"

На правах рукописи

ЧЖУН синь

ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНО-ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА И ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ К АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫМ ПРЕПАРАТАМ БАКТЕРИЙ Pseudomonas aeruginosa

06.02.02 — Ветеринарная микробиология, вирусология,

эпизоотология, микология с микотоксикологиен и иммунология

1 0 >".С'г1 щ

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

МОСКВА 2015

005569924

Работа выполнена на кафедре «Ветеринарная медицина» ФГБОУ ВПО «Московский государственный университет пищевых производств» (ФГБОУ ВПО «МГУПП») Министерства образования и науки РФ

Научный руководитель: Ленченко Екатерина Михайловна,

доктор ветеринарных наук, профессор ФГБОУ ВПО «Московский государственный университет пищевых производств», профессор кафедры «Ветеринарная медицина» Официальные оппоненты: Куликовский Александр Витальевич,

Заслуженный деятель науки РФ, доктор ветеринарных наук, профессор Заместитель начальника отдела научного планирования ФГБУ «Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГБУ «ВГНКИ»)

Кондакова Ирина Анатольевна,

кандидат ветеринарных наук, доцент Заведующая кафедрой «Эпизоотологии, микробиологии и паразитологии» ФГБОУ ВПО «Рязанский государственный агротехнологический университет имени П.А. Костычева» (ФГБОУ ВПО «РГАТУ»)

Ведущая организация: ФГАОУ ВО «Российский университет

дружбы народов» (ФГАОУ ВО «РУДН»)

Защита состоится «01» июля 2015 г. в «12.30» часов на заседании диссертационного совета Д 212.148.09 при ФГБОУ ВПО «Московский государственный университет пищевых производств» (109316, Москва, ул. Талалихина, 33).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Московский государственный университет пищевых производств».

Автореферат разослан 2015 г.

Автореферат размещен на официальном сайте

Министерства образования и науки РФ http://vak.ed.ru/ 2015г.

Ученый секретарь диссертационного совета, ,1 ,

доктор ветеринарных наук, профессор Андрианова Т.Г.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Аю-уальность темы. Бактерии Pseudomonas aeruginosa выделены практически от всех видов млекопитающих, птиц, рыб, при инфицировании восприимчивых видов, реализуют факторы вирулентности, связанные с синтезом экзотоксинов (гемотоксин, лейкоцидин, цитотоксины) и эндотоксина (липополисахариды). Указанные бактерии распространены повсеместно, обнаружены в воде, почве, пищевых продуктах, выделенные из объектов внешней среды, характеризуются психрофильностью, метаболической пластичностью, ростом на обедненных средах с сохранением вирулентности (Сомов Г.П., Литвин В.Ю., 1988; Павлова И.Б., Ленченко Е.М., 1998; Марченко Т.В., 2006; Павлова И.Б. и соавт., 2007; Макаров В.В., 2008; Шестаков А. Г., 2010; Викторов Д.А., 2011; Захарченко О.Н., Плешакова В.И., 2011; Кондакова И.А. и соавт., 2011, 2014; Николаева Н.В., 2011; Пруцаков B.C., 2011; Рождественская Т.Н., 2011; Серегин И.Г. и соавт., 2011; Баженова Е.А., 2012).

Экзополисахариды, продуцируемые бактериями Р.aeruginosa в виде биопленок, обладают защитным эффектом от действия активного кислорода, что приводит к смене бактериями фенотипа в виде перехода в мукоидную форму, характеризующуюся изменением способности окраски по Граму, снижением процессов метаболизма и переходом популяции в «некультивируемое состояние», что обусловливает длительность и ретроспективность бактериологических исследований (Мележик И.А. и соавт., 2013; Ленченко Е.М., 2014; Döra Märta, 2011).

При мониторинге распространенности возбудителей инфекционных болезней наблюдается статистически достоверная тенденция роста множественной лекарственной устойчивости бактерий (Куликовский A.B., 2004, 2011; Тарасова И.И. и соавт., 2014; Gram et al„ 2002; Huang Meizi et al., 2003; IrohalR. et al., 2011; He Lanxiang et al., 2012).

Учитывая социальную и экономическую значимость проблемы, одной из приоритетных задач является изыскание антибактериальных препаратов, эффективность которых определяется экологической безопасностью и широким спектром действия, в том числе и по отношению к бактериям P.aeruginosa, проявляющим множественную лекарственную устойчивость, вследствие повышенного синтеза экзополисахаридов, формирующих биопленки, которые способны замедлять диффузию антибактериальных препаратов (Чеботарь И.В. и соавт., 2012; Не Xianyuan, 2014). Для расширения научных познаний этиологической значимости факторов вирулентности бактерий P.aeruginosa целесообразным является изучение динамики патологических процессов на восприимчивых лабораторных моделях; апробация, изыскание и подбор эффективных диагностических сред, тест-систем для дифференциации бактерий, а также экспресс-тестов изучения чувствительности к антибактериальным препаратам, что и определило актуальность темы диссертационной работы.

з

Цель работы: изучить дифференциально-диагностические, патогенные, антагонистические свойства, чувствительность к антибактериальным препаратам бактерий Р.aeruginosa, выделенных из пищевого сырья и продуктов.

Задачи исследований:

- изучить морфологию колоний бактерий Pseudomonas aeruginosa;

- апробировать и изыскать эффективные диагностические среды и тест-системы для количественного учета, видовой идентификации и дифференциации бактерий Pseudomonas aeruginosa;

- изучить патогенные свойства бактерий Pseudomonas aeruginosa;

- изучить антагонистические свойства бактерий Pseudomonas aeruginosa;

- изучить чувствительность бактерий Pseudomonas aeruginosa к антибактериальным препаратам

Научная новизна. Научно обоснована и экспериментально подтверждена эффективность применения селективной среды «Cetrimide agar» (специфичность - 94,8 %) для количественного учета, видовой идентификации и дифференциации бактерий P.aeruginosa. Установлено, что цитопатическое действие бактерий P.aeruginosa при экспериментальной токсемии птиц характеризовалось преобладанием процессов, развивающихся по типу реакции гиперчувствительности замедленного типа, признаками макрофагальных реакций, экссудативно-инфильтративными процессами тканей и органов иммунной системы, сочетанием общей сосудистой реакции с дистрофическими и некротическими изменениями паренхиматозных органов. При изучении антагонистической активности бактерий установлено, что бактериоцины, продуцируемые бактериями P.aeruginosa, угнетали рост бактерий S.enteritidis - 12,3±0,39; K.pneumoniae - 11,0±0,35; C.freundii -9,6±0,30; Y.enterocolitica - 10,3±0,33. Установлено, что 79,8 % культур микроорганизмов Pseudomonas aeruginosa, выделенных из пищевого сырья и продуктов, чувствительны к антибиотикам группы ß-лактам (цефоперазон, цефотаксим, цефепим, азтреонам, имипенем, меропенем); 51,8 % -

аминогликозидам (гентамицин, тобрамицин, нетилмицин); 88,4 % - хинолонам (норфлоксацин, пефлоксацин, ципрофлоксацин, левофлоксацин, ломефлоксацин); 58,1 % устойчивы к хлорамфениколу, тетрациклину, доксициклину.

Практическая значимость работы. На основе изучения морфологии колоний Р. aeruginosa модифицирована методика подготовки препаратов для микроскопического исследования колоний бактерий. Результаты исследований по данной методике используются в учебном процессе ФГБОУ ВПО «МГУПП» по дисциплинам: «Цитология, гистология, эмбриология»; «Эпизоотология».

Апробация материалов диссертации. Основные результаты диссертационной работы доложены и одобрены на заседаниях кафедры «Ветеринарная медицина» ФГБОУ ВПО «МГУПП» (Москва, 2011-2015 гг). Материалы диссертации доложены на Международных научных конференциях

студентов и молодых учёных «Живые системы и биологическая безопасность населения» (М., 2011; М., 2012).

Основные положения, выносимые на защиту:

- результаты изучения морфологии колоний Р.aeruginosa-,

-результаты изучения дифференциально-диагностических свойств бактерий Р.aeruginosa-,

- результаты изучения патогенных свойств бактерий Р.aeruginosa-,

- результаты изучения антагонистических свойств бактерий Р.aeruginosa-,

-результаты изучения чувствительности бактерий Р. aeruginosa ' к

антибактериальным препаратам

Публикация результатов исследований.

По материалам диссертации опубликованы 5 работ, в том числе 3 в журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, библиографии, приложений. Работа изложена на 152 страницах компьютерного текста^ содержит 25 таблиц, 27 рисунков. Библиографический список включает 230 источников, из них 110 иностранных авторов.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Работа выполнена в период с 2011 по 2015 гг. на кафедре «Ветеринарная медицина» ФГБОУ ВПО «МГУПП», часть исследований проводилась в лаборатории «Санитарная микробиология» ФГБНУ «ВНИИВСГЭ». В опытах были использованы паспортизированные штаммы: Pseudomonas aeruginosa АТСС 9027; P.fluorescens № 19; P.putida № 43; Salmonella enteritidis № 204; Escherichia coli K88, №727; Klebsiella pneumoniae №24; Proteus vulgaris Н2091,-Citrobacter freundii №33/57; Enterobacter aerogenes № 0030; Yersinia enterocolitica 09, №383; Staphylococcus aureus №123, полученные из коллекции ФГБУ «ВГНКИ», Государственного НИИ стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. JI.A. Тарасевича.

При индикации и идентификации бактерий Р. aeruginosa исследования проводили в соответствии с ГОСТ Р 54755-2011 «Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества бактерий вида Pseudomonas aeruginosa» (М., 2012); «Методические рекомендации обнаружения и идентификации Pseudomonas aeruginosa в объектах окружающей среды (пищевых продуктах, воде, сточных жидкостях) (М., 1984). Пробы пищевых продуктов для бактериологических исследований отбирали в количествах, предусмотренных нормативными документами: ГОСТ 26668-85 (СТСЭВ 3013-81) «Продукты пищевые и вкусовые. Методы отбора проб для микробиологического анализа»; ГОСТ Р 50396.02013 «Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Методы отбора проб и подготовка к микробиологическим исследованиям»; ГОСТ Р 55365-2012

«Фарш мясной. Технические условия»; ГОСТ 10444.15-94 «Продукты пищевые. Методы определения количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов». Сравнительную оценку дифференциально-диагностических сред проводили в соответствии с «Методическими рекомендациями по организации и проведению контроля качества питательных сред для ветеринарных лабораторий» (М., 2011), используя следующие среды: Хью Лейфсон {«Hugh Leifson») («Merck», Germany); Мак Конки («MacConkey»); «Хай Хром» («HiChrom»); Цефсулодин-Новобиоцин агар («Cefsulodin-Novobiocin agar» - «CN»); Цетримид агар («Cetrimide») («IiiMedia», India). Биохимические свойства бактерий изучали с использованием сред Гисса, тест-набора «MIKRO-LA-TEST», «ОКСИ-TEST» («Lachema», Czech). Идентификацию микроорганизмов и изучение патогенных свойств бактерий проводили общепринятыми методами (Биргер М.О., 1973; Герхардт Ф.И и соавт., 1984; Сидоров М.А. и соавт.,1995; Скородумов Д.И. и соавт., 2005). Патогенные свойства микроорганизмов оценивали, используя методы биологического тестирования: «кожнореактивный фактор» (белые беспородные крысы, и=12); «эдематозный тест» (белые беспородные мыши, «=12); «эмбрионы птиц» (утки породы «Пекинская», /7=12); «проницаемость сосудов» (цыплята породы «Белый леггорн», «=12). При гистохимическом исследовании срезы окрашивали гематоксилином и эозином, соединительную и мышечную ткани - по Ван Гизону, на фибрин - по Шуенинову (Ленченко Е.М., 2009). Чувствительность бактерий к антибактериальным препаратам изучали, в соответствии с «МУК 4.2.1890-04. Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам» (М., 2004); ГОСТ Р 55481-2013 «Мясо и мясные продукты. Качественный метод определения остаточных количеств антибиотиков и других антимикробных химиотерапевтических веществ» (М., 2014). Гемолитическую активность микроорганизмов оценивали на МПА с содержанием 5,0 % крови млекопитающих (Лабинская A.C., 1984). Адгезивные свойства микроорганизмов изучали на эритроцитах млекопитающих и птиц (Павлова И.Б., Ленченко Е.М., 2010). Для морфологических исследований применяли оптический микроскоп «Н604 Trinocular Unico» (USA); стереоскопический микроскоп «БИОМЕД МС-1 Стерео» (Россия); электронный микроскоп «Hitachi-800» со сканирующей приставкой (Japan). Экспериментальные данные подвергали статистической обработке общепринятыми методами (Ашмарин И.П., Воробьев Л.А., 1962; Садовский Н.В., 1975); с использованием программы «Statistika»; профиль антибиотикорезистентности бактерий - «WHONET 5.4» для PC Microsoft Excel 2007.

Выражаем благодарность д-ру биол. наук, проф. Павловой И.Б. (ВНИИВСГЭ) за оказание консультативной помощи при освоении методов подготовки препаратов для изучения популяции бактерий с использованием сканирующей электронной микроскопии.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

ЗЛ. Результаты исследований морфологии колоний бактерий Pseudomonas aeruginosa

При культивировании бактерий Р.aeruginosa на МПА, «CN» «Cetrimide» через 18 - 48 ч при 37 °С выявлено формирование S-R-M форм колоний; S-формы колоний имели округлую форму, были прозрачными, с ровными краями, d=2,0 - 5,0 мм; R-формы - плоские неправильной формы, складчатые, непрозрачные, с шероховатыми краями, d>3,0 мм; карликовые, d<l,0 мм; М-формы- мукоидные (слизистые), d=l,5-3,0 мм (табл.1).

Таблица 1

Морфология колоний Р. aeruginosa

Морфология колоний Частота вст речаемости, %

«МПА» «CN» «Cetrimide»

Б-формы: круглые, прозрачные 51,5 6,2 88,0

Я-формы:

- плоские неправильной формы 33,4 3,1 7,2

-складчатые 8.4 0 4,8

- карликовые 0 36,5 0

М-формы: мукоидные (слизистые) 6,7 54,2 0

Для изучения морфологии колоний препараты фиксировали в течение 3 мин в этиловом спирте, после подсушивания на поверхность колонии наносили 3-5 капель 1,0 %-ного водного раствора метиленового синего или водного раствора кристаплвиолета в разведении 1:2000. Для сохранения естественной архитектоники колоний препараты фиксировали парами 25,0 % раствора глутарового альдегида в течение 30 - 40 мин, для контрастирования применяли пары 1,0 % водного раствора осмиевой кислоты (0504) в течение 1-2 мин, после обработки колонии приобретали коричневый цвет, что позволило подсчитывать количество колоний, в том числе очень мелких (<1,0 мм) (рис. 1).

i в • • и

мм

Рис. 1. Морфология колоний P. aeruginosa: а - на МПА; б - при стереоскопической микроскопии, «WF»: 10X20

Для исследования колоний бактерий с использованием сканирующей электронной микроскопии применяли метод культивирования на мембранных фильтрах, что позволило изучить морфологию популяции бактерий без нарушения архитектоники колоний, выявить изменения в структуре бактериальных клеток, переход популяции в гетероморфизм с различными проявлениями Ь-трансформации, в частности, выявлены сферопласты округлой формы различной величины, а также нестабильные и стабильные Ь-формы. При культивировании в течение 7-10 суток установлено, что нестабильные Ь-формы способны реверсировать в исходное состояние, реверсировавшие культуры микроорганизмов визуально формировали нетипичный рост мелких, уплощенных колоний, закрытых слизистой биопленкой (рис. 2).

а б в

Рис. 2. Фрагмент популяции P. aeruginosa: а - бактерии под покровами; б, в-гетероморфизм популяции бактерий, покровы отсутствуют. СЭМ

Методика изучения популяции бактерий без нарушения архитектоники колонии, позволила выявить морфологические изменения на уровне структуры бактериальных клеток Р.aeruginosa, проявляющиеся диссоциацией на S-, R-, М-формы колоний: S-формы имели типичную для вида палочковидную форму и гладкие края колоний; у R-форм наряду с типичными для данного вида бактериями по морфологическим критериям выявлен гетероморфизм; М-формы представлены сливными слизистыми колониями под массивными покровами (биопленками).

3. 2. Результаты изучения дифференциально-диагностических свойств бактерий Pseudomonas aeruginosa

Для индикации и идентификации бактерий изучали ростобеспечивающие, ингибирующие свойства и специфичность сред: «Hugh Leifson»; «Mac Conkey>r, «.Hi Chrom»; «CN» и «Cetrimide», при посеве ОД мл исследуемой взвеси микроорганизмов, содержащих около 1000 бактериальных клеток в 1 мл (стандарт мутности ГИСК им. Л. А. Тарасевича), культивировали 24 - 48 ч при 37 °С. Установлено, что ростообеспечивающие и ингибирующие свойства изученных дифференциально-диагностических сред существенно не отличались (табл. 2, 3).

Таблица 2

Сравнительная оценка ростообеспечивающих свойств сред (М±т)

Бактерии Количество выросших колоний, КОЕ

«Hugh Leifson» «Мае Сопкеу» «Hi Chrom» «CN» «Cetrimide»

P. aeruginosa 81,3±3,4 64,2±2,7 84,2±3,5 74,2±3,1 86,3±3,6

S. enteritidis 82,2±3,4 69,2±2,9 80,2±3,4 - -

Е. coli 70,0±2,9 72,2±3,0 75,0±3,1 - -

К. pneumoniae 79,7±3,3 77,7±3,2 73,3±3,1 - -

Y. enterocolitica 62,2±2,6 54,1 ±2,3 42,2±1,8 70,2±2,9 -

C.freundii 78,0±3,3 76,2±3,2 76,0±3,2 - 73,3±3,1

Таблица 3

Сравнительная оценка ингибирующих свойств сред (М±ш)

Среда Количество колоний микроорганизмов, КОЕ

P. aeruginosa P. aeruginosa P. aeruginosa P. aeruginosa Р. aeruginosa С. freundii

P. fluorescens P. putida S. enteritidis Я coli

«Яг Chrom» 41.3±1.7 39,4±1,6 39.1±1.6 43,1±1,8 33,2±1.4 37,2±1,6 45.7±1.9 47,6±2,0 40.3±1.7 35,4±1,5

«Cetrimide» 42,3±1,7 47,3±1.9 45,3±1,9 41,6±1.7 41.2±1.7 39,2±1,6

Условные обозначения: «-» нет роста микроорганизмов

Для оценки специфичности сред суспензии микроорганизмов, содержащие 1 млрд. бакт. клеток в 1 мл по 30 мл вносили в пакеты, содержащие исследуемые образцы, выдерживали при комнатной температуре в течение 15 мин, переносили в пакеты, содержащие по 50 мл пептонной воды, и выдерживали в течение 15 мин. Для выделения чистой культуры микроорганизмов высевали по 0,1 мл на поверхность дифференциально-диагностических сред, культивировали при 37 °С 24 ч (рис. 3).

Рис. 3. Морфология колоний бактерий

Для идентификации изолятов, выделенных при изучении контаминации бактериями пищевых продуктов, исследуемые пробы (ш=25,0 г), помещали в среду обогащения (Триптон - соевый бульон) в соотношении 1:9 (масса/объем) и культивировали при 37° С 18-24 ч. Из среды обогащения делали высев на дифференциально-диагностические питательные среды и культивировали при 37° С, 18 - 48 ч. При идентификации учитывали, что в мазках, окрашенных по Граму, Р.aeruginosa представлены грамотрицательными бактериями, длиной 0,5 - 1,4 мкм и шириной 0,2 - 0,4 мкм; аэробы (расщепляющие глюкозу путем окисления с образованием кислоты без газа - «+» окислительно-ферментативный тест Хью-Лейфсона); оксидазаположительные; каталазаположительные, восстанавливали нитраты в нитриты, обладали протеолитической активностью (разжижали желатин и свернутую кровяную сыворотку, гидролизовали казеин), свертывали лакмусовое молоко, не ферментировали мальтозу, не образовывали индол, сероводород (рис. 4).

Исследуемый материал Триптон - соевый бульон

I

«HiChrom»; «Cetrimide»

Грам «-»_—» МИЛ

Оксидаза «+» «+» «+»

Каталаза «+» «+» «+»

Глюкоза «+» «+» «+» «+»

Мальтоза «+» «+» «+»

Индол «-»

Сероводород «+»

Гидролиз желатины «+» «+»

Рост при 41° С «+» «-» «-»

Учет результатов P.aeruginosa P.fluorescens P.putida C.fieundii

Рис. 4. Схема индикации и идентификации P. aeruginosa

Для исследования контаминированных бактериями жидкостей и поверхностей апробирована тест-система «Дип-слайд» - пластина, содержащая питательные среды, применение которых позволяет сократить время проведения эксперимента, расход питательных сред и расходные материалы на этапе первичного посева, за счет комбинаций дифференциально-диагностических питательных сред «Cetrimide», «Mac Conkey» для количественного учета и дифференциации сходных видов бактерий. Для оценки специфичности сред учитывали отношение количества идентифицированных культур микроорганизмов от общего числа типичных для вида колоний. Установлено, что специфичность сред: «Hugh Leifson», «Мае Conkey», «CN», относительно невысокая от 21,4 до 66,6 %, за счет наличия достаточно часто встречающихся углеводов (лактоза, глюкоза). Для

ю

достаточно часто встречающихся углеводов (лактоза, глюкоза). Для дифференциации бактерий рода Pseudomonas специфичность среды «Hi Chrom» выше по сравнению с предыдущими средами - 80,0 % за счет выявления специфических ферментов «ß-глюкозидаза» и «ß-галактозидаза» Для видовой идентификации эффективной является селективная среда «Cetrimide» за счет наличия цетримида (этилтриметиламмоний-бромид) -четвертичное аммониевое соединение, подавляющее рост сопутствующих бактерий, специфичность 94,8 % (табл. 4).

Таблица 4

Изучение специфичности дифференциально-диагностических сред

Среды Количество типичных колоний Количество культур микроорганизмов

Всего %

«Hugh Leifson» 14 3 21,4

«Mac Conkey» 12 4 33,3

«CN» 12 8 66,6

«Hi Chrom» 15 12 80,0

«Cetrimide» 20 19 94,8

При изучении контаминации бактериями пищевого сырья и продуктов из основного разведения готовили ряд последующих разведений, используя три способа: способ I - серийные разведения в 0,9 % №С1; способ II - серийные разведения в 0,7 % МПА; способ Ш - тест-пластины «Ре^уИт». Количество микроорганизмов КМАФАнМ в исследуемых пробах, через 18 ч культивирования при 37 °С, определенное с использованием трех способов, существенно не отличалось. При идентификации бактерий из пищевого сырья и продуктов выделены 43 культуры микроорганизмов, в том числе 27 культур микроорганизмов семейства Pseudomonaceae, 16 - семейства ЕшегоЬас/спсеае (табл. 5).

Таблица 5

Результаты идентификации бактерий, выделенных из пищевого сырья и продуктов

Исследуемые Пробы Количество идентифицированных микроорганизмов

Pseudomonas Enterobactericeae

Абс. % Абс. %

Мясо птицы 1 2,3 - _

Фарш из мяса птицы 3 7,0 2 4,7

Субпродукты птицы 2 4,7 4 9,3

Фарш свиной 5 11,6 5 11,6

Фарш говяжий 5 11,6 4 9,3

Мясо рыбы 7 16,3 1 2,3

Креветки 4 9,3 -

Всего 27 62,8 16 37,2

и

На основе сравнительной оценки и подбора эффективных дифференциально-диагностических селективных сред и тест-систем при идентификации бактерий, выделенных из пищевого сырья и продуктов, идентифицировано 43 культуры микроорганизмов, в том числе 19 (44, 2 %) Р.aeruginosa", 5 (11,6 %) P.fluorescens; 3 (7,0 %) P.putida; 4 (9,3 %) C.freundii; 4 (9,3 %) E.aerogenes; 5 (11,6 %) P.mirabilis; 3 (7,0 %) E.tarda.

3.3. Результаты изучения патогенных свойств бактерий Pseudomonas aeruginosa

При изучении факторов вирулентности бактерий P.aeruginosa учитывали адгезивные, гемолитические и токсигенные свойства. Исследование среднего показателя адгезии (СПА) при взаимодействии с клетками крови птиц и млекопитающих выявило, что 26,3 % культур микроорганизмов были высокоадгезивные, СПА>4,0; 57,9 % - среднеадгезивные, СПА<4,0; 15,8 % -низкоадгезивные, СПА<2,0.

При изучении гемолитической активности 26,3 % культур микроорганизмов P.aeruginosa продуцировали а-гемолизины, 52,6 % - ß-гемолизины. Для оценки токсигенных свойств бактерии культивировали в жидкой среде Хотгингера при 37° С в течение 24 ч, центрифугировали при 6000 об\мин в течение 30 мин, надосадочную жидкость использовали для определения наличия токсинов - опыт (контроль - жидкая среда Хотгингера).

При оценке наличия токсина в тесте «кожнореактивный фактор» исследуемый материал в объеме 0,1 мл вводили внутрикожно в участки депиляции кожи беспородным белым крысам, через 24 ч учитывали показатель коэффициента (К) толщины кожи (мм): контроль - К<1,6; опыт - 1,7±0,50 -1,9±0,56.

Для изучения наличия токсинов на лабораторной модели «эдематозный тест» 0,1 мл надосадочной жидкости вводили в плантарную поверхность лапок белых беспородных мышей, через 24 ч учитывали показатель коэффициента отека - oedema (мг): контроль - К<15,0; опыт - 40,67±3,80 -60,17±5,62.

При оценке наличия токсинов с применением модели «эмбрионы птиц» 0,2 мл исследуемой жидкости вводили в аллантоисную оболочку 14-суточных эмбрионов уток «Пекинская», через 24 ч после заражения летальность эмбрионов составила 100,0 %. Динамика развития патологических процессов сопровождалась развитием признаков септицемии, при наличии бактериальной эмболии и нарушения кровообращения. Наблюдали обширные кровоизлияния в зародышевых оболочках, наличие гиперемии, гемоциркуляторные изменения в тканях и органах сердечно-сосудистой и дыхательной системы, развитие перикардита, серозно-фибринозного аэросаккулита, перигепатита, катарально-фибринозного энтероколита, гиперплазии селезенки.

При исследовании продукции токсинов с применением лабораторной модели «проницаемость сосудов» исследуемую жидкость вводили интраназально 5-суточным цыплятам породы «Белый леггорн», через 24 ч внутривенно вводили раствор красителя «синего Эванса», не проникающего через неповрежденный эндотелий кровеносных сосудов, результаты оценивали, сравнивая разность массы легких (мг): контроль - К<0,17; опыт - 1,08±0,32 — 1,38±0,41. При экспериментальной токсемии птиц цитопатическое действие Р. aeruginosa характеризовалось кровоподтеками кожных покровов, фибринозным перикардитом, аэросаккулитом, кровоизлияниями в печени и почках, гиперплазией селезенки. Как правило, выявляли множественную бактериальную эмболию кровеносных сосудов тканей и органов иммунной, сердечно-сосудистой, дыхательной, пищеварительной, выделительной системы, в паренхиматозных органах выявляли многочисленные некротические очажки, инфильтрированные лейкоцитами, наблюдали нарушение сосудистой проницаемости легких, сердца, печени, почек, застойную гиперемию селезенки. Изменения в тканях и органах иммунной системы характеризовались развитием признаков экссудативно-инфильтративных процессов по типу реакции гиперчувствительности замедленного типа, скоплением плазматических клеток, макрофагальной реакцией, периваскулярным отеком тканей, диссеминированным тромбозом, признаками акцидентальной трансформации тимуса - расстройство кровообращения, уменьшение долек, формированием кист, граница между корковым и мозговым веществом не выявлялась; атрофии фабрициевой бурсы - нарушение целостности кортико-медуллярного эпителиального слоя, граница между корковым и мозговым веществом не выявлялась, атрофированные лимфоидные фолликулы содержали клеточный детрит; гиперплазии селезенки — синусы красной пульпы расширенные, клетки эндотелия в состоянии пролиферации, опустошение пульпы, периваскулярный отек и плазматическое пропитывание тканей, периартериальные лимфоидные скопления (рис. 5).

Рис. 5. Селезенка птиц: а - контроль; б - опыт. Гематоксилин и эозин. Ок.Ю, об.10-40

При развитии перикардита выявляли многочисленные точечные, пятнистые и полосчатые кровоизлияния, перикард был заполнен серозно-фибринозным экссудатом, на эпи- и эндокарде - обширные кровоизлияния с кровоподтеками, застойная гиперемия сосудов, токсическая дистрофия кардиомиоцитов, массовый распад лимфоцитов, диссеминированный тромбоз. Пораженные дольки легких имели дряблую консистенцию, окрашены в темно красный цвет, поверхность разреза органа была влажной, выделялась кровянистая жидкость, воздухоносные мешки были тусклые, непрозрачные с наложениями пленок фибрина. В альвеолах выявляли скопление экссудата и слущивание эпителиального слоя, в междольковой соединительной ткани наблюдались гиперемия и лейкоцитарная инфильтрация, пролиферация фибробластов, в просвете парабронхов и бронхов - светло-розовые нити фибрина с наличием эритроцитов, плазмоцитов, псевдоэозинофилов, лимфоцитов. Множественные точечные, пятнистые и полосчатые кровоизлияния наблюдали в слизистой оболочке желудка, кишечника, наличие в просвете кишечника жидкости коричневого цвета с кровяными сгустками. В печени выявляли дискомплексацию балочной структуры долек, кровенаполнение центральной вены и синусоидных капилляров, гепатоциты были увеличенными с признаками токсической дистрофии, в почках - признаки застойного геморрагического инфаркта, в паренхиме микроабсцессы, гиперемия сосудов, с лейкоцитарной инфильтрацией некротических участков, некроз эпителия канальцев нефронов почек.

Цитопатическое действие бактерий P.aeruginosa при экспериментальной токсемии птиц характеризовалось преобладанием процессов, развивающихся по типу реакции гиперчувствительности замедленного типа, признаками макрофагальных реакций, экссудативно-инфильтративными процессами тканей и органов иммунной системы, сочетанием общей сосудистой реакции с дистрофическими и некротическими изменениями паренхиматозных органов.

3.4. Результаты изучения антагонистических свойств бактерий P. aeruginosa

Для изучения антагонистических свойств бактерий P.aeruginosa применяли способы: «перпендикулярных штрихов», «агаровых блочков», «мембранных фильтров», «агаровой пленки». При использовании способа «перпендикулярных штрихов» возможно учитывать бактериоцины штаммов, продуцирующих соединения, которые диффундируют в толще агарового слоя и, следовательно, образуются более обширные зоны задержки роста тест-культуры, недостаток метода - применение одной среды не всегда одинаково благоприятно как для продуцента бактериоцинов, так и для роста тест-организмов. Преимущество способа «агаровых блочков» заключалось в возможности изучения антагонистической активности чистых и смешанных культур микроорганизмов, применение «мембранных фильтров» позволило изучить антагонистическую

активность бактерий разных систематических групп и оценивать количество и степень ингибирования тест-штамма. При апробации способа «агаровой пленки» или «микрокультуры» на поверхность двух предметных стекол наносили 0,2 - 0,3 мл питательной среды (МПА, «Cetrimide») и распределяли по всей поверхности стекла. Затем предметные стекла опускали в смесь культур бактерий, смытых с поверхности плотной питательной среды и доведенных по стандарту мутности до концентрации 106 кл/мл. При 37°С через 18 ч наблюдался рост изолированных колоний микроорганизмов, что позволяло изучать морфологические изменения бактериальной популяции, измерять диаметр колонии с помощью окуляр-микрометра. При исследовании межвидового антагонизма результаты исследований с применением методов существенно не отличались, бактериоцины, продуцируемые P.aeruginosa, угнетали рост бактерий S.enteritidis; К.pneumoniae; C.freundii; Y.enterocolitica (табл. 6).

Таблица 6

Результаты изучения антагонистических свойств P. aeruginosa

Вид бактерий Зоны задержки роста, мм

1 2 3 М±т t td

S. enteritidis 12,0 13,0 12,0 12,3±0,39 31,54 2,2

К. pneumonia 10,0 12,0 11,0 11,0±0,35 31,43 1,8

С. freundii 10,0 10,0 9,0 9,6±0,30 31,25 1.9

Y.enterocolitica 12,0 9,0 10,0 10,3±0,33 31,21 2.1

Примечание: I - доверительный коэффициент: id -коэффициент достоверности различий средних величин

Из числа апробированных способов наиболее результативным являлись способы «мембранных фильтров», «агаровой пленки», позволяющие изучать антагонистическую активность бактерий, относящихся к разным систематическим группам, сократить расход питательных сред, стерильной бактериологической посуды и времени проведения анализа.

3.5. Результаты изучения чувствительности Pseudomonas aeruginosa к антибактериальным препаратам

При изучении чувствительности бактерий к антибактериальным препаратам (АБП) применяли методы диффузии в агар и серийные разведения. При изучении чувствительности бактерий с применением стандартных коммерческих дисков, содержащих 5-30 мкг антибиотиков, установили, что P.aeruginosa были чувствительными к группе ß-лактам; аминогликозидам; хинолонам; устойчивыми к хлорамфениколу, тетрациклину, доксициклину (табл.7).

Таблица 7

Результаты изучения чувствительности бактерий к антибактериальным препаратам

Антибиотики Зоны задержки роста микроорганизмов, мм (М±т)

Р. aeruginosa I E.coti 1 S. aureus

/f-лакгамы

Цефоперазон 21,10±0,9 22,20±0,9 18,20±0,8

Цефотаксим 24,20±1,0 21,15±0,9 17,10±0,7

Цефтриаксон 10,20±0,4 22,13±0,9 17,15±0,7

Цефтазидим 16,40±0,7 20,21±0,8 19,20±0,8

Цефепим 22,25±0,9 16,18±0,7 17,18±0,7

Азтреонам 23,18±1,0 24,24±1,0 22,14±0,9

Имипенем 21,26±0,9 18,13±0,8 17,23±0,7

Меропенем 22,14±0,9 17,25±0,7 18,21±0,8

Аминогликозиды

Гентамицин 18,25±0,8 20,14±0,8 19,10±0,8

Тобрамицин 23,18±1,0 19,00±0,8 18,22±0,8

Нетилмицин 22,14±1,0 15,00±0,6 15,00±0,6

Амикацин 15,26±0,6 22,20±0,9 12,17±0,5

Хинолоны

Норфлоксацин 20,00±0,8 18,00±0,8 19,10±0,8

Пефлоксацин 22,00±0,9 22,00±0,9 23,20±1,0

Офлоксацин 10,00±0,4 20,10±0,8 18,40±0,8

Ципрофлоксацин 22,00±0,9 33,30±1,4 24,20±1,0

Левофлоксацин 19,00±0,8 25,20±1,1 11,20±0,5

Ломефлоксацин 23,00±1,0 26,00±1,1 20,10±0,8

Другие препараты

Хлорамфеникол 10,20±0,4 21,20±0,9 20,24±0,8

Тетрациклин 10,23±0,4 11,00±0,5 21,00±0,9

Доксициклин 12,00±0,5 19,00±0,8 17,20±0,7

Применение тест-системы «HexaDisc Pseudo 6» из 6 дисков, радиально прикрепленных к центру, позволяло одновременно изучить чувствительность бактерий к антибиотикам разных групп, в частности, к цефалоспоринам III поколения. Использование гексадисков с цефотаксимом, цефтазидимом в комбинации с клавуланатом позволяло изучить продукцию ß-лактамаз расширенного спектра штаммами, проявляющими пониженную

чувствительность к одному из цефалоспоринов III поколения (табл. 8).

Таблица 8

Результаты изучения чувствительности Pseudomonas aeruginosa к антибактериальным препаратам

Бактерии P.aeruginosa Зона задержки роста микроорганизмов, мм (М±ш)

Амикацин Цефепим Цсфтазидим Ципрофлоксацин Гентамцин Имипенем

№ 1-6' 18,6±0,8 20,6±0,9 12,1±0,5 15,9±0,7 13,1±0,5 20,7±0,9

№ 1-9L 15,3±0,6 21,3±1,0 17,1 ±0,7 23,1±1,0 17,1±0,7 22,2±0,9

№10-14J 16,1±0,7 20,6±0,9 11,0±0,5 22,1±0,9 16,0±0,7 15,5±0,6

№15-174 15,6±0,7 21,7±0,9 15,9±0,7 24,3±1,0 10,9±0,5 22,7±0,9

№18-193 15,4±0,6 22,6±0,9 16,7±0,7 23,5±1,0 14,7±0,6 14,4±0,6

Примечание: продукция птицеводства; фарш свиной; фарш говяжий; мясо рыбы; креветки

При изучении чувствительности бактерий Р.aeruginosa к АБП методом серийных разведений, антибиотикорезистентность микроорганизмов оценивали, определяя показатель «Минимальная ингибирующая концентрация» — «МИК» (табл. 9).

Таблица 9

Результаты изучения минимальной ингибирующей концентрации антибиотиков («МИК», мг/г)

Антибиотики P.aeruginosa* P.aeruginosa** P.aeruginosa ***

«МИК», мг/г «МИК», мг/г «МИК», мг/г

Цефтазидим 1,0 4,0 2,0

Цефепим 2,0 4,0 4,0

Имипенем 1,0 1,0 1,0

Меропенем 0,5 1,0 1,0

Азтреонам 1,0 4,0 2,0

Амикацин 1,0 32,0 32,0

Ципрофлоксацин 0,063 0,125 0,125

Примечание: референтный штамм; ** - продукция птицеводства; *** мясо рыбы

Установлено, что 79,8 % культур микроорганизмов Р.aeruginosa, выделенных из пищевого сырья и продуктов, были чувствительными к антибиотикам группы ß-лактам (цефоперазон, цефотаксим, цефепим, азтреонам, имипенем, меропенем); 51,8 % - аминогликозидам (гентамицин, тобрамицин, нетилмицин), 88,4 % - хинолонам (норфлоксацин, пефлоксацин, ципрофлоксацин, левофлоксацин, ломефлоксацин); 58,1 % были устойчивы к хлорамфениколу, тетрациклину, доксициклину. При изучении чувствительности к антибактериальным препаратам установлена прямая коррелятивная зависимость результатов исследований с применением методов диффузии в агар и серийных разведений (г=0,91).

Для обнаружения остаточных количеств антибиотиков в пищевом сырье и продуктах использовали тест-систему «Premi ® Test», основанную на

чувствительности бактерий Bacillus Stearothermophilus к антибактериальным препаратам. Ампулы «Premi ® Test» содержат твердую агаровую питательную среду, стандартное количество спор указанных бактерий и цветной индикатор бромкрезол, при культивировании при 64°С споры прорастают. Учет результатов проводили по изменению цвета индикатора; «+» результат - при отсутствии в анализируемом образце АБП в концентрации, превышающей минимально обнаруживаемую, рост бактерий подавляется, кислотность среды остается близкой к нейтральной, бромкрезол придает содержимому ампулы фиолетовый цвет; «-» результат - при отсутствии в анализируемом образце АБП происходит размножение бактерий и выделение кислоты, в результате индикатор бромкрезол приобретает желтый цвет. При изучении наличия АБП количество положительных результатов составило 40,0 - 80,0 % (рис. 6).

I«+» «-»

Рис. 6. Результаты исследований наличия АБК (%): I - продукция птицеводства;

II - фарш свиной; III - фарш говяжий; IV - мясо рыба; V- креветки

При исследовании чувствительности к дезинфицирующему препарату «Дезант», содержащему 1,6,3,8-диметано-1,3,6,8-тетраазациклодекан четвертичное аммониевое соединение (ЧАС) по активному действующему веществу зоны задержки роста бактерий (мм) составили 10,3 ±1 3 -13,9 ±1,7 (табл. 10).

Таблица 10

Результаты изучения чувствительности бактерий к препарату «Дезант»

Культуры микроорганизмов Зона задержки роста микроорганизмов, мм

Концентрация препарата, %

2,0 2,5 3,0

P. aeruginosa' 10,7±1,3 11,0±1,4 13,9±1,7

Р. aeruginosa1 10,3±1,3 10,8±1,4 11,2±1,4

Р. aeruginosa' 10,9±1,4 13,8±1,7 12,2±1,5

Р. aeruginosa4 12,2±1,5 12,1±1,5 11,3±1,4

Р. aeruginosa3 13,4±1,7 12,0±1,5 13,6±1,7

Примечание: 'продукция птицеводства; 'фарш свиной: 'фарш говяжии: J мясо рыбы: ' креветки

Следующей задачей исследований явилось изучение чувствительности бактерий P.aeruginosa к действию экстрактов растений (КНР): Коптис китайский (Coptis chinensis), Шлемник байкальский (Scutellaria baicalensis Georgi), Японская жимолость (Honeysuckle aqueous), Чай Пуэр (iCamellia sinensis var assamica), а также 1,0 - 4,0 % растворов консервированной желчи (ООО «Самсон-Мед», Санкт-Петербург). Уровень резистентности изученных видов бактерий уменьшался в ряду: P.aeruginosa, К.pneumoniae, P.vulgaris, S.enteritidis, E.coli, C.freundii, Y.enterocolitica (табл.11).

Таблица 11

Результаты изучения антибактериальной активности экстрактов растений и желчи, мм (М±ш)

Бактерии Зоны задержки роста (мм) (М ± т)

Коптис китайский Шлемник байкальский Японская жимолость Чай Пуэр Желчь

Р.aeruginosa 11,5±0,5 9,8±0,4 - - 9,7±0,4

S.enteritidis 13,5±0,6 12,2±0,5 11,2±0,5 10,4±0,4 13,6±0,6

E.coli 13,0±0,5 11,0±0,5 10,5±0,4 10,0±0,4 13,9±0,6

К. pneumoniae 12,5±0,5 10,8±0,5 11,8±0,5 10,2±0,4 10,2±0,4

P.vulgaris 13,2±0,6 11,5±0,5 11,2±0,5 10,8±0,5 12,5±0,5

C.freundii 12,0±0,5 10,3±0,4 9,2±0,4 9,0±0,4 14,2±0,6

Y.enterocolitica 11,0±0,5 9,9±0,4 9,4±0,4 9,5±0,4 14,8±0,6

Для изучения антиадгезивных свойств экстрактов растений и растворов желчи использовали методику, позволяющую сохранять естественную архитектонику взаимодействия бактерий и клеток крови. В опыте использовали суспензию эритроцитов концентрацией 109 кл/мл в физиологическом растворе и суточную бульонную культуру микроорганизмов P.aeruginosa в концентрации 109кл/мл. Изучение антиадгезивных свойств экстратов растений: Коптис китайский. Шлемник байкальский; Японская жимолость; Чай Пуэр, растворов желчи выявило, что средний показатель адгезии бактерий Р.aeruginosa-, 4,21±0,53 - 5,36±0,67 (контроль); 1,16±0,15-2,75±0,34 (опыт) (рис. 7, 8).

t* -щ

Ф

•т.? /v '

/

Рис. 7. Адгезия бактерий к эритроцитам птиц. ОкЛО, об. 100

Рис. 8. Антиадгезивные свойства: I - Коптис китайский; II - Шлемник

байкальский; III-Японская жимолость; IV-Чай Пуэр; V- желчь

На основании результатов исследований сделано заключение, что этиологическая значимость факторов вирулентности бактерий Р. aeruginosa обеспечивается продукцией цитотоксинов, гемолизинов, бактериоцинов; динамика патологических процессов при экспериментальной токсемии характеризуется признаками макрофагальных реакций, экссудативно-инфильтративными процессами тканей и органов иммунной системы, общей сосудистой реакции с дистрофическими и некротическими изменениями паренхиматозных органов; на основе апробации, изыскания и подбора эффективных дифференциально-диагностических сред, тест-систем, модифицирована методика подготовки препаратов для исследования популяционной изменчивости бактерий; для количественного учета и видовой идентификации рекомендуется схема бактериологического исследования с применением среды «Cetrimide agar»; установлено, что культуры микроорганизмов, выделенные из пищевого сырья и продуктов, чувствительны к антибиотикам группы ß-лактам (цефоперазон, цефотаксим, цефепим, азтреонам, имипенем, меропенем); аминогликозидам (гентамицин, тобрамицин, нетилмицин), хинолонам (норфлоксацин, пефлоксацин, ципрофлоксацин, левофлоксацин, ломефлоксацин); устойчивы к хлорамфениколу, тетрациклину, доксициклину.

ВЫВОДЫ

1. При изучении морфологии колоний Р.aeruginosa установлено, S-формы имели типичную для вида палочковидную форму и гладкие края колоний; у R-форм наряду с типичными для данного вида бактериями по морфологическим критериям выявлен гетероморфизм; М-формы представлены сливными слизистыми колониями под массивными покровами (биопленками).

2. При исследовании контаминированных бактериями жидкостей и поверхностей эффективно применение пластин «Дип-слайд», т.к. позволяет сократить время проведения

эксперимента, расход питательных сред и расходные материалы на этапе первичного посева, за счет комбинаций дифференциально-диагностических питательных сред «.Cetrimide», «.Mac Conkey» для количественного учета и дифференциации Р.aeruginosa от сходных видов бактерий.

3. На основе сравнительной оценки и подбора эффективных дифференциально-диагностических селективных сред и тест-систем при идентификации бактерий, выделенных из пищевого сырья и продуктов, идентифицировано 43 культуры микроорганизмов, в том числе 19 (44, 2 %) Р. aeruginosa; 5 (11,6 %) Р.fluorescens; 3 (7,0 %) P.putida; 4 (9,3 %) C.freundii; 4 (9,3 %) E.aerogenes; 5 (11,6 %) P. mirabilis; 3 (7,0 %) E. tarda.

4. Цитопатическое действие P. aeruginosa при экспериментальной токсемии птиц характеризовалось преобладанием процессов, развивающихся по типу реакции гиперчувствительности замедленного типа, признаками макрофагальных реакций, экссудативно-инфильтративными процессами тканей и органов иммунной системы, сочетанием общей сосудистой реакции с дистрофическими и некротическими изменениями паренхиматозных органов.

5. С применением модифицированного метода изучения антагонистической активности бактерий установлено, что бактериоцины, продуцируемые бактериями Р.aeruginosa, угнетали рост бактерий: S.enteritidis - 12,3±0,39; К.pneumoniae - 11,0±0,35; C.freundii - 9,6±0,30; Y.enterocolitica- 10,3±0,33.

6. При изучении чувствительности к антибактериальным препаратам установлено, что 79,8 % культур микроорганизмов Pseudomonas aeruginosa, выделенных из пищевого сырья и продуктов, чувствительны к антибиотикам группы ß-лактам (цефоперазон, цефотаксим, цефепим, азтреонам, имипенем, меропенем); 51,8 % - аминогликозидам (гентамицин, тобрамицин, нетилмицин), 88,4 % - хинолонам (норфлоксацин, пефлоксацин, ципрофлоксацин, левофлоксацин, ломефлоксацин); 58,1 % устойчивы к хлорамфениколу, тетрациклину, доксициклину.

7. Изучение антиадгезивных свойств экстрактов растений: Коптис китайский; Шлемник байкальский; Японская жимолость; Чай Пуэр, а также 1,0 — 4,0 % растворов желчи выявило, что средний показатель адгезии бактерий Р.aeruginosa: 4,21±0,53-5,36±0,67 (контроль); 1,16±0,15 - 2,75±0,34 (опыт).

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

• На основе изучения морфологии бактерий P.aeruginosa модифицирована методика подготовки препаратов для исследования популяционной изменчивости бактерий без нарушения естественной архитектоники колоний.

• Для дифференциации бактерий P.aeruginosa от сходных видов бактерий рекомендуется использовать среду «Я/ Chrom», специфичность - 80,0 %; для количественного учета и видовой идентификации бактерий Р. aeruginosa - схему бактериологического исследования с применением среды «Cetrimide agar», специфичность - 94,8 %.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1. Чжун Синь. Оценка чувствительности к антибиотикам и дезинфицирующим препаратам бактерий, выделенных при желудочно-кишечных болезнях птиц // Живые системы и биологическая безопасность населения: Материалы X международной научной конференции студентов и молодых ученых. - М.: МГУПП, 2012. - С.221-223.

2. Ленченко Е.М. Чувствительность микроорганизмов к дезинфицирующим средствам / Е.М. Ленченко, Чжун Синь, И.И. Тарасова, Д.С. Зверев // Аграрная наука. - 2013. - № 8. С. 27-28.

3. Ленченко Е.М. Чувствительность к антибактериальным препаратам энтеробактерий, выделенных при желудочно-кишечных болезнях животных // Е.М. Ленченко, Чжун Синь, Е.А. Мансурова // Аграрная наука. - 2014. - № 9 С. 30-32.

4. Тарасова И.И. Механизм формирования резистентности к дезинфектантам // И.И. Тарасова, Е.М. Ленченко, Чжун Синь, И.Ю. Московкина, Р-Н. Мельник // Ветеринария и кормление. - 2014. -№ 6. С. 47-48.

5. Чжун Синь. Сравнительная оценка эффективности диагностических сред и тест-систем для индикации и идентификации бактерий, выделенных из пищевых продуктов // Проблемы ветеринарии и ветеринарно-санитарной экспертизы и биологической безопасности: Материалы 7-ой международной конференции ветеринарно-санитарной экспертизы, часть I. - М.: МГУПП 2015 - С. 64-69.

Подписано в печать: 20.05.2015 Тираж: 100 экз. Заказ №3665

Типография «ОПБ-Принт» ИНН 7715893757 107078, г. Москва, Мясницкий пр-д, д. 2/1 (495) 777 33 14 www.opb-print.ru