Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

ДЕЙСТВИЕ КАРОТИНОИДОВ НА ЭФФЕКТИВНОСТЬ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ БАРАНОВ И РЕЗУЛЬТАТ КРИОКОНСЕРВАЦИИ ИХ СЕМЕНИ

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "ДЕЙСТВИЕ КАРОТИНОИДОВ НА ЭФФЕКТИВНОСТЬ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ БАРАНОВ И РЕЗУЛЬТАТ КРИОКОНСЕРВАЦИИ ИХ СЕМЕНИ"

№9393

ВСЕСОЮЗНЫЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЖИВОТНОВОДСТВА

(аиж)

На правах рукописи УДК 636.3.082.453.53.087.73 Лязункоа Анатолий Фэаорович

ДЕЙСТВИЕ КАРОТИВОИДОВ НА ЭФФЕКТИВНОСТЬ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ БАРАНОВ И РЕЗУЛЬТАТ КРИОКОНСЕРВА11ИИ ИХ СЕМЕНИ

03.00,13. Физиология человека в жиьоткых

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой стеле>ш какокоата биологических наук

п. Дубровины Московской области 1989

Работа выполнена в Отделе биологии воспроизведения я искусственного осеменения сельскохозяйственных животных Всесоюзного ордена Трудового Красного Знамена научно-исследовательского института животноводства

Научный руководитель

ЛэучныЙ консу.шгант Официальные отгоне еты:

- лауреат Государственной премии СССР, академик ВАСХНШЕ Б.К.МШ10ВАЯ0В

- кандидат биологических наук Л . И.ПАРАЫШОВА

- доктор биодогическях наук Б.А.НАУК

- кандидат биологически* паут. В.К.СТОЯНОВ

Ведущее учреждение - Казахской, научно-исследовательский техис— логический институт овцеводства

Зашита диссертации состоится 'МОУГ;^ 7 19вЬг. на заседании специализированного Совета Д.020.16.02 при Всесоюзно1.! научно-исследовательской институте животноводства.

Адрес института: 142012, ц.Дувровшш, Подольского района. Московской области.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИЕа. Автореферат разослан "//" у . 15£Эг.

Ученый секретарь специализированного Совета кандидат биологических наук

И.И.1ШПЩ

Г, ОЩЛЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБШЫ

1.1.Актуальности темц. Наиболее аффективный путь ускорения исдашяеняя продуктивности - широкое применение искусственного осеменения животных, особенно в его наиболее совершенной Форш, основанной на низкотемпературном гранении семени самцев-производн-телей»

2 замороженном состоянии семя сельскохозяйственных животных кохко хранить во огршзгкяно долго» транспортировать да левые расстояния для осуществления селекционных целей.

Метод длительного хранения семени в глубокозамороженном состоянии дает возможность сохранить генофонд редких в исчезавших видов и пород.

Важнее значение для решения проблемы глубокого заморелотакил сеывни ишотных ишет разработка методов улучшения^качества сетле-ни животных, рационализация их коргления и режима гепользовакия, конструирование оптимальных синтетических сред для разбавления семени с учетом наличия в их составе.биоэвергетических компонентов, защитных криолротекторпнх нетоксичных агентов.

Особой важности задача представляет собой изучение влияния на качествЭ^кивотних биологически активных веществ» в частностг, каротиноидов.

1.2.й^ль данного идследо^эниз - усовершенствовать технолог»: глубокого замораживания семени бараков.

Для достижения этой цеди поставлены следутдние задачи:

- изучить действие бета-каротина микробного синтеза в рацио но баранов-прокз водят еле К на их воспроизводительные функции;

- выяснить значение каротин ощ^эт^ в качестве компонентов сре-

А-азт

ли для - крдевоясервают семена баранов, в частности:

- изучить их влияние ва биологическую полноценность сперматозоидов; .

- изучить их антжоксидантные свойства;

- усоверганствовать на этой основе защитную среду для крио-кснсервапии.

Х.З.Катчная новизна работы. Впервые в качества источника каротина в коршгевшг бараяов-производателе2 использовали бета-каротин шкробяого синтеза.

Впервые, в' качестве средств защиты лншщов ливчлков от пере-кисного оюслввгя ирг криохонсе рвааии семени баранов бшш изучены каротинодцы (ксантсфидды) фукоасантин, литеин, каротиноидная шхяжка ршгеп шафрана, а таете синтетический бета-каротин.

Впервые была изучена антиоксидантная способность каротанои-дой при взаимодействии их с супероксид ашон-радгкалом .

1.4.Дэактичэекая ценность работы состоит в тем, что дотазана необходимость наличия бета-каротина в рационах Саршюв-пропэводителей, а также доказана способность каротиноидсв (лнгеша я фуко-ксантта) улучшать биологическую полноценность живчиков в составе сред для криоконсервают.

работы. Материалы диссертации доложены и одобрены:

- на научках конференциях Отдела биологии воспроизведения и искусственного осеменения сельскохозяйственных животных ВШд (1585, 1587, 1383 гг.);

- на 40, 41-ой конференциях молодое ученых и аспирантов ВИЕа (1587, 1Е83 ГГ.).

таботы. Двосэртацзя состоит из введете, описашп "" золе и'задаэ, обзора литературы, методики исследовагка, результатов сооставнешс исследований, выводов и практических предложений, «писка использованной литература, вмшчаюпвго253 наименования:, та пжх 78 па иностранных языках.

Материал дассертеяии изложен на 129 страницах машшописи и содержит 22 таблица, 4 фотографии н 18 расушоз.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТ США ИССЛЕДОВАНИЙ

Лабораторные сшиты выдолноны s Отдела биологии воспроизведения к искусственного осеменения сельскохозяйственны* животных ВДЕа, а такаю в лаборатория витаиинов я биологически еятаввых соединений института биохимии галоше А.К.Еаха Академии науд СССР.

ХозяСственкый опыт до замораживанию семени к действию sa активность колоеюс рефлексов и качество семени баранов-прозгавсуш-талей бета-каротина микробного синтеза был про воден на шхра&эд.-

ком шгэдшредпраятиг "Куйбышевское*. Хозяйственный опыт по вежда*

эффективности осемзяегаи овец глубокоахлажданныы семешк upe» веден в совхозе "Восток" Б-^рниговского района фйбышевской об—

JîRCTH.

2-1-Ьп!елениа.-отастта ждютаисдшя. КарогшоЕД морских во-' д«рослей, фукоксаитш, выделяли из бурой водоросли Cistozir* barbet* по методу Евстигнеева В.Г. в Парамоновой Л.Н.,1974. Ьлчш! извлекали из сухой крапивы в очищали согласно метода coodvir. T.w. ,1565. Кароткноиднузэ штяжку из рылец шафрана (oo:t гротагографкчесхой очистки и вдвнтяфшеадии пигментов) готоглот с помсс.ь» now о г тапол ового раствора (1:1). Использованный намк сьтй-каротек -Ííu: синтетический, фкрш

2.2.3амгго5ЖЕзаюа с&мэнц вровседак согласно датодичесаях рексшЕдаца! по технологии глубокого заморазизанися и использом-нял семени высокоценных баранов (BIS, 1985).

г.з.Пуч^таангте деьънх проводили в аэродинамическом оттаава-теяе хонструкщи Соколовсксй 1!.И. ,1975.

2.4.0дределеккэ качества згазурмов

2.4.1.Подвжкность живчиков и абсолютный показатель пережи-вавмости осредаталг по Ишговаяовт B.K., 1962.

2.4.2. Определение концентрации кив-тшсов в эякуляте проводили с дсмодыэ СЗК(Иванков М.0. в др. ,1968)с проверкой (раз s неделю) з статной камере Гэряева.

2.4.3.Определение согра-дсста акроссы проводили с помощи > акрсскопг^вс^го штода 'Соколовская И.И. и др., 1981).

2.5.раре1нигенга ^тгт^трзщ^ натоганодгов аддстэбяроввлих на иемдраче жеэтико» проводили по разработанной пами датодкке ;йигеаанов В.К. и др., 1983).

2.6.агределокар кароти^ в сынотттжа ттовтг проводят яо штс-ДГ Корсшслова B.C. и Кудрявцевой Л.Л., 1973.

2^7.Атгисхе»гавнтии свойства к m от ян рядов изучала е помощью шаухьснсго радиостэа {Б&асассон Р. и др., IS87).

йспользсваннкй нами ускоритель бкл ¡.'лркп 7-12. Ыахкзшлъная швргхя ускорелпюс злекгронов 4,5. Иэв, ток в вмлульсе до 0,1 Л, ^сктельыость импульса и релзэда одиночных тщульсов мохет «онпться от С,5 мко до 22 цке. Спветра^ький интервал вэи&ронай установке от 220 им до 1800 au, »ременной диапазон измерений от I икс до Ш'е. '

Б.Производствеиные ошты по изучению действия бета-карста-кп дакроЗного синтеза на воспроизводительные функции баранов-производителей проводили в пшмпрадприятии "Куйбышевское * с 17 марта со 16 ишя 1986 года.

Ддя опыта было отобрано 9 баранов-производителей кавказской порода по принципу аналогов со средними показателями времени полового рефлекса, количества и качества сешии. Кормиенве баранов-производителей осуществляли по рациону, составленное по норка» В1Иа

Недостаток в бета-каротине восполняли каротином микробного который ска^зАшвали из расчета 4 г на барана в сутки в здесг с концентагрованшащ корнами. В использованном намя кормовом бета-каропше микробного синтеза содержалось 2 % действующего зеиества» . .

Перед началам скармливания бета-каротина (в течение "двух недель) и в процессе скармливания у баранов-производителей брали кровь дин анализа содержания каротина, измеряли время полового рефлекса, исследовали количество и качество семени. Семя брали по 1-рафику: первая неделя 2 раза в неделю дуплетом, вторая - 3 раза т: неделю дуплетом. Выделенное баранами семи в предодатный период л по истечении 1,5 месячного периода коршгения с добавкой бета-каротина микробного синтеза было заморсхзно по технологии БИЕа в среде о токоферолом.

В августе 1586 года било произведено осеменение овцематок.

В августе 1987 года для осеменения овцематок использовали семи с добавлением в сред/ для криоконсервации различных каротин г идов (фукоксантин в концентрации 500 лвдеин в концентрации

500 нкг£, бета-каротин в концентрации 300 каротиноддн рнлег.

шафрана в концентрации Х000 кКаротиноидц использовались в

качестве астиоЕсилавтов вместо тсксферсла.

Зга осешнещд окп гспольэоьалЕ одиночный станок е групповой механизированной передвгкнсй. станок системы Подстазкпна.

Осемашняе провсдаюш с помозье свет сгароводного расширителя ж штавдического катетера конструкции JD.Н.Трофимова.

RiOcrpiy матоз в состоянии оссоты срзвшщяи однократно о 5 до 7 часов утра» Дет этого использовали баранов-пробников с подвя-эаннииш фартукам и ьгеттогоин. Осеменяла овец двухкратно: первый раз непосредственно после выборки, второй - -по истечению 10-12 часов.

2,5.Учет .-результатов осецекртрд; кеглей гатки фиксировали в журнале оевмзнекая, где креме номера ошематки и даты осеменения записывали помер барана-пр еззвадителк. Розугьтагы осеменения учитывали со фактиче сксцу ягнению, при этем фиксировали вес z дол припкода, плодовитость озаеыагок и продолжительность плодоношении.

3. РЕЗУЛЬТАШ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1.Изучение действют каротиноидов на воспроизведение

3.1,1 »Изучение действия бета-каротина микробного синтеза,

вваленного в рацион баранов-проюводителей, на половые ре$лексы а качество сеыени

Оргашсэк животных ве способен к синтезу каротина. Сцвако зна-чегшэ его для ххзиу. хивотшх вообце и., в частности, в воспроизведется исключительно велико* Известно, что каротинощщ, в той число, Оета-кьротш иредстгвлягт собой провитамины витамина А. Кроые того, s ц^стояаэа зреиз установлено и. самостоятельное значение бета--квротгаз для фазислдЕичвскЕГ процессов в организма (Фялипович З.Г., X2S5; Г«гк*1 2- , 1983).

LîapoKoe распространение в последнее время получил бета-каре-тив микробного синтеза, изготовленный из гриба Bzatesiea triepors Положительное влияние биомасса гриба, как источника Оета-кнроткнг на физиодогиче ские щюпессы различных видов животных было выяснено многими исследователями (Власов А.И.,1985; Власов A.IL и др., 198?; гроза Д.Е.»I9Ö6; Пиввяк. Й.Г. в др.,1986; Heins S. und их., 1982).

Мы использовали бега-каротин микробного синтеза для изучения его шшшия ва воспроизводительные функции баранов-производителей,в первую очередь,на шпяваость подового рефлекса (табл.1).

Таблица X

Действие добавок бета-каротина к рацвону баранов-производителей ва активность полового рефлекса

Период опыта ! Иссладо- t Йссле дова-1 Время полевого t Активность

(вано баранов1но эякуля-!рефлекса, шв (полового реф! !тов f ¡лбДр^ "

Прэдопытпый 9 89 4, гад ,37 0,23

Опытный 9 418 З.З&Ю.ОЭ* 0,30

Р I 0,05

Как вгдао из табл.1 действие бета-каротина уменьшало время полового рефлекса б аранов-производителей на статистически достоверную величину.

В предоштный период и по окончанию -первого п второго месяца шишадниа в рацион бета-каротпна шверобного синтеза исследовали содержание бета-каротина в iq>OBn.

В предопытный период в яраш баранов-производителей ' обнарухи-вались только лпгь следы каротина. Во уже в конце первого месяца слпгашешга рациона бе та-каротин ом, содержание его в крови пошей—

- ю -

лссь до 0,35 мгЯ а оставалось на уровне 0,3 wrí,

Исследовали влияние обогащения рациона баранов бета-карагг-иом на количество и качество зянулятов Í табл. 2).

Таблица 'í

Действие включения бета—каротина шкроСшго синтеза в рацион баранов на объел се-леня и концентрации хибчшсов в ней (9 баранов в каздон периоде)

Период опыта!Неследо-íСредний объем! Средняя концент-!Общее чеслс !вано эя-!эякулятов, кл!радия живчиков, 1жпвчо;о:е в !кулятов \ И.шрд/мл" ? эякуляте, т

Иредовытный 89 1,06+0,05 3,4+0,34 3,60+0,24

Опытный . 418 X,21+0,01х1 3,3+0,031 A.KIjp.IC^

Узника *0Д5 í0»4 +1,05

^P/O.OS =^¿0,01

Kpaue того, улучшилась подвижность яывчнков. До опыта процент эякулятов, выбракованных из-за плохоЭ подвзжности яяячико! (кенее 0,8), составил 15,6 в то вреыя как за весь серпок опыта процент эякулятов с плохой подвижностью яззчшеов снизился почта в 2 раза (8,3 $).

Веко исследовано действие обогащения рационов баранов-производителей бета-наротяаш на устойчивость гивчигов к замореспва-ehd. Дт этого семя взятое от баранов до опыта s по истечешш I и 2 месяцев после начала опыта разбавляли средой i токоферол«*, замораживали и оттаивала по технологии ВШа и исследовали аосо-латцуп переливаемо сть датчиков, а также сохранность их авросом (табл.3).

Добавка бета-каротина микробного синтеза к основное радзо-irj баранов-производателей положительно сказалась на результатах

•Таблица 3

Действие добавок бета-каротина в рацион баранов на характеристику свежевзятого я оттаянного после замораживания семени баранов

Период опита |Сохранш^ь анроссы ШсодотнвЁ показатель

живчиков

■Свехевзя- ¡Оттаянное ,Свахевзятое ¡Оттаянное _;Тое семя |оеш {семя ¡семя

До опыта 85,4^2,25 53,0^2,64 3,57±0,13 2,02+0,0? После !Через «е-

начада{сяц 90,2±2,S0 58,QtI,72 4(I5ip,II 2,07±0,0?

опыта (Через два 93,^2,62* 61,4±2,01х 4,3б±0,20хх г.Л^ОЭ*

х^ Р Z0»05 L °»01 ло сравнение с до опытными

показателями

ягнения при статистически достоверных различиях о контролем (табл.4)

Таблица 4

Действие добавок бета-каротина на результаты ягвения овцематок

Группы опыта!ОсемененоHfc н^.офигнммь!,, Рмздтсъ ягнят

ошвиаток Всего í % {Всего {На 100 оседа-, { í i {венных овцема-

_' I I I I«» '

Контроль 100 44 44,0^5 65 .55

Ошт 106 59 55,7i5x 72 68

х) Р ¿ 0,05

Таким образом, в опыте выяснено существенное улучшение не только половой активности бараков» но тапка характеристики эяку-

лятов ж результат ягнения вследствие введения в рапион бараноь--iipo из водителей бета-каротиаа микробного синтеза.

3.1.2.Действие различных наротиясздов в среде на качество семени после разбавления и криоконсервадик

Осяошваясь на дяннчх исследователей (Ыилованов В.К. ,1962, Кслиакоева A.,ISB4, СоргеэвоЗ A.M.,1984, Goodwin T.V. ,1984)

учзгшвая собственные исследования о полсдаггвльнои влиянии бета*-каротина микробного синтеза в рационе баранов на качество их семени, мы изучали действие каротаноидов-ксантофкалов (gyxo-ксантина, лютеина, каротикоидной вытяжки рылец избрана), a тагке синтетического Оета-карогина в средах для семени на его характеристики после разбавления и оттаивания из замороженного состояния о дальнейшим использованием для осеменения овцематок.

Действие замены токоферола в среде каротиноидов на пережи-ваемость живчиков барана после оттаивания представлено в табл.5.

Таблица 5

Абсолютный показатель переживаемости живчиков в сроде без токоферола с различными карлтинсндаыя

Концентрация! Абсолютный показатель выживаемости живчиков в каротиноидовI ссхите с различными каругиноидачн

} Лютеин {вукоксантин ¡Бета-каро- ¡Каротшюидная vmkl/»/ I i {тин ¡вытяжка рылец _._!_!__ - 'eajnaqq_

О (KCHTPOIb) 2,01±0,07

100 2,20+0,07 г^гьО^^ 2,25iP,04 2,09+0,13

200 2,09£0,07 З^З+О^З11 2,2£&0,05 2,2%3,09

ХО 2,10+0,06 2,64±0,05хх 2,3^±0,11х 2,11+0,04

400 I,99+Q,I4 2,84+0,07^ - '2,20^0,09 1,99+0,04

.500 1,90+0,11 ^,95±0,04ххх 2,12±0,07 2,04*0,05

" .1000 „ v ' 2,49+0,08 2,01+0,06 2.43+0,06х1

? /0.05 rt) Р ¿0,01 ^Р/0,001

Как видно из таЗл.5 нзялучзея переживаемость живчиков I среде'с фукоксанъ'енсм в концентрации 400-500 мкг?. Статистическ достоверная разница переживаемости живчиков по сравнению с контролей была также в среде с бета-каротином в концентрации ЗООикя и в среде с каротинощщой вытяжкой 1.3 рылец шафрана в концентрации 1000 мкг£.

Предполагая, что кароткноиды, введенные в состав среды адсорбируется на живчиках, изучали состояние акросои живчиков (табл.6).

Таблица С

Сохранность акроссм живчиков в среде без токоферола в зависимости от состава каротиноцдов в среде и юс концентрации

Концентрация! Живчиков с неповрежденными акросомама ($) в каротиноидов! среде с каротшоидаш _- - _

в среда 1Дйтёин!ЗукоксантинjБета-каро- ]Каротинсиднап i } ¡тин ,вытяжка ралеи _._;_i_'mafrofiga_

0 (КОНТРОЛЬ) 57,^0,87

100 64,0+1,54* 58,€¿0,94 57,011,02 55,2±I,42

200 60,QtI,I6 57,$+0,89 55,4±I,53

300 66,0+1,15х 60,4±1,05х 56,§+0,90 57,2+0,99

400 67,0+1,ОО** 82,4*1,46* 60,2+1,30 56,&tl,89

500 68, ^tí »К3™ 64,Q£l,7CF 58,4+1,23 56,4*1,09

1000 56,0*1,44 59,4±2,02 56,6±I,44 58,$+I,I7

Р I 0,05 ^Р ¿ 0,01

Из табл.6 видно, что лютеин и йукоксантин при всех яонцеш рациях (креме 1000 мкг?) для лютеина улучшили сохранность акро-сш. Бета-каротин оказал благотворное действие пд сравнению с

контролен только при концентрации 400-500 ккг£. Каротпноидная знтязка рндец шафрана всех концентраций, кроле 1С-0С ухуя-лала состояние акрооом.

Исследовали способность харотпаокдов адсорбироваться на кекбрене кнвчиков (табл. 7).

Из табл.7 видно, что обработка гиЕ^гков с адсорбированные на их мембранах каротхгаоидаш йосфатшсл буфером сшшает значительную порщт их с поверхности тавчиков. Однако не все кароги-ЗС2ДН в ровной «ере растЕОрлгш в фосфатном буфере. Последующая обработка осадпа прогдггшс еосфатнш буперш нлвчпков этанолом ■такте гыывает знач^тельцув додолнительцуг» по£вд:а каротшкотов с поверхности живчиков. Однако в двухкратное удаление бшю неполное Дазе после экстракции ацетона! на гшвчшсах оотаптся каротпноэдш, прочие сьлз&ннне с из: ист-й^ааагли, хотя к в незначительно« количестве-

Из той ге таблицы видно, что наиболее прочно связан с иемб-каротпновд - лютеин г фукоксантш, в наименьшей степей каротиноиды рылец шафрана.

По окончании лабораторных исследований на:д1 било проведено осеменение 509 овцематок для выяснения влияния раажгсияе каротиноидов в среде для семени на результативность осеменения овец оттаянный семенем барана.

В качестве среди для криоконсервации использовали сред/ ЬЛЕа с заменой токоферола одним из исследуемых карогпнопдов: лютеином, ¿укокезлтинои а концентрациях 50й ккг£, бета-каротлном в концентрации ЗОС ккт?, либо каротиноадаги ршец шфрага в концентрации 1000 мир?.

<1з табл. 8 видно, что введение лютеина,щгкоксакт;гна или бета--/лротиза в среду для кргтоконсервациа сенеки полоеттельно нов-

ТаЛлвда V

Йзвлвкагкость карсгкповдев, здсс^йарованн«* на живчиках

Каротиноиды (мкг$)

1 Лютеип 1 I 1 фуноксвятйн 1 Еета-глротин {Каротилоадтя ти~ (тяжка рмлэц рЫ|-1мна

Концентрация до 00м00тки 510 ! 503 505 1 1 435

Кадоса- |0садоп дочная зящкооть {îîanoca- ¡Осадок {дочная ¡жидкость} Надоса- 1 дочная ! жидкость1 Осадок Надоса- : Осадок дочная жидкость

ОБРАБОТКИ: /

Центрифугирование 320 ISO 350 153 445 60 447 48

Экстракция фосфатным буфером 67 103 75 78 32 28 13 -35

Экстракция этанолом 35 6S 28 SU 9 19 30 5

Экстракода йцэто- нсм 33 35 22 28 8 8 5

Табяжа £

Результаты ягнания овиематок,осемененных оттаянным сошнам, зачорожешша в добавлением иаротикоидов к

''I . . . . . среда- ■

!0сешва-1 Объяснилось ? Ропшгось ягнят; Каротинондн , '^^^¡Всего { % | Всего {Шадовитос

Лвтеин 100 за 58,0^4,91 , 70 120,7

Оукоксантив * 104 57 54,Э±5ДХ1> 70 122,8

Бета-каротин 100 31 65 127^5

КаротЕНОНДН ригец 100 43 43,0+5,0 54 125,6

Контроль - без каротшкедов 105 41 ЗЭ,0±4,7 52 126,8

х) Р I 0,05

лгало на процент ягнения при статистически достоверных различиях с контроле« я с другими каротивоидгми. По плодовитости маток существенного различия не обнаружено, хотя яадвыстая шгодозитость, несколько вша контроля, била получена после применения бетаг-каро-тина в среде для сешни барана (127,5 против 126,6).

ЗЛ.З.Аотиоксизинтдаа свойства каротиноидов

■ Взаимодействие каропшовдов с супероксид анион-радя-' калом

£ля объяснения механизма наблюдаемого нами стабилизирующего действия иаротиноидов на моиЗраш живчиков^ важно било исследовать взашлодеЗствиА этих вэще ств-.с- пктявной форлоЗ кислорода

. ■.•г*»* " л

• Ис учение^-реакий' с биологически активными субстратами ше-'в? гезяое значение, так как шдаж-радикал присутствует практике с-

/я. bí ücex компонентах живой клетки (Афанасьев И.Е,, 1979;.

йа исследовали вгияние Ое?&-каротяна, фукоксантина, лгтегна :: варотиноидао! вытяхкк из рылец шафрана на спектральные иотне-•гическае характеристики сигналов оптического поглощения суперск-|;пд анион-радикала в фосфатном буфере (рН 7,8) в присутствии Ьормиата натрии (0,01 Ы>.

Супэрокслд анион-радикал генерировали в насшвннсы кислородом буферном растворе в соответствии о установленной схемой реакций:

HgO --sMr—- Н* + Ш* + e^p (I)

®гидр + Og— <£ <2>

Н* + 02-+ Я* (3)

В присутствии фораиата все радикаш Ш*, обдадащие большой, окислительно! способность» переходят в CÍj :

ОН* + HCOg -EgO + CCg (4)

• C0Í ^ °z --*" + C¿2 (5)

Реакции 1-5 полностью завершаются к концу импульса.

Введение в фосфатный буфер любого из кислородосодерваших каротиноидов ( '—' 1СГ5 М) приводит к формированию щюшяуточной частицы (рисЛ), которая имеет батахремныйсдвиг на ХО ны ( \ макс.* 265 в случае лютеина и каротиноидов шафрана и на 15 нм £ Д. = 270 ны) в случив фукокс ангина, по сравнению с поглощением 0% (Д. макс< = 255 ны). Кроме том» интенсивность полосы поглощения в присутствии первых каротиноидов почта в два раза ниже чем в чистой буфере* При срсшнеюи кинетики гибели сш>* налов оптического истощения яле лютеина я каротиноидов шафрана

- 1С -

J 0,10

0,06 л * /7*

»1 о 0 т. 1 0,06 "5 /

| 0,04. * 1

0,02.

1. • - Чистый буфер

2. * - Бета-каротин

3. о - Шафран

4. л - Лютеин

о - Фукоксантин

250 250 270 28Q 290 300 ,

Длина волны, ни

Рис. I Спектры погяо^ешат т:тгон-оелнкала а тггмсугст:::™ эазжгчних каротинокдов

.3 ь о 0.Ю

i

i 0,C6

0.04

«S 0,02

10 20 30 40 ,50 ^60 70 80 90

_ . Время',~мс ..Л£гг"Й"11Кинетика гибели агягон-радика-« « разливок »саротякоидов

(тле.2; кривые 3,4) видно, что лгтеин не только подавляет генерация ь системе, ко и ускоряет его нейтрализация.

Б присутствии каротинощеной вытяжки из шафрана активная частица стабилизируется и обнаружится заметно дольше, чем в контроле.

Сукоксантин не влияет на интенсивность полосы поглошэния генерируемого супероксид анион-радикала, однако, эаштно ускоряет табель последнего {рис.1; 5 я рио.2; 5). "

Бета-каротин в наших исследованиях не оказал заметного влияния ни на образование ни на его гибель (рис.1; 2, рис.2; 2).

Наблхщаеное нами смещение максимума поглощения супероксяд анион-радикала в присутствии ксантофиллов свидетельствует об обра-аовшши комплекса с переносом заряда между и молекулой ксантофилла (Кс): О2 + Кс—>- [кс.. о характерной для каждого ксантофилла кинетикой гибели.

Таким образом, наблгщаемая нами зависимость взаимодействия исследуемых каротикокдов с 0^ позволяет предположить, чтонаблю-даемое нами стабилизирующее действие каротиновдов на сохранность акроссм определяется способностью и характером взаимодействия пигменте!' с супероксвд анион-радикалом.

Харотиноцдн (лютеин, фукоксантин)

лейтралиэул снижают окис ление лшгадов мембран тем самым их стабилизируют.

3.1.4. Разработка протектора для семени баранов с использованием каротиноидов в его составе

В целях усовершенствования ■ состава изучали возможность склае-1шя количества основных компонентов среды ВИЖа с токоферолом,вводи г качестве основного криозщитного компонента карстиловд лютеин и хлорофилл.

Количество желтка удалссь снизить с 10 мл до 6 мл, глицерина -

. - 20 -

с 5 «я до 2 од, с ели ЭДГА-с 0,84 хр до 0,7 гр при усагкчекаи количества сахара с 3,84 гр до 1С гр к полном зскявченаи сдерыэ-(¡ала (расчет на 100 мк среда).

Данине сравнительного изучения качества оттаянного сенеки в исходной а предлагаемой среде показаны в тайл.Э.

Таблица 9

Характеристика оттаянных хпвчиков заморсвенннх в исходной и предлагаемой среде

Шовтор-ЛАбсолютный покаМЯтителъность! Сохранность Среда '.кость »затедь живучести 1 жиззп „ I шгроерм _? •_(чдс) 1 (X)_

Предлагаемая 10 3,1^0,20х 10,040,72 70,013,01

Исходная 10 2,3±0ДЭ 6,0+1,00 57,0±2,6

Р I С,05

Как видно из табл.9, предлагаем^ состав среда обеспечивает аесштнве свойства, сохраняя биологии скую полноценность хивчиков,

3 табл.10 дан расчет стоимости предлагаемой среды по сравнению с исходной.

Хах видно кз таблицу экономический эффект от использования предлагаемой среды около 700 рублей в расчете на 1000 литров приготавливаемой среди.

Результативность осеменения овцематок семенем баранов эамо-равеяшш в новой среда по сравнению с исходной представлена в

Из таблицы видно, что результативность осеменения с ксподь-зоавшшш предлагаемой среда для разбавления семени по сравншгил с ксхедшй средой № хуке, а даже лучше.

Таблица 10

Экономическая эффективность предлагаемой среды до сравнено» с исходное

Ингредиенты

¡Стоимость стмя.таД./ГООО литров | Предлагаемой ' Исходной

1. Сахар-рафинад 104,0

2. Яйцо куриное 420,0

3. Комплексная саль ЗЦХА 490,0

4. Глицерин 48,0 Маалшш^^раствор токоферола

6. Литвин 1,5

7. Хлорофилл 1,5 6, Спермосан -

ИТОГО: 1065,0

Результаты ягнения овцематок

! Осемене-!Вибы-1 _1

|но още-!ло изГ5ГГ™1 . <?м- тпп

102,3 500,0 588,*0 120,0

400,0

31,1

1741,4 Таблица II

Среда

но оше-!ло И317ГГ1 маток Iопыта

! Iго I Г I ! _\ 1

Все- На 100 ¡на 100 го ¡осеме- {объяли кенных } овдома-}оБЦемаг-}ток ¡так_

Предлагаемая Исходная

115 105

67 60,Iх 81 53 50,4+5,1 64

73,6 120,0 60,9 120,7

х) Р С 0,05

3.2. Влияние глубины введения семени в половив пути овцы на результативность осеменения

Учитывая, что миграция живчкков в пологом пути овцы может быть затруднена в таком участке, как шейка маткя вследствие ее сложного строения, исследовали зависимость процента объягнившихся

овцематок от глубины введения оттаянного семени в подоше пута овец (тгбл.Х2).

Таблица Т2

Результат ягнепкк озец в зависимости от глубины введения сом«ни в кзйку ьсатки

Глубина введения (Осеыанено! ник сбъягкилось от (Родилось ягнят семени в 'овец 1 осемдрдкдя в омт охотт?на 100 объяг-и'т:а (см) ! " '! 5 (шгвлпхся маток _I_,дсего |_*_I_«у_

0 - 0.5 49 8 16,3^5,2 100

1,0 - 2,0 121 35 32.214,2х 1X5

2,5 - 4,0 70 48 68,6+5,5** 120

х) Р 1 0,05 хх) Р 1 0.01

Из видзо, что с увеличением глубины введения семени

на наздне 1,5-2,0 см результативность осеменения овец ьозрастает в 2 раза. Увеличилось таете шогодагсдие овец - оно было наиьыспз®; после гведенкя со;.*<ски на глубину 2,£>-4,0 см.

вывода

1,Реэудьтати1дост» осеиеконся овец замор иго ннь'и со ш ней находится в зависимости от обеспэчэчнслти раоиокоь барано&-проязподк-твле! бата-каротансы.

г.ПЭЕШгеняе биолото с кой полноценно ст;; зшвчкков и результативности осеменения сьаоматок ысгут бить достяпгутк вгюдонпеы ка-ротлнокдов (люгеина и фукоксянтика) в срсду для нриэкоисорэаяяи.

З.Еиологичеокан пошатни ос?-» глыккои находятся и за-

висимости от способности ка;.с,ти:о"Дов агсс^йроттилл не. ыемб-раз'^х.

■i-issshe суперокскд анион-радикала зависят от авгиокег-дантно?. сдососностп каротпиокдов при явных преимуществах лвтегне а фулоксантина.

б.Результаты ягнения свцекаток находятся в пряью!: гаsncn^"?-тв от глубины введения сеиенп в половые пути овцематки оудуп; налшсяаз (68,6 ?) при глубине введения в сейиу матки на 2-4 os.

6. Эковаягческая эффективность осеменения овец оттаянзал семенем, при одновременной высокой его результативности,может достигнута снижением содержания желтка и глицерина в среде кококонсервацип.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ШЗЗКОЕЕШ

разсавления семени Саранов,хгредвазкаченного для хранения в замороженном состоянии предлагаем применять среду следу::»-шего состава: сахар (г) - 10,0; желток курижого ^ца (ш:) - S,i ; глицерин (мл) - 2,0; кальций-натриевый кошлексоват этыгекдаашк тетраадетоновой кл слоты (г) - 0,7; лютеия (кг) - 0,5; хдэрсйг.лл (иг) - С,5; вода дистиллированная до 100. ыл.

-.Для лабораторных исследований предлагает; металлу- onpejisj:* кия количества каротиноидсэ адсорбированных па мембранах

Список опуслккованных работ по теме диссерташж

1.Лизунков А.О. Влияние бета-каротина на воспроизводитель!^ <Ёункцпи оаранов // Овцеводство.-1968.- Л 4.- С. 16-17,

2.Использование каротаноидов при криоконсервации спетые Д'л-лованов В.К. .Парамонова Л.Й. .Лнзушсов А.ф. .Дмитровский A.A. // Доклады ВАСЗЯИЕ. -1966. - Ä II.- С.33^35.

3. Заявка на изобретение (Среда для разбавления и кргэкойчсг— внроваЕия семени сельскохозяйственна! животных) авторы Глгсвч-яов B.K.f Лизунков А.5., Парамонова Л.И., Дмитровский A.A. Приоритетная справка * 4467011/15 от,22.06.88.

Подаисано к печати 14*07.39 г* Заказ 547.

Л - 36052. Тираж 100 экз. Объем 1,0 уч^-иэа. л.